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CN102458437A - 抗il-17f 抗体及其使用方法 - Google Patents

抗il-17f 抗体及其使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供识别IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体但不识别IL-17A的全人单克隆抗体。本发明还提供使用这种单克隆抗体作为治疗剂、诊断剂和预防剂的方法。

Description

抗IL-17F 抗体及其使用方法
相关申请
本申请要求2009年5月5日提交的美国临时申请No.61/175,512的权益，其内容据此通过引用整体并入本文。
发明领域
本发明总体上涉及识别IL-17F但不识别IL-17A的单克隆抗体(例如全人单克隆抗体)、识别异二聚体IL-17A/IL-17F复合体的单克隆抗体(例如全人单克隆抗体)的产生，及使用该单克隆抗体作为疗法的方法。
发明背景
IL-17F(也称为ML-1)是IL-17细胞因子家族的成员，IL-17细胞因子家族还包括蛋白质IL-17A(也称为CTL-8、IL-17)、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E(也称为IL-25)。IL-17A和IL-17F作为二硫化物连接的同二聚体分泌，所述同二聚体通过受体IL-17R、IL-17RC或由IL-17R和IL-17RC组成的多聚体受体复合体传导信号。两者还在相同T细胞亚群(主要通过Th17CD4+T细胞)上共表达。IL-17A和IL-17F还相互作用并形成异二聚体IL-17A/IL-17F复合体。
IL-17F和IL-17A/IL-17F复合体的水平升高与多种炎性病症和自身免疫性疾病有关。因此，对中和IL-17F的生物活性的疗法存在需要。
发明概述
本发明提供特异性结合到IL-17F和/或IL-17A/IL-17F异二聚体复合体但不特异性结合到IL-17A的单克隆抗体，例如全人单克隆抗体。IL-17F通常作为同二聚体蛋白被表达且具有生物活性。因此，除非另外说明，使用的术语“IL-17F”及其等同物是指IL-17F同二聚体蛋白。本发明的抗体能够调节例如阻断、抑制、降低、拮抗、中和或以其他方式干扰IL-17F-介导的促炎细胞因子和/或趋化因子的产生。
本发明的示例性单克隆抗体包括，例如5E12抗体、41B10抗体、11C5抗体、21B10抗体、1F1抗体和2E12抗体。可选地，单克隆抗体是与41B10抗体、11C5抗体、21B10抗体、1F1抗体、2E12抗体、5D3抗体、22F8抗体、28B11抗体、41A4抗体和43G6抗体结合到相同表位的抗体。这些抗体在本文分别称作“huIL17F”抗体。huIL-17F抗体包括全人单克隆抗体以及人源化单克隆抗体和嵌合抗体。
优选地，全人单克隆抗体选自11C5抗体、21B10抗体、1F1抗体、2E12抗体、5D3抗体、22F8抗体、28B11抗体、41A4抗体和43G6抗体。与结合IL-17F和/或IL-17A/IL-17F异二聚体复合体的其它抗体(例如5E12抗体和41B10抗体)相比，这些抗体对IL-17F和/或IL-17A/IL-17F异二聚体复合体显示出更高的亲和力。与结合IL-17F和/或IL-17A/IL-17F异二聚体复合体的其它抗体(例如5E12抗体和41B10抗体)相比，这些抗体是IL-17F的至少一种生物活性或功能的更好的抑制剂。例如11C5抗体、21B10抗体、1F1抗体、2E12抗体、5D3抗体、22F8抗体、28B11抗体、41A4抗体和43G6抗体比5E12抗体和/或41B10抗体在更大程度上抑制IL-17F的生物活性和/或功能。在一些实施方案中，与在存在结合IL-17F和/或IL-17A/IL-17F异二聚体复合体的其它抗体(例如5E12抗体和/或41B10抗体)的情况下促炎细胞因子的产生减少相比，在存在这些抗体的情况下11C5抗体、21B10抗体、1F1抗体、2E12抗体、5D3抗体、22F8抗体、28B11抗体、41A4抗体和43G6抗体在更大程度上减少促炎细胞因子的产生。相比，在存在11C5抗体、21B10抗体、1F1抗体、2E12抗体、5D3抗体、22F8抗体、28B11抗体、41A4抗体和43G6抗体的情况下促炎细胞因子(例如IL-6)产生的水平比例如与结合IL-17F和/或IL-17A/IL-17F异二聚体复合体的其它抗体(例如5E12抗体和/或41B10抗体)的促炎细胞因子产生的水平低大于或等于5％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、99％或100％。
这些抗体对人IL-17F和/或人IL-17A/IL-17F异二聚体复合体显示特异性，并且它们显示了抑制IL-17F-介导的细胞因子的产生。这些抗体具有不同的特异性。在一些实施方案中，本发明的huIL-17F抗体特异性结合IL-17F，但不特异性结合IL-17A。优选地，本发明的huIL-17抗体还特异性结合IL-17F同二聚体，但不特异性结合IL-17A同二聚体。在一些实施方案中，本发明的huIL-17F抗体特异性结合IL-17A/IL-17F异二聚体复合体，但不特异性结合IL-17A或IL-17A同二聚体。在一些实施方案中，本发明的huIL-17F抗体特异性结合IL-17F和IL-17A/IL-17F异二聚体复合体，但不特异性结合IL-17A或IL-17A同二聚体。例如抗体11C5、21B10、1F1、2E12、41B10、5D3、22F8、28B11、41A4和43G6特异性结合IL-17F，并且这些抗体不结合IL-17A或IL-17A同二聚体。优选地，huIL-17F抗体结合IL-17F并且不与IL-17A或IL-17A同二聚体交叉反应。例如5E12、11C5、21B10、1F1、2E12、41B10、5D3、22F8、28B11、41A4和43G6结合IL-17F，但不与IL-17A交叉反应。
本发明的全人抗体包含具有SEQ ID NOS：10、14、18、22、26、30、34、38和42的氨基酸序列的重链可变区。本发明的人抗体包含具有SEQ ID NOS：12、16、20、24、28、32、36、40和44的氨基酸序列的轻链可变区。重链CDR包括：VH CDR1区，其包含与选自由SEQ ID NOS：45、48、51、56、59、64、67和70组成的组的序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列；VH CDR2区，其包含与选自由SEQ ID NOS：46、49、52、54、57、60、62、65、68、71和73组成的组的序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列；和VH CDR3区，其包含与选自由SEQ ID NOS：47、50、53、55、58、61、63、66、69和72组成的组的序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列。三个轻链CDR包括：VL CDR1区，其包含与选自由SEQ ID NOS：74、77、80、85、88、91和94组成的组的序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列；VL CDR2区，其包含与选自由SEQ ID NOS：75、78、81、83、86、89、92和96组成的组的序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列；和VL CDR3区，其包含选自由SEQ ID NOS：76、79、82、84、87、90、93、95、97、98和99组成的组的序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列。
优选地，重链CDR包括：VH CDR1区，其包含与选自由SEQ IDNOS：45、48、51、64、67和70组成的组的序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列；VH CDR2区，其包含与选自由SEQ ID NOS：46、49、52、54、62、65、68、71和73组成的组的序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列；和VH CDR3区，其包含与选自由SEQ IDNOS：47、50、53、55、63、66、69和72组成的组的序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列。三个轻链CDR包括：VL CDR1区，其包含与选自由SEQ ID NOS：74、77、80、85、91和94组成的组的序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列；VL CDR2区，其包含与选自由SEQ ID NOS：75、78、81、83、86、92和96组成的组的序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列；和VL CDR3区，其包含与选自由SEQ ID NOS：76、79、82、84、93、95、97、98和99组成的组的序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列，条件是当VL CDR1包含与SEQ ID NO：85的序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列时，则VL CDR2包含与SEQ ID NO：86的序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列，并且VL CDR3包含与SEQ ID NO：98的序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列，并且条件是当VL CDR2包含与SEQ ID NO：86的序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列时，则VL CDR1包含与SEQ ID NO：85的序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列并且VL CDR3包含与SEQ ID NO：98的序列具有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列。
本发明的抗体免疫特异性结合IL-17F，其中抗体结合到包括人IL-17F上一个或多个氨基酸残基的表位。在一些实施方案中，本发明的抗体还特异性结合异二聚体IL-17A/IL-17F复合体但不特异性结合IL-17A，其中抗体结合到包括人IL-17F上一个或多个氨基酸残基的表位。
本发明的抗体还包括特异性结合IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体的全人抗体，其中抗体显示抑制大于50％的IL-17F-介导的促炎细胞因子在体外的产生。例如本发明的抗体显示抑制IL-17刺激的细胞大于55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％或99％的IL-6分泌。如本文所使用，术语“促炎细胞因子”是指促进炎症和/或与炎症相关的那些免疫调节性细胞因子。促炎细胞因子和趋化因子包括，例如IL-6、IL-8、G-CSF和GM-CSF。促炎趋化因子包括，例如GRO-α、GRO-b、LIX、GCP-2、MIG、IP10、I-TAC、和MCP-1、RANTES、Eotaxin(嗜酸细胞活化趋化因子)、SDF-1和MIP3a。
本发明还提供通过给其中需要此治疗或预防的受治疗者施用本发明的单克隆抗体(例如全人单克隆抗体)来治疗或预防与异常IL-17F活性(例如异常促炎细胞因子例如异常IL-6的产生)相关的病理学，或缓解与此病理学相关的症状的方法。待治疗的受治疗者是例如人。单克隆抗体以足以治疗、预防或缓解与该病理学相关的症状的量施用。足以治疗或预防受治疗者的病理学的单克隆抗体的量是，例如足以降低IL-17F信号(例如IL-17F-诱导一种或多种促炎细胞因子例如IL-6的产生)的量。如本文所使用，术语“降低”是指在存在本发明的单克隆抗体的情况下促炎细胞因子产生的减少，其中产生是，例如产生局部促炎细胞因子(例如在发炎组织的部位)或产生系统性促炎细胞因子。当在存在本发明的单克隆抗体的情况下促炎细胞因子(例如IL-6)产生的水平比促炎细胞因子产生的对照水平(即，在不存在单克隆抗体的情况下促炎细胞因子产生水平)低大于或等于5％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、99％或100％时，IL-17F信号(例如IL-17F-诱导的促炎细胞因子，例如IL-6)减少。例如使用本文所述IL-17F-刺激的小鼠胚胎成纤维(MEF)细胞测定来测量促炎细胞因子(例如IL-6)产生的水平。本领域技术人员应理解促炎细胞因子产生的水平可使用多种测定(包括例如市售的ELISA试剂盒)来测量。
使用本发明的单克隆抗体(例如全人单克隆抗体)治疗和/或预防的病理学包括，例如急性炎症、慢性炎症(例如与变应性疾患和哮喘相关的慢性炎症，与关节炎疾患相关的慢性炎症)、自身免疫性疾病(例如克罗氏病、多发性硬化、类风湿性关节炎和其它自身免疫性关节炎疾患)、炎性肠道疾病和移植排异。
根据本发明的药物组合物可包括本发明的抗体和载体。这些药物组合物可包括于试剂盒例如诊断试剂盒中。
本发明还提供可溶性IL-17F蛋白、用于表达IL-17F蛋白的方法及用于纯化可溶形式的此类蛋白质的方法。
在一些实施方案中，待治疗的病理学是一种或多种自身免疫性疾病、炎性病症或癌。例如不限于，所述病理学是类风湿性关节炎和其它关节炎疾患、克罗氏病、银屑病、多发性硬化、慢性阻塞性肺部疾病和/或哮喘、癌和血管生成。
根据本发明的药物组合物可包括本发明的抗体和载体。这些药物组合物可包括于试剂盒例如诊断试剂盒中。
本领域技术人员应理解本发明的抗体具有多种用途。例如本发明的蛋白质用作治疗剂以防止病症(例如类风湿性关节炎、克罗氏病、银屑病、多发性硬化、慢性阻塞性肺部疾病、血管生成、哮喘和癌)中IL-17F受体的活化。本发明的抗体还用作诊断试剂盒中的试剂或用作诊断工具，或这些抗体可用于竞争测定以产生治疗试剂。
附图简述
图1是描述使用标准关节炎评分方法在小鼠中进行胶原-诱导的关节炎的临床评分的进展的图。
图2A-2F是描述在终点(第22天)时测定的用II型牛胶原免疫的小鼠中的多种细胞因子血清水平的一系列图。图2A描述检测的肿瘤坏死因子α(TNF-α)的血清水平；图2B描述检测的白细胞介素6(IL-6)的血清水平；图2C描述检测的干扰素γ(IFN-γ)的血清水平；图2D描述检测的白细胞介素1α(IL-1α)的血清水平；图2E描述检测的单核细胞趋化蛋白(MCP-1)的血清水平；以及图2F描述检测的白细胞介素12/白细胞介素23(IL-12/IL-23)异二聚体复合体的血清水平。
详述
本发明提供特异性结合IL-17F的单克隆抗体。本发明还提供特异性结合IL-17F和异二聚体IL-17A/IL-17F复合体(在本文也称作IL-17A/IL-17F异二聚体)的单克隆抗体。所述抗体是例如全人单克隆抗体。
本发明的抗体特异性结合IL-17F但不特异性结合IL-17A，其中抗体结合到包括人IL-17F的一个或多个氨基酸残基的表位。在一些实施方案中，本发明的抗体特异性结合IL-17F和异二聚体IL-17A/IL-17F复合体但不特异性结合IL-17A或IL-17A同二聚体，其中抗体结合到包括人IL-17F的一个或多个氨基酸残基的表位。
本发明的抗体以≤1μM、例如≤100nM、优选地≤10nM、并且更优选地≤1nM的平衡结合常数(Kd)结合到IL-17F表位。例如本文提供的huIL-17F抗体显示Kd大约在≤1nM至约1pM之间的范围内。
IL-17F的晶体结构显示该蛋白质采用半胱氨酸结折叠，表明与半胱氨酸结蛋白质超家族有关系。然而，IL-17F的半胱氨酸结基序仅利用4个半胱氨酸而不是传统的6个半胱氨酸以形成结。和半胱氨酸结家族的其它成员一样，IL-17F还与IL-17A作为异二聚体存在。据认为IL-17A/IL-17F异二聚体通过IL-17R和/或多聚体IL-17R/IL-17RC复合体传导信号。最近的证据已显示用于形成IL-17A/IL-17F异二聚体的相同的半胱氨酸残基与用于IL-17F同二聚体形成的半胱氨酸相同。该数据表明与半胱氨酸结家族中的其它蛋白质一样，IL-17F同二聚体或IL-17A/IL-17F异二聚体的受体可结合到二聚体界面处的保守半胱氨酸残基。
已报道IL-17细胞因子家族的很多免疫调节功能，大概由于它们诱导许多免疫信号分子。IL-17A表达为IL-17A同二聚体，并且IL-17F表达为IL-17F同二聚体，在一些情况下共有非常相似的生物学功能。两者都促进从包括成纤维细胞、角质形成细胞、巨噬细胞、上皮细胞和内皮细胞的多种细胞中分泌促炎细胞因子(例如IL-6、IL-8、G-CSF和GM-CSF)、趋化因子(例如GRO-α、GRO-b、LIX、GCP-2、MIG、IP10、I-TAC、和MCP-1、RANTES、Eotaxin、SDF-1、和MIP3a)及前列腺素(例如PGE2)。两者还已显示调节软骨基质更新。IL-17F同二聚体还具有不同于IL-17A同二聚体的生物学功能，例如刺激T细胞和外周血单核细胞(PBMC)增殖和活化的能力，及抑制血管生成的能力。
本发明的huIL17F抗体有助于调节、阻断、抑制、降低、拮抗、中和或以其它方式干扰IL-17F的生物活性。IL-17F的生物活性包括，例如结合到IL-17R、IL-17RC和/或多聚体IL-17R/IL-17RC受体复合体，及诱导靶细胞中的细胞因子和/或趋化因子(例如IL-6、IL-8、G-CSF、GM-CSF、GRO-α、GRO-b、LIX、GCP-2、MIG、IP10、I-TAC、和MCP-1、RANTES、Eotaxin、SDF-1、和MIP3a)表达。例如huIL-17F抗体通过部分或完全调节、阻断、抑制、降低、拮抗、中和或以其它方式干扰IL-17F结合到其受体，或以其它方式部分或完全调节、阻断、抑制、减少、拮抗、中和IL-17F信号活性来完全或部分抑制IL-17F生物活性。
当在存在huIL-17F抗体的情况下的IL-17F活性的水平与在不存在与本文所述huIL-17F抗体结合的情况下的IL-17F活性的水平相比较减少至少95％，例如96％、97％、98％、99％或100％时，认为HuIL-17F抗体完全调节、阻断、抑制、降低、拮抗、中和或以其它方式干扰IL-17F生物活性。当在存在huIL-17F抗体的情况下的IL-17F活性的水平与在不存在与本文所述huIL-17F抗体结合的情况下的IL-17F活性的水平相比较减少小于95％，例如10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、75％、80％、85％或90％时，认为HuIL-17F抗体部分调节、阻断、抑制、降低、拮抗、中和或以其它方式干扰IL-17F活性。
定义
除非另外定义，本发明使用的相关科学和技术术语应具有本领域的那些普通技术人员通常理解的含义。此外，除非上下文另外要求，单数术语应包括复数并且复数术语应包括单数。一般来说，本文所述的细胞和组织培养、分子生物学、及蛋白质和寡核苷酸或多核苷酸化学及杂交的技术及利用的相关命名法是本领域所熟知的和常用的。标准技术用于重组DNA、寡核苷酸合成、及组织培养和转化(例如电穿孔、脂质转染)。根据制造商的说明书或如本领域通常所实现或如本文所述进行酶反应和纯化技术。通常根据本领域熟知的常规方法和如在贯穿本说明书引用和讨论的多种一般的和更具体的参考所述进行上述技术和程序。参见例如Sambrook等人，Molecular Cloning：ALaboratory Manual(第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，ColdSpring Harbor，N.Y.(1989))。本文所述的分析化学、有机合成化学、及医学和药物化学的实验室程序和技术及使用的相关命名法是本领域熟知的和常用的。标准技术可用于化学合成、化学分析、药物制备、配制、和递送及患者的治疗。
除非另外指明，根据本公开内容使用的以下术语应理解为具有以下含义：
如本文所使用，术语白细胞介素-17A、IL-17A、IL17A、IL-17、IL17、CTLA8、CTLA-8、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原8和白细胞介素-17A前体是同义的并且可替换使用。这些术语中的每一个是指同二聚体蛋白，除非另外说明。
如本文所使用，术语白细胞介素-17F、IL-17F、IL17F、ML-1、ML1、白细胞介素-24、IL-24、IL24和白细胞介素-17F前体是同义的并且可替换使用。这些术语中的每一个是指IL-17F同二聚体蛋白，除非另外说明。
如本文所使用，术语“抗体”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白(Ig)分子的免疫活性部分，即包含特异性结合抗原(与抗原免疫反应)的抗原结合位点的分子。“特异性结合”或“免疫反应”或“针对”是指抗体与所需的抗原的一个或多个抗原决定簇反应并且与其它多肽不反应或以更低的亲和力(Kd＞10-6)结合。抗体包括但不限于，多克隆抗体，单克隆抗体，嵌合抗体，dAb(结构域抗体)，单链抗体，Fab、Fab’和F(ab′)2片段，scFv和Fab表达文库。
已知基本结构单元包含四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链组成，每对具有一条“轻链”(约25kDa)和一条“重链”(约50-70kDa)。每条链的氨基末端部分包括主要负责抗原识别的约100至110个或以上氨基酸的可变区。每条链的羧基末端部分界定了主要负责效应子功能的恒定区。一般来说，由人获得的抗体分子涉及IgG、IgM、IgA、IgE和IgD任何类，其通过存在于分子中的重链的性质而相互不同。某些类还具有亚类，例如IgG1、IgG2及其它。而且，在人类中，轻链可以是κ链或λ链。
如本文所使用的术语“单克隆抗体”(MAb)或“单克隆抗体组合物”是指仅包含由独特的轻链基因产物和独特的重链基因产物组成的抗体分子的一种分子种类的抗体分子种群。特别地，该种群的所有分子中的单克隆抗体的互补决定区(CDR)均相同。MAb包含能够与抗原的特定表位免疫反应的抗原结合位点，所述抗原特征在于对抗原具有独特的结合亲和力。
一般来说，由人获得的抗体分子涉及任何类IgG、IgM、IgA、IgE和IgD，其通过存在于分子中的重链的性质而相互不同。某些类还具有亚类，例如IgG1、IgG2及其它。而且，在人中轻链可以是κ链或λ链。
术语“抗原结合位点”或“结合部分”是指免疫球蛋白分子参与抗原结合的部分。抗原结合位点是由重链(“H”)和轻链(“L”)的N-末端可变(“V”)区的氨基酸残基形成。重链和轻链的V区内称为“高变区”的3个高度发散的延伸介于称为“框架区”或“FR”的更保守的侧面延伸之间。因此，术语“FR”是指通常在免疫球蛋白中的高变区之间和邻近免疫球蛋白中的高变区天然存在的氨基酸序列。在抗体分子中，轻链的3个高变区和重链的3个高变区在三维空间中相对于彼此排列以形成抗原结合表面。抗原结合表面互补于结合的抗原的三维表面，并且每条重链和轻链的3个高变区称为“互补决定区”或“CDR”。每个结构域氨基酸的分配是根据Kabat Sequences of Proteins of immunologicalInterest(National Institutes of Health，Bethesda，Md.(1987和1991))，或Chothia & Lesk J.Mol.Biol.196：901-917(1987)，Chothia等人，Nature 342：878-883(1989)。
如本文所使用，术语“表位”包括能够特异性结合到免疫球蛋白或其片段或T-细胞受体的任何蛋白决定簇。术语“表位”包括能够特异性结合到免疫球蛋白或T-细胞受体的任何蛋白决定簇。表位决定簇通常由分子例如氨基酸或糖侧链的化学活性的表面分类组成并且通常具有特定的三维结构特征，以及特定的带电特征。据说当解离常数≤1μM、例如≤100nM、优选地≤10nM并且更优选地≤1nM时，抗体特异性结合抗原。
如本文所使用，术语“免疫结合”和“免疫结合性质”是指在免疫球蛋白分子和对免疫球蛋白特异性的抗原之间发生的非共价相互作用类型。免疫结合相互作用的强度或亲和力可以以相互作用的解离常数(Kd)的方式来表达，其中Kd越小表示亲和力越强。选择的多肽的免疫结合性质可使用本领域熟知的方法来定量。这些方法之一需要测量抗原结合位点/抗原复合体形成和解离的速率，其中那些速率取决于复合体伴侣的浓度、相互作用的亲和力，及同样地影响两个方向的速率的几何参数。因此，“结合速率常数”(Kon)和“解离速率常数”(Koff)两者可通过计算浓度及结合和解离的实际速率来测定。(参见Nature 361：186-87(1993))。Koff/Kon的比率使得与亲和力不相关的所有参数抵消，并且等于解离常数Kd。(一般参见，Davies等人，(1990)Annual RevBiochem 59：439-473)。如通过测定例如放射性配体结合测定或本领域技术人员已知的类似测定所测量，据说当平衡结合常数(Kd)≤1μM、优选地≤100nM、更优选地≤10nM并且最优选地≤100pM至约1pM时，本发明的抗体特异性结合到IL-17F和/或IL-17A/IL-17F异二聚体。
如本文所使用的术语“分离的多核苷酸”应指基因组、cDNA或合成来源的或它们的一些组合的多核苷酸，由于其来源，“分离的多核苷酸”(1)与全部或部分的多核苷酸不结合，其中“分离的多核苷酸”在自然界中被发现，(2)可操作地连接至在自然界中不与其连接的多核苷酸，或(3)在自然界中不作为较大序列的一部分而存在。根据本发明的多核苷酸包括编码SEQ ID NOS：1、5、9、13、17、21、25、29、33、37和41中所示的重链免疫球蛋白分子的核酸分子、及编码SEQID NOS：3、7、11、15、19、23、27、31、35、39和43中所示的轻链免疫球蛋白分子的核酸分子。
本文提到的术语“分离的蛋白质”是指cDNA、重组RNA或合成来源的或它们的一些组合的蛋白质，由于其来源或衍生的来源，“分离的蛋白质”(1)与在自然界中发现的蛋白质不结合，(2)不含来自相同的来源的其它蛋白质，例如无不含海洋蛋白质，(3)由来自不同物种的细胞表达，或(4)在自然界中不存在。
本文作为通用术语使用的术语“多肽”是指天然蛋白质、片段、或多肽序列的类似物。因此，天然蛋白质片段及类似物是多肽属的种类。根据本发明的多肽包含SEQ ID NOS：2、6、10、14、18、22、26、30、34、38和42中所示的重链免疫球蛋白分子，和SEQ ID NOS：4、8、12、16、20、24、28、32、36、40和44中所示的轻链免疫球蛋白分子，以及由包含重链免疫球蛋白分子和轻链免疫球蛋白分子(例如κ轻链免疫球蛋白分子)的组合形成的抗体分子，并且反之亦然，及其片段及类似物。
如本文所使用应用于对象的术语“天然存在”是指可在自然界中发现的对象的事实。例如，存在于生物体(包括病毒)中可从自然界来源分离并且没有被实验室人员有意修饰或以其它方式修饰的多肽或多核苷酸序列是天然存在的。
如本文所使用的术语“可操作地连接”是指所描述的组分的位置处于容许它们以其预期的方式发挥功能的关系。“可操作地连接”至编码序列的对照序列以这样的方式配接以使在与对照序列相容的条件下实现编码序列的表达。
如本文所使用的术语“控制序列”是指完成编码序列表达和加工效果所需的多核苷酸序列，所述控制序列与编码序列连接。控制测序的性质根据原核生物中的宿主生物体而不同，该控制序列一般包括启动子、核糖体结合位点和真核生物中的转录终止序列，一般来说，该控制序列包括启动子和转录终止序列。术语“控制序列”预期至少包括，其存在对于表达和加工来说是必要的所有组分，并且还可包括其存在是有益的另外组分，例如前导序列和融合伴侣序列。本文提到的术语“多核苷酸”是指至少10个碱基长度的核苷酸的硼聚合物，所述核苷酸为核糖核苷酸或脱氧核苷酸或任一类型核苷酸的修饰形式。该术语包括DNA的单链和双链形式。
本文提到的术语“寡核苷酸”包括通过天然存在的和非天然存在的寡核苷酸键合连接在一起的天然存在的核苷酸和修饰的核苷酸。寡核苷酸是一般包含200个碱基或更少的长度的多核苷酸子集。优选地寡核苷酸是10至60个碱基长度并且最优选地是12、13、14、15、16、17、18、19或20至40个碱基长度。虽然寡核苷酸可以是双链的(例如用于构建基因突变)，但寡核苷酸通常是单链的(例如对于探针)。本发明的寡核苷酸是正义的或反义的寡核苷酸。
本文提到的术语“天然存在的核苷酸”包括脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。本文提到的术语“修饰的核苷酸”包括具有修饰的或取代的糖基等的核苷酸。本文提到的术语“寡核苷酸键合”包括寡核苷酸键合，例如硫代磷酸酯、二硫硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯(phosphorodiselenoate)、phosphoroanilothioate、phoshoraniladate、氨基磷酸酯(phosphoronmidate)等。参见例如LaPlanche等人，Nucl.AcidsRes.14：9081(1986)；Stec等人，J.Am.Chem.Soc.106：6077(1984)，Stein等人，Nucl.Acids Res.16：3209(1988)，Zon等人，Anti CancerDrug Design 6：539(1991)；Zon等人，Oligonucleotides and Analogues：A Practical Approach，第87-108页(F.Eckstein编，Oxford UniversityPress，Oxford England(1991))；Stec等人，美国专利No.5,151,510；Uhlmann和Peyman Chemical Reviews 90：543(1990)。如果需要，寡核苷酸可包括用于检测的标记。
