CN115038425B - 包括多糖类、酵母提取物及具备益生菌特性的菌株发酵物作为有效成分的皮肤改善用化妆料组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及包含多糖类、酵母提取物及具备益生菌特性的菌株发酵物作为有效成分,对人体无害且具有皮肤的状态改善功能的化妆料组合物,上述化妆料组合物提供为,栖息在皮肤上的微生物菌丛改善用、皮肤舒缓用、皮肤皱纹改善用、皮肤弹性改善用、头皮舒缓用、头皮油分改善用、脱发预防用或生发改善用。
Description
技术领域
本发明涉及包括多糖类、酵母提取物及具备益生菌特性的菌株发酵物作为有效成分的皮肤改善用外用组合物。
背景技术
随着生活水平的提高,人们不仅关心健康,而且对美容的关注度也越来越高,由此人们普遍努力地想要拥有美丽的皮肤,随之出现了各种用于皮肤管理的化妆料组合物。
从这样的美容的观点来看,头发占据重要的一部分。头发是从皮肤表面生成的比较细且角质化的结构。这不仅对外部冲击起到缓冲作用,而且能够在直射光线、寒冷、摩擦、危险等外部刺激中保护人体,使得对身体有害的砷、汞、锌等重金属排出到体外,而现代在作为装饰的美容方面也发挥着越发重要的作用。
因以饮食的变化或内外压力增加为主的各种原因,会导致包括脱发在内的头发状态的恶化,通常头皮和头发是相互依赖的,因此头皮的状态成为影响头发的最重要的一个要素(Int.J.Trichology.,2018Nov-Dec;10(6):262-270)。
另一方面,以头皮及头发管理为主的用于皮肤管理的外用组合物在原料或形态、功能上以各种形态出现,其中大多数情况下为了杀灭皮肤中的有害菌或为了调节油分而添加人工化合物,而这样的人工化合物在功能性方面具备优异的优点,但有时会刺激皮肤,长期以来反而会成为损伤皮肤的原因。
因此,需要研发一种改善如以往的应用于皮肤的外用组合物的问题,且对人体无害,还能够对皮肤状态改善起到有效作用的组合物。
发明内容
发明要解决的课题
本发明是为解决如上述的以往技术的问题而研发的,本发明的目的在于提供一种包含源自植物的多糖类、源自酵母的提取物及具备益生菌特性的菌株发酵物作为有效成分,从而能够实现增加皮肤的有益菌或减少有害菌的效果的皮肤改善用化妆料组合物。
用于解决课题的手段
本发明提供一种包含多糖类、源自微生物的提取物的酵母提取物及源自微生物的发酵物即具备益生菌特性的菌株发酵物作为有效成分的皮肤改善用化妆料组合物。
本发明中使用的用语即“益生菌(probiotics)”是指,存在于人体内且对人类的健康起到有益的作用的微生物及上述作用,包括上述微生物的死菌体、提取物及发酵物这样的代谢体。“益生元(prebiotics)”是指,为了促进上述微生物的繁殖、生长及提高活性使用的食物。
本发明中使用的用语即“菌丛”是指,在人体内的特定部位正常地存在而影响人类的健康的微生物的细胞群。
本发明中,具备益生菌特性的菌株发酵物其本身不能实现增加有益菌或降低有害菌而改善皮肤状态的有意义的效果,但确认到包括上述菌株发酵物及益生菌即多糖类和其他益生菌即源自酵母的提取物的组合物显示出促进有益菌的生长及繁殖的益生元特性,从而上述组合物被制成头皮或皮肤状态改善用组合物而提供。
本发明中多糖类为选自由菊粉、β-葡聚糖及麦芽糊精构成的组的1种以上。上述这样的多糖类有利于在人体内通过提高免疫细胞的活性而增强免疫力,降低细胞中的氧化压力。
菊粉(inulin)作为在菊苣、小麦、洋葱、香蕉、大蒜、芦笋等多个植物中用作存储能源的手段的多糖类,在一般情况下可从该植物的根或根茎获得。在将菊粉应用于皮肤的情况下,菊粉可在抗菌物质中保护存在于皮肤中的具备益生元特性的微生物。由下面的化学式1表示的菊粉(C6nH10n+2O5n+1)在链端包括葡萄糖基部分且在之间包括重复的果糖基部分。
[化学式1]
上述n可以是2至60,但不限于此。本发明中菊粉可从菊苣根获得,但也可以从国内外市场中购买而使用。
β-葡聚糖(beta-glucan)是在谷物、细菌及霉菌的细胞壁中形成的多糖类。在将β-葡聚糖应用于皮肤的情况下,β-葡聚糖具有提高皮肤细胞中的抗氧化活性,皱纹防止活性,提高紫外线阻断、伤口治愈及保湿力的效果。下面的化学式2所表示的β-葡聚糖包括在贝塔1,3位置进行糖苷结合的反复的葡萄糖基部分。
[化学式2]
上述n可以是2至100,但不限于此。本发明中β-葡聚糖从蘑菇子实体提取而获得,但也可以从国内外市场中购买而使用。
麦芽糊精(maltodextrin)是通过植物淀粉的部分水解而形成的多糖类。在将麦芽糊精应用于皮肤的情况下,麦芽糊精提高皮肤细胞中的抗氧化活性。下面的化学式3所表示的麦芽糊精包括在阿尔法1,4位置进行糖苷结合的反复的葡萄糖基部分。
[化学式3]
上述n可以是2至20,但不限于此。在本发明中可将玉米或小麦淀粉水解而获得,但也可以从国内外市场中购买而使用。
本发明中酵母提取物包括利用溶剂提取酵母的提取物、将酵母细胞水解而获得的组分、酵母及培养物共存的酵母的培养基、从上述的组分或培养基提取的提取物、从上述的组分或培养基过滤出酵母的过滤物、上述的组分或提取物的稀释液或干燥物等。例如,酵母提取物是利用药学上允许的有机溶剂来提取酵母或利用酶而将酵母细胞水解之后通过溶剂分离的组分。
