CN107988252B

CN107988252B - bHLH73蛋白在调控植物株高中的应用

Info

Publication number: CN107988252B
Application number: CN201810059520.8A
Authority: CN
Inventors: 周奕华; 张保才; 王少干
Original assignee: Institute of Genetics and Developmental Biology of CAS
Current assignee: Institute of Genetics and Developmental Biology of CAS
Priority date: 2018-01-22
Filing date: 2018-01-22
Publication date: 2020-05-26
Anticipated expiration: 2038-01-22
Also published as: CN107988252A

Abstract

本发明公开了一种培育株高降低的植物的方法，包括如下步骤：抑制出发植物中bHLH73基因的表达，从而使植物的株高降低；所述bHLH73基因为编码bHLH73蛋白的核酸；所述bHLH73蛋白为序列表的序列1所示的蛋白质。本发明中发现并证实了，通过CRISPR/Cas9技术敲除bHLH73基因的部分区段后，水稻成株株高显著降低，因此本发明可用于增加水稻抗倒伏性，培育矮杆水稻品种，将在水稻育种工作中发挥重大作用，有助于提高稻米产量和品质，具有重要经济价值。

Description

bHLH73蛋白在调控植物株高中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及bHLH73蛋白在调控植物株高中的应用。

背景技术

株高是水稻重要的农艺性状之一。适度的降低水稻株高有利于耐密、耐肥、增强抗倒伏性，提高收获指数。20世纪60年代，育种专家通过半矮杆和矮杆基因的应用，大幅地降低了水稻的株高，开始了第一次“绿色革命”，即水稻矮化育种。大量水稻矮化品种在农业生产上的成功应用，使水稻的产量得到显著提高，保障了粮食安全。

茎秆是水稻重要的器官，它连接根部和穗部，不仅沟通地上部与地下部、叶片与穗部的物质交流，还支撑水稻植株的直立生长，也对水稻的株高形成起着至关重要的作用。茎秆的发生起源于顶端分生组织，当顶端分生组织的发育从营养生长阶段向生殖生长阶段转变时，茎秆起始发育并逐渐伸长，随着发育进程的推进，茎秆不断延伸，直至成熟。居间分生组织在水稻茎秆发育过程中发挥着独特的作用。成熟期的水稻茎秆最上端的第四节或第五节间最初与底端未伸长的节间在细胞结构上是一致的，当顶端分生组织的发育向生殖生长阶段转变时，居间分生组织同步响应了这种发育转变信号，促使茎秆不同节间的细胞开始产生差异性的分化，并以不同的速率伸长，最终完成水稻茎秆的形态建成并确定水稻的株高性状。

大量的研究已经鉴定出很多通过影响水稻茎秆正常伸长发育来调控水稻株高性状的基因，并对这些基因编码的蛋白产物进行了相关的功能研究。虽然目前有大量的矮杆或半矮秆基因被注册，但大多数基因的突变体往往因过度矮化导致生长发育生产的其它问题，在农业生产的实际应用中存在明显的局限性。因此，进一步发掘和利用更多具有理想农艺性状的矮秆或半矮杆基因资源对于水稻株高性状的遗传改良以及培育更多可以在农业生产上广泛应用的水稻矮化品种将具有重要的理论和实际生产意义。

发明内容

本发明的目的是提供bHLH73蛋白在调控植物株高中的应用。

本发明保护一种培育株高降低的植物的方法，包括如下步骤：抑制出发植物中bHLH73基因的表达，从而使植物的株高降低；

所述bHLH73基因为编码bHLH73蛋白的核酸；

所述bHLH73蛋白为如下(a1)或(a2)或(a3)：

(a1)序列表的序列1所示的蛋白质；

(a2)将(a1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；

(a3)来源于水稻且与(a1)具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有相同功能的蛋白质。

所述bHLH73基因为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)：

(b1)编码区如序列表的序列2所示的DNA分子；

(b2)序列表的序列3所示的DNA分子；

(b3)在严格条件下与(b1)或(b2)限定的DNA分子杂交且编码所述bHLH73蛋白的DNA分子；

(b4)来源于水稻且与(b1)或(b2)具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码所述bHLH73蛋白的DNA分子。

上述严格条件可为用6×SSC，0.5％SDS的溶液，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

“抑制出发植物中bHLH73基因的表达”是通过敲除全长bHLH73基因或敲除bHLH73基因的部分区段实现的。所述部分区段具体可如序列表的序列8所示。

“抑制出发植物中bHLH73基因的表达”是通过CRISPR/Cas9技术实现的。CRISPR/Cas9技术中具体采用两个sgRNA,即OsU3-sgRNA和OsU6a-sgRNA；OsU3-sgRNA的靶序列如序列表的序列4所示；OsU6a-sgRNA的靶序列如序列表的序列5所示。OsU3-sgRNA如序列表的序列9所示。OsU6a-sgRNA如序列表的序列10所示。

