CN106236801A - 超微破壁粉碎技术制成的三七活性药物及保健品及其制法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及中药领域，具体涉及一种三七活性药物组合物及其制备方法与制药用途。该药物组合物是由以下重量份的原料制成的：三七花0.5～10重量份，三七0.5～10重量份。该药物组合物制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、滴丸、注射剂。本发明还提供了该药物组合物的质量检测方法。该药物组合物具有提高免疫力、抗肿瘤、治疗高血压、心血管病、脑血管病、糖尿病、高血脂、代谢综合征、乳腺增生、抑郁症、抗衰老、美容养颜等多种功效。

Description

超微破壁粉碎技术制成的三七活性药物及保健品及其制法

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种三七与三七花的活性药物组合物及其制备方法。

背景技术

本专利申请是以2015年7月22日提交的第201510433658.6号中国发明专利为优先权专利的在后专利申请。

一、三七的化学成分和药理作用

三七为五加科植物三七panaxnotoginseng（Burk.）F.H.Chen的干燥根，主产于广西、云南，四川、广东、湖南等地亦有少量引种。本品性温，味甘、微苦，归肝、胃、心、大肠经，具有止血散瘀、消肿定痛的功效，主治吐血、咳血、尿血、便血、血痢、崩漏、产后出血、外伤出血、跌仆损伤、胸痹心痛、脘胁久痛、瘕积块、血瘀经闭、痛经、产后瘀滞腹痛、疮疡肿痛。与三七散瘀止血、消肿定痛功效相关的药理作用十分广泛，包括止血、抗血栓、促进造血、扩血管、降血压、抗心肌缺血、抗脑缺血、抗心律失常、抗动脉粥样硬化、抗炎、保肝、抗肿瘤、镇痛等。

1 有效成分

三七的主要成分为达玛烷型四环三萜类、三萜皂苷以及三萜类寡糖苷，还含有三七素、β-谷甾醇、β-谷甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、三七糖苷等。此外，三七根含有多种挥发油，主要有α和γ-依兰油烯、香附子烯、丁香烯等烯类，棕榈酸甲酯等酯类，辛酸、乙酸等酸类，3-壬烯-2-酮等酮类和多种烷类。

2 药理学研究进展

2.1 抗凝血作用体外试验与体内十二指肠给药试验表明，三七三醇皂苷可明显抑制胶原、花生四烯酸诱导的大鼠及家兔血小板聚集。三七总皂苷与猪主动脉血管内皮细胞共孵，可促进内皮细胞分泌组织型纤溶酶原激活物。

2.2 对心血管系统的影响

三七总皂苷对心血管系统具有多方面的作用，可降低不可逆性室颤的发生，改善心脏舒缩功能，减少心肌缺血性损伤，对抗心肌肥大，抑制左心室重构；对内皮细胞的作用主要为增加其内游离钙离子浓度，保护内皮；对于血管平滑肌细胞，三七总皂苷具有抑制和促进细胞增生的双向作用。

2.3 对脑组织和神经的影响

采用改良的线栓法制备大鼠短暂大脑中动脉栓塞再灌注模型，检测缺血-再灌注后不同恢复期（3，7，28d）大鼠神经功能恢复、脑梗死体积、Nogo-AmRNA及蛋白的表达。结果表明，三七三醇皂苷可抑制脑缺血-再灌注后Nogo-A的表达，从而起到促进脑梗死后神经功能恢复、脑功能重塑的作用。

采用原代培养的大鼠大脑皮层神经细胞，经不同浓度的三七总皂苷预处理后，建立氧糖剥夺（OGD）模型，2h后复氧复糖，模拟再灌注模型。通过MTT法比较神经元的存活情况，并测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的活性变化，以及Bcl-2蛋白表达的变化。结果表明，三七总皂苷对缺氧缺糖条件下的大鼠皮层神经细胞有保护作用，其保护作用可能与其抑制神经细胞脂质过氧化反应、提高Bcl-2蛋白表达有关。

2.4 对脊髓损伤的保护作用

将健康成年雌性SD大鼠63只，随机分为正常组、溶剂对照组、三七总皂苷组，大鼠脊髓T10右侧半横断损伤后15min，腹腔注射三七总皂苷，剂量为20mg/kg，以后每天给药1次，溶剂对照组注射等量生理盐水。术后1，3，7，14，21，28d进行BBB评分行为学检测，并运用免疫组织化学方法检测脊髓损伤远侧端胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的变化。结果表明，三七总皂苷能抑制脊髓半横断损伤后星形胶质细胞的活化，这可能是其促进脊髓损伤后运动功能恢复的机制之一。

将25只成年雌性大鼠在施行脊髓半横断术后，分为对照组、三七总皂苷低剂量组、三七总皂苷中剂量组、三七总皂苷高剂量组和N-硝基-L-精氨酸组。三七总皂苷组每天胃饲一定剂量的三七总皂苷，L-NNA组每天腹腔内注射L-NNA。术后30d取出脊髓和大脑行冷冻切片，做尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶（NADPH）组化染色和中性红染色。结果表明，三七总皂苷能促进受损伤的背核神经元和红核神经元的存活，同时能抑制受损伤的背核神经元表达一氧化氮合酶（NOS）。

2.5 对肾组织的影响

将大鼠随机分为假手术组、模型组和三七总皂苷治疗组，建立肾动脉狭窄肾缺血大鼠模型，分别于造模后第7，28，45，60d处死大鼠，观察肾间质病理形态学变化，应用免疫组织化学法检测肾小管-间质α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在不同时间点的表达，放射免疫分析法检测血清白细胞介素2（IL-2）的含量、ELISA检测血清血小板源性生长因子（PDGF）的含量。结果表明，三七总皂苷可能通过抑制肾小管间质细胞表型转化，降低细胞因子血小板源性生长因子的水平和早期白细胞介素2的水平，减轻和改善慢性肾缺血肾间质纤维化。

以四氧嘧啶复制糖尿病大鼠模型，动物分为正常组、模型组、三七总皂苷高剂量治疗组、低剂量治疗组，生化检测空腹血糖、尿素氮、肌酐、总胆固醇、甘油三酯及尿蛋白水平，HE及PAS染色、光镜观察肾组织形态学改变，RT-PCR法检测肾组织转化生长因子β1（TGFβ1）、纤溶酶原激活物抑制因子-1（PAI-1）mRNA表达。结果表明，三七皂苷可能通过降低TGFβ1和PAI-1mRNA表达，进而保护糖尿病大鼠肾脏。

2.6 其他作用

三七对记忆获得障碍、记忆巩固障碍有一定改善作用，对家兔失血性休克有一定疗效，三七皂苷A对犬有一定的利尿作用。三七皂苷腹腔注射，可提高小鼠痛阈，具有抗炎及免疫调节作用，纳洛酮可部分阻断其效应。小鼠烫伤后腹腔注射三七皂苷液，对巨噬细胞肌醇脂质信号系统IP3-CaM途径有调理作用。三七总皂苷腹腔注射能增加烫伤早期大鼠心肌GsαmRNA表达量、cAMP含量、腺苷酸环化酶活性。三七皂苷腹腔注射可使四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖降低。

3 结论

三七的有效成分种类很多，这些有效成分单用或联用的药理作用也很广泛。今后不但要探明三七有效成分的结构、分离方法、药理作用，还要进一步探明其作用机制，以便为临床治疗、预防保健及基础研究提供科学依据。

二、三七花化学成分和药理作用

1 引言

三七花是传统名贵中药五加科植物三七的干燥花蕾[F1ower buds of PanaxNotoginseng （Burk）F.H.Chen]，三七花性味甘凉，具有清热、平肝、降压之功效，具有较好的药用价值和保健作用。三七花作为药材已载入《云南中草药选》，“甘凉，清热平肝，降压。治疗高血压，头昏，目眩，耳鸣，急性咽喉炎”；同时《中华本草》记载三七花“性甘味凉。清热生津，平肝降压。主治津伤口渴，咽痛音哑，高血压病”。本文对三七花的主要化学成分和药理作用研究进行综述，为其深入研究与开发提供有益的参考。

2 化学成分

从三七花蕾中分离得到人参皂甙F2，Rd，Rc，Rb2和Rb1。三七花皂甙元的研究，通过提取精制得到了三七花粗皂甙沉淀物，再对粗皂甙进行水解和分离，分别得到三七花甙元A、B、C、D和E。三七花蕾含有U-谷甾醇、胡萝卜甙、三七皂甙Fe、绞股蓝皂甙Ⅸ、人参皂甙Rc和人参皂甙Rb3等多种成分。从三七花挥发油中经气相层析得到16种成分，包括萜烯类、烃类和酯。采用气质联用法从三七花挥发油中鉴定出包括烃类、单萜类、倍半萜类、醇、醛、酮、酸、酯等化合物37种，其中单萜3种，倍半萜类16种，鉴定成分为总挥发油含量的67%。上海中医药大学采用L ₉（3⁴）正交试验设计，以洗脱物转移率及纯度为考察指标，用AB-8树脂筛选出三七花总皂苷的最佳工艺条件为:上样浓度为0.2g生药/mL，以3倍树脂柱体积（BV）的70%乙醇溶液洗脱，吸附及洗脱流速均为2倍树脂柱体积每小时（BV·h^-1），洗脱液蒸干后即得纯化的三七花蕾总皂苷提取物，纯化后三七花蕾总皂苷含量为87.60%。云南文山不同产地、不同生长年限的三七花中总皂苷和单体皂苷的变化规律，发现产地和生长年限不同，三七花所含总皂苷和人参皂苷Rb1、Rb3的含量有显著性差异。

3 药理作用

3.1 抗炎作用

三七总皂苷的作用机制可能与三七总皂苷阻止炎细胞内游离钙水平升高并抑制灌流液中磷脂酶A2活性从而减少地诺前列酮得释放有关。而三七花总皂苷与三七总皂苷在化学成分上有相似之处，发现50～100mg·kg^-1三七花皂苷能明显抑制多种致炎剂所致大鼠足肿胀和小鼠耳廓炎症，有较强的抗炎活性；而利用三七花皂苷f配制的溶液进行抗炎实验，也发现其对急性炎症和慢性炎症均有抑制作用。以巴豆油等致炎剂建立的动物炎症模型进行三七花总皂苷的抗炎症效果评价，发现三七花总皂苷对炎症反应均有抑制作用，并能对抗由醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性亢进。广西医科大学附属肿瘤医院用三七花冰块进行预防化疗性口腔炎的实验观察，观察组的口腔炎发生率为8%，而对照组的发生率为24%，观察组显著低于对照组，也说明三七花具有消肿抗炎的功效。

3.2 镇痛作用

对三七花总皂苷进行镇痛实验，观察到三七花总皂苷能明显抑制由乙酸所致的小鼠扭体反应，延长因热刺激引起的小鼠痛反应潜伏期，表明三七花总皂苷具有镇痛效能；小鼠侧脑室注入（icv）微量三七花总皂苷后，仍能显著提高其痛闭值，提示其镇痛作用部位可能在中枢。研究表明三七总皂苷对化学性和热刺激性引起的疼痛均有明显的镇痛作用，且三七总皂苷是一种阿片肽样受体激动剂，不具成瘾的副作用。

3.3 镇静作用

三七地上部分对中枢神经有抑制作用，三七花总皂苷也能明显抑制小鼠的外观行为活动和自发活动，三七花总皂苷能显著加强氯丙嗪对小鼠自发活动的抑制作用，同时三七花总皂苷对戊四氮和士的宁惊厥无保护作用，表明三七花总皂苷对中枢神经系统具有抑制效能。同样利用三七花水煎剂进行镇静实验，实验结果表明三七花可用于治疗头昏、目眩和耳鸣。

3.4 活血化瘀作用

研究三七花总皂苷对大鼠血液流变学的影响，发现三七花中提取的总皂苷高、中、低剂量组均能明显降低血瘀大鼠的全血比粘度，降低其红细胞压积，延长凝血酶原的时间，降低纤维蛋白的数量，可以有效的预防血小板的聚集，防止血液粘度增加，从而起到预防血栓的作用。说明三七花具有活血化瘀的临床功效。