本发明中酵母提取物是选自由源自啤酒的酵母提取物及源自松露的酵母提取物构成的组的1种以上。
源自啤酒的酵母提取物是对相当于子囊菌类的啤酒酵母属(Saccharomyces)的酵母进行培养或购买相同种类的酵母而进行培养后,提取灭菌处理的培养物而获得的提取物。优选为,上述酵母为啤酒酵母(Saccharomy cescerevisiae)。啤酒酵母还被称为面包酵母,在制造以啤酒为主的酒精饮料及面包时使用。源自啤酒的酵母提取物通过在利用啤酒酵母的啤酒制造工序中使麦汁发酵而过滤啤酒之后将分离的酵母进行干燥而获得。源自啤酒的酵母提取物为非发酵性的,包括大量的碳水化合物、蛋白质、核酸、维生素B及磷这样的矿物质。维生素B群具有皮肤健康及头发状态改善效果。本发明中将啤酒制造工序中使用的酵母分离而培养之后灭菌处理而获得,但也可以从国内外市场中购买而使用。
源自松露(松茸)的酵母提取物是将存在于松露的微生物中将酵母分离而培养或购买与在松露发现的酵母同一种类的酵母而培养之后进行灭菌处理而提取的培养物的提取物。源自松露的酵母提取物中含有大量的β-葡聚糖,包括少量的维生素B群。本发明中可通过上述例示的方法来获得提取物,但也可以从国内外市场中购买而使用。
本发明中具备益生菌特性的菌株是选自由乳杆菌属菌株及双歧杆菌属菌株构成的组的1种以上的厌氧性菌株。因此,具备益生菌特性的菌株的发酵物包括上述菌株的发酵代谢产物,但不限于此。
本发明中发酵物不仅包括从菌株获得的发酵的物质,而且还包括菌株及培养物共存的菌株的培养基、从上述培养基将菌株过滤而获得的发酵物、从上述培养基对菌株进行灭菌处理并将此过滤而获得的发酵物、上述的发酵物或从包括这些的培养基提取的提取物、上述的发酵物或提取物的稀释液或干燥物、捕捉菌株的菌体而破碎而成的溶解物等。优选为,发酵物是指发酵溶解物和发酵过滤物。
例如,发酵物包括发酵溶解物和发酵过滤物。发酵溶解物是指,在通过厌氧性菌株而发酵之后利用热、pH、酶、压力等条件而将该菌杀灭之后所得到的获得物。发酵溶解物中不仅包括发酵代谢产物,还包括该菌株内的有用的各种成分。发酵过滤物是指,在通过厌氧性菌株而发酵之后通过过滤等分离方法而将该菌株为主的微生物去除而获得的上清液。
乳杆菌属(Lactobacillus)菌株是分布在人体内部或植物及土壤这样的整个自然环境的革兰氏阳性菌。乳杆菌属菌株通过对6碳糖的发酵代谢而生成乳酸。乳杆菌属菌株作为人体内的代谢结果而生成乳酸或过氧化氢而抑制以特定病原菌为主的有害菌的生长。
本发明中乳杆菌属菌株包括将1个6碳糖分子发酵成2个乳酸分子的同型乳酸发酵菌株及从6碳糖分子生成乳酸分子及乙醇、醋酸、二氧化碳等的异型乳酸发酵菌株。例如,乳杆菌属菌株可包括嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、德氏乳杆菌(L.delbrueckii)、瑞士乳杆菌(L.helveticus)、唾液乳杆菌(L.salivarius)、干酪乳杆菌(L.casei)、植物乳杆菌(L.plantarum)、沙克乳酸杆菌(L.sakei)、短乳杆菌(L.brevis)、布氏乳杆菌(L.buchneri)、发酵乳杆菌(L.fermentum)、罗伊氏乳杆菌(L.reuteri)、鼠李糖乳酸杆菌(L.rhamnosus)、副干酪乳杆菌(L.paracasei)、约氏乳杆菌(L.Johnsonii)、保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)等,但不限于此。优选为,乳杆菌属菌株是嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、副干酪乳杆菌及保加利亚乳杆菌中的至少一个。更优选为,乳杆菌属菌株为嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌及副干酪乳杆菌中的至少一个。最优选为,乳杆菌属菌株为嗜酸乳杆菌及植物乳杆菌中的至少一个。
因此,本发明中,乳杆菌属菌株的发酵物包括相对6碳糖的上述菌株的发酵代谢物,优选为将上述菌株杀灭的发酵溶解物。
双歧杆菌属(Bifidobacterium)菌株是分布在人体的皮肤或食物及土壤这样的整个自然环境的革兰氏阳性菌。双歧杆菌属菌株是通过利用果糖-6-磷酸磷酸酮醇酶的独特的6碳糖发酵代谢而生成乳酸、醋酸、甲酸等的异型乳酸发酵菌株。
本发明中双歧杆菌属菌株例如包括动物双歧杆菌(B.animalis)、两歧双歧杆菌(B.bifidum)、短双歧杆菌(B.breve)、齿双歧杆菌(B.dentium)、长双歧杆菌(B.longum)、假长双岐杆菌(B.pseudolongum)等,但不限于此。优选为,双歧杆菌属菌株是动物双歧杆菌、两歧双歧杆菌及长双歧杆菌中的至少一个。
本发明中双歧杆菌属菌株的发酵物包括相对6碳糖的上述菌株的发酵代谢物,优选为将上述菌株杀灭的发酵溶解物。
