CN107338206A - 一种富集乳酸杆菌的培养基及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及微生物培养技术领域，尤其涉及一种富集乳酸杆菌的培养基及其制备方法，所述富集乳酸杆菌的培养基，包括基础培养基和添加剂，以质量份数计，所述添加剂包括以下物质：蛋白胨2～12份，氯化钠3～12份，肉汤20～50份，谷物发酵液20～80份，奶粉5～12份，葡萄糖2～8份，乳糖1～10份，磷源1.2～5.6份，猪胆盐0.02～0.15份，丙酮酸钠0.6～2.9份，氨基酸0.1～3.8份，抗生素0.1～2份，金属盐0.05～0.5份，表面活性剂0.01～0.05份，蒸馏水500份；本发明中首先通过谷物发酵液一直其它细菌的生长，实现乳酸菌的选择性生长，通过在培养基中加入丰富的营养物质，增大乳酸菌的生长活力，促进乳酸菌的生长，从而提高乳酸菌的产量，实现乳酸菌的富集，在工业化生产和检测中具有广阔的应用前景。

Description

一种富集乳酸杆菌的培养基及其制备方法

技术领域

本发明涉及微生物培养技术领域，尤其涉及一种富集乳酸杆菌的培养基及其制备方法。

背景技术

乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的直接关系目前针对食品中的致病菌的检测一般都是按照有关标准方法进行，而相关标准方法的确立主要依赖于传统的分离鉴定方法。针对于每种致病菌均需要其特定的增菌培养基进行增菌，选择性增菌等步骤；同一样品需要同时进行多种致病菌的检测，这样就需要同时在多种特定的增菌培养基上进行样品的增菌处理，造成检测工作前期增菌过程繁琐。

传统的微生物培养的方法至今仍然是甄别微生物的权威方法。国标增菌方法需要对样品进行3-4次增菌才能完成细菌的增菌过程，而复合增菌只需要一次增菌过程即可完成细菌的增殖过程，相比较于国标增菌方法操作简便。现有的增菌培养基单次增菌只能增菌1～2种致病菌，无法实现快速检测的目的，因此，为实现致病菌的快速增菌检测，有必要对于传统培养基和方法进行改进。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的主要目的是提供一种富集乳酸杆菌的培养基及其制备方法，该培养基可同时培养沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌复合增菌，实现快速检测的目的。

为解决上述问题，本发明提供了一种富集乳酸杆菌的培养基，包括基础培养基和添加剂，以质量份数计，所述添加剂包括以下物质：蛋白胨2～12份，氯化钠3～12份，肉汤20～50份，谷物发酵液20～80份，奶粉5～12份，葡萄糖2～8份，乳糖1～10份，磷源1.2～5.6份，猪胆盐0.02～0.15份，丙酮酸钠0.6～2.9份，氨基酸0.1～3.8份，抗生素0.1～2份，金属盐0.05～0.5份，表面活性剂0.01～0.05份，蒸馏水500份。

优选的，所述的富集乳酸杆菌的培养基，以质量份数计，所述添加剂包括以下物质：蛋白胨5～10份，氯化钠5～10份，肉汤25～42份，谷物发酵液36～64份，奶粉8～10份，葡萄糖3～5份，乳糖2～8份、磷源2.4～3.8份，猪胆盐0.05～0.12份，丙酮酸钠1.2～2.4份，氨基酸0.5～3.6份，抗生素1.2～1.8份，金属盐0.1～0.4份，表面活性剂0.01～0.03份，蒸馏水500份。

优选的，所述的富集乳酸杆菌的培养基，以质量份数计，所述添加剂包括以下物质：蛋白胨8份，氯化钠6份，肉汤35份，谷物发酵液48份，奶粉8份、葡萄糖3份，乳糖6份、磷源3份，猪胆盐0.08份、丙酮酸钠1.8份，氨基酸2.6份，抗生素1.6份，金属盐0.3份，表面活性剂0.02份，蒸馏水500份。

本发明对基础培养基的种类没有特殊的要求，可以为本领域技术人员所常知，例如，所述培养基选自MEM培养基、DMEM培养基、DMEM-F12培养基(1:1)、HB培养基、BEM培养基中的一种。

本发明中，蛋白胨为细菌的生长提供氮源和碳源，是维持细胞生长的重要因素，本发明中，所述蛋白胨可以为植物蛋白胨或动物蛋白胨，优选的，所述蛋白胨为大豆蛋白胨、血液蛋白胨、胰蛋白胨、肉蛋白胨中的至少一种。

