CN106491680A - 一种预防或治疗老年痴呆的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物制备技术领域，具体为一种预防或治疗老年痴呆的中药组合物及其制备方法，该组合物包括如下重量配比的原料药制备而成的制剂：人参2‑20份、川芎2‑20份、三七1‑10份、水蛭1‑10份、冰片0.1‑1份、麝香0.01‑0.03份。本发明组合物具备活气行血、醒脑开窍的功效，用于气虚血弱，痰阻清窍，淤血阻络而致的记忆力严重减退，行动不便，步履不稳，情感淡漠，精神萎靡或易怒，甚至不识家人，不知回家道路等症状具有良好的治疗效果，安全可靠，成本低廉，为临床用药提供了新的选择。

Description

一种预防或治疗老年痴呆的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及药物制备技术领域，具体为一种预防或治疗老年痴呆的中药组合物及其制备方法。

背景技术

老年痴呆是一种慢性疾病，常见的有阿尔茨海默病和血管性痴呆，病程往往持续多年，患者生活多不能自理，给家庭和社会造成巨大负担。目前，我国有1.3亿老年人，其中大约500万-600万的65岁以上的老年人患有痴呆症，到21世纪中叶，我国的老年人大约要增长到4亿，到那时老年痴呆症患者大约就会有1600万-2000万。老年痴呆问题也是随着人口老年化发展的一个必然趋势。

现有西药对老年痴呆症的治疗主要是从预防卒中、改善认知功能及控制行为和精神症状下手。临床多用胆碱酯酶抑制剂、脑循环改善剂、多肽类促智药、自由基清除剂和抗氧化剂等等，其效果仍需进一步研究。

中医认为该病病因主要以内因为主，多由年迈体虚、七情内伤、久病耗损等原因导致气血不足、肾精亏损、脑髓失养，或气滞痰阻、血淤于脑而成。痴呆的病位主要在脑，与心肝脾肾功能失调关系密切。治疗上要活气补血、益气养血，佐以醒脑开窍，该病即可逐渐好转。因此有必要发明一种疗效确切、安全方便、副作用低下、价格低廉的中药组合物来治疗老年性痴呆。

发明内容

本发明正是针对以上技术问题，提供一种疗效确切、安全方便、价格低廉的纯中药治疗气虚血弱，痰阻清窍，淤血阻络而致的记忆力严重减退，行动不便，步履不稳，情感淡漠，精神萎靡或易怒，甚至不识家人，不知回家道路等症状的药物组合物及其制备方法。该中药组合物治疗老年痴呆具有良好的效果，可显著改善学习、记忆、认知等能力。

本发明的另外一个目的是为以上所述预防或治疗老年痴呆的中药组合物提供一种工艺先进、操作简便、有效成分含量高的制备方法。

本发明的具体技术方案如下：

一种预防或治疗老年痴呆的中药组合物，其包括如下重量份的原料药：人参2-30份、川芎2-30份、三七1-15份、水蛭1-15份、冰片0.1-1份、麝香0.01-0.03份。

作为优选，该治疗老年痴呆的中药组合物包括以下重量份的原料药：人参5-25份、川芎5-25份、三七2.5-12.5份、水蛭2.5-12.5份、冰片0.25-2.5份、麝香0.025-0.075份。

更进一步优选，该治疗老年痴呆的中药组合物包括以下重量份的原料药：人参20份、川芎20份、三七10份、水蛭10份、冰片0.5份、麝香0.02份。

该治疗老年痴呆的中药组合物可由原料药的药粉、或原料药的水或乙醇提取物为活性成分，加上药学上常用的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

以上所述预防或治疗老年痴呆的中药组合物制剂的制备方法为：

1)按比例称取以上六味药；

2)将水蛭粉碎成粗粉，加8-12倍量水煎煮，煎煮1-3次，每次0.5-1.5小时，合并水煎液，滤过，浓缩至相对密度为1.0-1.3，加乙醇至质量浓度为50％-80％，静置24-48小时，滤过，取药渣备用；