本发明的一个实施例的皮肤改善用化妆料组合物包括菊粉、β-葡聚糖、麦芽糊精、源自啤酒的酵母提取物、源自松露的酵母提取物、乳杆菌发酵溶解物或双歧杆菌发酵溶解物作为有效成分。
优选为,上述化妆料组合物以相同的比率包括菊粉、β-葡聚糖、麦芽糊精、源自啤酒的酵母提取物、源自松露的酵母提取物、乳杆菌发酵溶解物及双歧杆菌发酵溶解物。例如,上述化妆料组合物依次以a:b:c:d:e:f:g的重量比包括菊粉、β-葡聚糖、麦芽糊精、源自啤酒的酵母提取物、源自松露的酵母提取物、乳杆菌发酵溶解物及双歧杆菌发酵溶解物。在此,a至g分布为1至10,优选为a至g分别为1至5,最优选为a至g均为1。
本发明的一个实施例的皮肤改善用化妆料组合物相对于全部100重量%而包括0.00001至10重量%的选自由菊粉、β-葡聚糖、麦芽糊精、源自啤酒的酵母提取物、源自松露的酵母提取物、乳杆菌发酵溶解物及双歧杆菌发酵溶解物构成的组的一个以上的有效成分。优选为包括0.0001至1重量%,更优选为包括0.0005至0.5重量%,最优选为包括0.001至0.1重量%。
本发明中使用的用语即“皮肤改善”不仅包括肉眼观察的皮肤状态的改善,而且还包括对皮肤健康产生直接及间接影响的要素。
具体地,本发明的皮肤改善用化妆料组合物是栖息在皮肤上的微生物菌丛改善用组合物。微生物菌丛的改善包括促进存在于皮肤的有益菌的生长而增加有益菌或抑制有害菌的生长而减少有害菌的情况。
具体地,本发明的皮肤改善用化妆料组合物是皮肤舒缓用组合物、皮肤皱纹改善用组合物及皮肤弹力改善用组合物中的任一个组合物。皮肤舒缓包括预防或抑制皮肤上的炎症的情况在内的预防皮肤上的障碍或正常化。皮肤皱纹改善或弹力改善包括预防或抑制由老化等自然原因和紫外线、氧化压力等外部环境原因导致的真皮层的损坏或体积减少的情况。
具体地,本发明的皮肤改善用化妆料组合物应用于头皮。例如,头皮改善用化妆料组合物是头皮舒缓用组合物、头皮油分改善用组合物、脱发预防用及生发改善用组合物中的任一个组合物。皮肤舒缓是指预防或抑制头皮上的炎症。头皮油分改善表示在皮肤上分泌过量的油分时减少油分的分泌量。脱发预防或生发改善包括提高头皮的人毛乳头细胞的活性或抑制对构成皮肤的细胞的炎症因子或加大构成皮肤的细胞中的胶原生物合成率的情况。
优选为,“皮肤改善”是指,增加存在于皮肤的有益菌并减少有害菌。上述有益菌及有害菌根据对人体的皮肤健康的该菌株的效果而区分,例如可以是葡萄球菌属(Staphylococcus)的菌株,但不限于此。
例如,葡萄球菌属的菌株中作为表皮葡萄状球菌的表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)这样的菌对正常的皮肤不用作病原菌,生成对于其他病原菌的抗菌性肽或具有抑制一部分癌的发展的效果,因此可区分为有益菌。
例如,葡萄球菌属的菌株中作为黄色葡萄球菌的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)这样的菌存在于皮肤表面或毛孔而引发各种皮肤感染,并且对于正常的皮肤也可能引发疾病,因此区分为有害菌。皮肤为头皮的情况下,有害菌包括生成霉菌毒素而引发头皮的炎症的黑曲霉(A.niger)。
如后述,本发明的一个实施例的组合物通过增加有益菌等,通过改善人体内的菌丛,由此提供改善皮肤的效果。
人毛乳头细胞(human dermal papilla cell)作为存在于头皮毛囊的中间外侧细胞,对控制头发生成及头发生长周期的事件起到决定性的作用。在头皮的油分过量存在的情况下,可引发皮肤炎,炎症因子可引发对存在于头皮的细胞的炎症反应。胶原是指存在于细胞外基质的构成结合组织的蛋白质,头皮中胶原的生物合成率下降的情况下,可引发头皮的真皮恶化及由此导致的毛囊的缩小。
如后述,本发明的一个实施例的组合物可提供如下效果:提高特定细胞的活性;减少皮肤的油分;抑制对皮肤的细胞的炎症因子的生成;及通过加大胶原生物合成率而改善皮肤。
本发明中使用的用语即“化妆料组合物”是指,直接涂敷到皮肤或通过喷洒等而提供的组合物。本发明中使用的用语“提供”是指,利用本领域通常的方法而将本发明的组合物投放到目的组织中。
本发明的皮肤改善用化妆料组合物可以是化妆水、乳液、润肤乳、营养霜、保湿霜、眼霜、精华、化妆软膏、喷雾、凝胶、面膜、防晒霜、粉底液、粉底霜、粉体、洁面霜、洁面乳、洁面油、洁面奶、皂或沐浴露的剂型。
本发明的皮肤改善用化妆料组合物中,皮肤为头皮或头发的情况下,可以是生发水、养发素、护发精华、护发乳液、护发营养乳液、洗发水、护发素、头发护理液、护发霜、头发营养霜、头发保湿霜、头发按摩霜、发蜡、头发喷雾、发膜、头发营养膜、洗发皂、洗发乳、发油、头发干燥剂、头发保存处理剂、头发染色剂、头发用波浪剂、头发脱色剂、发胶、发釉、头发调节剂、染发剂、头发保湿剂、摩丝或头发喷雾的剂型。
在将本发明的组合物剂型化为液体的情况下,本发明的组合物包括上述有效成分的载体。上述载体例如为水、乙醇、蓖麻油、甘油、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇油、甘油脂族酯、聚乙二醇或山梨聚糖这样的脂肪酸酯,但不限于此。这些可以单独使用或将2种以上混合而使用。
