CN102614173A - 一种复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物，该纳米乳药物的液滴直径大小在1～100nm之间，由下列质量百分比的原料组成：美贝霉素肟0.5%～3.5%，左旋咪唑0.1%～1.5%，表面活性剂23.5%～38.5%、油3.0%～17.0%、余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100%。该纳米乳制剂是澄清透明液体，稳定性好，吸收迅速，靶向释药，具有高效、广谱、低毒等特点，是一种防治宠物体内外寄生虫的药物，主要用于防治恶丝虫病，驱除线虫、钩虫、蛔虫、鞭虫等体内寄生虫和疥螨、鼻螨、毛囊虫、虱、跳蚤等体外寄生虫。本发明解决了美贝霉素肟的水不溶性问题，制备工艺简单，安全性高，便于推广。

Description

一种复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物及其制备方法

技术领域

本发明属于兽药领域，涉及一种抗寄生虫药的新剂型，特别涉及一种用于防治宠物体内外寄生虫的复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物及其制备方法。 

  

背景技术

随着经济的快速发展和人们生活水平的提高，越来越多的人开始养殖宠物，然而，目前市场上能够专门用于宠物的药品尚不健全，宠物一旦感染疾病，威胁最大的就是人类，因此，开发新的宠物药品迫在眉睫。 

美贝霉素肟(Milbemycin Oxime)是一种大环内酯类抗寄生虫药，它是美贝霉素A₄ 和A₃半合成的衍生物。1975年由日本Sankyo公司的科学家从链霉菌的发酵物中分离得到的，美国于上世纪90年代初批准该药上市，2003年又批准该药与氯芬奴隆的复方药品上市；我国台湾地区在诺华公司的极力争取下于1997年正式上市，商品名为倍脉心。 

美贝霉素肟是通过激发r氨基丁酸( GABA )的离子通道，影响虫体的神经传导进而发挥其药效。该药是目前防治犬猫体内外寄生虫的药物，能特效防治心丝虫，高效防治钩虫、圆虫、鞭虫、蛔虫等体内寄生虫，以及毛囊虫、疥癣、虱、跳蚤等体外寄生虫。其药理作用独特，广谱，高效，用药剂量小，按推荐剂量使用时对寄生虫毒性强大，而对动物机体几乎无毒副作用，口服用药也很方便，符合安全高效的新型抗寄生虫药的要求。左旋咪唑（Levamisole）是一种广谱、高效、低毒的驱虫药，用于畜禽胃肠道线虫病、肺线虫病、犬心丝虫病和猪肾虫病。其次，也用于免疫功能低下动物的辅助治疗和提高疫苗的免疫效果，具有较好的免疫增强作用。 

美贝霉素肟虽广谱驱虫，但对某些线虫的作用不如其他阿维菌素类药物，而左旋咪唑除了对线虫有好的驱除作用外，对免疫功能低下的动物具有较好的免疫增强作用，还具有抗肿瘤、抗感染等的作用。将这两种药物相互结合，大大增加了抗虫谱作用，还可以起到免疫增强作用，满足了宠物用药的需求，在兽药领域具有广阔的应用前景。 

发明内容

本发明的目的是针对上述现有技术的问题与缺陷，提供一种稳定性好，吸收迅速，靶向释药，具有高效、广谱、低毒特点的体内外防治宠物寄生虫病的复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物。 

实现上述发明目的的技术方案是一种复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物，该纳米乳液滴直径大小在1～100nm之间，由下列质量百分比的原料组成：美贝霉素肟0.5%～3.5%，左旋咪唑0.1%～1.5%，表面活性剂 23.5%～38.5%、油3.0%～17.0%、余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100%。 

所述的表面活性剂为RH-40、吐温-80、EL-40中的任一种或几种的混合物。 

所述油是乙酸丁酯、肉桂醛、蓖麻油、肉豆蔻酸异丙酯和三乙酸甘油酯中的任一种或几种的混合物。 

本发明采用的纳米乳由表面活性剂、油相、和水组成，是一种粒径在1～100nm之间的各向同性的热力学稳定体系。处方设计原则：作为药物载体，纳米乳首先应符合一般药物载体的要求，即无毒、无刺激、无不良药理作用、具有良好的生物相容性、不影响主药的药效和稳定性；另外由于纳米乳自身的特性，它对处方组成还有特殊的要求，对药物有较强的增溶能力并能在较大范围内形成稳定的纳米乳区。本发明遵循此原则。 

   在表面活性剂的选择上，本发明选用无毒性和生物相容性好的非离子型表面活性剂。非离子型表面活性剂在溶液中比较稳定，不易受强电解质、无机盐类的影响，也不易受酸碱的影响，并且与其他表面活性剂的相容性好，溶血作用较小。考虑到制备工艺的简单性，即纳米乳的易形成性和制备出来的纳米乳的稳定性，本发明选用HLB介于10～15之间的液态非离子型表面活性剂，或者与一种HLB<10的非离子型表面活性剂复配。可选用的表面活性剂有RH-40、吐温-80、EL-40中的任一种或几种的混合物。 

