CN103232454A

CN103232454A - 治疗精神疾病的药物

Info

Publication number: CN103232454A
Application number: CN2013101608274A
Authority: CN
Inventors: 王元青
Original assignee: Individual
Current assignee: Beijing Kaili Economic And Trade Co Ltd
Priority date: 2013-05-05
Filing date: 2013-05-05
Publication date: 2013-08-07

Abstract

本发明涉及治疗精神疾病的药物。具体地说，本发明涉及一种原料药物，其中包括作为活性成分的说明书所述式I化合物或其药学可接受的盐：其中R1为溴，R2和R3为甲基。本发明原料药物具有良好的稳定性。

Description

治疗精神疾病的药物

技术领域

本发明涉及可用于治疗中枢神经系统疾病的药物。

背景技术

以下式I化合物：

其中R1为溴，R2和R3为甲基，

由于含有上述特定的的结构，WO00/69836中报道该化合物(说明书60页实施例Ic-8)是短效中枢神经系统(CNS)抑制剂，具有包括镇静催眠、抗焦虑、肌肉松弛和抗惊厥作用。它们可用于以下临床治疗方案中的静脉给药：如手术期间中的手术前镇静、抗焦虑和遗忘用途；在短期诊断、手术或内窥镜程序期间的清醒性镇静；在施用其它麻醉剂和止痛剂之前和/或同时，作为用于全身麻醉的诱导和维持的组分；ICU镇静等，据CN101501019A(PAION，申请号CN200780028964.5)中报道，该化合物的游离碱不是很稳定，只适于低温5℃保存，在40℃/75%相对湿度(开放)的条件下，储存的样品潮解，颜色变成黄色到橙色，并且相对于初始含量显示含量显著的降低。因此人们合成式(I)化合物的盐，希望能增加其化学稳定性，以便用于药物的制备。

已有CN101501019A和US20100075955A1(TILBROOK)分别报道了式I化合物的苯磺酸盐、乙磺酸盐。CN102964349A(恒瑞，申请号201110456864.0)报道了式I化合物的对甲苯磺酸盐。

已有报道式I化合物或其盐存在稳定性方面的担忧，这对于该类化合物用于临床治疗相关疾病是不利的。

发明内容

本发明目的在于一种有益的药物，期待其具有良好的药学或生理学性质。已经出人意料地发现，具有有限量特定杂质的作为原料药物或制剂的式I化合物或其盐，其具有良好的药学或生理学性质。其特别是可以作为配制药物制剂的原料药物使用。本发明是通过以下方式实现的。

本发明第一方面提供了一种原料药物，其中包括作为活性成分的以下式I化合物或其药学可接受的盐：

其中R1为溴，R2和R3为甲基。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其中所述式I化合物的药学可接受的盐是对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐或乙磺酸盐。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其中所述式I化合物的药学可接受的盐是对甲苯磺酸盐或苯磺酸盐。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其中所述式I化合物的药学可接受的盐选自以下式Ia化合物或式Ib化合物：

在本发明中，上述式Ia化合物为式I化合物的对甲苯磺酸盐，式Ib化合物为式I化合物的苯磺酸盐。在本发明中，提及式I化合物时，如其语境中未特别指明，是指式I所示游离碱以及它的药学可接受的盐例如上述对甲苯磺酸盐和苯磺酸盐。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其中还包含作为杂质的以下式Ix化合物或其药学可接受的盐：

式中R1为溴，R2和R3为甲基。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其中包含的式I化合物或其药学可接受的盐以式I所示游离碱化合物计，式Ix化合物或其药学可接受的盐以式Ix所示游离碱化合物计，式I所示游离碱化合物与式Ix所示游离碱化合物的重量比为200～10000(其亦表示该原料药物中式I所示游离碱化合物是式Ix所示游离碱化合物重量的200～10000倍，该数值亦可表示为200～10000：1)；优选地，式I所示游离碱化合物与式Ix所示游离碱化合物的重量比为250～5000，例如重量比为250～2500。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其照以下【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，显示作为主成分的S异构体色谱峰以及作为杂质的R异构体色谱峰：

【HPLC法A】：

照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定；

使用Daicel Chrialcel OJ-H(5μm)4.6×250mm手性色谱柱(必要时使用保护柱DaicelChrialcel OJ-H分析保护柱5μm4.0×10mm，其为日本大赛璐(Daicel)品牌)，以己烷：乙醇=93：7(v/v)为流动相，流速为1.0ml/min，柱温40°C，检测波长为225nm；

供试品溶液的配制：取供试品(例如本发明的原料药物或者包含该原料药物的药物组合物例如药物制剂)适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含以游离碱计的式I化合物1.0mg的溶液，作为供试品溶液(必要时过滤)；精密量取适量，用稀释剂制成每1ml中含式I化合物10μg的溶液，作为对照溶液；

异构体溶液的配制：取式Ix化合物适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含以游离碱计的式Ix化合物10μg的溶液，作为异构体溶液；

取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高约为满量程的20%；

精密量取异构体溶液10μl，注入液相色谱仪，记录异构体溶液色谱图并读取式Ix化合物的保留时间(其为呈游离碱型的式Ix化合物)；

再精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，分别记录供试品溶液色谱图和对照溶液色谱图；

读取供试品溶液色谱图中主成分峰(即S异构体色谱峰，其为呈游离碱型的式I化合物)的峰面积，以及与异构体溶液色谱图中式Ix化合物的保留时间相应的杂质峰(即R异构体色谱峰，其为呈游离碱型的式Ix异构体杂质化合物)的峰面积，计算S异构体色谱峰与R异构体色谱峰的面积比。

需要说明的是，在以上【HPLC法A】中，以及本文【HPLC法B】中，测定含有盐根的式I化合物或式Ix化合物的药用盐时，色谱图中显示的盐根色谱峰不计，例如使用【HPLC法A】或【HPLC法B】测定式I化合物的对甲苯磺酸盐时，对甲苯磺酸在色谱图中显示的色谱峰不计。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其照所述【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，显示作为主成分的S异构体色谱峰以及作为杂质的R异构体色谱峰，其中S异构体色谱峰与R异构体色谱峰的面积比为200～10000(其亦表示该原料药物中式I所示游离碱化合物的峰面积是式Ix所示游离碱化合物峰面积的200～10000倍，该数值亦可表示为200～10000：1；优选地，式I所示游离碱化合物与式Ix所示游离碱化合物的峰面积比为250～5000，例如重量比为250～2500)。本发明人已经出人意料地发现，控制本发明原料药物或者由其制备成的药物组合物中R异构体杂质的含量在一定限量以下，该原料药物或者由其制备成的药物组合物具有更好的生物学安全性。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其中所述【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，扣除溶剂峰和/或盐根峰和/或在测试药物组合物时其中的辅料峰。

本发明人已经发现，式I所示游离碱化合物与式Ix所示游离碱化合物二者作为异构体，它们在本发明【HPLC法A】的色谱测定中，当色谱进样量相同时显示具有相同的色谱峰面积，即二者相对校正因子为1。因此在测定/计算R异构体的量时，可以使用S异构体的量以及S异构体的峰面积确定，即：