将本发明的组合物剂型化为糊、霜或凝胶的情况下,本发明的组合物包括上述有效成分的载体。上述载体例如为动物性油、植物性油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、羟乙基等纤维素衍生物、聚乙二醇、硅、膨润土、二氧化硅、滑石、氧化锌、十六硬脂醇或硬脂基三乙基氯化铵,但不限于此。这些可以单独使用或将2种以上混合而使用。
将本发明的组合物剂型化为粉体或喷雾的情况下,本发明的组合物可包括上述有效成分的载体。上述载体例如为乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉体,但不限于此。这些可以单独使用或将2种以上混合而使用。将本发明的组合物剂型化为喷雾的情况下,还包括氯氟烃、丙烷、丁烷或二甲醚这样的推进体。
将本发明的组合物剂型化为皂的情况下,本发明的组合物包括上述有效成分的载体。上述载体例如为脂肪酸的碱金属盐、脂肪酸半酯盐、脂肪酸蛋白水解物、乙硫磷、羊毛脂衍生物、脂肪醇、植物性油、甘油、糖等,但不限于此。这些可以单独使用或将2种以上混合而使用。
本发明的组合物还包括对化妆料组合物通常使用的添加剂。上述添加剂例如为纯净水、表面活性剂、保湿剂、低级醇、螯合剂、杀菌剂、氧化防止剂、防腐剂、色素、香料,但不限于此。这些可以单独使用或将2种以上混合而使用。
本发明提供多糖类、酵母提取物及具备益生菌特性的菌株发酵物中的任一个以上的用途。具体为,本发明提供多糖类、酵母提取物及具备益生菌特性的菌株发酵物中的任一个以上的皮肤改善用化妆料组合物中的用途。更具体为,本发明提供多糖类、酵母提取物及具备益生菌特性的菌株发酵物中的任一个以上的皮肤改善用化妆料组合物的制造方法中的用途。
另外,本发明提供多糖类、酵母提取物及具备益生菌特性的菌株发酵物中的任一个以上的皮肤改善方法、栖息在皮肤上的微生物菌丛改善方法、皮肤舒缓方法、皮肤皱纹改善方法、皮肤弹性改善方法、头皮舒缓方法、头皮油分改善方法、脱发预防方法或生发改善方法中的用途。
另外,本发明提供将包括多糖类、酵母提取物及具备益生菌特性的菌株发酵物中的任一个以上的化妆品处理于对象体而改善皮肤的方法、改善栖息在皮肤上的微生物菌丛的方法、舒缓皮肤的方法、改善皮肤皱纹的方法、改善皮肤弹性的方法、舒缓头皮的方法、改善头皮油分的方法、预防脱发的方法或生发改善方法。
以上,本发明中所包括的所有成分的含量不超过各个国家所规定的规格制度。优选为,在不超过中国政府所指定的“化妆品安全技术规范”中规定的最大使用量的范围内包括本发明的化妆料组合物中所提及的各个成分。
发明效果
本发明的皮肤改善用化妆料组合物包括作为益生元的多糖类、作为益生菌的从酵母中提取的提取物及菌株发酵物,与单独应用益生元或益生菌的情况相比,达到了繁殖皮肤中的有益菌及抑制有害菌的优异的效果。这样的化妆料组合物对人体无害,通过改善皮肤的菌丛而能够改善皮肤状态。
具体地,本发明的皮肤改善用化妆料组合物提高人毛乳头细胞的活性而改善头皮健康及头发状态。
另外,本发明的皮肤改善用化妆料组合物抑制对皮肤细胞的炎症因子的生成而能够改善皮肤状态。
另外,本发明的皮肤改善用化妆料组合物加大皮肤细胞中的胶原生物合成率而改善皮肤的状态及健康。
另外,本发明的皮肤改善用化妆料组合物对皮肤无副作用地去除异物和油分,由此改善皮肤表面的油水平衡。
附图说明
图1是本发明的实施例的洗发水的(a)应用前和(b)应用1次之后的头皮照片。
图2是本发明的实施例的洗发水的(a)应用前和(b)应用1次之后的头皮照片。
图3是本发明的实施例的洗发水的(a)应用前和(b)应用1次之后的头皮照片。
具体实施方式
通过参照下面的具体说明和优选的实施例能够更加清楚地理解本发明的目的、特定的优点及新颖的特征。但是,这些实施例仅用于对本发明进行例示性说明,本发明的范围不限于这些实施例。另外,在对本发明进行说明时,在判断为对相关的公知技术的具体说明导致本发明的要旨不清楚的情况下,省略其详细的说明。
制造例.包括多糖类、酵母提取物及具备益生菌特性的菌株发酵物的复合物
关于在下面的实施例中使用的菊粉(Beneo)、β-葡聚糖((株)Quegen Biotech)、麦芽糊精(samyang)、源自啤酒的酵母提取物(activon),使用了市场上销售的产品。作为源自松露的酵母提取物使用了从松露分离出酵母而在37℃下培养48小时之后进行灭菌处理来得到的获得物中提取的提取物。作为乳杆菌发酵溶解物及双歧杆菌发酵溶解物使用了将乳杆菌和双歧杆菌(Chr.Hansen)在37℃下培养48小时之后进行灭菌处理来得到的获得物中提取的提取物。
(制造例1)中制造了分别混合10g的菊粉、源自啤酒的酵母提取物及乳杆菌发酵溶解物而成的复合物。(制造例2)中制造了分别混合10g的β-葡聚糖、源自啤酒的酵母提取物及乳杆菌发酵溶解物而成的复合物。(制造例3)中制造了分别混合10g的麦芽糊精、源自啤酒的酵母提取物及乳杆菌发酵溶解物而成的复合物。(制造例4)中制造了分别混合10g的菊粉、源自松露的酵母提取物及双歧杆菌发酵溶解物而成的复合物。(制造例5)中制造了分别混合10g的β-葡聚糖、源自松露的酵母提取物及双歧杆菌发酵溶解物而成的复合物。(制造例6)中制造了分别混合10g的麦芽糊精、源自松露的酵母提取物及双歧杆菌发酵溶解物而成的复合物。(制造例7)中制造了分别混合10g的菊粉、β-葡聚糖、麦芽糊精、源自啤酒的酵母提取物、源自松露的酵母提取物、乳杆菌发酵溶解物及双歧杆菌发酵溶解物而成的复合物。
