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CN108815342B - 一种治疗男性不育的中药组合物 - Google Patents

一种治疗男性不育的中药组合物 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种治疗男性不育的中药组合物，所述中药组合物由如下原料药制成：巴戟天8‑40重量份、枸杞子5‑32重量份、金钱草8‑40重量份、水蛭1‑6重量份、桑椹8‑40重量份、萆薢3‑20重量份、菟丝子5‑32重量份、鱼鳔8‑40重量份。本发明中药组合物具有明显的治疗少弱精子症的作用。

Description

一种治疗男性不育的中药组合物
技术领域
本发明涉及一种中药组合物，具体涉及一种治疗男性不育的中药组合物，属于医药领域。
背景技术
伴随着工作压力的增加、社会关系的复杂以及性病的传播，男性不育症日益增多，不良的生活习惯进一步加重这一现象。全球约15%夫妇被不孕不育所困扰。研究发现，1995-2008年见间我国正常男子精液质量呈下降趋势，而这一阶段正处于我国工业化发展、经济大繁荣时期。由此推断，工业发展对环境的破坏、经济增长人民生活习惯的改变是导致我国正常男性精液质量下降的原因之一。
中医认为，少弱精子症病机多为肾气虚或肾阴阳俱损导致，其原因可能由长期生活无规律，超负荷工作过久，性生活过于频繁以至于无法做到节欲保精等。此外痰浊淤血阻滞血道，导致血脉不通也是常见病机。睾丸、附睾是一个血液供应丰富的组织，髂总动脉分为髂外动脉和髂内动脉，髂内动脉分出阴部内动脉，阴部内动脉分为阴茎深动脉，尿道球动脉和阴囊动脉，这三条动脉是全身心血管系统的一部分，与心脏及其它血管具有一荣俱有，一损俱损的关系，所以血管中任何部位由于瘀血、痰浊导致的血脉不通均可以影响睾丸、附睾的正常血供，发生局部充血或缺血，最终发生病变。
在治疗方面，中医常用补肾填精、活血化瘀、清利湿热等方法。中国专利CN104069314 A公开了一种治疗男性不育、无精、少精、弱精的“益精汤”，其原料药包括生地、山茱萸、山药、枸杞子、桑椹、菟丝子、远志、锁阳，对于精亏不育者加党参、黄芪、巴戟天、肉苁蓉、鹿角胶，另外上等人参，海狗肾以 1 ：5 的成分研末兑汤冲服；阴虚火旺不育者，加知母、黄柏、天门冬、麦门冬；阳虚不育者加党参、黄芪、巴戟天、淫羊藿、制附子、金毛狗脊；兼湿热者加金钱草、薏苡仁、气滞血瘀者选用青皮、陈皮、泽兰、桃仁、红花。该发明的缺点在于原料药组成复杂，剂量大，不利于长期服用。
发明内容
为解决现有技术存在的问题，本发明提供一种组成简单、效果显著的治疗男性不育的中药组合物。
作为本发明的一个方面，本发明提供一种治疗男性不育的中药组合物，该中药组合物由如下原料药制成：巴戟天、枸杞子、金钱草、水蛭、桑椹、萆薢、菟丝子、鱼鳔。
在具体的实施方式中，所述中药组合物由如下原料药制成：巴戟天8-40重量份、枸杞子5-32重量份、金钱草8-40重量份、水蛭1-6重量份、桑椹8-40重量份、萆薢3-20重量份、菟丝子5-32重量份、鱼鳔8-40重量份。
在优选的实施方式中，所述中药组合物由如下原料药制成：巴戟天10-32重量份、枸杞子7-28重量份、金钱草10-32重量份、水蛭2-6重量份、桑椹10-32重量份、萆薢4-18重量份、菟丝子7-28重量份、鱼鳔10-32重量份。
在进一步优选的实施方式中，所述中药组合物由如下原料药制成：巴戟天12-30重量份、枸杞子10-22重量份、金钱草12-30重量份、水蛭2-5重量份、桑椹12-30重量份、萆薢5-15重量份、菟丝子10-22重量份、鱼鳔12-30重量份。
在进一步优选的实施方式中，所述中药组合物由如下原料药制成：巴戟天15-25重量份、枸杞子12-18重量份、金钱草15-25重量份、水蛭2-4重量份、桑椹15-25重量份、萆薢7-13重量份、菟丝子12-18重量份、鱼鳔15-25重量份。
在最优选的实施方式中，所述中药组合物由如下原料药制成：巴戟天20重量份、枸杞子15重量份、金钱草20重量份、水蛭3重量份、桑椹20重量份、萆薢10重量份、菟丝子15重量份、鱼鳔20重量份；
或，巴戟天17重量份、枸杞子17重量份、金钱草16重量份、水蛭4重量份、桑椹16重量份、萆薢12重量份、菟丝子13重量份、鱼鳔23重量份；
或，巴戟天23重量份、枸杞子13重量份、金钱草24重量份、水蛭2重量份、桑椹23重量份、萆薢8重量份、菟丝子17重量份、鱼鳔16重量份。