本文提到的术语“选择性杂交”是指可检测性和特异性结合。在杂交和冲洗条件下，根据本发明的多核苷酸、寡核苷酸及其片段选择性杂交至核酸链，所述杂交和冲洗条件使与非特异性核酸可检测性结合的可察觉的量最小化。可使用高度严格以实现本领域已知的和本文所讨论的选择性杂交条件。一般来说，多核苷酸、寡核苷酸及本发明的片段和目标核酸序列之间的核酸序列同源性将为至少80％，并且更典型地，优选地至少85％、90％、95％、99％和100％的提高的同源性。如果两个氨基酸序列之间存在部分或完全同一性，则它们是同源的。例如当比对两个序列以达到最大匹配时85％同源性是指85％的氨基酸具有同一性。最大化匹配中允许有缺口(匹配的两个序列中的任一个)，缺口长度优选5个或更少，更优选具有2个或更少。可选地且优选地，如果使用具有突变数据矩阵的程序ALIGN，两个蛋白质序列(或至少30个氨基酸长度的源自它们的多肽序列)的比对评分大于5(以标准偏差单位计)并且缺口罚分为6或更高时，则它们是同源的(该术语如本文所使用的)。参见Dayhoff，M.O.，Atlas of ProteinSequence and Structure，第101-110页(第5卷，National BiomedicalResearch Foundation(1972))和该卷的增刊2，第1-10页。当使用ALIGN程序最佳比对时，如果两个序列或其部分的氨基酸具有大于或等于50％的同一性，则它们是更优选地同源。本文使用的术语“对应于”是指多核苷酸序列与参考多核苷酸序列的全部或部分同源(即，具有同一性，不严格的进化性相关)，或指多肽序列与参考多肽序列具有同一性。相比之下，本文使用的术语“互补于”是指互补序列与参考多核苷酸序列的全部或部分同源。举例说明，核苷酸序列“TATAC”对应于参考序列“TATAC”并且互补于参考序列“GTATA”。
以下术语用于描述两个或多个多核苷酸或氨基酸序列之间的序列关系：“参考序列”、“比较窗口”、“序列同一性”、“序列同一性百分比”和“基本同一性”。“参考序列”是用作序列比较的基础的确定序列，参考序列可以是较大序列的子集，例如作为全长cDNA或序列表中给定的基因序列的片段或可包含完整的cDNA或基因序列。一般来说，参考序列为至少18个核苷酸或6个氨基酸长度，经常至少24个核苷酸或8个氨基酸长度，并且经常至少48个核苷酸或16个氨基酸长度。因为两个多核苷酸或氨基酸序列各自可(1)包含两个分子之间相似的序列(即，完整多核苷酸或氨基酸序列的一部分)，以及(2)还可包含两个多核苷酸或氨基酸序列之间趋异的序列，所以通常通过在“比较窗口”上比较两个分子的序列进行两个(或以上)分子之间的序列比较以鉴定和比较序列相似性的局部区域。如本文所使用，“比较窗口”是指至少18个连续核苷酸位置或6个氨基酸的概念片段，其中多核苷酸序列或氨基酸序列可与至少18个连续核苷酸或6个氨基酸序列的参考序列相比较，并且其中比较窗口中的多核苷酸序列部分相较于参考序列(其不包含添加或缺失)可包含20％或更少的添加、缺失、取代等(即缺口)以达到两个序列的最佳比对。通过Smith和Waterman Adv.Appl.Math.2：482(1981)的局部同源性算法，通过Needleman和Wunsch J.Mol.Biol.48：443(1970)的同源比对算法，通过Pearson和Lipman Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)85：2444(1988)的相似法的研究，通过这些算法的计算机执行(Wisconsin Genetics Software PackageRelease 7.0(Genetics Computer Group，575Science Dr.，Madison，Wis.)中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，Geneworks或MacVector软件包)，或通过检查可进行用于比对比较窗口的序列的最佳比对，并且选择通过多种方法产生的最佳比对(即，在比较窗口导致同源的最高百分比)。
术语“序列同一性”是指在比较窗口上两个多核苷酸或氨基酸序列具有同一性(即，基于核苷酸-核苷酸或残基-残基)。术语“序列同一性百分比”是通过下述来计算：在比较窗口上比较两个最佳比对序列，确定在两个序列上存在的相同核酸碱基(例如A、T、C、G、U或I)或残基的位置的数目以产生匹配的位置的数目，将匹配的位置的数目除以比较窗口中位置的总数目(即窗口的大小)，并且将结果乘以100以产生序列同一性百分比。如本文所使用的术语“基本同一性”表示多核苷酸或氨基酸序列的特征，其中多核苷酸或氨基酸包含这样的序列：其与参考序列相比，在具有至少18个核苷酸(6个氨基酸)位置的比较窗口、通常具有至少24-48个核苷酸(8-16个氨基酸)位置的窗口上具有至少85百分比的序列同一性，优选地至少90至95百分比的序列同一性，更通常至少99百分比的序列同一性，其中序列同一性百分比通过在比较窗口上比较参考序列与可包括缺失或添加总计20百分比或更少的的序列来计算。参考序列可以是较大序列的子集。
如本文所使用，20个常规氨基酸及它们的缩写遵循常规用法。参见Immunology-A Synthesis(第2版，E.S.Golub和D.R.Gren编，Sinauer Associates，Sunderland7 Mass.(1991))。20个常规氨基酸的立体异构体(例如D-氨基酸)，非天然氨基酸例如α-、α-双取代氨基酸、N-烷基氨基酸、乳酸，和其它非常见氨基酸还可以是本发明的多肽的合适的组分。非常见氨基酸的实例包括：4-羟基脯氨酸、γ-羧基谷氨酸、ε-N，N，N-三甲基赖氨酸、ε-N-乙酰基赖氨酸、O-磷酸丝氨酸、N-乙酰基丝氨酸、N-甲酰基甲硫氨酸、3-甲基组氨酸、5-羟基赖氨酸、σ-N-甲基精氨酸、和其它类似的氨基酸和亚氨基酸(例如4-羟基脯氨酸)。本文使用的多肽标记法中，根据标准用法和惯例，左手方向是氨基末端方向并且右手方向是羧基末端方向。
类似地，除非另外指出，单链多核苷酸序列的左手端是5′端，双链多核苷酸序列的左手方向称为5′方向。5′到3′添加RNA转录物的方向称为转录方向，在DNA链上与RNA具有相同的序列并且对于RNA转录物的5′端为5′的序列区称为“上游序列”，DNA链上与RNA具有相同的序列并且对于RNA转录物的3′端为3′的序列区称为“下游序列”。
应用于多肽的术语“基本同一性”是指当例如使用默认缺口权重(default gap weight)通过程序GAP或BESTFIT最佳比对时，两条肽序列共享至少80百分比的序列同一性，优选地至少90百分比的序列同一性，更优选地至少95百分比的序列同一性，并且最优选地至少99百分比的序列同一性。
优选地，不具有同一性的残基位置由保守氨基酸取代而不同。
保守氨基酸取代是指具有相似侧链的残基的可互换性。例如一组具有脂肪族侧链的氨基酸是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；一组具有脂肪族-羟基侧链的氨基酸是丝氨酸和苏氨酸；一组具有含酰胺侧链的氨基酸是天冬酰胺和谷氨酰胺；一组具有芳香族侧链的氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；一组具有碱性侧链氨基酸是赖氨酸、精氨酸和组氨酸；及一组具有含硫侧链氨基酸是半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸取代组是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。
如本文所讨论，认为抗体或免疫球蛋白分子的氨基酸序列中的轻微改变包含于本发明，条件是氨基酸序列中的改变保持至少75％，更优选地至少80％、90％、95％，并且最优选地99％。特别地，包括保守氨基酸取代。保守取代是那些发生于氨基酸家族内与它们的侧链相关的取代。基因编码的氨基酸一般分为以下家族：(1)酸性氨基酸是天冬氨酸、谷氨酸；(2)碱性氨基酸是赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)非极性氨基酸是丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸，及(4)不带电极性氨基酸是甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。亲水氨基酸包括精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、组氨酸、赖氨酸、丝氨酸和苏氨酸。疏水氨基酸包括丙氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。氨基酸的其它家族包括(i)丝氨酸和苏氨酸，其为脂肪族-羟基家族；(ii)天冬酰胺和谷氨酰胺，其为包含酰胺的家族；(iii)丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸，其为脂肪族家族；及(iv)苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，其为芳香族家族。例如，合理预期分别用异亮氨酸或缬氨酸替换亮氨酸、用谷氨酸替换天冬氨酸、用丝氨酸替换苏氨酸或用结构相关的氨基酸相似替换氨基酸对生成分子的结合或性质将无重大影响，特别是如果替换不涉及框架位置内的氨基酸。功能肽中的氨基酸改变结果是否可容易地通过测定多肽衍生物的比活性来确定。该测定在本文详述。抗体或免疫球蛋白分子的片段或类似物可由本领域的普通技术人员容易地制备。片段或类似物优选的氨基端和羧基端出现在功能结构域的边界附近。结构和功能结构域可通过将核苷酸和/或氨基酸序列数据与公共或专有序列数据库比较来鉴定。优选地，计算机化比较方法用于鉴定序列基序或预测出现在已知结构和/或功能的其它蛋白质上的蛋白质构象结构域。已知鉴定折叠成已知三维结构的蛋白质序列的方法。Bowie等人，Science 253：164(1991)。因此，上述实例证明本领域技术人员可识别可用于界定根据本发明的结构和功能结构域的序列基序和结构构象。
优选的氨基酸取代是以下氨基酸取代，所述氨基酸取代(1)降低对蛋白质水解的敏感性，(2)降低对氧化作用的敏感性，(3)改变用于形成蛋白质复合体的结合亲和力，(4)改变结合亲和力，和(4)赋予或修饰此类似物的其它物理化学或功能性质。类似物可包括序列的多种突变型蛋白而非天然存在的肽序列。例如单个或多个氨基酸取代(优选地是保守氨基酸取代)可产生于天然存在的序列中(优选地在形成分子间接触的结构域外的多肽部分)。保守氨基酸取代不应该大致上改变亲本序列的结构特征(例如替换氨基酸不应该倾向于破坏出现在亲本序列中的螺旋，或破坏表征亲本序列的二级结构的其它类型)。本领域公认的多肽二级和三级结构的实例描述于Proteins，Structuresand Molecular Principles(Creighton编，W.H.Freeman and Company，New York(1984))；Introduction to Protein Structure(C.Branden和J.Tooze编，Garland Publishing，New York，N.Y.(1991))；及Thornton等人，Nature 354：105(1991)。
如本文所使用的术语“多肽片段”是指具有氨基末端和/或羧基末端缺失但其中残留的氨基酸序列与推导的天然存在序列(例如从全长cDNA序列)在对应位置具有同一性的多肽。片段通常为至少5、6、8或10个氨基酸长度，优选地至少14个氨基酸长度，更优选地至少20个氨基酸长度，通常至少50个氨基酸长度，并且甚至更优选地至少70个氨基酸长度。如本文所使用的术语“类似物”是指由与推导的氨基酸序列的部分具有基本同一性的至少25个氨基酸的片段构成并且在合适的结合条件下仅特异性结合到IL-17F或特异性结合到IL-17A/IL-17F异二聚体(即复合体)的多肽。典型地，多肽类似物包含关于天然存在的序列的保守氨基酸取代(或添加或缺失)。类似物通常是至少20个氨基酸长度，优选地至少50个氨基酸长度或更长，并且可通常与全长天然存在的多肽一样长。
肽类似物作为具有类似于模板肽性质的非肽药物常用于制药业。这些类型的非肽化合物称为“肽模拟物(peptide mimetic)”或“模拟肽(peptidomimetic)”。Fauchere，J.Adv.Drug Res.15：29(1986)，Veber和Freidinger TINS第392页(1985)；以及Evans等人，J.Med.Chem.30：1229(1987)。这种化合物的开发通常借助于计算机分子模型。与治疗上使用的肽在结构上类似的肽模拟物可用于产生等同的治疗或预防效果。一般来说，肽模拟物结构上类似于范本多肽(即具有生化性质或药理学活性的多肽)例如人抗体，但具有通过本领域熟知的方法被选自由-CH2NH-、-CH2S-、-CH2-CH2-、-CH＝CH-(顺式和反式)、-COCH2-、CH(OH)CH2-和-CH2SO-组成的组的键合所任选地替换的一种或多种肽键合。用相同的类型的D-氨基酸(例如D-赖氨酸替换L-赖氨酸)系统取代共有序列的一个或多个氨基酸可用于产生更加稳定的肽。另外，包含共有序列或基本相同的共有序列改变的限制性肽可通过本领域已知方法产生(Rizo和Gierasch Ann.Rev.Biochem.61：387(1992))；例如通过添加内部半胱氨酸残基能够形成使肽环化的分子内二硫键。
本文使用的术语“试剂(agent)”表示化合物、化合物的混合物、生物大分子、或从生物材料制得的提取物。
如本文所使用，术语“标记”或“标记的”是指掺入可检测的标记物，例如通过掺入放射标记的氨基酸或附接到可通过标记的抗生物素蛋白(例如包含可通过光学方法或量热法检测的荧光标记物或酶活性的链霉抗生物素蛋白)检测的生物素基部分的多肽。在某些情况下，标记或标记物还可以是治疗性的。标记多肽和糖蛋白的多种方法是本领域已知的并且可以使用。用于多肽的标记的实例包括但不限于以下：放射性同位素或放射性核素(例如3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)、荧光标记(例如FITC、罗丹明、镧系磷光体)、酶标记(例如辣根过氧化物酶、p-半乳糖苷酶、萤光素酶、碱性磷酸酶)、化学发光、生物素基组、由二级报道分子(例如亮氨酸拉链对序列、二级抗体的结合位点、金属结合结构域、表位标签)识别的预设的多肽表位。在一些实施方案中，由多种长度的间隔臂附接标记以降低可能的位阻。如本文所使用的术语“药用试剂或药物”是指当适当地施用给患者时能够诱导所需的治疗效果的化合物或组合物。
本文使用的其它化学术语依照本领域常规用法，如由McGraw-Hill化学术语词典(McGraw-Hill Dictionary of ChemicalTerms)所示例(Parker，S.编，McGraw-Hill，San Francisco(1985))。
本文使用的术语“抗肿瘤剂”是指具有抑制人肿瘤、特别是恶性(癌性)损害例如癌、肉瘤、淋巴瘤或白血病的发展或进展的功能特性的试剂。抑制转移通常是抗肿瘤剂的特性。
如本文所使用，“基本纯的”是指对象种类是存在的占优势的种类(即，以于摩尔计，它比组合物中的任何其它单个种类更丰富)，并且优选地基本纯化的馏分是其中对象种类包含所有存在的大分子种类的至少约50百分比(以摩尔计)的组合物。
一般来说，基本纯的组合物包含存在于组合物中的所有大分子种类的多于约80百分比，更优选地多于约85％、90％、95％和99％。最优选地，对象种类被纯化至必需的均一性(通过常规检测方法未能在组合物中检测出污染种类)，其中组合物基本上由单一大分子种类组成。
自身免疫性疾病包括，例如获得性免疫缺陷综合征(AIDS，其为具有自身免疫性组分的病毒性疾病)、斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、自身免疫性艾迪生病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳病(AIED)、自身免疫性淋巴细胞增生综合征(ALPS)、自身免疫性血小板减少性紫癜(ATP)、贝切特氏病、心肌症、口炎性腹泻-疱疹样皮炎(celiac sprue-dermatitis hepetiformis)；慢性疲劳免疫功能紊乱综合征(CFIDS)、慢性炎性脱髓鞘多发性神经病(CIPD)、疤痕性类天疱疮(cicatricial pemphigold)、冷凝集素病、CREST综合征(crest syndrome)、克罗氏病、德戈斯氏病、幼年型皮肌炎、盘状狼疮、原发性混合型冷球蛋白血症、纤维肌痛-纤维肌炎、格雷夫斯氏病、吉兰-巴雷综合征、桥本甲状腺炎、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA肾病、胰岛素依赖型糖尿病、幼年型慢性关节炎(斯提耳氏病)、幼年型类风湿性关节炎、美尼尔氏综合症(Ménière’s disease)、混合性结缔组织病、多发性硬化、重症肌无力、恶性贫血(pernacious anemia)、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多发性肌炎和皮肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬变、银屑病、银屑病关节炎、雷诺氏现象、莱特尔综合征、风湿热、类风湿性关节炎、肉样瘤病、硬皮病(进行性系统性硬化病(PSS)，也称为系统性硬化病(SS))、干燥综合征、僵人综合征、系统性红斑狼疮、大动脉炎、颞动脉炎/巨细胞动脉炎溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癜风和韦格纳氏肉芽肿病。
炎性病症包括，例如慢性和急性炎性病症。炎性病症的实例包括阿尔茨海默氏病、哮喘、特应性变态反应、变态反应、动脉粥样硬化、支气管哮喘、湿疹、肾小球性肾炎、移植物抗宿主病(graft vs.hostdisease)、溶血性贫血、骨关节炎、败血病、中风、组织和器官移植、血管炎、糖尿病性视网膜病和呼吸机所致的肺损伤。
huIL-17F抗体
本发明的单克隆抗体(例如全人单克隆抗体)结合IL-17F，并且在一些实施方案中，结合IL-17A/IL-17F异二聚体复合体，但不结合IL-17A或IL-17A同二聚体。这些单克隆抗体具有抑制IL-17F诱导的促炎细胞因子(例如IL-6)产生的能力。测定抑制，例如通过本文所述IL-17F刺激的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)细胞测定。
本发明的示例性抗体包括，例如本文所述5E12抗体、41B10抗体、11C5抗体、21B10抗体、1F1抗体、2E12抗体、5D3抗体、22F8抗体、28B11抗体、41A4抗体和43G6抗体。这些抗体对人IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体显示特异性，并且它们已显示在体外抑制促炎细胞因子IL-6的人IL-17F诱导。
本文所述的huIL-17F单克隆抗体中的每一个包括如氨基酸和以下所列的相应核酸序列中所示的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)。
5E12抗体包括由SEQ ID NO：1中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：2)、和由SEQ ID NO：3中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO：4)。
＞5E12VH核酸序列(SEQ ID NO：1)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTG
GCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTT
GATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG
GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAGTTGGAATAGTGGTACCATA
GGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAG
ACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAG
AGCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGAACTGTATA
TCAGTGACTGGGACTCCTACTCCTACGGTATGGACGTCTGGGGC
CAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
 ＞5E12VH氨基酸序列(SEQ ID NO：2)
QVQLVQSGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGK
GLEWVSGISWNSGTIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRA
EDTALYYCAKELYISDWDSYSYGMDVWGQGTTVTVSS
＞5E12VL核酸序列(SEQ ID NO：3)
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCC
AGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTT
AGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG
CTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGC
ATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCA
CTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTAT
TACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCTTTCGGCGGAGGGACCA
AGGTGGAGATCAAA
＞5E12VL氨基酸序列(SEQ ID NO：4)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPR
LLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYG
SSPFGGGTKVEIK
41B10抗体包括由SEQ ID NO：5中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：6)、和由SEQ ID NO：7中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO：8)。
＞41B10VH核酸序列(SEQ ID NO：5)
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTAAAGCCTG
GGGGGTCCCTTAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTC
AGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG
GGCTGGAATGGGTTGGCCGTATTAAAAGCAAAACTGATGGTGG
GACAACAGACTACGTTGCACCCGTGAAAGGCAGATTCACCATC
TCAAGAGATGATTCAAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACA
GCCTGAAAACCGAGGACACAGCCGTATATTACTGTACCACATCG
TATAGCAGTTACTGGTTCCCCTACTACTTTGACTACTGGGGCCA
GGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
＞41B10VH氨基酸序列(SEQ ID NO：6)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKG
LEWVGRIKSKTDGGTTDYVAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLK
TEDTAVYYCTTSYSSYWFPYYFDYWGQGTLVTVSS
＞41B10VL核酸序列(SEQ ID NO：7)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGTCTGCATCTGT
AGGAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGGTATT
AGCAGCTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCC
CTAAGTCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTC
CCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCT
CACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACT
GCCAACAGTATAATAGTTACCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACA
CGACTGGAGATTAAA
＞41B10VL氨基酸序列(SEQ ID NO：8)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPK
SLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYN
SYPITFGQGTRLEIK
The 11C5抗体包括由SEQ ID NO：9中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：10)、和由SEQ ID NO：11中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO：12)。11C5抗体的轻链可变区的氨基酸序列包括位于5’端以将残基转化为相应的人种系序列中发现的残基的突变。11C5抗体的轻链可变区氨基酸序列的非突变版本在SEQ IDNO：102中示出、11C5抗体的轻链可变区核酸序列的非突变版本在SEQ ID NO：103中示出。
＞11C5VH核酸序列(SEQ ID NO：9)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCT
GGGGCCTCAGTGAAGGTT
TCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCATCTATTATTTGCAC
TGGGTGCGACAGGCC
CCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAATAATCAACCCTAGTG
GTGGTAGGACAAACTAC
GCACAGAAGTTCCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACCCG
TCCACGAACACAGTCTAC
ATGGAACTGAGCAGCCTGACATCTGAGGACGCGGCCGTGTATT
ACTGTGCGAGAGGGGAA
TTTAGCAGTGGCTGGCTTGACTACTGGGGCCAAGGGACCACGG
TCACCGTCTCCTCA
＞11C5VH氨基酸序列(SEQ ID NO：10)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTIYYLHWVRQAPGQ
GLEWMGIINPSGGRTNY
AQKFQGRVTMTRDPSTNTVYMELSSLTSEDAAVYYCARGEFSSG
WLDYWGQGTTVTVS S
＞11C5VL核酸序列(SEQ ID NO：11)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCATCTGT
AGGAGACAGAGTCACC
ATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCCTG
GTATCAGCATAAACCA
GGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCA
AAGTGGGGTCCCATCA
AGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCAT
CAGCAGCCTGCAGCCT
GAAGATTTTGCAACTTACTATTGTCAACAGGCTAATAGTTTCCC
GCTCACTTTCGGCGGA
GGGACCAAGGTGGAGATCAAA
＞11C5VL氨基酸序列(SEQ ID NO：12)
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQHKPGKAPK
LLIYAASSLQSGVPS
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPLTFGGGTKVEIK
＞非突变11C5VL核酸序列(SEQ ID NO：102)
GACATCGTGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCATCTGTA
GGAGACAGAGTCACC
ATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCCTG
GTATCAGCATAAACCA
GGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCA
AAGTGGGGTCCCATCA
AGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCAT
CAGCAGCCTGCAGCCT
GAAGATTTTGCAACTTACTATTGTCAACAGGCTAATAGTTTCCC
GCTCACTTTCGGCGGA
GGGACCAAGGTGGAGATCAAA
＞非突变11C5VL氨基酸序列(SEQ ID NO：103)
DIVMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQHKPGKAPK
LLIYAASSLQSGVPS
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPLTFGGGTKVEIK
21B10抗体包括由SEQ ID NO：13中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：14)、和由SEQ ID NO：15中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO：16)。
＞21B10VH核酸序列(SEQ ID NO：13)
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTG
GGGGGTCCCTGAGACTC
TCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATAGCATGAA
CTGGGTCCGCCAGGCT
CCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTGGTGGTA
GTAGTACCATATACTAC
GCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATG
CCAAGAACTCACTGTAT
CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGACGAGGACACGGCTGTGTATT
ACTGTGCGAGAGAGGGC
TATGTTTCGGGGACCTATTACAACTACTACTACGGTATGGACGTC
TGGGGCCAAGGGACC
ACGGTCACCGTCTCCTCA
＞21B10VH氨基酸序列(SEQ ID NO：14)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKG
LEWVSYISGGSSTIYY
ADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCAREGYVSG
TYYNYYYGMDVWGQGT
TVTVSS
＞21B10VL核酸序列(SEQ ID NO：15)
GAAATTGTGTTGACCCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCC
AGGGGAAAGAGCCACC
CTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGTTACTTAGCCTG
GTACCAACAGAAACCT
GGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCACCCAACAGGGC
CACTGGCATCCCAGCC
AGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCA
TCAGCAGCCTAGAGCCT
GAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGTC
GCTCACTTTCGGCGGA
GGGACCAAGGTGGAGATCAAA
＞21B10VL氨基酸序列(SEQ ID NO：16)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRL
LIYDAPNRATGIPA
RFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWSLTFGGGTKVEIK
1F1抗体包括由SEQ ID NO：17中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：18)、和由SEQ ID NO：19中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO 20)。1F1抗体的轻链可变区的氨基酸序列包括位于5’端以将残基转化为相应的人种系序列中发现的残基的突变。1F1抗体的轻链可变区氨基酸序列的非突变版本在SEQ ID NO：104中示出、和1F1抗体的轻链可变区核酸序列的非突变版本在SEQ IDNO：105中示出。
＞1F1VH核酸序列(SEQ ID NO：17)
GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTG
GGGGGTCCCTGAGACTC
TCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGTCATGAG
CTGGGTCCGCCAGGTT
CCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTCGTG
GTGGTAACACATTCTAC
GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATT
CCAAGAACACGCTGTAT
CTGCAAATGGACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATT
ACTGTGCGAAAGATGAT
CGGCGTATAGCAGCAGGTAGTTTTGACTATTGGGGCCAAGGGA
CCACGGTCACCGTCTCC
TCA
＞1F1VH氨基酸序列(SEQ ID NO：18)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYVMSWVRQVPGKG
LEWVSAISGRGGNTFY
ADSVKGRF TISRDNSKNTLYLQMDSLRAEDTAVYYCAKDDRRIAA
GSFDYWGQGTTVTVS
S
＞1F1VL核酸序列(SEQ ID NO：19)
GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTA
GGAGACAGAGTCACC
ATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCAGTGCTTTAGCCTG
GTATCAGCAGAAACCA
GGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGTCTCCAGTTTGGA
AAGTGGGGTCCCATCA
AGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCAT
CAGCAGCCTGCAGCCT
GAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTTTAATAGTTACCCT
CTCACTTTCGGCGGA
GGGACCAAGGTGGAGATCAAA
＞1F1VL氨基酸序列(SEQ ID NO：20)
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKL
LIYDVS SLESGVPS
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLTFGGGTKVEIK
＞非突变1F1VL核酸序列(SEQ ID NO：104)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGT
AGGAGACAGAGTCACC
ATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCAGTGCTTTAGCCTG
GTATCAGCAGAAACCA
GGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGTCTCCAGTTTGGA
AAGTGGGGTCCCATCA
AGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCAT
CAGCAGCCTGCAGCCT
GAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTTTAATAGTTACCCT
CTCACTTTCGGCGGA
GGGACCAAGGTGGAGATCAAA
＞非突变1F1VL氨基酸序列(SEQ ID NO：105)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKL
LIYDVS SLESGVPS
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLTFGGGTKVEIK
2E12抗体包括由SEQ ID NO：21中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：22)、和由SEQ ID NO：23中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO 24)。
＞2E12VH核酸序列(SEQ ID NO：21)
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCGG
GGGGGGTCCCTGAGACTC
TCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATAGCATGAA
CTGGGTCCGCCAGGCT
CCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTAGTAGTAG
TAGTGCCATATACTAC
GCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATG
CCAAGAACTCACTGTAT
CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGACGAGGACACGGCTGTGTATT
ACTGTGCGAGAGAGGGC
TATGCTTCGGGGAGGTATTACAACTACTACTACGGTATGGACGTC
TGGGGCCAAGGGACC
ACGGTCACCGTCTCCTCA
＞2E12VH氨基酸序列(SEQ ID NO：22)
EVQLVESGGGLVQRGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKG
LEWISYISSSSSAIYY
ADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCAREGYASG
RYYNYYYGMDVWGQGT
TVTVSS
＞2E12VL核酸序列(SEQ ID NO：23)
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCC
AGGGGAAAGAGCCACC
CTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTGGCCT
GGTACCAACAGAAACCT
GGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGC
CACTGGCATCCCAGCC
AGGTTCAGTGTCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCA
TCAGCAGCCTAGAGCCT
GAAGATTTTGCGGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAGCTGGTC
GCTCACTTTCGGCGGA
GGGACCAAGGTGGAGATCAAA
＞2E12VL氨基酸序列(SEQ ID NO：24)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRL
LIYDASNRATGIPA
RFSVSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSWSLTFGGGTKVEIK
5D3抗体包括由SEQ ID NO：25中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：26)、和由SEQ ID NO：27中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO：28)。
＞5D3VH核酸序列(SEQ ID NO：25)
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTG
GCAGGTCCCTGAGACTC
TCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTGATGATTATGCCATGCAC
TGGGTCCGGCAAGCT
CCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAGTTGGAATA
GTGGTAGCAGAGGCTAT
GCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACG
CCAAGAACTCCCTGTAT
CTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGGACACGGCCTTGTATT
ACTGTGCAAAAGATATG
GTCTACGCTTTGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCG
TCTCCTCA
＞5D3VH氨基酸序列(SEQ ID NO：26)
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKG
LEWVSGISWNSGSRGY
ADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDMVYAL
DVWGQGTTVTVSS
＞5D3VL核酸序列(SEQ ID NO：27)
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCC
AGGGGAAAGAGCCACC
CTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTTTTAGCGGCAGCTACTTAGC
CTGGTACCAGCAGAAA
CCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATACATCCAGCAG
GGCCACTGGCATCCCA
GACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCA
CCATCAGCAGACTGGAG
CCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTACGTG
GACGTTCGGCCAAGGG
ACCAAGGTGGAAATCAAA
＞5D3VL核酸序列(SEQ ID NO：28)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSFSGSYLAWYQQKPGQAPR
LLIYDTSSRATGIP
DRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGTWTFGQGTKVEIK
22F8抗体包括由SEQ ID NO：29中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：30)、和由SEQ ID NO：31中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO：32)。
＞22F8VH核酸序列(SEQ ID NO：29)
GAGGTGCAGTTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTG
GGGGGTCCCTGAGACTC
TCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAA
CTGGGTCCGCCAGGCT
CCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTATTAGTGGTCGTG
GTGGTAGCATATACTAC
GCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATT
CCAAGAACACGCTGTAT
CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATT
ACTGTGCGAAAGAGGAG
GCTACCTGGGACTTTGACTACTGGGGCCAAGGGACCACGGTCA
CCGTCTCCTCA
＞22F8VH氨基酸序列(SEQ ID NO：30)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKG
LEWVSTISGRGGSIYY
ADSVKGRF TISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKEEATWD
FDYWGQGTTVTVSS
＞22F8VL核酸序列(SEQ ID NO：31)
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCC
AGGGGAAAGAGCCACC
CTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTTCTTAGCCTG
GTTCCAACAGAAACCT
GGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGC
CACTGGCATCCCAGCC
AGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCA
TCAGCAGCCTAGAGCCT
GAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCC
TCCGACGTTCGGCCAA
GGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞22F8VL氨基酸序列(SEQ ID NO：32)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSFLAWFQQKPGQAPRLL
IYDASNRATGIPA
RFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPTFGQGTKVEIK
28B11抗体包括由SEQ ID NO：33中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：34)、和由SEQ ID NO：35中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO：36)。
＞28B11VH核酸序列(SEQ ID NO：33)
CAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTG
GAGGGTCCCTGAGACTC
TCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACTACTACATGAC
CTGGATCCGCCAGGCT
CCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTAGTACTGGTGGTAACATCTACTAC
GCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACG
CCCAGAATTCACTGTAT
CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATT
ACTGTGCGAGAGATGGG
GGTGTAATAATCTCAACTGCTATGTTTGACTATTGGGGCCAAGG
GACCACGGTCACCGTC
TCCTCA
＞28B11VH氨基酸序列(SEQ ID NO：34)
QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNYYMTWIRQAPGKG
LEWISYISSTGGNIYY
ADSVKGRFTISRDNAQNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGGVIIS
TAMFDYWGQGTTVTV
SS
＞28B11VL核酸序列(SEQ ID NO：35)
GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCCTCCTCCCTGTCTGCATCTGT
AGGAGACAGAGTCACC
ATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCAGTGCTTTAGCCTG
GTATCAGCAGAAACCA
GGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGA
AAGTGGGGTCCCATCA
AGGCTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCA
TCAGCAGCCTGCAGCCT
GAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTTTAATAGTTACCCG
CTCACTTTCGGCGGA
GGGACCAAGGTGGAGATCAAA
＞28B11VL氨基酸序列(SEQ ID NO：36)
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKL
LIYDASSLESGVPS
RLSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLTFGGGTKVEIK
41A4抗体包括由SEQ ID NO：37中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：38)、和由SEQ ID NO：39中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO：40)。
＞41A4VH核酸序列(SEQ ID NO：37)
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTG
GCAGGTCCCTGAGACTC
TCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTGATGATTGTGCCATGCA
CTGGGTCCGGCAAGCT
CCAGGGAAGGGCCTGGAATGGGTCTCAGGTATTAGTTGGAATA
GTGGTAGCGTATACTAT
GCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACG
CCAAGAATTCCCTGTAT
CTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGGACACGGCCTTGTATT
ACTGTACAAAAGAAAAA
TACAACTGGAACGACGAGGGGGAATACTTCTACGGAATGGACG
TCTGGGGCCAAGGGACC
ACGGTCACCGTCTCCTCA
＞41A4VH氨基酸序列(SEQ ID NO：38)
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDCAMHWVRQAPGKG
LEWVSGISWNSGSVYY
ADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCTKEKYNWN
DEGEYFYGMDVWGQGT
TVTVSS
＞41A4VL核酸序列(SEQ ID NO：39)
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCC
AGGGGAAAGAGCCACC
CTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAG
CCTGGTACCAGCAGAAA
CCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAG
GGCCACTGGCATCCCA
GACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCA
CCATCAGCAGACTGGAG
CCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCT
TTCGGCGGAGGGACC
AAGGTGGAGATCAAA
＞41A4VL氨基酸序列(SEQ ID NO：40)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPR
LLIYGAS SRATGIP
DRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSFGGGTKVEIK
43G6抗体包括由SEQ ID NO：41中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：42)、和由SEQ ID NO：43中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO：44)。
＞43G6VH3核酸序列(SEQ ID NO：41)
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTG
GGGGGTCCCTGAGACTC
TCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATAGCATGAA
CTGGGTCCGCCAGGCT
CCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAGTGGTA
GTAGTACCATATACTAC
GCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATG
CCAAGAACTCACTGTAT
CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGACGAGGACACGGCTGTGTATT
ACTGTGCGAGAGAGGGC
TATGTTTCGGGGACCTATTACAACTACTACTACGGTATGGACGTC
TGGGGCCAAGGGACC
ACGGTCACCGTCTCCTCA
＞43G6VH3氨基酸序列(SEQ ID NO：42)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKG
LEWVSYISSGSSTIYY
ADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCAREGYVSG
TYYNYYYGMDVWGQGT
TVTVSS
＞43G6VL3核酸序列(SEQ ID NO：43)
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCC
AGGGGAAAGAGCCACC
CTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGTTACTTAGCCTG
GTACCAACAGAAACCT
GGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCACCCAACAGGGC
CACTGGCATCCCAGCC
AGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCA
TCAGCAGCCTAGAGCCT
GAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGTC
GCTCACTTTCGGCGGA
GGGACCAAGGTGGAGATCAAA
