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CN106349233B - 3,4-二苯基-4h-1,2,4-三唑衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

3,4-二苯基-4h-1,2,4-三唑衍生物及其制备方法和应用 Download PDF

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CN106349233B
CN106349233B CN201610560660.4A CN201610560660A CN106349233B CN 106349233 B CN106349233 B CN 106349233B CN 201610560660 A CN201610560660 A CN 201610560660A CN 106349233 B CN106349233 B CN 106349233B
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Shanghai Hansoh Biomedical Co Ltd
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Abstract

本发明公开了3,4‑二苯基‑4H‑1,2,4‑三唑衍生物及其制备方法和应用。具体地，本发明涉及具有式(I)结构的3,4‑二苯基‑4H‑1,2,4‑三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其中式(I)中各取代基的定义与说明书中的定义相同。这些结构新颖的化合物具有热休克蛋白HSP90抑制活性，可用于治疗癌症、神经退行性疾病、炎症性疾病、自身免疫性疾病、缺血性脑损伤等用途，具有广阔的应用前景。

Description

3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于药物合成领域，具体涉及一种3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
热休克蛋白对各种细胞应激因素(比如有毒异物、化疗、放射)起到关键的保护作用，可以使参与维持正常细胞功能的关键蛋白避免错误折叠。热休克蛋白HSP90在一系列客户蛋白的构象成熟、稳定及功能化方面起着重要作用，这些客户蛋白很多是属于原癌基因蛋白家族，例如Bcr-Abl,Raf-1,Akt,ErbB2,EGFR,Hif和其他蛋白以及类固醇激素受体。抑制热休克蛋白HSP90可以触发热休克蛋白与客户蛋白复合物解聚，随后导致客户蛋白降解而失去功效，从而可以抑制肿瘤细胞的生长。因此，热休克蛋白HSP90在不同疾病领域已成为重要的靶点，尤其是在癌症及神经退行性疾病中所起的作用已被确证(Solit D.B.,etal.,Drug Discov.Today,2008,13(1-2),38；TaylorD.M.,et al.,Cell StressChaperones,2007,12,.2.,151；Yang Z.,et al.,Nat.Med.,2007,13,.3.,348；Luo W.,etal.,Proc.Natl.Acad.Sci.,2007,104,9511；Macario A.J.,et al.,N.Engl.J.Med.,2005,353,1489；Dou F.,etal.,Int.J.Mol.Sci.,2007,8,51)。
此外，许多HSP90客户蛋白在癌症中过度表达，并且往往以变异形式，导致癌细胞无限增殖和生存；而且，最近发现HSP90对癌细胞间的浸润与扩散也起到重要作用。有趣的是，从肿瘤细胞中分离出的HSP90蛋白比从正常细胞中具有特别高的三磷酸腺苷酶活性，因此，设计特定的化合物可以选择性的抑制肿瘤细胞中的HSP90而不影响正常细胞的功能是可以实现的(Chiosis G.,et al.,ACSChem.Biol.,2006,1,Ii,279；Eustace B.K.,et al.,Nature Cell Biol.,2004,6,.6.,507；Koga F.,et al.,Cell cycle,2007,6,1393)。
因此，HSP90被认为是开发癌症治疗药物的重要靶点，抑制HSP90可以实现对多种癌症的治疗。自从发现两种天然产物，Geldanamycin和Radicicol，都能通过结合到热休克蛋白N端区域的三磷酸腺苷口袋中，人们对HSP90抑制剂的开发越来越感兴趣。天然抗生素Geldanamycin对人类的癌细胞生长显示出了潜在的抑制作用，但是这个化合物明显的毒性阻止了其进一步的临床开发(Whitesell L.,et al.,Cancer Res.,1992,52,1721；SupkoJ.G.,et al.,Cancer Chemother.Pharmacol.,1995,36,305)。
目前FDA还没批准一个HSP90抑制剂作为抗癌药物，而HSP90作为一个很有前景的抗癌药物靶点仍然吸引着医药界去开发新的HSP90抑制剂。
发明内容
为了克服现有技术的不足之处，发明人经过深入研究发现了一种具有式(I)结构的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物。这些结构新颖的化合物具有热休克蛋白HSP90抑制活性，可用于治疗癌症、神经退行性疾病、炎症性疾病、自身免疫性疾病、缺血性脑损伤等用途，具有广阔的应用前景。
本发明的目的在于一方面提供一种具有如下式(I)化合物3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐：
Figure BDA0001051104540000021
其中：
R1选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-C0-8-N(R5)-C(O)R6或-C0-8-N(R6)-C(O)OR5，任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-C0-8-N(R5)-C(O)R6或-C0-8-N(R6)-C(O)OR5的取代基所取代；
R2、R3、R4各自独立的选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-C0-8-N(R5)-C(O)R6或-C0-8-N(R6)-C(O)OR5，任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-C0-8-N(R5)-C(O)R6或-C0-8-N(R6)-C(O)OR5的取代基所取代；
或者，R2与R3、R2与R4和其直接相连的碳原子一起形成6-8元含氮杂环基，任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、羰基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-C0-8-N(R5)-C(O)R6或-C0-8-N(R6)-C(O)OR5的取代基所取代；
R5选自氢、Cl-8烷基、C3-8环烷基或Cl-8烷基羰基；
R6、R7、R8各自独立的选自氢、C1-8烷基、C1-8烷氧基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、C0-8烷基羰基、C0-8烷基氨基或C0-8烷基酰胺基，任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、乙酰胺基、叠氮基、磺酰基、甲磺酰基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C1-8烷氧基、C1-8烷氧羰基、C1-8烷基羰基、C1-8烷基羰基氧基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、氨基、C1-8烷基单取代氨基或C1-8烷基双取代氨基的取代基所取代；
r为0、1或2。
作为进一步优选的方案，所述的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R3、R4各自独自的选自氢。。
作为更进一步优选的方案，所述的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R1选自羟基或-C0-4-C(O)NR7R8。
作为更进一步优选的方案，所述的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自如下结构：
Figure BDA0001051104540000031
其中，R1选自羟基或-C0-4-C(O)NR7R8；R7、R8如权利要求1所定义；R9、R10各自独立的选自氢、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-C0-8-N(R5)-C(O)R6或-C0-8-N(R6)-C(O)OR5。
作为更进一步优选的方案，所述的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R9、R10各自独立的选自氢、氟、甲基、乙基、烯丙基、环丙基、甲氧基、乙氧羰基、乙酰基、乙酰氧基、氨基、氨基甲酰基或乙酰氨基。
作为更进一步优选的方案，所述的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R6、R7、R8各自独立选自氢、氟、甲基、乙基、烯丙基、环丙基、甲氧基、乙酰基、氨基、氨基甲酰基、乙酰氨基、5元杂环基。
作为进一步优选的方案，所述的所述的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，5元杂环基选自以下结构：
Figure BDA0001051104540000041
X1选自氧或硫，X2选自氮、氧或硫。
作为最优选的方案，所述的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自如下化合物：
Figure BDA0001051104540000042
根据化学共振理论，下述几个化合物互为异构体：
Figure BDA0001051104540000043
与
Figure BDA0001051104540000044
Figure BDA0001051104540000051
与
Figure BDA0001051104540000052
以上可以看出，当R1为羟基时，式(I)可以发生以下结构互变：
Figure BDA0001051104540000053
作为进一步优选的方案，所述的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R2与R3、R2与R4和其直接相连的碳原子一起形成7元含氮杂环基，任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、羰基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-C0-8-N(R5)-C(O)R6或-C0-8-N(R6)-C(O)OR5的取代基所取代。
作为更进一步优选的方案，所述的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R2与R3、R2与R4和其直接相连的碳原子一起形成7元含氮杂环基，任选进一步被一个或多个选自羰基、C1-4烷基或C3-6环烷基的取代基所取代。
作为更进一步优选的方案，所述的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R1选自氢、羟基或-C0-4-C(O)NR7R8。
作为更进一步优选的方案，所述的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R7、R8各自独立的选自氢、C1-4烷基、C3-6环烷基、C1-4烷氧基或C0-4烷基氨基。
作为最优选的方案，所述的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自如下化合物：
Figure BDA0001051104540000061
本发明另一方面提供了前述的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐的制备方法，其包括如下步骤：
Figure BDA0001051104540000062
或者，
Figure BDA0001051104540000063
或者，
Figure BDA0001051104540000071
任选的，根据R1、R2、R3、R4定义的不同做进一步反应的步骤；
其中，Pg1为羟基保护基，优选苄基、2-四氢呋喃、甲氧基甲基、乙氧基乙基、C1-8烷基、烯丙基、三甲基硅基、三乙基硅基、三异丙基硅基、叔丁基二甲基硅基或叔丁基二苯基硅基；
Pg2为氨基保护基，优选自苄氧羰基、叔丁氧羰基、9-芴甲氧羰基、三苯甲基、三氟乙酰基、苄基或对甲氧苯基；
X为卤素，优选氯；R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、r如式(I)化合物所定义。
本发明再一方面提供一种药物组合物，其包括治疗有效剂量的前述的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐及可药用的载体。
本发明再一方面提供了前述3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐、或前述药物组合物在制备用于治疗癌症、神经退行性疾病、炎症性疾病、自身免疫性疾病、缺血性脑损伤药物中的应用。
具体实施方式
详细说明：除非有相反陈述，下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。
“C1-8烷基”指包括1至8个碳原子的直链烷基和含支链烷基，烷基指饱和的脂族烃基团，C0-8是指不含碳原子或者C1-8烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2，3-二甲基戊基、2，4-二甲基戊基、2，2-二甲基戊基、3，3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2，3-二甲基己基、2，4-二甲基己基、2，5-二甲基己基、2，2-二甲基己基、3，3-二甲基己基、4，4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基或其各种支链异构体等。
烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R5)-C(O)R6或-N(R6)-C(O)OR5的取代基所取代；
“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，“C3-8环烷基”指包括3至8个碳原子的环烷基，例如：
单环环烷基的非限制性实施例包含环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等。
多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。“螺环烷基”指单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基基或多螺环烷基，螺环烷基的非限制性实施例包含：
Figure BDA0001051104540000081
“稠环烷基”指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，稠环烷基的非限制性实施例包含：
Figure BDA0001051104540000082
“桥环烷基”指任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，桥环烷基的非限制性实施例包含：
Figure BDA0001051104540000091
所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实施例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。
环烷基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R5)-C(O)R6或-N(R6)-C(O)OR5的取代基所取代；
“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。“3-8元杂环基”指包含3至8个环原子的环基，“3-6元杂环基”指包含3至6个环原子的环基，3-8元杂环基优选3-6元杂环基，进一步优选6元杂环基。
单环杂环基的非限制性实施例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。
多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。“螺杂环基”指单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，其余环原子为碳。这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基。螺环烷基的非限制性实施例包含：
Figure BDA0001051104540000092
“稠杂环基”指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，其余环原子为碳。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环烷基，稠杂环基的非限制性实施例包含：
Figure BDA0001051104540000101
“桥杂环基”指任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，其余环原子为碳。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，桥环烷基的非限制性实施例包含：
Figure BDA0001051104540000102
所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，非限制性实施例包含：
Figure BDA0001051104540000103
杂环基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R5)-C(O)R6或-N(R6)-C(O)OR5的取代基所取代；
“芳基”指全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，具有共轭的π电子体系的多环(即其带有相邻对碳原子的环)基团，“C5-10芳基”指含有5-10个碳的全碳芳基，“5-10元芳基”指含有5-10个碳的全碳芳基，例如苯基和萘基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限制性实施例包含：
Figure BDA0001051104540000111
芳基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R5)-C(O)R6或-N(R6)-C(O)OR5的取代基所取代；
“杂芳基”指包含1至4个杂原子的杂芳族体系，所述杂原子包括氮、氧和S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，5-7元杂芳基指含有5-7个环原子的杂芳族体系，“5-10元杂芳基”指含有5-10个环原子的杂芳族体系，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实施例包含：
Figure BDA0001051104540000112