3.5 治疗心律失常作用

三七总皂苷对几种实验性心律失常模型均有明显对抗作用，三七二醇皂苷也有类似效应，提示其抗心律失常作用并不是通过竞争性阻断肾上腺素U-受体或兴奋M-胆碱受体所致，而是与心肌的直接抑制有关；三七二醇皂苷能降低离体大鼠右心房的自发频率，对大鼠和家兔心电图实验，证明三七二醇皂苷有负性频率作用，负性传导作用，其结果阐明了三七二醇苷的抗心律失常作用。三七花治疗心律失常实验也验证了其对心悸胸闷等病症有较好的疗效。

3.6 清咽润喉作用

利用三七花含片进行清咽润喉的人体试食试验，清咽功效的总有效率为80.0%，表明三七花含片对咽痛、咽痒、咽灼热、干咳、多言加重、咽部异物感、咽干涩和咳痰不爽等症状均有改善作用，对咽部充血、水肿和咽后壁滤泡增生等症状也有一定疗效。

3.7 护肝作用

进行三七花含片对酒精性肝损伤保护作用的实验研究，研究结果显示，三七花含片可显著降低酒精性肝损模型的大鼠肝组织中的丙二醛（MDA）及甘油三酯（TG）含量，提高肝组织还原型谷胱甘肽（GSH）含量，可减轻酒精性肝损伤大鼠的肝组织脂肪变性，表明三七花含片对酒精性肝损伤具有保护作用。

3.8 抑制细胞增殖作用

以去甲肾上腺素诱导的人主动脉血管平滑肌细胞增殖和钙超载为模型，发现三七花总皂苷各剂量组均能够改善去甲肾上腺素诱导的人主动脉血管平滑肌细胞增殖的细胞活力，这也提示了三七花总皂苷对血管平滑肌细胞增殖有抑制作用，这一作用可能与降低细胞内钙离子浓度有关。

4 结论

三七花的化学成分和药理活性还在不断的探索研究中，对其分析方法还有待研究。同时对于三七花的单体化合物制剂的研究，以及三七花代谢产物尤其是三七皂苷的代谢研究都应给予高度的重视。三七花制品的研究应本着无农药残留、无重金属残留的原则，这样才能将中药推向国际市场。

发明内容

本发明的目的是提供一种三七花与三七的药物组合物。

本发明的另一目的是提供该药物组合物的制备方法。

本发明还提供了该药物组合物的质量检测方法。

本发明还提供了该药物组合物的制药用途。

一种药物组合物是由以下重量份的原料制成的：三七花0.5～10重量份，三七0.5～10重量份。

该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：三七花0.5重量份，三七10重量份。

该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：三七花10重量份，三七0.5重量份。

该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：三七花5重量份，三七5重量份。

该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：三七花3重量份，三七7重量份。

所述的药物组合物中三七花为三年生三七花，三七为三年生三七主根或三年生三七剪口。

所述的药物组合物中三年生三七花为超微粉碎后或破壁后的三年生三七花，三年生三七主根为超微粉碎后或破壁后的三年生三七主根，三年生三七剪口为超微粉碎后或破壁后的三年生三七剪口。

所述的药物组合物中可以制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、滴丸、注射剂。

所述的药物组合物的制备方法如下：

（1）冷冻干燥：

① 三七冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-30℃～-40℃下冷冻，维持5h～10h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-30℃～-40℃下进行，时间为30h～120h；将冷冻干燥后的三七粉碎，通过100目筛网过筛，得三七冷冻干燥细粉；

② 三七花冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七花，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-30℃～-40℃下冷冻，维持5h～10h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-30℃～-40℃下进行，时间为30h～120h；将冷冻干燥后的三七花粉碎，通过100目筛网过筛，得三七花冷冻干燥细粉；

（2）超微粉碎破壁：

① 三七破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七破壁超微粉；

② 三七花破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七花冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七花破壁超微粉；

（3）药物制剂的制备：将步骤（2）制备的三七破壁超微粉和三七花破壁超微粉混合，采用中药学中的常规方法制剂成型。

所述的药物组合物的制备方法中，步骤（1）中三七与三七花冷冻干燥的时间为60h～80h。

所述的药物组合物的制备方法中，步骤（3）中将三七超微粉和三七花超微粉混合，进行全粉末压片，制成片剂。

所述的药物组合物的制备方法中，步骤（3）中将三七超微粉和三七花超微粉混合，进行全粉末填充肠溶胶囊，制成肠溶硬胶囊剂。

所述的药物组合物采用如下方法检测：采用高效液相色谱法测定：

（1）色谱条件：Kromasil C₁₈色谱柱；流动相为比例为70～90：10～30乙腈-水；检测波长200～210nm；流速0.5～2.0mL·min^-1；柱温20～40℃；进样量5～20μL。理论塔板数按人参皂苷Rg₁峰计算应不低于4000；

（2）供试品溶液制备：取本发明药物粉末，精密称定，精密加入甲醇，称定重量，放置过夜，置水浴上保持微沸，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（3）混合对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg₁，人参皂苷Rb₁，三七皂苷R₁对照品和人参皂苷Re适量，加甲醇制成混合溶液，即得；

（4）测定：分别取对照品溶液和供试品溶液各5～20μL进样，测定。

所述的药物组合物优选采用如下方法检测：采用高效液相色谱法测定：

（1）色谱条件：Kromasil C₁₈色谱柱；流动相为比例为82：18乙腈-水；检测波长203nm；流速1mL·min^-1；柱温30℃；进样量10μL。理论塔板数按人参皂苷Rg₁峰计算应不低于4000；

（2）供试品溶液制备：取本发明药物粉末0.5g，精密称定，精密加入甲醇50mL，称定重量，放置过夜，置80℃水浴上保持微沸2h放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（3）混合对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg₁，人参皂苷Rb₁，三七皂苷R₁对照品和人参皂苷Re适量，加甲醇制成每1mL含人参皂苷Rg₁0.4mg，人参皂苷Rb₁0.4mg，人参皂苷Re0.1mg，三七皂苷R₁0.1mg的混合溶液，即得；

（4）测定：分别取对照品溶液和供试品溶液各10μL进样，测定。

所述的药物组合物可用于制备提高免疫力、抗肿瘤、治疗高血压、治疗心血管病、治疗脑血管病、治疗糖尿病、治疗高血脂、治疗代谢综合征、治疗乳腺增生、治疗抑郁症、抗衰老、美容养颜的药物或保健品中的应用。

实验一：本发明药物增强免疫力实验研究

1 实验材料

1.1 受试物

本发明药物A：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备。

本发明药物B：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例2制备。

本发明药物C：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例11制备。

本发明药物D：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例12制备。

对比药物甲：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例3制备。

对比药物乙：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例4制备。

1.2 实验动物 饲养清洁级昆明种雄性小鼠240只，体质量18～21g，由南京中医药大学实验动物中心提供，在温度18～24℃、湿度40%～70%的环境中饲养。

1.3 主要试剂 绵羊红细胞（SRBC），HanK液（pH值7.2～7.4），RPMI1640培养液。小牛血清，青链霉素，刀豆蛋白A（ConA），MTT，补体（豚鼠血清），SA缓冲液，印度墨汁，都氏试剂，YAC-1细胞等。

1.4 主要仪器 洁净工作台，二氧化碳（CO₂）培养箱，离心机，TU-1901双光束紫外可见光分光光度计（北京普析），酶标仪，显微镜，游标卡尺等。

2 实验方法

2.1 动物分组及给药方法 参照文献（1.中华人民共和国卫生部.保健食品功能学评价程序和检验方法[S].2003.；2.徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].3版.北京：人民卫生出版社，2002：1420-1460）。实验分3大组，每大组80只小鼠。免疫1组测定迟发型变态反应（DTH）和抗体生成细胞数；免疫2组进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、NK细胞活性测定；免疫3组进行碳廓清实验。每大组80只小鼠随机分为8组，分别为阴性对照组、阳性对照组、本发明药物A组、本发明药物B组、本发明药物C组、本发明药物D组、对比药物甲组、对比药物乙组，每组10只。阴性对照组给予纯化水，阳性对照组给予配制成15.0mg·mL^-1灵芝全粉溶液，本发明药物A组给予配制成66.0mg·mL^-1本发明药物A溶液、本发明药物B组给予配制成66.0mg·mL^-1本发明药物B溶液、本发明药物C组给予配制成66.0mg·mL^-1本发明药物C溶液、本发明药物D组给予配制成66.0mg·mL^-1本发明药物D溶液、对比药物甲组给予配制成66.0mg·mL^-1对比药物甲溶液、对比药物乙组给予配制成66.0mg·mL^-1对比药物乙溶液。各组灌胃体积均为20mL·kg^-1，qd，连续灌胃15d。

2.2 细胞免疫功能测定 检测给药后各组小鼠迟发型变态反应（DTH）的情况，采用足跖增厚法。每鼠腹腔注射2%（V/V）SRBC悬液0.2mL。致敏后4d，测量左后足跖厚度。在测量部位皮下注射20%SRBC。每鼠20μL，24h后测量左后足跖肿胀厚度，连续测3次，取均值。以前后足跖厚度差值表示DTH程度。

ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验，采用MTT法检测小鼠淋巴细胞转化及增殖情况。无菌取脾，于无菌HanK液中制成细胞悬液，200目筛网过滤，HanK液洗3次。用RPmL1640培养液调整细胞浓度为3×106个·mL^-1。而后分两孔加入24孔培养板，每孔1.0mL，一孔加ConA液50μL，一孔作对照，置5%CO₂、37℃培养72h。培养结束前4h，每孔吸去上清液0.7mL，加入不含小牛血清的RPMI1640培养液和MTT（5mg·mL^-1，每孔50μL）。培养结束后，每孔加入酸性异丙醇1mL，吹打混匀，波长570nm处用酶标仪测定吸光度值（A值）。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的A值减不加ConA孔的A值表示。

2.3 体液免疫功能测定 以抗体生成细胞检测测定药物对小鼠体液免疫功能的影响，采用Jeme改良玻片法。每鼠腹腔注射2%SRBC悬液0.2mL，免疫后4d，处死小鼠，取脾，用HanK液制成细胞悬液，筛孔内径（75.0±4.1）μm（200目）筛网过滤，洗涤、离心2次，最后将细胞悬浮在HanK液5mL中。将表层培养基加热溶解后与等量pH值7.4、2倍浓度的HanK液混合，分装小试管，每管0.5mL。再向管内加入用HanK液配制的10%SRBC悬液50μL、脾细胞悬液20μL，迅速混匀后倾倒于已刷薄层琼脂糖的玻片上，凝固后，放入二氧化碳培养箱中温育1.5h，加HanK液稀释的补体（1：10），继续温育1.5h后计数溶血空斑数。

2.4 单核-巨噬细胞吞噬功能测定 采用小鼠碳廓清实验检测小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能。小鼠尾静脉注射10mL·kg^-1以0.9%氯化钠溶液稀释4倍的印度墨汁，立即计时，注入墨汁后第2，10分钟，从内眦静脉丛取血20μL，加到0.1%碳酸钠溶液2mL中，摇匀，600nm波长处测A值。处死小鼠，取肝、脾称重，按下式计算吞噬指数：吞噬指数（α）=Ｋ^1/3×体重/（肝重+脾重）。式中K=（1gA₁-1gA₂）/（t₂-t₁）。A₁为2min时吸光度，A₂为10min时吸光度，t₁t₂分别为2，10min。