＞43G6VL3氨基酸序列(SEQ ID NO：44)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRL
LIYDAPNRATGIPA
RFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWSLTFGGGTKVEIK
本发明的huIL-17F抗体还包括，例如表1中所示的重链互补决定区(VH CDR)、表2中所示的轻链CDR(VL CDR)，及其组合。
表1.来自结合和中和IL-17F生物活性的抗体克隆的VH CDR序列
Figure BDA0000126968330000431
表2.来自结合和中和IL-17F的抗体克隆的VL CDR序列
Figure BDA0000126968330000442
涵盖互补决定区(CDR)的氨基酸如E.A.Kabat等人所定义。(参见Kabat，EA等人，Sequences of Protein of immunological interest，FifthEdition(第5版)，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office(1991))。
本发明中还包括与本文所述的抗体结合到相同的表位的抗体。例如本发明的抗体特异性结合到IL-17F和/或IL-17A/IL-17F异二聚体复合体，其中抗体结合到包括人IL-17F(登录号AAH70124)上的一个或多个氨基酸残基的表位。在一些实施方案中，本发明的抗体特异性结合IL-17F和异二聚体IL-17A/IL-17F复合体，其中抗体结合到人IL-17F(例如登录号AAH70124)上的表位。
本领域技术人员应认识到无需过度实验就有可能确定是否单克隆抗体(例如全人单克隆抗体)与本发明的单克隆抗体(例如克隆5E12、41B10、11C5、21B10、1F1、2E12、5D3、22F8、28B11、41A4和43G6)具有相同的特异性，这通过确定是否前者阻止后者结合到IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体来进行。如果待测试的单克隆抗体与本发明的单克隆抗体竞争，如由本发明的单克隆抗体的结合减少所示，那么两个单克隆抗体结合到相同的或密切相关的表位。
用于测定单克隆抗体是否具有本发明的单克隆抗体的特异性的替代方法是将可溶性IL-17F和/或可溶性异二聚体IL-17A/IL-17F复合体蛋白质与本发明的单克隆抗体一起预孵育，然后加入待测试的单克隆抗体以测定是否待测试的单克隆抗体结合IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体的能力被抑制。如果待测试的单克隆抗体被抑制，那么很可能其与本发明的单克隆抗体具有相同的或功能上等同的表位特异性。
还可进行本发明的单克隆抗体的筛选，例如通过测量IL-17F-诱导的细胞因子和/或趋化因子的产生(例如IL-6、IL-8、G-CSF、GM-CSF、GRO-α、GRO-b、LIX、GCP-2、MIG、IP10、I-TAC、和MCP-1、RANTES、Eotaxin、SDF-1、和MIP3a)并且测定测试的单克隆抗体是否能够调节、阻断、抑制、降低、拮抗、中和或以其它方式干扰IL-17F-诱导的细胞因子和/或趋化因子的产生。
本领域已知的多种程序可用于生产针对IL-17F的单克隆抗体、或针对衍生物、片段、类似物同系物或其直系同源物的单克隆抗体。(参见，例如Antibodies：A Laboratory Manual，Harlow E和Lane D，1988，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，通过引用并入本文)。全人抗体是其中轻链和重链的整个序列(包括CDR)源自人基因的抗体分子。该抗体在本文称为“人抗体”或“全人抗体”。制备人单克隆抗体，例如使用以下提供的实例中所述的程序。人单克隆抗体还可通过使用三源杂交瘤技术、人B-细胞杂交瘤技术(参见Kozbor等人，1983 Immunol Today 4：72)制备；及EBV杂交瘤技术来制备人单克隆抗体(参见Cole等人，1985 MONOCLONALANTIBODIES AND CANCER THERAPY中，Alan R.Liss，Inc.，第77-96页)。可利用人单克隆抗体并且可通过使用人杂交瘤(参见Cote等人，1983.Proc Natl Acad Sci USA 80：2026-2030)或通过用EB病毒(Epstein BarrVirus)在体外转化人B细胞(参见Cole等人，1985 MONOCLONALANTIBODIES AND CANCER THERAPY中，Alan R.Liss，Inc.，第77-96页)来制备人单克隆抗体。
通过主要提供免疫血清的IgG馏分的熟知技术(例如使用蛋白质A或蛋白质G的亲和层析法)来纯化抗体。随后，或可选地，特异性抗原(免疫球蛋白搜索的靶标)或其表位可通过免疫亲和层析法固定在柱上以纯化免疫特异性抗体。免疫球蛋白的纯化讨论于例如D.Wilkinson(The Scientist，由The Scientist，Inc.出版，Philadelphia PA，Vol.14、No.8(2000年4月17日)，第25-28页)。
本发明的抗体(例如5E12、41B10、11C5、21B10、1F1、2E12、5D3、22F8、28B11、41A4和43G6)是全人单克隆抗体。例如通过用IL-17F(例如鼠、rat或人IL-17F或免疫原性片段、衍生物或其变体)免疫动物来产生单克隆抗体，所述单克隆抗体调节、阻断、抑制、降低、拮抗、中和或以其它方式干扰由IL-17F介导的促炎细胞因子的产生。可选地，用包含编码IL-17F的核酸分子的载体转染的细胞免疫动物，使得IL-17F被表达并且与转染细胞的表面结合。可选地，通过筛选包含结合到IL-17F的抗体或抗原结合结构域序列的文库来获得抗体。例如在噬菌体中作为蛋白质或肽与在组装的噬菌体颗粒表面和包含于该噬菌体颗粒(即“噬菌体展示文库”)内的编码DNA序列上表达的噬菌体外壳蛋白的融合来制备该文库。然后筛选由骨髓瘤/B细胞融合产生的杂交瘤对IL-17F的反应性。
制备单克隆抗体，例如使用杂交瘤方法，例如Kohler和Milstein，Nature，256：495(1975)所述的杂交瘤方法。在杂交瘤方法中，通常用免疫剂免疫小鼠、仓鼠、或其它合适的宿主动物以诱导淋巴细胞，所述淋巴细胞产生或能够产生特异性结合到免疫剂的抗体。可选地，淋巴细胞可在体外免疫。
免疫剂通常包括蛋白质抗原、其片段或其融合蛋白。一般来说，如果需要人源细胞则使用外周血淋巴细胞，或如果需要非人哺乳动物源则使用脾细胞或淋巴结细胞。然后使用合适的熔剂(例如聚乙二醇)使淋巴细胞与永生细胞系融合以形成杂交瘤细胞(Goding，Monoclonal Antibodies：Principles and Practice，Academic Press，(1986)第59-103页)。永生细胞系一般是转化的哺乳动物细胞，具体地是啮齿类动物、牛和人源的骨髓瘤细胞。一般地，使用大鼠或小鼠骨髓瘤细胞系。杂交瘤细胞可在合适的培养基中培养，所述培养基优选包含抑制非融合的永生化细胞生长或存活的一种或多种物质。例如，如果亲代细胞缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HGPRT或HPRT)，则用于杂交瘤的培养基通常将包括次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(“HAT培养基”)，这些物质防止HGPRT-缺陷性细胞的生长。
优选的永生化细胞系是有效融合，维持所选择的产生抗体的细胞对抗体的稳定高水平表达，并且对培养基例如HAT培养基敏感的细胞系。更优选的永生化细胞系是鼠骨髓瘤系，其可从例如萨克研究所细胞配送中心(Salk Institute Cell Distribution Center)，San Diego，California和美国典型培养物保藏所(American Type CultureCollection)，Manassas，Virginia获得。还描述了人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系用于产生单克隆抗体。(参见Kozbor，J.Immunol.，133：3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody ProductionTechniques and Applications，Marcel Dekker，Inc.，New York，(1987)第51-63页))。
然后可测定培养杂交瘤细胞的培养基中是否存在针对抗原的单克隆抗体。优选地，由杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的结合特异性通过免疫沉淀法或通过体外结合测定例如放射免疫测定(RIA)或酶联免疫吸附测定(ELISA)来测定。这些技术和测定方法是本领域已知的。单克隆抗体的结合亲和力可通过例如Munson和Pollard，Anal.Biochem.，107：220(1980)的斯卡查德分析(Scatchard analysis)来测定。而且，在单克隆抗体的治疗应用中，鉴定对靶抗原具有高度特异性和高结合亲和力的抗体是重要的。
鉴定所需的杂交瘤细胞后，克隆可通过有限稀释程序进行亚克隆和通过标准方法进行生长。(参见Goding，Monoclonal Antibodies： Principles and Practice，Academic Press，(1986)第59-103页)。用于该目的的合适的培养基包括，例如达尔伯克氏改良伊格尔培养基(Dulbecco′s Modified Eagle′s Medium)和RPMI-1640培养基。可选地，杂交瘤细胞可在哺乳动物体内作为腹水生长。
由亚克隆分泌的单克隆抗体可通过常规免疫球蛋白纯化程序(例如蛋白质A-琼脂糖、羟磷灰石层析、凝胶电泳、透析、或亲和层析法)从培养基或腹水液中分离或纯化。
单克隆抗体还可通过重组DNA方法例如美国专利No.4,816,567中所述的方法来生产。编码本发明的单克隆抗体的DNA可易于分离且可使用常规程序(例如通过使用能够特异性结合到编码鼠抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)进行测序。本发明的杂交瘤细胞用作该DNA的优选来源。一旦分离，DNA可放入表达载体，然后所述表达载体被转染到不以其它方式产生免疫球蛋白的宿主细胞(例如猿COS细胞、中华仓鼠卵(CHO)细胞或骨髓瘤细胞)以在重组宿主细胞中获得单克隆抗体的合成。DNA还可以被修饰，例如通过在同源的鼠序列的位置处用编码序列取代人重链和轻链恒定域(参见美国专利No.4,816,567；Morrison，Nature 368，812-13(1994))或通过共价结合到免疫球蛋白编码序列、非免疫球蛋白多肽的全部或部分编码序列。该非免疫球蛋白多肽可取代本发明的抗体的恒定域，或可取代本发明的抗体的一个抗原结合位点的可变域以产生嵌合双价抗体。
人抗体和抗体的人源化
本发明的单克隆抗体包括全人抗体或人源化抗体。这些抗体适合于施用给人，而不使人引起对抗所施用的免疫球蛋白的免疫响应。
huIL-17F抗体例如使用以下提供的实施例中所提供的程序来产生。
在其它可选的方法中，huIL-17F抗体例如使用噬菌体展示方法、用仅包含人序列的抗体来开发。该方法是本领域所熟知的，例如WO92/01047和美国专利No.6,521,404，这些文献据此通过引用并入。在该方法中，携带随机轻链和重链对的噬菌体的组合文库使用IL-17F或其片段的天然或重组来源来筛选。在另一方法中，可通过以下方法生产huIL-17F抗体，其中该方法的至少一个步骤包括用人IL-17F蛋白质免疫转基因非人动物。在该方法中，这种异种非人动物的一些内源性重链和/或κ轻链基因座有缺陷并且不能进行所需的重排以产生响应抗原而编码免疫球蛋白的基因。另外，至少一个人重链基因座和至少一个人轻链基因座已被稳定地转染到动物中。因此，响应于所施用的抗原，人基因座重排以提供编码对抗原免疫特异性的人可变区的基因。因此，免疫后，异种小鼠产生分泌全人免疫球蛋白的B细胞。
本领域熟知的多种技术用于产生异种非人动物。例如，参见美国专利No.6.075,181和No.6,150,584，其通过引用据此整体并入。此总策略被证明与于1994年公开的第一个XenoMouseTM系的产生相关。参见Green等人，Nature Genetics 7：13-21(1994)，其据此通过引用整体并入。还参见，美国专利No.6,162,963、6,150,584、6,114,598、6,075,181和5,939,598及日本专利No.3 068 180 B2、3 068 506 B2和3 068 507 B2及欧洲专利No.EP 0 463 151 B1及国际专利申请No.WO 94/02602、WO 96/34096、WO 98/24893、WO 00/76310和相关家族成员。
在替代方法中，其他人已利用“微腺伴随病毒基因座(minilocus)”方法，其中通过包括来自Ig基因座的碎片(个体基因)来模拟外源性Ig基因座。因此，一个或多个VH基因、一个或多个DH基因、一个或多个JH基因、μ恒定区、和第二恒定区(优选地γ恒定区)形成用于插入动物中的构建体。参见例如美国专利No.5,545,806、5,545,807、5,591,669、5,612,205、5,625,825、5,625,126、5,633,425、5,643,763、5,661,016、5,721,367、5,770,429、5,789,215、5,789,650、5,814,318、5,877,397、5,874,299、6,023,010和6,255,458，及欧洲专利No.0 546073 B1，及国际专利申请No.WO 92/03918、WO 92/22645、WO92/22647、WO 92/22670、WO 93/12227、WO 94/00569、WO 94/25585、WO 96/14436、WO 97/13852和WO 98/24884及相关家族成员。
还已证明从小鼠产生人抗体，在小鼠中通过微细胞融合引入了大段染色体或整条染色体。参见欧洲专利申请No.773 288和843 961。
人抗小鼠抗体(HAMA)响应已引入工业来制备嵌合或以其它方式人源化抗体。虽然嵌合抗体具有人恒定区和免疫可变区，但预期将观察到某些人抗嵌合抗体(HACA)响应，特别是在抗体的长期或多剂量利用中。因此，将需要提供针对IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体的全人抗体以便降低或以其它方式减轻HAMA或HACA响应的影响和/或效果。
具有降低的免疫原性的抗体的产生也通过人源化、嵌合化和使用合适文库的展示技术来实现。应理解的是，鼠抗体或来自其它物种的抗体可使用本领域熟知的技术来人源化或灵长类化(primatized)。参见例如Winter和Harris Immunol Today 14：4346(1993)及Wright等人，Crit，Reviews in Immunol.12125-168(1992)。目标抗体可通过重组DNA技术改造来取代CH1、CH2、CH3、铰链区和/或具有相应人序列的框架区(参见WO 92/102190及美国专利No.5,530,101、5,585,089、5,693,761、5,693,792、5,714,350和5,777,085)。而且，将Ig cDNA用于构建嵌合免疫球蛋白基因是本领域已知的(Liu等人，P.N.A.S.84：3439(1987)及J.Immunol.139：3521(1987))。mRNA是从杂交瘤或其它产生抗体的细胞分离的并且用于产生cDNA。目标cDNA可使用特定引物通过聚合酶链式反应扩增(美国专利No.4,683,195和4,683,202)。可选地，创建并筛选文库以分离目标序列。然后将编码抗体的可变区的DNA序列融合到人恒定区序列。人恒定区基因的序列可在Kabat等人，(1991)Sequences of Proteins of immunological Interest，N.I.H.publication no.91-3242中发现。人C区基因易于从已知的克隆获取。同种型的选择将由所需的效应子功能例如补体结合或抗体依赖的细胞毒性的活性来指导。优选的同种型是IgG1、IgG3和IgG4。可使用人轻链恒定区(κ或λ)的任一个。然后通过常规方法表达嵌合的人化抗体。
抗体片段，例如Fv、F(ab′)2和Fab可通过切割完整的蛋白质(例如通过蛋白酶或化学切割)来制备。可选地，设计截短基因。例如，编码部分F(ab′)2片段的嵌合基因可能包括后面是翻译终止密码子的编码H链的CH1结构域和铰链区的DNA序列，以产生截短分子。
H和L J区的共有序列可用于设计用作引物的寡核苷酸以将有用的限制位点引入到J区内，随后将V区片段连接到人C区片段。可通过定点诱变修饰C区cDNA以在人序列中的类似位置放置限制位点。
表达载体包括质粒、逆转录病毒、YAC、EBV源性游离基因及类似载体。合适的载体是编码功能上完全人CH或CL免疫球蛋白序列，具有改造的合适的限制性位点的载体，所述限制性位点使得任何VH或VL序列可容易地插入和表达。在该载体中，剪接通常发生在插入J区中的剪接供体位点和人C区前面的剪接受体位点之间，并且还位于发生在人CH外显子内的剪接区。多腺苷酸化和转录终止发生在编码区的天然染色体位点下游。生成的嵌合抗体可连接到包括逆转录病毒LTR例如SV-40早期启动子(Okayama等人，Mol.Cell.Bio.3：280(1983))、劳氏肉瘤病毒LTR(Gorman等人，P.N.A.S.79：6777(1982))，及莫洛尼鼠白血病病毒LTR(Grosschedl等人，Cell 41：885(1985))的任何强启动子。而且，应理解可使用天然Ig启动子等。
此外，人抗体或来自其它物种的抗体可使用本领域熟知的技术通过展示类型技术(包括不限于，噬菌体展示、逆转录病毒展示、核糖体展示和其它技术)来产生，并且生成的分子可经受另外的成熟，例如亲和力成熟，这些技术是本领域熟知的。Wright等人，Crit，Reviewsin Immunol.12125-168(1992)，Hanes和Plückthun PNAS USA 94：4937-4942(1997)(核糖体展示)，Parmley和Smith Gene 73：305-318(1988)(噬菌体展示)，Scott，TIBS，vol.17：241-245(1992)，Cwirla等人，PNAS USA 87：6378-6382(1990)，Russel等人，Nucl.AcidsResearch 21：1081-1085(1993)，Hoganboom等人，Immunol.Reviews130：43-68(1992)，Chiswell和McCafferty TIBTECH；10：80-8A(1992)，及美国专利No.5,733,743。如果利用展示技术来产生非人的抗体，该抗体可如上述进行人源化。
使用这些技术，可产生针对表达IL-17F的细胞、针对IL-17F自身、针对IL-17F表位或其肽的形式，及针对表达文库(参见例如美国专利No.5,703,057)的抗体，所述抗体随后可如上述筛选本文所述活性。
本发明的huIL-17F抗体可由包含编码上述单链抗体的DNA片段的载体表达。
这些可包括载体、脂质体、裸DNA、佐剂辅助的DNA、基因枪、导管(catheter)等。载体包括化学偶联物(例如WO 93/64701中所述的)，其具有靶部分(例如针对细胞表面受体的配体)和核酸结合部分(例如聚赖氨酸)；病毒载体(例如DNA或RNA病毒载体)；融合蛋白(例如PCT/US 95/02140(WO 95/22618)中所述的)，其为包含靶部分(例如对靶细胞特异的抗体)和核酸结合部分(例如鱼精蛋白)的融合蛋白；质粒；噬菌体等。载体可以是染色体的、非染色体的或合成的。
优选的载体包括病毒载体、融合蛋白和化学偶联物。逆转录病毒载体包括莫洛尼鼠(moloney murine)白血病病毒。优选DNA病毒载体。这些载体包括痘载体例如正痘或禽痘载体，疱疹病毒载体例如单纯疱疹I病毒(HSV)载体(参见Geller，A.I.等人，J.Neurochem，64：487(1995)；Lim，F.等人，DNA Cloning：Mammalian Systems中，D.Glover编(Oxford Univ.Press，Oxford England)(1995)；Geller，A.I.等人，Proc Natl.Acad.Sci.：U.S.A.90：7603(1993)；Geller，A.I.等人，Proc Natl.Acad.Sci USA 87：1149(1990))，腺病毒载体(参见LeGalLaSalle等人，Science，259：988(1993)；Davidson等人，Nat.Genet 3：219(1993)；Yang等人，J.Virol.69：2004(1995))及腺伴随病毒载体(参见Kaplitt，M.G等人，Nat.Genet.8：148(1994)。
痘病毒载体将基因引入细胞质。禽痘病毒载体导致仅仅短期的核酸表达。为了将核酸引入神经细胞，优选腺病毒载体、腺伴随病毒载体和单纯疱疹病毒(HSV)载体。腺病毒载体导致比腺伴随病毒(约4个月)更短期的表达(约2个月)，所述腺伴随病毒导致比HSV载体更短期的表达。所选择的特定载体将取决于靶细胞和待治疗的疾患。可通过标准技术，例如感染、转染、转导或转化来引入。基因转移模式的实例包括例如裸DNA、CaPO4沉淀、DEAE葡聚糖、电穿孔、原生质体融合、脂质转染、细胞微注射和病毒载体。
可利用载体以基本上靶向任何所需的靶细胞。例如可使用立体定位注射引导载体(例如腺病毒，HSV)至所需的位置。另外，颗粒可使用微泵输注系统(例如SynchroMed输注系统)通过脑室内(icv)输注来递送。已证明基于整体流(称为对流)的方法有效递送大分子至脑的延伸区域并且可用于递送载体至靶细胞。(参见Bobo等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：2076-2080(1994)；Morrison等人，Am.J.Physiol.266：292-305(1994))。可使用的其它方法包括导管、静脉内、肠胃外、腹膜内和皮下注射，及口服或其它已知施用途径。
这些载体可用于表达大量的可以多种方式使用的抗体。例如用于检测样品中IL-17F的存在。抗体还可用于设法结合到并且破坏IL-17F相关信号。
可改进技术以产生对于本发明的抗原蛋白具有特异性的单链抗体(参见例如美国专利No.4,946,778)。另外，可改进方法以构建Fab表达文库(参见例如Huse等人，1989 Science 246：1275-1281)以允许快速和有效地鉴定对于蛋白质或衍生物、片段、类似物或其同系物具有所需特异性的单克隆Fab片段。包含针对蛋白质抗原的个体基因型的抗体片段可通过本领域已知的技术产生，所述技术包括但不限于：(i)F(ab′)2片段，其通过胃蛋白酶消化抗体分子产生；(ii)Fab片段，其通过还原F(ab′)2片段的二硫键产生；(iii)Fab片段，其通过用木瓜蛋白酶和还原剂处理抗体分子产生；和(iv)Fv片段。
本发明还包括Fv、Fab、Fab’和F(ab′)2抗IL-17F片段、单链抗IL-17F抗体、双特异性抗IL-17F抗体和异源偶联物抗IL-17F抗体。
双特异性抗体是对至少两种不同抗原具有结合特异性的抗体。在本案例中，结合特异性之一是对IL-17F。第二结合靶标是任何其它抗原，并且有益地是细胞表面蛋白质或受体或受体亚基。
用于制备双特异性抗体的方法是本领域已知的。传统上，双特异性抗体的重组产生基于两个免疫球蛋白重链/轻链对的共表达，其中两条重链具有不同的特异性(Milstein和Cuello，Nature，305：537-539(1983))。因为免疫球蛋白重链和轻链的随机分配，所以这些杂交瘤(细胞杂交瘤)产生10种不同抗体分子的可能混合物，其中仅一种具有正确的双特异性结构。正确分子的纯化通常通过亲和层析法步骤实现。类似的程序在WO 93/08829(1993年5月13日出版)中公开，和Traunecker等人，EMBO J.，10：3655-3659(1991)中。
具有所需的结合特异性(抗体-抗原结合位点)抗体可变域可融合至免疫球蛋白恒定域序列。优选与包含至少一部分铰链区、CH2区和CH3区的免疫球蛋白重链恒定域融合。优选地使第一重链恒定区(CH1)包含存在于至少一种融合中的轻链结合所需的位点。编码免疫球蛋白重链融合以及(如果需要)免疫球蛋白轻链的DNA，插入到分离表达载体内，并且共转染到合适的宿主生物体内。对于产生双特异性抗体的进一步详情，参见例如Suresh等人，Methods in Enzymology，121：210(1986)。
根据WO 96/27011中所述的另一方法，可改造一对抗体分子之间的界面以使异二聚体的百分比最大化，所述异二聚体从重组细胞培养中回收。优选的界面包含抗体恒定结构域的CH3区的至少一部分。在该方法中，用较大侧链(例如酪氨酸或色氨酸)替换来自第一抗体分子的界面的一个或多个小氨基酸侧链。通过用较小侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)替换大的氨基酸侧链，在第二抗体分子的界面产生与较大侧链具有相同或相似尺寸的补偿性“空腔”。这提供相比于其它非期望的最终产物(例如同二聚体)增加异二聚体产量的机制。
双特异性抗体可制备成全长抗体或抗体片段(例如F(ab’)2双特异性抗体)。在文献已描述了用于从抗体片段产生双特异性抗体的技术。例如可使用化学键合来制备双特异性抗体。Brennan等人，Science 229：81(1985)描述其中蛋白质水解切割完整的抗体以产生F(ab’)2片段的步骤。在存在二硫醇络合剂亚砷酸钠的情况下将这些片段还原以稳定邻近的二硫醇并且防止形成分子间二硫化物。然后将产生的Fab’片段转化为硫代硝基苯甲酸酯(TNB)衍生物。然后通过用巯基乙胺还原将Fab’-TNB衍生物之一转化为Fab’-硫醇并且与等摩尔量的其它Fab’-TNB衍生物混合以形成双特异性抗体。产生的双特异性抗体可用作酶选择性固定的试剂。
另外，Fab’片段可直接从大肠杆菌(E.coli)回收并化学偶联以形成双特异性抗体。Shalaby等人，J.Exp.Med.175：217-225(1992)描述了全人源化双特异性抗体F(ab’)2分子的产生。分别从大肠杆菌分泌每个Fab’片段并在体外经受直接化学偶联以形成双特异性抗体。由此形成的双特异性抗体能够结合到过表达ErbB2受体的细胞和正常的人T细胞，以及引发针对人乳腺肿瘤靶标的人细胞毒性淋巴细胞的溶解活性。
还描述了用于直接从重组细胞培养物制备和分离双特异性抗体片段的多种技术。例如已使用亮氨酸拉链生产双特异性抗体。Kostelny等人，J.Immunol.148(5)：1547-1553(1992)。通过基因融合将来自Fos和Jun蛋白质的亮氨酸拉链肽连接至两个不同的抗体的Fab’部分。在铰链区将抗体同二聚体还原以形成单体并且然后重新氧化以形成抗体异二聚体。还可利用该方法以产生抗体同二聚体。Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993)所述的“双特异抗体”技术提供了用于制备双特异性抗体片段的替代机制。该片段包含通过连接子连接到轻链可变结构域(VL)的重链可变结构域(VH)，所述连接子太短而不允许相同链上的两个结构域之间配对。因此，迫使一个片段的VH和VL结构域与另一片段的互补VL和VH结构域配对，由此形成两个抗原结合位点。已报道通过单链Fv(sFv)二聚体用于制备双特异性抗体片段的另一策略。参见，Gruber等人，J.Immunol.152：5368(1994)。
涵盖具有两个以上效价的抗体。例如可制备三特异性抗体。Tutt等人，J.Immunol.147：60(1991)。
示例性双特异性抗体可结合到两个不同的表位，至少一个所述表位源自本发明的蛋白质抗原。可选地，免疫球蛋白分子的抗抗原臂可与结合到白细胞上的触发分子例如T-细胞受体分子(例如CD2、CD3、CD28或B7)或IgG的Fc受体(FcγR)例如FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)和FcγRIII(CD16)的臂组合以便将细胞防御机制聚焦到表达特定抗原的细胞。双特异性抗体还可用于将细胞毒素剂引入表达特定抗原的细胞。这些抗体具有抗原结合臂和结合细胞毒素剂或放射性核素螯合剂(例如EOTUBE、DPTA、DOTA或TETA)的臂。另一目标双特异性抗体结合本文所述蛋白抗原并且还结合组织因子(TF)。
异源偶联抗体也在本发明的范围内。异源偶联抗体由两个共价连接的抗体构成。已提出这种抗体，例如使免疫系统细胞靶向非期望的细胞(参见美国专利No.4,676,980)，并且用于治疗HIV感染(参见WO91/00360；WO 92/200373；EP 03089)。预期抗体可使用合成蛋白质化学中的已知方法在体外制备，包括那些涉及交联剂的方法。例如，免疫毒素可使用二硫化物交换反应或通过形成硫醚键来构建。用于该目的的合适的试剂的实例包括亚氨基硫醇酯(iminothiolate)和甲基-4-巯基丁酰亚氨酸酯(methyl-4-mercaptobutyrimidate)及那些例如在美国专利No.4,676,980公开的试剂。
可期望修改本发明的抗体的效应子功能，以便增强，例如抗体在治疗与IL-17F信号相关的疾病和病症中的效果。例如可将半胱氨酸残基引入到FC区，由此允许在该区形成链间二硫键。因此产生的同二聚体抗体可具有改进的内化能力和/或增强的补体介导的细胞杀伤和抗体依赖的细胞毒性(ADCC)。(参见Caron等人，J.Exp Med.，176：1191-1195(1992)及Shopes，J.Immunol.，148：2918-2922(1992))。可选地，可改造抗体使具有双FC区并且可由此具有增强的补体溶解和ADCC能力。(参见Stevenson等人，Anti-Cancer Drug Design，3：219-230(1989)).