常见的乳化剂的HLB值可以在一些化工手册中查到，如化工出版的《化学产品手册》。由于表面活性剂的亲水亲油平衡（HLB）值具有加合性，可用质量平均法求出表面活性剂的HLB值。例如，两种表面活性剂A、B混合后，其混合表面活性剂的亲水亲油平衡值HLB_AB值为 

         HLB_AB=（W_A ×HLB_A+W_B ×HLB_B）/(W_A+W_B)

式中     WA，WB—混合表面活性剂A、B的质量；

         HLBA，HLBB—表面活性剂A、B的HLB值。

    本发明根据当乳化油相所需的表面活性剂的HLB与表面活性剂相近时，所形成的乳状液稳定的原则，所述油是乙酸丁酯、肉桂醛、蓖麻油、肉豆蔻酸异丙酯和三乙酸甘油酯中的任一种或几种的混合物。 

   本发明经透射电子显微镜检测，液滴直径分布在1～100nm，外观为黄色或无色透明液体，具有很好的稳定性： 

   1、经时稳定性

   经时稳定性是指纳米乳口服液在室温自然变化条件下贮藏时，外观随时间延长而发生变化的程度。该复方美贝霉素肟纳米乳持久透明，未发现浑浊或沉淀，则说明经时稳定性好。这是评价纳米乳的一个重要指标。

   2、热贮稳定性 

   将该复方美贝霉素肟纳米乳置于试管，密封，置于37 ℃恒温水浴箱中贮存14天，该液热贮后外观透明。

   3、抗冷冻稳定性 

   将该复方美贝霉素肟纳米乳在冰箱中-4℃保存一周后。恢复至室温。如果纳米乳在-4℃成固体，恢复至室温，恢复至透明，且放置一周后继续透明，则认为抗冷冻性好。

   4、加速稳定性 

   将该复方美贝霉素肟纳米乳置于试管，密封，在15000r/min的转速下离心20分钟，没有分层，仍澄清透明。

   用法：根据体重，口服，每次1.0mg/kg；外用，每次1.5mg/kg。 

   本发明的复方美贝霉素肟纳米乳抗菌药物，与现有技术相比，具有以下优点： 

1）    本发明的O/W型复方美贝霉素肟纳米乳属纳米级药物，

粒径在1～100nm，稳定性好，粘度低，渗透性强，作用迅速高效； 

2）    本发明的复方美贝霉素肟纳米乳用途广泛，既可口服也

可外用，口服可通过饮水，外用可生产成喷雾剂和涂抹剂，使用方便；

   3）本发明的技术方法解决了美贝霉素肟的水不溶性问题，提高了载药量，复方制剂使其抗虫谱广泛，更加满足了宠物的需求；

    4）本发明的制备方法简单，安全性高，便于推广应用。 

具体实施方式

以下通过药效学试验和对比试验来进一步阐述本发明所述药物的抗菌效果。 

试验例1 本发明的复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物的毒性试验 

1.   试验方法

1.1     急性经口毒性试验  参照霍恩氏法，选择健康的小鼠50只，

雌雄各半，根据预测结果，设500、1000、3000、5000mg/kg 4个剂量组和生理盐水对照组，随机分为5组，每组雌雄各5只，并按5ml/(kg·w)量一次灌胃，观察10 d，给药后记录小鼠的饮食、活动和精神状态以及出现死亡的时间和数量，并解剖观察各脏器官，根据一次最大计量法计算LD₅₀值。

1.2     急性皮肤刺激性试验  选取健康无皮肤损伤的新西兰家兔6 

只，体重2.5±0.3kg，分为两组，每组3只，在试验前24h给家兔背部中间脊柱两侧的皮肤脱毛，每侧脱毛区以2cm×3cm左右为宜，一侧裸露皮肤涂本发明复方美贝霉素肟纳米乳0.5g（实施例1），并覆盖纱布，用透明胶带固定；另一侧皮肤涂以等量蒸馏水作对照，敷药时间为4h。涂药4 h后，以温热生理盐水清洗两侧涂药部位，分别于清除受试物后的1、24、48h，观察并记录两侧涂药部位皮肤反应。

2.   结果 

2.1     急性经口毒性  复方美贝霉素肟纳米乳对小鼠急性经口毒

性10 d观察，各剂量组无明显中毒症状，未见死亡。小鼠解剖未见异常。可见，该复方美贝霉素肟纳米乳使用安全，其LD₅₀值大于5000mg/kg。

2.2     急性皮肤刺激  受试家兔给药4h后，在各个观察期内两侧 

皮肤未见红斑或水肿，对皮肤刺激性反应的积分值为0，表明该复方美贝霉素肟纳米乳对皮肤局部无刺激作用。

试验例2   本发明复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物对犬驱虫药效试验 

通过粪捡，选择50条自然感染肠道寄生虫的病犬，另外每条犬补饲40个蛔虫，正常饲喂30天后，对所有病犬粪便进行虫卵计数，根据虫卵计数情况将50条病犬分为5组，每组10条，尽量使各组虫卵数接近。按照临床给药量将犬分为以下几个剂量组：低剂量组0.6mg/kg、中剂量组1.5 mg/kg、高剂量组3 mg/kg、单方美贝霉素肟微乳对照组1.5 mg/kg，不给药对照组。根据每条犬的体重及给药量计算出所需药量，进行一次口服给药，并在服药后连续7天收集所有试验犬的粪便，在显微镜下对每克粪便中的虫卵计数，结果如下表1所示：

