CN102600192A - 一种治疗皮肤病的复方特比萘芬纳米药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于治疗皮肤病的复方特比萘芬纳米药物，该药物的粒径为1nm～100nm，由下列组分的原料组成：特比萘芬0.1%～10%、丁香酚0.1%～15%、红霉素0.1%～5%、油0.1%～10%、表面活性剂10%～40%、助表面活性剂4%～20%、余量为蒸馏水，上述成分的质量百分比之和为100%。该药物颗粒小、粘度小、流动性好、性质稳定，有较好的经皮渗透性，不仅对宠物皮肤真菌病有较强疗效，而且对宠物细菌性皮肤病及寄生虫性皮肤病均有强有力的治疗作用，本发明产品制备简单、耗能低、不需特殊设备就能大量生产。在宠物皮肤病的治疗方面具有广阔应用前景。

Description

一种治疗皮肤病的复方特比萘芬纳米药物及其制备方法

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种复方药物新剂型，特别涉及一种稳定透明的用于治疗皮肤病的复方特比萘芬纳米药物的制备方法。 

背景技术

特比萘芬是广谱抗真菌新一代丙烯胺类药物，为白色或类白色结晶性粉末，难溶于水，可溶于有机溶剂。其突出的优点在于它具有杀菌和抑菌的双重作用，主要通过抑制真菌角鲨烯环氧化酶，导致角鲨烯聚集，脂滴沉积于细胞壁及细胞浆内，引起细胞膜破裂达到杀菌的目的；其次可导致麦角固醇的缺乏，真菌细胞膜的生长受干扰，真菌停止生长，达到抑菌的目的。特比萘芬对临床常见真菌具有较强抗菌作用，体内无蓄积，副反应低。 

丁香酚即4-烯丙基-2-甲氧基苯酚，是一种油状有香味的化合物，是很多中草药如丁香、肉桂中的有效成分，几乎不溶于水，与乙醇、乙醚及油等可混溶。丁香酚来源广泛，易于制备，是一种良好的植物源药物，有广泛的药理作用，其具有较强抑制真菌、细菌、杀除螨虫等作用。 

红霉素属大环内酯类抗生素，为白色或类白色的结晶或粉末，无臭，味苦，微有引湿性，性状稳定，难溶于水，易溶于有甲醇、乙醇等有机溶媒。对革兰阳性菌有强大抗菌作用，敏感菌有葡萄球菌、草绿色链球菌、化脓性链球菌、肺炎链球菌等。对革兰阴性菌如淋球菌、螺旋杆菌、百日咳杆菌、布鲁菌属等也有抑制作用。此外，对支原体、放线菌、钩端螺旋体、立克次体、衣原体、奴卡菌、少数分枝杆菌和阿米巴原虫有抑制作用。红霉素毒性低，但刺激性强。肌注可发生局部炎症，宜采用深部肌注。静注速度要缓慢，同时应避免露出血管外。犬、猫内服则可引起呕吐、腹痛、腹泻等症状。 

以上三种药物溶解性较差，物理性质不稳定，不能综合性地预防及治疗多种原因引起的宠物皮肤病，需同时多次给药才能达到治疗效果。目前市场上治疗宠物皮肤病的药物有伊维菌素、甲硝唑、林可霉素、多拉菌素等，但上述产品功能单一，使用不便，伊维菌素等药物使用周期较长，对于宠物毒副作用较大。 

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷与不足，本发明目的在于提供一种适宜于临床应用的治疗宠物皮肤病的复方特比萘芬纳米药物，该药物能够同时治疗真菌、细菌、寄生虫等原因引起的宠物皮肤病，且安全有效，生物利用率较高。 

实现上述发明目的的技术方案是一种治疗皮肤病的复方特比萘芬纳米药物，该药物的粒径为1nm～100nm，由下列质量百分比的原料组成： 

特比萘芬0.1%～10%、丁香酚0.1%～15%、红霉素0.1%～5%、油相0.1%～10%、表面活性剂10%～40%、助表面活性剂4%～20%、余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100%。

