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CN108290864B - 一种蛋白激酶抑制剂及其制备方法和医药用途 - Google Patents

一种蛋白激酶抑制剂及其制备方法和医药用途 Download PDF

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CN108290864B CN201680064053.7A CN201680064053A CN108290864B CN 108290864 B CN108290864 B CN 108290864B CN 201680064053 A CN201680064053 A CN 201680064053A CN 108290864 B CN108290864 B CN 108290864B
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Gan and Lee Pharmaceuticals Co Ltd
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Abstract

本发明提供一种结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，氘代化合物，前药或其混合物形式，或结构式I所示的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，氘代化合物，前药或其混合物的药学上可以接受的盐或溶剂化物，其中R1～R7如文中定义。本发明还提供所述化合物的制备方法和医药用途。本发明所述的化合物活性优于或与目前处于III期临床试验的候选药物LY2835219相当，部分化合物表现出更好的选择性。而且优选的化合物口服吸收良好、血脑分布好，预示着本发明的化合物有希望被开发成新的治疗细胞增殖相关疾病的药物，尤其是脑瘤，为临床医生和患者提供新的选择。

Description

一种蛋白激酶抑制剂及其制备方法和医药用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2015年11月30日提交的第CN201510856641.1号中国发明专利的优先权，所述申请以引用的方式整体并入本文。
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一系列具有蛋白激酶抑制作用的取代2-(吡啶-2-基)氨基嘧啶类化合物及其制备方法和医药用途。
背景技术
细胞周期是细胞生命活动的重要部分，在正常的细胞生长过程中，细胞周期进程的实现有赖于各级调控因子对细胞周期精确而严密的调控。这些调控因子的核心是细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(Cyclin Dependent Kinase,CDK)及其正、负性调控因子———细胞周期蛋白(Cyclin)和细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂(CDI)。细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶和细胞周期蛋白形成的CDK-Cyclin复合物，参与细胞的生长、增殖、休眠或者进入凋亡。细胞周期的过程中，细胞周期蛋白周期性连续的表达和降解，并分别结合到由它们瞬时活化的CDK上，通过CDK活性，催化不同底物磷酸化，实现对细胞周期不同时相的推进和转化作用。
目前CDK家族已经发现了13个成员，分别是CDK1-CDK13；其中CDK1、CDK2、CDK3、CDK4和CDK6与调节细胞增殖有关，CDK7、CDK8、CDK9、CDK11、CDK12和CDK13参与调控转录。
Cyclin分为A-L，不同的CDK分别连接不同亚型的Cyclin。其中，Cyclin D家族(Cyclin D1，D2，D3)，在G1期开始表达，结合并激活CDK4和CDK6，形成CDK4/6-Cyclin D复合物，使包括视网膜母细胞瘤蛋白(Retinoblastomaprotein,Rb)在内的一系列底物磷酸化。Rb磷酸化后释放与其结合并被其抑制的蛋白，主要是转录因子E2F等，E2F激活并转录进入S期所必须的一些基因(马珂，CDK4/6抑制剂抗肿瘤作用研究进展，《国外医药·抗生素分册》，2013，34(5)：197-202)。如果由于各种因素使平衡被打破，无论是促进细胞增殖的信号增强，或者是抑制细胞增殖的信号减弱到某种程度，细胞增殖都会失控，进而出现肿瘤。研究发现，大约80％的人类肿瘤中存在Cyclin D–CDK4/6–INK4–Rb通路的异常(1.MalumbresM,Barbacid M.,To cycle or not to cycle:a critical decision in cancer[J].Nature Reviews Cancer,2001,1(3):222；2.Shapiro GI.,Cyclin-dependent kinasepathways as targets for cancer treatment[J].J Clinical Oncology,2006,24(11):1770)。这条通路的改变，加速了G1期进程，使得肿瘤细胞增殖加快而获得生存优势。因此，对其的干预成为一种治疗策略，CDK4/6因此成为潜在的抗肿瘤的靶点之一。
CDK4/6作为抗肿瘤靶点的优势在于：(1)大多数增殖的细胞依赖CDK2或者CDK4/6增殖，但CDK4/6的抑制剂不表现出“泛-CDK抑制剂”的细胞毒性，如骨髓抑制和肠道反应。(2)临床前实验表明，如果细胞Cyclin D水平升高或者p16INK4a失活，能够增加细胞对药物的敏感性，由于肿瘤细胞相对于正常细胞存在上述现象，所以一定程度上增加了药物的靶向。
除了抑制肿瘤生长，也有CDks抑制剂用于其它病症的治疗；如用于治疗心血管障碍，包括动脉粥样硬化、血管支架植入后再狭窄和其它由细胞异常增殖引起的心血管障碍；再如用于治疗真菌、原生动物寄生虫(如恶性疟原虫)和DNA与RNA病毒感染引起的疾病，包括疟疾、艾滋病等。此外，还有研究发现CDKs抑制剂还可以用于自身免疫系统疾病(如牛皮癣、类风湿性关节炎、肾小球性肾炎和红斑狼疮等)，抑制炎症细胞的增殖。
自WO9811095中公开了一系列具有细胞激酶抑制活性的2-嘧啶胺类化合物后，基于这样的母核结构，现有技术陆续出现了很多具有CDK4/6抑制活性的化合物，有的已经成为有希望的候选药物，甚至进入临床III期试验阶段。如，化合物PD0332991在WO2003062236中被公开，又名Palbociclib，结构式如1所示，由辉瑞公司开发。PD0332991抑制CDK4和CDK6的IC50分别为11nmol/L和15nmol/L；而抑制CDK2、CDK1和CDK5的IC50则大于10μmol/L(FryDW,Harvey PJ,Keller PR,et al.Specifi c inhibition of cyclin-dependent kinase4/6 by PD 0332991 and associated antitumor activity in human tumor xenografts[J].Molecular Cancer Therapeutics,2004,3(11):1427)。诺华公司在研的化合物LEE011(由WO2011101409公开)，结构式如2所示。化合物LY2835219(由WO2010075074公开)，又名Bemaciclib，结构式如3所示；据报道，它对CDK4和CDK6的抑制IC50分别为2nmol/L和9.9nmol/L(Lawrence M.G.,S.F.Cai,X.Lin et al.Preclinical characterization ofthe CDK4/6 inhibitor LY2835219:in-vivo cell cycle-dependent/independent anti-tumor activities alone/in combination with gemcitabine[J].Invest New Drugs,(2014),32:825)。目前LY2835219正在由礼来公司进行III期临床实验。
Figure GDA0001881047060000021
由于这些化合物的出现，CDK4/6已经成为明确的抗肿瘤靶点。申请人也就一系列新的取代2-(吡啶-2-基)氨基嘧啶类化合物提出过专利申请(申请号201510708487.3，申请日2015年10月27日),这些化合物显示出选择性抑制CDK4/6的活性。
恶性肿瘤依然严重威胁人类的健康。研发出活性、选择性、生物利用度更好的CDK4/6抑制剂，从而为临床提供更多治疗癌症等与细胞异常增殖相关疾病的新选择，是十分必要和迫切的。
发明内容
针对上述问题，本发明的一个目的在于提供一种新的取代2-(吡啶-2-基)氨基嘧啶类化合物。本发明提供的化合物，能够选择性抑制细胞周期蛋白激酶CDK4/6，使细胞停止在G1期，从而可以用于治疗细胞增殖障碍性疾病。
为了达到上述技术效果，本发明采用了如下的技术方案：
一方面，本发明提供了一种结构式I的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物的药学上可以接受的盐或溶剂化物，
Figure GDA0001881047060000031
其中，R1，R2，R3各自独立地选自氢原子、未被取代的C1-C6的烃基或被一个或多个选自C1-C6的烃基、C3-C6的环烷基、C1-C6的卤代烷基、C1-C6的烷氧基、羟基、卤素、氰基、-NR8R9、
Figure GDA0001881047060000032
的取代基取代的C1-C6的烃基；
或者R1，R2，R3中的任意两个与各自连接的C原子一起形成饱和或不饱和的3-7元环；
R4和R5各自独立地选自氢、卤素，且R4和R5中至少一个是卤素；
R6选自氢原子、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羟基或卤素；
R7为
Figure GDA0001881047060000033
其中，Z是羰基、O、S、亚胺基、磺酰基或
Figure GDA0001881047060000034
n＝0-4的整数；W和Y各自独立地是C、N、O或S，但W和Y不能同时是C，且当Z是O或S时，W是C；R10、R11、R12和R13各自独立地选自氢原子、C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基、C1-C6的羟基烷基、C1-C6的卤代烷基、C1-C6的烷氧基、羟基、卤素、氰基、-NR8R9、
Figure GDA0001881047060000035
Figure GDA0001881047060000036
且Y＝N时，R10不能是NH2、-NHR8、-NR8R9、
Figure GDA0001881047060000037
Figure GDA0001881047060000038
或者，R6和R7与其连接的C原子一起形成含一个或多个选自N、O或S的5-7元杂环，并且所述5-7元杂环被一个或多个选自C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基、C1-C6的卤代烷基、C1-C6的烷氧基、C1-C6的羟基烷基、羟基、卤素、氰基、-NH2、-NHR8、-NR8R9、
Figure GDA0001881047060000039
Figure GDA00018810470600000310
的取代基所取代；
其中，R8和R9各自独立地选自氢原子、C1-C6的烷基、C1-C6的羟基烷基。
优选的，R1，R2，R3各自独立地选自氢原子、未被取代的C1-C6的烃基或被一个或多个选自C1-C6的烃基、C3-C6的环烷基、C1-C6的卤代烷基、C1-C6的烷氧基、羟基或卤素的取代基取代的C1-C6的烃基。
更优选的，R1，R2，R3各自独立地选自氢原子、未被取代的C1-C6的烃基或被一个或多个选自C1-C6的烃基、羟基或卤素的取代基取代的C1-C6的烃基。
进一步优选的，R1，R2，R3各自独立地选自氢原子、未被取代的C1-C6的直链或支链烷基、未被取代的C2-C4的直链或支链烯基。
最优选的，R1，R2，R3各自独立地选自氢原子、未被取代的C1-C4的直链或支链烷基。
作为另一种优选的方式，R2和R3与共同连接的C原子一起形成饱和或不饱和的3-7元环。
更优选的，R2和R3与共同连接的C原子一起形成饱和的3-7元环。
优选的，R4和R5各自独立地是氢、氟或氯，且R4和R5中至少一个是氟或氯。
更优选的，R4和R5各自独立地是氢或氟，且R4和R5中至少一个是氟。
最优选的，R4是氢或氟，R5是氟。
优选的，R6选自氢原子或C1-C6的烷基。
优选的，Z是羰基、O或
Figure GDA0001881047060000041
n＝0-4的整数。
更优选的，Z是
Figure GDA0001881047060000042
n＝0-2的整数，进一步优选的，n＝0或1。
优选的，W和Y各自独立地选自C或N，但W和Y不能同时是C。
优选的，R10、R11、R12和R13各自独立地选自氢原子、C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基、C1-C6的羟基烷基、C1-C6的卤代烷基、C1-C6的烷氧基、羟基或-NR8R9，且Y＝N时，R10不能是-NR8R9，R8和R9各自独立地选自氢原子和C1-C4的烷基。
更优选的，R10、R11、R12和R13各自独立地选自氢原子、C1-C6的烷基、C1-C6的羟基烷基、C1-C6的卤代烷基、C1-C6的烷氧基或-NR8R9，R8和R9各自独立地选自氢原子和C1-C4的烷基。
进一步优选的，R7选自如下结构的取代基：
Figure GDA0001881047060000043
Figure GDA0001881047060000044
其中，
R14和R15各自独立地选自氢原子、C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基、C1-C6的卤代烷基、C1-C6的羟基烷基、C1-C6的烷氧基或羟基，R16选自氢原子、C3-C6的环烷基、C1-C6的卤代烷基、C1-C6的羟基烷基、C1-C6的烷氧基、羟基或-NR8R9，R8和R9各自独立地选自氢原子和C1-C4的烷基。
更优选的，R14和R15各自独立地选自氢原子、C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基、C1-C6的羟基烷基，R16选自氢原子、C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基、C1-C6的羟基烷基或-NR8R9，R8和R9各自独立地选自氢原子和C1-C4的烷基。
作为另一种优选的方式，R6和R7与其连接的C原子一起形成含一个或多个选自N、O或S的6元杂环。
更优选的，R6和R7与其连接的C原子一起形成含一个N的6元杂环。
进一步优选的，R6和R7与其连接的C原子一起形成如下的化学结构：
Figure GDA0001881047060000051
其中R17选自羟基或C1-C3的烷氧基；进一步优选为羟基。
作为优选实施方式，本发明还提供结构式II、III、IV或V的化合物或各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物形式，或所述结构式II、III、IV或V的化合物、各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物的药学上可以接受的盐或溶剂化物，
Figure GDA0001881047060000052
其中，Z、W、Y、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R10、R11和R17的定义如前，A环为饱和的3-7元环。
优选的，A环为饱和3-6元环。
更优选的，本发明提供结构式VIII的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物形式，或所述结构式VIII的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物的药学上可以接受的盐或溶剂化物，
Figure GDA0001881047060000061
其中，R20、R21、R22各自独立地选自C1-C4的烷基，或者R20为C1-C4的烷基，R21和R22与其共同连接的C原子形成5-6元饱和环；R23选自氢或氟；n＝0或1；R24选自氢、C1-C4的烷基或C1-C4的羟基烷基；Q为C或N。
作为更优选的实施方式，本发明提供如下结构的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物形式，或所述化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物的药学上可以接受的盐或溶剂化物：
Figure GDA0001881047060000062
Figure GDA0001881047060000071
本发明所述的化合物还包括同位素标记的上述所有化合物。
另一方面，本发明还提供一种结构式VI的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、同位素标记物、前药或其混合物形式，或所述结构式VI的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、同位素标记物、前药的药学上可以接受的盐或溶剂化物，
Figure GDA0001881047060000081
其中R1、R2、R3、R4和R5的定义如前，X为离去基团或氨基。
