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CN107801837B - 一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺 - Google Patents

一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺 Download PDF

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CN107801837B CN201711410167.5A CN201711410167A CN107801837B CN 107801837 B CN107801837 B CN 107801837B CN 201711410167 A CN201711410167 A CN 201711410167A CN 107801837 B CN107801837 B CN 107801837B
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Abstract

本发明公开了一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，集成现代混菌微生物发酵技术，研制开发出高蛋白、高氨基酸含量、低纤维素含量、高饲料报酬率的鸡粪蛋白饲料，该工艺技术发酵工艺简单高效、除臭杀菌效果好，生产成本低，易于工业化规模生产。本申请采取混菌好氧发酵和混菌厌氧发酵二步发酵工艺，其中好氧发酵菌群包括霉菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌；厌氧发酵菌群包括嗜热链球菌、尿肠球菌和嗜酸乳杆菌中的一种或几种的混合物。该工艺采用多菌混菌发酵，通过不同代谢能力的组合,完成单个菌种难以完成的复杂代谢作用，通过微生物之间协同发酵对鸡粪的有效转化，卫生指标达到国家标准要求，产品营养价值指标显著提升。

Description

一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺
技术领域
本发明涉及一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，尤其是一种利用多种益生菌协同发酵制备高蛋白含量、高饲料报酬率发酵鸡粪饲料的生物发酵工艺，属于生物工程领域。
背景技术
随着现代畜牧业的发展,家禽养殖场规模化、集约化程度不断提高,大型家禽养殖场产生的粪便严重污染环境。国家环保总局2002年对规模化畜禽养殖污染情况调查结果显示：中国年畜禽粪便量约为19亿t，其中，COD（化学需氧量）排放量己达7118万t，畜禽粪便产量和COD排放量都远远超过工业废水和生活用水排放量之和，而2004年畜禽粪便总量为28亿t；2010年达到45亿t。这对人类、其它生物以及家禽自身生存环境的污染愈来愈严重。从环境的角度看, 它对大气、水域及土壤造成了严重污染, 使地球生态环境恶化。从资源的角度看, 它是良好的可再生资源。如能将其转化为饲料,实现畜牧业资源的自我循环利用,不仅可以解决目前人类面临的资源短缺和环境污染两大难题, 而且对于缓解人畜争粮的矛盾, 实现可持续发展的畜牧业循环经济, 都具有十分重要的意义。
鸡的消化道短，饲料停留时间不长，其粪便粗蛋白质含量高，且富含多种氨基酸、钙、磷和维生素等，有研究结果表明鸡粪干物质中，粗蛋白28.0％、纯蛋白11.3％、可消化蛋白质14.4％、粗脂肪2％左右、粗纤维10％左右、钙6％-8％、磷2.5％-3.0％，还含有锌、铜、铁等矿质元素及丰富的Ｂ族维生素。因此，通过加工将鸡粪转化成可利用饲料是一种比较理想的无公害化处理方式。
目前家禽粪便在肥料化和资源化利用方面技术已经日臻成熟，但在饲料化处理方面还存在较多的弊端。在制作饲料方面，处理效率最髙的方法主要有化学法、物理处理法和热喷鸡粪再生饲料法等，这些方法不仅成本较高，还会破坏物料中的营养物质，降低了经济效溢。有益微生物具有繁殖快、代谢旺，发酵饲料可解毒、脱毒，并能积累有用的中间代谢产物，提高其适口性，利用微生物发酵可使大量的农副产品和废弃物转化成饲料，因而在生物法制备饲料方面，也有很多人在研究，他们将ＥＭ菌等微生物加入物料中，并且还加入玉米粉和麸皮等调理剂，然后进行青贮发酵，能够明显缩短发酵时间，并且还能提髙饲料的品质，如专利CN201510642108.5公开了一种含有鸡粪的猪饲料；专利CN201510703677.6公开了一种鸡粪饲料及其制备方法；专利CN200710115062.7公开了一种动物粪便（含鸡粪）为原料的微生物饲料及其制备方法；专利CN201611037162.8公开了一种增强猪免疫力的饲料及其制备方法；专利CN201410514712.5公开了一种资源化利用禽粪生产猪配合饲料的方法。