[go: up one dir, main page]

CN105188747A - 包含toll样受体激动剂的免疫组合物的皮内递送 - Google Patents

包含toll样受体激动剂的免疫组合物的皮内递送 Download PDF

Info

Publication number
CN105188747A
CN105188747A CN201480007165.XA CN201480007165A CN105188747A CN 105188747 A CN105188747 A CN 105188747A CN 201480007165 A CN201480007165 A CN 201480007165A CN 105188747 A CN105188747 A CN 105188747A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antigen
alkyl
agonist
antigens
microneedles
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201480007165.XA
Other languages
English (en)
Inventor
B.鲍德纳
D.奥黑根
S.加洛里尼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
GlaxoSmithKline Biologicals SA
Original Assignee
GlaxoSmithKline Biologicals SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by GlaxoSmithKline Biologicals SA filed Critical GlaxoSmithKline Biologicals SA
Publication of CN105188747A publication Critical patent/CN105188747A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A61K9/0021—Intradermal administration, e.g. through microneedle arrays, needleless injectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/095—Neisseria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55544—Bacterial toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55583—Polysaccharides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16171—Demonstrated in vivo effect

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

皮内递送系统包含免疫原性组合物，所述组合物包含TLR激动剂和免疫原和微针。所述免疫原性组合物可包含固体生物可降解微针或固体涂覆微针。所述皮内递送系统可配制成皮肤贴剂。

