CN101804127A - 一种防治老年痴呆症的复方中药提取物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种预防和/或治疗老年痴呆症的复方中药提取物组合物。该组合物是由从下述中药组合物中提取得到的总方黄酮提取物和总方多糖提取物组成，所述总方黄酮提取物和总方多糖提取物的质量比为50-80∶200-400；所述中药组合物由下述质量份的原料组成：淫羊藿3000-12000、菟丝子(炒)3000-12000、枸杞子3000-12000、覆盆子1500-6000、五味子(蒸)375-1500和车前子(盐炒)750-3000。试验证明：经过大鼠定位航行及空间探索实验，本发明的总黄酮和总多糖组合物组可以提高AD(阿尔茨海默病)模型大鼠的空间学习记忆能力，缩短其逃避潜伏期和搜索距离且显著增加空间探索实验中原平台所在象限搜索时间和距离占总时间和距离的百分比。因此表明该提取物组合物可用于预防或治疗老年痴呆症。

Description

一种防治老年痴呆症的复方中药提取物组合物

技术领域

本发明涉及一种用于防治老年痴呆症的复方中药提取物组合物。

背景技术

随着全世界向老龄社会进入步伐的不断加快，各种神经退行性老年疾病，如轻度认知障碍、老年痴呆等疾病已经成为威胁人类晚年健康，降低老年人生活质量的重要危险因素，给社会及家庭带来了严重的经济负担和沉重的精神压力。因此，开发改善认知功能障碍，治疗老年痴呆症的药物成为全球各国医疗工作者的研究重点，受到中西方医学界的高度重视。

西方医药界研究抗轻度认知障碍及以阿尔茨海默病为主的老年痴呆药物的思路主要围绕四抗(抗炎、抗氧化、抗胆固醇、抗β-淀粉样蛋白)和两拟(拟胆碱和拟谷氨酸)来进行，目前美国食品药品管理局批准的治疗阿尔茨海默病(AD)的药物包括他克林、多奈哌齐、利凡斯的明、加兰他敏和美金刚等，这些药物虽能短期内改善痴呆患者的症状，但不能延缓疾病的发展，并且其中有些药物对肝脏还具有较强的毒副作用，目前几乎不使用，有些药物价格昂贵，患者及其家属难以承受，因此，急需要开发有良好疗效，副作用少，且价格便宜的新型药物。

现代医学中的轻度认知功能障碍、老年痴呆等类疾病大概涵盖于传统中医中“痴呆”、“善忘”、“郁证”、“颤震”、“颤证”、“振掉”等衰老性疾病范畴。概“夫精者，生之本也”(《素问·金匮真言论》)，因此，中医认为肾中精气充足与否是决定人体是否衰老的主要条件。而“痴呆”、“善忘”等类的衰老性疾病，多因肾精亏损，脑髓虚空成病，因此多采取补肾益精法进行治疗。

发明内容

本发明的目的是提供一种预防和/或治疗老年痴呆症的复方中药提取物组合物。

本发明所提供的复方中药提取物组合物，是由从下述中药组合物中提取得到的总黄酮提取物和总多糖提取物组成，所述总黄酮提取物和总多糖提取物的质量比为50-80∶200-400；所述中药组合物由下述质量份的原料组成：淫羊藿3000-12000、炒菟丝子3000-12000、枸杞子3000-12000、覆盆子1500-6000、蒸五味子375-1500和盐炒车前子750-3000。

其中，所述复方中药提取物组合物中总黄酮提取物和总多糖提取物的质量比可进一步为70-75∶370-380；优选为73∶374。

所述中药组合物可进一步由下述质量份的原料组成：淫羊藿5600-6400、炒菟丝子5600-6400、枸杞子5600-6400、覆盆子2800-3200、蒸五味子700-800和盐炒车前子1300-1700；选由下述原料组成：淫羊藿6000、炒菟丝子6000、枸杞子6000、覆盆子3000、蒸五味子750和盐炒车前子1500。