尽管目前生物发酵法制备鸡粪饲料的工艺日趋成熟，但目前工艺中仍存在生产工艺复杂、生产成本高、饲料化利用水平低、适口性仍需进一步提升等弊端。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足，满足鸡粪无害化处理及市场对高蛋白、高饲料报酬率鸡粪饲料的需求，本发明提供一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，集成现代混菌微生物发酵技术，研制开发出高蛋白、高氨基酸含量、低纤维素含量、高饲料报酬率的鸡粪蛋白饲料，该工艺技术发酵工艺简单高效、除臭杀菌效果好，生产成本低，易于工业化规模生产。
本发明通过下述技术方案实现上述技术效果：
一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，具体包括混菌好氧发酵和混菌厌氧发酵二步发酵，其中好氧发酵菌群包括霉菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌；厌氧发酵菌群包括嗜热链球菌、尿肠球菌和嗜酸乳杆菌中的一种或几种的混合物。
上述好氧发酵菌群中霉菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌的用量比为1.2:1.8:0.6:1。
上述霉菌是黑曲霉、嗜热侧孢霉菌的一种或两种的混合菌；
上述酵母菌可以是产朊假丝酵母、啤酒酵母、酿酒酵母、糖蜜酵母中一种或几种的混合菌；
优选的，酵母菌的最佳菌种为产朊假丝酵母与糖蜜酵母的混合菌，其用量比为1:0.75。
优选的，所述厌氧发酵菌群最优菌群为嗜热链球菌、尿肠球菌和嗜酸乳杆菌接种比例1:1:3的混合菌群。
上述黑曲霉或嗜热侧孢霉菌的种子液的制备方法为：在无菌条件下，采用土豆培养基在35～40℃条件下培养24h，制得黑曲霉或嗜热侧孢霉菌种子液，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL。
上述酵母菌种子液制备方法为：在无菌操作条件下，从酵母菌YDP斜面上用接种环挑取两环菌种，接种到500mL装300mLPDA液体培养基的三角瓶内，28℃～32℃，140r/min振荡培养24h后，然后按照上述工艺接种种子罐扩大培养制备酵母菌种子液，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL。
上述枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌种子液制备方法为：在无菌条件下，采用LB培养基在28～32℃条件下培养24h，制得液体芽孢杆菌种子液，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL。
上述嗜热链球菌、尿肠球菌和嗜酸乳杆菌的种子液制备方法为：将斜面或甘油管保藏菌种截至相应的种子培养基，其中酪酸梭状芽孢杆菌接种至LB培养基，乳酸菌菌种接种至MRS培养基中，37℃静置培养20～30h得到一级种子液；然后将一级种子液接种到10L的玻璃瓶种子发酵罐中，37℃发酵20～30h得到二级种子液，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL。
本发明还提供了一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，其具体工艺步骤包括：
（1）配料：按照鸡粪80份、玉米粉10份、麸皮5份、硫酸铵0.1份、尿素2份、磷酸二氢钾0.05份、硫酸镁0.03份的比例混合均匀，调整物料的含水量40%～50%，干湿标准以用手紧握刚好能滴出水为宜；
（2）好氧发酵：将活化好的霉菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌种子液按1.2:1.8:0.6:1的比例接种至培养基，总接种量为固体培养基的3～5wt%，拌匀后堆肥发酵，通风培养24～30h；
（3）厌氧发酵：好氧发酵后停止通风，2h后接种厌氧发酵菌种，接种量为固体培养基的1.5～2wt%，厌氧发酵12～16h；
（4）干燥：发酵结束后低温通风干燥；