优选的，X是卤素或氨基，更优选是氟、溴、氯或氨基。
本发明所述的所有化合物，所述同位素标记物(上下全文)优选为氘代化合物。
又一方面，本发明提供结构式I的化合物的制备方法，包括结构式VI和结构式VII的化合物在溶剂中，经钯催化偶联反应得到结构式I的化合物，
Figure GDA0001881047060000082
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7的定义如前，X和M各自独立地为离去基团或氨基，X和M中只能有一个且必须有一个为氨基；
优选的，所述离去基团为卤素；
更优选的，所述离去基团为氟、溴或氯。
其中，上述制备方法还可以包括脱保护基。
其中，上述制备方法还可以包括产物分离和/或精制，所述分离和/或精制可以采用通常有机合成中采用的方法，例如过滤、萃取、洗涤、浓缩、层析等适当组合进行。
再一方面，本发明提供结构式I-V和VIII的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物形式，或所述结构式I-V和VIII的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物的药学上可以接受的盐或溶剂化物在制备用于治疗细胞增殖障碍性疾病的药物制剂中的用途。
优选的，所述药物制剂包括药学上可以接受的辅料。
优选的，所述细胞增殖障碍性疾病是指哺乳动物或人的癌症，更优选的是指人的癌症，包括恶性实体瘤和恶性非实体瘤，具体包括但不限于乳腺癌、肺癌、前列腺癌、白血病、脑癌、胃癌、胶质瘤等。
优选的，所述细胞增殖障碍性疾病还可以是指艾滋病、动脉粥样硬化、血管支架植入后再狭窄。
优选的，上述用途是指所述结构式I-V和VIII的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物形式，或所述结构式I-V和VIII的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物的药学上可以接受的盐或溶剂化物作为唯一活性成分或联合其它具有生物活性的物质在制备用于治疗细胞增殖障碍性疾病的药物制剂中的用途。
所述其它具有生物活性的物质包括但不限于抗癌剂、免疫抑制剂、抗病毒剂等。其中，所述抗癌剂选自烷化剂(如环磷酰胺、异环磷酰胺、塞替派、司莫司汀、盐酸氮芥、白消安、苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、硝卡芥、氮甲、卡莫司汀、洛莫司汀、六甲蜜胺、二溴甘露醇、替莫唑胺等)，抗代谢类抗肿瘤药(阿糖胞苷、氟尿嘧啶、甲氨喋呤、羟基脲、替加氟、甲异靛、巯嘌呤等)，铂络合剂(如顺铂、卡铂、奥沙利铂等)，抗生素类抗肿瘤药(放线菌素D、丝裂霉素、阿霉素、平阳霉素、表柔比星、吡柔比星、柔红霉素、博来霉素等)，天然来源抗肿瘤药(高三尖杉酯碱及其衍生物、长春新碱及其衍生物、羟喜树碱及其衍生物、依托泊苷及其衍生物、长春地辛及其衍生物、长春碱及其衍生物、重酒石酸长春瑞宾、紫杉醇及其衍生物、秋水仙碱及其衍生物、榄香烯及其衍生物等)，激素类抗肿瘤药(如氨鲁米特、他莫昔芬、地塞米松、度他雄胺、氟他胺、戈那瑞林、醋酸亮丙瑞林、来曲唑等)，VEGFR或EGFR抑制剂(如舒尼替尼、索拉非尼、伊马替尼、吉非替尼、埃罗替尼、凡德替尼、帕唑帕尼、拉帕替尼、卡奈替尼、阿法替尼、木利替尼、达沙替尼、来那替尼等)，抗体抗肿瘤药(如曲妥单抗、帕妥珠单抗、利妥昔单抗、帕尼单抗、贝伐单抗、伊匹单抗、奥法木单抗、雷莫卢单抗等)，mTOR抑制剂(如依维莫司、西罗莫司、佐他莫司等)，治疗脑瘤类用药替莫唑胺等。
还一方面，本发明提供一种用于治疗细胞增殖障碍性疾病的组合产品，所述组合产品包括选自结构式I-V、VIII的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物形式，结构式I-V、VIII的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物形式的药学上可以接受的盐或溶剂化物中的一种或多种。
优选地，所述组合产品还包括药学可以接受的辅料。和/或
所述组合产品为试剂盒。
另一方面，本发明还提供一种治疗细胞增殖障碍性疾病的方法，包括对患有所述细胞增殖障碍性疾病的患者通过口服或非口服途径给予有效剂量的本发明所述化合物或上述组合产品。
优选的，上述治疗细胞增殖障碍性疾病的方法，包括对所述患者通过口服或非口服途径给予有效剂量的本发明所述化合物和所述其它具有生物活性的物质。所述其它具有生物活性的物质包括但不限于抗癌剂、免疫抑制剂、抗病毒剂等。其中，所述抗癌剂选自烷化剂(如环磷酰胺、异环磷酰胺、塞替派、司莫司汀、盐酸氮芥、白消安、苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、硝卡芥、氮甲、卡莫司汀、洛莫司汀、六甲蜜胺、二溴甘露醇、替莫唑胺等)，抗代谢类抗肿瘤药(阿糖胞苷、氟尿嘧啶、甲氨喋呤、羟基脲、替加氟、甲异靛、巯嘌呤等)，铂络合剂(如顺铂、卡铂、奥沙利铂等)，抗生素类抗肿瘤药(放线菌素D、丝裂霉素、阿霉素、平阳霉素、表柔比星、吡柔比星、柔红霉素、博来霉素等)，天然来源抗肿瘤药(高三尖杉酯碱及其衍生物、长春新碱及其衍生物、羟喜树碱及其衍生物、依托泊苷及其衍生物、长春地辛及其衍生物、长春碱及其衍生物、重酒石酸长春瑞宾、紫杉醇及其衍生物、秋水仙碱及其衍生物、榄香烯及其衍生物等)，激素类抗肿瘤药(如氨鲁米特、他莫昔芬、地塞米松、度他雄胺、氟他胺、戈那瑞林、醋酸亮丙瑞林、来曲唑等)，VEGFR或EGFR抑制剂(如舒尼替尼、索拉非尼、伊马替尼、吉非替尼、埃罗替尼、凡德替尼、帕唑帕尼、拉帕替尼、卡奈替尼、阿法替尼、木利替尼、达沙替尼、来那替尼等)，抗体抗肿瘤药(如曲妥单抗、帕妥珠单抗、利妥昔单抗、帕尼单抗、贝伐单抗、伊匹单抗、奥法木单抗、雷莫卢单抗等)，mTOR抑制剂(如依维莫司、西罗莫司、佐他莫司等)，治疗脑瘤类用药替莫唑胺等。
所述口服或非口服途径可以为通过口服、注射、贴片、喷雾和其他已知的一种或多种递送给所述患者。所述有效量可以包括对治疗、降低、缓和、减轻、消除一种或多种症状有效的量，所述状况寻求被治疗，或可选地，所述状况寻求被避免，或另外在所述状况或其效果中产生临床上可确认的有利变化。
又一方面，本发明提供一种用于治疗细胞增殖障碍性疾病的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物形式，或所述化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物形式的药学上可以接受的盐或溶剂化物，所述化合物的结构式选自结构式I-V和VIII中的一种或多种；
优选的，所述细胞增殖障碍性疾病是指哺乳动物或人的癌症，更优选的是指人的癌症，包括恶性实体瘤和恶性非实体瘤，具体包括但不限于乳腺癌、肺癌、前列腺癌、白血病、脑癌、胶质瘤和胃癌。和/或
所述细胞增殖障碍性疾病选自艾滋病、动脉粥样硬化和血管支架植入后再狭窄中的一种或多种。
本发明的说明书中，如无特殊说明，所述“C1-C6烷基”指的是C1-C6的直链或支链烷基；“C1-C4烷基”指的是C1-C4的直链或支链烷基，优选为甲基、乙基、丙基或异丙基。所述“C1-C6烷氧基”，指的是C1-C6的直链或支链烷氧基，优选为C1-C4的直链或支链烷氧基，进一步优选为甲氧基、乙氧基、丙氧基或2-甲基乙氧基。所述“C3-C6环烷基”，指的是未取代或C1-C4烷基和/或C1-C4烷氧基取代的C3-C6的环烷基，优选为未取代或C1-C4烷基和/或C1-C4烷氧基取代的C3-C6的环烷基，进一步优选为环丙烷、环丁烷、甲基环丙烷、环戊烷或环己烷。所述“卤素”，指的是溴，氯或氟。所述“C1-C6卤代烷基”指的是溴取代，氯取代或氟取代C1-C6的直链或支链烷基，优选为氯取代或氟取代C1-C4的直链或支链烷基，进一步优选为一氟代甲基、二氟代甲基、三氟代甲基、一氯代甲基、二氯代甲基、三氯代甲基、1-氟乙基、1-氯丙基、1-氯乙基、1-氯丙基。
现有研究认为，CDKs抑制剂的毒性主要与其抑制CDK1和其它蛋白激酶有关，如由同名的原癌基因编码的苏氨酸/丝氨酸激酶Pim-1。因此，作为CDKs抑制剂类化合物，希望其对CDK4/CDK6和CDK1以及其它激酶的作用差异越显著越好，即选择性抑制CDK4/CDK6。本发明提供的化合物其活性优于或与目前处于III期临床试验的候选药物LY2835219相当，部分化合物表现出更好的激酶选择性。而且优选的化合物(实施例17制备)口服吸收良好、血脑分布好。上述结果预示着本发明的化合物有希望被开发成新的治疗细胞增殖相关疾病，尤其是恶性肿瘤(特别是脑癌)的药物。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
本发明所述的结构式VI的化合物是合成结构式I的化合物的关键中间体，其和结构式VII的化合物在溶剂中，经钯催化偶联反应得到结构式I的化合物。
Figure GDA0001881047060000111
结构式VI的化合物可以通过如下的反应路线合成：
Figure GDA0001881047060000112
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7的定义如前，X为离去基团或氨基。
优选的，R1，R2，R3各自独立地选自氢原子、未被取代的C1-C6的烃基或被一个或多个选自C1-C6的烃基、羟基或卤素的取代基取代的C1-C6的烃基。
更优选的，R1，R2，R3各自独立地选自氢原子、未被取代的C1-C6的直链或支链烷基、未被取代的C2-C4的直链或支链烯基。
进一步优选的，R1，R2，R3各自独立地选自氢原子、未被取代的C1-C4的直链或支链烷基。
或者，作为另一种优选的方式，R1如前所述，R2和R3与共同连接的C原子一起形成饱和或不饱和的3-7元环；更优选的，R2和R3与共同连接的C原子一起形成饱和的3-7元环。
优选的，R4和R5各自独立地是氢或氟，且R4和R5中至少一个是氟。
X优选为卤素或氨基，更优选为氟、溴、氯或氨基。
R6优选为氢原子或C1-C4的烷基。
R7优选为如下结构的取代基：
Figure GDA0001881047060000113
其中，R14和R15各自独立地选自氢原子、C1-C4的烷基、C1-C4的羟基烷基。
或者，作为另一个优选的实施方式，R6和R7与其连接的C原子一起形成如下的化学结构：
Figure GDA0001881047060000114
其中R17选自羟基或C1-C3的烷氧基；进一步优选为羟基。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的化学原料、试剂等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
本发明实施例中出现的缩略语及其含义如下所示：
PE：石油醚
EA：乙酸乙酯
DCM：二氯甲烷
MeOH：甲醇
Pd(dppf)Cl2：[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯
Pd(PPh3)4：：四(三苯基膦)钯
Pd2(dba)3：三(二亚苄基丙酮)二钯
NaHB(OAc)3：三乙酰氧基硼氢化钠
LHMDS：六甲基二硅基胺基锂
DAPI：DAPI荧光染料
实施例1 5-氟-4-(7-氟-2,3,3-三甲基-3H-吲哚-5-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000121
步骤1 4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧基叔丁酯
Figure GDA0001881047060000122
向反应瓶中加入5-溴-2-硝基吡啶(5.0g,24.63mmol)，哌嗪-1-羧基叔丁酯(5.04g,27.09mol)，乙腈(30mL),二异丙基乙胺(4.77g,36.94mmol)，回流反应2h,旋干溶剂，柱色谱分离(PE/EA＝1:1至DCM/MeOH＝20:1)，得到标题化合物3.8g(黄色固体)。
MS(ESI):mass calcd.for C14H20N4O4 308.1,m/z found 309.1[M+H]+.
步骤2 4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧基叔丁酯
Figure GDA0001881047060000123
向反应瓶中加入步骤1制备的4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧基叔丁酯(0.92g,3.0mmol)，乙酸乙酯/甲醇(10mL/10mL),Pd/C(0.1g)，通入氢气室温反应2小时，过滤，浓缩，得到标题化合物792mg(类白色固体)。
MS(ESI):mass calcd.for C14H22N4O2 278.2,m/z found 279.2[M+H]+.
步骤3 5-溴-7-氟-2,3,3-三甲基-3H-吲哚的合成
Figure GDA0001881047060000124
向反应瓶中加入(4-溴-2-氟苯)肼盐酸盐(1.0g,4.14mmol)，醋酸(10ml),3-甲基-2-丁酮(0.32g,4.14mmol)，然后回流反应5小时，旋干溶剂，加入20ml水，用乙酸乙酯萃取三次，每次20ml，合并有机相，然后用25ml饱和氯化钠水溶液洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱色谱分离(DCM:MeOH＝50:1-25:1)，得到标题化合物420mg(黄色固体)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.23-7.21(m,2H),2.30(s,3H),1.32(s,6H).
MS(ESI):m/z 258.0[M+H]+.
步骤4 7-氟-2,3,3-三甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼酸-2-基)-3H-吲哚的合成
Figure GDA0001881047060000131
向反应瓶中加入步骤3制备的5-溴-7-氟-2,3,3-三甲基-3H-吲哚(400.0mg,1.56mmol),
4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(436.5mg,1.71mmol)，乙酸钾(306.3mg,3.12mmol)，二氧六环(10ml)，Pd(dppf)Cl2(228.7mg,0.32mmol)，氮气保护，加热至90℃，反应过夜；混合物冷却至室温，过滤，加入10ml水，用乙酸乙酯萃取三次，每次20ml；合并乙酸乙酯有机相，用25ml饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱色谱分离(DCM:MeOH＝50:1-30:1)，得到标题化合物306.5mg(黄色油状物)。
MS(ESI):m/z 304.1[M+H]+.
步骤5 5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-7-氟-2,3,3-三甲基-3H-吲哚的合成
Figure GDA0001881047060000132
向微波反应瓶中加入步骤4制备的7-氟-2,3,3-三甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼酸-2-基)-3H-吲哚(300mg,0.99mmol)，2,4-二氯-5-氟嘧啶(181.8mg,1.08mmol),磷酸钾(419.8mg,1.98mmol)，二氧六环/水(4mL/1mL)，Pd(PPh3)4(114.5mg,0.09mmol)，氮气保护，在130℃下微波反应1小时；冷却至室温，过滤，加入10ml水，用二氯甲烷萃取三次，每次15ml；合并二氯甲烷有机相，用20ml饱和氯化钠水溶液洗涤一次，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱色谱分离(DCM:MeOH＝100:1-50:1)，得到标题化合物301.2mg(黄色固体)。
MS(ESI):mass calcd.for C15H12ClF2N3 307.1,m/z found 308.1[M+H]+.
步骤6 4-(6-((5-氟-4-(7-氟-2,3,3-三甲基-3H-吲哚-5-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧基叔丁酯的合成
Figure GDA0001881047060000133
向反应瓶中加入步骤5制备的5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-7-氟-2,3,3-三甲基-3H-吲哚(150.0mg,0.48mmol),步骤2制备的4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧基叔丁酯(135.8mg,
0.48mmol)，碳酸铯(371.6mg,0.96mmol)，二氧六环(3ml)，Pd2(dba)3(44.7mg,0.05mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(30.4mg,0.05mmol)，氮气保护，加热至150℃，微波反应1小时，冷却至室温；过滤，加入10ml水，用二氯甲烷萃取三次，每次10ml，合并有机相，用30ml饱和氯化钠水溶液洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱色谱分离(DCM/MeOH＝50:1)，得到标题化合物53.4mg(黄色固体)。
MS(ESI):mass calcd.for C29H33F2N7O2 549.3,m/z found 550.3[M+H]+.