本发明中所述总黄酮提取物可按照包括下述步骤的方法提取得到：

1)按各药材的质量配比称取所述中药组合物，向所述中药组合物中加入质量浓度为86-96％的乙醇水溶液进行提取，收集醇提取液(提取总黄酮用)及残渣(提取总多糖用)；将所述醇提取液用石油醚进行萃取，萃取完毕后弃醚相，收集醇相，将所述醇相在50-60℃减压蒸馏至原体积的1/10，得总黄酮的粗提液；

2)用质量浓度为10％-95％乙醇溶液作为洗脱液按照浓度递增的顺序进行梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱液的用量为8-10倍柱体积，收集质量浓度为50％-70％乙醇溶液的洗脱组分，将所述洗脱组分浓缩干燥，得所述总方黄酮。

其中，步骤1)中所述提取可至少进行一次，每次提取时，所述乙醇水溶液的加入量可为所述中药组合物质量的6-10倍；所述提取的温度为80-85℃，所述提取的时间可为1-1.5小时。

步骤2)中所述梯度洗脱具体可按照下述顺序进行梯度洗脱：10％乙醇溶液-30％乙醇溶液-50％乙醇溶液-70％乙醇溶液，四个梯度洗脱液的用量依次为10倍柱体积、8倍柱体积、8倍柱体积、8倍柱体积，收集质量浓度为50％和70％乙醇溶液的洗脱组分。

本发明中所述总方多糖提取物可按照包括下述步骤的方法提取得到：将按照本发明所述方法提取得到总黄酮提取物后的残渣(见步骤1)用水提取，收集提取液，将所述提取液在50-60℃下减压浓缩至原体积的1/10，然后采用Savage法去除蛋白，室温干燥，即得所述总多糖提取物。

其中，所述提取可至少进行一次，每次提取时，加水量可为所述残渣质量的8-10倍，所述提取的时间可为1-1.5小时。

本发明的另一个目的是提供所述复方中药提取物组合物的应用。

本发明所提供的复方中药提取物组合物的应用是该组合物在制备预防和/或治疗老年痴呆症药物中的应用或在制备改善认知功能障碍药物中的应用。所述老年痴呆症可为阿尔茨海默病。

同时，以本发明所提供的复方中药提取物组合物为活性成分制成的预防和/或治疗老年痴呆症的药物以及改善认知功能障碍药物也属于本发明的保护范围。

所述药物可通过口服、外用、注射、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉或粘膜组织；或是被其它物质混合或包裹后导入机体。

需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体及润滑剂等。

该药物可以制成药学上可接受的任何剂型，如片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸、散剂、滴丸剂、汤剂、糖浆剂、合剂、煎膏剂和浸膏剂等。上述各种剂型的药物均可以按照中药制剂的常规方法制备。

上述预防和/或治疗老年痴呆症的药物的使用剂量和使用方法取决于诸多因素，包括患者的年龄、体重、性别、自然健康状况、营养状况、化合物的活性强度、服用时间、代谢速率、病证的严重程度以及诊治医师的主观判断。本领域的技术人员根据上述因素可以容易地决定药物组合物使用剂量和使用方法。

本发明中的中药组合物是发明人从中医补肾生髓益智的理论出发，在唐代的经典补肾益精方五子衍宗方(菟丝子、枸杞子、覆盆子、五味子、车前子)的基础上加淫羊藿而成，具有补肾益精之功效。

试验证明：经过大鼠定位航行及空间探索实验，本发明的总黄酮和总多糖组合物组可以提高AD(阿尔茨海默病)模型大鼠的空间学习记忆能力--缩短其逃避潜伏期和搜索距离且显著增加空间探索实验中原平台所在象限搜索时间和距离占总时间和距离的百分比。进而表明总黄酮和总多糖组合物可用于治疗老年痴呆症，尤其治疗老年痴呆症前期(如阿尔茨海默痴呆前期)，改善患者认知功能障碍，延缓患者大脑萎缩的发展，提高患者记忆力，尤其是肾虚精亏型痴呆前期患者，补肾益精生髓为该药物组合物的最大特点。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。