（5）粉碎：将干燥后的发酵鸡粪粉碎即得发酵鸡粪饲料。
上述工艺中鸡粪优选雏鸡的鸡粪。
本发明提供了一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，所得发酵鸡粪臭味全部消失，质地松软，不成团，带有比较浓的酸香味；产品中富含益生菌、维生素、酶及氨基酸、短肽、优质蛋白质等营养成分，产品营养、安全、绿色，具有促进生长发育、提高饲料利用率、增强免疫力、改进肠道微生态、防止疾病、减少环境污染等优点。该产品可直接用于饲喂猪、鸡等动物，也可以与饲料搭配后配合饲喂。
为验证本发明产品的卫生安全性，测定其卫生指标，并与国家标准对比，结果如下表所示。测定结果表明本申请产品符合国家卫生标准。
表1 本申请产品卫生指标
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本发明提供一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，与现有技术相比，具有以下显著优势：
（1）本申请利用好氧菌（黑曲霉、嗜热侧孢霉菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌）和厌氧菌（嗜热链球菌、尿肠球菌和嗜酸乳杆菌）共同发酵饲料化综合利用鸡粪，充分利用微生物菌种间的协同作用，消除制约鸡粪饲料化利用存在的臭味大、存在大量致病菌、可利用蛋白偏低等弊端，提升发酵鸡粪的适口性和营养水平，从而显著提升棉粕的饲用营养价值，其中：黑曲霉同化淀粉和纤维素的能力强，可将鸡粪的结构性碳水化合物降解为酵母可利用的单糖、双糖等单糖类物质，使酵母、芽孢杆菌、乳酸菌等得以良好的生长；同样，嗜热侧孢霉菌能在髙温下分解纤维素，与黑曲霉之间的协同作用可取得“1+1>2”的技术效果；酵母菌的存在可以通过快速繁殖增加产品的菌体蛋白，且能够抑制鸡粪中的蛋白被分解，避免出现发酵过程中出现粗蛋白下降的现象；同时，酵母菌的快速繁殖使物料pH值下降，抑制包括沙门氏菌等致病菌的生长；枯草芽孢杆菌在高温发酵过程中能够杀灭鸡粪中的致病菌，并具有较强的产蛋白酶能力，可以将大分子蛋白物质降解为养殖动物更易消化吸收的小分子量蛋白质、肽及氨基酸；嗜热异养氨氧化细菌的存在能够防治氨气的产生，使鸡粪饲料化利用的发酵工艺更加清洁化，同时有利于促进益生菌的生长；嗜热链球菌、尿肠球菌和嗜酸乳杆菌等厌氧菌的添加，能分解粪料中碳类物质形成带有酸香味的有机小分子化合物，使发酵鸡粪产生酸香味，同时使发酵鸡粪中含有大量的益生菌，进入动物肠道后，对促进双歧杆菌等肠道益生菌的生产，抑制病害菌生长，恢复肠道菌群平衡，增强肠道免疫功能和生理功能具有重要作用；
（2）本申请提供了一种饲料化利用鸡粪的发酵工艺，采用好氧发酵和厌氧发酵二步发酵工艺，在好氧发酵过程中能将有效消灭鸡粪中存在的志贺氏菌等致病菌，并能将臭气物质NH3转化成为硝酸盐，H2S转变为H2SO4，能将其他物质转化成CO2和H2O，消除臭味，黑曲霉、枯草芽孢杆菌和酵母菌能分泌多种酶类帮助消化进而提高饲料转化率；在厌氧发酵过程中，通过厌氧微生物的发酵作用，生成酸香味物质，提高产品的适口性，还能够分泌维生素、有机酸等营养物质从而促进养殖畜禽的生长，并提高机体的免疫力。好氧发酵和厌氧发酵相辅相成，共同构建成高效饲料化利用鸡粪的生物发酵技术体系，产品具有较好的应用推广价值；
（3）采用分段发酵，发酵菌株对温度、pH、通氧等要求不同，不同的反应控制条件，提高了菌体的生长速率，缩短了发酵时间，提升了生产效率，在本技术方案下，最长发酵时间为48h，显著低于行业内现有技术的发酵时间；
（4）发酵工艺条件温和，生产成本低，采用固体发酵，且发酵周期较短，本技术方案生产成本仅为目前已报道技术水平的1/2，对提升行业经济效益及规模化推广应用具有重要作用；
（5）采用固态发酵，生产工艺简单，能耗低、无环境污染、投资小、易于规模化生产。
具体实施方式
以下实施例中的发酵菌种的种子液均采用如下工艺：
（1）黑曲霉或嗜热侧孢霉菌的种子液制备方法：在无菌条件下，采用土豆培养基在35～40℃条件下培养24h，制得黑曲霉或嗜热侧孢霉菌种子液，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL；
（2）酵母菌种子液制备方法：在无菌操作条件下，从酵母菌YDP斜面上用接种环挑取两环菌种，接种到500mL装300mLPDA液体培养基的三角瓶内，28℃～32℃，140r/min振荡培养24h后，然后按照上述工艺接种种子罐扩大培养制备酵母菌种子液，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL；
