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CN104651262B - 一种植物乳杆菌冻干制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种植物乳杆菌冻干制剂及其制备方法和应用 Download PDF

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CN104651262B CN201410790557.XA CN201410790557A CN104651262B CN 104651262 B CN104651262 B CN 104651262B CN 201410790557 A CN201410790557 A CN 201410790557A CN 104651262 B CN104651262 B CN 104651262B
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Shanghai Bright Dairy and Food Co Ltd
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Abstract

本发明公开了一种植物乳杆菌冻干制剂及其制备方法和应用。所述制备方法包括以下步骤：(1)将植物乳杆菌接种于番茄汁培养基中进行培养，培养温度为35～40℃，培养6～12小时收集发酵液；(2)将所得发酵液pH值调整为6.5～7.5，冷冻干燥即得。该制备方法工艺简便，所得植物乳杆菌冻干制剂具有包含的菌株存活率高，而且其保存稳定性极佳的优点。

Description

一种植物乳杆菌冻干制剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种植物乳杆菌冻干制剂及其制备方法和应用。
背景技术
乳酸菌是人类肠道中的重要菌群，研究表明，乳酸菌可以使肠道菌群的构成发生有益变化，抑制腐败菌的繁殖，恢复人体肠道内菌群平衡，形成抗菌生物屏障，并消解腐败菌产生的毒素，清除肠道垃圾，维护人体健康。其次，乳酸菌的发酵代谢产物能减轻胃酸分泌，并且对肠壁神经有良好的刺激作用,能促进人体消化酶的分泌和肠道的蠕动,从而促进对蛋白质、单糖及钙、镁等营养物质的吸收利用,并预防便泌。另外，乳酸菌在改善乳糖不耐、降血脂、降血压、增强人体免疫力和抵抗力、抗衰老、抗肿瘤等方面都起着积极作用。
真空冷冻干燥技术是将湿物料或溶液在较低的温度(一般为－10℃～－50℃)下冻结成固态，然后在真空条件下使其中的水分不经液态直接升华成气态，最终使物料脱水的干燥技术，乳酸菌可通过这种干燥技术保持较高的生理特性，并可直接投入食品生产中。为了增强菌株在冻干过程中的存活性能，除了对冻干工艺的优化外，冻干保护剂的选择也是影响乳酸菌干燥过程中细胞稳定性的重要外部因素。目前，常用的冻干保护剂有海藻糖、乳糖、蔗糖、D-山梨醇、脱脂奶粉、糊精等，并且，现有乳酸菌冻干制剂的制备所涉及的配方相当复杂，一个配方往往会涉及多种冻干保护剂，复杂的配方对冻干保护剂原料的安全性提出了更高的要求，同时大大增加了在制备过程中污染的风险，进而对消费者构成了潜在的威胁。此外，随着生活质量的不断提高，与我们每个人日常生活息息相关的乳酸菌制剂所采用的冻干保护剂(糊精等)的食品安全问题越来越受到消费者的重视，然而目前市场上非常匮乏天然、安全、健康的植物乳杆菌冻干制剂。因此，寻找来源天然、操作简便、存活率高、保存稳定性佳的新型乳酸菌冻干制剂的制备方法将是未来乳酸菌冻干制剂制备的重要研究方向之一。
发明内容
因此，本发明为了解决目前缺乏来源天然、操作简便、益生菌存活率高、保存稳定性佳的植物乳杆菌冻干制剂的问题，提供了一种复合植物乳杆菌冻干制剂及其制备方法和应用。
本发明人发现，由于现有乳酸菌冻干制剂的制备所涉及的配方相当复杂，正如背景部分所述，包括海藻糖、乳糖、蔗糖、D-山梨醇、脱脂奶粉、糊精等等，由于冻干制剂的配方复杂，对植物乳杆菌冻干制剂原料的安全性提出了更高的要求，同时大大增加了在制备过程中产生污染的风险，进而对消费者构成了潜在的威胁，这种现状与当前消费者日益增强的食品安全意识构成了极大的矛盾和冲突，为了解决这一矛盾，发明人对乳酸菌特别是植物乳杆菌的培养方式，包括培养基的选择，发酵培养的温度、时间等一系列技术参数进行了认真的分析和筛选，最终得到了本发明所述的技术方案以及所得植物乳杆菌冻干制剂的原料来源天然，其制备方法工艺简便，所得植物乳杆菌冻干制剂中菌株存活率高、保存稳定性佳的技术效果。
