CN103889239A

CN103889239A - 用于促进肠血管生成和营养吸收和经肠喂养耐受性和/或预防和/或治疗肠炎、和/或肠损伤和手术后恢复的组合物

Info

Publication number: CN103889239A
Application number: CN201280051292.0A
Authority: CN
Inventors: C·加西亚-罗德纳斯; N·斯普伦格
Original assignee: Societe dAssistance Technique pour Produits Nestle SA
Current assignee: Nestec SA
Priority date: 2011-10-18
Filing date: 2012-10-15
Publication date: 2014-06-25
Also published as: RU2624233C2; CL2014000791A1; ES2666491T3; PH12014500509A1; US20140286908A1; EP2768311B1; WO2013057062A1; BR112014008425A2; AU2012324985A1; RU2014119904A; MX2014004719A; EP2768311A1; PH12014500509B1; AU2012324985B2

Abstract

本发明公开了包含至少一种长链多不饱和脂肪酸、至少一种益生菌和寡糖混合物的组合物，所述混合物含有至少一种N-乙酰化寡糖、至少一种唾液酸化的寡糖和至少一种中性寡糖，所述组合物用于促进肠血管生成和营养吸收和经肠喂养耐受性，和/或用于预防和/或治疗肠炎如坏死性小肠结肠炎，和/或用于肠损伤和/或手术后的恢复。该组合物尤其适用于婴儿，特别是早产婴儿。

Description

用于促进肠血管生成和营养吸收和经肠喂养耐受性和/或预防和/或治疗肠炎、和/或肠损伤和手术后恢复的组合物

发明领域

本发明涉及用于促进肠血管生成和营养吸收和经肠喂养耐受性和/或预防和/或治疗肠炎如坏死性小肠结肠炎、和/或肠损伤和/或手术后恢复的组合物。该组合物用于哺乳动物，优选人类，更优选婴儿。

发明背景

肠黏膜中的血管加速形成发生于新生婴儿期、尤其早产婴儿。新生血管形成和血管修复在肠损伤和/或手术后愈合期间也是至关重要的。新生血管形成和血管修复经由血管生成而发生。

婴儿，尤其是早产和LBW婴儿可经受不成熟肠血管形成，且因此减少至肠黏膜的血流(Reber KM,Nankervis CA,Nowicki PT.Newbornintestinal circulation.Physiology and pathophysiology.Clin Perinatol2002;29(1):23-39)。

受损血流可延迟肠发育、损害营养吸收和对经肠喂养的耐受性，改变肠运动性，并且据信其为坏死性小肠结肠炎发病中的致病因素(NankervisCA,Giannone PJ,Reber KM.The neonatal intestinal vasculature:contributing factors to necrotizing enterocolitis.Semin Perinatol2008;32(2):83-91)。

坏死性小肠结肠炎(NEC)主要影响早产婴儿。所述坏死性小肠结肠炎(NEC)是最常见的新生婴儿外科急诊。约12%体重小于1500g的早产婴儿患有NEC。死亡率在20-50%范围内且病状包括狭窄、黏附和短肠综合征。

没有哪一种单一因素已被确定为NEC的病因。现在认为，NEC为多种因素组合的结果。两个始终如一的发现为早产和喂养。早产肠反应异常并对喂养产生急性炎性反应，从而导致肠坏死。一些出生后问题、包括心脏异常、肠内循环阻塞、感染或腹裂)也与NEC相关。

在早产婴儿中，NEC通常发生于开始喂养后一周至10天。在足月婴儿中，若在第一天开始喂养，则NEC发生于出生后1至4天内。较大孕龄发生NEC的风险较小。极少未经喂养婴儿发生NEC。不成熟新生婴儿血管系统对环境刺激极其敏感，这可导致血流的显著变化。现行见解提出，由血管收缩、之后缺血再灌注损伤引起的黏膜损伤可为NEC发病中的初始事件。一种将喂养与肠黏膜损害关联的理论涉及细菌在提供以经肠营养来源时过度生长，这导致细菌经由先前受损的黏膜侵入(Nankervis CA,Giannone PJ,Reber KM.The neonatal intestinal vasculature:contributingfactors to necrotizing enterocolitis.Semin Perinatol2008;32(2):83-91)。

NEC难以预防。喂养母乳或初乳的早产婴儿似乎比喂养配方产品的那些具有更低的NEC发生率(Schanler RJ,Lau C,Hurst NM,Smith EO2005Randomized trial of donor human milk versus preterm formula assubstitutes for mothers’own milk in the feeding of extremely prematureinfants.Pediatrics116:400–406)。然而，自身母乳(own mother milk)或甚至供体乳通常不可用。

医疗管理包括终止喂养、鼻胃引流、7-14天的抗生素和静脉内营养。还必需严密监测流体状态、电解质、凝固和需氧量。对60-80%的NEC婴儿实施医疗管理并且症状不进行手术即消失。缓慢开始手术后喂养。然而，经肠喂养供给延迟导致生长停滞和发育不良(failure to thrive)，这可增加早产发病率和死亡率并导致终生后遗症如认知发育受损。

当医疗管理无效或肠穿孔(裂开)时，20-40%病例必需进行手术。目标为仅移除完全坏死(死亡)的肠和留下希望可存活的任何边际区域。然而，手术导致短肠综合征，这可导致营养消化永久受损、对喂养的耐受不良和生命质量受损。

本发明涉及特别是婴儿和年幼儿童、优选婴儿中用于促进肠血管生成和营养吸收和经肠喂养耐受性和/或预防和/或治疗肠炎如坏死性小肠结肠炎和/或肠损伤和/或手术后恢复的组合物，所述婴儿和年幼儿童早产或具有低出生体重(LBW)或经历子宫内生长迟缓(IUGR)或经受子宫内营养欠佳和/或肠损伤和/或手术。

