CN104105470A - 皮肤共生益生元剂和包含其的组合物的局部使用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种局部化妆品组合物，所述局部化妆品组合物包含皮肤病学可接受的载体和有效量的皮肤共生益生元以改善皮肤微生物组的健康状态、从而潜在地改善皮肤的状况和/或外观。通过使用第一体外测定法鉴定潜在的皮肤共生益生元剂；使用第二体外测定法或体内测定法确认经鉴定的益生元剂的益生元潜能；以及将经确认的益生元剂与皮肤病学可接受的载体混合以形成局部化妆品组合物，从而制备所述局部化妆品组合物。

Description

皮肤共生益生元剂和包含其的组合物的局部使用

技术领域

本文的组合物和方法一般地涉及针对皮肤共生微生物的益生元剂的使用。更具体地，本文的组合物和方法涉及局部施用的益生元剂。

背景技术

大多数人的皮肤和胃肠道(“GI”)定植着大量各种不同的微生物。定植一般开始于出生后不久，当婴儿暴露于母亲的微生物区系和通常导致向先前无菌的人类胎儿的定植的其他环境事件时。从初始的定植时起，人类的微生物组保持不断变化的状态，其中常驻微生物区系的组成响应于对宿主而言内在和外在的因素而随着时间变化。一般来讲，定植于人类宿主的微生物可被划分为三个不同的类别：(1)零星驻留并且通常不增殖的那些，(2)可增殖并与宿主在一起(例如，在皮肤上或在胃肠道中)相对短时期的那些，和(3)可永久性地定植于宿主的那些。

已经认识到，宿主的健康状态至少部分地依赖于宿主的微生物组的健康状态。例如，由通常存在于人类胃肠道中的某些微生物提供的健康有益效果已被很好地研究。相似地，不健康的或不平衡的胃肠道微生物组的不可取的效应也是为人们所熟知的。关于宿主的健康状态和宿主的胃肠道微生物组的健康状态之间关系的知识，已导致了市场定位于改善或维持人类胃肠道微生物组的一个或多个成员的健康状态的多种可商购获得的产品。这些可商购获得的产品一般被分类为益生菌、益生元或合生元。益生菌是所谓的“好”微生物(通常为细菌)，其活着被人摄入，使得所引入的微生物能够定植在此人的胃肠道中。常规的益生元是可摄取的成分，其选择性地支持有利地存在于胃肠道中的“好”微生物的生长或生存。常规的益生元通常是能够被胃肠道微生物组的一个或多个成员吸收、但不能被人类宿主消化的营养物质来源(例如，低聚果糖或低聚半乳糖)。合生元是益生元和益生菌的混合物。合生元的益生元部分向合生元的益生菌部分提供合适的营养物质来源，这据信提高了益生菌生存和定植的可能性。

不久前，关注转向了存在于人类皮肤上的微生物区系，以更好地了解驻留的微生物区系的健康状态和宿主的健康状态之间的关系。不出意料地，已经发现健康平衡的皮肤微生物组能够向人类宿主提供健康和/或美容有益效果，例如，通过刺激人类的免疫系统和/或产生定向减少不希望的微生物的定植的抗微生物物质。另一方面，破坏皮肤微生物区系的微妙平衡的扰动可以为宿主和/或微生物区系带来不可取的后果。例如，与痤疮丙酸杆菌的增殖相关联的游离脂肪酸副产物的增加的产生可促进粉刺的发展。就所存在的微生物的类型和多样性而言，人类皮肤微生物组的组成与胃肠道微生物组的组成是显著不同的。因此，毫无意外的是，至少部分地由于胃肠道和皮肤微生物组所存在于其中的显著不同的环境和可供用作食物的底物，胃肠道和皮肤微生物组的成员可利用不同的营养物质来源。

为人们所熟知的是，微生物的饮食需求从一个物种到另一个能够显著地变化，并且对于在特定微生物上表现出益生元活性的试剂，在不同的微生物上表现出没有益生元活性是并不稀奇的。例如，被设计用于胃肠道微生物区的益生元历史上是基于碳水化合物的材料，其作为食物用于驻留的糖分解驱动的微生物。但存在于人的皮肤上的微生物区系能够包括亲脂的生物，其不一定能被预期吸收碳水化合物。甚至可存在于皮肤上的糖分解的微生物也可能不利用与胃肠道微生物相比相同种类的碳水化合物，因为存在于皮肤上的微生物一般不暴露于与胃肠道中的微生物相比相同种类的碳水化合物。

尽管可能毫无意外的是，人类的胃肠道微生物组和皮肤微生物组的组成可显著地不同，也许更加令人意外的是相同微生物组的组成在个体之间也能够存在显著的变异度这一发现。提供健康、平衡的皮肤微生物组的健康和美容有益效果直到最近才被较好地了解。因此，仅鉴定了有限数量的合适的益生元剂供用于皮肤。此外，常规的益生元剂通常是口服施用的，例如，作为营养补充剂方案的部分。虽然口服摄取可能适合向胃肠道递送益生元剂，它可能不是向存在于皮肤上的微生物区递送益生元的最佳途径。

因此，存在通过提供在一种或多种皮肤共生微生物上表现出益生元活性的试剂来改善人类皮肤的健康状态和/或外观的需求。还存在对于向皮肤共生微生物递送益生元剂的改善的机制的需求。

发明内容

为了提供对上述问题中的一个或多个的解决，本文公开了用于改善皮肤的状况和/或外观的方法。所述方法包括向皮肤局部施用化妆品组合物。所述化妆品组合物包含皮肤病学可接受的载体和低聚半乳糖。

附图说明

图1示出了示例性的微生物组群体分布。

图2示出了基于体外测试，随着时间进程对测试试剂的微生物ATP响应。

图3示出了基于体外测试，随着时间进程对测试试剂的细菌计数响应。

图4示出了基于体外测试，对不同含量的测试试剂的微生物ATP响应。

图5示出了基于体外测试，对不同含量的测试试剂的细菌计数响应。

图6示出了基于体内测试，对测试试剂的需氧微生物的细菌计数响应。

图7示出了基于体内测试，对测试试剂的厌氧微生物的细菌计数响应。

图8示出了对多种组合物的体外的细菌ATP响应。

图9显示了就体内研究而言的测试计划表的部分。

图10示出了测试区域在人的前臂上的示例性位置。

具体实施方式

定义

“化妆品组合物”是指适于局部施用于哺乳动物皮肤和/或诸如毛发和指/趾甲的角质组织上的组合物，其旨在改善所述皮肤或角质组织的状况和/或外观，或以其他方式提供护肤有益效果。局部是指皮肤或其他角质组织的表面。化妆品组合物包括任何有色化妆品、指/趾甲、或护肤产品。“护肤”是指调节和/或改善皮肤状况。护肤有益效果的一些非限制性例子包括通过提供更光滑、更均匀的外观和/或感觉来改善皮肤外观和/或感觉；增加皮肤的一个或多个层的厚度；改善皮肤的弹性或回弹力；改善皮肤的紧致度；和减少皮肤的油性的、有光泽的、和/或无光泽的外观、改善皮肤的水合状态或保湿状态、改善细纹和/或皱纹的外观、改善皮肤肌理或光滑性、改善皮肤剥落或脱屑、使皮肤丰满、改善皮肤的屏障性能、改善皮肤色调、减少红色或皮肤斑点的外观、和/或改善皮肤的亮度、光彩、或半透明性。化妆品组合物的一些非限制性例子包括在面部留下颜色的产品，例如粉底、睫毛膏、遮瑕膏、眼线膏、眉彩、眼影、腮红、唇膏、润唇膏、化妆底粉、固体乳液粉盒等。“护肤产品”包括但不限于护肤霜、保湿剂、洗剂、和沐浴露。

“皮肤病学可接受的载体”是指可局部施用于皮肤或角质组织的载体。皮肤病学可接受的载体可以是很多种形式，例如，简单溶液(基于水的或基于油的)、固体形式(凝胶或棒状物)和乳液(油包水或水包油)。

“有效量”是指在指定条件下足够具有指定特性的指定组分的量。例如，益生元的有效量是指足够在体外和/或体内导致一种或多种所选择的微生物的代谢物含量和/或细菌计数的所期望的增加的量。

“胃肠道微生物”或“GI微生物”是定植(即，生活和繁殖)在人类消化道中的原核生物和/或真核生物。

“增加”是指高于基础含量或与对照相比的增加。例如，对于体内研究可以测定基础含量，而对照被用于体外测试。

“代谢”是指在微生物内部发生的任何化学反应。代谢包括合成代谢，即生物分子的合成(例如蛋白质合成和DNA复制)，和分解代谢，即生物分子的裂解。

“微生物裂解物”是指产生自微生物的裂解的细胞组分和试剂的混合物。“裂解”涉及通过处理(例如，化学的、生物学的、机械的、或热的处理)使细胞的细胞壁和/或细胞膜破裂，导致该细胞的生物学组分的一些或全部的释放的动作。

“微生物体”和“微生物”是同义的，是指细菌、真菌、和藻类。

“基本碳培养基”(“MCM”)是指用于支持微生物的有限生长(即，在24小时期间菌落形成单位数(“CFU”)小于0.2对数增长)和/或生存的物质的混合物，在其中碳是限制性资源。在某些实施例中，MCM可以是液体或凝胶的形式。由于基本的碳需求在不同微生物之间可能有差别，MCM中存在的碳的量也可以有差别。在某些实施例中，例如，MCM可以完全不含碳。在某些实施例中，MCM可以基本上不含碳(即，基于培养基的重量，小于0.001重量％)。在某些实施例中，MCM可包含0.001％至0.1％的碳。碳的量以存在的碳的摩尔份数或分子量％被测定。例如，葡萄糖按重量计为40％碳。

“低聚糖”是指包含少量(例如，二至十)的单糖的糖类聚合物。

“可口服摄取”是指旨在被置于口中并被吞下的组合物。

“PCR”是指聚合酶链反应，并且包括实时PCR、定量PCR(“QPCR”)、半定量PCR、以及它们的组合。

“益生元”是指能够作为营养物质被所选择的微生物(例如，皮肤共生微生物或胃肠道微生物)利用、能够诱导所选择的微生物的生长和/或活性、能够诱导所选择的微生物的复制、能够作为能量源被所选择的微生物利用、和/或能够被所选择的微生物用于生物分子(即，RNA、DNA、和蛋白质)的制备的任何物质或多种物质的组合。益生元的非限制性例子包括黏多糖、低聚糖如低聚半乳糖(“GOS”)、多糖、氨基酸、维生素、营养物质前体、收集的生物体的代谢产物、脂类、和蛋白质。为了确定测试试剂是否在一种微生物上表现出益生元活性，可能期望将该测试试剂与惰性缓冲液(例如，盐水溶液)或溶剂混合。合适的溶剂的非限制性例子包括二甲基亚砜(DMSO)、诸如甲醇和乙醇的醇类、和诸如水和培养基的水性溶液。