肉汤中含有含氮化合物如肌酸、肌酐、嘌呤碱、氨基酸，同时肉中脂肪也能部分地溶于汤中，除此之外，汤里还有水溶性B族维生素，如B1、B2和烟酸等，汤里还可能有一些无机盐，如钾盐及微量元素铁和少量的蛋白质，这些营养物质有利于细菌的繁殖和生长，所述肉汤可以为红肉的汤汁、白肉汤汁和海鲜汤汁，优选的，所述肉汤为猪肉汤、牛肉汤、羊肉汤、鸡肉汤、鸭肉汤、鱼汤中的至少一种。

谷物发酵液中含有大量的微量元素，且呈弱酸性，能够抑制大多数细菌的生长繁殖，但是有利于乳酸菌的生长的繁殖，因此起到选择性培养细菌的作用，同时，由于其它细菌无法繁殖，能够提高乳酸菌对培养基中营养物质的利用率，从而提高乳酸菌的生长活力，加快乳酸菌的繁殖，提高乳酸菌的产量，有助于乳酸菌的富集。优选的，所述谷物发酵液为大米、玉米、高粱、小麦、小米、大豆中的至少一种的发酵液。

氨基酸是生长因子的一种，微生物生长所需要的生长因子量很小，而且微生物本身不能合成或合成量不足，不能满足机体生长所需要，微生物的生长或酶的合成需要氨基酸，但是微生物本身缺乏合成氨基酸的能力，必须在培养基中添加氨基酸或含有氨基酸的多肽，才能维持细菌的正常生长。优选的，所述氨基酸为甘氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-精氨酸、L-组氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-酪氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸、L-天冬氨酸和L-天冬酰胺中的至少一种。

磷酸盐既可以为微生物提供足够的磷元素，也可以缓冲培养基中pH值，优选的，所述磷源为磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾和磷酸二氢钾中的至少一种。

表面活性剂可以改变细胞的通透性，从而有利于在细胞合成过程中，酶的释放，优选的，所述表面活性剂为SDS和或CTAB。

抗生素能够抑制其它菌种的繁殖，防止其它菌种对培养基造成的污染，优选的，所述抗生素为β-内酰胺类抗生素、氨基糖苷类抗生素、多肽类抗生素中的至少一种，更优选的，所述β-内酰胺类抗生素为青霉素G、青霉素V、苄星青霉素、甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、氟氯西林、氯唑西林、双氯西林中的至少一种；所述氨基糖苷类抗生素为霉素、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、新霉素、核糖霉素、小诺霉素、阿斯霉素中的至少一种；所述多肽类抗生素为万古霉素、去甲万古霉素、替考拉宁中的至少一种。

金属盐也是维持细胞生长的另一个重要因素，优选的，所述金属盐为铁盐、铜盐、锌盐、钴盐、锰盐、铬盐、硒盐、镍盐、钼盐、钒盐、锡盐、锶盐中的至少一种。

一种富集乳酸杆菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：

肉汤的制备：将肉类放入2～4的水中，然后以3～5℃/min的速率升温至85～100℃，然后保温30～180min，冷却至室温后，得到肉汤；

谷物发酵液的制备：将谷物在5～6倍的水中浸泡5～48h，然后将谷物研磨成粉，得到谷物浆料，然后在谷物浆料中加入酵母，发酵12～72h后，过滤除去沉淀物，得到谷物发酵液；

将蛋白胨，氯化钠，肉汤，谷物发酵液，奶粉、葡萄糖，乳糖、磷源，猪胆盐、丙酮酸钠，氨基酸，抗生素，金属盐，表面活性剂在水中混合均匀，然后调节pH值至7.2-7.5，高温灭菌后，得到乳酸菌培养基。

与现有技术相比，本发明具有以下技术效果：

本发明中首先通过谷物发酵液一直其它细菌的生长，实现乳酸菌的选择性生长，通过在培养基中加入丰富的营养物质，增大乳酸菌的生长活力，促进乳酸菌的生长，从而提高乳酸菌的产量，实现乳酸菌的富集，在工业化生产和检测中具有广阔的应用前景。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

一种富集乳酸杆菌的培养基，包括基础培养基和添加剂，以质量份数计，所述添加剂包括以下物质：

大豆蛋白胨8份，氯化钠6份，羊肉汤35份，大米发酵液48份，奶粉8份、葡萄糖3份，乳糖6份、磷源3份，猪胆盐0.08份、丙酮酸钠1.8份，甘氨酸2.6份，β-内酰胺类抗生素1.6份，铁盐0.3份，表面活性剂0.02份，蒸馏水500份；

本实施例还提供了一种该富集乳酸杆菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：

羊肉汤的制备：将羊肉放入3倍的水中，然后以4℃/min的速率升温至100℃，然后保温60min，冷却至室温后，得到羊肉汤；

大米发酵液的制备：将大米在5倍的水中浸泡24h，然后将大米研磨得到大米浆料，然后在大米浆料中加入酵母，发酵36h后，过滤除去沉淀物，得到大米发酵液；

将大豆蛋白胨，氯化钠，羊肉汤，大米发酵液，奶粉、葡萄糖，乳糖、磷源，猪胆盐、丙酮酸钠，甘氨酸，β-内酰胺类抗生素，铁盐，表面活性剂在水中混合均匀，然后调节pH值至7.4，高温灭菌后，得到乳酸菌培养基。