Description

包含TOLL样受体激动剂的免疫组合物的皮内递送
发明领域
本发明是疫苗递送领域。
背景技术
包含Toll样受体(TLR)激动剂的免疫组合物是目前可用的且这些疫苗通过肌内注射施用。尽管肌内给药是有效的，但其可引起疼痛和局部组织损伤，并且对肌内注射的恐惧是常见的。肌内注射必须是由医学培训人员实施，从而避免快速给药和出售非处方药。肌内给药需要使用液体制剂，其在长时间内可能会缺乏稳定性。
本发明的目标是提供给药含TLR激动剂的疫苗的不同方法，且具体地以更便利的方式，该方式没有上述缺点。
发明内容
本发明人惊讶地发现，如果将包含Toll样受体(TLR)激动剂的免疫原性组合物以皮内递送，会比肌内递送提供更好的免疫应答。相比于在肌肉中，表达TLR的细胞更多地在真皮和表皮内被发现，这可解释所得到的提高的响应。此外，相比肌内递送，皮内递送可显著降低疼痛且更易于进行该组合物的自身给药，尤其是当所述皮内递送是通过使用微针装置形式的多个微针，例如皮肤贴剂实现。因此，本发明提供皮内递送包含TLR激动剂和免疫原的免疫原性组合物的方法。
本发明还提供了包含免疫原性组合物的皮内递送系统，所述组合物包含TLR激动剂和免疫原。
本发明还提供了包含固体免疫原性组合物的皮内递送系统，所述组合物包含TLR激动剂、免疫原和微针。
本发明还提供了包含固体生物可降解微针的皮内递送系统，其中所述微针包含TLR激动剂和免疫原。
本发明还提供了包含固体微针的皮内递送系统，其中所述微针包含TLR激动剂和细菌性抗原。
本发明还提供包含涂覆微针(coatedmicroneedle)的皮内递送系统，其中所述微针包含TLR激动剂和免疫原，其中所述TLR激动剂选自：TLR2、TLR4、TLR5、TLR1、TLR6、TLR8和TLR9激动剂。
本发明还提供包含免疫原性组合物的皮内递送系统，所述组合物包含TLR激动剂，其中所述TLR激动剂为：
(a)苯并萘啶TLR7激动剂；
(b)具有式T1的TLR7激动剂：
(c)具有式T2的TLR2激动剂：
本发明还提供了包含固体免疫原性组合物的皮内递送系统，所述组合物包含TLR激动剂、免疫原和微针，其中所述TLR激动剂选自：TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR1、TLR6、TLR8和TLR9激动剂，且所述免疫原不是流感抗原。
本发明还提供包含免疫原性组合物的皮内递送系统，所述组合物包含TLR3激动剂和免疫原，其中所述免疫原不是流感抗原。
本发明还提供了包含免疫原性组合物的皮内递送系统，所述组合物包含TLR2激动剂和免疫原，其中所述免疫原是病毒抗原、细菌性抗原、真菌抗原或肿瘤抗原。
本发明还提供了包含免疫原性组合物的皮内递送系统，所述组合物包含TLR激动剂和免疫原，其中所述TLR激动剂选自：TLR5激动剂、TLR1激动剂和TLR6激动剂。
所述免疫原性组合物可包含中空针。所述中空针可以是中空微针。
本发明还提供了制备本发明皮内递送系统或皮肤贴剂的方法。该方法可包括i)浓缩抗原；ii)将TLR激动剂加至该浓缩的抗原中；iii)由该浓缩的抗原和TLR激动剂配制免疫原性组合物。
本发明还提供了制备包含固体微针的皮内递送系统的方法，其中所述微针包含TLR激动剂和免疫原，其中该方法包括以下步骤a)将免疫原和TLR激动剂混合，形成免疫原性组合物，其中所述免疫原具有10mg/ml-50mg/ml的浓度和所述TLR激动剂具有0.1mg/ml-10mg/ml的浓度和b)干燥该免疫原性组合物，形成固体微针。
免疫原的浓度可以是10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、40mg/ml、45mg/ml或50mg/ml且TLR激动剂的浓度可以是0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.7mg/ml、0.8mg/ml、0.9mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml或10mg/ml。
所用的抗原与TLR激动剂的比例可为约10:1。
实现皮内递送的优选方式是通过皮肤贴剂(例如通过生物可降解微针或涂覆微针)并因此本发明还提供皮内递送具有多个微针的免疫原的皮肤贴剂，其中所述微针包含TLR激动剂和免疫原。
经皮内递送的免疫原性组合物优选为固体，而相比之下，所述液体组合物是通过标准中空皮内针进行递送的。固体免疫原性组合物可以是固体微针的形式，所述微针可穿透皮肤并皮内递送免疫原性组合物。所述微针自身可由固体免疫原性组合物形成(参见下文固体生物可降解微针)，或所述微针可穿透皮肤来递送单独的免疫原性组合物(参见下文固体涂覆微针)。
本发明还提供了包含免疫原性组合物的皮内递送系统，所述组合物包含CD1d激动剂和免疫原。
本发明还提供了包含免疫原性组合物的皮内递送系统，所述组合物包含CLR激动剂和免疫原。
本发明还提供了包含免疫原性组合物的皮内递送系统，所述组合物包含突变体大肠杆菌不耐热毒素、免疫原和微针。
皮内递送
组合物的皮内递送可使用任意递送模式实现，其中将所述组合物施用于真皮，但是不穿过真皮至肌肉，包括其中将该组合物直接递送至真皮的模式(例如通过完全穿过表皮至真皮的针)以及其中通过渗透表皮首先将该组合物递送至表皮的模式(例如通过针，其中该组合物随后从表皮移至真皮)。将皮内递送与现有技术的肌内递送相对比，所述肌内递送需要该递送系统穿透表皮(在人类中通常约100μm厚)和真皮(在人类中通常约0.6-3mm厚)，然后将该组合物递送至肌肉。
合适的皮内递送系统包括，但不限于，那些基于微针的系统。微针是固体，非中空的，其在储存和插入过程中保留了它们的结构完整性，且将微针成形使得它们可穿透受试者所施用的皮肤。穿透皮肤所需的机械特性取决于靶有机体，但是它们优选具有足够强度来穿透人的皮肤同时大体上保持完整。制成合适的针的材料都是容易得到的(参见下文)并将它们进行测定以确定任意具体需求的合适的特性。疫苗的微针递送参见参考文献1和2。
固体微针不同于标准中空针，因为它们不包含空腔(免疫原性组合物作为液体穿过该空腔)，而微针的形式是这样的：固体免疫原性组合物存在于该针外面，或者其自身形成针。
所述微针可穿过皮肤。其足够长以穿透表皮从而将材料递送至真皮并因此实现皮内递送，但理想地没有长到能透入到或穿过下皮。该针的长度依赖于靶有机体，且该长度需要到达具体靶有机体的真皮。因此对于在人中的使用，它们通常为100-2500μm长，例如约500μm、约1000μm或约1500μm。递送时，微针的尖端可透过真皮，但其基部保留在表皮内。
所述微针可具有各种形状和几何形状，例如参见参考文献3的图2。其通常逐渐变细，具有面向皮肤的点，例如为锥形或圆锥形。逐渐变细的微针通常具有<500μm的最大直径。已详细研究了结构参数(包括形状、尖端半径、基部半径、螺距、高度、密度和总的孔隙体积)(例如参见参考文献3-4)并根据任意所选情况下的具体需要和期望对该结构参数进行修改。
微针通常不单独使用，而是使用微针装置，如含多种微针的皮肤贴剂以同时施用多重针。单一贴剂通常包括多种微针，例如每片≥10、≥20、≥30、≥40、≥50、≥60、≥70、≥80、≥90、≥100、≥200、≥300、≥400、≥50、≥750、≥1000或更多种。贴剂包括多种微针时，其可包括结合所有微针的背衬层。单一背衬层通常具有≥20种突出的微针，例如每片50-600种微针。贴剂包括多种微针时，这些可以规律重复形式或阵列排列，或可无规律排列。微针的间距是控制渗透率的重要参数[3,错误！未定义书签。]且其可根据具体情况进行调整。
贴剂通常具有3cm2或更小的面积，例如<2cm2或<1cm2。直径0.5cm-1.5cm的圆形贴剂有用。
贴剂上的微针的密度可不同，但可为≥10cm-2、≥20cm-2、≥30cm-2、≥40cm-2、≥50cm-2、≥60cm-2、≥70cm-2、≥80cm-2或更高。
本发明的贴剂具有面对皮肤的内面和面对环境的外面。所述内面可包括粘合剂以协助粘附受试者的皮肤。存在时，其优选不位于所述微针自身上，即所述微针无粘合剂。因此，该内面通常具有外部粘合边缘或环，以用于将贴剂粘附于皮肤，例如橡皮膏或烟碱贴剂所示。该粘合区域和所述微针可作为整体单元提供，或所述粘合区域可通过添加一个延伸至微针外的背衬制备以提供外部粘合边缘或环，以用于将该贴剂粘附于皮肤，例如橡皮膏或烟碱贴剂所示。
贴剂可包装在如氮气密封的单独小袋中，然后加热密封。其需要小心储存以防止损坏所述微针。本发明贴剂可包含粘合剂，其包括增粘剂。增粘剂是提高贴剂粘着性从而防止该贴剂从受试者的皮肤上掉落的物质。如果所述免疫原性组合物在贴剂的内面上结晶，那么该贴剂可从受试者皮肤脱落。因此可加入结晶抑制剂至该免疫原性组合物用于防止该组合物结晶。
微针可以是中空的，使得免疫原性组合物可穿过它们并因此到达真皮。然而，优选的选择是使用固体非中空的微针。有用的固体针包括生物可降解和非生物可降解针。生物可降解针可(如果需要的话)在施用后留在皮肤内，且免疫原可在制备过程中掺入到该针自身中，使得当该针原位降解或溶解时，免疫原可被释放。非生物可降解的固体针在施用后的一段时间必须被除去且免疫原通常作为固体针外表面上的干燥涂层存在。
固体生物可降解微针
可用于本发明的一种有用的固体微针形式是固体生物可降解微针。将免疫原掺入到该微针中，使得该针在结构上由免疫原和适当的固体赋形剂组成。所述固体赋形剂提供机械强度，使得该微针插入到受试者的皮肤，该免疫原在其中被释放。
所述微针是生物可溶的和生物可降解的。因此所述针可在该微针施用后在皮肤中溶解，这与参考文献5&6(见下)中所用的涂覆微针相反。溶解后，所述针材料可代谢产生无害的终产物。施用该贴剂后溶解的时间量程可不同，但溶解通常在使用贴剂后立即开始(例如10秒内)且可持续例如至多1分钟、5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、1小时、5小时、10小时或24小时，直至所述微针完全溶解(虽然该针可在溶解完全之前被除去)。适合体内溶解动力学的材料容易获得(如下所述)且其可不同，并进行测试以确定用于任何所需溶解概况的合适浓度等。
用于形成微针的合适的材料通常为生物可溶性的和生物可降解聚合物，且这些可包括一种或多种碳水化合物。还可使用短链碳水化合物。例如，该材料可包括纤维素、糊精、葡聚糖、二糖、壳聚糖、壳质等，或其混合物。也可使用透明质酸[7]，聚乳酸也可以[8]。作为碳水化合物材料的替代，可使用聚合物，例如聚维酮(PVP)，或甲基乙烯基醚和马来酸或马来酸酐的共聚物(PMVE/MA)，例如GantrezTMAN-139[4,9]。还可使用其他的GRAS材料。
合适的纤维素包括，但不限于，纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素和羟丙基甲基纤维素。合适的糊精包括，但不限于，麦芽糖糊精、环糊精、淀粉糊精、艾考糊精(icodextrin)、黄糊精和白糊精。合适的二糖包括，但不限于，蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、松二糖和纤维二糖。一种用于形成生物可溶性和生物可降解微针的合适的材料是糊精/海藻糖混合物。其他合适的碳水化合物是支链淀粉[10]。制剂赋形剂可容易地添加至固体生物可降解微针的免疫原性组合物中以提高该组合物的稳定性并提供稳定且规模可变的制备方法。固体生物可降解微针的聚合物可提供稳定抗原的优势。该优势可由微针的聚合物或具有碳水化合物基团的共聚物提供，其对抗原具有稳定作用。因此该皮内递送系统的贮存期限可被延长。
固体生物可降解微针比其他微针的抗原能力要高，这便提供了一种优势，使其能够与需要高水平免疫原的抗原组合，所述免疫原被用于各针，例如四价流感疫苗。
这些针可以各种方式制成，例如遵循以下参考文献12至19中的技术和指导。例如，可制备有微针腔的模具。可将基质材料(例如糊精和海藻糖的混合物)与免疫原组合且然后将这一水性材料在该模具中离心铸造，形成固体微针阵列。然后将纤维素凝胶铸造在该基质/免疫原混合物(例如已形成膜的混合物)上，形成贴片上的背衬层。当该背衬层干燥时，可将其从固体微针突出的地方除去，得到贴剂。其他方法涉及在合适的模具上的原位聚合，例如可将免疫原与液体单体(例如乙烯吡咯烷酮)混合于贴剂模具中，并可将这一混合物光聚合(photopolymerised)。在该方法中，该免疫原理想地是以干燥(例如冷冻)形式存在，使得其在聚合过程中被包封。还可使用水凝胶[12]或颗粒[11]的模具。用于这些方法的模具可以各种方式制备，例如通过基于激光的微注塑成型(micromolding)[4]、蚀刻等。
因此制备方法可包括：(a)将生物可溶性和生物可降解基质材料与免疫原混合，通常是通过重建冻干的免疫原；(b)将步骤(a)中得到的混合物添加至含腔的模具中以形成微针；(c)将所述混合物留在模具中，形成固体微针；(d)任选地，将材料施用于所设置的微针，提供背衬层；和(e)将所述微针(和任选的背衬层)从模具中移除。其他的制备方法可包括：(a)将可聚合单体与免疫原混合，通常是冻干的免疫原；(b)将步骤(a)中得到的混合物添加至含腔的模具中以形成微针；(c)在模具中，将单体与该混合物聚合，形成固体微针；(d)任选地，将材料施用于该固体微针，提供背衬层；和(e)将所述微针(和任选的背衬层)从模具中移除。
固体生物可降解微针理想地是作为贴片上的阵列提供。上如所述，该贴剂可具有两部分，其可适当地采用内盘和外环的形式。所述微针可提供于该贴片的第一内部，且第二外部可包括粘合剂。可将这一贴剂置于皮肤上并按压，使得将外部粘附于皮肤，而将位于内部的微针穿透其表皮。该阵列可通过软光刻或光刻技术制成。
溶解微针阵列在参考文献12中示出，其适用于引发针对破伤风、白喉、疟疾和流感的预防(还参见参考文献错误！未定义书签。)。固体生物可降解微针优于其他形式的针是由于其在针上没有尖锐的表面。因此固体生物可降解针提供更高的安全性并可使其为非处方药并自我给药。
此外，作为固体生物可降解微针的免疫原性组合物制剂比下文所讨论的与固体涂覆微针一同使用的免疫原性组合物更容易实现。许多免疫原性组合物包括洗涤剂，尤其是基于病毒表面抗原的那些。当制备涂覆微针时，这些洗涤剂可产生困难，因此生物可降解微针为该组合物提供了优势。
固体涂覆微针
可用于本发明的另一种有用的固体微针形式是固体、非中空、非生物可降解微针。该微针由以下材料制成，该材料具有机械强度，允许插入到受试者的皮肤。将免疫原涂覆在针上，并且将其注射后，免疫原从该涂层释放。MACROFLUXTM(Zosano)、MTSTM(3M)和IMMUNPATCHTM技术是该递送系统的实例。
所述微针为固体，从而在其插入到患者皮肤后保留完整性(与上述生物生物可降解微针相反)。形成合适的固体针的材料容易得到且可对其测试并就具体需要进行选择，例如金属(例如不锈钢)、聚合物(例如聚碳酸酯，理想地为药物级)或硅。金属针可通过使用激光切割和电抛光[15]或蚀刻[13]来制造。共聚物针可通过微复刻和/或微成型(包括注射成型)来制造。硅针可通过蚀刻[错误！未定义书签。,14]制造。合适的微针在参考文献5、6和15-16中公开。
可将免疫原包被在微针上。此包被可通过以下实现：施用液体涂料，该涂料然后形成固体涂层(例如通过干燥)，或者直接施用固体涂料。此涂覆可通过简单方法实现，例如浸渍涂层，例如涉及浸渍步骤然后干燥步骤(如通过蒸发)，按需重复。其它有用涂覆技术公开于参考文献错误！未定义书签。。还可使用喷雾涂层用于基于糖的制剂，得到干燥的涂层[17]。因此，本发明方法可包括：将免疫原施用于一种或多种固体微针的表面，提供涂覆微针装置用于疫苗注射。
应用于所述针的包被溶液可包括一种或多种生物可溶性和生物可降解基质材料，例如上文形成生物可降解针中所述的那些，和尤其包括碳水化合物。因此，本发明的方法可包括：(a)将生物可溶性和生物可降解基质材料与免疫原混合；(b)将步骤(a)中得到的混合物施用到一种或多种固体微针的表面，提供涂覆微针装置用于疫苗注射。包被可通过施用参考文献26中所述的一种或多种“促沉积组分”来增强。
上述施用步骤可包括施用子步骤，然后是干燥子步骤，且此对子步骤可进行一次或多次，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10次或更多次。
包被的固体微针陈列与流感病毒免疫原用于参考文献13中且被证明激活免疫应答的体液和细胞防御并提供了改善的长期保护。
Toll样受体激动剂
本发明组合物包含TLR激动剂，即可激动Toll样受体的化合物。最优选地，TLR激动剂是人TLR的激动剂。所述TLR激动剂可活化任意TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9或TLR11；优选地，它可活化人TLR4或人TLR7。
本发明组合物可包含一种以上的TLR激动剂。这两种激动剂是彼此不同的，且它们可靶向相同的TLR或不同的TLR。
针对任意具体Toll样受体的化合物的激动剂活性可通过标准测试进行确定。公司，例如Imgenex和Invivogen提供细胞系，其经人TLR基因和NFκB，加上合适的报告基因稳定地共转染，用于测量TLR活化路径。将它们设计成灵敏、宽工作范围的动力学且可用于高通量筛选。一个或多个特异性TLR的组成性表达在这类细胞系中是典型的。还参见参考文献18。许多TLR激动剂在本领域中是已知的，例如参考文献19中描述了一些脂肽分子，其为TLR2激动剂，参考文献20-21各类TLR7的小分子激动剂，且参考文献22&23描述了用于治疗疾病的TLR7和TLR8激动剂。
用于本发明的TLR7激动剂可为苯并萘啶，例如具有式T1的那些：
其中
R1是H、C1-C6烷基、-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5,或-OL2R6；
L1是–C(O)-或–O-；
L2是C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基、亚芳基、亚杂芳基或-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L2的所述C1-C6亚烷基和C2-C6亚烯基任选地经1-4个氟基团取代；
各L3独立地选自：C1-C6亚烷基和-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L3的C1-C6亚烷基任选地经1-4个氟基团取代；
L4是亚芳基或亚杂芳基；
R2是H或C1-C6烷基；
R3选自：C1-C4烷基、–L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5、-L3L4L3R5、-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OR8、-OL3L4R5、-OL3L4L3R5和-C(R5)2OH；
各R4独立地选自：H和氟；
R5是-P(O)(OR9)2，
R6是–CF2P(O)(OR9)2或-C(O)OR10；
R7是–CF2P(O)(OR9)2或-C(O)OR10；
R8是H或C1-C4烷基；
各R9独立地选自：H和C1-C6烷基；
R10是H或C1-C4烷基；
各p独立地选自：1、2、3、4、5和6，和
Q是1、2、3或4。
这些化合物的其他细节公开在参考文献24，且本发明可使用参考文献24中的任意化合物1-28。式T1的化合物的优选实例包括：
其它有用的TLR7激动剂包括，但不限于，参考文献错误！未定义书签。中公开的任意化合物1-247，或参考文献25中的任意化合物1-102。
可用于本发明的TLR2激动剂可为具有式T2的脂肽：
其中：
R1是H、-C(O)-C7-C18烷基或–C(O)-C1-C6烷基；
R2是C7-C18烷基；
R3是C7-C18烷基；
L1是-CH2OC(O)-、-CH2O-、-CH2NR7C(O)-或-CH2OC(O)NR7-；
L2是-OC(O)-、-O-、-NR7C(O)-或-OC(O)NR7-；
R4是-L3R5或-L4R5；
R5是–N(R7)2、-OR7、-P(O)(OR7)2、-C(O)OR7、-NR7C(O)L3R8、-NR7C(O)L4R8、-OL3R6、-C(O)NR7L3R8、-C(O)NR7L4R8、-S(O)2OR7、-OS(O)2OR7、C1-C6烷基、C6芳基、C10芳基、C14芳基、含有1-3个选自O、S和N的杂原子的5-14元杂芳基、C3-C8环烷基或含有1-3个选自O、S和N的杂原子的5-6元杂环烷基，其中R5的所述芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基各自为未取代的或R5的所述芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基各自被1-3个取代基取代，所述取代基独立地选自：-OR9、-OL3R6、-OL4R6、-OR7和-C(O)OR7；
L3是C1-C10亚烷基，其中L3的C1-C10亚烷基是未取代的或L3的C1-C10亚烷基经1-4个R6基团取代，或L3的C1-C10亚烷基经2个在同一碳原子上的C1-C6烷基取代，所述C1-C6烷基与它们所连接的碳原子一起形成C3-C8环烷基；
L4是-((CR7R7)pO)q(CR10R10)p-或-(CR11R11)((CR7R7)pO)q(CR10R10)p-，其中各R11是C1-C6烷基，其与它们所连接的碳原子一起形成C3-C8环烷基；
各R6独立地选自：卤素、C1-C6烷基、经1-2个羟基取代的C1-C6烷基、-OR7、-N(R7)2、-C(O)OH、-C(O)N(R7)2、-P(O)(OR7)2、C6芳基、C10芳基和C14芳基；
各R7独立地选自：H和C1-C6烷基；
R8选自：–SR7、-C(O)OH、-P(O)(OR7)2和含有1-3个选自O和N的杂原子的5-6元杂环烷基；
R9是苯基；
各R10独立地选自：H和卤素；
各p独立地选自：1、2、3、4、5和6，和
q是1、2、3或4。
这些化合物的其他细节公开于参考文献26，且本发明可使用本文公开的任意化合物，例如其实施例1-92，和权利要求17中所列的化合物。另一有用的TLR2激动剂是棕榈酰-Cys(2[R],3-二月桂酰基氧基-丙基)-Abu-D-Glu-NH2，其中：Cys是半胱氨酸残基，Abu是氨基丁酸残基和Glu是谷氨酸残基。这个化合物公开在参考文献19的实施例16，且具有式T3a：
式T1或T2或T3a的激动剂可以药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂合物(例如水合物)、N-氧化物衍生物、异构体(包括互变异构体或对映异构体)或异构体的混合物等存在。一种特别有用的盐是化合物T1c的精氨酸盐，其可用作精氨酸盐一水合物。
其他有用的TLR激动剂是下列化合物：
各种有用的TLR4激动剂是本领域已知的，其中许多是内毒素或脂多糖(LPS)的类似物，或单磷酸类脂A(‘MPLA’)的类似物。例如，本发明所用的TLR4激动剂可为：
(i)3d-MPL(即3-O-脱酰单磷酸类脂A；也称作3-去-O-酰化单磷酸类脂A或3-O-去酰化-4'-单磷酸类脂A)。内毒素的单磷酸类脂A部分的衍生物具有葡糖胺的还原性末端的去酰化位点3。其已从明尼苏达沙门菌(Salmonellaminnesota)的无庚糖突变体(heptoselessmutant)制备，且其在化学上类似于脂质A但缺乏酸不稳定的磷酰基和碱不稳定的酰基。3d-MPL的制备最初描述于参考文献28，且该产物由CorixaCorporation生产并销售。其存在于GSK的‘AS04’佐剂中。进一步的细节可见于参考文献29至30。
(ii)吡喃葡萄糖基脂质A(GLA)[31]或其铵盐，例如
(iii)氨基烷基氨基葡萄糖苷磷酸酯，例如RC-529或CRX-524[32-33]。
RC-529和CRX-524具有以下结构，不同于它们的R2基团：
(iv)化合物，其含有连接至含磷酸酯无环骨架的脂质，例如E5564[34,35]：
(v)在参考文献36中所定义式I、II或III化合物，或其盐，例如化合物‘ER803058’、‘ER803732’、‘ER804053’、‘ER804058’、‘ER804059’、‘ER804442’、‘ER804680’、‘ER803022’、‘ER804764’或‘ER804057’。ER804057还称作E6020且具有下列结构：
而ER803022具有以下结构：
(vi)公开于参考文献37中的一种多肽配体。
优选的TLR4激动剂是单磷酸类脂A(MPL)的类似物
其他生物受体
参考TLR激动剂，本发明如上下文所定义，但它可更广泛地应用于其他小分子免疫增强剂(SMIPs)，其不经由TLR起作用。具体地，可用于本发明的SMIP可激动C型凝集素受体(CLR)或CD1d而不是(或除了)TLR。因此，本公开包括上文所述的关于TLR激动剂的发明，但是其中将TLR激动剂(或类似)的参考替换成CLR激动剂或CD1d激动剂。
CLR激动剂，包括，但不限于，海藻糖-6,6'-二霉菌酸酯(TDM)、其合成类似物D-(+)-海藻糖-6,6'-二山嵛酸酯(TDB)和海藻糖和脂肪酸的其他6,6'-二酯。因此，本发明可应用于海藻糖酯和二酰基海藻糖，其为CLR激动剂。这些激动剂可具有式(C)：
其中R1C(O)-和R2C(O)-相同或不同且为酰基。合适的酰基可为饱和的或不饱和的。它们可选自：分枝菌酸、白喉菌酸、2-十四烷基-3-羟基硬脂酸、2-二十烷基-3-羟基二十四烷酸、bourgeanicacid、山嵛酸、棕榈酸等的酰基残基。有用的分枝菌酸包括α-、甲氧基-和酮-分枝菌酸，以顺式-和或反式-形式。