制备本发明药物的配方优选质量百分比范围是：特比萘芬0.2%～8%、丁香酚0.2%～12%、红霉素0.2%～4.5%、油相0.5%～8%、表面活性剂15%～35%、助表面活性剂5%～15%、余量为蒸馏水，上述成分的质量百分比之和为100%。 

所述的表面活性剂是吐温-80（Tween-80）、吐温-60（Tween-60）、吐温-20（Tween-20）、聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油（RH-40）、聚氧乙烯(40)蓖麻油（EL-40）和司盘-80（Span-80）中的一种或几种的混合物。 

所述的助表面活性剂是无水乙醇、乙二醇、1,2-丙二醇、丙三醇、聚乙二醇200（PEG 200）、聚乙二醇400（PEG 400）、聚乙二醇600（PEG 600）中的一种或几种的混合物。 

所述的油相是肉豆蔻酸异丙酯、液体石蜡、维生素E油、霍霍巴油、三醋酸甘油酯、乙酸乙酯、杏仁油、小麦胚芽油、橄榄油、蓖麻油中的一种或几种的混合物。 

在表面活性剂的选择上，本发明选用无毒性和生物相容性好的非离子型表面活性剂。非离子型表面活性剂在溶液中比较稳定，不易受强电解质、无机盐类的影响，也不易受酸碱的影响，与其他表面活性剂的相容性好，溶血作用较小。理论上，O/W型纳米乳状液的制备需要表面活性剂的HLB值介于8～18之间，考虑到制备工艺的简单性，即纳米乳的易形成性和纳米乳的稳定性，本发明选用HLB介于10～15之间的液态非离子型表面活性剂，或者与一种HLB＜10的非离子型表面活性剂复配。可选用的表面活性剂有：Tween-80、Tween-60、Tween-20、RH-40、EL-40和Span-80中的一种或几种的混合物。 

本发明根据当乳化油相所需的表面活性剂的HLB值与表面活性剂相近时，所形成的乳状液稳定的原则，选用的油脂有：肉豆蔻酸异丙酯、液体石蜡、维生素E油、霍霍巴油、三醋酸甘油酯、乙酸乙酯、杏仁油、小麦胚芽油、橄榄油、蓖麻油中的一种或几种的混合物。 

大部分纳米乳的形成都需要加入助表面活性剂，其作用主要有：降低油水间界面张力、 增加界面膜的流动性、调节表面活性剂的HLB值等。本发明选用的助表面活性剂有：无水乙醇、乙二醇、1,2-丙二醇、丙三醇、PEG 200、PEG 400、PEG 600中的一种或几种的混合物。 

本发明还有一个目的是提供上述治疗皮肤病的复方特比萘芬纳米药物的制备方法，其特征在于，具体包括下列步骤： 

1）称取特比萘芬、丁香酚、红霉素、油、表面活性剂、助表面活性剂、蒸馏水，备用；

2）将特比萘芬、丁香酚、红霉素加入助表面活性剂中完全溶解；

3）将油加入步骤2）制备的溶液中搅拌均匀；

4）再将表面活性剂加入步骤2）制备的溶液中，搅拌均匀，在20℃～25℃下缓慢加入蒸馏水充分搅拌，直至形成澄清透明、粘度小具有流动性的黄色或无色透明的复方特比萘芬纳米乳。

本发明的复方特比萘芬纳米药物具有治疗动物真菌性皮肤病、细菌性皮肤病、寄生虫性皮肤病的功能。 

用法：局部外涂，每天1～2次，连续1～2周。 

本发明经透射电子显微镜检测，液滴直径分布在1～100nm之间，外观为黄色或无色透明液体，具有很好的稳定性： 

1.光稳定性

将本发明复方特比萘芬纳米药物装入玻璃瓶中，密封，置于室温中，光照10d，于1d、3d、5d、7d、10d取样检测。结果表明，复方特比萘芬纳米乳外观仍然澄清透明，无混浊、分层、沉淀等现象，粒径保持在1nm~100nm之间。

2.温度稳定性 

将适量本发明复方特比萘芬纳米药物装入玻璃瓶中，密封，分别置于4℃，25℃和37℃三种温度条件下留样考察30d，每隔5d取样观察。结果表明，该复方特比萘芬纳米药物在此三种温度条件下均保持澄清透明，未见分层、浑浊和沉淀的现象。