2.5 NK细胞活性测定 采用乳酸脱氢酶（LDH）测定法检测NK细胞活性。实验前24h将YAC-1细胞进行传代培养，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×10⁵个·mL^-1。动物给完药后无菌取脾，置于盛有适量无菌HanK液的小平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎，制成单细胞悬液。经筛孔内径（75.0±4.1）μm（200目）筛网过滤，加入0.5mL灭菌水20s裂解红细胞，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×10⁷个·mL^-1。取YAC-1细胞和脾细胞各100μL，加入96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和2.5%Triton各100μL；上述各项均设3个复孔，于37℃、5%CO₂培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500ｒ·min^-1离心5min，每孔吸取上清液100μL置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μL，反应3min，每孔加入1mol·Ｌ^-1盐酸溶液30μL，在酶标仪490nm处测定A值。NK细胞活性（%）=（反应A值-自然释放孔A值）/（最大释放孔A值-自然释放孔A值）×100%。

2.6 统计学方法 用Excel、SPSS10.0软件进行数据转化和统计分析。方差齐性检验合格后，采用dunnet单因素多重比较统计分析。

3 结果

3.1 本发明药物对小鼠细胞免疫功能实验 在小鼠迟发型变态反应实验中，本发明药物A组至D组及阳性对照组足跖增厚值与阴性对照组比较，差异有极显著性。表明本发明药物液能增加小鼠迟发型变态反应。对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验，本发明药物A组至D组及阳性对照组的A值差值高于阴性对照组，差异有显著性。表明本发明药物能提高小鼠脾淋巴细胞转化的能力。结果见表1-1。

3.2 对小鼠体液免疫功能的影响 对小鼠抗体生成细胞的影响见表1-1。本发明药物A组至D组及阳性对照组小鼠溶血空斑数均高于阴性对照组；对比药物甲组、对比药物乙组对小鼠体液免疫功能的影响不明显。表明本发明药物能够提高小鼠的抗体生成细胞数，提示本发明药物具有增强小鼠体液免疫功能的作用。

表1-1各组小鼠迟发型变态反应和脾淋巴细胞转化和

抗体生成细胞数结果（±s）

注：与阴性对照组比较，*P<0.01，**P<0.05

3.3 本发明药物对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响 经方差分析和统计学两两比较，发现本发明药物A组至D组及阳性对照组小鼠的碳廓清吞噬指数（α）均高于阴性对照组，差异有极显著性（P<0.01），表明本发明药物具有增强小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的作用，对比药物甲组、对比药物乙组的作用不明显，见表1-2。

3.4 本发明药物对小鼠NK细胞活性的影响 经方差分析和统计学两两比较，发现本发明药物A组至D组及阳性对照组小鼠的NK细胞活性均高于阴性对照组，差异有显著性。表明本发明药物具有增强小鼠NK细胞活性的作用。结果见表1-2。

表1-2 各组小鼠单核-巨噬细胞碳廓清和NK细胞活性的检测结果（±s）

注：与阴性对照组比较，*P<0.01，**P<0.05

4 讨论与结论

实验研究结果表明，本发明药物能增加小鼠迟发型变态反应，可增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化增殖能力，有增强细胞免疫功能作用；提高小鼠的抗体生成细胞数，有增强体液免疫功能作用；有增强小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能及增强小鼠NK细胞活性的作用。表明本发明药物具有增强小鼠细胞和体液免疫功能及非特异性的作用。

而且，实验研究结果还表明，单独使用三七花或单独使用三七剪口制成的对比药物甲和对比药物乙的药物作用效果则不明显，由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。

实验二：本发明药物抗肿瘤的实验研究

1 材料

本发明药物A：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备。

本发明药物B：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例2制备。

本发明药物C：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例11制备。

本发明药物D：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例12制备。

对比药物甲：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例3制备。

对比药物乙：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例4制备。

注射用环磷酰胺，江苏盛迪医药有限公司，国药准字H20023036；

健康昆明种小鼠，雌雄兼用，体质量18～22g；小鼠肝癌H₂₂细胞株购于南京中医药大学实验动物中心，肉瘤S₁₈₀细胞株，购于由南京中医药大学实验动物中心。

2 方法

2.1 制备瘤细胞悬液 在无菌操作下取瘤块，称重，用玻璃组织匀浆器研磨，磨匀后放入无菌容器内，加生理盐水稀释成1：3的细胞悬液，容器置冰块上，充分混匀。

2.2 本发明药物对H₂₂移植性实体瘤的抑制作用 取小鼠80只，每只小鼠均于右前腋下接种H₂₂瘤细胞液0.2ml。次日称体质量，并随机分为8组，即生理盐水组、环磷酰胺组、本发明药物A组、本发明药物B组、本发明药物C组、本发明药物D组、对比药物甲组、对比药物乙组，每组10只小鼠。接种24h后灌胃给药，灌胃体积为20ml/kg体质量，1次/d，连续给药10d，环磷酰胺组腹腔注射给药，隔日1次。停药后次日处死小鼠称重，并小心剥离瘤组织、胸腺及脾脏，分别称重，并计算抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数。

2.3 本发明药物对S₁₈₀腹水瘤小鼠存活期的影响 取小鼠70只，每只小鼠均腹腔接种S₁₈₀瘤细胞液0.2ml。随机分为7组，即生理盐水组、本发明药物A组、本发明药物B组、本发明药物C组、本发明药物D组、对比药物甲组、对比药物乙组，每组10只小鼠。接种24h后灌胃给药，灌胃体积为20ml/kg体质量，1次/d，连续给药10d。以接种肿瘤之日算起，记录死亡时间，计算生命延长率。

2.4 统计学处理 各组数据以均数±标准差（±s）表示，采用F检验进行统计学分析。

3 结果

3.1 对H₂₂移植性实体瘤的抑制作用 本发明药物A组至D组对H₂₂移植性实体瘤的抑制与生理盐水组相比，本发明药物A组至D组有显著抑制H₂₂移植性实体瘤生长的作用（P<0.01），并且本发明药物A组至D组对小鼠体质量的增加没有明显的抑制作用。环磷酰胺虽然抑瘤效果最好，抑瘤率达到68.71%，但是其对小鼠的增长有明显的抑制作用。对比药物甲组及对比药物乙组的作用效果则不明显。见表2-1，表2-2。

表2-1 本发明药物对H₂₂移植性实体瘤的抑制作用（±s，10例）

注：与生理盐水组比较，**P<0.01

3.2 对荷瘤小鼠免疫器官的影响 见表2-2。

表2-2 本发明药物对荷瘤（H₂₂）鼠免疫器官的影响（±s，10例）

注：与生理盐水组比较，*P<0.05

3.3 对S₁₈₀腹水瘤小鼠存活期的影响 见表2-3。

表2-3 本发明药物对S₁₈₀腹水瘤小鼠存活期的影响（±s，10例）

注：与生理盐水组比较，**P<0.01

4 讨论与结论

在肿瘤的临床治疗中，主要应用的仍然是传统的细胞毒类化疗药物。该类药物在发挥疗效的同时，对机体的毒副作用明显，尤其是对免疫力有较大的破坏。实验结果初步说明，增强免疫功能是本发明药物抗肿瘤的可能途径之一。本发明药物除了增强机体免疫功能之外，尚有抗氧化、提高机体应激能力等多种活性。

而且，实验研究结果还表明，单独使用三七花或单独使用三七剪口制成的对比药物甲和对比药物乙的药物作用效果则不明显，由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。

实验三：本发明药物对自发性高血压大鼠血压的影响

1实验材料

1.1实验动物

成年雄性自发性高血压大鼠（SHR）40 只，体重 225±30g。Wistar 大鼠 90 只，雌雄兼用，鼠龄12周，体重245g～310g。

1.2实验药品

本发明药物A：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备。

本发明药物B：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例2制备。

本发明药物C：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例11制备。

本发明药物D：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例12制备。

对比药物甲：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例3制备。

对比药物乙：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例4制备。

阳性中药：山菊降压片，河北恒利集团制药股份有限公司生产，将中药配成浓度为0.0288g/ml。按1ml/100g 的体积灌胃给药。

1.3 实验仪器

清醒大鼠血压心率测定仪，HX-III 型

2 实验方法

2.1 分组

将实验动物分成9组，每组10只，分组情况如下：

（1）空白对照组，Wistar大鼠；（2）模型对照组，SHR模型对照；（3）阳性对照组，灌胃山菊降压片；（4）本发明药物A组，灌胃本发明药物A；（5）本发明药物B组，灌胃本发明药物B；（6）本发明药物C组，灌胃本发明药物C；（7）本发明药物D组，灌胃本发明药物D；（8）对比药物甲组，灌胃对比药物甲；（9）对比药物乙组，灌胃对比药物乙。

2.2 给药

正式实验前每天测压训练1次，连续7天，待大鼠适应环境、血压稳定后将 SHR随机分为9组，每组10只，即空白对照组、SHR模型对照组、山菊降压片阳性对照组、本发明药物A组、本发明药物B组、本发明药物C组、本发明药物D组、对比药物甲组、对比药物乙组，分别灌胃给药，山菊降压片阳性对照组、本发明药物A、本发明药物B、本发明药物C、本发明药物D、对比药物甲、对比药物乙，空白组、模型对照组给予相同体积的蒸馏水。给药时间为每天上午。连续给药 28 天，于第 29 天测定给药后的血压。

2.3 实验步骤

测压前将SHR 放入37±1℃电热恒温箱内，加温使鼠尾动脉充分扩张，用清醒大鼠血压心率测定仪间接测大鼠尾动脉的收缩压，取连续3次血压值不超过 5mmHg 差异的平均值作为应测血压值，采用自身前后及组间F检验进行统计处理，比较给药前后及组间血压均数差异的显著性。

3 实验结果

见表3-1和表3-2。

表 3-1 疗程给药后测SBP（mmHg）

注：与模型对照组比△P＜0.05，与阳性对照组比*P＜0.05

表3-2 疗程给药后测 DBP（mmHg）

注：与模型对照组比较，△P＜0.05；与阳性对照组比较，*P＜0.05；与本发明药物比较，# P＜0.05。

由表3-1、3-2可知，模型组大鼠在实验期间血压与治疗前相比无明显差异（P＞0.05）。连续灌服本发明药物A组至D组血压缓慢下降，28天后SBP、DBP的下降值与模型组相比有明显差异（△P＜0.05﹚，与阳性对照组相比也有明显差异（*P＜0.05﹚；给予山菊降压片血压也明显下降，28天后SBP、DBP下降值明显优于模型组（△P＜0.05）。而对比药物甲和对比药物乙的作用效果则不明显。

以上结果表明，本发明药物具有明显的降压效果，其降压作用较持久，且明显优于对比药物甲组、对比药物乙组，也明显优于阳性对照药山菊降压片。由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。

实验四：本发明药物降血脂作用的实验研究

1 实验材料

1.1 药物

本发明药物A：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备。

本发明药物B：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例2制备。

本发明药物C：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例11制备。

本发明药物D：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例12制备。

对比药物甲：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例3制备。

对比药物乙：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例4制备。

血脂康胶囊：北大维信生物科技有限公司，国药准字Z10950029。

1.2 试剂 甘油三酯测定试剂盒，总胆固醇测定试剂盒，低密度脂蛋白测定试剂盒，高密度脂蛋白测定试剂盒。

1.3 动物 昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22g。

1.4 仪器 B-260型恒温水浴锅，TDL80-2B型低速离心机，DG5033A型酶联免疫检测仪。

2 实验方法

2.1蛋黄乳溶液的制备 吸取蛋黄液75mL，置100mL的量筒中，以生理盐水稀释至100mL，配成75%的蛋黄乳均匀溶液。

2.2分组与给药 取70只昆明种小鼠，雌雄各半，体重在18～22g范围内，随机分为9组，每组10只，分别为：正常对照组、高脂模型组、阳性对照组、本发明药物A组、本发明药物B组、本发明药物C组、本发明药物D组、对比药物甲组、对比药物乙组，灌胃给药。正常对照组和高脂模型组每日给予浓度为0.5% CMC-Na溶液，给予体积为0.2mL/10g；阳性对照组、本发明药物A组、本发明药物B组、本发明药物C组、本发明药物D组、对比药物甲组、对比药物乙组，分别给予相应药物，剂量均为1g/kg。给药14天，最后一次给药后两小时，除正常对照组外，其余各组均腹腔注射75%蛋黄乳溶液0.02mL/g造模，造模20小时后，从眼球取血，将血液样品于3000rpm·min^-1，离心10min，分离得到血清，按照总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白试剂盒说明书操作，测定总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）和高密度脂蛋白（HDL-C）的浓度。