（3）枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌种子液制备方法：在无菌条件下，采用LB培养基在28～32℃条件下培养24h，制得液体芽孢杆菌种子液，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL；
（4）嗜热链球菌、尿肠球菌和嗜酸乳杆菌的种子液制备方法：将斜面或甘油管保藏菌种截至相应的种子培养基，其中酪酸梭状芽孢杆菌接种至LB培养基，乳酸菌菌种接种至MRS培养基中，37℃静置培养20～30h得到一级种子液；然后将一级种子液接种到10L的玻璃瓶种子发酵罐中，37℃发酵20～30h得到二级种子液，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL。
实施例1
一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，具体工艺步骤包括：
（1）配料：按照鸡粪80份、玉米粉10份、麸皮5份、硫酸铵0.1份、尿素2份、磷酸二氢钾0.05份、硫酸镁0.03份的比例混合均匀，调整物料的含水量40%～50%，干湿标准以用手紧握刚好能滴出水为宜；
（2）好氧发酵：将活化好的霉菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌种子液按1.2:1.8:0.6:1的比例接种至培养基，总接种量为固体培养基的4wt%，拌匀后堆肥发酵，通风培养27h；所述霉菌为黑曲霉、嗜热侧孢霉菌1:1的混合菌液，所述酵母菌为产朊假丝酵母与糖蜜酵母1:0.75的混合菌；
（3）厌氧发酵：好氧发酵后停止通风，2h后接种厌氧发酵菌种，接种量为固体培养基的1.8wt%，厌氧发酵14h；其中所述厌氧菌为嗜热链球菌、尿肠球菌和嗜酸乳杆菌1:1:3的混合菌群；
（4）干燥：发酵结束后低温通风干燥；
（5）粉碎：将干燥后的发酵鸡粪粉碎即得发酵鸡粪饲料。
实施例2
一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，具体工艺步骤包括：
（1）配料：按照鸡粪80份、玉米粉10份、麸皮5份、硫酸铵0.1份、尿素2份、磷酸二氢钾0.05份、硫酸镁0.03份的比例混合均匀，调整物料的含水量40%～50%，干湿标准以用手紧握刚好能滴出水为宜；
（2）好氧发酵：将活化好的霉菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌种子液按1.2:1.8:0.6:1的比例接种至培养基，总接种量为固体培养基的4wt%，拌匀后堆肥发酵，通风培养27h；所述霉菌为黑曲霉，所述酵母菌为产朊假丝酵母与糖蜜酵母1:0.75的混合菌；
（3）厌氧发酵：好氧发酵后停止通风，2h后接种厌氧发酵菌种，接种量为固体培养基的1.8wt%，厌氧发酵14h；其中所述厌氧菌为嗜热链球菌、尿肠球菌和嗜酸乳杆菌1:1:3的混合菌群；
（4）干燥：发酵结束后低温通风干燥；
（5）粉碎：将干燥后的发酵鸡粪粉碎即得发酵鸡粪饲料。
实施例3
一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，具体工艺步骤包括：
（1）配料：按照鸡粪80份、玉米粉10份、麸皮5份、硫酸铵0.1份、尿素2份、磷酸二氢钾0.05份、硫酸镁0.03份的比例混合均匀，调整物料的含水量40%～50%，干湿标准以用手紧握刚好能滴出水为宜；
（2）好氧发酵：将活化好的霉菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌种子液按1.2:1.8:0.6:1的比例接种至培养基，总接种量为固体培养基的4wt%，拌匀后堆肥发酵，通风培养27h；所述霉菌为嗜热侧孢霉菌，所述酵母菌为产朊假丝酵母与糖蜜酵母1:0.75的混合菌；
（3）厌氧发酵：好氧发酵后停止通风，2h后接种厌氧发酵菌种，接种量为固体培养基的1.8wt%，厌氧发酵14h；其中所述厌氧菌为嗜热链球菌、尿肠球菌和嗜酸乳杆菌1:1:3的混合菌群；
（4）干燥：发酵结束后低温通风干燥；
（5）粉碎：将干燥后的发酵鸡粪粉碎即得发酵鸡粪饲料。
实施例4
一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，具体工艺步骤包括：