本发明所述中药组合物可以是各原料药粉碎后混合而成的组合物，也可以混合或单独提取后得到的提取物，或者是提取物进一步精制纯化得到的有效部位，还可以是加入药学上可接受的辅料制成的常规剂型。
其中，所述提取方法包括煎煮提取、回流提取、浸渍提取、超声提取、渗漉提取、微波提取等；所述纯化方法包括水提醇沉、碱溶酸沉以及各种柱色谱纯化方法，如大孔树脂柱、硅胶柱、凝胶柱、反相柱等；所述常规剂型包括但不限于注射剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液、滴丸剂或纳米制剂；所述药学可接受的辅料包括：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等。
作为本发明的另一个方面，本发明中药组合物还可以由所述原料药的提取物作为原料，因此，本发明还提供一种中药组合物，所述中药组合物由如下原料制成：巴戟天提取物8-40重量份、枸杞子提取物5-32重量份、金钱草提取物8-40重量份、水蛭提取物1-6重量份、桑椹提取物8-40重量份、萆薢提取物3-20重量份、菟丝子提取物5-32重量份、鱼鳔提取物8-40重量份。
在优选的实施方式中，所述中药组合物由如下原料制成：巴戟天提取物10-32重量份、枸杞子提取物7-28重量份、金钱草提取物10-32重量份、水蛭提取物2-6重量份、桑椹提取物10-32重量份、萆薢提取物4-18重量份、菟丝子提取物7-28重量份、鱼鳔提取物10-32重量份。
在进一步优选的实施方式中，所述中药组合物由如下原料制成：巴戟天提取物12-30重量份、枸杞子提取物10-22重量份、金钱草提取物12-30重量份、水蛭提取物2-5重量份、桑椹提取物12-30重量份、萆薢提取物5-15重量份、菟丝子提取物10-22重量份、鱼鳔提取物12-30重量份。
在进一步优选的实施方式中，所述中药组合物由如下原料制成：巴戟天提取物15-25重量份、枸杞子提取物12-18重量份、金钱草提取物15-25重量份、水蛭提取物2-4重量份、桑椹提取物15-25重量份、萆薢提取物7-13重量份、菟丝子提取物12-18重量份、鱼鳔提取物15-25重量份。
在最优选的实施方式中，所述中药组合物由如下原料制成：巴戟天提取物20重量份、枸杞子提取物15重量份、金钱草提取物20重量份、水蛭提取物3重量份、桑椹提取物20重量份、萆薢提取物10重量份、菟丝子提取物15重量份、鱼鳔提取物20重量份；
或，巴戟天提取物17重量份、枸杞子提取物17重量份、金钱草提取物16重量份、水蛭提取物4重量份、桑椹提取物16重量份、萆薢提取物12重量份、菟丝子提取物13重量份、鱼鳔提取物23重量份；
或，巴戟天提取物23重量份、枸杞子提取物13重量份、金钱草提取物24重量份、水蛭提取物3重量份、桑椹提取物23重量份、萆薢提取物8重量份、菟丝子提取物17重量份、鱼鳔提取物16重量份。
作为优选的实施方式，所述提取物分别为各原料药的水提取物。
作为本发明的第二个方面，本发明提供所述中药组合物在制备治疗男性不育的药物中的应用。在具体的实施方式中，本发明中药组合物对于少弱精子症具有显著效果；更具体的，本发明中药组合物能够提高精子质量和性激素含量。
本发明原料药巴戟天、枸杞子、金钱草、水蛭、桑椹、菟丝子均收载于《中国药典》（2015版）。萆薢选自《中国药典》（2015版）记载的绵萆薢和粉萆薢；鱼鳔收载于《浙江省中药炮制规范》（浙江省卫生厅主编，浙江科学技术出版社出版），又名黄鱼胶、线鱼胶，为石首鱼科动物大黄鱼Pseudosciaena crocea（Richardson）的干燥膘。
本发明中药组合物中，巴戟天味辛甘，性微温，无毒，入肝肾经，补肾助阳，祛风湿，强筋骨，既能补其火又无灼阴之弊，实为补药之翘楚；枸杞子味甘，性平，归肝肾经，药性平和，补益精气，强盛阴道，枸杞子与巴戟天共为君药，两药相配，阴阳共济。菟丝子味辛甘，性平，善滋阴液，于滋补中又有宣通百脉，温运阳和之意，为阴阳并补之药；鱼鳔专入肾经，有补精益阴，暖精种子功效；桑椹益肾脏而固精，补血生津；菟丝子、鱼鳔、桑椹子三药并用共为臣药，既助巴戟天益肾兴阳，更助枸杞子添精益髓。水蛭善除恶血，有破血逐瘀的功效，凡破血之药多伤气分，唯水蛭味咸，专入血分，破血却无损于气分；金钱草利尿以清湿热，萆薢利湿祛浊，使邪从小便出，邪去正自安，金钱草、萆薢与水蛭同为佐助药。全方综合运用补阳、滋阴、活血、利湿多种治法，配伍精当，具有补阳而不助燥，滋阴却无滋腻，攻邪而不伤正。
