CN105030950A - 防治高血脂的微生态制剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Landscapes
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Abstract
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种防治高血脂的微生态制剂及其制备方法和应用。本发明制剂组合物包括纳豆冻干粉、益生菌和药食同源中药，按重量份计具体由以下组分组成：纳豆冻干粉20-40份，山楂15-40份，银杏18-35份，香菇5-25份；所述益生菌为植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和青春双歧杆菌中的一种或多种；其中每克组合物中益生菌的活菌数≥1×109cfu。本发明制备方法，操作简单，易于工业化生产；制得的益生菌中药制剂产品，经试验验证，对高血脂有预防及辅助治疗的作用，防治高血脂的同时还可调节肠道菌群平衡，提高抵抗力；且安全，保存期长，制剂产品可制成粉剂，片剂，胶囊等，具有广阔的市场前景。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种防治高血脂的微生态制剂及其制备方法。
背景技术
心脑血管疾病心血管疾病是一种严重威胁人类的疾病，目前，我国心脑血管疾病患者已经超过2.7亿人！我国每年死于心脑血管疾病近300万人，占我国每年总死亡病因的51％。而幸存下来的患者75％不同程度丧失劳动能力，40％重残！特别是50岁以上中老年人的常见病，即使应用目前最先进、完善的治疗手段，仍可有50％以上的脑血管意外幸存者生活不能完全自理！心脑血管疾病已成为人类死亡病因最高的头号杀手，也是人们健康的“无声凶煞”。
高血脂是动脉粥样硬化形成的主要原因，血液中长期过高的胆固醇、甘油三脂以及血管壁上过多的脂类容易被自由基氧化，形成脂质过氧化物质，在血管壁上沉积，从而导致动脉粥样硬化。动脉粥样硬化可导致心、脑、血管疾病，引起严重后果，因此积极治疗高血脂症，对防治心脑血管疾病具有重要意义。
血脂一般指总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)及三酰甘油(TG)。TC损伤血管内皮细胞，促使动脉硬化形成和发展，TC聚积在血管内膜，使内膜增厚及粥样斑块形成，导致管腔变窄，冠状动脉狭窄会影响心脏供氧。LDL－C使内膜表面的粥样斑块变得松脆容易脱落，脱落的碎屑即栓子。栓子小又不是一次脱落的，会引起不稳定性心绞痛，大的栓子堵住了较大的冠状动脉，引起心肌梗死。TG能使LDL-C不进入肝脏代谢减少其活性，而直接进入致动脉硬化和粥样斑块崩解的途径，TG又使HDL-C进入肝脏灭活，结果HDL-C减少。HDL-C对以上血脂造成的血管损害有保护作用，所以HDL-C是对人体有益的脂蛋白。
纳豆菌，别称纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)，属枯草芽孢杆菌纳豆菌亚种(为革兰阳性菌，好氧，有芽孢，极易成链，具有广谱抗菌作用。利用纳豆菌可以制造纳豆。纳豆菌在通过吞噬大豆蛋白来繁殖的时候，产生出的无数酵素纳豆激酶和维生素K等，具有神奇的药效，对降脂、抗癌、防治骨质正在松等有较大的作用；还可以治疗三高(高血糖，高血压，高血脂)和溶解血栓，改善血液循环状况，维持血细胞的正常形态和功能等多种生理功能，而且还能产生出氨基酸的美味。
益生菌是一类能够对人体健康起到促进作用的活体微生物。迄今为止，已发现其具有多种生物活性。降低血清胆固醇水平是其重要的生理活性之一。自从Shaper和Mann等发现L.acidophilus发酵酸奶对非洲部落年男性血清胆固醇水平具有潜在的调节功能后，各种关于益生菌降胆固醇功能的研究逐渐开展起来，由此拉开了益生菌降胆固醇功能研究的序幕。
中医活血化瘀的药有很多，一般来讲可分为四类：活血祛瘀药、养血活血药、活血止血药与破血祛瘀药。其代表药物分别有：银杏、山楂和纳豆、香菇等。银杏除含有丰富的营养成分，具有较高的营养价值外，还有很多具有特殊生物活性的功能因子，包括：银杏多糖，银杏黄酮类化合物，银杏内酯，银杏酸。其中银杏黄酮类化合物，银杏内酯均具有降压、降脂、降胆固醇、降低血液粘稠度等，可保护心脑血管系统，山楂中含有山萜类及黄酮类等药物成分，香菇中含有嘌呤、胆碱、酪氨酸、氧化酶以及某些核酸物质以及纳豆中富含皂青素、游离的异黄酮类物质纳豆激酶均是降血压、降胆固醇、降血脂的作用，又可预防动脉硬化的活性物质。