3.抗冷冻稳定性 

将本发明复方特比萘芬纳米乳于-4℃保存一周，取出后恢复至室温。该复方特比萘芬纳米药物在-4℃时成固体，恢复至室温后其恢复至透明，且放置一周后仍澄清透明。

4.加速稳定性 

将本发明复方特比萘芬纳米药物置于离心管中，于15000rpm离心20min，观察结果，发现其未分层，仍澄清透明。

本发明的治疗皮肤病的复方特比萘芬纳米药物与现有技术相比，具有以下优点： 

1）热力学稳定性好，贮存稳定性高，久置不分层，经离心加速试验仍未分层；

2）本发明属于纳米级药物，外观澄清透明，乳液液滴分散度良好，生物利用度高；

3）本发明药物能够同时治疗宠物真菌性、细菌性及寄生虫性皮肤病，使用方便，疗效显著。

4）制备工艺简单，适合规模化生产。 

附图说明

图1 是本发明复方特比萘芬纳米药物的透射电镜图。 

具体实施方式

以下通过试验例进一步阐述本发明说述药物的有益效果，这些试验例包括本发明药物的透射电子显微镜观察试验、体外药效试验和临床疗效试验。 

试验例1  本发明复方特比萘芬纳米药物透射电子显微镜观测 

本发明药物用透射电子显微镜进行微观形态观察，结果显示见图1，图1是复方特比萘芬纳米乳透射电镜照片，显示复方特比萘芬纳米乳滴呈球形且分布均匀、分散型良好，粒径均小于100nm。

试验例2  本发明复方特比萘芬纳米药物体外抗菌活性试验 

采用微量稀释法测定药物对金黄色葡萄球菌、中间葡萄球菌、溶血性链球菌（菌种均来自西北农林科技大学动医学院微生物实验室）的最小杀菌浓度(MBC)和最低抑菌浓度(MIC)。试验设复方特比萘芬纳米乳组、红霉素溶液组、硫酸新霉素溶液组。

方法：取无菌微孔板，第1孔加入180μL 2×10⁵CFU/mL的菌液，其余每孔均加100μL，加至14孔，在第1孔内加入浓度为640μg/mL的复方特比萘芬纳米乳20μL，吹打混匀后吸取100μL加入第2孔中，同法依次稀释至第13孔，弃去100μL，第14孔为菌液对照，第15孔只加药液做药物对照。37℃培养16～24h后观察结果。以无细菌生长的最低浓度为MIC，将所有完全清晰无细菌生长孔内液体移种于琼脂平板内，用灭菌玻棒推匀，经37℃培养过夜，菌落数不超过5个的平板的最低药物浓度即为该药物的MBC。同法测定对照药物红霉素溶液和硫酸新霉素溶液的MBC和MIC。 

体外抗菌活性试验表明，复方特比萘芬纳米乳对金黄色葡萄球菌的MIC、MBC分别为0.0625μg /mL和0.125μg /mL，显著低于红霉素和硫酸新霉素；对中间葡萄球菌的MIC、MBC分别为0.5μg /mL和1μg /mL，较红霉溶液小，与硫酸新霉素溶液相当；对溶血性链球菌的MIC、MBC分别为0.0156μg /mL 和0.0625μg /mL，显著低于红霉素和硫酸新霉素，表明复方特比萘芬纳米乳体外抗菌作用强于红霉素和硫酸新霉素。结果见表1。 

表1 最小杀菌浓度(MBC)和最低抑菌浓度(MIC)(单位：μg /mL) 

试验例3  本发明复方特比萘芬纳米药物的离体杀螨试验

刮取自然感染螨虫的家兔耳道内长满血痂的痂皮和表皮患部皮屑，并用镊子取出置于玻璃平皿内，平皿边缘涂少量螨虫趋避剂，稍微加温，用挑虫针挑取活性强的螨虫供试验用。在解剖镜下进行虫体鉴定，鉴定其为兔痒螨及兔疥螨。