因此，为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之一是：一种植物乳杆菌冻干制剂的制备方法，其包括以下步骤：
(1)将植物乳杆菌接种于番茄汁培养基中进行培养，培养温度为35～40℃，培养6～12小时收集发酵液；
(2)将步骤(1)所得发酵液pH值调整为6.5～7.5，冷冻干燥即得。
其中步骤(1)为：将植物乳杆菌接种于番茄汁培养基中进行培养，培养温度为35～40℃，时间为6～12小时收集发酵液。其中所述植物乳杆菌较佳地为植物乳杆菌(L.plantarum)ST-Ⅲ，植物乳杆菌ATCC14917，植物乳杆菌WCFS1，植物乳杆菌P8。上述几种植物乳杆菌均为现有技术，其制备方法为本领域常规制备方法，或者通过购买获得。其中所述番茄汁培养基为本领域常规的番茄汁培养基，所述的番茄汁培养基较佳地由包括由以下步骤组成的方法制备而得：清洗成熟番茄，去皮，榨汁，过滤后煮沸，4,000-12,000g离心10min，取上清，灭菌，冷却即得。其中所述的过滤较佳地为采用100目纱布过滤，煮沸的时间较佳地为1-10分钟，所述的灭菌温度较佳地为110-135℃，灭菌时间较佳地为10-30分钟。其中所述植物乳杆菌ST-Ⅲ的培养温度较佳地为37℃，时间较佳地为8小时。其中所述的培养温度较佳地为37℃，时间较佳地为8小时，所述植物乳杆菌的接种量较佳地为0.5％-5％，所述百分比为体积百分比。
其中步骤(2)为：将步骤(1)所得发酵液pH值调整为6.5～7.5，冷冻干燥即得。其中所述pH值的调整方法为本领域常规的pH值调整方法，较佳地为加入食品级碱调整pH值，所述食品级碱优选地是：Na2CO3、NaHCO3和NaOH中的一种或多种。所述pH值较佳地调整为7.0。
为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之二是：一种植物乳杆菌冻干制剂，其由以下包括以下步骤的方法制备而得：
(1)将植物乳杆菌接种于番茄汁培养基中进行培养，培养温度为35～40℃，时间为6～12小时收集发酵液；
(2)将步骤(1)所得发酵液pH值调整为6.5～7.5，冷冻干燥即得。
本发明所述植物乳杆菌冻干制剂中的植物乳杆菌活菌总数≥1010cfu/g。
为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之三是：一种如上所述植物乳杆菌冻干制剂在制备食品或膳食添加剂中的应用。
本发明所述的应用为本领域常规的应用，所述应用较佳地包括利用本发明所述复合植物乳杆菌冻干制剂制备发酵食品，乳制品中的用途，或者将所得复合植物乳杆菌冻干制剂作为膳食添加剂或营养添加剂等用途。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
1、本发明所述植物乳杆菌冻干制剂的制备方法采用的原料来源天然，与现有的冻干制剂技术所用的复合配方相比，制备获得的冻干制剂具有更高的食品安全性；
2、本发明所述植物乳杆菌冻干制剂的制备方法工艺简便，一方面省略了传统冻干制剂制备工艺中菌体收集的步骤，最大程度上减少了菌体收集时造成的机械损伤；另一方面，省去了后续冻干保护剂的复配与菌体重悬的步骤，大大降低了冻干制剂制备过程中污染的可能性。
3、采用本发明的制备方法获得的植物乳杆菌冻干制剂中菌株存活率高、保存稳定性佳，其可作为一种新型的制备方法应用于植物乳杆菌冻干制剂工业化生产及相关领域中，应用前景十分广阔。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。本发明中所述的室温是指进行试验的操作间的温度，一般为15-25℃。
实施例1植物乳杆菌冻干制剂的制备与存活率、活菌数的测定
1、材料与方法
番茄汁培养基的制备：成熟番茄清洗，去皮，榨汁机压榨，100目纱布过滤取汁，煮沸5min，8000g离心10min取上清，121℃灭菌20min，冷却至室温，即得无菌的番茄汁培养基。
