CN102731629B

CN102731629B - 一种抗菌肽及其应用

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Publication number: CN102731629B
Application number: CN201210157559.6A
Authority: CN
Inventors: 陈育新; 黄宜兵; 陈明侠; 李杨
Original assignee: Changchun Protelight Pharmaceutical & Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Changchun Protelight Pharmaceutical & Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2012-05-21
Filing date: 2012-05-21
Publication date: 2015-05-20
Anticipated expiration: 2032-05-21
Also published as: CN102731629A

Abstract

本发明公开了一种抗菌肽及其应用，其氨基酸的序列为：Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂（SQ-1），及其衍生序列Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_L-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_L-Leu_L-Lys_D-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂（SQ-25）。本发明通过多肽固相合成的技术合成了可以用做抗微生物制剂的多肽及其相关化合物，解决日益严重的抗药性问题，解决顽固感染对广大患者造成的痛苦。本发明中的抗菌肽可以应用于各种顽固感染性疾病及普通感染，作为现有抗生素的优良替代药物或辅助药物。

Description

一种抗菌肽及其应用

技术领域

本发明涉及一种新型的抗菌肽及其该抗菌肽在制备用于控制微生物感染的治疗药物组合物中的应用，属于多肽技术领域。

背景技术

抗生素是能抵抗致病微生物的药物，是抗菌消炎药中最大的一类。抗生素是由细菌、真菌或其他微生物在生活过程中所产生的物质，具有抑制或杀灭细菌、真菌、螺旋体、支原体、衣原体等致病微生物的作用，因此作为抗感染药物。还有的抗生素可治疗恶性肿瘤。抗生素类药物广泛地应用于各种感染性疾病，其品种繁多。阳离子抗菌肽可以代表一类新型的抗生素，虽然阳离子抗菌肽的作用模式尚未完全确定，但所有的阳离子两亲性抗菌肽都会与细胞膜相互作用，细胞膜是抗菌肽的主要靶点，抗菌肽分子在细胞膜上的聚集会导致通透性的增加并使细胞膜丧失其屏障功能。产生这种抗药性需要对微生物细胞膜脂成分的实质性改变，因此，针对这些膜活性的抗菌肽产生抗药性是几乎不可能的。

-螺旋型和-折叠型抗菌肽是最主要的两大类阳离子抗菌肽。-折叠型抗菌肽包括由分子内二硫键固定的环形多肽，例如防卫素和保护素，以及具有N末端到C末端的共价键的多肽，例如短杆菌肽S和短杆菌酪肽。与-折叠型抗菌肽不同，-螺旋型抗菌肽是更加线性的分子，其在水介质中以无序结构存在，但它们通过与疏水细胞膜相互作用，呈两亲螺旋状态，例如蛾血素，马加宁和蜂毒肽。

生物学研究表明-螺旋型抗菌肽的药理活性及溶血活性一般与抗菌肽的疏水性、两亲性及螺旋性相关。多数情况下，D-型氨基酸取代L-型氨基酸形成的抗菌肽，其螺旋度会降低，从而其毒性（溶血活性）也随之降低。而用疏水性更高的氨基酸取代疏水性较低的氨基酸所形成的多肽会具有更强的抗菌活性。通过利用一系列选定的D-或者L-型氨基酸替换在这些两亲分子的非极性和极性面上特定位置的疏水或者亲水的氨基酸残基，我们设计出了具有更高抗菌特异性的抗菌肽。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗菌肽，通过人工合成即多肽固相合成的方法制备可以用作抗微生物制剂的多肽及其相关化合物，解决日益严重的抗药性问题及顽固感染对广大患者造成的痛苦。其抗菌作用起效稳定，无毒性，易于人体接受。

本发明的另一个目的在于提供一种抗菌肽在制备用于控制微生物感染的治疗药物组合物中的应用，可以应用于各种顽固感染性疾病及普通感染，作为现有抗生素的优良替代药物或辅助药物。

本发明的技术方案为：一种抗菌肽，其特征在于衍生自Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-

Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Ala_L-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Ala_L-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂（代码为NK_L）序列的一种新型多肽，其氨基酸的序列为：Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-

Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂（命名为SQ-1），序列中下脚标分别表示该位置氨基酸为L-型或者D-型氨基酸，Ac代表N-端乙酰化，NH₂代表C-端酰胺化。SQ-1在NK_L序列基础上，将疏水面第12及20位上的疏水性较低的Ala_L取代为疏水性较高的Leu_D，由于Leu疏水性高于Ala，因而使得其抗菌活性增加，用D-型取代L-型氨基酸，又降低了SQ-1序列的螺旋度，从而使得其溶血活性降低，最终达到到优化的目的，得到相对NK_L序列特异性更高的优选多肽，抗菌活性增强，同时细胞毒性（溶血活性）降低。以下所述SQ-1系列多肽的取代方式均基于这种设计理念衍生。

例如，多肽类似物SQ-25氨基酸序列为：Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-

Lys_L-Ser_L-Leu_L-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_L-Leu_L-Lys_D-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂，是通过将SQ-1疏水面12位及20位上的Leu_D取代为Leu_L，同时将亲水面第22位上的Lys_L换成Lys_D，这种取代便是为了得到特异性更强的多肽序列。