下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

下述实施例中所用的淫羊藿、炒菟丝子、枸杞子、覆盆子、蒸五味子和盐炒车前子均符合中国药典2005年版一部正文各药材项下的有关规定。投料前，通过鉴定，各味药材实物与名称相符，质量符合药典标准。

实施例1、制备总黄酮提取物和总多糖提取物的组合物

一、制备总黄酮提取物

1)称取下述质量份的药材：淫羊藿(6000份)、炒菟丝子(6000份)、枸杞子(6000份)、覆盆子(3000份)、蒸五味子(750份)和盐炒车前子(1500份)，混合后得中药组合物。

2)向所述中药组合物中加入质量浓度为95％的乙醇水溶液提取3次，三次提取加醇量依次为10倍体积、8倍体积、6倍体积，三次提取的时间均为1.5小时，合并三次醇提取液以及剩余残渣(提取总多糖用)；将所述醇提取液用石油醚进行萃取，萃取完毕后弃醚相，收集醇相，将所述醇相在60℃减压蒸馏至总体积的1/10，得总黄酮的粗提液。

3)大孔树脂柱分离：将所述总方黄酮的粗提液上AB-8大孔树脂柱进行分离，用质量浓度为10％-95％乙醇溶液作为洗脱液按照下述顺序进行梯度洗脱：10％乙醇溶液(洗脱10倍柱体积)-30％乙醇溶液(洗脱8倍柱体积)-50％乙醇溶液(洗脱8倍柱体积)-70％乙醇溶液(洗脱8倍柱体积)-95％乙醇溶液(洗脱5倍柱体积)，洗脱流速为1.0L/30min，分别收集各梯度的洗脱液；薄层色谱鉴定：聚丙烯酰胺薄膜点板，90％乙醇展开，三氯化铝乙醇溶液显色，256nm紫外灯下观察，黄酮类化合物主要集中在50％和70％乙醇的部分。合并50％乙醇和70％乙醇的洗脱组分，减压浓缩，真空冷冻干燥，即得总黄酮提取物。

二)、制备总多糖提取物

将上述步骤2)中所述剩余的残渣用10倍质量的蒸馏水提取3次，每次提取1.5h，合并提取液，60℃减压浓缩至总体积的1/10，然后采用Savage法去除蛋白，室温干燥，即得所述总多糖提取物。

将上述得到的总黄酮提取物与总多糖提取物以质量比73∶374的比例配伍组成总黄酮提取物与总多糖提取物的组合物。

实施例2、复方总黄酮提取物和总多糖提取物的组合物对于痴呆大鼠学习记忆能力的影响

1、材料

1.1动物：SD雄性大鼠(SPF等级)，体重285～315g，由中国军事医学科学院科学实验动物中心提供(许可证号SCXK-军-2007-004)。

1.2试剂药物：1)试验药物：实施例1制备的复方总黄酮提取物和总多糖提取物的组合物；2)阳性对照药选用石杉碱甲片，河南太龙药业产品，批号：H10940156；3)Aβ_25-35购自Sigma公司，无菌生理盐水溶解配制成5μg/ml，37℃老化7天，-20℃保存备用。

1.3实验仪器：SN-3N脑立体定位仪(日本Narishige)，DMS-2Morris水迷宫系统(中国医学科学院药物研究所)。

2、方法

2.1构建AD模型大鼠

大鼠适应性喂养3d后，用2％戊巴比妥钠腹腔麻醉(40～50mg/kg体重)，固定于脑立体定位仪上，头顶部被皮，碘酊消毒后切开皮肤，参照包新民的《大鼠脑立体定位图》，选择右侧侧脑室为注射靶区，于前囟向后1.0mm、中线旁开1.7mm处，用三棱针钻开颅骨，暴露硬脑膜，再用5μl微量注射器自脑表面垂直进针4.0mm，将10mMAβ25-35溶液5μl缓慢注入(注入时间不少于5min)，留针2min后缓慢撤针，缝合伤口；假手术组钻开颅骨后即缝合伤口。各组动物术后常规腹腔注射苄星青霉素抗感染。待动物清醒后治疗组即开始灌胃给药。