种子(发酵菌种)的制备：将L.plantarum ST-Ⅲ(所述植物乳杆菌的保藏编号为CGMCC No.084，该菌株的来源请参见公开号为CN 102604833A的中国专利)的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于MRS固体培养基(Merck Co.德国)上，37℃厌氧培养24h取出，用接种环挑取单菌落放入1mL MRS液体(Merck Co.德国)，运用涡旋震荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，37℃厌氧培养24h取出，以2％(v/v)接种量接种于50mL MRS液体，37℃培养24h后，培养物9,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到发酵用的种子。
2、植物乳杆菌冻干制剂的制备
(1)将L.plantarum ST-Ⅲ常规条件发酵，即以接种量2％(v/v)无菌接种于无菌的番茄汁培养基，37℃培养8小时获得发酵液。
(2)将发酵液以无菌的食用级碱液调节pH至7.0，冷冻干燥后即得ST-Ⅲ的冻干制剂S1。
3、植物乳杆菌冻干制剂存活率、活菌数的测定
向上述方法制备的冻干制剂S1中加入无菌蒸馏水，使体积还原为冻干前的体积，采用MRS平板计数方法测定单位体积(通常为每毫升)内的植物乳杆菌活菌数。冻干粉活菌数(cfu/g)＝单位体积发酵液活菌数(cfu/mL)÷单位体积发酵液冻干后的质量(g/mL)，存活率(％)＝冻干制剂还原体积后单位体积内的活菌数÷冻干前发酵液单位体积内的理论活菌数×100。经测定，ST-Ⅲ冻干制剂S1的菌株存活率为95％，活菌数对数值为10.48(即3.05×1010cfu/g)。
实施例2植物乳杆菌冻干制剂的制备与存活率、活菌数的测定
1、材料与方法
番茄汁培养基的制备：同实施例1；种子(发酵菌种)的制备：同实施例1。
2、植物乳杆菌冻干制剂的制备
(1)将所得L.plantarum ST-Ⅲ的种子以常规条件发酵，即以接种量0.5％(v/v)无菌接种于无菌的番茄汁培养基，35℃培养12小时获得发酵液。
(2)将发酵液以无菌的食用级碱液调节pH至6.5，冷冻干燥后即得ST-Ⅲ的冻干制剂S2。
3、植物乳杆菌冻干制剂存活率、活菌数的测定
向上述方法制备的冻干制剂S2中加入无菌蒸馏水，使体积还原为冻干前的体积，采用MRS平板计数方法测定单位体积(通常为每毫升)内的植物乳杆菌活菌数。冻干粉活菌数(cfu/g)＝单位体积发酵液活菌数(cfu/mL)÷单位体积发酵液冻干后的质量(g/mL)，存活率(％)＝冻干制剂还原体积后单位体积内的活菌数÷冻干前发酵液单位体积内的理论活菌数×100。经测定，ST-Ⅲ冻干制剂S2的菌株存活率为93％，活菌数对数值为10.39(即2.48×1010cfu/g)。
实施例3植物乳杆菌冻干制剂的制备与存活率、活菌数的测定
1、材料与方法
番茄汁培养基的制备：同实施例1；种子(发酵菌种)的制备：同实施例1。
2、植物乳杆菌冻干制剂的制备
(1)将L.plantarum ST-Ⅲ常规条件发酵，即以接种量5％(v/v)无菌接种于无菌的番茄汁培养基，40℃培养6小时获得发酵液。
(2)将发酵液以无菌的食用级碱液调节pH至7.5，冷冻干燥后即得ST-Ⅲ的冻干制剂S3。
3、植物乳杆菌冻干制剂存活率、活菌数的测定
向上述方法制备的冻干制剂S3中加入无菌蒸馏水，使体积还原为冻干前的体积，采用MRS平板计数方法测定单位体积(通常为每毫升)内的植物乳杆菌活菌数。冻干粉活菌数(cfu/g)＝单位体积发酵液活菌数(cfu/mL)÷单位体积发酵液冻干后的质量(g/mL)。存活率(％)＝冻干制剂还原体积后单位体积内的活菌数÷冻干前发酵液单位体积内的理论活菌数×100。经测定，ST-Ⅲ冻干制剂S3中的菌株存活率为88％，活菌数对数值为10.14(即1.37×1010cfu/g)。
实施例4植物乳杆菌冻干制剂的制备与存活率、活菌数的测定
1、材料与方法
番茄汁培养基的制备：同实施例1。
