CN102614240A - 一种含灯盏花素的提取物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明关于一种含灯盏花素的提取物，该提取物来源于菊科飞蓬属或白酒草属植物，特别关于一种以飞蓬属植物一年蓬和白酒草属植物小飞蓬、苏门白酒草、香丝草为原料，经溶剂提取、分离、浓缩和干燥等工艺步骤所制备的含灯盏花素提取物。该提取物加上药学上可接受的辅料，可制成多种剂型，例如注射剂、片剂、胶囊等。一年蓬、小飞蓬、苏门白酒草和香丝草均为生物入侵植物品种，将其用于制备灯盏花素，不仅来源极为广泛、具有多种药用价值，而且还可以减少一年蓬等对生物多样性造成的损害，变害为利，一举多得。

Description

一种含灯盏花素的提取物及其制备方法

技术领域

本发明关于一种含灯盏花素的提取物，特别关于一种由菊科飞蓬属或白酒草属植物制备含灯盏花素的提取物、制备该提取物的方法以及利用该提取物制备的制剂。

背景技术

菊科飞蓬属植物共有200多种，主要包括灯盏细辛(短葶飞蓬Erigeronbreviscapus)、一年蓬(Erigeron annuus)、长茎飞蓬(Erigeron elongatus Ledeb)、红头小仙(Erigeron molle D Don)等。性寒、微苦，甘温辛，具有散寒解表、祛风除湿、活血化瘀、消炎止痛、清热解毒、化痰止咳等功效。临床上主要用于治疗心脑血管疾病及各种炎症等。

白酒草属植物共有80多种，主要包括小飞蓬(Erigeron Canadensis L)，苏门白酒草(Conyza sumatrensis(Retz.)Walker)，宿根白酒草(学名：Conyzaperennis)，香丝草(Conyza bonariensis L)，熊胆草(Conyza blinii Levl.)等。

其中，一年蓬、小飞蓬、苏门白酒草和香丝草均为从南美传入中国的生物入侵植物品种，由于菊科植物种子多，且能随风飘散，目前已遍布中国南北各地。这些植物根能分泌特殊化学物质，可抑制其它植物种子的萌发而抑制本土植物的生长，对生物多样性造成损害，对农林牧渔业生产造成严重损失。

目前，灯盏花素(breviscapine，BVP)主要从灯盏花(又名灯盏细辛)中提取、分离制备，其为一类总黄酮，主要包括灯盏乙素(scutellarin)和灯盏甲素，灯盏花素是目前国内一个重要的植物中间体之一，由其制成的制剂灯盏花素片、灯盏花素注射液与注射用灯盏花素对于冠心病心绞痛，急性心肌梗死、缺血性脑血管病等心脑血管病变疗效好而且不良反应少。同时也可应用于慢性肾衰竭、肾病综合症、糖尿病及其并发症、慢性肺源性心脏病、慢性乙肝等的治疗。灯盏花素原料与制剂年产值达数十亿元，灯盏花素及注射用灯盏花素已收《中国药典》，产值逐年递增。

但目前仅在云南泸西建有灯盏花GAP种植基地。由于灯盏花素制剂疗效稳定，副作用小，全国有近100家制药企业生产该类药物制剂，加上部分药材或其提取物用于出口，因此，目前灯盏花药材供不应求，导致其收购价格一直上升，由2005年的8元/公斤左右，升到2010年的20元/公斤左右。因此，实有必要寻找制备灯盏花素的新原料。