“抑制出发植物中bHLH73基因的表达”是通过导入干扰载体实现的；所述干扰载体表达CAS9mRNA、OsU3-sgRNA和OsU6a-sgRNA；OsU3-sgRNA的靶序列如序列表的序列4所示；OsU6a-sgRNA的靶序列如序列表的序列5所示。OsU3-sgRNA如序列表的序列9所示。OsU6a-sgRNA如序列表的序列10所示。所述干扰载体具体可为在pYLCRISPR/Cas9Pubi-H质粒的多克隆位点(例如MluⅠ酶切位点)插入序列表的序列6所示的双链DNA分子得到的重组质粒。

本发明还保护所述的bHLH73基因作为被沉默的靶点，在培育株高降低的植物中的应用。

本发明还保护用于抑制所述bHLH73基因的表达的物质，在培育株高降低的植物中的应用。抑制所述bHLH73基因的表达的物质可为通过CRISPR/Cas9技术抑制所述bHLH73基因的表达的物质。CRISPR/Cas9技术中具体采用两个sgRNA,即OsU3-sgRNA和OsU6a-sgRNA；OsU3-sgRNA的靶序列如序列表的序列4所示；OsU6a-sgRNA的靶序列如序列表的序列5所示。OsU3-sgRNA如序列表的序列9所示。OsU6a-sgRNA如序列表的序列10所示。抑制所述bHLH73基因的表达的物质可为干扰载体。所述干扰载体表达CAS9mRNA、OsU3-sgRNA和OsU6a-sgRNA；OsU3-sgRNA的靶序列如序列表的序列4所示；OsU6a-sgRNA的靶序列如序列表的序列5所示。OsU3-sgRNA如序列表的序列9所示。OsU6a-sgRNA如序列表的序列10所示。所述干扰载体具体可为在pYLCRISPR/Cas9Pubi-H质粒的多克隆位点(例如MluⅠ酶切位点)插入序列表的序列6所示的双链DNA分子得到的重组质粒。

本发明还保护一种培育株高降低的植物的方法，包括如下步骤：降低植物中所述bHLH73蛋白的含量和/或抑制植物中所述bHLH73蛋白的活性，从而使植物的株高降低。

本发明还保护所述bHLH73蛋白的应用，为如下(c1)或(c2)或(c3)：

(c1)调控植物株高；

(c2)促进植物株高；

(c3)作为被抑制的靶点培育株高降低的植物。

本发明还保护用于降低植物中所述bHLH73蛋白的含量和/或抑制植物中所述bHLH73蛋白的活性的物质，在培育株高降低的植物中的应用。

株高降低有利于抗倒伏，因此本发明可用于培育抗倒伏材料。

以上任一所述植物，可为单子叶植物或双子叶植物。进一步，所述单子叶植物可为禾本科植物。更加具体的，所述禾本科植物为水稻。更加具体的，所述水稻为粳稻，例如日本晴。

本发明中发现并证实了，通过CRISPR/Cas9技术敲除bHLH73基因的部分区段后，水稻成株株高显著降低，因此本发明可用于增加水稻抗倒伏性，培育矮杆水稻品种，将在水稻育种工作中发挥重大作用，有助于提高稻米产量和品质，具有重要经济价值。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

从水稻(Oryza sativa L.)中发现一个新蛋白，命名为bHLH73蛋白，如序列表的序列1所示。将编码bHLH73蛋白的基因命名为bHLH73基因，cDNA中的开放阅读框如序列表的序列2所示，基因组中的基因序列如序列表的序列3所示(序列3中，第1-303位核苷酸为5'-UTR区，第7085-7704位核苷酸为3'-UTR区)。

pYLCRISPR/Cas9Pubi-H质粒，记载于“Ma X,Zhang Q,Zhu Q,Liu W,Chen Y,QiuR,Wang B,YangZ,Li H,Lin Y,Xie Y,Shen R,Chen S,Wang Z,Chen Y,Guo J,Chen L,ZhaoX,Dong Z,Liu Y.A robust CRISPR/Cas9systemfor convenient,high-efficiencymultiplex genome editing inmonocot and dicot plants.Molecular Plant,2015,8:1274–1284”一文，公众可从申请人处获得，仅可用于重复本发明实验使用。公众也可通过商购途径获得该质粒。

农杆菌EHA105：CAMIA公司，澳大利亚。

日本晴(Nipponbare)全称为水稻日本晴，属于粳稻品种：中国水稻所。

实施例、通过抑制bHLH73基因表达实现植株株高降低

一、CRISPR-Cas9基因敲除载体的构建

在bHLH73基因中筛选靶序列，经过特异性比较，确定两个靶序列：靶序列OsU3和靶序列OsU6a。

靶序列OsU3(序列表的序列4)：5’-GGAGAATTCCAGAGCTCCC-3’。

靶序列OsU6a(序列表的序列5)：5’-CGGCCATGAGAGCAGCATGC-3’。

将序列表的序列6所示的双链DNA分子插入pYLCRISPR/Cas9Pubi-H质粒的MluⅠ酶切位点，得到重组质粒pYLCRISPR/Cas9P_ubi-H-bHLH73。