种子(发酵菌种)的制备：将L.plantarum ATCC14917(从ATCC购买)、L.plantarumWCFS1(从TI Food and Nutrition,Wageningen,The Netherlands购买)、L.plantarum P8(由内蒙古农大提供)的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于MRS固体培养基(Merck Co.德国)上，37℃厌氧培养24h取出，用接种环挑取单菌落放入1mL MRS液体(Merck Co.德国)，运用涡旋震荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，37℃厌氧培养24h取出，以2％(v/v)接种量接种于50mL MRS液体，37℃培养24h后，培养物9,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到发酵用的种子。
2、植物乳杆菌冻干制剂的制备
(1)将上述植物乳杆菌的种子常规条件发酵，即以接种量2％(v/v)无菌接种于无菌的番茄汁培养基，37℃培养8小时获得发酵液。
(2)将发酵液以无菌的食用级碱液调节pH至7.0，冷冻干燥后即得各植物乳杆菌所对应的冻干制剂。
3、植物乳杆菌冻干制剂存活率、活菌数的测定
向上述方法制备的不同植物乳杆菌冻干制剂中加入无菌蒸馏水，使体积还原为冻干前的体积，采用MRS平板计数方法测定单位体积(通常为每毫升)内的植物乳杆菌活菌数。冻干粉活菌数(cfu/g)＝单位体积发酵液活菌数(cfu/mL)÷单位体积发酵液冻干后的质量(g/mL)。存活率(％)＝冻干制剂还原体积后单位体积内的活菌数÷冻干前发酵液单位体积内的理论活菌数×100。不同植物乳杆菌冻干制剂的菌株存活率、活菌数如表1所示。
表1不同植物乳杆菌冻干制剂的菌株存活率、活菌数
由表1可知，运用本发明所制备的不同植物乳杆菌冻干制剂普遍具有很高的存活率和很高的活菌数特性。
实施例5植物乳杆菌冻干制剂的制备与存活率、活菌数的测定
1、材料与方法
番茄汁培养基的制备：成熟番茄清洗，去皮，榨汁机压榨，100目纱布过滤取汁，煮沸1min，4000g离心10min取上清，110℃灭菌30min，冷却至室温，即得无菌的番茄汁培养基。
种子(发酵菌种)的制备：将L.plantarum ST-Ⅲ(所述植物乳杆菌的保藏编号为CGMCC No.084，该菌株的来源请参见公开号为CN 102604833A的中国专利)的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于MRS固体培养基(Merck Co.德国)上，37℃厌氧培养24h取出，用接种环挑取单菌落放入1mL MRS液体(Merck Co.德国)，运用涡旋震荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，37℃厌氧培养24h取出，以2％(v/v)接种量接种于50mL MRS液体，37℃培养24h后，培养物9,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到发酵用的种子。
2、植物乳杆菌冻干制剂的制备
(1)将L.plantarum ST-Ⅲ常规条件发酵，即以接种量0.5％(v/v)无菌接种于无菌的番茄汁培养基，37℃培养8小时获得发酵液。
(2)将发酵液以无菌的食用级碱液调节pH至7.0，冷冻干燥后即得ST-Ⅲ的冻干制剂S4。
3、植物乳杆菌冻干制剂存活率、活菌数的测定
向上述方法制备的冻干制剂S1中加入无菌蒸馏水，使体积还原为冻干前的体积，采用MRS平板计数方法测定单位体积(通常为每毫升)内的植物乳杆菌活菌数。冻干粉活菌数(cfu/g)＝单位体积发酵液活菌数(cfu/mL)÷单位体积发酵液冻干后的质量(g/mL)，存活率(％)＝冻干制剂还原体积后单位体积内的活菌数÷冻干前发酵液单位体积内的理论活菌数×100。经测定，ST-Ⅲ冻干制剂S4的菌株存活率为91％，活菌数对数值为10.34(即2.20×1010cfu/g)。
实施例6植物乳杆菌冻干制剂的制备与存活率、活菌数的测定
1、材料与方法
番茄汁培养基的制备：成熟番茄清洗，去皮，榨汁机压榨，100目纱布过滤取汁，煮沸10min，8000g离心10min取上清，135℃灭菌100min，冷却至室温，即得无菌的番茄汁培养基。