本发明药理实验结果表明，雷公藤多苷片连续给药可导致大鼠精子活率及运动能力明显下降，给予本发明中药组合物治疗后，不仅可以提升大鼠精子质量，还可以提高血清性激素含量、改善附睾氧化应激损伤程度等。说明本发明中药组合物具有明显的治疗少弱精子症的作用。
具体实施方式
实施例1
组方：巴戟天20g、枸杞子15g、金钱草20g、水蛭3g、桑椹20g、萆薢10g、菟丝子15g、鱼鳔20g；
制备方法：以上八味药，加水煎煮两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩，即得。
实施例2
组方：巴戟天17g、枸杞子17g、金钱草16g、水蛭4g、桑椹16g、萆薢12g、菟丝子13g、鱼鳔23g；
制备方法：以上八味药，加水煎煮两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩，即得。
实施例3
组方：巴戟天23g、枸杞子13g、金钱草24g、水蛭2g、桑椹23g、萆薢8g、菟丝子17g、鱼鳔16g；
制备方法：以上八味药，加水超声提取两次，每次40min，合并提取液，滤过，滤液浓缩，加入片剂辅料制成片剂。
实施例4
组方：巴戟天18g、枸杞子16g、金钱草18g、水蛭3g、桑椹17g、萆薢11g、菟丝子14g、鱼鳔24g；
制备方法：以上八味药，加水渗漉提取，提取液滤过，滤液浓缩，加入颗粒剂辅料制成颗粒剂。
实施例5
组方：巴戟天24g、枸杞子14g、金钱草23g、水蛭2g、桑椹22g、萆薢9g、菟丝子16g、鱼鳔17g；
制备方法：以上八味药，加水回流提取两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩，静置，滤过，滤液调整总量至1000 ml，搅匀，分装，灭菌，即得。
实施例6
组方：巴戟天13g、枸杞子21g、金钱草13g、水蛭5g、桑椹13g、萆薢14g、菟丝子11g、鱼鳔28g；
制备方法：以上八味药，加水超声提取两次，每次40min，合并提取液，滤过，滤液浓缩，加入片剂辅料制成片剂。
实施例7
组方：巴戟天28g、枸杞子11g、金钱草29g、水蛭3g、桑椹27g、萆薢6g、菟丝子21g、鱼鳔13g；
制备方法：以上八味药，加水煎煮两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩，静置，滤过，滤液调整总量至1000 ml，搅匀，分装，灭菌，即得。
实施例8
组方：巴戟天14g、枸杞子20g、金钱草14g、水蛭4g、桑椹14g、萆薢15g、菟丝子10g、鱼鳔26g；
制备方法：以上八味药，加水超声提取两次，每次40min，合并提取液，滤过，滤液浓缩，加入胶囊剂辅料制成胶囊剂。
实施例9
组方：巴戟天26g、枸杞子10g、金钱草27g、水蛭2g、桑椹28g、萆薢5g、菟丝子20g、鱼鳔14g；
制备方法：以上八味药，加水超声提取两次，每次40min，合并提取液，滤过，滤液浓缩，加入颗粒剂辅料制成颗粒剂。
实施例10
组方：巴戟天11g、枸杞子27g、金钱草11g、水蛭5g、桑椹11g、萆薢17g、菟丝子8g、鱼鳔31g；
制备方法：以上八味药，加水回流提取两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩，静置，滤过，滤液调整总量至1000 ml，搅匀，分装，灭菌，即得。
实施例11
组方：巴戟天31g、枸杞子8g、金钱草11g、水蛭3g、桑椹30g、萆薢5g、菟丝子26g、鱼鳔11g；
制备方法：以上八味药，加水超声提取两次，每次40min，合并提取液，滤过，滤液浓缩，加入颗粒剂辅料制成颗粒剂。
实施例12
组方：巴戟天9g、枸杞子31g、金钱草9g、水蛭6g、桑椹10g、萆薢18g、菟丝子6g、鱼鳔38g；
制备方法：以上八味药，加水煎煮两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩，静置，滤过，滤液调整总量至1000 ml，搅匀，分装，灭菌，即得。
实施例13
组方：巴戟天38g、枸杞子6g、金钱草37g、水蛭1g、桑椹38g、萆薢4g、菟丝子30g、鱼鳔10g；
制备方法：以上八味药，加水渗漉提取，提取液滤过，滤液浓缩，加入颗粒剂辅料制成颗粒剂。
实施例14
组方：巴戟天提取物20g、枸杞子提取物15g、金钱草提取物20g、水蛭提取物3g、桑椹提取物20g、萆薢提取物10g、菟丝子提取物15g、鱼鳔提取物20g。
实施例15