R异构体的量=(S异构体的量×R异构体的峰面积)÷S异构体的峰面积

由于上述校正因子为1，因此本发明原料药物中R异构体的量可以通过其与S异构体的相对量来表征，即可以用下式计算本发明原料药物中的R异构体的相对含量(%，亦可简称为百分含量)：

或者可以用【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图计算：

以上以R异构体相对含量(%)表示其与S异构体相比的含量，适用于不包含药用辅料的原料药物以及包含药用辅料的药物制剂，并且在包含药用辅料的药物制剂中不会因添加辅料造成总重量的改变而改变该R异构体相对含量(%)。

为此，根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其中R异构体相对含量(%)小于1.0%，例如小于0.5%，例如小于0.4%，例如小于0.3%，例如小于0.2%，例如为0.01～0.5%，例如为0.02～0.45%，例如为0.04～0.4%。

本发明所述术语“原料药物”，其是可用于制剂配制的原料药。当然，在本发明中，作为一种原料药物，其通常还应当符合作为原料药物的其它质量指标。而这些指标可通过本领域技术人员在制备原料药物时根据他们的经验而容易实现的。

本发明第一方面提供了可用于制剂配制的原料药物，因此，本发明可进一步地使用此类原料药物来配制包含它们的药物组合物即药物制剂。

因此，本发明第二方面提供了一种药物组合物，其中包含本发明第一方面任一项所述的原料药物，以及药学可接受的辅料或载体。

具体地说，本发明第二方面提供了一种药物组合物，其由原料药物和药学可接受的辅料或载体制备得到；所述原料药物中包括作为活性成分的以下式I化合物或其药学可接受的盐：

其中R1为溴，R2和R3为甲基。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其中所述式I化合物的药学可接受的盐是对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐或乙磺酸盐。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其中所述式I化合物的药学可接受的盐是对甲苯磺酸盐或苯磺酸盐。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其中所述式I化合物的药学可接受的盐选自以下式Ia化合物或式Ib化合物：

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其中还包含作为杂质的以下式Ix化合物或其药学可接受的盐：

式中R1为溴，R2和R3为甲基。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其中包含的式I化合物或其药学可接受的盐以式I所示游离碱化合物计，式Ix化合物或其药学可接受的盐以式Ix所示游离碱化合物计，式I所示游离碱化合物与式Ix所示游离碱化合物的重量比为200～10000(其亦表示该原料药物中式I所示游离碱化合物是式Ix所示游离碱化合物重量的200～10000倍，该数值亦可表示为200～10000：1)；优选地，式I所示游离碱化合物与式Ix所示游离碱化合物的重量比为250～5000，例如重量比为250～2500。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其照以下【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，显示作为主成分的S异构体色谱峰以及作为杂质的R异构体色谱峰：

【HPLC法A】：

照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定；

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其照所述【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，显示作为主成分的S异构体色谱峰以及作为杂质的R异构体色谱峰，其中S异构体色谱峰与R异构体色谱峰的面积比为200～10000(其亦表示该原料药物中式I所示游离碱化合物的峰面积是式Ix所示游离碱化合物峰面积的200～10000倍，该数值亦可表示为200～10000：1；优选地，式I所示游离碱化合物与式Ix所示游离碱化合物的峰面积比为250～5000，例如重量比为250～2500)。本发明人已经出人意料地发现，控制本发明原料药物或者由其制备成的药物组合物中R异构体杂质的含量在一定限量以下，该原料药物或者由其制备成的药物组合物具有更好的生物学安全性。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其中所述【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，扣除溶剂峰和/或盐根峰和/或在测试药物组合物时其中的辅料峰。

或者可以用【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图计算：

为此，根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其中R异构体相对含量(%)小于1.0%，例如小于0.5%，例如小于0.4%，例如小于0.3%，例如小于0.2%，例如为0.01～0.5%，例如为0.02～0.45%，例如为0.04～0.4%。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其是口服制剂或者注射制剂。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其是片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂(包括注射液和冷冻干燥粉针剂)、混悬剂、丸剂。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其是口服制剂，其中所述药学可接受的辅料或载体包括但不限于稀释剂或填充剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂或助流剂。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其中所述稀释剂或填充剂包括但不限于：淀粉例如玉米淀粉、糊精、微晶纤维素、改良淀粉、预胶化淀粉、甘露醇、乳糖、蔗糖、山梨醇、D-山梨醇、赤藻糖醇、木糖醇、果糖等。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其中所述崩解剂包括但不限于：低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基淀粉钠、淀粉羟基乙酸钠、交联羧甲纤维素钠、淀粉等等。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其中所述粘合剂例如但不限于：羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇，等等。更优选的包括羟丙基纤维素，羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙烯醇。所述粘合剂可以单独使用，也可以两种或多种联合使用。所述水溶性聚合物粘合剂混合量例如为片剂总重量的0.5至10wt％，优选l至5wt％。采用本发明药物组合物形式的口服制剂是指配制成片剂、胶囊、颗粒或细颗粒的药物制剂。所述制剂可以通过使用本发明配方等经传统方法制成片剂、胶囊、颗粒或细颗粒。

在本发明中，润滑剂和助流剂可以起统称为润滑剂。润滑剂包括但不限于：硬脂酸镁、硬脂酸、硬脂酸钙、硬脂酸锌、液状石蜡、聚乙二醇、二氧化硅、胶体二氧化硅、微粉硅胶、滑石粉、氢化植物油等或其组合。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其是溶液型注射剂，其中所述药学可接受的辅料或载体包括但不限于水、pH调节剂，以及任选的缓冲剂、渗透压调节剂，络合剂例如EDTA及其盐。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其是冻干粉针型注射剂，其中所述药学可接受的辅料或载体包括但不限于赋形剂例如甘露醇、乳糖、右旋糖苷、甘氨酸、氯化钠等，pH调节剂，以及任选的缓冲剂、渗透压调节剂，络合剂例如EDTA及其盐。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其中所述药学可接受的辅料或载体占该组合物重量的0～99.5%，例如所述药用辅料占该组合物重量的10～99%，例如所述药用辅料占该组合物重量的25～99%，例如所述药用辅料占该组合物重量的50～98%，例如所述药用辅料占该组合物重量的75～95%。所述药用辅料的用量可以根据本领域技术人员根据经验容易确定。例如，作为崩解剂，其在组合物中的总重量通常可以在3～30%范围内，例如通常可以在5～20%范围内。又例如，作为粘合剂，其在组合物中的总重量通常可以在2～20%范围内，例如通常可以在5～10%范围内。又例如，作为稀释剂或填充剂，其通常为了使药剂能够成型，因此其量是可以不作特别确定的，例如其在组合物中的总重量通常可以在1～95%范围内，例如通常可以在10～90%范围内。再例如，作为润滑剂，其在组合物中的总重量通常可以在1～20%范围内，例如通常可以在1～10%范围内，例如通常可以在1～8%范围内。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其是呈片剂、胶囊剂、颗粒剂、小丸、小容量注射液、冻干粉针剂等的制剂形式。在一个实施方案中，所述药物组合物是呈片剂、胶囊剂、颗粒剂、小容量注射液、冻干粉针剂的制剂形式。在一个实施方案中，所述药物组合物是呈片剂或胶囊剂、小容量注射液、冻干粉针剂的制剂形式。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其是呈片剂、胶囊剂、颗粒剂、小丸、小容量注射液、冻干粉针剂等的单位剂量制剂形式。术语“单位剂量制剂形式”是指例如一粒片剂、一粒胶囊剂、一瓶小容量注射液、一瓶冻干粉针剂等的制剂形式。在一个实施方案中，所述每个“单位剂量制剂形式”中包含式I化合物或其药学可接受的盐的量折合成其以式I表示的游离碱计为0.1～100mg，例如为0.1～50mg，例如为0.1～25mg，例如为0.5～20mg，例如约0.1mg、约0.5mg、约1mg、约2mg、约5mg、约10mg、约20mg、约50mg、约100mg。例如每粒片剂中包含式I化合物或其药学可接受的盐的量折合成其以式I表示的游离碱计为0.1～100mg，例如为0.1～50mg，例如为0.1～25mg，例如为0.5～20mg，例如约0.1mg、约0.5mg、约1mg、约2mg、约5mg、约10mg、约20mg、约50mg、约100mg。