3)将人参、川芎、三七三味药加6-10倍量50wt％-80wt％乙醇回流提取1-3次，每次0.5-1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.0-1.3，将上述药渣与浓缩液混溶，喷雾干燥(喷雾干燥时，进口温度180℃，出口温度80℃)，制成干膏粉；

4)将冰片和人工麝香共研(麝香与冰片采用加液研磨法粉碎，研磨时，轻研冰片，重研麝香)，加入干膏粉和适量辅料，混匀，按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的剂型，包括不限于片剂、散剂、丸剂、颗粒剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂或口服液体制剂。

所述制剂中，原料药的药粉、或原料药的水或乙醇提取物与辅料的重量之比为1：0.1-0.5。

作为优选，以上所述预防或治疗老年痴呆的中药组合物制剂的制备方法为：

1)按比例称取各原料药；

2)将称取的水蛭粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮，煎煮2次，每次1小时，合并水煎液，滤过，浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃)，加乙醇至质量浓度为60％，10℃以下静置36小时，滤过，取沉淀备用；

3)将人参、川芎、三七三味药加6倍量60％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，将上述药渣与浓缩液混溶，喷雾干燥，制成干膏粉；

4)将冰片和人工麝香共研，加入干膏粉和适量辅料，混匀，按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的剂型，包括不限于片剂、散剂、丸剂、颗粒剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂或口服液体制剂。

《中国药典》指出：粗粉指能全部通过二号筛，但混有能通过四号筛不超过40％的粉末。

本发明的积极效果体现在：

(一)、本发明中药组合物具有很好的活气行血、醒脑开窍的作用，本发明组合物制剂治疗老年痴呆具有良好的效果，临床表现显著的改善患者学习、记忆、认知等能力。

(二)、本发明对影响该中药组合物中人参、川芎、三七提取效果的乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数进行了考察，并结合工业化大生产需求，优选了人参、川芎、三七的最佳提取工艺，该工艺合理、稳定、可行、有效成分转移率高。

(三)、本发明以抗凝血酶活性和水蛭干膏收率的综合评分作为评价该中药组合物中水蛭提取工艺的指标，优选了水蛭提取工艺的最佳条件，该提取工艺确保水蛭有效组分提取完全，具有效率高、时间短、能耗低等优点。

(四)、本发明提供该中药组合物制备方法，该制备方法操作简单，稳定性好，微生物容易控制，服用、贮藏方便，运输成本低，制剂工艺能实现工业化生产和机械包装，可利用先进设备和技术，产品质量高。

附图说明：

图1为实施例1中所述阿魏酸标准曲线图

图2为实施例1中所述人参皂苷Rg1的标准曲线图

图3为实施例1中所述人参皂苷Rb₁的标准曲线图

图4为实施例1中所述人参皂苷Re的标准曲线图

图5为实施例1中所述三七皂苷R₁的标准曲线图

图6为实施例5中各实验组大鼠在定向航行试验中第5天典型的原始游泳轨迹表示图，注：图中小圆代表大鼠游泳的起点位置，大圆代表逃逸平台的位置。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。

实施例1：

一、本发明组合物中人参、三七、川芎提取工艺的优选

1、实验材料

人参药材、三七药材、川芎药材，阿魏酸对照品(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110773-201313)，人参皂苷Rg₁(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110703-201529)、人参皂苷Re(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110754-201525)、人参皂苷Rb₁(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110704-201424)、三七皂苷R₁(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110745-201318)；高效液相色谱仪(Aglient1200)HPLC色谱柱(Global Chromatography SP-120-5-C18-BI0(4.6×250mm))，水为重蒸水，乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2、实验方法