杂芳基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R5)-C(O)R6或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；
“烯基”指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上述定义的烷基，C2-8链烯基指含有2-8个碳的直链或含支链烯基，优选含有2-4个碳的直链或含支链烯基。例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-，2-或3-丁烯基等。
烯基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R5)-C(O)R6或-N(R6)-C(O)OR5的取代基所取代；
“炔基”指至少两个碳原子和至少一个碳-碳三键组成的如上所定义的烷基，C2-8链炔基指含有2-8个碳的直链或含支链炔基，优选含有2-4个碳的直链或含支链炔基。例如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-，2-或3-丁炔基等。
炔基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R5)-C(O)R6或-N(R6)-C(O)OR5的取代基所取代；
“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定义如上所述。C1-8烷氧基指含1-8个碳的烷基氧基，优选含1-4个碳的烷基氧基，非限制性实施例包含甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。
烷氧基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基，优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R5)-C(O)R6或-N(R6)-C(O)OR5的取代基所取代；
“环烷氧基”指-O-(未取代的环烷基)，其中环烷基的定义如上所述。C3-8环烷氧基指含3-8个碳的环烷基氧基，优选含3-6个碳的环烷基氧基，非限制性实施例包含环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。
环烷氧基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R5)-C(O)R6或-N(R6)-C(O)OR5的取代基所取代；
“卤取代的C1-8烷基”指烷基上的氢任选的被氟、氯、溴、碘原子取代的1-8个碳烷基基团，优选烷基上的氢任选的被氟、氯、溴、碘原子取代的1-4个碳烷基基团，例如二氟甲基、二氯甲基、二溴甲基、三氟甲基、三氯甲基、三溴甲基等。
“卤取代的C1-8烷氧基”烷基上的氢任选的被氟、氯、溴、碘原子取代的1-8个碳烷氧基基团，优选烷基上的氢任选的被氟、氯、溴、碘原子取代的1-4个碳烷氧基基团。例如二氟甲氧基、二氯甲氧基、二溴甲氧基、三氟甲氧基、三氯甲氧基、三溴甲氧基等。
“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“C1-8烷氧羰基”指C1-8烷氧基取代的羰基，优选C1-4烷氧基取代的羰基，非限制实例包括甲氧羰基、乙氧羰基、丙氧羰基、异丙氧羰基、正丁氧羰基、异丁氧羰基、叔丁氧羰基或仲丁氧羰基等。
“C1-8烷基羰基”指C1-8烷基取代的羰基，优选C1-4烷基取代的羰基，非限制实例包括乙酰基、丙酰基、异丙酰基、正丁酰基、异丁酰基、叔丁酰基、仲丁酰基、正戊酰基、1，1-二甲基丙酰基、1，2-二甲基丙酰基、2，2-二甲基丙酰基、1-乙基丙酰基、2-甲基丁酰基或3-甲基丁酰基等。
“C1-8烷基羰基氧基”指C1-8烷基取代的羰基氧基，优选C1-4烷基取代的羰基氧基，非限制实例包括甲羰氧基、乙羰氧基、丙羰氧基、异丙羰氧基、正丁羰氧基、异丁羰氧基、叔丁羰氧基或仲丁羰氧基。
“C1-8烷基单取代氨基”指C1-8烷基取代的氨基基团，优选C1-4烷基取代的氨基基团，非限制实例包括甲氨基、乙基氨基、丙基氨基、异丙基氨基、正丁基氨基、异丁基氨基、叔丁基氨基或仲丁基氨基等。
“C1-8烷基双取代氨基”指两个C1-8烷基取代的氨基基团，优选两个C1-4烷基取代的氨基基团，非限制实例包括二甲氨基、二乙基氨基、二丙基氨基、二异丙基氨基、二正丁基氨基、二异丁基氨基、二叔丁基氨基或二仲丁基氨基等。
-C0-8-S(O)rR5优选-C0-4-S(O)rR5；
-C0-8-O-R5优选-C0-4-O-R5；
-C0-8-C(O)OR5优选-C0-,4-C(O)OR5；
-C0-8-C(O)R6优选-C0-4-C(O)R6；
-C0-8-O-C0-8-C(O)R6优选-C0-8-O-C0-4-C(O)R6，进一步优选-C0-4-O-C0-4-C(O)R6；
-C0-8-NR7R8优选-C0-4-NR7R8；
-C0-8-C(O)NR7R8优选-C0-4-C(O)NR7R8，进一步优选为-C(O)NR7R8；
-C0-8-N(R5)-C0-8-C(O)R6优选-C0-8-N(R5)-C0-4-C(O)R6，进一步优选-C0-4-N(R5)-C0-4-C(O)R6；
-C0-8-N(R6)-C(O)OR5优选-C0-4-N(R6)-C(O)OR5。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
下面结合实施例对本发明做进一步详细、完整地说明，但决非限制本发明，本发明也并非仅局限于实施例的内容。
本发明的化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和液质联用色谱(LC-MS)来确定的。NMR化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代甲醇(CD3OD)和氘代氯仿(CDCl3)内标为四甲基硅烷(TMS)。
液质联用色谱LC-MS的测定用Agilent 1200 Infinity Series质谱仪。HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C18 150×4.6mm色谱柱)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，TLC采用的规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。
在无特殊说明的情况下，本发明的所有反应均在连续的磁搅拌下，在干燥氮气或氩气氛下进行，溶剂为干燥溶剂。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
在无特殊说明的情况下，实施例中的溶液是指水溶液。反应的温度为室温。室温为最适宜的反应温度，为20℃～30℃。
实施例一
5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)-N-乙基-4-(4-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-8-基)-4H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺
Figure BDA0001051104540000151
步骤一：2-(羟甲基)-5-硝基苯酚
化合物2-羟基-4-硝基苯甲酸(15g，82mmol)，加入干燥四氢呋喃(100mL)，冰浴下缓慢滴加浓度为10M的硼烷二甲硫醚溶液(82mL，820mmol)，滴加完毕后，升温至室温下反应16h。冷却至0℃，缓慢滴加甲醇淬灭。升温至70℃回流1h，浓缩后加入乙酸乙酯，盐水洗涤，干燥后浓缩得到2-(羟甲基)-5-硝基苯酚(13.5g)，收率为97.5％。
MS m/z(ESI):168.1。
步骤二：2-羟基-4-硝基苯甲醛
将化合物2-(羟甲基)-5-硝基苯酚(13g,77mmol)和二氧化锰(26.7g,308mmol)加入乙酸乙酯(250mL)，加热至80℃反应16h。过滤，滤液浓缩，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:3，v/v)分离得到2-羟基-4-硝基苯甲醛(10.5g)，收率为81.7％。
MS m/z(ESI):166.1。
步骤三：2-((甲氨基)甲基)-5-硝基苯酚
将化合物2-羟基-4-硝基苯甲醛1c(7g,42mmol)溶于甲醇(200mL)，冰浴下缓慢滴加浓度为2M的甲胺四氢呋喃溶液(31mL,63mmol)和氯化锌(5.7g,42mmol)。升温至室温反应2h后，分批加入氰基硼氢化钠(5.3g,84mmol)，继续反应36h，浓缩干后加入乙酸乙酯，水洗，干燥浓缩后得到2-((甲氨基)甲基)-5-硝基苯酚(7.2g)收率为94.4％。
MS m/z(ESI):183.1。
步骤四：2-氯-N-(2-羟基-4-硝基苄基)-N-甲基乙酰胺
将化合物2-((甲氨基)甲基)-5-硝基苯酚(7.2g,34.6mmol)和三乙胺(14mL,103mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，冰浴下缓慢滴加氯乙酰氯(5.2mL,69mmol)后，室温反应1h。加入二氯甲烷稀释，分别用1M的稀盐酸，1M的碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩得到粗产物2-氯-N-(2-羟基-4-硝基苯基)-N-甲基乙酰胺(11g)。
MS m/z(ESI):193.1。
步骤五：4-甲基-8-硝基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮
2-氯-N-(2-羟基-4-硝基苯基)-N-甲基乙酰胺(11g，42.5mmol，粗产品)，碳酸钾(11.8g，85mmol)和碘化钾(3.5g，21.3mmol)加入N，N-二甲基甲酰胺(60mL)。室温反应16h后，过滤，滤液浓缩干，粗品经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30:1，v/v)分离得到4-甲基-8-硝基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮(5.1g)，收率为54％。
MS m/z(ESI):193.1；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ7.85-7.82(dd,J＝2.0,8.0Hz,1H),7.68(d,J＝2.0,1H),7.55-7.53(d,J＝8.4,1H),4.89(s,2H),4.82(s,2H),3.0(s,3H)。
步骤六：4-甲基-8-硝基-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓
4-甲基-8-硝基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮(5g，22.5mmol)溶于四氢呋喃(50mL)中，缓慢滴加浓度为10M的硼烷二甲硫醚溶液(22.5mL,225mmol)。滴加完后，加热80℃反应16h。冷却至0℃，缓慢滴加甲醇淬灭。升温至80℃回流1h，浓缩后加入二氯甲烷，盐水洗涤，干燥后浓缩得到4-甲基-8-硝基-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓(4.1g)，收率为87.5％。
MS m/z(ESI):209.2。
步骤七：4-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-胺
4-甲基-8-硝基-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓(4g，19.2mmol)溶于甲醇(40mL)中，加入干钯碳(400mg)。氢气下室温反应2h，过滤，滤液浓缩后得到4-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-胺(3.2g)，收率为93.5％。
MS m/z(ESI):179.2。
步骤八：2,4-二酚羟基-5-异丙基-N-(4-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)苯硫酰胺
将4-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-胺(3.2g，18mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(50mL)中，加入亚磺酰基二((2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)甲基硫酮)(7.9g，18mmol)，室温反应16h。浓缩，乙酸乙酯稀释，经水洗，盐水洗干燥浓缩后得粗产物，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1至二氯甲烷/甲醇＝30:1至二氯甲烷/甲醇＝10:1，v/v)分离得到2,4-二酚羟基-5-异丙基-N-(4-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)苯硫酰胺(3.1g)，收率46.4％。
MS m/z(ESI):373.1。
步骤九：5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)-N-乙基-4-(4-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺
将化合物2,4-二酚羟基-5-异丙基-N-(4-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)苯硫酰胺(500mg,1.34mmol)，2-肼基-2-氧-N-丙基乙酰胺(229mg,1.75mmol)，氯化汞(1.1g,4.03mmol)以及吡啶(0.325mL,4.03mmol)加入无水二氧六环(12mL)中，微波加热至80℃反应20min，加入乙酸乙酯稀释，过滤除去固体，滤液经饱和碳酸氢钠溶液洗，盐水洗，干燥过滤，浓缩，粗产物经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30:1至二氯甲烷/甲醇＝8:1，v/v)得到粗品，再经反相色谱纯化(乙腈/水＝0至乙腈/水＝40％，v/v)后，得到5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)-N-乙基-4-(4-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(142mg)，收率为23.4％。
MS m/z(ESI):452.5；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ10.45(s,1H),9.73(s,1H),8.96-8.93(t,J＝6.0,1H),7.27-7.25(d,J＝7.6,1H),6.97-6.96(m,2H),6.64(s,1H),6.34(s,1H),3.99-3.97(m,2H),3.67(s,1H),3.21-3.14(m,2H),2.98-2.91(m,1H),2.88-2.87(m,2H),1.07-1.03(t,J＝7.2,3H),0.84(s,3H),0.82(s,3H)。
实施例二
4-(4-环己基-3-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)-5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)-N-乙基-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺
Figure BDA0001051104540000171
步骤一：2-((环丙基胺)甲基)-5-硝基苯酚
将化合物2-羟基-4-硝基苯甲醛(1.8g,10.8mmol)溶于甲醇(50mL)，加入环丙胺(800mg,14mmol)和乙酸(650mg,10.8mmol)。室温反应0.5h后，分批加入氰基硼氢化钠(1.35g,21.6mmol)，继续反应3h，浓缩后加入二氯甲烷，经饱和碳酸氢钠洗涤，食盐水洗，干燥浓缩后得到2-((环丙基胺)甲基)-5-硝基苯酚(2.1g)收率为93.6％。
MS m/z(ESI):209.2。
步骤二：2-氯-N-环丙基-N-(2-羟基-4-硝基苄基)乙酰胺
将化合物2-((环丙基胺)甲基)-5-硝基苯酚(1.6g,7.7mmol)和三乙胺(2.2mL,15.4mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，冰浴下缓慢滴加氯乙酰氯(1.16mL,15.4mmol)后，室温反应2h。加入二氯甲烷稀释，分别用1M的稀盐酸和饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩得到粗产物2-氯-N-(2-羟基-4-硝基苯基)-N-甲基乙酰胺(2.2g)，收率为100％。
MS m/z(ESI):219.3。
步骤三：4-环己基-8-硝基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮
2-氯-N-环丙基-N-(2-羟基-4-硝基苯基)-N-乙酰胺(2.2g，7.7mmol，粗产品)，碳酸钾(2.1g，15.4mmol)和碘化钾(1.28g，7.7mmol)加入N，N-二甲基甲酰胺(20mL)。室温反应16h后，过滤，滤液浓缩干，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1至石油醚/乙酸乙酯＝1:3，v/v)分离得到4-环己基-8-硝基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮(1.6g)，收率为83％。
MS m/z(ESI):219.1。
步骤四：8-氨基-4-环己基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮
4-环己基-8-硝基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮2d(1.6g，6.45mmol)溶于甲醇(20mL)中，加入干钯碳(160mg)。氢气下室温反应16h，过滤，滤液浓缩后得到8-氨基-4-环己基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮(1.4g)，收率为99％。
MS m/z(ESI):219.3。
步骤五：N-(4-环己基3-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)-2,4-二酚羟基-5-异丙基-苯硫酰胺
将8-氨基-4-环己基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮(1.3g，6mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(40mL)中，加入亚磺酰基二((2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)甲基硫酮)(2.6g，6mmol)，室温反应2h。浓缩，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5:1至石油醚/乙酸乙酯＝1:2，v/v)分离得到N-(4-环己基3-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)-2,4-二酚羟基-5-异丙基-苯硫酰胺(1.5g)，收率为61.1％。
MS m/z(ESI):413.2。