序列表的序列6中：第1-383位核苷酸为启动子，第384-483位核苷酸为OsU3-sgRNA的编码序列(OsU3-sgRNA如序列表的序列9所示)，第535-981位核苷酸为启动子，第982-1082位核苷酸为OsU6a-sgRNA的编码序列(OsU6a-sgRNA如序列表的序列10所示)。

二、创制bhlh73突变体

1、将重组质粒pYLCRISPR/Cas9P_ubi-H-bHLH73导入农杆菌EHA105，得到重组农杆菌。

2、采用步骤1得到的重组农杆菌，以日本晴未成熟胚愈伤组织为转化受体，进行遗传转化，得到再生植株。

3、通过分子鉴定从步骤2得到的再生植株中筛选水稻bhlh73突变体。

(1)取叶片，提取基因组DNA。

(2)以步骤(1)得到的基因组DNA为模板，采用bHLH73-CAS9-F和bHLH73-CAS9-R组成的引物对进行PCR扩增，PCR扩增产物进行电泳，然后回收特异条带并测序。将日本晴的基因组DNA作为对照。

bHLH73-CAS9-F：5’-TTTAAGATTGACCTGAGATTT-3’；

bHLH73-CAS9-R：5’-ATAGTTTAATTTACATGGATGTG-3’。

日本晴基因组DNA的PCR扩增产物只有一种，为654bp，如序列表的序列3第127-780位核苷酸所示。

一株再生植株的基因组DNA的PCR扩增产物只有一种，为374bp，如序列表的序列7所示，将该植株命名为bhlh73突变体。经全基因组测序，与日本晴的全基因组相比，bhlh73突变体的全基因组的差异仅在于纯合型缺失了序列表的序列8所示的DNA分子。该缺失发生于bHLH73基因中并引起移码，翻译提前终止，不能形成全长bHLH73蛋白。

bhlh73突变体自交，得到的后代为T1代植株，T1代植株自交得到的后代为T2代植株。

三、创制转转空载体对照

用pYLCRISPR/Cas9Pubi-H质粒代替重组质粒pYLCRISPR/Cas9P_ubi-H-bHLH73，按照步骤二进行操作，得到转空载体植株。

四、株高表型

在平行条件下种植日本晴(10株)、转空载体植株的T2代植株(10株)和bhlh73突变体的T2代植株(10株)，持续观察表型。植株发育至成株期的时间无显著差异，日本晴的平均成株株高为98.77cm，转空载体植株的T2代植株的平均成株株高为98.21cm，bhlh73突变体的T2代植株的平均成株株高为75.26cm。结果表明，与野生植株以及转空载体植株相比，bhlh73突变体植株矮化，且该矮化程度适宜，未出现过度矮化。

按照步骤二、三和四进行重复多次操作，获得多种纯合型缺失突变体，其T2代植株的株高均与bhlh73突变体的T2代植株的株高无显著差异。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国科学院遗传与发育生物学研究所

<120> bHLH73蛋白在调控植物株高中的应用

<130> GNCYX180259

<160> 10

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 415

<212> PRT

<213> Oryza sativa L.