正交试验设计优选提取工艺

本发明组合物中人参、川芎、三七的主要有效成分均为脂溶性成分，通过预试验考察及文献查阅，确定本发明中药组合物中人参、三七、川芎三味药材采用乙醇回流提取。影响乙醇回流提取的因素主要有乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数。针对以上四个因素，每个因素各取三个水平，以L9(3⁴)表进行正交试验，正交试验因素水平表见表1。按本发明中药组合物中人参、三七、川芎的重量比，精密称取各药材，按正交试验因素水平表进行试验，以总皂苷含量、阿魏酸含量和干膏收率作为评价指标。优选本发明组合物中人参、三七、川芎乙醇回流的提取工艺条件。

表1正交试验因素水平表

阿魏酸含量测定方法

2.2.1色谱条件

色谱柱：Global Chromatography SP-120-5-C18-BI0(4.6×250mm)，5μm；流动相：乙腈-1％醋酸溶液(30﹕70)；流速：1ml/min；进样量：10ul；柱温：30℃；检测波长：321nm；理论塔板数按阿魏酸峰计算应不低于4000。

2.2.2对照品溶液的制备

取阿魏酸对照品(批号：110773-201313)适量，精密称定，置10ml量瓶中，加70％甲醇制成每1ml含33.4ug的溶液，即得。

2.2.3供试品溶液的制备

精密量取正交试验9份样品液10ml，置于坩埚中水浴挥干，残渣加70％甲醇适量溶解，转移至10ml量瓶中，用70％甲醇稀释至刻度，微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。

2.2.4阴性溶液的制备

按本发明组合物各药材重量比称取人参和三七药材饮片适量，加8倍量的70％乙醇，提取1次，每次1小时，照供试品溶液制备方法制备，即得。

2.2.5标准曲线的制备

精密称定阿魏酸对照品2.51mg，置10ml量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，备用；分别吸取0.1、0.3、0.6、1.2、2.4、4.8ml的对照品溶液(浓度为0.251mg/ml)，置10ml量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度得2.51、7.53、15.06、30.12、60.24、120.48ug/ml的对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量(ug)为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y＝52.383X-10.201，r＝0.9999(n＝6)。结果表明，阿魏酸进样量在0.0251～1.2048μg范围内与峰面积具有良好线性关系。标准曲线见图1。

2.2.6阿魏酸专属性的考察

精密吸取对照品溶液和阴性溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，由结果分析，阴性溶液无干扰。

2.2.6样品的测定

精密吸取对照品溶液10μl，供试品溶液5μl，分别注入高效液相色谱仪，测定，记录峰面积。

2.3总皂苷含量的测定

2.3.1色谱条件

色谱柱：Global Chromatography SP-120-5-C18-BI0(4.6×250mm)，5μm；流动相：以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表的规定进行梯度洗脱；流速：1ml/min；柱温：25℃；检测波长：203nm；理论塔板数按三七皂苷R₁峰计算应不低于4000。

表2流动相洗脱条件

2.3.2对照品溶液的制备

取人参皂苷Rg₁对照品、人参皂苷Rb₁对照品、人参皂苷Re及三七皂苷R₁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg₁0.9359mg、人参皂苷Rb₁0.4277mg、人参皂苷Re0.1386mg、三七皂苷R₁的0.1285mg混合溶液，即得。2.3.3供试品溶液的制备

精密量取正交试验9份样品液10ml，置于坩埚中水浴挥干，残渣加甲醇适量溶解，转移至10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。