步骤六：4-(4-环己基-3-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)-5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)-N-乙基-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺
将化合物N-(4-环己基3-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)-2,4-二酚羟基-5-异丙基-苯硫酰胺(500mg,1.21mmol)，2-肼基-2-氧-N-丙基乙酰胺(190mg,1.45mmol)，氯化汞(987mg,3.63mmol)以及吡啶(0.3mL,3.63mmol)加入无水二氧六环(12mL)中，微波加热至80℃反应20min，过滤，滤液浓缩后加入乙酸乙酯溶解，分别经1M的盐酸水溶液，1M的硫化钠水溶液和饱和食盐水洗涤，干燥浓缩，粗产物加入甲醇打浆得到4-(4-环己基-3-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)-5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)-N-乙基-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(107mg)，收率为17.9％。
MS m/z(ESI):492.3；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ10.59(s,1H),9.76(s,1H),8.95-8.92(t,J＝5.2,1H),7.36-7.34(d,J＝7.6,1H),6.97-6.94(m,2H),6.59(s,1H),6.35(s,1H),4.74(s,2H),4.70(s,2H),3.21-3.14(m,2H),2.96-2.89(m,1H),2.85-2.79(m,1H),2.31(s,3H),1.07-1.03(t,J＝7.2,3H),0.88(s,3H),0.87(s,3H)。
实施例三
5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)-N-(3-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)-N-乙基-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺
Figure BDA0001051104540000191
步骤一：2-(((2,4-二甲氧基苄基)氨)甲基)-5-硝基苯酚
将化合物2-羟基-4-硝基苯甲醛(4g,23.9mmol)溶于甲醇(100mL)，加入2,4-二甲氧基苄胺(4.8g,28.7mmol)和乙酸(1.44g,23.9mmol)。室温反应0.5h后，分批加入氰基硼氢化钠(3g,47.8mmol)，继续反应2h，浓缩后加入二氯甲烷，经饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗，干燥浓缩，粗品打浆(二氯甲烷/石油醚＝1:10)得到2-(((2,4-二甲氧基苄基)氨)甲基)-5-硝基苯酚(6.5g)收率为85.3％。
MS m/z(ESI):319.1。
步骤二：2-氯-N-(2,4-二甲氧基苄基)-N-(2-羟基-4-硝基苄基)乙酰胺
将化合物2-(((2,4-二甲氧基苄基)氨)甲基)-5-硝基苯酚(6.5g,20.4mmol)和三乙胺(5.7mL,40.8mmol)溶于二氯甲烷(100mL)中，冰浴下缓慢滴加氯乙酰氯(3.1mL,40.8mmol)后，室温反应1h。加入二氯甲烷稀释，分别用1M的稀盐酸和饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩得到粗产物2-氯-N-(2,4-二甲氧基苄基)-N-(2-羟基-4-硝基苄基)乙酰胺(7.8g)，收率为96.8％。
MS m/z(ESI):329.2。
步骤三：4-(2,4-二甲氧基苄基)-8-硝基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮
2-氯-N-(2,4-二甲氧基苄基)-N-(2-羟基-4-硝基苄基)乙酰胺(7.8g，19.8mmol，粗产品)，碳酸钾(5.5g，39.6mmol)和碘化钾(3.3g，19.8mmol)加入N，N-二甲基甲酰胺(80mL)。室温反应16h后，过滤，滤液浓缩得到4-(2,4-二甲氧基苄基)-8-硝基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮(6.9g)，收率为97.5％。
MS m/z(ESI):319.1。
步骤四：8-硝基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮
将4-(2,4-二甲氧基苄基)-8-硝基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮(6.9g，19.3mmol)溶于三氟乙酸(30mL),微波加热至60℃反应20min，浓缩，加入二氯甲烷溶解，经饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗，干燥浓缩，粗品柱层析(二氯甲烷/甲醇＝50:1，v/v)分离得到8-硝基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮(3.5g)，收率为87.3％。
MS m/z(ESI):179.2。
步骤五：8-氨基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮
8-硝基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮(1g，4.8mmol)溶于甲醇和四氢呋喃的混合溶液中(甲醇/四氢呋喃＝1:1，v/v，50mL)中，加入雷尼镍(200mg)。氢气下室温反应2h，过滤，滤液浓缩后得到8-氨基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮(720mg)，收率为84.1％。
MS m/z(ESI):179.2。
步骤六：2,4-二酚羟基-5-异丙基-N-(3-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)苯硫酰胺
将8-氨基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮(406mg，2.28mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入亚磺酰基二((2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)甲基硫酮)(500mg，1.14mmol)，室温反应2h。浓缩，粗品经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝40:1，v/v)分离得到2,4-二酚羟基-5-异丙基-N-(3-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)苯硫酰胺(320mg)，收率为37.7％。
MS m/z(ESI):373.1。
步骤七：5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)-N-(3-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)-N-乙基-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺
将化合物2,4-二酚羟基-5-异丙基-N-(3-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)苯硫酰胺(180mg,0.483mmol)，2-肼基-2-氧-N-丙基乙酰胺(76mg,0.58mmol)，氯化汞(394mg,1.45mmol)以及吡啶(0.12mL,1.45mmol)加入无水二氧六环(10mL)中，微波加热至80℃反应20min，过滤，滤液浓缩后粗品经反相色谱纯化(乙腈/水＝0至乙腈/水＝28％，v/v)得到5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)-N-(3-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)-N-乙基-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(43mg)，收率为19.7％。
MS m/z(ESI):452.2；
1H NMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ7.42-7.40(d,J＝8.0,1H),7.17(d,J＝2.0,1H),7.11-7.09(dd,J＝2.0,8.0,1H),6.69(s,1H),6.33(s,1H),4.66(s,2H),4.46(s,2H),3.33-3.31(m,2H),3.06-3.00(m,1H),1.21-1.18(t,J＝7.2,3H),0.92(s,3H),0.91(s,3H)。
实施例四
5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基)-N-(4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)-N-乙基-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺
Figure BDA0001051104540000211
步骤一：4-甲基-8-硝基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮
将8-硝基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮溶于N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入碳酸铯(3.8g，11.6mmol)和碘甲烷(1.8mL，2.9mmol)。室温反应16h，过滤，滤液浓缩，粗品经柱层析(二氯甲烷)分离得到4-甲基-8-硝基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮(800mg)，收率为62.5％。
MS m/z(ESI):193.1。
步骤二：8-氨基-4-甲基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮
4-甲基-8-硝基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮(800mg，3.6mmol)溶于甲醇(50mL)中，加入干钯碳(80mg)。氢气下室温反应4h，过滤，滤液浓缩后得到8-氨基-4-甲基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮(650mg)，收率为93.9％。
MS m/z(ESI):193.1。
步骤三：2,4-二酚羟基-5-异丙基-N-(4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)苯硫酰胺
将8-氨基-4-甲基-4,5-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-3(2氢)-酮(600mg，3.12mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(15mL)中，加入亚磺酰基二((2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)甲基硫酮)(1.37g，3.12mmol)，室温反应2h。浓缩，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2:1至二氯甲烷/甲醇＝50:1，v/v)分离得到2,4-二酚羟基-5-异丙基-N-(4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)苯硫酰胺(1g)，收率为82.9％。
MS m/z(ESI):387.3。
步骤四：5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基)-N-(4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)-N-乙基-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺
将化合物2,4-二酚羟基-5-异丙基-N-(4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)苯硫酰胺(1g,2.59mmol)，2-肼基-2-氧-N-丙基乙酰胺(441mg,3.36mmol)，氯化汞(2.11g,7.76mmol)以及吡啶(0.62mL,7.76mmol)加入无水二氧六环(30mL)中，微波加热至80℃反应20min，过滤，滤液浓缩后粗品加入二氯甲烷溶解，分别用乙二胺四乙酸二钠水溶液和饱和食盐水洗涤，干燥浓缩，粗品经甲醇打浆得到5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)-N-(4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-8-基)-N-乙基-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(250mg)，收率为20.8％。
MS m/z(ESI):466.1；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ10.49(s,1H),9.73(s,1H),8.95-8.92(t,J＝6.0,1H),7.32-7.30(d,J＝8.0,1H),6.99(d,J＝2.0,1H),6.94-6.92(dd,J＝2.0,8.0,1H),6.59(s,1H),6.34(s,1H),4.77(s,2H),4.72(s,2H),3.21-3.15(m,2H),2.99(s,3H),2.97-2.89(m,1H),1.07-1.04(t,J＝7.2,3H),0.85(s,3H),0.83(s,3H)。
实施例五
5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基)-N-乙基-(4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-8-基-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺和5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基)-N-乙基-(4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-7-基-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺
Figure BDA0001051104540000221
步骤一：3-(2-硝基苯氧基)丙酸
将2-硝基苯酚5a(10g,71.9mmol)溶于1M的氢氧化钠水溶液(100mL)中，加入3-溴丙酸(16.5g,118mmol)。加热至70℃反应14h，用1M的稀盐酸水溶液调至中性(PH＝6-7),乙酸乙酯萃取，干燥浓缩，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1至石油醚/乙酸乙酯＝1:2，v/v)分离得到3-(2-硝基苯氧基)丙酸(4g)，收率为31％。
MS m/z(ESI):182.1。
步骤二：3-(2-氨基苯氧基)丙酸
3-(2-硝基苯氧基)丙酸(4g，19.1mmol)溶于乙醇(40mL)中，加入干钯碳(300mg)。氢气下室温反应14h，过滤，滤液浓缩后得到3-(2-氨基苯氧基)丙酸5c(3.2g)，收率为93.3％。
MS m/z(ESI):182.1。
步骤三：2,3-二氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-4(5氢)-酮
将3-(2-氨基苯氧基)丙酸(2g,11mmol)和二环己基碳二亚胺(2.5g,12.1mmol)加入到无水二氯甲烷(200mL)中，室温反应16h，浓缩，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝6:1至石油醚/乙酸乙酯＝2:1，v/v)分离得到2,3-二氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-4(5氢)-酮(1.5g)，收率为83.3％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ9.71(s,1H),7.08-7.00(m,5H),4.37-4.34(t,J＝6.0,2H),2.70-2.67(t,J＝6.0,2H)。
步骤四：8-硝基-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-4(5氢)-酮和7-硝基-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-4(5氢)-酮
将2,3-二氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-4(5氢)-酮(1g,6.13mmol)溶于三氟乙酸(30mL)中，冰浴下加入硝酸钾(1.86g,18.39mmol)，室温反应2h。浓缩后，加入水，用碳酸氢钠水溶液调至中性，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩得到8-硝基-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-4(5氢)-酮和7-硝基-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-4(5氢)-酮的混合物(880mg)，收率为68.9％。
MS m/z(ESI):179.2。
步骤五：8-氨基-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-4(5氢)-酮和7-氨基-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-4(5氢)-酮
将8-硝基-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-4(5氢)-酮和7-硝基-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-4(5氢)-酮的混合物(500mg，2.4mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入干钯碳(100mg)。氢气下室温反应16h，过滤，滤液浓缩后得到8-氨基-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-4(5氢)-酮和7-氨基-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-4(5氢)-酮的混合物(380mg)，收率为88.8％。
MS m/z(ESI):179.2。