进一步地，本发明第三方面提供了制备本发明第一方面任一项所述原料药物的方法，其包括以下步骤：

(a)提供式I化合物或其药学可接受的盐；

(b)将所述式I化合物或其药学可接受的盐加至40～60°C的5-10倍量(即，例如每投料溶质1kg所用溶剂为5-10L)乙醇-乳酸-水混合溶液中搅拌使溶解；

(c)使滤液在2～8°C的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，干燥，得式I化合物或其药学可接受的盐；

本发明人已经发现，比之于其它方法处理，使用上述步骤(b)和步骤(c)结晶处理后，所得式I化合物或其药学可接受的盐在本发明所述【HPLC法A】条件下测定，其中该式I化合物或其药学可接受的盐中显示具有更低的R异构体杂质。此外，必要时，重复步骤(b)和步骤(c)操作可以继续降低式I化合物或其药学可接受的盐中的R异构体杂质。因此，根据本发明第三方面任一实施方案所述的方法，其还任选地重复步骤(b)和步骤(c)操作以再次进行结晶。

根据本发明第三方面任一实施方案所述的方法，其中步骤(b)中所述乙醇-丙酮-乙酸-水混合溶液中包括40～50%(v/v)的乙醇、1～5%(v/v)乳酸和余量的水。

已经发现，通过步骤(b)和步骤(c)结晶处理可有效地除去式I化合物或其药学可接受的盐中的R异构体杂质，而该R异构体杂质在后续的步骤(d)中未见明显地增加。因此本发明方法中步骤(b)和步骤(c)结晶处理可有效地除去式I化合物或其药学可接受的盐中的R异构体杂质。需要说明的是，本领域技术人员公知，在相同色谱条件下，式I化合物或其药学可接受的盐例如式I游离碱化合物、式Ia化合物和式Ib化合物它们的色谱响应值相同。

在本发明中提及乙醇时，如未特别说明其浓度，是指98%的乙醇。

本发明任一方面或该任一方面的任一实施方案所具有的任一技术特征同样适用其它任一实施方案或其它任一方面的任一实施方案，只要它们不会相互矛盾，当然在相互之间适用时，必要的话可对相应特征作适当修饰。下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。

本发明涉及以下式I化合物或其药学可接受的盐作为活性成分的原料药物以及由该原料药物制成的药物组合物：

式中R1为溴，R2和R3为甲基；

式I化合物的化学名为3-[(4S)-8-溴-1-甲基-6-（2-吡啶基）-4H-咪唑[1，2-a][1，4]苯并二氮杂

-4-基]丙酸甲酯，

在本发明中，优选的式I化合物为其苯磺酸盐或者对甲苯磺酸盐。

在本发明中，优选的式I化合物为选自下列的式Ia化合物或式Ib化合物：

一般而言，作为制药原料用的本发明原料药物，其中作为活性成分的式I化合物的含量通常应在98%以上(例如99%以上；在本发明中，此含量对于原料药物为式I游离碱而言，以游离碱计，对于原料药物为式Ia盐或式Ib盐而言以盐计)，而其中单个杂质的含量应小于1.0%(例如小于0.5%)，总杂质的含量应小于2.0%(例如小于1.0%)。因此在本发明中，本发明原料药物中含有98%以上(例如99%以上)的式I化合物或其盐。

一般而言，作为一种临床使用的药品，由本发明原料药物制成的药物组合物例如其冷冻干燥粉针剂，其中作为活性成分的式I化合物的含量通常应在标示量的90～110%范围内，而其中单个杂质的含量应小于2.0%(例如小于1.0%，例如小于0.5%)，总杂质的含量应小于4.0%(例如小于3.0%，例如小于2.0%，均相对于其中的式I化合物的含量而言)。

本发明还提供在受试者中产生镇静或催眠状态的方法，该方法包括对该受试者施用包含镇静或催眠有效量的本发明式I化合物或其药学可接受的盐的本发明第一方面或第二方面所述原料药物或药物组合物。

根据本发明还提供在受试者中引起抗焦虑的方法，该方法包括对该受试者施用包含抗焦虑有效量的本发明式I化合物或其药学可接受的盐的本发明第一方面或第二方面所述原料药物或药物组合物。

根据本发明进一步提供在受试者中引起肌肉松弛的方法，该方法包括对该受试者施用包含肌肉松弛有效量的本发明式I化合物或其药学可接受的盐的本发明第一方面或第二方面所述原料药物或药物组合物。

根据本发明进一步提供在受试者中治疗惊厥状态的方法，该方法包括对该受试者施用包含抗惊厥的有效量的本发明式I化合物或其药学可接受的盐的本发明第一方面或第二方面所述原料药物或药物组合物。

在本发明中，所述受试者适合地是哺乳动物，优选人类。

用于上述疾病的本发明第一方面或第二方面所述原料药物或药物组合物，其给予哺乳动物例如人的剂量通常可以是以式I化合物的游离碱计为0.001-5.0mg/kg体重/天，优选是0.001-2.0mg/kg体重/天。

本发明第一方面或第二方面所述原料药物或药物组合物。可以作为短效CNS抑制剂，它们可用于按以下临床设定口服给药：围手术期事件中的手术前镇静、抗焦虑和遗忘用途；在短期诊断、手术或内窥镜程序期间的清醒性镇静；在施用其它麻醉剂或止痛剂之前和/或同时，作为用于全身麻醉的诱导和维持的组分；ICU镇静。此外，本发明第一方面或第二方面所述原料药物或药物组合物。可用于镇静、催眠、抗焦虑、肌肉松弛、抗惊厥等精神疾病。

具体实施方式

通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。以下实施例进一步说明本发明，而不是限制本发明。在下面制备组合物时所列的组方中，式I化合物计算量均以其游离碱的形式计算，所列配方均为每一单位剂量制剂(例如每粒片剂、每粒胶囊剂)中所含式I化合物游离碱的量，下面制备组合物时每批次制备量均为10000个单位剂量制剂的量，例如以1万片或者1万粒胶囊剂的量投料。