（1）配料：按照鸡粪80份、玉米粉10份、麸皮5份、硫酸铵0.1份、尿素2份、磷酸二氢钾0.05份、硫酸镁0.03份的比例混合均匀，调整物料的含水量40%～50%，干湿标准以用手紧握刚好能滴出水为宜；
（2）好氧发酵：将活化好的霉菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌种子液按1.2:1.8:0.6:1的比例接种至培养基，总接种量为固体培养基的4wt%，拌匀后堆肥发酵，通风培养27h；所述霉菌为黑曲霉、嗜热侧孢霉菌1:1的混合菌液，所述酵母菌为产朊假丝酵母；
（3）厌氧发酵：好氧发酵后停止通风，2h后接种厌氧发酵菌种，接种量为固体培养基的1.8wt%，厌氧发酵14h；其中所述厌氧菌为嗜热链球菌、尿肠球菌和嗜酸乳杆菌1:1:3的混合菌群；
（4）干燥：发酵结束后低温通风干燥；
（5）粉碎：将干燥后的发酵鸡粪粉碎即得发酵鸡粪饲料。
实施例5
一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，具体工艺步骤包括：
（1）配料：按照鸡粪80份、玉米粉10份、麸皮5份、硫酸铵0.1份、尿素2份、磷酸二氢钾0.05份、硫酸镁0.03份的比例混合均匀，调整物料的含水量40%～50%，干湿标准以用手紧握刚好能滴出水为宜；
（2）好氧发酵：将活化好的霉菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌种子液按1.2:1.8:0.6:1的比例接种至培养基，总接种量为固体培养基的4wt%，拌匀后堆肥发酵，通风培养27h；所述霉菌为黑曲霉、嗜热侧孢霉菌1:1的混合菌液，所述酵母菌为糖蜜酵母；
（3）厌氧发酵：好氧发酵后停止通风，2h后接种厌氧发酵菌种，接种量为固体培养基的1.8wt%，厌氧发酵14h；其中所述厌氧菌为嗜热链球菌、尿肠球菌和嗜酸乳杆菌1:1:3的混合菌群；
（4）干燥：发酵结束后低温通风干燥；
（5）粉碎：将干燥后的发酵鸡粪粉碎即得发酵鸡粪饲料。
实施例6
一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，具体工艺步骤包括：
（1）配料：按照鸡粪80份、玉米粉10份、麸皮5份、硫酸铵0.1份、尿素2份、磷酸二氢钾0.05份、硫酸镁0.03份的比例混合均匀，调整物料的含水量40%～50%，干湿标准以用手紧握刚好能滴出水为宜；
（2）好氧发酵：将活化好的霉菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌种子液按1.2:1.8:0.6:1的比例接种至培养基，总接种量为固体培养基的4wt%，拌匀后堆肥发酵，通风培养27h；所述霉菌为黑曲霉、嗜热侧孢霉菌1:1的混合菌液，所述酵母菌为产朊假丝酵母与糖蜜酵母1:0.75的混合菌；
（3）厌氧发酵：好氧发酵后停止通风，2h后接种厌氧发酵菌种，接种量为固体培养基的1.8wt%，厌氧发酵14h；其中所述厌氧菌为嗜热链球菌；
（4）干燥：发酵结束后低温通风干燥；
（5）粉碎：将干燥后的发酵鸡粪粉碎即得发酵鸡粪饲料。
实施例7
一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，具体工艺步骤包括：
（1）配料：按照鸡粪80份、玉米粉10份、麸皮5份、硫酸铵0.1份、尿素2份、磷酸二氢钾0.05份、硫酸镁0.03份的比例混合均匀，调整物料的含水量40%～50%，干湿标准以用手紧握刚好能滴出水为宜；
（2）好氧发酵：将活化好的霉菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌种子液按1.2:1.8:0.6:1的比例接种至培养基，总接种量为固体培养基的4wt%，拌匀后堆肥发酵，通风培养27h；所述霉菌为黑曲霉、嗜热侧孢霉菌1:1的混合菌液，所述酵母菌为产朊假丝酵母与糖蜜酵母1:0.75的混合菌；
（3）厌氧发酵：好氧发酵后停止通风，2h后接种厌氧发酵菌种，接种量为固体培养基的1.8wt%，厌氧发酵14h；其中所述厌氧菌为尿肠球菌；
（4）干燥：发酵结束后低温通风干燥；
（5）粉碎：将干燥后的发酵鸡粪粉碎即得发酵鸡粪饲料。
实施例8
一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，具体工艺步骤包括：
（1）配料：按照鸡粪80份、玉米粉10份、麸皮5份、硫酸铵0.1份、尿素2份、磷酸二氢钾0.05份、硫酸镁0.03份的比例混合均匀，调整物料的含水量40%～50%，干湿标准以用手紧握刚好能滴出水为宜；
