CN101797307A - 一种含苯乙醇苷的枇杷叶紫珠提取物及其制备方法 - Google Patents
一种含苯乙醇苷的枇杷叶紫珠提取物及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101797307A CN101797307A CN201010146367A CN201010146367A CN101797307A CN 101797307 A CN101797307 A CN 101797307A CN 201010146367 A CN201010146367 A CN 201010146367A CN 201010146367 A CN201010146367 A CN 201010146367A CN 101797307 A CN101797307 A CN 101797307A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- extract
- polar solvent
- group
- ethanol
- present
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- -1 Phenethyl alcohol glycoside Chemical class 0.000 title claims abstract description 44
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 title claims abstract description 44
- 241000441860 Callicarpa kochiana Species 0.000 title claims abstract description 21
- WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 2-Phenylethanol Natural products OCCC1=CC=CC=C1 WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 28
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 26
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 126
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 109
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 41
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims abstract description 15
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 claims description 36
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 claims description 26
- 150000008131 glucosides Chemical class 0.000 claims description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 20
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 18
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 14
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 14
- WKQLGHCWJNLUKK-UHFFFAOYSA-N Cistanoside C Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1CCOC1C(O)C(OC2C(C(O)C(O)C(C)O2)O)C(OC(=O)C=CC=2C=C(O)C(O)=CC=2)C(CO)O1 WKQLGHCWJNLUKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- PXAALZXMCCZTKN-UHFFFAOYSA-N Syringalide A Natural products OC1C(O)C(OC(=O)C=CC=2C=C(O)C(O)=CC=2)C(CO)OC1OCCC1=CC=C(O)C=C1 PXAALZXMCCZTKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- PXAALZXMCCZTKN-WDIXTDMMSA-N [(2r,3s,4r,5r,6r)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[2-(4-hydroxyphenyl)ethoxy]oxan-3-yl] (e)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)prop-2-enoate Chemical compound O([C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O)[C@H]1O)OC(=O)\C=C\C=1C=C(O)C(O)=CC=1)CO)CCC1=CC=C(O)C=C1 PXAALZXMCCZTKN-WDIXTDMMSA-N 0.000 claims description 10
- YDDMELPLARDERH-UHFFFAOYSA-N cistanoside Natural products CC1OC(OC2C(O)C(OCCc3ccc(O)c(OC(=O)C)c3)OC(COC4OC(CO)C(O)C(O)C4O)C2OC(=O)C=Cc5ccc(O)c(O)c5)C(O)C(O)C1O YDDMELPLARDERH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- ZMYQRHSOVRDQDL-NSWBACJASA-N leucosceptoside A Natural products COc1cc(C=CC(=O)O[C@@H]2[C@@H](CO)O[C@@H](OCCc3ccc(O)c(O)c3)[C@H](O)[C@H]2O[C@@H]4O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]4O)ccc1O ZMYQRHSOVRDQDL-NSWBACJASA-N 0.000 claims description 10
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 9
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 9
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 claims description 9
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 9
- SSINDPAYUSUNDH-DAESBZSGSA-N [(2r,3r,4s,5r,6r)-5-[(2s,3s,4r)-3,4-dihydroxy-4-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-6-[2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethoxy]-3-hydroxy-4-[(2s,3r,4r,5r,6s)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]methyl (e)-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)prop-2-enoate Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(\C=C\C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](O[C@H]3[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O3)O)[C@@H](O[C@H]3[C@H]([C@@](O)(CO)CO3)O)[C@H](OCCC=3C=C(O)C(O)=CC=3)O2)O)=C1 SSINDPAYUSUNDH-DAESBZSGSA-N 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 7
- 230000008030 elimination Effects 0.000 claims description 4
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 claims description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 4
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 4
- 239000012467 final product Substances 0.000 claims 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 claims 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 abstract description 27
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 23
- 229920005989 resin Polymers 0.000 abstract description 17