发明内容

考虑到作为灯盏花素主要来源的灯盏花资源的严重不足，本发明提供一种以菊科飞蓬属或白酒草属植物为原料制备含灯盏花素的提取物。

特别地，该提取物由一年蓬、小飞蓬、苏门白酒草、香丝草或其混合物制备。

优选地，该提取物包含大约10重量％的灯盏乙素。

本发明也包括一种制备所述含灯盏花素的提取物的制备方法，包括如下步骤：

a)用溶剂提取所述一年蓬、小飞蓬、苏门白酒草、香丝草或其混合物；

b)滤过，得到滤渣和滤液；

c)取上述滤液，加入酸，调pH值至1.0～3.0，过滤，得酸沉淀物和酸液，所述的酸为盐酸、硫酸、磷酸或乙酸；

d)取上述酸沉淀物，用水洗至水洗液呈中性，将经水洗后的酸沉淀物干燥，即得含灯盏花素的粗取物。

优选地，所述溶剂为水、乙醇或其混合溶液或碱性溶液。

进一步地，所述步骤a)中提取溶剂的用量为药材量的2～10倍(w/w)；提取次数为1～5次；提取温度为40～80℃。

优选地，所述含灯盏花素的提取物的制备方法，进一步还包括如下步骤：在所述步骤a)之前将所述一年蓬、小飞蓬、苏门白酒草、香丝草或其混合物切段或粉碎。

为了进一步纯化所得含灯盏花素的提取物，提高其中灯盏花素的纯度，所述步骤进一步还包括如下步骤：

e)取步骤d)干燥后的酸沉淀物加入沸水中，溶解，加入碱，调pH值至5.5～8.5，过滤，得碱沉淀物和碱液，所述的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、铵水、精氨酸、赖氨酸、组氨酸、碳酸钠或碳酸氢钠；

f)取上述碱液，通过聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱，用2～30倍柱体积的0～30％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，；

g)将上述洗脱液加酸调pH值至1.0～3.0，至沉淀完全，过滤，滤饼用水洗至水洗液呈中性，干燥即得含灯盏花素的提取物。

除了采取上述技术手段进一步纯化以提高灯盏花素的纯度外，还可以在所述步骤d)之后采取下述步骤：

h)加入5-15倍量丙酮(V/V)中，于50～100℃下加热回流使其混悬，搅匀，静置，抽滤；

i)用丙酮洗涤沉淀；

j)再用50％-70％的丙酮溶液使其混悬，然后用10％盐酸溶液调pH至1-3，静置，抽滤。

k)取沉淀，用注射用水洗至中性，再用90％乙醇洗涤，烘干，即得。

为了进一步提高纯度，可以在继所述步骤g)之后，采取下述步骤：

h)加入5-15倍量丙酮(V/V)中，于50～100℃下加热回流使其混悬，搅匀，静置，抽滤；

i)用丙酮洗涤沉淀；

j)再用50％-70％的丙酮溶液使其混悬，然后用10％盐酸溶液调pH至1-3，静置，抽滤。

k)取沉淀，用注射用水洗至中性，再用90％乙醇洗涤，烘干，即得。

此外，本发明也提供一种制剂，其包含本发明所述的含灯盏花素的提取物和药学上可接受的辅料或其它药物。

优选地，所述制剂可为散剂、丸剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、合剂、注射剂、滴丸剂、酒剂、酊剂、茶剂、鼻用制剂、凝胶剂、栓剂或气雾剂。

由于菊科飞蓬属或白酒草属植物，特别是一年蓬、小飞蓬、苏门白酒草和香丝草四种植物中均含有灯盏花素，灯盏花素的主要成分为灯盏乙素(scutellarin)，又名野黄芩苷，且其资源丰富，遍布大江南北，供应充足，特别是该四种植物均为生物入侵植物品种，因此本发明将其用作提取灯盏花素的原料，不仅解决了灯盏花药材匮乏的现实问题，补充了灯盏花素的药材来源，而且还可以减少其对环境和生物多样性造成的损害。

附图说明

图1为灯盏花素提取物的制备流程图。

图2为灯盏乙素(野黄芩苷)标准品的HPLC图谱。

图3为灯盏花的HPLC图谱。

图4为一年蓬的HPLC图谱。

图5为小飞蓬的HPLC图谱。

图6为苏门白酒草的HPLC图谱。

图7为香丝草的HPLC图谱。

具体实施方式

灯盏花素作为一种重要的植物中间体，其来源主要为灯盏花，由于灯盏花产地及产量有限，限制了灯盏花的临床应用和灯盏花素的生产制备。本申请人通过长期研究发现菊科飞蓬属或白酒草属植物，特别是一年蓬(Erigeronannuus)、小飞蓬(Erigeron Canadensis L)，苏门白酒草(Conyza sumatrensis(Retz.)Walker)，和香丝草(Conyza bonariensis L)等植物均含有灯盏花素，并通过高效液相色谱法(HPLC)测定了该各植物中灯盏乙素的含量。通过比对一年篷等植物与灯盏花的指纹图谱发现，其相似度非常高，这表明它们与灯盏花有着相类似的化学成分，根据构效关系的原理，可以推测其可能在某些药理活性方面具有相似性。