实施例.包括多糖类、酵母提取物及具备益生菌特性的菌株发酵物作为有效成分
的化妆料组合物
实施例1-1.洗发水组合物
制造了包括下面的表1所示的组成的洗发水组合物。
[表1]
实施例1-2.洗发水组合物
制造了具备下面的表2所示的组成的洗发水组合物。
[表2]
实施例2.头发护理液组合物
制造了具备下面的表3所示的组成的头发护理液组合物。
[表3]
实施例3.生发水
制造了具备下面的表4所示的组成的生发水组合物。
[表4]
实施例4.沐浴露
制造了具备下面的表5所示的组成的沐浴露组合物。
[表5]
实施例5.润肤乳
制造了具备下面的表6所示的组成的润肤乳组合物。
[表6]
实验例1.确认关于有益菌繁殖的效果
为了确认关于有益菌繁殖的制造例的复合物的效果,作为有益菌选择了表皮葡萄球菌(S.epidermidis),作为有害菌选择了金黄色葡萄球菌(S.aureus)。在使用之前,在-80℃条件下保管这些菌,准备多个100mL的TSB(trypticsoybroth)培养基,按照各个培养基分别接种了500μl的各个菌的库存。之后,在37℃的条件下以210rpm的速度旋转17小时而进行培养,然后分别取出4mL的培养液而接种到40mL的TSB并在37℃的条件下以210rpm的速度传代培养8小时。
经过8小时之后,将光学密度(O.D.,opticaldensity)值调整为0.65,分别以1%浓度接种根据上述制造例1至7而准备的复合物之后检测了初始光学密度值。之后,在37℃的条件下以210rpm的速度旋转16小时而培养之后检测了光学密度。按照各个培养基,将16小时之后的光学密度检测值与初期检测值之差除以初期检测值而进行标准化,从而进行了评价。
作为比较例,使用了以1%浓度分别接种菊粉、β-葡聚糖、麦芽糊精、源自啤酒的酵母提取物、源自松露的酵母提取物、乳杆菌发酵溶解物及双歧杆菌发酵溶解物的产物。作为对照群使用了未进行任何处理的无处理群。
将上述制造例及比较例的接种结果与无处理群进行比较并将有益菌及有害菌的平均增减程度换算成了百分比,其结果如下面的表7所示。
[表7]
区分 | 有益菌(S.epidermidis) | 有害菌(S.aureus) |
乳杆菌发酵溶解物 | -9.90 | 21.42 |
双歧杆菌发酵溶解物 | -4.69 | 26.00 |
源自啤酒的酵母提取物 | 2.48 | 16.37 |
源自松露的酵母提取物 | 3.39 | 14.95 |
菊粉 | 0.29 | -0.84 |
β-葡聚糖 | -0.26 | -0.78 |
麦芽糊精 | 0.14 | 1.43 |
制造例1 | 5.51 | -2.46 |
制造例2 | 4.79 | -2.88 |
制造例3 | 3.88 | -2.31 |
制造例4 | 7.18 | -2.49 |
制造例5 | 6.07 | -2.71 |
制造例6 | 5.99 | -2.19 |
制造例7 | 15.54 | -7.47 |
如表7所示,虽然菊粉、β-葡聚糖及麦芽糊精是具备益生元特性的多糖类,但在单独使用时对有益菌增加及有害菌减少未显示出有意义的效果,在具备益生菌特性的发酵溶解物的情况下,在单独使用时反而显示出有益菌减少且有害菌繁殖增加的情况。
与此相比,本发明的制造例1至7的复合物与单独使用多糖类、酵母提取物或发酵溶解物的比较例相比,显示出显著优异的有益菌增加且有害菌减少的效果,将作为益生元的多糖类和作为益生菌的酵母提取物及发酵溶解物并用的情况下,能够提高有益菌增加及有害菌减少的效果。特别地,制造例7与其他制造例相比,关于有益菌增加及有害菌减少,显示出最优异的效果。
实验例2.确认人毛乳头细胞的活性
为了确认对人毛乳头细胞的制造例的复合物效果,作为细胞株使用4-8passage的人类人毛乳头细胞(Promocell公司,C-12071),作为初期培养液,使用了真皮乳头细胞生长培养基(follicle dermal papilla cell growth media)(Promocell公司,C-26501)。
在96-孔板中,针对各个孔以3,000至6,000个水平播种细胞,在37℃的5%的二氧化碳浓度条件的培养器中培养了24小时。之后,将培养液更换成添加了0.1%的FBS(fetalbovine serum:胎牛血清)的DMEM培养基,并在37℃、5%的二氧化碳浓度条件的培养器中培养了24小时。之后,将培养液更换成将上述制造例1至7的复合物按照浓度处理的添加了0.1%的FBS的DMEM,并在37℃、5%的二氧化碳浓度条件的培养器中培养了48小时。将各个孔的CCK-8溶液10μl10μl地进行处理,并在37℃下培养1小时之后检测了450nm中的光学密度。
