CN103524556B

CN103524556B - 双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物及其合成方法和应用

Info

Publication number: CN103524556B
Application number: CN201310475685.0A
Authority: CN
Inventors: 王恒山; 黄日镇; 潘英明; 姚贵阳; 戴伟龙; 叶鳗仪; 陈振峰
Original assignee: Guangxi Normal University
Current assignee: Guangxi Normal University
Priority date: 2013-10-12
Filing date: 2013-10-12
Publication date: 2016-01-13
Anticipated expiration: 2033-10-12
Also published as: CN103524556A

Abstract

本发明公开了一系列双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物及它们的合成方法和应用。所述大黄酸氨基膦酸酯衍生物的合成方法为：以二乙酰大黄酸和α-氨基膦酸酯为原料，溶于极性溶剂中，在催化剂HOBT和缩合剂EDAC存在的条件下反应；向反应液中加入三氯甲烷，水洗，有机层上硅胶柱，用由体积比为1：6～100的乙酸乙酯和石油醚组成的混合溶剂洗脱，即得到相应的衍生物。所述双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物的结构通式如下式(I)所示：

Description

双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物及其合成方法和应用

技术领域

本发明涉及大黄酸衍生物，具体涉及双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物及其合成方法和应用。

背景技术

二乙酰大黄酸(Diacerhein，化学名称为4，5-二乙酰-9，10-二氢-9，10-二氧-2-蒽羧酸)，又名双醋瑞因，是大黄酸的衍生物，在大黄酸蒽醌环4，5位置添加了两个乙酰基，从而避免了大黄酸在口服给药时易腹泻的并发症。临床上主要用来治疗骨关节炎以及迟引性关节炎。近来来研究发现，其对风湿性关节炎、骨质疏松症、成人急性呼吸综合症及肺气肿都有较好的疗效。

α-氨基膦酸酯是具有生物活性和药物活性的中间体化合物，目前已被广泛用于抗生素、杀菌剂、酶抑制剂以及除草剂等方面。但目前尚未见有在大黄酸中引入α-氨基膦酸酯这种官能团的衍生物以及这类衍生物在抗肿瘤方面的公开报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一类结构新颖的双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物，以及它们的其合成方法和应用。

本发明所述的双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物，其结构通式如下式(I)所示：

其中，R为对溴苯、邻溴苯、间溴苯、对氟苯、邻氟苯、对氯苯、间氯苯、邻氯苯、间甲氧基苯、邻甲氧基苯、苯、萘、对甲氧基苯、间甲基苯、对甲基苯、间氟苯或蒽。

对应于上述R的选择，通式(I)化合物为：

(a)O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基)乙酰氨基](4-溴苯基)甲基}膦酸二乙酯；

(b)O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基)乙酰氨基](2-溴苯基)甲基}膦酸二乙酯；

(c)O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基)乙酰氨基](3-溴苯基)甲基}膦酸二乙酯；

(d)O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基)乙酰氨基](4-氟苯基)甲基}膦酸二乙酯；

(e)O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基)乙酰氨基](2-氟苯基)甲基}膦酸二乙酯；

(f)O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基)乙酰氨基](4-氯苯基)甲基}膦酸二乙酯；

(g)O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基)乙酰氨基](3-氯苯基)甲基}膦酸二乙酯；

(h)O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基)乙酰氨基](2-氯苯基)甲基}膦酸二乙酯；

(i)O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基)乙酰氨基](3-甲氧基苯基)甲基}膦酸二乙酯；

(j)O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基)乙酰氨基](2-甲氧基苯基)甲基}膦酸二乙酯；

(k)O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基)乙酰氨基](苯基)甲基}膦酸二乙酯；

(l)O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基)乙酰氨基](萘基)甲基}膦酸二乙酯；

(m)O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基)乙酰氨基](4-甲氧基苯基)甲基}膦酸二乙酯；

(n)O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基)乙酰氨基](3-甲基苯基)甲基}膦酸二乙酯；

(o)O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基)乙酰氨基](4-甲苯基)甲基}膦酸二乙酯；

(p)O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基)乙酰氨基](3-氟苯基)甲基}膦酸二乙酯；

(q)O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基)乙酰氨基](蒽基)甲基}膦酸二乙酯。

上述双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物的合成方法为：根据通式(I)，以二乙酰大黄酸和α-氨基膦酸酯为原料，溶于极性溶剂中，在催化剂1-羟基苯并三唑和缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐存在的条件下反应至完全；向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，上硅胶柱层析，用由体积比为1：6～100的乙酸乙酯和石油醚组成的混合溶剂洗脱，洗脱液蒸干溶剂，即得到相应的双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物。

上述合成方法中，对应于双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物，所述α-氨基膦酸酯的选择为：