本发明所述一年蓬(Erigeron annuus)、小飞蓬(Erigeron Canadensis L)，苏门白酒草(Conyza sumatrensis (Retz.)Walker)，和香丝草(Conyza bonariensis L)可取自不同地方，例如可以是取自湖南、辽宁、吉林、山西、珠海等地，且采摘季节也不作限制，此外，其可以任何形式使用，例如其鲜草或干草或经加工处理的饮片均可用作提取灯盏花素的原料。

本发明所述提取物的制备方法，可以采用有机溶剂或碱提取，经酸处理得到一含灯盏花素的粗提物，例如得到含灯盏乙素大于10％的粗提物；然后可采用大孔树脂分离技术或丙醇处理等方法进一步纯化提到一纯度较高的含灯盏花素的提取物，例如得到灯盏乙素的含量范围大于60％的提取物。本发明制备方法中所使用的酸包括但不限于盐酸、硫酸、磷酸、碳酸或乙酸、甲酸；所述碱包括但不限于氢氧化钠、氢氧化钾、铵水、精氨酸、赖氨酸、组氨酸、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢钠。

灯盏花素包含灯盏乙素和少量灯盏甲素，本发明以灯盏乙素作为指标成份，采用高效液相色谱法(HPLC)测定一年蓬(Erigeron annuus)、小飞蓬(ErigeronCanadensis L)，苏门白酒草(Conyza sumatrensis (Retz.)Walker)，和香丝草(Conyza bonariensis L)及其提取物中灯盏乙素的含量。

通过在本发明的含灯盏花素的提取物中加入药学上可接受的辅料，通过常规的制剂方法，可制成各种制剂，例如制备成散剂、丸剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、合剂、注射剂、滴丸剂、酒剂、酊剂、茶剂、鼻用制剂、凝胶剂、栓剂、气雾剂等。

以下配合附图及本发明的优选实施例，进一步阐述本发明为达成预定发明目的所采取的技术手段。

实施例1：一年蓬指纹图谱及灯盏乙素的含量测定

供试品溶液的制备：取本品，粉碎过2号筛，精密取约1.0g，加甲醇回流提取2次，每次50ml，30min，滤过，合并滤液，水浴蒸干，残渣加60％甲醇溶解并稀释至10ml，摇匀，通过0.45μm的滤膜，即得。

对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的灯盏乙素对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。

仪器：Agilent 1100(含四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器)

色谱条件：

色谱柱：Zorbax SB C18(4.6×250mm，5μm)

流动相：A.0.5％甲酸，B.乙腈，C.甲醇，梯度洗脱条件如下：

柱温：30℃

流速：1.0ml/min；

检测波长：335nm

测定法：分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱柱，测定，即得指纹图谱，灯盏乙素含量以峰面积外标法计算，即得。

结果：见表1。

表1样品中灯盏乙素含量测定结果

*含量是以药材干燥计。

实施例2：水飞蓬中灯盏乙素的含量测定

方法同实施实例1，结果见表1。

实施例3：苏门白酒草中灯盏乙素的含量测定

方法同实施实例1，结果见表1。

实施例4：香丝草中灯盏乙素的含量测定

方法同实施实例1，结果见表1。

实施例5：一年蓬粗提物1的制备

取一年蓬全草，粉碎，用6～10倍量的75％乙醇回流提取三次，合并提取液，然后将提取液在约60℃下减压浓缩成浸膏，按生药：水为1∶0.6(w/w)加入沸水搅拌使溶解，缓缓加入5％氢氧化钠溶液，调pH值至约6.5，趁热滤过，滤液加热、缓缓加入10％硫酸溶液，调pH值至2.0～2.5，静置3小时后，析出棕色沉淀物，倾取上层液，静置48小时后，析出棕色沉淀物，合并该棕色沉淀物，将该沉淀物在约60℃下真空干燥，即得一年蓬粗提物1，收率0.7％，灯盏乙素含量78％。

实施例6：一年蓬粗提物2的制备

取一年蓬药材粗粉300g，加0.2％碳酸氢钠渗漉提取，收集约10倍量漉液(即约3000ml)，加稀硫酸(2.0％)调节pH值至3.0，静置过液，滤取沉淀，将该沉淀在70℃下烘干，即得约2g，灯盏乙素含量65％，为一年蓬粗提物2。