本发明还涉及包含偶联到细胞毒素剂例如毒素(例如细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素，或其片段)或放射性同位素(即放射偶联物)的抗体的免疫偶联物。
可使用的酶活性毒素及其片段包括白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌)、篦麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、α-八叠球菌、油桐蛋白质、石竹素蛋白(dianthin protein)、美洲商陆蛋白(Phytolaca americanaprotein)(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜抑制剂(momordica charantiainhibitor)、麻疯树毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白、肥皂草抑制剂(sapaonaria officinalis inhibitor)、白树素、丝林霉素(mitogellin)、局限曲霉素、酚霉素、依诺霉素和单端孢霉烯族毒素(tricothecene)。多种放射性核素可用于产生放射偶联的抗体。实例包括212Bi、131I、131In、90Y和186Re。
使用多种双功能蛋白偶联剂来制备抗体和细胞毒素剂的偶联物，所述双功能蛋白质偶联剂例如N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二巯基)丙酸酯(SPDP)、亚氨基硫烷(IT)、亚氨酸酯的双功能衍生物(例如盐酸己二酰亚氨酸二甲酯)、活性酯(例如辛二酸二琥珀酰亚胺基酯)、醛类(例如戊二醛)、双重氮化合物(例如双(对-重氮苯甲酰)己二胺)、双重氮衍生物(例如双(对重氮苯甲酰)-乙二胺)、二异氰酸酯(例如甲苯2，6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(例如1，5-二氟-2，4-二硝基苯)。例如，如Vitetta等人，Science 238：1098(1987)中所描述可制备蓖麻毒素免疫毒素。碳-14-标记的1-异硫氰酸根合苯甲基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)用于将放射核苷酸偶联到抗体的示例性的螯合剂(参见WO94/11026)。
本领域的普通技术人员应认识到很多种可能的部分可偶联到本发明所得的抗体。(参见，例如“Conjugate Vaccines，”Contributions toMicrobiology and Immunology，J.M.Cruse和R.E.Lewis，Jr(编)，Carger Press，New York，(1989)，其全部内容通过引用并入本文)。
偶联可通过任何结合两个分子的化学反应来实现，只要抗体和其它部分保持它们各自的活性。这种连接可包括许多化学机制，例如共价结合、亲和结合、插入、配位结合和络合。然而，优选的结合是共价结合。共价结合可通过直接压缩存在的侧链或通过掺入外部桥接分子来实现。许多二价或多价的连接剂用于将偶联蛋白质分子例如本发明的抗体到其它分子。例如代表性的偶联剂可包括有机化合物例如硫酯、碳二亚胺、琥珀酰亚胺酯、二异氰酸酯、戊二醛、重氮苯和己二胺。该列表并非意图排除各类本领域已知的偶联剂，而是示例更常见的偶联剂。(参见Killen和Lindstrom，Jour.Immun.133：1335-2549(1984)；Jansen等人，immunological Reviews 62：185-216(1982)；及Vitetta等人，Science 238：1098(1987)。
优选的连接子描述于文献中。(参见，例如Ramakrishnan，S.等人，Cancer Res.44：201-208(1984)描述了使用MBS(M-马来酰苯甲酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯)。还参见，美国专利No.5,030,719描述了通过寡肽连接子的方式使用卤化乙酰基酰肼衍生物偶联抗体。特别优选的连接子包括：(i)EDC(1-乙基-3-(3-二甲氨基-丙基)碳二亚胺盐酸盐；(ii)SMPT(4-琥珀酰亚胺基氧羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫基)-甲苯(Pierce Chem.Co.，Cat.(21558G)；(iii)SPDP(琥珀酰亚胺基-6[3-(2-吡啶基二硫基)丙酰胺基]己酸盐(Pierce Chem.Co.，Cat #21651G)；(iv)磺基-LC-SPDP(磺基琥珀酰亚胺基6[3-(2-吡啶基二硫基)-丙酰胺]己酸盐(Pierce Chem.Co.Cat.#2165-G)；和(v)偶联至EDC的磺基-NHS(N-羟基磺基-琥珀酰亚胺)(Pierce Chem.Co.，Cat.#24510)。
上述连接子包含具有不同的性质的组分，因而导致具有不同物理化学性质的偶联物。例如烷基羧酸酯的磺基-NHS酯比芳香族羧酸酯的磺基-NHS酯更稳定。包含连接子的NHS-酯的可溶性比磺基-NHS酯更低。此外，连接子SMPT包含位阻的二硫键，并且可形成具有增加的稳定性的偶联物。一般来说，二硫键比其它键合的稳定性低因为二硫键在体外切割，导致可用的偶联物较少。特别地，磺基-NHS可增强碳二亚胺偶联的稳定性。当碳二亚胺偶联(例如EDC)与磺基-NHS联合使用时，比单独碳二亚胺偶联反应形成的酯更耐水解。
本文公开的抗体还可配制成免疫脂质体。包含抗体的脂质体通过本领域已知方法来制备，例如描述于Epstein等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82：3688(1985)；Hwang等人，Proc.Natl Acad.Sci.USA，77：4030(1980)；及美国专利No.4,485,045和4,544,545中的方法。具有延长循环时间的脂质体公开于美国专利No.5,013,556。
特别有用的脂质体可用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG-衍生的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物通过反相蒸发方法来产生。脂质体经过确定孔径的过滤器挤压以产生具有所需直径的脂质体。本发明的抗体的Fab′片段可经二硫化物交换反应偶联到脂质体，如Martin等人，J.Biol.Chem.，257：286-288(1982)所述。
针对IL-17F抗体的用途
应理解根据本发明的治疗实体的施用将与合适的载体、赋形剂和掺入制剂中的其它试剂一起施用以提供改进的转移、递送、耐受等。在所有药剂师已知的配方手册：Remington′s PharmaceuticalSciences(第15版，Mack Publishing Company，Easton，PA(1975))，特别是在其中的Blaug，Seymour的第87章中可发现许多合适的制剂。这些制剂包括，例如粉剂、糊剂、软膏、胶冻剂、蜡类、油类、脂质、包含脂质(阳离子或阴离子)的囊泡(例如LipofectinTM)、DNA偶联物、无水吸附糊剂、水包油和油包水乳剂、乳剂碳蜡(多种分子量的聚乙二醇)、半固体凝胶剂和包含碳蜡的半固体混合物。任何上述混合物可适于根据本发明的治疗和疗法，条件是制剂中的活性成分未被制剂失活并且该制剂与施用途径是生理上相容和耐受的。还参见BaldrickP.“Pharmaceutical excipient development：the need for preclinicalguidance.”Regul.Toxicol Pharmacol.32(2)：210-8(2000)，Wang W.“Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals.”Int.J.Pharm.203(1-2)：1-60(2000)，Charman WN“Lipids，lipophilic drugs，and oral drug delivery-some emerging concepts.”J Pharm Sci.89(8)：967-78(2000)，Powell等人，“Compendium of excipients for parenteralformulations”PDA J Pharm Sci Technol.52：238-311(1998)及其中对于药剂师熟知的与制剂、赋形剂和载体相关的另外的信息的引用。
在一个实施方案中，包括本发明的单克隆抗体(例如全人单克隆抗体)的本发明的抗体可用作治疗剂。这些试剂一般可用于诊断、预测、监测、治疗、缓解和/或预防受治疗者中与IL-17F信号相关的疾病或病理学。通过使用标准方法鉴定受治疗者，例如患有炎性疾病或病症(或有发展成炎性疾病或病症的危险)的人患者来实施治疗方案。给受治疗者施用抗体制剂，优选地对其靶抗原具有高特异性和高亲和力的抗体制剂，并且由于其与靶标的结合一般具有效果。抗体的施用可消除或抑制或干扰靶标(例如IL-17F)的信号功能。抗体的施用可消除或抑制或干扰靶标(例如IL-17F)与其天然结合的内源性配体(例如IL-17R或IL-17RC)的结合。例如，抗体结合到靶标并且调节、阻断、抑制、降低、拮抗、中和或以其它方式干扰IL-17F-诱导的促炎细胞因子的产生。
与IL-17F信号相关的疾病或病症包括自身免疫性疾病或炎性疾病或病症，包括但不限于类风湿性关节炎、克罗氏病、银屑病、多发性硬化、慢性阻塞性肺部疾病和哮喘。发现在囊性纤维化患者的唾液中(参见McAllister等人，J.Immunol.175：404-412(2005))及患有炎性肠道疾病的患者的结肠中(参见Seiderer等人，Inflamm.Bowel Dis.2007年12月18日，Epub.ahead of print)IL-17F上调。已显示IL-17A/IL-17F在呼吸道中性白细胞增多的募集中发挥作用，表明在呼吸道疾病的发病机理中发挥作用(参见Liang等人，J.Immunol.179(11)：7791-9(2007))。
自身免疫性疾病包括，例如获得性免疫缺陷综合征(AIDS，带有自身免疫性组分的病毒性疾病)、斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、自身免疫性艾迪生病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳病(AIED)、自身免疫性淋巴细胞增生综合征(ALPS)、自身免疫性血小板减少性紫癜(ATP)、贝切特氏病、心肌症、口炎性腹泻-疱疹样皮炎(dermatitis hepetiformis)；慢性疲劳免疫功能紊乱综合征(CFIDS)、慢性炎性脱髓鞘多发性神经病(CIPD)、疤痕性类天疱疮、冷凝集素病、CREST综合征、克罗氏病、德戈斯氏病、幼年型皮肌炎、盘状狼疮、原发性混合型冷球蛋白血症、纤维肌痛-纤维肌炎、格雷夫斯氏病、吉兰-巴雷综合征、桥本甲状腺炎、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA肾病、胰岛素依赖型糖尿病、幼年型慢性关节炎(斯提耳氏病)、幼年型类风湿性关节炎、美尼尔氏综合症、混合性结缔组织病、多发性硬化、重症肌无力、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多发性肌炎和皮肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬变、银屑病、银屑病关节炎、雷诺氏现象、莱特尔综合征、风湿热、类风湿性关节炎、肉样瘤病、硬皮病(进行性系统性硬化病(PSS)，也称为系统性硬化病(SS))、干燥综合征、僵人综合征、系统性红斑狼疮、大动脉炎、颞动脉炎/巨细胞动脉炎溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癜风和韦格纳氏肉芽肿病。
炎性病症包括，例如慢性和急性炎性病症。炎性病症的实例包括阿尔茨海默氏病、哮喘、特应性变态反应、变态反应、动脉粥样硬化、支气管哮喘、湿疹、肾小球性肾炎、移植物抗宿主病、溶血性贫血、骨关节炎、败血病、中风、组织和器官移植、血管炎、糖尿病性视网膜病和呼吸机所致的肺损伤。
还显示出通过IL-21信号上调IL-17F，表明与IL-21信号相关的促炎效果除了由IL-17A和/或IL-17F/IL17A复合体介导之外，还由IL-17F介导(Wei等人，J Biol Chem.282(48)：34605-10(2007))。同样地，本发明的抗体还用于诊断、预测、监测和/或治疗由IL-21信号介导的病症疾病，包括但不限于炎性/自身免疫性病症例如炎性肠道疾病、类风湿性关节炎、移植排异和银屑病。
本发明的huIL-17F抗体用于治疗、改善、延缓发病和/或进展或以其它方式减轻关节炎疾患或其一种或多种症状的严重程度。在本发明之前，研究已确定IL-17F在自身免疫性关节炎疾患的发展和/或进展中几乎不起作用(如果任何作用)。(参见Ishigame等人，Immunity，vol.30：108-119(2009))。本文实施例中提供的试验和数据展示了出乎意料的和令人惊讶的结果，即调节例如抑制、中和或以其它方式阻断IL-17F同二聚体而非IL-17A/IL-17F异二聚体复合体的表达和/或活性，极大地延迟关节炎疾患的进展并且降低了胶原诱导的关节炎(一种用于类风湿性关节炎的动物模型)中的炎性调节子例如TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-1α、MCP-1和IL-12/IL-23(p40)的水平。
因此，本发明包括通过给需要其的受治疗者施用本发明的huIL-17F抗体(例如5E12、41B10、11C5、21B10、1F1、2E12、5D3、22F8、28B11、41A4和43G6)或与本发明的huIL-17F抗体结合到相同的或类似表位的抗体来治疗、改善、延迟发病和/或进展，和/或减轻关节炎疾患的症状的方法。HuIL-17F抗体或与本发明的huIL-17F抗体结合到相同的表位的抗体以足以治疗、改善、延缓发病，延缓进展，和/或缓解关节炎疾患的一种或多种症状的量施用。受治疗者是例如人。在一些实施方案中，关节炎疾患是自身免疫性关节炎疾患。例如在一些实施方案中，关节炎疾患是类风湿性关节炎。
与炎症相关的病症有关的症状包括，例如炎症、发热、全身不适、发热、疼痛(往往位于发炎区域)、脉率快、关节痛(arthralgia)、呼吸急促或其它呼吸异常形式、发冷、意识错乱、定向障碍、烦躁不安、眩晕、咳嗽、呼吸困难、肺部感染、心力衰竭、呼吸衰竭、水肿、体重增加、粘液脓性复发(mucopurulent relapses)、恶病质、喘鸣、头痛，及腹部症状例如腹痛、腹泻或便秘。与免疫相关病症相关的症状包括，例如炎症、发热、食欲不振、体重下降、腹部症状(例如腹痛、腹泻或便秘)、关节疼痛或痛(关节痛)、疲劳、皮疹、贫血、对寒冷极端敏感(雷诺氏现象)、肌无力、肌肉疲劳、皮肤或组织紧张度变化、呼吸短促或其它呼吸异常形式、胸痛或胸肌收缩、心率异常(例如升高或降低)、光敏感、模糊或以其它方式视觉异常，及器官功能降低。
本发明的抗体的治疗有效量一般与实现治疗目标所需的量有关。如上所述，这可以是抗体及其靶抗原之间的结合相互作用，在某些情况下，所述靶抗原干扰靶标的功能。此外所需要施用的量取决于抗体对其特异性抗原的结合亲和力，并且还取决于施用的抗体从施用给其它受治疗者的自由体积中消耗的速率。通过非限定性实例的方式，本发明的抗体或抗体片段治疗有效剂量的常用范围可以是从约0.1mg/kg体重至约50mg/kg体重。常用剂量频率可在例如每天两次到一周一次的范围内。
治疗有效性的确定与用于诊断或治疗特定的炎症相关病症的任何已知方法相关。缓解炎症相关病症的一个或多个症状表明抗体赋予临床益处。
用于筛选具有所需特异性抗体的方法包括但不限于，本领域已知的酶联免疫吸附测定(ELISA)和其它免疫介导技术。
在另一实施方案中，针对IL-17F和/或IL-17F/IL17A复合体的抗体可用于与IL-17F或IL-17A/IL-17F复合体的定位和/或定量有关的本领域已知方法(例如用于测量合适的生理样品内IL-17F和/或IL-17A/IL-17F复合体的水平，用于诊断方法，用于蛋白质成像等)。在给定的实施方案中，对IL-17F和/或IL-17A/IL-17F复合体或其衍生物、片段、类似物或同系物特异性的抗体(包含源自抗原结合结构域的抗体)用作药物活性化合物(以下称作“疗法”)。
在另一实施方案中，IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体特异性的抗体可用于通过标准技术分离IL-17F多肽和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体多肽，所述标准技术例如免疫亲和、层析或免疫沉淀。针对IL-17F蛋白质和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体的抗体(或其片段)可用于作为临床测试程序的一部分的诊断性监测组织中的蛋白质水平，例如用于确定给出的治疗方案的功效。通过将抗体偶联(即物理连接)到可检测性物质可有助于检测。可检测性物质的实例包括多种酶、辅基、荧光材料、发光材料、生物荧光材料和放射活性材料。合适的酶的实例包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；合适的辅基复合体的实例包括链霉抗生物素蛋白/生物素和抗生物素蛋白/生物素；合适的荧光材料的实例包括伞形酮、荧光素、荧光素异硫氰酸酯、罗丹明、二氯三嗪氨基荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的实例包括鲁米诺；生物荧光材料的实例包括萤光素酶、萤光素、和水母发光蛋白，并且合适的放射活性材料的实例包括125I、131I、35S或3H。
在另一实施方案中，根据本发明的抗体可用作用于检测样品中IL-17F(或其蛋白质片段)的存在的试剂。在一些实施方案中，抗体包含可检测的标记。抗体为多克隆，或更优选地抗体为单克隆。使用完整的抗体或其片段(例如Fab、scFv或F(ab)2)。关于探针或抗体的术语“标记的”预期包括通过将可检测性物质偶联(即物理连接)到探针或抗体来直接标记探针或抗体，以及通过与直接标记的另一试剂反应来间接标记探针或抗体。间接标记的实例包括使用荧光标记的第二抗体检测第一抗体及用生物素对DNA探针末端标记使得其可用荧光标记的链霉抗生物素蛋白检测。术语“生物样品”预期包括从受治疗者分离的组织、细胞和生物液，以及在受治疗者中存在的组织、细胞和液体。因此，包括于术语“生物样品”的用法中的是血液和馏分或血液的组分(包括血清、血浆或淋巴)。也就是说，本发明的检测方法可用于在体外及体内检测生物样品中的分析物mRNA、蛋白质或基因组。例如，用于体外检测分析物mRNA的技术包括Northern杂交和原位杂交。用于体外检测分析物蛋白质的技术包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、蛋白质印迹、免疫沉淀法和免疫荧光法。用于体外检测分析物基因组的技术DNA包括Southern杂交。用于进行免疫测定的程序，例如在“ELISA：Theory and Practice：Methods in Molecular Biology”，Vol.42，J.R.Crowther(编)Human Press，Totowa，NJ，1995；“Immunoassay”，E.Diamandis和T.Christopoulus，Academic Press，Inc.，San Diego，CA，1996；及“Practice and Theory of Enzyme Immunoassays”，P.Tijssen，Elsevier Science Publishers，Amsterdam，1985中所描述。而且，用于体内检测分析物蛋白质的技术包括向受治疗者中引入标记的抗分析物蛋白质抗体。例如，可用放射活性标记物标记抗体，所述放射活性标记物在受治疗者中的存在和定位可通过标准成像技术检测。
huIL-17F抗体的治疗性施用和制剂
本发明的抗体(在本文也称作“活性化合物”)和衍生物、片段、类似物及其同系物可掺入适于施用的药物组合物中。例如在Remington’s Pharmaceutical Sciences：The Science And Practice OfPharmacy第19版(Alfonso R.Gennaro等人编)Mack Pub.Co.，Easton，Pa.：1995；Drug Absorption Enhancement：Concepts，Possibilities，Limitations，And Trends，Harwood Academic Publishers，Langhorne，Pa.，1994；及Peptide And Protein Drug Delivery(Advances In ParenteralSciences，Vol.4)，1991、M.Dekker，New York中提供了制备这些组合物涉及的原则和考虑，以及选择组分的指导。