更一般而言，需要在年幼哺乳动物、尤其是婴儿和儿童、优选婴儿以及年幼宠物中进行该营养干预。

需要诱导维持或改进人类和动物、尤其是年幼哺乳动物的肠血管生成的此类干预。

发明概述

本发明人已惊讶地发现：施用特定寡糖混合物与至少一种长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)和至少一种益生菌的组合可尤其有效地促进肠血管生成和营养吸收和经肠喂养耐受性和/或预防和/或治疗肠炎如坏死性小肠结肠炎，和/或肠损伤和/或手术后恢复。

因此，本发明提供包含至少一种LC-PUFA、至少一种益生菌和寡糖混合物的组合物，所述混合物含有至少一种N-乙酰化寡糖、至少一种唾液酸化的寡糖和至少一种中性寡糖，所述组合物用于促进营养吸收和肠血管生成和经肠喂养耐受性和/或预防和/或治疗肠炎如坏死性小肠结肠炎和/或肠损伤和/或手术后恢复。

本发明的组合物优选为营养组合物。

LC-PUFA优选选自花生四烯酸(ARA)和二十二碳六烯酸(DHA)，更优选LC-PUFA为ARA与DHA的混合物。

益生菌优选选自益生菌菌株，更优选益生菌为乳杆菌属(lactobacillus)或双歧杆菌属(bifidobacterium)。在一个优选实施方案中，益生菌为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)和罗伊乳杆菌(Lactobacillus reuteri)。

中性寡糖优选选自果寡糖(FOS)和半乳糖寡糖(GOS)，优选为GOS。

在一个实施方案中，寡糖混合物可源自动物乳，例如牛乳、山羊乳、绵羊乳或水牛乳中的一种或多种。例如，所述寡糖混合物通过牛乳分级和进一步酶促处理获得。

在第二实施方案中，可使用酶促、化学酶促和/或化学手段来制备寡糖混合物。

在第三实施方案中，可使用酵母和/或细菌发酵技术来制备寡糖混合物。例如，表达适合的酶如糖苷酶和/或糖基转移酶的细菌细胞和/或酵母在经遗传修饰后或不经遗传修饰可用于此目的。

本发明组合物优选用于早产或具有低出生体重(LBW)或经历子宫内生长迟缓(IUGR)和/或子宫内营养欠佳和/或肠损伤和/或手术的婴儿。

发明详述

如本文中所使用，下列术语具有下列意义。

术语“儿童”意指介于出生阶段与青春期阶段之间的人类。成人为年龄大于儿童的人类。

术语“婴儿”意指年龄在12个月以内的儿童。

术语“早产婴儿(preterm infant)”(或早产儿“premature infant”)意指少于37周孕龄出生的婴儿。

术语“低出生体重婴儿”意指活产重量小于2,500g的婴儿。

术语“年幼儿童”意指年龄在1至3岁之间的儿童。

术语“婴儿配方产品”意指预期用于在生命前四个至六个月期间的婴儿的特定营养用途、并且本身满足此类人的营养要求的食品(1991年5月14日关于婴儿配方产品及后续配方产品(follow-on formulae)的欧洲委员会指令91/321/EEC第1.2条)。

术语“早产婴儿配方产品”意指预期用于早产婴儿的婴儿配方产品。

术语“人乳强化剂”意指用于增加喂食给早产婴儿或具有低出生体重婴儿的母乳中的卡路里(calorie)、蛋白质、矿物质和维生素的补充剂。

术语“后续配方产品”意指预期用于年龄超过四个月的婴儿的特定营养用途且构成此类人的逐渐多样化饮食的主要液体元素的食品。

术语“新生婴儿配方产品”意指预期用于在生命前四个月期间的婴儿的特定营养用途的食品。

术语“幼儿食物”意指预期用于婴儿在生命最初几年期间的特定营养用途的食品。

术语“婴儿谷类组合物”意指预期用于婴儿在生命最初几年期间的特定营养用途的食品。

术语“成长乳”意指适合年幼儿童特定营养需要的乳基饮料。

术语“断奶期”意指婴儿饮食中的母乳或婴儿配方产品部分或完全由其它食物所代替的时期。

术语“促进营养吸收和肠血管生成和经肠喂养耐受性”意指支持营养吸收和肠血管生成和经肠喂养耐受性。例如，其涵盖缺血的预防。术语“经肠”意指“胃内”。

术语“预防和/或治疗肠炎”意指预防以及降低肠炎的频率和/或发生率和/或严重程度和/或缩短其持续时间。发生率是指任何肠炎的数量。频率是指相同肠炎的数量。此预防涵盖降低该肠炎在以后生活中的频率和/或严重程度。术语“在以后生活中”涵盖干预终止后的效应。“在以后生活中”的效应优选可为所述干预终止后2周至4周、2个月至12个月或数年(例如2年、5年、10年)。坏死性小肠结肠炎为肠炎的实例。

术语“肠损伤和/或手术后恢复”意指支持肠损伤和/或手术后的愈合和恢复。

术语“营养组合物”意指向对象提供营养的组合物。

该营养组合物通常经口服、灌胃或静脉内使用，并且其通常包括脂质或脂肪源以及蛋白质源。

术语“合成混合物”意指通过化学和/或生物方式获得的混合物，其化学上与哺乳动物乳中天然存在的混合物相同。

术语“低变应原的组合物”意指不太可能引起变态性反应的组合物。

术语“益生菌”意指对宿主健康或保持良好状态具有有益作用的微生物细胞制剂或微生物细胞或微生物细胞代谢物的组分。(Salminen S,Ouwehand A.Benno Y.等人，“Probiotics:how should they be defined”，Trends Food Sci.Technol.1999:10107-10)。