本发明优选多肽SQ-1及其多肽类似物SQ-25, 其含有下面氨基酸序列。

表1多肽及其氨基酸序列

这里，表中氨基酸后面的下标字母D代表该氨基酸是D-型氨基酸；与此相同，下标L代表该氨基酸是L-型氨基酸。Ac表示多肽的N端被乙酰化，NH₂表示C端酰胺化。

所述的抗菌肽氨基酸序列中的Leu由Ile, Val, 正亮氨酸, 正缬氨酸中任一氨基酸残基取代。

所述的抗菌肽氨基酸序列中的Phe由Trp，Tyr，Leu, Ile, Val, 正亮氨酸, 正缬氨酸中任一氨基酸残基取代。

所述的抗菌肽氨基酸序列中的Trp由Phe, Tyr，Leu, Ile, Val, 正亮氨酸, 正缬氨酸中任一氨基酸残基取代。

所述的抗菌肽及相应的对眏异构体的任意1-2个氨基酸可由L-型或D-型氨基酸取代。

所述的抗菌肽序列中以不同方式取代其中1-2个氨基酸或延长多肽序列及截短多肽序列1-2个氨基酸的方式所得到相似的序列及其的相关化合物。

抗菌肽在制备控制微生物感染的药物组合物中的应用。

所述的药物组合物中抗菌肽的剂量范围为：注射剂 0.1-50mg/kg；外用剂1/10000-10%/支。

本发明的积极效果是经过改造后的SQ-1系列抗菌肽较源序列NK_L具有更高的抗菌活性，或毒性降低，或抗菌特异性更强。可以用作人类药物和/或牲畜药物、兽用药物或者作为农业、食品及工业上有效的化合物试剂。

我们发现抗菌肽的一些物理特性对于其抗菌活性是至关重要的。这些特性包括：在亲水pH值下带有适宜的电荷数，同时存在疏水残基与碱性残基，将疏水残基与碱性残基分开的两亲性，可诱导的或预先形成的二级结构(-螺旋或-折叠)。

在临床实践中，微生物感染包括细菌、病毒、真菌或原生动物的一种或多种病原体所引起的感染。例如，两种不同的细菌同时引起的感染等。然而，临床检测是哪种感染的过程及确定治疗方案，相对繁琐。通过一种给药方式（抗菌肽），可治疗复杂型及耐药型病原体感染。

本发明中利用多肽固相从头设计的技术，在NK_L序列基础上进行优化，合成得到了SQ-1 及其类似物。这些多肽具有非常强的抗菌活性，同时对人体细胞毒性很低。序列组成上，这些多肽与SQ-1的氨基酸同源性均在90%以上（可由24-28个同源氨基酸组成，详见实施例1中序列信息表）。

本发明所述的多肽分子在疏水环境中呈一定的二级结构（例如螺旋结构）。我们已经利用圆二色谱（CD）监测了抗菌肽分子在50%三氟乙醇（细胞膜疏水环境的模拟）中的-螺旋结构。

本发明优选的抗菌肽是具有潜在的生物学活性的螺旋类似物，通过圆二色谱检测，该抗菌肽在亲水环境中（如含有100 mM氯化钾，pH7的50 mM磷酸缓冲液）具有很少的-螺旋结构。该结构特征可能对抗菌肽活性机理有重要意义，例如：a)降低在亲水环境中形成聚合体的能力，即自我相互作用能力；b)允许抗菌肽分子更容易穿过细胞壁到达微生物的细胞膜。并且，在亲水环境中对-螺旋结构的破坏，不会对抗菌肽(正电性)与微生物的细胞壁（负电性）的静电吸引作用产生影响；然而，特定结构的缺少可以降低细胞壁表面对抗菌肽的亲和作用（细胞壁中的疏水基团与多肽疏水面的疏水相互作用），从而允许抗菌肽更易于通过细胞壁，进入到细胞膜的亲/疏水的临界面，在该区域抗菌肽与膜表面呈平行状态。在膜内，抗菌肽可以被细胞膜的疏水环境诱导成-螺旋结构。由于此-螺旋结构，我们猜测抗菌肽的非极性面可以和细胞膜的疏水部分相互作用，而其极性面上的极性基团和带正电的基团可以和细胞膜表面上磷脂极性头部（负电性）相互作用。

当抗菌肽呈-螺旋结构时，抗菌肽分子呈现带净正电和两亲性。例如，-螺旋型抗菌肽在分子的一侧有非极性或疏水表面，在分子另一侧有极性或者带正电荷的表面，即两亲性分子。

通过高效液相色谱反相柱RP-HPLC的温度监控技术，在5℃~80℃的范围内，对一些抗菌肽类似物在溶液中的自我相互作用的能力进行评估。抗菌肽的自我相互作用能力是衡量其抗菌活性与溶血活性的另一个重要指标。上述抗菌肽及其组合物可以制备为任何一种医学上可用的生物载体或制剂形式给予感染疾病患者。

本发明原料药优选制剂剂量范围是0.01-500mg重量份。

制备本发明注射制剂常用辅料包括：乙二胺四乙酸二钠、吐温80、甘露醇、甘油、丙二醇。

制备本发明口服固体制剂常用的辅料包括：微晶纤维素、低取代-羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、微粉硅胶、淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、滑石粉、硬脂酸镁、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、预胶化淀粉等。

制备本发明外用制剂所述常用辅料包括：甘露醇、聚山梨酯-80、聚乙二醇、硬脂酸聚烃氧酯、甘油、卡波姆、三乙醇胺、乙醇、聚乙烯吡咯烷酮、酒石酸、碳酸氢钠、聚乙烯醇、苯甲酸钠、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素等。

制备本发明口服液体制剂辅料包括：乙醇、羟苯乙酯、羟苯甲酯、聚山梨酯-80、苯甲酸钠、山梨酸、蜂蜜、蔗糖、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、硫脲、乙二胺四乙酸二钠、磷酸、枸橼酸、甘油、乳糖等。

上述原料组分可与一定比例的常用药用辅料相配，按照本领域常规方法可制成包含注射剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、滴眼剂、喷雾剂、气雾剂、贴剂、涂膜剂、洗剂中的一种。