这些组合物通常包含抗体和药学上可接受的载体。其中使用抗体片段，优选特异性结合到靶蛋白的结合结构域的最小的抑制性片段。例如基于抗体可变区序列，可设计保留结合靶蛋白序列能力的肽分子。这种肽可用化学方法合成和/或通过重组DNA技术产生。(参见，例如Marasco等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90：7889-7893(1993))。
如本文所使用，术语“药学上可接受的载体”预期包括与药物施用相容的任何和所有的溶剂、分散介质、涂层、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸附延迟剂等。合适的载体描述于Remington’s PharmaceuticalSciences的最新版本(本领域的标准参考文本)，其通过引用并入本文。该载体或稀释剂的优选实例包括但不限于，水、盐水、林格氏溶液、葡萄糖溶液和5％的人血清蛋白。还可使用脂质体和非水载体例如非挥发油。药物活性物质的这些介质和试剂的用途是本领域熟知的。除非任何常规介质或试剂与活性化合物不相容，否则包括其在组合物中使用。
用于体内施用的制剂必须是无菌的。这易于通过经无菌滤膜过滤来实现。
本发明的药物组合物被配制成与其预期施用途径相容。施用途径的实例包括肠胃外，例如静脉内、皮内、皮下、口服(例如吸入)、经皮(即局部)、经粘膜和直肠施用。用于肠胃外、皮内、或皮下施用的溶液或悬浮液可包括以下组分：无菌稀释剂例如注射用水、盐水溶液、非挥发油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂例如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲液例如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，及用于调整强度的试剂例如氯化钠或葡萄糖。可用酸或碱例如盐酸或氢氧化钠调节pH。肠胃外制剂可装入由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多倍剂量小瓶中。
适合于注射用的药物组合物包括无菌水溶液(其中水溶性的)或分散体和用于即时制备无菌注射液或分散体的无菌粉剂。对于静脉内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany，N.J.)或磷酸缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，组合物必须是无菌的并且应该是易于进行注射的流动程度。在制造和贮存条件下它必须是稳定的并且必须防止微生物(例如细菌和真菌)污染作用。载体可以是溶剂或分散介质包含，例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。可保持适当的流动性，例如通过使用涂层例如卵磷脂，通过在分散的情况下维持所需的颗粒尺寸和通过使用表面活性剂。可通过多种抗菌剂和抗真菌剂例如对羟苯甲酸酯、三氯叔丁醇、酚、抗坏血酸、硫柳汞等来实现预防微生物作用。在许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇例如甘露醇、山梨糖、氯化钠。通过在组合物中包括延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)可引起延长注射组合物的吸收。
可如所需通过在具有一种上述所列的成分或上述所列的成分组合的合适溶剂中以所需的量掺入活性化合物，然后无菌过滤来制备无菌注射液。一般来说，分散体通过活性化合物掺入到无菌载体中来制备，所述无菌载体包含上述所列的基本分散介质和所需的来自上述所列的那些的其它成分。在无菌粉剂用于制备无菌注射液的情况下，制备方法是真空干燥和冷冻干燥，产生活性成分加上来自其之前的无菌过滤溶液的任何另外的所需的成分的粉末。
口服组合物一般包括惰性稀释剂或可食用载体。它们可装入明胶胶囊或压缩成片剂。为了口服治疗施用的目的，可将活性化合物与赋形剂掺和在一起并且以片剂、锭剂或胶囊剂的形成使用。口服组合物还可使用液体载体来制备以用作嗽口水，其中液体载体中的化合物经口施用，并喝入并吐出或吞咽。药学上相容的粘合剂和/或佐剂材料可作为组合物的一部分被包括。片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂等可包含任何以下成分或性质相似的化合物：粘合剂例如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂例如淀粉或乳糖，崩解剂例如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂例如硬脂酸镁或Sterote；助流剂例如胶体二氧化硅；甜味剂例如蔗糖或糖精；或调味剂例如薄荷、水杨酸甲酯或桔味剂。
对于通过吸入施用，化合物以喷雾剂形式从喷雾器或包含合适的推进剂例如气体(例如二氧化碳)的加压容器或投放器递送。
系统性施用还可通过经粘膜或经皮方式。对于经粘膜或经皮施用，在制剂中使用适于待渗透的屏障的渗透剂。这些渗透剂一般是本领域已知的并且例如对于经粘膜施用，包括清洁剂、胆汁盐和夫西地酸衍生物。经粘膜施用可通过使用鼻喷雾剂或栓剂来实现。对于经皮施用，活性化合物被配制成如本领域通常已知的软膏剂、油膏剂、凝胶剂或乳膏剂。
化合物还可制备成用于直肠递送的栓剂(例如具有常规栓剂基质例如可可油和其它甘油酯)或保留灌肠剂的形式。
在一个实施方案中，活性化合物与保护化合物不从身体迅速消除的载体一起制备，例如缓释/控释制剂，包括植入物和微胶囊递送系统。可使用可生物降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯-醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备这种制剂的方法对本领域技术人员是显而易见的。
例如，活性成分可装入例如分别通过凝聚技术或通过界面聚合作用制备的微胶囊例如(羟基甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(异丁烯酸甲酯)微胶囊)、胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊)或粗乳液(macroemulsion)。
可制备缓释制剂。缓释制剂的合适的实例包括包含抗体的固体疏水性聚合物的半透性基质，所述基质是成型产品的形式，例如薄膜或微胶囊。缓释基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如聚(2-羟乙基-丙烯酸甲酯)或聚(乙烯醇))、聚丙交酯(美国专利No.3,773,919)、L-谷氨酸与γ乙基-L-谷氨酸的共聚物、非降解乙烯-乙酸乙烯酯、可降解乳酸-乙醇酸共聚物例如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林构成的可注射微球)及聚-D-(-)-3-羟基丁酸。虽然聚合体例如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸能释放分子超过100天，但某些水凝胶释放蛋白质的期间较短。
该材料还可从Alza Corporation和Nova Pharmaceuticals，Inc商购的脂质体悬浮液(包括用针对病毒抗原的单克隆抗体靶向感染细胞的脂质体)获得并且还可用作药学上可接受的载体。这些可根据本领域技术人员已知方法来制备，例如美国专利No.4,522,811中所描述。
为了易于施用和剂量均一性，以剂量单位形式配制口服或肠胃外组合物是特别有益的。如本文所使用的剂量单位形式是指适于作为用于待治疗的受治疗者的单一剂量的物理上离散的单元；每个单位包含经计算以与所需的药用载体联合产生所需治疗效果的预定量的活性化合物。本发明的剂量单位形式的规格由以下决定并且直接取决于以下：活性化合物的独特特征和要实现的特定治疗效果及在本领域混合这些用于个体治疗的活性化合物的内在局限性。
药物组合物可与施用说明书包含于容器、包装或投放器中。
该制剂还可包含待治疗的特定适应症所需的多于一种的活性化合物，优选具有互补活性、彼此无不利相互影响的活性化合物。可选地，或另外地，组合物可包含增强其功能的试剂，例如细胞毒素剂、细胞因子、化疗剂或生长抑制剂。这些分子以对预期目的有效的的量适当地组合存在。
在一个实施方案中，活性化合物在组合疗法中施用，即与用于治疗病理疾患或病症(例如自身免疫性病症和炎性疾病)的其它试剂(例如治疗剂)组合。在该上下文中的术语“组合”是指试剂是基本同时给予的，或同时或相继给予的。如果是相继给予的，那么在开始施用第二化合物时，优选地在治疗位点处第一化合物仍可以有效浓度被检测出。
例如，组合疗法可包括与一种或多种另外的治疗剂共配制和/或共施用的一种或多种本发明的抗体，所述另外的治疗剂例如一种或多种细胞因子和生长因子抑制剂、免疫抑制剂、抗炎剂、代谢抑制剂、酶抑制剂和/或细胞毒素剂或细胞抑制剂，如下文更详细地描述。而且，一种或多种本文所述的抗体可与两种或多种本文所述的治疗剂组合使用。这种组合疗法可有益地利用较低剂量的所施用治疗剂，因此避免可能的毒性或与多种单一疗法相关的并发症。
与本发明的抗体组合使用的优选的治疗剂是在干扰炎症反应的不同阶段的那些治疗剂。在一个实施方案中，一种或多种本文所述的抗体可与一种或多种另外的试剂例如其它细胞因子或生长因子拮抗剂(例如可溶性受体、肽抑制剂、小分子、配体融合)；或结合到其它靶标的其抗体或抗原结合片段(例如结合到其它细胞因子或生长因子的抗体、它们的受体或其它细胞表面分子)；和抗炎性细胞因子或其激动剂共配制和/或共施用。与本文所述抗体组合使用的试剂的非限定性实例，包括但不限于，一种或多种白细胞介素(IL)或它们的受体的拮抗剂，例如IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-18、IL-21和IL-22的拮抗剂；细胞因子或生长因子或它们的受体的拮抗剂，例如肿瘤坏死因子(TNF)、LT、EMAP-II、GM-CSF、FGF和PDGF。本发明的抗体还可与细胞表面分子的抑制剂(例如针对细胞表面分子的抗体)组合，所述细胞表面分子例如CD2、CD3、CD4、CD8、CD20(例如CD20抑制剂利妥昔单抗
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CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80(B7.1)、CD86(B7.2)、CD90或它们的配体，所述配体包括CD154(gp39或CD4OL)、或LFA-1/ICAM-1和VLA-4/VCAM-1(Yusuf-Makagiansar等人(2002)Med.Res.Rev.22：146-67)。与本文所述的抗体组合使用的优选拮抗剂包括IL-1、IL-12、TNFα，IL-15、IL-18、和IL-22的拮抗剂。
那些试剂的实例包括IL-12拮抗剂，例如结合到IL-12(优选人IL-12)的嵌合、人源化、人或体外产生的抗体(或其抗原结合片段)，例如WO 00/56772中公开的抗体；IL-12受体抑制剂，例如针对人IL-12受体的抗体；及IL-12受体(例如人IL-12受体)的可溶性片段。IL-15拮抗剂的实例包括针对IL-15或其受体的抗体(或其抗原结合片段)(例如针对人IL-15或其受体的嵌合、人源化、人或体外产生的抗体)、IL-15受体的可溶性片段和IL-15结合蛋白。IL-18拮抗剂的实例包括针对人IL-18的抗体(例如嵌合、人源化、人或体外产生的抗体(或其抗原结合片段))、IL-18受体的可溶性片段和IL-18结合蛋白(IL-18BP)。IL-1拮抗剂的实例包括白细胞介素-1-转化酶(ICE)抑制剂和抗IL-1受体抗体(或其抗原结合片段)，所述白细胞介素-1-转化酶(ICE)抑制剂例如Vx740、IL-1拮抗剂，例如IL-1RA(anikinra，KINERETTM，Amgen)、sIL1RII(Immunex)。
TNF拮抗剂的实例包括针对TNF(例如人TNFα)的嵌合、人源化、人或体外产生的抗体(或其抗原结合片段)，例如(HUMIRATM，D2E7，人TNFα抗体)、CDP-571/CDP-870/BAY-10-3356(人源化抗TNFα抗体，Celltech/Pharmacia)、cA2(嵌合抗TNFα抗体，
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Centocor)；抗TNF抗体片段(例如CPD870)；TNF受体的可溶性片段，例如p55或p75人TNF受体或其衍生物，例如75kd TNFR-IgG(75kDTNF受体-IgG融合蛋白质，ENBRELTM；Immunex)、p55kdTNFR-IgG(55kD TNF受体-IgG融合蛋白质酶拮抗剂，例如TNFα转化酶(TACE)抑制剂(例如α-磺酰异羟肟酸衍生物、和N-羟基甲酰胺TACE抑制或GW 3333、-005或-022)；和TNF-bp/s-TNFR(可溶性TNF结合蛋白)。优选的TNF拮抗剂是TNF受体的可溶性片段和TNF α转化酶(TACE)抑制剂，所述TNF受体的可溶性片段例如p55或p75人TNF受体或其衍生物(例如75kdTNFR-IgG)。
在其它实施方案中，本文所述抗体可与以下的一种或多种组合施用：IL-13拮抗剂，例如可溶性IL-13受体(sIL-13)和/或针对IL-13的抗体；IL-2拮抗剂，例如DAB 486-IL-2和/或DAB 389-IL-2(IL-2融合蛋白质，Seragen)，和/或针对IL-2R的抗体，例如抗Tac(人源化抗IL-2R，Protein Design Labs)。另一组合包括与非消耗性抗CD4抑制剂(DEC-CE9.1/SB 210396；非消耗性灵长类化的抗CD4抗体；IDEC/SmithKline)组合的本发明的抗体、拮抗剂小分子和/或抑制性抗体。其它优选的组合包括共刺激途径CD80(B7.1)或CD86(B7.2)的拮抗剂，包括抗体、可溶性受体或拮抗性配体；以及p-选择蛋白糖蛋白配体(PSGL)，抗炎性细胞因子例如IL-4(DNAX/Schering)；IL-10(SCH52000；重组IL-10DNAX/Schering)；IL-13和TGF-β及其激动剂(例如激动剂抗体)。
在其它实施方案中，本发明的一种或多种抗体可与一种或多种抗炎药、免疫抑制剂、或代谢抑制剂或酶抑制剂共配制和/或共施用。可用于与本文所述抗体组合的药物或抑制剂的非限定性实例，包括但不限于，一种或多种：非甾体抗炎药(NSAID)，例如布洛芬、替尼达普、萘普生、美洛昔康、吡罗昔康、双氯芬酸、和吲哚美辛；柳氮磺吡啶；皮质类固醇例如泼尼松龙；抑制细胞因子的抗炎药(CSAID)；核苷酸生物合成的抑制剂，例如嘌呤生物合成的抑制剂，叶酸拮抗剂(例如甲氨蝶呤(N-[4-[[(2，4-二氨基-6-喋啶)甲基]甲氨基]苯甲酰]-L-谷氨酸)；及嘧啶生物合成的抑制剂，例如二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)抑制剂。与本发明的抗体组合使用的优选的治疗剂包括NSAID、CSAID、(DHODH)抑制剂(例如来氟米特)和叶酸拮抗剂(例如甲氨蝶呤)。
另外的抑制剂的实例包括一种或多种：皮质类固醇(口服、吸入和局部注射)；免疫抑制剂，例如环孢菌素、他克莫司(FK-506)；和mTOR抑制剂，例如西罗莫司(雷帕霉素-RAPAMUNETM或雷帕霉素衍生物，例如可溶性雷帕霉素衍生物(例如雷帕霉素酯衍生物，例如CCI-779)；通过促炎细胞因子例如TNFα或IL-1干扰信号的试剂(例如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制剂)；COX2抑制剂，例如塞来考昔、罗非考昔及其变体；磷酸二酯酶抑制剂，例如R973401(磷酸二酯酶Type IV抑制剂)；磷脂酶抑制剂，例如胞质磷脂酶2(cPLA2)的抑制剂(例如三氟甲基酮类似物)；血管内皮细胞生长因子或生长因子受体的抑制剂，例如VEGF抑制剂和/或VEGF-R抑制剂；及血管生成抑制剂。与本发明的抗体组合使用的优选的治疗剂是免疫抑制剂，例如环孢菌素、他克莫司(FK-506)；mTOR抑制剂，例如西罗莫司(雷帕霉素)或雷帕霉素衍生物，例如可溶性雷帕霉素衍生物(例如雷帕霉素酯衍生物，例如CCI-779)；COX2抑制剂，例如塞来考昔及其变体；及磷脂酶抑制剂，例如胞质磷脂酶2(cPLA2)抑制剂，例如三氟甲基酮类似物。
可与本发明的抗体组合的治疗剂的另外的实例包括一种或多种：6-巯基嘌呤(6-MP)；硫唑嘌呤；柳氮磺吡啶；美沙拉嗪；奥沙拉嗪；氯喹/羟氯喹
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青霉胺；金硫苹果酸盐(aurothiornalate)(肌内和口服)；硫唑嘌呤；秋水仙素(coichicine)；β-2肾上腺素受体激动剂(沙丁胺醇、特布他林、沙美特罗(salmeteral))；黄嘌呤(茶碱、氨茶碱(arninophylline))；色甘酸；奈多罗米；酮替芬；异丙托铵和氧托铵；霉酚酸酯；腺苷激动剂；抗血栓形成剂；补体抑制剂；及肾上腺素能剂。
可与本发明的抗体组合的用于治疗或预防关节炎病症(例如类风湿性关节炎、炎性关节炎、类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、骨关节炎和银屑病性关节炎)的试剂的非限定性实例，包括以下的一种或多种：如本文所述的IL-12拮抗剂；NSAID；CSAID；TNF，例如TNFα，如本文所述的拮抗剂；如本文所述的非消耗性抗CD4抗体；如本文所述的IL-2拮抗剂；抗炎性细胞因子，例如IL-4、IL-10、IL-13和TGFα或其激动剂；如本文所述的IL-1或IL-1受体拮抗剂；如本文所述的磷酸二酯酶抑制剂；如本文所述的Cox-2抑制剂；伊洛前列素；甲氨蝶呤；沙利度胺和沙利度胺相关药物(例如Celgen)；来氟米特；纤溶酶原活化的抑制剂，例如氨甲环酸；细胞因子抑制剂，例如T-614；前列腺素El；硫唑嘌呤；白细胞介素-1转化酶(ICE)的抑制剂；zap-70和/或lck抑制剂(酪氨酸激酶zap-70或lck的抑制剂)；如本文所述的血管内皮细胞生长因子或血管内皮细胞生长因子受体的抑制剂；如本文所述的血管生成抑制剂；皮质类固醇抗炎药(例如SB203580)；TNF-转化酶抑制剂；IL-11；IL-13；IL-17抑制剂；黄金；青霉胺；氯喹；羟氯喹；苯丁酸氮芥；环磷酰胺；环孢菌素；全淋巴辐射；抗胸腺细胞球蛋白；CD5-毒素；口服施用的肽和胶原；氯苯扎利二钠；细胞因子调节剂(CRA)HP228和HP466(HoughtenPharmaceuticals，Inc.)；ICAM-1反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(ISIS2302；Isis Pharmaceuticals，Inc.)；可溶性补体受体1(TP10；T CellSciences，Inc.)；泼尼松；奥古蛋白；糖胺聚糖多硫酸酯；米诺环素
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抗IL2R抗体；海洋和植物脂质(鱼和植物种子脂肪酸)；金诺芬(auranofm)；保泰松；甲氯芬那酸；氟芬那酸；静脉内免疫球蛋白；齐留通；麦考酚酸(RS-61443)；他克莫司(FK-506)；西罗莫司(雷帕霉素)；氨普立糖(盐酸氨普立糖)；克拉屈滨(2-氯代脱氧腺苷)；及阿扎立平。优选的组合包括一种或多种本发明的抗体与甲氨蝶呤或来氟米特的组合，并且在中度或重度类风湿性关节炎案例中，包括一种或多种本发明的抗体与环孢菌素组合。
用于与本发明的抗体组合以治疗关节炎病症的抑制剂的优选的实例包括TNF拮抗剂(例如结合到TNF的嵌合、人源化、人或体外产生的抗体或其抗原结合片段)；TNF受体的可溶性片段，例如p55或p75人TNF受体或其衍生物，例如75kdTNFR-IgG(75kDTNF受体-IgG融合蛋白质，ENBRELTM)、p55kD TNF受体-IgG融合蛋白质；TNF酶拮抗剂，例如TNFα转化酶(TACE)抑制剂)；IL-12、IL-15、IL-18、IL-22的拮抗剂；T细胞和B细胞消耗性试剂(例如抗CD4或抗CD22抗体)；小分子抑制剂，例如甲氨蝶呤和来氟米特；西罗莫司(雷帕霉素)及其类似物，例如CCI-779；cox-2和cPLA2抑制剂；NSAID；p38抑制剂，TPL-2、Mk-2和NFkb抑制剂；RAGE或可溶性RAGE；P-选择蛋白或PSGL-1抑制剂(例如小分子抑制剂，针对其的抗体，例如针对P-选择蛋白的抗体)；雌激素受体β(ERB)激动剂或ERB-NFkb拮抗剂。可与一种或多种本发明的抗体共施用和/或共配制的最优选的另外的治疗剂包括一种或多种：TNF受体的可溶性片段，例如p55或p75人TNF受体或其衍生物，例如75kdTNFR-IgG(75kD TNF受体-IgG融合蛋白质，ENBRELTM)；甲氨蝶呤、来氟米特、或西罗莫司(雷帕霉素)或其类似物，例如CCI-779。