组方：巴戟天提取物17g、枸杞子提取物17g、金钱草提取物16g、水蛭提取物4g、桑椹提取物16g、萆薢提取物12g、菟丝子提取物13g、鱼鳔提取物23g。
实施例16
组方：巴戟天提取物23g、枸杞子提取物13g、金钱草提取物24g、水蛭提取物2g、桑椹提取物23g、萆薢提取物8g、菟丝子提取物17g、鱼鳔提取物16g。
实施例17
组方：巴戟天提取物18g、枸杞子提取物16g、金钱草提取物18g、水蛭提取物3g、桑椹提取物17g、萆薢提取物11g、菟丝子提取物14g、鱼鳔提取物24g。
实施例18
组方：巴戟天提取物24g、枸杞子提取物14g、金钱草提取物23g、水蛭提取物2g、桑椹提取物22g、萆薢提取物9g、菟丝子提取物16g、鱼鳔提取物17g。
实施例19
组方：巴戟天提取物13g、枸杞子提取物21g、金钱草提取物13g、水蛭提取物5g、桑椹提取物13g、萆薢提取物14g、菟丝子提取物11g、鱼鳔提取物28g。
实施例20
组方：巴戟天提取物28g、枸杞子提取物11g、金钱草提取物29g、水蛭提取物3g、桑椹提取物27g、萆薢提取物6g、菟丝子提取物21g、鱼鳔提取物13g。
实施例21
组方：巴戟天提取物14g、枸杞子提取物20g、金钱草提取物14g、水蛭提取物4g、桑椹提取物14g、萆薢提取物15g、菟丝子提取物10g、鱼鳔提取物26g。
实施例22
组方：巴戟天提取物26g、枸杞子提取物10g、金钱草提取物27g、水蛭提取物2g、桑椹提取物28g、萆薢提取物5g、菟丝子提取物20g、鱼鳔提取物14g。
实施例23
组方：巴戟天提取物11g、枸杞子提取物27g、金钱草提取物11g、水蛭提取物5g、桑椹提取物11g、萆薢提取物17g、菟丝子提取物8g、鱼鳔提取物31g。
实施例24
组方：巴戟天提取物31g、枸杞子提取物8g、金钱草提取物11g、水蛭提取物3g、桑椹提取物30g、萆薢提取物5g、菟丝子提取物26g、鱼鳔提取物11g。
以上实施例14-24所述提取物分别为各原料药的水提取物。
效果实施例1
1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验动物
SPF级雄性SD大鼠，体重200-220g，由北京维通利华试验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（京）2016-0006大鼠均自由饮水和采食，每天更换垫料及饲料，保持环境干燥清洁，环境20℃-25℃。
1.1.2实验用药
五子衍宗丸：由北京同仁堂股份有限公司制药场生产，每次6g（60粒），一日两次，批准文号：国药准字Z11020188。
雷公藤多苷片：由湖南千金协力药业有限公司生产，10毫克*50，批准文号：Z43020138。
本发明中药组合物，按实施例1方法制备。
1.1.3主要实验试剂
国产培养基m199 500mL 品牌：invitrog。总超氧化物歧化酶测试盒，有南京建成提供，货号：A001-1。丙二醇测试盒，由南京建成提供，货号：A003-1。
1.1.4主要实验仪器
精子活力动态分析系统，型号Hamilton IVOS Tox，上海曼谱公司。台式离心机，型号：TGL-16C。纯水仪，型号：AJC-0501-P。微型旋涡混合器，型号：WH-2。水浴锅，型号：TL-420D。酶标仪，型号EPOCH。
1.1.5实验方法
取体重200-220g雄性大鼠36只，随机分为正常组、模型组、阳性药组、中药组合物高中低剂量组。除正常组外，其他各组均灌服雷公藤多苷30mg/（kg·d）连续灌胃40天，建立少弱精子症模型，从41天开始，正常组与模型组灌蒸馏水，阳性药组以五子衍宗丸灌胃，本发明中药组合物各组以人体等效剂量3、6、12倍用量灌胃，连续灌胃4周后计算睾丸指数、测试精子质量、血清性激素、生精细胞的细胞周期、HE染色观察大鼠睾丸组织学变化。
1.1.6药物用量计算
中药组合物高、中、低剂量组分别以人体等效剂量12、6、3倍计算。五子衍宗丸以人体等效剂量6倍计算。
2指标检测
末次给药后禁食12h，称重，以3%水合氯醛采用腹腔注射麻醉大鼠，腹主动脉取血，分离血清备用，处死大鼠，分离大鼠睾丸附睾组织，进行相关指标检测。
2.1精子质量分析