步骤7 5-氟-4-(7-氟-2,3,3-三甲基-3H-吲哚-5-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0001881047060000141
向反应瓶中加入步骤6制备的4-(6-((5-氟-4-(7-氟-2,3,3-三甲基-3H-吲哚-5-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧基叔丁酯(30.0mg,0.054mmol)，二氯甲烷(4ml)，三氟乙酸(1ml)，室温搅拌反应2小时；旋干溶剂，用饱和碳酸氢钠水溶液调pH到8，用二氯甲烷萃取三次，每次5ml，合并有机相，用10ml饱和氯化钠水溶液洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱色谱分离(DCM/MeOH＝20:1)，得到标题化合物10.5mg(黄色固体)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.75(br s,1H),8.65(d,1H,J＝3.2Hz),8.02-7.94(m,3H),7.82(d,1H,J＝10.8Hz),7.43(d,1H,J＝8.8Hz),3.09-3.02(m,4H),2.84-2.83(m,4H),2.31(s,3H),1.34(s,6H).
MS(ESI):mass calcd.for C24H25F2N7 449.50,m/z found 450.2[M+H]+.
实施例2 N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(7-氟-2,3,3-三甲基-3H-吲哚-5-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000142
步骤1 1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-乙基哌嗪
Figure GDA0001881047060000143
向反应瓶中加入2-溴-5醛基吡啶(1.5g,8.15mmol)，1-乙基哌嗪(0.93g,8.15mmol)，二氯甲烷(15mL),然后分批加入NaHB(OAc)3(2.58g,12.23mmol)。室温反应过夜，过滤，浓缩，柱色谱分离(DCM/MeOH＝100:1-10:1)，得到标题产物1.64g(黄色油状物)。
MS(ESI):mass calcd.for C12H18BrN3 285.1,m/z found 286.1[M+H]+.
步骤2 5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000144
向反应瓶中加入步骤1制备的1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-乙基哌嗪(2.84g,10mmol),2-(二环己基膦基)联苯(700mg,2mmol),Pd2(dba)3(915mg,1mmol)，甲苯(30mL)，氮气保护下加入LHMDS(1N)(20ml,20mmol).该混合物加热到80℃反应过夜，然后冷却到室温，过滤，浓缩，柱色谱分离(DCM/MeOH＝100:1-10:1)，得到标题产物1.52g(褐色固体)。
MS(ESI):mass calcd.for C13H21N3 220.2,m/z found 221.2[M+H]+.
步骤3 5-溴-7-氟-2,3,3-三甲基-3H-吲哚的合成
Figure GDA0001881047060000151
向反应瓶中加入(4-溴-2-氟苯)肼盐酸盐(900.0mg,3.73mmol)，乙酸(5mL)，3-甲基丁基-2-酮(353.3mg,4.09mmol)，回流反应5小时；旋干溶剂，加入10ml水，用乙酸乙酯萃取三次，每次20ml，合并有机相，有机相用25ml饱和氯化钠水溶液洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱色谱分离(乙酸乙酯:石油醚＝1:50-1:25)，得到标题化合物910mg(黄色固体)。
MS(ESI):m/z 258.0[M+H]+.
步骤4 7-氟-2,3,3-三甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼酸-2-基)-3H-吲哚的合成
Figure GDA0001881047060000152
向反应瓶中加入按照步骤3所述方法制备的5-溴-7-氟-2,3,3-三甲基-3H-吲哚(1.0g,3.91mmol)，4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼烷)(1.09g,4.29mmol)，醋酸钾(770mg,7.82mmol)，二氧六环(10ml)，Pd(dppf)Cl2(570mg,0.78mmol)，氮气保护，升温至90℃过夜反应，然后冷却至室温，过滤，加入10ml水稀释，用乙酸乙酯萃取三次，每次20ml。合并有机相，有机相用25ml饱和食盐水洗涤一次，硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱色谱分离(EA:PE＝1:100-1:20)，得到标题化合物1.02g(黄色油状物)。
MS(ESI):m/z 304.2[M+H]+.
步骤5 5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-7-氟-2,3,3-三甲基-3H-吲哚的合成
Figure GDA0001881047060000153
向微波反应瓶中加入步骤4制备的7-氟-2,3,3-三甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼酸-2-基)-3H-吲哚(1.0g,3.30mmol)，2,4-二氯-5氟嘧啶(610mg,3.63mmol)，磷酸钾(1.39g,6.60mmol)，二氧六环/水(8mL/2mL)，Pd(PPh3)4(380mg,0.33mmol)，氮气保护，在130℃下微波反应1小时；冷却至室温，过滤，加入10ml水，用二氯甲烷萃取三次，每次15ml，合并有机相，有机相用20ml饱和食盐水洗涤一次，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱色谱分离(EA:PE＝1:50-1:10)，得到标题化合物290.0mg(黄色固体)。
MS(ESI):m/z 308.1[M+H]+.
步骤6 N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(7-氟-2,3,3-三甲基-3H-吲哚-5-基)嘧啶-2-氨基的合成
Figure GDA0001881047060000161
向反应瓶中加入步骤5制备的5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-7-氟-2,3,3-三甲基-3H-吲哚(290.0mg,0.94mmol)，步骤2制备的5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-氨基(228.6mg,1.04mmol)，磷酸钾(400.5mg,1.88mmol)，二氧六环10ml，Pd2(dba)3(86.4mg,0.09mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(109.2mg,0.19mmol)，氮气保护，升温至150℃微波反应1小时；混合物冷却至室温，过滤，加入10ml水稀释，用二氯甲烷萃取三次，每次10ml，合并有机相；有机相用30ml饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱色谱分离(二氯甲烷：甲醇＝30：1)，得到标题化合物140.3mg(黄色固体)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.72(s,1H),8.49(d,1H,J＝3.2Hz),8.38(d,1H,J＝8.4Hz),8.31(s,1H),7.92(s,1H),7.89(s,1H),7.73(d,1H,J＝8.4Hz),3.52(s,2H),2.54-2.41(m,10H),2.38(s,3H),1.40(s,6H),1.10(t,3H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z 492.2[M+H]+.
实施例3 N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基吡啶-2-基)-5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000162
按照实施例2中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ9.75(s,1H),8.54(d,1H,J＝3.2Hz),8.38-8.37(m,2H),7.94(s,1H),7.87(d,1H,J＝10.8Hz),7.68(d,1H,J＝8.4Hz),3.49(s,2H),2.99-2.39(m,10H),2.37(s,3H),2.14-2.08(m,6H),1.87-1.84(m,2H),1.06(t,3H,J＝6.4Hz).
MS(ESI):m/z 518.3[M+H]+.
实施例4 氮-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环丁烷-1,3'-吲哚]-5'-基)氨基嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000163
按照实施例2中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36-8.32(m,2H),8.23(s,1H),8.04(s,1H),7.78-7.75(m,2H),7.71(d,1H,J＝8.4Hz),5.84-5.83(m,1H),5.63-5.62(m,1H),4.39-4.38(m,1H),3.66-3.64(m,1H),3.51(s,2H),3.06-3.00(m,1H),2.71-2.38(m,11H),1.55(s,3H),1.11(t,3H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z 504.3[M+H]+.
实施例5 4-(3-乙基-7-氟-2,3-二甲基-3H-吲哚-5-基)-N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000171
按照实施例2中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.71(s,1H),8.49(d,1H,J＝3.6Hz),8.38(d,1H,J＝8.4Hz),8.31(s,1H),7.94(d,1H,J＝11.2Hz),7.86(s,1H),7.72(dd,1H,J＝8.0,1.2Hz),3.52(s,2H),2.53-2.41(m,10H),2.34(s,3H),2.06-1.93(m,1H),1.91-1.84(m,1H),1.39(s,3H),1.09(t,3H,J＝7.2Hz),0.50(t,3H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z 506.3[M+H]+.
实施例6 5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)-氮-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000172
按照实施例1中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.67(br s,1H),8.44(d,1H,J＝3.6Hz),8.29(d,1H,J＝9.2Hz),8.11(d,1H,J＝2.4Hz),7.95(s,1H),7.89(d,1H,J＝10.8Hz),7.36(dd,1H,J＝9.2,2.8Hz),3.12-3.06(m,8H),2.39(s,3H),2.16-2.10(m,6H),1.89-1.86(m,2H).
MS(ESI):m/z 476.2[M+H]+.
实施例7 4-(3-乙基-7-氟-2,3-二甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟-氮-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000173
按照实施例1中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ9.33(br s,1H),8.46(d,1H,J＝3.6Hz),8.28(d,1H,J＝8.8Hz),8.16(d,1H,J＝2.4Hz),7.90(d,1H,J＝10.8Hz),7.82(s,1H),7.35(dd,1H,J＝8.8Hz,2.8Hz),3.10-3.03(m,8H),2.31(s,3H),2.03-1.80(m,3H),1.36(s,3H),0.47(t,6H,J＝7.6Hz).
MS(ESI):m/z 464.2[M+H]+.
实施例8 氮-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000181
按照实施例2中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.83(s,1H),8.61(d,1H,J＝5.2Hz),8.49(d,1H,J＝8.8Hz),8.32(d,1H,J＝1.2Hz),7.91(d,1H,J＝1.2Hz),7.78(d,1H,J＝10.8Hz),7.78(dd,1H,J＝8.4,1.6Hz),7.21(d,1H,J＝5.2Hz),3.52(s,2H),2.54-2.41(m,10H),2.38(s,3H),2.19-2.08(m,6H),1.90-1.87(m,2H),1.10(t,3H,J＝6.8Hz).
MS(ESI):m/z 500.3[M+H]+.
实施例9 氮-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000182
按照实施例2中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.73(br s,1H),8.47(d,1H,J＝3.6Hz),8.43(d,1H,J＝8.4Hz),8.30(s,1H),8.15-8.13(m,2H),7.70-7.64(m,2H),3.52(s,2H),2.53-2.37(m,10H),2.31(s,3H),2.21-2.06(m,6H),1.89-1.86(m,2H),1.10(t,3H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z 500.3[M+H]+.
实施例10 4-(3,3-二乙基-7-氟-2-甲基-3H-吲哚-5-基)-氮-(5-((4-乙基哌啶-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000183
按照实施例2中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ9.19(br s,1H),8.53(s,1H),8.39-8.34(m,2H),7.95(d,1H,J＝11.2Hz),7.83(s,1H),7.72(d,1H,J＝8.0Hz),3.51(s,2H),2.52-2.41(m,10H),2.31(s,3H),2.06-2.01(m,2H),1.90-1.85(m,2H),1.08(t,3H,J＝6.8Hz),0.46(t,6H,J＝6.8Hz).
MS(ESI):m/z 520.3[M+H]+.
实施例11 4-(3-乙基-7-氟-2,3-二甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟-氮-(5-(哌啶-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000191
步骤1 6-硝基-3',6'-二氢-[3,4'-二吡啶]-1'(2'H)-羧基叔丁酯
Figure GDA0001881047060000192
向反应瓶中加入5-溴-2-硝基吡啶(20.3g,0.1mol)，4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧基硼酸-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧基叔丁酯(31g,0.1mol)，二氧六环/水(250mL/30mL),碳酸铯(66g,0.2mol),Pd(dppf)Cl2(7.33g,0.01mol)，氮气保护。该混合物被加热至85℃反应12小时,冷却至室温，浓缩，柱色谱分离(PE/EA＝1:1-DCM/MeOH＝20:1)得到标题产物11g(黄色固体)。
MS(ESI):mass calcd.for C15H19N3O4 305.1,m/z found 306.1[M+H]+.
步骤2 4-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-1-羧基叔丁酯
Figure GDA0001881047060000193
向反应瓶中加入步骤1制备的6-硝基-3',6'-二氢-[3,4'-二吡啶]-1'(2'H)-羧基叔丁酯(0.9g,3.0mmol)，乙酸乙酯/甲醇(10mL/10mL),Pd/C(0.1g)，通入氢气，室温反应2小时，过滤，浓缩，得到标题产物790mg(类白色固体)。
MS(ESI):mass calcd.for C15H23N3O2 277.2,m/z found 278.2[M+H]+.
4-(3-乙基-7-氟-2,3-二甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟-氮-(5-(哌啶-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000194
其他步骤按照实施例1中3-7相似的步骤得到本实施例的标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.61(br s,1H),8.46(d,1H,J＝3.6Hz),8.34(d,1H,J＝8.8Hz),8.26(d,1H,J＝1.6Hz),7.93(d,1H,J＝11.2Hz),7.64(d,1H,J＝8.0Hz),7.86(s,1H),7.61(dd,1H,J＝8.4Hz,2.0Hz),3.24-3.21(m,2H),2.77(t,1H,J＝10.8Hz),2.64-2.61(m,1H),2.34(s,3H),2.06-1.91(m,4H),1.89-1.84(m,3H),1.72-1.63(m,2H),1.39(s,3H),0.50(t,1H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z found 463.3[M+H]+.
实施例12 氮-(5-(1-乙基哌啶-4-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000201
5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)-氮(5-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000202
按照实施例11相似的步骤得到该中间体
氮-(5-(1-乙基哌啶-4-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000203
向反应瓶中加入上步制备得到的5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)-氮-(5-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基50mg(0.1mmol)，乙醛26mg(0.6mmol)，二氯甲烷5ml，室温反应0.5小时，然后加入三乙基硼氢化钠60mg(0.28mmol)，室温反应2小时，向反应液中加入20ml饱和碳酸钠水溶液，然后用二氯甲烷萃取三次，每次10mL，合并有机相；有机相用饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，硅胶柱色谱分离(PE/EA＝5:1)，得到标题化合物11mg，收率22％。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(d,1H,J＝3.6Hz),8.38(s,1H),8.33(d,1H,J＝8.8Hz),8.25(s,1H),7.97(s,1H),7.90(d,1H,J＝11.2Hz),7.62(dd,1H,J＝8.8,2.0Hz),3.14-3.11(m,2H),2.55-2.46(m,3H),2.40(s,3H),2.18-2.03(m,8H),1.90-1.82(m,6H),1.15(t,3H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z 503.3[M+H]+.
实施例13 5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)-氮-(5-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000211
按照实施例11相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ9.14(br s,1H),8.48(d,1H,J＝3.2Hz),8.34-8.30(m,2H),7.96(s,1H),7.89(d,1H,J＝10.8Hz),7.58(d,1H,J＝8.4Hz),3.22-3.19(m,2H),2.76(t,2H,J＝11.6Hz),2.66-2.60(m,1H),2.38(s,3H),2.16-2.02(m,6H),1.88-1.83(m,4H),1.69-1.61(m,2H).