<400> 1

Met Asn Arg Gly Glu Phe Gln Ser Ser Leu Val Gln Gln Met Ile Trp

1 5 10 15

Ser Gly Ser Ser Thr Gly Thr Ala Thr Gly Val Gly Ser Gly Gly Gly

20 25 30

Ala Gly Ser Leu Met Gly Ser Leu Lys Pro Cys His Glu Asp Gln Glu

35 40 45

Ala Ser Pro Asn Met Pro Ser Leu Ser Ser Pro Ser Leu Ile Phe Ser

50 55 60

Gln Gln Phe Gln His Ser Ser Pro Gly Leu Val Pro Met Asn Gly Thr

65 70 75 80

Ala Gly Ala Ala Ala Ser Leu Pro Ser Leu His Asp Gly Gly Gly Gly

85 90 95

Gly His Glu Ser Ser Met Pro Glu Ser Trp Ser Gln Leu Leu Leu Gly

100 105 110

Gly Leu Ala Gly Asp Gln Glu Arg Tyr Ser Ala Thr Ala Ala Leu Leu

115 120 125

Ser Lys Gly Leu Glu Asn Trp Gly Asp His Ala Ala Ala Ala Ala Ala

130 135 140

Ser Ala Cys Met Val Gly Gly Met Lys Glu Glu Gly Ser Met Ala Gln

145 150 155 160

Ala Ala Ala Thr Ala Ala Ala Ala Ala Tyr Ser Phe Tyr Gly Ser His

165 170 175

Leu Ala Gly Asp His Gln His Glu Ile Gln Ala Ala Ala Ala Gly Gly

180 185 190

Gly Ala Ser Asn Lys Ser Gln Leu Ser Gln Met Leu Met Ala Ser Ser

195 200 205

Pro Arg Ser Cys Ile Thr Thr Ser Leu Gly Ser Asn Met Leu Asp Phe

210 215 220

Ser Asn Thr Ala Ala Pro Pro Glu Leu Arg Ser His His His Asn Ser

225 230 235 240

Asp Asn Ser Ser Glu Cys Asn Ser Thr Ala Thr Gly Ser Ala Leu Lys

245 250 255

Lys Ala Arg Val Gln Ala Ser Ser Ser Ala Gln Ser Thr Leu Lys Val

260 265 270

Arg Lys Glu Arg Leu Gly Asp Arg Ile Thr Ala Leu His Gln Ile Val

275 280 285

Ser Pro Phe Gly Lys Thr Asp Thr Ala Ser Val Leu Gln Glu Thr Ile

290 295 300

Gly Tyr Ile Arg Phe Leu Leu Ser Gln Ile Glu Ala Leu Ser Tyr Pro

305 310 315 320

Tyr Met Gly Asp Ala Asn Gly Thr Gly Pro Met Gln Asn Gly Pro Val

325 330 335

Gly Glu Arg Asn Pro Gly Leu Phe Pro Glu Tyr Pro Gly Gln Leu Leu

340 345 350

Asn His Asn Gly Asn Thr Gly Ala Gln Gln Pro Ala Ala Gln Pro Glu

355 360 365

Gln Gln Gly Ala Asn Asp Asp Gly Lys Lys Asp Leu Arg Ser Arg Gly

370 375 380

Leu Cys Leu Val Pro Val Ser Cys Thr Ser His Phe Gly Gly Asp Asn

385 390 395 400

Ala Ala Asp Tyr Trp Ala Pro Ala Pro Leu Gly Gly Ile Leu Arg

405 410 415

<210> 2

<211> 1248

<212> DNA

<213> Oryza sativa L.

<400> 2

atgaatagag gagaattcca gagctccctg gtgcagcaga tgatctggag cggcagtagt 60

acaggcacgg ctaccggcgt cggcagcggc ggcggcgccg gcagtttgat gggcagcttg 120

aagccatgcc atgaggatca agaggcctct cctaacatgc cctccttgtc ttctccatcg 180

ttgatcttct cgcagcagtt tcagcacagc tctccaggtc tagttccgat gaacggcacc 240

gccggcgccg ccgcttctct tccgagcttg cacgacggcg gcggcggcgg ccatgagagc 300

agcatgccgg agtcatggag ccaactgctt cttgggggat tagctggaga tcaggagagg 360

tacagcgcca ctgcggctct cctgtcaaag ggattagaga attggggaga tcacgctgct 420

gcagctgcag ccagtgcatg catggttggt ggcatgaagg aggagggctc catggctcaa 480

gctgcagcca ctgctgctgc tgctgcttac agcttctatg ggagccacct tgctggtgat 540

catcagcatg agatccaagc agcagcagca ggaggaggtg ctagcaacaa gtctcagctg 600

agccagatgc tcatggcttc ctctcctagg tcatgcatca ccaccagcct cggcagcaac 660

atgctcgact tctccaacac cgcggcgccg ccggagctcc ggagccacca ccacaactcc 720

gataattcat cagagtgtaa cagcacagcg actggttcgg ccctcaagaa ggctagggtt 780

caggcctcct cttcagcaca atctactcta aaggtgagga aggagaggct aggggataga 840

ataactgcac ttcatcagat tgtatcccca tttggcaaga ctgacacagc gtctgtactg 900

caagagacca ttggctatat cagattcctc ctgagtcaaa ttgaggctct gagctaccct 960

tacatgggcg acgccaacgg gaccggtcct atgcaaaatg gaccagttgg agaaaggaac 1020

cctggcctct tcccggaata ccctggccag ttgctaaacc ataatggcaa cactggagca 1080

cagcagcctg cagcccaacc tgagcagcag ggagcaaacg acgatggaaa gaaggacctg 1140

aggagccggg ggctgtgcct cgttccagtg tcgtgcacgt cgcactttgg aggggacaat 1200

gccgctgact actgggcccc ggcgccgctc ggcgggatcc tacggtag 1248

<210> 3

<211> 7704

<212> DNA

<213> Oryza sativa L.