“复制”是指微生物向子细胞的分裂(例如，通过有丝分裂或二分裂)。

“皮肤”是指表皮、真皮、和下皮(即，皮下组织)、毛囊、毛根、毛球、甲床(爪床)的腹侧上皮层、皮脂腺和汗腺(外分泌的和顶泌的)中的一种或多种。

“皮肤共生微生物”是指在体外和/或体内可定植(即，在人类皮肤上生活和繁殖)或暂时栖息在人类皮肤上的原核生物和真核生物。示例性的皮肤共生微生物包括但不限于α变形菌(Alphaproteobacteria)、β变形菌(Betaproteobacteria)、γ变形菌(Gammaproteobacteria)、丙酸杆菌(Propionibacteria)、棒状杆菌(Corynebacteria)、放线菌(Actinobacteria)、梭菌(Clostridiales)、乳杆菌(Lactobacillales)、葡萄球菌(Staphylococcus)、芽孢杆菌(Bacillus)、微球菌(Micrococcus)、链球菌(Streptococcus)、拟杆菌(Bacteroidales)、黄杆菌(Flavobacteriales)、肠球菌(Enterococcus)、假单胞菌(Pseudomonas)、马拉色菌(Malassezia)、Maydida、德巴利酵母(Debaroyomyces)、和隐球菌(Cryptococcus)。

“局部的”及其变型是指旨在被直接施用于皮肤或其他角质组织的外表面的组合物。

冠词“一个”和“一种”被理解为指所指称的和/或描述的对象的一个或多个。

靶标微生物的选择

哺乳动物皮肤的表面通常包含很多种的微生物，其可以是物种与物种不同的、个体与个体不同的、和甚至是一个个体的位置与位置不同的。总之，这些微生物形成了微生物组。健康的皮肤微生物组将大体由皮肤共生微生物的平衡的集合组成。人类宿主的皮肤微生物组可包含帮助提升宿主皮肤的健康状态和/或外观的多种驻留微生物。但在一些情况下，某些不期望的微生物如病原性细菌、酵母和真菌可能企图定植在皮肤上。此类微生物的定植能够扰乱健康的微生物组的平衡。幸运的是，通常(并且有利地)存在于人类皮肤微生物组中的驻留微生物已进化出多种主动和被动的机制来抑制和/或防止不期望的微生物在皮肤上定植。被动机制的例子包括针对能够被不期望的微生物占据的生态位的竞争，以及消耗对于不期望的微生物的生长和增殖至关重要的营养物质。就主动的机制而言，合乎期望的微生物可产生抑制不期望的微生物的增殖、或甚至将它们彻底杀灭的代谢物。除了对不期望的微生物的抑制之外，还有越来越多的证据表明某些驻留微生物区系影响先天免疫。例如，已经证明皮肤微生物组的某些成员通过它们对脂类、蛋白质和碳水化合物的代谢产生有助于维持皮肤的“酸性壳层”的酸。

使微生物组保持处于健康、平衡的状态和/或使微生物组回到健康、平衡的状态的一种方法可以是向某些合乎期望的微生物提供足够的营养物质，以使其兴旺发展，并从而胜过和/或杀灭不期望的细菌。例如，可能有利的是在人们在它们的日常护肤方案中使用的组合物中包含一种或多种益生元剂。然而，这并不是一件容易的事，因为人与人之间微生物的组成的可变性可导致作为有效的益生元适合一个人的皮肤共生微生物的特定的试剂不适合另一个人。尽管在不同个体的皮肤共生微生物中可观察到广泛的可变性，已发现的确存在一些共性。例如，已发现杰氏棒状杆菌(Corynebacterium jeikeium(“C.jeikeium”))、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis(“S.epidermidis”))、和痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes(“P.acnes”))以不同的程度以可测量的量存在于人类的面部和前臂两者上。

图1示出了可存在于人的面部和前臂上的类似但不同的微生物群体。图1中示出的微生物是通过用磷酸盐缓冲盐水(“PBS”)润湿的无菌拭子对皮肤取样来分离的。图1中示出的QPCR分析利用了从拭子样品分离的DNA。如图1所示，葡萄球菌(Staphylococcus)、棒状杆菌(Corynebacterium)和丙酸杆菌(Propionibacterium)均存在于所取样的个体的面部和前臂上。因此，痤疮丙酸杆菌(P.acnes)、葡萄球菌(Staphylococcus)和棒状杆菌(Corynebacterium)在益生元筛选方法中的包括可能对于预测潜在的益生元剂的体内效应是尤其有用的。图1还示出了丙酸杆菌(Propionibacterium)相较于前臂更常见于面部，而就棒状杆菌(Corynebacterium)和葡萄球菌(Staphylococcus)而言似乎正好相反。因此，由于痤疮丙酸杆菌(P.acnes)对前臂和面部微生物组的组成的相应贡献，表现出对痤疮丙酸杆菌的益生元效应的试剂可能对皮肤健康和/或皮肤微生物组具有显著的影响。并且表现出对棒状杆菌(Corynebacterium)和葡萄球菌(Staphylococcus)的益生元活性的试剂可被用于提供特定于前臂和/或具有类似微生物组组成的其他身体区域的靶向皮肤健康有益效果。

就可有利地影响皮肤微生物组和/或皮肤健康的皮肤共生微生物而言，据信杰氏棒状杆菌(C.jeikeium)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)、和痤疮丙酸杆菌(P.acnes)提供皮肤健康和/或期望的微生物组有益效果，通过向这些微生物提供具有益生元潜能的化合物可使它们增加。具体地，已经证明杰氏棒状杆菌(C.jeikeium)产生螯合铁的铁载体。杰氏棒状杆菌(C.jeikeium)还采用特化的机制来捕集锰，二者均是某些不期望的微生物的生长所必需的。

表皮葡萄球菌(S.epidermidis)据信在刺激皮肤的免疫系统中起着主动作用，例如，通过影响经Toll样受体(“TLR”)信号的角质细胞的先天免疫应答。此外，表皮葡萄球菌(S.epidermidis)据信占据了宿主细胞上还被诸如金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的更具毒性的微生物识别的受体。另外，表皮葡萄球菌(S.epidermidis)产生包含羊毛硫氨酸的抗菌肽(有时被称为细菌素)，已知其表现出对某些种的有害细菌的抗菌特性。此类肽的例子包括：表皮素(epidermin)、epilancin K7、epilancin15X Pep5、和葡萄球菌素(staphylococcin)1580。由表皮葡萄球菌(S.epidermidis)产生的其他肽反作用于种内和种间的竞争者。上述肽有效地抗金黄色葡萄球菌(Streptococcus aureus)、A组链球菌(streptococcus)、和酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)。

痤疮丙酸杆菌(P.acnes)是共生的、非孢子的、杆状(棒状)的、革兰氏阳性的细菌，其存在于人体的多种位置，包括皮肤、口、泌尿道和大肠的区域。痤疮丙酸杆菌(P.acnes)能够消耗皮肤的油并产生诸如短链脂肪酸和丙酸的副产物，这些副产物已知有助于维持健康的皮肤pH和屏障性能。诸如痤疮丙酸杆菌(P.acnes)的丙酸杆菌还产生细菌素和细菌素样的化合物(例如，propionicin PlG-1、jenseniin G、propionicins SM1、SM2T1、和acnecin)，它们对不期望的产乳酸细菌、革兰氏阴性细菌、酵母、和霉菌是抑制性的。

考虑到据信由杰氏棒状杆菌(C.jeikeium)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)、和痤疮丙酸杆菌(P.acnes)提供的有益的功能，以及它们似乎存在于人的前臂和面部两者上，提供表现出对这些皮肤共生微生物中的一种、两种、或甚至全部的适当的体内益生元活性的试剂将是合乎期望的。并且由于至少一些化妆品组合物通常被施用于人的面部、手和/或前臂，可能有利的是向这些化妆品组合物中掺入促进杰氏棒状杆菌(C.jeikeium)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)、和/或痤疮丙酸杆菌(P.acnes)的健康状态和/或生存的成分。当然，应当理解本文所述的益生元活性不限于前述微生物，而是可同样表现出对其他皮肤共生微生物的适当的益生元活性。

益生元剂

微生物，以及实际上全部的生命形式，已进化为在它们的环境中是成功的。生物的进化的一个方面是适应于利用通常存在于该生物的栖息地的可用的食物源。因此，皮肤共生微生物倾向于利用通常存在于皮肤上和/或在其内的营养物质来源，而栖息在胃肠道的微生物倾向于利用通常存在于胃肠道的食物源。例如，存在于大多数人的皮肤上的痤疮丙酸杆菌(P.acnes)已知消耗皮脂腺中的脂肪酸或由毛囊分泌的皮脂。另一方面，通常存在于人类胃肠道的双歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)能够利用低聚半乳糖(“GOS”)作为食物源。由于胃肠道中的环境和皮肤上的环境之间的实质差异以及通常存在于各自环境中的可用的营养物质的实质差异，皮肤共生微生物和胃肠道微生物预期不利用相同的食物源。

诸如GOS的可摄取形式的益生元剂用于改善胃肠道微生物组的健康状态是为人们所熟知的。如前文所指出的，一般被认为是存在于人类胃肠道中的有益菌种的双歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)已知利用GOS作为食物源。GOS是利用β-半乳糖苷酶的半乳糖基转移酶活性通常从乳糖产生的包含半乳糖的低聚糖。根据下式，取决于用于制备其的方法，GOS可包括二、三、四、五、或六糖或这些中的两种或更多种的混合物：

其中n＝2-5,

Gal表示半乳糖残基而

Glc表示葡萄糖残基。

在尤其合适的实施例中，GOS可以是混合物的形式，其包括20至35％w/v的二糖、20至35％w/v的三糖、约15至约25％w/v的四糖、和10至20％w/v的五糖。授予Gibson等人的美国专利7,883,874和授予Tzortzis等人的美国专利8,030,049和8,058,047各自公开了GOS和制备GOS的方法的例子。

GOS可以诸如粉末和糖浆的多种形式商购获得。GOS还可作为成分存在于供人类和/或动物消耗的销售的食物产品中。GOS的可商购获得的来源的尤其合适的例子是BIMUNO，可购自Clasado,Inc.(Panama)。据信BIMUNO是GOS、膳食纤维和其他填充成分的混合物。授予Gibson等人的美国专利7,883,874公开了通过双歧双歧杆菌(B.bifidum)的菌株产生的GOS的合适的例子，该菌株通过半乳糖苷酶活性将乳糖转化为前述的GOS的混合物。以这种方式产生的GOS被描述为包括至少一种二糖、至少一种三糖、至少一种四糖和至少一种五糖。尽管GOS是已知的针对胃肠道微生物的益生元剂，GOS通常不以显著量存在于人类皮肤上。因此，GOS先前尚未被考虑用作针对皮肤共生微生物的益生元。然而，已出人意料地发现，GOS表现出对至少一些皮肤共生微生物的可取水平的益生元活性。具体地，GOS表现出对杰氏棒状杆菌(C.jeikeium)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)、和痤疮丙酸杆菌(P.acnes)的益生元活性。