实施例7：一年蓬粗提物3的制备

取一年蓬新鲜全草，烘干或晒干，粉碎，用8倍量的0.1％氢氧化钠溶液超声提取两次，每次30min，滤过，合并滤液，用盐酸调pH为7.0，加热至80度，，通过聚酰胺柱(每1g药材用干聚酰胺2g，先用10倍量柱体积水洗脱，弃去水洗液，再以20％乙醇洗脱，弃去，继以70％乙醇洗脱，收集洗脱液，合并，回收乙醇，干燥，即得一年蓬粗提物3。收率0.6％，灯盏乙素含量68％。

实施例8：一年蓬粗提物的分离、纯化工艺

取实施例5～7任一份一年蓬粗提取约50.0g，加入300ml水混悬，加热，用10％碳酸钠、或精氨酸溶液调节pH至7-7.5，加热使溶解，离心，取上清液，滤过，滤液通过AB-8型大孔树脂柱，用水洗脱，收集洗脱液，滤过，滤液用5％盐酸调pH值至1-3，静置，滤过，沉淀用水洗至中性，取沉淀(约40g，灯盏乙素含量90％)，加入适量的水搅匀，加热，用20-30％磷酸氢二钠溶液调节pH值至6.5-7，煮沸，冷却至35-55度，减压浓缩，加入8-10倍量的丙酮，搅匀，静置，抽滤，用丙酮洗涤沉淀。取沉淀，加入50-55％丙酮溶液使混悬，用10％盐酸调节pH1-2，静置，抽滤。取沉淀，用水洗至中性，再用90％乙醇洗涤，烘干，即精品约35g，灯盏乙素含量98％。

实施例9：以小飞蓬为原料所制备的含灯盏乙素的提取物

取小飞蓬全草，粉碎，用6～10倍量的75％乙醇回流提取三次，合并提取液，然后将提取液在约60℃下减压浓缩成浸膏，按生药∶水为1∶0.6(w/w)加入沸水搅拌使溶解，缓缓加入5％氢氧化钠溶液，调pH值至约6.5，趁热滤过，滤液加热、缓缓加入10％硫酸溶液，调pH值至2.0～2.5，静置3小时后，析出棕色沉淀物，倾取上层液，静置48小时后，析出棕色沉淀物，合并该棕色沉淀物，将该沉淀物在约60℃下真空干燥，即得含灯盏乙素的粗提物，收率0.5％，灯盏乙素含量75％。

精制方法同实施实例8。

实施例11：以苏门白酒草为原料所制备的含灯盏乙素的提取物

取小飞蓬全草，粉碎，用6～10倍量的75％乙醇回流提取三次，合并提取液，然后将提取液在约60℃下减压浓缩成浸膏，按生药∶水为1∶0.6(w/w)加入沸水搅拌使溶解，缓缓加入5％氢氧化钠溶液，调pH值至约6.5，趁热滤过，滤液加热、缓缓加入10％硫酸溶液，调pH值至2.0～2.5，静置3小时后，析出棕色沉淀物，倾取上层液，静置48小时后，析出棕色沉淀物，合并该棕色沉淀物，将该沉淀物在约60℃下真空干燥，即得含灯盏乙素的粗提物，收率0.35％，灯盏乙素含量74％。

精制方法如下：取实施例11所得苏门白酒草粗提取约50.0g，加入300ml水混悬，加热，用10％碳酸氢钠溶液调节pH至7-7.5，加热使溶解，离心，取上清液，滤过，滤液通过AB-8型大孔树脂柱，用20％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，滤过，滤液用5％硫酸调pH值至大约2.5，静置，滤过，沉淀用水洗至中性，取沉淀，加入10倍量(体积比)丙酮中，约60℃下回流提取两次，热过滤，合并两次的滤液，回收丙酮，剩余物经冷却，过滤得液体和固体，该固体即为含有灯盏花的提取物，经HPLC检测，其中灯盏乙素的含量大约为97％。

