CN108752480B - 一种免疫原组合物、其制备方法及其用途 - Google Patents
一种免疫原组合物、其制备方法及其用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108752480B CN108752480B CN201810538359.2A CN201810538359A CN108752480B CN 108752480 B CN108752480 B CN 108752480B CN 201810538359 A CN201810538359 A CN 201810538359A CN 108752480 B CN108752480 B CN 108752480B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- peptide
- polypeptide
- composition
- ctni
- probnp
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 76
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title claims abstract description 62
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 25
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 26
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 14
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 8
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 2
- 101000800130 Bos taurus Thyroglobulin Proteins 0.000 claims description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 2
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 claims description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 24
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 abstract description 23
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 22
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 abstract description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 abstract description 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 abstract description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 30
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 13
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 11
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 11
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 11
- 238000011161 development Methods 0.000 description 10
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 8
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 8
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 102400001263 NT-proBNP Human genes 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 108010008064 pro-brain natriuretic peptide (1-76) Proteins 0.000 description 6
- 101100537532 Rattus norvegicus Tnni3 gene Proteins 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 5
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 5
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N Pyrrole Chemical compound C=1C=CNC=1 KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 2
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000001571 immunoadjuvant effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VCSABYLVNWQYQE-UHFFFAOYSA-N Ala-Lys-Lys Natural products NCCCCC(NC(=O)C(N)C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O VCSABYLVNWQYQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VJVQKGYHIZPSNS-FXQIFTODSA-N Ala-Ser-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N VJVQKGYHIZPSNS-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- DWOGMPWRQQWPPF-GUBZILKMSA-N Asp-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O DWOGMPWRQQWPPF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- VCDNHBNNPCDBKV-DLOVCJGASA-N His-Ala-Lys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N VCDNHBNNPCDBKV-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- ZTLGVASZOIKNIX-DCAQKATOSA-N Leu-Gln-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N ZTLGVASZOIKNIX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- LOLUPZNNADDTAA-AVGNSLFASA-N Leu-Gln-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LOLUPZNNADDTAA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- PRSBSVAVOQOAMI-BJDJZHNGSA-N Lys-Ile-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN PRSBSVAVOQOAMI-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- YDDDRTIPNTWGIG-SRVKXCTJSA-N Lys-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YDDDRTIPNTWGIG-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- UZLRNHDTHPGJCO-UHFFFAOYSA-N NC1=CC(C(C(=O)O)C=C1)=[N+]=[N-] Chemical compound NC1=CC(C(C(=O)O)C=C1)=[N+]=[N-] UZLRNHDTHPGJCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010073443 Ribi adjuvant Proteins 0.000 description 1
- YQHZVYJAGWMHES-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YQHZVYJAGWMHES-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N Ser-Pro-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KBLYJPQSNGTDIU-LOKLDPHHSA-N Thr-Glu-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O KBLYJPQSNGTDIU-LOKLDPHHSA-N 0.000 description 1
- SGAOHNPSEPVAFP-ZDLURKLDSA-N Thr-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SGAOHNPSEPVAFP-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- CAJZGSNKLFFARL-UHFFFAOYSA-N aminooxymethanol Chemical compound NOCO CAJZGSNKLFFARL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 108010082286 glycyl-seryl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002558 medical inspection Methods 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- FDRCDNZGSXJAFP-UHFFFAOYSA-M sodium