步骤六：2,4-二酚羟基-5-异丙基-N-(4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-8-基)苯硫酰胺和2,4-二酚羟基-5-异丙基-N-(4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-7-基)苯硫酰胺
将8-氨基-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-4(5氢)-酮和7-氨基-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-4(5氢)-酮的混合物(300mg,1.68mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入亚磺酰基二((2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)甲基硫酮)(370mg，0.84mmol)，室温反应16h。浓缩，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1，v/v)分离得到2,4-二酚羟基-5-异丙基-N-(4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-8-基)苯硫酰胺和2,4-二酚羟基-5-异丙基-N-(4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-7-基)苯硫酰胺混合物(180mg)，收率57.5％。
MS m/z(ESI):373.1。
步骤七：5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基)-N-乙基-(4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-8-基-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺和5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基)-N-乙基-(4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-7-基-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺
将2,4-二酚羟基-5-异丙基-N-(4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-8-基)苯硫酰胺和2,4-二酚羟基-5-异丙基-N-(4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-7-基)苯硫酰胺混合物(180mg,0.48mmol)，2-肼基-2-氧-N-丙基乙酰胺(76mg,0.58mmol)，氯化汞(394mg,1.45mmol)以及吡啶(0.12mL,1.45mmol)加入无水二氧六环(10mL)中，微波加热至80℃反应20min，过滤，滤液浓缩后粗品加入二氯甲烷溶解，分别用稀盐酸水溶液和饱和食盐水洗涤，干燥浓缩，粗品经反相色谱纯化(乙腈/水＝0至乙腈/水＝32％，v/v)分别得到5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基)-N-乙基-(4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-8-基-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(32mg)，收率为14.7％。5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基)-N-乙基-(4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-7-基-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(9mg)，收率为4.1％。
5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基)-N-乙基-(4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-8-基-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺。
MS m/z(ESI):452.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ10.46(s,1H),9.95(s,1H),9.74(s,1H),8.95-8.92(t,J＝6.0,1H),7.10-7.08(d,J＝8.4,1H),7.04-7.03(d,J＝2.0,1H),6.98-6.95(dd,J＝2.4,8.4,1H),6.67(s,1H),6.34(s,1H),4.34-4.31(t,J＝5.6,2H),3.22-3.15(m,2H),2.99-2.92(m,1H),2.76-2.74(t,J＝5.6,2H),1.07-1.04(t,J＝7.2,3H),0.91(s,3H),0.89(s,3H)。
5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基)-N-乙基-(4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-7-基-4氢-1,2,4-三唑-3-甲酰胺。
MS m/z(ESI):452.2；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ10.53(s,1H),9.86(s,1H),9.78(s,1H),8.99-8.96(t,J＝6.0,1H),7.06-7.04(d,J＝8.4,1H),7.04-7.03(d,J＝2.0,1H),6.99-6.97(dd,J＝2.4,8.4,1H),6.63(s,1H),6.35(s,1H),4.38-4.35(t,J＝5.2,2H),3.22-3.15(m,2H),2.99-2.92(m,1H),2.77-2.74(t,J＝5.2,2H),1.08-1.04(t,J＝7.2,3H),0.90(s,3H),0.88(s,3H)。
实施例六
N-(4-(3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-5-羰基-1,5-二氢-4H-1,2,4-三唑-4-基)苯甲基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
Figure BDA0001051104540000251
步骤一:2-(4-硝基苯甲基)异二氢吲哚-1,3-二酮
将1-(溴甲基)-4-硝基苯(5.5g，25.5mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(30ml)，然后加入邻苯二甲酸亚胺钾(9.5g，51.3mmol)。反应混合物在室温下搅拌3小时，然后加入水(250ml)。过滤得到固体，再用水(15ml*3)淋洗，固体干燥后得到2-(4-硝基苯甲基)异二氢吲哚-1,3-二酮(9.5g粗品)，然后直接进行下一步。
1H NMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ8.23(d,2H),7.92(dd,2H),7.85(dd,2H),7.62(d,2H),4.96(s,2H)。
步骤二:(4-硝基苯基)甲胺
将2-(4-硝基苯甲基)异二氢吲哚-1,3-二酮(5g，17mmol)溶于四氢呋喃(30ml)，然后在室温下加入水合肼(4g，68mmol，85％水溶液)，反应物加热到80℃并持续12h。然后直接浓缩除去溶剂，然后加入水(200ml)，乙酸乙酯(50ml*2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，然后浓缩得到(4-硝基苯基)甲胺(1.5g，52％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ8.17(d,2H),7.60(d,2H),3.81(s,2H),1.90-2.05(br,2H)。
步骤三:(4-硝基苄基)氨基甲酸叔-丁基酯
将(4-硝基苯基)甲胺(1.4g，9.2mmol)溶于二氯甲烷(35ml)，然后在室温下加入三乙胺(2.8g，27.6mmol)，然后再滴加二碳酸二叔丁酯(3.0g，13.8mmol)。反应物加热回流3小时，然后浓缩除溶剂，得到粗品。粗品用硅胶柱纯化得到(4-硝基苄基)氨基甲酸叔-丁基酯(2.3g，100％收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3,ppm):δ8.12(d,2H),7.37(d,2H)，4.85-5.00(br,1H),4.35(d,2H)，1.40(s,9H)。
步骤四:(4-氨基苄基)氨基甲酸叔-丁基酯
在氮气下，将钯碳(200mg)加入到(4-硝基苄基)氨基甲酸叔-丁基酯(2.4g，9.5mmol)的乙醇(40ml)溶液中。反应液在氢气(1atm)环境中反应室温3小时。过滤除去催化剂，有机相蒸干得到(4-氨基苄基)氨基甲酸叔-丁基酯(1.94g，91％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ7.14(m，1H)，6.78(d,2H),6.49(d,2H),4.91(s,2H),3.91(d,2H)，1.37(s,9H)。
步骤五:(4-((苯氧羰基)氨基)苄基)氨基甲酸叔-丁基酯
在0℃氮气保护下，将氯甲酸苯酯(1.09ml，8.7mmol)滴加到(4-氨基苄基)氨基甲酸叔-丁基酯(1.94g，8.7mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液中。反应物搅拌5分钟在0℃氮气保护下，然后吡啶(0.85ml，10.5mmol)滴加到反应体系中，然后再在0℃氮气保护下搅拌30分钟。水(50ml)加入到反应体系中，分离有机相，无水硫酸钠干燥，蒸干，得到(4-((苯氧羰基)氨基)苄基)氨基甲酸叔-丁基酯粗品(2.9g)，粗品直接用于下一步。
MS m/z(ESI):343.1。
步骤六:4-(肼-1-甲酰氨基)苄基)氨基甲酸叔-丁基酯
将水合肼(10ml，85％水溶液)加入到(4-((苯氧羰基)氨基)苄基)氨基甲酸叔-丁基酯(2.9g，8.5mmol)的二氧六环(20ml)溶液中。反应物加热到80℃，保持3小时，然后蒸干溶剂得到粗品。粗品用水(20ml*3)洗涤得到粗品，粗品在油泵下干燥得到4-(肼-1-甲酰氨基)苄基)氨基甲酸叔-丁基酯(2g，84％)。
MS m/z(ESI):281.1。
步骤七：(E)-(4-(2-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯亚甲基)肼-1-甲酰氨基)苄基)氨基甲酸叔-丁基酯
将4-(肼-1-甲酰氨基)苄基)氨基甲酸叔-丁基酯(1.3g,3.57mmol)和5-异丙基-2,4-二甲氧基苯甲醛(1g,3.57mmol)溶于乙醇(50mL)中，加入乙酸(0.1mL)，升温至90℃反应2h后，浓缩得到(E)-(4-(2-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯亚甲基)肼-1-甲酰氨基)苄基)氨基甲酸叔-丁基酯粗品(2.2g)，粗品直接用于下一步反应。
MSm/z(ESI):623.3。
步骤八：(4-(3-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯基)-5-羰基-1,5-二氢-4H-1,2,4-三唑-4-基)苄基)氨基甲酸叔-丁基酯
将粗品(E)-(4-(2-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯亚甲基)肼-1-甲酰氨基)苄基)氨基甲酸叔-丁基酯(2.2g，3.53mmol)溶于乙醇(40mL)中，加入六氰合铁酸三钾(2.33g,7.07mmol)和氢氧化钠(424mg，10.6mmol)。加热至100℃反应8h后，将反应液浓缩，粗品经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30:1，v/v)分离得到(4-(3-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯基)-5-羰基-1,5-二氢-4H-1,2,4-三唑-4-基)苄基)氨基甲酸叔-丁基酯(1.55g)，收率为71％。
MS m/z(ESI):621.3。
步骤九：4-(4-(氨基甲基)苯基)-5-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯基)-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-酮
将粗品(4-(3-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯基)-5-羰基-1,5-二氢-4H-1,2,4-三唑-4-基)苄基)氨基甲酸叔-丁基酯(800mg，1.29mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入三氟乙酸(2mL)室温反应3h后，将反应液浓缩，粗品加入二氯甲烷溶解，有机相分别用碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗涤，干燥浓缩得到4-(4-(氨基甲基)苯基)-5-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯基)-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-酮(650mg)，收率为96.9％。
MS m/z(ESI):521.1。
步骤十:5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-羧酸乙酯
在0℃氮气保护下,将草酰氯单乙酯(10g，74mmol)滴加到5-甲基-2H-四唑(6.25g，74mmol)和三乙胺(7.5g，74mmol)的甲苯(80ml)溶液中。反应液在0℃氮气保护下搅拌30分钟，固体过滤除去，固体用冷甲苯(10ml*2)淋洗。在50℃氮气保护下，将上述溶液滴加到甲苯(20ml)中，并保持温度在50℃，滴加完毕后在70℃加热1小时，然后冷却到室温，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，有机相直接过柱得到5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-羧酸乙酯(6.8g，59％收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3,ppm):δ4.51(m,2H),2.65(s,3H),1.46(m,3H)。
步骤十一:5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-羧酸钾
在0℃下，将KOH水溶液(5ml，780mg，13.5mmol)滴加到5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-羧酸乙酯(2.1g，13.5mmol)的乙醇(50ml)溶液中。然后在0℃下搅拌1小时，过滤得到固体，固体用乙醇(20ml)洗涤，得到5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-羧酸钾(1.6g，72％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ2.43(s，3H)。
步骤十二:5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氯
将5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-羧酸钾(500mg，3mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，冰浴下加入草酰氯(0.76mL，9mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(0.025mL)。室温反应2h后，将反应液浓缩，粗品直接用于下一步反应。
步骤十三：N-(4-(3-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯基)-5-羰基-1,5-二氢-4H-1,2,4-三唑-4-基)苯甲基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
将粗品4-(4-(氨基甲基)苯基)-5-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯基)-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-酮(650mg，1.25mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三乙胺(0.5mL，3.75mmol)和5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氯(660mg，3mmol)，室温反应1h后，将反应液浓缩，粗品经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30:1，v/v)分离得到N-(4-(3-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯基)-5-羰基-1,5-二氢-4H-1,2,4-三唑-4-基)苯甲基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(405mg)，收率为51.4％。
MS m/z(ESI):631.3。
步骤十四：N-(4-(3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-5-羰基-1,5-二氢-4H-1,2,4-三唑-4-基)苯甲基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
将N-(4-(3-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯基)-5-羰基-1,5-二氢-4H-1,2,4-三唑-4-基)苯甲基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(400mg，0.63mmol)溶于乙醇(10mL)中，加入干钯碳(40mg)。氢气下室温反应2h，过滤，滤液浓缩后得到N-(4-(3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-5-羰基-1,5-二氢-4H-1,2,4-三唑-4-基)苯甲基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(61mg)，收率为24.4％。
MS m/z(ESI):451.1；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ11.91(br,1H),9.81(s,1H),9.61(s,1H),9.39(s,1H),7.30-7.29(d,J＝6.4,2H),7.13-7.12(d,J＝6.4,2H),6.85(s,1H),6.26(s,1H),4.43(s,2H),2.98-2.96(m,1H),2.57(s,3H),0.99(s,3H),0.98(s,3H)。