- 239000011347 resin Substances 0.000 abstract description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 15
- 201000004810 Vascular dementia Diseases 0.000 abstract description 12
- 206010039966 Senile dementia Diseases 0.000 abstract description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 6
- 206010027175 memory impairment Diseases 0.000 abstract description 6
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 abstract description 2
- 241001092070 Eriobotrya Species 0.000 abstract 1
- 235000009008 Eriobotrya japonica Nutrition 0.000 abstract 1
- DTOUWTJYUCZJQD-UJERWXFOSA-N Forsythiaside Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](OC(=O)\C=C\C=2C=C(O)C(O)=CC=2)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](OCCC=2C=C(O)C(O)=CC=2)O1 DTOUWTJYUCZJQD-UJERWXFOSA-N 0.000 abstract 1
- DTOUWTJYUCZJQD-QJDQKFITSA-N Forsythiaside Natural products C[C@@H]1O[C@H](OC[C@H]2O[C@@H](OCCc3ccc(O)c(O)c3)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]2OC(=O)C=Cc4ccc(O)c(O)c4)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O DTOUWTJYUCZJQD-QJDQKFITSA-N 0.000 abstract 1
- 241001073567 Verbenaceae Species 0.000 abstract 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 abstract 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 40
- GMZVRMREEHBGGF-UHFFFAOYSA-N Piracetam Chemical compound NC(=O)CN1CCCC1=O GMZVRMREEHBGGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- 229960004526 piracetam Drugs 0.000 description 27
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 26
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 21
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 20
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 16
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 229930000680 A04AD01 - Scopolamine Natural products 0.000 description 12
- STECJAGHUSJQJN-GAUPFVANSA-N Hyoscine Natural products C1([C@H](CO)C(=O)OC2C[C@@H]3N([C@H](C2)[C@@H]2[C@H]3O2)C)=CC=CC=C1 STECJAGHUSJQJN-GAUPFVANSA-N 0.000 description 12
- STECJAGHUSJQJN-UHFFFAOYSA-N N-Methyl-scopolamin Natural products C1C(C2C3O2)N(C)C3CC1OC(=O)C(CO)C1=CC=CC=C1 STECJAGHUSJQJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000009189 diving Effects 0.000 description 12
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 12
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 12
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 12
- STECJAGHUSJQJN-FWXGHANASA-N scopolamine Chemical compound C1([C@@H](CO)C(=O)O[C@H]2C[C@@H]3N([C@H](C2)[C@@H]2[C@H]3O2)C)=CC=CC=C1 STECJAGHUSJQJN-FWXGHANASA-N 0.000 description 12
- 229960002646 scopolamine Drugs 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 102000010909 Monoamine Oxidase Human genes 0.000 description 10
- 108010062431 Monoamine oxidase Proteins 0.000 description 10
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 10
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 9
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 9
- UMADJYFWGWTKSA-UHFFFAOYSA-N lamiophlomioside A Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(CCOC2C(C(OC3C(C(O)C(O)C(C)O3)O)C(OC(=O)C=CC=3C=C(OC)C(O)=CC=3)C(COC3C(C(O)(CO)CO3)O)O2)O)=C1 UMADJYFWGWTKSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108010022752 Acetylcholinesterase Proteins 0.000 description 8
- 102100033639 Acetylcholinesterase Human genes 0.000 description 8
- TXKTYFANELXKLG-WOKZDXPSSA-N [(2r,3r,4s,5r,6r)-5-[(2s,3s,4r)-3,4-dihydroxy-4-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-6-[2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethoxy]-3-hydroxy-4-[(2s,3r,4r,5r,6s)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]methyl (e)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)prop-2-enoate Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O[C@H]2[C@H]([C@@](O)(CO)CO2)O)[C@H](OCCC=2C=C(O)C(O)=CC=2)O[C@H](COC(=O)\C=C\C=2C=C(O)C(O)=CC=2)[C@H]1O TXKTYFANELXKLG-WOKZDXPSSA-N 0.000 description 8
- 210000004004 carotid artery internal Anatomy 0.000 description 8
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 8
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 8
- TXKTYFANELXKLG-UHFFFAOYSA-N luteoside B Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(OC2C(C(O)(CO)CO2)O)C(OCCC=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC(COC(=O)C=CC=2C=C(O)C(O)=CC=2)C1O TXKTYFANELXKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 7
- 229940022698 acetylcholinesterase Drugs 0.000 description 7
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- 241000521257 Hydrops Species 0.000 description 5