2.2给药方法

分组采用随机数字表法将大鼠分为四个组：空白对照组，模型组，总黄酮与总多糖提取物组合物组，石杉碱甲片为阳性药对照组。每组6只。用药量为成人临床剂量的20倍：总黄酮与总多糖提取物组合物200mg·Kg-1·d-1，石杉碱甲片20mg·Kg-1·d-1。诸药均以蒸馏水配成溶液给大鼠灌胃，每日1次，每次2ml，空白对照和模型组则以等体积蒸馏水灌胃，连续15d后进行水迷宫实验。

2.3行为学实验方法

水迷宫由圆形水池、黑色平台和记录系统3部分组成。水池直径(120×50×30)cm；水池用墨水染成黑色，水温保持在22℃-26℃；水池放在1间小屋的中央。池壁上随意挂两个物体作为近距离视觉暗示，室内的门、窗、柜组、摄像头等构成远距离视觉暗示。平台没于水下2cm，上面有几个小孔以提供一个大鼠容易站稳的表面。水迷宫测试包括连续5d的定位航行试验(place navigation)和一次空间探索试验(spatial probetest)。

定位航行试验：

试验前1d将大鼠放入水池中(不放入平台)自由游泳2min，使其熟悉迷宫内的环境。试验历时5d，每天分上、下午两个时间段，每个时间段测试4次，每天共8次。测试开始时，将平台放在近端的象限中点，平台隐藏于水面下1cm，沿水池的4个象限中部的池壁将大鼠面向池壁轻巧地放入水池，自动摄像系统记录大鼠寻找平台的时间(逃避潜伏期)和游泳途径(过程)，电脑自动记录上述数据；设定120s为最长逃避潜伏期，120s后自动停止记录。如果大鼠在120s内找到平台，记录其实际逃避潜伏期；如果在120s未找到平台，由实验者将其引上平台并停留10s，逃避潜伏期记为120s。

空间探索试验：

第6d撤除平台，让大鼠自原平台对侧象限盆壁的中点入水自由游泳120s，记录其游泳轨迹，软件分析计算动物在各象限所用时间和各象限轨迹长度。计算动物在原平台所在象限游泳时间占逃避潜伏期的百分比，在原平台象限的轨迹长度占搜索距离的百分比。

2.4统计方法

统计学处理：数据以均数±标准差

表示，采用SPSS10.0统计分析软件。定位航行实验采用多元方差分析(M-ANOVA)，空间探索实验采用单因素方差分析(OneWay ANOVA)，组间两两比较采用LDS法。

3、结果

3.1总黄酮提取物和总多糖提取物的组合物对AD模型大鼠定位航行试验逃避潜伏期的影响

表1、各组对AD大鼠定位航行实验中逃避潜伏期和搜索距离的影响

注：与模型组比较¹⁾P＜0.05

表2、各组对AD大鼠空间探索实验中在原平台所在象限搜索时间及距离的百分比的影响

注：与模型组比较²⁾P＜0.01；与空白对照组比较³⁾P＜0.01

结果表明：经过大鼠定位航行及空间探索实验，总黄酮和总多糖组合物组可以提高AD模型大鼠的空间学习记忆能力--缩短其逃避潜伏期和搜索距离且显著增加空间探索实验中原平台所在象限搜索时间占总时间的百分比以及搜索距离占距离的百分比。

实施例3、复方总黄酮提取物和总多糖提取物组合物对于痴呆大鼠在体长时程增强的影响

1、材料

1.1动物：同实施例3。

1.2试剂药物：同实施例3。

1.3实验仪器：SN-3N脑立体定位仪(日本Narishige)，VC-11记忆示波器(日本Nihon Konden)，SEN-7203三道电子刺激器(日本Nihon Konden)，SS-202J刺激隔离器(日本Nihon Konden)。