术语“寡糖”是指聚合度(DP)为2至20的碳水化合物，其包括端值，但不包括乳糖；

术语“中性寡糖”意指不带电荷且不具有N-乙酰基残基的寡糖。

术语“唾液酸化的寡糖”意指具有唾液酸(例如N-乙酰基神经胺酸和/或N-乙醇酰基神经胺酸)残基的寡糖。

术语“N-乙酰化”寡糖意指具有至少一个带有N-乙酰基残基的己糖的寡糖。

除非另有说明，否则所有百分比均以重量计。

一方面，本发明提供组合物，其包含

●至少一种LC-PUFA、

●至少一种益生菌和

●寡糖混合物，所述混合物含有至少一种选自以下的N-乙酰化寡糖：GalNAcα1,3Galβ1,4Glc(=3'GalNAc-lac=N-乙酰基-氨基半乳糖基(galactosaminyl)-乳糖)和Galβ1,6GalNAcα1,3Galβ1,4Glc(=6'Gal-3GalNAc-lac=半乳糖基-N-乙酰基-氨基半乳糖基-乳糖)、Galβ1,4GlcNAcβ1,3Galβ1,4Glc(乳(lacto)-N-新四糖(neotetraose))和Galβ1,3GlcNAcβ1,3Galβ1,4Glc(乳-N-四糖)；至少一种选自以下的唾液酸化的寡糖：NeuAcα2,3Galβ1,4Glc(=3'-唾液酸乳糖)和NeuAcα2,6Galβ1,4Glc(=6'-唾液酸乳糖)；和至少一种选自以下的中性寡糖：Galβ1,6Gal(=β1,6-二半乳糖苷)、Galβ1,6Galβ1,4Glc(=6'Gal-lac)、Galβ1,6Galβ1,6Glc、Galβ1,3Galβ1,3Glc、Galβ1,3Galβ1,4Glc(=3'Gal-lac)、Galβ1,6Galβ1,6Galβ1,4Glc(=6',6-二Gal-lac)、Galβ1,6Galβ1,3Galβ1,4Glc(=6',3-二Gal-lac)、Galβ1,3Galβ1,6Galβ1,4Glc(=3',6-二Gal-lac)、Galβ1,3Galβ1,3Galβ1,4Glc(=3',3-二Gal-lac)、Galβ1,4Galβ1,4Glc(=4'Gal-lac)和Galβ1,4Galβ1,4Galβ1,4Glc(=4',4-二Gal-lac)，以及Fucα1,2Galβ1,4Glc(=2'岩藻糖基乳糖或FL)，所述组合物用于促进营养吸收和肠血管生成和经肠喂养耐受性和/或预防和/或治疗肠炎如坏死性小肠结肠炎，和/或肠损伤和/或手术后恢复。

在第二方面，本发明涉及包含至少一种长链多不饱和脂肪酸、至少一种益生菌和寡糖混合物的组合物，所述混合物包含：

●相对于寡糖混合物总重量，0.25-20wt%，优选0.3-10wt%，更优选0.3-5wt%且甚至更优选约0.5wt%的至少一种N-乙酰化寡糖，

●相对于寡糖混合物总重量，0.5-30wt%、优选0.75-15wt%、更优选0.75-10wt%且甚至更优选约1wt%的至少一种唾液酸化的寡糖，和

●相对于寡糖混合物总重量，50-99.3wt%、优选20-80wt%、更优选10-50wt%且甚至更优选约50wt%的至少一种中性寡糖，所述组合物用于促进肠血管生成和营养吸收和经肠喂养耐受性和/或预防和/或治疗肠炎如坏死性小肠结肠炎，和/或肠损伤和/或手术后恢复。

根据优选的实施方案，寡糖混合物相对于组合物的总重量以0.5-70%、更优选1-20%、甚至更优选2-5%的量存在。

寡糖化合物通过其结构定义，其中GalNAc为N-乙酰基半乳糖胺，GlcNAc为N-乙酰基葡萄糖胺，Gal为半乳糖，NeuAc为N-乙酰基神经胺酸，Fuc为岩藻糖且Glc为葡萄糖。

本发明组合物的寡糖混合物可为组合物中寡糖的唯一来源。

在第一实施方案中，中性寡糖优选选自FOS和GOS，优选为GOS，例如上述那些。

在第二实施方案(独立于或非独立于第一实施方案)中，中性寡糖优选为2'-岩藻糖基乳糖(FL)。在这种情况下，FL优选在寡糖混合物生产期间包括在寡糖混合物中的中性寡糖组中。

中性寡糖可通过采购并混合单个组分以混合物形式制备。例如，如以下合成半乳糖寡糖可以以商标

(来自Friesland Campina,Netherlands)和

商购获得：Galβ1,6Gal、Galβ1,6Galβ1,4Glc、Galβ1,6Galβ1,6Glc、Galβ1,3Galβ1,3Glc、Galβ1,3Galβ1,4Glc、Galβ1,6Galβ1,6Galβ1,4Glc、Galβ1,6Galβ1,3Galβ1,4Glc、Galβ1,3Galβ1,6Galβ1,4Glc、Galβ1,3Galβ1,3Galβ1,4Glc、Galβ1,4Galβ1,4Glc和Galβ1,4Galβ1,4Galβ1,4Glc及其混合物。其它寡糖供货商为Dextra Laboratories、Sigma-Aldrich Chemie GmbH和KyowaHakko Kogyo Co.,Ltd.。可选地，可使用特定糖基转移酶和/或糖苷酶如半乳糖基转移酶和/或岩藻糖基转移酶和/或半乳糖苷酶和/或岩藻糖苷酶来产生半乳糖寡糖和/或岩藻糖基化寡糖。