取附睾尾放入37℃生理盐水中（提前预热），剪碎，放置1分钟，取100μl精子悬浮液，加入1mlM199，放入37℃恒温水浴锅5分钟，取10μl精子悬浮液放入精子计板上，选取6个视野，于2分钟内完成测试。主要检测指标：精子浓度（×106个/每克附睾尾中含有精子量）、精子活力（%）（即样品中向前运动精子（a级+b级）占精子总数的百分率）、精子活率（%）（即样品中运动精子（a级+b级+c级）占精子总数的百分率）、精子运动能力参数（平均路径速度VAP、曲线速度VCL、直线速度VSL），精子运动方式参数（直线型LIN、前向性STR等）其中精子分为4级（a为精子活力良好，成直线运动，b为精子活力比较活泼，c为精子活力迟缓，原地打转，d为无活力），取a级精子为有活力，a+b为有效精子活率。
2.2附睾及睾丸氧化应激
取单侧附睾组织用4℃、0.9%的生理盐水在冰水浴中制成5%的组织勾浆，将勾浆3000r/min离心10min，取上清待测。取组织勾浆进行MDA、SOD水平的检测，检测SOD用黄嘌呤氧化酶法，检测MDA采用疏代巴比妥法，按试剂盒说明书步骤进行测试，并按其提供的考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒的方法测定蛋白含量。
MDA含量（nmol/mgprot)=测定OD值-对照OD值/标准OD值 -空白OD值*标准品浓度（10nmol/ml)/待测样本蛋白浓度（mgprot/ml)。
总SOD活力（U/mgprot)=对照OD值-测定OD值/对照OD值/50%*反应体系稀释倍数/待测样本蛋白浓度（mgprot/ml)*样本测试前稀释倍数。
3统计方法
有数据用均数±标准差(X±s） 表示，采用软件SPSS 20.0进行单因素方差分析（ANOVA），以 p<0.05为差异有显著性意义。
4结果
4.1 本发明中药组合物对精子质量的影响
结果见表1。
表1 本发明中药组合物对精子质量的影响（X±s、n=6）
Figure DEST_PATH_IMAGE002
注：与空白组相比，△ p<0.05 与模型组相比，* p<0.05
结果表明，采用雷公藤多苷灌胃造模方法后，模型组大鼠精子计数、浓度及精子活力明显低于正常组（p<0.05），提示造模成功。连续给药4周后，中药组合物各剂量组精子计数、浓度即精子活力等指标均有明显改善（P<0.05），效果与阳性药无明显差异。
4.2 本发明中药组合物对精子运动速度的影响
结果见表2。
表2本发明中药组合物对精子运动速度的影响（X±s、n=6）
组别 剂量 VAP路径速度μm／s VCL轨迹速度μm／s VSL进动速度μm／s AREA（运动面积）
空白组（蒸馏水） 3mL 87.90±8.05 108.60±20.95 71.46±3.85 14.55±1.07
模型组（雷公藤多苷） 30mg/kg 43.45±38.74△ 53.63±47.91△ 40.18±36.86△ 8.53±6.92△
五子衍宗丸组 1.02 g/kg 84.80±9.79* 119.13±14.02* 68.35±4.99* 14.01±1.06*
中药组合物高剂量组 21.08 g/kg 85.71±30.35* 101.76±23.28* 62.75±7.63* 12.93±2.69*
中药组合物中剂量组 10.54 g/kg 83.83±10.31* 119.60±21.22* 67.80±5.05* 14.63±1.35*
中药组合物低剂量组 5.27 g/kg 75.06±19.70* 102.11±32.89* 64.11±12.03* 14.43±0.98*
注：与空白组相比，△ p<0.05 与模型组相比，* p<0.05。
结果表明，模型组大鼠精子路径速度、轨迹速度、运动面积等指标均明显低于空白组（p<0.05）。本发明中药组合物各剂量组明显改善精子路径速度、运动面积等指标（p<0.05），效果与阳性药无明显差异。
4.3 本发明中药组合物对附睾中SOD、MDA蛋白的影响
结果见表3。
表3本发明中药组合物对附睾中SOD、MDA蛋白的影响（X±s、n=6）
组别 剂量 超氧化物歧化酶SOD 丙二醛MDA
空白组（蒸馏水） 3mL 8.07±0.60 6.38±0.80
模型组（雷公藤多苷） 30mg/kg 5.78±1.59 9.84±1.50△
五子衍宗丸组 1.02 g/kg 6.17±1.28 4.75±0.55*
中药组合物高剂量组 21.08g/kg 7.81±0.81 5.92±0.66*
中药组合物中剂量组 10.54 g/kg 11.15±5.27* 5.89±1.70*
中药组合物低剂量组 5.27 g/kg 6.98±0.74 5.54±1.14*
注：与空白组相比，△p<0.05 与模型组相比，* p<0.05