MS(ESI):m/z 475.3[M+H]+.
实施例14 5-氟-4-(2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)-氮-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000212
按照实施例11中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ9.28(br s,1H),8.43(d,1H,J＝3.6Hz),8.33(d,1H,J＝9.2Hz),8.16-8.09(m,3H),7.63(d,1H,J＝8.0Hz),7.32(dd,1H,J＝9.2Hz,2.8Hz),3.08-3.06(m,4H),3.03-3.02(m,4H),2.34(s,3H),2.29-2.04(m,7H),1.86-1.83(m,2H).
MS(ESI):m/z 458.3[M+H]+.
实施例15 5-氟-4-(2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)-氮-(5-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000213
按照实施例11中相似步骤得到标题化合物
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.99(br s,1H),8.46(d,1H,J＝3.6Hz),8.39(d,1H,J＝8.4Hz),8.29(d,1H,J＝1.6Hz),8.15-8.11(m,2H),7.65(d,1H,J＝8.0Hz),7.58(dd,1H,J＝8.8Hz,2.0Hz),3.22-3.19(m,2H),2.76(t,2H,J＝10.4Hz),2.65-2.59(m,1H),2.36(s,3H),2.18-2.05(m,7H),1.88-1.83(m,4H),1.70-1.60(m,2H).
MS(ESI):m/z 457.3[M+H]+.
实施例16 4-(3,3-二乙基-7-氟-2-甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟-氮-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000221
步骤1 5-溴-3,3-二乙基-7-氟-2-甲基-3H-吲哚的合成
Figure GDA0001881047060000222
向反应瓶中加入10ml乙酸，(4-溴-2-氟苯)肼盐酸盐5.0g(20.75mmol)，3-乙基戊烷-2酮2.35g(20.75mmol)，混合物回流反应5小时，旋干溶剂，加入50ml水，然后用乙酸乙酯萃取三次，每次50ml，合并有机相；,有机层用50ml盐水洗涤一次，加入硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱色谱分离(EA:PE＝1:100-1:10)，得到标题化合物2.5g(黄色油状物)，收率87.1％。
MS(ESI):m/z 286.1[M+H]+.
步骤2 3,3-二乙基-7-氟-2-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼基-2-基)-3H-吲哚的合成
Figure GDA0001881047060000223
向反应瓶中加入步骤1制备的5-溴-3,3-二乙基-7-氟-2-甲基-3H-吲哚2.0g(7.07mol)，4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧硼戊环)1.97g，(7.77mmol)，醋酸钾1.38g(1.41mmol)，1,4二氧六环10ml，Pd(dppf)Cl2 1.03g(1.41mmo)，氮气保护，混合物加热到90℃，反应过夜。混合物冷却到室温过滤，用10ml水稀释，用乙酸乙酯萃取三次，每次10ml，合并有机相。有机相用15ml食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱色谱分离(EA:PE＝1:50-1:10)，得到标题化合物2.0g(黄色油状物)，收率86.96％。
MS(ESI):m/z 332.3[M+H]+.
步骤3 5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3,3-二乙基-7-氟-2-甲基-3H-吲哚
Figure GDA0001881047060000224
向反应瓶中加入步骤2制备得到的3,3-二乙基-7-氟-2-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧基硼-2-基)-3H-吲哚2.0g(6.05mmol),2,4-二氯-5-氟嘧啶1.10g(6.65mmol)，磷酸钾2.56g(12.1mmol)，1,4-二氧六环/水20mL/5ml，Pd(PPh3)4 0.69g(0.61mmol)，氮气保护，混合物加热到120℃反应2小时。混合物冷却到室温，过滤，用10ml水稀释，用50ml二氯甲烷萃取三次，合并有机相。有机相用20ml食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，硅胶柱色谱分离(EA:PE＝1:100-1:10)，得到1.2g标题化合物(黄色固体)，收率59.4％。
MS(ESI):m/z 336.1[M+H]+.
步骤4 4-(6-((4-(3,3-二乙基-7-氟-2-甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧基叔丁酯
Figure GDA0001881047060000231
向反应瓶中加入步骤3制备得到的5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3,3-二乙基-7-氟-2-甲基-3H-吲哚400.0mg(1.19mmol),按照实施例1的步骤1-2制备的叔丁基4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸盐331.9mg(1.19mmol)，碳酸铯776.2mg(2.38mmol)，1,4-二氧六环10ml，Pd2(dba)3109.5mg(0.12mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽69.0mg(0.12mmol)，氮气保护.混合物在130℃，微波反应1小时。混合物冷却到室温，过滤，用10ml水稀释，用10ml二氯甲烷萃取三次，合并有机相。有机相用30ml食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，TLC分离得到253.1mg标题化合物(黄色固体)，收率36.74％。
MS(ESI):m/z 578.3[M+H]+.
步骤5 4-(3,3-二乙基-7-氟-2-甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000232
向反应瓶中加入步骤4制备得到的4-(6-((4-(3,3-二乙基-7-氟-2-甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧基叔丁酯250.0mg(0.43mmol)，二氯甲烷4mL，TFA1ml。混合物室温旋转搅拌2小时，除去溶剂，用5ml饱和碳酸氢钠溶液调节pH到8，用二氯甲烷萃取三次，每次5ml，合并有机相。有机相用10ml饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，TLC分离纯化，得到标题化合物201.2mg(黄色固体)，收率97.6％。
MS(ESI):m/z 478.3[M+H]+.
步骤6 4-(3,3-二乙基-7-氟-2-甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟-氮-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000233
向反应瓶中加入4-(3,3-二乙基-7-氟-2-甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟-氮-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基50.0mg(0.10mmol)，甲醛30.8mg(1.0mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺2ml，三乙基硼氢化钠65.3mg(0.3mmol)，反应过夜。加入2ml甲醇萃灭，用二氯甲烷萃取三次，每次5ml。有机相用10ml饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，TLC分离，得到20.3mg标题化合物(黄色固体)，收率39.4％。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ9.57(br s,1H),8.47(d,1H,J＝3.2Hz),8.28(d,1H,J＝8.8Hz),8.18(d,1H,J＝2.0Hz),7.91(d,1H,J＝11.2Hz),7.78(s,1H),7.33(d,1H,J＝8.8Hz),3.16-3.15(m,4H),2.58-2.57(m,4H),2.33(s,3H),2.26(s,3H),2.04-1.95(m,2H),1.85-1.78(m,7H),0.43(t,6H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z 492.3[M+H]+
实施例17 5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)-氮-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000241
按照实施例1相似步骤得到中间体5'-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]
Figure GDA0001881047060000242
步骤1 1'-甲基-6-硝基-1',2',3',6'-四氢-3,4'-二吡啶
Figure GDA0001881047060000243
向反应瓶中加入5-溴-2-硝基吡啶(20.3g,0.1mol)，1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧基硼酸-2-基)-1,2,3,6-四氢吡啶(22.3g,0.1mol)，二氧六环/水(250mL/30mL),碳酸铯(66g,0.2mol),Pd(dppf)Cl2(7.33g,0.01mol)，氮气保护。该混合物在85℃搅拌反应12小时，冷却至室温，浓缩，柱色谱分离(PE/EA＝1:1-DCM/MeOH＝20:1)，得到标题产物5.7g(白色固体)。
MS(ESI):mass calcd.for C11H13N3O2219.1,m/z found 220.1[M+H]+.
步骤2 5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000244
向反应瓶中加入步骤1制备的1'-甲基-6-硝基-1',2',3',6'-四氢-3,4'-二吡啶(657mg,3.0mmol)，乙酸乙酯/甲醇(10mL/10mL),Pd/C(0.1g)。向该混合物中通入氢气，搅拌反应2小时，过滤，浓缩，得到标题产物550mg(白色固体)。
MS(ESI):mass calcd.for C11H17N3191.1,m/z found 192.2[M+H]+.
步骤3 5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)-氮-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000251
向反应瓶中加入中间体5'-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚](150.0mg,0.45mmol),步骤2制备的5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-氨基(86.6mg,0.45mmol)，碳酸铯(293.2mg,0.9mmol)，二氧六环(3ml)，Pd2(dba)3(44.7mg,0.05mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(30.4mg,0.05mmol)，氮气保护，加热至150℃，微波反应1小时，冷却至室温，过滤，加入10ml水，用二氯甲烷萃取三次，每次10ml，合并有机相，用30ml饱和氯化钠水溶液洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝50:1)，得到标题化合物51.1mg(黄色固体)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ9.38(br s,1H),8.49(d,1H,J＝3.2Hz),8.34-8.33(m,2H),7.96(s,1H),7.88(d,1H,J＝11.2Hz),7.58(dd,1H,J＝8.8Hz,1.6Hz),3.01-2.98(m,2H),2.52-2.44(m,1H),2.38(s,3H),2.34(s,3H),2.25-2.04(m,8H),1.87-1.76(m,6H).
MS(ESI):m/z 489.3[M+H]+.
实施例18 4-(3-乙基-7-氟-2,3-二甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟-氮-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000252
按照实施例16中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ9.48(br s,1H),8.47(d,1H,J＝3.2Hz),8.28(d,1H,J＝9.2Hz),8.17(s,1H),7.90(d,1H,J＝10.8Hz),7.82(s,1H),7.34(d,1H,J＝8.4Hz),3.17-3.16(m,4H),2.59-2.58(m,4H),2.35(s,3H),2.31(s,3H),2.01-1.96(m,1H),1.87-1.82(m,1H),1.35(s,3H),0.47(t,3H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z 478.3[M+H]+.
实施例19 4-(3-乙基-7-氟-2,3-二甲基-3H-吲哚-5-基)-氮-(5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-5-氟嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000253
步骤1 1-乙基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪的合成
Figure GDA0001881047060000261
依次将5-溴-2-硝基吡啶4.00g(19.7mmol)、1-乙基哌嗪3.40g(2.98mmol)、碳酸钾4.10g(29.6mmol)，四丁基碘化铵0.4g(1.2mmol)，DMSO 40mL，加入反应瓶中，80℃反应16h。然后将反应液倒入冰水中，用二氯甲烷萃取三次，每次20ml，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱色谱分离得到(DCM/MeOH＝100:1-10:1)得到3.59g黄色固体，收率56.1％。
MS(ESI):m/z 237.2[M+H]+.
步骤2 5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-氨基的合成
Figure GDA0001881047060000262
将步骤1制备得到的1-乙基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪650mg(2.13mmol)溶于45ml甲醇中，加入10％钯碳(250mg，cat)，氢气置换三次，3个大气压下氢气氛围中室温反应12h。停止反应，少量硅藻土过滤，滤饼用二氯甲烷和甲醇(V/V＝10:1)的混合溶剂20ml洗涤一次，收集滤液，减压浓缩，得到559mg标题化合物粗品(透明粘稠状物)，未进一步纯化，直接用于后续反应。
MS(ESI):m/z 207.1[M+H]+.
步骤3 5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3-乙基-7-氟-2,3-二甲基-3H-吲哚的合成
Figure GDA0001881047060000263
该中间体的合成方法与实施例16步骤1-3相同的方法制备得到。
步骤4 4-(3-乙基-7-氟-2,3-二甲基-3H-吲哚-5-基)-氮-(5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-5-氟嘧啶-2-氨基的合成
Figure GDA0001881047060000264
向反应瓶中加入步骤3制备得到的5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3-乙基-7-氟-2,3-二甲基-3H-吲哚321mg(1mmol)，步骤2制备得到的5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-氨基206mg(1mmol)，1,4-二氧六环2ml,Cs2CO3 650mg(2mmol),Pd2(dba)3 91mg(0.1mmol)，二苯基膦58mg(0.1mmol)；混合物加热到120℃，微波反应1小时；冷却至室温，加入10ml水，然后用乙酸乙酯萃取三次，每次40ml，合并有机相。有机相用40ml饱和食盐水洗涤一次，硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，硅胶柱色谱分离(DCM/MeOH＝10:1)，得到49mg标题化合物(黄色固体)，收率10％。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ9.25(br s,1H),8.46(d,1H,J＝3.2Hz),8.28(d,1H,J＝9.2Hz),8.17(d,1H,J＝2.0Hz),7.90(d,1H,J＝11.2Hz),7.82(s,1H),7.35(dd,1H,J＝9.2Hz,2.8Hz),3.20-3.18(m,4H),2.64-2.61(m,4H),2.51(q,2H,J＝6.8Hz),2.31(s,3H),2.03-1.94(m,1H),1.89-1.82(m,1H),1.36(s,3H),1.13(t,3H,J＝7.2Hz),0.48(t,3H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z 492.3[M+H]+.
实施例20 5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)-氮-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000271
按照实施例16中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.77(br s,1H),8.63(d,1H,J＝4.0Hz),8.02-7.98(m,3H),7.82(d,1H,J＝11.2Hz),7.41(dd,1H,J＝8.8Hz,2.8Hz),3.13-3.11(m,4H),2.49-2.46(m,4H),2.33(s,3H),2.26(s,3H),2.23-2.07(m,6H),1.76-1.74(m,2H).
MS(ESI):m/z 490.3[M+H]+.
实施例21 氮-(5-(1-乙基哌啶-4-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000272
按照实施例12中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.91(br s,1H),8.65(d,1H,J＝4.0Hz),8.28-8.14(m,3H),8.04(d,1H,J＝8.4Hz),7.43(dd,1H,J＝8.4Hz,2.0Hz),7.60(d,1H,J＝8.0Hz),3.00-2.97(m,4H),2.38-2.33(m,2H),2.30(s,3H),2.08-2.07(m,6H),1.99-1.94(m,2H),1.77-1.64(m,6H),1.02(t,3H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z 485.3[M+H]+.
实施例22 氮-(5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000281
按照实施例19中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.87(br s,1H),8.42(d,1H,J＝3.6Hz),8.33(d,1H,J＝9.2Hz),8.13-8.10(m,3H),7.65(d,1H,J＝8.0Hz),7.35(dd,1H,J＝8.8Hz,2.4Hz),3.19-3.18(m,4H),2.64-2.63(m,4H),2.53(q,2H,J＝6.8Hz),2.35(s,3H),2.27-2.06(m,6H),1.88-1.85(m,2H),1.14(t,3H,J＝6.8Hz).
MS(ESI):m/z 486.4[M+H]+.
实施例23 氮-(5-(4-甲基哌啶-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000282
按照实施例17中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ9.24(br s,1H),8.47(d,1H,J＝3.2Hz),8.38(d,1H,J＝8.8Hz),8.31(s,1H),8.14-8.09(m,2H),7.64(d,1H,J＝8.4Hz),7.57(dd,1H,J＝8.4Hz,2.4Hz),3.00-2.98(m,2H),2.49-2.46(m,1H),2.35(s,3H),2.33(s,3H),2.16-1.99(m,8H),1.85-1.76(m,6H).
MS(ESI):m/z 471.3[M+H]+.