实施例七
5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-N-甲氧基-4-(4-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-8-基)-4H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺
Figure BDA0001051104540000281
步骤一：5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-N-甲氧基-4-(4-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-8-基)-4H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺
将2,4-二羟基-5-异丙基-N-(4-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-8-基)苯并硫代酰胺(100mg,0.27mmol)，2-肼基-N-甲氧基-2-羰基乙酰胺47mg,0.35mmol)，氯化汞(219mg,0.81mmol)以及吡啶(0.09mL,0.81mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，微波加热至80℃反应20min，过滤除去固体，滤液浓缩，粗产物反相色谱纯化(乙腈/水＝0至乙腈/水＝25％，v/v)得到化合物9(1.4mg)，收率为1.2％。
MS m/z(ESI):454.1；
1H NMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ7.25-7.25(d,J＝8.0,1H),6.94-6.91(m,2H),6.67(s,1H),6.19(s,1H),4.01-4.00(m,2H),3.75(m,2H),3.65(s,3H),2.96-2.95(m,2H),2.95-2.94(m,1H),2.37(s,3H),0.87(s,3H),0.85(s,3H)。
实施例八
5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1-H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-酰胺
Figure BDA0001051104540000291
步骤一:2-乙胺基-2-氧代乙酸乙酯
在0℃下,将三乙胺(7.78g,76.9mmol)和乙胺盐酸盐(2.98g,36.6mmol)溶解于二氯甲烷中(100mL),将草酰氯单乙酯(5.0g,36.6mmol)缓慢滴加于反应体系中，零度下反应2小时。反应结束后，过滤，反应液用二氯甲烷稀释，然后依次用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，盐水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得2-乙氨基-2-氧代乙酸乙酯(5g)。
MS m/z(ESI):146(M+1)。
步骤二:N-乙基-2-肼基-2-氧代酰胺
室温下，将2-乙胺基-2-氧代乙酸乙酯(5.0g,34.5mmol)溶解于乙醇(100mL)中,然后加入水合肼(80％,10.8g,172mmol),加热回流过夜，反应结束后，将体系冷却至室温。在减压下将乙醇旋除，残留物用石油醚/乙酸乙酯稀释(1:1,V/V,30mL),白色固体析出，过滤，空气下干燥得N-乙基-2-肼基-2-氧代酰胺(2.0g)，收率44％。
MS m/z(ESI):132(M+1)。
步骤三:7-硝基-1,3,4,5-四氢-2H-苯[b]氮杂卓-2-酮
在0℃下,将1,3,4,5-四氢-2H-苯[b]氮杂卓-2-酮(2.10g,13mmol)溶解于浓硫酸中(10mL),然后将浓硝酸(1.1mL,15.6mmol)滴加到反应液中，反应半小时。反应结束后将反应液倒入冰水中，过滤，固体用石油醚/乙酸乙酯洗涤(40mL,V/V:1:1)，空气中干燥得7-硝基-1,3,4,5-四氢-2H-苯[b]氮杂卓-2-酮(2.10g),收率78％。
MS m/z(ESI):207(M+1)；
1H NMR(400M,DMSO-d6,ppm)δ10.08(s,1H),8.19(d,J＝2.8Hz,1H),8.11(dd,J1＝2.8Hz,J2＝8.4Hz,1H),7.15(d J＝8.4Hz,1H),2.82(t,J＝7.2Hz,2H),2.24(t,J＝7.2Hz,2H),2.16(t,J＝7.2Hz,2H)。
步骤四:7-胺基-1,3,4,5-四氢-2H-苯[b]氮杂卓-2-酮
室温下，将7-硝基-1,3,4,5-四氢-2H-苯[b]氮杂卓-2-酮(1.60g,10mmol)溶解于四氢呋喃(60mL)和甲醇(20mL)中，加入钯碳(0.16g),氢气氛围下室温搅拌过夜。反应结束后过滤，用乙酸乙酯洗涤，溶剂在减压下旋干得7-胺基-1,3,4,5-四氢-2H-苯[b]氮杂卓-2-酮(1.0g)，收率78％。
MS m/z(ESI):177(M+1)。
步骤五:2,4-二羟基-5-异丙基苯并二硫代酸
将4-异丙基-1,3-苯二酚(25g,164.3mmol)和乙基黄原酸钾(29g,180.7mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(300mL)中，加热至100℃，反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水，乙酸乙酯萃取，然后水相用0.1M的稀盐酸溶液调至酸性(PH＝2-3)，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，浓缩得到2,4-二羟基-5-异丙基苯并二硫代酸(30g)，收率80％。
MS m/z(ESI):267(M+K+)。
步骤六:亚磺基双((2,4-二羟基-5-异丙基苯基)甲烷硫酮)
在0℃下，将2,4-二羟基-5-异丙基苯并二硫代酸(2.0g,8.77mmol)溶解于无水乙醚(40mL)中，往体系中通二氧化碳气体，持续10分钟。然后将二氯亚砜(2.08g,17.5mmol)滴加到反应体系中，滴加结束后，继续搅拌1小时，过滤，固体用无水乙醚洗涤，空气中干燥得亚磺基双((2,4-二羟基-5-异丙基苯基)甲烷硫酮)(1.50g)，收率80％。
步骤七:2,4-二羟基-5-异丙基-N-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)苯并硫代酰胺
室温下，将亚磺基双((2,4-二羟基-5-异丙基苯基)甲烷硫酮)(1.8g,4.11mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(25mL)中，然后将7-胺基-1,3,4,5-四氢-2H-苯[b]氮杂卓-2-酮(1.45g,8.22mmol)加入到反应体系中，室温搅拌一小时。反应体系用乙酸乙酯(50mL)稀释，然后用盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。粗产物用柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯(V/V):1/1---二氯甲烷/甲醇(V/V):25/1)得2,4-二羟基-5-异丙基-N-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)苯并硫代酰胺(1.30g)，收率70％。
MS m/z(ESI):371(M+1)。
步骤八:5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1-H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-酰胺
在30mL微波管中依次加入2,4-二羟基-5-异丙基-N-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)苯并硫代酰胺(0.70g,1.89mmol),N-乙基-2-肼基-2-氧代酰胺(0.37g,2.84mmol),氯化汞(0.62g,2.27mmol),吡啶(0.30g,3.78mmol)和二氧六环(15mL),在80度下微波加热20分钟。冷却至室温，过滤，乙酸乙酯洗涤，有机相用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物用柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇:V/V:25/1)，然后再用反相进一步纯化得5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1-H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-酰胺(130mg)，收率7.1％。
MS m/z(ESI):450(M+1)；
1H NMR(400M,CD3OD,ppm)δ7.32(d,J＝2.4Hz,1H),7.26(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.4Hz,1H),δ7.14(d,J＝8.4Hz,1H),6.74(s,1H),6.35(s,1H),3.35(q,J＝7.2Hz,2H),3.06-3.08(m,1H),2.81(t,J＝7.2Hz,2H),2.39(t,J＝7.2Hz,2H),2.25(m,2H),1.20(t,J＝7.2Hz,3H),0.93(s,3H),0.91(s,3H)。
实施例九
5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4-(1-甲基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1-H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-酰胺
Figure BDA0001051104540000321
步骤一:1-甲基-7-硝基-1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮
室温下，将7-硝基-1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮(4.0g,19.4mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺中(30mL),然后依次加入碳酸铯(9.50g,29.1mmol)和碘甲烷(13.78g,97mmol),室温搅拌过夜。反应液用乙酸乙酯(120mL)稀释，盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干,粗产物用柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯:V/V:10/1---5/1)得1-甲基-7-硝基-1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮(2.80g,)，收率63％。
MSm/z(ESI):221(M+1)。
步骤二:1-甲基-7-胺基-1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮
室温下，将1-甲基-7-硝基-1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮(2.80g,12.7mmol)溶解于乙醇中(30mL),加入钯碳(0.33g),室温搅拌过夜。反应结束后用硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤，溶剂在减压下旋干得1-甲基-7-胺基-1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮(2.20g)，收率91％。
MS m/z(ESI):191(M+1)。
步骤三:2,4-二羟基-5-异丙基-N-(1-甲基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)苯并硫代酰胺
室温下，将亚磺基双((2,4-二羟基-5-异丙基苯基)甲烷硫酮)(1.7g,3.88mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，然后将1-甲基-7-胺基-1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮(0.88g,4.66mmol)加入到反应体系中，室温搅拌一小时。反应体系用乙酸乙酯(50mL)稀释，然后用盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。粗产物用柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯(V/V):2/1---二氯甲烷/甲醇(V/V):25/1)得2,4-二羟基-5-异丙基-N-(1-甲基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)苯并硫代酰胺(1.40g)，收率93％。
MSm/z(ESI):385(M+1)。
步骤四:5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4-(1-甲基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1-H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-酰胺
在10mL微波管中依次加入2,4-二羟基-5-异丙基-N-(1-甲基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)苯并硫代酰胺(0.16g,0.42mmol),N-乙基-2-肼基-2-氧代酰胺(0.065g,0.50mmol),氯化汞(0.34g,1.26mmol),吡啶(0.05g,0.63mmol)和二氧六环(5mL),在80度下微波加热20分钟。冷却至室温，过滤，乙酸乙酯洗涤，有机相用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物用柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯(V/V):25/1)，然后再用反相进一步纯化得5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4-(1-甲基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1-H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-酰胺(15mg)，收率7.5％。
MS m/z(ESI):464(M+1)；
1H NMR(400M,CD3OD,ppm)δ7.45(d,J＝8.4Hz,1H),7.36(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.4Hz,1H),δ7.29(d,J＝2.4Hz,1H),6.74(s,1H),6.35(s,1H),3.36(s,3H),3.34(q,J＝7.2Hz,2H),3.02-3.09(m,1H),2.75(t,J＝7.2Hz,2H),2.36(t,J＝7.2Hz,2H),2.19(m,2H),1.20(t,J＝7.2Hz,3H),0.94(s,3H),0.92(s,3H)。
实施例十
5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4-(1-甲基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1-H-苯并[b]氮杂卓-8-基)-4H-1,2,4-三唑-3-酰胺
Figure BDA0001051104540000331
步骤一:1-甲基-1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮
室温下，将1,3,4,5-四氢-2H-苯[b]氮杂卓-2-酮(2.0g,12.4mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺中(30mL),然后依次加入碳酸铯(8.08g,24.8mmol)和碘甲烷(8.81g,62mmol),室温搅拌过夜。反应液用乙酸乙酯(120mL)稀释，盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得1-甲基-1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮(2.0g，粗产物)。
MS m/z(ESI):176(M+1)。
步骤二:1-甲基-8-硝基1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮
在0℃下,将1-甲基-1,3,4,5-四氢-2H-苯[b]氮杂卓-2-酮(1.75g,1mmol)溶解于浓硫酸中(10mL),然后将浓硝酸(2g,20mmol)滴加到反应液中，反应十分钟。反应结束后将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得1-甲基-8-硝基1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮和1-甲基-7-硝基1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮的混合物(1.70g，粗产物)。
MSm/z(ESI):221(M+1)。
步骤三:1-甲基-8-胺基1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮
室温下，将1-甲基-8-硝基1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮和1-甲基-7-硝基1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮的混合物(1.70g,黄色油状物，粗产物)溶解于甲醇(20mL)中，然后加入钯碳(0.17g),在氢气氛围下，室温搅拌过夜。过滤，乙酸乙酯洗涤，旋干得1-甲基-8-胺基1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮和1-甲基-7-胺基1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮的混合物(1.0g，粗产物)，收率68％。
MS m/z(ESI):191(M+1)。
步骤四:2,4-二羟基-5-异丙基-N-(1-甲基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-8-基)苯并硫代酰胺