尽管前述例子描述了GOS作为合适的皮肤共生益生元剂，需要理解的是，其他胃肠道益生元(但不是所有的胃肠道益生元)，如下文所详细讨论的，可能适用作皮肤共生益生元剂。可能适用作皮肤共生益生元的胃肠道益生元的一些非限制性例子包括羟基异亮氨酸；小麦糊精；阿拉伯半乳聚糖(例如，松木多糖(larch arabinogalactin))；柑橘纤维；豌豆纤维；麦芽糖糊精；低聚果糖(即，果寡糖或“FOS”)；菊粉；菊粉低聚纤维；甘露聚糖水解产物；葡甘露聚糖水解产物；半乳甘露聚糖；低聚龙胆糖；异麦芽低聚糖；猕猴桃和猕猴桃衍生化合物(例如，来源于猕猴桃并可购自Vital Foods的ZYACTINASE 45品牌酶复合物)；甜菜浆；和米糠。

要适用作针对皮肤共生微生物的益生元，该组合物或试剂应当促进所述微生物的生存和/或生长。为了测定测试试剂的益生元潜能，可能有利的是测量因使皮肤共生微生物暴露于该测试试剂而形成的代谢物。合适的微生物输出包括但不限于细胞裂解时释放的诸如ATP、NAD、NADP、NADH、NADPH、cAMP、cGMP、和/或ADP的代谢物的含量。在一些情况下，可使用可商购获得的基于酶的测定来测量代谢指标。除此之外或作为另外一种选择，可能有利的是测量微生物的数量和/或浓度的变化(即，增殖)，以确定是否表现出益生元活性。例如，细菌计数(例如，当用适当的平板计数测试测量时)的增加可能足以表明益生元活性。

对于测定益生元活性，体内测试一般是优选的。但此类测试能够是耗时的和高成本的。常规的体外测试(例如，ATP测定或平板计数)尽管通常比体内测试更快和成本更低，却可能不提供对体内活性的适当预测。因此，可能有利的是使用复合方法，在其中一种或多种类型的体外测试被用于预测GOS是否在体内表现出益生元活性，任选地随后是用以确认此类活性的体内测试。用于确定益生元活性的复合筛选测定和方法的尤其合适的例子公开于共同待决的美国专利13/672,163；13/672,192；和13/672,211中，全部由Lanzalaco等人提交。

图2和3示出了基于测试样品的体积，当以0.5重量％的量存在时GOS对时间的体外益生元效应。图2示出了在24小时和48小时相对于水对照组，三种皮肤共生微生物的ATP产生的百分比变化。图2和3中示出的三种皮肤共生微生物是表皮葡萄球菌(S.epidermidis)(显示为“Sepi”)、杰氏棒状杆菌(C.jeikeium)(显示为“Cj”)和痤疮丙酸杆菌(P.acnes)(显示为“Pacnes”)。如图2所示，在24和48小时，相对于水对照组，全部三种皮肤共生微生物的ATP产生增加了。ATP含量是按照下文所详述的ATP测试测定的。图3示出了当在24小时和48小时测量时，相对于水对照组，三种皮肤共生微生物的细菌计数的百分比变化。细菌计数是通过下文所详述的平板计数测试测量的。如图3所示，相对于水对照组，细菌计数在24和48小时是增加的。换句话讲，对于所测试的微生物，GOS在体外在24和48小时表现出益生元活性。用于产生图2和3所示的数据的测试样品是按照下文关于起始培养物、工作培养物和测试样品的建立所描述的方法制备的。测试样品是BIMUNO品牌GOS、基本碳培养基、和所选择的微生物的混合物。

图4和5示出了基于测试样品的体积，0.05重量％和0.5重量％的GOS的比较性体外益生元效应。如图4所示，相对于水对照组，在0.05％和0.5％两者含量上，全部三种皮肤共生微生物的ATP产生均是增加的。图5示出了在0.05％和0.5％的含量，细菌计数的增加。因此，当以0.05％和0.5％存在时，GOS在体外表现出益生元活性。用于产生图4和5所示的数据的测试样品是按照下文关于起始培养物、工作培养物和测试样品的建立所描述的方法制备的。测试样品是BIMUNO品牌GOS、基本碳培养基、和所选择的微生物的混合物。

图6示出了当微生物暴露于基于测试样品的体积1重量％的GOS测试样品时，GOS对皮肤微生物组中的需氧微生物中的至少一些的体内益生元效应。图表10示出了对应于取自详述于下文的体内临床实验中的人类受试者的样品的需氧细菌计数。图表10中显示为TPS 1和TPS 2的样品对应于取自该研究的处理阶段的微生物样品，在其中1％GOS测试样品存在于受试者的前臂上。图表10中显示为RGS 1的样品对应于取自该研究的复原阶段的第一微生物样品，在其中GOS不存在于前臂上。如图6所示，相对于在详述于下文的初始的条件化阶段测量的基线水平，需氧细菌计数在处理阶段增加，并且相对于处理阶段，在复原阶段减少。基于图6显示的数据，据信在处理阶段存在的GOS导致了需氧细菌计数的增加，并且随后在复原阶段GOS的缺乏导致了需氧细菌计数的减少。换句话讲，当以1％存在时，GOS在体内表现出对至少一些需氧的皮肤共生微生物的益生元活性。用于产生图6所示的数据的测试样品是1％BIMUNO品牌GOS的水性溶液。

图7示出了当微生物暴露于1％的GOS测试样品时，GOS对皮肤微生物组中的厌氧微生物中的至少一些的体内益生元效应。TPS 1、TPS 2、和RGS 1对应于就图6而言所描述的相同的取样时间。RGS2对应于取自复原阶段的第二微生物样品。如可见于图7中的，相对于在条件化阶段测量的基线水平，厌氧细菌计数在处理阶段增加，并且相对于处理阶段，在复原阶段减少。另外，图7示出了相对于RGS1，厌氧细菌计数在RGS2中的继续减少。基于图7的图表20所显示的数据，据信在处理阶段存在的GOS导致了厌氧细菌计数的增加，并且随后在复原阶段GOS的缺乏导致了厌氧细菌计数的减少。换句话讲，当以1％存在时，GOS在体内表现出对至少一些厌氧的皮肤共生微生物的益生元活性。用于产生图7所示的数据的测试样品是1％BIMUNO品牌GOS的水性溶液。

尽管已出人意料地发现，某些胃肠道益生元表现出对皮肤共生微生物的适当的益生元潜能，但这并不是对所有的通常已知的胃肠道益生元都成立，即使是在组成上与GOS相似(即，基于碳水化合物)的那些。图8示出了通过测量相对于水对照组的细菌ATP含量变化，多种基于碳水化合物的胃肠道益生元对表皮葡萄球菌(S.epidermidis)、杰氏棒状杆菌(C.jeikeium)和痤疮丙酸杆菌(P.acnes)的益生元潜能。如可见于图8中的，并非所有的胃肠道益生元均表现出对这三种皮肤共生微生物的所期望的益生元潜能。用于产生图8所示的数据的测试样品是按照下文关于起始培养物、工作培养物和测试样品的建立所描述的方法制备的。测试样品包括基于该测试样品的体积以1重量％存在的图8中显示的测试试剂中的一种。测试样品是测试试剂、基本碳培养基、和所选择的微生物的混合物。

美容组合物

不受理论的约束，据信皮肤微生物组的健康状态可能与期望的皮肤功能或外观相关和/或可在其他方面提供一种或多种护肤有益效果。例如，有可能通过维持或改善皮肤微生物组的一个或多个成员的健康状态来维持或改善皮肤的外观、屏障功能、保湿性和/或其他特性。在一些情况下，如果皮肤的特定的某个或某些区域表现出不期望的功能和/或外观，可能有利的是将皮肤的该特定的某个或某些区域作为维持或改善的靶标。例如，可能有利的是将诸如面部(例如，前额、脸颊、和面部的眶周部分)、手和/或前臂的皮肤的特定区域作为靶标，上述区域趋于比皮肤的某些其他区域更多地因暴露于环境(例如，紫外线辐射、风、污染、氧化、刺激物)而受损和/或可能发生内在老化的可见迹象。用于改善皮肤的健康状态和/或外观的局部施用的化妆品组合物是为人们所熟知的(例如，洗剂、保湿调理霜、油、粉底(液体和粉末)、唇膏、遮瑕物、剃刮准备组合物、液体或固体的洁肤皂)。因此，可能有利的是将诸如GOS的益生元剂掺入到化妆品组合物中，以利用可由健康的、平衡的皮肤微生物组提供的健康和/或外观有益效果。

本文的化妆品组合物可包含有效量的皮肤共生益生元剂。益生元剂可以按所述组合物的重量计大于0.001％、0.01％、0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％或甚至大于5％的量存在。可能有利的是将本发明的化妆品组合物中的益生元剂的量限制在按所述组合物的重量计小于25％、20％、15％、或甚至10％的量，以避免美容上不期望的特性(例如，黏性或不良的铺展性)。在某些实施例中，所述益生元剂可以足够使至少一种皮肤共生微生物的ATP含量在体外增加了至少80％(例如80–1000％或更多，或该范围内的任何值)的量存在。除此之外或作为另外一种选择，所述益生元剂可以足够使至少两种皮肤共生微生物的ATP含量在体外增加了至少50％(例如50–1000％或更多，或该范围内的任何值)的量存在。此外，所述益生元剂可以足够使至少三种皮肤共生微生物的ATP含量在体外增加了至少25％(例如25–1000％或更多，或该范围内的任何值)的量存在。应当理解的是，所述益生元剂可以在体外提供ATP含量的上述增加中的一种或多种的量存在于所述组合物中。例如，所述益生元剂可以足够使第一皮肤共生微生物的ATP含量计数在体外增加了至少80％并且第二皮肤共生微生物的ATP含量在体外增加了至少50％的量存在。继续这个例子，所述益生元剂还可以足够使第三皮肤共生微生物的ATP含量在体外增加了至少25％的量存在。ATP含量可按照下文所详述的ATP测试在体外测定。

在某些实施例中，所述益生元剂可以足够使至少一种皮肤共生微生物的细菌计数在体外增加了至少10％(例如10–200％或更多、50–175％、100–150％、或这些范围内的任何值)的量存在。除此之外或作为另外一种选择，所述益生元剂可以足够使至少两种皮肤共生微生物的细菌计数在体外增加了至少10％(例如10–200％或更多、20–180％、30–160％、40–150％、50–120％、或这些范围内的任何值)的量存在。此外，所述益生元剂可以足够使至少三种皮肤共生微生物的细菌计数在体外增加了至少10％(例如10–200％或更多，或该范围内的任何值)的量存在。应当理解的是，所述益生元可以在体外提供细菌计数的上述增加中的一种或多种的量被包含在本发明的组合物中。例如，所述益生元剂可以足够使第一皮肤共生微生物的细菌计数在体外增加了至少50％并且第二皮肤共生微生物的细菌计数在体外增加了至少20％的量存在。继续这个例子，所述益生元剂还可以足够使第三皮肤共生微生物的细菌计数在体外增加了至少10％的量存在。体外的细菌计数可以按照下文所详述的平板计数测试测量。