2.4 统计学处理 所得数据用SPSS10.0统计软件进行统计分析，分析结果以±s表示，以P<0.05有统计学意义。

3 实验结果

给药14天后，分别测定各组实验小鼠血清中的总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）和高密度脂蛋白（HDL-C）的浓度，实验与分析结果见表4-1。

表4-1 本发明药物给药组对小鼠相应血脂指标的影响（±s）

注：与正常空白对照组比较，##P<0.01；与高脂模型组比较，**P<0.01，*P<0.05

实验结果显示，高脂模型组的TC、TG、LDL-C的水平均比正常空白对照组显著升高（P<0.01），HDL-C的水平比正常对照组有所降低（P<0.01），表明小鼠高脂血症模型造模成功；与模型组相比，本发明药物A组至D组均可显著降低小鼠的TC、TG、LDL-C水平（P<0.01），可升高HDL-C的水平（P<0.05），且明显优于对比药物甲组和对比药物乙组。由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。

4 结论

本实验研究表明本发明药物对TC、TG、LDL-C的降低有明显作用，对HDL-C有明显的升高作用，本发明药物具有降低实验动物血脂的确切作用，其具有开发为降血脂药物的前景。

实验五：本发明药物治疗冠心病的实验研究

1.1材料

SPF级雄性SD大鼠90只（180±10）g，购于南京中医药大学实验动物中心；

本发明药物A：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备。

本发明药物B：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例2制备。

本发明药物C：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例11制备。

本发明药物D：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例12制备。

对比药物甲：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例3制备。

对比药物乙：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例4制备。

辛伐他汀片(商品名：舒降之)为杭州默沙东制药有限公司产品。

高脂饲料委托中国科学院上海斯莱克实验动物有限责任公司加工。单核细胞趋化蛋白-1多克隆抗体，P-选择素多克隆抗体，基质金属蛋白酶-9多克隆抗体，基质金属蛋白酶抑制因子-1购自上海天鸿生物科技有限公司。

1.2方法

将90只雄性SD大鼠随机分为9组，每组10只，分别为空白组，模型组，本发明药物A组、本发明药物B组、本发明药物C组、本发明药物D组、对比药物甲组、对比药物乙组，舒降之组（对照组），组间暴露无差异。大鼠动脉粥样硬化模型制备方法为150g维生素D₃（VitD₃，每克含VitD310万IU）溶解于375mL蒸馏水中，配制成0.4g/mL，即4万IU/mL的溶液。高脂饲料配方为：82.3%大鼠标准饲料、2%胆固醇、0.5%胆酸钠、10%猪油、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白砂糖。除空白组外，其他各组按70万IU/kg的总剂量灌胃给予VitD3，分3天给完，之后每天喂高脂饲料15g，喂养57天。空白组和模型组均灌服双蒸水5mL/（kg·d）；治疗组1灌服本发明药物A；治疗组2灌服本发明药物B；治疗组3灌服本发明药物C；治疗组4灌服本发明药物D；治疗组5灌服对比药物甲；治疗组6灌服对比药物乙；舒降之组灌服辛伐他汀1.7mg/（kg·d），以上各药均用双蒸水配制成溶液按5mL/（kg·d）剂量灌服。VitD3灌胃3天结束后，第4天开始治疗，疗程为57天。用药57天后，以100mg/kg氯胺酮腹腔注射麻醉大鼠，打开腹腔，腹主动脉取血后即刻分离胸主动脉，每组动物随机取6只。胸主动脉甲醛固定，石蜡包埋切片，常规行HE染色，光学显微镜下观察主动脉的形态（包括斑块结构、内膜突起变形、泡沫细胞、钙化），以-、+、++、+++，分别表示无病变、轻度、中度、重度。利用IMS细胞图象分析系统检测内膜厚度及泡沫细胞面积百分比。免疫组化检测胸主动脉中MMP-9蛋白、MMP-9/TMP-1蛋白比值的表达。采用石蜡包埋常规切片，SP法，MMP-9mAb以1:50稀释；TMP-1mAb以1:50稀释；稀释DAB显色，苏木素复染。显微镜下观察，阴性呈紫蓝色，阳性呈棕黄色。在高倍镜下（×400倍）观察每组切片主动脉，随机选取3个视野，测其阳性染色在整个视野（全视场定为351000）中所占面积百分比，取其平均值表示每张切片的阳性面积比，统计每组免疫组化阳性面积百分比。

1.3结果

（1）主动脉形态学变化：各组动物胸主动脉经HE染色在显微镜观察发现：模型组可见内膜细胞增生及内皮下出现淡染的空泡细胞等AS早期病变，有些部位可见中膜平滑肌细胞增生明显、细胞排列紊乱或隆起呈斑块状结构，有些部位中膜有明显的钙化形成，钙化区周围出现泡沫样细胞。各治疗组、对照组与模型组相比有不同程度改善，见表5-1。

表5-1 不同组别大鼠胸主动脉的病理分析

（2）主动脉内膜厚度：用图像分析仪检测的胸主动脉壁内膜厚度，模型组、对照组、治疗组内膜厚度都有不同程度增厚，与空白组相比均有显著性差异（P<0.01）。各治疗组、对照组内膜厚度较模型组相比，均有不同程度变薄，差异也有统计学意义。见表5-2。

表5-2 不同组别大鼠胸主动脉内膜厚度（40×10）

注：组间比较：各组与空白组比较，**P<0.01；模型组与治疗组、对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01；对照组与治疗组比较，#P>0.05。

（3）主动脉泡沫细胞面积百分比：用图像分析仪检测的胸主动脉泡沫细胞面积百分比，各组与空白组相比均有明显增多，差异显著（P<0.01）。治疗组、对照组与模型组相比，泡沫细胞面积百分比均有不同程度减少，有统计学意义（P<0.05）。各治疗组与对照组相比，治疗组1与治疗组4泡沫细胞面积百分比无统计学意义（P>0.05）。见表5-3。

表5-3不同组别大鼠胸主动脉内膜泡沫细胞面积和泡沫细胞百分比（40×10）

注：组间比较：各组与空白组比较，**P<0.01；模型组与治疗组、对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01；对照组与治疗组比较，☆P<0.01，#P>0.05。

（4）主动脉MMP-9蛋白表达：空白组与模型组、治疗组、对照组相比MMP-9阳性面积百分比显著下降（P<0.01）；模型组与治疗组、对照组相比，MMP-9的阳性面积百分比明显升高，均有统计学意义（P<0.01）。对照组与治疗组1至治疗组4相比，MMP-9的表达无统计学意义（P>0.05）。见表5-4。

表5-4 不同组别大鼠胸主动脉内膜MMP-9表达

注：组间比较：各组与空白组比较，**P<0.01；模型组与治疗组、对照组比较，△△P<0.01；对照组与治疗组比较，#P>0.05。

3结论

实验研究表明：本发明药物具有治疗动脉粥样硬化模型的大鼠存在血管内膜细胞增生及内皮下出现感染的空泡细胞等AS早期病变，出现以MMP-9升高为主的MMP-9/TMP-1失衡状态。

而且，实验研究结果还表明，单独使用三七花或单独使用三七剪口制成的对比药物甲和对比药物乙的药物作用效果则不明显，由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。

实验六：本发明药物降血糖实验研究

1 材料与方法

1.1实验动物

NIH种小白鼠，体质量22g±2g，由南京中医药大学试验动物中心提供。

1.2药品与试剂

四氧嘧啶（ALX）（美国Sigma化学公司产品），格列本脲片（天津太平洋生制药有限公司，国药准字H12020790），血糖试纸和测试仪由美国强生公司生产，全自动微粒子化学发光免疫分析系统。

1.3受试样品的制备

本发明药物A：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备。

本发明药物B：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例2制备。

本发明药物C：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例11制备。

本发明药物D：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例12制备。

对比药物甲：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例3制备。

对比药物乙：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例4制备。

1.4实验动物与分组

1.4.1糖尿病小鼠造模

参考陈建国等（陈建国，梅松，付颖，等．四氧嘧啶致小鼠高血糖模型的研[J].卫生毒理学杂志，2004，18 (2) ：98～100）四氧嘧啶致小鼠高血糖模型的方法，并作适当改进。取小鼠100只（雌雄各半）禁食（不禁水）12h后，分别腹腔注射2%的新鲜ALX溶液（220mg/kg）2次（第1次注射量为总量的70%，第2次为总量的30%，两次间隔12h）。3天后，禁食12h后断尾取血，用血糖试纸及测试仪测定小鼠血糖，并测定体重。FPG＞11.1mmol/L，定为糖尿病模型小鼠。

1.4.2实验分组

将模型小鼠80只随机分为8组，每组10只，实验期各组分别每天灌胃。

（1）模型组：蒸馏水0.3～0.4ml/只；（2）格列本脲组：灌胃格列本脲10mg/kg；（3）本发明药物A组：灌胃本发明药物A 400mg/kg；（4）本发明药物B组：灌胃本发明药物B 400mg/kg；（5）本发明药物C组：灌胃本发明药物C 400mg/kg；（6）本发明药物D组：灌胃本发明药物D400mg/kg；（7）对比药物甲组：灌胃对比药物甲 400mg/kg；（8）对比药物乙组：灌胃对比药物乙 400mg/kg。实验期14天。

1.4.3检测指标

在实验期观察小鼠的采食、饮水、体质量、精神状态、毛色等状况；分别在给药后的2h、3d、14d断尾取血测定小鼠禁食12h后的血糖值，实验结束时测定小鼠禁食12h后的血清胰岛素。

1.5统计学处理

用SPSS10.0统计软件进行数据分析，组间显著性检验采用独立样本t检验，所有数据以±s表示。

2结果

2.1本发明药物的降血糖作用

用四氧嘧啶造模后的小鼠出现了多饮、多食、多尿、体重减轻，并有反应迟钝，被毛杂乱无光等症状，在用药后本发明药物组小鼠以上症状均有不同程度的改善，反应较灵活，毛平伏且有光泽。由表6-l可见：对四氧嘧啶糖尿病小鼠在灌胃本发明药物后2h和14d后与模型组比较，能显著和极显著地降低小鼠的血糖值（P＜0.05和P＜0.01））。

表6-1本发明药物对四氧嘧啶糖尿病小鼠空腹血糖的影响（±s）

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

2. 2 本发明药物对糖尿病小鼠血清胰岛素水平的影响

连续灌服本发明药物14d 后，与模型组比较小鼠血清胰岛素水平有显著升高，见表6-2。

表6-2 本发明药物对四氧嘧啶糖尿病小鼠血清胰岛素的影响（±s）

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

3讨论与结论

本实验用本发明药物对四氧嘧啶糖尿病小鼠以400mg/kg·d^-1本发明药物灌胃后2h、3d和14d，通过测定小鼠空腹血糖浓度发现，与模型组比较在2h、3d、14d时本发明药物降血糖作用明显；血清胰岛素在第14d时都显著高于模型组。说明本发明药物具有减轻四氧嘧啶对胰岛β细胞的损伤程度或对这种损伤具有一定程度的保护和修复作用，这一作用随用药时间的延长其效果更加显著。

而且，实验研究结果还表明，单独使用三七花或单独使用三七剪口制成的对比药物甲和对比药物乙的药物作用效果则不明显，由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。

实验七：本发明药物治疗代谢综合征的实验研究

一、材料和方法

1.实验材料

1.1仪器试剂

血糖试纸及快速血糖仪购自美国雅培公司，血脂四项试剂购自北京世界诊中拓生物技术有限公司，微量注射泵购自德国贝朗公司，胰岛素使用诺和灵R，掌上型FEJ-1000B电子秤，购自福州福日电子有限公司。

