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CN102397558A - Exendin-4类似物的定位聚乙二醇化修饰物及其用途 - Google Patents

Exendin-4类似物的定位聚乙二醇化修饰物及其用途 Download PDF

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CN102397558A CN2010102769180A CN201010276918A CN102397558A CN 102397558 A CN102397558 A CN 102397558A CN 2010102769180 A CN2010102769180 A CN 2010102769180A CN 201010276918 A CN201010276918 A CN 201010276918A CN 102397558 A CN102397558 A CN 102397558A
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gly
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Abstract

本发明涉及Exendin-4类似物的定位聚乙二醇化修饰物及其用途。特别地，本发明涉及式(I)所示的Exendin-4类似物的聚乙二醇修饰物：或其可药用盐，其中各符号如说明书所述。本发明还涉及式(II)所示的Exendin-4类似物：其中各符号如说明书所述。本发明进一步涉及所述聚乙二醇修饰物的制备方法、其用途、包含其的组合物、以及所述Exendin-4类似物用于制备所述聚乙二醇修饰物的用途。通过本发明可以使聚乙二醇专一性地定位修饰于Exendin-4类似物的肽链中并且修饰物具有有益的生物学活性。PEG-M-X-(Ex-4) (I)[Aap]Exendin-4 (II)。

Description

Exendin-4类似物的定位聚乙二醇化修饰物及其用途
技术领域
本发明涉及Exendin-4类似物的定位聚乙二醇化修饰物，其制备方法、含它们的药物组合物、其修饰前体及其在治疗II型糖尿病等疾病中的用途。
背景技术
Exendin-4是一种从南美产毒蜥(Gila monster；Helodermasuspectum)的唾液分泌物中分离和鉴定出的天然产物。其序列为His1-Gly-Glu-Gly-Thr5-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu10-Ser-Lys-Gln-Met-Glu15-Glu-Glu-Ala-Val-Arg20-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp25-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly30-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala35-Pro-Pro-Pro-Ser39-NH2的三十九肽，Exendin-4是胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1，GLP-1)的类似物。是GLP-1受体激动剂，能激活GLP-1受体，具有控制甘油酯、促进胰岛素分泌、降低循环胰高血糖素、提高胰β-细胞质量、抑制胃的排空、减少营养的摄入、增加胰岛素敏感性等生物活性。Exendin-4可模拟体内自然分泌的激素，从而帮助人体调节血糖水平，而且在患者不需要的时候，就会停止该作用。Exendin-4的另一特点是可以恢复制造胰岛素的β细胞的第1时相分泌。第1时相分泌指的是由摄取食物而引发的胰岛素分泌，而对于II-型糖尿病患者而言，在患病初期就已经丧失了该反应能力。Exendin-4不但能够降低血糖，而且还能加强正在丧失功能的细胞机能，对II-型糖尿病治疗而言是一项重大进步。
Exendin-4于2005年4月获美国FDA批准，用于改善使用二甲双胍和磺酰脲类药物不理想的II型糖尿病患者的血糖控制。临床结果显示，Exendin-4用于糖尿病治疗效果明显，且副反应较小，但是每天两次的皮下给药给病人带来很多不便。
Exendin-4的效能及其内在独特的血糖依赖性作用机制使其更适宜制成缓释制剂，Amylin公司于2000年5月又和Alkennes公司签约合作开发品缓释型注射剂Exendin-4LAR，目前已完成II期临床试验，结果显示，15周后该药物的两种剂量水平都能很好耐受，并且Exendin-4的血药浓度均达到了预期的治疗范围。同时由于Exendin-4在II-糖尿病治疗机理方面具有明显优势，开发其长效类似物也是很多国外制药公司研发热点之一。
研究表明，多肽类药物经聚乙二醇(PEG)修饰后仍能保持好的生物活性，并能显著延长生物体内的半衰期。目前，已有对Exendin-4进行PEG修饰的研究报道，分别得到的三个位点His1、Lys12、Lys27的氨基PEG修饰产物，在大鼠的代谢研究中发现，代谢半衰期远长于Exendin-4(Jin Zhou等，Eur.J Pharma.Biopharm.，2009，72：412-417)。此外，还报道了对Exendin-4中Lys12和Lys27的ε-氨基进行脂肪酸或石胆酸或透明质酸修饰，分别得到单修饰和双修饰的修饰物(Su Young Chae等，J Control.Release，2010，144(1)：10-16；JControl.Release，2010，142：206-213；Biomaterials，2010，31：4121-4128)。
然而，本领域技术人员理解，不论是用PEG对Exendin-4进行修饰，还是用脂肪酸、石胆酸或透明质酸对Exendin-4进行修饰，均存在修饰位点专一性较差的问题，从而可能造成产物呈不同单位点修饰物共存的混合物形式，或者可能造成产物呈不同多位点修饰物共存的混合物形式，这对于后续的制药应用是不利的。
因此，仍然期望提供一种可以对Exendin-4定位修饰并仍然保持Exendin-4生物学活性的方法以及Exendin-4修饰物例如PEG修饰物，以克服目前对Exendin-4进行修饰例如PEG化修饰时专一性差的问题。
发明内容
本发明要解决的问题是以克服目前对Exendin-4进行修饰例如PEG化修饰时专一性差的缺点，提供一种可以对Exendin-4定位修饰并仍然保持Exendin-4生物学活性的方法以及Exendin-4修饰物例如PEG修饰物。本发明人令人惊奇地发现，对Exendin-4肽链中的个别氨基酸替换为其它氨基酸，得到Exendin-4类似物，这些类似物在进行PEG的化学修饰时具有优良的反应专一性。而且，本发明人发现，本发明Exendin-4类似物经PEG修饰后，其PEG修饰产物可具有GLP-1受体激动活性。本发明基于上述发现而得以完成。
发明概述
本发明第一方面提供了具有以下式(I)所示的Exendin-4类似物的聚乙二醇修饰物：
PEG-M-X-(Ex-4)         (I)
或其可药用盐，其中各符号如本文所述。
本发明第二方面提供了以下式(II)所示的Exendin-4类似物：
[Aap]Exendin-4         (II)
其中各符号如本文所述。
本发明第三方面提供制备本发明第一方面所述聚乙二醇修饰物的方法。
本发明第四方面提供了制备本发明第二方面所述Exendin-4类似物的方法。
本发明第五方面提供本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物在制备药物中的用途。
本发明第六方面提供一种组合物，其包括预防和/或治疗有效量的本发明第一方面所述聚乙二醇修饰物以及任选的药学可接受的载体。
本发明第七方面提供本发明第二方面所述Exendin-4类似物在制备本发明第一方面所述聚乙二醇修饰物中的用途。
本发明第八方面提供了在有需要的受试者中激活GLP-1受体的方法以及治疗相关疾病或症状的方法。
本发明第九方面提供作为GLP-1受体激动剂等或者疾病或症状的预防和/或治疗剂的本发明第一方面所述聚乙二醇修饰物。
本发明第十方面提供了用于在有需要的受试者中激活GLP-1受体的组合物，或者用于预防和/或治疗与GLP-1受体活性低下相关的疾病和/或症状的组合物，其包含本发明第一方面所述聚乙二醇修饰物。
发明详述
本发明第一方面提供了具有以下式(I)所示的Exendin-4类似物的聚乙二醇修饰物：
PEG-M-X-(Ex-4)         (I)
或其可药用盐，其中，
PEG表示RO(CH2CH2O)n-CH2CH2-，其中R为H或CH3，n为25-2500的整数；
M表示
Figure BSA00000263217000041
或
Figure BSA00000263217000042
各自的氮或硫原子一侧与PEG部分连接，另一侧与X部分的巯基连接；
X-(Ex-4)表示具有如下结构的Exendin-4类似物：His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Aa21-Aa22-Aa23-Glu-Trp-Leu-Aa27-Asn-Gly-Gly-Aa31-Ser-Ser-Gly-Ala-Aa36-Aa37-Aa38-Ser-NH2，其中
