CN102349937B - 一种能够保留苦碟子提取物有效成分的制备方法 - Google Patents

Abstract

一种能够保留苦碟子提取物有效成分的制备方法，它属于苦碟子提取领域。本发明要解决现有苦碟子提取物制备方法存在工艺复杂、有机酸类基本上流失或被石灰乳破坏的技术问题。方法如下：一、去离子水煎煮抱茎苦荬菜2次，浓缩清膏；二、将清膏内加水，调pH值，静置，收集上清液调pH值至2～3，静置，收集上层液体；三、过聚酰胺树脂柱，再用去离子水进行洗脱，水洗液弃去后使用乙醇溶液洗脱树脂柱，收集乙醇洗脱液；四、对乙醇洗脱液进行减压蒸馏回收乙醇，调pH值6.0～7.0，浓缩，减压干燥，即得到苦碟子提取物。本发明方法的提取物收率较高，超过2.0%，该提取物总黄酮含量超过80%。

Description

一种能够保留苦碟子提取物有效成分的制备方法

技术领域

本发明属于苦碟子提取领域；具体涉及苦碟子提取物的制备方法。

背景技术

抱茎苦荬菜[Ixeris sonchifolia(Bge.)Hance]为菊科（Compositae）苦荬菜属(Ixerisgenus)植物，别名为苦碟子、满天星等，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准—蒙药分册》25页，盛产于我国东北、华北等地。《内蒙古中草药》记载，抱茎苦荬菜味苦、辛，具清热解毒、排毒、止痛之功效。民间主要用于治疗阑尾炎、扁桃体炎、无名肿痛等症。全世界苦荬菜属植物共有50余种，主要分布于中国、朝鲜、日本、越南以及前苏联等地。我国共有苦荬菜属植物20余种。近年来，随着现代提取分离和波谱学技术以及现代药理学的飞速发展，对苦荬菜属植物的化学成分和生物活性的研究越来越深入。经化学分析，其主要成份为黄酮类、酚酸类及倍半萜内酯类、三萜类物质，是其发挥药理活性的物质基础。现代药理研究证实，抱茎苦荬菜提取物药理作用较为广泛：⑴心、脑血管保护作用；具有增加冠脉流量，降低氧代谢，提高耐缺氧能力，对实验性心肌梗死的治疗作用，增加脑血流量，改善微循环，收缩血管作用。⑵对血液系统的作用；具有抗血小板聚集，增强纤维蛋白酶活性，降血脂、活血化瘀、抗动脉粥样硬化作用。⑶镇痛、镇静作用；⑷抗氧化和清除自由基作用；⑸抗肿瘤作用；⑹抗呼吸道病毒作用；⑺肝脏保护作用；⑻其他作用；如膜稳定作用、提高学习记忆能力、急性肾损伤的保护作用等。因此，现在研究较多的苦荬菜总黄酮及总酚酸作为药用活性部位具有极大的临床应用价值和市场开发价值。

本发明方法获得的苦碟子提取物中总黄酮含量以无水芦丁（C₂₇H₃₀O₁₆）计，不少于80%；单体成分木犀草素（C₁₅H₁₀O₆）含量不少于7.0%。还含有咖啡酸、木犀草苷、木犀草素葡萄醛酸苷、菊苣酸、钠元素等。

苦碟子提取物的制备方法很多，但应用于工业生产的仅有石硫法，该方法主要针对于黄酮类成分，其他成分如有机酸类基本上流失或被石灰乳破坏，同时在提取物中产生钙盐的残留，带来一定的安全隐患。其他的方法基本上是实验室研究方法，例如采用硅胶柱分离纯化；有机溶剂（如、乙酸乙酯、正丁醇）萃取等。以致在工业化生产中实施困难，或根本不能实施。ZL 200410078168.0公开的方法虽采用了聚酰胺纯化手段，同时还采用了壳聚糖沉淀、为除去聚糖又采用醇沉、同时为提高总黄酮含量，又采用90%丙酮处理，使得工艺复杂，同时丙酮沸点低工业化操作要求条件较高。