CD1d激动剂包括，但不限于，α-糖基神经酰胺[38-39]，例如α-半乳糖神经酰胺类。因此，本发明可应用到糖基神经酰胺，其为CD1d激动剂，包括α-半乳糖神经酰胺(α-GalCer)、含植物鞘氨醇的α-糖基神经酰胺、[(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-半乳吡喃糖基)-2-(N-二十六碳酰氨基)-1,3,4-十八烷三醇][(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-galactopyranosyl)-2-(N-hexacosanoylamino)-1,3,4-octadecanetriol]、OCH、KRN7000CRONY-101、3”-O-磺基-半乳糖神经酰胺等。
突变体大肠杆菌不耐热毒素
参考TLR激动剂，本发明如上下文所定义，但它可更广泛地应用于蛋白质性质的佐剂，其不经由TLR起作用，例如突变体大肠杆菌不耐热毒素。因此，本公开包括上文所述的关于TLR激动剂的发明，但其中将TLR激动剂(或类似)的参考替换成突变体大肠杆菌不耐热毒素，其相比于野生型毒素，展现出减弱的酶活性[40,41,42]。各种该突变体是已知的，例如参考文献43。
合适的突变体大肠杆菌不耐热毒素包括，但不限于，K63突变体(其中酶活性A亚单元的野生型Ser-63突变成Lys[43,44])和R72突变体(其中野生型Ala-72突变成Arg[44,45])，或双K63/R72突变体[46]。还可使用所述G192突变体，其中野生型Arg突变成Gly。
免疫原
本发明可用于递送广泛的免疫原，用于治疗或预防广泛的疾病。所述免疫原可引起免疫应答，其预防病毒疾病(例如由包膜或非包膜病毒导致的)、细菌性疾病(例如由革兰阴性或革兰阳性细菌导致的)、真菌性疾病、寄生虫病、自身免疫性疾病或任意其他疾病。所述免疫原还可用于免疫疗法，例如用于治疗肿瘤/癌症、阿尔茨海默氏病或成瘾。
所述免疫原可采取各种形式，例如完整有机体、外膜囊泡、多肽、糖类、脂多糖、缀合物(例如载体和半抗原的缀合物，或载体和糖类的缀合物)等。当所述免疫原是多肽时，其通常为表面多肽，例如粘附素、血凝素、包膜糖蛋白、刺突糖蛋白等。
免疫原可通过在有机体中的表达产生，所述有机体不同于导致该疾病的有机体，所述免疫原提供针对所述疾病的免疫应答。但是，病毒免疫原是引起抵抗病毒疾病的免疫应答的免疫原，即使是该病毒免疫原表达于细菌中。类似地，引起针对细菌性疾病的免疫应答的免疫原是细菌性免疫原，无论该免疫原是怎么产生的。例如，表达于大肠杆菌中的HIV免疫原是病毒免疫原，而不是细菌免疫原。
病毒抗原
适用于本文所提供的免疫原性组合物的病毒抗原包括，但不限于，灭活(或杀死的)病毒、减毒病毒、裂解的病毒制剂、纯化的亚单位制剂、可从病毒中分离、纯化或衍生的病毒蛋白、病毒样颗粒(VLP)和可从病毒中分离、纯化或衍生或重组合成的多核苷酸抗原。在一些实施方案中，病毒抗原可衍生自在细胞培养基或其他底物中增殖的病毒。在其他实施方式中，病毒抗原重组表达。在一些实施方案中，病毒抗原优选地包括表位，其在病毒生命周期的至少一个阶段暴露于病毒的表面。病毒抗原优选地在多个血清型或分离菌(isolates)之间是保守的。适用于本文提供的免疫原性组合物的病毒抗原包括，但不限于，从下述以及下文确定的具体抗原实施例中的一种或多种病毒中衍生的抗原。
正粘病毒：病毒抗原，包括，但不限于，衍生自正粘病毒的那些，例如流感A、B和C。在一些实施方案中，正粘病毒抗原选自一种或多种病毒蛋白，包括血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、核蛋白(NP)、基质蛋白(M1)、膜蛋白质(M2)、一种或多种转录酶成分(PB1、PB2和PA)。在一些实施方案中，所述病毒抗原包括HA和NA。在一些实施方案中，所述流感抗原衍生自大流行期间(一年一次的)流感毒株(interpandemic(annual)flustrains)，而在其他实施方案中，所述流感抗原衍生自可能引起爆发流行的毒株(即，与目前流行的毒株血凝素相比具有新型血凝素的流感毒株，或对鸟类受试者有致病性并可能水平传播给人群的流感毒株，或对人有致病性的流感毒株)。
副粘病毒：病毒抗原，包括，但不限于，衍生自副粘病毒的那些，例如肺病毒(RSV)、副粘病毒(PIV)、偏肺病毒和麻疹病毒(麻疹)。
肺病毒：病毒抗原，包括，但不限于，衍生自肺病毒的那些，例如呼吸道合胞病毒(RSV)、牛呼吸道合胞病毒、小鼠肺炎病毒和火鸡鼻气管炎病毒。优选所述肺病毒是RSV或人偏肺病毒(HMPV)。优选地，所述肺病毒是RSV。在一些实施方案中，肺病毒抗原选自以下蛋白的一种或多种，包括表面蛋白融合(F)、糖蛋白(G)和小疏水蛋白(SH)、基质蛋白M和M2、核壳蛋白N、P和L和非结构蛋白NS1和NS2。在其他实施方案中，肺病毒抗原包括F、G和M。在一些实施方案中，肺病毒抗原还可被配制在或衍生自嵌合病毒，例如，仅以举例的方式，同时包含成分RSV和PIV的嵌合型RSV/PIV病毒。
副粘病毒：病毒抗原，包括，但不限于，衍生自副粘病毒的那些，例如1-4型副流感病毒(PIV)、流行性腮腺炎病毒、仙台病毒、猿猴病毒5型、牛副流感病毒、尼帕病毒、亨尼帕病毒和新城疫病毒。在一些实施方案中，所述副粘病毒是PIV或流行性腮腺炎。在一些实施方案中，副粘病毒抗原选自一种或多种以下蛋白：血凝素–神经氨酸酶(HN)、融合蛋白F1和F2、核蛋白(NP)、磷蛋白(P)、大蛋白(L)和基质蛋白(M)。在其他实施方案中，副粘病毒蛋白包括HN、F1和F2。在一些实施方案中，副粘病毒抗原还被配制或衍生自嵌合病毒，例如，仅通过举例，同时包含RSV和PIV成分的嵌合型RSV/PIV病毒。市售可得的流行性腮腺炎病毒疫苗包括活的减毒流行性腮腺炎病毒，其可以单价形式或与麻疹和风疹疫苗(MMR)组合。在其他实施方案中，所述副粘病毒是尼帕病毒或亨尼帕病毒且所述抗原选自以下的一种或多种蛋白：融合(F)蛋白、糖蛋白(G)的蛋白、基质(M)蛋白、核壳(N)蛋白、大(L)蛋白和磷蛋白(P)。
痘病毒：病毒抗原，包括，但不限于，衍生自正痘病毒的那些，例如天花(Variolavera)，包括但不限于，重型天花和轻型天花。
偏肺病毒：病毒抗原，包括，但不限于，偏肺病毒，例如人偏肺病毒(hMPV)和鸟类偏肺病毒(aMPV)。在一些实施方案中，偏肺病毒抗原选自以下的一种或多种蛋白，包括表面蛋白融合蛋白(F)、糖蛋白(G)和小疏水蛋白(SH)、基质蛋白M和M2、核壳蛋白N、P和L。在其他实施方案中，偏肺病毒抗原包括F、G和M。在一些实施方案中，偏肺病毒抗原还可配制于或衍生自嵌合病毒。
麻疹病毒：病毒抗原，包括，但不限于，衍生自麻疹病毒的那些，例如麻疹。在一些实施方案中，麻疹病毒抗原选自以下一种或多种蛋白：血凝素(H)、糖蛋白(G)、融合因子(F)、大蛋白(L)、核蛋白(NP)、聚合酶磷蛋白(P)和基质(M)。市售可得的麻疹疫苗包括活的减毒麻疹病毒，其通常与流行性腮腺炎和风疹(MMR)组合。
微小核糖核酸病毒：病毒抗原包括，但不限于，衍生自微小核糖核酸病毒的那些，例如肠道病毒、鼻病毒、嗜肝RNA病毒(Heparnavirus)、心脏病毒和口蹄疫病毒。在一些实施方案中，所述抗原衍生自肠道病毒，而在其他实施方案中，所述肠病毒是脊髓灰质炎病毒。仍在其他实施方案中，所述抗原衍生自鼻病毒。在一些实施方案中，将所述抗原配制成病毒样颗粒(VLP)。
肠病毒：病毒抗原包括，但不限于，衍生自肠病毒的那些，例如1、2或3型脊髓灰质炎病毒、1-22型和24型柯萨奇病毒A、1-6型柯萨奇病毒B、1-9型、11-27型和29-34型艾柯(ECHO)病毒和68-71型肠病毒。在一些实施方案中，所述抗原衍生自肠病毒，而在其他实施方案中，所述肠病毒是脊髓灰质炎病毒。在一些实施方案中，所述肠病毒抗原选自一种或多种以下衣壳蛋白VP0、VP1、VP2、VP3和VP4。市售可得的脊髓灰质炎疫苗包括灭活的脊髓灰质炎疫苗(IPV)和口服的脊髓灰质炎病毒疫苗(OPV)。在一些实施方案中，将所述抗原配制成病毒样颗粒。
布尼亚病毒：病毒抗原包括，但不限于，衍生自正布尼亚病毒的那些，例如加利福尼亚脑炎病毒、白蛉病毒，例如立夫特山谷热病毒、或内罗毕病毒，例如克里米亚-刚果出血热病毒。
鼻病毒：病毒抗原包括，但不限于，衍生自鼻病毒的那些。在一些实施方案中，所述鼻病毒抗原选自以下的一种或多种衣壳蛋白：VP0、VP1、VP2、VP2和VP4。在一些实施方案中，将所述抗原配制成病毒样颗粒(VLP)。
嗜肝RNA病毒：病毒抗原包括，但不限于，衍生自嗜肝RNA病毒的那些，例如，仅通过举例的方式，甲型肝炎病毒(HAV)。市售可得的HAV疫苗包括灭活的HAV疫苗。
披膜病毒：病毒抗原包括，但不限于，衍生自披膜病毒的那些，例如风疹病毒、甲病毒或动脉炎病毒。在一些实施方案中，所述抗原衍生自风疹病毒，例如仅通过举例的方式，风疹病毒。在一些实施方案中，所述披膜病毒抗原选自：E1、E2、E3、C、NSP-1、NSPO-2、NSP-3或NSP-4。在一些实施方案中，所述披膜病毒抗原选自：E1、E2或E3。市售可得的风疹疫苗包括活的冷适应病毒，其通常与流行性腮腺炎和麻疹疫苗(MMR)组合。
黄病毒：病毒抗原包括，但不限于，衍生自黄病毒的那些，例如蜱传脑炎(TBE)病毒、登革热(1、2、3或4型)病毒、黄热病毒、日本脑炎病毒、科萨努尔森林病毒、西尼罗河脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、俄罗斯春夏脑炎病毒、波瓦生脑炎病毒。在一些实施方案中，所述黄病毒抗原选自：PrM、M、C、E、NS-1、NS-2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5。在一些实施方案中，所述黄病毒抗原选自：PrM、M和E。市售可得的TBE疫苗包括灭活病毒疫苗。在一些实施方案中，将所述抗原配制成病毒样颗粒(VLP)。
瘟病毒：病毒抗原包括，但不限于，衍生自瘟病毒的那些，例如牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪典型高热(CSFV)或Border病病毒(BDV)。
嗜肝性DNA病毒：病毒抗原包括，但不限于，衍生自嗜肝性DNA病毒的那些，例如乙型肝炎病毒。在一些实施方案中，所述嗜肝性DNA病毒抗原选自：表面抗原(L、M和S)、核心抗原(HBc，HBe)。市售可得的HBV疫苗包括亚单位疫苗，其包含表面抗原S蛋白。
丙型肝炎病毒：病毒抗原包括，但不限于，衍生自丙型肝炎病毒(HCV)的那些。在一些实施方案中，所述HCV抗原选自：E1、E2、E1/E2、NS345多聚蛋白、NS345-核心多聚蛋白、核心和/或非结构域的肽中的一种或多种。在一些实施方案中，所述丙型肝炎病毒抗原包括以下的一种或多种：HCVE1和或E2蛋白、E1/E2异源二聚体络合物、核心蛋白和非结构蛋白，或这些抗原的片段，其中可任选地修改所述非结构蛋白以除去酶活性但保留免疫原性。在一些实施方案中，将所述抗原配制成病毒样颗粒(VLP)。
弹状病毒：病毒抗原包括，但不限于，衍生自弹状病毒的那些，例如狂犬病病毒(Lyssavirus)(Rabies病毒)和水泡性病毒(VSV)。弹状病毒抗原可选自：糖蛋白(G)、核蛋白(N)、大蛋白(L)、非结构蛋白(NS)。市售可得的狂犬病病毒疫苗包含在人二倍体细胞或胎恒河猴肺细胞中培养的杀死的病毒。
杯状病毒：病毒抗原包括，但不限于，衍生自杯状病毒的那些，例如诺沃克病毒和诺沃克样病毒，例如夏威夷病毒和雪山病毒。在一些实施方案中，将所述抗原配制成病毒样颗粒(VLP)。
冠状病毒：病毒抗原包括，但不限于，衍生自冠状病毒的那些，SARS、人呼吸道冠状病毒、鸟类感染性支气管炎病毒(IBV)、小鼠肝炎病毒(MHV)和猪传播性胃肠炎病毒(TGEV)。在一些实施方案中，所述冠状病毒抗原选自：刺突蛋白(S)、包膜蛋白(E)、基质蛋白(M)、核壳蛋白(N)和血凝素-酯酶糖蛋白(HE)。在一些实施方案中，所述冠状病毒抗原衍生自SARS病毒。在一些实施方案中，所述冠状病毒衍生自SARS病毒抗原，如WO04/92360所述。
逆转录病毒：病毒抗原包括，但不限于，衍生自逆转录病毒的那些，例如肿瘤病毒、慢病毒或泡沫病毒。在一些实施方案中，所述肿瘤病毒抗原衍生自HTLV-1、HTLV-2或HTLV-5。在一些实施方案中，所述慢病毒抗原衍生自HIV-1或HIV-2。在一些实施方案中，所述抗原衍生自HIV-1亚型(或分化单位)，包括，但不限于，HIV-1亚型(或分化单位)A、B、C、D、F、G、H、J、K、O。在其他实施方案中，所述抗原衍生自HIV-1流行重组型(circulatingrecombinantform)(CRF)，包括，但不限于，A/B、A/E、A/G、A/G/I等。在一些实施方案中，所述逆转录病毒抗原选自：gag、pol、env、tax、tat、rex、rev、nef、vif、vpu和vpr。在一些实施方案中，所述HIV抗原选自：gag(p24gag和p55gag)、env(gp160和gp41)、pol、tat、nef、revvpu、小型蛋白(miniproteins)(优选p55gag和gp140v删除)。在一些实施方案中，所述HIV抗原衍生自一种或多种以下毒株：HIVIIIb、HIVSF2、HIVLAV、HIVLAI、HIVMN、HIV-1CM235、HIV-1US4、HIV-1SF162、HIV-1TV1、HIV-1MJ4。在一些实施方案中，所述抗原衍生自内源性人逆转录病毒，包括，但不限于，HERV-K(“老的”HERV-K和“新的”HERV-K)。
呼吸道肠道病毒：病毒抗原包括，但不限于，衍生自呼吸道肠道病毒的那些，例如正呼吸道肠道病毒、轮状病毒、环状病毒或科罗拉多蜱媒热病毒。在一些实施方案中，所述呼吸道肠道病毒抗原选自：结构性蛋白λ1、λ2、λ3、μ1、μ2、σ1、σ2或σ3，或非结构蛋白σNS、μNS或σ1s。在一些实施方案中，所述呼吸道肠道病毒抗原衍生自轮状病毒。在一些实施方案中，所述轮状病毒抗原选自：VP1、VP2、VP3、VP4(或其裂解产物VP5和VP8)、NSP1、VP6、NSP3、NSP2、VP7、NSP4或NSP5。在一些实施方案中，所述轮状病毒抗原包括VP4(或其裂解产物VP5和VP8)和VP7。
细小病毒：病毒抗原包括，但不限于，衍生自细小病毒的那些，例如细小病毒B19。在一些实施方案中，所述细小病毒抗原选自：VP-1、VP-2、VP-3、NS-1和NS-2。在一些实施方案中，所述细小病毒抗原是衣壳蛋白VP1或VP-2。在一些实施方案中，将所述抗原配制成病毒样颗粒(VLP)。
丁型肝炎病毒(HDV)：病毒抗原包括，但不限于，衍生自HDV的那些，尤其是HDV的δ-抗原。
戊型肝炎病毒(HEV)：病毒抗原包括，但不限于，衍生自HEV的那些。
庚型肝炎病毒(HGV)：病毒抗原包括，但不限于，衍生自HGV的那些。
人疱疹病毒：病毒抗原包括，但不限于，衍生自人疱疹病毒的那些，例如，仅通过举例的方式，单纯疱疹病毒(HSV)、水痘带状疱疹病毒(VZV)、EB病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)、人疱疹病毒6(HHV6)、人疱疹病毒7(HHV7)和人疱疹病毒8(HHV8)。在一些实施方案中，所述人疱疹病毒抗原选自：即刻早期蛋白(α)、早期蛋白(β)和晚期蛋白(γ)。在一些实施方案中，所述HSV抗原衍生自HSV-1或HSV-2毒株。在一些实施方案中，所述HSV抗原选自：糖蛋白gB、gC、gD和gH、融合蛋白(gB)或免疫逃逸蛋白(gC、gE或gI)。在一些实施方案中，所述VZV抗原选自：核心、核壳、被摸或包膜蛋白。活的减毒VZV疫苗是市售可得的。在一些实施方案中，所述EBV抗原选自：早期抗原(EA)蛋白、病毒衣壳抗原(VCA)和薄膜抗原(MA)的糖蛋白。在一些实施方案中，所述CMV抗原选自：衣壳蛋白、包膜糖蛋白(例如gB和gH)和被摸蛋白。在其他实施方案中，CMV抗原可选自一种或多种以下蛋白：pp65、IE1、gB、gD、gH、gL、gM、gN、gO、UL128、UL129、gUL130、UL150、UL131、UL33、UL78、US27、US28、RL5A、RL6、RL10、RL11、RL12、RL13、UL1、UL2、UL4、UL5、UL6、UL7、UL8、UL9、UL10、UL11、UL14、UL15A、UL16、UL17、UL18、UL22A、UL38、UL40、UL41A、UL42、UL116、UL119、UL120、UL121、UL124、UL132、UL147A、UL148、UL142、UL144、UL141、UL140、UL135、UL136、UL138、UL139、UL133、UL135、UL148A、UL148B、UL148C、UL148D、US2、US3、US6、US7、US8、US9、US10、US11、US12、US13、US14、US15、US16、US17、US18、US19、US20、US21、US29、US30和US34A。CMV抗原还可与一种或多种CMV蛋白融合，例如，仅通过举例的方式，pp65/IE1(Reap等人，疫苗(2007)25:7441-7449)。在一些实施方案中，将所述抗原配制成病毒样颗粒(VLP)。
乳头多瘤病毒：抗原，包括，但不限于，衍生自乳头多瘤病毒的那些，例如乳头瘤病毒和多瘤病毒。在一些实施方案中，所述乳头瘤病毒包括HPV血清型1、2、4、5、6、8、11、13、16、18、31、33、35、39、41、42、47、51、57、58、63和65。在一些实施方案中，所述HPV抗原衍生自血清型6、11、16或18。在一些实施方案中，所述HPV抗原选自：衣壳蛋白(L1)和(L2)或E1–E7，或其融合。在一些实施方案中，将所述HPV抗原配制成病毒样颗粒(VLP)。在一些实施方案中，所述多瘤病毒包括BK病毒和JK病毒。在一些实施方案中，所述多瘤病毒抗原选自：VP1、VP2或VP3。
腺病毒：抗原包括衍生自腺病毒的那些。在一些实施方案中，所述腺病毒抗原衍生自腺病毒血清型36(Ad-36)。在一些实施方案中，所述抗原衍生自编码Ad-36外壳蛋白或其片段的蛋白或肽序列(WO2007/120362)。
还提供了抗原、组合物、方法和微生物，详见Vaccines，第4版(Plotkin和Orenstein编辑，2004年)；MedicalMicrobiology第4版(Murray等人编辑，2002年)；Virology，第3版(W.K.Joklik编辑，1988年)；FundamentalVirology，第2版(B.N.Fields和D.M.Knipe编辑，1991年)，预期其与本文提供的免疫原性组合物组合。
在优选实施方案中，所述免疫原可引起针对流感病毒(包括流感A和B病毒)的免疫应答。各种形式的流感病毒免疫原当前可用，其通常是基于活的病毒或灭活的病毒。灭活的疫苗可基于整个病毒粒子、裂开的粒子或纯化的表面抗原。流感免疫原还可以病毒小体(virosome)的形式存在。血凝素是当前灭活疫苗中的主要免疫原，且疫苗参照HA水平进行标准化，其通常经SRID进行测量。尽管例如对于儿童，或在大流行的情况下，或当使用佐剂时可使用低剂量，现有的疫苗通常每毒株含有约15μg的HA。已使用分剂量例如1/2(即每毒株7.5μg的HA)、1/4和1/8，也使用高剂量(例如3x或9x剂量[47,48])。因此，组合物可包含0.1至150μg的HA/流感毒株，优选0.1至50μg，例如0.1-20μg、0.1-15μg、0.1-10μg、0.1-7.5μg、0.5-5μg等。具体剂量包括例如约45、约30、约15、约10、约7.5、约5、约3.8、约3.75、约1.9、约1.5等/毒株。在疫苗中所包含的各毒株通常含有基本上相同质量的HA，例如使得各毒株的HA质量在平均HA质量/毒株的10％的范围内，且优选在该平均值的5％的范围内。对于活疫苗，剂量是通过半数组织培养感染剂量(TCID50)测定的，而不是HA含量，且TCID50通常是每毒株106至108(优选106 . 5-107.5)。可使用支持流感病毒复制的细胞系，而不是使用SPF卵作为病毒生长的底物，其中病毒获自鸡蛋的感染的尿囊液。所述细胞系通常是哺乳动物来源，例如MDCK。流感A病毒免疫原可来源于任意合适的HA亚型毒株，例如H1、H3、H5、H7、H9等，例如H1N1、H3N2和/或H5N1毒株。
细菌抗原
适用于本文提供的免疫原性组合物的细菌抗原包括，但不限于，蛋白、多糖、脂多糖、多核苷酸和外膜囊泡，其从细菌中被分离、纯化或衍生。在一些实施方案中，所述细菌抗原包括细菌裂解物和灭活的细菌制剂。在一些实施方案中，所述细菌抗原通过重组体表达产生。在一些实施方案中，所述细菌抗原包含表位，其在细菌生命周期的至少一个阶段暴露于该细菌的表面。细菌抗原优选地在多个血清型之间是保守的。在一些实施方案中，所述细菌抗原衍生自一种或多种下文提及以及下文确定的具体抗原实施例中的细菌。
脑膜炎奈瑟球菌：脑膜炎奈瑟球菌抗原包括，但不限于，蛋白、糖(包括多糖或脂低聚糖)或从脑膜炎奈瑟球菌血清群，例如A、C、W135、Y、X或B中纯化或衍生的外膜囊泡。脑膜炎奈瑟球菌蛋白抗原的有用的组合包括含有NHBA、fHbp和/或NadA免疫原中的一、二或三种，例如参考文献49中所公开的混合物。
肺炎链球菌：肺炎链球菌抗原包括，但不限于，来自肺炎链球菌的糖(包括多糖或寡糖)和/或蛋白。所述糖可以是多糖，其具有在从细菌中纯化该糖的过程中所产生的尺寸，或者其可为裂解该多糖所产生的寡糖。在该7价PREVNARTM产物中，例如，该糖中的6个是以完整的多糖存在，而一个(18C血清型)是以寡糖存在。在一些实施方案中，糖抗原选自一种或多种下列肺炎球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F和/或33F。免疫原性组合物可包含多种血清型例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23种或更多种血清型。7价、9价、10价、11价和13价缀合组合在本领域中是已知的，正如23价非缀合组合也是已知的。例如，10价组合可包含来自血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F的糖。11价组合还可包含血清型3的糖。可将12价组合加至该10价混合物：血清型6A和19A；6A和22F；19A和22F；6A和15B；19A和15B；r22F和15B；可将13价组合加至该11价混合物：血清型19A和22F；8和12F；8和15B；8和19A；8和22F；12F和15B；12F和19A；12F和22F；15B和19A；15B和22F等。在一些实施方案中，蛋白抗原可选自在WO98/18931、WO98/18930、美国专利6,699,703、美国专利6,800,744、WO97/43303、WO97/37026、WO02/079241、WO02/34773、WO00/06737、WO00/06738、WO00/58475、WO2003/082183、WO00/37105、WO02/22167、WO02/22168、WO2003/104272、WO02/08426、WO01/12219、WO99/53940、WO01/81380、WO2004/092209、WO00/76540、WO2007/116322，LeMieux等人，Infect.Imm.(2006)74:2453-2456，Hoskins等人，J.Bacteriol.(2001)183:5709-5717，Adamou等人，Infect.Immun.(2001)69(2):949-958，Briles等人，J.Infect.Dis.(2000)182:1694-1701，Talkington等人，Microb.Pathog.(1996)21(1):17-22，Bethe等人，FEMSMicrobiol.Lett.(2001)205(1):99-104，Brown等人，Infect.Immun.(2001)69:6702-6706，Whalen等人，FEMSImmunol.Med.Microbiol.(2005)43:73-80，Jomaa等人，Vaccine(2006)24(24):5133-5139中鉴定的蛋白。在其他实施方案中，肺炎链球菌蛋白可选自：聚三联组氨酸家族(PhtX)、胆碱结合蛋白家族(CbpX)、CbpX截短物、LytX家族、LytX截短物、CbpX截短物-LytX截短物嵌合蛋白、肺炎球菌自溶酶(Ply)、PspA、PsaA、Spl28、SpIOl、Spl30、Spl25、Spl33、肺炎球菌菌毛亚单位。
酿脓链球菌(A组链球菌)：A组链球菌抗原包括，但不限于，在WO02/34771或WO2005/032582(包括GAS40)中确定的蛋白、GASM蛋白片段的融合蛋白(包括WO02/094851，和Dale，Vaccine(1999)17:193-200，和Dale，Vaccine14(10):944-948中所述的那些)、纤连蛋白结合蛋白(Sfb1)、链球菌血红素相关蛋白(Shp)和链球菌溶血素S(SagA)。
粘膜炎莫拉菌：莫拉菌抗原包括，但不限于，在WO02/18595和WO99/58562中鉴定的抗原、外膜蛋白抗原(HMW-OMP)、C-抗原和/或LPS。
百日咳杆菌：百日咳抗原包括，但不限于，源于百日咳杆菌的百日咳类毒素(PT)和丝状血球凝集素(FHA)，其还任选地与百日咳杆菌粘附素和/或凝集原2和3组合。
伯克霍尔德杆菌：伯克霍尔德杆菌抗原包括，但不限于鼻疽伯克霍尔德杆菌、类鼻疽伯克霍尔德杆菌和洋葱伯克霍尔德杆菌。