岩藻糖基乳糖为岩藻糖基化寡糖(即具有岩藻糖残基的寡糖)。该岩藻糖基化的寡糖可通过色谱法或过滤技术由天然来源如动物乳中分离。可选地，其可通过生物技术方式、使用特定的岩藻糖基转移酶和/或岩藻糖苷酶、通过使用基于酶的发酵技术(重组体或天然酶)或微生物发酵技术来制备。在后者的情况下，微生物可表达其天然的酶和底物或可对其进行改造以产生相应的底物和酶。可使用单一微生物培养物和/或混合培养物。岩藻糖基化的寡糖的形成能由始于从DP=1起的任何聚合度(DP)的受体底物开始。可选地，岩藻糖基化的寡糖可由乳糖和游离岩藻糖通过化学合成制备。岩藻糖基化的寡糖还可由例如日本的Kyowa,Hakko,Kogyo获得。

根据本发明，唾液酸化的寡糖可选自包含3'-唾液酸乳糖和6'-唾液酸乳糖的组。优选地，唾液酸化的寡糖包含3'-唾液酸乳糖与6'-唾液酸乳糖两者。在该实施方案中，3'-唾液酸乳糖与6'-唾液酸乳糖间的比率优选在5:1与1:2之间的范围。

唾液酸乳糖的3'-和6'-形式可通过将天然来源如动物乳加至组合物中来获得，或可通过色谱或过滤技术、从此类天然来源分离。可选地，其可通过生物技术方式、使用特定的唾液酸转移酶或唾液酸酶、神经氨酸酶、通过基于酶的发酵技术(重组体或天然酶)或化学合成或微生物发酵技术来制备。在后者的情况下，微生物可表达其天然的酶和底物或可对其进行改造以产生相应的底物和酶。可使用单一微生物培养物和/或混合培养物。唾液酸基-寡糖的形成能由始于从DP=1起的任何聚合度(DP)的受体底物开始。可选地，唾液酸乳糖可由乳糖和游离N'-乙酰基神经胺酸(唾液酸)、通过化学合成来产生。唾液酸乳糖也可购自(例如)Kyowa Hakko Kogyo(日本)。

N-乙酰化寡糖可通过将天然来源如动物乳加至组合物中来获得。或者，它们可通过氨基葡糖苷酶和/或氨基半乳糖苷酶对N-乙酰基-葡萄糖和/或N-乙酰基半乳糖的作用而制备。同样地，可将N-乙酰基-半乳糖基转移酶和/或N-乙酰基-糖基转移酶用于该目的。N-乙酰化的寡糖还可使用相应的酶(重组体或天然的)、通过使用发酵技术和/或微生物发酵来制备。在后者的情况下，微生物可表达其天然的酶和底物或可对其进行改造以产生相应的底物和酶。可使用单一微生物培养物和/或混合培养物。N-乙酰化的寡糖的形成能由始于从DP=1起的任何聚合度(DP)的受体底物开始。一个选择是将己酮糖(例如果糖)(游离或与寡糖(例如乳果糖(lactulose))结合)化学转换为N-乙酰基己糖胺或包含N-乙酰基己糖胺的寡糖，如Wrodnigg,T.M.;Stutz,A.E.(1999)Angew.Chem.Int.Ed.38:827-828中所描述。

LNnT和LNT可通过使用糖基水解酶和/或糖基转移酶将糖单元从供体部分酶促转移至受体部分来合成，如例如美国专利第5,288,637号和WO96/10086中所述。可选地，如Wrodnigg,T.M.;Stutz,A.E.(1999)Angew.Chem.Int.Ed.38:827-828中所述，LNnT可通过将游离或结合至寡糖(例如乳果糖)的己酮糖(例如果糖)化学转化成N-乙酰基己糖胺或含N-乙酰基己糖胺的寡糖来制备。然后可将以此方式产生的N-乙酰基-乳糖胺转移至作为受体部分的乳糖。

优选地，N-乙酰化寡糖选自乳-N-新四糖(或LNnT)和乳-N-四糖(或LNT)。优选地，LNnT和/或LNT在寡糖混合物制造期间包括在寡糖混合物中的唾液酸化寡糖中。

本发明组合物中存在的益生菌菌株可选自满足益生菌定义并且对于将加入其中的组合物具有可接受的储存期的任何菌株。例如，如果组合物加入婴儿配方产品中，则需要该婴儿配方产品保持稳定且有效长达12个月。益生菌菌株优选为乳杆菌属或双歧杆菌属。

优选乳杆菌属菌种的实例为鼠李糖乳杆菌、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)和罗伊乳杆菌。尤其优选的菌株为鼠李糖乳杆菌ATCC53103、鼠李糖乳杆菌CGMCC1.3724、罗伊乳杆菌DSM17938和副干酪乳杆菌属CNCM I-2116。甚至更优选益生菌为鼠李糖乳杆菌，该术语涵盖鼠李糖乳杆菌ATCC53103和鼠李糖乳杆菌CGMCC1.3724。