实施例2

一种富集乳酸杆菌的培养基，包括基础培养基和添加剂，以质量份数计，所述添加剂包括以下物质：

血液蛋白胨5份，氯化钠5份，羊肉汤25份，玉米发酵液36份，奶粉8份，葡萄糖3份，乳糖2份、磷源2.4份，猪胆盐0.05份，丙酮酸钠1.2份，L-丙氨酸0.5份，氨基糖苷类抗生素1.2份，铬盐0.1份，表面活性剂0.01份，蒸馏水500份；

本实施例还提供了一种该富集乳酸杆菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：

羊肉汤的制备：将羊肉放入2倍的水中，然后以3℃/min的速率升温至85℃，然后保温30min，冷却至室温后，得到羊肉汤；

玉米发酵液的制备：将玉米在5倍的水中浸泡12h，然后将玉米研磨得到玉米浆料，然后在玉米浆料中加入酵母，发酵32h后，过滤除去沉淀物，得到玉米发酵液；

将血液蛋白胨，氯化钠，羊肉汤，玉米发酵液，奶粉、葡萄糖，乳糖、磷源，猪胆盐、丙酮酸钠，L-丙氨酸，氨基糖苷类抗生素，铬盐，表面活性剂在水中混合均匀，然后调节pH值至7.3，高温灭菌后，得到乳酸菌培养基。

实施例3

一种富集乳酸杆菌的培养基，包括基础培养基和添加剂，以质量份数计，所述添加剂包括以下物质：

胰蛋白胨10份，氯化钠10份，鸡肉汤42份，高粱发酵液64份，奶粉10份，葡萄糖5份，乳糖8份、磷源3.8份，猪胆盐0.12份，丙酮酸钠2.4份，L-谷氨酰胺0.5～3.6份，多肽类抗生素1.8份，钴盐0.4份，表面活性剂0.03份，蒸馏水500份；

本实施例还提供了一种该富集乳酸杆菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：

鸡肉汤的制备：将鸡肉放入4倍的水中，然后以3℃/min的速率升温至85℃，然后保温30min，冷却至室温后，得到鸡肉汤；

高粱发酵液的制备：将高粱在5倍的水中浸泡5h，然后将高粱研磨得到高粱浆料，然后在高粱浆料中加入酵母，发酵12h后，过滤除去沉淀物，得到高粱发酵液；

将胰蛋白胨，氯化钠，肉汤，高粱发酵液，奶粉、葡萄糖，乳糖、磷源，猪胆盐、丙酮酸钠，L-谷氨酰胺，多肽类抗生素，钴盐，表面活性剂在水中混合均匀，然后调节pH值至7.4，高温灭菌后，得到乳酸菌培养基。

实施例4

一种富集乳酸杆菌的培养基，包括基础培养基和添加剂，以质量份数计，所述添加剂包括以下物质：

肉蛋白胨2份，氯化钠3份，鸭肉汤20份，小麦发酵液20份，奶粉5份，葡萄糖2份，乳糖1份，磷源1.2份，猪胆盐0.02份，丙酮酸钠0.6份，L-精氨酸0.1份，β-内酰胺类抗生素0.1份，硒盐0.05份，表面活性剂0.01份，蒸馏水500份；

本实施例还提供了一种该富集乳酸杆菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：

鸭肉汤的制备：将鸭肉放入3倍的水中，然后以4℃/min的速率升温至90℃，然后保温100min，冷却至室温后，得到鸭肉汤；

小麦发酵液的制备：将小麦在5倍的水中浸泡12h，然后将小麦研磨得到小麦浆料，然后在小麦浆料中加入酵母，发酵32h后，过滤除去沉淀物，得到小麦发酵液；

将肉蛋白胨，氯化钠，鸭肉汤，小麦发酵液，奶粉、葡萄糖，乳糖、磷源，猪胆盐、丙酮酸钠，L-精氨酸，β-内酰胺类抗生素，硒盐，表面活性剂在水中混合均匀，然后调节pH值至7.4，高温灭菌后，得到乳酸菌培养基。

实施例5

一种富集乳酸杆菌的培养基，包括基础培养基和添加剂，以质量份数计，所述添加剂包括以下物质：

大豆蛋白胨12份，氯化钠12份，鱼汤50份，大豆发酵液80份，奶粉12份，葡萄糖8份，乳糖10份，磷源5.6份，猪胆盐0.15份，丙酮酸钠2.9份，L-组氨酸3.8份，多肽类抗生素2份，钒盐0.5份，表面活性剂0.05份，蒸馏水500份；