α-O，O'二乙基氨基（4-溴苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（2-溴苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（3-溴苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（4-氟苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（2-氟苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（4-氯苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（3-氯苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（2-氯苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（3-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（2-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（萘基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（4-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（3-甲基苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（4-甲苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（3-氟苯基）甲基膦酸二乙酯；或

α-O，O'二乙基氨基（蒽基）甲基膦酸二乙酯。

上述α-氨基膦酸酯的合成可参考现有文献(B.Kaboudin,K.Moradi,TetrahydronLett.46(2005)2989-2991)进行。具体的合成方法可以是：在烧瓶中加醛(根据不同的α-氨基膦酸酯选择不同的醛)、醋酸铵和亚磷酸二乙酯(其中醛、醋酸铵和亚磷酸二乙酯的摩尔比为2～3：1～1.5：1～1.5，，在80～90℃条件下搅拌10～12h，再往该烧瓶中加入乙醚(乙醚的加入量是醛的物质的量的1～1.5倍)，冰浴下加浓盐酸使反应体系呈酸性(pH=5～6)并搅拌2～3h，体系用水萃取，收集水层再用乙醚萃取除去有机杂质，再收集水层，并向收集的水层中加入氢氧化钠溶液调节其pH为8～10，用乙酸乙酯(或乙醚)萃取，收集有机层，有机层经无水硫酸钠干燥，得到相应的α-氨基膦酸酯，所有的α-氨基膦酸酯均为淡黄色油状液体。该合成方法中，醛的选择为：对溴苯甲醛、邻溴苯甲醛、间溴苯甲醛、对氟苯甲醛、邻氟苯甲醛、对氯苯甲醛、间氯苯甲醛、邻氯苯甲醛、间甲氧基苯甲醛、邻甲氧基苯甲醛、苯甲醛、萘甲醛、对甲氧基苯甲醛、间甲基苯甲醛、对甲基苯甲醛、间氟苯甲醛或蒽甲醛。

上述合成方法中用到的原料二乙酰大黄酸可以从市场上直接购买，也可以根据现有常规方法或者是参考现有文献中报道的方法(MAYan-ru,ZHAOXiao-yu,XUZhen.ChineseJoumalofSyntheticChemistry,2(2007):244-246.)进行合成；具体的合成方法可以为：在圆底烧瓶中加入大黄酸的吡啶溶液，常温下加入乙酸酐(大黄酸和乙酸酐的摩尔比为1～2：1.5～3)，搅拌3～4h，加入三氯甲烷，水洗，收集有机层用无水硫酸钠干燥，经硅胶柱层析纯化(由体积比为1：4～10的乙酸乙酯和石油醚组成的混合溶剂洗脱)即得到目标产物二乙酰大黄酸。

上述合成方法中，所述的极性溶剂为选自二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、二氯甲烷和三氯甲烷中的一种或任意两种以上的组合。当极性溶液的选择为上述两种以上的组合时，它们之间的配比可以为任意配比。具体在溶解时，可将二乙酰大黄酸和α-氨基膦酸酯分别用极性溶剂溶解，再混合在一起；也可将二乙酰大黄酸和α-氨基膦酸酯混合在一起后再加入极性溶剂溶解；还可以将二乙酰大黄酸用极性溶剂溶解后，直接加入α-氨基膦酸酯固体。极性溶剂的用量可根据需要确定，一般以能够溶解反应原料的量即可，通常情况下，1mmol的二乙酰大黄酸或1mmolα-氨基膦酸酯用5～20mL的极性溶剂来溶解。

上述合成方法中，二乙酰大黄酸和α-氨基膦酸酯的物质的量之比为化学反应式的计量比，为1：1。

上述合成方法中，所述催化剂1-羟基苯并三唑(HOBT)的加入量为二乙酰大黄酸物质的量的0.05～0.5倍，优选为二乙酰大黄酸物质的量的0.05～0.2倍，更优选为二乙酰大黄酸物质的量的0.1～0.2倍。由于催化剂的加入会产生放热反应，因此所述催化剂最好是在冰浴条件下加入。

上述合成方法中，所述缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDAC)的加入量为二乙酰大黄酸物质的量的1～2倍，优选为二乙酰大黄酸物质的量的1～1.5倍。

在本申请所述的合成方法中，二乙酰大黄酸、α-氨基膦酸酯、催化剂和缩合剂的加料顺序没有特别的讲究，但是以下述加料顺序可以获得更高的收率：先将二乙酰大黄酸溶解后，加入催化剂，搅拌均匀，然后再加入缩合剂，搅拌均匀后再加入α-氨基膦酸酯(此时α-氨基膦酸酯可以以固体的形式加入，也可以将其用极性溶剂溶解后以液体的形式加入)进行反应。