种子(发酵菌种)的制备：将L.plantarum ST-Ⅲ(所述植物乳杆菌的保藏编号为CGMCC No.084，该菌株的来源请参见公开号为CN 102604833A的中国专利)的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于MRS固体培养基(Merck Co.德国)上，37℃厌氧培养24h取出，用接种环挑取单菌落放入1mL MRS液体(Merck Co.德国)，运用涡旋震荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，37℃厌氧培养24h取出，以2％(v/v)接种量接种于50mL MRS液体，37℃培养24h后，培养物9,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到发酵用的种子。
2、植物乳杆菌冻干制剂的制备
(1)将L.plantarum ST-Ⅲ常规条件发酵，即以接种量5％(v/v)无菌接种于无菌的番茄汁培养基，37℃培养8小时获得发酵液。
(2)将发酵液以无菌的食用级碱液调节pH至7.0，冷冻干燥后即得ST-Ⅲ的冻干制剂S5。
3、植物乳杆菌冻干制剂存活率、活菌数的测定
向上述方法制备的冻干制剂S5中加入无菌蒸馏水，使体积还原为冻干前的体积，采用MRS平板计数方法测定单位体积(通常为每毫升)内的植物乳杆菌活菌数。冻干粉活菌数(cfu/g)＝单位体积发酵液活菌数(cfu/mL)÷单位体积发酵液冻干后的质量(g/mL)，存活率(％)＝冻干制剂还原体积后单位体积内的活菌数÷冻干前发酵液单位体积内的理论活菌数×100。经测定，ST-Ⅲ冻干制剂S5的菌株存活率为93％，活菌数对数值为10.39(即2.44×1010cfu/g)。
效果实施例1检测所得植物乳杆菌冻干制剂中菌株的稳定性
将实施例1-3制备的植物乳杆菌冻干制剂S1、S2、S3分装入无菌的铝箔袋，常温(25℃)保存6个月和12个月后，取出菌粉，采用MRS平板计数法测定活菌数，结果如表2所示。
表2植物乳杆菌ST-Ⅲ冻干制剂常温保存的稳定性测定
由表2可知，所有测试的ST-Ⅲ冻干制剂在常温保存12个月后，活菌数可稳定保持在108以上。
对比例1检测传统冻干制剂中菌株的存活率和活菌数
其中涉及的无菌番茄汁培养基以及微生物种子的制备方法与实施例1相同。
1、利用传统方法制备冻干制剂：
(1)传统冻干保护剂的制备：将7.06％脱脂乳、6.46％麦芽糖和6.70％谷氨酸钠溶解于蒸馏水中，115℃灭菌15分钟即得。(王世宽,洪玉程,袁先铃.响应面法优化植物乳杆菌和凝结芽孢杆菌冻干保护剂的研究[J].四川理工学院学报(自然科学版),2013,5:23-26.)
(2)将L.plantarum ST-Ⅲ常规条件发酵，即以接种量2％(v/v)无菌接种于无菌的番茄汁培养基，37℃培养8小时获得发酵液，将其8,000g离心10min获得ST-Ⅲ菌体沉淀。
(3)将ST-Ⅲ菌体沉淀重悬于相同体积的传统冻干保护剂，经冷冻干燥后即得ST-Ⅲ的冻干制剂P2。
2、传统冻干制剂中菌株存活率、活菌数的测定
取实施例1制备所得植物乳杆菌冻干制剂S1，将其命名为P1，作为对照。向上述方法制备的冻干制剂P1、P2中加入无菌蒸馏水，使体积还原为冻干前的体积，采用MRS平板计数方法测定单位体积(通常为每毫升)内的植物乳杆菌活菌数。冻干粉活菌数(cfu/g)＝单位体积发酵液活菌数(cfu/mL)÷单位体积发酵液冻干后的质量(g/mL)。存活率(％)＝冻干制剂还原体积后单位体积内的活菌数÷冻干前菌悬液单位体积内的理论活菌数×100。本发明冻干制剂和传统冻干制剂中植物乳杆菌的存活率、活菌数如表3所示。
表3本发明冻干制剂和传统冻干制剂中植物乳杆菌的存活率、活菌数
由表3可知，本发明方法所制备冻干制剂在存活率与活菌数方面均比传统方法有所提高。
对比例2检测常规发酵液制备的冻干制剂中菌株的存活率和活菌数
其中涉及的MRS培养基以及微生物种子的制备方法与实施例1相同。
1、利用常规发酵液制备冻干制剂：
(1)将L.plantarum ST-Ⅲ常规条件发酵，即以接种量2％(v/v)无菌接种于MRS培养基，37℃培养8小时获得发酵液，将其8,000g离心10min获得ST-Ⅲ菌体沉淀。
(2)将发酵液以无菌的食用级碱液调节pH至7.0，冷冻干燥后即得ST-Ⅲ的冻干制剂P3。
2、常规发酵液制备的冻干制剂中菌株存活率、活菌数的测定