本发明的化妆品组合物有利地以足够使至少一种需氧的和/或厌氧的皮肤共生微生物(例如，上文所述的皮肤共生微生物中的一种或多种)的体内细菌计数增加的量包含益生元剂。在某些实施例中，所述益生元剂可以使需氧的和/或厌氧的体内细菌计数增加了至少10％(例如，至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、110％、120％、130％或更多，或这些范围内的任何值)、但小于100x的增加(例如，小于90x、80x、70x、60x、50、40x、30、20x、10x、或5x)的量存在。本发明的化妆品组合物有利地以足够提供护肤有益效果的量包含所述益生元剂。

在某些实施例中，所述化妆品组合物可包含皮肤病学可接受的载体、有效量的皮肤共生益生元、和通常包含在所提供的特定化妆品组合物中的类型的一种或多种任选成分。

皮肤病学可接受的载体

在某些实施例中，本文的化妆品组合物可包含一种或多种水和/或水混溶性溶剂形式的合适载体。载体可以基于所述组合物的重量按重量计1％至99％的量存在(例如，1％、3％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、或85％至90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、或5％)。合适的水混溶性溶剂包括一元醇、二元醇、多元醇、甘油、二醇、聚亚烷基二醇如聚乙二醇、以及它们的混合物。当化妆品组合物是乳液形式时，水和/或水混溶性溶剂通常与该乳液的水相相关联。

本文的化妆品组合物可包含一种或多种合适的油。油可以是挥发性的或非挥发性的油。适用于本文的挥发性油可具有在25℃下0.5至5厘沲(cSt)范围的粘度。挥发性油可被用于促进护肤组合物在其被施用于皮肤后更快地干燥。可包含非挥发性油以向皮肤提供润滑和防护有益效果。

在某些实施例中，所述化妆品组合物可包含一种或多种合适的硅油，例如，一种或多种聚硅氧烷。适用于本文的聚硅氧烷可具有在25℃下0.5至1,000,000厘沲的粘度，并且能够以下列化学通式表示：

R₃SiO[R₂SiO]_xSiR₃

其中R独立地选自氢或C_1-30直链或支链、饱和或不饱和的烷基、苯基或芳基、三烷基甲硅烷氧基；并且x为0至10,000的整数，被选择为获得期望的分子量。在某些实施例中，R是氢、甲基、或乙基。可商购获得的聚硅氧烷包括聚二甲基硅氧烷，其也被称为聚二甲基硅氧烷(dimethicones)，其例子包括来自Shin-Etsu的DM-Fluid系列、由Momentive PerformanceMaterials Inc.销售的系列、和由Dow Corning Corporation销售的200系列。合适的聚二甲基硅氧烷的具体例子包括具有0.65、1.5、50、100、350、10,000、12,500100,000、和300,000cSt的粘度的200fluid(还作为PMX-200Silicone Fluids销售)。

合适的聚二甲基硅氧烷包括以下列化学通式表示的那些：

R₃SiO[R₂SiO]_x[RR’SiO]_ySiR₃

其中R和R’各自独立地为氢或C_1-30直链或支链、饱和或不饱和的烷基、芳基或三烷基甲硅烷氧基；并且x和y各自为1至1,000,000的整数，选择以获得期望的分子量。合适的聚二甲基硅氧烷包括苯基聚二甲基硅氧烷(来自Botanigenics,Inc.的Botansil^TMPD-151)、二苯基聚二甲基硅氧烷(来自Shin-Etsu的KF-53和KF-54)、聚苯基三甲基硅氧烷(来自Dow Corning的556Cosmetic Grade Fluid)、或三甲基硅烷氧苯基聚二甲基硅氧烷(来自Wacker-Belsil的PDM-20、PDM-200、或PDM-1000)。其他例子包括烷基聚二甲基硅氧烷，其中至少R’是脂肪烷基(例如，C_12-22)。一种合适的烷基聚二甲基硅氧烷是鲸蜡基聚二甲硅氧烷，其中R’是直链C16链并且R是甲基。鲸蜡基聚二甲硅氧烷可以商品名2502Cosmetic Fluid得自Dow Corning或以商品名Abil Wax 9801或9814得自Evonik Goldschmidt GmbH。

可适用于本文的化妆品组合物中的其他硅油包括具有下列通式的环状硅氧烷：

其中R独立地选自氢或C_1-30直链或支链、饱和或不饱和的烷基、苯基或芳基、三烷基甲硅烷氧基；并且其中n＝3-8，以及它们的混合物。通常，使用环状聚甲基硅氧烷(cyclomethicone)的混合物，其中n为4、5、和/或6。可商购获得的环状聚甲基硅氧烷包括Dow Corning UP-1001Ultra Pure Fluid(即n＝4)、Dow CorningPMX-0245(即n＝5)、Dow CorningPMX-0245(即n＝6)、Dow Corning 245fluid(即n＝4和5)、和Dow Corning 345fluid(即.n＝4、5、和6)。

在某些实施例中，烃油(例如，直链、支化、或环状的烷烃和烯烃)可被包含在本发明的化妆品组合物中。烃油的链长可基于所期望的功能特性(如挥发性)选择。合适的挥发性烃可具有介于5-20个之间的碳原子，或者作为另外一种选择，介于8-16个之间的碳原子。

可适用于本发明的化妆品组合物中的其他油包括至少10个碳原子的酯。这些酯包括具有衍生于脂肪酸或醇的烃基链的酯(例如，单酯、多元醇酯、以及二和三羧酸酯)。此处的酯的烃基基团可包含或具有与其共价键合的其他相容的官能团，如酰胺和烷氧基部分(例如，乙氧基或醚键等)。示例性的酯包括但不限于异硬脂酸异丙酯、月桂酸己酯、月桂酸异己酯、棕榈酸异己酯、棕榈酸异丙酯、油酸癸酯、油酸异癸酯、硬脂酸十六烷酯、硬脂酸癸酯、异硬脂酸异丙酯、己二酸二己基癸酯、乳酸月桂酯、乳酸肉豆蔻酯、乳酸十六烷基酯、硬脂酸油醇酯、油酸油醇酯、肉豆蔻酸油醇酯、乙酸月桂酯、丙酸十六烷酯、C_12-15醇苯甲酸酯、己二酸二异丙酯、己二酸二丁酯、和己二酸油醇酯。其他合适的酯还描述于美国个人保养品协会(Personal Care Product Council)的International CosmeticIngredient Dictionary and Handbook，第十三版，2010，在“酯类”功能分类下。其他适用于所述个人护理组合物中的酯包括作为多元醇酯和甘油酯已知的那些。

其他合适的油包括酰胺(例如，具有酰胺官能团，同时在25℃下为液体并不溶于水的化合物)。合适的酰胺包括N-乙酰基-N-丁基氨基丙酸、异丙基N-月桂酰肌氨酸、和N,N,-二乙基甲苯甲酰胺以及美国专利6,872,401中所公开的那些。

其他合适的油包括醚类。合适的醚包括多元醇的饱和的和不饱和的脂肪醚、以及它们的烷氧基化的衍生物。示例性的醚包括

聚丙二醇的C_4-20烷基醚、和二-C_8-30烷基醚。这些材料的合适的例子包括PPG-14丁基醚、PPG-15硬脂基醚、二辛基醚、十二烷基辛基醚、以及它们的混合物。

护肤组合物可包含乳化剂。当所述组合物以乳液的形式被提供或不混溶的材料被混合时，乳化剂可能是合乎期望的。本文的化妆品组合物可包含0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.5％、或1％至20％、10％、5％、3％、2％、或1％的乳化剂。乳化剂可以为非离子型、阴离子型或阳离子型。乳化剂的非限制性例子公开于美国专利3,755,560、美国专利4,421,769、和McCutcheon的“Emulsifiers and Detergents”(2010年年鉴版，由M.C.Publishing Co.公布)中。其它适宜的乳化剂进一步描述于Personal CareProduct Council的“International Cosmetic Ingredient Dictionary andHandbook”第十三版(2006)“表面活性剂-乳化剂”功能类别中。

适宜的乳化剂包括下列类别的醚和酯：聚乙二醇和脂肪醇的醚、聚乙二醇和脂肪酸的酯、糖基化的聚乙二醇和脂肪醇的醚、糖基化的聚乙二醇和脂肪酸的酯、C_12-30醇和甘油或聚甘油的醚、C_12-30脂肪酸和甘油或聚甘油的酯、氧化烯改性的C_12-30醇与甘油或聚甘油的醚、C_12-30脂肪醇与蔗糖或葡萄糖的醚、蔗糖和C_12-30脂肪酸的酯、季戊四醇和C_12-30脂肪酸的酯、山梨醇和/或脱水山梨糖醇与C_12-30脂肪酸的酯、山梨醇和/或脱水山梨糖醇与烷氧基化脱水山梨糖醇的醚、聚乙二醇和胆固醇的醚、C_12-30脂肪酸与山梨醇和/或脱水山梨糖醇的烷氧基化醚的酯、以及它们的组合。

还可使用直链或支化类型的硅氧烷乳化剂。尤其有用的聚醚改性的硅氧烷包括来自Shin Etsu的KF-6011、KF-6012、KF-6013、KF-6015、KF-6015、KF-6017、KF-6043、KF-6028、和KF-6038。同样尤其有用的是聚甘油化的直链或支化的硅氧烷乳化剂，包括来自Shin Etsu的KF-6100、KF-6104、和KF-6105。

乳化剂还包括乳化性硅氧烷弹性体。合适的乳化性硅氧烷弹性体可包括至少一种聚烷基醚或聚甘油化单元。可用于本发明至少一个实施例中的聚亚氧烷基化的乳化性有机硅弹性体包括由Shin-Etsu Silicones以商品名KSG-21、KSG-20、KSG-30、KSG-31、KSG-32、KSG-33；KSG-210(聚二甲基硅氧烷/PEG-10/15交联聚合物，分散于聚二甲基硅氧烷中)；KSG-310(PEG-15月桂基聚二甲基硅氧烷交联聚合物)、KSG-320(PEG-15月桂基聚二甲基硅氧烷交联聚合物，分散于异十二烷中)、KSG-330(PEG-15月桂基聚二甲基硅氧烷交联聚合物，分散于甘油三(乙基己酸)酯中)、KSG-340(PEG-10月桂基聚二甲基硅氧烷交联聚合物和PEG-15月桂基聚二甲基硅氧烷交联聚合物)出售的那些。其他的硅氧烷乳化性弹性体是由Dow Corning^TM提供的，包括PEG-12聚二甲基硅氧烷交联聚合物(DC 9010和9011)。由Dow Corning销售的其他合适的硅氧烷乳化剂包括DC9010和DC9011。聚甘油化乳化性硅氧烷弹性体公开于PCT/WO 2004/024798中。此类弹性体包括Shin-Etsu的KSG系列，诸如KSG-710(聚二甲基硅氧烷/聚甘油-3交联聚合物，分散于聚二甲基硅氧烷中)或月桂基聚二甲基硅氧烷/聚甘油-3交联聚合物，分散于多种溶剂，诸如异十二烷、聚二甲基硅氧烷、甘油三(乙基己酸)酯中，以商品名KSG-810、KSG-820、KSG-830或KSG-840得自Shin-Etsu。