chloroacetate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)CCl FDRCDNZGSXJAFP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4716—Muscle proteins, e.g. myosin, actin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/58—Atrial natriuretic factor complex; Atriopeptin; Atrial natriuretic peptide [ANP]; Cardionatrin; Cardiodilatin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/76—Albumins
- C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/35—Valency
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供了一种免疫原组合物，它包括如下组分：多肽与载体的偶联物和所述的多肽，还提供了制备这种免疫原组合物的方法，包括如下步骤：将多肽与载体的偶联物和所述的多肽按照质量比为：1:5‑5:1混合后，质量比优选为1:1，加入生理盐水将免疫原组合物的混合物稀释到2倍最终浓度，得稀释混合液，再加入与稀释混合液等体积的所述的免疫佐剂稀释至最终浓度，制备得到免疫原组合物；本发明还提供了采用这种免疫原组合物得到的单克隆抗体，最后得出，使用本发明中的免疫原组合物对动物进行免疫，免疫后的动物的血清效价得到了显著的提高，大大的增加了单克隆抗体中杂交瘤细胞的阳性率，减少了人力以及物力资源的浪费。
Description
技术领域
本发明属于动物免疫领域，具体涉及制备单克隆抗体领域。
背景技术
杂交瘤技术自1975年建立以来，在现代医学检验，治疗等领域发挥了极为重要的作用。该技术是通过在体外把小鼠骨髓瘤细胞和浆细胞进行融合，筛选出分泌特定抗体的杂交瘤细胞，该细胞同时具有骨髓瘤细胞的永生性和浆细胞持续分泌特定抗体的能力，能在体外进行培养并生产抗体。尽管多年来杂交瘤制备技术不断发展，但传统的单克隆抗体制备过程仍旧繁琐。融合后的杂交瘤细胞筛选通量较大，每块96孔板对应取细胞上清进行ELISA筛查，再进行细胞的多轮克隆化和扩大培养。工作量的多少在很大程度上由产生阳性杂交瘤的多少决定，而阳性杂交瘤的产生依赖于分泌特异性抗体的浆细胞的多少。若前期筛查过程阳性杂交瘤细胞过少，会造成以下几点影响：①为了选出更多的阳性杂交瘤，需要增加更多的铺板板数及融合次数，导致浪费过多的培养耗材及试剂，特别是胎牛血清等高成本试剂；②更多的铺板板数和融合次数以及冗长的ELISA筛查过程导致更多的人力物力消耗；③拖长单克隆抗体的制备周期；所以增加浆细胞的产生就显得尤为重要，但是传统的免疫方式均采用佐剂与抗原混合后进行小鼠免疫，促进淋巴细胞的活化，募集及相互接触，达到增强免疫效果，提高机体免疫应答的抗体滴度，常用的佐剂有弗氏佐剂，RIBI 佐剂，氢氧化铝佐剂等，但在实际应用中发现，传统的免疫方式中采用的免疫原并不能满足所有抗原的免疫及单克隆抗体的制备，所以开发一种新的免疫原来提高抗体的滴度就显得尤为重要。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种免疫原组合物，所述的组合物包含如下组分：多肽与载体结合所形成的偶联物和所述的多肽。
进一步的，所述的多肽与载体结合所形成的偶联物和所述的多肽的质量比为：1:5-5:1。
进一步的，所述的多肽与载体结合所形成的偶联物和所述的多肽的质量比为1:1。
进一步的，所述的载体为蛋白质、多肽聚合物和大分子聚合物中的一种。
进一步的，所述的载体为蛋白质。
进一步的，所述的免疫原组合物还包括溶剂与免疫佐剂，所述免疫佐剂的体积等于所述偶联物、所述多肽以及所述溶剂这三种物质体积之和。
进一步的，所述溶剂为生理盐水。
本发明还提供了一种制备上诉免疫原组合物的方法，其方法如下：将多肽与载体结合所形成的偶联物和所述的多肽按照质量比为：1:5-5:1混合后，质量比优选为1:1，加入生理盐水将免疫原组合物的混合物稀释到2倍最终浓度，得稀释混合液，再加入与稀释混合液等体积的所述的免疫佐剂稀释至最终浓度，制备得到免疫原组合物。
本发明还提供了采用所述免疫原组合物对动物进行免疫的方法，这种方法中包括了向动物注射所述免疫原组合物这一步骤。
本发明还提供了所述免疫原组合物在制备单克隆抗体中的用途。
进一步的，所述的单克隆抗体为抗NT-proBNP单克隆抗体。
进一步的，得到所述抗NT-ptoBNP单克隆抗体，采用的免疫原组合物为NT-proBNP-肽和NT-proBNP-肽与载体结合所形成的偶联物。
进一步的，所述的NT-proBNP-肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
进一步的，所述的单克隆抗体为抗CTNI单克隆抗体；
进一步的，得到所述抗CTNI单克隆抗体，采用的免疫原组合物为CTNI-肽和CTNI-肽与载体结合所形成的偶联物。
进一步的，所述的CTNI-肽的氨基酸序列如SEQ IDNO：2所示。
本发明中的最终浓度对于不同的项目，也就是对于制备不同单克隆抗体来说，其中制备免疫原组合物方法中的最终浓度是不一样的，本发明中对于制备抗NT-proBNP单克隆抗体来说，其中制备免疫原组合物方法中的最终浓度设定为1mg/mL，对于制备抗CTNI单克隆抗体来说，其中制备免疫原组合物方法中的最终浓度也设定为1mg/mL。