微生态制剂(Probioties)，也叫活菌制剂(Bigone)或生菌剂，是指运用微生态学原理，利用对宿主有益无害的益生菌或益生菌的促生长物质，经特殊工艺制成的制剂。目前，在食品领域，以乳酸菌发酵为代表的微生态制剂是近年来健康食品和保健食品开发中的一支新生力量。鉴于纳豆具有多种药理活性作用，因此，开发一种纳豆微生态制剂具有广阔的应用前景。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种防治高血脂的微生态制剂及其制备方法，本发明制剂配方包括纳豆冻干粉、益生菌和药食同源中药，本发明制得的微生态制剂成品，是利用纳豆中富含皂青素、游离的异黄酮类物质纳豆激酶等功效成分，具有降血压、降胆固醇、降血脂的作用。
为实现上述目的，本发明的技术方案为：
防治高血脂的微生态制剂组合物，包括纳豆冻干粉、益生菌和药食同源中药，按重量份计具体由以下组分组成：
纳豆冻干粉20-40份；
山楂15-40份；
银杏18-35份；
香菇5-25份；
所述益生菌为植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和青春双歧杆菌中的任一种或多种。
所述纳豆冻干粉可直接用现有产品，也可由豆类经纳豆芽孢杆菌发酵后制备所得。
制备纳豆冻干粉的方法：
a黄豆预处理：将黄豆在水介质中浸泡，浸泡时间为12-36h，浸泡后的黄豆含水量按质量百分比计为35-65％。
b接种前处理：对步骤a预处理好的黄豆进行灭菌处理，再加入质量百分比为1-10％的氯化钠和质量百分比为0.1-5％的葡萄糖；
c接种发酵：向步骤b处理后的黄豆接种纳豆芽孢杆菌，所述纳豆芽孢杆菌的接种量按质量百分比计为培养基的2-20％；接种后置于恒温装置中静置发酵，得发酵液；所述发酵的温度为25-40℃，所述发酵时间为24-48h。
作为一种优选，所述纳豆芽孢杆菌的接种量按质量百分比计为培养基的1-10％，更优选的为10％。
纳豆冻干粉主要的活性成分有：纳豆菌(即纳豆芽孢杆菌)、纳豆多肽、纳豆多糖、黏液素、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽、纳豆激酶、吡啶二羧酸、溶菌酶、高弹性蛋白酶、卵磷脂、皂甙、异黄酮、维生素K2、维生素E、B族维生素、多种矿物质等，有150种以上的生理活性物质，主要的功效有：
1)调整肠道菌群，抑制有害菌，保持有益菌占主导地位。改善胃炎、胃溃疡、肠炎、便秘、腹泻，肠易激综合症。抑制杀灭病菌病毒、预防感冒和流感。
2)溶化血栓、修复受损的血液细胞、血管细胞，有效改善冠心病、高血压、高血糖，高血脂，动脉硬化、中风、静脉曲张。
3)改善免疫系统，改善类风湿、红斑狼疮、牛皮癣等免疫系统疾病；促使癌细胞凋亡，改善息肉、增生、囊肿、肌瘤、肿瘤等。
4)增加骨密度、改善骨质疏松症、股骨头坏死、骨关节病、痛风等疾病；
5)修复胰岛细胞，改善糖尿病及并发症。肝功能障碍、老年痴呆等疾病；
6)对活化大脑、提高记忆力和注意力、美容、减肥、防醉酒等都有很好的功效。
纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)，属枯草芽孢杆菌纳豆菌亚种(为革兰阳性菌，好氧，有芽孢，极易成链，具有广谱抗菌作用。利用纳豆芽孢杆菌可以制造纳豆。纳豆芽孢杆菌在通过吞噬大豆蛋白来繁殖的时候，产生出的无数酵素纳豆激酶和维生素K等，具有神奇的药效，对降脂、抗癌、防治骨质正在松等有较大的作用；还可以治疗三高(高血糖，高血压，高血脂)和溶解血栓，改善血液循环状况，维持血细胞的正常形态和功能等多种生理功能。
银杏、山楂和香菇属于药食同源中药。银杏除含有丰富的营养成分，具有较高的营养价值外，还有很多具有特殊生物活性的功能因子，包括：银杏多糖，银杏黄酮类化合物，银杏内酯，银杏酸。其中银杏黄酮类化合物，银杏内酯均具有降压、降脂、降胆固醇、降低血液粘稠度等，可保护心脑血管系统，山楂中含有山萜类及黄酮类等药物成分，香菇中含有嘌呤、胆碱、酪氨酸、氧化酶以及某些核酸物质均是降血压、降胆固醇、降血脂的作用，又可预防动脉硬化的活性物质。
益生菌是指一类能对宿主产生有利影响的微生物，常见的有乳酸菌和双歧杆菌，益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物。植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)和青春双歧杆菌(Bifidobacteriumadolescentis)三株高效功能益生菌株进入人体后可以在肠道内大量存活，起到调节肠内菌群平衡、促进人体消化吸收；更好促进药食同源中药有效成分的吸收。同时增强宿主对微生物病原体的非特异性抵抗力。中药与益生菌协同作用，相互促进，整体调节机体体质，维护正常健康状态。