结构化试剂可被用于提高粘度、浓稠化、固化，或向护肤组合物提供固体或晶体结构。结构化试剂通常基于溶解度、可分散性、或相兼容性被分组。含水的或水结构化试剂的例子包括聚合剂、天然或合成的树胶、多糖等。聚合物的结构化试剂的示例性种类包括但不限于羧酸聚合物、聚丙烯酰胺聚合物、磺化聚合物、高分子量聚烷基乙二醇或聚甘油、它们的共聚物、它们的疏水改性的衍生物、以及它们的混合物。在某些实施例中，所述组合物可包含按所述组合物的重量计约0.0001％、0.001％、0.01％、0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、5％至约25％、20％、10％、7％、5％、4％、或2％的一种或多种结构化试剂。

油结构化试剂的例子包括硅氧烷和有机基材料。油结构化试剂的合适的范围是0.01％、0.05％、0.1％、0.5％、1％、2.5％、5％、或10％至30％、25％、20％、15％、10％、或5％。合适的油相结构化试剂可以是基于硅氧烷的，例如硅氧烷弹性体、硅氧烷树胶、硅氧烷蜡类、和直链硅氧烷聚合物，它们具有使得该硅氧烷能够提高油相的粘度的聚合程度。

合适的硅氧烷弹性体可以是粉末形式、或者分散于或溶解于诸如挥发性或非挥发性的硅氧烷、或与硅氧烷兼容的载体如石蜡烃类或酯类的溶剂中。硅氧烷弹性体粉末的例子包括乙烯基聚二甲基硅氧烷/聚二甲基硅氧烷倍半硅氧烷交联聚合物，如KSP-100、KSP-101、KSP-102、KSP-103、KSP-104、KSP-105，购自Shin-Etsu，包含氟代烷基的混合硅氧烷粉末，如KSP-200，购自Shin-Etsu，其为氟代硅氧烷弹性体，和包含苯基的混合硅氧烷粉末，诸如KSP-300，购自Shin-Etsu，其为苯基取代的硅氧烷弹性体；和DC 9506，购自Dow Corning。硅氧烷弹性体分散体的例子包括由多家供应商提供的聚二甲基硅氧烷/乙烯基聚二甲基硅氧烷交联聚合物，包括Dow Corning Corporation以商品名DC9040或DC9041、Momentive以商品名SFE 839、或Shin-Etsu Silicones以商品名KSG-15、16、18提供的。KSG-15具有INCI名称环戊硅氧烷(和)聚二甲基硅氧烷/乙烯基聚二甲基硅氧烷交联聚合物。KSG-18具有INCI名称二苯基甲硅烷氧基苯基聚三甲基硅氧烷(和)聚二甲基硅氧烷/苯基乙烯基聚二甲基硅氧烷交联聚合物。硅氧烷弹性体还可以Gransil商标购自Grant Industries。其他合适的硅氧烷弹性体具有长链烷基取代，例如由Shin Etsu以商品名KSG-41、KSG-42、KSG-43、和KSG-44提供的月桂基聚二甲基硅氧烷/乙烯基聚二甲基硅氧烷交联聚合物，其中所述弹性体分别分散在包括矿物油、异癸烷、三异辛酸甘油酯、或角鲨烯的溶剂中。其他合适的硅氧烷弹性体可具有聚甘油取代，例如由Shin Etsu以商品名KSG-810、KSG-820、KSG-830、和KSG-840提供的月桂基聚二甲基硅氧烷/聚甘油-3交联聚合物，其中所述弹性体分别分散在包括矿物油、异癸烷、三异辛酸甘油酯、或角鲨烯的溶剂中。其他合适的硅氧烷弹性体可具有聚乙二醇取代，例如由Shin Etsu以商品名KSG-310、KSG-320、KSG-330、和KSG-340提供的PEG-15/月桂基聚二甲基硅氧烷交联聚合物，其中所述弹性体分别分散在包括矿物油、异癸烷、三异辛酸甘油酯、或角鲨烯的溶剂中。具有聚乙二醇取代的其他合适的硅氧烷弹性体包括Shin Etsu的KSG-210，一种聚二甲基硅氧烷中的聚二甲基硅氧烷/PEG-10/15交联聚合物。

硅氧烷树胶是另外的油相结构化试剂。适用于本文的硅氧烷树胶可具有在25℃500,000至100百万cSt、600,000至20百万cSt、约600,000至12百万cSt范围的粘度。合适的硅氧烷树胶包括Wacker-Belsil以商品名CM3092、Wacker-Belsil 1000、或Wacker-Belsil DM 3096销售的那些。尤其合适的硅氧烷树胶如聚二甲基硅氧烷醇，可以商品名1-1254Fluid、2-9023Fluid、和2-9026Fluid购自Dow Corning Corporation。聚二甲基硅氧烷醇经常作为与挥发性或非挥发性的硅氧烷如Dow Corning 1401Fluid、1403Fluid、和1501Fluid的混合物被销售。

另一种类型的油相结构化试剂包括硅氧烷蜡。硅氧烷蜡可被称作烷基硅氧烷蜡，并且在室温是半固体或固体。术语“烷基硅氧烷蜡”是指具有赋予硅氧烷半固体或固体性质的取代的长链烷基(例如，C₁₆至C₃₀)的聚二甲基硅氧烷。此类硅氧烷蜡的例子包括硬脂基聚二甲基硅氧烷，其可以商品名Abil Wax 9800购自Evonik Goldschmidt GmbH，或以商品名2503购自Dow Corning。另外的例子是双-硬脂基聚二甲基硅氧烷(其可以商品名(Gransil A-18购自Gransil Industries)、二十二烷基聚二甲基硅氧烷、或山嵛氧基聚二甲基硅氧烷。合适的硅氧烷蜡公开于美国专利5,413,781和5,725,845中，并且还包括烷基甲基聚硅氧烷、C_10-60烷基聚二甲基硅氧烷、以及它们的混合物。

油相结构化试剂的其他非限制性例子包括天然的和合成的蜡(例如，天然的动物的、植物的和矿物的蜡以及从其制备的合成的蜡)。结构化试剂的另外的例子包括天然的或合成的蒙脱石矿物、二氧化硅、硅酸盐、甲硅烷基化二氧化硅、以及它们的碱金属或碱土金属衍生物。

任选成分

本文的化妆品组合物可任选地包含对于调节和/或改善哺乳动物皮肤的状况有用的成分。此类任选成分的一些非限制性例子包括维生素；肽和肽衍生物；糖胺、防晒活性物质(或防晒剂)和/或紫外线吸收剂、植物甾醇、水杨酸化合物、去氧苯比妥、二烷酰基羟脯氨酸化合物、类黄酮、类视色素化合物、植物性药物、N-酰基氨基酸化合物、它们的衍生物、以及它们的组合。

本发明的化妆品组合物可包含糖胺，其也被称为氨基糖。适用于本文中的示例性糖胺描述于PCT公开WO 02/076423和美国专利6,159,485中。糖胺可以基于所述化妆品组合物的重量按重量计0.01％至15％、0.1％至10％、或0.5％至5％的量存在。糖胺在来源上可为合成的或天然的，并且能够作为纯的化合物或多种化合物的混合物(例如，来自天然来源的提取物或合成的材料的混合物)被使用。糖胺的尤其合适的例子是葡糖胺及其盐，其可存在于某些贝类或来源于真菌来源。糖胺的其他例子包括N-乙酰基葡糖胺、甘露糖胺、N-乙酰基甘露糖胺、半乳糖胺、N-乙酰基半乳糖胺、它们的异构体(例如，立体异构体)、以及它们的盐(例如HCl盐)。

本发明的化妆品组合物可包含维生素B₃化合物(例如，烟酰胺)。维生素B₃化合物可调节皮肤状况，如美国专利5,939,082中所述。所述化妆品组合物可包含基于所述化妆品组合物的重量按重量计0.001％至50％、0.01％至20％、0.05％至10％、0.1％至7％、或甚至0.5％至5％。前述维生素B3化合物的一些示例性衍生物包括烟酸酯，包括盐酸的非血管舒张性酯(例如，生育酚烟酸酯、烟酸十四烷酯)。合适的维生素B₃化合物的例子可从多个来源商购获得(例如，Sigma Chemical Company、ICN Biomedicals,Inc.、和Aldrich Chemical Company)。

本发明的化妆品组合物可包含水杨酸化合物、它的酯、它的盐、或它们的组合。所述水杨酸化合物可包含基于所述化妆品组合物的重量按重量计0.0001％至25％、0.001％至15％、0.01％至10％、0.1％至5％、或甚至0.2％至2％。

本发明的化妆品组合物可包含去氧苯比妥化合物、它的盐和衍生物。去氧苯比妥可以基于所述组合物的重量按重量计0.0001％至25％、或0.001％至10％、或0.01％至5％、或0.02％至2.5％的量存在。如本文所用，去氧苯比妥衍生物包括去氧苯比妥化合物的任何异构体和互变异构体，包括但不限于有机酸和无机酸，例如磺酸、羧酸等。去氧苯比妥化合物包括二羟乙基磺酸己氧苯醚，可以商品名HP100从LaboratoiresSerobiologiques商购获得。

本发明的化妆品组合物可包含类黄酮化合物。类黄酮类广泛地公开于美国专利5,686,082和5,686,367中。一些类黄酮的例子是一种或多种黄酮、一种或多种异黄酮、一种或多种香豆素、一种或多种色酮、一种或多种双香豆素、一种或多种色满酮、一种或多种色满醇、它们的异构体(例如，顺式/反式异构体)、以及它们的混合物。一些例子包括黄酮和异黄酮，例如黄豆甙原(7,4'-二羟基异黄酮)、染料木黄酮(5,7,4'-三羟基异黄酮)、雌马酚(7,4'-二羟基异黄烷)、5,7-二羟基-4'-甲氧基异黄酮、大豆异黄酮(提取自大豆的混合物)、以及它们的混合物。用于本文的类黄酮化合物可从多个来源商购获得，例如Indofine Chemical Company、Inc.、Steraloids,Inc.、和Aldrich Chemical Company,Inc.。基于所述化妆品组合物的重量，类黄酮化合物按重量计可占0.01％至20％、0.1％至10％、或0.5％至5％。