结果表明，模型组附睾中超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, SOD）与其他各组比较无明显变化，但有降低趋势。模型组附睾中丙二醛（Malondialdehyde MDA ）与空白组相比明显升高（p<0.05），阳性药组、本发明中药组合物各组与模型组有明显差异（p<0.05）。
4.4 本发明中药组合物对睾丸氧化应激SOD、MDA蛋白的影响
结果见表4。
表4本发明中药组合物对睾丸氧化应激SOD、MDA蛋白的影响
组别 剂量 超氧化物歧化酶SOD 丙二醛MDA
空白组（蒸馏水） 3mL 6.67±0.51 5.82±0.50
模型组（雷公藤多苷） 30mg/kg 3.66±0.45△ 10.94±2.73△
五子衍宗丸组 1.02 g/kg 8.10±0.75* 4.48±1.93*
中药组合物高剂量组 21.08 g/kg 9.08±2.12* 3.66±0.45*
中药组合物中剂量组 10.54 g/kg 10.14±2.73* 5.58±1.40*
中药组合物低剂量组 5.27 g/kg 6.65±2.43* 4.00±0.97*
注：与空白组相比，△p<0.05 与模型组相比，* p<0.05
结果表明，模型组睾丸中SOD与空白组相比明显降低（p<0.05）。模型组睾丸中MDA与空白组相比明显升高（p<0.05），本发明中药组合物各组与模型组相比明显改善睾丸中MDA蛋白含量（p<0.05），效果与阳性药无明显差异。
以上实验结果表明，本发明中药组合物治疗后，不仅可以提升大鼠精子质量，还可以提高血清性激素含量、改善附睾氧化应激损伤程度等。说明本发明中药组合物具有明显的治疗少弱精子症的作用。
效果实施例2
1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验动物
SPF级雄性昆明小鼠，体重18-20g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（京）2016-0011。小鼠均自由饮水和采食，每天更换垫料及饲料，保持环境干燥清洁，环境温度20℃-25℃。
1.1.2实验用药
五子衍宗丸：由北京同仁堂股份有限公司制药场生产，每次6g（60粒），一日两次，批准文号：国药准字Z11020188。
本发明中药组合物，按实施例1方法制备。
对照药物①：生地12g、山茱萸10g、山药30g、枸杞子10g、桑椹子10g、菟丝子10g、远志10g、锁阳10g，共计102g；
对照药物②：在对照药物①的组方基础上加党参12g、黄芪12g、巴戟天10g、肉苁蓉10g、鹿角胶10g，另加上等人参、海狗肾以1:5的成分研末兑汤冲服，每次3g，每日3次，共计165g；
对照药物③：在对照药物①的组方基础上加知母6g、黄柏6g、天门冬10g 麦门冬10g ，共计134g；
对照药物④：在对照药物①的组方基础上加党参12g、黄芪15g、巴戟天10g、淫羊藿10g、制附子6g、金毛狗脊10g，共计165g；
对照药物⑤：在对照药物①的组方基础上加金钱草15g、薏苡仁12g，共计129g；
对照药物⑥：在对照药物①的组方基础上加青皮6g、陈皮10g、泽兰10g、桃仁6g、红花3g，共计137g。
对照药物①~⑥均按照实施例1的制备方法，采用水煎煮方法制备。
1.1.3主要实验试剂
环磷酰胺：由Baxter Onology GmbH生产，批号：7J193A。培养基M199（LifeTechnologies Corporation），批号：1917554。
1.1.4实验方法
小鼠适应性喂养一周，随机分为空白组、模型组、本发明中药组合物组、对照药物①-⑥组、五子衍宗丸组，共十组。除正常组外，其余各组小鼠均腹腔注射环磷酰胺60 mg/kg，持续5d，建立少精子症模型。从第6d开始，正常组和模型组以蒸馏水灌胃。本发明中药组与对照药物①-⑥组分别以人体等效剂量6倍灌胃，五子衍宗丸组组以五子衍宗丸灌胃，每日一次，连续灌胃2周。末次给药后，禁食12h并处死小鼠，进行后续检测。
1.1.5药物用量计算
五子衍宗丸组、本发明中药组合物组和对照药物①-⑥组分别以人体等效剂量6倍计算。
2指标检测
小鼠精子质量检测，包括精子浓度（×106/ml）、精子活力（%）、精子活率（%）和精子畸形率（%）。
2.1精子质量检测