实施例24 4-(3-乙基-7-氟-2,3-二甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟-氮-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000283
按照实施例17中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ9.74(br s,1H),8.50(d,1H,J＝3.6Hz),8.35-8.32(m,2H),7.88-7.82(m,2H),7.57(d,1H,J＝8.8Hz),2.97-2.95(m,2H),2.49-2.42(m,1H),2.30(s,6H),2.24-1.93(m,3H),1.88-1.74(m,5H),1.35(s,3H),0.47(t,3H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z 477.3[M+H]+.
实施例25 5-氟-氮-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-4-(2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000291
按照实施例16中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ9.28(br s,1H),8.44(d,1H,J＝3.6Hz),8.33(d,1H,J＝9.2Hz),8.18(d,1H,J＝2.0Hz),8.12-8.09(m,2H),7.64(d,1H,J＝8.0Hz),7.33(dd,1H,J＝9.2Hz,2.4Hz),3.16-3.14(m,4H),2.59-2.58(m,4H),2.35(s,3H),2.34(s,3H),2.15-2.06(m,6H),1.87-1.83(m,2H).
MS(ESI):m/z 472.3[M+H]+.
实施例26 4-(3-乙基-7-氟-2,3-二甲基-3H-吲哚-5-基)-氮-(5-(1-乙基哌啶-4-基)吡啶-2-基)-5-氟嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000292
按照实施例12中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.99(br s,1H),8.70(d,1H,J＝3.2Hz),8.19(s,1H),8.14(d,1H,J＝8.8Hz),7.92(s,1H),7.85(d,1H,J＝11.2Hz),7.69(d,1H,J＝8.4Hz),3.04-3.02(m,2H),2.42-2.41(m,2H),2.28(s,3H),2.04-1.99(m,3H),1.89-1.84(m,1H),1.78-1.63(m,4H),1.33(s,3H),1.04(t,3H,J＝6.8Hz),0.36(t,3H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z 491.3[M+H]+.
实施例27 氮-(5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000293
按照实施例19中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.92(br s,1H),8.44(d,1H,J＝3.6Hz),8.29(d,1H,J＝9.2Hz),8.15(d,1H,J＝2.8Hz),7.94(s,1H),7.89(d,1H,J＝11.2Hz),7.36(dd,1H,J＝9.2Hz,2.8Hz),3.21-3.19(m,4H),2.65-2.63(m,4H),2.51(q,2H,J＝7.2Hz),2.38(s,3H),2.22-2.07(m,6H),1.89-1.86(m,2H),1.15(t,3H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z 504.3[M+H]+.
实施例28 2-(4-(6-((5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙醇
Figure GDA0001881047060000301
向反应瓶中加入5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)-氮-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基20mg(0.04mmol，按照实施例6相同方法制备)，2-溴-乙醇16mg(0.12mmol)，DMF2ml，碳酸铯17mg(0.12mmol)，加热至80℃，反应1小时，然后冷却至室温，加入10ml水，然后用乙酸乙酯萃取三次，每次40ml，合并有机相。有机相用40ml饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，硅胶柱色谱分离(DCM/MeOH＝10:1)，得到标题化合物10mg(黄色固体)，收率55％。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(br s,1H),8.43(d,1H,J＝2.8Hz),8.29(d,1H,J＝9.2Hz),8.09(s,1H),7.94(s,1H),7.89(d,1H,J＝10.8Hz),7.36(d,1H,J＝8.8Hz),3.70-3.68(m,2H),3.19-3.18(m,4H),2.71-2.63(m,7H),2.39(s,3H),2.25-2.00(m,6H),1.90-1.87(m,2H).
MS(ESI):m/z 520.3[M+H]+.
实施例29 4-(3,3-二乙基-7-氟-2-甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟-氮-(5-(哌嗪-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000302
按照实施例1中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.66(br s,1H),8.45(d,1H,J＝3.6Hz),8.29(d,1H,J＝9.2Hz),8.11(d,1H,J＝2.8Hz),7.94(d,1H,J＝11.2Hz),7.81(s,1H),7.37(dd,1H,J＝8.8Hz,2.4Hz),3.13-3.12(m,4H),3.08-3.07(m,4H),2.30(s,3H),2.08-1.99(m,2H),1.91-1.82(m,3H),0.46(t,6H,J＝7.6Hz).
MS(ESI):m/z 478.3[M+H]+.
实施例30 2-(4-(6-((5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌啶-1-基)乙醇
Figure GDA0001881047060000303
向反应瓶中加入按照实施例13相同的方法制备得到的5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)-氮-(5-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基20mg(0.04mmol)，2-溴乙醇16mg(0.12mmol)，DMF 2mL，碳酸铯17mg(0.12mmol)，加热至80℃，反应1小时；然后冷却至室温，加入10ml水，用乙酸乙酯萃取三次，每次40ml，合并有机相。有机相用40ml饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，硅胶柱色谱分离(DCM/MeOH＝10:1)，得到标题化合物10mg(黄色固体)，收率55％。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.63(br s,1H),8.46(d,1H,J＝3.2Hz),8.34(d,1H,J＝8.4Hz),8.26(s,1H),7.96(s,1H),7.90(d,1H,J＝10.8Hz),7.60(d,1H,J＝8.0Hz),3.67-3.66(m,2H),3.08-3.06(m,2H),2.60-2.52(m,4H),2.39(s,3H),2.25-2.11(m,8H),1.89-1.83(m,4H),1.80-1.77(m,2H).
MS(ESI):m/z 519.3[M+H]+.
实施例31 5-氟-4-(7-氟-2,3,3-三甲基-3H-吲哚-5-基)-氮-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000311
按照实施例17中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.57(br s,1H),8.37(d,1H,J＝3.6Hz),8.18(s,1H),8.13(d,1H,J＝8.8Hz),7.84(s,1H),7.70(d,1H,J＝11.2Hz),7.51(d,1H,J＝7.2Hz),3.21-3.18(m,2H),2.60-2.54(m,4H),2.50-2.44(m,2H),2.37(s,3H),1.90-1.79(m,4H),1.38(s,6H).
MS(ESI):m/z 463.3[M+H]+.
实施例32 4-(3-乙基-2,3-二甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟-氮-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000312
按照实施例6中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ9.68(br s,1H),8.44(d,1H,J＝3.6Hz),8.32(d,1H,J＝8.8Hz),8.18(d,1H,J＝2.4Hz),8.11(d,1H,J＝8.0Hz),7.98(s,1H),7.64(d,1H,J＝8.0Hz),7.30(d,1H,J＝2.8Hz),3.05-3.04(m,4H),3.00-2.98(m,4H),2.26(s,3H),2.00-1.90(m,2H),1.83-1.74(m,1H),1.32(s,3H),0.45(t,1H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z 446.3[M+H]+.
实施例33 4-(3-乙基-2,3-二甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟-氮-(5-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000321
按照实施例13中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.33(d,1H,J＝2.8Hz),8.16-8.13(m,2H),7.95-7.93(m,2H),7.48-7.41(m,2H),3.18-3.15(m,2H),2.73(t,1H,J＝11.6Hz),2.59-2.53(m,1H),2.30(s,3H),2.01-1.96(m,1H),1.89-1.83(m,1H),1.79-1.76(m,2H),1.66-1.58(m,2H),1.32(s,3H),0.42(t,1H,J＝6.8Hz).
MS(ESI):m/z 445.3[M+H]+.
实施例34 4-(3-乙基-2,3-二甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟-氮-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000322
按照实施例16中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.42(d,1H,J＝3.2Hz),8.18(d,1H,J＝8.8Hz),8.09-8.01(m,3H),7.57(d,1H,J＝8.0Hz),7.42-7.37(m,1H),3.22-3.15(m,4H),2.61-2.60(m,4H),2.35(s,3H),2.32(s,3H),2.07-2.02(m,1H),1.94-1.89(m,1H),1.38(s,3H),0.43(t,1H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z 460.3[M+H]+.
实施例35 4-(3-乙基-2,3-二甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟-氮-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000323
按照实施例17中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.97(br s,1H),8.47(d,1H,J＝3.6Hz),8.39(d,1H,J＝8.4Hz),8.30(d,1H,J＝2.0Hz),8.15(d,1H,J＝8.4Hz),8.04(s,1H),7.68(d,1H,J＝8.0Hz),7.59(dd,1H,J＝8.8Hz,2.4Hz),3.01-2.98(m,4H),2.51-2.45(m,1H),2.34(s,3H),2.31(s,3H),2.10-1.97(m,3H),1.85-1.81(m,5H),1.37(s,3H),0.49(t,1H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z 459.3[M+H]+.
实施例36 4-(3-乙基-2,3-二甲基-3H-吲哚-5-基)-氮-(5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-5-氟嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000331
按照实施例19中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.93(br s,1H),8.44(d,1H,J＝3.6Hz),8.33(d,1H,J＝9.2Hz),8.15-8.13(m,2H),8.02(s,1H),7.67(d,1H,J＝8.0Hz),7.35(d,1H,J＝8.0Hz),3.19-3.18(m,4H),2.63-2.62(m,4H),2.52-2.47(m,2H),2.30(s,3H),2.02-1.97(m,1H),1.86-1.80(m,1H),1.36(s,3H),1.14(t,3H,J＝7.2Hz),0.57(t,1H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z 474.3[M+H]+.
实施例37 5-氟-氮-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(2,3,3-三甲基-3H-吲哚-5-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000332
按照实施例17中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ9.03(br s,1H),8.46(d,1H,J＝3.2Hz),8.38(d,1H,J＝8.4Hz),8.29(s,1H),7.67(d,1H,J＝8.0Hz),7.60(dd,1H,J＝8.8Hz,1.6Hz),3.00-2.97(m,2H),2.49-2.44(m,1H),2.34(s,3H),2.33(s,3H),2.10-2.03(m,2H),1.84-1.79(m,4H),1.37(s,6H).
MS(ESI):m/z 445.3[M+H]+.
实施例38 4-(3,3-二乙基-7-氟-2-甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟-N-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000333
按照实施例17中相似的步骤得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.95(s,1H),8.69(s,1H),8.19-8.11(m,2H),7.89-7.84(m,2H),7.67(d,1H,J＝7.6Hz),2.87-2.85(m,2H),2.25(s,3H),2.19(s,3H),2.02-1.92(m,6H),1.90-1.65(m,4H),0.34(m,6H).
MS(ESI):m/z 491.3[M+H]+.
实施例39 1-(2-((4-(3-乙基-7-氟-2,3-二甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氢-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-羟基乙酰胺
Figure GDA0001881047060000341
步骤1 2-(2-氯-7,8-二氢-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-乙酰氧基乙酰胺
Figure GDA0001881047060000342
向反应瓶中中加入2-氯-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶1.0g(5.95mmol)，三乙胺1.21g(11.90mmol)，二氯甲烷5ml，然后缓慢滴加2-氯-2-乙酰氧基乙酰氯1.22g(8.93mmol).该混合物室温反应1小时，加入5ml水萃灭反应，移除溶剂，用二氯甲烷萃取三次，每次15ml，合并有机相。有机相用10ml饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，得到标题化合物灰白色粗品1.09g,收率68.21％。
MS(ESI):m/z 269.1[M+H]+.
步骤2 1-(2-((4-(3-乙基-7-氟-2,3-二甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氢-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-羟基乙酰胺
Figure GDA0001881047060000343
向反应瓶中加入按照实施1步骤1-3相似的方法得到4-(3-乙基-7-氟-2,3-二甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟嘧啶-2-氨基101mg(0.34mmol)，步骤1制备得到的2-(2-氯-7,8-二氢-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-乙酰氧基乙酰胺85.2mg(0.32mmol)，二氧六环10mL，叔丁醇钠65.3mg(0.68mmol),Pd2(dba)3 31.2mg(0.034mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽19.7mg(0.034mmol)。该混合物加热至120℃，微波反应1小时，然后冷却至室温，加入50ml水，用乙酸乙酯萃取三次，每次50ml，合并有机相。有机相用50ml饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝10:1)得到标题化合物20mg(白色固体)，收率12％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.98(s,1H),8.70(d,1H,J＝3.6Hz),8.07(d,1H,J＝8.4Hz),7.94(s,1H),7.87(d,1H,J＝11.2Hz),7.64-7.57(m,1H),4.68-4.55(m,3H),4.22-4.21(m,2H),4.21-4.19(m,2H),2.89-2.81(m,2H),2.28(s,3H),2.04-1.84(m,2H),1.33(s,3H),0.37(t,3H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z 493.2[M+H]+.
实施例40 1-(2-((5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氢-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-羟基乙酰胺
Figure GDA0001881047060000351
按照实施例39中相似的步骤得到标题化合物
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.07(brs,1H),8.69(d,1H,J＝3.6Hz),8.53(s,1H),8.09-8.02(m,1H),7.98(s,1H),7.88(d,1H,J＝12.4Hz),7.62-7.54(m,1H),4.73(brs,1H),4.62-4.61(m,2H),4.21-4.19(m,2H),2.89-2.81(m,2H),2.50(s,2H),2.34-2.11(m,5H),1.75-1.72(m,2H).
MS(ESI):m/z 505.2[M+H]+.
实施例41 N-(5-(4-(环丙基甲基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000352
按照实施例6相似步骤得到中间体5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)-氮-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000353
向反应瓶中加入上述中间体5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)-氮-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基(150mg,0.32mmol)，溴甲基环丙烷，乙腈(5ml)，碳酸钾(130.0mg,0.96mmol)，加热至80℃反应4h,冷却至室温，加入50ml水，用二氯甲烷萃取三次，每次10ml.合并有机层，用15mg饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，柱色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝10:1)，得到本实施例的标题产物42.1mg(白色固体)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.89(s,1H),8.68(m,1H),8.64-8.01(m,3H),7.87(d,1H,J＝14.4Hz),7.42-7.40(m,1H),3.14-3.13(m,5H),2.60-2.51(m,5H),2.33(s,3H),2.24-2.23(m,2H),2.09-2.02(m,6H),1.99-1.97(m,2H),1.75-1.74(m,2H),0.85-0.83(m,2H),0.48-0.47(m,2H).
MS(ESI):m/z 530.3[M+H]+.
实施例42 4-(3-乙基-7-氟-2,3-二甲基-3H-吲哚-5-基)-5-氟-N-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000361
按照实施例2中相似的步骤得到标题化合物
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.06(brs,1H),8.72(d,1H,J＝3.2Hz),8.18-8.15(m,2H),7.93(s,1H),7.86(d,1H,J＝11.6Hz),7.67(d,1H,J＝5.2Hz),3.42(s,2H),2.35-2.28(m,8H),2.14(s,3H),2.04-1.98(m,1H),1.89-1.84(m,1H),1.34(s,3H),0.36(t,3H,J＝7.2Hz).
MS(ESI):m/z 492.3[M+H]+.
实施例43 5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)-N-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000362
按照实施例2中相似的步骤得到标题化合物
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.09(s,1H),8.71(d,1H,J＝3.2Hz),8.18-8.15(m,2H),8.02(s,1H),7.85(d,1H,J＝11.2Hz),7.67(d,1H,J＝8.4Hz),3.43(s,2H),2.50-2.34(m,8H),2.14(s,3H),2.14-2.08(m,6H),1.75-1.74(m,2H),1.75-1.72(m,2H).