进一步，防治高血脂的微生态制剂组合物，包括纳豆冻干粉、益生菌和药食同源中药，按重量份计具体由以下组分组成：
纳豆冻干粉25-35份；
山楂25-35份；
银杏25-35份；
香菇5-15份；
所述益生菌为植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和青春双歧杆菌中的任一种或多种。
进一步，防治高血脂的微生态制剂组合物，包括纳豆冻干粉、益生菌和药食同源中药，按重量份计具体由以下组分组成：
纳豆冻干粉30份；
山楂30份；
银杏30份；
香菇10份；
所述益生菌为植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和青春双歧杆菌中的任一种或多种。
进一步，每克所述组合物中含益生菌的活菌数≥1×109cfu。
本发明的目的之二在于提供一种用所述微生态制剂组合物制备微生态制剂的方法，包括以下步骤：
1)取上述重量份的中药经切段，粉碎，混合得中药混合物，粉碎后粒径≤50um；
2)制备冻干菌粉：取所述益生菌的各菌种经培养，发酵，收集菌体，加入保护剂冻干后粉碎，得各菌种冻干菌粉；
3)将纳豆冻干粉中加入步骤1)所述中药混合物和步骤2)所述各菌种冻干菌粉的混合物，充分混合得微生态制剂。
作为一种优选，步骤1)所述粉碎方法为气流粉碎。
进一步，步骤2)所述发酵的培养条件为：28-40℃，初始pH值为6.0-7.0，发酵时间为48-96h。
进一步，步骤2)所述保护剂包括戊五醇和/或蔗糖和/或脯氨酸和/或脱脂奶粉的一种或多种。
作为一种优选，所述保护剂使用脱脂奶粉。
作为一种优选，冻干参数为：冷冻温度(-50℃)-(-70℃)，升华温度30±5℃，冷冻干燥60-80h，优选72h。冻干处理可采用本领域任何常规操作均可实现。
进一步，步骤3)所述各菌种冻干菌粉的混合物中植物乳杆菌：罗伊氏乳杆菌：青春双歧杆菌的重量比为6-12:3-8:3-8。
本发明的目的之三在于提供一种用上述的方法制备的防治高血脂的微生态制剂产品，微生态制剂产品包括冻干粉末和/或片剂和/或胶囊。该微生态制剂产品对高血脂有预防及辅助治疗的作用。
进一步，所述的防治高血脂的微生态制剂产品中益生菌的活菌数≥1×109cfu/g。
本发明的有益效果在于：本发明提供了一种防治高血脂的微生态制剂及其制备方法。本发明制剂组合物包括纳豆冻干粉、益生菌和药食同源中药；纳豆冻干粉富含皂青素、游离的异黄酮类物质纳豆激酶等具有降血压、降胆固醇、降血脂功效成分，又可预防动脉硬化的活性物质。本发明制备益生菌中药制剂的方法，操作简单，易于工业化生产；本发明制得的益生菌中药制剂成品，经动物试验验证，对高血脂有预防及辅助治疗的作用，防治高血脂的同时还可调节肠道菌群平衡，提高抵抗力；且无毒、安全，保存期长，制剂产品可制成粉剂，片剂，胶囊等，具有广阔的市场前景。
附图说明
图1为各组大鼠血脂四项检测结果示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以，熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例一防治高血脂的微生态制剂组合物1
防治高血脂的微生态制剂组合物，包括纳豆冻干粉、益生菌和药食同源中药，按重量份计具体由以下组分组成：
纳豆冻干粉35份；
山楂30份；
银杏20；
香菇10份；
所益生菌为植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和青春双歧杆菌，植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、青春双歧杆菌，三者的比例为9：5：5，其中每克组合物中益生菌的活菌数为1×109cfu。
实施例二防治高血脂的微生态制剂组合物2
防治高血脂的微生态制剂组合物，包括纳豆冻干粉、益生菌和药食同源中药，按重量份计具体由以下组分组成：
纳豆冻干粉40份；
山楂25份；
银杏30份；
香菇15份；
所益生菌为植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和青春双歧杆菌，植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、青春双歧杆菌，三者的比例为9：5：5，其中每克组合物中益生菌的活菌数为1×109cfu。