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 5
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 5
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 5
- 230000000274 adsorptive effect Effects 0.000 description 5
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 5
- 210000000269 carotid artery external Anatomy 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 238000012449 Kunming mouse Methods 0.000 description 4
- STECJAGHUSJQJN-USLFZFAMSA-N LSM-4015 Chemical compound C1([C@@H](CO)C(=O)OC2C[C@@H]3N([C@H](C2)[C@@H]2[C@H]3O2)C)=CC=CC=C1 STECJAGHUSJQJN-USLFZFAMSA-N 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 230000006837 decompression Effects 0.000 description 4
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 4
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 4
- 241001073507 Callicarpa Species 0.000 description 3
- 241001136615 Callicarpa dichotoma Species 0.000 description 3
- 206010008089 Cerebral artery occlusion Diseases 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012347 Morris Water Maze Methods 0.000 description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 3
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 3
- 210000001168 carotid artery common Anatomy 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- ADYPXRFPBQGGAH-WVVAGBSPSA-N dihydroergotoxine Chemical compound CS(O)(=O)=O.C([C@H]1C(=O)N2CCC[C@H]2[C@]2(O)O[C@@](C(N21)=O)(C)NC(=O)[C@H]1CN([C@H]2C(C=3C=CC=C4NC=C(C=34)C2)C1)C)C1=CC=CC=C1 ADYPXRFPBQGGAH-WVVAGBSPSA-N 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 3
- 238000003808 methanol extraction Methods 0.000 description 3
- 201000007309 middle cerebral artery infarction Diseases 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 3
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 3
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N Malondialdehyde Chemical compound O=CCC=O WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 229930185474 acteoside Natural products 0.000 description 2
- FBSKJMQYURKNSU-ZLSOWSIRSA-N acteoside Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC(=O)\C=C\C=2C=C(O)C(O)=CC=2)[C@@H](CO)O[C@@H](OCCC=2C=C(O)C(O)=CC=2)[C@@H]1O FBSKJMQYURKNSU-ZLSOWSIRSA-N 0.000 description 2
- FBSKJMQYURKNSU-UKQWSTALSA-N acteoside I Natural products C[C@@H]1O[C@H](O[C@@H]2[C@@H](O)[C@H](OCCc3ccc(O)c(O)c3)O[C@H](CO)[C@H]2OC(=O)C=Cc4ccc(O)c(O)c4)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O FBSKJMQYURKNSU-UKQWSTALSA-N 0.000 description 2
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 2
- 210000002565 arteriole Anatomy 0.000 description 2
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 239000007766 cera flava Substances 0.000 description 2
- RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N chloral hydrate Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002327 chloral hydrate Drugs 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 229940120500 dihydroergotoxine Drugs 0.000 description 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 2
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 2
- 238000004508 fractional distillation Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000007087 memory ability Effects 0.000 description 2
- 230000009225 memory damage Effects 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 238000012549 training Methods 0.000 description 2
- QFRYQWYZSQDFOS-UHFFFAOYSA-N verbascoside Natural products CC1OC(COC2C(O)C(COC3OC(C(O)C(O)C3O)C(=O)O)OC(Oc4cc(O)cc5OC(=CC(=O)c45)c6ccc(O)c(O)c6)C2O)C(O)C(O)C1O QFRYQWYZSQDFOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 1
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 208000012661 Dyskinesia Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000007919 dispersible tablet Substances 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 238000005485 electric heating Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229930189432 forsythoside Natural products 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 206010025482 malaise Diseases 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012567 medical material Substances 0.000 description 1
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 1
- 210000003657 middle cerebral artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000956 olfactory bulb Anatomy 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000002407 reforming Methods 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 235000019615 sensations Nutrition 0.000 description 1