<400> 3

aggccctatg ctttttcttc ttcttcttct tcttctccat ctctcctctc ctgtttcttt 60

cttctctcct tgttgttgca gctgtcctct ctctctcctc aaagagaaaa ttaagccact 120

ggccccttta agattgacct gagatttcca gtacacaagt tgtgtgcatg caaagagagg 180

ccaaagctaa gctagcaaaa cacacattcc tttcccacag ctagcttagc ttgaagcaag 240

caagaactca tcatctttgt ttctacatat cctttaatac tctcctctct gtcactagca 300

gtgatgaata gaggagaatt ccagagctcc ctggtgcagc agatgatctg gagcggcagt 360

agtacaggca cggctaccgg cgtcggcagc ggcggcggcg ccggcagttt gatgggcagc 420

ttgaagccat gccatgagga tcaagaggcc tctcctaaca tgccctcctt gtcttctcca 480

tcgttgatct tctcgcagca gtttcagcac agctctccag gtctagttcc gatgaacggc 540

accgccggcg ccgccgcttc tcttccgagc ttgcacgacg gcggcggcgg cggccatgag 600

agcagcatgc cggagtcatg gagccaactg cttctgtaaa cacctctctc cttctcttct 660

ctccttatct atctctattt tctatattca gttcatggcc tcctgatcat gttcaagcag 720

ggagagagag attcaaataa gaaacaagcc agccatgcac atccatgtaa attaaactat 780

agttaaacag catacttaag tgtagctcta gggagaagga ataaagtggt taacccactt 840

tgtcctatag tagatcaagc ctttcctaat gttcttctcc ttttctgcta acccatcatc 900

agagagatat atacaagcat gtgttcatgc tactaactct gctgcagttg tttccatctc 960

catggactca tgttcttgtg ctcatctgtg tgtgtgctcc ttgtgcaaac aaagctaatt 1020

aactgcactt ttttttgcat gcaatcaaaa cagtggggga ttagctggag atcaggagag 1080

gtacagcgcc actgcggctc tcctgtcaaa gggattagag aattggggag atcacgctgc 1140

tgcagctgca gccagtgcat gcatggttgg tggcatgaag gaggagggct ccatggctca 1200

agctgcagcc actgctgctg ctgctgctta cagcttctat gggagccacc ttgctggtga 1260

tcatcagcat gagatccaag cagcagcagc aggaggaggt gctagcaaca agtctcagct 1320

gagccagatg ctcatggctt cctctcctag gtcatgcatc accaccagcc tcggcagcaa 1380

catgctcgac ttctccaaca ccgcggcgcc gccggagctc cggagccacc accacaactc 1440

cgataattca tcagaggtaa gattgtaatt tgatcttggt gtgtgtagat cattagctct 1500

caagtagtat tggtcttgca tcttgttctc ttttgctttg tcattttcca aaattttttt 1560

tagataaatg tttggcattt tttatggctt gtttcaatta tacatgcata tgcatacata 1620

aggcaggatg cactgtaggt ctagaggcca gagatatgta ttcttcatat tctattttct 1680

tttaaaaaaa atagctacat ggaatgcaat ggattaccag gtgtatccaa aatgagaatt 1740

ttacgtgttt gacagatctt taggtttttc atcgagtata taagctatgt tcatcccctc 1800

tttgaaaagt tgcagtttcc aaagcatact tctcttcctc atactgctac acatgtttgg 1860

tggaaaagtt ataagtttga tcatgttctc cctaatgatc ctctaggcca aggcttttac 1920

gggctgtcaa tactcaatta atacaatctc ttggcaatgg tgcattctgt cctccatagt 1980

tccacgaatt gaaagtgtgc tattattatt atttatttcc atgaaaaagg tacatgtttt 2040

catgtcccat gggaaatcca ctctggtcaa agttaccact tgatgttttg catagcatgt 2100

tcttttcatg atatcttggt aagagtgttg gtcatgtata cagtatccat tgacagagct 2160

agcttaacat gagatcttta atttggtcat actcttagcc ttgttcttct ttatggctaa 2220

ctgctgtagt agtacatgag aggtcagtga atgtttagat gtagaatcac tggggagaga 2280

attcacttta gagagggtag agagatgtgt gtttttttct tcttcttctt ctcgggacaa 2340

gatgaaattg gggtcatgat tattcacgct ttgcctttct ttgtctttct ctagtgtaac 2400

agcacagcga ctggttcggc cctcaagaag gctagggttc aggcctcctc ttcagcacaa 2460

tctactctaa aggtttcttc ctcatcatcc tccctgcttt ccatggcaca caagccccat 2520

ccctctctct ctctctctct gcacgcacgc ataaagtgtg cttactttgg aagttcgtgc 2580

acagaaaatc acaacatttg gcagtagttt ccatttggaa tatcttggat tatgtagtat 2640