上述合成方法中，反应优选在低于80℃的条件下进行，更优选是在20～40℃的条件下进行。反应是否完全可采用薄层层析跟踪检测，在上述优选的反应温度条件下，搅拌反应至完全大约需要3～5h的时间。

上述合成方法中，所述用于洗脱的混合溶剂中，乙酸乙酯和石油醚的体积比优选为1：6～50，更优选为1：6～20，进一步优选为1：6～10，再进一步优选为1：7～9。

本发明还包括上述双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明还包括以上述双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物为有效成分制备的抗肿瘤药物。

与现有技术相比，本发明提供了一系列结构新颖的双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物，以及它们的其合成方法和应用。申请人发现大部分的双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物具有的抗肿瘤活性均大大高于大黄酸，具有较好的潜在药用价值，有望用于各种抗肿瘤药物的制备。

具体实施方式

下面以具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。

实施例1：O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（4-溴苯基）甲基}膦酸二乙酯(a)的合成

1)α-O，O'二乙基氨基（4-溴苯基）甲基膦酸二乙酯的合成

在圆底烧瓶中加对溴苯甲醛、醋酸铵和亚磷酸二乙酯(摩尔比为2：1：1)，在80℃条件下搅拌反应10h，再往该圆底烧瓶中加入乙醚加入量是对溴苯甲醛的物质的量的1.2倍)，冰浴下加浓盐酸使反应体系呈酸性(pH=6)并搅拌3h，反应体系用水萃取，收集水层再用乙醚萃取除去有机杂质，再收集水层，并向收集的水层中加入质量浓度为10%的氢氧化钠溶液调节其pH为9，用乙酸乙酯萃取，收集有机层，有机层经无水硫酸钠干燥，得到α-O，O'二乙基氨基（4-溴苯基）甲基膦酸二乙酯。

2)目标产物的合成：

在圆底烧瓶中，将1mmol二乙酰大黄酸溶于5mL二甲基亚砜中，在冰浴下滴加0.5mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌10min，然后加入1.1mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌10min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（4-溴苯基）甲基膦酸二乙酯(用5mL二甲基亚砜溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，室温条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：8(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到淡黄色固体a。

对所得橙色固体a进行分析，其理化和波谱特性如下：

Yield80%.paintyellowsolid.m.p.218～220℃.¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ8.62(d,J=1.6Hz,1H),8.23(d,J=7.7Hz,1H),7.91(d,J=1.6Hz,2H),7.79(t,J=7.8Hz,1H),7.51(d,J=8.4Hz,2H),7.44(dd,J=7.6,2.9Hz,3H),5.67(dd,J=21.4,9.3Hz,1H),4.19-4.14(m,2H),4.05–3.97(m,1H),3.85–3.77(m,1H),2.45(s,3H),2.45(s,3H),1.32(t,J=7.1Hz,3H),1.15(t,J=7.0Hz,3H).³¹PNMR(202MHz,CDCl₃)δ(ppm):21.25.ESI-MSm/z:694.1(M+Na)⁺.

因此，可确定所得淡黄色固体a为O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（4-溴苯基）甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：

实施例2：O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（2-溴苯基）甲基}膦酸二乙酯(b)的合成

1)α-O，O'二乙基氨基（2-溴苯基）甲基膦酸二乙酯的合成

按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用邻溴苯甲醛代替对溴苯甲醛。

2)目标产物的合成：

在圆底烧瓶中，将1mmol二乙酰大黄酸溶于10mLN,N-二甲基甲酰胺中，在冰浴下滴加0.05mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌13min，然后加入1.2mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌13min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（2-溴苯基）甲基膦酸二乙酯，室温条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：10(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到淡黄色固体b。

对所得淡黄色固体b进行分析，其理化和波谱特性如下：

Yield79%.paintyellowsolid.m.p.220～222℃.¹HNMR(500MHzCDCl₃)δ(ppm):1.09(t,J=7.1Hz,3H,CH₃),1.35(t,J=7.2Hz,3H,CH₃),2.43(s,3H),2.45(s,3H),3.72-4.26(m,4H,OCH₂),6.31(dd,J=9.0,21.4Hz1H,PCH),7.17-8.22(m,9H,Ar-H,1H,NH).³¹PNMR(202MHz,CDCl₃)δ(ppm):21.33.ESI-MSm/z:694.1(M+Na)⁺.