- 238000009958 sewing Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 238000012109 statistical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供了一种含苯乙醇苷的枇杷叶紫珠提取物，该提取物的主要成分为苯乙醇苷类化合物，是用水或50～75％(v/v)的乙醇回流提取马鞭草科紫珠属枇杷叶紫珠(Callicarpakochiana)茎叶所得的提取液用大孔树脂纯化得到，其中含有40～55％(w/w)的连翘酯苷和10～30％(w/w)的毛瑞花糖苷。经动物实验发现，本发明所述的提取物对正常小鼠以及多种记忆损伤模型动物均有增强或改善学习记忆的功能，可用于制备治疗老年性痴呆症的药物，尤其是治疗血管性痴呆症(Vascular Dementia，VD)的药物。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及治疗神经系统疾病的药物，特别是治疗老年性痴呆症的药物。
背景技术
随着世界人口老龄化的不断加剧，与衰老有关的许多疾病如神经退行性疾病正严重影响着人们的健康和生活质量。血管性痴呆(Vascular Dementia，VD)是老年痴呆症的一种类型。国外研究表明，随着年龄的增长，VD的发病率呈上升趋势，在欧洲和美国VD是仅次于阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)的最常见的痴呆，约占所有痴呆的10％～50％。研究表明，血管性痴呆是唯一一类可治疗和预防的痴呆。由于发病机制的多样化，药物治疗疗效有限且差异较大，临床化学药物还存在一定的不良反应。研究显示，天然药物在防治VD方面具有独特的优势，尤其是单味中药或其有效部位、有效成分在用于VD防治时，具有选择性高、针对性强等特点，不仅能够从多途径、多靶点对VD进行干预，而且副作用少。因此开发和研究具有防治VD的天然药物具有广阔的前景。
近年来，韩国学者开始系统研究紫珠属植物的化学成分和药理活性，从紫珠属植物白棠子树(C.dichotoma)分离出包括连翘酯苷(forsythosides B)和毛瑞花糖苷(acteoside)在内的10种苯乙醇苷类化合物，并发现这些成分对胱氨酸诱导的大鼠大脑皮层细胞损伤的保护作用；文中还介绍了所述10种苯乙醇苷类化合物是采用下述分离方法得到：8.5Kg干燥白棠子树的茎叶用70％甲醇提取，得到780g提取物，然后经正己烷、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇分馏，得到正丁醇分馏产物360g；正丁醇分馏产物经Amberlite XAD-2分离(H2O-MeOH洗脱)得到A-1～A-10十个组分；取A-3(20g)经ODS gel column(500g，8×60cm，H2O-MeOH洗脱)和repeated semi-preparative HPLC(Microsorb C1880-299，10×250mm)分离出10个苯乙醇苷类化合物，其中连翘酯苷15mg，毛瑞花糖苷78mg(Koo KA，et al.Planta Med，2005，71(8)：778～780.)。另有文献对其中的毛瑞花糖苷(acteoside)的药理作用做了进一步研究，发现其对东莨菪碱诱导的记忆障碍具有改善作用(Ki Yong Lee，Biol.Pharm.Bull，2006，29(1)：71～74.)。尽管上述文献报道了从紫珠属植物中提取出可能具有治疗老年痴呆潜力的苯乙醇苷类化合物，但从Koo KA的报道中可以看出，其提取方法的苯乙醇苷类化合物得率极低，360g的正丁醇分馏物(植物用量为8.5kg)中只提取到连翘酯苷15mg、毛瑞花糖苷78mg，其他几类化合物也均是毫克级别的产量，难以产业化。因此，Koo KA所公开方法的分离纯化方法必须进行改进，否则尽管用70％甲醇提取可能将药材中所含苯乙醇苷类化合物基本溶出，但其浓度无法达到临床上可接受的要求。此外，Koo KA所公开的方法还存在有机溶剂毒副作用大和用量大等不足。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种枇杷叶紫珠提取物。
本发明解决上述问题的技术方案是：
一种含苯乙醇苷的枇杷叶紫珠提取物，该提取物中含有40～55％(w/w)的连翘酯苷和10～30％(w/w)的毛瑞花糖苷；所述的提取物是由以下方法制备得到的：
(1)取枇杷叶紫珠的茎叶粗粉，用第一极性溶剂提取2～3次，每次加10～30倍体积第一极性溶剂，在常压下加热回流提取1.0～1.5小时，滤出提取液；合并提取液，减压浓缩至比重1.10～1.20(50℃)，加乙醇至含醇量达60％(v/v)，冷藏12小时，滤去不容物后减压浓缩至无醇味，然后在5～20℃下，1000～3000rpm高速离心，分离出上清液；
(2)取上清液，以0.5～2BV/h的流速加到装有疏水大孔隙聚合物的柱中，待吸附饱和后，先用5～10BV第二极性溶剂以0.5～2BV/h的流速洗脱，再用第三极性溶剂进行洗脱，收集第三极性溶剂的洗脱液，浓缩，干燥即得；
上述步骤中，所述第一极性溶剂是水或50～75％(v/v)乙醇；第二极性溶剂为水；第三极性溶剂的极性比第二极性溶剂低，可以是20～30％(v/v)甲醇或30～40％(v/v)乙醇。
本发明所述提取物还含有cistanoside C、异毛瑞花糖苷、cistanoside、lamiophlomioside A、luteoside B、luteoside C和syringalide A 3’-α-L-Rhanmnopyranoside，其总含量不超过所述提取物总质量的5％。
为了更方便理解本发明提取物中的成分，所述提取物中的主要成分苯乙醇苷类化合物可用通式(1)表示：
其中R1、R2、R3、R4的结构分别如表1所示：
表1
表1中，Caf表示
Fer表示
Api表示
本发明所述提取物可由以下方法制备得到：
(1)取枇杷叶紫珠的茎叶粗粉，用第一极性溶剂提取2～3次，每次加10～30倍体积第一极性溶剂，在常压下加热回流提取1.0～1.5小时，滤出提取液；合并提取液，减压浓缩至比重1.10～1.20(50℃)，加乙醇至含醇量达60％(v/v)，冷藏12小时，滤去不容物后减压浓缩至无醇味，然后在5～20℃下，1000～3000rpm高速离心，分离出上清液；
(2)取上清液，以0.5～2BV/h的流速加到装有疏水大孔隙聚合物的柱中，待吸附饱和后，先用5～10BV第二极性溶剂以0.5～2BV/h的流速洗脱，再用第三极性溶剂进行洗脱，收集第三极性溶剂的洗脱液，浓缩，干燥即得。该第三极性溶剂与第二极性溶剂相比，极性较低；
上述步骤中，所述第一极性溶剂是水或50～75％(v/v)乙醇；第二极性溶剂为水；第三极性溶剂的极性比第二极性溶剂低，可以是20～30％(v/v)甲醇或30～40％(v/v)乙醇。
本发明方法中，
步骤(1)的最佳提取条件为：用水提取2次，每次加30倍水，分别提取1.5小时和1小时；
BV表示倍柱体积，BV/h表示倍柱体积每小时。
本发明人抛开了现有技术中提取紫珠植物中苯乙醇苷类化合物的方法(即甲醇提取+正丁醇分馏)，采用3种极性较强的溶剂按一定顺序提取结合大孔树脂纯化的方式，从枇杷叶紫珠获得苯乙醇苷类化合物含量极高(总含量可达50～85％)的提取物，该提取物不必经进一步的分离纯化为纯物质即具有显著的治疗老年性痴呆症的疗效。此外，本发明方法简便，提取率高，提取溶剂无毒害，有利于工业化生产。
经动物实验证实，本发明所述的提取物对正常小鼠以及多种记忆损伤模型动物均有增强或改善学习记忆的功能，可用于制备治疗老年性痴呆症的药物，尤其是治疗血管性痴呆症(Vascular Dementia，VD)的药物。所述药物可以是肠溶胶囊、软胶囊、滴丸、分散片、颗粒剂等。
以下通过具体实验来进一步说明本发明的有益效果：
1、本发明提取物对正常小鼠学习记忆功能的影响
(1)昆明种小鼠，按一下分组进行跳台试验和避暗试验：
空白对照组：不给予任何药物。
阳性对照组：以吡拉西坦片(Piracetam)为阳性对照药，灌胃给药，每天一次，连续灌服7天。
本发明提取物高剂量组：按200mg·kg·d-1本发明提取物灌胃给药，连续灌服7天。
本发明提取物低剂量组：按100mg·kg·d-1本发明提取物灌胃给药，连续灌服7天。
(2)实验方法
跳台实验方法：末次给药后次日开始训练。将动物放入反应箱适应环境3min，然后立即通以36V连续电流刺激5min，小鼠受到电击后正常逃避反应是跳上橡皮台。小鼠双足同时接触铜栅为触电，视为错误反应。多数动物可能再次或多次跳到铜栅上，受到电击又迅速跳回到橡皮台上。如此训练5min，并记录每鼠5min内受到电击的次数，以此评价学习成绩。24h后重复测验，将小鼠放在跳台上并开始计时，记录动物第一次跳下平台的潜伏期(若超过3min则按3min计算)，同时记录3min内的错误反应次数，以此评价记忆保持成绩。
避暗实验方法：实验开始时将小鼠头部背向洞口放入明室，同时开始计时，动物穿过洞口进入暗室受到电击，立即停止计时，取出小鼠，记录每只小鼠从放入明室至进入暗室受到电击所需的时间，此即为潜伏期，以此评价学习成绩。24h后重做测试，记录潜伏期和5min内的电击次数，以此评价记忆保持成绩。
(3)实验结果：各给药组与对照组对正常小鼠学习记忆的影响结果参见图1～4。
由图1和图2可知，与空白对照组相比，本发明提取物的高剂量组(200mg·kg·d-1，HPC)、低剂量组(100mg·kg·d-1，LPC)均能明显减少小鼠学习记忆的错误数(P＜0.05或P＜0.01)，延长潜伏期(P＜0.05或P＜0.01)，学习记忆保持能力都有显著的提高，吡拉西坦500mg/kg剂量组对正常小鼠跳台错误数有显著的减少作用(P＜0.05)。实验结果表明，本发明提取物的高、低剂量组在跳台实验中均能明显提高正常小鼠的学习记忆能力。由图3和图4可知，与空白对照组相比，只有本发明提取物的高剂量组具有明显减少正常小鼠进入暗箱的次数(P＜0.05)和延长小鼠进入暗箱的潜伏期(P＜0.05)的作用，其他组别对正常小鼠的学习记忆成绩无显著性影响。
2、本发明提取物对30％乙醇诱导的小鼠记忆再现缺失的保护作用
(1)昆明种小鼠，除空白对照组外，其余各组用30％乙醇诱导的小鼠记忆再现缺失，然后分为以下4个实验组：
模型对照组：不给予任何药物。
阳性对照组：以吡拉西坦片(Piracetam)为阳性对照药，灌胃给药，每天一次，连续灌服7天。
本发明提取物高剂量组：按200mg·kg·d-1本发明提取物灌胃给药，连续灌服7天。
本发明提取物低剂量组：按100mg·kg·d-1本发明提取物灌胃给药，连续灌服7天。