鼠李糖乳杆菌ATCC53103以商标名LGG购自Valio Oy(芬兰)，罗伊乳杆菌DSM17938为由BioGaia A.B以商标名Reuteri出售。

优选双歧杆菌属的实例包括乳双歧杆菌、长双歧杆菌属(Bifidobacterium longum)、短双歧杆菌属(Bifidobacterium breve)和婴儿双歧杆菌属(Bifidobacterium infantis)，尤其优选的菌株为由Christian Hansen公司(丹麦)以商标名Bb12出售的乳双歧杆菌CNCM I-3446、由MorinagaMilk Industry Co.Ltd.(日本)以商标名BB536出售的长双歧杆菌属ATCCBAA-999、由Danisco以商标名Bb-03出售的短双歧杆菌属菌株、由Morinaga以商标名M-16V出售的短双歧杆菌属菌株、由Procter&Gamble公司以商标名Bifantis出售的婴儿双歧杆菌属菌株和由InstitutRosell(Lallemand)以商标名R0070出售的短双歧杆菌属菌株。

根据本发明，益生菌选自益生菌菌株，益生菌优选为乳杆菌属或双歧杆菌属，益生菌更优选为鼠李糖乳杆菌、罗伊乳杆菌和乳双歧杆菌。

益生菌可以以宽范围的百分比存于组合物中，前提条件为益生菌递送所述效应。然而，优选地，益生菌以相当于每克组合物10e2cfu至10e12cfu(=菌落形成单位)的益生菌菌株、更优选10e6cfu和10e9cfu之间的量存在于组合物中。该表达包括以下可能性：细菌是活的、灭活的或死的或甚至以片段如DNA、细胞壁物质、细胞内物质或细菌代谢物存在。换句话说，如果所有细菌均为活的(无论其实际上为活的、灭活的或死的、片段化的或这些状态中任何一种或全部的混合物)，则组合物所含细菌的量表示为该量的细菌的菌落形成能力。

组合物含有至少一种LC-PUFA，其通常为n-3或n6LC-PUFA。n-3LC-PUFA可以是C20或C22n-3脂肪酸。C20或C22n-3LC-PUFA优选以组合物中所有脂肪酸的至少0.1wt%的量存在。优选地，n-3LC-PUFA是二十二碳六烯酸(DHA,C22：6,n-3)。n-6LC-PUFA可以是C20或C22n-6脂肪酸。C20或C22n-6LC-PUFA优选以组合物中所有脂肪酸的至少0.1wt%的量存在。优选地，n-6LC-PUFA是花生四烯酸(ARA,C20:4,n-6)。LC-PUFA来源可为例如卵脂、真菌油(fungal oil)、低EPA鱼油或海藻油。本发明组合物的LC-PUFA可以以少量含有大量预先形成的花生四烯酸和二十二碳六烯酸的油(例如鱼油或微生物油)提供。

根据本发明的组合物优选为营养组合物，更优选为合成的营养组合物。在这种情况下，其可为早产婴儿配方产品、人乳强化剂、新生婴儿配方产品、后续配方产品、幼儿食物配方产品、婴儿谷类配方产品、成长乳、用于临床营养的医疗食品，或补充剂，通常将在住院期间使用和/或将在出院后使用。补充剂可用于早产婴儿或儿童或成人。所述组合物优选为用于早产喂养的产品，例如早产婴儿配方产品、人乳强化剂或早产婴儿补充剂。根据一个实施方案，组合物优选为早产婴儿配方产品、人乳强化剂或补充剂。根据本发明的组合物也可以是用于儿童或成人的产品如酸奶或医疗食物，以及宠物食物。

根据特别优选的实施方案，本发明组合物为用于早产或具有LBW或经历IUGR的婴儿和年幼儿童，优选用于经历IUGR和/或经受欠佳子宫内营养和/或肠损伤和/或手术的婴儿。

本发明组合物可在断乳期之前和/或期间和/或之后使用。

本发明也包括根据本发明的组合物作为合成营养剂的用途，用于促进肠血管生成和营养吸收和经肠喂养耐受性和/或预防和/或治疗肠炎如坏死性小肠结肠炎，和/或肠损伤和/或手术后恢复。

在人类的情况下，上文所述所有用途尤其预期用于婴儿和年幼儿童，优选婴儿。但是这些用途也预期用于年幼宠物。

依照本发明的组合物和用途尤其适于早产或具有LBW或经历IUGR和/或子宫内营养欠佳和/或肠损伤和/或手术的婴儿和年幼儿童，优选为婴儿。

不期望受理论束缚，本发明人相信，上述组合物中的寡糖混合物的组合在肠血管生成和营养吸收和经肠喂养耐受性和/或预防和/或治疗肠炎如坏死性小肠结肠炎和/或肠损伤和/或手术后恢复方面的功效，可能是免疫调节效应的协同组合的结果，所述免疫调节剂效应通过益生菌菌株和LC-PUFA经由其与特定寡糖混合物进行刺激而触发。

寡糖混合物、LC-PUFA和益生菌菌株可以以相同组合物施用或可相继施用。

如果要针对早产和LBW婴儿组，则组合物优选以例如液体形式消耗的营养组合物。它可为营养完整配方产品，例如(早产)婴儿配方产品、补充剂、人乳强化剂、后续配方产品或成长乳。可选地，对于幼小哺乳动物组，组合物可为宠物食物。

根据本发明的组合物还可含有蛋白来源。对于本发明而言，认为蛋白质的类型不是关键，只要满足对必需氨基酸含量的最低需求且保证令人满意的生长即可。因此，可使用基于乳清、酪蛋白及其混合物的蛋白质源，以及基于大豆的蛋白质源。就乳清蛋白质而言，该蛋白质源可基于酸乳清或甜乳清或其混合物，并且可以以任何需要的比例包含α-乳清蛋白和β-乳球蛋白。蛋白质可最终部分地水解，以增强对过敏原、尤其是食物过敏原的口服耐受性。在该情况下，组合物为低过敏性组合物。