因此，可确定所得淡黄色固体b为O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（2-溴苯基）甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：

实施例3：O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（3-溴苯基）甲基}膦酸二乙酯(c)的合成

1)α-O，O'二乙基氨基（3-溴苯基）甲基膦酸二乙酯的合成

按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用间溴苯甲醛代替对溴苯甲醛。

2)目标产物的合成：

在圆底烧瓶中，将1mmol二乙酰大黄酸溶于10mL甲醇中，在冰浴下滴加0.5mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌10min，然后加入2mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌5min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（3-溴苯基）甲基膦酸二乙酯(用20mL乙醇溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，室温条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：50(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到淡黄色固体c。

对所得淡黄色固体c进行分析，其理化和波谱特性如下：

Yield79%.paintyellowsolid.m.p.218～220℃.1HNMR(500MHz,CDCl3)δ9.11(dd,J=9.3,3.6Hz,1H),8.67(d,J=1.8Hz,1H),8.13(dd,J=7.8,1.3Hz,1H),7.95(d,J=1.8Hz,1H),7.76(d,J=1.8Hz,1H),7.73(t,J=7.9Hz,1H),7.53(d,J=7.5Hz,1H),7.40(d,J=1.3Hz,1H),7.37(d,J=0.9Hz,1H),7.14(t,J=7.9Hz,1H),5.81(dd,J=22.0,9.4Hz,1H),4.22–4.13(m,2H),4.03–3.98(m,1H),3.86-3.81(m,1H),2.42(s,3H),2.40(s,3H),1.27(t,J=7.1Hz,3H),1.13(t,J=7.1Hz,3H).31PNMR(202MHz,CDCl3)δ(ppm):21.14.ESI-MSm/z:694.1(M+Na)⁺.

因此，可以确定所得橙色固体c为O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（3-溴苯基）甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：

实施例4：O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽）乙酰氨基〕（4-氟苯基）甲基}膦酸二乙酯(d)的合成

1)α-O，O'二乙基氨基（4-氟苯基）甲基膦酸二乙酯的合成

按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用对氟苯甲醛代替对溴苯甲醛。

2)目标产物的合成：

在圆底烧瓶中，将1mmol二乙酰大黄酸溶于10mL二氯甲烷和三氯甲烷的混合溶液(二氯甲烷和三氯甲烷的体积比为1：1)中，在冰浴下滴加0.2mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌8min，然后加入1mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌3min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（4-氟苯基）甲基膦酸二乙酯(用10mL三氯甲烷溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，室温条件下搅拌反应至完全(约4.5h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：20(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到淡黄色固体d。

对所得淡黄色固体d进行分析，其理化和波谱特性如下：

Yield79%.paintyellowsolid.m.p.222～224℃.1HNMR(500MHz,CDCl3)δ1.11(t,J=7.1Hz,3H),1.29(t,J=7.1Hz,3H),2.42(s,3H),2.43(s,3H),3.82–3.73(m,1H),4.00–3.93(m,1H),4.19–4.10(m,2H),5.76(dd,J=21.3,9.3Hz,1H),7.03(t,J=8.6Hz,2H),7.41(dd,J=8.1,1.0Hz,1H),7.64–7.49(m,2H),7.76(t,J=7.9Hz,1H),7.91(d,J=1.7Hz,1H),8.18(dd,J=7.7,1.0Hz,1H),8.41(d,J=6.1Hz,1H),8.62(d,J=1.7Hz,1H),31PNMR(202MHz,CDCl3)δ(ppm):20.6120.59.ESI-MSm/z:634.1(M+Na)⁺.

因此，可以确定所得淡黄色固体d为O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽）乙酰氨基〕（4-氟苯基）甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：

实施例5：O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽）乙酰氨基]（2-氟苯基）甲基}膦酸二乙酯(e)的合成

1)α-O，O'二乙基氨基（2-氟苯基）甲基膦酸二乙酯的合成

按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用邻氟苯甲醛代替对溴苯甲醛。

2)目标产物的合成：

在圆底烧瓶中，将1mmol二乙酰大黄酸溶于5mL乙酸乙酯的混合溶液中，在冰浴下滴加0.08mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌5min，然后加入1.8mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌13min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（2-氟苯基）甲基膦酸二乙酯(用10mL乙酸乙酯溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，室温条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：8(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到淡黄色固体e。

对所得淡黄色固体e进行分析，其理化和波谱特性如下：

Yield80%.paintyellowsolid.m.p.162～164℃.1HNMR(500MHz,CDCl3)δ8.66(d,J=1.8Hz,1H),8.43(dd,J=9.4,4.3Hz,1H),8.20(dd,J=7.8,1.3Hz,1H),7.94(d,J=1.8Hz,1H),7.77(t,J=7.9Hz,1H),7.57(ddd,J=8.7,5.1,1.9Hz,2H),7.42(dd,J=8.0,1.3Hz,1H),7.05(d,J=8.5Hz,2H),5.75(dd,J=21.4,9.3Hz,1H),4.20–4.11(m,2H),3.98–3.94(m,1H),3.80–3.74(m,1H),2.44(s,3H),2.43(s,3H),1.31(t,J=7.1Hz,3H),1.12(t,J=7.0Hz,3H).31PNMR(202MHz,CDCl3)δ(ppm):20.97.ESI-MSm/z:634.1(M+Na)⁺.