以对比例1所述的冻干制剂P1和P2作为对照。向上述方法制备的冻干制剂P1、P2和P3中加入无菌蒸馏水，使体积还原为冻干前的体积，采用MRS平板计数方法测定单位体积(通常为每毫升)内的植物乳杆菌活菌数。冻干粉活菌数(cfu/g)＝单位体积发酵液活菌数(cfu/mL)÷单位体积发酵液冻干后的质量(g/mL)。存活率(％)＝冻干制剂还原体积后单位体积内的活菌数÷冻干前菌悬液单位体积内的理论活菌数×100。本发明冻干制剂、传统冻干制剂及常规发酵液制备的冻干制剂中植物乳杆菌的存活率、活菌数如表4所示。
表4本发明冻干制剂、传统冻干制剂及常规发酵液制备的冻干制剂中植物乳杆菌的存活率、活菌数
从表4的结果中可以得出，常规发酵液制备的冻干制剂比本发明所述制备方法所得膳食补充剂的菌株存活率和活菌数显著降低。
对比例3检测冻干制剂中植物乳杆菌的存活率和活菌数
其中涉及的无菌番茄汁培养基以及微生物种子的制备方法与实施例1相同。
将实施例中植物乳杆菌L.plantarum ST-Ⅲ的接种量，番茄汁培养基的pH值，培养温度，培养时间以及所得发酵液的pH值逐一进行调整，获得了以下一组不同方法制备的植物乳杆菌冻干制剂，并向上述方法制备的冻干制剂中加入无菌蒸馏水，使体积还原为冻干前的体积，采用MRS平板计数方法测定单位体积(通常为每毫升)内的活菌数。冻干粉活菌数(cfu/g)＝单位体积发酵液活菌数(cfu/mL)÷单位体积发酵液冻干后的质量(g/mL)，存活率(％)＝冻干制剂还原体积后单位体积内的活菌数÷冻干前的发酵液单位体积内的活菌数×100。检测所得结果如表5所示：
表5不同方法制备所得冻干制剂中植物乳杆菌的存活率和活菌数
从对表5所示的结果中可以得出，将所述植物乳杆菌冻干制剂的制备方法中菌种的接种量，培养温度，培养时间以及发酵液的pH调整到本发明之外的时候，所得冻干剂中微生物的存活率和活菌数产生了显著降低。
应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (9)

1.一种植物乳杆菌冻干制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将植物乳杆菌接种于番茄汁培养基中进行培养，培养温度为35～40℃，培养8～12小时收集发酵液；所述植物乳杆菌的接种量为0.5％-5％，所述百分比为体积百分比；
(2)将步骤(1)所得发酵液pH值调整为6.5～7.5，冷冻干燥即得。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的植物乳杆菌是植物乳杆菌(L.plantarum)ST-Ⅲ，植物乳杆菌ATCC14917，植物乳杆菌WCFS1或植物乳杆菌P8。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的番茄汁培养基由包括以下步骤的方法制备而得：清洗成熟番茄，去皮，榨汁，过滤后煮沸，4,000-12,000g离心10min，取上清，灭菌，冷却即得。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的过滤采用100目纱布过滤，煮沸的时间为1-10分钟，所述的灭菌采用110-135℃，灭菌10-30分钟。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的培养温度为37℃，时间为8小时。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的pH值调整为7.0。
7.一种植物乳杆菌冻干制剂，其特征在于，其是包括以下步骤的方法制备而得：
(1)将植物乳杆菌接种于番茄汁培养基中进行培养，培养温度为35～40℃，时间为8～12小时收集发酵液；所述植物乳杆菌的接种量为0.5％-5％，所述百分比为体积百分比；
(2)将步骤(1)所得发酵液pH值调整为6.5～7.5，冷冻干燥即得。
8.如权利要求7所述的植物乳杆菌冻干制剂，其特征在于，步骤(1)所述的培养温度为37℃，时间为8小时，所述植物乳杆菌的接种量为0.5％-5％，所述百分比为体积百分比。
9.一种如权利要求7或8所述植物乳杆菌冻干制剂在制备食品或膳食添加剂中的应用。
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