用分离针挑取螨虫于凹形载玻片上，滴加供试药两滴，将挑选的螨虫8只置于药液中并加盖玻片，在倒置显微镜下持续观察24h，每隔5min观察一次，每次持续观察2min，对每组观察直至8只螨虫全部死亡，记录螨虫死亡时间。试验共分为5组，其余四组分别为：蒸馏水试验组，杀螨灵水溶液组、伊维菌素注射液组和1%丁香酚溶液组，试验方法同复方特比萘芬纳米乳组。 

试验结果：不同药液处理24h结果显示，复方特比萘芬纳米乳杀螨时间为3~4min，低于600倍稀释杀螨灵水溶液，与伊维菌素杀螨效果相当，强于1%丁香酚溶液。结果见表2。 

表2  离体杀螨效果比较结果 

注：＋ 表示有螨虫存活；－ 表示螨虫全部杀死无复苏

试验例4   复方特比萘芬纳米乳临床疗效试验

在医院就诊，经检验确诊患混合性皮肤病；征得主人同意后，符合本试验条件的宠物数40只，作为本研究对象。将试验药物直接涂于患处，用药前清洁和干燥患处，每日两次，连续使用14 d。观察记录试验结果。疗效判断标准为药物有效率：

痊愈：皮肤完全消退或仅留色素斑，无痒感，炎症消失；

显效：皮肤消退≥60%，皮肤损伤程度轻和病变密度较低，痒感明显减轻；

好转：皮肤消退20%～60%，痒感较轻；

无效：皮肤消退＜20%或继续加重，痒感同前或加剧。

作疗效评价时，将痊愈病例与显效病例合计为有效病例，计算出有效率，公式如下： 

有效率（%）＝（痊愈病例数＋显效病例数）/治疗总病例数×100

表3  两种药物的有效率

临床疗效试验结果表明，复方特比萘芬纳米乳药物有效率为95%，而临床常用药物癣螨净的有效率为85%，说明复方特比萘芬纳米乳的临床治疗效果优于癣螨净，而且安全，不良反应少，在宠物皮肤病的治疗方面具有广阔应用前景。

以下通过发明人给出的实施例来进一步阐述本发明复方特比萘芬纳米乳的制备方法。 

实施例1 

1）将0.02g特比萘芬、0.02g丁香酚、0.01g红霉素加入0.6g乙二醇中完全溶解；

2）将0.8g乙酸乙酯加入步骤1）制备的溶液中搅拌均匀；

3）再将3g Tween-80加入步骤2）制备的溶液中，搅拌均匀，在20℃下缓慢加入5.55g蒸馏水充分搅拌，直至形成澄清透明、粘度小具有流动性的黄色或无色透明的复方特比萘芬纳米乳。

实施例2  

特比萘芬0.6g、丁香酚0.1g、红霉素0.1g、三醋酸甘油酯0.2g、Tween-80 2g、无水乙醇1g、蒸馏水6g。

实施例3

特比萘芬0.05g、丁香酚1.2g、红霉素0.05g、乙酸乙酯0.2g、Tween-80 1g、无水乙醇1g、蒸馏水6.5g。

实施例4  

特比萘芬0.1g、丁香酚0.1g、红霉素0.3g、蓖麻油0.1g、RH-40 4g、无水乙醇0.8g、蒸馏水4.6g。

实施例5  

特比萘芬0.2g、丁香酚0.2g、红霉素0.1g、霍霍巴油0.1g、Tween-80 2g、无水乙醇0.4g、蒸馏水7g。

实施例6  

特比萘芬0.1g、丁香酚0.1g、红霉素0.08g、液体石蜡0.01g、橄榄油0.01g、Tween-80 2g、无水乙醇0.75g、1,2-丙二醇0.25g、蒸馏水6.7g。

实施例7  

特比萘芬0.2g、丁香酚0.1g、红霉素0.05g、杏仁油0.02g、小麦胚芽油0.03g、Tween-80 2g、Tween-60 1g、无水乙醇0.4g、PEG400 0.2g、蒸馏水6g。

实施例8  

特比萘芬0.1g、丁香酚0.1g、红霉素0.1g、乙酸乙酯0.2g、Tween-80 2g、Tween-20 1g、丙三醇1.5g、1,2-丙二醇0.5g、蒸馏水4.5g。