1.2实验动物

清洁级雄性6周龄SD大鼠90只，饲料、实验场地均由南京中医药大学实验动物中心提供，每笼4-5只，自由饮用食水，12h昼夜周期喂养。

1.3实验药物

本发明药物A：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备。

本发明药物B：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例2制备。

本发明药物C：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例11制备。

本发明药物D：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例12制备。

对比药物甲：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例3制备。

对比药物乙：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例4制备。

文迪雅的成分是马来酸罗格列酮片（RM），4mg/片，由美国葛兰素史克（天津）有限公司生产，国药准字H20020475。

2.模型的建立

正常对照组大鼠以普通标准饲料（碳水化合物60%、脂肪11%、蛋白质29%）喂养；模型组大鼠以高脂饲料（78.8%基础饲料、1%胆固醇、10%蛋黄粉、10%猪油、0.2%胆盐）喂养8周后成模，体质量和内脏脂肪质量均显著升高。

3.分组及给药

随机将大鼠分为9组，正常对照组、代谢综合征组、文迪雅组、本发明药物A组、本发明药物B组、本发明药物C组、本发明药物D组、对比药物甲组、对比药物乙组，每组各10只大鼠；正常对照组喂饲普通标准饲料，其余大鼠喂饲高脂饲料。投喂药物：成模后将模型组大鼠随机分为代谢综合征组、文迪雅组、本发明药物A组、本发明药物B组、本发明药物C组、本发明药物D组、对比药物甲组、对比药物乙组；自第9周开始文迪雅组按2mg·kg^-1·d^-1，喂饲文迪雅，本发明药物A组按60mg·kg^-1·d^-1喂饲本发明药物A，本发明药物B组按60mg·kg^-1·d^-1喂饲本发明药物B，本发明药物C组按60mg·kg^-1·d^-1喂饲本发明药物C，本发明药物D组按60mg·kg^-1·d^-1喂饲本发明药物D，对比药物甲组按60mg·kg^-1·d^-1喂饲对比药物甲，对比药物乙组按60mg·kg^-1·d^-1喂饲对比药物乙，药物均以生理盐水溶解；正常对照组、代谢综合征组投喂相同比例体积的生理盐水，持续喂养4周后，行钳夹试验。

4.实验指标测定

清醒状态下取血，用EDAT抗凝，TG、TC、HDL-C，LDL-C用生化法测定。空腹胰岛素（IFNS）测定用放免法。所有大鼠在试验过程中，每周测量1次体质量。用RBP-l型大鼠血压计，采用鼠尾袖带加压阻断法测量血压，每两周测量1次。

5.内脏脂肪质量称取方法

将大鼠处死后，剖开腹腔，取右侧附肇旁脂肪湿质量代替内脏脂肪质量。

6.测定胰岛素敏感性

用正常血糖高胰岛素钳夹（GC）法评价胰岛素的敏感性。各组大鼠用10%的水合氯醛（按每300g大鼠体质量1ml）经腹腔麻醉，向右颈动脉和左颈静脉插人导管（PE-50）第2天，在清醒状态下测定空腹血糖（FBS）后，分别以25mU/kg的初始浓度和4mU·kg^-1·min^-1维持浓度，持续150min静脉滴注胰岛素；血糖值每7min测定1次，同时以12.5%葡萄糖液持续静脉滴注；为维持空腹血糖水平，适当调整；其输注速度。待血糖值稳定后，用GC法（最后35min内葡萄糖输注速度的平均值，M值）评价胰岛素敏感性。

7.数据分析

所有数据以±s表示；各组基本统计量及方差齐性检验和两组间比较均用SPSS统计学软件分析。

二、结果

1.各组体质量及内脏脂肪的比较见表7-1、表7-2。

表7-l各组大鼠体质量的变化（±s，g）

注：与正常对照组比较， *P<0.05。

表7-2各组大鼠12周时体质量及内脏脂肪的比较（n=10，±s）

注：与正常对照组比较， *P<0.05。

代谢综合征组较正常对照组体质量和内脏脂肪增加明显（P<0.05）；表7-2可以看出文迪雅和本发明药物组较代谢综合征组，体质量和内脏脂肪均有下降趋势，两组之间无差异。

2.各组FBS、FINS、M值的比较

见表7-3。代谢综合征组较正常对照组M值明显降低（P<0.01），FINS明显升高（P<0.01）；本发明药物组较代谢综合征组M值明显升高（P<0.05），FINS明显降低（P<0.05）。

表7-3 各组FBS、FINS及M值的比较（±s）

注：与正常对照组比较，*P <0.05，**P <0.01；与代谢综合征组比较，△P <0.05。

3.各组血脂水平的比较

见表7-4。代谢综合征组较正常对照组TC、TG、LDL-C明显增高，HDL-C无差异；本发明药物组较代谢综合征组TC、TG、LDL-C明显降低，对HDL-C改善不明显。

表7-4 各组TC、TG、LDL-C、HDL-C之间的比较（±s，mmol/L）

注：与正常对照组比较，*P <0.05，**P <0.01；与代谢综合征组比较，△P <0.05。

三、结论与讨论

实验数据显示，造模8周后，模型组较正常对照组胰岛素敏感性指数（M值）明显降低，体质量和内脏脂肪明显增加，血脂水平明显升高，同时血清胰岛素也有升高趋势；提示以中心性肥胖和胰岛素抵抗为中心，合并血压增高、血脂紊乱、高胰岛素血症的代谢综合征模型成功建立。临床研究及流行病调查发现肥胖、超重者常伴有胰岛素抵抗和脂质代谢异常，脂肪组织在胰岛素抵抗的发病机制中起重要作用。

实验结果显示，本发明药物可以明显改善代谢综合征组的胰岛素敏感性有降低内脏脂肪和血清胰岛素水平的趋势，明显地改善了血清TC、TG、LDL-C水平。本发明药物能够有效治疗综合治疗代谢综合征。

而且，实验研究结果还表明，单独使用三七花或单独使用三七剪口制成的对比药物甲和对比药物乙的药物作用效果则不明显，由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。

实验八：本发明药物治疗乳腺增生的实验研究

1 材料与方法

1.1 实验动物及饲料 成年未孕的SD健康♀大鼠90只，体重180～220g；一级营养饲料80kg，均由南京中医药大学实验动物中心提供。

1.2 主要仪器及药品

ACS：I80SE型化学发光免疫分析仪，美国CHIRON公司产品；XX3型血粘度电子自动计时仪，北京中勤世帝科学仪器有限公司提供；

本发明药物A：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备。

本发明药物B：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例2制备。

本发明药物C：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例11制备。

本发明药物D：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例12制备。

对比药物甲：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例3制备。

对比药物乙：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例4制备。

苯甲酸雌二醇（Estradiol，E₂，以下简称E₂）注射液，上海第九药厂生产，规格：2mg·mL^-1。黄体酮（Pro-gesterone，Pt，以下简称Pt）注射液，上海第九药厂生产，规格：20mg·mL^-1。雌二醇及黄体酮测定试剂盒，为美国CHIRON公司配套产品；雌二醇（E₂）、孕酮（Pt）放射免疫分析测定盒，由天津德普生物技术和医学产品有限公司提供Dako公司产品。

1.3 动物分组及处理 将实验动物购回后正常饲养2周，按体重随机分成8组（模型组20只，其余每组10只）：空白对照组（以下简称对照组），模型组，本发明药物A组、本发明药物B组、本发明药物C组、本发明药物D组、对比药物甲组、对比药物乙组。模型组每只肌注E₂（0.5mg·kg）·d^-1，连续40d，继而改用肌注Pt（4mg·kg）·d^-1，连续10d，观察乳头出现红、肿和增大，并有部分乳晕出现时，处死5只，通过病理切片确认乳腺增生模型复制成功。对照组每日肌注等容量生理盐水，至实验结束。本发明药物A组、本发明药物B组、本发明药物C组、本发明药物D组、对比药物甲组、对比药物乙组于造模结束后按400mg·kg^-1分别灌服本发明药物A、本发明药物B、本发明药物C、本发明药物D、对比药物甲、对比药物乙，剂量为400mg·kg^-1，至实验结束。整个实验周期为80d。

1.4 指标检测与观察 最后1次给药24h后，动物禁食12h，肉眼观察各大鼠乳头形态变化。乙醚麻醉，主动脉放血处死，按要求留取血液及双侧乳房，用XX3型血粘度电子自动计时仪检测血液粘度，用压积管法检测红细胞压积；提取血浆，应用美国CH-IRON公司ACS：I80SE型化学发光免疫分析仪及其配套试剂检测检测血浆E₂和Pt；每只大鼠选择最大乳腺组织2个，经乳头向基底部最大切面取材，常规石蜡切片，HE染色，低倍镜计数每个小叶腺泡数，求其平均值，高倍镜观察导管上皮增生数，小叶中腺泡数；用免疫组化ABC法观察ER和PR的变化，ER，PR，工作浓度1：200，并设阳性和阴性对照。

1.5 统计学处理 数据以均数±标准差表示，各组显著性检验采用Dunnett'sT检验。

2 结果

2.1 病理形态学观察 对照组大鼠乳腺导管上皮细胞排列规则，管腔无扩张，小叶较少，小叶中腺泡数3～4个，核仁不明显。肌注E₂、Pt造模后大鼠乳头出现红、肿和增大，并有乳晕出现，解剖可见后3对乳房乳腺组织连接成片，分界不清。病理切片可见各组大鼠乳腺导管上皮细胞增生明显，局部呈乳头状或合体状并层数增多，核仁明显，管腔明显扩张，内有脱落上皮细胞及分泌物，小叶明显增多，小叶中腺泡数增生明显，间质出血、水肿和纤维组织增生，证明乳腺增生造模成功，增生类型以囊性增生为主。与模型组比较，本发明药物混悬液组大体观察的乳头红肿、乳腺增大和显微观察小叶、腺泡和导管的增生，均明显轻于造模组。各组乳腺导管上皮增生及小叶中腺泡数比较。（见表8-1）

表8-1 各组乳腺导管上皮增生及小叶中腺泡数比较（n=10）

注：与对照组相比##P<0.01，#P<0.05；与模型组相比**P<0.01，*P<0.05。

2.2 对大鼠血液流变学的影响（见表8-2）

模型组全血粘度（比）、血浆粘度（比）、红细胞压积显著高于对照组。本发明药物组血液流变学指标有所改善，大部分指标接近正常水平，优于对比药物甲组和对比药物乙组。

表8-2 本发明药物对大鼠血液流变学的影响（n=10）

注：与对照组相比，**P<0.01；与模型组相比，##P<0.01，#P<0.05。

2.3 对大鼠血浆E₂、Pt的影响（见表8-3）

2.4 对大鼠乳腺组织ER、PR表达的影响 阳性判断标准为乳腺导管和小叶上皮细胞核和/或细胞浆着色时为阳性。阳性细胞率<20%者为（-）；阳性细胞率不足20%，但局部区域有少量较强着色的阳性细胞者为（±）；阳性细胞率>20%者且阳性细胞数由少至多，着色由浅至深为+，++，+++，++++，并分别计1、2、3、4、5、6分，积分愈高表明ER、PR含量愈高。（见表8-3）

与对照组比较，模型组动物血浆雌二醇（E₂）含量显著增加，孕酮（Pt）含量显著降低，ER、PR积分值有显著差异，经本发明药物治疗后，高剂量组雌二醇含量明显降低、孕酮含量明显升高；ER、PR积分值与模型组相比也分别有显著和极显著性差异，且本发明药物作用效果优于对比药物甲组和对比药物乙组。

表8-3 各组大鼠血浆E₂、Pt和乳腺组织ER、PR积分比较（n=10）

注：与对照组比较**P<0.01，*P<0.05；与模型组比较，##P<0.01，#P<0.05。

3 讨论与结论

乳腺增生具有明显的性激素依赖性，模型组血浆E₂水平显著高于对照组，本发明药物组血浆E₂水平显著低于模型组，Pt水平显著高于模型组，乳腺组织ER、PR含量明显低于模型组，表明本发明药物的治疗作用与改善机体内分泌环境，同时降低大鼠乳腺组织ER、PR含量，从而减弱E₂对靶细胞的生物学效应有关。