本发明中的载体为蛋白质、多肽聚合物和大分子聚合物中的一种，而不限于其中的任何一种，其中蛋白质为牛血清蛋白、人血清蛋白、牛甲状腺球蛋白和血蓝蛋白中的一种或者多种，其中的多肽聚合物为人工合成的载体，其中的大分子聚合物包括羧甲基纤维素和聚乙烯吡咯等，本发明中采用的载体优选为蛋白质。
本发明中的免疫佐剂为化合物和生物制剂中的一种，而不限于其中的任何一种，其中的化合物包括氢氧化铝、明矾、矿物油、吐温-80和弗式佐剂等，其中的生物制剂包括细胞因子、热休克蛋白、卡介苗、短小棒状杆菌、百日咳杆菌、革兰阴性菌细胞壁成分脂多糖和类脂A等。
使用本发明中的免疫原组合物能够制备任何的单克隆抗体，不限于制备本发明实施例中提到的抗NT-proBNP单克隆抗体与抗CTNI单克隆抗体，制备NT-proBNP单克隆抗体不限于使用本发明中氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的NT-proBNP-肽，也可以使用针对 NT-proBNP不同表位的肽段；同理，制备CTNI单克隆抗体不限于使用本发明中氨基酸序列如SEQIDNO：2所示的CTNI-肽，也可以使用针对CTNI不同表位的肽段。
本发明中的动物免疫方法为常规的动物免疫方法。
多肽与抗原的偶联方法：
1、带有游离氨基或游离羧基以及两种基团都有的抗原，可直接与载体连接，连接方式有碳二亚胺法、戊二醛法、缓和酸酐法和过碘酸氧化法；
2、无羟基和氨基的抗原，需要用化学方法使其转变为带有游离氨基或游离羟基的衍生物才能与载体连接，常采用琥珀酸酐法、O-(羟甲基)羟胺法、一氯醋钠法和重氮的对氨基苯甲酸法。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：使用本发明中的免疫原组合物对动物进行免疫，免疫后的动物的血清效价得到了显著的提高，大大的增加了杂交瘤细胞的阳性率，为最后得到高效价的单克隆抗体奠定了良好的基础，减少了人力以及物力资源的浪费。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
本发明的有益效果通过如下实施例进行说明：
实施例1抗NT-proBNP单克隆抗体的制备
一、免疫原组合物中NT-proBNP-肽-BSA与NT-proBNP-肽质量比的确定
1、按NT-proBNP-肽-BSA与NT-proBNP-肽质量比分别为1:10,1:5,1:2；1:1；2:1；5:1； 10:1；15:1制备混合免疫原组合物的混合物，再加入生理盐水将免疫原组合物的混合物稀释到2倍最终浓度，得稀释混合液，再加入与稀释混合液等体积的所述的免疫佐剂稀释至最终浓度，制备得到免疫原组合物。(其中的最终浓度为1mg/mL)
2、取免疫原组合物注射免疫小鼠
对小鼠进行背部多点注射，每组分配三只小鼠，100μL/只。
3、测定免疫小鼠的血清效价
a、包被：用0.05M PH9.6碳酸盐包被缓冲液将NT-proBNP稀释至蛋白质含量为5μg/ml。在每个酶标板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
b、加样：尾血按1:1000,1:3000,1:9000……稀释，加稀释完成的尾血0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
c、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml.37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
d、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
e、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
f、结果判定：在ELISA检测仪上，于450nm处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。实验结果见下表1
4、取脾细胞与骨髓瘤细胞融合
无菌条件下摘取小鼠脾脏，制备单细胞悬液，同时收获sp2/0，清洗后对两种细胞分别计数，最终按1:1比例混合均匀，进行常规PEG融合，按10万细胞/孔进行铺板培养。
5、融合后采用HAT培养液培养和间接ELISA检测筛选，获得阳性杂交瘤细胞并测定其阳性率
包被：NT-proBNP-肽-OVA按5μg/ml，100μl/孔加至酶标板内，4℃过夜；
一抗：洗板3次，取细胞上清，(50μl上清+50μl稀释液)/孔，37℃孵育60min；
二抗：洗板3次，将羊抗鼠酶标二抗，稀释至工作浓度，100μl/孔加样，37℃孵育40min；
显色：洗板3次，加入显色液100μl/孔，显色充分后，加终止液终止，50μl/孔，读取OD值。实验结果见下表1。
表1三只小鼠血清效价以及采用此血清中的B细胞得到的杂交瘤细胞阳性率
结论：从上表1中得出，从血清效价以及阳性孔数占比率两者结合起来分析，当NT-proBNP-肽-BSA与NT-proBNP-肽的质量比在1:5-5:1之间时，该免疫原组合物是适用的，并且效果是比较好的，当NT-proBNP-肽-BSA与NT-proBNP-肽的质量比为1:1时，其效果是最好的。
二、以NT-proBNP-肽-BSA与NT-proBNP-肽质量比为1:1作为免疫原制备单克隆抗体
S1、免疫原组合物(关于NT-proBNP)的制备
1、NT-proBNP-肽的合成：委托吉尔生化(上海)有限公司合成。
2、NT-proBNP-肽-BSA的制备
将NT-proBNP-肽与BSA按比例加入适当的溶液中，然后加入水溶性碳化二亚胺，搅拌1-2h，置室温24h，再进行透析即可。
3、免疫原组合物的制备