金黄色葡萄球菌：金黄色葡萄球菌抗原包括，但不限于，金黄色葡萄球菌的多糖和/或蛋白。金黄色葡萄球菌多糖包括，但不限于，5型和8型荚膜多糖(CP5和CP8)，其任选地缀合于无毒的重组铜绿假单胞菌外毒素A，例如StaphVAXTM、336型多糖(336PS)、多糖细胞间粘连(PIA，也称作PNAG)。金黄色葡萄球菌蛋白包括，但不限于，衍生自表面蛋白的抗原、玻璃酸酶(杀白细胞素、激酶、透明质酸酶)、抑制吞噬细胞吞噬的表面因子(荚膜，蛋白A)、类葫萝卜素、过氧化氢酶的产生、蛋白A、凝固酶、凝固因子和/或破坏膜的毒素(任选去毒)，其裂解真核细胞膜(溶血素、白细胞毒素、杀白细胞素)。在一些实施方案中，金黄色葡萄球菌抗原可选自在WO02/094868、WO2008/019162、WO02/059148、WO02/102829、WO03/011899、WO2005/079315、WO02/077183、WO99/27109、WO01/70955、WO00/12689、WO00/12131、WO2006/032475、WO2006/032472、WO2006/032500、WO2007/113222、WO2007/113223、WO2007/113224中鉴定的蛋白。在其他实施方案中，金黄色葡萄球菌抗原可选自：IsdA、IsdB、IsdC、SdrC、SdrD、SdrE、ClfA、ClfB、SasF、SasD、SasH(AdsA)、Spa、EsaC、EsxA、EsxB、Emp、HlaH35L、CP5、CP8、PNAG、336PS。
表皮葡萄球菌：表皮葡萄球菌抗原包括，但不限于，粘液相关的抗原(slime-associatedantigen，SAA)。
破伤风梭菌(破伤风)：破伤风抗原包括，但不限于，破伤风类毒素(TT)。在一些实施方案中，该抗原用作与本文提供的免疫原性组合物结合/缀合的载体蛋白。
产气荚膜梭菌：抗原包括，但不限于，来自产气荚膜梭菌的Epsilon毒素。
肉毒梭状芽孢杆菌(肉毒杆菌毒素)：肉毒杆菌毒素抗原包括，但不限于，衍生自肉毒梭状芽孢杆菌的那些。
白喉棒杆菌(白喉)：白喉抗原包括，但不限于，白喉毒素，优选去毒的，例如CRM197。其他能够调节、抑制或与ADP核糖基化相关的的抗原用于与本文提供的免疫原性组合物组合/共同给药/缀合。在一些实施方案中，白喉类毒素用作载体蛋白。
流感嗜血杆菌B(Hib)：Hib抗原包括，但不限于，Hib糖抗原。所述Hib抗原之间可缀合。
铜绿假单胞菌：假单胞菌抗原包括，但不限于，内毒素A、Wzz蛋白、铜绿假单胞菌LPS、从PAO1(O5血清型)中分离出的LPS和/或外膜蛋白，包括外膜蛋白F(OprF)。
布鲁氏菌：衍生自布鲁氏菌的细菌抗原，包括但不限于，流产布鲁氏菌、犬布鲁菌、羊流产布氏杆菌、林鼠布鲁菌、羊布鲁菌、猪流产布氏杆菌和鳍型布鲁菌。
弗朗西斯菌：衍生自弗朗西斯氏菌的细菌抗原，包括但不限于，新凶手弗朗西斯菌、蜃楼弗朗西斯菌和土拉热弗朗西斯菌。
链球菌无乳链球菌(B组链球菌)：B组链球菌抗原包括，但不限于，在WO02/34771、WO03/093306、WO04/041157或WO2005/002619中鉴定的蛋白或糖抗原(包括蛋白GBS80、GBS104、GBS276和GBS322，且包括衍生自血清型Ia、Ib、Ia/c、II、III、IV、V、VI、VII和VIII的糖抗原)。
淋病奈瑟氏菌：淋病奈瑟氏菌抗原包括，但不限于，Por(或孔蛋白)蛋白，例如PorB(参见Zhu等人，Vaccine(2004)22:660-669)、转移结合蛋白，例如TbpA和TbpB(参见Price等人，Infection和Immunity(2004)71(1):277-283)、不透明蛋白(例如Opa)、还原反应可修饰蛋白(Rmp)和外膜囊泡(OMV)的制剂(参见Plante等人，JInfectiousDisease(2000)182:848-855)，还参见例如，WO99/24578、WO99/36544、WO99/57280、WO02/079243)。
沙眼衣原体：沙眼衣原体抗原包括，但不限于，衍生自血清型A、B、Ba和C的抗原(沙眼的致病因子、失明的原因)、血清型L1、L2&L3(与性病淋巴肉芽肿有关)和血清型D-K。在一些实施方案中，沙眼衣原体抗原包括，但不限于，在WO00/37494、WO03/049762、WO03/068811或WO05/002619中鉴定的抗原，包括PepA(CT045)、LcrE(CT089)、ArtJ(CT381)、DnaK(CT396)、CT398、OmpH-like(CT242)、L7/L12(CT316)、OmcA(CT444)、AtosS(CT467)、CT547、Eno(CT587)、HrtA(CT823)和MurG(CT761)。
苍白密螺旋体(梅毒)：梅毒抗原包括，但不限于，TmpA抗原。
杜克雷嗜血杆菌(导致软性下疳)：杜克雷抗原包括，但不限于，外膜蛋白(DsrA)。
粪肠球菌或屎肠球菌：抗原包括，但不限于，三糖重复或其他肠球菌衍生的抗原。
幽门螺杆菌：幽门螺杆菌抗原包括，但不限于，CagA、VacA、NAP、HopX、HopY和/或脲酶抗原。
腐生性葡萄球菌：抗原包括，但不限于，腐生性葡萄球菌抗原的160kDa血凝素。
小肠结肠炎耶尔森菌：抗原包括，但不限于，LPS。
大肠杆菌：大肠杆菌抗原可衍生自肠毒性大肠杆菌(ETEC)、肠聚集性大肠杆菌(EAggEC)、扩散粘附性大肠杆菌(DAEC)、致肠病性大肠杆菌(EPEC)、肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)和/或肠出血性大肠杆菌(EHEC)。ExPEC抗原包括，但不限于，辅助定居因子(orf3526)、orf353、细菌Ig样域(1组)蛋白(orf405)、orf1364、NodT家族外膜-因子-脂蛋白外排转运体(orf1767)、gspK(orf3515)、gspJ(orf3516)、tonB依赖性铁载体受体(orf3597)、菌毛蛋白(orf3613)、upec-948、upec-1232、1型菌毛蛋白的链前体(upec-1875)、yapH同系物(upec-2820)和溶血素A(recp-3768)。
炭疽杆菌(炭疽)：炭疽杆菌抗原包括，但不限于，A-组分(致死因子(LF)和水肿因子(EF))，二者可共享作为保护性抗原(PA)的同一种B-成分。在一些实施方案中，炭疽杆菌抗原是任选去毒的。
鼠疫耶尔森菌(鼠疫)：鼠疫抗原包括，但不限于，F1荚膜抗原、LPS、鼠疫耶尔森菌V抗原。
结核分枝杆菌：结核抗原包括，但不限于，脂蛋白、LPS、BCG抗原、抗原85B(Ag85B)的融合蛋白、任选配制于阳离子脂质囊泡中的ESAT-6、与结核分枝杆菌(Mtb)异柠檬酸脱氢酶相关的抗原和MPT51抗原。
立克次体：抗原包括，但不限于，外膜蛋白，包括外膜蛋白A和/或B(OmpB)、LPS和表面蛋白抗原(SPA)。
单核细胞增生李斯特菌：细菌抗原包括，但不限于，衍生自单核细胞增生李斯特菌的那些。
肺炎衣原体：抗原包括，但不限于，在WO02/02606中鉴定的那些。
霍乱弧菌：抗原包括，但不限于，蛋白酶抗原、LPS，尤其是霍乱弧菌II的脂多糖、O1InabaO特异性多糖、霍乱弧菌O139、IEM108疫苗的抗原和紧密连接毒素(Zot)。
伤寒沙门菌(伤寒)：抗原包括，但不限于，荚膜多糖，优选轭合物(Vi，即vax-TyVi)。
伯氏疏螺旋体(莱姆病)：抗原包括，但不限于，脂蛋白(例如OspA、OspB、OspC和OspD)、其他表面蛋白，例如OspE相关蛋白(Erps)、核心蛋白聚糖结合蛋白(例如DbpA)和抗原可变的VI蛋白，例如与P39和P13相关的抗原(内在膜蛋白、VlsE抗原变异蛋白。
牙龈卟啉单胞菌：抗原，包括，但不限于，牙龈卟啉单胞菌外膜蛋白(OMP)。
克雷伯菌：抗原，包括，但不限于，OMP，包括OMPA，或多糖，其任选缀合至破伤风类毒素。
用于本发明提供的免疫原性组合物的其他细菌抗原包括，但不限于，上述任意的荚膜抗原、多糖抗原、蛋白抗原或多核苷酸抗原。用于本文提供的免疫原性组合物的其他细菌抗原包括，但不限于，外膜囊泡(OMV)制剂。此外，用于本文提供的免疫原性组合物的其他细菌抗原包括，但不限于，上述任意细菌的活的、减毒和/或纯化形式。在一些实施方案中，在本文中提供的免疫原性组合物中所用的细菌抗原衍生自革兰阴性细菌，而在其他实施方案中，它们衍生自革兰阳性细菌。在一些实施方案中，用于本文提供的免疫原性组合物的细菌抗原衍生自好氧细菌，而在其他实施方案中，它们衍生自厌氧细菌。
在一些实施方案中，任意上述细菌衍生的糖(多糖、LPS、LOS或寡糖)缀合至另一试剂或抗原，例如载体蛋白(例如CRM197)。在一些实施方案中，这样的缀合是直接缀合，其受糖的羰基部分到蛋白质的氨基部分的还原氨基化的影响。在其他实施方案中，所述糖是通过连接体缀合，例如，用琥珀酰胺或其他连接，其提供于BioconjugateTechniques，1996和CRC，ChemistryofProteinConjugationandCross-Linking，1993中。
真菌抗原
适用于本文提供的免疫原性组合物的真菌抗原包括，但不限于，源自下文列出的一种或多种真菌中的抗原。
源自皮肤癣菌的真菌抗原，包括：絮状表皮霉菌、奥杜安氏小孢子菌、犬小孢子菌、扭曲小孢子菌、马类小孢子菌、石膏样小孢子菌、矮小孢子菌、同心发癣菌、马发癣菌、鸡毛癣菌、石膏样发癣菌、麦格毛菌、须毛癣菌、昆克努发癣菌、红色毛癣菌、许兰毛癣菌、断发毛癣菌、疣状毛癣菌、疣状毛癣菌变种(T.verrucosumvar.album)、盘状变种、黄褐变种、紫色毛癣菌、和/或蜜块状发癣菌(Trichophytonfaviforme)；和
源自以下的真菌病原体：烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、构巢曲霉、土曲霉、聚多曲霉、黄曲霉、灰绿曲霉、头状芽生裂殖菌、白色念珠菌、假丝酵母烯醇化酶、热带念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌、星状念珠菌、克鲁斯假丝酵母、Candidaparakwsei、葡萄牙念珠菌、假热带念珠菌、吉利蒙德念珠菌、卡氏分支着色霉菌、粗球孢子菌、皮炎芽生菌、新型隐球菌、棒地霉、荚膜组织胞浆菌、肺炎杆菌、微孢子虫、脑胞内原虫属、肠有膈微孢虫和比氏微孢子虫。不太常见的是短粒虫属(BrachiolaSpp.)、微孢子虫属(MicrosporidiumSpp.)、微孢子虫属(NosemaSpp.)、具褶孢虫属(Pleistophoraspp.)、气管普孢虫属(TrachipleistophoraSpp.)、条孢虫属(VittaformaSpp.)、巴西芽生菌(ParacoccidioidesBrasiliensis)、卡氏肺囊虫(PneumocystisCarinii)、凋萎腐酶(PythiumnInsidiosum)、卵状糠疹癣菌(PityrosporumOvale)、酿酒酵母(Sacharomycescerevisae)、布拉酵母(SaccharomycesBoulardii)、粟酒酵母(SaccharomycesPombe)、尖端赛多孢子菌(ScedosporiumApiosperum)、申克孢子丝菌(SporothrixSchenckii)、白吉利丝孢酵母(TrichosporonBeigelii)、鼠弓形体(ToxoplasmaGondii)、马尔尼菲青霉菌(PenicilliumMarneffei)、马拉色菌属(MalasseziaSpp.)、产色芽生菌属(FonsecaeaSpp.)、王氏皮炎霉菌属(WangiellaSpp.)、孢子丝菌属(SporothrixSpp.)、蛙粪霉属(BasidiobolusSpp.)、耳霉属(ConidiobolusSpp.)、根霉属(RhizopusSpp.)、毛霉属(MucorSpp.)、犁头霉属(AbsidiaSpp.)、被孢霉属(MortierellaSpp.)、小克银汉霉属(Cunninghamellaspp.)、瓶霉属(SaksenaeaSpp.)、链格孢菌属(AlternariaSpp.)、弯孢霉属(Curvulariaspp.)、长蠕孢菌属(HelminthosporiumSpp.)、镰孢菌属(FusariumSpp.)、曲霉属(AspergillusSpp.)、青霉属(PenicilliumSpp.)、褐腐病菌属(MonoliniaSpp.)、丝核菌属(RhizoctoniaSpp.)、拟青霉属(PaecilomycesSpp.)、皮司霉属(PithomycesSpp.)和枝孢霉属(CladosporiumSpp.)。
在一些实施方案中，制造真菌抗原的方法包括一种方法，其中溶解的级分提取和分离自真菌细胞的不溶的部分，所述真菌细胞的细胞壁已被基本上除去或至少部分除去，其特征在于该方法包括以下步骤：获得活的真菌细胞；得到真菌细胞，其细胞壁已被基本上除去或至少部分除去；使真菌细胞破裂，该真菌细胞的细胞壁已被基本上除去或至少部分除去；得到不溶的级分；和从不溶性级分提取和分离可溶级分。
例如，免疫原可引发抗念珠菌真菌如白色念珠菌的免疫应答。例如，免疫原可为β-葡聚糖，其可缀合于载体蛋白。所述葡聚糖可包括β-1,3和/或β-1,6键。合适的免疫原包括参考文献75和76所公开的STD抗原。
在一些实施方案中，本文提供的免疫原性组合物包括源自性传播疾病(STD)的一种或多种抗原。在一些实施方案中，所述抗原提供对STD的预防性，所述STD例如衣原体、生殖器疱疹、肝炎(例如HCV)、生殖器疣、淋病、梅毒和/或软性下疳。在其他实施方案中，提供所述抗原用于治疗STD如衣原体、生殖器疱疹、肝炎(如HCV)、生殖器疣、淋病、梅毒和/或软下疳。所述抗原来源于一种或多种病毒或细菌性STD。在一些实施方案中，病毒STD抗原来源于HIV、单纯疱疹病毒(HSV-1和HSV-2)、人乳头瘤病毒(HPV)和肝炎(HCV)。在一些实施方案中，细菌STD抗原来源于淋病奈瑟球菌、沙眼衣原体、苍白密螺旋体、杜克雷嗜血杆菌、大肠杆菌、和无乳链球菌。源自这些病原体的特异性抗原的实例如上所述。
呼吸道抗原
在一些实施方案中，本文提供的免疫原性组合物包括源自引起呼吸系统疾病的病原体的一种或多种抗原。仅通过示例的方式，如呼吸道抗原源自呼吸道病毒，例如正粘病毒(流感)、肺病毒(RSV)、副粘病毒(PIV)、麻疹病毒(麻疹)、披膜病毒(风疹)、VZV和冠状病毒(SARS)。在一些实施方案中，呼吸道抗原选自引起呼吸系统疾病的细菌，如，仅通过示例的方式，肺炎链球菌、铜绿假单胞菌、百日咳杆菌、结核分枝杆菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、炭疽杆菌和粘膜炎莫拉菌。源自这些病原体的特异性抗原的实例如上所述。
儿科疫苗抗原
在一些实施方案中，本文提供的免疫原性组合物包括适合用于儿科受试者的一种或多种抗原。所述儿科受试者典型地小于约3岁，或小于约2岁，或小于约1岁。儿科抗原是在6个月、1、2或3年的过程中多次施用。儿科抗原来源于其可以靶向儿科人群的病毒和/或儿科群体易受感染的病毒。儿科病毒抗原包括，但不限于，源自以下一种或多种抗原：流感、流行性腮腺炎、麻疹、风疹、脊髓灰质炎和HBV。儿科细菌抗原包括源自肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、百日咳杆菌、破伤风梭菌(破伤风)、白喉棒杆菌(白喉)和流感嗜血杆菌B(Hib)的一种或多种的抗原。源自这些病原体的特异性抗原的实例如上所述。
适用于老年人或免疫受损个体的抗原
在一些实施方案中，本文提供的免疫原性组合物包括适用于老年人或免疫受损个体的一种或多种抗原。这样的个体可能需要更频繁地接种疫苗，用较高剂量或含佐剂的制剂以提高其对靶抗原的免疫应答。靶向用于老年人或免疫力受损个体的抗原包括来自一种或多种以下病原体的抗原：脑膜炎奈瑟球菌、肺炎链球菌、酿脓链球菌(A组链球菌)、粘膜炎莫拉菌、百日咳杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、破伤风杆菌(破伤风)、白喉棒杆菌(白喉)、流感嗜血杆菌B(Hib)、铜绿假单胞菌、嗜肺军团菌、无乳链球菌(B组链球菌)、粪肠球菌、幽门螺杆菌、肺炎衣原体、正粘病毒(流感)、肺病毒(RSV)、副粘病毒(PIV和流行性腮腺炎)、麻疹病毒(麻疹)、披膜病毒(风疹)、肠病毒(脊髓灰质炎)、HBV、冠状病毒(SARS)、水痘带状疱疹病毒(VZV)、EB病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)。源自这些病原体的特异性抗原的实例如上所述。
适合于青少年使用的疫苗的抗原
在一些实施方案中，本文提供的免疫原性组合物包括适合用于青少年受试者的一种或多种抗原。青少年需要在先前给予的儿科抗原的追加剂量。适合用于青少年的儿科抗原如上所述。此外，青少年针对接收源自STD病原体的抗原，以确保性行为开始之前的保护性或治疗性免疫力。适合用于青少年的STD的抗原如上所述。
肿瘤抗原
在一些实施方案中，肿瘤抗原或癌抗原被用于与本文所提供的免疫原性组合物联合。在一些实施方案中，所述肿瘤抗原是含肽的肿瘤抗原，如多肽肿瘤抗原或糖蛋白肿瘤抗原。在一些实施方案中，所述肿瘤抗原是含糖肿瘤抗原，如糖脂肿瘤抗原或神经节苷脂肿瘤抗原。在一些实施方案中，肿瘤抗原是表达含多肽的肿瘤抗原的含多核苷酸的肿瘤抗原，RNA载体构建体或DNA载体构建体，如质粒DNA。
用于与本文提供的免疫原性组合物结合使用的合适的肿瘤抗原包含多种分子，例如(a)含多肽的肿瘤抗原，其包括多肽(其可以，例如，长度在8-20个氨基酸范围，尽管在此范围之外的长度也是常见的)、脂多肽和糖蛋白，(b)含有糖类的肿瘤抗原包括聚糖类、粘蛋白、神经节苷脂、糖脂和糖蛋白，和(c)表达抗原多肽的多核苷酸。
在一些实施方案中，所述肿瘤抗原为，例如，(a)与癌症细胞相关的全长分子，(b)其同系物和修饰形式，包括具有缺失、添加和/或取代的部分的分子，和(c)其片段。在一些实施方案中，所述肿瘤抗原以重组形式提供。在一些实施方案中，所述肿瘤抗原包括，例如，能被CD8+淋巴细胞识别的I类限制性抗原或被CD4+淋巴细胞识别的II类限制性抗原。
在一些实施方案中，所述肿瘤抗原包括，但不限于，(a)睾丸癌抗原，例如NY-ESO-1、SSX2、SCP1以及RAGE、BAGE、GAGE和MAGE家族的多肽，例如，GAGE-1、GAGE-2、MAGE-1、MAGE-2、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-5、MAGE-6和MAGE-12(其可用于，例如，解决黑色素瘤、肺癌、头颈部癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、胃肠道癌、和膀胱肿瘤)，(b)突变的抗原，例如，p53(与各种实体肿瘤相关，如与结肠直肠癌、肺癌、头颈部癌症相关)、p21/Ras(例如，与黑色素瘤、胰腺癌和结肠癌有关)、CDK4(例如，与黑色素瘤相关)、MUM1(例如，与黑色素瘤相关)、胱天蛋白酶-8(例如，与头颈部癌症相关)、CIA0205(例如，与膀胱癌相关)、HLA-A2-R1701，β连环蛋白(例如，与黑色素瘤相关)、TCR(例如，与T细胞非霍奇金淋巴瘤相关)、BCR-abl(例如，与慢性髓细胞性白血病相关)、磷酸丙糖异构酶、KIA0205、CDC-27和LDLR-FUT，(c)过表达的抗原，例如半乳凝素4(例如，如结肠直肠癌相关)、半乳凝素9(例如，与霍奇金病相关)、蛋白酶3(例如，与慢性髓细胞性白血病相关)、WT1(例如，与各种白血病相关)、碳酸酐酶(例如，与肾癌相关)、醛缩酶A(例如，与肺癌相关)、PRAME(例如，与黑色素瘤相关)、HER-2/neu(例如，与乳腺癌、结肠癌、肺癌和卵巢癌相关)、甲胎蛋白(例如，与肝细胞瘤相关)、KSA(例如，与结肠直肠癌相关)、胃泌素(例如，与胰腺癌和胃癌相关)、端粒酶催化蛋白、MUC-1(例如，与乳腺癌和卵巢癌相关)、G-250(例如，与肾细胞癌相关)、p53(例如，与乳腺癌、结肠癌相关)和癌胚抗原(例如，与乳腺癌、肺癌以及胃肠道的癌症，如结肠直肠癌相关)，(d)共享抗原，例如，黑色素瘤-黑素细胞分化抗原，例如MART-1/MelanA、gp100、MC1R、刺激黑素细胞激素受体、酪氨酸酶、酪氨酸酶相关的蛋白-1/TRP1和酪氨酸酶相关的蛋白-2/TRP2(例如，与黑色素瘤相关)；(e)前列腺相关的抗原，例如PAP、PSA、PSMA、PSH-P1、PSM-P1、PSM-P2，如与前列腺癌相关，(f)免疫球蛋白独特型(例如，与骨髓瘤和B细胞淋巴瘤相关)，和(g)其它肿瘤抗原，如含多肽的和含糖的抗原，其包括：(i)糖蛋白，如唾液酸Tn和唾液酸基路易斯抗原(sialylLeX)(例如，与乳腺癌和直肠癌相关)以及各种粘蛋白；糖蛋白偶联于载体蛋白(例如，MUC-1偶联至KLH)；(ⅱ)脂多肽(如连接至脂质部分的MUC-1)；(ⅲ)多糖(例如，GloboH合成性六糖)，其被偶联至载体蛋白(例如，至KLH)，(ⅳ)神经节苷脂，如GM2、GM12、GD2、GD3(例如，与脑癌、肺癌、黑色素瘤相关)，其也被偶联至载体蛋白(例如，KLH)。
在一些实施方案中，所述肿瘤抗原包括但不限于，p15、Hom/Mel-40、H-Ras、E2A-PRL、H4-RET、IGH-IGK、MYL-RAR、EB病毒抗原、EBNA、人乳头状瘤病毒(HPV)抗原，包括E6和E7、乙型肝炎和丙型肝炎病毒抗原、人嗜T淋巴细胞病毒抗原、TSP-180、p185erbB2、p180erbB-3、c-met、mn-23H1、TAG-72-4、CA19-9、CA72-4、CAM17.1、NuMa、K-ras、p16、TAGE、PSCA、CT7、43-9F、5T4、791Tgp72、β-HCG、BCA225、BTAA、CA125、CA15-3(CA27.29\BCAA)、CA195、CA242、CA-50、CAM43、CD68\KP1、CO-029、FGF-5、Ga733(EpCAM)、HTgp-175、M344、MA-50、MG7-Ag、MOV18、NB/70K、NY-CO-1、RCAS1、SDCCAG16、TA-90(Mac-2结合蛋白\亲环蛋白C相关蛋白)、TAAL6、TAG72、TLP、TPS等。
与本文中所提供的免疫原性组合物联合使用的含多核苷酸的抗原包括编码例如以上列出的多肽癌抗原的多核苷酸。在一些实施方案中，含多核苷酸的抗原包括，但不限于，DNA或RNA载体构建体，如质粒载体(例如，pCMV)，其能够在体内表达多肽的癌抗原。
在一些实施方案中，所述肿瘤抗原源自突变的或改变的细胞成分。改变后，细胞成分不再履行调节功能，因此该细胞可能经历不受控制的生长。改变的细胞成分的代表性的实例包括，但不限于，ras、p53、Rb、由维尔姆斯瘤基因编码的改变的蛋白、泛素、粘蛋白、由DCC、APC和MCC基因编码的蛋白、以及受体或受体样结构例如neu、甲状腺激素受体、血小板衍生生长因子(PDGF)受体、胰岛素受体、表皮生长因子(EGF)受体、和集落刺激因子(CSF)受体。
可使用多种其它免疫原。
载体部分
糖抗原可偶联于载体部分。
所述载体部分可以是蛋白质。典型的载体蛋白是细菌毒素，如白喉或破伤风毒素，或其类毒素或突变体或片段。CRM197白喉毒素突变体[77]是有用的。其它合适的载体蛋白包括脑膜炎奈瑟球菌外膜蛋白复合物[78]、合成肽[79、80]、热休克蛋白[81、82]、百日咳蛋白[83、84]、细胞因子[85]、淋巴因子[85]、激素[85]、生长因子[85]、包括源自多种病原体衍生抗原[86]如N19[97]的多种人CD4+T细胞表位的人工蛋白、源自流感嗜血杆菌的蛋白D[88-90]、肺炎链球菌溶血素[91]或其无毒衍生物[92]、肺炎球菌表面蛋白PSPA[93]、铁摄取蛋白[94]、源自艰难梭菌的毒素A或B[95]、重组绿脓杆菌胞外蛋白质A(rEPA)[96]等。在一些实施方案中，所述载体蛋白是金黄色葡萄球菌蛋白，如选自第一、第二、第三或第四抗原组的抗原。
组合物中包含多于一种免疫原时，各免疫原可使用相同的载体蛋白或不同的载体蛋白。
缀合物可具有过量的载体(w/w)或过量抗原(w/w)。在一些实施方案中，缀合物可以包括各自基本相等的重量。
载体分子可以直接或通过连接体，共价缀合于载体。直接连接至蛋白质可通过例如参考文献97和98描述的，将抗原和载体之间还原胺化，来实现。抗原可能首先需要通过例如氧化激活。通过连接基团进行连接可使用任何已知的方法进行，例如，在参考文献中99和100中描述的操作。连接的优选类型是己二酸联结子，其可通过偶联游离的-NH2基团(例如通过胺化引入至葡聚糖)与己二酸(使用，例如，二酰亚胺活化)，然后偶联蛋白质至得到的抗原-己二酸中间体来形成[101、102]。连接的另一优选类型是羰基联结子，其可通过糖CDI[103、104]的游离羟基反应，然后接着与蛋白反应以形成氨基甲酸酯键来形成。其它联结子包括β-丙酰胺[105]、硝基苯基-乙基胺[106]、卤代酰基卤化物[107]、糖苷键[108]、6-氨基己酸[109]、ADH[110]、C4至C12部分[111]等。也可使用碳二亚胺缩合[112]。
进一步的非活性成分
本发明的组合物可包括除了免疫原，TLR激动剂和针材料的其他成分，例如它们通常包含一种或多种药物载体和/或赋形剂。这类组分的充分讨论见于参考文献113中。这些组分可以加至其中以促进组合物的固体的性质，或者可以来自成分的早期水性性质的残余。
组合物可以包括一种或多种防腐剂，如乙基汞硫代水杨酸钠或2-苯氧乙醇。无汞的组合物是优选的，并且可制备不含防腐剂的疫苗。
组合物可以包括生理盐，例如钠盐。氯化钠(NaCl)是典型的，其可为1-20mg/ml如10±2mg/ml或9mg/ml。其它可存在的盐包括氯化钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠脱水物、氯化镁、氯化钙等。用于皮内递送的组合物优选地不包括铝盐，例如磷酸铝和氢氧化铝。
组合物可包括一种或多种缓冲盐。当组合物再溶解时，缓冲盐可以被加入以提供缓冲。典型的缓冲液包括：磷酸缓盐冲液；Tris缓冲液；硼酸盐缓冲液；琥珀酸盐缓冲液；组氨酸缓冲液；或柠檬酸盐缓冲液。缓冲盐将典型地包括在5-20mM范围内。如果使用磷酸缓盐冲液，则在一些实施方案中，磷酸根离子的浓度应是<50mM的(见上文)，如<10mM。