而且，实验研究结果还表明，单独使用三七花或单独使用三七剪口制成的对比药物甲和对比药物乙的药物作用效果则不明显，由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。

实验九：本发明药物抗抑郁作用实验研究

1材料与方法

1.1药物

本发明药物A：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备。

本发明药物B：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例2制备。

本发明药物C：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例11制备。

本发明药物D：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例12制备。

对比药物甲：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例3制备。

对比药物乙：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例4制备。

1.2动物

健康SD大鼠，雄性，体重180～200g，健康ICR小鼠，雌雄不限，体重18～22g，南京中医药大学实验动物中心提供。

1.3药品及试剂

盐酸文拉法辛片（常州四药制药有限公司，国药准字H20110150），给药剂量6.25mg/Kg，为人临床用量1.25mg/Kg的5倍；利血平片（上海信谊药厂有限公司，国药准字H31021148）。

1.4仪器

有机玻璃游泳槽，高40cm，长60cm，宽30cm，南京中医药大学实验动物中心提供；XZ-4小鼠自主活动计数器，南京中医药大学实验动物中心提供。

1.5方法

1.5.1大鼠强迫游泳实验：健康SD大鼠80只，雄性，按体重随机分成8组，每组10只，即模型对照组，阳性对照盐酸文拉法辛片6.25mg/Kg剂量组、本发明药物A 20.00生药/Kg剂量组、本发明药物B 20.00生药/Kg剂量组、本发明药物C 20.00生药/Kg剂量组、本发明药物D20.00生药/Kg剂量组、对比药物甲 20.00生药/Kg剂量组、对比药物乙20.00生药/Kg剂量组，模型对照组给予同体积去离子水。大鼠灌胃给药，给药1次/天，连续10天。第9天，于给药后30min将大鼠单个放入有机玻璃游泳槽中，水深为15cm，水温25℃，强迫其游泳，15min后取出动物，晒干，然后放回笼中。于末次给药30min后，将大鼠放入游泳槽中，记录5min内大鼠保持不动状态的时间，即大鼠微蜷躯体，但保持垂直姿势，鼻孔露出水面的时间。

1.5.2小鼠尾悬挂实验：健康ICR小鼠80只，雌、雄各半，按体重随机分成8组，每组10只，即模型对照组、阳性对照盐酸文拉法辛片6.25mg/Kg剂量组、本发明药物A 20.00生药/Kg剂量组、本发明药物B 20.00生药/Kg剂量组、本发明药物C 20.00生药/Kg剂量组、本发明药物D 20.00生药/Kg剂量组、对比药物甲 20.00生药/Kg剂量组、对比药物乙 20.00生药/Kg剂量组，模型对照组给予同体积去离子水。小鼠灌胃给药，每日1次，连续10天。于末次给药30min后，将小鼠尾（距尾尖1cm处）用胶布粘在高出桌面3cm的木条上，记录5min内动物的不动时间。

1.5.3利血平拮抗实验：健康小鼠160只，雌、雄各半，按体重随机分成8组，每组20只，分组及剂量同上，于末次给药30min后，小鼠尾静脉注射利血平2mg/Kg，于注射1h后观察小鼠眼睑下垂的动物数、身体僵直保持肌挛状态不动的动物数，并计算其发生率，观察并记录注射利血平前后体温变化。

1.5.4自主活动实验：健康小鼠80只，雌雄各半，按体重随机分成8组，每组10只，即模型对照组、盐酸文拉法辛片组、本发明药物A组、本发明药物B组、本发明药物C 组、本发明药物D 组、对比药物甲组、对比药物乙组，给药剂量同前。小鼠灌胃给药，每日1次，连续10天。于末次给药后30min，以XZ-4小鼠自主活动计数器记录各组小鼠的自主活动情况，记录5min，测定2次，取其平均值。

1.6统计学方法

应用SPSS10.0统计软件进行数据处理，所有计量资料以均数±标准（±s）差表示，组间比较采用t检验，计数资料采用χ²检验。

2结果

2.1大鼠强迫游泳实验

强迫游泳模型中出现的不动状态也反映了动物的绝望行为，可以模拟人类的抑郁状态。与模型对照组比较，本发明药物A组至D组可明显对抗“失望”，缩短游泳不动时间（P<0.05），而对比药物甲组和对比药物乙组的作用效果则不明显。由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。见表9-1。

表9-1本发明药物对大鼠强迫游泳实验的影响（±s）

注：与模型对照组比较，*P<0.05

2.2小鼠尾悬挂实验

小鼠在悬尾模型中出现的不动状态反映了动物的绝望行为。与模型对照组比较，本发明药物A组至D组可缩短小鼠悬尾的不动时间（P<0.05），而对比药物甲组和对比药物乙组的作用效果则不明显。由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。提示本发明药物具有减轻小鼠绝望行为、抗抑郁作用。见表9-2。

表9-2 本发明药物对小鼠悬尾实验的作用（±s）

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

2.3利血平拮抗实验

与模型对照组比较，本发明药物A组至D组可明显降低利血平引起小鼠眼睑下垂及小鼠运动不能发生率（P<0.05），可减轻注射利血平后体温降低的程度（P<0.05）；而对比药物甲组和对比药物乙组的作用效果则不明显。由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。见表9-3～表9-5。

表9-3本发明药物对利血平引起小鼠眼睑下垂作用的影响（±s）

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

表9-4本发明药物对利血平引起小鼠运动不能的影响（±s）

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

表9-5本发明药物对利血平引起小鼠体温降低的影响（±s）

注：与模型对照组比较，*P<0.05

2.4自主活动实验

未见本发明药物各剂量组对小鼠自主活动有显著影响。见表9-6。

表9-6 本发明药物对小鼠自主活动的影响（±s）

注：与模型对照组比较，**P<0.01

3.结论

从动物实验结果看，本发明药物可明显对抗“失望”，缩短游泳不动时间；可缩短小鼠悬尾的不动时间；可降低利血平引起小鼠眼睑下垂及小鼠僵直状态发生率，减轻注射利血平后体温降低的程度；对正常小鼠自主活动无影响。由此可见，本发明药物对行为应激模型和药物诱发的抑郁模型有一定的抗抑郁作用，同时对正常小鼠的自主活动没有显著影响，此点与阳性药物比较具有一定的区别。

综上，本发明药物具有明显的抗抑郁作用，并且优于对比药物甲与对比药物乙，说明本发明药物中各药味之间的配伍精良，缺一不可，各药味之间的组合产生了明显的协同增效作用。

实验十：本发明药物抗衰老的实验研究

1实验材料

1.1实验动物：纯系昆明种小鼠，体重20±2g，由南京中医药大学实验动物中心提供。

1.2实验药物

1.2.1 药物

本发明药物A：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备。

本发明药物B：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例2制备。

本发明药物C：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例11制备。

本发明药物D：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例12制备。

对比药物甲：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例3制备。

对比药物乙：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例4制备。

阳性药：六味地黄丸，北京同仁堂生产。

1.2.2 D-半乳糖（D-半乳糖上海试剂二厂）：用去离子水配成浓度为5%的D-gal溶液，放入密封瓶内高压灭菌后，4℃冰箱保存，备用。

1.3主要试剂 丙二醛（MDA）试剂盒、脂褐质（LF）试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒、过氧化氢酶（CAT）试剂盒，均产于南京建成生物工程研究所。

1.4主要仪器 冷冻离心机、恒温水浴埚、722型分光光度计、电动玻璃匀浆器、微量加样器、超低温冰箱、计时器、高压灭菌器、电热干烤箱。

2实验方法

2.1分组 实验用昆明种小鼠108只，随机分为9组，即空白组、模型对照组、本发明药物A组、本发明药物B组、本发明药物C组、本发明药物D组、对比药物甲组、对比药物乙组、阳性药用药组，各组12只。

2.2造膜给药的同时，模型组和给药组小鼠每天颈背部皮下注射5%D-半乳糖，连续注射6周，空白对照组皮下注射等量的注射用盐水。注射均按无菌要求进行操作。

2.3给药 采用灌胃法给药6周。本发明药物A组、本发明药物B组、本发明药物C组、本发明药物D组、对比药物甲组、对比药物乙组分别给予本发明药物A、本发明药物B、本发明药物C、本发明药物D、对比药物甲、对比药物乙的水煎液，其浓度为0.2g/ml，药液体积为每天0.2ml/20g，阳性药用药组给予六味地黄丸。

2.4取材与测定 将给药6周后各组小鼠，眼眶取全血处理后备用，并处死动物取出肝脏，取全血按照试剂盒说明书法进行SOD、CAT活力、MDA含量测定；取肝脏按照试剂盒说明书法进行LF含量测定。

2.5统计方法 本实验数据均采用（±s）表示，各组间的数据比较采用t检验。

3实验结果

3.1外观和行为观察 衰老模型组、本发明药物A组、本发明药物B组、本发明药物C组、本发明药物D组、对比药物甲组、对比药物乙组，给药12天后，开始出现小鼠毛发枯黄，自主活动减少，行动迟缓，精神萎靡等衰老现象。

3.2本发明药物对衰老小鼠血清SOD含量的影响

由表10-1可见，与空白对照组比较，衰老模型组血清SOD含量明显降低（P<0.05），与模型组比较，对比药物甲组和对比药物乙组SOD含量虽然升高，但效果不明显（P>0.05），本发明药物A组至D组SOD含量明显升高（P<0.05）。由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。

表 10-1 本发明药物对衰老小鼠血清 SOD含量的影响（±s）

注:与空白对照组比较，△P<0.05；与衰老模型组比较，*P<0.05。

3.3 本发明药物对衰老小鼠红细胞 CAT 活性的影响

由表10-2可见，与空白对照组比较，衰老模型组红细胞CAT活性明显降低（P<0.05），与模型组比较，六味地黄丸组、本发明药物A组至D组红细胞CAT活性均明显升高（P<0.05），对比药物甲组和对比药物乙组红细胞CAT活性有升高，但与空白对照组比较，无显著性差异（P>0.05）。由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。

表10-2 本发明药物对衰老小鼠红细胞 CAT 活性的影响（±s）

注：与空白对照组比较，△P<0.05；与模型组比较，*P<0.05。

3.4本发明药物对衰老小鼠血清MDA含量的影响

由表10-3可见，与空白对照组比较，衰老模型组血清MDA含量明显升高（P<0.05），与模型组比较，六味地黄丸组、本发明药物A组至D组血清MDA含量均明显降低（P<0.05），对比药物甲组和对比药物乙组血清MDA含量有所降低，但与模型组比较，无显著性差异（P>0.05）。由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。

表 10-3 本发明药物对衰老小鼠血清MDA 含量的影响（±s）

注：与空白对照组比较，△P<0.05；与模型组比较，*P<0.05。

3.5本发明药物对衰老小鼠肝LF含量的影响

由表10-4可见，与空白对照组比较，衰老模型组肝LF含量明显升高（P<0.05），与模型组比较，六味地黄丸组、本发明药物A组至D组的肝LF含量均明显降低（P<0.05），对比药物甲组和对比药物乙组的肝LF含量有所降低，但与衰老模型组比较，无显著性差异（P>0.05）。由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。

表 10-4 本发明药物对衰老小鼠肝LF含量的影响（±s）

注：与空白对照组比较，△ P<0.05；与模型组比较，*P<0.05。

4结论

本实验结果表明：本发明药物能够降低衰老模型小鼠血清MDA、LF含量，使血清SOD、CAT活性提高（P<0.05）；对比药物甲和对比药物乙作用效果不明显。由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。