MS(ESI):m/z 504.2[M+H]+.
实施例44 氮-(5-(1-甲基哌啶-4-基)-(6-甲基吡啶)-2-基)-5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000363
按照实施例12中相似的步骤得到标题化合物。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6),δ9.84(s,1H),8.70(s,1H),8.11(s,1H),7.98-8.01(d,2H),7.81-7.85(d,1H),2.87-2.90(d,2H),2.50-2.51(m,1H),2.20-2.34(m,6H),1.78-1.98(m,8H),1.69-1.75(m,6H).
MS(ESI):m/z 503.3[M+H]+.
实施例45 氮-(5-((1-甲基哌啶-4-基)氧基)-吡啶-2-基)-5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)嘧啶-2-氨基
Figure GDA0001881047060000371
按照实施例1相似步骤得到中间体5'-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]
Figure GDA0001881047060000372
步骤1 1-甲基哌啶-4-基4甲基苯磺酸酯
Figure GDA0001881047060000373
向反应瓶中加入4-羟基-1-甲基哌啶(1000mg,8.69mmol)，对甲苯磺酰氯(3310mg,17.38mmol)，二氯甲烷(50ml)，三乙胺(1mL)，室温反应2h，加入50ml水，用二氯甲烷萃取三次，每次30ml.合并有机层，用50mg饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，柱色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝50:1)，得到中间体1.87g，产率80.0％(淡黄色固体)。
步骤2 2-溴-5-((1-甲基哌啶-4-基)氧基)吡啶
Figure GDA0001881047060000374
向反应瓶中加入中间体1-甲基哌啶-4-基4甲基苯磺酸酯(1000mg,3.70mmol)，2-溴-5-羟基吡啶(637mg,3.70mmol)，DMF(50ml)，加热90℃反应2h，加入50ml水，用二氯甲烷萃取三次，每次30ml.合并有机层，用50mg饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，柱色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝40:1)，得到中间体0.49g，产率50.1％(淡黄色固体)。
步骤3 5-((1-甲基哌啶-4-基)氧基)吡啶-2-胺
Figure GDA0001881047060000375
向反应瓶中加入中间体2-溴-5-((1-甲基哌啶-4-基)氧基)吡啶(1000mg,3.70mmol)，二(三甲基硅基)氨基钠(618mg,3.70mmol)，四氢呋喃(50ml)，2-(二环己基膦基)联苯(120mg，0.37mmol)，三(二亚苄基茚丙酮)二钯(338mg，0.37mmol)加热65℃反应12h，加入50ml水，用二氯甲烷萃取三次，每次30ml.合并有机层，用50mg饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，柱色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝10:1)，得到中间体0.37g，产率49.3％(黄色固体)。
步骤4按照实施例1步骤6的试验方法完成氮-(5-((1-甲基哌啶-4-基)氧基)-吡啶-2-基)-5-氟-4-(7'-氟-2'-甲基螺[环戊烷-1,3'-吲哚]-5'-基)嘧啶-2-氨基的合成。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6),δ9.69(s,1H),8.63(s,1H),7.93-7.99(d,1H),7.80-7.83(d,1H),7.81-7.85(d,1H),7.12-7.14(d,1H),5.76-5.82(m,1H),5.02-5.13(m,2H),3.79(s,2H),2.56-2.59(m,13H),2.28-2.33(m,6H),1.74-1.99(m,2H).
MS(ESI):m/z 505.2[M+H]+.
以下实验例中所用的对照品，编号为LY2835219，参考专利WO2010075074制备方法制备，其结构式如背景技术结构式3所示。
实验例1本发明化合物的CDKs激酶抑制活性测定
本发明所述化合物体外对CDK(CDK1、CDK4、CDK6)激酶活性的抑制作用通过以下的方法进行测试。
1.1仪器和试剂盒信息
Figure GDA0001881047060000381
1.2实验准备：
1.2.1激酶反应缓冲液Ⅰ的配制：将试剂盒中给出的5×Reaction Buffer A(Promega；V307A-C)用Milli Q H2O和0.1M DTT(二硫苏糖醇)混合稀释成4x激酶缓冲液；再按比例加入Milli Q H2O，最终配制成1x激酶缓冲液。
激酶反应缓冲液Ⅱ的配制：在1x激酶反应缓冲液中加入0.5％DMSO(二甲基亚砜)混匀即可。
1.2.2激酶溶液的配制：用1x激酶反应缓冲液将100ng/μl激酶储液配制每个反应体系所需浓度的激酶溶液。
1.2.3供试化合物和对照品LY2835219溶液的配制:
(1)配制对照品LY2835219溶液
a.分别取1μl的10mM标准品储液，加入到9μl的激酶反应缓冲液Ⅰ中，混匀；再加入90μl的激酶反应缓冲液Ⅰ，混匀；再加入100μl的激酶反应缓冲液Ⅰ，混匀；得到终浓度为50μM。
b.在96-孔板的B2-B10中加入40μl的激酶反应缓冲液Ⅱ；在B1中加入50μl上述溶液；
c.从孔B1中取出10μl加入B2，混匀，然后取10μl加入到B3，依次稀释B9；得到依次5倍稀释的对照品溶液。
(2)准备供试化合物溶液：
a.分别取一定浓度的供试化合物溶液，用激酶反应缓冲液Ⅰ稀释到终浓度为50μM的化合物溶液；
b.在96-孔板的H2-H10中加入40μl的激酶反应缓冲液Ⅱ；在H1中加入50μl上述溶液；
c.从孔H1中取出10μl加入H2，混匀，然后取10μl加入到H3，依次稀释H9；得到依次5倍稀释的供试化合物溶液。
1.2.4准备反应底物和ATP混合溶液：
a.准备ATP溶液：
200μl 0.1mM ATP溶液:2μl 10mM ATP加入198μl激酶反应缓冲液Ⅰ；
300μl 50μM ATP溶液：加150μl的激酶反应缓冲液Ⅰ到150μl上述0.1mM ATP溶液中；
b.准备300μl的反应底物溶液：
将150μl 1μg/μl的反应底物储液，加入150μl激酶反应缓冲液Ⅰ混匀；
c.将上述a/b两种溶液混合分别得到混合溶液。
1.3实验过程：1.3.1取2μl各浓度的化合物溶液加入到384孔板中，离心3min；
1.3.2每孔加入4μl激酶溶液，18℃，5000rpm离心10min，摇板机上摇匀10min；
1.3.3每孔加入4μl底物和ATP混合溶液，18℃，5000rpm离心10min，摇板机37℃摇匀90min；
1.3.4取出384孔板，放置至室温；
1.3.5每孔加入10μl的ADP-Glo试剂，18℃、5000rpm离心10min，摇板机25℃摇匀40min，终止反应；
1.3.6每孔加入20μl的激酶检测试剂，18℃、5000rpm离心10min，摇板机25℃摇匀30min；
1.3.7 M1000pro酶标仪读取荧光数值。
1.4数据处理：
按如下公式计算各化合物在各浓度点的抑制率，并通过软件GraphPad Prism 5进行曲线拟合得到IC50值。
Figure GDA0001881047060000391
1.5检测结果：
由WO2010075074公开的LY2835219以及实施例1-43的化合物对CDK1/CyclinA2和CDK6/CyclinD3的抑制作用，以IC50表示，具体结果见表1。
表1受试化合物对CDK1/CyclinA2和CDK6/CyclinD3抑制活性检测结果(IC50：nM)
Figure GDA0001881047060000392
Figure GDA0001881047060000401
本发明部分代表化合物对CDK9/CyclinD3、Pim-1和CDK2/CyclinE1及CDK4/CyclinE1的抑制作用分别见表2、表3和表4。
表2部分受试化合物对CDK9/CyclinD3抑制活性检测结果(IC50：nM)
实施例 CDK1/CyclinA2 CDK6/CyclinD3 CDK9/CyclinD3 CDK1/CDK6 CDK9/CDK6
LY2835219 319.43 3.81 5.08 83.83 1.33
1 2223.92 43.03 244.97 51.68 5.69
3 1678 79.06 50.02 21.22 0.63
6 152.2 6.45 0.42 23.59 0.06
7 83.83 3.26 4.58 25.71 1.40
9 268.28 20.42 14.43 13.13 0.71
10 435.68 47.11 27.04 9.25 0.57
12 1071.23 3.78 57.19 283.33 18.75
13 327.00 0.39 2.56 838.46 6.56
16 95.70 9.02 16.37 10.61 1.81
17 2707.11 0.73 5.36 3708.37 7.33
18 189.86 2.74 1.00 69.29 0.36
20 1444.45 87.60 0.24 16.49 0.003
22 915.35 52.50 0.50 17.43 0.009
24 76.44 12.86. 1.74 5.94 0.13
25 417.16 8.78 1.09 47.51 0.12
26 216.08 12.51 10.95 17.27 0.88
27 1160.23 16.21 2.83 71.57 0.17
28 328.47 6.24 0.96 52.63 0.15
30 176.58 0.49 0.43 360.37 0.88
表3部分受试化合物对Pim-1抑制活性检测结果(IC50：nM)
Figure GDA0001881047060000411
Figure GDA0001881047060000421
表4部分受试化合物对CDK4和CDK2的抑制作用(IC50：nM)
Figure GDA0001881047060000422
1.6试验结论：
1)本发明的化合物对CDK6和CDK4具有显著的抑制作用。
2)CDK1/CDK6、CDK9/CKD6和Pim-1/CDK6可以体现化合物对于蛋白激酶的选择性，数值越大，则化合物对CDK6的选择性越好，预示着化合物的泛蛋白激酶抑制的毒性可能越小。对照化合物(LY2835219)的CDK1/CDK6＝83.83，CDK9/CDK6＝1.33，Pim-1/CDK6＝1.03；本发明的部分化合物显示出比LY2835219更好的选择性，特别是实施例17制备的化合物表现出对于CDK6具有更高的酶学活性，对于CDK1，CDK9和Pim1具有更好的选择性。
实验例2本发明代表化合物对人乳腺癌细胞MDB-MA-231的增殖抑制测定
2.1实验材料：人乳腺癌细胞MDA-MB-231购于北京协和细胞资源中心，DAPI(5mg/mL,碧云天，c1002)，4％多聚甲醛(鼎国生物，AR-0211)，黑色透明底96孔板(PE，6005182)，In Cell Analyzer 2200(GE Healthcare)
2.2实验准备：
2.2.1人乳腺癌细胞MDA-MB-231培养基的配制:RPIM1640+10％FBS+1％青霉素/链霉素
2.2.2供试化合物和标准品LY2835219溶液的配制:
(1)配制标准品LY2835219溶液
a.分别取3.6μl的10mM标准品储液，加入到6.4μl培养基中，混匀；再加入90μl的培养基，混匀；再加入200μl的培养基，混匀；配制成20μM起始浓度。
b.在96-孔板的B2-B10中加入200μl的含0.2％DMSO(二甲基亚砜)的培养基；在B1中加入300μl上述溶液；
c.从孔B1中取出100μl加入B2，混匀，然后取100μl加入到B3，依次稀释B9；得到依次3倍稀释的标准品溶液。
(2)准备供试化合物溶液：
a.分别取一定浓度的供试化合物溶液，用培养基稀释到终浓度为20μM的化合物溶液；
b.在96-孔板的H2-H10中加入200μl的含0.2％DMSO(二甲基亚砜)的培养基；在H1中加入300μl上述溶液；
c.从孔H1中取出100μl加入H2，混匀，然后取100μl加入到H3，依次稀释H9；得到依次3倍稀释的供试化合物溶液。
2.3实验过程：
2.3.1MDA-MB-231细胞分别以4000cells/100μl/well接种至96孔黑色透明底细胞板，37℃培养过夜；
2.3.2上述样品分别以100μl/孔加入接种有细胞的培养板中，轻拍使混匀，37℃孵育72h；
2.3.3固定：取出细胞板，去除培养基，每孔加入50μl 4％多聚甲醛固定10min；
2.3.4加入50μl 0.1M glycine(甘氨酸)中和10min；
2.3.5 1×PBS(磷酸盐缓冲液PH7.2)洗两次；
2.3.6通透：每孔加50μl 0.2％TritonX-100(曲拉通)室温通透10min；
2.3.7 1×PBS(磷酸盐缓冲液PH7.2)洗两次；
2.3.8 5mg/mL的DAPI储备液1:5000稀释(终浓度1μg/ml)室温染色20min
2.3.9 1×PBS(磷酸盐缓冲液PH7.2)洗三次；
2.3.10 In cell analyser扫描并分析。
2.4数据处理：
按如下公式计算各化合物在各浓度点的抑制率，并通过软件GraphPad Prism 5进行曲线拟合得到IC50值。
Figure GDA0001881047060000431
2.5测定结果：
由WO2010075074公开的LY2835219以及实施例12和17的化合物的细胞学活性测定结果，以IC50表示，具体结果见表5。
表5本发明代表化合物对人乳腺癌细胞MDB-MA-231增殖的抑制活性(IC50：nM)
实施例 IC<sub>50</sub>
LY2835219 229.05
12 182.72
17 109.82
2.6实验结论：
实施例12和17的化合物对MDA-MB-231细胞系具有明显的增殖抑制活性，相对于对照化合物LY2835219，本发明代表化合物具有更高的增殖抑制活性。
实验例3本发明代表化合物的大鼠药代动力学测定
3.1实验摘要
以SD大鼠为受试动物，应用LC/MS/MS方法测定大鼠静脉注射给药和灌胃给药代表化合物后不同时刻血浆中的药物浓度，以研究本发明化合物在大鼠体内的药代动力学行为，评价其药动学特征。
3.2实验方案
3.2.1供试药品：
本发明实施例17制备的化合物；
对照药LY2835219,自制。
3.2.2供试动物：
健康成年SD大鼠12只，雄性，6-8周龄，体重200-250g,购自苏州昭衍新药研究中心有限公司，动物生产许可证号：SCXK(苏)2013-0003
3.2.3供试药物配制
灌胃给药：称取适量样品，加入0.1％羟乙基纤维素/0.5％吐温80至终体积，配成1mg/ml溶液；
静脉注射：称取适量样品，加入10％的N-甲基-2-吡咯烷酮和90％的18％磺丁基-β-环糊精至终体积，配成0.4mg/ml溶液，供静脉注射给药。
3.2.4供试药品给药
静脉注射给药：每个供试化合物3只雄性SD大鼠，禁食一夜后分别静脉注射给药，剂量为2mg/kg，给药体积为1ml/kg。
灌胃给药：每个供试化合物3只雄性SD大鼠，禁食一夜后分别灌胃给药，剂量为5mg/kg,给药体积为5ml/kg。
3.3实验操作
在给药前及给药后0.0833、0.25、0.5、1、2、4、8、12、24小时后，经过颈动脉插管取血。全血EDTA-K2抗凝，离心去上清，-20摄氏度冷冻保存，直至样品分析。用LC-MS/MS进行血浆样品分析，蛋白沉淀法进行样品前处理，样品分析线性范围1-2000ng/ml.最低定量限为1ng/ml.