分析测试方法

采用己烷和乙醇为流动相以正相色谱法测定本发明原料药物或由其制成的药物组合物中异构体纯度(例如其中作为主成分的式I化合物或其药学可接受的盐的色谱纯度，或者其中作为杂质的式Ix化合物或其药学可接受的盐的含量)，可采用本发明上文所述【HPLC法A】进行。同样，本文试验用的式Ix化合物或其药学可接受的盐中的作为主成分的式Ix化合物或其药学可接受的盐的色谱纯度，或者其中作为杂质的式I化合物或其药学可接受的盐的含量，亦可类似地采用本发明上文所述【HPLC法A】进行。

本发明各种色谱分析中，酸根显示的色谱峰在计算时均忽略不计。

以下【HPLC法B】可用于测定本发明原料药物或由其制成的药物组合物中的有关物质及其变化情况；类似地该【HPLC法B】还可用于测定本文试验用的式Ix化合物或其药学可接受的盐中的有关物质及其变化情况。

【HPLC法B】：

在HP1100Agilent色谱仪上进行纯度分析：

色谱柱：Phenomenex Gemini C185μm(2.0×50mm)(保护柱Phenomenex Gemini C18，2x4mm)，美国菲罗门公司

柱温：40℃

进样量：10μl

流速：0.8ml/分钟

检测：紫外检测，波长：254nm；

流动相A：2mmol的NH₄HCO₃(用NH₃溶液调节至pHl0)

流动相B：乙腈

梯度洗脱程序：

洗脱时间/分钟	流动相A(%)	流动相B(%)
			0	90	10
25	10	90
			28.8	10	90
29	90	10
			34	90	10

样品配制：取各种试样(原料药或组合物)适量，加乙腈-水混合液(乙腈：水=50：50，其中含有1mmol的NH₄HCO₃，并且用NH₃溶液调节至pH10)适量溶解并制成浓度约1mg/ml的溶液，必要时过滤。

计算方法：以式I化合物色谱峰为主峰，其相对保留时间为1，读取相对保留时间在0.60～2.00之间的全部色谱峰的峰面积(峰面积小于主峰面积的0.01%的杂质峰忽略不计)，以面积归一化法计算各杂质峰的含量以及主峰的含量(亦称为色谱纯度)，并计算最大单一杂质含量以及总杂质含量。

在以上各种HPLC法中，不论式I化合物是以其游离碱形式配液还是以其药用盐的形式配液，因苯磺酸或者对甲苯磺酸或其它酸根的解离，它们在色谱系统中均显示与式I游离碱具有相同的保留时间。另外式I化合物或其盐与式Ix化合物或其盐在本文所述【HPLC法B】中显示具有相同的保留时间(反相色谱无法分离异构体)，但在【HPLC法A】中显示具有不同的保留时间，相对于式I化合物而言式Ix化合物的相对保留时间约为1.2。这些知识是色谱分析领域技术人员公知的。

制备例1：制备式Ix化合物

本发明涉及的R-异构体(即式Ix表示的化合物)可参考WO00/69836中记载的方法进行，具体如下：

步骤1：参考WO00/69836说明书23-24页Int-1的制备方法，使用Fmoc-D-Glu(OMe)-OH(购自吉尔生化)为原料得到以下式Int-1x中间体(其为Int-1的异构体)：

Int-1x；

步骤2：接着参考WO00/69836说明书34-35页Example I-1的制备方法，使用Int-1x中间体和WO00/69836说明书24记载的中间体Int-2为原料，得到以下Ex I-10x化合物(其为WO00/69836说明书38页记载的Example I-10化合物的异构体)：

ExI-10x；

步骤3：接着参考WO00/69836说明书60-61页Example Ic-8的制备方法，使用Ex I-10x为原料，得到以下式Ix表示的化合物(其为WO00/69836说明书60页记载的Example Ic-8化合物的R-异构体)

式中R1为溴，R2和R3为甲基。

接着参考本发明下文制备例7的方法对其纯化，得到白色固体。经测定，其分子式C₂₁H₁₉BrN₄O₂，ESIMS461(M+Na，碱)，439(M+H)。色谱纯度99.53%【HPLC法B】，S异构体含量0.46%【HPLC法A】。在【HPLC法A】法测试中相对于S异构体而言，该R异构体的相对保留时间约为1.17。该R异构体在本发明中作为活性成分式I化合物或其盐的异构体杂质对待。

制备例2：制备式Ix化合物的对甲苯磺酸盐

取制备例1化合物碱(式Ix化合物)1g溶于6ml乙酸乙酯中，然后将与上述碱等摩尔比的对甲苯磺酸溶于1ml甲醇中，并滴加到式Ix化合物碱的乙酸乙酯溶液中，搅拌析晶，抽滤，减压干燥得式Ix化合物的对甲苯磺酸盐，白色固体，收率为71.2%。HPLC：99.48%【HPLC法B】，S异构体含量0.50%【HPLC法A】。

制备例3：制备式Ix化合物的苯磺酸盐

取制备例1化合物碱(式Ix化合物，1g)加入小瓶中并在环境温度下添加甲苯(6ml)。向该溶液中添加与上述碱等摩尔比的苯磺酸(配制成1M的乙醇溶液)并搅拌该反应混合物15分钟，此后，过滤从该溶液沉淀的固体，用甲苯洗涤并在真空下在40℃烘干，得白色固体，收率为76.3%。HPLC：99.44%【HPLC法B】，S异构体含量0.46%【HPLC法A】。

制备例4：制备式I化合物

照WO00/69836说明书60-61页Example Ic-8的制备方法，使用0.5mol的Ex I-10为原料投料，得到以下式I化合物：

式中R1为溴，R2和R3为甲基，分子式C₂₁H₁₉BrN₄O₂，ESIMS461(M+Na，碱)，439(M+H)。色谱纯度98.4%【HPLC法B】；R异构体杂质含量1.32%(S异构体峰面积/R异构体峰面积=75，该参数在本发明中亦可表示为“S/R比”、“S/R面积比”或“S/R峰面积比”等等；由于二者在HPLC中色谱响应系数相同，即等浓度的S和R异构体在HPLC中显示相同的峰面积，因此根据该峰面积比值同样可确定式I所示游离碱化合物与式Ix所示游离碱化合物的重量比为75，在本文中其它地方亦可作同样的推算)【HPLC法A】。

制备例5：制备式I化合物的对甲苯磺酸盐

取制备例4化合物碱(式I化合物)100g溶于600ml乙酸乙酯中，然后将与上述碱等摩尔比的对甲苯磺酸溶于100ml甲醇中，并滴加到式I化合物碱的乙酸乙酯溶液中，搅拌析晶，抽滤，减压干燥得式I化合物的对甲苯磺酸盐，白色固体。HPLC：98.83%【HPLC法B】；R异构体杂质含量1.18%(S异构体峰面积/R异构体峰面积=84)【HPLC法A】。

制备例6：制备式I化合物的苯磺酸盐

取制备例4化合物碱(式I化合物，100g)加入小瓶中并在环境温度下添加甲苯(600ml)。向该溶液中添加与上述碱等摩尔比的苯磺酸(配制成1M的乙醇溶液)并搅拌该反应混合物15分钟，此后，过滤从该溶液沉淀的固体，用甲苯洗涤并在真空下在40℃烘干，得白色固体。HPLC：98.77%【HPLC法B】；R异构体杂质含量1.14%(S异构体峰面积/R异构体峰面积=87)【HPLC法A】。