实验十一：本发明药物美容养颜的实验研究

1实验材料

1.1动物

雄性金黄地鼠，重100±20g，由南京中医药大学实验动物中心提供，微生物控制为清洁级。

1.2药物

本发明药物A：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备。

本发明药物B：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例2制备。

本发明药物C：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例11制备。

本发明药物D：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例12制备。

对比药物甲：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例3制备。

对比药物乙：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例4制备。

对照组：清热暗疮片（广州王老吉药业股份有限公司，国药准字Z44020578），主要成分：穿心莲浸膏、人工牛黄、金银花、蒲公英浸膏、大黄浸膏、山兰根浸膏、桅子浸膏、珍珠层粉、甘草。

模型组：生理盐水。

1.3主要仪器及试剂

LD4-2型高速离心机（北京医用离心机厂）、GC-1200C放射免疫计数器（中国科学技术大学科技实业总公司中佳光电仪器分公司）、脱水机、生物组织自动包埋机、摊片机、切片机。睾酮（T）、雌二醇（E₂）试剂盒均由中美合资天津九鼎医学生物工程有限公司提供。

2实验方法

2.1动物分组

雄性金黄地鼠饲养3天，无不良反应，饮食、饮水、活动正常者纳入实验。随机分成8组，模型组、清热暗疮片组、本发明药物A组、本发明药物B组、本发明药物C组、本发明药物D组、对比药物甲组、对比药物乙组，每组各10只。

2.2动物给药

饲养3天后开始灌胃给药，连续灌胃30天，各组金黄地鼠分别按以下方案给药：模型组：以生理盐水灌胃，2mL/天；清热暗疮片组：以0.200g/mL浓度的清热暗疮片溶液灌胃，2mL/天；本发明药物A组、本发明药物B组、本发明药物C组、本发明药物D组、对比药物甲组、对比药物乙组分别以0.800g/mL浓度的本发明药物A、本发明药物B、本发明药物C、本发明药物D、对比药物甲、对比药物乙的溶液灌胃，2mL/天。

2.3模型

以金黄地鼠侧腹部皮脂腺斑作为实验模型。

2.4标本采集

于实验第34天取材，取材前禁食，自由饮水，24h后，用摘除眼球法采血3～5mL滴入试管，分离血清送检。采血后脱颈椎处死动物，在强光照射下，用游标卡尺测量右侧斑块的最大横径和最大纵径。立即取下金黄地鼠侧腹部皮脂腺斑组织，切取约1cm×1cm组织块以10%甲醛固定液中固定，石蜡包埋，切片，HE染色，于光镜下观察皮脂腺斑的组织学改变。

2.5指标观测及方法

2.5.1一般情况 每日观察记录金黄地鼠的饮食、饮水、大小便、精神状况及活动度。

2.5.2测量皮脂腺斑的大小 实验开始时先用电动剃须刀剃尽金黄地鼠背部毛，将地鼠用乙醚麻醉后，在强光照射下，用游标卡尺测量右侧斑块的最大横径和最大纵径。实验结束时再次将鼠毛剃尽，用同样的方法、在同样的部位测量右侧斑块的最大横径和最大纵径。

2.5.3血清睾酮（T）的测定 将所取鼠血4℃、3000r/min离心10min，分离血清送检，采用双抗体放射免疫法进行检测，具体操作按试剂盒说明书进行。由南京中医药大学附属医院同位素室协助完成。

2.5.4血清雌二醇（E₂）的测定 将所取鼠血4℃、3000r/min离心10min，分离血清送检，采用液相平衡竞争放射免疫分析法进行检测，具体操作按试剂盒说明书进行。由南京中医药大学附属医院同位素室协助完成。

2.5.5观察皮脂腺斑显微结构的变化 将10%甲醛固定液中的皮脂腺斑组织固定脱水后，常规石蜡包埋，切片，HE染色后，光镜下观察皮脂腺班的显微结构。由南京中医药大学附属医院病理科协助完成。

3实验结果

3.1对金黄地鼠皮脂腺斑大小的影响

实验结果显示用药前，各组动物皮脂腺斑大小经统计处理，差别无统计学意义（P>0.05），各组之间具有可比性；用药后，本发明药物A组、本发明药物B组、本发明药物C组、本发明药物D组、对比药物甲组、对比药物乙组与模型组之间具有显著性差异（P<0.05），尤其是本发明药物A至D组与模型组和对照组之间差异非常显著（P<0.01）。由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。见表11-1。

表11-1 对金黄地鼠皮脂腺斑大小的影响（mm²，€±s）

注：与模型组比较，*P<0.05；**P<0.01；与对照组比较，#P<0.05，##P<0.01。

3.2对金黄地鼠血清睾酮水平的影响

实验结果显示：用药后睾酮水平比较，本发明药物A组至D组、对比药物甲组、对比药物乙组与模型组之间具有显著性差异（P<0.05，P<0.01），尤其是本发明药物A组至D组与模型组之间差异非常显著（P<0.01）。由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。见表11-2。

表11-2 治疗后各组金黄地鼠血清睾酮（T）水平的比较（±s）

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

3.3本发明药物对金黄地鼠血清雌二醇水平的影响

用药后，雌二醇水平比较，本发明药物组与模型组之间具有显著性差异（P<0.05）。见表11-3。

表11-3治疗后各组金黄地鼠血清雌二醇（E₂）水平的比较（±s）

注：与模型组比较，*P<0.05。

4结论

以金黄地鼠侧腹部皮脂腺斑作为实验模型，观察本发明药物对皮脂腺斑、血清激素的影响，结果表明，本发明药物可缩小皮脂腺斑、使皮脂腺变薄，质地较前疏松，同时降低血清睾酮、提高血清雌二醇水平。通过本试验初步了解本发明药物治疗痤疮的现代医学机理，从动物研究角度证明了其治疗痤疮的有效性。

而且，实验研究结果还表明，单独使用三七花或单独使用三七剪口制成的对比药物甲和对比药物乙的药物作用效果则不明显，由此可见，本发明药物将三七花和三七剪口组合使用，产生了明显的一加一大于二的协同增效作用。

实验十二：本发明药物的质量检测方法研究

1仪器与试药

1.1仪器

LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司），SPD-20AVWD检测器，LCSolution色谱工作站；Phenomenex-NH2色谱柱（4.6mm×250mm，5.0μm，广州菲罗门科学仪器有限公司）；UV-2000紫外-可见分光光度计（日本日立）；METTLERAE240型电子分析天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；YP10002型电子天平（上海越平科学仪器有限公司）。

1.2试药

本发明药物，参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备；人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、三七皂苷R1对照品均购自中国药品生物制品检定所（供含量测定用）；乙腈（Caledon公司，色谱纯）；纯净水（屈臣氏蒸馏水）；甲醇（北京化工厂，分析纯）。

2方法与结果

2.1色谱条件

Kromasil C₁₈色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为比例为82：18乙腈-水；检测波长203nm；流速1mL·min^-1；柱温30℃；进样量10μL。理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于4000，

2.2混合对照品溶液的制备

精密称取人参皂苷Rg₁，人参皂苷Rb₁，三七皂苷R₁对照品和人参皂苷Re适量，加甲醇制成每1mL含人参皂苷Rg₁0.4mg，人参皂苷Rb₁0.4mg，人参皂苷Re0.1mg，三七皂苷R₁0.1mg的混合溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备

取本发明药物粉末0.5g，精密称定，精密加入甲醇50mL，称定重量，放置过夜，置80℃水浴上保持微沸2h放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4线性关系考察

精密吸取混合对照品溶液2，6，10，14，18，22，26，30μL，注入高效液相色谱仪测定，记录峰面积。以对照品峰面积为纵坐标（Y），以进样质量为横坐标（X），绘制标准曲线，得回归方程。结果表明，人参皂苷Rg₁在0.804～12.060μg，人参皂苷Re在0.200～3.000μg，人参皂苷Rb₁在0.820～12.300μg，三七皂苷R₁在0.218～3.264μg范围内，其进样质量均与峰面积呈良好的线性关系，结果见表12-1。

表12-1 4种皂苷线性关系测定结果

2.5精密度考察

精密吸取混合对照品溶液10μL，重复进样6次，测定峰面积，计算相对标准偏差RSD。结果，人参皂苷Rg₁的RSD=0.21%，人参皂苷Re的RSD=0.46%，人参皂苷Rb₁的RSD=1.83%，三七皂苷R₁的RSD=0.22%，表明方法精密度良好。

2.6稳定性试验

精密吸取“2.3”项下供试品溶液，在制备后0，1，2，4，8，12，24h进样测定，结果人参皂苷Rg₁，人参皂苷Re，人参皂苷Rb₁，三七皂苷R₁峰面积的RSD分别为1.98%，1.73%，2.06%，2.43%；表明供试品溶液在24h内稳定。

2.7重复性试验

精密称取同一批次本发明药物粉末6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依上述色谱条件进样测定，分别记录峰面积，结果人参皂苷Rg₁，人参皂苷Re，人参皂苷Rb₁，三七皂苷R₁含量的RSD分别为2.12%，0.49%，0.90%，1.22%，表明方法重复性良好。

2.8加样回收率试验

精密称取0.2g已知含量的本发明药物粉末6份，分别精密加入对照品人参皂苷Rg₁ 4mg，人参皂苷Re 1mg，人参皂苷Rb₁ 4mg，三七皂苷R₁ 1mg，再精密加入50mL甲醇，按“2.3”项下方法制备供试品溶液。依上述色谱条件进样测定。结果各成分平均加样回收率均符合要求，表明该测定方法稳定可靠。

具体实施方式：

实施例1：本发明药物A

处方：三七花50g，三七剪口50g

制备方法：

（1）冷冻干燥：

① 三七剪口冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七剪口，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-35℃下冷冻，维持8h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-35℃下进行，时间为70h；将冷冻干燥后的三七剪口粉碎，通过100目筛网过筛，得三七剪口冷冻干燥细粉；

② 三七花冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七花，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-35℃下冷冻，维持8h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-35℃下进行，时间为70h；将冷冻干燥后的三七花粉碎，通过100目筛网过筛，得三七花冷冻干燥细粉；

（2）超微粉碎破壁：

① 三七剪口破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七剪口冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七剪口破壁超微粉；

② 三七花破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七花冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七花破壁超微粉；

（3）药物制剂的制备：将步骤（2）制备的三七剪口破壁超微粉和三七花破壁超微粉混合，得本发明药物。

实施例2：本发明药物B

处方：三七花50g，三七剪口50g

制备方法：将三七剪口和三七花粉碎成细粉，混合，得本发明药物B。

实施例3：对比药物甲

处方：三七花100g

制备方法：

（1）三七花冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七花，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-35℃下冷冻，维持8h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-35℃下进行，时间为70h；将冷冻干燥后的三七花粉碎，通过100目筛网过筛，得三七花冷冻干燥细粉；

（2）三七花破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七花冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七花破壁超微粉，即对比药物甲。

实施例4：对比药物乙

处方：三七剪口100g

（1）三七剪口冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七剪口，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-35℃下冷冻，维持8h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-35℃下进行，时间为70h；将冷冻干燥后的三七剪口粉碎，通过100目筛网过筛，得三七剪口冷冻干燥细粉；

（2）三七剪口破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七剪口冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七剪口破壁超微粉，即对比药物乙。

实施例5：本发明药物胶囊剂

处方：三七花950g，三七剪口50g

制法：

（1）冷冻干燥：

① 三七冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-40℃下冷冻，维持5h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-40℃下进行，时间为30h；将冷冻干燥后的三七粉碎，通过100目筛网过筛，得三七冷冻干燥细粉；

② 三七花冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七花，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-30℃下冷冻，维持10h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-30℃下进行，时间为120h；将冷冻干燥后的三七花粉碎，通过100目筛网过筛，得三七花冷冻干燥细粉；

（2）超微粉碎破壁：

① 三七破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七破壁超微粉；

② 三七花破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七花冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七花破壁超微粉；

（3）药物制剂的制备：将步骤（2）制备的三七破壁超微粉和三七花破壁超微粉混合，加入淀粉，制粒，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂1000粒。