因此，可以确定所得淡黄色固体e为O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽）乙酰氨基]（2-氟苯基）甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：

实施例6：O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（4-氯苯基）甲基}膦酸二乙酯(f)的合成

1)α-O，O'二乙基氨基（4-氯苯基）甲基膦酸二乙酯的合成

按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用对氯苯甲醛代替对溴苯甲醛。

2)目标产物的合成：

在圆底烧瓶中，将1mmol二乙酰大黄酸溶于8mL乙酸乙酯和甲醇的混合溶液(乙酸乙酯和甲醇的体积比为2：1)中，在冰浴下滴加0.08mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌5min，然后加入1.8mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌5min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（4-氯苯基）甲基膦酸二乙酯(用4mL甲醇和1mL乙醇溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，室温条件下搅拌反应至完全(约3.5h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：9(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到淡黄色固体f。

对所得淡黄色固体f进行分析，其理化和波谱特性如下：

Yield80%.paintyellowsolid.m.p.219～221℃.1HNMR(500MHzCDCl3)δ(ppm):1.16(t,J=7.0Hz,3H,CH3),1.32(t,J=7.1Hz,3H,CH3),2.43(s,3H),2.45(s,3H),3.82-4.21(m,4H,OCH2),5.76(dd,J=9.3,22.4Hz1H,PCH),7.28-8.40(m,9H,Ar-H,1H,NH),31PNMR(202MHz,CDCl3)δ(ppm):21.34.ESI-MSm/z:640.1(M+Na)⁺.

因此，可以确定所得淡黄色固体f为O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（4-氯苯基）甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：

实施例7：O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（2-氯苯基）甲基}膦酸二乙酯(h)的合成

1)α-O，O'二乙基氨基（2-氯苯基）甲基膦酸二乙酯的合成

按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用邻氯苯苯甲醛代替对溴苯甲醛。

2)目标产物的合成：

在圆底烧瓶中，将1mmol二乙酰大黄酸溶于10mLN,N-二甲基甲酰胺中，在冰浴下滴加0.5mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌6min，然后加入1mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌5min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（2-氯苯基）甲基膦酸二乙酯(用5mL乙酸乙酯溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，室温条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：100(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到淡黄色固体h。

对所得淡黄色固体h进行分析，其理化和波谱特性如下：

Yield80%.paintyellowsolid.m.p.227～229℃.1HNMR(500MHz,CDCl3)δ8.64(d,J=1.8Hz,1H),8.23(dd,J=7.8,1.2Hz,1H),7.92(d,J=1.8Hz,2H),7.79(t,J=7.9Hz,1H),7.71(d,J=7.6Hz,1H),7.46–7.39(m,2H),7.32–7.26(m,3H),6.29(dd,J=21.5,8.9Hz,1H),4.27–4.18(m,2H),3.98-3.93(m,1H),3.77–3.70(m,1H),2.45(s,6H),1.36(t,J=7.1Hz,3H),1.10(t,J=7.1Hz,3H).31PNMR(202MHz,CDCl3)δ(ppm):21.92.ESI-MSm/z:640.1(M+Na)⁺.

因此，可以确定所得淡黄色固体h为O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（2-氯苯基）甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：

实施例8：O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（2–甲氧基苯基）甲基}膦酸二乙酯(j)的合成

1)α-O，O'二乙基氨基（2-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯的合成

按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用邻甲氧基苯甲醛代替对溴苯甲醛。

2)目标产物的合成：

在圆底烧瓶中，将1mmol二乙酰大黄酸溶于5mL甲醇中，在冰浴下滴加0.1mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌5min，然后加入2mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌5min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（2-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯(用5mLN,N-二甲基甲酰胺溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，35℃条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：80(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到淡黄色固体j。

对所得淡黄色固体j进行分析，其理化和波谱特性如下：

Yield82%.paintyellowsolid.m.p.218～220℃.1HNMR(500MHz,CDCl3)δ8.57(d,J=1.8Hz,1H),8.22(dd,J=7.8,1.2Hz,1H),8.03(d,J=9.1Hz,1H),7.92(d,J=1.8Hz,1H),7.77(t,J=7.9Hz,1H),7.49(d,J=7.6Hz,1H),7.42(dd,J=8.0,1.2Hz,1H),7.30(t,J=7.9Hz,1H),7.00–6.94(m,2H),6.12(dd,J=21.0,9.5Hz,1H),4.19–4.13(m,2H),4.01–3.94(m,1H),3.97(s,3H)3.83–3.75(m,1H),2.44(s,6H),1.31(t,J=7.1Hz,3H),1.10(t,J=7.0Hz,3H).31PNMR(202MHz,CDCl3)δ(ppm):20.70.ESI-MSm/z:646.2(M+Na)⁺.