atatgttaac ataatcctta cattaggagg tttcttaggt gtgataattt gttttcaggt 2700

gaggaaggag aggctagggg atagaataac tgcacttcat cagattgtat ccccatttgg 2760

caaggtaaca aaaagacatg aaacttcagt taaccgcttt catggttaat tttagagatt 2820

agtaataagc tagcaacaat cagttgcatt atatatatat aagtatagag ggagatggat 2880

tacatcaaga tctgaatgtg ttgtcatgca cagtatgcaa ataggctatg gatgacttag 2940

aatagtttta ttcatatgtt gatgatgtta catgcaatta tctatagttt gtgccatgcc 3000

atgcatcgag ccagtagcaa ggtaagagta gctcctttat ttctttgttg ctggttttca 3060

ctcgaggggt tgtgtccaag taaagtaaat ctctgacaca cgtgcctcct tttacagact 3120

gacacagcgt ctgtactgca agagaccatt ggctatatca gattcctcct gagtcaaatt 3180

gaggtccaat ctctctctct cactttctat agctctgtct gcgtgtgtgc gtgtgtgttt 3240

aatttagagg gtgaaaaaaa atacttcccg ttatttttat caagttccta attataaata 3300

gatatattct aaaatggaga gagtgtgatc aatcttcttt gtaatgggca tatatattgc 3360

ataccccatc cgtccaagaa aaaactcaat tctagctacg aatctggata tatgtgggtt 3420

tgtctttttt tttaagacag aagagtagta tatgtatggg acattgagat ggaataagta 3480

tgggtgaaca gggaatattt gcactgcagg cagttgcagc attgtgccag tctcttcagc 3540

tactctagct gtttcagcca cagtaacatt tttccaagga aaaaaagaaa agaaacttct 3600

gcctctgcaa agtggggccc acagaggagt gtccccacaa gtaagggaca gtagtcgtag 3660

aggaggtaca tgtgatactg gcacacagtg cgggcgggaa acgaaaagat gggagagaat 3720

atgcatgcaa aatgggggcg gggccgggct aggtctgagc gggagcgcac gctgttaaag 3780

ttagctgcac ggcgagagat ggctcatggt catggctgtg cgtgcatggg cttcagcagc 3840

tgcatctgca tctgcatctg cggctgcagc gagatcgatt gatggagatg tcgttttagc 3900

caagtgcaat gtcgttgtta tctagttctt cgtctcgtag tgatgggaga ccggttaaat 3960

aggtattggt tttaaataaa tcgacaccta taagtcgata cctattaggt gttttgtact 4020

ccctctgttt tttaatagat gacgctgttg actttttctc acatgtttga ctattcgtct 4080

tactaaaaaa aattacgtaa ttgtaattta ttttgttatg agttatttta tcactcatag 4140

tactttaagt gtgatttatt aaaaaacgga ggtagtagta gtgttctatg tctcaaaatt 4200

tatagtattt gaatgtgtca catccggtat tagattgatt ttttataaaa tagagtagtt 4260

gttttatgtg tttcagagac cagtagagga ttgactctct ctctctctct gctcttctag 4320

ctttctacat ctcttgccct cttttttcta actaaaatgt aggttttacc tcggtatccg 4380

tctgaatgtt tttaaaattg ctaaaccgtg tatttcgtgt gaacaatttt tataaataag 4440

ttgctttaaa atattagata aatcttttct ttttttcaaa attgtaatga ttaaaactca 4500

attaaccgct aataattttc tagttgttca tgccctagct ctatatttat cttcttaaaa 4560

aaacaaacat atgtctctct tgatgaccat aggatgttgt ttcttgtgtg tgcaggctct 4620

gagctaccct tacatgggcg acgccaacgg gaccggtcct atgcaaaatg taagttcgtt 4680

gttgcatctc tctctctctc tctctctctc tttctctcat atttacgcac gtagtataag 4740

gctatatatg agcacaaaga ggaaaggagt atctatatac gagcgagaag atgccctaca 4800

cacgtgcagg ggtgccgtgc aacgcgaact taggctagct ttgccttggc tttgtagatc 4860

catactatca taggtgaaca aaactcttta tcaaaggcat tctaaaaaaa accctttcat 4920

caaaggttag gctgagtagg atcatccttt tggtgacctt tggggccaaa ggctttagat 4980

cttttataaa tctttatact acgtgcatga cggcaagctc tgttctgaaa acaaatatat 5040

ataacctcca tgaatttatg tgcgaatcca gaaaatattt tcatgtttgc aaatccatgc 5100

atagttgcac gtgttttttt ttcatggaat ggaagaaaaa tttccttaaa aattggggca 5160

tttgattaga tatatataag aaatagtaac tcaaaaaatt taaaacaagt gagtatgtcc 5220