所述抗菌剂中抗菌肽的剂量范围为：注射剂 0.1-500mg/kg；外用剂1/10000-10%/支。

附图说明

图1为SQ-1的氨基酸序列及螺旋轮和螺旋网示意图。

图2为SQ-25的氨基酸序列及螺旋轮和螺旋网示意图。

图3为抗菌肽NK_L与SQ-1，SQ-25比较的圆二色谱图。

图4为抗菌肽NK_L与SQ-1，SQ-25温度曲线及自我相互作用能力的比较。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。

实施例1 衍生自SQ-1的相关抗菌肽序列信息

多肽SQ-1是由26个氨基酸残基所组成，序列为Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-

Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂，衍生于NK_L序列的抗菌肽。SQ-1为具有一个极性表面和一个非极性表面的两亲性α-螺旋型抗菌肽，在本研究中作为模板多肽。它的极性表面由14个亲水氨基酸（6个赖氨酸，4个丝氨酸，3个苏氨酸，1个组氨酸）组成。相比之下，其非极性表面含有11个疏水氨基酸（1个色氨酸，2个苯丙氨酸，5个亮氨酸，1个缬氨酸，1个丙氨酸，1个异亮氨酸）和1个亲水氨基酸（1个赖氨酸）组成。

通过多种不同方式取代其中某些氨基酸或延长及截短多肽序列的方式，我们筛选得到了系列SQ-1多肽类似物。图1（A）表明在本发明中优选的多肽SQ-1、图2（A）表明SQ25的氨基酸序列及螺旋轮图形，图1（B、C）表明SQ-1螺旋网图形、图2（B、C）SQ-25螺旋网图形；其中带四方框的氨基酸表示位于螺旋的非极性/疏水表面的疏水氨基酸，带圆圈的氨基酸表示位于极性/亲水表面上的亲水氨基酸，三角形框中的氨基酸表示位于疏水面上的亲水氨基酸。在螺旋轮图1（A）中，亲水表面用空心的弓形表示，疏水表面用实心的弓形表示。Ac指N端乙酰化，NH₂指C端酰胺化。氨基酸残基用单字母编码表示并以此为基础进行进一步改造，得到了一组活性基本一致的相关抗菌多肽。多肽SQ-1主要是由L-型氨基酸组成（其中仅第12及20位的亮氨酸为D型氨基酸），我们设计了其对映异构体多肽SQ-2主要由对应的D-型氨基酸组成（其中仅第12及20位的亮氨酸为L型氨基酸）。因此，SQ-2在立体化学上与相应的SQ-1完全相反。已有大量研究工作表明，对映异构体多肽在各种理化性质及生物活性方面一致，因而在本文本中下述实施例中，仅选列了其中部分代表性多肽序列的实验数据。

SQ-3及SQ-5为不同带电氨基酸取代形成的多肽类似物之一，通过选择取代SQ-1序列中氨基酸改变带电氨基酸的性能而得到的。选择用于取代的氨基酸优选是带电荷的氨基酸，特别是净电荷为带正电荷的氨基酸。带电荷的氨基酸包括Lys、Arg、Orn、His、二氨基丁酸和二氨基丙酸。Orn具有δ-氨基来替代Lys的ε-氨基，即其侧链减少一个碳原子；二氨基丁酸具有γ氨基，即其比Orn的侧链少一个碳原子；二氨基丙酸比Orn支链少两个碳原子，即具有β氨基。SQ-4及SQ-6为上述两条多肽的对映异构体。

SQ-7、SQ-9和SQ -11为多点取代SQ-1形成的多肽类似物。在发明多肽的不同位点进行多点取代形成的多肽（如三位点取代）能够依然保持活性。对于多点取代形成的特定多肽，这样的在非极性面中心的多点取代至少会与单点取代具有同样的效果。考虑到多肽序列的氨基酸组成，特别是疏水氨基酸在生物活性中的重要性，认为具有与SQ-1序列的氨基酸组成90%以上的相似度的多肽，具有很好的生物学活性。SQ -8、SQ-10及SQ -12为上述三条多肽的对映异构体。

SQ-13、SQ-15和SQ-17为对多肽的N端和C端的氨基酸进行截取，获得比发明多肽更短的多肽，这种去除SQ-1一端或两端1-2个氨基酸而产生的多肽，其氨基酸相似性仍在90%以上，从而保持与SQ-1抗菌相当的活性。SQ-14、SQ-16及SQ-18为上述三条多肽的对映异构体。

多肽表面的疏水氨基酸通过疏水相互作用，构成多肽整体疏水面。SQ-1的非极性表面上由疏水氨基酸W2，F5，L6，F9，L_D12，V16，L17，L_D20，L21，A23，I24和一个亲水氨基酸K13组成。同样，极性表面由K1，K3，S4，K7，T8，K10，S11，K14，T15，H18，T19，K22，S25，S26 组成。对组成SQ-1的氨基酸残基特别是疏水氨基酸进行重组（可以是将非极性表面上疏水氨基酸残基进行重组，或者将极性表面上的极性氨基酸残基进行重组，或者在极性表面及非极性表面进行氨基酸残基的重组而不会实质改变多肽分子的两亲性的组合）组成的多肽仍然具有很好的生物学活性，SQ-19、SQ-21和SQ-23为部分序列信息（选取了任意2个氨基酸进行位点互换），这种重组在氨基酸组成同源性中与SQ-1保持了100%的同源性，其活性与SQ-1抗菌活性相当。SQ-20、SQ-22及SQ-24为上述三条多肽的对映异构体。

SQ-25及SQ-27为SQ-1同一位点氨基酸L-型与D-型的互换式取代形成的多肽类似物。这种互换式取代保持了氨基酸侧链长度引起的疏水性，但适度降低多肽整体的疏水性和螺旋度，因而能在保持其抗菌活性同时降低其细胞毒性。SQ-26及SQ-28为上述两条多肽的对映异构体。