(2)实验方法：与实验1相同。
(3)实验结果：各给药组与对照组对30％乙醇诱导的小鼠记忆再现缺失的保护作用结果参见图5～8。
由图5和图6可知，模型组与空白对照组相比，逃避潜伏期显著缩短，记忆保持能力显著降低，表明造成了记忆再现障碍，30％乙醇所致的小鼠记忆损伤模型复制成功。给药后，对本发明提取物的高剂量组(200mg·kg·d-1，HPC)、低剂量组(100mg·kg·d-1，LPC)与模型组进行观察比较，结果显示本发明提取物的高、低剂量组均能显著性减少小鼠学习记忆的错误次数(P＜0.01)和延长潜伏期(P＜0.01)，提高学习记忆保持能力。吡拉西坦组对小鼠跳台错误数有显著的减少作用(P＜0.01)，同时延长小鼠进入暗箱潜伏期(P＜0.01)。实验结果显示，本发明提取物能显著地拮抗由30％乙醇造成的小鼠记忆再现障碍。由图7和图8可知，模型组与空白对照组相比，错误次数明显增多，逃避潜伏期显著缩短，记忆保持能力显著降低，造成了记忆再现障碍，表明乙醇所致的小鼠记忆损伤模型复制成功。给药后，对本发明提取物的高、低剂量组与模型组进行观察比较，结果显示本发明提取物的高、低剂量组均能显著性减少小鼠学习记忆的错误次数(P＜0.01)和延长潜伏期(P＜0.01)，提高学习记忆保持能力。吡拉西坦组对小鼠跳台错误数有显著的减少作用(P＜0.01)，同时延长小鼠进入暗箱潜伏期(P＜0.01)。实验结果显示，本发明提取物能显著地拮抗由30％乙醇造成的小鼠记忆再现障碍，较高剂量组的作用效果较为显著，且优于阳性对照药。
3、本发明提取物对NaNO2致小鼠记忆巩固障碍的影响
(1)昆明种小鼠，除空白对照组外，其余各组用NaNO2诱导的小鼠记忆巩固障碍，然后分为以下4个实验组：
模型对照组：不给予任何药物。
阳性对照组：以吡拉西坦片(Piracetam)为阳性对照药，灌胃给药，每天一次，连续灌服7天。
本发明提取物高剂量组：按200mg·kg·d-1本发明提取物灌胃给药，连续灌服7天。
本发明提取物低剂量组：按100mg·kg·d-1本发明提取物灌胃给药，连续灌服7天。
(2)实验方法：与实验1相同。
(3)实验结果：各给药组与对照组对NaNO2诱导的小鼠记忆巩固障碍的影响结果参见图9～12。
由图9和图10可知，模型组与空白对照组相比，错误次数明显增多，潜伏期显著缩短，造成了记忆巩固障碍，表明NaNO2所致的小鼠记忆巩固障碍模型复制成功。给药后，对本发明提取物的高剂量组(200mg·kg·d-1，HPC)、低剂量组(100mg·kg·d-1，LPC)与模型组进行观察比较，结果显示本发明提取物的高、低剂量组均能显著性减少小鼠学习记忆的错误次数(P＜0.01或P＜0.05)，延长潜伏期(P＜0.01)，学习记忆巩固能力有显著的提高。吡拉西坦500mg/kg剂量组对小鼠跳台错误数有显著的减少作用(P＜0.05)，同时延长小鼠进入暗箱潜伏期(P＜0.01)。
由图11和图12可知，模型组与空白对照组相比，错误次数明显增多，潜伏期显著缩短，造成了记忆巩固障碍，表明NaNO2所致的小鼠记忆巩固障碍模型复制成功。给药后，对本发明提取物的高、低剂量组与模型组进行观察比较，结果显示本发明提取物的高、低剂量组均能显著性减少小鼠学习记忆的错误次数(P＜0.01)，延长潜伏期(P＜0.01或P＜0.05)，学习记忆能力有显著的提高，且高剂组作用强度超过吡拉西坦组(P＜0.05)。实验结果显示，本发明提取物的高、低剂量组均能明显地对抗由NaNO2诱导的小鼠记忆巩固障碍，且高剂量组作用比低剂量组效果更明显。
4、本发明提取物对东莨菪碱诱导的小鼠记忆获得障碍的影响
(1)昆明种小鼠，除空白对照组外，其余各组用东莨菪碱诱导的小鼠记忆获得障碍，然后分为以下4个实验组：
模型对照组：不给予任何药物。
阳性对照组：以吡拉西坦片(Piracetam)为阳性对照药，灌胃给药，每天一次，连续灌服7天。
本发明提取物高剂量组：按200mg·kg·d-1本发明提取物灌胃给药，连续灌服7天。
本发明提取物低剂量组：按100mg·kg·d-1本发明提取物灌胃给药，连续灌服7天。
(2)实验方法：与实验1相同。
(3)实验结果：各给药组与对照组对东莨菪碱诱导的小鼠记忆获得障碍的影响结果参见图13～16。
由图13和图14可知，模型组与空白对照组相比，错误次数明显增多，潜伏期显著缩短，造成了记忆获得性障碍，表明东莨菪碱所致的小鼠记忆障碍模型复制成功。给药后，对本发明提取物的高剂量组(200mg·kg·d-1，HPC)、低剂量组(100mg·kg·d-1，LPC)与模型组进行观察比较，结果显示本发明提取物的高、低剂量组均能显著性减少小鼠学习记忆的错误次数(P＜0.01)，延长潜伏期(P＜0.01)，学习记忆能力有显著的提高。吡拉西坦500mg/kg剂量组对小鼠跳台错误数有显著的减少作用(P＜0.05)，同时延长小鼠进入暗箱潜伏期。实验结果显示，本发明提取物的高、低剂量组均能明显地对抗由东莨菪碱诱导的小鼠记忆获得性障碍。
由图15和图16可知，模型组与空白对照组相比，错误次数明显增多，潜伏期显著缩短，造成了记忆获得性障碍，表明东莨菪碱所致的小鼠记忆获得障碍模型复制成功。给药后，对本发明提取物的高、低剂量组与模型组进行观察比较，结果显示本发明提取物的高、低剂量组均能显著性减少小鼠学习记忆的错误次数(P＜0.01或P＜0.05)，延长潜伏期(P＜0.01或P＜0.05)，学习记忆能力有显著的提高，且高剂组作用强度超过吡拉西坦组(P＜0.05)。实验结果显示，本发明提取物的高、低剂量组均能明显地对抗由东莨菪碱诱导的小鼠记忆获得性障碍，并呈现一定的量效关系。
5、本发明提取物对大脑中动脉梗死(middle cerebral artery occlusion，MCAO)模型大鼠学习记忆行为能力及脑和血清中生化指标活性的影响
本实验采用大脑中动脉梗死(middle cerebral artery occlusion，MCAO)法制作VD大鼠模型，观察本发明提取物对模型大鼠学习记忆行为能力及脑和血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、单胺氧化酶(MAO-B)活性和乙酰胆碱酯酶活性的影响。
5.1实验材料
实验材料：手术剪(直、弯)、微动脉夹、显微手术镊、尼龙线、手术缝线、缝合针、孔巾、手术固定板、Morris水迷宫及玻璃平台、电动离心机、玻璃匀浆器、电热恒温水浴箱、托盘式扭力天平。水合氯醛(广东省医学实验动物中心制备)，SOD、MDA、MAO-B、AChE测定试剂盒，均为南京建成生物工程研究所产品。本发明提取物的冻干品，实验时用双蒸水配成浓度为0.05g/mL的混悬液，喜德镇(天津华津制药厂与北京诺华制药有限公司合作生产，批号：080917)，用前用双蒸水经超声细胞粉碎机制成浓度为0.625mg/mL的混悬液，药物配制后置4℃冰箱保存备用，用前摇匀。
5.2动物及分组
SD健康大白鼠60只，雌雄各半，体重200g～220g(广东省医学实验动物中心供给，合格证号：No.0010256)，实验条件下自然饮食，适应环境一周后进行实验。分为6组，即含苯乙醇苷的制剂高、低剂量组，喜德镇组，模型组，假手术组和正常组各10只。
5.3模型制备及动物处理
采用改良线栓法制成大脑中动脉梗死模型：大鼠10％水合氯醛腹腔注射(0.35mL/100g)麻醉后，将其仰卧固定，以络合碘消毒颈部皮肤，行颈部右侧切口，于胸骨舌骨肌与胸骨甲状肌间分离出右颈总动脉(CCA)、颈内动脉(ICA)及颈外动脉(ECA)，并挂线备用，结扎ECA与CCA，用微动脉夹夹闭ICA远心端后，迅速于ECA与ICA分叉处作一切口，从切口处插入一端加热成光滑球形尼龙线(直径为0.25mm，距球端2cm处作标记)。线插入ICA后，于入口处稍稍结扎尼龙线与入口处ICA段，然后松开夹闭ICA的动脉夹，继续插入尼龙线至稍有阻力后略回撤，至线插入深度为18mm～20mm，实现大脑中动脉阻塞导致脑缺血。再次结扎入口处，尼龙线外留约3cm，缝合皮肤。2h后轻轻提拉所留线头至有阻力，实现大脑中动脉再灌，则造模完成。正常组大鼠不作任何手术处理。假手术组只结扎ECA与ICA。取造模成功的大鼠随机分为模型组、含苯乙醇苷的制剂组和西药组均10只。含苯乙醇苷的制剂高、低剂量组分别给予灌胃(200、100mg·kg·d-1)，西药组给予喜德镇灌胃(0.625mg·kg·d-1)，模型组、假手术组和正常组均给予蒸馏水1mL/100g灌胃。术后第1天即用药，每日灌胃1次，连续给药21d后，进行行为学测试，然后取脑测定相应指标。
5.4相关指标检测
用Morris水迷宫训练，该训练包括隐匿平台搜索实验和探索实验。动物熟悉平台两次后，每只动物每天上下午各训练1次，连续训练5d，分别得到潜伏期数据和探索实验数据，该数据反映动物的学习与记忆能力。为排除感觉或运动功能障碍对空间学习记忆的影响，最后进行可见平台实验。行为学测试后，将动物断头，冰盘上快速取脑，弃去嗅球和小脑，称量海马组织100mg左右，用预冷的生理盐水制成1％匀浆，3000r/min离心10min，取上清液，4℃保存备测，严格按试剂盒说明书测定SOD活力、MDA含量、MAO-B(机体衰老正相关酶)活性和AchE(乙酰胆碱酯酶)活性。
5.5统计学处理
所有数据用均数±标准差
表示，实验结果采用SPSS 11.5统计软件进行处理，组间差异的显著性用方差分析法检验，组间两两比较用t检验。
5.6实验结果
5.6.1行为学检测结果
结果如表2所示。表2的结果显示，在Morris水迷宫隐匿平台搜索实验中，与正常组相比，含苯乙醇苷的制剂高、低剂量组、阳性对照组和模型组的逃避潜伏期明显延长(P＜0.05)，而以模型组的逃避潜伏期最长(P＜0.05)，假手术组与正常组相比较无统计学意义(P＞0.05)；探索实验结果中，正常组和假手术组动物的平均穿越次数最多，含苯乙醇苷的制剂组和阳性对照组动物穿越次数多于模型组(P＜0.05)；在可见平台实验中，5组动物的逃避潜伏期没有明显的组间差异。
表2本发明提取物对大鼠水迷宫实验的测定结果
注：与正常组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05。
5.6.2对大鼠血清和脑匀浆中MDA和SOD活性的影响
结果如表3和4所示。从表3可以看出，与正常组比较，模型组大鼠血清和脑中MDA含量显著提高(P＜0.05)，痴呆大鼠在给予本发明提取物后血清及脑中MDA的含量均有不同程度的降低，其中高剂量组对血清中MDA抑制率高于低剂量组，且均优于阳性对照组。
表3本发明提取物对血管性痴呆大鼠血清和脑中MDA含量的影响
(n＝10，mean±S.D.)