可与本发明的抗体组合的用于治疗或预防多发性硬化的试剂的非限定性实例包括以下：干扰素，例如干扰素-α1a(例如AVONEXTM；Biogen)和干扰素-1b(BETASERONTM Chiron/Berlex)；共聚物1(Cop-1；COPAXONETM Teva Pharmaceutical Industries，Inc.)；高压氧；静脉内免疫球蛋白；克拉屈滨；如本文所述的TNF拮抗剂；皮质类固醇；泼尼松龙；甲基泼尼松龙；硫唑嘌呤；环磷酰胺；环孢菌素；环孢菌素A、甲氨蝶呤；4-氨基吡啶；及替扎尼定。与本发明的抗体组合使用的另外的拮抗剂包括针对其它人细胞因子或生长因子的抗体或其它人细胞因子或生长因子的拮抗剂，所述其它人细胞因子或生长因子例如TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、EL-7、IL-8、IL-12 IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-11、GM-CSF、FGF和PDGF。如本文所述的抗体可与针对细胞表面分子例如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80、CD86、CD90或它们的配体的抗体组合。本发明的抗体还可与试剂组合，所述试剂例如甲氨蝶呤、环孢菌素、FK506、雷帕霉素、霉酚酸酯、来氟米特、NSAID例如布洛芬、皮质类固醇例如泼尼松龙、磷酸二酯酶抑制剂、腺苷激动剂、抗血栓形成剂、补体抑制剂、肾上腺素剂、通过如本文所述的促炎细胞因子干扰信号的试剂、IL-Ib转化酶抑制剂(例如Vx740)、抗P7s，PSGL、TACE抑制剂、T-细胞信号抑制剂例如激酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂、柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤(azathloprine)、6-巯基嘌呤、血管紧张素转化酶抑制剂、如本文所述的可溶性细胞因子受体及其衍生物，及抗炎性细胞因子(例如IL-4、IL-10、IL-13和TGF)。
本发明的抗体可与其组合的用于多发性硬化的治疗剂的优选的实例包括干扰素-β，例如IFNβ-1a和IFNβ-1b；copaxone、皮质类固醇、IL-1抑制剂、TNF抑制剂、针对CD40配体和CD80的抗体、IL-12拮抗剂。
可与本发明的抗体组合用于治疗或预防炎性肠道疾病(例如克罗氏病、溃疡性结肠炎)的试剂的非限定性实例包括以下：布地奈德(budenoside)；表皮生长因子；皮质类固醇；环孢菌素；柳氮磺吡啶；氨基水杨酸盐；6-巯基嘌呤；硫唑嘌呤；甲硝唑；脂氧合酶抑制剂；美沙拉嗪；奥沙拉嗪；巴柳氮；抗氧化剂；血栓素抑制剂；IL-1受体拮抗剂；抗IL-1单克隆抗体；抗IL-6单克隆抗体；生长因子；弹性蛋白酶抑制剂；吡啶基-咪唑化合物；如本文所述的TNF拮抗剂；IL-4、IL-10、IL-13和/或TGFβ细胞因子或其激动剂(例如激动剂抗体)；IL-11；葡糖苷酸-或葡聚糖-偶联的泼尼松龙、地塞米松或布地奈德的前药；ICAM-1反义硫代磷酸酯寡脱氧核苷酸(ISIS 2302；IsisPharmaceuticals，Inc.)；可溶性补体受体1(TP10；T Cell Sciences，Inc.)；缓释美沙拉嗪；甲氨蝶呤；血小板活化因子(PAF)的拮抗剂；环丙沙星；及利多卡因。
可与本发明的抗体组合用于治疗或预防银屑病的试剂的非限定性实例包括以下：皮质类固醇；维生素D3及其类似物；类维生素A(例如阿维A)；甲氨蝶呤；环孢菌素、6-硫鸟嘌呤；异维生素A酸；羟基脲(hydrea)；羟基脲(hydroxyurea)；柳氮磺吡啶；霉酚酸酯；硫唑嘌呤；他克莫司；富马酸酯；生物制品例如Amevive、Enbrel、Humira、Raptiva和Remicade、Ustekinmab和XP-828L；光疗法；及光化学疗法(例如补骨脂素和紫外光疗法组合)。
可与本发明的抗体组合用于治疗或预防炎性气道/呼吸道疾病(例如慢性阻塞性肺病、哮喘)的试剂的非限定性实例包括以下：β2-肾上腺素受体激动剂(例如沙丁胺醇(沙丁胺醇USAN)、左旋沙丁胺醇、特布他林、比托特罗)；长效β2-肾上腺素受体激动剂(例如沙美特罗、福莫特罗、班布特罗)；肾上腺素能激动剂(例如吸入肾上腺素和麻黄碱片)；抗胆碱能药物(例如异丙托溴铵)；吸入类固醇和长效支气管扩张剂的组合(例如氟替卡松/沙美特罗(United States的Advair，和UnitedKingdom的Seretide))或布地奈德/福莫特罗(Symbicort))；吸入糖皮质素(例如环索奈德、倍氯米松、布地奈德、氟尼缩松、氟替卡松、莫米松、曲安西龙)；白细胞三烯调节剂(例如孟鲁司特、扎鲁司特、普仑司特和齐留通)；肥大细胞稳定剂(例如色甘酸盐(色甘酸)和奈多罗米)；抗毒蕈碱/抗胆碱能药物(例如异丙托铵、氧托铵、噻托铵(tiotropium))；甲基黄嘌呤(例如茶碱、氨茶碱)；抗组胺剂；IgE阻断剂(例如奥马珠单抗(Omalizumab))；M3毒蕈碱拮抗剂(抗胆碱能药物)(例如异丙托铵、噻托铵)；cromone(例如色苷酸盐(chromoglicate)、奈多罗米)；黄嘌呤(例如茶碱)；及TNF拮抗剂(例如英夫利昔单抗、阿达木单抗和依那西普).
在一个实施方案中，本发明的抗体可与定向参与调节免疫响应(例如移植排异)的其它靶标的一种或多种抗体组合使用。
可与本发明的抗体组合用于治疗或预防免疫响应的试剂的非限定性实例包括以下：针对其它细胞表面分子，包括但不限于CD25(白细胞介素-2受体-a)、CD11a(LFA-1)、CD54(ICAM-1)、CD4、CD45、CD28/CTLA4(CD80(B7.1)，例如CTLA4Ig-阿巴西普
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ICOSL、ICOS和/或CD86(B7.2)的抗体。在另一实施方案中，本发明的抗体与一种或多种普通免疫抑制剂(例如环孢菌素A或FK506)组合使用。
在其它实施方案中，抗体用作针对自身免疫性病症、炎性疾病等的疫苗佐剂。用于治疗这些类型病症的佐剂的组合适合于与来自以下的多种抗原组合使用：抗原靶向的自身抗原，即参与自身免疫的自身抗原，例如髓鞘碱性蛋白；炎性自身抗原，例如淀粉样肽蛋白质或移植抗原，例如异源抗原。抗原可包含源自蛋白质的肽或多肽，以及以下的任何片段：糖类、蛋白质、多核苷酸或寡核苷酸、自身抗原、淀粉样肽蛋白质、移植抗原、变应原或其它大分子组分。在一些情况下，多于一种抗原包括于抗原组合物中。
例如用于脊椎动物宿主中减轻对变应原的响应所需的疫苗(包含本发明的佐剂组合)，包括包含变应原或其片段的疫苗。这些变应原的实例描述于美国专利No.5,830,877和公布的国际专利申请No.WO 99/51259(其据此通过引用以其整体并入)，并且包括花粉、虫毒、动物毛屑、真菌孢子和药物(例如青霉素)。疫苗干扰IgE抗体(变应性反应的已知原因)的产生。在另一实例中，用于预防或治疗脊椎动物宿主中特征在于淀粉样沉淀的疾病所需的疫苗(包含本发明的佐剂组合)，包括包含淀粉样肽蛋白质(APP)的部分的疫苗。这种疾病是指各种阿尔茨海默氏病、淀粉样变性或致淀粉样疾病(amyloidogenicdisease)。因此，本发明的疫苗包括本发明的佐剂组合加上Aβ肽以及Aβ肽的片段和针对Aβ肽或其片段的抗体。
其它疗法的设计和产生
根据本发明并且基于本文中关于IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体产生和表征的抗体的活性，促进了超出抗体部分的其它治疗形式的设计。这些治疗形式包括但不限于，先进的抗体疗法，例如双特异性抗体、免疫毒素和放射性标记疗法、肽疗法的产生、基因疗法，特别是细胞内抗体、反义疗法和小分子。
例如关于双特异性抗体，可产生包含下列的双特异性抗体：(i)偶联在一起的两个抗体，一个对IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体具有特异性，并且另一个对第二分子具有特异性，(ii)单一抗体，其具有对IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体特异性的第一链，并且对第二分子特异性的第二链，或(iii)单链抗体，其具有对IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体及第二分子的特异性。这些双特异性抗体使用熟知的技术来产生，例如关于(i)和(ii)参见例如Fanger等人，Immunol Methods 4：72-81(1994)及Wright等人，Crit，Reviews in Immunol.12125-168(1992)，并且关于(iii)参见例如Traunecker等人，Int.J.Cancer(Suppl.)7：51-52(1992)。
关于免疫毒素，可利用本领域熟知的技术修饰抗体以作为免疫毒素起作用。参见例如Vitetta Immunol Today 14：252(1993)。还参见美国专利No.5,194,594。关于放射性标记的抗体的制备，利用本领域熟知的技术也可容易地制备这些修饰的抗体。参见例如Junghans等人，Cancer Chemotherapy and Biotherapy 655-686(第2版，Chafner和Longo编，Lippincott Raven(1996))中。还参见美国专利No.4,681,581、4,735,210、5,101,827、5,102,990(RE 35,500)、5,648,471和5,697,902。每种免疫毒素和放射性标记的分子都可能杀死表达IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体的细胞。
关于治疗肽的产生，通过利用与IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体及针对其的抗体(例如本发明的抗体)相关的结构信息，或通过肽文库的筛选，可产生针对IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体的治疗肽。关于Houghten等人，Biotechniques 13：412-421(1992)，Houghten PNAS USA 82：5131-5135(1985)，Pinalla等人，Biotechniques 13：901-905(1992)，Blake和Litzi-Davis BioConjugateChem.3：510-513(1992)中讨论了肽疗法的设计和筛选。还可制备免疫毒素和放射性标记的分子，并且以类似的方法，关于肽部分如上述关于抗体的讨论。假设IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体分子(或形式，例如剪接变体或替换形式)在疾病过程中是功能活性的，也可能通过常规技术设计针对其的基因和反义疗法。这些形式可用于调节IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体的功能。与其相关，本发明的抗体促进与其相关的功能测定的设计和使用。在国际专利申请No.WO 94/29444中详细讨论了用于反义疗法的设计和策略。用于基因疗法的设计和策略是熟知的。然而，特别地，可证明涉及细胞内抗体的基因治疗技术的使用是特别有益的。参见例如Chen等人，Human Gene Therapy 5：595-601(1994)及Marasco Gene Therapy 4：11-15(1997)。在国际专利申请No.WO 97/38137中还讨论了基因疗法的一般设计和与基因疗法相关的考虑。
可利用从IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体分子的结构及它与根据本发明的其它分子(例如本发明的抗体)的相互作用及其它收集的信息来合理设计另外的治疗形式。在这点上，可利用合理的药物设计技术例如X射线晶体学、计算机辅助(或协助)分子模型(CAMM)、定量或定性结构-活性关系(QSAR)及类似的技术以聚焦于药物发现的努力。合理的设计允许预测可与分子或其特定形式相互作用的蛋白质或合成结构，其可用于修饰或调节IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体的活性。这些结构可被化学合成或在生物系统中表达。这种方法综述于Capsey等人，Genetically Engineered HumanTherapeutic Drugs(Stockton Press，NY(1988))中。此外，可设计和合成组合文库并用于筛选程序，例如高通量筛选效果。
筛选方法
本发明提供用于鉴定调节剂(本文也称作“筛选检测”)的方法，所述调节剂即调节、阻断、抑制、降低、拮抗、中和或以其它方式干扰IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体结合到它们的固有受体的候选物或测试化合物或试剂(例如肽、肽模拟物、小分子或其它试剂)，或调节、阻断、抑制、降低、拮抗、中和或以其它方式干扰IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体的信号功能的候选物或测试化合物或试剂。还提供鉴定用于治疗与IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体信号相关的病症的化合物的方法。本发明还包括本文所述的筛选测定中鉴定的化合物。
在一个实施方案中，本发明提供用于筛选调节IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体的信号功能的候选物或测试化合物的测定。使用本领域已知的组合文库法中众多方法的任何方法可获得本发明的测试化合物，包括：生物文库、空间可寻址平行固相或液相文库、需要重叠合法(deconvolution)的合成文库法、“一珠一化合物”的文库法及使用亲和层析选择的合成文库法。生物文库法限于肽文库，而其它四种方法可应用于肽、非肽寡聚体或化合物的小分子文库。(参见，例如Lam，1997.Anticancer Drug Design 12：145)。
如本文所使用的“小分子”意指具有小于约5kD并且最优选地小于约4kD分子量的组合物。小分子可以是，例如核酸、肽、多肽、肽模拟物、碳水化合物、脂质或其它有机或无机分子。化学和/或生物混合物(例如真菌、细菌或海藻提取物)的文库是本领域已知的并且可用任何本发明的测定来筛选。
用于分子文库合成方法的实例可在本领域发现，例如在：DeWitt等人，1993.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90：6909；Erb等人，1994.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.91：11422；Zuckermann等人，1994.J.Med.Chem.37：2678；Cho等人，1993.Science 261：1303；Carrell等人，1994.Angew.Chem.Int.Ed.Engl.33：2059；Carell等人，1994.Angew.Chem.Int.Ed.Engl.33：2061；及Gallop等人，1994.J.Med.Chem.37：1233。
化合物文库可存在于溶液中(参见例如Houghten，1992.Biotechniques 13：412-421)或珠子上(参见Lam，1991.Nature 354：82-84)、芯片上(参见Fodor，1993.Nature 364：555-556)、细菌(参见美国专利No.5,223,409)、孢子(参见美国专利5,233,409)、质粒(参见Cull等人，1992.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：1865-1869)或噬菌体上(参见Scott和Smith，1990.Science 249：386-390；Devlin，1990.Science 249：404-406；Cwirla等人，1990.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87：6378-6382；Felici，1991.J.Mol.Biol.222：301-310；及美国专利No.5,233,409)。
在一个实施方案中，将候选化合物引入到抗体-抗原复合体并且确定候选化合物是否破坏抗体-抗原复合体，其中这种复合体的破坏表明候选化合物调节IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体的信号功能。例如抗体是单克隆抗体5E12(“Mab05”)并且抗原是IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体。
在另一实施方案中，提供IL-17F同二聚体并且暴露于至少一种中和单克隆抗体。检测抗体-抗原复合体的形成，并且将一种或多种候选化合物引入到复合体。如果引入一种或多种候选化合物之后抗体-抗原复合体被破坏，则该候选化合物用于治疗与IL-17F信号相关的病症。
在另一实施方案中，提供IL-17F的可溶性蛋白质并且暴露于至少一种中和单克隆抗体。检测抗体-抗原复合体的形成，并且将一种或多种候选化合物引入到复合体。如果引入一种或多种候选化合物之后抗体-抗原复合体被破坏，该候选化合物用于治疗与IL-17F信号相关的病症。
可实现测试化合物干扰或破坏抗体-抗原复合体的能力的测定，例如通过将测试化合物与放射性同位素或酶标记偶联使得可通过检测复合体中的标记化合物来确定测试化合物结合到抗原或其生物活性部分。例如，测试化合物可用125I、35S、14C或3H直接或间接地标记，并且放射性同位素通过直接射电辐射计数或通过闪烁计数来检测。可选地，测试化合物可用例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或萤光素酶来酶标记，并且测定通过合适的底物至产物的转化来检测酶标记。
在一个实施方案中，测定包括使抗体-抗原复合体与测试化合物接触，并且测定测试化合物与抗原相互作用的能力或以其它方式破坏存在的抗体-抗原复合体的能力。在这个实施方案中，测定测试化合物与抗原相互作用和/或破坏抗体-抗原复合体的能力包含测定测试化合物与抗体相比优先结合到抗原或其生物活性部分的能力。
在另一实施方案中，测定包括使抗体-抗原复合体与测试化合物接触并且测定测试化合物调节抗体-抗原复合体的能力。可实现测试化合物调节抗体-抗原复合体的能力的测定，例如通过测定在存在测试化合物的情况下抗原结合到抗体或与抗体相互作用的能力。
本领域技术人员应理解，在本文所公开的任何筛选方法中，抗体可以是中和抗体，例如单克隆抗体5E12、41B10、11C5、21B10、1F1、2E12、5D3、22F8、28B11、41A4和43G6，每种抗体调节或以其它方式干扰促炎细胞因子的产生。
本文所公开的筛选方法可作为基于细胞的测定或作为无细胞测定来实施。本发明的无细胞测定适用于可溶性IL-17F、可溶性IL-17A/IL-17F复合体及其片段。
在多于一个实施方案中，可能需要将抗体或抗原固定以在引入候选化合物之后促进复合体形式与一种或两种非复合体形式的分离，以及调节测定的自动化。在存在和不存在候选化合物的情况下对抗体-抗原复合体的观察可在适于包含反应物的任何容器中实现。这种容器的实例包括微量滴定板、试管和微离心管。在一个实施方案中，可提供添加了允许一种或两种蛋白质结合到基质的结构域的融合蛋白。例如GST-抗体融合蛋白质或GST-抗原融合蛋白可吸附到谷胱甘肽琼脂糖珠子(Sigma Chemical，St.Louis，MO)或谷胱甘肽衍生化微量滴定板上，然后其与测试化合物组合，并且在有助于复合体形成的条件下(例如在生理盐和pH条件下)孵育混合物。孵育后，冲洗珠子或微量滴定板孔以去除任何未结合的组分，在珠子的情况下使基质固定，直接或间接测定复合体。可选地，复合体可从基质解离，并且可使用标准技术测定抗体-抗原复合体形式的水平。
用于将蛋白质固定在基质上的其它技术还可用于本发明的筛选检测。例如，可利用生物素和链霉抗生物素蛋白的偶联固定抗体(例如5E12、41B10、11C5、21B10、1F1、2E12、5D3、22F8、28B11、41A4和43G6)或抗原(例如IL-17F蛋白质或IL-17A/IL-17F复合体)。可使用本领域熟知的技术(例如生物素化试剂盒，Pierce Chemicals，Rockford，Ill.)从生物素-NHS(N-羟基-琥珀酰亚胺)制备生物素化的抗体或抗原分子，并且固定于链霉抗生物素蛋白包被的96孔板(PierceChemical)的孔中。可选地，与目标抗体或抗原反应但不干扰目标抗体-抗原复合体的形成的其它抗体可衍生化到板的孔中，并且未结合的抗体或抗原通过抗体偶联捕获于孔中。用于检测这种复合体的方法，除上述用于GST-固定的复合体的方法以外，还包括使用这些其它抗体与抗体或抗原反应免疫检测复合体。
本发明还涉及通过任何上述筛选检测而鉴定的新试剂和将其用于如本文所述的治疗。
诊断和预防制剂
本发明的huIL-17F MAb用于诊断和预防制剂。在一个实施方案中，给有发展一种或多种上述自身免疫性或炎性疾病风险的患者施用IL-17F拮抗剂(例如本发明的huIL-17F MAb)，所述上述自身免疫性或炎性疾病例如不限于，类风湿性关节炎和其它自身免疫性关节炎疾患、克罗氏病、银屑病、多发性硬化、慢性阻塞性肺部疾病、哮喘、骨关节炎和癌。可使用基因型、血清学或生化标记物来确定患者或器官对一种或多种上述自身免疫性或炎性疾病的倾向。
在本发明的另一实施方案中，给被诊断出具有与一种或多种上述自身免疫性或炎性疾病相关的临床适应症的人个体施用IL-17F拮抗剂(例如huIL-17F抗体)，所述上述自身免疫性或炎性疾病例如类风湿性关节炎或其它自身免疫性关节炎疾患、克罗氏病、银屑病、多发性硬化、慢性阻塞性肺部疾病、哮喘、骨关节炎和癌。诊断后，施用IL-17F拮抗剂(例如huIL-17F抗体)以减轻或逆转与类风湿性关节炎和其它自身免疫性关节炎疾患、克罗氏病、银屑病、多发性硬化、慢性阻塞性肺部疾病、哮喘、骨关节炎和癌相关的临床适应症的效果。