tgatgattta tatgtttaga ataatagatc tgaataacct cccaaattaa ttaattttgt 5280

atatgccact gaataactac atgtccttta tacatgcatg aaactcctgc catcaatggc 5340

atattgttca gacaatgagg gttactactg catatataca atatgtatag ctatgatata 5400

tataattttt ttaaagctta gcatgcttaa ggcatcaaat cgactagaac atattagccg 5460

ctaaaaacca attaatataa atgcactctt gtagatgtat aaattttgtg tttctaaagc 5520

aaagaaaagt ttaacatgcc aattttttct gtctgtaaat ctatttttgt atagtataac 5580

tatattataa tttattttct gtgttaaatt tttattctgc acataaaatg ttcatatcta 5640

tttgcgtaaa actatatcgg ttatatatta tacattttta ttacccgtgg agaagggaca 5700

taaaccagta gttttcaatt tttttaaagc atggaataaa ttatcgatga aaagtctaca 5760

atgttggata tcaagaaaat taagacccta cttaagagtt taaatttctc ataaactgat 5820

tgaaaaatat tcaagaaaaa ttataccttg tgtccatatt tattttcaaa aaaaaattta 5880

tagctactaa atccacttta ctatctcata tattaaatta atcataggtt tatataaaaa 5940

agtattcctg tacaaaaagg tttcacgcaa tatatcacct cgcaagattt caacttaaaa 6000

tataacttat ataaggagaa taaaaaaaga ggaatgccat ttgcaattaa gtaaagtgtc 6060

ttagttcagt agttcaagtg aagcagcaaa atagttcatc gtagtaaaat tgacttctcc 6120

attttaaaac tttcaaacag cttagtacaa gattaattgt gtcatcatca catgagagaa 6180

aaaaaaaacc catgcaaagt acacagacat ggataagata gatattacca ccataacgtt 6240

cttagtttag ttgacattgg ccatatgcat ctgagacaac catgggccag tacaactcat 6300

gggttcaatc attttaccac acccaaaaaa atattctccc ctcagctttt ttgcacgctt 6360

gtacgtgcaa cgttgacatg tgacacagtt actttccttt tgattttata gggaccagtt 6420

ggagaaagga accctggcct cttcccggaa taccctggcc aggttagtgt agatctgtac 6480

atgcacatga ttattaattc ttatagatat aagaatataa tctatctata tagatattcc 6540

tttccagctc caagccactt ttttccttat atcttttttg tttgtgtgtg gttccttgtg 6600

cagttgctaa accataatgg caacactgga gcacagcagc ctgcagccca acctgagcag 6660

caggtatgta tgctctttgc ttagcttcaa agccattttc acaatgatgt atatacatga 6720

gtactgtgtc gactagagtg catggcatgt tgttatatat aagttttcaa gggcaaaatt 6780

aataccatac tcatatgttt ctttttccct ttttttcact aaaagcacct acatatagtt 6840

actatatata ctgataatag ttgcgaaaat taacatgcat gttactagct cctatatgta 6900

tttttttctg tataataatt tcatggcatt tgataattgt tattagggag caaacgacga 6960

tggaaagaag gacctgagga gccgggggct gtgcctcgtt ccagtgtcgt gcacgtcgca 7020

ctttggaggg gacaatgccg ctgactactg ggccccggcg ccgctcggcg ggatcctacg 7080

gtagaatgca tcgttgagat tcgtgcatac aaagcgtggc ggcacagcga gtactatatg 7140

ttgatgcatg aggaggctac agacgaaata ggtctcttaa gaatggagaa cagagtgtgc 7200

attgggtgca ggagtaacgt cgtcataaca tcatgagcag tcattctctg gtaagaaaaa 7260

aaattacctg taaggttgat tgctcttgat gctatgggag tgagaggtag ctagctatag 7320

tataattaat taagcttctg gatctgcaaa ttaagaagct tcagttcaag aaggagacct 7380

tgcaaaagtt gatgccccct ttgatatgta tatgtaaaat ctagcaagtc agtgaacact 7440

ttgctcatac taccgtgctt tgatttatca tcagaagcag aaaagcttgc gcggtagtgt 7500

caatattccg tcagttgctc ggctggtgta tgtaggaaat taaagttgat atcccatatc 7560

acatatatgt atattgacag ttaatttgta tcagttattt actgagttaa gtcagcaata 7620

ttatttgtct tcgatgttgc tgaattattt gtgtgcatct atatatggat tttctgtatg 7680

tcaatcgaca ggaaattagg ggac 7704

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> Oryza sativa L.

<400> 4

ggagaattcc agagctccc 19

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> Oryza sativa L.