本实施例还提供了一种该富集乳酸杆菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：

鱼汤的制备：将鱼放入4倍的水中，然后以5℃/min的速率升温至90℃，然后保温150min，冷却至室温后，得到鱼汤；

大豆发酵液的制备：将大豆在6倍的水中浸泡48h，然后将大豆研磨得到大豆浆料，然后在大豆浆料中加入酵母，发酵60h后，过滤除去沉淀物，得到大豆发酵液；

将大豆蛋白胨，氯化钠，鱼汤，大豆发酵液，奶粉、葡萄糖，乳糖、磷源，猪胆盐、丙酮酸钠，L-组氨酸，多肽类抗生素，钒盐，表面活性剂在水中混合均匀，然后调节pH值至7.4，高温灭菌后，得到乳酸菌培养基。

上述描述仅是对本发明部分实施例的描述，并非对本发明范围的任何限定，本行业的普通技术人员可根据本发明对上述实施例做出改进或修改，但均属于本发明保护范围。

Claims (10)

1.一种富集乳酸杆菌的培养基，其特征在于，包括基础培养基和添加剂，以质量份数计，所述添加剂包括以下物质：蛋白胨2～12份，氯化钠3～12份，肉汤20～50份，谷物发酵液20～80份，奶粉5～12份，葡萄糖2～8份，乳糖1～10份，磷源1.2～5.6份，猪胆盐0.02～0.15份，丙酮酸钠0.6～2.9份，氨基酸0.1～3.8份，抗生素0.1～2份，金属盐0.05～0.5份，表面活性剂0.01～0.05份，蒸馏水500份。

2.根据权利要求1所述的富集乳酸杆菌的培养基，其特征在于，以质量份数计，所述添加剂包括以下物质：蛋白胨5～10份，氯化钠5～10份，肉汤25～42份，谷物发酵液36～64份，奶粉8～10份，葡萄糖3～5份，乳糖2～8份、磷源2.4～3.8份，猪胆盐0.05～0.12份，丙酮酸钠1.2～2.4份，氨基酸0.5～3.6份，抗生素1.2～1.8份，金属盐0.1～0.4份，表面活性剂0.01～0.03份，蒸馏水500份。

3.根据权利要求2所述的富集乳酸杆菌的培养基，其特征在于，以质量份数计，所述添加剂包括以下物质：蛋白胨8份，氯化钠6份，肉汤35份，谷物发酵液48份，奶粉8份、葡萄糖3份，乳糖6份、磷源3份，猪胆盐0.08份、丙酮酸钠1.8份，氨基酸2.6份，抗生素1.6份，金属盐0.3份，表面活性剂0.02份，蒸馏水500份。

4.根据权利要求1～3任意一项所述的富集乳酸杆菌的培养基，其特征在于，所述蛋白胨为大豆蛋白胨、血液蛋白胨、胰蛋白胨、肉蛋白胨中的至少一种。

5.根据权利要求4所述的富集乳酸杆菌的培养基，其特征在于，所述肉汤为猪肉汤、牛肉汤、羊肉汤、鸡肉汤、鸭肉汤、鱼汤中的至少一种。

6.根据权利要求4所述的富集乳酸杆菌的培养基，其特征在于，所述谷物发酵液为大米、玉米、高粱、小麦、小米、大豆中的至少一种的发酵液。

7.根据权利要求4所述的富集乳酸杆菌的培养基，其特征在于，所述氨基酸为甘氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-精氨酸、L-组氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-酪氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸、L-天冬氨酸和L-天冬酰胺中的至少一种。

8.根据权利要求1所述的富集乳酸杆菌的培养基，其特征在于，所述抗生素为β-内酰胺类抗生素、氨基糖苷类抗生素、多肽类抗生素中的至少一种。

9.根据权利要求1所述的增菌培养基，其特征在于，所述金属盐为铁盐、铜盐、锌盐、钴盐、锰盐、铬盐、硒盐、镍盐、钼盐、钒盐、锡盐、锶盐中的至少一种。

10.一种根据权利要求1～9任意一项所述的富集乳酸杆菌的培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

肉汤的制备：将肉类放入2～4倍的水中，然后以3～5℃/min的速率升温至85～100℃，然后保温30～180min，冷却至室温后，得到肉汤；

谷物发酵液的制备：将谷物在5～6倍的水中浸泡5～48h，然后将谷物研磨得到谷物浆料，然后在谷物浆料中加入酵母，发酵12～72h后，过滤除去沉淀物，得到谷物发酵液；

将蛋白胨，氯化钠，肉汤，谷物发酵液，奶粉、葡萄糖，乳糖、磷源，猪胆盐、丙酮酸钠，氨基酸，抗生素，金属盐，表面活性剂在水中混合均匀，然后调节pH值至7.2-7.5，高温灭菌后，得到乳酸菌培养基。