Aa21、Aa22、Aa23、Aa27、Aa31、Aa36、Aa37和Aa38各自独立地是选自下列的氨基酸：Cys、Thp、Ala、Arg、Asn、Asp、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、Val，并且Aa21、Aa22、Aa23、Aa27、Aa31、Aa36、Aa37和Aa38中只有一个为Cys或Thp；
X表示在X-(Ex-4)所示的Exendin-4类似物中，位于21、22、23、27、31、36、37或38位的任一个位点并且为半胱氨酸或4-巯基脯氨酸(Thp，
Figure BSA00000263217000051
)的氨基酸，该氨基酸的巯基与M基团连接。
另外地，或者根据上述第一方面进一步地，本发明第一方面提供具有以下式(I)所示的Exendin-4类似物的聚乙二醇修饰物：
PEG-M-X-(Ex-4)         (I)
或其可药用盐，其中，
PEG表示分子量为1,000至100,000的聚乙二醇；
M表示或
Figure BSA00000263217000053
各自的氮或硫
原子一侧与PEG部分连接，另一侧与X部分的巯基连接；
X-(Ex-4)表示
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu21-Phe22-Ile23-Glu-Trp-Leu-Lys27-Asn-Gly-Gly-Pro31-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro3 6-Pro37-Pro38-Ser-NH2中第21、22、23、27、31、36、37或38位氨基酸中的任一个被半胱氨酸或4-巯基脯氨酸(Thp，
Figure BSA00000263217000054
)取代的三十九肽；
X表示在X-(Ex-4)所示的三十九肽中，位于21、22、23、27、31、36、37或38位的任一个位点并且为半胱氨酸或4-巯基脯氨酸(Thp，
Figure BSA00000263217000055
)的氨基酸，该氨基酸的巯基与M基团连接。
根据本发明第一方面任一项所述的聚乙二醇修饰物，其中所述PEG表示RO(CH2CH2O)n-CH2CH2-，其中R为H或CH3，n为50-2000的整数。在一个实施方案中，所述R是H。在一个实施方案中，所述R是CH3。在一个实施方案中，所述n为50-1500的整数。在一个实施方案中，所述n为50-1000的整数。在一个实施方案中，所述n为75-1500的整数。在一个实施方案中，所述n为75-1000的整数。在一个实施方案中，所述n为75-500的整数。在一个实施方案中，所述n为100-500的整数。
根据本发明第一方面任一项所述的聚乙二醇修饰物，其中所述PEG表示分子量为1,000至100,000的聚乙二醇。在一个实施方案中，所述PEG表示分子量为2,000至80,000的聚乙二醇。在一个实施方案中，所述PEG表示分子量为3,000至60,000的聚乙二醇。在一个实施方案中，所述PEG表示分子量为4,000至60,000的聚乙二醇。在一个实施方案中，所述PEG表示分子量为5,000至60,000的聚乙二醇。在一个实施方案中，所述PEG表示分子量为3,000至50,000的聚乙二醇。在一个实施方案中，所述PEG表示分子量为4,000至40,000的聚乙二醇。在一个实施方案中，所述PEG表示分子量为4,000至30,000的聚乙二醇。在一个实施方案中，所述PEG表示分子量为5,000至20,000的聚乙二醇。
根据本发明第一方面任一项所述的聚乙二醇修饰物，其中所述M表示
Figure BSA00000263217000061
(在本发明中，该基团部分可以以MAL表示)、
Figure BSA00000263217000062
或
Figure BSA00000263217000063
各自的氮或硫原子一侧与PEG部分连接，另一侧与X部分的巯基连接。例如，三者分别形成
Figure BSA00000263217000064
Figure BSA00000263217000071
或
Figure BSA00000263217000072
各式中Peg表示本文所定义的聚乙二醇。在一个实施方案中，所述的M表示
Figure BSA00000263217000073
根据本发明第一方面任一项所述的聚乙二醇修饰物，其中所述X-(Ex-4)表示具有如下结构的Exendin-4类似物：His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Aa21-Aa22-Aa23-Glu-Trp-Leu-Aa27-Asn-Gly-Gly-Aa31-Ser-Ser-Gly-Ala-Aa36-Aa37-Aa38-Ser-NH2，其中Aa21、Aa22、Aa23、Aa27、Aa31、Aa36、Aa37和Aa38各自独立地是选自下列的氨基酸：Cys、Thp、Leu、Phe、Ile、Lys、Pro，并且Aa21、Aa22、Aa23、Aa27、Aa31、Aa36、Aa37和Aa38中只有一个为Cys或Thp。在一个实施方案中，所述Aa21可选自Cys、Thp、Leu，所述Aa22可选自Cys、Thp、Phe，所述Aa23可选自Cys、Thp、Ile，所述Aa27可选自Cys、Thp、Lys，所述Aa31可选自Cys、Thp、Pro，所述Aa36可选自Cys、Thp、Pro，所述Aa37可选自Cys、Thp、Pro，所述Aa38可选自Cys、Thp、Pro；前提条件是，Aa21、Aa22、Aa23、Aa27、Aa31、Aa36、Aa37和Aa38中只有一个为Cys或Thp。
根据本发明第一方面任一项所述的聚乙二醇修饰物，其中所述X表示在X-(Ex-4)所示的Exendin-4类似物中，位于21、22、23、27、31、36、37或38位的任一个位点并且为半胱氨酸或4-巯基脯氨酸的氨基酸，该氨基酸的巯基与M基团连接。在一个实施方案中，所述X表示在X-(Ex-4)所示的Exendin-4类似物中，位于21、22、23、31、36、37或38位的任一个位点并且为半胱氨酸或4-巯基脯氨酸的氨基酸。在一个实施方案中，所述X表示在x-(Ex-4)所示的Exendin-4类似物中，位于21、22、23、31、36、37或38位的任一个位点并且为半胱氨酸的氨基酸。在一个实施方案中，所述X表示在X-(Ex-4)所示的Exendin-4类似物中，位于31、36、37或38位的任一个位点并且为4-巯基脯氨酸的氨基酸。
根据本发明第一方面任一项所述的聚乙二醇修饰物，其中所述X-(Ex-4)表示His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu21-Phe22-Ile23-Glu-Trp-Leu-Lys27-Asn-Gly-Gly-Pro31-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro36-Pro37-Pro38-Ser-NH2中第21、22、23、27、31、36、37或38位氨基酸中的任一个被半胱氨酸(即，Cys)或4-巯基脯氨酸(即，Thp或
Figure BSA00000263217000081
)取代的三十九肽。在一个实施方案中，所述Aa21选自Cys、Thp。在一个实施方案中，所述Aa22选自Cys、Thp。在一个实施方案中，所述Aa23选自Cys、Thp。在一个实施方案中，所述Aa27选自Cys、Thp。在一个实施方案中，所述Aa31选自Cys、Thp。在一个实施方案中，所述Aa36选自Cys、Thp。在一个实施方案中，所述Aa37选自Cys、Thp。在一个实施方案中，所述Aa38选自Cys、Thp。
根据本发明第一方面任一项所述的聚乙二醇修饰物，其中所述X表示在X-(Ex-4)所示的三十九肽中，位于21、22、23、27、31、36、37或38位的任一个位点并且为半胱氨酸或4-巯基脯氨酸的氨基酸，该氨基酸的巯基与M基团连接。在一个实施方案中，所述X表示在X-(Ex-4)所示的三十九肽中，位于21、22、23、31、36、37或38位的任一个位点并且为半胱氨酸或4-巯基脯氨酸的氨基酸。在一个实施方案中，所述X表示在X-(Ex-4)所示的三十九肽中，位于21、22、23、31、36、37或38位的任一个位点并且为半胱氨酸的氨基酸。在一个实施方案中，所述X表示在X-(Ex-4)所示的三十九肽中，位于31、36、37或38位的任一个位点并且为4-巯基脯氨酸的氨基酸。
根据本发明第一方面任一项所述的聚乙二醇修饰物，其是Exendin-4类似物的定位聚乙二醇化修饰物或其可药用盐。根据本发明第一方面任一项所述的聚乙二醇修饰物，其是Exendin-4类似物的定位聚乙二醇化修饰物或其可药用盐，并且其中所述的聚乙二醇修饰为单聚乙二醇修饰。
根据本发明第一方面任一项所述的聚乙二醇修饰物，其选自：