2.3.4阴性溶液的制备

按处方量比例称取川芎药材饮片(10g)，加8倍量的70％乙醇，提取1次，每次1小时，照供试品溶液制备方法制备，即得。

2.3.5标准曲线的制备

分别取人参皂苷Rg₁对照品25.09mg、人参皂苷Rb₁对照品20.02mg、人参皂苷Re对照品10.20mg、三七皂苷R₁对照品10.41mg，精密称定，置5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，备用；分别精密吸取三七皂苷R₁对照品溶液和人参皂苷Re对照品溶液各0.05、0.15、0.25、0.5、1ml，人参皂苷Rg1对照品溶液0.1、0.4、0.8、1.2、1.6ml，人参皂苷Rb1对照品溶液0.1、0.25、0.5、0.75、1ml，置5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制备成不同浓度下的混合对照品溶液。分别精密吸取上述不同浓度的混合对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量(ug)为横坐标峰，峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程。人参皂苷Rg₁：Y＝254.6797X+16.6542，r＝0.9996(n＝5)；人参皂苷Rb₁：：Y＝223.9737X+3.7854，r＝0.9996(n＝5)；人参皂苷Re：Y＝162.9548X-4.9477，r＝0.9997(n＝5)；三七皂苷R₁：Y＝186.0201X-56.4761，r＝0.9991(n＝5)。结果表明，人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Re、三七皂苷R₁的进样量分别在0.9374～14.9978、0.7680～7.6796、0.1891～3.7822、0.1957～3.9142μg范围内与峰面积具有良好线性关系。标准曲线分别见图2、3、4、5。

2.3.6总皂苷专属性的考察

精密吸取混合对照品溶液和阴性溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，由结果分析，阴性溶液无干扰。

2.3.7样品的测定

精密吸取混合对照品溶液10μl，供试品溶液10μl，分别注入高效液相色谱仪，测定，记录峰面积。

2.4浸膏收率的测定

方法：精密量取定容后供试品提取液各25ml，置干燥至恒重的蒸发皿，低温蒸干，于105℃干燥3小时，取出，迅速移入干燥器内冷却0.5小时，取出并迅速精密称重，计算浸膏收率。

3结果与分析

以总皂苷含量为0.4、阿魏酸含量为0.4和浸膏收率为0.2的权重系数进行加权评分，试验结果、试验方差分析见表3、4。

表3 L₉(3⁴)醇提工艺正交试验结果表

注：总皂苷含量评分＝总皂苷含量/最大总皂苷含量×100×0.4；阿魏酸含量评分＝阿魏酸含量/最大阿魏酸含量×100×0.4；干膏收率评分＝干膏收率/最大干膏收率×100×0.2；综合评分＝绿原酸含量评分+干膏收率评分。

表4方差分析表

方差来源	离差平方和	自由度	方差	F值	显著性
						A	4067.23	2	2033.62	84.25	*
B	1168.75	2	584.375	24.21	*
						C	48.28	2	24.14	1
D	2211.61	2	1405.81	45.81	*

注：F0.05(2,2)＝19.0，F0.01(2,2)＝99.0，*表明有显著性影响。

结果表明：根据综合评分结果，由直观分析可得影响提取效果的因素大小为：提取次数(A)＞提取时间(D)＞乙醇浓度(B)＞乙醇用量(C)；对试验数据进行方差分析结果表明，提取次数、提取时间、乙醇浓度对总皂苷含量、阿魏酸含量及浸膏收率有显著性影响，乙醇用量对总皂苷含量、阿魏酸含量及浸膏收率无显著性影响。综合直观分析和方差分析结果，结合工业化大生产节约能效，降低生产成本考虑，确定最佳提取工艺为A₃B₁C₁D₃，即加6倍量60％乙醇，提取3次，每次1.5小时。

4验证试验

按本发明组合物重量比称取人参、三七、川芎药材，共25g，照优选的醇提工艺进行验证，结果见表5。

表5醇提工艺验证结果表

编号	总皂苷含量(mg)	阿魏酸含量(mg)	浸膏收率(％)
				1	856.12	20.481	25.58
2	852.33	20.070	25.36
				3	871.75	19.809	25.81
平均值	860.07	20.120	25.59