表2 部分多肽序列信息汇总表

a. 除有特殊脚注标示外，其他均为L型对映异构体，氨基酸后面的下标字母D代表该氨基酸是D-型氨基酸

b. 除有特殊脚注标示外，其他均为D型对映异构体，氨基酸后面的下标字母L代表该氨基酸是L-型氨基酸

实施例1－1. 延长SQ-1形成的多肽类似物

本发明中多肽是通过增加N端或C端1-2个氨基酸残基形成的多肽类似物。SQ-29，在SQ-1疏水面上（N端）增加了一个疏水氨基酸，加大了多肽疏水面；SQ-31，在SQ-1基础上延长了两个疏水氨基酸；SQ-33和SQ-35是在SQ-1的（C端）以上述同样方式增加氨基酸，提高多肽的正电性。这种长度变化保存了90%以上的氨基酸相似性，具有与SQ-1相似的生物学活性。SQ-30、SQ-32、SQ-34及SQ-36为上述四条多肽的对映异构体。

表 3 延长SQ-1两端氨基酸形成的代表性多肽序列

a.除有特殊脚注标示外，其他均为L型对映异构体，氨基酸后面的下标字母D代表该氨基酸是D-型氨基酸

b.除有特殊脚注标示外，其他均为D型对映异构体，氨基酸后面的下标字母L代表该氨基酸是L-型氨基酸

实施例1-2. 相似的疏水氨基酸取代形成的多肽类似物

本发明中更多的多肽是通过单一位点相似的疏水性氨基酸残基的取代来形成的多肽类似物。采用具有类似疏水性侧链的氨基酸来进行单个疏水性氨基酸的取代通常会产生具有生物学活性的多肽。

表4 可用于同源氨基酸取代的氨基酸残基

实施例2 SQ-1及相关抗菌肽制备及相关参数检测

本发明中的多肽全部采用多肽固相合成方法，使用N-芴甲氧羰基保护的方法合成。需要指出的是，从技术角度来说，本发明中的多肽可以采用其它的合成策略与合成方法进行合成和生产。合成的多肽粗产物通过制备型反相高效液相色谱进行分离纯化，实验条件如下：Zorbax 300 SB-C₈柱(250x9.4mm内径; 6.5μm 粒径, 300?孔径；安捷伦公司)，AB线性洗脱梯度(0.2%乙腈/min)，洗脱速度为2ml/min,其中，A流动相为含有0.1％TFA的水溶液，B流动相为含有0.1％TFA的乙腈。制备得到的纯品肽采用分析型反相高效液相色谱RP-HPLC按照下述方法进行分析。多肽产物的进一步鉴定采用质谱方法和氨基酸组分分析方法。

多肽的RP-HPLC分析——采用安捷伦1200系列液相色谱进行多肽产物的分析。实验条件如下：Zorbax 300 SB-C₈柱（150×4.6内径; 5 μm粒径；300?孔径），AB线性洗脱梯度(1%乙腈/min)，洗脱速度为1ml/min。其中，A流动相为含有0.1％TFA的水溶液，B流动相为含有0.1％TFA的乙腈。

螺旋结构的表征――利用Jasco J-720 圆二色谱（CD）仪, 在25 °C亲水条件下（50 mM KH₂PO₄/K₂HPO₄/ 100 mM KCl，pH 7）和含有50％-螺旋诱导试剂2,2,2-三氟乙醇(TFE)的溶液（50 mM KH₂PO₄/K₂HPO₄/100 mM KCL，pH7缓冲溶液50%TFE）。分别测定抗菌肽的平均残基摩尔椭圆率，将750 μM的多肽母液经过10倍稀释以后加入到0.02cm石英测试管中，通过190到250 nm的扫描得到产物多肽的椭圆度数值。数值越大，表示多肽螺旋程度越大。

为了测定不同环境下的多肽二级结构，我们在亲水条件（100 mM KCl， 50 mM KH₂PO₄/K₂HPO₄，pH 7，叫做KP缓冲液）以及50%三氟乙醇（TFE）中（模拟细胞膜的疏水环境条件下）利用圆二色谱仪测定SQ-1，SQ-25及NK_L的圆二色性。SQ-1等多肽的圆二图谱见附图2。如图所示，多肽SQ-1和类似物SQ-25在 KP缓冲液中基本呈无序列结构；然而，在含有50%TFE时，两个序列多肽均充分折叠成-螺旋结构，与NK_L序列相比，SQ-1螺旋度增加程度更大，SQ-25螺旋度也有所增加（表5）。

表5 SQ-1等多肽的生物物理数据

a.多肽序列见表1。

b.在25oC条件下，在222nm波长处通过圆二色谱分别测定在亲水条件（100mM KCl, 50mM PO₄ pH7.0）或含有50％三氟乙醇的亲水缓冲液中的主要氨基酸残基摩尔椭圆率，[θ]₂₂₂，(deg.cm².dmol^-1)。

c.多肽的螺旋含量（百分数）表示多肽类似物与SQ-1在50%三氟乙醇中的摩尔椭圆率的相对比。

d.测定条件为0.5%乙腈/min洗脱梯度

RP-HPLC的保留行为是判断多肽疏水性的常用方法。众所周知，由多肽的二级结构而产生的疏水结合域会影响多肽与反相柱固定相的相互结合，这种现象在两亲性的多肽中尤为明显。由于这种优先结合域，两亲性的-螺旋肽会比与其具有同样氨基酸组成的非两亲多肽保留时间更长。另外，RP-HPLC的色谱条件（疏水固定相，非极性洗脱剂）也可以在潜在的螺旋多肽中以与螺旋诱导溶剂三氟乙醇相似的方式诱导并稳定螺旋结构。这样一来由不同氨基酸取代所带来的疏水性的变化可以直接反应在RP-HPLC的保留时间上。