[Cys21(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Cys22(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Cys23(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Cys31(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Cys36(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Cys37(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Cys38(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Thp31(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Thp36(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Thp37(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Thp38(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，和
[Cys31(mPEG20000-MAL)]Exendin-4，
或其药学可接受的盐。
以上各式所示化合物中，例如对于[Cys21(mPEG5000-MAL)]Exendin-4所示化合物，其中Cys21表示Exendin-4的第21位氨基酸Leu替换为Cys，使该三九肽为21位氨基酸为Cys的Exendin-4类似物；其中mPEG5000表示末端为甲基(以m表示)的分子量约为5000的聚乙二醇；MAL表示
Figure BSA00000263217000091
即，[Cys21(mPEG5000-MAL)]Exendin-4表示这样的化合物：21位氨基酸被Cys取代的Exendin-4类似物通过MAL与分子量为约5000的聚乙二醇连接的Exendin-4类似物的聚乙二醇修饰物。其它化合物亦有类似含义。
本发明第二方面提供了以下式(II)所示的Exendin-4类似物：
[Aap]Exendin-4            (II)
其中，
Exen din-4表                                        示
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu21-Phe22-Ile23-Glu-Trp-Leu-Lys27-Asn-Gly-Gly-Pro31-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro3 6-Pro37-Pro38-Ser-NH2的三十九肽；
Aap表示取代Exendin-4所示三十九肽p位的氨基酸，其选自半胱氨酸(即，Cys)或4-巯基脯氨酸(即，Thp、
Figure BSA00000263217000101
)；
p表示Exendin-4所示三十九肽的21、22、23、27、31、36、37或38位。
根据本发明第二方面任一项所述的Exendin-4类似物，其中：
Aap表示取代Exendin-4所示三十九肽p位的半胱氨酸；
p表示Exendin-4所示三十九肽的21、22、23、31、36、37或38位。
根据本发明第二方面任一项所述的Exendin-4类似物，其中：
Aap表示取代Exendin-4所示三十九肽p位的4-巯基脯氨酸；
p表示Exendin-4所示三十九肽的31、36、37或38位。
根据本发明第二方面任一项所述的Exendin-4类似物，其选自：
[Cys21]Exendin-4，
[Cys22]Exendin-4，
[Cys23]Exendin-4，
[Cys31]Exendin-4，
[Cys36]Exendin-4，
[Cys37]Exendin-4，
[Cys38]Exendin-4，
[Thp31]Exendin-4，
[Thp36]Exendin-4，
[Thp37]Exendin-4，和
[Thp38]Exendin-4。
以上各式所示化合物中，例如对于[Cys21]Exendin-4所示化合物，其中Cys21表示Exendin-4的第21位氨基酸Leu替换为Cys，使该Exendin-4所示三九肽成为21位氨基酸为Cys的Exendin-4类似物。即，[Cys21]Exendin-4表示这样的化合物：21位氨基酸被Cys取代的Exendin-4。其它化合物亦有类似含义。
本发明第三方面提供制备本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物的方法，其包括使发明第二方面任一项所述Exendin-4类似物与PEG-M反应的步骤。在一个实施方案中，所述反应是在磷酸盐缓冲液中进行的。在一个实施方案中，所述反应是在10-40℃(例如15-35℃，例如约室温)下进行的。在一个实施方案中，所述PEG-M是PEG-MAL。
在本发明第三方面任一项所述方法的一个实施方案中，所述Exendin-4类似物是按以下步骤制备的：(1)以Rink-酰胺树脂为固相载体，以HBTU-HOBt为缩合剂，根据待获得的Exendin-4类似物的氨基酸序列，以Fmoc保护的相应氨基酸为原料，按标准的Fmoc固相多肽合成方法合成肽树脂；(2)然后以三氟乙酸∶苯甲硫醚∶间甲酚∶乙二硫醇∶水的混合物(例如此五者的体积比为8.25∶0.5∶0.5∶0.25∶0.5)为裂解液，在0-40℃下使肽脱除保护基并从树脂上裂解(例如在约0℃下反应约30分钟，然后在室温下反应90分钟)；和(3)任选的纯化步骤。
为此，本发明第四方面提供了制备本发明第二方面任一项所述Exendin-4类似物的方法，其包括以下步骤：(1)以Rink-酰胺树脂为固相载体，以HBTU-HOBt为缩合剂，根据待获得的Exendin-4类似物的氨基酸序列，以Fmoc保护的相应氨基酸为原料，按标准的Fmoc固相多肽合成方法合成肽树脂；(2)然后以三氟乙酸∶苯甲硫醚∶间甲酚∶乙二硫醇∶水的混合物(例如此五者的体积比为8.25∶0.5∶0.5∶0.25∶0.5)为裂解液，在0-40℃下使肽脱除保护基并从树脂上裂解(例如在约0℃下反应约30分钟，然后在室温下反应90分钟)；和(3)任选的纯化步骤。
本发明第五方面提供本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物在制备作为GLP-1受体激动剂的药物中的用途。
本发明第五方面还提供本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物在制备用于预防和/或治疗与GLP-1受体活性低下相关的疾病和/或症状的药物中的用途。在一个实施方案中，本发明聚乙二醇修饰物可以用于控制甘油酯、促进胰岛素分泌、降低循环胰高血糖素、提高胰β-细胞质量、抑制胃的排空、减少营养的摄入、增加胰岛素敏感性，以预防和/或治疗与GLP-1受体活性低下相关的疾病和/或症状。
本发明第五方面还提供本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物在制备用于预防和/或治疗与糖代谢相关的疾病和/或症状的药物中的用途。在一个实施方案中，所述与糖代谢相关的疾病和/或症状选自II型糖尿病、肥胖和/或肥胖症、β细胞功能低下等糖代谢疾病。
本发明第五方面还提供本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物在制备用于控制II型糖尿病患者体内血糖的药物中的用途。
本发明第六方面提供一种组合物，其包括预防和/或治疗有效量的本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物以及任选的药学可接受的载体。
本发明第七方面提供本发明第二方面任一项所述Exendin-4类似物在制备本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物中的用途。
本发明第八方面提供了在有需要的受试者中激活GLP-1受体的方法，其包括给所述受试者施用预防和/或治疗有效量的本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物。
本发明第八方面还提供了在有需要的受试者中预防和/或治疗与GLP-1受体活性低下相关的疾病和/或症状的方法，其包括给所述受试者施用预防和/或治疗有效量的本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物。在一个实施方案中，本发明提供了在有需要的受试者中控制甘油酯、促进胰岛素分泌、降低循环胰高血糖素、提高胰β-细胞质量、抑制胃的排空、减少营养的摄入、和/或增加胰岛素敏感性的方法，其包括给所述受试者施用预防和/或治疗有效量的本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物。本发明方法可以用于预防和/或治疗与GLP-1受体活性低下相关的疾病和/或症状。
本发明第八方面还提供了在有需要的受试者中预防和/或治疗与糖代谢相关的疾病和/或症状的方法，其包括给所述受试者施用预防和/或治疗有效量的本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物。在一个实施方案中，所述与糖代谢相关的疾病和/或症状选自II型糖尿病、肥胖和/或肥胖症、β细胞功能低下等糖代谢疾病。