表1  复方美贝霉素肟纳米乳给药后驱虫效果

从表1可以看出，各组犬在给药前粪便所测虫卵数相差不大，各用药组的虫卵数随着时间的延长而减少，其中高剂量组的虫卵数减少幅度最大，中剂量组和单方美贝霉素肟微乳对照组在相同剂量下，复方制剂比单方制剂的驱虫效果更好，充分说明了该复方美贝霉素肟纳米乳的良好驱虫效果。

具体实施方式

以下通过具体实施例来进一步阐述本发明所述药物的组成和制备方法。 

实施例1   

（1）按配方比例称取吐温-80  29.6g、肉桂醛 12.2g、美贝霉素肟 2.6g、左旋咪唑0.7g，蒸馏水54.9g，备用；

（2）将2.6g美贝霉素肟加入12.2g肉桂醛中，搅拌使其充分溶解，作为油相；

（3）将0.7g左旋咪唑加入到54.9g蒸馏水中，搅拌使其充分溶解，作为水相；

（4）在室温下迅速搅拌油相和表面活性剂，搅拌的同时缓慢滴加水相，不断搅拌直至体系呈透明澄清的液体，即得复方美贝霉素肟纳米乳。              

实施例2  一种复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物，各组分的质量：

EL-40  28.8g、三乙酸甘油酯 10.7g、美贝霉素肟 1.2g、左旋咪唑0.3g，蒸馏水59.0g。

实施例3  一种复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物，各组分的质量： 

RH-40  37.5g、蓖麻油 3.5g、美贝霉素肟 0.8g、左旋咪唑0.2g，蒸馏水59.0g。

实施例4  一种复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物，各组分的质量： 

吐温-80  34.5g、肉豆蔻酸异丙酯5.8g、美贝霉素肟 0.5g、左旋咪唑0.1g，蒸馏水59.1g。

实施例5  一种复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物，各组分的质量： 

吐温-80  25.4g、乙酸丁酯16.5g、美贝霉素肟 3.5g、左旋咪唑1.1g，蒸馏水53.5g。

实施例6  一种复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物，各组分的质量： 

吐温-80  30.8g、乙酸丁酯4.0g、肉桂醛、4.5g、美贝霉素肟2.1g、左旋咪唑0.6g，蒸馏水58.0g。

实施例7  一种复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物，各组分的质量： 

吐温-80  31.5g、乙酸丁酯4.9g、肉桂醛5.0g、美贝霉素肟 1.8g、左旋咪唑0.5g，蒸馏水56.3g。

实施例8  一种复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物，各组分的质量： 

EL-40  29.6g、蓖麻油1.0g、肉豆蔻酸异丙酯2.0g、三乙酸甘油酯5.6g、美贝霉素肟 2.0g、左旋咪唑0.5g，蒸馏水59.3g。

实施例9  一种复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物，各组分的质量： 

RH-40  33.5g、三乙酸甘油酯7.8g、美贝霉素肟 0.9g、左旋咪唑0.2g，蒸馏水57.6g。

实施例10  一种复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物，各组分的质量： 

EL-40  29.4g、蓖麻油6.0g、肉豆蔻酸异丙酯5.2g、美贝霉素肟 2.8g、左旋咪唑0.9g，蒸馏水55.7g。

 实施例11  一种复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物，各组分的质量： 

吐温-80  27.5g、乙酸丁酯13.7g、美贝霉素肟 3.2g、左旋咪唑1.2g，蒸馏水54.4g。

Claims (3)

1.一种复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物，其特征在于，由下列质量百分比的原料组成： 

美贝霉素肟               0.5%～3.5%

左旋咪唑                 0.1%～1.5%

表面活性剂               23.5%～38.5%

油                       3.0%～17.0%

余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100%；

所述的表面活性剂是吐温-80、RH-40、EL-40中的任一种；

所述油是乙酸丁酯、肉桂醛、蓖麻油、肉豆蔻酸异丙酯和三乙酸甘油酯中的任一种或几种的混合物。

2.根据权利要求1所述的复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物，其特征在于，该纳米乳液滴直径大小在1～100nm之间。

3.制备权利要求1所述的复方美贝霉素肟纳米乳抗寄生虫药物的方法，其特征在于，包括下列步骤：

（1）按配方比例称取表面活性剂、油、美贝霉素肟、左旋咪唑、蒸馏水，备用；

（2）将所述量的美贝霉素肟加入油中，搅拌使其充分溶解，作为油相；

（3）将所述量的左旋咪唑加入蒸馏水中，搅拌使其充分溶解，作为水相；

（4）在室温下迅速搅拌油相和表面活性剂，搅拌的同时缓慢滴加水相，不断搅拌直至体系呈透明澄清的液体，即得复方美贝霉素肟纳米乳。