组合物典型地具有5.0和9.5之间的pH，如6.0和8.0之间。固体组合物的pH值是当其再溶解在水中时组合物的pH值。
组合物优选是无菌的、无热原的(例如含有<1EU(内毒素单位，标准量度)每剂量，优选<0.1EU每剂量)，和/或不含麸质。
组合物适用于给药于动物(且特别是人类)患者，因此，其包括人类和兽医用途。它们可以用于提高患者免疫应答的方法，其包括将组合物给药组合物于患者的步骤。组合物可以在受试者被暴露于病原体之前和/或之后给药。组合物是通过将其施用至受试者的皮肤给药。
本发明还提供含有本发明的组合物的密封容器。合适的容器包括例如药袋或封袋。
给药剂量
皮肤贴剂中的免疫原的总剂量可以是10μg/片-100μg/片。总剂量可以是10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100μg/片。所用的具体剂量依赖于具体免疫原和所使用的具体TLR激动剂。皮内给药相比于肌内给药允许使用更低剂量的免疫原和TLR激动剂。
皮肤贴剂中提供的TLR激动剂的总剂量可以是10μg/片-100μg/片。该总剂量可以是10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100μg/片。所用的具体剂量依赖于具体免疫原和所用的具体TLR激动剂。皮内给药相比于肌内给药允许使用更低剂量的免疫原和TLR激动剂。
抗原与TLR激动剂的比例(按质量计)可以是大约10:1。
免疫原浓度
通过微针皮内递送的免疫原性组合物可能会需要比肌内递送通常的免疫原性组合物低得多的容量，但是它们可能需要相同量的抗原，这就通常会需要更浓的散装抗原。
各种技术可用于这种浓度步骤，包括，但不限于：离心过滤；超滤；或正切流动过滤(也称作错流过滤)。
离心过滤包括通过过滤器离心液体。该过滤器保留抗原使其浓缩，但不保留溶剂或较小的溶质。随着滤液体积的增加，抗原在保留物中的浓度也增加。该技术通常使用固定角转头。各种适当的离心过滤装置是市售可得的，例如以商标CentriconTM、VivaspinTM和SpintekTM贩售的产品。选择过滤器的截留值，使得将该兴趣的抗原留在保留物中。
超滤涉及使用流体静力压以迫使液体抵抗半透膜。该过滤器保留抗原使其浓缩，但不保留溶剂或较小的溶质。持续应用流体静力压导致滤液体积增加，并因此抗原在该保留物中的浓度也增加。许多超滤膜是市售可得的。该超滤膜的截留分子量(MWCO)确定了何种溶质可穿过该膜(即进入到滤液中)以及何种被保留(即在保留物中)。对本发明所用的过滤器的MWCO进行选择，使得基本上全部的感兴趣的抗原均保留于该保留物中。
正切流动过滤(TFF)包括使液体沿切向穿过过滤膜。样品侧通常相对于滤液侧保持正压。随着液体流过该过滤器，其中的组分可穿过该膜进入到滤液中。持续的流动导致滤液的体积增加，并因此该抗原在保留物中的浓度增加。TFF与死端过滤(deadendfiltration)相反，在死端过滤中的样品是穿过膜而不是与其正切。许多TFF系统是市售可得的。TFF膜的MWCO确定了何种溶质可穿过该膜(即进入到滤液中)以及何种被保留(即在保留物中)。对本发明所用的过滤器的MWCO进行选择，使得基本上全部的感兴趣抗原均保留于该保留物中。
这三种浓缩技术互相不排斥。
无论选择何种技术，其优选地将感兴趣抗原的浓度提高至原始浓度的n倍，其中n为5、6、7、8、9、10、12、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80或更高。
冷冻干燥
根据抗原浓度，可使用冻干步骤。
冻干通常涉及一个腔室内的三个阶段：(a)冷冻；(b)初级干燥；和(c)二级干燥。步骤(a)冷冻缀合物的流动的水。在步骤(b)中，降低腔室压力(例如至≤0.1托)并将热量施加至该产物，使该冷冻的水升华。在步骤(c)中，升高温度以解吸任何的结合水，例如结晶水，直至残余的水含量降低至所需水平。
通常冷冻干燥的起始步骤，其在冷冻发生之前，是加入冻干保护剂(lyoprotectant)。在一些实施方案中，冻干保护剂可能在步骤(i)的浓缩之前已经加入，但是优选即在步骤(i)结束时或在步骤(ii)起始时加入，而不是在已发生浓缩之后加入。这就使得更容易控制存在于冻干冷冻的开始时的冻干保护剂的量。
因此可将一种或多种冻干保护剂加至该浓缩的抗原中。合适的冻干保护剂包括，但不限于，糖醇(例如山梨糖醇、甘露糖醇、麦芽糖醇、赤藻糖醇、木糖醇)和二糖(例如蔗糖、海藻糖、麦芽糖、乳果糖、乳糖、纤维二糖)。蔗糖和甘露糖醇(或其混合物)是优选的用于本发明的冻干保护剂。
冷冻干燥后，可重构该冻干的免疫抗原。这一重构可使用水(例如注射用水，wfi)或缓冲液(例如磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、硼酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液或柠檬酸盐缓冲液)。缓冲液通常在5-20mM的范围内。磷酸盐缓冲液是优选的。
步骤(i)浓缩免疫抗原的第一液体体积，提供一种组合物，其在第二(减少的)液体体积中含有相同量的抗原。步骤(ii)干燥这一浓缩材料。该干燥的材料可在第三液体体积中重构。如果该第三体积大于第一体积，则整个过程并没有浓缩该抗原。类似地，如果该第三体积大于第二体积，则该重构步骤使该浓缩倒退。因此，该第三体积等于或优选地，小于第二体积。因此该冷冻干燥/重构步骤能实现进一步的抗原浓缩。
抗原浓缩后，可将TLR激动剂加至该免疫原性组合物。
治疗方法和免疫原性组合物的给药
本发明提供了提高受试者免疫应答的方法，包括皮内给药受试者TLR激动剂和免疫原的步骤。
本发明还提供了包含TLR激动剂和免疫原的组合物，其用于通过皮内递送提高受试者免疫应答的方法中。
本发明还提供了TLR激动剂和免疫原在制备用于提高受试者中免疫应答的皮内药物中的用途。该药物的其他细节在上文中提供。
本发明适用于提高人或非人动物(尤其是哺乳动物)受试者的免疫应答。根据本发明制备的组合物可用于治疗儿童和成人。
通过这些方法和应用刺激的免疫应答通常包括抗体应答，优选保护性的抗体应答。评估免疫后的抗体应答的方法是本领域熟知的。
化学基团
除非在别处特别定义，当本文讨论的化学基团用于本说明书中时，其具有以下含义：
术语“烷基”包括饱和烃基，包括：
-直链基团，其具有最多10个原子(C1-C10)，或最多6个原子(C1-C6)，或最多4个原子(C1-C4)。该烷基的实例包括，但不限于，C1–甲基、C2–乙基、C3–丙基和C4-正丁基。
-支链基团，其具有3至10个原子(C3-C10)，或最多7个原子(C3-C7)，或最多4个原子(C3-C4)。该烷基的实例包括，但不限于，C3–异丙基、C4–仲丁基、C4–异丁基、C4–叔丁基和C5–新戊基。
术语“亚烷基”是指衍生自烷基的二价烃基，且应根据上述定义进行解释。
术语“烯基”包括单不饱和烃基，包括：
-直链基团，其具有2至6个原子(C2-C6)。该烯基的实例包括，但不限于，C2-乙烯基、C3-1-丙烯基、C3-烯丙基、C4-2-丁烯基
-支链基团，其具有3至8个原子(C3-C8)。该烯基的实例包括，但不限于，C4-2-甲基-2-丙烯基和C6-2,3-二甲基-2-丁烯基。
术语亚烯基是指衍生自烯基的二价烃基，且应根据上述定义进行解释。
术语“烷氧基”包括O-连接的烃基，包括：
-直链基团，其具有1至6个原子(C1-C6)，或1至4个原子(C1-C4)。该烷氧基的实例包括，但不限于，C1-甲氧基、C2–乙氧基、C3–正丙氧基和C4–正丁氧基。
-支链基团，其具有3至6个原子(C3-C6)或3至4个原子(C3-C4)。该烷氧基的实例包括，但不限于，C3-异丙氧基和C4–仲丁氧基和叔丁氧基。
卤素选自：Cl、F、Br和I。卤素优选为F。
术语“芳基”包括单或稠合芳环系统，其含有6或10个碳原子；其中，除非另外提及，否则芳基每次出现可任选地被最多5个取代基取代，所述取代基独立地选自(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、OH、卤素、CN、COOR14、CF3和NR14R15；如上所定义。通常，芳基将任选地被1、2或3个取代基取代。任选的取代基选自上述那些。合适的芳基的实例包括苯基和萘基(各自任选地按上述取代)。亚芳基是指衍生自芳基的二价基团，且应根据上述定义进行解释。
术语“杂芳基”包括5、6、9或10元单环或双环芳环，其含有1或2个N原子且，任选地，NR14原子，或一个NR14原子和S或O原子，或一个S原子，或一个O原子；其中，除非另外提及，否则所述杂芳基可任选地被1、2或3个取代基取代，所述取代基独立地选自：(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、OH、卤素、CN、COO14、CF3和NR14R15；如下文所定义。合适的杂芳基实例包括噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并三唑基、喹啉基和异喹啉基(任选地如上述取代)。亚杂芳基是指衍生自杂芳基的二价基团，且应根据上述定义进行解释。
术语“杂环基”是C-连接或N-连接的3至10元非芳族、单环或双环，其中在可能的情况下，所述杂环烷基环含有1、2或3个杂原子，其独立地选自N、NR14、S(O)q和O；且在可能的情况下，所述杂环烷基环任选地含有1或2个双键，且其任选地在碳上取代有1或2个取代基，所述取代基独立地选自(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、OH、CN、CF3、卤素、COOR14、NR14R15和芳基。
在上述定义中，R14和R15独立地选自H和(C1-C6)烷基。
当结构式是由通过未指定或“浮动”键连接至分子核心的取代基所限定时，该定义涵盖了以下情况：其中未指定的取代基连接至浮动键所处于的环上的任意原子，同时满足该原子允许的化合价。
在本发明化合物可存在于互变异构体(即酮或烯醇形式)形式的情况下，所提及的具体化合物任选地包括所有这些互变异构形式。
一般定义
术语“包含”涵盖了“包括”以及“由……组成”，例如“包含”X的组合物可完全由X组成或可包含一些其他的，例如X+Y。
词语“基本上”并不排除“完全地”，例如组合物，其“基本上不含”Y可以是完全不含Y。在必要时，词语“基本上”可从本发明的定义中省略。
涉及数值的x的术语“约”是任选的且是指，例如，x±10％。
除非另外具体说明，包括混合两种或多种成分的步骤的操作不要求任何具体的混合顺序。因此，成分可按任意顺序混合。当存在三种组分时，可将两种组分彼此组合，然后可将该组合与第三种组分组合，等。
当将动物(且尤其是牛)材料用于细胞培养时，它们可获自不含传染性海绵状脑病(TSE)，尤其是不含牛海绵状脑病(BSE)的材料。总而言之，优选的是在完全不存在动物来源的材料中的培养细胞。
当化合物是作为组合物的一部分给药至机体，那么该化合物可替代地被合适的前药所替换。
附图说明
图1.HI滴度是根据两种免疫方法，由皮内和肌内递送流感抗原和TLR激动剂提供的。
实施本发明的方式
免疫原的浓缩
离心过滤
离心过滤使用MilliporeTM设备(10kDa截留值)以5000rpm的转速操作。
测试了三种离心持续时间：15、30和45分钟。检查所述保留物(浓缩物)和滤液，观察流感病毒血凝素的位置。图1表明，在45分钟后所述抗原仍在该保留物中。抗原浓度在15分钟后是3倍，在30分钟后是6倍，且在45分钟后是13倍。抗原回收率在15分钟后是40％，30分钟后是41％，且在45分钟后是55％。因此，选择45分钟进行进一步的研究。
在进一步的研究中，在离心后将抗原冷冻干燥，进行进一步的浓缩。使用蔗糖作为冻干保护剂，单独(以两种不同的浓度)或与甘露糖醇一起。将冷冻干燥的材料重构。所述重构的样品含有可见的聚集物。相对于起始材料，按以下对HA的含量(经ELISA测定)进行浓缩：
因此，离心和冷冻干燥的组合可提供>25倍浓度的流感病毒HA含量。还可用SRID对两种离心样品进行评估且它们的HA含量显示出21.1x和35.1x的增加，更高的蔗糖水平得到更好的结果。
超滤
超滤使用AmiconTM搅拌细胞浓缩器，配有由再生纤维素制成的10kDa截留膜，在加压氮气下操作1小时。
如果进行冷冻干燥，然后重构至预冷冻干燥体积，那么该重构材料具有与起始材料相当的HA浓度(由SRID测定)，指示不丧失功能性的抗原。该重构材料在>2周的时间是稳定的。
免疫原性组合物的皮内递送
流感
用100μl或20μl免疫原性组合物免疫Balb/c小鼠是使用肌内递送和皮内递送进行的。该组合物包含三价流感疫苗，其含有1μgHA剂量的X181H1N1Cal、X187H3N2Perth和B/Brisbane，以及包括TLR激动剂的一组佐剂中的一种。在免疫前将小鼠麻醉。对于接受皮内免疫的小鼠，对其背部区域进行剃毛或拔毛以除去注射位点的毛发。用70％的乙醇擦拭该位点。插入该针，斜面向上，保持该针与皮肤平面处于基本上平行。使用以多种不同的TLR激动剂接受肌内和皮内免疫的小鼠，且给药剂量、所用的组合物的总体积和给药途径在下表1中所示。每个位点使用50μl或更少的体积用于皮内递送，以避免组织创伤。
表1
组 佐剂 剂量 总体积 途径
1 - - 100ul IM
2 MF59 (1:1) 100μl IM
3 - - 100μl IM
4 - - 20μl ID
5 T1a 50μg 20μl ID
6 T1b 50μg 20μl ID
7 T1b 100μg 20μl ID
8 T2 50μg 20μl ID
9 LTK63 5μg 20μl ID
10 α-GalCer 5μg 20μl ID
11 MPLA 25μg 20μl ID
12 MF59 (1:1) 20μl ID
所述T1a佐剂是通过在0.05％羧甲基纤维素或0.05％吐温80中分散进行配制的并在水浴中进行超声。所述T1b佐剂是通过在1X中分散进行配制的并在水浴中进行超声。所述T2佐剂是通过在10mM氨水溶液中分散进行配制的并在水浴中进行超声。将所述LTK63佐剂[114]配制于0.05M磷酸钠和0.2ML-精氨酸。将所述α-GalCer佐剂配制于水和0.05％吐温20中，并在37℃水浴中超声30分钟。将该MPL佐剂用水分散液进行配制，其使用0.5％TEoA/WFI。
两次免疫是间隔28天进行的，并在第一次免疫后的第14天和第28天和第二次免疫后的第14天分析单个样品的抗-H1N1、抗H3N2和抗-B血凝抑制(HI)滴度。图1-3分别显示了抗-H1N1、抗-H3N2和抗-B的HI滴度。
当皮内给药时，流感抗原诱导了与肌内给药所诱导的相当的HI滴度。相比于没有TLR激动剂的皮内免疫而言，在存在各TLR激动剂的第二次皮内免疫后提供改善的免疫应答。单独用抗原或抗原加MF59进行的皮内免疫所提供的免疫应答与单独用抗原或抗原加MF59进行的肌内免疫所提供的免疫应答相当。
相比于仅使用抗原进行的皮内或肌内免疫，用T1b(100μg)或LTK63(5μg)的皮内免疫提供了显著改善的免疫应答。
脑膜炎奈瑟球菌
用100μl免疫原性组合物对CD1小鼠进行的免疫是使用肌内递送和皮内递送进行的，所述免疫原性组合物包含10μg剂量的三种脑膜炎奈瑟球菌B抗原[错误！未定义书签。]和包括TLR激动剂在内的一组佐剂中的一种。免疫前对小鼠进行麻醉。对小鼠的背部区域进行剃毛或拔毛以除去注射位点的毛发。用70％的乙醇擦拭该位点。插入该针，斜面向上，保持该针与皮肤平面处于基本上平行。使用多种不同的TLR激动剂，给药剂量、所用的组合物的总体积和给药途径在下表2中所示。
组 佐剂 剂量 总体积 途径
1 - - 100ul IM
2 - - 100μl ID
3 T1a 100μg 100μl IM
4 T1a 100μg 100μl ID
5 T1b 100μg 100μl IM
6 T1b 100μg 100μl ID
7 T2 100μg 100μl IM
8 T2 100μg 100μl ID
9 Alum/T1c 100μg 100μl IM
10 Alum/T1c 100μg 100μl ID
所述T1a佐剂是通过在0.05％羧甲基纤维素或0.05％吐温80中分散进行配制的并在水浴中进行超声。所述T1b佐剂是通过在1X中分散进行配制的并在水浴中进行超声。所述T2佐剂是通过在10MmNH3溶液中分散进行配制的并在水浴中进行超声。
进行免疫，并分析单个样品的细菌活性。图4显示了所测定的各个组合物的杀菌滴度。
当皮内给药时，即使是在不存在TLR激动剂时，所述MenB抗原诱导了比肌内给药后所诱导的更高的杀菌滴度。相比于抗原与其他佐剂的组合，用T2的皮内免疫提供了改善的免疫应答。皮内给药脑膜炎抗原和TLR激动剂后所提供的免疫应答与肌内给药脑膜炎抗原和TLR激动剂后所提供的免疫应答相当。
应理解，本发明仅通过举例进行描述且可在本发明的范围和精神范围内对其进行修改。
参考文献
[1]Prausnitzetal.(2009)CurrTopMicrobiolImmunol.333：369-93.
[2]Kangetal.(2012)ExpertRevVaccines.11(5)：547-60.
[3]Davidsonetal.(2008)ChemicalEngineeringResearchandDesign86：1196-1206.
[4]Careyetal.(2011)PLoSONE6(7)：e22442.
[5]Baletal.(2010)JControlRelease.147：218-24.
[6]Donnellyetal.(2011)PharmRes28：41-57.
[7]Koutsonanosetal.(2009)PLoSONE4(e)：e4773.
[8]Quanetal.(2009)PLoSONE4(9)：e7152.
[9]Matsuoetal.(2012)JControlRelease161：10-17.
[10]US-2011/112509.
[11]WO2009/040548.
[12]Leeetal.(2008)Biomaterials29(13)：2113-24.
[13]WO2007/030477.
[14]US-6945952.
[15]US-7211062.
[16]Sullivanetal.(2010)NatureMed16：915-920.
[17]US-2009/0182306
[18]US-7182747.
[19]Ohetal.(2006)AmericanAssociationofPharmaceuticalScientists，2006AnnualMeetingandExposition.TheAAPSJournal.8(S2).
[20]WO2007/127976.
[21]Matsuoetal.(2012)JControlRelease.160(3)：495-501.
[22]Koutsonanosetal.(2012)SciRep.2：357.
[23]EP-A-2289843.
[24]Gill&Prausnitz(2007)JControlRelease117：227-37.
[25]WO2007/124393.
[26]WO2007/061964.
[27]WO2007/059289.
[28]Jinetal.(2009)BiomedMicrodevices.11(6)：1195-203.
[29]Vrdoljaketal.(2012)JControlRelease159：34-42.
[30]Rosenbergetal.(2010)JImmunol184：136.20.
[31]US-4,666,886.
[32]WO2009/118296.
[33]WO2008/005555.
[34]WO2009/111337.
[35]WO2009/067081.
[36]WO2007/040840.
[37]WO2010/014913.
[38]WO2011/049677.
[39]WO2012/031140
[40]WO2011/119759.
[41]US2010/0143301.
[42]GB-A-2220211.
[43]Myersetal.(1990)pages145-156ofCellularandmolecularaspectsofendotoxinreactions.
[44]Ulrich(2000)Chapter16(pages273-282)
[45]Johnsonetal.(1999)JMedChem42：4640-9.
[46]Baldricketal.(2002)RegulatoryToxicolPharmacol35：398-413.
[47]Coleretal.(2011)PLoSONE6(1)：e16333.
[48]Johnsonetal.(1999)BioorgMedChemLett9：2273-2278.
[49]Evansetal.(2003)ExpertRevVaccines2：219-229.
[50]Bazinetal.(2006)TetrahedronLett47：2087-92.
[51]Wongetal.(2003)JClinPharmacol43(7)：735-42.
[52]US2005/0215517.
[53]WO03/011223.
[54]WO2007/053455.
[55]DeLiberoetal，NatureReviewsImmunology，2005，5：485-496.
[56]USpatent5,936,076.
[57]Okietal，J.Clin.Investig.，113：1631-1640.
[58]US2005/0192248.
[59]Yangetal，Angew.Chem.Int.Ed.，2004，43：3818-3822.
[60]WO2008/047174.
[61]WO2008/047249.
[62]WO2005/102049.
[63]Goffetal，J.Am.Chem.，Soc.，2004，126：13602-13603.
[64]WO03/105769.
[65]Peppolonietal.(2003)ExpertRevVaccines2：285-93.
[66]WO95/17211.
[67]daHoraetal.(2011)Vaccine29：1538-44.
[68]WO93/13202.
[69]Pizzaetal.(2000)IntJMedMicrobiol290：455-61.
[70]WO98/18928.
[71]Fengetal.(2005)ActaBiochimBiophysSin(Shanghai).37(2)：126-32.
[72]Treanoretal.(1996)JInfectDis173：1467-70.
[73]Keiteletal.(1996)ClinDiagnLabImmunol3：507-10.
[74]Giulianietal.(2006)ProcNatlAcadSciUSA.103：10834-9.
[75]WO03/097091.
[76]Cassone&Torosantucci(2006)ExpertRevVaccines5：859-67.
[77]ResearchDisclosure，453077(Jan2002).
[78]EP-A-0372501.
[79]EP-A-0378881.
[80]EP-A-0427347.
[81]WO93/17712.
[82]WO94/03208.
[83]WO98/58668.
[84]EP-A-0471177.
[85]WO91/01146.
[86]Falugietal.(2001)EurJImmunol31：3816-3824.
[87]Baraldoetal.(2004)InfectImmun72(8)：4884-7.
[88]EP-A-0594610.
[89]Ruanetal.(1990)JImmunol145：3379-3384.
[90]WO00/56360.
[91]Kuoetal.(1995)InfectImmun63：2706-13.
[92]Michonetal.(1998)Vaccine.16：1732-41.
[93]WO02/091998.
[94]WO01/72337.
[95]WO00/61761.
[96]WO00/33882
[97]USpatent4,761,283.
[98]USpatent4,356,170.
[99]USpatent4,882,317.
[100]USpatent4,695,624.
[101]Mol.Immunol.，1985，22，907-919
[102]EP-A-0208375.
[103]BethellG.S.etal.，J.Biol.Chem.，1979，254，2572-4
[104]HearnM.T.W.，J.Chromatogr.，1981，218，509-18
[105]WO00/10599.
[106]Geveretal.，Med.Microbiol.Immunol，165：171-288(1979).
[107]USpatent4,057,685.
[108]USpatents4,673,574；4,761,283；4,808,700.
[109]USpatent4,459,286.
[110]USpatent4,965,338.
[111]USpatent4,663,160.
[112]WO2007/000343.
[113]Remington：TheScienceandPracticeofPharmacy(Gennaro，2000；20thedition，ISBN：0683306472)
[114]Trittoetal.(2007)J.Immunol.179：5346-5357.