本发明的化妆品组合物可包含一种或多种N-酰基氨基酸化合物。所述氨基酸可以是本领域已知的任何氨基酸之一。本领域已知的氨基酸的可能的侧链的列表描述于：Stryer,Biochemistry,1981,W.H.Freeman andCompany出版。R¹可以为饱和或不饱和的、直链或支化的、取代或未取代的C₁至C₃₀烷基；取代或未取代的芳族基团；或它们的混合物。N-酰基氨基酸化合物可选自N-酰基苯丙氨酸、N-酰基酪氨酸、它们的异构体、它们的盐、以及它们的衍生物。氨基酸可为D或L异构体或它们的混合物。氨基酸衍生物的一个例子是N-十一碳烯酰-L-苯基丙氨酸，其属于N-酰基苯丙氨酸氨基酸衍生物类。示例性的氨基酸衍生物包括为C₁₁单不饱和脂肪酸部分的酰基和苯丙氨酸的L异构体。N-十一碳烯酰-L-苯基丙氨酸的一个例子是可以商品名从SEPPIC商购获得的。N-酰基氨基酸衍生物可以基于所述化妆品组合物的重量按重量计0.0001％至25％、0.001％至10％、0.01％至5％、或0.02％至2.5％的量存在。

本发明的化妆品组合物可包含类视色素，其可以基于所述组合物的重量按重量计0.001％至10％、0.005％至2％、0.008％至1％、或0.01％至0.5％的量存在。如本文所用，“类视色素”是指维生素A的天然的和合成的类似物、或在皮肤中具有维生素A的生物学活性的视黄醇样化合物，以及这些化合物的几何异构体和立体异构体。类视色素可选自视黄醇、视黄醇酯(例如，视黄醇的C₂-C₂₂烷基酯，包括视黄醇棕榈酸酯、视黄醇乙酸酯、视黄醇丙酸酯)、视黄醛、和/或视黄酸(包括全反式视黄酸和/或13-顺式视黄酸)、或它们的混合物。

本发明的化妆品组合物可包含肽，包括但不限于二、三、四、五、和六肽以及它们的衍生物。所述化妆品组合物可包含按所述组合物的重量计1×10^-7％至20％、或1×10^-6％至0％、或1×10^-5％至5％的肽。肽可包含十个或更少的氨基酸以及它们的衍生物、异构体、和与其他物质如金属离子(例如，铜、锌、锰、镁等)的复合物。肽是指天然存在的和合成的肽。本文中同样有用的是天然存在的或可商购获得的包含肽的组合物。肽的一些例子包括二肽肌肽(β-ala-his)、三肽gly-his-lys、五肽lys-thr-thr-lys-ser、肽的亲脂衍生物、以及上述的金属络合物，例如，三肽his-gly-gly的铜络合物(也被称为Iamin)。一种可商购获得的包含三肽衍生物的组合物是其包含100ppm的棕榈酰基-gly-his-lys，可从Sederma商购获得。一种优选的可商购获得的包含五肽衍生物的组合物是其包含100ppm的棕榈酰基-lys-thr-thr-lys-ser，可从Sederma商购获得。

本发明的化妆品组合物可包含一种或多种水溶性维生素。水溶性维生素的例子包括但不限于水溶性型式的维生素B、维生素B衍生物、维生素C、维生素C衍生物、维生素K、维生素K衍生物、维生素D、维生素D衍生物、维生素E、维生素E衍生物、它们的维生素原如泛醇以及它们的混合物。所述化妆品组合物可包含基于所述组合物的重量按重量计0.0001％至50％、或0.001％至10％、0.01％至8％、或0.1％至5％。

本发明的化妆品组合物可包含防晒活性物质。防晒活性物质包括防晒剂和物理防晒霜。防晒活性物质可以是有机的或无机的。很多种常规的防晒活性物质可以被使用。Sagarin等人在Cosmetics Science and Technology(1972)的第VIII章，第189页等公开了很多合适的活性物质。防晒剂的一些非限制性例子包括2-乙基己基-对-甲氧基肉桂酸酯(如可商购获得的PARSOL MCX)、4,4'-叔丁基甲氧基二苯甲酰-甲烷(如可商购获得的PARSOL1789)、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、辛基二甲基-对-氨基苯甲酸、二倍酰三油酸酯、2,2-二羟基-4-甲氧基二苯甲酮、乙基-4-(双(羟基-丙基))氨基苯甲酸酯、2-乙基己基-2-氰基-3,3-二苯基丙烯酸酯、2-乙基己基-水杨酸酯、甘油基-对-氨基苯甲酸酯、3,3,5-三-甲基环己基水杨酸酯、氨基苯甲酸甲酯、对-二甲基-氨基苯甲酸或氨基苯甲酸酯、2-乙基己基-对-二甲基-氨基-苯甲酸酯、2-苯基苯并咪唑-5-磺酸、2-(对-二甲氨基苯基)-5-磺酸苯并噁唑酸、氰双苯丙烯酸辛酯、氧化锌、二氧化钛、以及这些化合物的混合物。一些有机防晒剂活性物质是2-乙基己基-对-甲氧基肉桂酸酯、丁基甲氧基二苯甲酰-甲烷、2-羟基-4-甲氧基苯-苯酮、2-苯基苯并咪唑-5-磺酸、辛基二甲基-对-氨基苯甲酸、氰双苯丙烯酸辛酯、氧化锌、二氧化钛、以及它们的混合物。防晒活性物质可以基于所述组合物的重量按重量计1％至20％、或2％至10％的量存在。确切的量可根据所选择的防晒剂和所期望的防晒因子(SPF)变化。

本发明的化妆品组合物可包含调理剂，如湿润剂、保湿剂、或皮肤调理剂。多种这些材料能够被利用，并且各自可以基于所述组合物的重量按重量计0.01％至20％、0.1％至10％、0.5％至7％的含量存在。调理剂的一些非限制性例子包括但不限于：胍；脲；乙醇酸和乙醇酸盐(例如，铵和季烷基铵)；水杨酸；乳酸和乳酸盐(例如，铵和季烷基铵)；芦荟的多种形式中的任何形式的芦荟(例如，芦荟凝胶)；多羟基醇，如山梨醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓醇、甘油、己三醇、丁三醇、丙二醇、丁二醇、己二醇等；聚乙二醇；糖类(例如，蜜二糖)和淀粉类；糖和淀粉衍生物(例如，烷氧基化的葡萄糖、岩藻糖)；透明质酸；乳酰胺单乙醇胺；乙酰胺单乙醇胺；泛醇；尿囊素；以及它们的混合物。本文中同样有用的是描述于美国专利4,976,953中的丙氧基化的甘油。另外的有用的是糖类的多种C₁-C₃₀单酯和聚酯以及相关的材料。这些酯来源于糖或多元醇部分和一个或多个羧酸部分。

本发明的化妆品组合物可包含其他任选的成分，例如一种或多种着色剂(颜料、染料、色淀、这些的组合，等等)、表面活性剂和/或成膜组合物。本发明的化妆品组合物可以是本领域中已知的多种形式中的任何一种，包括，例如，乳液、洗剂、乳、液体、固体、霜膏、凝胶、摩丝、软膏剂、糊剂、浆液、棒状物、喷雾、滋补剂、气溶胶、泡沫、笔状物等。所述化妆品组合物还可以被结合到剃刮准备产品中，包括，例如，凝胶、泡沫、洗剂、和霜膏，并且包括气溶胶和非气溶胶型式。其他化妆品组合物包括止汗剂、除臭剂、和个人清洁组合物如皂和洗发剂。化妆品组合物的合适的例子公开于：Tanner等人于2008年3月13日提交的美国专利公布2009/0017080；Willemin等人于2010年1月11日提交的美国专利公布2010/0112100；Susak等人于2010年4月28日提交的PCT公布WO2010/129313；Wilson等人于2011年2月14日提交的美国专利公布2011/0280647；Sabino等人于2005年4月28日提交的美国专利公布20050244442；Alberius等人于2007年8月13日提交的欧洲专利公布EP2025364；和美国专利6,017,552、6,060,547、7,022,346、7,404,966、7,772,214和7,871,633。

本发明的化妆品组合物可按照本领域已知的用于制备此类组合物的常规方法制备。此类方法可包括在存在或不存在加热、冷却、施加真空等下，在一个或多个步骤中将成分混合以实现相对均匀的状态。例如，通过首先独立于脂肪相材料而混合水相材料，然后适当地混合两种相以得到所期望的连续相，可制备乳液。在某些实施例中，可制备所述组合物以提供活性物质材料的适当的稳定性(物理稳定性、化学稳定性、光稳定性等)和/或递送。所述组合物可以在尺寸被设定成贮存用于一个处理周期的足够量的组合物的包装中被提供。包装的尺寸、形状、和设计可广泛地变化。一些包装的例子描述于USPN D570,707；D391,162；D516,436；D535,191；D542,660；D547,193；D547,661；D558,591；D563,221；和美国专利公布2009/0017080；2007/0205226；和2007/0040306中。

使用方法

本文所公开的化妆品组合物可适用作局部护肤或有色化妆品产品，其可以作为使用者的日常化妆品或个人护理方案的部分而被施用。除此之外或作为另外一种选择，本文的化妆品组合物可以在“按需”的基础上被使用。在某些实施例中，诸如包含美容方面可接受的载体和有效量的皮肤共生益生元剂的保湿调理霜、洗剂或软膏剂的护肤产品，可被局部施用于使用者的皮肤的一个或多个靶标区域(例如，面部、前臂、手或这些的部分)，以提供护肤有益效果或在其他方面改善所述靶标区域中的皮肤的健康状态和/或外观。在某些实施例中，所述皮肤共生益生元剂可被结合到有色化妆品产品中，例如作为日常美容方案的部分被施用至使用者的面部或其部分的粉底。

在某些实施例中，皮肤的特定区域可被鉴定为需要通过本文的化妆品组合物的使用能够解决的护肤有益效果。例如，面部的区域(例如，鼻、面颊、前额、下巴、眶周)、颈部的前面和后面、手的顶部、前臂的顶部、肩部和/或身体可被鉴定为需要本发明的益生元的、局部化妆品组合物的处理。当然，应当理解的是，本文所公开的化妆品组合物可被施用于身体的皮肤的任何部分(例如，脚、腿、后背、上臂、躯干、臀部)，以提供美容有益效果，并且此类皮肤的部分可被鉴定为靶标区域。

在某些实施例中，本文的局部化妆品组合物可以与益生菌或益生菌衍生物质(例如，益生菌裂解物)一起使用，其可以局部用组合物和/或口服的可摄取组合物的形式被提供。在某些实施例中，本文的局部化妆品组合物可与口服的可摄取益生元(例如，GOS)、益生菌(例如，贝飞达(Bifido)细菌)和/或营养补充剂(例如，ω-3脂肪酸)一起使用。例如，本发明的局部化妆品组合物可以在试剂盒中被销售，所述试剂盒还包含口服的可摄取胃肠道益生元、益生菌、和/或益生菌衍生化合物。在某些实施例中，所述试剂盒可包含掺入了有效量的第一皮肤共生益生元如GOS的第一局部用组合物和掺入了益生菌、益生菌裂解物和/或胃肠道或第二皮肤共生益生元的第二局部用组合物。胃肠道益生元一般被认为是1)抗胃酸、哺乳动物的酶和水解的降解作用的；2)可被至少一种类型(例如，属或种)的所期望的胃肠道微生物发酵的；和3)能够选择性地刺激至少一种类型的所期望的胃肠道微生物的生长和/或活性的。胃肠道益生元剂的多个非限制性例子显示于图8中。