注：与正常组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05。
从表4可以看出，与正常组比较，模型组大鼠血清和脑中SOD活性显著降低(P＜0.05)，痴呆大鼠在给予本发明提取物后血清及脑中SOD活性均显著提高，高、低剂量组对血清中SOD提高率在100％以上，且均优于阳性对照组。
表4本发明提取物对血管性痴呆大鼠血清和脑中SOD活性的影响
(n＝10，mean±S.D.)
注：与正常组比较，*P＜0.05与模型组比较，#P＜0.05。
5.6.3对大鼠脑中MAO-B活性的影响
结果如表5所示，与正常组比较，模型组大鼠脑中MAO-B的活性明显提高(P＜0.05)。痴呆大鼠在给予本发明提取物后，脑中MAO-B活性均显著降低(P＜0.05)，高、低剂量组对脑中MAO-B抑制率在60％以上，且均优于阳性对照组。
表5本发明提取物对血管性痴呆大鼠脑中MAO-B活性的影响
(n＝10，mean±S.D.)
注：与正常组比较，*P＜0.05与模型组比较，#P＜0.05。
5.6.4对大鼠脑中AchE活性的影响
结果如表6所示，与正常组比较，模型组大鼠脑中AchE的活性明显提高(P＜0.01)。痴呆大鼠在给予本发明提取物后，能显著抑制脑中AchE活性(P＜0.01)，高剂量组对脑中AchE抑制效果最强达到35.3％。
表6本发明提取物对血管性痴呆大鼠脑中AchE活性的影响
(n＝10，mean±S.D.)
附图说明
图1是给予不同药物的正常小鼠跳台错误次数的比较柱形图，其中Cont为空白对照组，HPC为本发明提取物高剂量组，LPC为本发明提取物低剂量组，Pirac为阳性药物吡拉西坦片对照组。
图2是给予不同药物的正常小鼠第一次跳下平台潜伏期的比较柱形图，其中Cont为空白对照组，HPC为本发明提取物高剂量组，LPC为本发明提取物低剂量组，Pirac为阳性药物吡拉西坦片对照组。
图3是给予不同药物的正常小鼠进入暗箱次数的比较柱形图，其中Cont为空白对照组，HPC为本发明提取物高剂量组，LPC为本发明提取物低剂量组，Pirac为阳性药物吡拉西坦片对照组。
图4是给予不同药物的正常小鼠进入暗箱潜伏期的比较柱形图，其中Cont为空白对照组，HPC为本发明提取物高剂量组，LPC为本发明提取物低剂量组，Pirac为阳性药物吡拉西坦片对照组。
图5是给予不同药物的30％乙醇所致记忆损伤小鼠跳台错误次数的比较柱形图，其中Cont为空白对照组，EtOH为模型对照组，HPC为本发明提取物高剂量组，LPC为本发明提取物低剂量组，Pirac为阳性药物吡拉西坦片对照组。
图6是给予不同药物的30％乙醇所致记忆损伤小鼠第一次跳下平台潜伏期的比较柱形图，其中Cont为空白对照组，EtOH为模型对照组，HPC为本发明提取物高剂量组，LPC为本发明提取物低剂量组，Pirac为阳性药物吡拉西坦片对照组。
图7是给予不同药物的30％乙醇所致记忆损伤小鼠进入暗箱次数的比较柱形图，其中Cont为空白对照组，EtOH为模型对照组，HPC为本发明提取物高剂量组，LPC为本发明提取物低剂量组，Pirac为阳性药物吡拉西坦片对照组。
图8是给予不同药物的30％乙醇所致记忆损伤小鼠进入暗箱潜伏期的比较柱形图，其中Cont为空白对照组，EtOH为模型对照组，HPC为本发明提取物高剂量组，LPC为本发明提取物低剂量组，Pirac为阳性药物吡拉西坦片对照组。
图9是给予不同药物的NaNO2所致记忆巩固障碍小鼠跳台错误次数的比较柱形图，其中Cont为空白对照组，NaNO2为模型对照组，HPC为本发明提取物高剂量组，LPC为本发明提取物低剂量组，Pirac为阳性药物吡拉西坦片对照组。
图10是给予不同药物的NaNO2所致记忆巩固障碍小鼠第一次跳下平台潜伏期的比较柱形图，其中Cont为空白对照组，NaNO2为模型对照组，HPC为本发明提取物高剂量组，LPC为本发明提取物低剂量组，Pirac为阳性药物吡拉西坦片对照组。
图11是给予不同药物的NaNO2所致记忆巩固障碍小鼠进入暗箱次数的比较柱形图，其中Cont为空白对照组，NaNO2为模型对照组，HPC为本发明提取物高剂量组，LPC为本发明提取物低剂量组，Pirac为阳性药物吡拉西坦片对照组。
图12是给予不同药物的NaNO2所致记忆巩固障碍小鼠进入暗箱潜伏期的比较柱形图，其中Cont为空白对照组，NaNO2为模型对照组，HPC为本发明提取物高剂量组，LPC为本发明提取物低剂量组，Pirac为阳性药物吡拉西坦片对照组。
图13是给予不同药物的东莨菪碱所致记忆获得障碍小鼠跳台错误次数的比较柱形图，其中Cont为空白对照组，Scop为模型对照组，HPC为本发明提取物高剂量组，LPC为本发明提取物低剂量组，Pirac为阳性药物吡拉西坦片对照组。
图14是给予不同药物的东莨菪碱所致记忆获得障碍小鼠第一次跳下平台潜伏期的比较柱形图，其中Cont为空白对照组，Scop为模型对照组，HPC为本发明提取物高剂量组，LPC为本发明提取物低剂量组，Pirac为阳性药物吡拉西坦片对照组。
图15是给予不同药物的东莨菪碱所致记忆获得障碍小鼠进入暗箱次数的比较柱形图，其中Cont为空白对照组，Scop为模型对照组，HPC为本发明提取物高剂量组，LPC为本发明提取物低剂量组，Pirac为阳性药物吡拉西坦片对照组。
图16是给予不同药物的东莨菪碱所致记忆获得障碍小鼠进入暗箱潜伏期的比较柱形图，其中Cont为空白对照组，Scop为模型对照组，HPC为本发明提取物高剂量组，LPC为本发明提取物低剂量组，Pirac为阳性药物吡拉西坦片对照组。
具体实施方式
制备例
例1
取干燥的枇杷叶紫珠5kg，粉碎成粗粉。
取枇杷叶紫珠粗粉，加水20倍量浸泡1小时，在常压下加热回流提取1.5小时，趁热过滤，药渣再加水15倍，加热回流提取1小时，趁热过滤，合并两次提取液，减压浓缩至比重1.15(50℃)，加乙醇至含醇量达60％，冷藏12小时，倾出上清液，将残留的悬浊液过滤，合并上清液和滤液。将乙醇提取液减压浓缩至无醇味，在5～20℃下以2000rpm离心，取上清液，以1BV/h(倍柱体积每小时)的流速上大孔吸附树脂柱(AB-8型大孔吸附树脂，天津南开大学化工厂生产)，待吸附饱和后，先用8倍柱体积水以1.5BV/h的流速洗脱树脂柱，再用30％乙醇以1BV/h的流速洗脱，收集10倍柱体积的30％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，干燥，即得含苯乙醇苷的提取物208g。
以高效液相色谱法测定连翘酯苷、毛瑞花糖苷、cistanoside C、异毛瑞花糖苷、cistanoside、lamiophlomioside A、luteoside B、luteoside C和syringalide A 3’-α-L-Rhanmnopyranoside的含量：