Claims (12)

1.皮内递送系统，其包含固体生物可降解微针，其中所述微针包含TLR激动剂和免疫原。
2.皮内递送系统，其包含固体微针，其中所述微针包含TLR激动剂和细菌性抗原。
3.皮内递送系统，其包含免疫原性组合物，所述组合物包含TLR激动剂，其中所述TLR激动剂是：
(a)苯并萘啶TLR7激动剂；
(b)具有式T1的TLR7激动剂：
其中
R1是H、C1-C6烷基、-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6；
L1是–C(O)-或–O-；
L2是C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基、亚芳基、亚杂芳基或-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L2的C1-C6亚烷基和C2-C6亚烯基任选地经1至4个氟基团取代；
各L3独立地选自：C1-C6亚烷基和-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L3的C1-C6亚烷基任选地经1至4个氟基团取代；
L4是亚芳基或亚杂芳基；
R2是H或C1-C6烷基；
R3选自：C1-C4烷基、–L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5、-L3L4L3R5、-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OR8、-OL3L4R5、-OL3L4L3R5和-C(R5)2OH；
各R4独立地选自：H和氟；
R5是-P(O)(OR9)2，
R6是–CF2P(O)(OR9)2或-C(O)OR10；
R7是–CF2P(O)(OR9)2或-C(O)OR10；
R8是H或C1-C4烷基；
各R9独立地选自：H和C1-C6烷基；
R10是H或C1-C4烷基；
各p独立地选自：1、2、3、4、5和6，且
q是1、2、3或4；
(c)具有式T2的TLR2激动剂：
其中：
R1是H、-C(O)-C7-C18烷基或–C(O)-C1-C6烷基；
R2是C7-C18烷基；
R3是C7-C18烷基；
L1是-CH2OC(O)-、-CH2O-、-CH2NR7C(O)-或-CH2OC(O)NR7-；
L2是-OC(O)-、-O-、-NR7C(O)-或-OC(O)NR7-；
R4是-L3R5或-L4R5；
R5是–N(R7)2、-OR7、-P(O)(OR7)2、-C(O)OR7、-NR7C(O)L3R8、-NR7C(O)L4R8、-OL3R6、-C(O)NR7L3R8、-C(O)NR7L4R8、-S(O)2OR7、-OS(O)2OR7、C1-C6烷基、C6芳基、C10芳基、C14芳基、含有1-3个选自O、S和N的杂原子的5-14元杂芳基、C3-C8环烷基或含有1-3个选自O、S和N的杂原子的5-6元杂环烷基，其中R5的芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基各自是未取代的或R5的所述芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基各自被1-3个取代基取代，所述取代基独立地选自：-OR9、-OL3R6、-OL4R6、-OR7和-C(O)OR7；
L3是C1-C10亚烷基，其中L3的C1-C10亚烷基是未取代的，或L3的C1-C10亚烷基经1至4个R6基团取代，或L3的C1-C10亚烷基经相同碳原子上的2个C1-C6烷基取代，所述C1-C6烷基与它们所连接的碳原子一起形成C3-C8环烷基；
L4是-((CR7R7)pO)q(CR10R10)p-或-(CR11R11)((CR7R7)pO)q(CR10R10)p-，其中各R11是C1-C6烷基，其与它们所连接的碳原子一起形成C3-C8环烷基；
各R6独立地选自：卤素、C1-C6烷基、经1-2个羟基取代的C1-C6烷基、-OR7、-N(R7)2、-C(O)OH、-C(O)N(R7)2、-P(O)(OR7)2、C6芳基、C10芳基和C14芳基；
各R7独立地选自：H和C1-C6烷基；
R8选自：–SR7、-C(O)OH、-P(O)(OR7)2和含有1-3个选自O和N的杂原子的5-6元杂环烷基；
R9是苯基；
各R10独立地选自：H和卤素；
各p独立地选自：1、2、3、4、5和6，和
q是1、2、3或4。
4.皮内递送系统，其包含免疫原性组合物，所述组合物包含TLR激动剂和免疫原，其中所述TLR激动剂选自：TLR5激动剂、TLR1激动剂和TLR6激动剂。
5.皮内递送系统，其包含免疫原性组合物，所述组合物包含CD1d激动剂或CLR激动剂和免疫原。
6.权利要求10的皮内递送系统，其中所述CD1d激动剂是α-糖基神经酰胺。
7.皮内递送系统，其包含免疫原性组合物，该组合物包含突变体大肠杆菌不耐热毒素和免疫原。
8.权利要求1或2中任一项的皮内递送系统，其中所述TLR激动剂是TLR7激动剂。
9.权利要求1或2中任一项的皮内递送系统，其中所述TLR激动剂是：
a)TLR4激动剂；
b)TLR5激动剂；
c)TLR1激动剂；
d)TLR6激动剂；或
e)TLR9激动剂。
10.权利要求9的皮内递送系统，其中所述TLR4激动剂是MPL。
11.权利要求2-10中任一项的皮内递送系统，其包含固体生物可降解微针。
12.制备包含固体微针的皮内递送系统的方法，其中所述微针包含TLR激动剂和免疫原，其中该方法包括以下步骤a)将免疫原与TLR激动剂混合，形成免疫原性组合物，其中所述免疫原具有的浓度是10mg/ml-50mg/ml，且所述TLR激动剂具有的浓度是0.1mg/ml-10mg/ml；和b)干燥该免疫原性组合物，形成固体微针。
CN201480007165.XA 2013-02-01 2014-01-30 包含toll样受体激动剂的免疫组合物的皮内递送 Pending CN105188747A (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361759751P 2013-02-01 2013-02-01
US61/759,751 2013-02-01
EP13169596.7 2013-05-28
EP13169596 2013-05-28
PCT/EP2014/051860 WO2014118305A1 (en) 2013-02-01 2014-01-30 Intradermal delivery of immunological compositions comprising toll-like receptor agonists