我们进一步利用高效液相色谱反相柱温度监控技术来确定SQ-1和类似物SQ-25的自我相互作用的能力，自我相互作用是通过这些两亲性多肽的-螺旋的非极性表面相互作用而实现的。我们利用0.1%TFA乙腈水溶液和色谱反相柱的疏水条件（疏水的固定相和在流动相中的疏水有机试剂），反相柱的疏水环境也可以诱导-螺旋结构。RP-HPLC温度监控技术自发明至今已经应用在许多不同类型的分子上，其中包括环状-折叠多肽，单体-螺旋肽和二聚体-螺旋肽及形成超螺旋结构的二聚体螺旋肽。多肽在色谱反相柱上的洗脱主要靠吸附和去吸附机理，即使一个多肽强烈结合在疏水固定相上，当流动相中的乙腈的浓度达到一定高度时该多肽还是会在流动相与固定相之间进行分配。总体来说，机理基于4种假设：1）低温时有能力形成二聚体的两亲性-螺旋分子，它一定会在反相色谱的水溶液(疏水性，非极性表面)中形成二聚体；2）在高温时由于二聚体被破坏，单体—二聚体的平衡倾向于单体；3）温度足够高时水溶液中只有单体存在；4）多肽只能以单体的形式结合到色谱柱固定相上，即二聚体只能存在溶液中，只有已被破坏的二聚体才能与色谱柱固定相相结合。

在利用高效液相色谱反相柱温度监控来衡量多肽聚合能力时，一个呈无序结构的多肽（多肽C）被作为对照多肽。这个序列为Ac- ELEKGGLEGEKGGKELEK-NH₂的18个残基多肽，即使在低温5℃和强-螺旋诱导剂50%三氟乙醇（TFE）存在的条件下，依然呈无序结构。由于肽C在水相和疏水介质中均呈单体无序状态，它由5℃到80℃内保留行为的变化仅仅体现了温度对多肽保留行为的影响，即肽保留时间随着温度的升高保留时间呈线性降低，这是由于在固定相和流动相之间高温所引起的更高的溶质扩散性和增强的质量转移。因此以多肽C的保留时间做标准对照后，多肽保留行为仅代表多肽自我相互作用能力。P _A值越高代表自我相互作用能力越强，自我相互作用能力与多肽的疏水性直接相关，除了由于上述的温度作用以外，升高温度时-螺旋结构被破坏，多肽的无序结构的增多，保留时间下降。

多肽保留时间数据如表6所示，它记录了温度曲线图中5℃的保留时间，最大保留时间及在80℃的保留时间。5℃和80℃是RP-HPLC温度曲线图的温度上限和下限，在5℃多肽呈聚合体状态存在，而在80℃由于高温使多肽变性，聚合体分解成单体。最大保留时间代表着多肽由聚合体全部转变成单体的界点。

表6.在RP-HPLC温度曲线中，多肽类似物的疏水性与多肽自我相互作用能力的相关性

^a. 表示经RP-HPLC测定的不同多肽在5 °C和80 °C 的保留时间以及在温度变化过程中所测得的多肽最大保留时间，测定条件为1%乙腈/min洗脱梯度。

^b. 表示在不同温度下（5 °C和80 °C），多肽的保留时间与对照多肽C的保留时间之差，代表了多肽类似物的相对疏水性。

^c. P _A表示在RP-HPLC控温监测中，每种肽的解离常数。在温度变化范围内，用多肽最大的保留时间差值即((t _R ^t-t _R ⁵螺旋肽) - (t _R ^t-t _R ⁵对照肽C))来表示，其中， (t_R ^t-t_R ⁵)表示多肽在特定温度(t)条件下的保留时间与其在5 °C 条件下的保留时间的差值。

^d. 多肽C是无序结构的对照多肽，其在RP-HPLC的保留行为可以反映因温度变化导致RP-HPLC体系的变化。用于扣除因温度变化引起的色谱条件对多肽保留时间的影响，从而仅反映多肽在不同温度下的物理性质变化。

RP-HPLC的洗脱时间经常用来衡量多肽类似物的相对疏水性。因此表6中的保留时间数据可以用来反应多肽类似物疏水性的不同。表6中5℃和80℃时的保留时间数据在相应温度下的保留时间相对比，可以直观地看出，经过改造后的SQ-1及SQ-25多肽疏水性明显高于NK_L的变化，这也就意味着，SQ-1及SQ-25很有可能较NK_L具有更高的抗菌活性。

图3表示随温度变化（5℃－80℃）多肽在RP－HPLC中的保留时间变化曲线。如上所述多肽的自我相互作用是与温度相关的。多肽在PR－HPLC中的分配呈聚合体—单体间互相转化的动态平衡中，低温下多肽倾向于以二聚体或多聚体形式存在（自我相互作用）。通常自我相互作用是通过多肽疏水面的疏水相互作用实现的，这样造成聚合体与色谱柱固定相的结合能力变弱，因此保留时间相对低。随着温度的升高，聚合体—单体相互转化的平衡向更易于形成单体的方向移动。高浓度的单体在色谱柱上的分配增加了多肽与色谱柱的结合机率，所以保留时间相对增加。值得注意的是升高温度同时也引入其它的作用，如降低流动相粘度和增加在流动相与固定相之间的质量转移等。正如无序结构对照肽C的保留时间所示，随着温度的增加，其保留时间会呈线性的降低。相反地，对于聚合的多肽而言，升高温度会破坏聚合体而转换成单体，单体结合色谱柱固定相的能力强，这样保留时间会达到最大值。在这一临界温度之上，我们可以观察到随着温度继续升高多肽的保留时间开始下降。这主要是由于降低流动相粘度和增加质量转移以及高温造成多肽分子变性所引起的。RP-HPLC的温度监控技术引入的无序结构的对照多肽C，其保留行为用来反映温度变化过程中，色谱柱条件的变化状况，从而去除因色谱条件变化对多肽保留行为的影响。