本发明的抗体还用于检测患者样品中的IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体并因而用作诊断。例如本发明的huIL-17F抗体用于体外测定，例如ELISA，以检测患者样品中IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体水平。
在一个实施方案中，将本发明的huIL-17F抗体固定在固体载体(例如微量滴定板的孔)上。固定的抗体用作可存在于测试样品中的用于任何IL-17F和/或任何异二聚体IL-17A/IL-17F复合体的捕获抗体。在使固定抗体与患者样品接触之前，冲洗固体载体并且用阻断剂(例如乳蛋白或白蛋白)处理以预防分析物的非特异性吸附。
然后用疑似包含抗原的测试样品或用包含标准量抗原的溶液处理孔。这种样品是，例如来自疑似具有循环抗原水平(视为病理学诊断)的受治疗者的血清样品。冲洗掉测试样品或标准量抗原之后，用带可检测标记的第二抗体处理固体载体。标记的第二抗体用作检测抗体。测量可检测标记的水平，并且通过与从标准样品发展的标准曲线相比较来确定测试样品中IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体抗原的浓度。
应理解，基于使用本发明的huIL-17F抗体在体外诊断测定中获得的结果，可能在受治疗者中基于IL-17F和/或异二聚体IL-17A/IL-17F复合体抗原的表达水平对疾病(例如与局部缺血、自身免疫性或炎性病症相关的临床适应症)的划分阶段。对于给定的疾病，从诊断为在疾病进展中的多个阶段和/或在疾病治疗的多个治疗点的受治疗者采集血液样品。使用提供进展或疗法的每个阶段的统计学重要结果的样品群体，指定可视为每个阶段的特征的抗原的一系列浓度。
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实施例
仅为了示例的目的提供包括进行的实验和实现的结果的以下实施例，而这些实施例不应解释为对本发明的限制。
实施例1：人IL-17F、大鼠IL-17F、猕猴IL-17F的克隆、表达和纯 化
克隆
通过PCR扩增编码成熟人IL-17F(AF384857，aa 31-163)、大鼠IL-17F(AAH91568，aa 21-153)和猕猴IL-17F(与序列XP_001106517 aa31-163具有同一性)的cDNA并且在PCR4TOPO载体(Invitrogen)中克隆。在另一PCR步骤时，将His标签或后面是AviTag的His标签(Avidity，Denver CO)引入到细胞因子编码序列的N端。然后这些构建体融合到前导序列并且在相应表达载体中亚克隆。
从杆状病毒感染细胞表达和纯化人IL-17F和大鼠IL-17F
将前面是GP67前导序列(MLLVNQSHQGFNKEHTSKMVSAIVLYVLLAAAAHSAFA)(SEQ ID NO：100)的His标记的huIL-17F或大鼠IL-17F亚克隆到杆状病毒杆粒载体pFASTBAC Dual(Invitrogen)中。转染到Sf9细胞内之后，将重组病毒分离和扩增。为了产生蛋白质，用杆状病毒感染Hi5细胞或SF9细胞并在27℃孵育3天。通过离心使细胞培养基澄清，过滤并且在SartoFlow Slice200(Sartorius-Hydrosart，截留10kD)中浓缩约10次。将pH调整至7.0和另一离心步骤后，使用标准程序在Ni-NTA Superflow柱(Qiagen)或带有Ni2+离子电荷的HiTrap Chelating HP柱(GE Healthcare)上纯化浓缩的蛋白质。汇集包含IL-17F的馏分并且在PD-10柱(GEHealthcare)上脱盐。
来自杆状病毒感染细胞的人IL-17F和大鼠IL-17F在一个纯化步骤之后基本上无污染物，并且表现出主要是二硫化物-连接的同二聚体，如通过非还原性SDS-PAGE所证明。His-标记的杆状病毒表达的人IL-17F的生物活性与商品化的细胞因子(E.Coli表达的huIL-17F，Peprotech EC或R & D Systems)的活性相当。
从CHOK1SV细胞表达和纯化人IL-17F和大鼠IL-17F
在表达载体pEE14.4中，前面是CD33前导序列(MPLLLLLPLLWAGALAMD；SEQ ID NO：101)、加上His标记和AviTag(Avidity，Denver CO)的huIL-17F或大鼠IL-17F编码序列处于hCMV启动子的控制下。IL-17F从包含病毒内部核糖体进入位点(IRES)和GFP编码序列作为第二顺反子的双顺反子mRNA表达。pEE14.4.载体包含谷氨酰胺合成酶(GS)基因，所述谷氨酰胺合成酶(GS)基因是转染细胞在包含甲硫氨酸砜亚胺(MSX)的选择培养基中的生存所必需的。稳定的转染子在Lonza Biologics所有的CHOK1SV细胞系中产生。在存在MSX的情况下培养4周后，鉴定高表达克隆，扩增并且用于产生人或大鼠IL-17F。
通过Ni2+亲和层析纯化CHOK1SV表达的人IL-17F和大鼠IL-17F。它们基本上无污染物并且在非还原性SDS-PAGE凝胶上表现为二硫化物-连接同二聚体。与商品化的huIL-17F的活性相比，His+Avi-标记的、CHO-表达的人IL-17F的生物活性显著减少，这可能是因为在N-端存在庞大的双标记。
从PEAK细胞表达和纯化人IL-17F cnIL-17F
在游离基因表达载体pEAK8中，将His-标记的huIL-17F或cnIL-17F编码序列融合到桡足类动物(Gaussia princeps)萤光素酶前导序列(AF015993)并且处于EF1启动子的控制下。细胞因子编码序列的后面是病毒内部核糖体进入位点(IRES)和第二顺反子(GFP)。pEAK8载体包含嘌呤霉素抗性基因、EBV核抗原1(EBNA1)和oriP复制起点。EBNA1和oriP作为人细胞中的游离基因DNA对pEAK8载体增殖是必需的并且产生稳定的转染子。在存在2μg/mL的嘌呤霉素的情况下培养7-10天后获得稳定转染的细胞。扩增嘌呤霉素抗性细胞群并用于细胞因子产生。
PEAK表达的通过Ni2+亲和层析纯化的纯度＞95％并且发现主要是二硫键连接的同二聚体的形式，如通过非还原性SDS-PAGE所证明。His-标记的、PEAK-表达的人IL-17F的生物活性与来自商业来源的huIL-17F的活性类似。
实施例2：免疫
使用小鼠的转基因品系产生全人单克隆抗体，其中小鼠抗体基因表达受抑制并且用人抗体基因表达替换。使用了三种转基因小鼠品系：
Figure BDA0000126968330000891
小鼠(Medarex，Princeton NJ)
2)KMTM小鼠，小鼠和Kirin′s TC小鼠(Kirin Pharma Company，Japan)之间的杂种
3)KM(FCγRIIb-KO)小鼠，从KMTM小鼠衍生的品系、其中编码抑制性Fcγ受体IIB的基因Fcgr2b已被灭活。
用人IL-17F或人IL-17F和大鼠IL-17F两者免疫小鼠。两种形式的抗原用于免疫：非偶联的IL-17F或偶联到钥孔戚血蓝素(KLH)的IL-17F。免疫策略遵循来自文献的标准方案。
通过ELISA对免疫的动物血清定期筛选针对huIL-17F和大鼠IL-17F的人IgG的存在。大多数动物发展了对人IL-17F的高滴度响应。当大鼠IL-17F和huIL-17都用于免疫时，大多数动物发展了对两种抗原的高滴度响应。用huIL-17F作为唯一的抗原(即不用大鼠IL-17F)免疫的KM和KM(FCγRIIb-KO)小鼠中偶尔产生对huIL-17A的抗体交叉反应。与KM和KM(FCγRIIb-KO)小鼠相反，HuMAb小鼠不发展对IL-17A的交叉反应滴度，与利用的免疫方案无关。
实施例3：杂交瘤的产生
淋巴结细胞与SP2/0骨髓瘤细胞的融合
为了获得杂交瘤，从小鼠去除腿弯部、腹股沟、主动脉旁、下颌骨下、颈部、轴向和臂淋巴结并且用胶原酶和脱氧核糖核酸酶消化。淋巴结细胞的单一细胞悬液与SP2/0骨髓瘤细胞以1∶1的比率混合并且在细胞融合低电导率培养基(Cytofusion Low ConductivityMedium)(CPS-LCMC，CytoPulse Sciences，Inc.)中悬浮。用3千万至6千万个脾细胞在细胞脉冲CEEF50电融合(CytoPulse CEEF50Electrofusion)仪器中进行融合，如制造商(Cyto Pulse Sciences，Inc)所指示。电融合后，细胞在37℃孵育大约1小时以允许在分配到96-孔板之前回收。
杂交瘤的培养
在HAT选择培养基中将融合细胞再悬浮并且以200μl培养基中0.1-0.2×105个脾细胞/孔的细胞浓度涂布到44至52个96-孔板。杂交瘤选择进行14天。免疫小鼠的淋巴结的融合导致产生对huIL-17F特异的抗体或对huIL-17F和IL-17A特异的交叉反应抗体的杂交瘤的产生。
杂交瘤筛选
融合14天后，通过FLISA对包含杂交瘤的板筛选结合到人IL-17F和/或人IL-17A的人IgG(荧光连接的免疫吸附测定)的存在。简言之，用huIL-17F(两者均来自Peprotech EC)或BSA(Sigma)包被6微米珠子(Polybead，cat.No 07312，Polysciences Inc.)并且以5,000珠子/孔的密度分配到
Figure BDA0000126968330000901
384-孔光学板(Applied Biosystems)。将珠子与小容量的杂交瘤培养上清液(30μl/孔)混合并且在加入偶联到FMAT
Figure BDA0000126968330000902
染料(Applied Biosystems)的山羊抗人IgG Fc(JacksonImmunoresearch No 109-005-098)之前孵育过夜。2至8小时的孵育期间后，在8200细胞检测系统分析器(8200 Cellular Detection Systemanalyzer)(Applied Biosystems)中测量珠子的荧光。将产生结合到huIL-17F、但不结合到BSA的人IgG的杂交瘤扩增并经受进一步分析。
实施例4：重组抗体产生
从杂交瘤克隆的抗体序列
为了分离抗体可变重链和轻链序列，首先将RNA从选择的杂交瘤提取并且经受逆转录。然后，通过PCR扩增VH和VL序列，克隆并且通过DNA测序进一步分析。简言之，使用RNeasy Plus试剂盒从杂交瘤(QIAGEN)提取模板RNA并且使用ready-to-go you-primefirst-strand珠子(GE Healthcare，No 27-9264-01)用寡dT引物产生cDNA以用于逆转录。然后通过PCR使用识别人可变重链和轻链家族的引物组扩增VH和VL序列。使用测序用
Figure BDA0000126968330000911
克隆试剂盒(Invitrogen)将扩增序列克隆到载体中。然后选择的克隆经受DNA测序。
抗体重新形成、测种系和表达
可变重链和轻链序列重新形成到用于抗体产生和表征的哺乳动物表达载体。简言之，用分离的VH和VL进行序列分析以测定它们的种系。由于引物错配，在PCR扩增步骤期间将突变引入1F1和11C5VL的5’端。因此，使用用Quikchange试剂盒(Strate基因)进行的定点诱变，使这些突变转化回到人种系序列。此后，将VH和VL序列亚克隆到在人IgG1和IgK骨架的框架中的哺乳动物表达系统。然后使用转染试剂(Mirus Bio)将抗体重链和轻链的相应载体转染到PEAK细胞中并且在DMEM+IgG消耗性血清+谷氨酰胺中培养。然后使用MAbelectSure slurry(GE Healthcare)从上清液中纯化PEAK-表达抗体。
实施例5：huIL-17F抗体的交叉反应性
结合测定：对huIL-17F抗体测试它们结合到IL-17细胞因子家族的其它成员、以及结合到来自其它物种的IL-17A和IL-17F的能力。测定以如上述的FLISA形式进行。使以下重组细胞因子结合到聚苯乙烯珠子并且测试它们结合huIL-17F抗体的能力：huIL 17B(PeprotechEC，cat No 200-28)、huIL-17C(R&D Systems，catNo)、huIL-17D(PeprotechEC，cat No 200-27)、huIL-17E(huIL-25，PeprotechEC，cat No 200-24)、muIL-17A(PeprotechEC，cat No 210-17)、muIL-17F(PeprotechEC，cat No 200-17F)、大鼠IL-17F(His-标记的，在昆虫细胞内部产生)、大鼠IL-17A(His-标记的，在PEAK细胞内部产生)、cyIL-17F(His-标记的，在PEAK细胞内部产生)，及cyIL-17A(His-标记的，PEAK细胞内部产生)。单个huIL-17F抗体结合这些不同的细胞因子的能力概括于以下表3中：
表3：通过FLISA测定的huIL-17F抗体的交叉反应性(n.t.＝未测试)
Figure BDA0000126968330000921
实施例6：huIL-17F抗体的中和潜能
IL-17-刺激的小鼠胚胎成纤维细胞的IL-6分泌
人和猕猴IL-17A和IL-17F结合相应的小鼠IL-17受体复合体。结果，小鼠成纤维细胞通过分泌IL-6响应人或猕猴IL-17A和IL-17F。用小鼠TNF共刺激显示出与IL-17信号协同(Ruddy等人，2004、J.Biol.Chem 279：2559)极大地增加了小鼠成纤维细胞对IL-17细胞因子的敏感性。因此使用小鼠C57BL/6胚胎成纤维细胞(MEF，ATCC NoSCRC-1008)测定huIL-17F抗体对中和huIL-17F、cyIL-17F、huIL-17A/F异二聚体和cy IL-17A/F异二聚体生物活性的中和能力。
简言之，在加入10ng/ml IL-17细胞因子和小鼠TNFα(PeprotechEC，cat No 315-01A)之前，将接种于96-孔板的MEF细胞在DMEM+谷氨酰胺+10％胎牛血清(FBS)中培养48h。MAb中和活性测定中，在加入细胞之前用抗体将IL-17细胞因子预孵育1小时。刺激24小时之后在存在人或猕猴IL-17A/F异二聚体(50ng/ml)的情况下或刺激40小时之后在存在人或猕猴IL-17F(5ng/ml)的情况下，收集上清液并且通过夹心ELISA使用用于捕获的大鼠抗小鼠IL6抗体(BD cat No554400)及生物素化的第二大鼠抗小鼠IL6抗体(BD 554402)加上用于检测的链霉抗生物素蛋白HRP(Jackson Immunoresearch 016-030-084)测量小鼠IL-6的浓度。用任何测试的抗IL-17F抗体未观察到huIL-17A/F异二聚体或cyIL-17A/F异二聚体的抑制作用。用人和猕猴IL-17F同二聚体获得的IC50值总结于下表4中并且是使用标准统计技术从IL-6校准曲线获得的。
表4：用huIL-17F或cy IL-17F同二聚体和mTNF-α刺激的MEF细胞中huIL-17F抗体的中和潜能(IC50值)
Figure BDA0000126968330000941
实施例7：疾病的实验模型：胶原诱导的关节炎(CIA)
IL-17A在关节炎的发病机理中发挥重要作用，促进炎症介质的释放和软骨破坏。IL-17A的中和已证明减轻多种实验模型中的关节炎，包括CIA(胶原诱导的关节炎)。假定IL-17F与IL-17A密切相关，并且类风湿性关节炎(RA)患者的滑液中过表达的事实，在RA的模型中检测到中和这种细胞因子的效果。为了这个目标，产生有效中和小鼠IL-17F同二聚体但不中和IL-17A/F异二聚体抗mIL-17F(小鼠IL-17F)抗体，并且测试在CIA动物模型中这种抗mIL-17F抗体对RA的效果。
简言之，用完全弗氏佐剂(CFA)中的100微克的II型牛胶原免疫8-10周大的雄性DBA-1J小鼠。在尾巴基部皮内注射CFA中的II型胶原。3周后，皮内注射不完全弗氏佐剂(IFA)中的100微克II型胶原以诱发疾病。推入胶原-IFA 4至10天后通常出现疾病的第一征兆。募集开始发展关节炎的动物用于研究并且将其分配到以下治疗组：
1)同种型对照(小鼠IgG1k)，每次注射300微克，每周两次持续3周(n＝10)
2)仓鼠鼠嵌合抗TNF-α，每次注射300微克，每周1次持续3周(n＝10)
3)抗小鼠IL-17F抗体(小鼠IgG1k)，每次注射300微克，每周两次持续3周(n＝11)
平衡3个治疗组以包含在不同的临床严重程度评分(1至3)募集的相等数量的动物。使用标准的关节炎评分方法每周3次进行疾病的临床评分。评分为每爪0-4(其中0意味着无疾病，并且4表示涉及整个爪的水肿)及每个动物理论最大累积评分为16分。除了临床严重程度评分以外，还通过Luminex在终点(募集后22天)测定关键促炎细胞因子的血清水平。
在图1和2中分别示出临床评分的进展和细胞因子血清水平。IL-17F同二聚体的中和足以极大地延迟疾病进展和降低炎性介质的水平。这些发现表明IL-17F是用于自身免疫性疾病例如类风湿性关节炎疗法的候选靶标。
本发明现已通过书面说明和实例的方式描述，本领域的技术人员应理解可在多种方案中实施本发明并且上述说明和实例是出于示例目的，而不是对以下权利要求的限制。

Claims (20)

1.一种分离的全人单克隆抗IL-17F抗体或其片段，其中所述抗体包含：
(a)VH CDR1区，其包含SEQ ID NO：45、48、51、64、67或70的氨基酸序列；
(b)VH CDR2区，其包含SEQ ID NO：46、49、52、54、62、65、68、71或73的氨基酸序列；
(c)VH CDR3区，其包含SEQ ID NO：47、50、53、55、63、66、69或72的氨基酸序列；
(d)VL CDR1区，其包含SEQ ID NO：74、77、80、85、91或94的氨基酸序列；
(e)VL CDR2区，其包含SEQ ID NO：75、78、81、83、86、92或96的氨基酸序列；及
(f)VL CDR3区，其包含SEQ ID NO：76、79、82、84、93、95、97、98和99的氨基酸序列，
其中所述抗体结合IL-17F。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体不结合IL-17A同二聚体。
3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是IgG同种型。
4.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是IgG1同种型。
5.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含：重链可变序列，其包含选自SEQ ID NO：10、14、18、22、26、30、34、38和42的氨基酸序列；和轻链可变序列，其包含选自SEQ ID NO：12、16、20、24、28、32、36、40和44的氨基酸序列。
6.一种分离的全人单克隆抗体，所述全人单克隆抗体包含：重链可变序列，其包含SEQ ID NO：10、14、18、22、26、30、34、38和42的氨基酸序列；和轻链可变序列，其包含SEQ ID NO：12、16、20、24、28、32、36、40和44的氨基酸序列，其中所述抗体结合IL-17F。
7.根据权利要求6所述的抗体，其中所述抗体不结合IL-17A同二聚体。
8.根据权利要求7所述的抗体，其中所述抗体是IgG同种型。
9.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的抗体和载体。
10.一种药物组合物，其包含权利要求6所述的抗体和载体。
11.一种减轻受治疗者中与类风湿性关节炎、克罗氏病、银屑病、多发性硬化、慢性阻塞性肺部疾病或哮喘相关的临床适应症的症状的方法，所述方法包括以足以缓解与类风湿性关节炎、克罗氏病、银屑病、多发性硬化、慢性阻塞性肺部疾病或哮喘相关的临床适应症的症状的量给需要其的受治疗者施用IL-17F的拮抗剂。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述受治疗者是人。
13.根据权利要求11所述的方法，其中所述拮抗剂是单克隆抗体或其片段。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述单克隆抗体是根据权利要求1所述的抗体或其片段。
15.一种减轻自身免疫性疾病或炎性病症的症状的方法，所述方法包括以足以缓解受治疗者中自身免疫性疾病或炎性病症的症状的量给需要其的受治疗者施用根据权利要求1所述的抗体。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述受治疗者是人。
17.一种减轻关节炎疾患的症状的方法，所述方法包括以足以缓解受治疗者中关节炎疾患的症状的量给需要其的受治疗者施用根据权利要求1所述的抗体。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述受治疗者是人。
19.根据权利要求17所述的方法，其中所述关节炎疾患是自身免疫性关节炎疾患。
20.根据权利要求17所述的方法，其中所述关节炎疾患是类风湿性关节炎。
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