本发明第八方面还提供了在有需要的受试者中控制血糖的方法，其包括给所述受试者施用预防和/或治疗有效量的本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物。在一个实施方案中，所述受试者罹患II型糖尿病。
本发明第九方面提供作为GLP-1受体激动剂的本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物。
本发明第九方面还提供了用于预防和/或治疗与GLP-1受体活性低下相关的疾病和/或症状的本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物。在一个实施方案中，本发明提供了用于控制甘油酯、促进胰岛素分泌、降低循环胰高血糖素、提高胰β-细胞质量、抑制胃的排空、减少营养的摄入、和/或增加胰岛素敏感性的本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物。
本发明第九方面还提供用于预防和/或治疗与糖代谢相关的疾病和/或症状的本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物。在一个实施方案中，所述与糖代谢相关的疾病和/或症状选自II型糖尿病、肥胖和/或肥胖症、β细胞功能低下等糖代谢疾病。
本发明第九方面还提供用于控制II型糖尿病患者体内血糖的本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物。
本发明第十方面提供了用于在有需要的受试者中激活GLP-1受体的组合物，其包含本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物。
本发明第十方面还提供了用于预防和/或治疗与GLP-1受体活性低下相关的疾病和/或症状的组合物，其包含本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物。在一个实施方案中，本发明提供了用于控制甘油酯、促进胰岛素分泌、降低循环胰高血糖素、提高胰β-细胞质量、抑制胃的排空、减少营养的摄入、和/或增加胰岛素敏感性的组合物，其包含本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物。
本发明第十方面还提供了用于在有需要的受试者中预防和/或治疗与糖代谢相关的疾病和/或症状的组合物，其包含本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物。在一个实施方案中，所述与糖代谢相关的疾病和/或症状选自II型糖尿病、肥胖和/或肥胖症、β细胞功能低下等糖代谢疾病。
本发明第十方面还提供了用于在有需要的受试者中控制血糖的组合物，其包含本发明第一方面任一项所述聚乙二醇修饰物。在一个实施方案中，所述受试者罹患II型糖尿病。
本发明任一方面或该任一方面的任一项所具有的特征同样适用于其它任一方面或该其它任一方面的任一项，只要它们不会相互矛盾，当然在相互之间适用时，必要的话可对相应特征作适当修饰。在本发明中，例如，提及“本发明第一方面任一项”时，该“任一项”是指本发明第一方面的任一子方面；在其它方面以类似方式提及时，亦具有相同含义。
下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。
本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。
本文中使用的术语“约”，例如在修饰制备产物的产率时，其通常是指本领域允许的误差范围，例如±10％，例如±5％，例如±2％。
如本文所述的，术语“有效量”是指可在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病或病症的剂量。
如本文所述的，术语“药物组合物”，是指可用于在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病、病症、症状的物质。
如本文所述的，术语“受试者”或“患者”，可以指接受本发明组合物和提取物以治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病、病症、症状的动物，特别是哺乳动物，例如人、狗、猴、牛、马等。
如本文所述的，术语“疾病或症状”是指所述受试者的一种身体状态，该身体状态与本发明所述疾病或症状有关。
如本文所述的，“％”，如未特别指明，对于总物料是固体时一般是指重量/重量的百分比，对于总物料是液体时一般是指重量/体积的百分比。当然，对于总物料是液体并且溶质是液体时，表征该液态溶质的百分比一般是指体积/体积的百分比。
如本文所述的，术语“Exendin-4”是指序列为His1-Gly-Glu-Gly-Thr5-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu10-Ser-Lys-Gln-Met-Glu15-Glu-Glu-Ala-Val-Arg20-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp25-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly30-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala35-Pro-Pro-Pro-Ser39-NH2的三十九肽。术语“Exendin-4类似物”是指上述Exendin-4三十九肽中任一个或多个(优选其中的一个)位于任意位置(优选位于21、22、23、27、31、36、37或38位)氨基酸被其它氨基酸(优选半胱氨酸或4-巯基脯氨酸)取代的三十九肽。
如本文所述的，术语“PEG”是指聚乙二醇，其规格可以以聚合度表示(例如在本文中，PEG可以表示为RO(CH2CH2O)n-CH2CH2-，其中的n为25-2500的整数)，亦可以以分子量表示(例如在本文中PEG可以表示分子量为1,000至100,000的聚乙二醇)。上述二种不同表述形式是本领域技术人员公知的，并且相互之间不会矛盾。
如未特殊说明，本发明所述氨基酸均为L-型氨基酸。
如本文所述的，术语“与GLP-1受体相关的疾病和/或症状”是指与通过激动GLP-1受体达到预防和/或治疗相关疾病，主要是指II型糖尿病、肥胖和/或肥胖症、β细胞功能低下等糖代谢疾病。
本发明的目的在于提供一类PEG修饰的exendin-4类似物，有助于开发长效的II型糖尿病的治疗药物及制剂。本发明人发现，在Exendin-4中引入含有特异性反应功能基的氨基酸残基，使Exendin-4与PEG反应的反应专一性增加，从而为获得精确的单一PEG定位修饰物提供了可能，进而利用PEG可延长肽类药物作用时间、提高生物利用度等特性，为改善Exendin-4在体内的行为提供了可能。
本发明的目的之一是提供Ex-4类似物的定位聚乙二醇化修饰物，该修饰产物的结构为在Ex-4的氨基酸序列中改变某些氨基酸残基使侧链只保留一个氨基、羧基或巯基，并在这些氨基、羧基或巯基上完成定位的聚乙二醇修饰。本发明的Ex-4类似物的聚乙二醇修饰物详见本文所述的式(I)结构及其定义。
本发明的另一目的是提Ex-4类似物的聚乙二醇化修饰物的制备方法。
本发明还涉及到含至少一种上述聚乙二醇化Ex-4类似物或其立体异构体或盐和可药用载体或赋形剂的药物组合物。
本发明还涉及本发明化合物在制备用于治疗和预防糖尿病的药物中的用途。
本发明还涉及本发明化合物在治疗和预防糖尿病及相关糖代谢疾病或症状的用途。
在本发明的一个方面，提供了Exendin-4类似物的聚乙二醇修饰物，其具有式(I)结构：
PEG-M-X-(Ex-4)            (I)
其中，
PEG为RO(CH2CH2O)n-CH2CH2-，R＝H或CH3，n＝25-2500；
Figure BSA00000263217000161
或或
Figure BSA00000263217000163
X-(Ex-4)为具有如下结构的Exendin-4类似物：His1-Gly-Glu-Gly-Thr5-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu10-Ser-Lys-Gln-Met-Glu15-Glu-Glu-Ala-Val-Arg20-Aa21-Aa22-Aa23-Glu-Trp25-Leu-Aa27-Asn-Gly-Gly30-Aa31-Ser-Ser-Gly-Ala35-Aa36-Aa37-Aa38-Ser39-NH2，其中：Aa21、Aa22、Aa23、Aa27、Aa31、Aa36、Aa37和Aa38各自独立地可选自Cys，Thp，Ala，Arg，Asn，Asp，Gln，Glu，Gly，His，Ile，Leu，Lys，Met，Phe，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr，Val的氨基酸，前提条件是Aa21、Aa22、Aa23、Aa27、Aa31、Aa36、Aa37和Aa38中只有一个为Cys或Thp；