S1、取137μL浓度为4.0mg/mL的NT-proBNP-肽-BSA与275μL浓度为2.0mg/mL 的NT-proBNP-肽，将二者混合，在混合液中加入138μL生理盐水，混合，得稀释混合液，再在稀释混合液中加入550μL弗氏佐剂完成乳化，对于首次免疫，前述的弗式佐剂为弗式完全佐剂，对于加强免疫，前述的弗式佐剂为弗式不完全佐剂。
S2、取免疫原组合物注射免疫小鼠：
将S1中得到的乳化后的免疫原组合物对小鼠进行背部皮下多点注射，共计10只，100 μL/只；
S3、测定免疫小鼠的血清效价
其操作步骤与实施例1中一、3中的步骤一致。其实验结果见下表2。
S4、取脾细胞与骨髓瘤细胞融合
其操作步骤与实施例1中一、4中的步骤一致。
S5、融合后采用HAT培养液培养和间接ELISA检测筛选，获得阳性杂交瘤细胞并测定其阳性率
其操作步骤与实施例1中一、5中的步骤一致。其实验结果见下表2。
S6、用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行克隆化直至出现阳性单克隆率为100％。
S7、采用小鼠体内诱生腹水法制备NT-proBNP-肽单克隆抗体
将筛选出来的细胞株进行数量扩增，数量足够时把细胞重悬至1640基础培养基中，调整细胞浓度为5×106个/mL，注射至已接受石蜡预刺激的小鼠腹腔内，0.5mL/只，观察并收取腹水。
S8、NT-proBNP-肽单克隆抗体的效价的测定
包被：NT-proBNP-肽-OVA按5μg/ml，100μl/孔加至酶标板内，4℃过夜；
一抗：洗板，抗体稀释至1ug/mL(记作1:1000)，3倍倍比稀释，37℃孵育60min；
二抗：洗板，将羊抗鼠酶标二抗，适当稀释后，100μl/孔加样，37℃孵育40min；
显色：洗板，加入显色液100μl/孔，显色充分后，加终止液终止，50μl/孔，读取 OD值。其实验结果见下表3。
对比例1
对比例1与实施例1的区别在于：步骤S1中，抗原是使用单独的NT-proBNP-肽-BSA，其余相同。
对比例2
对比例2与实施例1的区别在于：在步骤S1中，抗原是使用单独的NT-proBNP-肽，其余相同。
实施例1、对比例1与对比例2中的实验结果
1、小鼠血清效价实验结果
表2小鼠血清(NT-ProBNP)效价
实验结果分析：从实施例1中的实验结果看出，有50％的小鼠的血清效价达到了1×106级别，从对比例1中的实验结果看出，30％的小鼠的血清效价达到了1×105级别，从对比例2中的实验结果看出，只有10％的小鼠的血清效价只达到了1×104级别，由此而看，采用本发明的免疫原组合物对小鼠进行免疫得到的小鼠血清效价明显提高，单独采用免疫原组合物中的任意一种都达不到如此的效果。
2、经过筛选后，测的的杂交瘤细胞阳性率的实验结果
表3杂交瘤细胞阳性率结果
| 铺板板数 | 阳性孔数 | 阳性孔数率 | |
| 实施例1 | 54 | 1036 | 20.0％ |
| 对比例1 | 48 | 623 | 13.5％ |
| 对比例2 | 23 | 47 | 2.1％ |
实验结果分析：从上表3中看出，采用本发明中的免疫原对动物进行免疫后得到的得到的B细胞更容易与骨髓瘤细胞进行融合，并且融合的成功率越高，其中实施例1中的阳性孔数是对比例1的阳性孔数的1.7倍，实施例1中的阳性孔数是对比例2的阳性孔数的 22倍。
3、单克隆抗体的效价的实验结果
表4单克隆抗体(NT-ProBNP)效价实验结果
实验结果分析：从上表4中看出，采用本发明中的免疫原组合物来对小鼠进行免疫后，得到的相应的单克隆抗体的效价为1×106级别，远远高于单独采用免疫原组合物中的任意一种免疫原对小鼠进行免疫后得到的单克隆抗体的效价(分别为1×105和1×104)，并且其有效的单克隆抗体的柱数的总量也远远高于对比例中的方法得到的单克隆抗体的株树的总量。
实施例2抗CTNI单克隆抗体的制备
一、免疫原组合物中CTNI-肽-BSA与CTNI-肽质量比的确定
1、按CTNI-肽-BSA与CTNI-肽质量比分别为1:10,1:5,1:2；1:1；2:1；5:1；10:1；15:1制备混合免疫原组合物的混合物，再加入生理盐水将免疫原组合物的混合物稀释到2倍最终浓度，得稀释混合液，再加入与稀释混合液等体积的所述的免疫佐剂稀释至最终浓度，制备得到免疫原组合物。(其中的最终浓度为1mg/mL)
2、取免疫原组合物组合物注射免疫小鼠
3、测定小鼠血清效价，其过程与实施例1中的过程一致。
4、取脾细胞与骨髓瘤细胞融合，其过程与实施例1中的过程一致。
5、融合后采用HAT培养液培养和间接ELISA检测筛选，获得阳性杂交瘤细胞并测定其阳性率，其过程与实施例1中的过程一致，其实验结果见下表5。
表5三只小鼠血清效价以及采用此血清中的B细胞得到的杂交瘤细胞阳性率
结论：从上表5 中得出，从血清小家以及阳性孔数率占比率两者结合起来分析，当CTNI-肽-BSA与CTNI-肽的质量比在1:5-5:1之间时，该免疫原组合物是有效的，并且效果是比较好的。当CTNI-肽-BSA与CTNI-肽的质量比为1:1时，其效果是最好的。
二、以CTNI-肽-BSA与CTNI-肽质量比为1:1作为免疫原制备单克隆抗体
S1、免疫原组合物(关于CTNI)的制备
1、CTNI-肽的合成：委托吉尔生化(上海)有限公司合成。
2、CTNI-肽-BSA的制备
将NT-proBNP-肽与BSA按比例加入适当的溶液中，然后加入水溶性碳化二亚胺，搅拌1-2h，置室温24h，再进行透析即可。
3、免疫原组合物的制备
取110μL浓度为5.0mg/mL的CTNI-肽-BSA与220μL浓度为2.5mg/mL的CTNI- 肽，将二者混合，在混合液中加入220μL生理盐水，混合，得稀释混合液，再在稀释混合液中加入550μL弗氏佐剂完成乳化，首轮免疫使用弗氏完全佐剂，加强免疫使用弗氏不完全佐剂。
S2、取免疫原组合物注射免疫小鼠：
将S1中步骤3中得到的乳化后的抗原对小鼠进行背部皮下多点注射，共计10只，100 μL/只；