本文的局部化妆品组合物还可包含益生菌或益生菌衍生物质，例如与皮肤共生益生元相结合提供护肤有益效果的裂解物。所述益生菌可以是皮肤共生微生物或胃肠道微生物或从这些之一获得的裂解物。例如，本文的化妆品组合物可包含双歧杆菌属(Bifidobacterium)、乳杆菌属(Lactobacillus)、肠球菌属(Enterococcus)、链球菌属(Streptococcus)或葡萄球菌属(Staphylococcus)的一个或多个成员；肠膜明串珠菌葡聚糖亚种(Leuconostoc mesenteroides subsp dextranicum)；乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)；菊糖芽孢乳杆菌(Sporolactobacillus inulinus)；唾液链球菌嗜热亚种(Streptococcus salvarius subsp.thermophilus)；酵母属(Saccharomyces)(啤酒糖酵母(cerevisiae)或者布拉迪酵母(boulardii))；芽胞杆菌属(Bacillus)(腊样芽孢杆菌(cereus var toyo)或枯草芽孢杆菌(subtilis))；凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)；地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)；大肠杆菌尼氏菌株(Escherichia colistrain nissle)；费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)；以及这些的混合物。胃肠道益生菌微生物和益生菌裂解物的非限制性例子公开于：Amar等人于2010年1月12日提交的美国专利公布20100203094；Gueniche于2010年3月4日提交的美国专利公布20100226892；Breton于2010年10月20日提交的PCT公布WO 2011/048554；和Gueniche等人于2010年12月7日提交的PCT公布WO 2011/070508和WO 2011/070509。

本发明的化妆品组合物可作为使用者的常规美容方案(例如，淋浴、施用化妆品、施用保湿霜或其他护肤或护发产品)的部分每天被施用一次或多次。本发明的局部化妆品组合物每天可被施用多于一次，例如，在当天开始时一次、当天的中间一次、和/或当天结束时一次。在一些情况下，本发明的化妆品组合物可在每当使用者施用或再施用其他化妆品组合物如唇膏或睫毛膏时被施用。在一些情况下，如所期望的，可能期望每隔一天、每星期两或三次、每星期一次、两星期一次或每月一次地施用本发明的化妆品组合物。可能期望施用本发明的化妆品组合物，使得所述组合物的至少一部分(例如，益生元部分)在使用者的皮肤上存在至少一小时(例如，1至24小时、2至20小时、4至16小时、或8–12小时)。在某些实施例中，可能期望施用所述组合物，使得所述组合物的至少一部分在皮肤上存在超过一天(例如，1–7天、2–6天、3–5天、或甚至4天)。在某些实施例中，可能期望以一种或多种前述频率施用本发明的化妆品组合物至少两个连续的或非连续的施用周期。例如，所述组合物可被每天一次地施用连续的或非连续的2、3、4、5、6、或7天。在另一个例子中，本发明的化妆品组合物可每隔一天地被施用一个月或更多。除此之外或作为另外一种选择，本发明的化妆品组合物可以在一种或多种前述时间周期中与口服的可摄取益生菌、益生菌衍生组合物(例如，裂解物)和/或益生元一起使用。

测试方法

起始培养物、工作培养物和测试样品的制备

从适当的来源获得杰氏棒状杆菌(C.jeikeium)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)、和痤疮丙酸杆菌(P.acnes)中每一种的试样。尤其合适的来源是美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection(ATCC)，Manassas,VA)，目录号分别为43734、12228、和11827。微生物分别生长在采用无菌培养基(其可以是采用常规方法(例如，高压灭菌)灭菌的)的起始培养物中。表皮葡萄球菌(S.epidermidis)生长在脑心浸液培养基(“BHI”)的起始培养物中；杰氏棒状杆菌(C.jeikeium)生长在补充了0.1％Tween 80的BHI培养基(“BHIT”)的起始培养物中；痤疮丙酸杆菌(P.acnes)生长在梭菌加强液体培养基(“RCB”)的起始培养物中。BHI培养基是通过将动物组织的胃酶消化物、氯化钠、右旋糖、明胶的胰酶消化物、和磷酸二钠的37克可商购获得的粉末添加至1升USP水制备的。RCB是通过将酪蛋白酶水解产物、牛肉和酵母提取物、右旋糖、氯化钠、乙酸钠、淀粉和l-半胱氨酸盐酸盐的38克可商购获得的粉末添加至1升USP水制备的。通过将0.75mL对数培养物与0.25mL的80％甘油混合并储存于-80℃直至使用，制备了上述三种细菌中每一种的甘油保存的种菌。

在第1天，通过在适当的容器中以50:1的比率用杰氏棒状杆菌(C.jeikeium)接种BHIT培养基(即，1mL甘油保存的种菌对50mL BHIT培养基)，制备了BHIT的起始培养物。同样在第1天，通过在适当的容器中以50:1的比率用痤疮丙酸杆菌(P.acnes)接种RCB培养基(即，1mL甘油保存的种菌对50mL RCB培养基)，制备了RCB的起始培养物。在33-37℃有氧地孵育包含杰氏棒状杆菌(C.jeikeium)的起始培养物46至48小时。在35-37℃厌氧地孵育包含痤疮丙酸杆菌(P.acnes)的起始培养物46至48小时。

在第2天，通过在适当的容器中以50:1的比率用表皮葡萄球菌(S.epidermidis)接种BHI培养基(即，1mL甘油保存的种菌对50mL BHI培养基)，制备了BHI的起始培养物，然后在33-37℃有氧地孵育22至26小时。

在第3天，通过以足够使细菌沉淀但保持活力的速度(例如，在Sorvall Evolution RC离心机中8500rpm)在室温离心，收集了上述三种起始培养物。在0.90％w/v盐水溶液(“生理盐水”)中清洗来自上述起始培养物的细菌沉淀物、重新沉淀、并重悬在足够的生理盐水中，以提供具有0.5×107CFU/mL至5×108CFU/mL之间的细菌浓度的工作培养物。

0.05％、0.5％和1％的测试样品可制备如下。然而，如本领域中普遍已知的，应当理解下列方法可以被修改，以提供具有所期望的最终体积或浓度的测试样品。

通过将1g干燥的经辐照的测试材料(例如，GOS)添加至10mL的水(10％w/v)并通过0.2微米过滤装置过滤该溶液，制备了测试试剂的10x工作原液。

通过将0.5mL的10x工作原液添加至9.5mL水，以得到0.5％稀释的工作原液。然后，可以将0.1mL的这种稀释的工作原液与0.8mL基本碳培养基和0.1mL所期望的工作培养物混合，以在适当的测试容器中(例如，在96孔深孔平板的每个孔中或烧瓶中)提供1mL的最终体积，可提供0.05％的测试样品。

通过将5mL的10x工作原液添加至5mL水，以制备稀释的工作原液，然后将0.1mL的这种稀释的工作原液与0.8mL基本碳培养基和0.1mL所期望的工作培养物混合，以在适当的测试容器中提供1mL的最终体积，可提供0.5％的测试样品。

通过将0.1mL的10x工作原液与0.8mL基本碳培养基和0.1mL所期望的工作培养物混合，以在适当的测试容器中提供1mL的最终体积，可提供1％的测试样品。

通过用水替换测试材料提供了水对照组。将测试材料添加至反应容器以形成测试样品的时间为T＝0。培养基或其他成分的全部转移可以使用，例如，具有适当体积范围(例如，100μL至1000μL或2μL至20μL)的Eppendorf Research系列体积可调式移液器(可购自Fisher Scientific(Pittsburgh,PA)进行。

在对每孔取样之前，通过在孔内上下吸打混合每一孔的内容物，这是本领域已知的常规混合技术。

ATP测试

ATP测试可以被用于测定测试样品中存在的三磷酸腺苷的含量。为了测量每一孔中的ATP，使用适当的转移设备从反应容器的每一孔移出了样品(例如，100微升)并置于96孔黑色孔的平板中。任选地，足量的葡萄糖被添加至包含表皮葡萄球菌(S.epidermidis)的孔中，以达到1％v/v的最终浓度，并于室温等待至少5分钟。不受理论的约束，据信表皮葡萄球菌(S.epidermidis)在受胁迫(即，饥饿)时，趋于比其他两种微生物更快地用尽其ATP。因此，添加葡萄糖可使表皮葡萄球菌(S.epidermidis)“做好准备”，并提供与对应的平板计数值相称的基线ATP含量。然而，为了潜在地增大可测量的益生元活性的动态范围，可能期望避免向包含表皮葡萄球菌(S.epidermidis)的孔中添加葡萄糖。在将测试样品置于黑色孔的平板中之后，通过向每一孔添加等体积的ATP试剂(例如，来自Promega Corporation的BacTiter Glo)测量了测试样品的ATP含量。例如，按照制造商的说明，100μL样品将得到100μL的ATP试剂。然后于室温以750rpm摇动孵育平板十五分钟。使用适当的冷光酶标仪，例如，可购自Wallac/PerkinElmer(Waltham,MA)的Victor X Multi Label品牌酶标仪，可测量培养物所发冷光。测量的冷光作为ATP值被记录。在T＝0、T＝24小时和T＝48小时对反应容器取样。在制备测试样品后尽可能快地测量在T＝0测量的ATP含量，决不能超过30分钟。对每一样品进行三次测试，并对结果取平均值，以提供ATP值。

平板计数测试

平板计数测试可被用于细菌计数评估。首先，在T＝0从每个一式三份的容器移出10μL的测试样品，总计为30μL，并将其置于970μL的生理盐水中。按需系列稀释样品，以允许20-300菌落每平板的计数范围(例如，1:10至1:10,000)，通过使用如本领域的技术人员所普遍已知的适当的铺板技术将50μL适当的稀释物置于每一平板上，将样品一式两份地在针对所测试的每一生物的适当培养基(例如，布氏杆菌血琼脂(“BBA”)TSA、TSA-0.1％Tween、RCA)上铺板。在氧气的存在下于33-37℃或厌氧地在35-37℃(取决于微生物偏好有氧的还是缺氧的条件)孵育所得到的平板，并在48至72小时后使用本领域已知的常规菌落计数技术进行分析，以确定菌落形成单位数。取一式两份平板的平均值，以提供细菌计数值。

体内实验

可进行体内实验以确认在体外预测的测试试剂的益生元潜能。在该研究规程中，24位女性志愿者被选择作为测试对象。测试对象必须满足下列入选标准，并且不可符合任何的下列排除标准。

入选标准

1.女性

2.年龄18至65岁

3.自我报告具有良好的总体健康状态

4.前臂支持模板

排除标准

1.在过去2星期(或研究期间)使用抗生素

2.已知对牛奶或甜菜食物过敏

3.在样品区域具有炎症、可见的割伤、擦伤等

4.导致反复皮疹、干燥或瘙痒的持续性皮肤状况，例如湿疹受试者指令/限制。测试对象同意遵守下列指令/限制。

1.在整个研究期间放弃在他们的前臂使用除被提供的那些之外的任何其他产品(包括，例如，保湿乳液和防晒剂)