固定相为色谱柱：Kromasil 100-5 C18(4.6×250mm，5μm)；保护柱：Analytical GuardCartridge System(phenomenex，USA)；流动相：甲醇-0.1％冰醋酸溶液(30∶70)；流速：1.0mL/min；柱温：30±1℃；检测波长为334nm；分析周期：45min。
精密称取60℃减压干燥24小时的连翘酯苷、毛瑞花糖苷、cistanoside C、异毛瑞花糖苷、cistanoside、lamiophlomioside A、luteoside B、luteoside C和syringalide A 3’-α-L-Rhanmnopyranoside适量，分别用流动相溶解于5.0mL量瓶中，摇匀，备用。分别吸取一定量的上述标准品溶液，混合均匀，配制成混合对照品溶液。最终对照品溶液中连翘酯苷、毛瑞花糖苷、cistanoside C、异毛瑞花糖苷、cistanoside、lamiophlomioside A、luteoside B、luteosideC和syringalide A 3’-α-L-Rhanmnopyranoside的浓度依次为3.124、1.258、0.435、0.836、0.682、0.562、0.831、0.456和0.724mg·mL-1、。
供试品溶液的制备是取本发明所述含苯乙醇苷的制剂20mg，加流动相溶解并定容至10mL。精密吸取上述溶液2mL至10mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，用0.4μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取连续滤液约1.0mL，作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μL连续进样3次，测定峰面积，采用线性回归方程计算即得。检测结果显示连翘酯苷、毛瑞花糖苷、cistanoside C、异毛瑞花糖苷、cistanoside、lamiophlomioside A、luteoside B、luteoside C和syringalide A 3’-α-L-Rhanmnopyranoside的含量分别为53.2％、25.8％、0.64％、1.87％、0.53％、0.38％、0.82％、0.34％和0.93％。
例2
取干燥的枇杷叶紫珠6kg，粉碎成粗粉。
取枇杷叶紫珠粗粉，加水30倍浸泡1小时，在常压下加热回流提取1.0小时，趁热过滤，药渣再加水20倍，加热回流提取1小时，趁热过滤，合并两次提取液，减压浓缩至比重1.12(50℃)，加乙醇至含醇量达60％，冷藏12小时，倾出上清液，将残留的悬浊液过滤，合并上清液和滤液。将乙醇提取液减压浓缩至无醇味，在5～20℃下以2000rpm离心，取上清液加于已处理好的AB-8型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂生产)，以2BV/h(倍柱体积每小时)的流速上大孔吸附树脂柱，待吸附饱和后，先用6倍柱体积水以1.5BV/h的流速洗脱树脂柱，再用40％乙醇以1BV/h的流速洗脱，收集8倍柱体积的40％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，干燥，即得含苯乙醇苷的提取物325g。采用制备例1的方法测定该提取物中连翘酯苷、毛瑞花糖苷、cistanoside C、异毛瑞花糖苷、cistanoside、lamiophlomioside A、luteosideB、luteoside C和syringalide A 3’-α-L-Rhanmnopyranoside含量分别为45.6％、10.2％、0.73％、1.68％、0.42％、0.31％、0.74％、0.28％和0.85％。
例3
取干燥的枇杷叶紫珠10kg，粉碎成粗粉。
取枇杷叶紫珠粗粉，加水30倍浸泡1小时，在常压下加热回流提取1.0小时，趁热过滤，药渣再加水20倍，加热回流提取1小时，趁热过滤，合并两次提取液，减压浓缩至比重1.12(50℃)，加乙醇至含醇量达60％，冷藏12小时，倾出上清液，将残留的悬浊液过滤，合并上清液和滤液。将乙醇提取液减压浓缩至无醇味，在5～20℃下以2000rpm离心，取上清液加于已处理好的AB-8型大孔吸附树脂，以2BV/h(倍柱体积每小时)的流速上大孔吸附树脂柱，待吸附饱和后，先用6倍柱体积水以1.5BV/h的流速洗脱树脂柱，再用40％乙醇以1BV/h的流速洗脱，收集8倍柱体积的40％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，干燥，即得含苯乙醇苷的提取物463g。采用制备例1的方法测定该提取物中连翘酯苷、毛瑞花糖苷、cistanoside C、异毛瑞花糖苷、cistanoside、lamiophlomioside A、luteoside B、luteoside C和syringalide A 3’-α-L-Rhanmnopyranoside含量分别为48.7％、16.8％、0.96％、1.82％、0.46％、0.35％、0.82％、0.41％和0.98％。
例4
取干燥的枇杷叶紫珠5kg，粉碎成粗粉。
取枇杷叶紫珠粗粉，加50％乙醇30倍浸泡1小时，在常压下加热回流提取1.0小时，趁热过滤，药渣再加50％乙醇20倍，加热回流提取1小时，趁热过滤，合并两次提取液，减压浓缩至比重1.12(50℃)，将提取液减压浓缩至无醇味，在5～20℃下以2000rpm离心，取上清液加于已处理好的AB-8型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂生产)，以2BV/h(倍柱体积每小时)的流速上大孔吸附树脂柱，待吸附饱和后，先用5倍柱体积水以1.0BV/h的流速洗脱树脂柱，再用乙醇以1BV/h的流速洗脱，收集8倍柱体积的乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，干燥，即得含苯乙醇苷的提取物243g。采用制备例1的方法测定该提取物中连翘酯苷、毛瑞花糖苷、cistanoside C、异毛瑞花糖苷、cistanoside、lamiophlomioside A、luteoside B、luteosideC和syringalide A 3’-α-L-Rhanmnopyranoside含量分别为49.3％、14.7％、0.86％、1.38％、0.26％、0.37％、0.83％、0.32％和1.06％。
例5
取干燥的枇杷叶紫珠5kg，粉碎成粗粉。