S3、测定免疫小鼠的血清效价
其操作步骤与实施例2中一、3中的步骤一致。
S4、取脾细胞与骨髓瘤细胞融合
其操作步骤与实施例2中一、4中的步骤一致。
S5、融合后采用HAT培养液培养和间接ELISA检测筛选，获得阳性杂交瘤细胞并测定其阳性率
其操作步骤与实施2中1、5中的步骤一致。其实验结果见下表6。
S6、用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行克隆化直至出现阳性单克隆率为100％。
S7、采用小鼠体内诱生腹水法制备CTNI-肽单克隆抗体
将筛选出来的细胞株进行数量扩增，数量足够时把细胞重悬至1640基础培养基中，调整细胞浓度为5×106个/mL，注射至已接受石蜡预刺激的小鼠腹腔内，0.5mL/只，观察并收取腹水。
S8、CTNI-肽单克隆抗体的效价的测定
包被：NT-proBNP-肽-OVA按5μg/ml，100μl/孔加至酶标板内，4℃过夜；
一抗：洗板，抗体稀释至1ug/mL(记作1:1000)，3倍倍比稀释，37℃孵育60min；
二抗：洗板，将羊抗鼠酶标二抗，稀释后，100μl/孔加样，37℃孵育40min；
显色：洗板，加入显色液100μl/孔，显色充分后，加终止液终止，50μl/孔，读取 OD值。其实验结果见下表3。
对比例3
对比例3与实施例2的区别在于：步骤S1中，抗原是使用单独的CTNI-肽-BSA，其余相同。
对比例4
对比例4与实施例2的区别在于：在步骤S1中，抗原是使用单独的CTNI-肽，其余相同。
实施例2、对比例3与对比例4中的实验结果
1、小鼠血清效价实验结果
表6小鼠血清(CTNI)效价
实验结果分析：从实施例2中的实验结果看出，有70％的小鼠的血清效价达到了1×105级别，从对比例3中的实验结果看出，90％的小鼠的血清效价达到了1×104级别，从对比例4中的实验结果看出，只有10％的小鼠的血清效价只达到了1×104级别，由此而看，采用本发明的免疫原组合物对小鼠进行免疫得到的小鼠血清效价明显提高，单独采用免疫原组合物中的任意一种都达不到如此的效果。
2、经过筛选后，测的杂交瘤细胞阳性率的实验结果
表7杂交瘤细胞阳性率结果
| 铺板板数 | 阳性孔数 | 阳性孔数率 | |
| 实施例2 | 44 | 1574 | 37.3％ |
| 对比例3 | 32 | 863 | 28.1％ |
| 对比例4 | 28 | 74 | 2.8％ |
实验结果分析：从上表7中看出，其中实施例2中的阳性孔数是对比例3的阳性孔数的1.8倍，实施例2中的阳性孔数是对比例4的阳性孔数的21倍，由此得出采用本发明中的免疫原对动物进行免疫后得到的得到的B细胞更容易与骨髓瘤细胞进行融合，并且融合的成功率越高。
3、单克隆抗体的效价的实验结果
表8单克隆抗体(CTNI)效价实验结果
实验结果分析：从上表8中看出，采用本发明中的免疫原组合物来对小鼠进行免疫后，得到的相应的单克隆抗体的效价为1×106级别，远远高于单独采用免疫原组合物中的任意一种免疫原对小鼠进行免疫后得到的单克隆抗体的效价(分别为1×105和低于1×104级别)，并且其有效的单克隆抗体的株数的总量也远远高于对比例中的方法得到的单克隆抗体的株树的总量,由此得出采用相同的实验途径以及材料，采用本发明的免疫原得到有效并且质量更高的抗体越多，这无形中就减少了人力以及物力资源的浪费。
序列表
<110> 重庆中元汇吉生物技术有限公司
<120> 一种免疫原组合物、其制备方法及其用途
<130> 2018
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Ser Pro Gly Ser Ala Ser Asp Leu Glu Thr Ser Gly Leu Gln Glu Gln
1 5 10 15
<210> 2
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Thr Glu Pro His Ala Lys Lys Lys Ser Lys Ile Ser Ala Ser Arg Lys
1 5 10 15
Leu Gln Leu Lys
20
Claims (8)
1.一种免疫原组合物，其特征在于：它包含如下组分：多肽与载体结合所形成的偶联物和所述的多肽，所述的多肽与载体结合所形成的偶联物和所述的多肽的质量比为：1:5-5:1，所述多肽为NT-proBNP-肽或CTNI-肽，所述NT-proBNP-肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述的CTNI-肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述的多肽与载体结合所形成的偶联物和所述的多肽的质量比为1:1。
3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述的载体为蛋白质、多肽聚合物和大分子聚合物中的一种。
4.如权利要求3所述的组合物，其特征在于：所述的蛋白质为牛血清蛋白、人血清蛋白、牛甲状腺球蛋白和血蓝蛋白中的一种或者多种。
5.如权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述的组合物还包括溶剂与免疫佐剂，所述免疫佐剂的体积等于所述偶联物、所述多肽以及所述溶剂这三种物质体积之和。
6.一种制备如权利要求1-5任意一项所述的组合物的方法，其特征在于：将多肽与载体结合所形成的偶联物和所述的多肽按照质量比为：1:5-5:1混合后，加入生理盐水将免疫原组合物的混合物稀释到2倍最终浓度，得稀释混合液，再加入与稀释混合液等体积的所述的免疫佐剂稀释至最终浓度，制备得到免疫原组合物。
7.权利要求1-5任意一项所述的组合物在制备抗NT-proBNP单克隆抗体或抗CTNI单克隆抗体中的用途。