因此，可以确定所得淡黄色固体j为O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（2–甲氧基苯基）甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：

实施例9：O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（苯基）甲基}膦酸二乙酯(k)的合成

1)α-O，O'二乙基氨基（苯基）甲基膦酸二乙酯的合成

按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用苯甲醛代替对溴苯甲醛。

2)目标产物的合成：

在圆底烧瓶中，将1mmol二乙酰大黄酸溶于5mL甲醇中，在冰浴下滴加0.2mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌10min，然后加入1.2mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌5min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（苯基）甲基膦酸二乙酯，室温条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：60(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到淡黄色固体k。

对所得淡黄色固体k进行分析，其理化和波谱特性如下：

Yield81%.paintyellowsolid.m.p.213～215℃.1HNMR(500MHz,CDCl3)δ8.64(s,1H),8.47(d,J=8.6Hz,1H),8.17(dd,J=7.5,2.7Hz,1H),7.93(s,1H),7.75(td,J=7.9,3.5Hz,1H),7.58(s,2H),7.40(dd,J=7.8,2.8Hz,1H),7.32(d,J=7.7Hz,3H),5.78(dd,J=19.9,7.9Hz,1H),4.21–4.10(m,2H),3.94-3.93(m,1H),3.76–3.67(m,1H),2.43(s,3H),2.42(s,3H),1.29(t,J=8.6Hz,3H),1.08(t,J=8.5Hz,3H).31PNMR(202MHz,CDCl3)δ(ppm):21.04..ESI-MSm/z:616.1(M+Na)⁺.

因此，可以确定所得淡黄色固体k为O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（苯基）甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：

实施例10：O，O'二乙基{[2-4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（萘基）甲基}膦酸二乙酯(l)的合成

1)α-O，O'二乙基氨基（萘基）甲基膦酸二乙酯的合成

按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用萘甲醛代替对溴苯甲醛。

2)目标产物的合成：

在圆底烧瓶中，将1mmol二乙酰大黄酸溶于15mL丁醇中，在冰浴下滴加0.5mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌5min，然后加入1.3mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌6min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（萘基）甲基膦酸二乙酯(用5mL丁醇溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，50℃条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：10(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到淡黄色固体l。

对所得淡黄色固体l进行分析，其理化和波谱特性如下：

Yield82%.paintyellowsolid.m.p.218～220℃.1HNMR(500MHz,CDCl3)δ8.68(d,J=1.8Hz,1H),8.25(dd,J=7.8,1.3Hz,1H),8.05(s,2H),7.96(d,J=1.8Hz,1H),7.84(dd,J=15.8,5.9Hz,3H),7.80(d,J=7.8Hz)7.70(d,J=8.4Hz,1H),7.48(ddd,J=20.0,6.9,2.0Hz,3H),5.93(dd,J=21.2,9.2Hz,1H),4.27-4.18(m,2H),4.02-3.97(m,1H),3.77-3.72(m,1H),2.47(s,3H),2.46(s,3H),1.36(t,J=7.1Hz,3H),1.10(t,J=7.1Hz,3H).31PNMR(202MHz,CDCl3)δ(ppm):21.28.ESI-MSm/z:666.2(M+Na)⁺.

因此，可以确定所得淡黄色固体l为O，O'二乙基{[2-4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（萘基）甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：

实施例11：O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（4-甲氧基苯基）甲基}膦酸二乙酯(m)的合成

1)α-O，O'二乙基氨基（4-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯的合成

按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用对甲氧基苯甲醛代替对溴苯甲醛。

2)目标产物的合成：

在圆底烧瓶中，将1mmol二乙酰大黄酸溶于10mL二甲基亚砜中，在冰浴下滴加0.5mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌均匀，然后加入1.5mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，搅拌均匀；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（4-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯，60℃条件下搅拌反应至完全(约3h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：6(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到淡黄色固体m。

对所得淡黄色固体m进行分析，其理化和波谱特性如下：

Yield80%.paintyellowsolid.m.p.219～221℃.1HNMR(500MHzCDCl3)δ(ppm):1.13(t,J=6.6Hz,3H,CH3),1.31(t,J=6.6Hz,3H,CH3),3.76(s,3H,OCH3),2.46(s,3H),2.47(s,3H),3.80-4.18(m,4H,OCH2),5.75(dd,J=7.6,21.7Hz1H,PCH),6.83-8.26(m,9H,Ar-H,1H,NH),.31PNMR(202MHz,CDCl3)δ(ppm):20.92.ESI-MSm/z:646.2(M+Na)⁺.