用手术剪刀迅速分离附睾尾，并提出附睾尾上的脂肪组织，将附睾尾放入提前预热37℃的M199培养基中，将附睾尾剪碎，轻轻震荡均匀，使精子充分游出。取10μl精子悬浮液放入精子计板上，选取6个视野，于2分钟内完成测试。
3统计方法
有数据用均数±标准差(X±s） 表示，采用软件SPSS 20.0进行单因素方差分析（ANOVA），以 p<0.05为差异有显著性意义。
4结果
4.1 本发明中药组合物对精子质量的影响
结果见表5。
表5不同中药组合物对精子质量的影响（X±s、n=9）
组别 精子浓度10<sup>6</sup>/ml 精子活力% 精子活率% 精子畸形率%
空白组 5.52±0.24* 50.19±3.88* 60.85±3.63* 5.42±0.50*
模型组 1.89±1.22 16.01±1.23 5.24±1.40 61.65±6.04
五子衍宗丸组 4.74±1.79* 40.93±2.18* 44.86±9.02* 7.97±0.93*
本发明中药组合物组 4.61±0.39* 40.451±3.04*# 45.20±3.75* 6.43±0.27*
对照药物①组 2.71±0.52*# 24.22±1.86*# 10.61±1.48*# 17.05±1.77*#
对照药物②组 2.81±0.54*# 20.78±2.08*# 11.76±1.48*# 18.54±1.61*#
对照药物③组 3.03±0.56*# 25.50±5.27*# 16.44±5.00*# 16.55±0.87*#
对照药物④组 2.41±0.51# 15.92±2.52# 10.66±1.11*# 24.69±2.29*#
对照药物⑤组 2.10±0.53# 15.29±2.87# 16.71±3.16*# 15.34±3.97*#
对照药物⑥组 2.23±0.78# 15.02±0.57# 15.03±1.97*# 16.48±1.42*#
注：*为与模型组对比，p<0.05 #为与本发明中药组合物组对比p<0.05。
由表5可见，模型组精子浓度与空白组对比有显著下降（p<0.05），说明造模成功。五子衍宗丸组与本发明中药组合物组精子浓度与模型组相比有明显提升，差异有统计学意义（p<0.05）。对照药物①、②、③组精子浓度与模型组相比有明显提升（p<0.05），但明显低于本发明中药组合物（p<0.05）。对照药物④、⑤、⑥组精子浓度与模型组相比有上升趋势，但差异无统计学意义（p>0.05）。
模型组精子活力与空白组对比有显著下降（p<0.05），说明造模成功。五子衍宗丸组与本发明中药组合物组精子活力与模型组相比有明显提升，差异有统计学意义（p<0.05）。对照药物①、②、③组精子活力与模型组相比有明显提升（p<0.05），但明显低于本发明中药组合物（p<0.05）。对照药物④、⑤、⑥组精子浓度与模型组相比有上升趋势，但差异无统计学意义（p>0.05）。
模型组精子活率与空白组对比有显著下降（p<0.05），说明造模成功。五子衍宗丸组、本发明中药组合物组以及对照药物①-⑥精子活率与模型组相比有明显提升，差异有统计学意义（p<0.05）。但是，对照药物①-⑥精子活率明显低于本发明中药组合物（p<0.05）。
模型组精子畸形率与空白组对比有显著上升（p<0.05），说明造模成功。五子衍宗丸组、本发明中药组合物组以及对照药物①-⑥与模型组相比精子畸形率有明显下降，差异有统计学意义（p<0.05）。但是，对照药物①-⑥精子畸形率明显高于本发明中药组合物（p<0.05）。
综上所述，本发明中药组合物与对照药物均可以治疗男性少弱精子症，可以显著提高精子密度、精子活力、精子活率，降低精子畸形率。但本发明中药组合物治疗效果显著优于对照药物。

Claims (10)

1.一种治疗男性不育的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由如下原料药制成：巴戟天8-40重量份、枸杞子5-32重量份、金钱草8-40重量份、水蛭1-6重量份、桑椹8-40重量份、萆薢3-20重量份、菟丝子5-32重量份、鱼鳔8-40重量份。
2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由如下原料药制成：巴戟天10-32重量份、枸杞子7-28重量份、金钱草10-32重量份、水蛭2-6重量份、桑椹10-32重量份、萆薢4-18重量份、菟丝子7-28重量份、鱼鳔10-32重量份；
或，巴戟天12-30重量份、枸杞子10-22重量份、金钱草12-30重量份、水蛭2-5重量份、桑椹12-30重量份、萆薢5-15重量份、菟丝子10-22重量份、鱼鳔12-30重量份；