（2）好氧发酵：将活化好的霉菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌种子液按1.2:1.8:0.6:1的比例接种至培养基，总接种量为固体培养基的4wt%，拌匀后堆肥发酵，通风培养27h；所述霉菌为黑曲霉、嗜热侧孢霉菌1:1的混合菌液，所述酵母菌为产朊假丝酵母与糖蜜酵母1:0.75的混合菌；
（3）厌氧发酵：好氧发酵后停止通风，2h后接种厌氧发酵菌种，接种量为固体培养基的1.8wt%，厌氧发酵14h；其中所述厌氧菌为嗜酸乳杆菌；
（4）干燥：发酵结束后低温通风干燥；
（5）粉碎：将干燥后的发酵鸡粪粉碎即得发酵鸡粪饲料。
实施例9 以下以试验数据说明本申请取得的技术效果
1、指标测定方法
营养成分指标测定：取样品100g置于105℃干燥箱中干燥10h左右，直至恒重为止，研磨成粉状，其中总蛋白采用国家标准（GB/T6432-1994）凯氏定氮法测定，真蛋白用硫酸铜法沉淀蛋白后按照国家标准（GB/T6432-1994）凯氏定氮法测定，粗纤维的含量用酸碱洗涤-重量法快速测定，总氨基酸的检测采用甲醛法进行测定；
乳酸含量测定：发酵鸡粪中乳酸含量测定采用酸碱滴定法。样品中乳酸的提取方法：准确称取烘干后的发酵产物2g，置于100mL烧杯中，加入50mL超纯水，于4℃条件下静置24h后，过滤于150mL锥形瓶中，滴入2～3滴酚酞指示剂，用0.1mol/L的氢氧化钠溶液滴定至溶液微红即可。乳酸含量计算公式：
乳酸含量（%）=
Figure DEST_PATH_IMAGE004
式中：C为氢氧化钠浓度，V为样液消耗氢氧化钠体积，V0为空白消耗氢氧化钠体积，M为乳酸摩尔质量，m为样品称取质量。
2、试验分组
试验分为实施例1-8试验组、空白对照组（重蒸水代替发酵种子液，其余工艺同实施例1）、对照1组（好氧菌群仅含霉菌，霉菌、厌氧菌群组成及配比 ，发酵生产工艺同实施例1）、对照2组（好氧菌群仅含酵母菌，酵母菌、厌氧菌群组成及配比，发酵生产工艺同实施例1）、对照3组（好氧菌群仅为枯草芽孢杆菌，厌氧菌群组成及配比、发酵生产工艺同实施例1）、对照4组（好氧菌群仅含嗜热异养氨氧化细菌，酵母菌、厌氧菌群组成及配比 ，发酵生产工艺同实施例1）；上述分组中鸡粪原料为同一批原料，经检测指标营养成分差异不显著；
3、数据分析统计
数据运用SPSS11.5软件的随机单因素分析，并采用LSD多重比较法，用“平均值±标准差（SD）”表示。
4、试验结果
表2 不同工艺条件对发酵鸡粪营养指标的影响
测定指标 粗蛋白（%） 真蛋白（%） 粗纤维（%） 氨基酸（%） 乳酸（%）
空白对照组 29.17±0.71 13.77±0.46 15.02±0.44 8.11±0.38 0.43±0.08
实施例1试验组 32.09±0.65 22.81±0.53 6.13±0.29 18.27±0.25 7.54±0.28
实施例2试验组 29.74±0.51 19.62±0.42 11.85±0.35 10.27±0.32 3.96±0.31
实施例3试验组 28.78±0.62 18.14±0.56 10.87±0.29 9.93±0.28 4.08±0.25
实施例4试验组 30.77±0.48 18.46±0.55 7.91±0.41 13.17±0.44 5.21±0.37
实施例5试验组 29.48±0.65 16.29±0.49 8.43±0.52 12.09±0.52 4.84±0.26
实施例6试验组 31.74±0.72 20.70±0.51 7.06±0.38 15.08±0.46 2.11±0.18
实施例7试验组 30.52±0.69 19.88±0.63 7.22±0.42 14.79±0.39 1.47±0.15
实施例8试验组 31.19±0.44 20.21±0.59 7.14±0.45 14.96±0.41 3.69±0.22
对照1组 24.78±0.86 15.29±0.68 10.65±0.55 9.76±0.33 4.92±0.32
对照2组 29.29±0.92 17.48±0.66 14.29±0.49 10.21±0.37 3.14±0.29
对照3组 26.91±0.78 15.41±0.71 12.95±0.61 11.35±0.41 4.74±0.41
对照4组 24.08±0.88 14.37±0.69 14.88±0.39 9.63±0.32 2.07±0.36
上述试验结果表明，好氧发酵菌群和厌氧发酵菌群的选择会对发酵鸡粪产生显著的影响。比较实施例营养成分指标，实施例1为本申请最佳实施例。