2、方法

2.1构建AD模型大鼠同实施例4。

2.2给药方法同实施例4。

2.3电生理学实验方法

(1)电极的埋植  以20％乌拉坦(urethane，1.2g/kg，ip.)麻醉动物，并固定于立体定位仪上，电极定位参照pellegrino大鼠脑图谱，双极刺激电极埋植于内嗅区前穿通纤维(perforant path，PP)，其定位坐标为AP-7.5mm，L4.2mm，H3.0mm；记录电极坐标为AP-3.8mm，L2.5mm，H3.5mm，位于同侧海马齿状回的颗粒细胞层。在上述坐标部位钻一直径为1.5mm的小孔，分别埋植记录电极及刺激电极，调整刺激电极和记录电极的位置，找到以固定强度的刺激记录到最大的群峰电位(populationspike，PS)时将电极固定。

(2)诱发电位的记录和观测  采用细胞外记录方法。测试刺激(频率为1/30Hz，波宽为0.1ms的方波)由电子刺激器产生后，经刺激隔离器和刺激电极输向PP，诱发的动作电位经生物放大器在记忆示波器上显示，并同时输入计算机进行分析、记录PS幅值，作为DG颗粒细胞群兴奋性的指标。调整刺激强度，采用引起最大PS幅值所需刺激强度的1/2作为测试刺激强度，整个实验过程中测试刺激强度参数恒定不变。

(3)HFS参数  海马齿状回的颗粒细胞层LTP是由10串200Hz的HFS所诱导，每串刺激由5个波宽0.1ms的方波刺激组成，刺激间隔为200ms，刺激强度与测试刺激相同。

(4)数据的采集  每个测试刺激都诱发出一个PS，将连续10个PS幅值叠加后的平均值作为一个时间点的PS幅值，以给药前30min所测得6个时间点的PS幅值的平均值作为自身基础突触传递水平，每个时间点的突触传递水平以与基础突触传递水平比较得出的相对值(％)表示。

2.5统计方法

统计学处理：电生理学按下式计算PS增加幅度：PS增加幅度＝(给药后某时间点的PS幅值-给药前的PS幅值)/给药前的PS幅值。t检验用于组间比较。P＜0.05为差异有统计学意义。

3、结果

表3高频刺激后各组PS幅度增强的比较

                                                   

组别                          PS增幅(％)

                                                   

空白对照组                    220.8±3.6^▲▲#

模型组                        173.4±4.5

石杉碱甲组                    210.3±4.7^▲▲#*

总黄酮和总多糖组合物组        190.2±6.9^▲**

                                                   

注：与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；与组合物组比较，#P＜0.01；与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

如表3所示，各组动物在高频刺激后PS的幅度都较刺激前增加，表明各组动物海马齿状回都有LTP的形成。模型组PS虽然有一定的增强，但明显低于假手术组(P＜0.01)；组合物组与模型组比较，幅度也有增加(P＜0.05)。

Claims (10)

1.一种预防和/或治疗老年痴呆症的复方中药提取物组合物，由从下述中药组合物中提取得到的总黄酮提取物和总多糖提取物组成，所述总黄酮提取物和总多糖提取物的质量比为50-80∶200-400；所述中药组合物由下述质量份的原料组成：淫羊藿3000-12000、炒菟丝子3000-12000、枸杞子3000-12000、覆盆子1500-6000、蒸五味子375-1500和盐炒车前子750-3000。

2.根据权利要求1所述的复方中药提取物组合物，其特征在于：所述复方中药提取物组合物中所述总黄酮提取物和总多糖提取物的质量比为70-75∶370-380；优选为73∶374。

3.根据权利要求1或2所述的复方中药提取物组合物，其特征在于：所述中药组合物由下述质量份的原料组成：淫羊藿5600-6400、炒菟丝子5600-6400、枸杞子5600-6400、覆盆子2800-3200、蒸五味子700-800和盐炒车前子1300-1700；所述中药组合物优选由下述原料组成：淫羊藿6000、炒菟丝子6000、枸杞子6000、覆盆子3000、蒸五味子750和盐炒车前子1500。