从上述验证试验可见，所筛选的工艺，稳定可行。

二、本发明组合物中水蛭提取工艺的优选

1、实验材料

水蛭药材、凝血酶对照品(天津生物化学制品厂，批号：140625-201310，510单位/瓶)、纤维蛋白原(卫生部上海生物制品研究所出品)，其余试剂均为分析纯。

2、实验方法

2.1正交试验设计优选提取工艺

水蛭为本发明组合物中的动物药，具有破血痛经，逐淤消癥的功效，水蛭主要的药效成分为水蛭素、吻蛭素、肝素和组织胺等多种水溶性成分，不易溶于极性小的溶剂。本试验结合预试验和文献查阅。试验采用水煎煮提取法，以抗凝血酶活性和干膏收率的综合评分作为评价指标，通过L₉(3⁴)正交实验设计，考察水提取工艺的煎煮次数，加水量、煎煮时间及浸泡时间，正交试验因素水平表见表5，优选水蛭水提工艺条件。

表5水蛭水提工艺正交试验因素水平表

2.2抗凝活性效价的测定

2.2.1测定方法

取水蛭提取液适量，离心，精密量取上清液100μl置玻璃试管中，加入含0.5％牛纤维蛋白原(以凝固物记)的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液(临用配制)200μl，搅匀，置水浴中(37℃+0.5℃)温浸5分钟，滴加入每1ml中含10单位的凝血酶溶液(临用配置，每分钟5μl，轻轻搅匀)，直至针尖可以挑出絮状凝固物，记录消耗凝血酶溶液的体积，按下式计算：

U＝C₁V₁/C₂V₂

式中U—每1g含凝血酶活性单位，U/g；

C₁—凝血酶溶液的浓度，U/ml；

C₂—供试品溶液的浓度，g/ml；

V₁—消耗凝血酶溶液的体积，μl；

V₂—供试品溶液的加入量，μl；

中和一个单位的凝血酶的量，为一个抗凝血酶活性单位。

2.2.2凝血酶溶液配制

取凝血酶对照品(批号：140625-201310，510单位/瓶)适量，加生理盐水制成每1ml含10.2单位的溶液，即得。

2.2.3(牛)纤维蛋白原的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液配制

取0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液25ml与0.1mol/L盐酸溶液40ml，加水至100ml，调节pH值至7.4；取(牛)纤维蛋白原对照品(批号：)适量，精密称定，加已配制好的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液制成0.5％(牛)纤维蛋白原(以凝固物计)的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液。

2.3浸膏收率的测定

精密量取正交试验中供试品提取液各25ml，置干燥至恒重的蒸发皿，低温蒸干，于105℃干燥3小时，取出，迅速移入干燥器内冷却0.5小时，取出并迅速精密称重，计算浸膏收率。

2.3.1供试品溶液的制备

称取水蛭药材粗粉5g，平行9份，在80℃条件下，按正交试验因素水平表进行提取，滤过，定容至200ml，即得。

2.3.2样品的测定

取各份煎煮液，取上清液作为供试品溶液。照“2.2”项下方法测定其抗凝活性U。

3试验结果与分析

以抗凝活性为80，干膏收率为20的权重系数进行加权评分，试验结果、方差分析见表6、7。

表6水蛭水提工艺正交试验结果表

注：抗凝活性评分＝抗凝活性/最大最大抗凝活性×80；浸膏收率评分＝浸膏收率/最大浸膏收率×20；综合评分＝抗凝活性评分+浸膏收率评分

表7水蛭水提工艺正交试验方差分析表

方差来	离差平方和	自由度	方差	F值	显著性
						A	6912.69	2	3456.34	19.84	<0.05
B	715.73	2	357.86	2.05
						C	1751.65	2	875.82	5.03
D	348.40	2	174.20	1

注：临界值F0.05(2,2)＝19

结果表明：影响提取效果的因素大小为：A＞C＞B，A因素有显著性差异，B和C因素没有显著性差异，综合直观分析和方差分析结果，结合工业化大生产节约能效，降低生产成本考虑，确定最佳提取工艺为A₂B₂C₂，即加10倍量水煎煮2次，每次1小时。