室温下，将亚磺基双((2,4-二羟基-5-异丙基苯基)甲烷硫酮)(0.63g,1.45mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，然后将1-甲基-8-胺基1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮和1-甲基-7-胺基1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮的混合物(0.55g,2.89mmol)加入到反应体系中，室温搅拌一小时。反应体系用乙酸乙酯(30mL)稀释，然后用盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。粗产物用柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯：V/V:2/1---二氯甲烷/甲醇:V/V:25/1)得2,4-二羟基-5-异丙基-N-(1-甲基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-8-基)苯并硫代酰胺和2,4-二羟基-5-异丙基-N-(1-甲基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)苯并硫代酰胺的混合物(0.55g，粗产物)。
步骤五:5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4-(1-甲基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1-H-苯并[b]氮杂卓-8-基)-4H-1,2,4-三唑-3-酰胺
在30mL微波管中依次加入2,4-二羟基-5-异丙基-N-(1-甲基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-8-基)苯并硫代酰胺和2,4-二羟基-5-异丙基-N-(1-甲基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)苯并硫代酰胺的混合物(0.30g,0.78mmol),N-乙基-2-肼基-2-氧代酰胺(0.15g,1.17mmol),氯化汞(0.63g,2.34mmol),吡啶(0.12g,1.56mmol)和二氧六环(15mL),在80度下微波加热20分钟。冷却至室温，过滤，乙酸乙酯洗涤，有机相用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物用柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯:V/V:1/1)，然后再用反相进一步纯化得5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4-(1-甲基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1-H-苯并[b]氮杂卓-8-基)-4H-1,2,4-三唑-3-酰胺(25mg)，收率12％。
MS m/z(ESI):464(M+1)；
1H NMR(400M,CD3OD,ppm)δ7.46(d,J＝8.4Hz,1H),7.37(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.4Hz,1H),7.30(d,J＝2.4Hz,1H),6.75(s,1H),6.35(s,1H),3.34(q,J＝7.2Hz,2H),3.02-3.09(m,1H),2.75(t,J＝7.2Hz,2H),2.37(t,J＝7.2Hz,2H),2.19(m,2H),1.21(t,J＝7.2Hz,3H),0.94(s,3H),0.93(s,3H)。
实施例十一
7-(3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-4H-1,2,4-三唑-4-基)-1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮
Figure BDA0001051104540000351
步骤一:7-(3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-4H-1,2,4-三唑-4-基)-1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮
在微波管(10mL)中依次加入5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-4-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1-H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-甲酸乙酯(0.05g,0.11mmol),碳酸钾(0.061g,0.44mmol)和乙醇(5mL),油浴80度下加热15小时。冷却至室温，旋干，残留物用乙酸乙酯溶解，盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物用大板纯化得7-(3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-4H-1,2,4-三唑-4-基)-1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b]氮杂卓-2-酮(4mg),收率9.5％。
MSm/z(ESI):379(M+1)；
1HNMR(400M,CD3OD,ppm)δ8.62(s,1H),7.27(d,J＝2.0Hz,1H),7.21(dd,J1＝2.0Hz,J2＝8.4Hz,1H),7.08(d,J＝8.4Hz,1H),6.75(s,1H),6.26(s,1H),3.03-3.11(m,1H),2.82(t,J＝7.2Hz,2H),2.35(t,J＝7.2Hz,2H),2.23-2.26(m,2H),0.97(s,3H),0.95(s,3H)。
实施例十二
N-甲氧基-5-(2-羟基-5-异丙基-4-甲氧基苯基)-4-(1-甲基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-酰胺
Figure BDA0001051104540000361
步骤一:2-甲氧胺基-2-氧代乙酸乙酯
在0℃下,将三乙胺(2.5mL,1.796mmol)和甲氧胺盐酸盐(500mg,5.988mmol)溶解于二氯甲烷中(5mL),将草酰氯单乙酯(0.8mL,7.185mmol)缓慢滴加于反应体系中，零度下反应2小时。反应结束后，过滤，反应液用二氯甲烷稀释，然后依次用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，盐水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得2-甲氧氨基-2-氧代乙酸乙酯(812mg)，收率91％。
MS m/z(ESI):148(M+1)。
步骤二:N-甲氧基-2-肼基-2-氧代酰胺
室温下，将2-甲氧胺基-2-氧代乙酸乙酯(812mg,5.520mmol)溶解于乙醇(10mL)中,然后加入水合肼(80％,1.8mL,27.60mmol),加热回流过夜，反应结束后，将体系冷却至室温。在减压下将乙醇旋除，残留物用石油醚/乙酸乙酯稀释(30mL,V/V:1:1),白色固体析出，过滤，空气下干燥得N-甲氧基-2-肼基-2-氧代酰胺(187mg)，收率25％。
MS m/z(ESI):134(M+1)。
步骤三:7-硝基-1,3,4,5-四氢-2H-苯[b]氮杂卓-2-酮
在0℃下,将1,3,4,5-四氢-2H-苯[b]氮杂卓-2-酮(2.10g,13mmol)溶解于浓硫酸中(10mL),然后将浓硝酸(1.1mL,15.6mmol)滴加到反应液中，反应半小时。反应结束后将反应液倒入冰水中，过滤，固体用石油醚/乙酸乙酯洗涤(40mL,V/V:1:1)，空气中干燥得7-硝基-1,3,4,5-四氢-2H-苯[b]氮杂卓-2-酮(2.10g),收率78％。
MS m/z(ESI):207(M+1)；
1H NMR(400M,DMSO-d6,ppm)δ10.08(s,1H),8.19(d,J＝2.8Hz,1H),8.11(dd,J1＝2.8Hz,J2＝8.4Hz,1H),7.15(d J＝8.4Hz,1H),2.82(t,J＝7.2Hz,2H),2.24(t,J＝7.2Hz,2H),2.16(t,J＝7.2Hz,2H)。
步骤四:7-胺基-1,3,4,5-四氢-2H-苯[b]氮杂卓-2-酮
室温下，将7-硝基-1,3,4,5-四氢-2H-苯[b]氮杂卓-2-酮(1.60g,10mmol)溶解于四氢呋喃(60mL)和甲醇(20mL)中，加入钯碳(0.16g),氢气氛围下室温搅拌过夜。反应结束后过滤，用乙酸乙酯洗涤，溶剂在减压下旋干得7-胺基-1,3,4,5-四氢-2H-苯[b]氮杂卓-2-酮(1.0g)，收率78％。
MS m/z(ESI):177(M+1)。
步骤五:2,4-二羟基-5-异丙基苯并二硫代酸
将4-异丙基-1,3-苯二酚(25g,164.3mmol)和乙基黄原酸钾(29g,180.7mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(300mL)中，加热至100℃，反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水，乙酸乙酯萃取，然后水相用0.1M的稀盐酸溶液调至酸性(PH＝2-3)，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，浓缩得到2,4-二羟基-5-异丙基苯并二硫代酸(30g)，收率80％。
MS m/z(ESI):267(M+K+)。
步骤六:亚磺基双((2,4-二羟基-5-异丙基苯基)甲烷硫酮)
在0℃下，将2,4-二羟基-5-异丙基苯并二硫代酸(2.0g,8.77mmol)溶解于无水乙醚(40mL)中，往体系中通二氧化碳气体，持续10分钟。然后将二氯亚砜(2.08g,17.5mmol)滴加到反应体系中，滴加结束后，继续搅拌1小时，过滤，固体用无水乙醚洗涤，空气中干燥得亚磺基双((2,4-二羟基-5-异丙基苯基)甲烷硫酮)(1.50g)，收率80％。
步骤七:2,4-二羟基-5-异丙基-N-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)苯并硫代酰胺
室温下，将亚磺基双((2,4-二羟基-5-异丙基苯基)甲烷硫酮)(1.8g,4.11mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(25mL)中，然后将7-胺基-1,3,4,5-四氢-2H-苯[b]氮杂卓-2-酮(1.45g,8.22mmol)加入到反应体系中，室温搅拌一小时。反应体系用乙酸乙酯(50mL)稀释，然后用盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。粗产物用柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯(V/V):1/1---二氯甲烷/甲醇(V/V):25/1)得2,4-二羟基-5-异丙基-N-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)苯并硫代酰胺(1.30g)，收率70％。
MS m/z(ESI):371(M+1)。
步骤八:5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-N-甲氧基-4-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1-H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-酰胺
在10mL微波管中依次加入2,4-二羟基-5-异丙基-N-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)苯并硫代酰胺(120mg,0.3239mmol),N-甲氧基-2-肼基-2-氧代酰胺(60mg,0.4858mmol),氯化汞(252mg,0.9716mmol),吡啶(72mg,0.9716mmol)和二氧六环(2mL),在80度下微波加热20分钟。冷却至室温，过滤，乙酸乙酯洗涤，有机相用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物用柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V):25/1)，然后再用反相进一步纯化得5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-N-甲氧基-4-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1-H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-酰胺(12mg)，收率7％。
MS m/z(ESI):452(M+1)；
1H NMR(400M,DMSO-d6,ppm)δ12.33(s,1H),10.56(s,1H),9.78(s,1H),9.75(s,1H),7.29(s,1H),7.20(d,J＝8.4Hz,1H),7.01(d,J＝8.4Hz,1H),6.68(s,1H),6.35(s,1H),3.60(s,3H),2.92-2.96(m,1H),2.66(t,J＝7.2Hz,2H),2.19(t,J＝7.2Hz,2H),2.05-2.11(m,2H),0.86(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例十三
5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-4-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1-H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-酰肼
Figure BDA0001051104540000381
步骤一:(E)-2,4-二羟基-5-异丙基-N-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)苯并腙酰胺
室温下，50mL圆底烧瓶中依次加入2,4-二羟基-5-异丙基-N-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)苯并硫代酰胺(0.35g,0.95mmol),水合肼(80wt％,0.24g,4.73mmol)和二氧六环(6mL),回流2小时。冷却至室温，反应液用乙酸乙酯稀释，然后依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得(E)-2,4-二羟基-5-异丙基-N-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)苯并腙酰胺(300mg)，收率86％。
MSm/z(ESI):369(M+1)。
步骤二:5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-4-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1-H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-甲酸乙酯
氮气保护下,将(E)-2,4-二羟基-5-异丙基-N-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)苯并腙酰胺(0.15g,0.41mmol)溶解于四氢呋喃(5mL)中，-78℃下将草酰氯单乙酯(0.055g,0.41mmol)的四氢呋喃溶液滴加到反应体系中，滴加结束后再滴加二异丙基乙基胺(0.079g,0.62mmol),-78℃下搅拌并反应至室温。反应结束后，反应液用乙酸乙酯稀释，然后依次用饱和碳酸氢钠溶液洗涤和盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-4-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1-H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-甲酸乙酯(170mg)，收率92％。
MS m/z(ESI):451(M+1)。
步骤三:5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-4-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1-H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-酰肼
在微波管(10mL)中依次加入5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-4-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1-H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-甲酸乙酯(0.15g,0.33mmol)，水合肼(0.098g,1.67mmol)和乙醇(10mL),油浴80度下加热2小时。冷却至室温，旋干，粗产物用反相柱色谱纯化得5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-4-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1-H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-酰肼(40mg)，收率28％。
MS m/z(ESI):437(M+1)；
1HNMR(400M,DMSO-d6,ppm)δ10.7(s,1H),10.17(s,1H),9.80(s,1H),9.75(s,1H),7.30(d,J＝2.4Hz,1H),7.21(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.4Hz,1H),δ7.01(d,J＝8.4Hz,1H),6.66(s,1H),6.36(s,1H),4.53(d,J＝3.6Hz,2H),2.90-2.97(m,1H),2.66(t,J＝6.8Hz,2H),2.20(t,J＝6.8Hz,2H),2.06-2.11(m,2H),0.86(s,3H),0.84(s,3H)。
实施例十四
N'-((叔丁基)-5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-4-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-酰肼
Figure BDA0001051104540000391
步骤一:2-(2-(叔丁基肼基)-2-氧代乙酸乙酯
在0℃下,将三乙胺(3.74g,36.8mmol)和叔丁基肼盐酸盐(2.20g,17.6mmol)溶解于二氯甲烷中(25mL),将草酰氯单乙酯(2.0g,14.7mmol)缓慢滴加于反应体系中，零度下反应2小时。反应结束后，反应液用二氯甲烷稀释，然后依次用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，盐水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得2-(2-(叔丁基肼基)-2-氧代乙酸乙酯(2g)，收率72％。
MS m/z(ESI):189(M+1)。
步骤二:N'-((叔丁基)-5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-4-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-酰肼