实施例三防治高血脂的微生态制剂的制备
本实施例中纳豆冻干粉是由充分浸泡的黄豆经纳豆芽孢杆菌发酵后制备所得。
制备步骤具体如下：
1)纳豆粉的制备：
①黄豆预处理：称取500g的黄豆充分浸泡在纯净水中，浸泡时间约20h，待含水量达到50％左右。
②接种前处理：将预处理好的黄豆进行灭菌处理，然后分别加入1％的氯化钠和1％的葡萄糖。
③接种：向处理好的黄豆中接种纳豆芽孢杆菌，接种量为10％。
④培养：将接种完的黄豆置于37℃的恒温培养箱中进行培养，培养时间约为24h。
⑤纳豆冻干粉的制备：用脱脂奶粉作为保护剂，向培养好的纳豆中加入保护剂进行冻干处理，在-70℃冷冻再经30℃干燥，冷冻干燥72h后粉碎，即得到纳豆冻干粉。
2)取实施例1重量份的中药经切段，气流粉碎，得超微粉，粉碎后粒径最大不超过50um，将其混合得中药混合物；
3)制备冻干菌粉；
a将所述益生菌的各菌种经斜面培养活化，转接到一级种子培养基中，制得一级种子液；然后再转接入发酵培养基进行高密度培养，得发酵液；
b将步骤a所述发酵液离心，收集菌体，加入保护剂在-70℃冷冻再经30℃干燥，冷冻干燥72h后粉碎，得各菌种冻干菌粉；
4)在步骤1)所述的纳豆冻干粉中加入步骤2)所述中药混合物和步骤3)所述各菌种冻干菌粉的混合物，充分混合得防治高血脂的微生态制剂。
实施例四动物实验验证
材料及方法：
以大鼠为实验对象，构建高血脂大鼠模型，研究防治高血脂的微生态制剂对高血脂的生理及病理组织的影响。具体方法参照保健食品检验与评价技术规范(2003版)
1实验分组：
选SD雄性大鼠，每组10只，体重150克左右，标准条件饲养，供水。适应性饲养1周后，分组进行保护性处理。实验设1个正常对照组CK、1个阳性对照组PS和3个实验组(菌粉组SY1，中药组SY2，纳豆冻干粉与益生菌和药食同源中药复合组SY3)，用高脂饲料饲喂造成高血脂模型，受试样品给予时间30d。
2实验步骤：
1)灌胃前实验组和阳性对照组高脂饲料饲喂一个月，正常对照组普通饲料饲喂，饲喂一个月后分别进行尾静脉取血，测定血液指标。
2)每日经口灌胃给予受试样品，正常对照组给予生理盐水；阳性对照组给予蒲参胶囊；实验组分别给予相应受试样品。每天灌胃一次，每次4ml/只，连续灌胃一个月。
3)将大鼠进行麻醉取血，解剖取肝、脾、肾。测定血液指标以及脏器指数。
3实验结果：
3.1各组血液指标测定
造模结束后，对大鼠进行尾静脉取血，分别测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白HDL－C、低密度脂蛋白(LDL-C)，测定结果显示，TC(总胆固醇)、TG(甘油三酯)模型组与正常组比较有升高趋势且差异显著(p<0.05)。说明高脂血症大鼠造模成功。
3.2实验期间各组大鼠体征变化
表1实验期间各组大鼠体征变化
3.3各组对试验大鼠采食量及料肉比的影响
表2试验30天每组大鼠每6天的平均采食量及增重(单位：g)
| 组别 | CK组 | PS | SY1 | SY2 | SY3 |
| 采食量 | 165.36±8.65 | 155.90±8.24 | 166.83±16.86 | 167.55±9.18 | 161.62±23.56 |
| 增重 | 37.003±9.825 | 35.905±2.555 | 35.013±3.688 | 35.488±7.024 | 33.055±4.057 |
表3各组对试验大鼠料肉比的影响
| 组别 | CK组 | PS | SY1 | SY2 | SY3 |
| 料肉比 | 4.418±0.319 | 4.342±0.599 | 5.142±1.050 | 4.591±1.000 | 5.048±0.892 |
经分析：各组间采食量相比较无显著性差异(p>0.05)，但由表2可以看出，蒲参胶囊组略低于其他各组。各组间大鼠的料肉比相比较无显著性差异(p>0.05)，但由表3可以看出，SY1和SY3组料肉比稍高，阳性对照组料肉比较低。
3.4各组对大鼠内脏指数的影响
表4各组对大鼠内脏指数的影响
| 组别 | CK | PS | SY1 | SY2 | SY3 |
| 肝指数 | 3.376±0.211bc | 3.737±0.168a | 3.379±0.194a | 3.643±0.215ab | 3.585±0.139c |
| 脾指数 | 0.209±0.030a | 0.191±0.038ab | 0.198±0.036ab | 0.199±0.028b | 0.205±0.032ab |