4验证试验

称取水蛭药材5g，平行3份，按筛选的水提工艺条件提取，进行工艺验证，结果见表8。

表8水提工艺正交试验验证结果表

编号	抗凝活性U(U/g)	干膏收率(％)
			1	130.56	23.45
2	122.40	23.89
			3	130.56	23.28
平均值	127.84	23.54

结论：由表4可知，平均抗凝活性为127.84，水浸出物收率为23.54％。说明该工艺条件稳定可行。

实验例2：本发明组合物片剂的制备

人参2-30份、川芎2-30份、三七1-15份、水蛭1-15份、冰片0.1-1份、麝香0.01-0.03份

按比例称取以上六味药，然后将水蛭粉碎成粗粉，加8-12倍质量水煎煮，煎煮1-3次，每次0.5-1.5小时，合并水煎液，滤过，浓缩至相对密度为1.0-1.3，加乙醇至浓度为50-80％，静置24-48小时，滤过，取药渣备用；人参、川芎、三七三味加6-10倍量50％-80％乙醇回流提取1-3次，每次0.5-1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.0-1.3适量，将上述药渣与浓缩液混溶，喷雾干燥，制成干膏粉；冰片和人工麝香共研，加入干膏粉和适量辅料，混匀，制成颗粒，压制1000片，包薄膜衣，即得。

实验例3：本发明组合物颗粒剂的制备

人参2-30份、川芎2-30份、三七1-15份、水蛭1-15份、冰片0.1-1份、麝香0.01-0.03份

按比例称取以上六味药，然后将水蛭粉碎成粗粉，加8-12倍质量水煎煮，煎煮1-3次，每次0.5-1.5小时，合并水煎液，滤过，浓缩至相对密度为1.0-1.3，加乙醇至浓度为50-80％，静置24-48小时，滤过，取药渣备用；人参、川芎、三七三味加6-10倍量50％-80％乙醇回流提取1-3次，每次0.5-1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.0-1.3适量，将上述药渣与浓缩液混溶，喷雾干燥，制成干膏粉；冰片和人工麝香共研，加入干膏粉和适量辅料，混匀，制成颗粒，干燥，即得。

实验例4：本发明组合物滴丸剂的制备

人参2-30份、川芎2-30份、三七1-15份、水蛭1-15份、冰片0.1-1份、麝香0.01-0.03份

按比例称取以上六味药，然后将水蛭粉碎成粗粉，加8-12倍质量水煎煮，煎煮1-3次，每次0.5-1.5小时，合并水煎液，滤过，浓缩至相对密度为1.0-1.3，加乙醇至浓度为50-80％，静置24-48小时，滤过，取药渣备用；人参、川芎、三七三味加6-10倍量50％-80％乙醇回流提取1-3次，每次0.5-1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.0-1.3适量，将上述药渣与浓缩液混溶，喷雾干燥，制成干膏粉；冰片和人工麝香共研，加入干膏粉和适量辅料，混匀，滴制成滴丸，包薄膜衣，即得。

实验例5：Morris水迷宫行为学测试本发明组合物制剂对老年痴呆模型大鼠学习记忆能力的影响

1、实验材料

1.1实验仪器

BN-Morris水迷宫(徐州博纳信息技术有限公司)，动物行为学视频分析系统(V2.0)，CHA-S恒温振荡器(国华企业)；1810A摩尔原子型超纯水器(上海摩勒科学仪器有限公司)，ME204E型电子天平(德国Mettler Toledo)

1.2实验动物

SPF级SD大鼠，雌雄各半，体重200～220g，由成都达硕生物科技有限公司提供，动物合格证号SCXK(川)2013-24；实验场地为成都中医药大学药理实验室(国家中医药管理局三级实验室，编号TCM2032043)。

1.3药物与试剂

本发明组合物制剂(按实施例4方法制备)；缺失人参的中药组合物制剂(按实施例4方法制备不含人参的中药组合物制剂)；缺失川芎的中药组合物制剂(按实施例4方法制备不含川芎的中药组合物制剂)；安理申(卫材(中国)药业有限公司，批号1501019)；Aβ_25－35(美国sigma公司，批号A4559)