除了寡糖混合物外，根据本发明的组合物还可含有碳水化合物源。这在本发明的组合物是婴儿配方产品的情况下尤其优选。在这种情况下，可以使用在婴儿配方产品中常规存在的任何碳水化合物源如乳糖、蔗糖、麦芽糖糊精、淀粉及其混合物，但优选碳水化合物源是乳糖。在任何情况下，寡糖混合物优选为根据本发明的组合物中的单一益生素来源。

除了LC-PUFA外，根据本发明的组合物也可含有脂质来源。如果本发明的营养组合物是婴儿配方产品，这尤其相关。在这种情况下，脂质源可以是适合用于婴儿配方产品的任何脂质或脂肪。优选的脂肪源包括棕榈油酸、高油酸向日葵油和高油酸红花油。还可加入必需的脂肪酸亚油酸和α-亚麻酸。在组合物中，脂肪源(包括LC-PUFA，例如ARA和/或DHA)优选具有约1:2至约10:1，优选约3:1至约8:1的n-6对n-3脂肪酸的比率。

本发明的组合物还可包含认为在日常饮食中是必需的所有维生素和矿物质，并且以营养显著的量包含所述物质。已确定了某些维生素和矿物质的最小需要量。任选地存在于本发明组合物中的矿物质、维生素以及其它营养素的实例包括维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素E、维生素K、维生素C、维生素D、叶酸、肌醇、烟酸、生物素、泛酸、胆碱、钙、磷、碘、铁、镁、铜、锌、锰、氯、钾、钠、硒、铬、钼、牛磺酸和L-肉碱。通常以盐的形式加入矿物质。特定矿物质和其它维生素的存在和量将根据预期群体而变化。

如需要，本发明的组合物可包含乳化剂和稳定剂如大豆卵磷脂、甘油单酯和二酯的柠檬酸酯等。

本发明的组合物还可包含具有有益作用的其它物质，例如乳铁蛋白、核苷酸、核苷、神经节苷脂、聚胺等。

现在将以例举方式描述根据本发明的组合物的制备。

配方产品可以以任一适合的方式制备。例如，其可通过将蛋白质源、碳水化合物源(不同于寡糖混合物)与脂肪源(包括LC-PUFA)以适当比例掺混来制备。若使用，则可于此时纳入乳化剂。可在此时加入维生素和矿物质，但通常稍后加入以避免热降解。可在掺混之前将任何亲脂性维生素、乳化剂等溶解入脂肪源。然后可混入水、优选已进行反渗透的水，来形成液体混合物。水温可方便地在约50℃和约80℃之间的范围内，以帮助各成份的分散。可使用市售液化剂来形成液体混合物。如果最终产物具有液体形式，则将在该阶段加入寡糖混合物。如果最终产物为粉末，如果需要可同样在该阶段加入寡糖。然后在例如两个阶段中将液体混合物匀化。

然后，可将液体混合物热处理，以减少细菌载量，例如通过将液体混合物快速加热至约80℃至约150℃范围的温度，持续约5秒至约5分钟。这可通过蒸汽注射的方式、高压釜或换热器、例如板式换热器进行。

然后，可将液体混合物冷却至约60℃至约85℃，例如瞬时冷却。然后可再匀化液体混合物，例如分两个阶段，在第一阶段约10MPa至约30MPa，在第二阶段约2MPa至约10MPa。然后进一步冷却匀化的混合物以加入任何热敏成分，例如维生素和矿物质。此时方便地调节经匀化混合物的pH和固体含量。

将匀化的混合物转移至合适的干燥装置如喷雾干燥器或冷冻干燥器，将其转变为粉末。所述粉末应当具有低于以重量计约5%的含水量。寡糖混合物可在该阶段通过与益生菌菌株干燥混合、或通过将其以晶体糖浆形式与益生菌菌株掺混来加入，并且喷雾干燥(或冷冻干燥)。

如果液体组合物优选，则可将匀化混合物灭菌然后无菌填充至适合的容器中，或首先可将其填充至容器中然后经灭菌釜处理(retorted)。

在另一实施方案中，本发明的组合物可为足以在个体中达到期望效应的量的补充剂。该施用形式通常更适于早产或LBW或IUGR婴儿、较大儿童和成人。

将根据待施用补充剂的施用方式来选择将包括于补充剂中的寡糖混合物、LC-PUFA和益生菌菌株的量。

补充剂可呈例如粉末、片剂、胶囊、锭剂或液体的形式。补充剂可进一步含有保护性水胶体(例如胶、蛋白质、改性淀粉)、黏合剂、膜形成剂、包封剂/材料、壁/壳材料、基质化合物、包衣、乳化剂、表面活性剂、增溶剂(油、脂肪、蜡、卵磷脂等)、吸附剂、载剂、填充剂、共化合物、分散剂、润湿剂、加工助剂(溶剂)、流动剂、掩味剂、增重剂、胶凝化剂和凝胶形成剂。补充剂也可含有常规药物添加剂和佐剂、赋形剂和稀释剂，包括但不限于水、任何来源的明胶、植物胶、木质素磺酸盐、滑石粉、糖、淀粉、阿拉伯树胶、植物油、聚亚烷基二醇、矫味剂、防腐剂、稳定剂、乳化剂、缓冲剂、润滑剂、着色剂、润湿剂、填充剂等。

补充剂可以以消费者(其为人类或动物)可接受的产品(分别例如可摄取载剂或载体)被加入。此类载剂或载体的实例为药物或食物或宠物食物组合物。此类组合物的非限制性实例为乳、酸奶、凝乳、奶酪、发酵乳、乳基发酵产品、基于发酵谷类的产品、乳基粉末、人乳、早产配方产品、婴儿配方产品、口服补充剂和管喂养物。