8.如权利要求7所述的用途，其特征在于：得到所述抗NT-proBNP单克隆抗体，采用的免疫原组合物为NT-proBNP-肽和NTproBNP-肽与载体结合所形成的偶联物；得到所述抗CTNI单克隆抗体，采用的免疫原组合物为CTNI-肽和CTNI-肽与载体结合所形成的偶联物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810538359.2A CN108752480B (zh) | 2018-05-30 | 2018-05-30 | 一种免疫原组合物、其制备方法及其用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810538359.2A CN108752480B (zh) | 2018-05-30 | 2018-05-30 | 一种免疫原组合物、其制备方法及其用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108752480A CN108752480A (zh) | 2018-11-06 |
| CN108752480B true CN108752480B (zh) | 2022-03-29 |
Family
ID=64003940
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810538359.2A Active CN108752480B (zh) | 2018-05-30 | 2018-05-30 | 一种免疫原组合物、其制备方法及其用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108752480B (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1723041A (zh) * | 2002-09-16 | 2006-01-18 | 尼奥瓦克斯公司 | 包含抗原性杂络物的稳定的免疫原性产物 |
| CN1832964A (zh) * | 2003-05-12 | 2006-09-13 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 用结合脑钠尿肽前体分子氨基酸41－46的单克隆抗体检测脑钠尿肽前体分子的方法 |
| WO2007138163A2 (en) * | 2006-05-26 | 2007-12-06 | Hytest Ltd. | Antibodies and standard for nt-probnp and probnp immunoassays |
| US7384751B1 (en) * | 1997-07-16 | 2008-06-10 | Queen's University At Kingston | Methods of diagnosing muscle damage |
| CN102770444A (zh) * | 2010-02-26 | 2012-11-07 | 诺华有限公司 | 免疫原性蛋白和组合物 |
| CN102879589A (zh) * | 2012-09-26 | 2013-01-16 | 中国人民解放军总医院 | 一种能稳定保存的人NT-proBNP制剂及其制备方法 |
-
2018
- 2018-05-30 CN CN201810538359.2A patent/CN108752480B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7384751B1 (en) * | 1997-07-16 | 2008-06-10 | Queen's University At Kingston | Methods of diagnosing muscle damage |
| CN1723041A (zh) * | 2002-09-16 | 2006-01-18 | 尼奥瓦克斯公司 | 包含抗原性杂络物的稳定的免疫原性产物 |
| CN1832964A (zh) * | 2003-05-12 | 2006-09-13 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 用结合脑钠尿肽前体分子氨基酸41－46的单克隆抗体检测脑钠尿肽前体分子的方法 |
| WO2007138163A2 (en) * | 2006-05-26 | 2007-12-06 | Hytest Ltd. | Antibodies and standard for nt-probnp and probnp immunoassays |
| CN102770444A (zh) * | 2010-02-26 | 2012-11-07 | 诺华有限公司 | 免疫原性蛋白和组合物 |
| CN102879589A (zh) * | 2012-09-26 | 2013-01-16 | 中国人民解放军总医院 | 一种能稳定保存的人NT-proBNP制剂及其制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 2种方法制备小肽免疫原的免疫特性比较;刘颖等;《天津医药》;20100122;第37卷(第10期);第862-864页 * |
| Detection of NT-pro BNP using fluorescent protein modified by streptavidin as a label in immunochromatographic assay;Haixia Li等;《Sensing and Bio-Sensing Research》;20161231;第11卷;第1-7页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN108752480A (zh) | 2018-11-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103408664B (zh) | 抗人cxcl1单克隆抗体或其片段 | |