2、实验方法

2.1Aβ老化

将Aβ_25－35溶于生理盐水中(浓度为2μg/μL)，于37℃恒温箱孵育72h老化备用。

2.2老年痴呆大鼠模型制备

将SD大鼠用10％水合氯醛麻醉(3mL/kg,ip)后，固定在脑立体定位仪上，用碘伏和酒精常规消毒头皮后，用无菌手术刀在大鼠头皮正中线处切开长约1.5cm纵行切口,暴露前囟,钝性分离皮下组织及骨膜，然后根据大鼠脑立体定位图谱，先在大鼠前囟后3mm，右侧2mm处用无菌牙科钻钻开颅骨，用5μL微量进样器自颅骨开孔处进入大鼠右侧海马背部，进针深度3.4mm，缓慢匀速注射5μL凝聚态Aβ_25－35，注射速度为1μL/min，注射完毕，留针2min，缓慢撤针；同法在左侧海马背部注射5μL凝聚态Aβ_25－35，造成痴呆大鼠模型。

另取同批次SD大鼠，同法操作，两侧海马背部各注射5μL生理盐水作为假手术组，术后饲养一周。

2.3分组及给药

将存活的70只模型动物按体重随机均分为模型对照组、阳性对照组和本发明组合物低、中、高剂量组及缺失人参组、缺失川芎组，每组10只；另取同批次10只假手术大鼠作为空白对照组。造模后，缝合创口，消毒，造模一周后，除空白对照组和模型对照组大鼠通过灌胃给予等体积的生理盐水外，阳性对照组按1.4mg/kg计灌胃给予安理申；本发明组合物低剂量组按0.9g/kg计灌胃给予本发明组合物；本发明组合物中剂量组按1.8g/kg计灌胃给予本发明组合物；本发明组合物高剂量组按3.6g/kg计灌胃给予本发明组合物；缺失人参组按1.8g/kg计灌胃给予缺失人参的中药组合物；缺失川芎组按1.8g/kg计灌胃给予缺失川芎的中药组合物；各实验组大鼠按给药体积为10mL/kg体重，连续给药30天。

2.4学习记忆能力测试

给药第23天后开始进行Morris水迷宫训练。每次训练四个象限，观察记录大鼠在60s内找到逃逸平台所用的时间，即定向航行试验中大鼠找到逃逸平台的平均逃避潜伏期，计算各实验组大鼠训练1、3、5天后平均逃避潜伏期。训练第5天后，通过水池上方固定的摄像头记录大鼠找到隐蔽平台的活动，进行图像采集并用动物行为学视频分析系统进行处理，规划出各实验组大鼠在定向航行试验中第5天典型的原始游泳轨迹。

给药第30天进行空间搜索试验。具体方法为撤除平台后，大鼠凭空间记忆寻找平台的位置，记录60s内大鼠跨平台次数。在整个测试过程中，水池周围参照物和实验者本身的位置保持不变。

3、实验结果

定向航行试验中各实验组大鼠找到平台的平均逃避潜伏期结果表明：模型对照组较空白对照组相比，第3、5天逃避潜伏期明显延长(P<0.05)；本发明组合物低、中、高剂量组在训练第5天后逃避潜伏期显著缩短，且与模型对照组比较，本发明组合物中剂量组具有显著性差异(P<0.05)，本发明组合物低、高剂量组具有极显著性差异(P<0.01)，显示本发明组合物可明显改善SD大鼠的学习记忆和空间定位以及认知能力；缺失人参的中药组合物组及缺失川芎的中药组合物组大鼠在训练第5天后逃避潜伏期，与模型对照组相比无显著改变，显示缺失人参或川芎的中药组合物无明显改善大鼠空间学习和记忆功能。具体见表1。