实施例9

特比萘芬0.05g、丁香酚0.1g、红霉素0.1g、肉豆蔻酸异丙酯0.05g、Tween-80 3.5g、Span-80 0.5g、PEG200 0.3g、PEG600 0.3、蒸馏水5.1g。

实施例10

特比萘芬0.2g、丁香酚0.3g、红霉素0.1g、维生素E油 0.2g、EL-40 2g、无水乙醇1g、蒸馏水6.2g。

Claims (9)

1.一种治疗皮肤病的复方特比萘芬纳米药物，其特征在于，该药物的粒径为1nm～100nm，由下列质量百分比的原料组成：

特比萘芬0.1%～10%、丁香酚0.1%～15%、红霉素0.1%～5%、油0.1%～10%、表面活性剂10%～40%、助表面活性剂4%～20%、余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100%；

所述表面活性剂是Tween-80、Tween-60、Tween-20、RH-40、EL-40和Span-80中的一种或几种的混合物；

所述助表面活性剂是无水乙醇、乙二醇、1,2-丙二醇、丙三醇、PEG 200、PEG 400、PEG 600中的一种或几种的混合物；

所述油是肉豆蔻酸异丙酯、液体石蜡、维生素E油、霍霍巴油、三醋酸甘油酯、乙酸乙酯、杏仁油、小麦胚芽油、橄榄油、蓖麻油中的一种或几种的混合物。

2.根据权利要求1所述的治疗皮肤病的复方特比萘芬纳米药物，其特征在于，由下列质量百分比的原料组成：

特比萘芬0.2%～8%、丁香酚0.2%～12%、红霉素0.2%～4.5%、油0.5%～8%、表面活性剂15%～35%、助表面活性剂5%～15%、余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100%。

3.一种治疗皮肤病的复方特比萘芬纳米药物，其特征在于，由下列质量百分比的原料组成：

特比萘芬2%、丁香酚3%、红霉素1%、油2%、表面活性剂20%、助表面活性剂10%、蒸馏水62%。

4.一种治疗皮肤病的复方特比萘芬纳米药物，其特征在于，由下列质量百分比的原料组成：

特比萘芬0.2%、丁香酚0.2%、红霉素0.1%、乙酸乙酯8%、Tween-80为30%、乙二醇6%、蒸馏水55.5%。

5.一种治疗皮肤病的复方特比萘芬纳米药物，其特征在于，由下列质量百分比的原料组成：

特比萘芬6%、丁香酚1%、红霉素1%、三醋酸甘油酯2%、Tween-80为 20%、无水乙醇10%、蒸馏水60%。

6.一种治疗皮肤病的复方特比萘芬纳米药物，其特征在于，由下列质量百分比的原料组成：

特比萘芬0.5 %、丁香酚12%、红霉素0.5%、乙酸乙酯2%、Tween-80为10%、无水乙醇10%、蒸馏水65%。

7.一种治疗皮肤病的复方特比萘芬纳米药物，其特征在于，由下列质量百分比的原料组成：

特比萘芬1%、丁香酚1%、红霉素3%、蓖麻油1%、RH-40为40%、无水乙醇8%、蒸馏水46%。

8.一种治疗皮肤病的复方特比萘芬纳米药物，其特征在于，由下列质量百分比的原料组成：

特比萘芬2%、丁香酚2%、红霉素1%、霍霍巴油1%、Tween-80为20%、无水乙醇4%、蒸馏水70%。

9.权利要求1所述治疗皮肤病的复方特比萘芬纳米药物的制备方法，其特征在于，具体包括下列步骤：

1）称取特比萘芬、丁香酚、红霉素、油、表面活性剂、助表面活性剂、蒸馏水，备用；

2）将特比萘芬、丁香酚、红霉素加入助表面活性剂中完全溶解；

3）将油加入步骤2）制备的溶液中搅拌均匀；

4）再将表面活性剂加入步骤2）制备的溶液中，搅拌均匀，在20℃～25℃下缓慢加入蒸馏水充分搅拌，直至形成澄清透明、粘度小具有流动性的黄色或无色透明的复方特比萘芬纳米乳。

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