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105188747A true CN105188747A (zh) 2015-12-23

Family

ID=48485056

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201480007165.XA Pending CN105188747A (zh) 2013-02-01 2014-01-30 包含toll样受体激动剂的免疫组合物的皮内递送

Country Status (9)

Country Link
US (1) US9827190B2 (zh)
EP (1) EP2950819B1 (zh)
JP (1) JP6411378B2 (zh)
CN (1) CN105188747A (zh)
BR (1) BR112015018014A2 (zh)
CA (1) CA2899787A1 (zh)
ES (1) ES2670863T3 (zh)
TR (1) TR201807340T4 (zh)
WO (1) WO2014118305A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113966228A (zh) * 2019-06-11 2022-01-21 葛兰素史密斯克莱生物公司 黏膜疫苗配制剂
CN114728154A (zh) * 2019-10-09 2022-07-08 瓦克塞斯技术公司 基于丝素蛋白的微针及其用途

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2847204A1 (en) * 2011-09-01 2013-03-07 Novartis Ag Adjuvanted formulations of staphylococcus aureus antigens
AU2016248452B2 (en) * 2015-04-16 2018-05-31 Inventprise, Inc. Bordetella pertussis immunogenic vaccine compositions
JP2018196401A (ja) * 2017-05-19 2018-12-13 ロレアル マイクロニードルシート
AR111760A1 (es) 2017-05-19 2019-08-14 Novartis Ag Compuestos y composiciones para el tratamiento de tumores sólidos mediante administración intratumoral
WO2020010016A1 (en) 2018-07-04 2020-01-09 Sutrovax, Inc. Self-adjuvanted immunogenic conjugates
CN112955167A (zh) * 2018-08-06 2021-06-11 尼尔森生物科学公司 疣的治疗
WO2021207281A2 (en) * 2020-04-06 2021-10-14 Eisai R&D Management Co., Ltd. Vaccines, adjuvants, and methods of generating an immune response

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1602216A (zh) * 2001-04-20 2005-03-30 阿尔扎公司 微突出物阵列免疫贴剂和方法
WO2011151723A2 (en) * 2010-06-01 2011-12-08 Novartis Ag Concentration of vaccine antigens without lyophilization