此外，根据政府机构如USRDA的建议，补充剂可含有适于经肠或胃肠外施用的有机或无机载剂材料以及维生素、痕量矿物质元素以及其它微量营养素。

在考虑到现将详细描述的说明性实验、以及附图后，本发明的优点、性质和各种其它特征将更全面地显示。在附图中：

图1为说明实验方案的图。

图2为绘制关于CD34的归一化mRNA表达(×10^-3)的实验结果的条形图。

图3为绘制关于VEGF的归一化mRNA表达(×10^-3)的实验结果的条形图。

图4为绘制FGF的归一化mRNA表达(×10^-3)的实验结果的条形图。

实施例

就以下方面进行实验：补充寡糖混合物(其为富含半乳糖寡糖的牛乳寡糖(CMOS)的混合物)(去矿物质、去乳糖乳清渗透物或DDWP)、LC-PUFA(花生四烯酸-ARA-和二十二碳六烯酸-DHA-)和乳双歧杆菌(BL)以及任选地2'-岩藻糖基乳糖(FL)对幼崽的效应。

1.方法

实验方案

实验依照瑞士动物保护法(严重程度1)实施，且由Office VétérinaireCantonal(Lausanne,Switzerland，授权号2028和2028.1)批准。可繁殖(Reproductor)雄性和未交配雌性Long-Evans Hooded大鼠购自Janvier(法国)，所述大鼠于交配前两周到达动物看护所。

妊娠雌性自由进食(Kliba3437)和饮水，将其圈养在恒定温度和湿度下，且维持于12:12黑暗:光照循环。圈养条件保持方案的全部持续时间。在出生(B)后于出生后(=PND)第2天，自生育笼移出母鼠并确定幼崽性别。在通过体重随机分配后，将8只雄性幼崽的标准化窝分配用于饲养。向母鼠及其幼崽分配两种饲育条件中的一种：1)母体剥夺组，其于PND2至PND14每天与母体隔离180min时段(MS)，或2)未处置对照(NS)。

MS幼崽于PND15断奶(W)。通过重量和哺乳母鼠将其随机分配，且分配为16只动物的组，其接受以下喂养直至PND26：对照饮食(改性AIN93G，MS对照组)或调整含有LC-PUFA、乳双歧杆菌CNCM I-3446(BL)和寡糖(DDWP)的相似饮食。将MS动物(MS对照组)以8只幼崽的组圈养至PND21，以降低早产断奶的应激负荷，并且随后单独圈养直至实验结束。于PND21使NS组的动物断奶食用对照饮食(NS对照组)并将其单独圈养直至实验结束。

于PND26通过在异氟烷麻醉下彻底放血来处死(

)动物。采集肠试样以进一步qRT-PCR分析血管生成标记物mRNA表达。

2.治疗和饮食

用于实验管饲和饮食组合物的以下功能成份包含98.8%干物质的DDWP成分，其组成详述于下表1中。

表1.DDWP混合物的组成

DDWP通常根据WO2007/101675或WO2007/090894的公开获得并且通常含有以下的混合物：约30wt%的GalNAcα1,3Galβ1,4Glc和Galβ1,6GalNAcα1,3Galβ1,4Glc;50wt%的Galβ1,6Galβ1,4Glc和Galβ1,3Galβ1,4Glc;20wt%的NeuAcα2,3Galβ1,4Glc和NeuAcα2,6Galβ1,4Glc。

动物自断奶起直至实验结束接受以下喂养：营养适应的半合成饮食(改性AIN93G)，其组成示于表2、3和4中。

表2：饮食的组成(每100g饮食)

¹DDWP(去矿物质、去乳糖乳清渗透物);²FL=2-岩藻糖基-乳糖;³乳双歧杆菌=BL=乳双歧杆菌CNCM I-3446，喷雾-干燥；

表3：脂肪混合物(g/100g脂肪混合物)

表4饮食的营养组成

⁴由营养组合物预测(1g可消化碳水化合物=4Kcal;1g寡糖=2Kcal;1g蛋白=4Kcal;1g脂肪=9Kcal);⁵通过Kjeldhal分析；⁶通过Soxhlet分析；⁷AA=花生四烯酸，⁸DHA=二十二碳六烯酸；⁹通过标准培养方法和PCR分析；NA=未分析；ND=低于检测限(小于1.00E+03)

平衡三种饮食的脂肪酸谱以提供相似的n-6/n-3比率和相似的饱和、单不饱和和多不饱和脂肪酸的比例。因此，三种饮食的脂肪酸组成在脂肪酸谱方面接近相同。

在出生后(PND)第26天处死动物。

3.血管生成参数

测试血管生成的标记物，即CD34(其为在内皮细胞中高度表达的蛋白质)以及VEGF(血管内皮生长因子)和FGF(纤维母细胞生长因子)(其为血管生成因子)。

已知所有自由指征CD34、VEGF和FGF的基本原理均指示较好的肠血管形成。

根据图2、3和4的结果，似乎根据本发明组合物PUFA-BL-DDWP和PUFA-BL-DDWP-FL显示血管生成的血管生成生长因子和标记物的表达比两种组合物对照NS对照和MS对照更好。特别地，CD34和VEGF的归一化mRNA表达甚至比对照NS-CONT更好。

因此，根据本发明的混合物PUFA-BL-DDWP和PUFA-BL-DDWP-FL证明本发明的血管形成比MS对照更好，并且比NS对照更好。这是根据本发明组合物的真正优势。