| 肾指数 | 0.579±0.059 | 0.601±0.040 | 0.589±0.042 | 0.595±0.032 | 0.601±0.036 |
经分析：肝指数中SY2组与阳性对照组比无显著性差异(p>0.05)，但略低；SY1、SY3组与阳性对照组比差异显著(p<0.05)，明显低于阳性对照组，其中SY1组与正常对照组最接近。所以，复合组对于降低高脂大鼠的肝指数效果较好。
脾、肾指数—各组间相比较无显著性差异(p>0.05)，说明高脂大鼠脾脏、肾脏无明显变化。
3.5各组大鼠血脂四项检测结果
经试验结果分析：TC(总胆固醇)，PS组与SY1和SY3组比显著性差异(p<0.05)，与SY24组比差异不显著，说明中药在降TC方面差异明显，但益生菌降胆固醇效果明显，见图1。
TG(甘油三酯)PS组与各实验组无显著性差异，但总体效果是，中药降甘油三脂效果好于菌粉组。HDL-C(高密度脂蛋白)各对照组与实验组差异不显著，但总体趋势是，实验组都能略使HDL-C含量升高，特别是添加了菌粉的SY1和SY3组。LDL-C(低密度脂蛋白)-各组差异显著(p<0.05)，总体效果是，中药组降低LDL-C方面不如复合组。
实施例五防治高血脂的微生态制剂的应用
为验证本发明的微生态制剂在防治高血脂的功效，符合入选标准的100例高血脂患者，入选人群为48-85岁之间，知情同意自愿参加本试验并签署知情同意书，其中男性48例，女性52例，病程6-48个月，平均18.2个月，达到显著治愈效果94例、有效4例、效果不太明显2例。治愈率98％，显效94％，无效2％。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (10)
1.防治高血脂的微生态制剂组合物，其特征在于，包括纳豆冻干粉、益生菌和药食同源中药，按重量份计具体由以下组分组成：
纳豆冻干粉20-40份；
山楂15-40份；
银杏18-35份；
香菇5-25份；
所述益生菌为植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和青春双歧杆菌中的任一种或多种。
2.根据权利要求1所述的微生态制剂组合物，其特征在于，包括纳豆冻干粉、益生菌和药食同源中药，按重量份计具体由以下组分组成：
纳豆冻干粉25-35份；
山楂25-35份；
银杏25-35份；
香菇5-15份；
所述益生菌为植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和青春双歧杆菌中的任一种或多种。
3.根据权利要求1所述的微生态制剂组合物，其特征在于，包括纳豆冻干粉、益生菌和药食同源中药，按重量份计具体由以下组分组成：
纳豆冻干粉30份；
山楂30份；
银杏30份；
香菇10份；
所述益生菌为植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和青春双歧杆菌中的任一种或多种。
4.根据权利要求1所述的微生态制剂组合物，其特征在于，每克所述组合物中含益生菌的活菌数≥1×109cfu。
5.基于权利要求1-4任一项所述的微生态制剂组合物制备微生态制剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)取上述重量份的中药经切段，粉碎，混合得中药混合物，粉碎后粒径≤50um；
2)制备冻干菌粉：取所述益生菌的各菌种经培养，发酵，收集菌体，加入保护剂冻干后粉碎，得各菌种冻干菌粉；
3)将纳豆冻干粉中加入步骤1)所述中药混合物和步骤2)所述各菌种冻干菌粉的混合物，充分混合得微生态制剂。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤2)所述发酵的培养条件为：28-40℃，初始pH值为6.0-7.0，发酵时间为48-96h。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤2)所述保护剂包括戊五醇和/或蔗糖和/或脯氨酸和/或脱脂奶粉的一种或多种。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤3)所述各菌种冻干菌粉的混合物中植物乳杆菌：罗伊氏乳杆菌：青春双歧杆菌的重量比为6-12:3-8:3-8。
9.权利要求5所述的方法制备的防治高血脂的微生态制剂产品，其特征在于，所述微生态制剂产品包括冻干粉末和/或片剂和/或胶囊。
10.根据权利要求9所述的防治高血脂的微生态制剂产品中益生菌的活菌数≥1×109cfu/g。
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