x表示在X-(Ex-4)所示的Exendin-4类似物中的氨基酸，为半胱氨酸或4-巯基脯氨酸(Thp，)，可位于Ex-4的21、22、23、27、31、36、37、38位的任一个位点，通过巯基与M基团连接。
如未特殊说明，所述氨基酸均为L-型氨基酸。
根据本发明Exendin-4类似物的聚乙二醇修饰物的一个优选实施方式，式(I)中的X-(Ex-4)部分具有如下的结构特征：
Aa21可选自Cys，Thp，Leu；
Aa22可选自Cys，Thp，Phe；
Aa23可选自Cys，Thp，Ile；
Aa27可选自Cys，Thp，Lys；
Aa31可选自Cys，Thp，Pro；
Aa36为选自Cys，Thp，Pro；
Aa37为选自Cys，Thp，Pro；
Aa38为选自Cys，Thp，Pro；
前提条件是，Aa21、Aa22、Aa23、Aa27、Aa31、Aa36、Aa37和Aa38中只有一个为Cys或Thp。
如未特殊说明，所述氨基酸均为L-型氨基酸。
根据本发明Exendin-4类似物的聚乙二醇修饰物，其优选下列12个Exendin-4类似物聚乙二醇化修饰物：
1[Cys21(mPEG5000-MAL)]Exendin-4
2[Cys22(mPEG5000-MAL)]Exendin-4
3[Cys23(mPEG5000-MAL)]Exendin-4
4[Cys31(mPEG5000-MAL)]Exendin-4
5[Cys36(mPEG5000-MAL)]Exendin-4
6[Cys37(mPEG5000-MAL)]Exendin-4
7[Cys38(mPEG5000-MAL)]Exendin-4
8[Thp31(mPEG5000-MAL)]Exendin-4
9[Thp36(mPEG5000-MAL)]Exendin-4
10[Thp37(mPEG5000-MAL)]Exendin-4
11[Thp38(mPEG5000-MAL)]Exendin-4
12[Cys31(mPEG20000-MAL)]Exendin-4
本发明化合物的制备采用常规的多肽合成方法，包括固相多肽合成方法、液相多肽合成法以及固相-液相多肽合成方法，氨基酸采用Fmoc-/tBu-或Boc-/Bzl-保护策略，连接方式采用从N-末端向C-末端顺序连接，或先合成片段，再将片段连接的方式，固相合成采用各种可形成酰胺末端的树脂为载体(如MBHA、PAL、Rink酰胺树脂等)，以各种常用缩合剂进行缩合反应(如DCC/HOBT、BOP/DIEA、HBTU/HOBt、TBTU等)，反应完后以三氟醋酸或无水HF将肽从树脂上切割下来。肽与PEG修饰剂的连接在水溶液或磷酸缓冲盐溶液中进行，适当控制反应溶液的pH值，以RP-HPLC对修饰产物进行监测，并分离纯化，最终产物测定MALDI-TOF-MS。
根据本发明，部分优选化合物在细胞水平对GLP-1受体有激动作用。
本发明还涉及含有作为活性成分的有效剂量的至少一种多肽修饰物和/或其立体异构体或其无生理毒性盐以及常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。这里“常规药物赋形剂或辅剂”包括任一种或所有溶剂，分散介质，包衣，抗菌剂或抗真菌剂，等渗及缓释试剂，以及类似的生理配伍制剂，以适合静脉注射，肌肉注射，皮下注射，或其它非消化道给药方式为佳。根据给药的方式，可将活性化合物包衣以保护化合物免受酸或其它自然条件的影响而失活。
本发明所用术语“无生理毒性的盐”是指可保留母体化合物预期生理活性而不会产生任何意料之外毒副作用的盐，或者含它们的组合物，例如：盐酸盐，氢溴酸盐，硫酸盐，磷酸盐，硝酸盐，以及醋酸盐，草酸盐，酒石酸盐，琥珀酸盐，苹果酸盐，苯甲酸盐，双羟萘酸盐，海藻酸盐，甲磺酸盐，萘磺酸盐等。根据盐中含有的阳离子又可为：钾盐，锂盐，锌盐，铜盐，钡盐，铋盐，钙盐等无机盐，还可为诸如三烷基铵盐等有机盐。
本发明中多肽修饰物及其立体异构体或含有它的药物组合物可以以已知的任何方式给药，如口服、肌肉、皮下、鼻腔给药等，给药剂型例如片剂、胶囊、口含片、咀嚼片、酏剂、混悬剂、透皮剂、微囊包埋剂、埋植剂、糖浆剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种生物可降解的或生物相容载体。关于载体的例子，如盐水基及各种缓冲水溶液、乙醇或其它多元醇、脂质体、聚乳酸、乙酸乙烯酯、聚酐、聚羟乙酸、胶原、聚原酸酯等。
本发明中多肽修饰物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重，敏感性及个体反应，所用的具体化合物，给药途径，给药次数以及所希望达到的治疗效果等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三、四个剂量形式给药。本领域技术人员参考Exendin-4的已知剂量，结合常规试验方法的研究结果，无需要花费创造性劳动即可确定本发明PEG修饰物的具体用量。
本发明中使用的一些缩写词具有下面的含义：
Ex-4  表示   Exendin-4
PEG   表示   聚乙二醇
Aa    表示   氨基酸
Ala   表示   丙氨酸          Arg  表示精氨酸
Asn   表示   天冬酰胺        Asp  表示天冬氨酸
Cys   表示   半胱氨酸        Gln  表示谷氨酰胺
Glu   表示   谷氨酸          Gly  表示甘氨酸
His   表示   组氨酸          Hyp  表示羟脯氨酸
Ile   表示   异亮氨酸        Leu  表示亮氨酸
Lys   表示   赖氨酸          Met  表示甲硫氨酸
Phe   表示   苯丙氨酸        Pro  表示脯氨酸
Ser  表示   丝氨酸       Thr  表示苏氨酸
Thp  表示   巯基脯氨酸   Trp  表示色氨酸
Tyr  表示   酪氨酸       Val  表示缬氨酸
Fmoc 表示   芴甲氧羰基
DMF  表示   二甲基甲酰胺
DCC  表示   二环己基碳二亚胺
HOBt 表示   1-羟基苯并三唑
TFA  表示   三氟乙酸
EDT  表示   巯基乙醇
HBTU 表示   2-(1H-1-羟基苯并三唑)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐
RP-HPLC表示  反相高效液相色谱
其它未标示的缩写具有本领域公知的含义。
具体实施方式
通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。
实施例所用固相合成载体Rink-酰胺树脂为天津南开合成责任有限公司产品；HOBT、HBTU、DIEA以及Fmoc-保护的天然氨基酸由上海吉尔生化公司提供；式(I)中“PEG-M”部分表示的聚乙二醇修饰物(例如实施例中所用的mPEG5000-MAL)为凯正生物技术有限责任公司产品。
实施例1[Cys 21 (mPEG5000-MAL)]Exendin-4(化合物1)的合成 步骤1：固相法合成[Cys 21 ]Exendin-4
以670mg Rink-酰胺树脂(0.25mmol)为固相载体，以Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OtBu)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Met-OH，Fmoc-Phe-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Trp-OH，Fmoc-Val-OH为原料，HBTU-HOBt为缩合剂，根据化合物1的氨基酸序列，按标准的Fmoc固相多肽合成方法合成肽树脂。以25ml三氟乙酸∶苯甲硫醚∶间甲酚∶乙二硫醇∶水(8.25∶0.5∶0.5∶0.25∶0.5，体积比)作裂解液，0℃反应30分钟，室温90反应分钟，将肽脱除保护基并从树脂上裂解下来。粗肽溶于20％醋酸水溶液中，冰冻干燥，得白色干粉719mg。粗肽经RP-HPLC纯化，生物质谱测定分子量为4176，保留时间为10.365min，HPLC条件，A相：0.05％TFA/水；B相：0.05％TFA/70％ACN/水；色谱柱：菲罗门(phenomenex)jupiler 5u C4300A 4.6×250mm；梯度：0-17分钟B％35-85，17-21分钟B％85-35，25分钟结束；流速：1mL/min；柱温：25℃。
步骤2：多肽与PEG修饰物的反应
将经RP-HPLC纯化后的[Cys21]Exendin-4溶于磷酸盐缓冲液中，加入适量的mPEG5000-MAL，室温反应，用RP-HPLC监测反应进程和分离产物。经MALDI-TOF-MS分析，Mn＝9135，相邻两峰分子量相差约44，具有聚乙二醇的典型结构特征，RP-HPLC保留时间12.925min。
实施例2[Cys 22 (mPEG 5000 -MAL)]Exendin-4(化合物2)的合成
合成方法参考实施例1。
[Cys22]Exendin-4分子量为4142，保留时间为10.86min。PEG修饰产物为经MALDI-TOF-MS分析，Mn＝9146，相邻两峰分子量相差约44，具有聚乙二醇的典型结构特征，RP-HPLC保留时间10.438min。
实施例3[Cys 23 (mPEG 5000 -MAL)]Exendin-4(化合物3)的合成