在微波管(10mL)中依次加入(E)-2,4-二羟基-5-异丙基-N-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)苯并腙酰胺(0.15g,0.408mmol)，2-(2-(叔丁基肼基)-2-氧代乙酸乙酯(0.15g,0.816mmo),醋酸(0.003g,0.0408mmol)和乙醇(5mL),油浴80度下加热15小时。冷却至室温，旋干，残留物用乙酸乙酯溶解，然后依次用饱和碳酸钠溶液和盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物先用大板纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V):25/1),然后再用反相柱色谱纯化得N'-((叔丁基)-5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-4-(2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-7-基)-4H-1,2,4-三唑-3-酰肼(5mg),收率2.5％。
MSm/z(ESI):493(M+1)；
1HNMR(400M,CD3OD,ppm)δ7.34(d,J＝2.4Hz,1H),7.30(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.4Hz,1H),7.16(d,J＝8.4Hz,1H),6.77(s,1H),6.35(s,1H),3.02-3.09(m,1H),2.81(t,J＝7.2Hz,2H),2.37(t,J＝7.2Hz,2H),2.23-2.26(m,2H),1.09(3,9H),0.94(s,3H),0.92(s,3H)。
实施例十五
N-(2-(4-(3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-5-(乙胺甲酰基)-4H-1,2,4-三唑-4-基)苯基)丙烷-2-基)-5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-酰胺
Figure BDA0001051104540000401
步骤一:2-甲基-2-(4-硝基苯基)丙酸甲酯
冰浴下，将2-(4-硝基苯基)乙酸(2.0g,0.011mmol)和18-冠-6(0.58g,0.022mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中，然后将钠氢(60％,1.76g,44mmol)加入到反应体系中，搅拌半小时，然后将碘甲烷(9.37g,66mmol)加入到反应体系中，室温搅拌14小时。反应结束后，加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，然后用乙醚萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得2-甲基-2-(4-硝基苯基)丙酸甲酯(2.50g)。
MS m/z(ESI):224(M+1)。
步骤二:2-甲基-2-(4-硝基苯基)丙酸
室温下，将2-甲基-2-(4-硝基苯基)丙酸甲酯(1.0g,4.48mmol)溶解于甲醇(5mL)和四氢呋喃(5mL)中，然后将氢氧化钠(0.36g,8.97mmol)的水溶液(2mL)滴加到反应体系中，室温搅拌14小时。反应结束后，将溶剂旋干，往残留物中加入稀盐酸(1N),红色固体析出，过滤，空气中干燥得2-甲基-2-(4-硝基苯基)丙酸(0.70g)，收率74％。
MS m/z(ESI):210(M+1)；
1HNMR(400M,DMSO,ppm)δ8.20(d,J＝9.2Hz,2H),7.62(d,J＝9.2Hz,2H),1.52(s,6H)。
步骤三:2-甲基-2-(4-硝基苯基)丙胺
冰浴下，将2-甲基-2-(4-硝基苯基)丙酸(0.20g,0.96mmol)和三乙胺(0.12g,1.20mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，氮气保护，往反应体系中加入叠氮磷酸二苯酯(0.26g,0.96mmol)，冰浴下搅拌两小时。反应结束后，反应液用乙酸乙酯稀释，盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。然后将残留物溶解于甲苯(10mL),加入稀盐酸(5N,2mL),在100度下加热两小时。反应结束后冷却至室温，然后用氢氧化钠将体系pH值调节至8-9，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得2-甲基-2-(4-硝基苯基)丙胺(0.12g)，收率，70％。
MS m/z(ESI):181(M+1)。
步骤四:5-甲基-N-(2-(4-硝基苯基)丙烷-2-基)-1,3,4-恶二唑-2-酰胺
冰浴下，将5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-甲酸钾(0.20g,1.20mmol)悬浮于乙腈(10mL)中，然后将草酰氯(0.15g,1.20mmol)滴加到反应体系中，最后加入N,N-二甲基甲酰胺(0.1mL),冰浴下搅拌一小时。反应结束后，在冰浴下，将上述反应液直接滴加到2-甲基-2-(4-硝基苯基)丙胺(0.108g,0.60mmol)和N-甲基吗啉(0.36g,3.60mmol)的四氢呋喃溶液中，冰浴下搅拌两小时。反应结束后，反应液用乙酸乙酯稀释，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸干燥，过滤，旋干，粗产物用大板纯化(石油醚/乙酸乙酯(V/V):1/1)得5-甲基-N-(2-(4-硝基苯基)丙烷-2-基)-1,3,4-恶二唑-2-酰胺(0.07g)，产率20％。
MS m/z(ESI):291(M+1)。
步骤五:N-(2-(4-胺基苯基)丙烷-2-基)-5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-酰胺
室温下，将5-甲基-N-(2-(4-硝基苯基)丙烷-2-基)-1,3,4-恶二唑-2-酰胺(0.07g,0.24mmol)溶解于乙醇(15mL)中，加入钯碳(0.02g),氢气氛围下室温搅拌过夜。反应结束后过滤，用乙酸乙酯洗涤，溶剂在减压下旋干得N-(2-(4-胺基苯基)丙烷-2-基)-5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-酰胺(0.04g)，收率63％。
MS m/z(ESI):261(M+1)。
步骤六:N-(2-(4-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基硫代胺)苯基)丙烷-2-基)-5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-酰胺
室温下，将亚磺基双((2,4-二羟基-5-异丙基苯基)甲烷硫酮)(0.067g,0.54mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，然后将N-(2-(4-胺基苯基)丙烷-2-基)-5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-酰胺(0.04g,0.154mmol)加入到反应体系中，室温搅拌14小时。反应体系用乙酸乙酯(40mL)稀释，然后用盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。粗产物用大板纯化(二氯甲烷/甲醇:V/V:20/1)得N-(2-(4-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基硫代胺)苯基)丙烷-2-基)-5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-酰胺(0.04g)，收率57％。
MS m/z(ESI):455(M+1)。
步骤七:N-(2-(4-(3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-5-(乙胺甲酰基)-4H-1,2,4-三唑-4-基)苯基)丙烷-2-基)-5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-酰胺
在10mL微波管中依次加入N-(2-(4-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基硫代胺)苯基)丙烷-2-基)-5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-酰胺(0.04g,0.088mmol),N-乙基-2-肼基-2-氧代酰胺(0.015g,0.114mmol),氯化汞(0.072g,0.264mmol),吡啶(0.010g,0.132mmol)和二氧六环(3mL),在80度下微波加热20分钟。冷却至室温，过滤，乙酸乙酯洗涤，有机相用稀盐酸洗涤，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物用反相柱色谱纯化得N-(2-(4-(3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-5-(乙胺甲酰基)-4H-1,2,4-三唑-4-基)苯基)丙烷-2-基)-5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-酰胺(8mg)，收率17％。
MS m/z(ESI):534(M+1)；
1H NMR(400M,DMSO-d6,ppm)δ10.70(s,1H),9.81(s,1H),9.26(s,1H),8.96(t,J＝6.4Hz,1H),7.47(d,J＝8.8Hz,2H),7.31(d,J＝8.8Hz,2H),6.52(s,1H),6.36(s,1H),3.17(m,2H),2.86-2.93(m,1H),2.57(s,3H),1.70(s,6H),1.03(t,J＝7.2Hz,3H),0.80(s,3H),0.78(s,3H)。
实施例十六
N-(4-(3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-5-(乙胺甲酰基)-4H-1,2,4-三唑-4-基)苄基-5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-酰胺
Figure BDA0001051104540000431
步骤一:5-甲基-N-(4-硝基苯基)1,3,4-恶二唑-2-酰胺
在微波管(10mL)中依次加入5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-甲酸乙酯(0.10g,0.51mmol)，对硝基卞胺(0.10g,0.66mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(3mL)，130度下微波加热1.5小时。反应结束后冷却至室温，反应液用乙酸乙酯稀释，饱和实验室洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物用大板纯化(石油醚/甲醇(V/V):1/1)得5-甲基-N-(4-硝基苯基)1,3,4-恶二唑-2-酰胺(0.11g)，收率33％。
MS m/z(ESI):263(M+1)。
步骤二:N-(4-胺基苯基)-5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-酰胺
室温下，将5-甲基-N-(4-硝基苯基)1,3,4-恶二唑-2-酰胺(0.11g,0.42mmol)溶解于乙醇(10mL)中，加入钯碳(0.02g),氢气氛围下室温搅拌过夜。反应结束后过滤，用乙酸乙酯洗涤，溶剂在减压下旋干得N-(4-胺基苯基)-5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-酰胺(0.08g)，收率82％。
MS m/z(ESI):233(M+1)。
步骤三:N-(4-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基硫代胺)苄基)-5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-酰胺
室温下，将亚磺基双((2,4-二羟基-5-异丙基苯基)甲烷硫酮)(0.057g,0.129mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，然后将N-(4-胺基苯基)-5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-酰胺(0.03g,0.129mmol)加入到反应体系中，室温搅拌二小时。反应体系用乙酸乙酯(50mL)稀释，然后用盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。粗产物用大板纯化(二氯甲烷/甲醇:V/V:20/1)得N-(4-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基硫代胺)苄基)-5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-酰胺(0.05g)，收率91％。
MS m/z(ESI):427(M+1)。
步骤四:N-(4-(3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-5-(乙胺甲酰基)-4H-1,2,4-三唑-4-基)苄基-5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-酰胺
在10mL微波管中依次加入N-(4-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基硫代胺)苄基)-5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-酰胺(0.1g,0.24mmol),N-乙基-2-肼基-2-氧代酰胺(0.04g,0.30mmol),氯化汞(0.20g,0.72mmol),吡啶(0.028g,0.36mmol)和二氧六环(3mL),在80度下微波加热20分钟。冷却至室温，过滤，乙酸乙酯洗涤，有机相用稀盐酸洗涤，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物用反相柱色谱纯化得N-(4-(3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-5-(乙胺甲酰基)-4H-1,2,4-三唑-4-基)苄基-5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-酰胺(30mg)，收率17％。
MS m/z(ESI):506(M+1)；
1H NMR(400M,CD3OD,ppm)δ7.41(d,J＝8.4Hz,2H),7.23(d,J＝8.4Hz,2H),6.55(s,1H),6.19(s,1H),4.52(s,2H),3.19(q,J＝7.2Hz,2H),2.82-2.90(m,1H),2.52(s,3H),1.06(t,J＝7.2Hz,3H),0.75(s,3H),0.73(s,3H)。
实施例十七
5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)-N-乙基-4-(5-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-8-基)-4H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺
Figure BDA0001051104540000441
步骤一:3-(3-氯丙烷基)-6-硝基苯并[d]恶唑-2(3H)-酮
将化合物6-硝基苯并[d]恶唑-2(3H)-酮(5g，27.76mmol)，碳酸钾(6.52g，47.19mmol)加入丙酮(300mL)，缓慢滴加1-溴-2-氯乙烷(14.86g，94.38mmol)，滴加完毕后，升温至55℃下反应16小时。冷却至室温，浓缩至较少体积，加入水(100mL)和乙酸乙酯(150mL)，分离有机相并用盐水洗，干燥后浓缩得粗产物，打浆(乙酸乙酯/正己烷＝5/95,100mL)后得到3-(3-氯丙烷基)-6-硝基苯并[d]恶唑-2(3H)-酮(7g)，收率98％。
MS m/z(ESI):227.1。
步骤二:2-((3-氯丙烷基)(乙氧碳基)胺)-5-硝基苯醇酸钾
将氢氧化钾(1.33g，23.77mmol)溶于乙醇(120mL)中，加入化合物3-(3-氯丙烷基)-6-硝基苯并[d]恶唑-2(3H)-酮18a(6.1g，23.77mmol)，室温反应2小时。浓缩后得到2-((3-氯丙烷基)(乙氧碳基)胺)-5-硝基苯醇酸钾(7.4g)，收率91％。
步骤三:8-硝基-3,4-二氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-5(2H)-羧酸乙酯
将化合物2-((3-氯丙烷基)(乙氧碳基)胺)-5-硝基苯醇酸钾(7.4g，21.71mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(100mL)中，升温至80℃反应2小时。冷却至室温，倒入水(200mL)，乙酸乙酯(60mL*3)萃取，有机相先后用水洗，盐水洗，干燥后浓缩得粗产物，用乙酸乙酯重结晶得到8-硝基-3,4-二氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-5(2H)-羧酸乙酯(4.5g)，收率78％。
MS m/z(ESI):237.3。
步骤四:8-硝基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓
将化合物8-硝基-3,4-二氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-5(2H)-羧酸乙酯(2g，7.51mmol)溶于2-甲氧基乙醇(80mL)中，加热至80℃，滴加1N的氢氧化钾溶液(39mL)，滴加完毕后，在100℃下反应3小时。冷却至室温，加入水(200mL)，乙酸乙酯(100mL*3)萃取，有机相先后用水洗，盐水洗，干燥后浓缩得8-硝基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓(1.4g)，收率96％。
MS m/z(ESI):195.3。
步骤五:5-甲基-8-硝基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓
将8-硝基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓(650mg,3.35mmol)溶于甲醇(20mL)中。先后加入甲醛(150mg,5.02mmol)，氯化锌(547mg,4.02mmol)，室温下搅拌半小时，分批加入氰基硼氢化钠(316mg,5.02mmol)，室温搅拌下反应16小时，LC-MS监测原料转化完全停止反应。反应液浓缩后残留物溶于乙酸乙酯(20mL)中，先后用饱和碳酸氢钠溶液，盐水洗涤。有机相经干燥，过滤后浓缩得粗产物5-甲基-8-硝基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓(550mg)，收率79％。
MS m/z(ESI):209.2。
步骤六:5-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮卓-8-胺