<400> 5

cggccatgag agcagcatgc 20

<210> 6

<211> 1104

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400> 6

aaggaatctt taaacatacg aacagatcac ttaaagttct tctgaagcaa cttaaagtta 60

tcaggcatgc atggatcttg gaggaatcag atgtgcagtc agggaccata gcacaagaca 120

ggcgtcttct actggtgcta ccagcaaatg ctggaagccg ggaacactgg gtacgttgga 180

aaccacgtgt gatgtgaagg agtaagataa actgtaggag aaaagcattt cgtagtgggc 240

catgaagcct ttcaggacat gtattgcagt atgggccggc ccattacgca attggacgac 300

aacaaagact agtattagta ccacctcggc tatccacata gatcaaagct ggtttaaaag 360

agttgtgcag atgatccgtg gcaggagaat tccagagctc ccgttttaga gctagaaata 420

gcaagttaaa ataaggctag tccgttatca acttgaaaaa gtggcaccga gtcggtgctt 480

tttttcaaga gcttggagtg gatggaccct gacactggaa tcggcagcaa aggatttttt 540

cctgtagttt tcccacaacc attttttacc atccgaatga taggatagga aaaatatcca 600

agtgaacagt attcctataa aattcccgta aaaagcctgc aatccgaatg agccctgaag 660

tctgaactag ccggtcacct gtacaggcta tcgagatgcc atacaagaga cggtagtagg 720

aactaggaag acgatggttg attcgtcagg cgaaatcgtc gtcctgcagt cgcatctatg 780

ggcctggacg gaatagggga aaaagttggc cggataggag ggaaaggccc aggtgcttac 840

gtgcgaggta ggcctgggct ctcagcactt cgattcgttg gcaccggggt aggatgcaat 900

agagagcaac gtttagtacc acctcgctta gctagagcaa actggactgc cttatatgcg 960

cgggtgctgg cttggctgcc gcggccatga gagcagcatg cgttttagag ctagaaatag 1020

caagttaaaa taaggctagt ccgttatcaa cttgaaaaag tggcaccgag tcggtgcttt 1080

ttttcaagag cttggagtgg atgg 1104

<210> 7

<211> 374

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400> 7

tttaagattg acctgagatt tccagtacac aagttgtgtg catgcaaaga gaggccaaag 60

ctaagctagc aaaacacaca ttcctttccc acagctagct tagcttgaag caagcaagaa 120

ctcatcatct ttgtttctac atatccttta atactctcct ctctgtcact agcagtgatg 180

aatagaggag aattccagag ctgccggagt catggagcca actgcttctg taaacacctc 240

tctccttctc ttctctcctt atctatctct attttctata ttcagttcat ggcctcctga 300

tcatgttcaa gcagggagag agagattcaa ataagaaaca agccagccat gcacatccat 360

gtaaattaaa ctat 374

<210> 8

<211> 280

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400> 8

tccctggtgc agcagatgat ctggagcggc agtagtacag gcacggctac cggcgtcggc 60

agcggcggcg gcgccggcag tttgatgggc agcttgaagc catgccatga ggatcaagag 120

gcctctccta acatgccctc cttgtcttct ccatcgttga tcttctcgca gcagtttcag 180

cacagctctc caggtctagt tccgatgaac ggcaccgccg gcgccgccgc ttctcttccg 240

agcttgcacg acggcggcgg cggcggccat gagagcagca 280

<210> 9

<211> 100

<212> RNA

<213> Artificial sequence

<400> 9

ggagaauucc agagcucccg uuuuagagcu agaaauagca aguuaaaaua aggcuagucc 60

guuaucaacu ugaaaaagug gcaccgaguc ggugcuuuuu 100

<210> 10

<211> 101

<212> RNA

<213> Artificial sequence

<400> 10

cggccaugag agcagcaugc guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu u 101

Claims

1.一种培育株高降低的植物的方法，包括如下步骤：抑制出发植物中bHLH73基因的表达，从而使植物的株高降低；所述植物为水稻；

所述bHLH73基因为编码bHLH73蛋白的核酸；

所述bHLH73蛋白为序列表的序列1所示的蛋白质。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述bHLH73基因为如下（b1）或（b2）：

（b1）编码区如序列表的序列2所示的DNA分子；

（b2）序列表的序列3所示的DNA分子。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：“抑制出发植物中bHLH73基因的表达”是通过敲除全长bHLH73基因或敲除bHLH73基因的部分区段实现的。

4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：“抑制出发植物中bHLH73基因的表达”是通过CRISPR/Cas9技术实现的。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：“抑制出发植物中bHLH73基因的表达”是通过导入干扰载体实现的；所述干扰载体表达CAS9 mRNA、OsU3-sgRNA和OsU6a-sgRNA；OsU3-sgRNA的靶序列如序列表的序列4所示；OsU6a-sgRNA的靶序列如序列表的序列5所示。

6.权利要求1或2中所述的bHLH73基因作为被沉默的靶点在培育株高降低的植物中的应用；所述植物为水稻。

7.用于抑制权利要求1或2中所述的bHLH73基因的表达的物质在培育株高降低的植物中的应用；所述植物为水稻。

8.一种培育株高降低的植物的方法，包括如下步骤：降低植物中权利要求1中所述的bHLH73蛋白的含量和/或抑制植物中权利要求1中所述的bHLH73蛋白的活性，从而使植物的株高降低；所述植物为水稻。

9.权利要求1中所述的bHLH73蛋白的应用，所述应用为作为被抑制的靶点培育株高降低的植物；所述植物为水稻。

10.用于降低植物中权利要求1中所述的bHLH73蛋白的含量和/或抑制植物中权利要求1中所述的bHLH73蛋白的活性的物质在培育株高降低的植物中的应用；所述植物为水稻。