3.4药代动力学数据结果
本发明化合物的药代动力学参数见表6和表7。
表6本发明化合物17的大鼠单次静脉给药PK参数(Mean±SD)
Figure GDA0001881047060000441
表7本发明化合物17的大鼠单次灌胃给药PK参数(Mean±SD)
Figure GDA0001881047060000442
3.5实验结论：本发明的代表化合物(实施例17制备)，相对于化合物LY2835219，在大鼠中具有更高的生物利用度和良好的口服吸收效果。
实验例4本发明代表化合物的小鼠药代动力学测定
4.1实验摘要
以ICR小鼠为受试动物，应用LC/MS/MS方法测定小鼠灌胃、静脉注射给予本发明代表化合物后不同时刻血浆中的药物浓度，以研究本发明化合物在小鼠体内的药代动力学行为，评价其药动学特征。
4.2实验方案
4.2.1供试药品：
本发明实施例17制备的化合物；
对照药LY2835219,自制。
4.2.2供试动物：
健康成年ICR小鼠，12只，雄性，6-8周龄，体重20-25g,购自苏州昭衍新药研究中心有限公司，动物生产许可证号：SCXK(苏)2013-0003
4.2.3供试药物配制
称取适量样品，加入0.1％羟乙基纤维素/0.5％吐温80至终体积，配成0.5mg/ml溶液，供灌胃给药。
称取适量样品，加入10％的N-甲基-2-吡咯烷酮和90％的18％磺丁基-β-环糊精至终体积，配成0.2mg/ml溶液，供静脉注射给药。
4.2.4供试药品给药
每个供试药品，雄性ICR小鼠3只，禁食一夜后分别灌胃给药，剂量为5mg/kg,给药体积为10ml/kg；
每个供试药品，雄性ICR小鼠3只，禁食一夜后分别静脉注射给药，剂量为2mg/kg，给药体积为10ml/kg.
4.3实验操作
灌胃给药组于给药前及给药后在0.25、0.5、1、2、4、8、12、24小时后，经过颈动脉插管取血。全血EDTA-K2抗凝，离心去上清，-20摄氏度冷冻保存，直至样品分析。静脉注射给药组于给药前及给药后在0.083h、0.25、0.5、1、2、4、8、12、24小时后，经过颈动脉插管取血。血浆样品处理同灌胃给药。用LC-MS/MS进行血浆样品分析，蛋白沉淀法进行样品前处理，样品分析线性范围1-2000ng/ml.最低定量限为1ng/ml.
4.4药代动力学数据结果：见表8和表9。
表8本发明化合物17的小鼠单次静脉给药PK参数(Mean±SD)
Figure GDA0001881047060000451
表9本发明化合物17的小鼠单次灌胃给药PK参数(Mean±SD)
Figure GDA0001881047060000452
4.5实验结论：本发明的代表化合物17，相对于化合物LY2835219，在小鼠中具有更高的生物利用度，更长的半衰期，具有良好的口服吸收效果。
实验例5本发明代表化合物17血浆和脑暴漏水平的测定
5.1实验摘要
以CD-1小鼠为受试动物，应用LC/MS/MS方法测定小鼠单次灌胃给药本发明代表化合物后不同时刻血浆和脑组织中的药物浓度，以研究本发明化合物在小鼠体内的血浆和脑暴漏水平。
5.2实验方案
5.2.1供试药品：
本发明实施例17制备的化合物；
对照药LY2835219,自制。
5.2.2供试动物：
健康成年CD-1小鼠，24只，雄性，6-8周龄，体重20-25g,购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，动物生产许可证号：SCXK(沪)2013-0016。
5.2.3供试药物配制
称取适量样品，加入0.1％羟乙基纤维素/0.5％吐温80至终体积，配成1.0mg/ml溶液。
5.2.4供试药品给药
每个供试药品，雄性CD-1小鼠12只，禁食一夜后分别灌胃给药，剂量为10mg/kg,给药体积为10ml/kg。
5.3实验操作
LY2835219：给药前及给药后在0.25、1.5、6小时时，经过颈动脉插管取血，同时处死3只小鼠，收集整个脑并且捣碎后冻存于液氮中；给药后10小时，将剩余的动物处死，并且通过心脏穿刺采集全血，收集整个脑并且捣碎后冻存于液氮中。
实施例17：给药前及给药后在2、4、24小时时，经过颈动脉插管取血，同时处死3只小鼠，收集整个脑并且捣碎后冻存于液氮中；给药后48小时，将剩余的动物处死，并且通过心脏穿刺采集全血，收集整个脑并且捣碎后冻存于液氮中。
全血样品处理：采集的全血EDTA-K2抗凝，离心去上清，-20℃冷冻保存，直至样品用LC-MS/MS分析。
脑部匀浆取样：脑部匀浆用5倍于脑匀浆溶液体积的PBS(pH＝7.4):MeOH(v:v,2:1)溶液分散，取100μL，用600μL IS沉淀其中的蛋白，混合物在20-25℃,13000rpm离心15分钟，取50μL上层清液用150μL含有0.3％FA的水混合，4℃离心，取5μL样品用LC-MS/MS进行分析。
样品分析线性范围1-2000ng/ml.最低定量限为1ng/ml。
5.4血脑暴露水平测定结果：见表10。
表10受试化合物在CD-1小鼠中血浆和脑部的平均暴漏
Figure GDA0001881047060000461
5.5实验结论：本发明的代表化合物(实施例17制备)，相对于化合物LY2835219，具有更好的血脑分布，更高的AUC0-last比值(脑部/血浆)，更高的Cmax比值(脑部/血浆)，而且脑部Tmax和血浆中的Tmax相等，说明药物在脑部与血浆中具有相似的PK行为。提示本发明的化合物可以穿过血脑屏障从而抑制脑部肿瘤(脑癌)的生长，治疗脑癌。
实验例6本发明代表化合物17对U87 MG细胞系的增殖抑制测定
6.1实验材料：人胶质瘤细胞系U87 MG购于上海中科院细胞库，DAPI(5mg/mL,碧云天，c1002)，4％多聚甲醛(鼎国生物，AR-0211)，黑色透明底96孔板(PE，6005182)，In CellAnalyzer 2200(GE Healthcare)。
6.2实验准备：
6.2.1 U87 MG培养基的配制:RPIM1640+10％FBS+1％青霉素/链霉素
6.2.2供试化合物和标准品LY2835219溶液的配制:
(1)配制标准品LY2835219溶液
a.分别取3.6μl的10mM标准品储液，加入到6.4ul培养基中，混匀；再加入90μl的培养基，混匀；再加入200μl的培养基，混匀；配制成20uM起始浓度。
b.在96-孔板的B2-B10中加入200μl的含0.2％DMSO(二甲基亚砜)的培养基；在B1中加入300μl上述溶液；
c.从孔B1中取出100μl加入B2，混匀，然后取100μl加入到B3，依次稀释B9；得到依次3倍稀释的标准品溶液。
(2)准备供试化合物溶液：
a.分别取一定浓度的供试化合物溶液，用培养基稀释到终浓度为20μM的化合物溶液；
b.在96-孔板的H2-H10中加入200μl的含0.2％DMSO(二甲基亚砜)的培养基；在H1中加入300μl上述溶液；
c.从孔H1中取出100μl加入H2，混匀，然后取100μl加入到H3，依次稀释H9；得到依次3倍稀释的供试化合物溶液。
6.3实验过程：
6.3.1 U87 MG细胞分别以4000cells/100μl/well接种至96孔黑色透明底细胞板，37℃培养过夜；
6.3.2上述样品分别以100μl/孔加入接种有细胞的培养板中，轻拍使混匀，37℃孵育72h；
6.3.3固定：取出细胞板，去除培养基，每孔加入50μl 4％多聚甲醛固定10min；
6.3.4加入50μl 0.1M glycine(甘氨酸)中和10min；
6.3.5 1×PBS(磷酸盐缓冲液PH7.2)洗两次；
6.3.6通透：每孔加50μl 0.2％TritonX-100(曲拉通)室温通透10min；
6.3.7 1×PBS(磷酸盐缓冲液PH7.2)洗两次；
6.3.8 5mg/mL的DAPI储备液1:5000稀释(终浓度1μg/ml)室温染色20min
6.3.9 1×PBS(磷酸盐缓冲液PH7.2)洗三次；
6.3.10 In cell analyser扫描并分析。
6.4数据处理：
按如下公式计算各化合物在各浓度点的抑制率，并通过软件GraphPad Prism 5进行曲线拟合得到IC50值。
Figure GDA0001881047060000471
6.5测定结果：
由WO2010075074公开的LY2835219以及实施例17的化合物的细胞学活性测定结果，以IC50表示，具体结果见表11。
表11本发明代表化合物对U87 MG细胞系增殖的抑制活性(IC50：nM)
实施例 IC<sub>50</sub>
LY2835219 150.70
17 35.43
6.6实验结论：
实施例17的化合物对U87 MG细胞系具有明显的增殖抑制活性，相对于对照化合物LY2835219，本发明代表化合物具有更高的增殖抑制活性。
实验例7本发明化合物17以及与替莫唑胺的组合用药在U87-luc原位脑异种移植模型中的药效学研究
7.1实验摘要
以成年雌性BALB/c裸鼠为受试动物，应用原位脑异种移植模型，灌胃给药以研究本发明代表化合物17对雌性BALB/c裸鼠中值生存的影响。
7.2实验方案
7.2.1供试药品：
本发明实施例17制备的化合物；
对照药LY2835219,自制。
替莫唑胺购自selleck。
7.2.2供试动物：
健康成年雌性BALB/c裸鼠，8只/组，6-8周龄，体重18-22gg,购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，动物生产许可证号：2008001658261；2008001658263。
7.2.3供试化合物的配置
称取适量化合物17，加入0.1％羟乙基纤维素/0.5％吐温80的溶媒至0.3125mg/ml。
称取适量替莫唑胺样品，加入1％CMC-Na+0.25％Tween80的溶媒至0.3mg/ml。
7.3原位脑异种移植模型
将成年雌性BALB/c裸鼠以80mg/kg剂量的戊巴比妥钠腹腔注射进行麻醉。为了减轻疼痛，在术前30分钟以及术后6个小时给动物皮下注射丁丙诺啡，剂量是0.1mg/kg。在麻醉后观察动物，直至所有的动物苏醒。
麻醉后的动物被恰当固定，动物的头部皮肤用70％的乙醇消毒，在中线偏右侧、前额至耳间线之间实施约10mm长的切口。在距离每一只动物前卤右侧2mm及冠状缝前侧1mm处的右侧大脑额叶处接种3×105U87-luc细胞(3μl，PBS和Matrigel以4:1混合)。切口用No.6线缝合，用聚乙烯吡咯碘酮消毒。动物被保暖直到复苏。在肿瘤细胞移植后6天，根据荧光信号强度值，以分层随机法对荷瘤动物进行分组，分组给药时平均生物发光达到了2.812E+07photons/sec。不同的动物组按照不同的剂量开始给药，总计给药时间为35天。
7.4本发明化合物17以及与替莫唑胺的组合用药在U87-luc原位脑异种移植模型中的中值生存(天)
表12化合物17以及与替莫唑胺的组合用药引起的中值生存
Figure GDA0001881047060000481
Figure GDA0001881047060000491
a生存时间范围。
b各组与溶媒组对照时的p值。
c各组与替莫唑胺单剂量组对照时的p值。
7.5实验结论：本发明的代表化合物17在U87-luc原位脑异种移植模型中能够显著延长动物的中值生存期，并且具有剂量依赖关系。在与替莫唑胺的组合用药研究中，相比于替莫唑胺单独给药，组合给药更加延长了动物的中值生存期。
总之，本发明提供了一系列新的具有选择性CDK4/6激酶抑制活性的化合物，其活性优于或与目前处于III期临床试验的候选药物LY2835219相当，部分化合物表现出更好的选择性。而且优选的化合物口服吸收良好、血脑分布好，对U87-luc原位脑异种移植模型具有显著的药效，预示着本发明的化合物有希望被开发成新的治疗细胞增殖相关疾病，尤其是恶性肿瘤(特别是脑癌)的药物，为临床医生和患者提供新的选择。
试剂盒
本发明还提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括结构式I-V、VIII的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物形式，或结构式I-V和VIII的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物形式的药学上可以接受的盐或溶剂化物。
此外，所述试剂盒还可包括使用说明书。
药物组合物
本发明还涉及了一种用于治疗细胞增殖障碍性疾病的组合产品，其包含药学上可接受的载体，以及结构式I-V、VIII的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物形式，或结构式I-V、VIII的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物形式的药学上可以接受的盐或溶剂化物。所述化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物形式，或结构式I-V和VIII的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物形式的药学上可以接受的盐或溶剂化物在该药物组合物中可以为有效量的或治疗有效量的。
如本文所用，“有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。
如本文所用，“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物(如哺乳动物或禽类)而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)的，即具有合理的效益/风险比的物质。“药学上可接受的载体”是指用于给药的载体，可以包括各种赋形剂和稀释剂等。这类载体可以包括但不限于：水、生理盐水、脂质体、脂质、蛋白、蛋白-抗体缀合物、肽类物质、纤维素、纳米凝胶、缓冲液、葡萄糖、甘油、乙醇及其组合。载体的选择通常应与给药方式相匹配，这是本领域的普通技术人员所熟知的。
本发明所述的有效量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度等而变化。优选的有效量可以由本领域普通技术人员根据各种因素来确定(例如通过临床试验)。所述的因素包括但不限于：所述的活性成分的药代动力学参数，例如生物利用率、代谢、半衰期等；患者所要治疗的疾病的严重程度、患者的体重、患者的免疫状况、给药的途径等。
治疗方法
本发明还提供了一种治疗细胞增殖障碍性疾病的方法，所述方法包括对所述患者通过口服或非口服途径给予有效剂量的结构式I-V、VIII的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物形式，或结构式I-V和VIII的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物，前药或其混合物形式的药学上可以接受的盐或溶剂化物，或上述药物组合物。
所述口服或非口服途径可以为通过胃肠道、鼻腔、气管、肺、非病灶部位的静脉或表皮、皮内、皮下、心内、肌肉、骨髓、腹腔、硬膜外、口腔、舌下、眼部、直肠、阴道、尿道、耳道等途径给药。优选施用方式或给药方式包括：口服、呼吸道、注射、透皮、粘膜或腔道给药。
其中，所述口服给药包括吞服、含化等。所述呼吸道给药方式包括吸入方式，例如超声雾化吸入、氧气雾化吸入、手压式雾化吸入等。所述注射给药方式包括动脉注射、静脉注射、肌肉注射、心内注射、皮内注射等。所述透皮给药或经皮给药方式，包括离子导入法、电致孔透皮法等。所述粘膜给药方式包括鼻粘膜给药、口腔粘膜给药、眼粘膜给药、直肠粘膜给药、子宫给药以及阴道粘膜给药等。所述腔道给药方式包括直肠给药、阴道给药、尿道给药、鼻腔给药、耳道给药等。
在本发明所提及的所有文献(包括专利文献或非专利文献)都在本发明中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。
尽管本发明已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本发明的精神和范围的条件下，可进行各个条件的适当变化。可以理解，本发明不限于所述实施方案，而归于权利要求的范围，其包括所述每个因素的等同替换。

Claims (72)

1.一种结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，
Figure FDF0000014545330000011
其中，R1选自氢原子、未被取代的C1-C6的烃基或被一个或多个选自C1-C6的烃基、C1-C6的卤代烷基、C1-C6的烷氧基、羟基、卤素的取代基取代的C1-C6的烃基；
R2，R3各自独立地选自未被取代的C1-C6的烃基或被一个或多个选自C1-C6的烃基、C1-C6的卤代烷基、C1-C6的烷氧基、羟基、卤素的取代基取代的C1-C6的烃基；
或者R2，R3与各自连接的C原子一起形成饱和或不饱和的3-7元环；
R4和R5各自独立地选自氢、卤素，且R4和R5中至少一个是卤素；
R6选自氢原子、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羟基或卤素；
R7为
Figure FDF0000014545330000012
其中，Z是羰基、O、S、亚胺基、磺酰基或
Figure FDF0000014545330000013
n＝0-4的整数；W和Y各自独立地是C、N、O或S，但W和Y不能同时是C，且当Z是O或S时，W是C；R10、R11、R12和R13各自独立地选自氢原子、C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基、C1-C6的羟基烷基、C1-C6的卤代烷基、C1-C6的烷氧基、羟基或卤素；
或者，R6和R7与其连接的C原子一起形成含一个或多个选自N、O或S的5-7元杂环，并且所述5-7元杂环被一个或多个选自C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基、C1-C6的卤代烷基、C1-C6的烷氧基、C1-C6的羟基烷基、羟基、卤素、氰基、-NH2、-NHR8、-NR8R9、
Figure FDF0000014545330000014
Figure FDF0000014545330000015
的取代基所取代；
其中，R8和R9各自独立地选自氢原子、C1-C6的烷基、C1-C6的羟基烷基。
2.根据权利要求1所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R1选自氢原子、未被取代的C1-C6的烃基或被一个或多个选自C1-C6的烃基、羟基或卤素的取代基取代的C1-C6的烃基，R2，R3各自独立地选自未被取代的C1-C6的烃基或被一个或多个选自C1-C6的烃基、羟基或卤素的取代基取代的C1-C6的烃基。
3.根据权利要求2所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R1选自氢原子、未被取代的C1-C6的直链或支链烷基、未被取代的C2-C4的直链或支链烯基，R2，R3各自独立地选自未被取代的C1-C6的直链或支链烷基、未被取代的C2-C4的直链或支链烯基。
4.根据权利要求3所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R1选自氢原子、未被取代的C1-C4的直链或支链烷基，R2，R3各自独立地选自未被取代的C1-C4的直链或支链烷基。
5.根据权利要求1所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R2和R3与共同连接的C原子一起形成饱和或不饱和的3-7元环。
6.根据权利要求5所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R2和R3与共同连接的C原子一起形成饱和的3-7元环。
7.根据权利要求1至6中任一项所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R4和R5各自独立地是氢、氟或氯，且R4和R5中至少一个是氟或氯。
8.根据权利要求7所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R4和R5各自独立地是氢或氟，且R4和R5中至少一个是氟。
9.根据权利要求8所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R4是氢或氟，R5是氟。
10.根据权利要求1至6、8至9中任一项所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R6选自氢原子或C1-C6的烷基。
11.根据权利要求7所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R6选自氢原子或C1-C6的烷基。