因此，可以确定所得淡黄色固体m为O，O'二乙基{[2-(4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（4-甲氧基苯基）甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：

实施例12：O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（4-甲基苯基）甲基}膦酸二乙酯(o)的合成

1)α-O，O'二乙基氨基（4-甲苯基）甲基膦酸二乙酯的合成

按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用对甲基苯甲醛代替对溴苯甲醛。

2)目标产物的合成：

在圆底烧瓶中，将1mmol二乙酰大黄酸溶于10mL三氯甲烷中，在冰浴下滴加0.1mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌均匀，然后加入2mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，搅拌均匀；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（4-甲苯基）甲基膦酸二乙酯(用10mL二甲基亚砜配成溶液，以溶液的方式加入)，20℃条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：30(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到淡黄色固体o。

对所得淡黄色固体o进行分析，其理化和波谱特性如下：

Yield81%.paintyellowsolid.m.p.218～220℃.1HNMR(500MHz,CDCl3)δ8.65(d,J=1.8Hz,1H),8.24(dd,J=7.8,1.2Hz,1H),7.92(d,J=1.8Hz,1H),7.87(dd,J=9.1,4.4Hz,1H),7.79(t,J=7.9Hz,1H),7.43(dd,J=8.0,1.1Hz,3H),7.18(d,J=8.1Hz,2H),5.69(dd,J=20.8,9.3Hz,1H),4.21–4.11(m,2H),3.99–3.93(m,1H),3.75-3.70(m,1H),2.45(s,3H),2.45(s,3H),2.34(s,3H),1.32(t,J=7.1Hz,3H),1.12(t,J=7.1Hz,3H).31PNMR(202MHz,CDCl3)δ(ppm):21.56.ESI-MSm/z:630.2(M+Na)⁺.

因此，可以确定所得淡黄色固体o为O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（4-甲基苯基）甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：

实施例13：O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（3-氟苯基）甲基}膦酸二乙酯(_p)的合成

1)α-O，O'二乙基氨基（3-氟苯基）甲基膦酸二乙酯的合成

按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用间氟苯甲醛代替对溴苯甲醛。

2)目标产物的合成：

在圆底烧瓶中，将1mmol二乙酰大黄酸溶于10mL甲醇中，在冰浴下滴加0.3mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌均匀，然后加入1.6mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，搅拌均匀；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（3-氟苯基）甲基膦酸二乙酯(用5mL二甲基亚砜配成溶液，以溶液的方式加入)，10℃条件下搅拌反应至完全(约5h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：15(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到淡黄色固体p。

对所得淡黄色固体p进行分析，其理化和波谱特性如下：

Yield81%.paintyellowsolid.m.p.219～221℃.1HNMR(500MHzCDCl3)δ(ppm):1.15(t,J=7.0Hz,3H,CH3),1.31(t,J=7.1Hz,3H,CH3),2.43(s,3H),2.44(s,3H),3.85-4.22(m,4H,OCH2),5.81(dd,J=9.4,22.0Hz1H,PCH),6.95-8.60(m,10H,Ar-H,1H,NH).31PNMR(202MHz,CDCl3)δ(ppm):20.24.ESI-MSm/z:634.1(M+Na)⁺.

因此，可以确定所得橙色固体p为O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（3-氟苯基）甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：

实施例14：O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（蒽基）甲基}膦酸二乙酯(q)的合成

1)α-O，O'二乙基氨基（蒽基）甲基膦酸二乙酯的合成

按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用蒽甲醛代替对溴苯甲醛。

2)目标产物的合成：

在圆底烧瓶中，将1mmol二乙酰大黄酸溶于5mL甲醇中，在冰浴下滴加0.1mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌均匀，然后加入1.5mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，搅拌均匀；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（蒽基）甲基膦酸二乙酯(用5mL二甲基亚砜配成溶液，以溶液的方式加入)，室温条件下搅拌反应至完全(约5h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：7(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到淡黄色固体q。

对所得淡黄色固体q进行分析，其理化和波谱特性如下：

Yield80%.paintyellowsolid.m.p.219～221℃.1HNMR(500MHzCDCl3)δ(ppm):0.63(t,J=7.1Hz,3H,CH3),1.42(t,J=7.1Hz,3H,CH3),2.47(s,3H),2.49(s,3H),3.31-4.35(m,4H,OCH2),7.24-7.28(m,2H,Ar-H),7.31(dd,J=8.5,25.7Hz1H,PCH),7.38-8.79(m,12H,Ar-H,1H,NH).31PNMR(202MHz,CDCl3)δ(ppm):22.34.ESI-MSm/z:716.2(M+Na)⁺.