其中，在《天然产物研究与开发》（2010.22:430-432）中公开的文章《抱茎苦荬菜水溶性成分的分离与结构鉴定》，公开了采用氧化钙沉淀药液，并采用氢氧化钠调节药液至中性，在采用乙醇沉淀，再过聚酰胺柱，此方法虽然解决了去除鞣质等大分子杂质的问题，但对有效成分的保留没有任何改善，并且除杂之步骤较多，加剧了有效成分的流失。

发明内容

本发明要解决现有苦碟子提取物制备方法存在工艺复杂、有机酸类基本上流失或被石灰乳破坏的技术问题；而提供了一种能够保留苦碟子提取物有效成分的制备方法。

本发明中苦碟子提取物的制备方法是按下述步骤进行的：步骤一、取100kg抱茎苦荬菜中药材，然后用去离子水煎煮2次，第一次煎煮去离子水的质量是抱茎苦荬菜中药材的16～20倍，第二次煎煮去离子水的用量是抱茎苦荬菜中药材质量的12～16倍，每次煎煮耗时1小时，合并两次煎煮液，再浓缩至以80℃计相对密度为1.12～1.16的清膏；步骤二、将步骤一获得的清膏内加水，加水至体积为200L，然后用质量浓度为10%氢氧化钠溶液调pH值至6.5～7.0，静置12～24小时，收集上清液，上清液用盐酸溶液调pH值至2～3，然后静置12～24小时，收集上层液体；步骤三、将步骤二收集的上层液体过聚酰胺树脂柱，过聚酰胺树脂质量与药材（抱茎苦荬菜）的质量比为1：2.25，再用去离子水进行洗脱，洗脱用的去离子水体积为6～10个柱体积，水洗液弃去后使用体积浓度为55%～85%的乙醇溶液洗脱树脂柱，洗脱用的乙醇溶液体积是5个柱体积，收集乙醇洗脱液；步骤四、对乙醇洗脱液进行减压蒸馏回收乙醇，用氢氧化钠溶液调pH值6.0～7.0，浓缩，减压干燥，即得到苦碟子提取物。

采用酸处理提取液的方法去除分子量较大的鞣质类物质，运用聚酰胺树脂处理，采用80%乙醇洗脱，该工艺进一步去除大分子的蛋白、鞣质及树脂类物质。使得富集分子量较小的黄酮类物质和有机酚酸物质。该发明的关键点是采用聚酰胺树脂处理之前，先采用酸处理提取液，使提取液中的黄酮及有机酸均已非成盐状态下进入树脂柱中，并且能够较完全的被树脂吸附，并且针对性较好。同时采用80%乙醇能够较完全的解吸黄酮与有机酸。该工艺除乙醇外，不使用其他有机溶剂，使得工艺流程简单，生产设备要求较低，制造成本降低，同时该方法的的提取物收率较高超过2.0%，该提取物总黄酮含量超过80%，达到国家中药注射剂原料的技术要求，该提取物可作为中药注射剂原料或口服制剂的原料。

附图说明

图1是苦碟子提取物HPLC谱图。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

具体实施方式一：本实施方式中苦碟子提取物的制备方法是按下述步骤进行的：

步骤一、取100kg抱茎苦荬菜中药材，然后用去离子水煎煮2次，第一次煎煮去离子水的质量是抱茎苦荬菜中药材的16～20倍，第二次煎煮去离子水的用量是抱茎苦荬菜中药材质量的12～16倍，每次煎煮耗时1小时，合并两次煎煮液，再浓缩至以80℃计相对密度为1.12～1.16的清膏；

步骤二、将步骤一获得的清膏内加水，加水至体积为200L，然后用质量浓度为10%氢氧化钠溶液调pH值至6.5～7.0，静置12～24小时，收集上清液，上清液用盐酸溶液调pH值至2～3，然后静置12～24小时，收集上层液体；