将各个孔的48小时之后的光学密度检测值与初期检测值之差除以初期检测值而标准化,由此进行了评价,其平均值如下面的表8所示。作为对照群,处理了1μM的米诺地尔。关于显著性差异,假设等分散而汇出了p-value值(显著性差异p<0.05)。
[表8]
如表8所示,本发明的制造例1至7的复合物具有提高人毛乳头细胞活性的效果。特别地,制造例7与其他制造例相比,提高人毛乳头细胞活性的效果最优异。
实验例3.确认对炎症因子的抑制
作为细胞中的炎症因子,为了确认制造例的复合物对NO的生成的效果,使用鼠Raw264.7细胞株,作为初期培养液使用了在Complete RPMI(RPMI:FBS:抗生剂=10:1:0.1)中添加NaOH而将最终pH调整为8.5的培养液。
在37℃、5%的二氧化碳浓度条件下培养24小时,当出现Raw264.7细胞浮在培养液上的样子时播种到准备了DMEM培养液的24-孔板,并在37℃、5%的二氧化碳浓度条件下培养了24小时。之后,将培养基更换成serum free DMEM培养液而将制造例1至7的复合物稀释成下面的各个浓度而进行处理之后执行了1μg/mL的LPS处理。在37℃的5%的二氧化碳浓度条件下培养24小时之后,将上清液与Griessreagen t试剂(Sigma-Aldrich)以1:1混合,从而关于NO生成抑制功能,以吸亮度进行了评价,平均值如下面的表9所示。
NO生成抑制性能(%)={1–(添加复合物时的NO生成量/无处理群的NO生成量)}×100
作为对照群,使用了NO抑制剂即L-NMMA1(NG-Methyl-L-arginine acetate salt,NG-甲基-L-精氨酸乙酸盐)20μg/mL。
[表9]
如表9所示,本发明的制造例1至7的复合物对细胞中的炎症因子即NO的生成具有抑制性能。特别地,制造例7与其他制造例相比NO生成抑制性能最优异。
实验例4.确认胶原生物合成率
以人类皮肤纤维芽细胞为对象,确认了制造例的复合物对该细胞中的胶原生物合成率的效果。将皮肤纤维芽细胞在完全DMEM培养液中在37℃、5%的二氧化碳浓度条件下培养了72小时。之后,播种到24-孔板,并在37℃、5%的二氧化碳浓度条件下培养了24小时。对制造例的复合物进行处理,并在37℃、5%的二氧化碳浓度条件下培养48小时之后仅将上清液分离,利用前胶原I型C肽(procollagen type I C-peptide)(PIP)EIA试剂盒而以吸亮度来确认了胶原合成效果。将胶原生物合成增长率评价为如下,平均值如下面的表10所示。
胶原生物合成增长率(%)={(复合物处理组吸亮度–无处理组吸亮度)/无处理组吸亮度}×100
作为对照组使用了细胞因子即TGF-β10ng/mL。
[表10]
如表10所示,确认了本发明的制造例1至7的复合物具有提高纤维芽细胞中的胶原生物合成的效果。特别地,制造例7与其他制造例相比,提高纤维芽细胞中的胶原生物合成的效果最优异。
实验例5.确认头皮油分改善与否
确认了使用实施例1-1的洗发水组合物时的头皮油分改善效果。作为被实验者,以22名的20至50岁的成人女性为对象,将被实验者的头皮选定为实验部位。被实验者在本实验期间禁止使用了其他洗发水、护发修护素、护发精华等产品的使用和染色、烫发这样的头发手术。
被实验者在22±2℃及湿度50±5%条件的恒温恒湿室中镇静了30分钟之后进行了实验,所有实验均在上述恒温恒湿室内进行。被实验者用微热的水将头发及头皮充分地打湿之后将相同量的实施例1-1的洗发水组合物均匀地涂敷到头发及头皮之后进行按摩,然后用流动的水充分地进行了清洗。
关于使用洗发水前后的头皮油分评价,使用皮脂计(Sebumeter)(SKIN-O-MAT,Cosmomed GmbH)及电子显微镜(KongPCCamera,Bomtech公司)进行了评价。对所有被实验者的头顶部配置附着有油分吸附带的探针盒,用相同的压力进行30秒的接触,以充分地吸附油分,然后将上述盒插入到皮脂计(Sebumeter)的主体而检测了皮脂量。另外,在相同的照明条件下利用电子显微镜而将所有被实验者的头顶部放大300倍而进行了观察。
以下,关于本实验中的统计处理,均利用SPSS17.0 for Windows而进行了分析。下面的表11是表示使用实施例1-1的组合物之前和使用1次之后的皮脂量(μg/cm2)的结果(用皮脂计(Sebumeter)可检测的最大皮脂量为350μg/cm2)。
[表11]
使用前 | 使用1次之后 | |
平均 | 200.41 | 32.05 |
标准偏差 | 37.03 | 14.87 |
下面的表12表示用于分析使用1次实施例1-1的组合物之后的皮脂量改善率(%)及有意义的变化与否的成对t检验(paired t-test)分析结果(*p<.05,**p<.01,***p<.001):改善率(%)={(使用1次之后的检测值–使用前检测值)/使用前检测值}×100
[表12]
皮脂量改善率 | p值 | |
使用1次之后 | 84.01 | .001*** |
另外,对被实验者个人的头皮状态和使用实施例1-1的组合物之前和使用1次之后的头皮状态变化进行咨询而将其结果分别示于下面的表13及14(N=总频率数=被实验者数=22)。