2.洗手时加以注意。不允许皂接触前臂上的测试区域(然而，应当认识到，在淋浴时一些偶然的皂接触可能是不可避免的)

3.在整个研究期间仅适用被提供的产品，包括10天的条件化阶段和8天的复原阶段：

a.Olay Ultra Moisture With Shea Butter品牌条皂(重要的是不要使用抗菌性皂)

b.Pantene品牌洗发剂(重要的是不要使用去头屑洗发剂)

c.Pantene品牌调理剂(如果需要的话)

4.在所有的取样和处理日(参见图9中的研究日程表)，禁止洗涤前臂。允许淋浴；然而，不可物理洗涤前臂。

5.在处理阶段(参见图9中的研究日程表)，禁止穿着长袖衣服(即，覆盖前臂的衣服)。

6.整个研究期间，包括条件化和复原阶段，禁止泡澡(浸泡/淹没在水中)

7.整个研究期间，禁止游泳或坐在加氯水中。

8.禁止过量的日晒(人工的或天然的日光)

9.如果在研究期间发生健康状态的变化，告知研究者。

10.在参与本研究时不参与涉及前臂的任何其他研究。

研究设计

本研究包括三个阶段。第一个阶段是条件化阶段，在此过程中从每一测试对象获得前臂上靶标位点处的细菌计数的基线水平。第二个阶段是处理阶段，在此过程中使前臂上的靶标位点暴露于测试试剂(例如，GOS)，并取样以确定细菌计数相对于基线是否已发生了变化。第三个阶段是复原阶段，在此过程中前臂上的靶标区域不再暴露于测试试剂，并取样以确定细菌计数相对于处理阶段和/或条件化阶段是否已发生了变化。图9中提供了图表30，用于显示本研究的阶段以及进行取样时的时间线。

条件化阶段

如图9的图表30所示，条件化阶段在第1周的星期五开始。给予测试对象指令和在研究期间将使用的个人清洁产品(即，洗发剂、调理剂和条皂)。测试对象被指示对于所有的淋浴仅使用被提供的产品，并且除三个取样的早晨(即，第2周的星期一和星期五以及第3周的星期一)之外，遵从他们关于淋浴通常的习惯和实践。测试对象被指示在第2周的星期一和星期五以及第3周的星期一到研究地点报到，以便进行前臂的微生物取样，这详述于下文中。在这三个取样的早晨，测试对象在取样前不洗涤他们的前臂(不用皂或物理擦洗)。

处理阶段

处理阶段在第3周的星期一开始。测试对象在第3周星期一至星期四的每一早晨上午7:30和9:30之间到研究地点报到，并在每一下午的下午1:00和3:00之间返回，以在规定的前臂位点施用测试材料。在整个处理阶段，测试对象不洗涤他们的前臂(不用皂或物理擦洗)或穿着任何覆盖他们前臂的衣物。在取样后(当适用时)和处理前用温水冲洗前臂是允许的。在处理阶段期间，在星期一(第三个条件化阶段样品)、星期二(第一个处理阶段样品)和星期五(第二个处理阶段样品)的早晨收集前臂微生物样品。

复原阶段

复原阶段在第3周的星期五开始。测试对象在第4周的星期一到研究地点报到，以进行复原期间的前臂微生物取样。除了取样的早晨之外，测试对象遵从他们关于淋浴通常的习惯和实践。在取样的早晨，测试对象在取样前不洗涤他们的前臂(不用皂或物理擦洗)。

取样和处理

使用具有足够数量的1.5英寸×1.5英寸方形区域100的固定的模板标记每一测试对象的前臂，如图10所示。上述方形区域各自标识前臂上的一个靶标测试区域。在图10所示的例子中，六种测试试剂可被测试(即，每一手臂上三个)，或三种测试试剂可被测试两次(即，每一前臂上重复)，或是这些的任何组合。在另一方面，如果仅有一种测试试剂，则每一前臂上的两个方形区域100可足够提供适用于一种测试试剂和一种对照物(例如，水对照组)的测试区域。如果在本研究的过程中，标记褪色或以其他方式变得难以看见，可用适当的标记装置(例如，永久性记号笔)标识每一方形区域100的角落，以允许前后一致的取样和处理。用于处理的测试试剂以含水的测试溶液的形式被提供。在制备后，在无菌条件下过滤(0.2μm)测试溶液，然后转移至单个的无菌小瓶(1mL)中，供每一测试对象日常使用。对于每次处理，在每次上门时用配备了无菌吸头的适当的移液器将五十微升(μL)施用于前臂上的每一靶标区域。因此，每一靶标测试区域每次上门(即，早晨和下午)接受50μL，每天每位点接受总计100μL的测试溶液。在每次将测试溶液施用于测试对象的前臂上所期望的靶标区域后，用无菌的接种环将产品在该方形区域的表面分散。移液器吸头和接种环在每次使用后丢弃。在进行了全部的处理后，受试者在溶液风干的同时在原地停留5分钟。

在前臂上的每一靶标测试区域处(即，在每一方形区域100中)对测试对象取样。为了对靶标区域取样，在无菌的1x磷酸盐缓冲盐水+0.1％Triton X-100中润湿清洁的无菌拭子，并在容器的侧边轻轻除去多余的液体。每天丢弃拭子溶液。将拭子置于靶标测试区域并施加足够的压力以使拭子弯曲(但不断裂)。持续施加压力，以交叉影线方式移动拭子末端通过靶标测试区域5秒钟。将拭子旋转180°并重复。如果不立即对样品进行分析，则将拭子置于15mL无菌锥形管中，并弄断拭子的杆，使得其在管被密封时适合装在管中并能够被方便地从管中取出用于分析。一英寸的杆长度可以是足够的。将管密封并在管上提供适当的标记(例如，使用预先标记的管或在管的外部贴上标签)。如果不是立即，但会在几个小时(例如，1–3小时)内对样品进行分析，则将管置于冰上直到对其进行分析。如果在几个小时内不会进行分析(例如，超过3个小时)，则将管储存在-80℃冰箱中，直到对样品进行分析。用第二根拭子在相同位点使用相同的方法重复取样过程，并将第二根拭子以与第一根拭子相同的方式置于15mL锥形管中。将第二根拭子储存在-80℃。第二根拭子可以被用作第一根拭子的备份，或者用于稍后的群落分析(即，通过用例如QPCR的DNA分析，确定样品中存在的微生物物种)。

样品分析

对于来自上文的被置于冰上的拭子样品或在分析前刚取样的拭子样品，分析可立即开始。向每一管添加5mL的1x磷酸盐缓冲盐水+0.1％Triton X-100以形成测试溶液，并涡旋10秒以促进微生物从拭子上移出。就在移出测试溶液用于铺板之前，可进行附加的涡旋以有利于混合。通过使用常规铺板技术将50μL的测试溶液在第一平板上铺板，并使用常规铺板技术将50μL的1:10稀释的测试溶液(即，5μL测试溶液混于45μL缓冲溶液中)在第二平板上铺板，按照上文所述的平板计数测试方法测量了样品的细菌计数值。将200μL的测试溶液转移至重复的96-孔深孔平板中。将上述96孔板与任何剩余的测试溶液一起冷冻在-80℃，用于附加的分析，如所期望的(例如，QPCR)。对于冷冻的测试样品的分析，将包含所期望的样品的管从冰箱中取出，并将它们在室温静置约30分钟或直到解冻。对于没有缓冲液的冷冻拭子的分析，处理将按照所使用的分析方法。

本文所公开的量纲和值不应被理解为严格限于所列举的精确值。相反，除非另外指明，每个这样的量纲旨在表示所列举的值和该值周围的功能上等同的范围。例如，被公开为“40mm”的量纲旨在表示“约40mm”。

本文所引用的每一文献，包括任何交叉引用的或相关的专利或专利申请，除非明确地排除或以其他方式限制，均全文以引用的方式并入本文。对任何文献的引用均非承认其是相对于本文所公开的或受权利要求书保护的任何发明的在先技术、或其单独地或在与任何其他参考文献的组合中教导、建议或公开了任何此类发明。另外，对于本文中的术语的任何含义或定义与相同的术语在以引用的方式并入的文献中的任何含义或定义相抵触的情况，应以该术语在本文中所指定的含义或定义为准。

虽然已经图示和描述了本发明的具体实施例，但是对于本领域的技术人员显而易见的是，可以在不脱离本发明的实质和范围的情况下，做出各种其他改变和修改。因此在所附权利要求中，旨在涵盖落在本发明范围内的所有此类改变和修改。

Claims (15)

1.一种局部化妆品组合物，包含：

a.皮肤病学可接受的载体；和

b.有效量的皮肤共生益生元。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中根据平板计数测试，向皮肤施用所述组合物在体内增加了需氧的和厌氧的皮肤共生微生物中的至少一种的细菌计数。

3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述增加为至少10％。

4.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述皮肤共生益生元以按所述组合物的重量计约0.001％至约25％的量存在。

5.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述皮肤共生益生元以足够使至少一种皮肤共生微生物的ATP含量根据ATP测试在体外增加的量存在。

6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述增加为至少80％。

7.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述皮肤共生益生元以足够使至少两种皮肤共生微生物的ATP含量在体外增加的量存在。

8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述增加为至少50％。

9.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述皮肤共生益生元以足够使至少三种皮肤共生微生物的ATP含量在体外增加的量存在。

10.根据权利要求9所述的组合物，其中所述增加为至少25％。

11.根据权利要求1所述的组合物，其中根据平板计数测试，所述皮肤共生益生元以足够使至少一种皮肤共生微生物的细菌计数在体外增加的量存在。

12.根据权利要求1所述的化妆品组合物，其中所述皮肤共生微生物为选自葡萄球菌属、棒状杆菌属、丙酸杆菌属的物种。

13.根据权利要求1所述的化妆品组合物，其中所述皮肤共生益生元选自低聚半乳糖、羟基异亮氨酸、小麦糊精、阿拉伯半乳聚糖、柑橘纤维、豌豆纤维、麦芽糖糊精、低聚果糖、菊粉、菊粉低聚纤维、甘露聚糖水解产物、葡甘露聚糖水解产物、半乳甘露聚糖、低聚龙胆糖、异麦芽低聚糖、猕猴桃衍生化合物、甜菜浆、和米糠。

14.根据权利要求1所述的局部化妆品组合物，还包含护肤活性物质、着色剂、保湿剂、湿润剂、润肤剂、成膜剂、粘度调节剂、pH缓冲剂、香料、和防晒剂中的至少一种。

15.一种制备根据前述权利要求中任一项所述的局部化妆品组合物的方法，包括：

a.使用第一体外测定法鉴定潜在的皮肤共生益生元剂；

b.使用第二体外测定法和体内测定法中的至少一种确认(a)中所鉴定的试剂的益生元潜能；

c.将有效量的来自(b)的经确认的益生元剂与皮肤病学可接受的载体混合以形成局部化妆品组合物。