步骤三、将步骤二收集的上层液体过聚酰胺树脂柱，过聚酰胺树脂与药材（抱茎苦荬菜药材）的质量比为1：2.25，再用去离子水进行洗脱，洗脱用的去离子水体积为6～10个柱体积，水洗液弃去后使用体积浓度为55%～85%的乙醇溶液洗脱树脂柱，洗脱用的乙醇溶液体积是5个柱体积，收集乙醇洗脱液；

步骤四、对乙醇洗脱液进行减压蒸馏回收乙醇，用氢氧化钠溶液调pH值6.0～7.0，浓缩，减压干燥，即得到苦碟子提取物。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤二所述盐酸溶液的质量浓度为5%。其它步骤和参数与具体实施一相同。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：步骤三所述乙醇溶液的体积浓度为60%～80%。其它步骤和参数与具体实施一或二相同。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：步骤三所述乙醇溶液的体积浓度为80%。其它步骤和参数与具体实施一或二相同。

具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是：步骤四中所述氢氧化钠溶液的质量浓度为10%。其它步骤和参数与具体实施方式一至四之一相同。

具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是：所述减压干燥温度为60～80℃，减压干燥时间为6～10小时。其它步骤和参数与具体实施方式一至五之一相同。

采用下述试验验证发明效果：

试验一：本实施方式中苦碟子提取物的制备方法是按下述步骤进行的：取抱茎苦荬菜药材100kg，加去离子水煎煮2次，加水量分别为药材量的20倍、16倍，煎煮时间分别为1.0小时，合并煎液，浓缩至相对密度1.12～1.16（80℃）的清膏；清膏加水至生药量的一倍，调pH值6.5～7.0，静置24小时，收集上清液，沉淀弃去；上清液用5%盐酸调pH值2.0～3.0，静置24小时，收集上清液过已处理好的聚酰胺树脂柱，树脂药材比w/w（1：2.25），水洗6～10个柱体积，再用80%乙醇洗脱5个柱体积，收集醇洗脱液；回收乙醇，药液用10%氢氧化钠溶液调pH值至6.5～7.0，浓缩，减压干燥，提取物收率≥2.2%。

提取物中主要成分为黄酮、有机酸；黄酮有木犀草素为母核的黄酮，木犀草苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、有机酸主要是咖啡酰系列有机酸，包括咖啡酸、菊苣酸等。

该提取物的组分情况研究结果

提取物中总黄酮含量以无水芦丁（C₂₇H₃₀O₁₆）计，不少于80%；单体成分木犀草素（C₁₅H₁₀O₆）含量不少于7.0%，其组成成分：木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷C₂₁H₁₇O₁₂）含量不少于9.0%；木犀草苷（C₂₁H₂₀O₁₁）含量不少于0.7%；菊苣酸（C₂₂H₁₈O₁₂）的含量不少于5.5%；咖啡酸（C₉H₈O₄）的含量不少于0.6%；钠离子含量在7.5%以上。