Family Cites Families (117)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US112509A (en) 1871-03-07 Improvement in medical compounds for treating fever and ague
US4057685A (en) 1972-02-02 1977-11-08 Abbott Laboratories Chemically modified endotoxin immunizing agent
US4356170A (en) 1981-05-27 1982-10-26 Canadian Patents & Development Ltd. Immunogenic polysaccharide-protein conjugates
US4673574A (en) 1981-08-31 1987-06-16 Anderson Porter W Immunogenic conjugates
DE3485094D1 (de) 1983-01-25 1991-10-31 Ciba Geigy Ag Neue peptidderivate.
US4459286A (en) 1983-01-31 1984-07-10 Merck & Co., Inc. Coupled H. influenzae type B vaccine
US4663160A (en) 1983-03-14 1987-05-05 Miles Laboratories, Inc. Vaccines for gram-negative bacteria
US4761283A (en) 1983-07-05 1988-08-02 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
US4695624A (en) 1984-05-10 1987-09-22 Merck & Co., Inc. Covalently-modified polyanionic bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers, and methods of preparing such polysaccharides and conjugates and of confirming covalency
US4882317A (en) 1984-05-10 1989-11-21 Merck & Co., Inc. Covalently-modified bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers and methods of preparing such polysaccharides and conjugataes and of confirming covalency
US4808700A (en) 1984-07-09 1989-02-28 Praxis Biologics, Inc. Immunogenic conjugates of non-toxic E. coli LT-B enterotoxin subunit and capsular polymers
IT1187753B (it) 1985-07-05 1987-12-23 Sclavo Spa Coniugati glicoproteici ad attivita' immunogenica trivalente
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
NL8802046A (nl) 1988-08-18 1990-03-16 Gen Electric Polymeermengsel met polyester en alkaansulfonaat, daaruit gevormde voorwerpen.
DE3841091A1 (de) 1988-12-07 1990-06-13 Behringwerke Ag Synthetische antigene, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
CA2006700A1 (en) 1989-01-17 1990-07-17 Antonello Pessi Synthetic peptides and their use as universal carriers for the preparation of immunogenic conjugates suitable for the development of synthetic vaccines
EP0482068A1 (en) 1989-07-14 1992-04-29 American Cyanamid Company Cytokine and hormone carriers for conjugate vaccines
IT1237764B (it) 1989-11-10 1993-06-17 Eniricerche Spa Peptidi sintetici utili come carriers universali per la preparazione di coniugati immunogenici e loro impiego per lo sviluppo di vaccini sintetici.
SE466259B (sv) 1990-05-31 1992-01-20 Arne Forsgren Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal
DE69113564T2 (de) 1990-08-13 1996-05-30 American Cyanamid Co Faser-Hemagglutinin von Bordetella pertussis als Träger für konjugierten Impfstoff.
US5936076A (en) 1991-08-29 1999-08-10 Kirin Beer Kabushiki Kaisha αgalactosylceramide derivatives
IT1253009B (it) 1991-12-31 1995-07-10 Sclavo Ricerca S R L Mutanti immunogenici detossificati della tossina colerica e della tossina lt, loro preparazione ed uso per la preparazione di vaccini
IT1262896B (it) 1992-03-06 1996-07-22 Composti coniugati formati da proteine heat shock (hsp) e oligo-poli- saccaridi, loro uso per la produzione di vaccini.
IL102687A (en) 1992-07-30 1997-06-10 Yeda Res & Dev Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them
GB9326174D0 (en) 1993-12-22 1994-02-23 Biocine Sclavo Mucosal adjuvant
EP0907738A1 (en) 1996-04-02 1999-04-14 Smithkline Beecham Corporation Novel compounds
EP0934336A1 (en) 1996-05-14 1999-08-11 Smithkline Beecham Corporation Novel compounds
US6420135B1 (en) 1996-10-31 2002-07-16 Human Genome Sciences, Inc. Streptococcus pneumoniae polynucleotides and sequences
GB9622660D0 (en) 1996-10-31 1997-01-08 Biocine Spa Immunogenic detoxified mutant toxin
GB9713156D0 (en) 1997-06-20 1997-08-27 Microbiological Res Authority Vaccines
US6800744B1 (en) 1997-07-02 2004-10-05 Genome Therapeutics Corporation Nucleic acid and amino acid sequences relating to Streptococcus pneumoniae for diagnostics and therapeutics
AU9363798A (en) 1997-11-06 1999-05-31 Chiron S.P.A. Neisserial antigens
WO1999027109A2 (en) 1997-11-26 1999-06-03 Inhibitex, Inc. EXTRACELLULAR MATRIX-BINDING PROTEINS FROM $i(STAPHYLOCOCCUS AUREUS)
CA2317815A1 (en) 1998-01-14 1999-07-22 Chiron S.P.A. Neisseria meningitidis antigens
JP2002516251A (ja) 1998-04-23 2002-06-04 ユーエイビー リサーチ ファンデーション 肺炎球菌表面プロテインＣ（ＰｓｐＣ）のエピトープ領域およびその菌株選択、ならびにそのための使用法
PT1944371E (pt) 1998-05-01 2015-07-13 Novartis Ag Antigénios e composições da neisseria meningitidis
GB9810193D0 (en) 1998-05-12 1998-07-08 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
WO2000006737A2 (en) 1998-07-27 2000-02-10 Microbial Technics Limited Streptococcus pneumoniae proteins and nucleic acid molecules
CN1318103A (zh) 1998-07-27 2001-10-17 微生物技术有限公司 肺炎链球菌的核酸和蛋白质
WO2000010599A2 (en) 1998-08-19 2000-03-02 North American Vaccine, Inc. IMMUNOGENIC β-PROPIONAMIDO-LINKED POLYSACCHARIDE PROTEIN CONJUGATE USEFUL AS A VACCINE PRODUCED USING AN N-ACRYLOYLATED POLYSACCHARIDE
EP2330192A1 (en) 1998-08-31 2011-06-08 The Provost, Fellows and Scholars of the College of the Holy and Undivided Trinity of Queen Elizabeth near Dublin Polypeptides and polynucleotides from coagulase-negative staphylococci
ATE422368T1 (de) 1998-08-31 2009-02-15 Inhibitex Inc Multikomponenten impfstoffe gegen staphylococcus aureus
WO2000033882A1 (en) 1998-12-04 2000-06-15 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services A vi-repa conjugate vaccine for immunization against salmonella typhi
GB9828000D0 (en) 1998-12-18 1999-02-10 Chiron Spa Antigens
JP4689044B2 (ja) 1998-12-21 2011-05-25 メディミューン，インコーポレーテッド ワクチン用の肺炎連鎖球菌タンパク質と免疫原断片
US20030130212A1 (en) 1999-01-14 2003-07-10 Rossignol Daniel P. Administration of an anti-endotoxin drug by intravenous infusion
US6551600B2 (en) 1999-02-01 2003-04-22 Eisai Co., Ltd. Immunological adjuvant compounds compositions and methods of use thereof
DE122009000054I1 (de) 1999-03-19 2009-12-31 Glaxosmithkline Biolog Sa Impfstoff gegen bakterielle antigene
WO2000058475A2 (en) 1999-03-26 2000-10-05 Provalis Uk Limited Streptococcus pneumoniae antigens
EP1165796A2 (en) 1999-04-09 2002-01-02 Techlab, Inc. Recombinant clostridium toxin a protein carrier for polysaccharide conjugate vaccines
JP2003501110A (ja) 1999-06-10 2003-01-14 メディミューン，インコーポレーテッド 肺炎連鎖球菌タンパク質とワクチン
EP1075841A1 (en) 1999-08-13 2001-02-14 Erasmus Universiteit Rotterdam Pneumococcal vaccines
WO2001070955A2 (en) 2000-03-21 2001-09-27 Elitra Pharmaceuticals, Inc. Identification of essential genes in prokaryotes
GB0007432D0 (en) 2000-03-27 2000-05-17 Microbiological Res Authority Proteins for use as carriers in conjugate vaccines
EP1278856A2 (en) 2000-04-27 2003-01-29 Medimmune, Inc. Immunogenic pneumococcal protein and vaccine compositions thereof
WO2002002606A2 (en) 2000-07-03 2002-01-10 Chiron S.P.A. Immunisation against chlamydia pneumoniae
US20040091495A1 (en) 2000-07-20 2004-05-13 Lars Bjorck Protein
AU8743001A (en) 2000-08-28 2002-03-13 Aventis Pasteur Moraxella polypeptides and corresponding dna fragments and uses thereof
GB0022742D0 (en) 2000-09-15 2000-11-01 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
WO2002034773A2 (en) 2000-10-26 2002-05-02 Imperial College Innovations Ltd. Streptococcal genes
NZ594877A (en) 2000-10-27 2012-07-27 Novartis Vaccines & Diagnostic Nucleic acids and proteins from streptococcus groups A & B
AT410798B (de) 2001-01-26 2003-07-25 Cistem Biotechnologies Gmbh Verfahren zur identifizierung, isolierung und herstellung von antigenen gegen ein spezifisches pathogen
GB0103424D0 (en) 2001-02-12 2001-03-28 Chiron Spa Gonococcus proteins
WO2002077183A2 (en) 2001-03-21 2002-10-03 Elitra Pharmaceuticals, Inc. Identification of essential genes in microorganisms
GB0107661D0 (en) 2001-03-27 2001-05-16 Chiron Spa Staphylococcus aureus
GB0108079D0 (en) 2001-03-30 2001-05-23 Microbial Technics Ltd Protein
WO2002085442A1 (en) 2001-04-19 2002-10-31 Radi Medical Systems Ab Combined pressure-volume sensor and guide wire assembly
US20030035806A1 (en) 2001-05-11 2003-02-20 D'ambra Anello J. Novel meningitis conjugate vaccine
EP1399181B1 (en) 2001-05-18 2012-05-09 The Government of the USA, as represented by the Secretary, Dept. of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention Peptide vaccines against group a streptococci
CA2450939C (en) 2001-06-15 2012-11-06 Inhibitex, Inc. Cross-reactive monoclonal and polyclonal antibodies which recognize surface proteins from coagulase-negative staphylococci and staphylococcus aureus
CA2808598A1 (en) 2001-08-02 2003-02-13 University Of Sheffield Antigenic polypeptides
EP2335723A1 (en) 2001-12-12 2011-06-22 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Immunisation against chlamydia trachomatis
GB0203403D0 (en) 2002-02-13 2002-04-03 Chiron Spa Chlamydia cytotoxic-T cell epitopes
EP2275124A3 (en) 2002-04-02 2011-03-23 Ben Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Protein-based streptococcus pneumoniae vaccines
GB0210128D0 (en) 2002-05-02 2002-06-12 Chiron Spa Nucleic acids and proteins from streptococcus groups A & B
GB0211118D0 (en) 2002-05-15 2002-06-26 Polonelli Luciano Vaccines
CN100360558C (zh) 2002-06-11 2008-01-09 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 免疫原性组合物
JP2005533057A (ja) 2002-06-13 2005-11-04 ニューヨーク・ユニバーシティ 合成ｃ−糖脂質、ならびに癌、感染性疾患および自己免疫疾患を処置するための合成ｃ−糖脂質の使用
US6945952B2 (en) 2002-06-25 2005-09-20 Theraject, Inc. Solid solution perforator for drug delivery and other applications
ES2504166T3 (es) 2002-09-13 2014-10-08 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Vacuna de estreptococo del grupo B
AU2004230485B2 (en) 2003-04-10 2009-01-22 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. The severe acute respiratory syndrome coronavirus
CN102174534A (zh) 2003-04-15 2011-09-07 英特塞尔股份公司 肺炎链球菌抗原
RU2352356C2 (ru) 2003-06-26 2009-04-20 Новартис Вэксинес Энд Дайэгностикс, Инк. ИММУНОГЕННАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ОСНОВЕ АНТИГЕНА Chlamydia trachomatis (ВАРИАНТЫ) И ЕЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ
PT1648500E (pt) 2003-07-31 2014-10-10 Novartis Vaccines & Diagnostic Composições imunogénicas para estreptococos piogenes
US7771726B2 (en) 2003-10-08 2010-08-10 New York University Use of synthetic glycolipids as universal adjuvants for vaccines against cancer and infectious diseases
CN1918176A (zh) 2004-02-18 2007-02-21 默克公司 用于诱导针对金黄色葡萄球菌的保护性免疫反应的多肽
EP1732384A4 (en) 2004-03-31 2008-04-23 Univ New York State Res Found NOVEL SYNTHETIC C-GLYCOLIPIDES, THEIR SYNTHESIS AND USE FOR THE TREATMENT OF INFECTIONS, CANCER AND AUTOIMMUNE DISEASES
AU2005287505A1 (en) 2004-09-22 2006-03-30 Biosynexus Incorporated Staphylococcal immunogenic compositions
WO2006062637A2 (en) * 2004-11-03 2006-06-15 Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. Influenza vaccination
UA95237C2 (uk) 2005-06-27 2011-07-25 Ґлаксосмітклайн Байолоджікалз С.А. Імуногенна композиція
TWI382019B (zh) 2005-08-19 2013-01-11 Array Biopharma Inc 作為類鐸受體（ｔｏｌｌ-ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）調節劑之胺基二氮雜呯
JP5161776B2 (ja) 2005-09-06 2013-03-13 セラジェクト， インコーポレイテッド 薬物粒子および／または薬物を吸着した粒子を含む、固溶体穿孔器
AR056591A1 (es) 2005-10-28 2007-10-10 Vaxinnate Corp Polipeptidos ligandos para receptor 4 simil toll (tlr4)
CA2629193C (en) 2005-11-18 2016-03-29 3M Innovative Properties Company Coatable compositions, coatings derived therefrom and microarrays having such coatings
WO2007059289A1 (en) 2005-11-18 2007-05-24 3M Innovative Properties Company Microneedle arrays and methods of preparing same
RU2008130893A (ru) 2005-12-27 2010-02-10 ОБЕТЕК, ЭлЭлСи (US) Адипогенные аденовирусы как биомаркеры заболеваний
AU2007281934B2 (en) 2006-01-18 2012-11-15 University Of Chicago Compositions and methods related to Staphylococcal bacterium proteins
US20080031877A1 (en) 2006-02-17 2008-02-07 Antonello Covacci Purification of bacterial antigens
AR060187A1 (es) 2006-03-30 2008-05-28 Glaxosmithkline Biolog Sa Composicion inmunogenica
BRPI0710210A2 (pt) 2006-03-30 2011-05-24 Glaxomithkline Biolog S A composição imunogênica, vacina, métodos para preparar a vacina, e para prevenir ou tratar infecção estafilocócica, uso da composição imunogênica, e, processo para conjugar oligassacarìdeo ou polissacarìdeo capsular
EP2076312A4 (en) 2006-04-20 2013-09-04 3M Innovative Properties Co SHAPED ITEMS WITH MICRONADEL ARRANGEMENTS
US8101114B2 (en) 2006-05-01 2012-01-24 Georgia Tech Research Corporation Particle based molding
JP5356228B2 (ja) 2006-07-07 2013-12-04 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド ｔｏｌｌ様レセプター７の調節因子
US20090182306A1 (en) * 2006-07-21 2009-07-16 Georgia Tech Research Corporation Microneedle Devices and Methods of Drug Delivery or Fluid Withdrawal
WO2008047174A1 (en) 2006-10-18 2008-04-24 Centre National De La Recherche Scientifique Alpha-galactosylceramide analogs, their methods of manufacture, intermediate compounds useful in these methods, and pharmaceutical compositions containing them
CN101808588B (zh) 2007-09-28 2012-12-19 贝尔法斯特女王大学 递送装置及方法
PE20091236A1 (es) 2007-11-22 2009-09-16 Astrazeneca Ab Derivados de pirimidina como immunomoduladores de tlr7
HRP20150892T1 (hr) 2008-03-03 2015-09-25 Novartis Ag Spojevi i sastavi kao modulatori tlr-aktivnosti
CN101980707B (zh) 2008-03-24 2015-05-20 4Sc股份有限公司 新的取代的咪唑并喹啉化合物
CN102076357A (zh) * 2008-06-30 2011-05-25 久光制药株式会社 微针装置以及利用微针装置提高流感疫苗的功效性的方法
EP2313111B1 (en) 2008-08-01 2013-09-04 Ventirx Pharmaceuticals, Inc. Toll-like receptor agonist formulations and their use
SG172060A1 (en) 2008-12-09 2011-07-28 Gilead Sciences Inc Modulators of toll-like receptors
EP2289843A1 (en) 2009-08-31 2011-03-02 University College Cork-National University of Ireland, Cork A microneedle device and method for the fabrication thereof
JO3257B1 (ar) * 2009-09-02 2018-09-16 Novartis Ag مركبات وتركيبات كمعدلات لفاعلية tlr
KR101853513B1 (ko) 2010-03-23 2018-04-30 노파르티스 아게 감염, 염증, 호흡기 질환 등의 치료를 위해 사용되는 ｔｌｒ2 효능제로서의 화합물 (시스테인 기재 리포펩티드) 및 조성물
CN103313725B (zh) 2010-09-01 2016-06-29 诺华有限公司 免疫增强剂吸附不溶性金属离子
US10933173B2 (en) * 2010-10-19 2021-03-02 Trustees Of Tufts College Silk fibroin-based microneedles and methods of making the same

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1602216A (zh) * 2001-04-20 2005-03-30 阿尔扎公司 微突出物阵列免疫贴剂和方法
WO2011151723A2 (en) * 2010-06-01 2011-12-08 Novartis Ag Concentration of vaccine antigens without lyophilization

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ADITYA PATTANI ET AL.: "Microneedle mediated intradermal delivery of adjuvanted recombinant HIV-1 CN54gp140 effectively primes mucosal boost inoculations", 《JOURNAL OF CONTROLLED RELEASE》 *
RYAN F. DONNELLY ET AL.: "Design, Optimization and Characterisation of Polymeric Microneedle Arrays Prepared by a Novel Laser-Based Micromoulding Technique", 《PHARM RES.》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113966228A (zh) * 2019-06-11 2022-01-21 葛兰素史密斯克莱生物公司 黏膜疫苗配制剂
CN114728154A (zh) * 2019-10-09 2022-07-08 瓦克塞斯技术公司 基于丝素蛋白的微针及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
TR201807340T4 (tr) 2018-06-21
JP2016508494A (ja) 2016-03-22
JP6411378B2 (ja) 2018-10-24
US9827190B2 (en) 2017-11-28
BR112015018014A2 (pt) 2017-07-11
ES2670863T3 (es) 2018-06-01
US20150366796A1 (en) 2015-12-24
WO2014118305A1 (en) 2014-08-07
EP2950819B1 (en) 2018-03-28
CA2899787A1 (en) 2014-08-07
EP2950819A1 (en) 2015-12-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9827190B2 (en) Intradermal delivery of immunological compositions comprising toll-like receptor 7 agonists
RU2454244C2 (ru) Сахарид-конъюгатные вакцины
US9517263B2 (en) Benzonaphthyridine-containing vaccines
JP5667566B2 (ja) 免疫原性組成物における使用のための微粒子
US10046048B2 (en) Homogenous suspension of immunopotentiating compounds and uses thereof
JP5988435B2 (ja) 放射線照射された生分解性微粒子
US20110250237A1 (en) Immunogenic amphipathic peptide compositions
JP2017057227A (ja) 免疫原性組成物に使用するための生分解性ポリマーおよびカチオン性多糖を含むミクロ粒子
WO2025240407A1 (en) Intranasal administration of toll-like receptor 4 agonists for treating allergic rhinitis and other diseases and conditions

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20151223

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication