CN104800303B - 一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和应用。本发明的中药组合物由黄芪，当归，赤芍以及水红花子组成，研究表明本发明的中药组合物可以改善阿尔茨海默病昆明小鼠的空间学习能力和空间探索能力，改善阿尔茨海默病小鼠的脑和脾脏的脏器指数，降低阿尔茨海默病血脑屏障的通透性，降低阿尔茨海默病脑组织海马Aβ、IL‑6、IL‑12蛋白表达水平，并且对阿尔茨海默病模型昆明小鼠体重无明显的影响。以上结果说明本发明的中药组合物对于阿尔茨海默病的治疗效果良好，因此本发明的中药组合物在阿尔茨海默病治疗领域将具有广阔的应用前景。

Description

一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和 应用

技术领域

本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和用途，特别涉及一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和应用，本发明属于中药研究技术领域。

背景技术

阿尔茨海默病是一种常见的老年性疾病之一，表现为机体的脑组织出现智能障碍及其精神障碍，这是一种综合性的、多发性的神经系统退行性疾病。阿尔茨海默病的病理表现为脑组织出现大量的淀粉样斑块的沉积，斑块的主要成分是β-淀粉样蛋白(Aβ)，Aβ的前体是β-淀粉样蛋白前体蛋白(APP)，Aβ是APP通过α、β、γ-分泌酶水解产生的一种40-42个氨基酸的肽类物质，主要包括Aβ_1-40和Aβ_1-42，其中Aβ_1-40的毒性没有Aβ_1-42大，基于此，实验可以采用Aβ_1-42或者Aβ_1-40脑组织注射建立阿尔茨海默病模型，开展对阿尔茨海默病的实验研究。同时阿尔茨海默病模型脑组织海马Aβ水平异常，基于此可以观察阿尔茨海默病模型脑组织海马Aβ的表达水平。阿尔茨海默病模型行为学指标多出现异常，这样就需要检测阿尔茨海默病模型的空间学习能力及其空间探索能力，判断阿尔茨海默病模型的学习和记忆能力，基于此，需要检测阿尔茨海默病模型的行为学指标。

Zlokovic提出阿尔茨海默病神经血管假说，认为血脑屏障改变引起多种级联反应，血脑屏障的通透性改变影响脑组织海马对Aβ清除异常致Aβ沉积等(ZlokovicBV.Neurovascular mechanisms of Alzheimer’s neurodegeneration[J].TrendsNeurosci，2008，28(4)：202-208.)，而血脑屏障的通透性可以通过检测脑组织EB的含量来显示(王萍，蔺扬，葛菲菲，等.CRM197对豚鼠血脑屏障通透性的影响[J].解剖科学进展，2008，14(4)：416-419.)，基于此，可以检测阿尔茨海默病模型的脑组织EB含量。阿尔茨海默病多表现免疫反应的衰退，可以引起大量的免疫因子的表达增加，包括IL-6、IL-12等因子的增加，基于此可以通过测定IL-6、IL-12蛋白表达水平判断阿尔茨海默病的免疫衰退反应(Richartz E，Stransky E，Batra A，et al.Decline of immune responsiveness：apathogenetic factor In Alzheimer's disease？[J].J Psychiatr Res.2005Sep；39(5)：535-543.Swardfager W， Rothenburg L，et al.A meta-analysis ofcytokines in Alzheimer's disease[J].Biol Psychiatry.2010Nov 15；68(10)：930-941.Lin nW，Levison SW.Context-dependent IL-6potentiation of interferon-gamma-induced IL-12secretion and CD40expression in murine microglia[J].J Neurochem.2009Nov；111(3)：808-818.)。

黄芪，当归，赤芍是祖国古老方剂补阳还五汤的成分之一。补阳还五汤是祖国医学的古老方剂之一，本发明人前期工作指出补阳还五汤及拆方对Aβ1-40所致阿尔茨海默病大鼠血清与海马组织Aβ和细胞因子含量能够起到调节作用(周忠光，韩玉生，姜波，等.补阳还五汤及拆方对Aβ_1-40所致阿尔茨海默病大鼠血清与海马组织Aβ和细胞因子含量的影响[J].山西医药杂志，2008，37(2)：129-131.)，在此基础上，本发明发明人对补阳还五汤进行了改良，即本发明的一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物除了含有补阳还五汤的部分成分黄芪，当归以及赤芍外，还有祖国医药水红花子，其中水红花子具有抗肿瘤、免疫抑制、抗氧化、抗肝纤维化等作用。

实验证明，相较于古老方剂补阳还五汤，本发明的中药组合物中黄芪剂量减少约三分之二，却仍可以达到与补阳还五汤相同或相近的治疗效果。目前中药基础研究比较薄弱，中药原料药中化学成分异常复杂，中药有效成分不明确，而中药是多成分多靶点综合发挥作用，因此，药味越多越易引起不良反应。鉴于此，本发明人精简了中药组方，仅选择黄芪，当归，赤芍以及水红花子进行组方，并采用Aβ1-42注射昆明小鼠海马区域制备阿尔茨海默病动物模型，开展了对防治阿尔茨海默病的研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和应用。

本发明的一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物，由以下重量份的各原料药组成：黄芪30-50重量份，当归4-8重量份，赤芍3-7重量份以及水红花子15-25重量份。

在本发明中，优选的，所述的中药组合物由以下重量份的各原料药组成：黄芪40重量份，当归6重量份，赤芍5重量份以及水红花子20重量份。

进一步的，本发明还提出了一种临床上适宜的用于治疗阿尔茨海默病的中药制剂，其特征在于由所述的中药组合物加入制剂成型所需的辅料，按照制备药物制剂的常规方法制成。

在本发明中，优选的，所述的制剂为水煎剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、片剂或口服液。

本发明制剂的制备方法属于常规制剂方法，在此无庸赘述。

更进一步的，本发明还提出了一种制备所述的中药组合物的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)按照以上所述的重量份称取各原料药；

(2)将各原料药的混合物放入高颈圆底烧瓶中，加入药材总重量7-10倍的蒸馏水，玻璃棒搅拌均匀，封闭环境下浸泡1.5-2.5h，加热煎煮1.5-2.5h，冷却10min后。用多层纱布过滤药材组合物，直到药物没有药液流出，得到第一次滤液；

(3)再将药物残渣放到高颈圆底烧瓶中，加入原药材总重量7-10倍蒸馏水，重复步骤(2)的过程进行第二次过滤处理，得到第二次滤液，合并两次的滤液；

(4)滤液经过双筒蒸锅70℃蒸发水分后得到中药组合物的提取浓缩液，得到的提取浓缩液在70℃电热恒温鼓风干燥箱内继续干燥4-5d，所得到的残留物就是所述的中药组合物的干膏。

进一步的，以上所述的方法中还包括将中药组合物的干膏放在粉碎机内粉碎，进行研磨，反复分子筛处理，得到所述中药组合物的粉剂。

优选的，所述的方法中，所述各原料药的重量份为：黄芪40重量份，当归6重量份，赤芍5重量份以及水红花子20重量份。

本发明开展了以昆明小鼠为处理对象，无菌条件下微量加样器双侧脑室一次性注入5μl凝聚态Aβ_1-42(80pmol·μl-1)，制备阿尔茨海默病模型。采用由黄芪40g，当归6g，赤芍5g，水红花子20g组成的中药组合物，设定中药组合物高、中、低剂量18.46g·kg^-1·d^-1、9.23g·kg^-1·d^-1、4.62g·kg^-1·d^-1三个剂量组开展对阿尔茨海默病的实验研究，便于观察中药组合物对阿尔茨海默病模型昆明小鼠的影响，主要观察和测试的内容包括阿尔茨海默病昆明小鼠的空间学习能力和空间探索能力，脑脏器指数，脾脏的脏器指数，血脑屏障的通透性，脑组织海马Aβ、IL-6、IL-12蛋白水平及其阿尔茨海默病模型昆明小鼠的体重，结果表明，本发明的中药组合物能改善阿尔茨海默病模型小鼠的学习记忆功能，减轻炎症反应，降低血脑屏障的通透性，该中药组合物能够通过抑制海马Aβ和其他的炎症因子蛋白在阿尔茨海默病治疗中发挥重要的作用，同时Aβ蛋白与IL-6、IL-12蛋白含量变化存在相关性。以上综合表明本发明的中药组合物对阿尔茨海默病的综合治疗效果良好。

因此，在此基础上，本发明还提出了所述的中药组合物在制备治疗阿尔茨海默病药物中的用途。

附图说明

图1为本发明的中药组合物对阿尔茨海默病小鼠定位航行能力的影响；

图2为本发明的中药组合物对阿尔茨海默病小鼠空间探索能力的影响；

图3为本发明的中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脑脏器指数的影响；

图4为本发明的中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脾脏脏器指数的影响；

图5为本发明的中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脑组织EB含量的影响；

图6为本发明的中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脑海马组织Aβ蛋白表达的影响；

图7为本发明的中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脑海马组织IL-6蛋白表达的影响；

图8为本发明的中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脑海马组织IL-12蛋白表达的影响；

图9为本发明的中药组合物对阿尔茨海默病小鼠体重的影响。

具体实施方式

下面通过实验并结合实施例对本发明做进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。

实施例1一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备

本发明的中药组合物由以下重量的各原料药组成：黄芪40g，当归6g，赤芍5g以及水红花子20g。

实施例2一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备

本发明的中药组合物由以下重量的各原料药组成：黄芪35g，当归8g，赤芍4g以及水红花子24g。

实施例3一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备

本发明的中药组合物由以下重量的各原料药组成：黄芪45g，当归5g，赤芍7g以及水红花子14g。

实施例4一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物(干膏)的制备

实验使用的药材包括黄芪40g、当归6g、赤芍5g、水红花子20g，药材均匀混合得到71g，按照同样的配制方法配制10副此药材，得到710g的药材总量。将710g药材的混合物放入20000ml的高颈圆底烧瓶中，加入6000ml蒸馏水，玻璃棒搅拌均匀，封闭环境下浸泡2h，加热煎煮2h，冷却10min，用多层纱布过滤药材组合物，纱布过滤残渣，直到药物没有药液流出，得到第一次滤液。再将药物残渣放到高颈圆底烧瓶中，加入6000ml蒸馏水，重复上面过程进行第二次过滤处理，得到第二次滤液，合并两次的滤液。

滤液经过双筒蒸锅70℃蒸发水分后得到中药组合物的提取浓缩液，得到的提取浓缩液在70℃电热恒温鼓风干燥箱内继续干燥4-5d，所得到的残留物就是所述的中药组合物的干膏。

实验得到中药组合物干膏267.1g，中药组合物出膏率为干膏/中药药材×100％＝37.62％。

实施例5一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物(粉剂)的制备

取实施例4得到的中药组合物干膏，将中药组合物干膏放在粉碎机内粉碎，进行研磨，反复分子筛处理，减少损失，粉碎机内粉碎后得到中药组合物干粉261.5g，中药组合物的出粉率为干粉/中药药材×100％＝36.83％。实际使用的药材是710g，得到的干粉是261.5g，因此1g中药组合物干粉相当于原药药材2.72g。

电子天平调零后称取中药组合物干粉10g分装，密封放置在-80℃冰箱内长期保存。

实施例6本发明的中药组合物在治疗阿尔茨海默病中的用途

1.材料和仪器

1.1材料

54只雄性、8周龄、清洁级昆明小鼠、体重25±3g，黑龙江中医药大学实验动物中心李宝龙提供，质量合格证书：SCXK(黑)2013-004。昆明小鼠在黑龙江中医药大学实验动物中心常温、常湿、无菌的适当条件下饲养，昆明小鼠自由摄取食物和饮用水。吡拉西坦购买于湖南迪诺制药有限公司，药品批号：130325。Aβ1-42购于Sigma公司。Aβ、IL-6、IL-12酶联免疫试剂盒购买于南京建成生物工程研究所，批号：20140401。蒸馏水购买于哈尔滨市文景蒸馏水厂。黄芪批号131109，当归批号131001，赤芍批号121003，水红花子批号140922，由黑龙江中医药大学中医药研究院周忠光教授购买于黑龙江中医药大学附属第一医院。中药组合物干粉按照实施例5方法制备，给予小鼠灌胃治疗的时候，需要将药材干粉配制成相当于原药材18.46g·kg^-1·d^-1、9.23g·kg^-1·d^-1、4.62g·kg^-1·d^-1的三个剂量，并对中药组合物进行加热至37℃，便于给予小鼠灌胃。其他试剂均为国产分析纯。

1.2仪器

HMIAS高清晰度彩色医学图文分析系统，武汉千屏影像技术有限公司生产；RE-52A旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂生产；SIMF124制冰机，日本三洋公司生产；CM1900冰冻切片机，Leica公司生产；PLZOZ-S电子天平，梅特勒-托利多仪器有限公司生产；Morris水迷宫，安徽淮北正华生物仪器设备有限公司生产；6100型RT-雷杜酶标仪，美国RT公司生产；TGL-16G台式离心机，上海安亭科学仪器厂生产；超净工作台，苏州博莱尔净化设备有限公司生产；酒精计，河北省河间市玻璃厂生产；101-0AB型电热恒温鼓风干燥箱，天津市泰斯特仪器有限公司生产生产；高压灭菌器，上海医用核子仪器厂生产等。

2方法

2.1实验分组

昆明小鼠随机分对照组9只、模型组9只、吡拉西坦组9只、中药组合物高剂量组(18.46g·kg^-1·d^-1)9只、中药组合物中剂量组(9.23g·kg^-1·d^-1)9只、中药组合物低剂量组(4.62g·kg^-1·d^-1)9只，小鼠共54只。

2.2阿尔茨海默病模型复制

观察昆明小鼠的一般状态，抓取昆明小鼠，选择模型组、吡拉西坦组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组和中药组合物低剂量组小鼠，采用10％水合氯醛对昆明小鼠进行麻醉，固定小鼠，无菌条件下微量加样器于小鼠的双侧脑室一次性注入5μl凝聚态Aβ_1-42(80pmol·μl-1)，针头留下2min，包扎小鼠，让小鼠充分休息，防止感染。同时对照组采用同样的方法在小鼠的双侧脑室注射等量的生理盐水。

2.3实验给药

黄芪40g、当归6g、赤芍5g、水红花子20g的剂量确定依据是：正常机体标准体重的药物剂量是71g，通过人与小鼠的体表面积之比，求得每20g小鼠标准体重的药物剂量是71g乘以0.0026，得到每20g小鼠标准体重的药物剂量0.1846g/20g，换算成9.23g/kg，此剂量就是进行实验的小鼠用药的中剂量，大剂量较中剂量加倍，小剂量较中剂量减半。

对照组、模型组小鼠给予等量的生理盐水灌胃，吡拉西坦组给予吡拉西坦0.62g·kg^-1·d^-1灌胃，中药组合物高剂量组给予中药组合物18.46g·kg^-1·d^-1灌胃、中药组合物中剂量组给予中药组合物9.23g·kg^-1·d^-1灌胃、中药组合物低剂量组给予中药组合物4.62g·kg^-1·d^-1灌胃，灌胃持续时间为21d。

2.4测试定位航行能力和空间探索能力

Morris水迷宫测试的主要设备包括：Morris水迷宫、电脑摄像系统和软件分析系统。采用Morris水迷宫仪器检测各组小鼠定位航行能力和空间探索能力，即各组小鼠的学习能力和记忆能力。该Morris水迷宫仪器为圆形的水池，内含有一个可以移动的平台，平台上有横纹，可以方便小鼠停留，水池上方的摄像仪器和计算机相连，随时对小鼠的运动轨迹进行跟踪，分析小鼠的相应实验数据。测试的时候需要保持室内外的参照物一致，减少外界的干扰。Morris水迷宫仪器水深20cm，温度控制在(23±2)℃，水中放上墨汁形成浑浊黑色背景，因为小鼠为白色，需要制造黑色背景，便于开展实验。

通过摄像仪器确定四个象限。其中Morris水迷宫平台放于水迷宫的第四象限，另外3个象限作为测试的象限。实验第1、2、3、4d为训练时间，每次训练为60s，测试的时候将小鼠头朝外侧分别放于Morris水迷宫仪器的第一、二、三象限开展实验研究，记录每次小鼠的游泳轨迹及其相应的实验数据。实验第5d测试小鼠到达水下平台位置时间记作潜伏期时间，以此来衡量小鼠的定位航行能力。另外在测试第5d的时候撤去Morris水迷宫仪器平台，检测在60s内小鼠找到平台的游泳距离作为衡量小鼠空间探索能力，以此来衡量小鼠的记忆能力。

2.5测定脏器指数

Morris水迷宫测试实验结束2h后，超净工作台上放置冰台，进行操作，迅速断头处死各组小鼠，取材各组小鼠的脑、脾脏器官，电子天平精确称取小鼠脑、脾脏的脏器质量，进行统计分析，计算小鼠脑、脾脏的脏器指数。

小鼠脏器指数的计算公式：脏器指数(mg·g^-1)＝脏器质量(mg)/体重(g)

2.6测定脑组织伊文氏蓝(EB)含量

实验按照倍比稀释法依次配成EB标准溶液，浓度分别为8、4、2、1、0.5、0.25μg·ml^-1，在6100型RT-雷杜酶标仪上检测630nm的吸光度值(A)。以EB浓度为横坐标，吸光度值(A)为纵坐标，绘制EB含量的标准曲线，求EB含量标准曲线方程。

Morris水迷宫测试实验结束2h后，各组小鼠的尾静脉注射2％EB溶液，随时观察小鼠的全身皮肤出现明显的蓝色后，表明2％EB溶液注射成功。2％EB溶液注射成功后小鼠水合氯醛进行麻醉，细绳固定小鼠，采用无菌的输液器对小鼠的左心室灌注100ml生理盐水，冰台上迅速解剖、甲酰胺溶液浸泡、避光孵育、匀浆、离心10min。使用美国RT公司的6100型RT-雷杜酶标仪，选择630nm处测定上清液吸光度值(A)。根据EB标准曲线求出EB浓度(μg·ml^-1)，在通过小鼠脑组织的质量求出小鼠的EB含量(μg·g^-1)，EB含量用EB浓度/脑湿重(μg·g^-1)的比值来表示。

2.7测定小鼠海马组织Aβ、IL-6和IL-12蛋白含量

Morris水迷宫测试实验结束2h后，各组小鼠在超净工作台上断头处死，去除脑组织皮肤，开颅，取出完整的小鼠大脑组织放在冰台上，去除脑干和小脑，迅速取各组小鼠的海马组织，匀浆小鼠海马组织，4℃冰箱静置，5000rpm·min^-1离心10min，吸取海马组织上清液，分装，-20℃保存。按酶联免疫试剂盒说明书进行操作，使用6100型RT-雷杜酶标仪450nm波长处测定各孔吸光度(A)，求得小鼠脑海马组织Aβ、IL-6和IL-12蛋白的含量。

2.8测定体重

实验期间每天测定小鼠体重，实验结束前最后测定昆明小鼠体重，以最后测的小鼠体重为实验统计数据，计算比较各组小鼠的体重差异。

2.9统计分析

采用SPSS19.0软件进行统计学处理，实验数据采用表示，多组间比较采用单因素方差分析实验数据。P<0.05认为差异有统计学意义。

3结果

3.1中药组合物对阿尔茨海默病小鼠定位航行能力的影响

小鼠定位航行能力用潜伏期表示。结果表明，与对照组比较，模型组小鼠潜伏期明显延长(P＜0.05)；与模型组比较，吡拉西坦组、中药组合物高、中、低剂量组小鼠潜伏期明显缩短(P＜0.05)(见表1，图1)。

表1中药组合物对阿尔茨海默病小鼠定位航行能力的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05

3.2中药组合物对阿尔茨海默病小鼠空间探索能力的影响

小鼠空间探索能力用游泳距离表示。结果表明，与对照组比较，模型组小鼠游泳距离明显增加(P＜0.05)；与模型组比较，吡拉西坦组、中药组合物高、中、低剂量组小鼠游泳距离明显减少(P＜0.05)(见表2，图2)。

表2中药组合物对阿尔茨海默病小鼠空间探索能力的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05

3.3中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脑脏器指数的影响

由表3分析可见，与对照组比较，模型组阿尔茨海默病小鼠脑脏器指数明显降低(P＜0.05)，与模型组比较，吡拉西坦组、中药组合物高、中、低剂量组阿尔茨海默病小鼠脑脏器指数明显升高(P＜0.05)(见表3，图3)。

表3中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脑脏器指数的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05

3.4中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脾脏脏器指数的影响

由表4分析可见，与对照组比较，模型组阿尔茨海默病小鼠脾脏的脏器指数明显降低(P＜0.05)，与模型组比较，吡拉西坦组、中药组合物高、中、低剂量组小鼠脾脏的脏器指数明显升高(P＜0.05)(见表4，图4)。

表4中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脾脏脏器指数的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05

3.5中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脑组织EB含量的影响

由表5分析可见，与对照组比较，模型组阿尔茨海默病小鼠脑组织EB含量明显升高(P＜0.05)；与模型组比较，吡拉西坦组、中药组合物高、中、低剂量组阿尔茨海默病小鼠脑组织EB含量明显降低(P＜0.05)(见表5，图5)。

表5中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脑组织EB含量的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05

3.6中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脑海马组织Aβ蛋白表达的影响

由表6分析可见，与对照组比较，模型组小鼠阿尔茨海默病脑海马组织Aβ蛋白含量明显升高(P＜0.05)；与模型组比较，吡拉西坦组、中药组合物高、中、低剂量组脑海马组织Aβ蛋白含量明显降低(P＜0.05)(见表6，图6)。

表6中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脑海马组织Aβ蛋白表达的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05

3.7中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脑海马组织IL-6蛋白表达的影响

由表7可见，与对照组比较，模型组阿尔茨海默病小鼠海马组织IL-6蛋白含量明显升高(P＜0.05)；与模型组比较，吡拉西坦组、中药组合物高、中、低剂量组阿尔茨海默病小鼠海马组织IL-6蛋白含量明显降低(P＜0.05)(见表7，图7)。

表7中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脑海马组织IL-6蛋白表达的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05

3.8中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脑海马组织IL-12蛋白表达的影响

由表8可见，与对照组比较，模型组阿尔茨海默病小鼠海马组织IL-12蛋白含量明显升高(P＜0.05)；与模型组比较，吡拉西坦组、中药组合物高、中、低剂量组阿尔茨海默病小鼠海马组织IL-12蛋白含量明显降低(P＜0.05)(见表8，图8)。

表8中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脑海马组织IL-12蛋白表达的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05

3.9中药组合物对小鼠体重的影响

结果表明，与对照组比较，模型组小鼠的体重改变不明显(P＞0.05)；与模型组比较，吡拉西坦组、中药组合物高、中、低剂量组的小鼠体重改变不明显(P＞0.05)(见表9，图9)。

表9中药组合物对阿尔茨海默病小鼠体重的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＞0.05；与模型组比较：²⁾P＞0.05

4结论

本次动物实验行为学的检测结果显示，模型组小鼠的学习记忆能力明显下降，模型稳定，适宜开展实验研究。中药组合物高、中、低剂量组小鼠的学习记忆能力明显改善，提示中药组合物高、中、低剂量可以明显改善阿尔茨海默病模型小鼠的学习记忆能力。以上说明黄芪40g、当归6g、赤芍5g、水红花子20g中药组合物可以改善阿尔茨海默病昆明小鼠空间学习能力和空间探索能力。

实验测定小鼠脾脏、脑的脏器指数显示，模型组小鼠脑和脾脏的质量分数不正常，小鼠脑和脾脏损伤较重，机体脑功能减弱，抗感染能力减弱。中药组合物高、中、低剂量组可以改善小鼠的脑和脾脏的质量分数，增强机体的抗感染能力，提示黄芪、当归、赤芍、水红花子中药组合物恢复脾脏、脑的部分功能，对阿尔茨海默病模型小鼠抗炎作用及其脑功能有一定的恢复作用。以上说明祖国医药黄芪、当归、赤芍、水红花子生药组合物可以对阿尔茨海默病昆明小鼠脑组织和脾脏有一定的保护作用。

实验测定脑组织的EB含量，与对照组比较，模型组小鼠脑组织EB含量明显升高(P＜0.05)，说明脑组织血脑屏障的通透性增加，加重了异常物质进入脑组织；与模型组比较，中药组合物高、中、低剂量组小鼠脑组织EB含量明显降低(P＜0.05)，说明黄芪、当归、赤芍、水红花子中药组合物明显改善脑组织血脑屏障的通透性，脑组织通透性的变化与脑、脾脏的脏器指数变化一致，提示脑组织炎症反应明显的同时伴有一定的血脑屏障通透性的增加。以上说明祖国医药黄芪、当归、赤芍、水红花子生药组合物可以明显改善阿尔茨海默病昆明小鼠血脑屏障的通透性。

实验通过酶联免疫方法测定Aβ蛋白的含量，结果表明，模型小鼠的海马组织阿尔茨海默病发病的中心环节成分Aβ蛋白含量明显升高。黄芪、当归、赤芍、水红花子中药组合物高、中、低剂量通过影响Aβ蛋白来改善阿尔茨海默病的发生发展。以上综合提示黄芪、当归、赤芍、水红花子中药组合物高、中、低剂量治疗阿尔茨海默病有明显的效果，并且通过Aβ来发挥对阿尔茨海默病的治疗作用。

实验通过酶联免疫方法测定IL-6、IL-12蛋白的含量，结果表明，与对照组比较，模型组小鼠海马组织IL-6、IL-12蛋白含量明显升高(P＜0.05)，说明模型组炎症反应明显，大量的炎症因子参与了阿尔茨海默病的发生发展；与模型组比较，中药组合物高、中、低剂量组海马组织IL-6、IL-12蛋白含量明显降低(P＜0.05)，说明黄芪、当归、赤芍、水红花子中药组合物明显改善小鼠海马组织的炎症反应，IL-6、IL-12蛋白与Aβ蛋白的趋势接近，说明这些因子是阿尔茨海默病评价的重要的相关因子，同时也说明在阿尔茨海默病小鼠海马组织中心环节因子Aβ蛋白与免疫炎症因子IL-6、IL-12蛋白存在一定的相关性。

实验结束后，与对照组比较，模型组昆明小鼠体重改变不明显(P＞0.05)；与模型组比较，中药组合物高、中、低剂量组昆明小鼠阿尔茨海默病体重改变也不明显(P＞0.05)，说明黄芪、当归、赤芍、水红花子中药组合物治疗阿尔茨海默病的同时不会改变昆明小鼠的体重，表明黄芪、当归、赤芍、水红花子混合物副作用较小，适合开展针对阿尔茨海默病的治疗。

综上所述，本发明的中药组合物能改善阿尔茨海默病模型小鼠的学习记忆功能，减轻炎症反应，降低血脑屏障的通透性，中药组合物能够通过抑制海马Aβ和其他的炎症因子蛋白在阿尔茨海默病治疗中发挥重要的作用，同时Aβ蛋白与IL-6、IL-12蛋白含量变化存在相关性，具体的机制还有待于进一步的实验研究。以上综合表明本发明的中药组合物对阿尔茨海默病的综合治疗效果良好。

以上所述仅为本发明的优选实施例，对本发明而言仅是说明性的，而非限制性的；本领域普通技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效变更，但都将落入本发明的保护范围内。

Claims (8)

1.一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物，其特征在于由以下重量份的各原料药组成：黄芪30-50重量份，当归4-8重量份，赤芍3-7重量份以及水红花子15-25重量份。

2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于由以下重量份的各原料药组成：黄芪40重量份，当归6重量份，赤芍5重量份以及水红花子20重量份。

3.一种临床上适宜的用于治疗阿尔茨海默病的中药制剂，其特征在于由权利要求1或2所述的中药组合物加入制剂成型所需的辅料，按照制备药物制剂的常规方法制成。

4.如权利要求3所述的中药制剂，其特征在于所述的制剂为水煎剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、片剂或口服液。

5.一种制备权利要求1所述的中药组合物的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)按照权利要求1所述的重量份称取各原料药；

(2)将各原料药的混合物放入高颈圆底烧瓶中，加入药材总重量7-10倍的蒸馏水，玻璃棒搅拌均匀，封闭环境下浸泡1.5-2.5h，加热煎煮1.5-2.5h，冷却10min后，用多层纱布过滤药材组合物，直到药物没有药液流出，得到第一次滤液；

(3)再将药物残渣放到高颈圆底烧瓶中，加入原药材总重量7-10倍蒸馏水，重复步骤(2)的过程进行第二次过滤处理，得到第二次滤液，合并两次的滤液；

(4)滤液经过双筒蒸锅70℃蒸发水分后得到中药组合物的提取浓缩液，得到的提取浓缩液在70℃电热恒温鼓风干燥箱内继续干燥4-5d，所得到的残留物就是所述的中药组合物的干膏。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于还包括将中药组合物的干膏放在粉碎机内粉碎，进行研磨，反复分子筛处理，得到所述中药组合物的粉剂。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于所述各原料药的重量份为：黄芪40重量份，当归6重量份，赤芍5重量份以及水红花子20重量份。

8.如权利要求1或2所述的中药组合物在制备治疗阿尔茨海默病药物中的用途。