6主要成分的探索性研究

1材料、试药与试剂

高效液相色谱仪  安捷伦1100系列液相色谱仪，配有在线脱气机；四元梯度洗脱泵；柱温箱

木犀草苷    化学对照品    批号：111720-200501

咖啡酸      化学对照品    批号：110885-200102

芦丁        化学对照品    批号：110080-200306

木犀草素    化学对照品    批号：111520-200504

                          由中国药品生物制品检定所提供

木犀草素-7-O-葡糖醛酸苷   由沈阳药科大学天然药化教研室提供

菊苣酸      由美国SIGMA-ALDRICH提供（99.1%byHPLC）

色谱柱      Penomenex

Luna C18 250×4.6mm 5μm

试剂        甲醇、乙腈  色谱纯（DIKMA）

            氯化钠  基准试剂  其它试剂为市售分析纯

试药        苦碟子提取物   由哈药集团中药二厂提供

            批号：070201、070501、060601、080701

2试验方法与结果

2.1试验方法

苦碟子提取物质量控制采用紫外分光光度法测定总黄酮，采用酸水解，高效液相法测定黄酮苷元木犀草素。

苦碟子提取物中的大类成分主要是有机酸和黄酮类成份，通过文献和标准品定位，初步认为苦碟子提取物中含有咖啡酸、木犀草苷、木犀草素葡萄糖醛酸苷、菊苣酸四种成分，均采用高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VI D）进行含量测定。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水-磷酸系统为流动相；检测波长：有机酸为324nm、黄酮类成分为350nm；由于在制备工艺中使用了氢氧化钠调节酸碱度，同时对成品中的钠元素进行含量测定，钠元素采用火焰法原子吸收分光光度法测定。

2.2试验结果

2-1苦碟子提取物质量控制含量测定结果

通过对部分已知成份进行含量测定，其含量结果见下表2-1

表2-2苦碟子提取物的已知成分含量研究结果

苦碟子提取物质量控制指标成分，总黄酮含量以无水芦丁（C₂₇H₃₀O₁₆）计，不少于80%；单体成分木犀草素（C₁₅H₁₀O₆）含量不少于7.0%。

通过高效液相法对部分已知成分探索性研究，苦碟子提取物中明确结构的（见图1）有咖啡酸(tR=4.886min)、木犀草苷(tR=7.610min)、木犀草素葡萄醛酸苷(tR=8.142min)、菊苣酸(tR=9.398min)、金属钠元素五种成分，并对五种成分进行了含量测定，其中咖啡酸0.94%；木犀草苷0.79%；木犀草素葡萄醛酸苷10.65%；菊苣酸6.16%；钠元素7.76%。各成分含量较稳定，初步研究证实提取物中的可控成分已达到25%左右。

Claims (6)

1.一种能够保留苦碟子提取物有效成分的制备方法，其特征在于能够保留苦碟子提取物有效成分的制备方法是按下述步骤进行的：

步骤一、取100kg抱茎苦荬菜中药材，然后用去离子水煎煮2次，第一次煎煮去离子水的质量是抱茎苦荬菜中药材的16～20倍，第二次煎煮去离子水的用量是抱茎苦荬菜中药材质量的12～16倍，每次煎煮耗时1小时，合并两次煎煮液，再浓缩至以80℃计相对密度为1.12～1.16的清膏；

步骤二、将步骤一获得的清膏内加水，加水至体积为200L，然后用质量浓度为10%氢氧化钠溶液调pH值至6.5～7.0，静置12～24小时，收集上清液，上清液用盐酸溶液调pH值至2～3，然后静置12～24小时，收集上层液体；

步骤三、将步骤二收集的上层液体过聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂与抱茎苦荬菜的质量比为1：2.25，再用去离子水进行洗脱，洗脱用的去离子水体积为6～10个柱体积，水洗液弃去后使用体积浓度为55%～85%的乙醇溶液洗脱树脂柱，洗脱用的乙醇溶液体积是5个柱体积，收集乙醇洗脱液；

步骤四、对乙醇洗脱液进行减压蒸馏回收乙醇，用氢氧化钠溶液调pH值6.0～7.0，浓缩，减压干燥，即得到苦碟子提取物。

2.根据权利要求1所述的一种能够保留苦碟子提取物有效成分的制备方法，其特征在于步骤二所述盐酸溶液的质量浓度为5%。

3.根据权利要求2所述的一种能够保留苦碟子提取物有效成分的制备方法，其特征在于步骤三所述乙醇溶液的体积浓度为60%～80%。

4.根据权利要求2所述的一种能够保留苦碟子提取物有效成分的制备方法，其特征在于步骤三所述乙醇溶液的体积浓度为80%。

5.根据权利要求1-4任一项权利要求所述的一种能够保留苦碟子提取物有效成分的制备方法，其特征在于步骤四中所述氢氧化钠溶液的质量浓度为10%。

6.根据权利要求5任一项权利要求所述的一种能够保留苦碟子提取物有效成分的制备方法，其特征在于所述减压干燥温度为60～80℃，减压干燥时间为6～10小时。