合成方法参考实施例1。
[Cys23]Exendin-4分子量为4176，保留时间为10.875min。PEG修饰产物为经MALDI-TOF-MS分析，Mn＝9180，相邻两峰分子量相差约44，具有聚乙二醇的典型结构特征，RP-HPLC保留时间11.52min。
实施例4[Cys 31 (mPEG 5000 -MAL)]Exendin-4(化合物4)的合成
合成方法参考实施例1。
[Cys31]Exendin-4分子量为4192，保留时间为11.15min。PEG修饰产物为经MALDI-TOF-MS分析，Mn＝9150，相邻两峰分子量相差约44，具有聚乙二醇的典型结构特征，RP-HPLC保留时间11.72min。
实施例5[Cys 36 (mPEG 5000 -MAL)]Exendin-4(化合物5)的合成
合成方法参考实施例1。
[Cys36]Exendin-4分子量为4192，保留时间为11.21min。PEG修饰产物为经MALDI-TOF-MS分析，Mn＝9151，相邻两峰分子量相差约44，具有聚乙二醇的典型结构特征，RP-HPLC保留时间11.88min。
实施例6[Cys 37 (mPEG 5000 -MAL)]Exendin-4(化合物6)的合成
合成方法参考实施例1。
[Cys37]Exendin-4分子量为4192，保留时间为10.92min。PEG修饰产物为经MALDI-TOF-MS分析，Mn＝9150，相邻两峰分子量相差约44，具有聚乙二醇的典型结构特征，RP-HPLC保留时间11.82min。
实施例7[Cys 38 (mPEG 5000 -MAL)]Exendin-4(化合物7)的合成
合成方法参考实施例1。
[Cys38]Exendin-4分子量为4192，保留时间为11.24min。PEG修饰产物为经MALDI-TOF-MS分析，Mn＝9153，相邻两峰分子量相差约44，具有聚乙二醇的典型结构特征，RP-HPLC保留时间11.90min。
实施例8[Thp 31 (mPEG 5000 -MAL)]Exendin-4(化合物8)的合成
Thp保护氨基酸原料为Fmoc-Thp(Trt)-OH，合成方法参考实施例1。
[Thp31]Exendin-4分子量为4218，保留时间为11.02min。PEG修饰产物为经MALDI-TOF-MS分析，Mn＝9221，相邻两峰分子量相差约44，具有聚乙二醇的典型结构特征，RP-HPLC保留时间11.45min。
实施例9[Thp 36 (mPEG 5000 -MAL)]Exendin-4(化合物9)的合成
合成方法同实施例8。
[Thp36]Exendin-4分子量为4218，保留时间为10.95min。PEG修饰产物为经MALDI-TOF-MS分析，Mn＝9222，相邻两峰分子量相差约44，具有聚乙二醇的典型结构特征，RP-HPLC保留时间11.62min。
实施例10[Thp 37 (mPEG 5000 -MAL)]Exendin-4(化合物10)的合 成
合成方法同实施例8。
[Thp37]Exendin-4分子量为4218，保留时间为10.82min。PEG修饰产物为经MALDI-TOF-MS分析，Mn＝9222，相邻两峰分子量相差约44，具有聚乙二醇的典型结构特征，RP-HPLC保留时间11.43min。
实施例11[Thp 38 (mPEG 5000 -MAL)]Exendin-4(化合物11)的合 成
合成方法同实施例8。
[Thp38]Exendin-4分子量为4218，保留时间为10.91min。PEG修饰产物为经MALDI-TOF-MS分析，Mn＝9221，相邻两峰分子量相差约44，具有聚乙二醇的典型结构特征，RP-HPLC保留时间11.74min。
实施例12[Cys 31 (mPEG 20000 -MAL)]Exendin-4(化合物12)的合 成
合成方法参考实施例1，[Cys31]Exendin-4肽类似物使用以下所述然谱条件进行分析。
[Cys31]Exendin-4肽类似物分子量为4192，保留时间为8.838min。PEG修饰产物为经MALDI-TOF-MS分析，Mn＝25682，相邻两峰分子量相差约44，具有聚乙二醇的典型结构特征，RP-HPLC保留时间9.70min。HPLC条件，A相：0.05％TFA/水；B相：0.05％TFA/70％ACN/水；色谱柱：安捷伦(Agilent)zorbax 5uC18 300A 4.6×150mm；梯度：0-15分钟B％35-85 15-17分钟B％85-3520分钟结束；流速：1mL/min；柱温：25℃。
根据以上合成和分析结果可见，本发明获得了单一PEG修饰的Exendin-4类似物，由于所述Exendin-4类似物肽链中活性巯基的高反应性，使得PEG可以定位连接于该Exendin-4类似物上。
实验例1：GLP-1受体激动活性评价
GLP-1受体是一个Gs偶联的GPCR。在用于评价的HEK293人胚肾上皮细胞株中，兼有CRE-荧光素酶报告系统的稳定表达。因此，一旦受体被激活，通过Gs信号通路提高细胞内第二信使cAMP的浓度，就会启动前述报告系统中荧光素酶基因的表达。通过检测荧光素酶报告基因的表达多少，来反映待测化合物对于GLP-1受体刺激活化的程度。
参照文献方法(殷菲 等，中国药学杂志，2007，42(1)：24)对Exendin-4类似物PEG修饰物在细胞水平测定GLP-1受体激动活性，Exendin-4的EC50为1.93nM。结果见表1。
表1.Exendin-4类似物PEG修饰物的GLP-1受体激动活性结果
  化合物序号   序列   EC50(nM)
  1   [Cys21(mPEG5000-MAL)]Exendin-4   22.46
  2   [Cys22(mPEG5000-MAL)]Exendin-4   19.75
  3   [Cys23(mPEG5000-MAL)]Exendin-4   15.77
  4   [Cys31(mPEG5000-MAL)]Exendin-4   0.58
  5   [Cys36(mPEG5000-MAL)]Exendin-4   1.53
  6   [Cys37(mPEG5000-MAL)]Exendin-4   1.76
  7   [Cys38(mPEG5000-MAL)]Exendin-4   10.72
  8   [Thp31(mPEG5000-MAL)]Exendin-4   6.36
  9   [Thp36(mPEG5000-MAL)]Exendin-4   7.46
  10   [Thp37(mPEG5000-MAL)]Exendin-4   8.01
  11   [Thp38(mPEG5000-MAL)]Exendin-4   28.19
  12   [Cys31(mPEG20000-MAL)]Exendin-4   1.84
从表1可以看出，本发明Exendin-4类似物PEG修饰物均具有有效的GLP-1激动活性。

Claims (20)

1.式(I)所示的Exendin-4类似物的聚乙二醇修饰物：
PEG-M-X-(Ex-4)         (I)
或其可药用盐，其中，
PEG表示RO(CH2CH2O)n-CH2CH2-，其中R为H或CH3，n为25-2500的整数；
M表示 
Figure FSA00000263216900011
或 
Figure FSA00000263216900012
各自的氮或硫
原子一侧与PEG部分连接，另一侧与X部分的巯基连接；
X-(Ex-4)表示具有如下结构的Exendin-4类似物：
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Aa21-Aa22-Aa23-Glu-Trp-Leu-Aa27-Asn-Gly-Gly-Aa31-Ser-Ser-Gly-Ala-Aa36-Aa37-Aa38-Ser-NH2，其中
Aa21、Aa22、Aa23、Aa27、Aa31、Aa36、Aa37和Aa38各自独立地是选自下列的氨基酸：Cys、Thp、Ala、Arg、Asn、Asp、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、Val，并且Aa21、Aa22、Aa23、Aa27、Aa31、Aa36、Aa37和Aa38中只有一个为Cys或Thp；
X表示在X-(Ex-4)所示的Exendin-4类似物中，位于21、22、23、27、31、36、37或38位的任一个位点并且为半胱氨酸或4-巯基脯氨酸(Thp， 
Figure FSA00000263216900013
)的氨基酸，该氨基酸的巯基与M基团连接。 
2.式(I)所示的Exendin-4类似物的聚乙二醇修饰物：
PEG-M-X-(Ex-4)         (I)
或其可药用盐，其中，
PEG表示分子量为1,000至100,000的聚乙二醇；
M表示 
Figure FSA00000263216900021
或 
Figure FSA00000263216900022
各自的氮或硫
原子一侧与PEG部分连接，另一侧与X部分的巯基连接；
X-(Ex-4)表                   示