本研究中的NK_L及SQ-1,SQ-25多肽序列在水溶液中表现出不同的自我相互作用能力（图3）。图内保留时间差值变化((多肽的t _R ^t-t _R ⁵)－(多肽C的t _R ^t-t _R ⁵)) 的最大数值被定义为多肽自我相互作用系数（P _A），用来量化多肽在水溶液中形成聚合体的能力。由图可以看出，SQ-25的自我相互作用能力最强，SQ-1次之，均高于NK_L序列，表明SQ-1及SQ-25系列多肽在水溶液中可能具有较NK_L更高的抗菌特异性。

实施例３：SQ-1系列代表抗菌肽抗细菌药物敏感性试验

选择实验室保存标准菌株和临床分离耐药菌株20株，采用平皿二倍稀释法和Denlay多点接种器进行药敏实验，试验菌用营养肉汤及脑心浸液增菌。药物溶解后用MH肉汤二倍稀释成各种所需浓度，分别加适量到平皿中。平皿中培养基凝固后用多点接种器接种试验菌（10⁴CFU/点），置35℃恒温培养18小时后观察结果。无菌生长的平皿中所含药物最小的浓度即为最低抑菌浓度(MIC)。大量研究工作表明，对映异构体多肽在各种理化性质及生物活性方面一致，因而在本实施例中，仅选列了其中部分代表性多肽序列的实验数据。SQ-1系列样品对20株细菌的抗菌作用见表7。

表7 　SQ-1系列代表多肽最低抑菌浓度MIC（μg/ml）

　　上述结果表明，经过这种精心设计及筛选后的SQ-1系列多肽，抗菌活性明显增强，且对于绝大多数常见敏感细菌，SQ-1系列抗菌肽杀菌效果与NK_L比较有很大优势。

实施例４：SQ-1系列代表多肽溶血活性及治疗指数比较

如表8所示，SQ-1系列多肽溶血活性，因设计上有意增加疏水性氨基酸成分，或者以D-型氨基酸取代L-型氨基酸，从而达到降低新改造序列溶血活性的目的。因有大量研究工作表明对映异构体多肽在各种理化性质及生物活性方面一致，因而在本实施例中，仅选列了其中部分代表性多肽序列的溶血实验数据。

表8 待测多肽溶血活性（MHC）检测比较

实验结果表明，经过上述序列改造，除SQ-25与NK_L溶血活性基本相当，其他系列多肽溶血活性均得到明显减低。

为了更好地评价SQ-1系列多肽的生物学活性，我们采用治疗指数这个被广泛应用的代表抗菌药物特异性的参数来进行比较。治疗指数由MHC（溶血活性）和MIC（抗菌活性）的比值计算而来，数值越大，表示多肽抗菌特异性越强。如表9所示，SQ-1系列多肽经过对特点位点精心设计改造，治疗指数明显变大，平均增加倍数在10倍以上，SQ-1对于粪肠球菌C625治疗指数可增至NK_L的106.7倍，对粘质沙雷氏菌41002其治疗指数可增至116倍，SQ-25对于粪肠球菌C625治疗指数最高可增至NK_L的160倍，意味着抗菌特异性有着非常明显的增加，这也进一步证实了我们的从头设计理念。

表9　　SQ-1系列多肽治疗指数比较

*分隔线前数据代表多肽治疗指数，由MHC与MIC的比值计算得出；

分隔线后数据为该多肽与NK_L比较治疗指数增加的倍数

实施例5：SQ-1/ SQ-25皮肤外用剂抗感染试验

金葡菌ATCC25923和铜绿假单胞菌ATCC27853菌液稀释至5×10⁶CFU/ml，备用。ICR小鼠，按体重随机分组，每组10只。分为感染阴性对照组，百多邦阳性对照组，1℅浓度外用剂组，1‰浓度外用剂和空白基质对照组。将小鼠背部脱毛后，以60目砂纸打磨至渗血。皮下注射浓度为5×10⁶CFU/ml的菌液0.1ml。除感染阴性对照组外，其他各组均对应给以不同剂量的外用剂，剂量为0.1ml，每天早晚各外用1次，连续4天。末次给药后次日无菌取各组动物感染部位的皮肤，检测活菌并计数统计，检测结果见表10。

表10 SQ-1/SQ-25外用剂对皮肤感染影响（CFU/皿 n=10）

上述结果显示SQ-1及SQ-25外用剂可有效抑制金葡菌及铜绿假单胞菌ATCC27853引起的皮肤感染，且抑菌率均可以提高至95%以上，明显优于NK_L（其高低浓度对上述两种致病菌的抑菌率均<50%）。

实施例6：SQ-1注射剂对细菌全身感染动物的治疗试验

铜绿假单胞菌ATCC27853和金黄色葡萄球菌ATCC29213ICR菌液稀释至5×10⁷CFU/ml，备用。ICR小鼠按体重随机分组，每组10只，分为空白对照组，阴性对照组，SQ-1/SQ-25/NK_L高、中、低剂量组。除空白对照组外，每只小鼠腹腔注射菌液0.2ml造模。造模后立即按体重给药，除空白对照组和感染阴性对照组外，其他各组均尾静脉注射不同剂量的各注射剂，2次/日，连续给药5天，观察14天。观察动物死亡情况，记录动物存活时间。SQ-1注射剂对全身感染小鼠存活时间影响试验结果详见表11-12。

表11 SQ-1系列注射剂对铜绿假单胞菌全身感染小鼠存活时间的影响（n=10）

注：与阴性对照组比较*P<0.05，**P<0.01

表12 SQ-1系列注射剂对金葡菌全身感染小鼠存活时间的影响（n=10）

注：与阴性对照组比较*P<0.05，**P<0.01

由表11及表12可知，直至试验结束，SQ-1及SQ-25高、中、低剂量组与阴性对照组比较小白鼠平均存活天数相比差异均极显著（p<0.01），NK_L试药组1mg/kg剂量组虽然也可以有效延长感染动物生存时间，但SQ-1及SQ-25高、中、低剂量的抗感染作用明显优于NK_L试药组，感染动物存活时间比NK_L组延长2-3倍。