| CN101928346B (zh) | 一种抗人组织激肽释放酶单克隆抗体及其制备 | |
| CN112940087B (zh) | 一种SARS-CoV和SARS-CoV-2共同抗原表位肽及其应用 | |
| CN113736744B (zh) | 洋地黄毒苷单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用 | |
| CN111732664A (zh) | 一种新型冠状病毒重组蛋白、兔-人嵌合抗体、其制备方法及应用 | |
| CN110272502A (zh) | 免疫原、分泌抗心肌肌钙蛋白i单克隆抗体的杂交瘤细胞及制备方法、单克隆抗体及应用 | |
| CN112457392B (zh) | 一种可溶性st2蛋白抗原决定簇多肽及其应用 | |
| CN102703388A (zh) | 抗人mCRP蛋白的单克隆抗体、杂交瘤细胞系和试剂盒 | |
| CN110879293A (zh) | 一种筛选分泌配对单克隆抗体的杂交瘤细胞株的方法与应用 | |
| CN107561289B (zh) | 人心肌肌钙蛋白i的双抗夹心elisa检测试剂盒 | |
| CN109912713A (zh) | 用于免疫诊断试剂配制的肌钙蛋白i抗体的制备方法及获得的菌株 | |
| EP0142345A2 (en) | Anti-idiotypic vaccine employing anti-idiotypic monoclonal antibodies | |
| CN107557345A (zh) | 人心肌肌钙蛋白i的杂交瘤细胞株7d2及单克隆抗体和应用 | |
| CN101580545B (zh) | 抗h5n1来源的血凝素蛋白的单克隆抗体及其应用 | |
| CN106399294B (zh) | 一种抗人降钙素原蛋白n末端抗原表位的单克隆抗体7h8的制备 | |
| CN108752480B (zh) | 一种免疫原组合物、其制备方法及其用途 | |
| CN109342711B (zh) | 多物种IL-1Ra与IL-1β及其比值同步测定的ELISA试剂盒 | |
| CN102690351A (zh) | 间日疟原虫醛缩酶蛋白单克隆抗体的制备方法 | |
| CN110951703B (zh) | 一种间日疟原虫乳酸脱氢酶重组蛋白及其单克隆抗体的制备 | |
| CN110894216B (zh) | 一种猪流行性腹泻病毒抗原表位肽、单克隆抗体及应用 | |
| CN101928700B (zh) | 蛋白激酶pftk1单克隆抗体及其制备方法 | |
| CN117024595B (zh) | 抗人st2的单克隆抗体及其应用 | |
| CN118702812B (zh) | 一种抗新型冠状病毒膜蛋白的抗体或其抗原结合片段及其应用 | |
| JPH1175839A (ja) | モノクローナル抗体、細胞株及びｎ１，ｎ１２−ジアセチルスペルミンの測定法 | |
| CN114805564B (zh) | 特异性识别SARS-CoV-2 S蛋白NTD区域的单克隆抗体及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: Floor 1-4, building 30, no.6, Taikang Road, Zone C, Jianqiao Industrial Park, Dadukou District, Chongqing 400000 Applicant after: Zhongyuan Huiji Biotechnology Co.,Ltd. Address before: Floor 1-4, building 30, no.6, Taikang Road, Zone C, Jianqiao Industrial Park, Dadukou District, Chongqing 400000 Applicant before: CHONGQING ZHONGYUAN HUIJI BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. |
|
| CB02 | Change of applicant information | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: No. 45 Shilin Avenue, Tiaodeng Town, Dadukou District, Chongqing 400082 Patentee after: Zhongyuan Huiji Biotechnology Co.,Ltd. Country or region after: China Address before: Floor 1-4, building 30, no.6, Taikang Road, Zone C, Jianqiao Industrial Park, Dadukou District, Chongqing 400000 Patentee before: Zhongyuan Huiji Biotechnology Co.,Ltd. Country or region before: China |
|
| CP03 | Change of name, title or address |