制备例7：制备基本纯净的式I化合物

取制备例4所得式I化合物100g，加至50°C的800ml乙醇-乳酸-水(三者体积比45：2：53)混合溶液中搅拌使溶解；过滤，使滤液在5°C的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，干燥，得式I化合物。重复该操作7次，得到的产物色谱纯度99.99%【HPLC法B】；R异构体杂质含量0(未检测到)【HPLC法A】。

制备例8：制备基本纯净的式I化合物的对甲苯磺酸盐

取制备例7化合物碱(式I化合物)10g溶于60ml乙酸乙酯中，然后将与上述碱等摩尔比的对甲苯磺酸溶于10ml甲醇中，并滴加到式I化合物碱的乙酸乙酯溶液中，搅拌析晶，抽滤，减压干燥得式I化合物的对甲苯磺酸盐，白色固体。HPLC：99.96%【HPLC法B】；R异构体杂质含量0(未检测到)【HPLC法A】。

制备例9：制备基本纯净的式I化合物的苯磺酸盐

取制备例7化合物碱(式I化合物，10g)加入小瓶中并在环境温度下添加甲苯(60ml)。向该溶液中添加与上述碱等摩尔比的苯磺酸(配制成1M的乙醇溶液)并搅拌该反应混合物15分钟，此后，过滤从该溶液沉淀的固体，用甲苯洗涤并在真空下在40℃烘干，得白色固体。HPLC：99.97%【HPLC法B】；R异构体杂质含量0(未检测到)【HPLC法A】。

试验例1：式I化合物或其盐的急性毒性研究

试验动物：动物为昆明种小白鼠，体重20g±2g。采用寇氏法测定药物经静脉注射给药的半数致死量(LD50)。试药：制备例2得到的式Ix化合物的对甲苯磺酸盐、制备例8得到的基本纯净的式I化合物的对甲苯磺酸盐，用0.9%氯化钠注射液配制。经测定，式I化合物的对甲苯磺酸盐的LD50为950mg/kg，而式Ix化合物的对甲苯磺酸盐的LD50为65mg/kg。可见式I化合物的对甲苯磺酸盐在小鼠中的LD50值约为式Ix化合物的对甲苯磺酸盐的15倍。

在补充试验中，使用体重20g±2g的昆明种小白鼠，采用寇氏法测定药物经口服给药的半数致死量(LD50)。试药：制备例1得到的式Ix化合物、制备例7得到的基本纯净的式I化合物，用5%CMC-Na配制混悬液。结果：式I化合物在小鼠中的口服LD50值约为式Ix化合物的18倍。

在补充试验中，使用体重20g±2g的昆明种小白鼠，采用寇氏法测定药物经经静脉注射给药的半数致死量(LD50)。试药：制备例3得到的式Ix化合物的苯磺酸盐、制备例9得到的基本纯净的式I化合物的苯磺酸盐，用0.9%氯化钠注射液配制。结果式I化合物的苯磺酸盐在小鼠中的静脉注射LD50值约为式Ix化合物的苯磺酸盐的16倍

以上结果显示式I化合物或其盐的安全性远比式Ix化合物或其盐高。

试验例2：式I化合物或其盐对小鼠白细胞的影响

以上试验例1结果显示式I化合物或其盐的安全性远比式Ix化合物或其盐高。本试验例期待探究这种安全性差异的原因。结果显示式Ix化合物或其盐的安全性低的原因可能与其造成白细胞减少这类在临床上可能表现为血象下降的现象有关。

在本发明中各种生物学试验或者制剂配制试验中，如未另外说明，各种形式的式I化合物或者式Ix化合物或者它们的盐均折算成这些化合物的游离碱形式进行计量。

雌性昆明种小白鼠70只，体重20±2克，适应饲养后，随机分为以下7组：

O组：对照组(溶剂组，给予等体积溶剂)、

A组：式I化合物组(25mg/kg/次，制备例7制得)、

B组：式I化合物对甲苯磺酸盐组(25mg/kg/次，制备例8制得)、

C组：式I化合物苯磺酸盐组(25mg/kg/次，制备例9制得)、

D组：式Ix化合物组(25mg/kg/次，制备例1制得)、

E组：式Ix化合物对甲苯磺酸盐组(25mg/kg/次，制备例2制得)、

F组：式Ix化合物苯磺酸盐组(25mg/kg/次，制备例3制得)。

上述25mg/kg/次剂量大约是人用剂量的10～20倍。

试药配制：各试样用0.9%氯化钠注射液溶解并用盐酸或氢氧化钠调节pH值至4.0，制成2.5mg/ml的溶液。

给药方法：小鼠尾静脉注射给药，给药体积为0.2ml/20g体重，每天给药一次，连续给药4周。

血象检测：眼角取血20μl，以日产血象检测仪检测。各组小鼠在给药前、给药期间每周末、给药结束后一周各检测一次。白细胞数检测结果(×1000个/立方毫米)见表1，表中各结果均以平均值(×1000/立方毫米)提供，它们的标准差(SD)均在2×个1000/立方毫米以内(表中未提供)，结果显示处于正常状态的对照组动物的外周血白细胞数均在10800～12900个/立方毫米范围内。

表1：式I化合物对小鼠外周血白细胞的影响

注：表中对照组给药前数值12.3表示外周血白细胞数为12.3×1000个/立方毫米即12300个/立方毫米，其它类推；*表示与相应时间点的对照组相比，p<0.05。

由表1可见，与对照组相比，式I化合物及其盐组动物的白细胞数较稳定，均在正常范围之内，且各组小鼠的外周血白细胞数量无明显改变，而式Ix化合物及其盐组动物的白细胞数下降都较大，与对照组相比呈现显著性差异。说明式Ix化合物及其盐可致小鼠外周血的白细胞数减少，而式I化合物及其盐对小鼠外周血白细胞数没有影响。

试验例3：式I化合物或其盐对小鼠白细胞的影响

雌性昆明种小白鼠100只，体重20±2克，适应饲养后，随机分为10组，各组设置为：

0组：对照组(溶剂组，给予等体积溶剂)、

1组：式I化合物对甲苯磺酸盐组(25mg/kg/次，制备例8制得)、

2组：式I化合物对甲苯磺酸盐(制备例8制得)与式Ix化合物对甲苯磺酸盐(制备例2制得)以重量比99.9:0.1组合的组(25mg/kg/次，该组合物中含有99.9%的式I化合物对甲苯磺酸盐以及0.1%式Ix化合物对甲苯磺酸盐，并且其在本发明【HPLC法A】中检测到式I化合物色谱峰与式Ix化合物色谱峰的峰面积比为1007，与重量比基本相同)、

3组：式I化合物对甲苯磺酸盐(制备例8制得)与式Ix化合物对甲苯磺酸盐(制备例2制得)以重量比99.8:0.2组合的组(25mg/kg/次，该组合物中含有99.8%的式I化合物对甲苯磺酸盐以及0.2%式Ix化合物对甲苯磺酸盐，并且其在本发明【HPLC法A】中检测到式I化合物色谱峰与式Ix化合物色谱峰的峰面积比为497，与重量比基本相同)、