或，巴戟天15-25重量份、枸杞子12-18重量份、金钱草15-25重量份、水蛭2-4重量份、桑椹15-25重量份、萆薢7-13重量份、菟丝子12-18重量份、鱼鳔15-25重量份。
3.如权利要求2所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由如下原料药制成：巴戟天20重量份、枸杞子15重量份、金钱草20重量份、水蛭3重量份、桑椹20重量份、萆薢10重量份、菟丝子15重量份、鱼鳔20重量份；
或，巴戟天17重量份、枸杞子17重量份、金钱草16重量份、水蛭4重量份、桑椹16重量份、萆薢12重量份、菟丝子13重量份、鱼鳔23重量份；
或，巴戟天23重量份、枸杞子13重量份、金钱草24重量份、水蛭2重量份、桑椹23重量份、萆薢8重量份、菟丝子17重量份、鱼鳔16重量份。
4.如权利要求1-3任一项所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物是各原料药粉碎后混合而成的组合物。
5.如权利要求4所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物加入药学上可接受的辅料制成常规剂型。
6.一种治疗男性不育的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由如下原料制成：巴戟天提取物8-40重量份、枸杞子提取物5-32重量份、金钱草提取物8-40重量份、水蛭提取物1-6重量份、桑椹提取物8-40重量份、萆薢提取物3-20重量份、菟丝子提取物5-32重量份、鱼鳔提取物8-40重量份。
7.如权利要求6所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由如下原料制成：巴戟天提取物10-32重量份、枸杞子提取物7-28重量份、金钱草提取物10-32重量份、水蛭提取物2-6重量份、桑椹提取物10-32重量份、萆薢提取物4-18重量份、菟丝子提取物7-28重量份、鱼鳔提取物10-32重量份；
或，巴戟天提取物12-30重量份、枸杞子提取物10-22重量份、金钱草提取物12-30重量份、水蛭提取物2-5重量份、桑椹提取物12-30重量份、萆薢提取物5-15重量份、菟丝子提取物10-22重量份、鱼鳔提取物12-30重量份；
或，巴戟天提取物15-25重量份、枸杞子提取物12-18重量份、金钱草提取物15-25重量份、水蛭提取物2-4重量份、桑椹提取物15-25重量份、萆薢提取物7-13重量份、菟丝子提取物12-18重量份、鱼鳔提取物15-25重量份。
8.如权利要求7所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由如下原料制成：巴戟天提取物20重量份、枸杞子提取物15重量份、金钱草提取物20重量份、水蛭提取物3重量份、桑椹提取物20重量份、萆薢提取物10重量份、菟丝子提取物15重量份、鱼鳔提取物20重量份；
或，巴戟天提取物17重量份、枸杞子提取物17重量份、金钱草提取物16重量份、水蛭提取物4重量份、桑椹提取物16重量份、萆薢提取物12重量份、菟丝子提取物13重量份、鱼鳔提取物23重量份；
或，巴戟天提取物23重量份、枸杞子提取物13重量份、金钱草提取物24重量份、水蛭提取物3重量份、桑椹提取物23重量份、萆薢提取物8重量份、菟丝子提取物17重量份、鱼鳔提取物16重量份。
9.如权利要求1-3、6-8任一项所述的中药组合物在制备治疗男性不育的药物中的应用。
10.如权利要求1-3、6-8任一项所述的中药组合物在制备治疗少弱精子症的药物中的应用。
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第十七讲 关于少弱精子症治疗难点与制方思路的讨论;郑燕飞等;《中医药通报杂志》;20141025;第13卷(第5期);第5页 1王琦教授开讲 *
菟丝子、仙茅、巴戟天对人精子体外运动和膜功能影响的研究;彭守静等;《中国中西医结合杂志》;19970320;第17卷(第03期);第145-147页 *
陈文伯治疗男性不育症的学术特点;尚博文等;《北京中医》;19931025(第05期);第15页右栏第1段 *

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