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<213>人工序列

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SQ-1:

Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂

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<223>用于控制微生物感染的治疗药物组的多肽

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SQ-2:

Ac-Lys_D-Trp_D-Lys_D-Ser_D-Phe_D-Leu_D-Lys_D-Thr_D-Phe_D-Lys_D-Ser_D-Leu_L-Lys_D-Lys_D-Thr_D-Val_D-Leu_D-His_D-Thr_D-Leu_L-Leu_D-Lys_D-Ala_D-Ile_D-Ser_D-Ser_D-NH₂

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SQ-3:

Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Arg_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂

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SQ-4:

Ac-Lys_D-Trp_D-Lys_D-Ser_D-Phe_D-Leu_D-Lys_D-Thr_D-Phe_D-Lys_D-Ser_D-Leu_L-Arg_D-Lys_D-Thr_D-Val_D-Leu_D-His_D-Thr_D-Leu_L-Leu_D-Lys_D-Ala_D-Ile_D-Ser_D-Ser_D-NH₂

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SQ-5:

Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂

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SQ-6:

Ac-Lys_D-Trp_D-Lys_D-Ser_D-Phe_D-Leu_D-His_D-Thr_D-Phe_D-Lys_D-Ser_D-Leu_L-Lys_D-Lys_D-Thr_D-Val_D-Leu_D-His_D-Thr_D-Leu_L-Leu_D-Lys_D-Ala_D-Ile_D-Ser_D-Ser_D-NH₂

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SQ-7:

Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Val_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Ile_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Val_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂

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SQ-8:

Ac-Lys_D-Trp_D-Lys_D-Ser_D-Phe_D-Leu_D-Val_D-Thr_D-Phe_D-Lys_D-Ser_D-Leu_L-Lys_D-Lys_D-Thr_D-Val_D-Ile_D-His_D-Thr_D-Leu_L-Val_D-Lys_D-Ala_D-Ile_D-Ser_D-Ser_D-NH₂

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SQ-9:

Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Trp_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Leu_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂

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SQ-10:

Ac-Lys_D-Trp_D-Lys_D-Ser_D-Trp_D-Leu_D-Lys_D-Thr_D-Leu_D-Lys_D-Ser_D-Leu_L-Lys_D-Lys_D-Thr_D-Val_D-Leu_D-His_D-Thr_D-Leu_L-Leu_D-Lys_D-Ala_D-Ile_D-Ser_D-Ser_D-NH₂

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SQ-11:

Ac-Lys_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂

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SQ-12:

Ac-Lys_D-Phe_D-Lys_D-Ser_D-Phe_D-Leu_D-Lys_D-Thr_D-Phe_D-Lys_D-Ser_D-Leu_L-Lys_D-Lys_D-Thr_D-Val_D-Leu_D-His_D-Thr_D-Leu_L-Leu_D-Lys_D-Ala_D-Ile_D-Ser_D-Ser_D-NH₂

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SQ-13:

Ac-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂

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SQ-14:

Ac-Trp_D-Lys_D-Ser_D-Phe_D-Leu_D-Lys_D-Thr_D-Phe_D-Lys_D-Ser_D-Leu_L-Lys_D-Lys_D-Thr_D-Val_D-Leu_D-His_D-Thr_D-Leu_L-Leu_D-Lys_D-Ala_D-Ile_D-Ser_D-Ser_D-NH₂

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SQ-15:

Ac-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-NH₂

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SQ-16:

Ac-Trp_D-Lys_D-Ser_D-Phe_D-Leu_D-Lys_D-Thr_D-Phe_D-Lys_D-Ser_D-Leu_L-Lys_D-Lys_D-Thr_D-Val_D-Leu_D-His_D-Thr_D-Leu_L-Leu_D-Lys_D-Ala_D-Ile_D-Ser_D-NH₂

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SQ-17:

Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-NH₂

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Ac-Lys_D-Trp_D-Lys_D-Ser_D-Phe_D-Leu_D-Lys_D-Thr_D-Phe_D-Lys_D-Ser_D-Leu_L-Lys_D-Lys_D-Thr_D-Val_D-Leu_D-His_D-Thr_D-Leu_L-Leu_D-Lys_D-Ala_D-Ile_D-NH₂

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SQ-19:

Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Leu_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Phe_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂

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SQ-20:

Ac-Lys_D-Trp_D-Lys_D-Ser_D-Leu_D-Leu_D-Lys_D-Thr_D-Phe_D-Lys_D-Ser_D-Leu_L-Lys_D-Lys_D-Thr_D-Val_D-Leu_D-His_D-Thr_D-Leu_L-Phe_D-Lys_D-Ala_D-Ile_D-Ser_D-Ser_D-NH₂

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SQ-21:

Ac-Lys_L-Lys_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Trp_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂

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SQ-22:

Ac-Lys_D-Lys_D-Lys_D-Ser_D-Phe_D-Leu_D-Lys_D-Thr_D-Phe_D-Lys_D-Ser_D-Leu_L-Trp_D-Lys_D-Thr_D-Val_D-Leu_D-His_D-Thr_D-Leu_L-Leu_D-Lys_D-Ala_D-Ile_D-Ser_D-Ser_D-NH₂

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SQ-23:

Ac-Lys_L-Trp_L-Ser_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Lys_L-Leu_D-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂

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SQ-24:

Ac-Lys_D-Trp_D-Ser_D-Ser_D-Phe_D-Leu_D-Lys_D-Thr_D-Phe_D-Lys_D-Lys_D-Leu_L-Lys_D-Lys_D-Thr_D-Val_D-Leu_D-His_D-Thr_D-Leu_L-Leu_D-Lys_D-Ala_D-Ile_D-Ser_D-Ser_D-NH₂