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu21-Phe22-Ile23-Glu-Trp-Leu-Lys27-Asn-Gly-Gly-Pro31-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro36-Pro37-Pro38-Ser-NH2中第21、22、23、27、31、36、37或38位氨基酸中的任一个被半胱氨酸或4-巯基脯氨酸(Thp， 
Figure FSA00000263216900023
)取代的三十九肽；
X表示在X-(Ex-4)所示的三十九肽中，位于21、22、23、27、31、36、37或38位的任一个位点并且为半胱氨酸或4-巯基脯氨酸(Thp， 
Figure FSA00000263216900024
)的氨基酸，该氨基酸的巯基与M基团连接。
3.根据权利要求1的聚乙二醇修饰物，其中n为50-2000的整数、50-1500的整数、50-1000的整数、75-1500的整数、75-1000的整数、75-500的整数、或100-500的整数。
4.根据权利要求2的聚乙二醇修饰物，其中所述PEG表示分 子量为1,000至100,000、2,000至80,000、3,000至60,000、4,000至60,000、5,000至60,000、3,000至50,000、4,000至40,000、4,000至30,000、或5,000至20,000的聚乙二醇。
5.根据权利要求1-4任一项的聚乙二醇修饰物，其中所述X-(Ex-4)表示具有如下结构的Exendin-4类似物：His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Aa21-Aa22-Aa23-Glu-Trp-Leu-Aa27-Asn-Gly-Gly-Aa31-Ser-Ser-Gly-Ala-Aa36-Aa37-Aa38-Ser-NH2，其中Aa21、Aa22、Aa23、Aa27、Aa31、Aa36、Aa37和Aa38各自独立地是选自下列的氨基酸：Cys、Thp、Leu、Phe、Ile、Lys、Pro，并且Aa21、Aa22、Aa23、Aa27、Aa31、Aa36、Aa37和Aa38中只有一个为Cys或Thp。
6.根据权利要求5的聚乙二醇修饰物，其中所述Aa21可选自Cys、Thp、Leu，所述Aa22可选自Cys、Thp、Phe，所述Aa23可选自Cys、Thp、Ile，所述Aa27可选自Cys、Thp、Lys，所述Aa31可选自Cys、Thp、Pro，所述Aa36可选自Cys、Thp、Pro，所述Aa37可选自Cys、Thp、Pro，所述Aa38可选自Cys、Thp、Pro；前提条件是，Aa21、Aa22、Aa23、Aa27、Aa31、Aa36、Aa37和Aa38中只有一个为Cys或Thp。
7.根据权利要求1-6任一项的聚乙二醇修饰物，其中所述X表示在X-(Ex-4)所示的Exendin-4类似物中，位于21、22、23、31、36、37或38位的任一个位点并且为半胱氨酸或4-巯基脯氨酸的氨基酸。
8.根据权利要求7的聚乙二醇修饰物，其中所述X表示在X-(Ex-4)所示的Exendin-4类似物中，位于21、22、23、31、36、37或38位的任一个位点并且为半胱氨酸的氨基酸。 
9.根据权利要求7的聚乙二醇修饰物，其中所述X表示在X-(Ex-4)所示的Exendin-4类似物中，位于31、36、37或38位的任一个位点并且为4-巯基脯氨酸的氨基酸。
10.根据权利要求1-9任一项的聚乙二醇修饰物，其是Exendin-4类似物的定位聚乙二醇化修饰物或其可药用盐。
11.根据权利要求1-9任一项的聚乙二醇修饰物，其是Exendin-4类似物的定位聚乙二醇化修饰物或其可药用盐，并且其中所述的聚乙二醇修饰为单聚乙二醇修饰。
12.根据权利要求1-11任一项的聚乙二醇修饰物，其选自：
[Cys21(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Cys22(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Cys23(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Cys31(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Cys36(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Cys37(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Cys38(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Thp31(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Thp36(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Thp37(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，
[Thp38(mPEG5000-MAL)]Exendin-4，和
[Cys31(mPEG20000-MAL)]Exendin-4，
或其药学可接受的盐。
13.式(II)所示的Exendin-4类似物：
[Aap]Exendin-4  (II)
其中，
Exendin-4表                        示 
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu21-Phe22-Ile23-Glu-Trp-Leu-Lys27-Asn-Gly-Gly-Pro31-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro36-Pro37-Pro38-Ser-NH2的三十九肽；
Aap表示取代Exendin-4所示三十九肽p位的氨基酸，其选自半胱氨酸(即，Cys)或4-巯基脯氨酸(即，Thp、 
Figure FSA00000263216900051
)；
p表示Exendin-4所示三十九肽的21、22、23、27、31、36、37或38位。
14.根据权利要求13的Exendin-4类似物，其中：
Aap表示取代Exendin-4所示三十九肽p位的半胱氨酸；
p表示Exendin-4所示三十九肽的21、22、23、31、36、37或38位。
15.根据权利要求13的Exendin-4类似物，其中：
Aap表示取代Exendin-4所示三十九肽p位的4-巯基脯氨酸；
p表示Exendin-4所示三十九肽的31、36、37或38位。
16.根据权利要求13-15任一项的Exendin-4类似物，其选自：
[Cys21]Exendin-4，
[Cys22]Exendin-4，
[Cys23]Exendin-4，
[Cys31]Exendin-4，
[Cys36]Exendin-4，
[Cys37]Exendin-4，
[Cys38]Exendin-4，
[Thp31]Exendin-4，
[Thp36]Exendin-4，
[Thp37]Exendin-4，和 
[Thp38]Exendin-4。
17.制备权利要求1-12任一项所述聚乙二醇修饰物的方法，其包括使发明第二方面任一项所述Exendin-4类似物与PEG-M反应的步骤。
18.权利要求1-12任一项所述聚乙二醇修饰物的用途，其为：
在制备作为GLP-1受体激动剂的药物中的用途；
在制备用于预防和/或治疗与GLP-1受体活性低下相关的疾病和/或症状的药物中的用途；
在制备用于控制甘油酯、促进胰岛素分泌、降低循环胰高血糖素、提高胰β-细胞质量、抑制胃的排空、减少营养的摄入、增加胰岛素敏感性的药物中的用途；
在制备用于预防和/或治疗与糖代谢相关的疾病和/或症状的药物中的用途；
在制备用于预防和/或治疗II型糖尿病、肥胖和/或肥胖症、β细胞功能低下等糖代谢疾病的药物中的用途；和/或
在制备用于控制II型糖尿病患者体内血糖的药物中的用途。
19.一种组合物，其包括预防和/或治疗有效量的权利要求1-12任一项所述聚乙二醇修饰物以及任选的药学可接受的载体。
20.权利要求13-16任一项所述Exendin-4类似物在制备权利要求1-12任一项所述聚乙二醇修饰物中的用途。 
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Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102718868A (zh) * 2011-03-30 2012-10-10 上海华谊生物技术有限公司 定点单取代聚乙二醇化Exendin类似物及其制备方法
CN103130889A (zh) * 2012-06-15 2013-06-05 中国药科大学 一种Exendin-4类似物及其制备方法和应用
CN104945498A (zh) * 2014-03-24 2015-09-30 扬子江药业集团北京海燕药业有限公司 长效化PEG-rExendin-4改构体偶联物的制备
CN105175514A (zh) * 2015-09-05 2015-12-23 苏州普罗达生物科技有限公司 聚乙二醇修饰的拟胰岛素多肽及其应用