[表13]
[表14]
追加地,对在使用实施例的组合物时是否在头皮及头发发生不良反应的情况进行了咨询,其结果示于下面的表15(0:无,1:微弱程度,2:中间程度,3:严重程度)。
[表15]
不良反应 | 使用1次之后 | 不良反应 | 使用1次之后 |
红斑(变红) | 0 | 刺痛(痛症) | 0 |
浮肿(肿起) | 0 | 灼热感 | 0 |
头屑(角质) | 0 | 僵硬 | 0 |
发痒 | 0 | 刺挠 | 0 |
如表11及12所示,将本发明的实施例1-1的洗发水应用1次之后,与之前相比,皮脂量改善80%以上,头皮油分改善效果优异,这样的结果与表13至15所示的在被实验者的咨询结果中90%以上的被实验者回答无副作用且具有清洗及皮脂去除效果的情况相符。
图1至3是表示被实验者中的3人在本发明的实施例1-1的洗发水(a)应用之前和(b)应用1次之后的放大的观察结果照片,由此可确认清洗及皮脂去除效果优异。
实验例6.确认头皮菌丛改善与否
对使用实施例1的洗发水组合物、实施例2的头发护理液组合物及实施例3的生发水组合物时的头皮菌丛改善效果进行了确认。作为被实验者,以24名的平均45岁的成人女性为对象,将被实验者的头皮选定为实验部位。被实验者在本实验期间禁止使用了其他洗发水、护发修护素、护发精华等产品和染色、烫发这样的头发手术。
使被实验者在20至25℃及湿度40至60%的条件的恒温恒湿室内静置了30分钟之后进行了实验,所有实验均在上述恒温恒湿室内进行。被实验者用微热的水将头发及头皮充分地打湿之后,将实施例1-1及1-2的洗发水组合物及实施例2的头发护理液组合物分别一天一次地在头发及头皮上涂敷相同的量并进行按摩,然后用流动水充分地冲洗干净。另外,被实验者将实施例3的生发水组合物一天一次地在头皮上涂敷相同的量,然后进行按摩之后不冲洗而直接进行了干燥。
在实验期间之后,在一天的时间期间不将洗发水及水施加到头发及头皮上的状态下,在上述恒温恒湿室内静置了30分钟之后,将头顶的发线固定并用棉棒上下地移动40次而采集头皮的微生物,从而与在实验之前采集的微生物进行了比较分析。
以下,在本实验中利用SPSS而进行统计处理来进行了分析。分析结果,在95%的可靠区间中显著性概率p<0.05时,判断为具有改善效果。作为统计分析法,在使用参数方法时,使用成对样品t检验(Pairedsamplest-test)进行了分析,在使用非参数方法时,使用Wilcoxon有符号秩检验(Wilcoxonsigned rank test)而进行了分析。表16是在使用实施例的组合物前后属(genus)水平下执行分散分析(ANOVA)的结果。
[表16]
属(Genus) | p值 | 使用前 | 使用1周之后 | 使用2周之后 |
曲霉菌(Aspergillus) | p<0.01 | 2.21 | 2.01 | 0.78 |
镰刀菌(Fusarium) | p<0.01 | 1.58 | 1.49 | 0.28 |
青霉菌(Penicillium) | p<0.01 | 1.12 | 0.99 | 0.21 |
枝孢菌(Cladosporium) | p<0.01 | 1.03 | 0.98 | 0.19 |
毛霉菌(Mucor) | p<0.01 | 0.66 | 0.71 | 0.2 |
链格孢(Alternaria) | p<0.01 | 0.6 | 0.56 | 0.13 |
克鲁维酵母(Kluyveromyces) | p<0.01 | 0.66 | 0.54 | 0.06 |
杯伞属(Clitocybe) | p<0.01 | 0.6 | 0.57 | 0.032 |
帚枝霉属(Sarocladium) | p<0.01 | 0.53 | 0.55 | 0 |
在将实施例的组合物使用2周之后,存在于头皮的9个属的菌丛在统计上显著地发生变化。如表16所示,自将本发明的实施例1至3的组合物使用1周之后开始有助于头皮保湿、弹力改善的酵母菌(Saccharomyces)属在统计上显著地增加,引发真菌病或皮肤炎的曲霉菌(Aspergillus)、镰刀菌(Fusarium)及青霉菌(Penicillum)属等中,在使用2周之后在统计上显著地减少,从而确认在头皮上统计出显著的菌丛改善。
实验例7.确认皮肤菌丛改善与否
对使用实施例4的沐浴露组合物及实施例5的润肤乳组合物时的皮肤菌丛改善效果进行了确认。作为被实验者,以22名的20至60岁的成人女性为物件,将被实验者的前胳膊部皮肤选定为实验部位。被实验者在进行本实验期间禁止使用了其他护肤产品。
被实验者在8小时以上未对实验部位进行清洗的状态下,在20至25℃及湿度40至60%的条件的恒温恒湿室内静置了30分钟之后进行了实验,所有实验均在上述恒温恒湿室内进行。被实验者用微热的水将前胳膊部的皮肤打湿,然后用实施例4的沐浴露组合物进行清洗,并均匀地涂敷了实施例5的润肤乳组合物。
过了实验期间之后,在前胳膊部的皮肤用棉棒上下地移动40次而采集微生物,从而与在实验之前采集的微生物进行了比较分析。统计处理的情况与上述的实验例6相同。表17是对在使用实施例的组合物前后在属(genus)水平下执行分散分析(ANOV A)的结果。