4.根据权利要求1-3中任一所述的复方中药提取物组合物，其特征在于：所述总黄酮提取物按照包括下述步骤的方法提取得到：

1)取权利要求1-3中所述中药组合物，用质量浓度为86-96％的乙醇水溶液进行提取，收集醇提取液及残渣；将所述醇提取液用石油醚进行萃取，萃取完毕后弃醚相，收集醇相，将所述醇相在50-60℃减压蒸馏至原体积的1/10，得总黄酮的粗提液；所述残渣用于总多糖的提取；

2)将所述总黄酮的粗提液上AB-8大孔树脂柱进行分离，用质量浓度为10％-95％乙醇溶液作为洗脱液按照浓度递增的顺序进行梯度洗脱，每个浓度梯度洗脱液的用量为8-10倍柱体积，收集质量浓度为50％-70％乙醇溶液的洗脱组分，将所述洗脱组分浓缩干燥，得所述总黄酮提取物。

5.根据权利要求4所述的复方中药提取物组合物，其特征在于：步骤1)中所述提取至少进行一次，每次提取时，乙醇水溶液的加入量为所述中药组合物质量的6-10倍；所述提取的温度为80-85℃；所述提取的时间为1-1.5小时；步骤1)中所述提取优选按照下述方法进行：所述提取进行三次，三次加入乙醇水溶液的量依次为所述中药组合物质量的10倍、8倍、6倍，三次提取的时间均为1.5小时。

6.根据权利要求4或5所述的复方中药提取物组合物，其特征在于：步骤2)中将所述总黄酮的粗提液上AB-8大孔树脂柱进行分离，用质量浓度为10％-70％乙醇溶液作为洗脱液按照下述顺序进行梯度洗脱：10％乙醇溶液-30％乙醇溶液-50％乙醇溶液-70％乙醇溶液，四个梯度洗脱液的用量依次为10倍柱体积、8倍柱体积、8倍柱体积、8倍柱体积，收集质量浓度为50％和70％乙醇溶液的洗脱组分，将所述洗脱组分浓缩干燥，得所述总黄酮。

7.根据权利要求1-3中任一所述的复方中药提取物组合物，其特征在于：所述总多糖提取物按照包括下述步骤的方法提取得到：将权利要求4步骤1)中所述残渣用水进行提取，收集提取液，将所述提取液在50-60℃减压浓缩至原体积的1/10，然后采用Savage法去除蛋白，室温干燥，得所述总方多糖提取物。

8.根据权利要求7所述的复方中药提取物组合物，其特征在于：所述提取至少进行一次，优选进行3次；每次提取时，加水量为所述残渣质量的8-10倍，优选为10倍；所述提取的时间为1-1.5小时，优选为1.5小时。

9.权利要求1-8中任一所述的复方中药提取物组合物在制备下述药物中的应用：1)预防和/或治疗老年痴呆症药物，所述老年痴呆症优选为阿尔茨海默痴呆症；2)改善认知功能障碍药物；3)提高阿尔茨海默痴呆症模型大鼠空间学习记忆能力药物，提高所述空间记忆学习能力表现为：在定位航行试验中缩短其逃避潜伏期和搜索距离，且增加空间探索实验中原平台所在象限搜索时间占总时间的百分比，以及搜索距离占总距离的百分比。

10.一种药物，其活性成分为权利要求1-8中所述的复方中药提取物组合物；所述药物为：1)预防和/或治疗老年痴呆症药物，或2)改善认知功能障碍药物；所述预防和/或治疗老年痴呆症药物优选为预防和/或治疗阿尔茨海默痴呆症的药物；3)提高阿尔茨海默痴呆症模型大鼠空间学习记忆能力药物，提高所述空间记忆学习能力表现为：在定位航行试验中缩短其逃避潜伏期和搜索距离，且增加空间探索实验中原平台所在象限搜索时间占总时间的百分比，以及搜索距离占总距离的百分比。