将5-甲基-8-硝基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓(0.5g，2.4mmol)溶于乙醇(20mL)中，加入钯碳(0.05g，10％w/w)。在室温标准大气压下氢化反应2小时，反应完成后滤除催化剂，滤液浓缩后得到5-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮卓-8-胺(0.4g)，收率93％。
MS m/z(ESI):179.2。
步骤七:2,4-二酚羟基-5-异丙基-N-(5-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-8-基)苯硫酰胺
将5-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮卓-8-胺(0.4g，2.24mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入亚磺酰基二((2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)甲基硫酮)(1g，2.24mmol)，室温反应16小时。反应液用乙酸乙酯稀释，经水洗，盐水洗干燥浓缩后得粗产物，柱层析(石油醚/乙酸乙酯从100:0至50:50，v/v)分离得到2,4-二酚羟基-5-异丙基-N-(5-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-8-基)苯硫酰胺(0.58g)，收率70％。
MS m/z(ESI):373.1。
步骤八:5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)-N-乙基-4-(5-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-8-基)-4H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺
将化合物2,4-二酚羟基-5-异丙基-N-(5-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-8-基)苯硫酰胺(550mg,1.48mmol)，2-肼基-2-氧-N-丙基乙酰胺(232mg,1.77mmol)，氯化汞(1.2g,4.43mmol)以及吡啶(350mg,4.43mmol)加入无水二氧六环(10mL)中，微波加热至80℃反应20分钟，加入乙酸乙酯稀释，过滤除去固体，滤液经饱和碳酸氢钠溶液洗，盐水洗，干燥过滤，浓缩，粗产物经柱层析(二氯甲烷/甲醇从100:0到90：10，v/v)得到5-(2,4-二酚羟基-5-异丙基苯)-N-乙基-4-(5-甲基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧氮杂卓-8-基)-4H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(80mg)，收率12％。
MS m/z(ESI):452.5；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ10.90(s,1H),9.78(s,1H),8.90-8.87(m,1H),6.90–6.82(m,3H),6.59(s,1H),6.36(s,1H),4.07-4.05(m,2H),3.22-3.14(m,4H),2.95-3.90(m,1H),2.87(s,3H),2.10-1.96(m,2H),1.07-1.03(m,3H),0.86(s,3H),0.84(s,3H)。
实施例十八
N-乙酰基-N-(4-(3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-5-羰基-1,5-二氢-4H-1,2,4-三唑-4-基)苯甲基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
Figure BDA0001051104540000461
步骤一:N-(4-硝基苯甲基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
将5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-羧酸乙酯(300mg，1.9mmol)溶于乙醇(20ml)，然后加入对硝基苄胺(将对硝基苯胺盐酸盐(500mg，2.6mmol)加入到饱和碳酸氢钠溶液中，然后用乙酸乙酯萃取，有机相蒸干得到对硝基苄胺)。反应物加热到回流12小时，然后冷却到室温。过滤得到固体，然后乙醇重结晶得到N-(4-硝基苯甲基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺，收率66％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ9.90(br,1H),8.20(d,J＝6.4,2H),7.60(d,J＝6.4,2H),4.57(d,J＝6.4,2H),2.59(s,3H)。
步骤二:N-(4-氨基苯甲基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
将N-(4-硝基苯甲基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(178mg，0.68mmol)溶于甲醇(20ml)，在氮气保护下加入Pd/C(20mg)。反应物在氢气下(1atm)反应4小时。过滤除去催化剂，有机相蒸干得到N-(4-氨基苯甲基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺，收率96％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ9.58(br,1H),6.96(d,J＝6.4,2H),6.47(d,J＝6.4,2H),4.99(br,2H),4.25(d,J＝6.4,2H),2.56(s,3H)。
步骤三:(4-((5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺)甲基)苯基)氨基甲酸苯酯
在0℃氮气保护下，将氯甲酸苯酯(67mg，0.43mmol)滴加到N-(4-氨基苯甲基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(100mg，0.43mmol)的四氢呋喃(10ml)溶液中。反应物搅拌5分钟在0℃氮气保护下，然后吡啶(41mg，0.51mmol)滴加到反应体系中，然后再在0℃氮气保护下搅拌30分钟。水(20ml)加入到反应体系中，分离有机相，无水硫酸钠干燥，蒸干，得到(4-((5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺)甲基)苯基)氨基甲酸苯酯粗品(156mg)，粗品直接用于下一步。
MS m/z(ESI):353.1。
步骤四:N-(4-(肼-甲酰氨基)苄基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
将水合肼(71mg，1.7mmol，95％水溶液)加入到(4-((5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺)甲基)苯基)氨基甲酸苯酯(156mg，0.48mmol)的二氧六环(10ml)溶液中。反应物加热到120℃，保持3小时，然后蒸干溶剂得到粗品。粗品用水(10ml*3)洗涤得到粗品，粗品在油泵下干燥得到N-(4-(肼-甲酰氨基)苄基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(100mg)，粗品直接用于下一步。
MS m/z(ESI):291.1。
步骤五:(E)-N-(4-(2-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯亚甲基)肼-1-甲酰氨基)苄基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
将化合物N-(4-(肼-甲酰氨基)苄基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(100mg,0.44mmol)和5-异丙基-2,4-二甲氧基苯甲醛(158mg,0.44mmol)溶于乙醇(10mL)中，加入乙酸(2d)，升温至90℃反应2h后，浓缩得到(E)-N-(4-(2-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯亚甲基)肼-1-甲酰氨基)苄基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺粗品(175m g)，粗品直接用于下一步反应。
MSm/z(ESI):633.3。
步骤六:(Z)-N-乙酰基-2-((4-(3-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯基)-5-羰基-1,5-二氢-4H-1,2,4-三唑-4-基)苄基)氨基)-2-羰基乙酰腙酸乙酯
将(E)-N-(4-(2-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯亚甲基)肼-1-甲酰氨基)苄基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺粗品(30mg，0.047mmol)溶于乙醇(10mL)中，加入六氰合铁酸三钾(44g,0.142mmol)和氢氧化钠(7mg，0.142mmol)。加热至100℃反应8h后，将反应液浓缩，粗品经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30:1，v/v)分离得到(Z)-N-乙酰基-2-((4-(3-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯基)-5-羰基-1,5-二氢-4H-1,2,4-三唑-4-基)苄基)氨基)-2-羰基乙酰腙酸乙酯(30mg)，收率为100％。
MS m/z(ESI):677.3。
步骤七:N-乙酰基-N-(4-(3-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯基)-5-羰基-1,5-二氢-4H-1,2,4-三唑-4-基)苄基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
将(Z)-N-乙酰基-2-((4-(3-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯基)-5-羰基-1,5-二氢-4H-1,2,4-三唑-4-基)苄基)氨基)-2-羰基乙酰腙酸乙酯(30mg，0.037mmol)溶于乙酸酐(5ml)，反应液加热到80℃保持10小时。然后蒸干得到粗品，粗品经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝5:1，v/v)分离得到N-乙酰基-N-(4-(3-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯基)-5-羰基-1,5-二氢-4H-1,2,4-三唑-4-基)苄基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(15mg)，收率为60％。
MS m/z(ESI):673.3。
步骤八:N-乙酰基-N-(4-(3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-5-羰基-1,5-二氢-4H-1,2,4-三唑-4-基)苯甲基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
将N-乙酰基-N-(4-(3-(2,4-二(苄氧基)-5-异丙基苯基)-5-羰基-1,5-二氢-4H-1,2,4-三唑-4-基)苄基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(18mg，0.022mmol)溶于甲醇(5ml)，在氮气保护下加入Pd/C(5mg)。反应物在氢气下(1atm)反应2小时。过滤除去催化剂，有机相蒸干得到N-乙酰基-N-(4-(3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-5-羰基-1,5-二氢-4H-1,2,4-三唑-4-基)苯甲基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺，收率90％。
MS m/z(ESI):493.3；
1H NMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ7.48(d,J＝8.0,2H),7.28(d,J＝8.0,2H),6.90(s,1H),6.25(s,1H),4.60(s,2H),3.05-2.95(m,1H),2.65(s,3H),2.63(s,3H),0.92(d,J＝8.0,6H)。
生物学评价
1、HSP90抑制化合物的酶学活性检测
HSP90抑制化合物的酶学活性是用荧光偏振(Fluorescence Polarization)竞争性结合方法检测的。在384孔板中，加入反应液，HSP90蛋白，FITC标记的格尔德霉素,然后在不同孔中加上不同浓度的HSP90抑制化合物，在室温下反应3小时后用BioTek酶标仪测量平行光和垂直光读值，以及各自的背景吸光度。mP(milli-polarization)的计算方法为：
mP＝1000*[(Is-IsB)-(Ip-IpB)]/[(Is-IsB)+(Ip-IpB)]。
根据各浓度抑制率，采用4参数非线性回归方法计算半数抑制浓度IC50。
本发明化合物及对照化合物(STA9090)的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见下表。
实施例编号 IC<sub>50</sub>(HSP90/BIO)(nM)
实施例一 5
实施例二 13
实施例三 10
实施例四 7.7
实施例五(5-1) 7
实施例五(5-2) 9
实施例七 25
实施例八 13.7
实施例九 8
实施例十 4
实施例十一 117
实施例十二 32
实施例十三 12
实施例十四 17
实施例十五 14
实施例十六 30
实施例十七 4
实施例十八 13
对照化合物(STA9090) 26
结论：本发明实施例化合物对HSP90酶活性均有明显地抑制作用。
2、HSP90抑制化合物的细胞活性检测
应用
Figure BDA0001051104540000491
发光法细胞活力检测试剂盒(
Figure BDA0001051104540000492
LuminescentCell Viability Assay)检测药物对肿瘤细胞增殖生长的抑制作用。主要步骤如下：接种一定数量的对数生长期细胞于96孔培养板。贴壁生长24小时后，加入不同浓度的药物，每个浓度设复孔，同时设相应浓度的溶媒对照。然后肿瘤细胞在37℃、5％CO2条件下再培养72h。将培养板及其内容物平衡到室温大约30分钟，加入
Figure BDA0001051104540000501
试剂，在振荡器上混合内容物2分钟诱导细胞裂解。将培养板在室温进一部孵育10-45分钟，用酶标仪(BioTekSynergyH1)测定萤光信号值。
Figure BDA0001051104540000502
根据各浓度抑制率，采用非线性回归方法计算半数抑制浓度IC50。
本发明化合物及对照化合物(STA9090)的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见下表。
实施例编号 IC<sub>50</sub>(BT474)(nM)
实施例一 6.6
实施例二 7.3
实施例三 23
实施例四 5.4
实施例五(5-1) 6.33
实施例五(5-2) 19.67
实施例八 5.2
实施例九 6.7
实施例十 7.7
实施例十一 386
实施例十二 264
实施例十三 79
实施例十四 54
实施例十五 3.4
实施例十六 10.5
实施例十七 3.3
实施例十八 32
对照化合物(STA9090) 6.3
结论：本发明实施例化合物对BT474细胞活性均有明显地抑制作用。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制本发明，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，所述技术方案也不会脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围内。

Claims (8)

1.具有式(I)结构的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐：
Figure FDA0002980270400000011
其中：
R1为-C(O)NR7R8；
R3选自氢；
R2与R4和其直接相连的碳原子一起形成7元含氮杂环基，任选进一步被一个或多个选自羰基、C1-8烷基或C3-8环烷基的取代基所取代；
R7、R8各自独立的选自氢或C1-4烷基。
2.根据权利要求1所述的具有式(I)结构的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，R7、R8各自独立选自氢、乙基。
3.根据权利要求1所述的具有式(I)结构的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，R2与R4和其直接相连的碳原子一起形成7元含氮杂环基，任选进一步被一个或多个选自羰基、C1-4烷基或C3-6环烷基的取代基所取代。
4.根据权利要求1所述的具有式(I)结构的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，选自如下化合物：
Figure FDA0002980270400000012
Figure FDA0002980270400000021
5.根据权利要求1-4中任一项所述的具有式(I)结构的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐的制备方法，其包括如下步骤：
Figure FDA0002980270400000022
或者，
Figure FDA0002980270400000023
或者，
Figure FDA0002980270400000024
任选的，根据R1、R2、R3、R4定义的不同做进一步反应的步骤；
其中，Pg1为羟基保护基；
Pg2为氨基保护基；
X为卤素；
R1、R2、R3、R4如权利要求1所定义。
6.根据权利要求5所述的具有式(I)结构的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐的制备方法，其特征在于，Pg1选自苄基、2-四氢呋喃、甲氧基甲基、乙氧基乙基、C1-8烷基、烯丙基、三甲基硅基、三乙基硅基、三异丙基硅基、叔丁基二甲基硅基或叔丁基二苯基硅基；
Pg2选自苄氧羰基、叔丁氧羰基、9-芴甲氧羰基、三苯甲基、三氟乙酰基、苄基或对甲氧苯基；
X为氯。
7.一种药物组合物，其包括治疗有效剂量的根据权利要求1-4中任一项所述的具有式(I)结构的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐及可药用的载体。
8.根据权利要求1-4中任一项所述的具有式(I)结构的3,4-二苯基-4H-1,2,4-三唑衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐、或权利要求7所述的药物组合物在制备用于治疗HSP90相关的癌症、神经退行性疾病、炎症性疾病、自身免疫性疾病、缺血性脑损伤药物中的应用。
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