4组：式I化合物对甲苯磺酸盐(制备例8制得)与式Ix化合物对甲苯磺酸盐(制备例2制得)以重量比99.7:0.3组合的组(25mg/kg/次，该组合物中含有99.7%的式I化合物对甲苯磺酸盐以及0.3%式Ix化合物对甲苯磺酸盐，并且其在本发明【HPLC法A】中检测到式I化合物色谱峰与式Ix化合物色谱峰的峰面积比为334，与重量比基本相同)、

5组：式I化合物对甲苯磺酸盐(制备例8制得)与式Ix化合物对甲苯磺酸盐(制备例2制得)以重量比99.6:0.4组合的组(25mg/kg/次，该组合物中含有99.6%的式I化合物对甲苯磺酸盐以及0.4%式Ix化合物对甲苯磺酸盐，并且其在本发明【HPLC法A】中检测到式I化合物色谱峰与式Ix化合物色谱峰的峰面积比为245，与重量比基本相同)、

6组：式I化合物对甲苯磺酸盐(制备例8制得)与式Ix化合物对甲苯磺酸盐(制备例2制得)以重量比99.5:0.5组合的组(25mg/kg/次，该组合物中含有99.5%的式I化合物对甲苯磺酸盐以及0.5%式Ix化合物对甲苯磺酸盐，并且其在本发明【HPLC法A】中检测到式I化合物色谱峰与式Ix化合物色谱峰的峰面积比为202，与重量比基本相同)、

7组：式I化合物对甲苯磺酸盐(制备例8制得)与式Ix化合物对甲苯磺酸盐(制备例2制得)以重量比99.4:0.6组合的组(25mg/kg/次，该组合物中含有99.4%的式I化合物对甲苯磺酸盐以及0.6%式Ix化合物对甲苯磺酸盐，并且其在本发明【HPLC法A】中检测到式I化合物色谱峰与式Ix化合物色谱峰的峰面积比为164，与重量比基本相同)、

8组：式I化合物对甲苯磺酸盐(制备例8制得)与式Ix化合物对甲苯磺酸盐(制备例2制得)以重量比99.25:0.75组合的组(25mg/kg/次，该组合物中含有99.25%的式I化合物对甲苯磺酸盐以及0.75%式Ix化合物对甲苯磺酸盐，并且其在本发明【HPLC法A】中检测到式I化合物色谱峰与式Ix化合物色谱峰的峰面积比为134，与重量比基本相同)、

9组：式I化合物对甲苯磺酸盐(制备例8制得)与式Ix化合物对甲苯磺酸盐(制备例2制得)以重量比99.0:1.0组合的组(25mg/kg/次，该组合物中含有99.0%的式I化合物对甲苯磺酸盐以及1.0%式Ix化合物对甲苯磺酸盐，并且其在本发明【HPLC法A】中检测到式I化合物色谱峰与式Ix化合物色谱峰的峰面积比为98，与重量比基本相同)。

血象检测：眼角取血20μl，以日产血象检测仪检测。各组小鼠在给药前、给药期间每周末、给药结束一周后各检测一次。白细胞数检测结果(×1000个/立方毫米)见表2，表中各结果均以平均值(×1000/立方毫米)提供，它们的标准差(SD)均在2×个1000/立方毫米以内(表中未提供)，结果显示处于正常状态的对照组动物的外周血白细胞数均在10000～13000个/立方毫米范围内。

表2：式I化合物或其盐对小鼠外周血自细胞的影响

注：*表示与相应时间点的对照组相比p<0.05。

由表2可见，与对照组相比，式I化合物盐组和对照组动物的白细胞数较稳定，均在正常范围之内；而组合物组在式Ix化合物盐含量≤0.40%时，各组小鼠的外周血白细胞数量无明显改变，而当式Ix化合物盐含量达0.5%剂量组时，小鼠白细胞在给药后第四周与对照组相比显著减少；当式Ix化合物盐含量达0.6%时，小鼠白细胞在给药后第三周与对照组相比显著减少；当式Ix化合物盐含量达0.75%时，小鼠白细胞在给药后第三周就显著减少；当式Ix化合物盐含量达1.0%时，小鼠白细胞在给药后第二周就显著减少。可见，随着组合物中式Ix化合物盐含量的增大，小鼠白细胞数目减少的程度越大，且白细胞减少的时间也提前。可见式Ix化合物盐不高于0.5%时，是相对比较安全的，特别是相对于式I化合物盐而言式Ix化合物盐含量等于或低于0.4%是优选的。

补充试验：参照上文表2的方法，不同的是使用制备例9制得的式I化合物苯磺酸盐代替其中使用的式I化合物对甲苯磺酸盐，使用制备例3制得的式Ix化合物苯磺酸盐代替其中使用的式Ix化合物对甲苯磺酸盐。结果与表2基本相同，即，与对照组相比，式I化合物盐组和对照组动物的白细胞数较稳定，均在正常范围之内；而组合物组在式Ix化合物盐含量≤0.40%时，各组小鼠的外周血白细胞数量无明显改变，而当式Ix化合物盐含量达0.5%剂量组时，小鼠白细胞在给药后第四周与对照组相比显著减少；当式Ix化合物盐含量达0.6%时，小鼠白细胞在给药后第三周与对照组相比显著减少；当式Ix化合物盐含量达0.75%时，小鼠白细胞在给药后第三周就显著减少；当式Ix化合物盐含量达1.0%时，小鼠白细胞在给药后第二周就显著减少。

实施例1：制备本发明原料药物

取制备例4所得式I化合物1g，加至50°C的8ml乙醇-乳酸-水(三者体积比45：2：53)混合溶液中搅拌使溶解；过滤，使滤液在5°C的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，40°C真空干燥；再重复以上操作一次，得到可作为药物制剂配制用的式I化合物原料药物，两次重结晶收率86.1%。产物色谱纯度99.22%【HPLC法B】；R异构体杂质相对含量0.39%，峰面积比(I/Ix)=255【HPLC法A】。

实施例2：制备本发明原料药物

取照实施例1方法得到的式I化合物1g，加至60°C的10ml乙醇-乳酸-水(三者体积比40：5：55)混合溶液中搅拌使溶解；过滤，使滤液在2°C的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，40°C真空干燥，自实施例1起三次重结晶总收率79.4%。产物色谱纯度99.38%【HPLC法B】；R异构体杂质相对含量0.24%，峰面积比(I/Ix)=415【HPLC法A】。

实施例3：制备本发明原料药物

取照实施例2方法得到的式I化合物1g，加至40°C的5ml乙醇-乳酸-水(三者体积比60：1：39)混合溶液中搅拌使溶解；过滤，使滤液在8°C的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，40°C真空干燥，自实施例1起四次重结晶总收率71.2%。产物色谱纯度99.51%【HPLC法B】；R异构体杂质相对含量0.11%，峰面积比(I/Ix)=908【HPLC法A】。

实施例4：制备本发明原料药物

取照实施例3方法得到的式I化合物1g，加至50°C的8ml乙醇-乳酸-水(三者体积比45：3：52)混合溶液中搅拌使溶解；过滤，使滤液在5°C的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，40°C真空干燥，自实施例1起五次重结晶总收率63.4%。产物色谱纯度99.73%【HPLC法B】；R异构体杂质相对含量0.04%，峰面积比(I/Ix)=2499【HPLC法A】。