适应症：提高免疫力、抗肿瘤、治疗高血压、心血管病、脑血管病、糖尿病、高血脂、代谢综合征、乳腺增生、抑郁症、抗衰老、美容养颜。

用法用量：口服，每次1～2粒，每日2～3次。

实施例6：本发明药物胶囊剂

处方：三七花500g，三七剪口500g

制法：

（1）冷冻干燥：

① 三七冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-35℃下冷冻，维持8h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-35℃下进行，时间为75h；将冷冻干燥后的三七粉碎，通过100目筛网过筛，得三七冷冻干燥细粉；

② 三七花冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七花，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-35℃下冷冻，维持7h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-35℃下进行，时间为75h；将冷冻干燥后的三七花粉碎，通过100目筛网过筛，得三七花冷冻干燥细粉；

（2）超微粉碎破壁：

① 三七破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七破壁超微粉；

② 三七花破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七花冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七花破壁超微粉；

（3）药物制剂的制备：将步骤（2）制备的三七破壁超微粉和三七花破壁超微粉混合，加入淀粉或糊精，制粒，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂1000粒。

适应症：提高免疫力、抗肿瘤、治疗高血压、心血管病、脑血管病、糖尿病、高血脂、代谢综合征、乳腺增生、抑郁症、抗衰老、美容养颜。

用法用量：口服，每次1～2粒，每日2～3次。

实施例7：本发明药物丸剂

处方：三年生三七花100g，三年生三七剪口900g

制法：

（1）冷冻干燥：

① 三七冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-35℃下冷冻，维持7h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-35℃下进行，时间为70h；将冷冻干燥后的三七粉碎，通过100目筛网过筛，得三七冷冻干燥细粉；

② 三七花冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七花，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-38℃下冷冻，维持8h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-35℃下进行，时间为80h；将冷冻干燥后的三七花粉碎，通过100目筛网过筛，得三七花冷冻干燥细粉；

（2）超微粉碎破壁：

① 三七破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七破壁超微粉；

② 三七花破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七花冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七花破壁超微粉；

（3）药物制剂的制备：将步骤（2）制备的三七破壁超微粉和三七花破壁超微粉混合，用水泛丸，干燥，制成10000丸。

适应症：提高免疫力、抗肿瘤、治疗高血压、心血管病、脑血管病、糖尿病、高血脂、代谢综合征、乳腺增生、抑郁症、抗衰老、美容养颜。

用法用量：口服，每次10～20丸，每日2～3次。

实施例8：本发明药物颗粒剂

处方：三年生三七花900g，三年生三七剪口100g

制法：

（1）冷冻干燥：

① 三七冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-30℃下冷冻，维持5h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-30℃下进行，时间为30h；将冷冻干燥后的三七粉碎，通过100目筛网过筛，得三七冷冻干燥细粉；

② 三七花冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七花，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-30℃下冷冻，维持5h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-30℃下进行，时间为30h；将冷冻干燥后的三七花粉碎，通过100目筛网过筛，得三七花冷冻干燥细粉；

（2）超微粉碎破壁：

① 三七破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七破壁超微粉；

② 三七花破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七花冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七花破壁超微粉；

（3）药物制剂的制备：将步骤（2）制备的三七破壁超微粉和三七花破壁超微粉混合，加适量蔗糖、糊精、乙醇，制成颗粒，干燥，整粒，制成颗粒剂10000g.

适应症：提高免疫力、抗肿瘤、治疗高血压、心血管病、脑血管病、糖尿病、高血脂、代谢综合征、乳腺增生、抑郁症、抗衰老、美容养颜。

用法用量：口服，每次10～20g，每日2～3次。

实施例9：本发明药物胶囊剂

处方：三七花800g，三七剪口200g

制法：

（1）冷冻干燥：

① 三七冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-40℃下冷冻，维持10h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-40℃下进行，时间为120h；将冷冻干燥后的三七粉碎，通过100目筛网过筛，得三七冷冻干燥细粉；

② 三七花冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七花，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-40℃下冷冻，维持10h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-40℃下进行，时间为120h；将冷冻干燥后的三七花粉碎，通过100目筛网过筛，得三七花冷冻干燥细粉；

（2）超微粉碎破壁：

① 三七破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七破壁超微粉；

② 三七花破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七花冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七花破壁超微粉；

（3）药物制剂的制备：将步骤（2）制备的三七破壁超微粉和三七花破壁超微粉混合，加入淀粉或糊精，制粒，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂1000粒。

适应症：提高免疫力、抗肿瘤、治疗高血压、心血管病、脑血管病、糖尿病、高血脂、代谢综合征、乳腺增生、抑郁症、抗衰老、美容养颜。

用法用量：口服，每次1～2粒，每日2～3次。

实施例10：本发明药物片剂

处方：三年生三七花50g，三年生三七剪口950g

制法：

（1）冷冻干燥：

① 三七冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-30℃下冷冻，维持10h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-30℃下进行，时间为120h；将冷冻干燥后的三七粉碎，通过100目筛网过筛，得三七冷冻干燥细粉；

② 三七花冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七花，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-40℃下冷冻，维持5h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-40℃下进行，时间为30h；将冷冻干燥后的三七花粉碎，通过100目筛网过筛，得三七花冷冻干燥细粉；

（2）超微粉碎破壁：

① 三七破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七破壁超微粉；

② 三七花破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七花冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七花破壁超微粉；

（3）药物制剂的制备：将步骤（2）制备的三七破壁超微粉和三七花破壁超微粉混合，压片，制成片剂1000片。

适应症：提高免疫力、抗肿瘤、治疗高血压、心血管病、脑血管病、糖尿病、高血脂、代谢综合征、乳腺增生、抑郁症、抗衰老、美容养颜。

用法用量：口服，每次1～2片，每日2～3次。

实施例11：本发明药物C

处方：三七花4.8g，三七剪口96g

制备方法：将三七剪口和三七花粉碎成细粉，混合，得本发明药物C。

实施例12：本发明药物D

处方：三七花96g，三七剪口4.8g

制备方法：将三七剪口和三七花粉碎成细粉，混合，得本发明药物D。

实施例13：本发明药物滴丸

处方：三七花50g，三七剪口50g

制备方法：取三七花50g，三七剪口50g粉碎过120目筛网，得混合细粉，备用；取250g聚乙二醇4000，加热至熔融，在80℃保温状态下加入混合细粉，搅拌使混悬；采用机械装置将药料经滴头滴入到2℃的二甲基硅油100中梯度冷却，成型即得滴丸。

实施例14：本发明药物注射剂

处方：三七花50g，三七剪口50g

制备方法：三七花50g、三七剪口50g，加800mL 50%乙醇加热回流二次，每次2小时，合并醇提液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.04～1.05，用0.5mol/L磷酸调pH 2～3，静置，离心，滤液用30%氢氧化钠溶液调pH 9～10，用氯仿提取3次，合并氯仿液，回收氯仿至无明显氯仿层的稠膏，氯仿浓缩液以1％（V/V）盐酸水溶液调节pH值，继续浓缩至相对密度为1.25～1.35的浸膏，真空干燥，得混合干浸膏；混合干浸膏加入8倍量1％盐酸溶液煮沸2次，冷却，滤过，分取酸水，减压浓缩至密度1.25～1.35的浸膏，干燥，得混合提取物；向混合提取物中加注射用水，调节pH值至1.5～2.0，搅拌使溶解，冷藏，滤过，滤液合并，煮沸，冷藏滤过，滤液加入活性炭吸附，脱碳，以30%氢氧化钠溶液调节pH值至4.0～5.0，煮沸，冷藏，滤过，超滤，得药液；向药液加入吐温-80 2ml、苯甲醇2ml，混匀，调节pH值至3.0～4.0，加注射用水至100ml，微滤，充氮灌封于2ml安瓿中，于100℃流通蒸汽灭菌30分钟即得注射剂。

Claims (15)

1.一种药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的原料制成的：三七花0.5～10重量份，三七0.5～10重量份。

2.如权利要求1所述药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的原料制成的：三七花0.5重量份，三七10重量份。

3.如权利要求1所述药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的原料制成的：三七花10重量份，三七0.5重量份。

4.如权利要求1药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的原料制成的：三七花5重量份，三七5重量份。

5.如权利要求1药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的原料制成的：三七花3重量份，三七7重量份。

6.如权利要求1～5中任意一项所述的药物组合物，其特征在于，三七花为三年生三七花，三七为三年生三七主根或三年生三七剪口。

7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，三年生三七花为超微粉碎后或破壁后的三年生三七花，三年生三七主根为超微粉碎后或破壁后的三年生三七主根，三年生三七剪口为超微粉碎后或破壁后的三年生三七剪口。

8.如权利要求1～5中任意一项所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、滴丸、注射剂。

9.如权利要求1～5中任意一项所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物的制备方法如下：

（1）冷冻干燥：

① 三七冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-30℃～-40℃下冷冻，维持5h～10h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-30℃～-40℃下进行，时间为30h～120h；将冷冻干燥后的三七粉碎，通过100目筛网过筛，得三七冷冻干燥细粉；

② 三七花冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七花，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液在-30℃～-40℃下冷冻，维持5h～10h后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-30℃～-40℃下进行，时间为30h～120h；将冷冻干燥后的三七花粉碎，通过100目筛网过筛，得三七花冷冻干燥细粉；

（2）超微粉碎破壁：

① 三七破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七破壁超微粉；

② 三七花破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1）得到的三七花冷冻干燥细粉进行超微粉碎，得粒径30μm以下的三七花破壁超微粉；

（3）药物制剂的制备：将步骤（2）制备的三七破壁超微粉和三七花破壁超微粉混合，采用中药学中的常规方法制剂成型。

10.如权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，步骤（1）中三七与三七花冷冻干燥的时间为60h～80h。

11.如权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，步骤（3）中将三七超微粉和三七花超微粉混合，进行全粉末压片，制成片剂。

12.如权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，步骤（3）中将三七超微粉和三七花超微粉混合，进行全粉末填充肠溶胶囊，制成肠溶硬胶囊剂。

13.一种药物组合物的质量检测方法，该药物组合物是由以下重量份的原料制成的：三七花0.5～10重量份，三七0.5～10重量份，其特征在于，该药物组合物采用如下方法检测：采用高效液相色谱法测定：

（1）色谱条件：Kromasil C₁₈色谱柱；流动相为比例为70～90：10～30乙腈-水；检测波长200～210nm；流速0.5～2.0mL·min^-1；柱温20～40℃；进样量5～20μL；理论塔板数按人参皂苷Rg₁峰计算应不低于4000；

（2）供试品溶液制备：取本发明药物粉末，精密称定，精密加入甲醇，称定重量，放置过夜，置水浴上保持微沸，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（3）混合对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg₁，人参皂苷Rb₁，三七皂苷R₁对照品和人参皂苷Re适量，加甲醇制成混合溶液，即得；

（4）测定：分别取对照品溶液和供试品溶液各5～20μL进样，测定。

14.如权利要求13所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于，该药物组合物采用如下方法检测：采用高效液相色谱法测定：

（1）色谱条件：Kromasil C₁₈色谱柱；流动相为比例为82：18乙腈-水；检测波长203nm；流速1mL·min^-1；柱温30℃；进样量10μL；理论塔板数按人参皂苷Rg₁峰计算应不低于4000；

（2）供试品溶液制备：取本发明药物粉末0.5g，精密称定，精密加入甲醇50mL，称定重量，放置过夜，置80℃水浴上保持微沸2h放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（3）混合对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg₁，人参皂苷Rb₁，三七皂苷R₁对照品和人参皂苷Re适量，加甲醇制成每1mL含人参皂苷Rg₁0.4mg，人参皂苷Rb₁0.4mg，人参皂苷Re0.1mg，三七皂苷R₁0.1mg的混合溶液，即得；

（4）测定：分别取对照品溶液和供试品溶液各10μL进样，测定。

15.如权利要求1～5中任意一项所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物在制备提高免疫力、抗肿瘤、治疗高血压、治疗心血管病、治疗脑血管病、治疗糖尿病、治疗高血脂、治疗代谢综合征、治疗乳腺增生、治疗抑郁症、抗衰老、美容养颜的药物或保健品中的应用。