定向航行试验中各实验组大鼠第5天典型的原始游泳轨迹结果表明：模型对照组较空白对照组相比，模型对照组大鼠在四个象限内游泳多次后未找到逃逸平台，空白对照组大鼠直接从第二象限游向位于第三象限的逃逸平台，说明模型对照组大鼠记忆力严重减退，反应迟慢，验证了本次实验造模成功；本发明组合物低、中、高剂量组大鼠在训练第5天后均成功找到逃逸平台，且与模型对照组大鼠比较，本发明组合物低、中、高剂量组大鼠从游泳起点位置到逃逸平台的路线均较明确，说明本发明组合物低、中、高剂量组大鼠学习、记忆、认知能力优于模型对照组大鼠，证明本发明组合物低、中、高剂量组大鼠的老年痴呆均得到了明显改善；缺失人参或川芎的中药组合物组大鼠在四个象限内游泳多次后才找到逃逸平台，与模型对照组相比无明显改善效果，说明缺失人参或川芎的中药组合物无明显改善大鼠空间记忆及认知能力。具体见图6。

空间探索试验结果表明：与空白组相比，模型组大鼠在规定时间内穿越站台次数明显减少(P<0.05)；与模型对照组相比，本发明组合物制剂低、中、高剂量组能显著提高大鼠穿越站台次数(P<0.01)，提高大鼠记忆能力；与模型对照组相比，缺失人参或川芎的中药组合物组无明显改善大鼠记忆能力。具体见表9。

表9各实验组对Aβ致痴呆大鼠学习记忆能力影响(n＝10,)

注：模型对照组与空白对照组相比，*表示P<0.05，**表示P<0.01；各试验组与模型对照组比较，#表示P<0.05，##表示P<0.01。

综上，本发明组合物明显优于相同剂量下缺失部分药物的中药组合物，说明本发明组合物中各组分配伍得当，具有协同增效的作用。本发明组合物中各组分联合使用，可充分发挥药物的多效性以适应老年痴呆的复杂病情，有助于提高疗效，减少毒副作用，用于气虚血弱，痰阻清窍，淤血阻络而致的记忆力严重减退，行动不便，步履不稳，情感淡漠，精神萎靡或易怒，甚至不识家人，不知回家道路等症状具有良好的治疗效果。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (4)

1.一种预防或治疗老年痴呆的中药组合物，其特征在于包括如下重量份的原料药：人参2-30份、川芎2-30份、三七1-15份、水蛭1-15份、冰片0.1-1份、麝香0.01-0.03份。

2.根据权利要求1所述预防或治疗老年痴呆的中药组合物，其特征在于包括以下重量份的原料药：人参5-25份、川芎5-25份、三七2.5-12.5份、水蛭2.5-12.5份、冰片0.25-2.5份、麝香0.025-0.075份。

3.根据权利要求2所述预防或治疗老年痴呆的中药组合物，其特征在于包括以下重量份的原料药制备而成的制剂：人参20份、川芎 20份、三七10份、水蛭10份、冰片0.5份、麝香0.02份。

4.根据权利要求1-3中任意一项权利要求所述预防或治疗老年痴呆的中药组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）先按比例称取以上六味药；

2）将水蛭粉碎成粗粉，加8-12倍量水煎煮，煎煮1-3次，每次0.5-1.5小时，合并水煎液，滤过，浓缩至相对密度为1.0-1.3，加乙醇至质量浓度为50%-80%，静置24-48小时，滤过，取药渣备用；

3）将人参、川芎、三七三味药加6-10倍量50wt%-80wt%的乙醇回流提取1-3次，每次0.5-1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.0-1.3，将上述药渣与浓缩液混溶，喷雾干燥，制成干膏粉；

4）将冰片和人工麝香共研，然后加入干膏粉和辅料，混匀，按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的剂型，包括但不限于片剂、散剂、丸剂、颗粒剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂或口服液体制剂。