实施例5：制备本发明原料药物

取照实施例3方法得到的式I化合物1g，加至50°C的8ml乙醇-乳酸-水(三者体积比45：3：52)混合溶液中搅拌使溶解；过滤，使滤液在5°C的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，40°C真空干燥，自实施例1起六次重结晶总收率27.2%。产物色谱纯度99.98%【HPLC法B】；R异构体杂质相对含量0.016%，峰面积比(I/Ix)=6249【HPLC法A】。可见，虽然通过多次重结晶可以有效地除去R异构体杂质，但当峰面积比(I/Ix)大于5000例如达到6249时，产物的收率大大降低，因此在满足产品安全性的情况下例如上文所述R异构体杂质相对含量小于等于0.4%不致产生血象不利变化的情况下，具有峰面积比(I/Ix)在250～2500范围内的较高收率的原料药物对于工业化生产来说是有益的。

实施例6：制备本发明原料药物

取制备例5所得式I化合物对甲苯磺酸盐1g，加至50°C的8ml乙醇-乳酸-水(三者体积比45：2：53)混合溶液中搅拌使溶解；过滤，使滤液在5°C的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，40°C真空干燥；再重复以上操作一次，得到可作为药物制剂配制用的式I化合物盐原料药物，两次重结晶收率88.3%。产物色谱纯度99.26%【HPLC法B】；R异构体杂质相对含量0.38%，峰面积比(I/Ix)=262【HPLC法A】。

实施例7：制备本发明原料药物

取照实施例6方法得到的式I化合物对甲苯磺酸盐1g，加至60°C的10ml乙醇-乳酸-水(三者体积比40：5：55)混合溶液中搅拌使溶解；过滤，使滤液在2°C的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，40°C真空干燥，自实施例6起三次重结晶总收率77.6%。产物色谱纯度99.35%【HPLC法B】；R异构体杂质相对含量0.23%，峰面积比(I/Ix)=424【HPLC法A】。

实施例8：制备本发明原料药物

取照实施例7方法得到的式I化合物对甲苯磺酸盐1g，加至40°C的5ml乙醇-乳酸-水(三者体积比60：1：39)混合溶液中搅拌使溶解；过滤，使滤液在8°C的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，40°C真空干燥，自实施例6起四次重结晶总收率72.4%。产物色谱纯度99.55%【HPLC法B】；R异构体杂质相对含量0.09%，峰面积比(I/Ix)=1110【HPLC法A】。

实施例9：制备本发明原料药物

取照实施例8方法得到的式I化合物对甲苯磺酸盐1g，加至50°C的8ml乙醇-乳酸-水(三者体积比45：3：52)混合溶液中搅拌使溶解；过滤，使滤液在5°C的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，40°C真空干燥，自实施例6起五次重结晶总收率60.1%。产物色谱纯度99.82%【HPLC法B】；R异构体杂质相对含量0.041%，峰面积比(I/Ix)=2438【HPLC法A】。

实施例10：制备本发明原料药物

取照实施例9方法得到的式I化合物对甲苯磺酸盐1g，加至50°C的8ml乙醇-乳酸-水(三者体积比45：3：52)混合溶液中搅拌使溶解；过滤，使滤液在5°C的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，40°C真空干燥，自实施例6起六次重结晶总收率21.2%。产物色谱纯度99.98%【HPLC法B】；R异构体杂质相对含量0.013%，峰面积比(I/Ix)=7691【HPLC法A】。

实施例11：制备本发明原料药物

取制备例6所得式I化合物苯磺酸盐1g，加至50°C的8ml乙醇-乳酸-水(三者体积比45：2：53)混合溶液中搅拌使溶解；过滤，使滤液在5°C的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，40°C真空干燥；再重复以上操作一次，得到可作为药物制剂配制用的式I化合物盐原料药物，两次重结晶收率87.6%。产物色谱纯度99.23%【HPLC法B】；R异构体杂质相对含量0.392%，峰面积比(I/Ix)=254【HPLC法A】。

实施例12：制备本发明原料药物

取照实施例11方法得到的式I化合物苯磺酸盐1g，加至60°C的10ml乙醇-乳酸-水(三者体积比40：5：55)混合溶液中搅拌使溶解；过滤，使滤液在2°C的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，40°C真空干燥，自实施例11起三次重结晶总收率73.6%。产物色谱纯度99.40%【HPLC法B】；R异构体杂质相对含量0.25%，峰面积比(I/Ix)=399【HPLC法A】。

实施例13：制备本发明原料药物

取照实施例12方法得到的式I化合物苯磺酸盐1g，加至40°C的5ml乙醇-乳酸-水(三者体积比60：1：39)混合溶液中搅拌使溶解；过滤，使滤液在8°C的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，40°C真空干燥，自实施例11起四次重结晶总收率68.5%。产物色谱纯度99.61%【HPLC法B】；R异构体杂质相对含量0.114%，峰面积比(I/Ix)=876【HPLC法A】。

实施例14：制备本发明原料药物

取照实施例13方法得到的式I化合物苯磺酸盐1g，加至50°C的8ml乙醇-乳酸-水(三者体积比45：3：52)混合溶液中搅拌使溶解；过滤，使滤液在5°C的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，40°C真空干燥，自实施例11起五次重结晶总收率60.3%。产物色谱纯度99.87%【HPLC法B】；R异构体杂质相对含量0.039%，峰面积比(I/Ix)=2563【HPLC法A】。

实施例15：制备本发明原料药物

取照实施例14方法得到的式I化合物苯磺酸盐1g，加至50°C的8ml乙醇-乳酸-水(三者体积比45：3：52)混合溶液中搅拌使溶解；过滤，使滤液在5°C的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，40°C真空干燥，自实施例11起六次重结晶总收率17.6%。产物色谱纯度99.99%【HPLC法B】；R异构体杂质相对含量0.011%，峰面积比(I/Ix)=9090【HPLC法A】。

本发明人还在另外的试验中发现，如果在以上实施例1-15中，不添加乳酸，则不能有效地提高峰面积比(I/Ix)，特别是难以将该峰面积比(I/Ix)提高到250以上，即不能有效地除去其中的R异构体杂质。例如在实施例1中，如果不添加乳酸，所得产物中式I化合物为143，而在实施例2中，如果不添加乳酸，所得产物中峰面积比(I/Ix)为186。

药物制剂例1：制备本发明原料药物的胶囊剂药物组合物

取实施例2、3、或4所得式I化合物5mg与乳糖10mg、玉米淀粉13mg、滑石粉2mg通过研磨混合均匀并过80目筛，装入空心硬胶囊中，得到胶囊剂，每粒胶囊含式I化合物5mg，每批制5000粒。这些胶囊剂在本发明中分别称为胶囊1、胶囊2、胶囊3。

同样，分别以实施例7、8、或9所得式I化合物盐作为原料，同胶囊1的方法制备胶囊剂，分别得到胶囊4、胶囊5、胶囊6。

同样，分别以实施例12、13、或14所得式I化合物盐作为原料，同胶囊1的方法制备胶囊剂，分别得到胶囊7、胶囊8、胶囊9。

药物制剂例2：制备本发明原料药物的片剂药物组合物

制备10000片规模，每片组成为：实施例2、3、或4所得式I化合物5mg、甘露醇100mg、玉米淀粉90mg、胶体二氧化硅2mg、聚维酮(K25)5mg、硬脂酸镁3mg。