实施例12：以香丝草为原料所制备的含灯盏乙素的提取物

取香丝草全草，粉碎，用6～10倍量的75％乙醇回流提取三次，合并提取液，然后将提取液在约60℃下减压浓缩成浸膏，按生药∶水为1∶0.6(w/w)加入沸水搅拌使溶解，缓缓加入5％氢氧化钠溶液，调pH值至约6.5，趁热滤过，滤液加热、缓缓加入10％硫酸溶液，调pH值至2.0～2.5，静置3小时后，析出棕色沉淀物，倾取上层液，静置48小时后，析出棕色沉淀物，合并该棕色沉淀物，将该沉淀物在约60℃下真空干燥，即得灯盏乙素的粗提物，收率0.8％，灯盏乙素含量78％。

精制方法同实施实例11。

实施例13：注射用含灯盏花素制剂的制备

取注射用水1500ml，加精氨酸调pH值至7.5±0.1，加入20g上述经精制所得的灯盏花素提取物，搅拌，加热使溶解，再加注射用甘露醇30g，搅拌使溶解，加精氨酸调pH值至7.0±0.1，加注射用水至2000ml，滤过，分装(每支2ml)，冻干，得注射用灯盏花素(20mg/支)。

以上所述仅是本发明的优选实施例而已，并非对本发明做任何形式上的限制，虽然本发明已以优选实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案的范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (10)

1.一种含灯盏花素的提取物，其特征在于，该提取物由菊科飞蓬属或白酒草属植物制备。

2.根据权利要求1所述含灯盏花素的提取物，其特征在于，该提取物由一年蓬、小飞蓬、苏门白酒草、香丝草或其混合物制备。

3.根据权利要求2所述含灯盏花素的提取物，其特征在于，该提取物包含大于10重量％的灯盏乙素。

4.一种制备如权利要求2或3所述含灯盏花素的提取物的方法，包括如下步骤：

a)用溶剂提取所述一年蓬、小飞蓬、苏门白酒草、香丝草或其混合物；

b)过滤，得到滤渣和滤液；

c)取上述滤液，加入酸，调pH值至1.0～3.0，滤过，得酸沉淀物和酸液，所述的酸为盐酸、硫酸、磷酸或乙酸；

d)取上述酸沉淀物，用水洗至水洗液呈中性，将经水洗后的酸沉淀物干燥，即得。

5.根据权利要求4所述方法，进一步还包括：在所述步骤a)之前将所述一年蓬、小飞蓬、苏门白酒草、香丝草或其混合物切段或粉碎。

6.根据权利要求5所述方法，进一步还包括：

e)取步骤d)干燥后的酸沉淀物加入沸水中，溶解，加入碱，调pH值至5.5～8.5，滤过，得碱沉淀物和碱液，所述的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、铵水、精氨酸、赖氨酸、组氨酸、碳酸钠或碳酸氢钠；

f)取上述碱液，通过聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱，用2～30倍柱体积的0～30％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；

g)将上述洗脱液加酸调pH值至1.0～3.0，至沉淀完全，滤过，滤饼用水洗至水洗液呈中性，干燥，即得。

7.根据权利要求5所述方法，其特征在于，步骤d)之后进一步还包括：

h)加入5-15倍量丙酮(V/V)中，于50～100℃下加热回流使其混悬，搅匀，静置，抽滤；

i)用丙酮洗涤沉淀；

j)再用50％-70％的丙酮溶液使其混悬，然后用10％盐酸溶液调pH至1-3，静置，抽滤。

k)取沉淀，用注射用水洗至中性，再用90％乙醇洗涤，烘干，即得。

8.根据权利要求6所述方法，其特征在于，步骤g)之后进一步还包括：

h)加入5-15倍量丙酮(V/V)中，于50～100℃下加热回流使其混悬，搅匀，静置，抽滤；

i)用丙酮洗涤沉淀；

j)再用50％-70％的丙酮溶液使其混悬，然后用10％盐酸溶液调pH至1-3，静置，抽滤。

k)取沉淀，用注射用水洗至中性，再用90％乙醇洗涤，烘干，即得。

9.一种含有灯盏花素的提取物的制剂，其特征在于，所述制剂中包含权利要求1至3任一项提取物和药学上可接受的辅料或其它药物。

10.根据权利要求9所述的制剂，其特征在于，所述制剂为散剂、丸剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、合剂、注射剂、滴丸剂、酒剂、酊剂、茶剂、鼻用制剂、凝胶剂、栓剂或气雾剂。

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