因此，可以确定所得淡黄色固体q为O，O'二乙基{[2-（4,5-二乙酰基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽氨基）乙酰氨基]（蒽基）甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：

为了说明本发明所述双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物在制药中的用途，申请人对上述实施例1～14制得的化合物进行了抗肿瘤活性实验。

以临床使用的肿瘤治疗药物5-氟尿嘧啶为阳性对照药，以相应溶剂作阴性对照，以HCT-116（人结肠癌细胞），Spca-2(肺癌细胞)，CNE（鼻咽癌细胞），Hela(宫颈癌细胞)，HepG-2(肝癌细胞)，HUVEC（人脐静脉内皮细胞）为受试细胞株；用MTT法对化合物进行了体外抗肿瘤活性测试。

将药物和细胞共培养48h，根据预实验细胞生长速率的结果，接种一定密度的细胞190μL于96孔培养板（约5×10⁴～1×10⁵个/孔）。

培养24h待细胞贴壁后，分别加入系列浓度的样品10μL，每个样品设5个复孔，其中乙醇终浓度＜1%.另设阴性对照孔4个，加入10μL空白基质。

细胞于饱和湿度、5%CO₂，37oC条件下孵化48h.每孔加入10μLMTT（5mg/ml），继续培养4h。

吸去上清液，加入DMSO150μL/孔，充分溶解后用酶标仪在测定波长为570nm和参考630nm处测定OD值，计算每个给药孔细胞增殖抑制率，结果如下述表1所示。

表1化合物对不同细胞株的IC₅₀值

从表中可以看出，大黄酸(Rhein)本身的体外抗肿瘤活性不高，由本发明制备的大多数双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物的细胞毒性都高于大黄酸的活性。对于人结肠细胞癌Hct-116细胞，一些衍生物显示了较好的体外抗肿瘤活性，如化合物o对Hct-116细胞具有较好的活性(IC₅₀值为9.83μM)。另外，如化合物o对Spca-2细胞具有很高的活性(IC₅₀值为11.38μM),超过临床治疗人结肠癌的药物五氟尿嘧啶。

为了进一步验证上述所有化合物对人体正常细胞的细胞毒性，我们利用MTT法对人体静脉内皮细胞HUVEC（正常细胞）进行了活性筛选，结果表明所有化合物的IC₅₀值都比大黄酸的高(如表1所示)，也就是说所有衍生物对人正常细胞的细胞毒性比大黄酸要小。

Claims

1.双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物，其结构通式如下式(I)所示：

2.权利要求1所述双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物的合成方法，其特征在于：根据通式(I)，以二乙酰大黄酸和α-氨基膦酸酯为原料，溶于极性溶剂中，在催化剂1-羟基苯并三唑和缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐存在的条件下反应至完全；向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，上硅胶柱层析，用由体积比为1：6～100的乙酸乙酯和石油醚组成的混合溶剂洗脱，洗脱液蒸干溶剂，即得到相应的双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物。

3.根据权利要求2所述双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物的合成方法，其特征在于：所述的α-氨基膦酸酯为：

α-O，O'二乙基氨基（4-溴苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（2-溴苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（3-溴苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（4-氟苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（2-氟苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（4-氯苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（3-氯苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（2-氯苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（3-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（2-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（萘基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（4-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（3-甲基苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（4-甲苯基）甲基膦酸二乙酯；

α-O，O'二乙基氨基（3-氟苯基）甲基膦酸二乙酯；或

α-O，O'二乙基氨基（蒽基）甲基膦酸二乙酯。

4.根据权利要求2所述双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物的合成方法，其特征在于：所述的极性溶剂为选自二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、二氯甲烷和三氯甲烷中的一种或任意两种以上的组合。

5.根据权利要求2～4中任一项所述双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物的合成方法，其特征在于：所述催化剂1-羟基苯并三唑的加入量为二乙酰大黄酸物质的量的0.05～0.5倍。

6.根据权利要求2～4中任一项所述双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物的合成方法，其特征在于：所述缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的加入量为二乙酰大黄酸物质的量的1～2倍。

7.根据权利要求2～4中任一项所述双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物的合成方法，其特征在于：所述反应的温度为低于80℃。

8.根据权利要求2～4中任一项所述双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物的合成方法，其特征在于：所述用于洗脱的混合溶剂中，乙酸乙酯和石油醚的体积比为1：6～10。

9.权利要求1所述的双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

10.以权利要求1所述的双乙酰大黄酸氨基膦酸酯衍生物为有效成分制备的抗肿瘤药物。