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SQ-25:

Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_L-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_L-Leu_L-Lys_D-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂

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SQ-26:

Ac-Lys_D-Trp_D-Lys_D-Ser_D-Phe_D-Leu_D-Lys_D-Thr_D-Phe_D-Lys_D-Ser_D-Leu_D-Lys_D-Lys_D-Thr_D-Val_D-Leu_D-His_D-Thr_D-Leu_D-Leu_D-Lys_L-Ala_D-Ile_D-Ser_D-Ser_D-NH₂

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<210>27

<211>26

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>用于控制微生物感染的治疗药物组的多肽

<400>1

SQ-27:

Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_L-Lys_D-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_D-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂

<110>长春普莱医药生物技术有限公司

<120>一种抗菌肽及其应用

<160>1

<210>28

<211>26

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>用于控制微生物感染的治疗药物组的多肽

<400>1

SQ-28:

Ac-Lys_D-Trp_D-Lys_D-Ser_D-Phe_D-Leu_D-Lys_D-Thr_D-Phe_D-Lys_D-Ser_D-Leu_D-Lys_L-Lys_D-Thr_D-Val_D-Leu_D-His_D-Thr_D-Leu_L-Leu_D-Lys_L-Ala_D-Ile_D-Ser_D-Ser_D-NH₂

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<120>一种抗菌肽及其应用

<160>1

<210>29

<211>27

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>用于控制微生物感染的治疗药物组的多肽

<400>1

SQ-29:

Ac-Leu_L-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂

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<120>一种抗菌肽及其应用

<160>1

<210>30

<211>27

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>用于控制微生物感染的治疗药物组的多肽

<400>1

SQ-30:

Ac-Leu_D-Lys_D-Trp_D-Lys_D-Ser_D-Phe_D-Leu_D-Lys_D-Thr_D-Phe_D-Lys_D-Ser_D-Leu_L-Lys_D-Lys_D-Thr_D-Val_D-Leu_D-His_D-Thr_D-Leu_L-Leu_D-Lys_D-Ala_D-Ile_D-Ser_D-Ser_D-NH₂

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<120>一种抗菌肽及其应用

<160>1

<210>31

<211>28

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>用于控制微生物感染的治疗药物组的多肽

<400>1

SQ-31:

Ac-Leu_L-Phe_L-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂

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<120>一种抗菌肽及其应用

<160>1

<210>32

<211>28

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>用于控制微生物感染的治疗药物组的多肽

<400>1

SQ-32:

Ac—Leu_D-Phe_D-Lys_D-Trp_D-Lys_D-Ser_D-Phe_D-Leu_D-Lys_D-Thr_D-Phe_D-Lys_D-Ser_D-Leu_L-Lys_D-Lys_D-Thr_D-Val_D-Leu_D-His_D-Thr_D-Leu_L-Leu_D-Lys_D-Ala_D-Ile_D-Ser_D-Ser_D-NH₂

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<120>一种抗菌肽及其应用

<160>1

<210>33

<211>27

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>用于控制微生物感染的治疗药物组的多肽

<400>1

SQ-33:

Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-Phe_L-NH₂

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<120>一种抗菌肽及其应用

<160>1

<210>34

<211>27

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>用于控制微生物感染的治疗药物组的多肽

<400>1

SQ-34:

Ac-Lys_D-Trp_D-Lys_D-Ser_D-Phe_D-Leu_D-Lys_D-Thr_D-Phe_D-Lys_D-Ser_D-Leu_L-Lys_D-Lys_D-Thr_D-Val_D-Leu_D-His_D-Thr_D-Leu_L-Leu_D-Lys_D-Ala_D-Ile_D-Ser_D-Ser_D- Phe_D-NH₂

<110>长春普莱医药生物技术有限公司

<120>一种抗菌肽及其应用

<160>1

<210>35

<211>28

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>用于控制微生物感染的治疗药物组的多肽

<400>1

SQ-35:

Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L- Phe_L- Ser_L-NH₂

<110>长春普莱医药生物技术有限公司

<120>一种抗菌肽及其应用

<160>1

<210>36

<211>28

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>用于控制微生物感染的治疗药物组的多肽

<400>1

SQ-36:

Ac-Lys_D-Trp_D-Lys_D-Ser_D-Phe_D-Leu_D-Lys_D-Thr_D-Phe_D-Lys_D-Ser_D-Leu_L-Lys_D-Lys_D-Thr_D-Val_D-Leu_D-His_D-Thr_D-Leu_L-Leu_D-Lys_D-Ala_D-Ile_D-Ser_D-Ser_D- Phe_D- Ser_D-NH₂

Claims

1.一种抗菌肽，其特征在于其氨基酸的序列为SQ-1或SQ-25：

SQ-1:

Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_D-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_D-Leu_L-Lys_L-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂；

SQ-25:

Ac-Lys_L-Trp_L-Lys_L-Ser_L-Phe_L-Leu_L-Lys_L-Thr_L-Phe_L-Lys_L-Ser_L-Leu_L-Lys_L-Lys_L-Thr_L-Val_L-Leu_L-His_L-Thr_L-Leu_L-Leu_L-Lys_D-Ala_L-Ile_L-Ser_L-Ser_L-NH₂。

2.一种抗菌组合物，其含有根据权利要求1的所述的抗菌肽，其抗菌肽的剂量为0.01-500mg重量份。

3.根据权利要求2的抗菌组合物，其剂型为注射剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、软膏剂、凝胶剂、滴眼剂、喷雾剂、气雾剂、贴剂、涂膜剂、洗剂中的一种。

4.根据权利要求1所述的抗菌肽在制备控制微生物细菌和真菌感染的药物组合物中的应用。