以上实施例仅用于说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对被发明进行了详细的说明，但对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而对这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。

Claims (5)

1.一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，其特征在于具体包括混菌好氧发酵和混菌厌氧发酵二步发酵，其中好氧发酵菌群包括霉菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌；所述好氧发酵菌群中霉菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌的用量比为1.2:1.8:0.6:1，所述霉菌是黑曲霉、嗜热侧孢霉菌的一种或两种的混合菌，所述酵母菌是产朊假丝酵母、啤酒酵母、酿酒酵母、糖蜜酵母中一种或几种的混合菌；所述厌氧发酵菌群为嗜热链球菌、尿肠球菌和嗜酸乳杆菌接种比例1:1:3的混合菌群。
2.根据权利要求1所述的一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，其特征在于所述酵母菌的菌种为产朊假丝酵母与糖蜜酵母的混合菌，其用量比为1:0.75。
3.根据权利要求1所述的一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，其特征在于所述黑曲霉或嗜热侧孢霉菌的种子液的制备方法为：在无菌条件下，采用土豆培养基在35～40℃条件下培养24h，制得黑曲霉或嗜热侧孢霉菌种子液，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL；所述酵母菌种子液制备方法为：在无菌操作条件下，从酵母菌YDP斜面上用接种环挑取两环菌种，接种到500mL装300mLPDA液体培养基的三角瓶内，28℃～32℃，140r/min振荡培养24h后，然后按照上述工艺接种种子罐扩大培养制备酵母菌种子液，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL；所述枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌种子液制备方法为：在无菌条件下，采用LB培养基在28～32℃条件下培养24h，制得液体芽孢杆菌种子液，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL；所述嗜热链球菌、尿肠球菌和嗜酸乳杆菌的种子液制备方法为：将斜面或甘油管保藏菌种截至相应的种子培养基，其中嗜热链球菌、尿肠球菌接种至LB培养基，乳酸菌菌种接种至MRS培养基中，37℃静置培养20～30h得到一级种子液；然后将一级种子液接种到10L的玻璃瓶种子发酵罐中，37℃发酵20～30h得到二级种子液，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL。
4.根据权利要求1所述的一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，其特征在于所述饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺具体工艺步骤包括：
（1）配料：按照鸡粪80份、玉米粉10份、麸皮5份、硫酸铵0.1份、尿素2份、磷酸二氢钾0.05份、硫酸镁0.03份的比例混合均匀，调整物料的含水量40%～50%，干湿标准以用手紧握刚好能滴出水为宜；
（2）好氧发酵：将活化好的霉菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜热异养氨氧化细菌种子液按1.2:1.8:0.6:1的比例接种至培养基，总接种量为固体培养基的3～5wt%，拌匀后堆肥发酵，通风培养24～30h；
（3）厌氧发酵：好氧发酵后停止通风，2h后接种厌氧发酵菌种，接种量为固体培养基的1.5～2wt%，厌氧发酵12～16h；
（4）干燥：发酵结束后低温通风干燥；
（5）粉碎：将干燥后的发酵鸡粪粉碎即得发酵鸡粪饲料。
5.根据权利要求4所述的一种饲料化利用鸡粪的生物发酵工艺，其特征在于所述生物发酵工艺中鸡粪是雏鸡的鸡粪。
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