制备方法：(a)各物料预先粉碎至过60～80目。将式I化合物、甘露醇、玉米淀粉(2/3量)装载到流化床制粒机中；(b)将聚维酮溶解于水中以形成溶液，并将该溶液喷洒于该流化床制粒机中的颗粒上，将这些混合物制成颗粒以形成粒状混合物；(c)将该粒状混合物干燥至约1.0%至约2.5%的终点水分含量；(d)将步骤(c)的该粒状混合物与胶体二氧化硅、余量玉米淀粉及硬脂酸镁混合，并掺混以形成最终掺混物；(e)使用压片机将该最终掺混物压制成片剂。这些片剂在本发明中分别称为片剂1、片剂2、片剂3。

同样，分别以实施例7、8、或9所得式I化合物盐作为原料，同片剂1的方法制备片剂，分别得到片剂4、片剂5、片剂6。

同样，分别以实施例12、13、或14所得式I化合物盐作为原料，同片剂1的方法制备片剂，分别得到片剂7、片剂8、片剂9。

药物制剂例3：制备本发明原料药物的冻干粉针剂药物组合物

制备1000瓶规模，每瓶冻干粉针剂配液组成为：实施例7、8、或9所得式I化合物盐5mg、甘露醇50mg、注射用水加至1ml，调节溶液pH值至3.5。经常规冷冻干燥法制成冻干粉针剂。这些粉针剂在本发明中分别称为粉针剂1、粉针剂2、粉针剂3。

同样，分别以实施例12、13、或14所得式I化合物盐作为原料，同粉针剂1的方法制备粉针剂，分别得到粉针剂4、粉针剂5、粉针剂6。

试验例4：对各种试样进行稳定性考察

考察试样：上述药物制剂例1、2、3所得各胶囊剂、片剂分别用铝箔袋密封包装，冻干粉针剂密封包装于玻璃瓶中，置于40°C恒温箱中放置6月，测定各试样在0月(即放样前)和6月时活性成分的含量。对于每一试样，以6月活性成分含量除以0月活性成分含量所得的百分值，作为高温处置6月后的活性成分相对含量(%)，即计算式如下：

活性成分相对含量(%)=(6月含量÷0月含量)×100%

结果表明，各胶囊剂、片剂、粉针剂在40°C恒温箱中放置6月后，活性成分相对含量(%)均在96～101%范围内，显示本发明原料药物制成的药物组合物具有良好的稳定性。

Claims

1.一种原料药物，其中包括作为活性成分的以下式I化合物或其药学可接受的盐：

其中R1为溴，R2和R3为甲基。

2.根据权利要求1的原料药物，其中所述式I化合物的药学可接受的盐是对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐或乙磺酸盐；或者，其中所述式I化合物的药学可接受的盐选自以下式Ia化合物或式Ib化合物：

3.根据权利要求1的原料药物，其中还包含作为杂质的以下式Ix化合物或其药学可接受的盐：

式中R1为溴，R2和R3为甲基；

进一步地，该原料药物中包含的式I化合物或其药学可接受的盐以式I所示游离碱化合物计，式Ix化合物或其药学可接受的盐以式Ix所示游离碱化合物计，式I所示游离碱化合物与式Ix所示游离碱化合物的重量比为200～10000；

或者，该原料药物照说明书【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，显示作为主成分的S异构体色谱峰以及作为杂质的R异构体色谱峰，其中S异构体色谱峰与R异构体色谱峰的面积比为200～10000；

或者，该原料药物中R异构体相对于其中作为主成分的S异构体的相对含量小于1.0%，例如小于0.5%，例如为0.01～0.5%，例如为0.04～0.4%。

4.一种药物组合物，其中包含权利要求1-3任一项所述的原料药物，以及药学可接受的辅料或载体。

5.一种药物组合物，其中包括作为活性成分的以下式I化合物或其药学可接受的盐以及药学可接受的辅料或载体：

其中R1为溴，R2和R3为甲基；进一步地，其中所述式I化合物的药学可接受的盐是对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐或乙磺酸盐；或者，其中所述式I化合物的药学可接受的盐是对甲苯磺酸盐或苯磺酸盐；或者，其中所述式I化合物的药学可接受的盐选自以下式Ia化合物或式Ib化合物：

6.根据权利要求5的药物组合物，其中还包含作为杂质的以下式Ix化合物或其药学可接受的盐：

式中R1为溴，R2和R3为甲基；

进一步地，该药物组合物中，包含的式I化合物或其药学可接受的盐以式I所示游离碱化合物计，式Ix化合物或其药学可接受的盐以式Ix所示游离碱化合物计，式I所示游离碱化合物与式Ix所示游离碱化合物的重量比为200～10000；

或者，该药物组合物照说明书【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，显示作为主成分的S异构体色谱峰以及作为杂质的R异构体色谱峰，其中S异构体色谱峰与R异构体色谱峰的面积比为200～10000；

或者，该药物组合物中R异构体相对于其中作为主成分的S异构体的相对含量小于1.0%，例如小于0.5%，例如为0.01～0.5%，例如为0.04～0.4%。

7.根据权利要求5至6任一项的药物组合物，其是口服制剂或者注射制剂；例如，其是片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂(包括注射液和冷冻干燥粉针剂)、混悬剂、丸剂。

8.根据权利要求7的药物组合物，其是口服制剂，其中所述药学可接受的辅料或载体包括但不限于稀释剂或填充剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂或助流剂；具体地说，

所述稀释剂或填充剂包括但不限于：淀粉例如玉米淀粉、糊精、微晶纤维素、改良淀粉、预胶化淀粉、甘露醇、乳糖、蔗糖、山梨醇、D-山梨醇、赤藻糖醇、木糖醇、果糖等；

所述崩解剂包括但不限于：低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基淀粉钠、淀粉羟基乙酸钠、交联羧甲纤维素钠、淀粉等等；

所述粘合剂例如但不限于：羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇，等等。更优选的包括羟丙基纤维素，羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙烯醇；

所述润滑剂包括但不限于：硬脂酸镁、硬脂酸、硬脂酸钙、硬脂酸锌、液状石蜡、聚乙二醇、二氧化硅、胶体二氧化硅、微粉硅胶、滑石粉、氢化植物油等或其组合。

9.根据权利要求7的药物组合物，其是溶液型注射剂，其中所述药学可接受的辅料或载体包括但不限于水、pH调节剂，以及任选的缓冲剂、渗透压调节剂，络合剂例如EDTA及其盐；或者，其是冻干粉针型注射剂，其中所述药学可接受的辅料或载体包括但不限于赋形剂例如甘露醇、乳糖、右旋糖苷、甘氨酸、氯化钠等，pH调节剂，以及任选的缓冲剂、渗透压调节剂，络合剂例如EDTA及其盐。

10.根据权利要求5至9任一项的药物组合物，其是呈片剂、胶囊剂、颗粒剂、小丸、小容量注射液、冻干粉针剂等的单位剂量制剂形式；进一步地，所述每个单位剂量制剂形式中包含式I化合物或其药学可接受的盐的量折合成其以式I表示的游离碱计为0.1～100mg。