CN105175513A (zh) * 2015-09-05 2015-12-23 苏州普罗达生物科技有限公司 聚乙二醇修饰的glp-1受体激动多肽及其应用
CN106432471A (zh) * 2016-12-14 2017-02-22 江苏师范大学 一种新型非洲爪蟾胰高血糖素样肽‑1（glp‑1）缀合肽及其应用
CN106554404A (zh) * 2015-09-25 2017-04-05 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 一种艾塞那肽修饰物及其用途
CN106699870A (zh) * 2016-12-14 2017-05-24 江苏师范大学 长效非洲爪蟾胰高血糖素样肽‑1（glp‑1）类似物及其应用
US11179467B2 (en) 2015-09-25 2021-11-23 Brightgene Bio-Medical Technology Co., Ltd. Exenatide modifier and use thereof

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA116217C2 (uk) 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
EP2934566B1 (en) 2012-12-21 2017-06-21 Sanofi Exendin-4 derivatives as dual glp1/gip or trigonal glp1/gip/glucagon agonists
WO2015086730A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Non-acylated exendin-4 peptide analogues
EP3080149A1 (en) 2013-12-13 2016-10-19 Sanofi Dual glp-1/glucagon receptor agonists
WO2015086729A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Dual glp-1/gip receptor agonists
WO2015086728A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Exendin-4 peptide analogues as dual glp-1/gip receptor agonists
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
AR105284A1 (es) 2015-07-10 2017-09-20 Sanofi Sa Derivados de exendina-4 como agonistas peptídicos duales específicos de los receptores de glp-1 / glucagón

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006074600A1 (fr) * 2005-01-14 2006-07-20 Wuxi Grandchamp Pharmaceutical Technology Co., Ltd. Exendines modifiees et utilisations correspondantes
CN101463078A (zh) * 2009-01-12 2009-06-24 华东师范大学 一种Exendin-4衍生物及其固相化学合成

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE122007000042I2 (de) * 1999-01-14 2011-05-05 Amylin Pharmaceuticals Inc Neue exendin agonist formulierungen und deren verabreichung
AU775063C (en) * 1999-04-30 2005-05-12 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Modified exendins and exendin agonists
US6924264B1 (en) * 1999-04-30 2005-08-02 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Modified exendins and exendin agonists
CN1162446C (zh) 2001-05-10 2004-08-18 上海华谊生物技术有限公司 促胰岛素分泌肽衍生物
MXPA05009940A (es) * 2003-03-19 2005-12-05 Lilly Co Eli Compuestos de glp-1 de enlace de glicol polietilenico.
KR100890989B1 (ko) 2006-06-01 2009-03-31 이강춘 폴리에틸렌글리콜 또는 이의 유도체로 단일 수식된 엑센딘,이의 제조방법 및 이의 용도
CN102827284B (zh) 2006-11-14 2015-07-29 上海仁会生物制药股份有限公司 带有聚乙二醇基团的Exendin或其类似物及其制剂和用途
US8420598B2 (en) 2007-04-20 2013-04-16 B & L Delipharm Corp. Mono modified exendin with polyethylene glycol or its derivatives and uses thereof

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006074600A1 (fr) * 2005-01-14 2006-07-20 Wuxi Grandchamp Pharmaceutical Technology Co., Ltd. Exendines modifiees et utilisations correspondantes
CN101463078A (zh) * 2009-01-12 2009-06-24 华东师范大学 一种Exendin-4衍生物及其固相化学合成

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102718868A (zh) * 2011-03-30 2012-10-10 上海华谊生物技术有限公司 定点单取代聚乙二醇化Exendin类似物及其制备方法
CN103130889A (zh) * 2012-06-15 2013-06-05 中国药科大学 一种Exendin-4类似物及其制备方法和应用
CN104945498A (zh) * 2014-03-24 2015-09-30 扬子江药业集团北京海燕药业有限公司 长效化PEG-rExendin-4改构体偶联物的制备
CN104945498B (zh) * 2014-03-24 2018-08-03 扬子江药业集团北京海燕药业有限公司 长效化PEG-rExendin-4改构体偶联物的制备
CN105175514A (zh) * 2015-09-05 2015-12-23 苏州普罗达生物科技有限公司 聚乙二醇修饰的拟胰岛素多肽及其应用
CN105175513A (zh) * 2015-09-05 2015-12-23 苏州普罗达生物科技有限公司 聚乙二醇修饰的glp-1受体激动多肽及其应用
CN106554404A (zh) * 2015-09-25 2017-04-05 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 一种艾塞那肽修饰物及其用途
CN106554404B (zh) * 2015-09-25 2020-11-20 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 艾塞那肽修饰物及其用途
US11179467B2 (en) 2015-09-25 2021-11-23 Brightgene Bio-Medical Technology Co., Ltd. Exenatide modifier and use thereof
CN106432471A (zh) * 2016-12-14 2017-02-22 江苏师范大学 一种新型非洲爪蟾胰高血糖素样肽‑1（glp‑1）缀合肽及其应用
CN106699870A (zh) * 2016-12-14 2017-05-24 江苏师范大学 长效非洲爪蟾胰高血糖素样肽‑1（glp‑1）类似物及其应用
CN106432471B (zh) * 2016-12-14 2019-12-03 江苏师范大学 一种新型非洲爪蟾胰高血糖素样肽-1(glp-1)缀合肽及其应用

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