12.根据权利要求1至6、8至9或11中任一项所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，Z是羰基、O或
Figure FDF0000014545330000031
n＝0-4的整数。
13.根据权利要求7所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，Z是羰基、O或
Figure FDF0000014545330000032
n＝0-4的整数。
14.根据权利要求12所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，Z是
Figure FDF0000014545330000033
n＝0-2的整数。
15.根据权利要求13所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，Z是
Figure FDF0000014545330000034
n＝0-2的整数。
16.根据权利要求14或15所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，n＝0或1。
17.根据权利要求1至6、8至9或11中任一项所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，W和Y各自独立地选自C或N，但W和Y不能同时是C。
18.根据权利要求7所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，W和Y各自独立地选自C或N，但W和Y不能同时是C。
19.根据权利要求1至6、8至9、11中任一项所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R10、R11、R12和R13各自独立地选自氢原子、C1-C6的烷基、C1-C6的羟基烷基、C1-C6的卤代烷基或C1-C6的烷氧基。
20.根据权利要求7所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R10、R11、R12和R13各自独立地选自氢原子、C1-C6的烷基、C1-C6的羟基烷基、C1-C6的卤代烷基或C1-C6的烷氧基。
21.根据权利要求1至6、8至9或11中任一项所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R7选自如下结构的取代基：
Figure FDF0000014545330000041
Figure FDF0000014545330000042
其中，
R14和R15各自独立地选自氢原子、C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基、C1-C6的卤代烷基、C1-C6的羟基烷基、C1-C6的烷氧基或羟基，R16选自氢原子、C3-C6的环烷基、C1-C6的卤代烷基、C1-C6的羟基烷基、C1-C6的烷氧基或羟基。
22.根据权利要求7所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R7选自如下结构的取代基：
Figure FDF0000014545330000043
Figure FDF0000014545330000044
其中，
R14和R15各自独立地选自氢原子、C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基、C1-C6的卤代烷基、C1-C6的羟基烷基、C1-C6的烷氧基或羟基，R16选自氢原子、C3-C6的环烷基、C1-C6的卤代烷基、C1-C6的羟基烷基、C1-C6的烷氧基或羟基。
23.根据权利要求21所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R14和R15各自独立地选自氢原子、C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基、C1-C6的羟基烷基，R16选自氢原子、C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基或C1-C6的羟基烷基。
24.根据权利要求22所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R14和R15各自独立地选自氢原子、C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基、C1-C6的羟基烷基，R16选自氢原子、C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基或C1-C6的羟基烷基。
25.根据权利要求1至6、8至9中任一项所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R6和R7与其连接的C原子一起形成含一个或多个选自N、O或S的6元杂环。
26.根据权利要求7所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R6和R7与其连接的C原子一起形成含一个或多个选自N、O或S的6元杂环。
27.根据权利要求25所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R6和R7与其连接的C原子一起形成含一个N的6元杂环。
28.根据权利要求26所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R6和R7与其连接的C原子一起形成含一个N的6元杂环。
29.根据权利要求27或28所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R6和R7与其连接的C原子一起形成如下的化学结构：
Figure FDF0000014545330000051
其中R17选自羟基或C1-C3的烷氧基。
30.根据权利要求29所述结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，R17为羟基。
31.根据权利要求1至6、8至9、11、13至15、18、20或22至24、26至28、30中任一项所述的结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
32.根据权利要求7所述的结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
33.根据权利要求10所述的结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
34.根据权利要求12所述的结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
35.根据权利要求16所述的结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
36.根据权利要求17所述的结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
37.根据权利要求19所述的结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
38.根据权利要求21所述的结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
39.根据权利要求25所述的结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
40.根据权利要求29所述的结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
41.结构式II、III、IV或V所示的化合物或各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或所述结构式II、III、IV或V所示的化合物、各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，
Figure FDF0000014545330000071
其中，R1、R2和R3的定义如权利要求1至4中任一项所述，R4和R5的定义如权利要求1、7至9中任一项所述；R6定义如权利要求1、10至11中任一项所述；R10和R11的定义如权利要求1、12至20中任一项所述；R17的定义如权利要求29至30中任一项所述；Z、W和Y的定义如权利要求1、12至17中任一项所述；
A环为饱和的3-7元环。
42.根据权利要求41所述的结构式II、III、IV或V所示的化合物或各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或所述结构式II、III、IV或V所示的化合物、各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，A环为饱和3-6元环。
43.根据权利要求41或42所述结构式II、III、IV或V所示的化合物或各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或所述结构式II、III、IV或V所示的化合物、各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
44.一种结构式VIII所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或所述结构式VIII的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，
Figure FDF0000014545330000081
其中，R20、R21、R22各自独立地选自C1-C4的烷基，或者R20为C1-C4的烷基，R21和R22与其共同连接的C原子形成5-6元饱和环；R23选自氢或氟；n＝0或1；R24选自氢、C1-C4的烷基或C1-C4的羟基烷基，Q为C或N。
45.根据权利要求44所述的结构式VIII所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或所述结构式VIII的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
46.结构如下的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或所述化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，
Figure FDF0000014545330000082
Figure FDF0000014545330000091
47.根据权利要求46所述的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或所述化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
48.一种结构式VI所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、同位素标记物或其混合物形式，或所述结构式VI的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、同位素标记物、或其混合物的药学上可以接受的盐，
Figure FDF0000014545330000101
其中R1、R2和R3的定义如权利要求1至4中任一项所述；R4和R5的定义如权利要求1或7至9中任一项所述；X为离去基团或氨基。
49.根据权利要求48所述的结构式VI所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、同位素标记物或其混合物形式，或所述结构式VI的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、同位素标记物、或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，X是卤素或氨基。
50.根据权利要求49所述的结构式VI所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、同位素标记物或其混合物形式，或所述结构式VI的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、同位素标记物、或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，X是氟、溴、氯或氨基。
51.根据权利要求48至50中任一项所述的结构式VI所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或所述结构式VI的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
52.权利要求1所述的结构式I所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或结构式I的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐的制备方法，包括结构式VI和结构式VII所示的化合物在溶剂中，经钯催化偶联反应得到结构式I所示的化合物，
Figure FDF0000014545330000102
其中，R1、R2和R3的定义如权利要求1至4中任一项所述，R4和R5的定义如权利要求1或7至9中任一项所述；R6定义如权利要求1、10至11或25至30中任一项所述；R7的定义如权利要求1、12至30中任一项所述；X和M各自独立地为离去基团或氨基，X和M 中只能有一个且必须有一个为氨基。
53.根据权利要求52所述制备方法，其特征在于，所述离去基团为卤素。
54.根据权利要求53所述制备方法，其特征在于，所述离去基团为氟、溴或氯。
55.根据权利要求52至54任一项所述的制备方法，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
56.权利要求1至47中任一项所述的结构式I-V和VIII所示的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或所述结构式I-V和VIII的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐在制备用于治疗细胞增殖障碍性疾病的药物中的用途。
57.根据权利要求56所述用途，其特征在于，所述药物包括药学上可以接受的辅料。
58.根据权利要求56所述用途，其特征在于，所述细胞增殖障碍性疾病是指哺乳动物或人的癌症。
59.根据权利要求58所述用途，其特征在于，所述细胞增殖障碍性疾病是指恶性实体瘤和恶性非实体瘤；和/或
所述细胞增殖障碍性疾病选自艾滋病、动脉粥样硬化、血管支架植入后再狭窄中的一种或多种。
60.根据权利要求59所述用途，其特征在于，所述恶性实体瘤和恶性非实体瘤包括乳腺癌、肺癌、前列腺癌、白血病、脑癌、胃癌、胶质瘤。
61.根据权利要求56至60中任一项所述用途，其特征在于，上述用途是指所述结构式I-V和VIII所示的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或所述结构式I-V和VIII所示的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物的药学上可以接受的盐作为唯一活性成分或联合其它具有生物活性的物质在制备用于治疗细胞增殖障碍性疾病的药物中的用途。
62.根据权利要求61所述用途，其特征在于，所述其它具有生物活性的物质包括但不限于抗癌剂、免疫抑制剂和抗病毒剂；其中，所述抗癌剂选自环磷酰胺、异环磷酰胺、塞替派、司莫司汀、盐酸氮芥、白消安、苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、硝卡芥、氮甲、卡莫司汀、洛莫司汀、六甲蜜胺、二溴甘露醇、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、甲氨喋呤、羟基脲、替加氟、甲异靛、巯嘌呤、顺铂、卡铂、奥沙利铂、放线菌素D、丝裂霉素、阿霉素、平阳霉素、表柔比星、吡柔比星、柔红霉素、博来霉素、高三尖杉酯碱及其衍生物、长春新碱及其衍生物、羟喜树碱及其衍生物、依托泊苷及其衍生物、长春地辛及其衍生物、长春碱及其衍生物、重酒石酸长春瑞宾、紫杉醇及其衍生物、秋水仙碱及其衍生物、榄香烯及其衍生物、氨鲁米特、他莫昔芬、地塞米松、度他雄胺、氟他胺、戈那瑞林、醋酸亮丙瑞林、来曲唑、舒尼替尼、索拉非尼、伊马替尼、吉非替尼、埃罗替尼、凡德替尼、帕唑帕尼、拉帕替尼、卡奈替尼、阿法替尼、木利替尼、达沙替尼、来那替尼、替莫唑胺、曲妥单抗、帕妥珠单抗、利妥昔单抗、帕尼单抗、贝伐单抗、伊匹单抗、奥法木单抗、雷莫卢单抗、依维莫司、西罗莫司和佐他莫司中的一种或多种。
63.根据权利要求56至60、62中任一项所述的用途，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
64.根据权利要求61所述的用途，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
65.一种用于治疗细胞增殖障碍性疾病的组合产品，其特征在于，所述组合产品包括选自如权利要求1至47中任一项所述的结构式I-V、VIII所示的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，结构式I-V、VIII所示的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式的药学上可以接受的盐中的一种或多种。
66.根据权利要求65所述的用于治疗细胞增殖障碍性疾病的组合产品，其特征在于，所述组合产品还包括药学可以接受的辅料；和/或
所述组合产品为试剂盒。
67.根据权利要求65或66所述的用于治疗细胞增殖障碍性疾病的组合产品，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
68.一种用于治疗细胞增殖障碍性疾病的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或所述化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述化合物的结构式选自如权利要求1至47中任一项所述的结构式I-V和VIII中的一种或多种。
69.根据权利要求68所述的用于治疗细胞增殖障碍性疾病的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或所述化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述细胞增殖障碍性疾病是指哺乳动物或人的癌症。
70.根据权利要求69所述的用于治疗细胞增殖障碍性疾病的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或所述化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述细胞增殖障碍性疾病是指恶性实体瘤和恶性非实体瘤。
71.根据权利要求70所述的用于治疗细胞增殖障碍性疾病的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或所述化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述恶性实体瘤和恶性非实体瘤乳腺癌、肺癌、前列腺癌、白血病、脑癌、胶质瘤和胃癌；和/或
所述细胞增殖障碍性疾病选自艾滋病、动脉粥样硬化和血管支架植入后再狭窄中的一种或多种。
72.根据权利要求68至71中任一项所述的用于治疗细胞增殖障碍性疾病的化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式，或所述化合物或其各自的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，同位素标记物或其混合物形式的药学上可以接受的盐，其特征在于，所述同位素标记物为氘代化合物。
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