已知受损血流延迟肠发育，从而损害营养吸收，并且据信其为NEC发病中的致病因素。因此，混合物PUFA-BL-DDWP和PUFA-BL-DDWP-FL有效地帮助摄取它们的对象不会经受肠黏膜的血流减少。

因此，根据本发明的营养组合物在肠血管生成和营养吸收和经肠喂养耐受性和/或预防和/或治疗肠炎如坏死性小肠结肠炎和/或肠损伤和/或手术后恢复方面显示出效应。

Claims

1.包含至少一种长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)、至少一种益生菌和寡糖混合物的组合物，所述混合物含有至少一种N-乙酰化寡糖、至少一种唾液酸化的寡糖和至少一种中性寡糖，所述组合物用于促进肠血管生成和营养吸收和经肠喂养耐受性，和/或用于预防和/或治疗肠炎如坏死性小肠结肠炎，和/或用于肠损伤和/或手术后恢复。

2.根据前述权利要求的组合物，其中所述中性寡糖选自果寡糖(FOS)和/或半乳糖寡糖(GOS)，优选GOS。

3.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述寡糖混合物含有至少一种选自下组的N-乙酰化寡糖：GalNAcα1,3Galβ1,4Glc(=3’GalNAc-lac=N-乙酰基-氨基半乳糖基-乳糖)、Galβ1,6GalNAcα1,3Galβ1,4Glc(=6'Gal-3GalNAc-lac=半乳糖基-N-乙酰基-氨基半乳糖基-乳糖)、Galβ1,4GlcNAcβ1,3Galβ1,4Glc(乳-N-新四糖或LNnT)和Galβ1,3GlcNAcβ1,3Galβ1,4Glc(乳-N-四糖或LNT)；至少一种选自下组的唾液酸化的寡糖：NeuAcα2,3Galβ1,4Glc(=3'-唾液酸乳糖)和NeuAcα2,6Galβ1,4Glc(=6’-唾液酸乳糖)；以及至少一种选自下组的中性寡糖：Galβ1,6Gal(=β1,6-二半乳糖苷)、Galβ1,6Galβ1,4Glc(=6'Gal-lac)、Galβ1,6Galβ1,6Glc、Galβ1,3Galβ1,3Glc、Galβ1,3Galβ1,4Glc(=3'Gal-lac)、Galβ1,6Galβ1,6Galβ1,4Glc(=6',6-二Gal-lac)、Galβ1,6Galβ1,3Galβ1,4Glc(=6’,3-二Gal-lac)、Galβ1,3Galβ1,6Galβ1,4Glc(=3’,6-二Gal-lac)、Galβ1,3Galβ1,3Galβ1,4Glc(=3’,3-二Gal-lac)、Galβ1,4Galβ1,4Glc(=4'Gal-lac)和Galβ1,4Galβ1,4Galβ1,4Glc(=4’,4-二Gal-lac)，以及Fucα1,2Galβ1,4Glc(=2’岩藻糖基乳糖或FL)。

4.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述寡糖混合物包含：

·相对于寡糖混合物的总重量0.25-20wt%、优选0.3-10wt%、更优选0.3-5wt%且甚至更优选约0.5wt%的至少一种N-乙酰化寡糖；

·相对于寡糖混合物的总重量0.5-30wt%、优选0.75-15wt%、更优选0.75-10wt%且甚至更优选约1wt%的至少一种唾液酸化的寡糖，和

·相对于寡糖混合物的总重量50-99.3wt%、优选20-80wt%、更优选10-50wt%且甚至更优选约50wt%的至少一种中性寡糖。

5.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述寡糖混合物以相对于组合物总重量0.5-70%、更优选1-20%、甚至更优选2-5%的量存在。

6.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述LC-PUFA选自花生四烯酸(ARA)和二十二碳六烯酸(DHA)，优选所述LC-PUFA为ARA和DHA的混合物。

7.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述益生菌选自益生细菌菌株，优选所述益生菌为乳杆菌属或双歧杆菌属，更优选所述益生菌为鼠李糖乳杆菌、乳双歧杆菌和罗伊乳杆菌。

8.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述N-乙酰化寡糖选自乳-N-新四糖(或LNnT)和乳-N-四糖(或LNT)。

9.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述唾液酸化的寡糖选自3'-唾液酸乳糖和6'-唾液酸乳糖，并且优选所述唾液酸化的寡糖包含3'-唾液酸乳糖与6'-唾液酸乳糖两者，3'-唾液酸乳糖和6'-唾液酸乳糖之间的比率优选在5:1和1:2之间的范围内。

10.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述中性寡糖为2'-岩藻糖基乳糖(或FL)。

11.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述组合物为早产婴儿配方产品、人乳强化剂、新生婴儿配方产品、后续配方产品、幼儿食物配方产品、婴儿谷类配方产品、成长乳、用于临床营养的医疗食品或补充剂，并且优选所述组合物为早产婴儿配方产品、人乳强化剂或补充剂。

12.根据前述权利要求中任一项的组合物，其用于婴儿和儿童，优选为婴儿，其早产或具有低出生体重或经历子宫内生长迟缓和/或经受欠佳子宫内营养和/或肠损伤和/或手术。

13.组合物的用途，所述组合物包含至少一种长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)、至少一种益生菌和寡糖混合物，所述混合物含有至少一种N-乙酰化寡糖、至少一种唾液酸化的寡糖和至少一种中性寡糖，所述组合物用于制备合成营养剂、用于促进肠血管生成和营养吸收和经肠喂养耐受性，和/或用于预防和/或治疗肠炎如坏死性小肠结肠炎，和/或用于肠损伤和/或手术后恢复。