[表17]
属(Genus) | pvalue | 使用前 | 使用1周之后 | 使用2周之后 |
埃希氏菌(Ehrlichia) | p<0.001 | 7.43 | 7.54 | 2.62 |
鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas) | p<0.001 | 3.19 | 3.22 | 2.29 |
假单胞菌(Pseudomonas) | p<0.001 | 1.56 | 1.5 | 3.31 |
醋杆菌(Acetobacter) | p<0.001 | 2.65 | 2.7 | 0.95 |
丙酸杆菌(Cutibacterium) | p<0.001 | 1.22 | 1.17 | 3.07 |
链球菌(Streptococcus) | p<0.001 | 1.13 | 0.96 | 1.93 |
Akkermansia | p<0.001 | 1.55 | 1.56 | 0.85 |
拟杆菌(Bacteroides) | p<0.001 | 1.37 | 1.41 | 0.69 |
葡萄球菌(Staphylococcus) | p<0.001 | 0.72 | 0.72 | 1.81 |
肠球菌(Enterococcus) | p<0.001 | 0.93 | 0.92 | 0.80 |
在使用实施例的组合物2周之后,确认了存在于皮肤的10个属的菌丛在统计上显著地发生变化。如表17所示,在使用本发明的实施例4及5的组合物2周之后,葡萄球菌(Staphylococcus)、丙酸杆菌(Cutibacterium)属在统计上显著地增加,引起感染症的埃希氏菌(Ehrlichia)、鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas)属等的情况下,在使用2周之后在统计上显著地减少,从而在皮肤上实现在统计上显著的菌丛改善效果。另外,对菌丛的多样性(β-diversity)进行了检测,其结果在统计上显著地增加,确认了在皮肤上实现在统计上显著的菌丛改善。
本发明不限于上述说明的实施例,作为又一个实施例可包括上述实施例的组合或上述实施例中的至少任一个和公知技术的组合。
以上,通过具体的实施例对本发明进行了具体说明,但这是为了对本发明进行具体的说明,本发明不限于此,本领域的技术人员可在本发明的技术思想内进行其变形或改良。
本发明的单纯的变形至变更均包括在本发明的领域,通过所附的权利要求书,可清楚地了解本发明的具体的保护范围。
Claims (11)
1.一种皮肤改善用化妆料组合物,其包括多糖类、酵母提取物及具备益生菌特性的菌株发酵物作为有效成分,
上述酵母提取物包括源自松露的酵母提取物和源自啤酒的酵母提取物,
上述多糖类为选自由菊粉、β-葡聚糖及麦芽糊精构成的组的1种以上,
上述具备益生菌特性的菌株包括乳杆菌发酵溶解物及双歧杆菌发酵溶解物。
2.根据权利要求1所述的皮肤改善用化妆料组合物,其特征在于,
该皮肤改善用化妆料组合物包括源自松露的酵母提取物、菊粉、β-葡聚糖、麦芽糊精、源自啤酒的酵母提取物、乳杆菌发酵溶解物及双歧杆菌发酵溶解物作为有效成分。
3.根据权利要求2所述的皮肤改善用化妆料组合物,其特征在于,
分别以相同的重量比包括源自松露的酵母提取物、菊粉、β-葡聚糖、麦芽糊精、源自啤酒的酵母提取物、乳杆菌发酵溶解物及双歧杆菌发酵溶解物。
4.根据权利要求2所述的皮肤改善用化妆料组合物,其特征在于,
相对于100重量%的上述化妆料组合物,包括0.00001重量%至10重量%的松露的酵母提取物、菊粉、β-葡聚糖、麦芽糊精、源自啤酒的酵母提取物、乳杆菌发酵溶解物及双歧杆菌发酵溶解物作为有效成分。
5.根据权利要求1所述的皮肤改善用化妆料组合物,其特征在于,
上述化妆料组合物是栖息在皮肤的微生物菌丛改善用组合物。
6.根据权利要求5所述的皮肤改善用化妆料组合物,其特征在于,
上述化妆料组合物促进栖息在皮肤的有益菌的生长或抑制有害菌的生长。
7.根据权利要求6所述的皮肤改善用化妆料组合物,其特征在于,
上述有益菌为表皮葡萄球菌(S.epidermidis),
上述有害菌为金黄色葡萄球菌(S.aureus)。
8.根据权利要求1所述的皮肤改善用化妆料组合物,其特征在于,
上述化妆料组合物为皮肤舒缓用组合物、皮肤皱纹改善用组合物及皮肤弹力改善用组合物中的任一个组合物。
9.根据权利要求1所述的皮肤改善用化妆料组合物,其特征在于,
上述皮肤为头皮。
10.根据权利要求9所述的皮肤改善用化妆料组合物,其特征在于,
上述化妆料组合物为头皮舒缓用组合物、头皮油分改善用组合物、脱发预防用组合物及生发改善用组合物中的任一个组合物。
11.根据权利要求9所述的皮肤改善用化妆料组合物,其特征在于,
上述化妆料组合物是栖息在头皮的微生物菌丛改善用组合物。
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