取枇杷叶紫珠粗粉，加75％乙醇25倍浸泡1小时，在常压下加热回流提取1.0小时，趁热过滤，药渣再加75％乙醇20倍，加热回流提取1小时，趁热过滤，合并两次提取液，减压浓缩至比重1.13(50℃)，将提取液减压浓缩至无醇味，在5～20℃下以2000rpm离心，取上清液加于已处理好的AB-8型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂生产)，以2BV/h(倍柱体积每小时)的流速上大孔吸附树脂柱，待吸附饱和后，先用8倍柱体积水以2.0BV/h的流速洗脱树脂柱，再用甲醇以1BV/h的流速洗脱，收集8倍柱体积的甲醇洗脱液，减压回收甲醇，浓缩，干燥，即得含苯乙醇苷的提取物258g。采用制备例1的方法测定该提取物中连翘酯苷、毛瑞花糖苷、cistanoside C、异毛瑞花糖苷、cistanoside、lamiophlomioside A、luteoside B、luteosideC和syringalide A 3’-α-L-Rhanmnopyranoside含量分别为43.6％、18.3％、0.58％、1.73％、0.46％、0.21％、0.65％、0.26％和0.76％。
本发明方法的苯乙醇苷类成分提取率与文献报道的比较
下面将本方法制备的提取物与文献(Kyung Ah Koo，Planta Medica，2005，71：778～780.)报道的共有的三种苯乙醇苷类成分(连翘酯苷、毛瑞花糖苷、异毛瑞花糖苷)进行比较，进一步说明本方法的有益效果。
表7本发明方法的苯乙醇苷类成分提取率与文献报道的比较结果
从表7比较的结果可看出，与文献报道的方法相比，本发明的方法可大大提高苯乙醇苷类成分的含量和得率，而且具有操作相对简单，提取溶剂可循环利用，环境污染小的特点。
应用例
例1
将制备例1所得提取物150g用适量乙醇稀释后，按照等量递加法分别与赋型剂HPMC和微粉硅胶按1∶1.5∶0.5的比例混合均匀，过6号筛制成颗粒，于60℃温度下干燥3小时。取1#空肠溶胶囊，分别填充以上干燥颗粒，每1粒胶囊0.3g，于囊口处涂一层阿拉伯胶浆，套封胶囊，用干燥纱布擦拭胶囊后，装于密闭棕色瓶内，即得。该制剂的用量为每天两次，每次2粒，口服。
例2
将制备例2所得提取物100g与225g花生油混合，加入25g蜂蜡及2g吐温-80，再用旋转式扎囊机压制成1000粒软胶囊(0.3g/粒)。该制剂的用量为每天两次，每次2粒，口服。
例3
将制备例3所得提取物120g与大豆油150g混合，加入15.0g蜂蜡及2g吐温-80，再用旋转式扎囊机压制成1000粒软胶囊(0.3g/粒)。该制剂的用量为每天两次，每次4粒，口服。
Claims (5)
1.一种含苯乙醇苷的枇杷叶紫珠提取物，该提取物中含有40～55％(w/w)的连翘酯苷和10～30％(w/w)的毛瑞花糖苷；所述的提取物是由以下方法制备得到的：
(1)取枇杷叶紫珠的茎叶粗粉，用第一极性溶剂提取2～3次，每次加10～30倍体积第一极性溶剂，在常压下加热回流提取1.0～1.5小时，滤出提取液；合并提取液，减压浓缩至比重1.10～1.20(50℃)，加乙醇至含醇量达60％(v/v)，冷藏12小时，滤去不容物后减压浓缩至无醇味，然后在5～20℃下，1000～3000rpm高速离心，分离出上清液；
(2)取上清液，以0.5～2BV/h的流速加到装有疏水大孔隙聚合物的柱中，待吸附饱和后，先用5～10BV第二极性溶剂以0.5～2BV/h的流速洗脱，再用第三极性溶剂进行洗脱，收集第三极性溶剂的洗脱液，浓缩，干燥即得；
上述步骤中，所述第一极性溶剂是水或50～75％(v/v)乙醇；第二极性溶剂为水；第三极性溶剂是20～30％(v/v)甲醇或30～40％(v/v)乙醇。
2.如权利要求1所述提取物，其特征在于所述的提取物中还含有不超过提取物总质量5％(w/w)的以下成分：cistanoside C、异毛瑞花糖苷、cistanoside、lamiophlomiosideA、luteosideB、luteoside C和syringalide A 3’-α-L-Rhanmnopyranoside。
3.权利要求1或2所述提取物的制备方法，该方法由以下步骤组成：
(1)取枇杷叶紫珠的茎叶粗粉，用第一极性溶剂提取2～3次，每次加10～30倍体积第一极性溶剂，在常压下加热回流提取1.0～1.5小时，滤出提取液；合并提取液，减压浓缩至比重1.10～1.20(50℃)，加乙醇至含醇量达60％(v/v)，冷藏12小时，滤去不溶物后减压浓缩至无醇味，然后在5～20℃下，1000～3000rpm高速离心，分离出上清液；
(2)取上清液，以0.5～2BV/h的流速加到装有疏水大孔隙聚合物的柱中，待吸附饱和后，先用5～10BV第二极性溶剂以0.5～2BV/h的流速洗脱，再用第三极性溶剂进行洗脱，收集第三极性溶剂的洗脱液，浓缩，干燥即可；
上述步骤中，所述第一极性溶剂是水或50～75％(v/v)乙醇；第二极性溶剂为水；第三极性溶剂是20～30％(v/v)甲醇或30～40％(v/v)乙醇。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于步骤(1)中第一溶剂提取的次数为2次，第一次提取1.5小时，第二次提取1.0小时，所述的第一溶剂为水。
5.权利要求1或2所述提取物在制备治疗老年性痴呆药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101463676A CN101797307B (zh) | 2010-04-09 | 2010-04-09 | 一种含苯乙醇苷的枇杷叶紫珠提取物及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101463676A CN101797307B (zh) | 2010-04-09 | 2010-04-09 | 一种含苯乙醇苷的枇杷叶紫珠提取物及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101797307A true CN101797307A (zh) | 2010-08-11 |
| CN101797307B CN101797307B (zh) | 2011-08-10 |
Family
ID=42593248
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2010101463676A Expired - Fee Related CN101797307B (zh) | 2010-04-09 | 2010-04-09 | 一种含苯乙醇苷的枇杷叶紫珠提取物及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101797307B (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103156867A (zh) * | 2011-12-16 | 2013-06-19 | 杏辉天力（杭州）药业有限公司 | 预防或治疗淀粉样β肽相关疾病或状况的医药组合物 |
| WO2014075570A1 (zh) * | 2012-11-19 | 2014-05-22 | 苏州润新生物科技有限公司 | 紫珠总苷提取物及其制备方法和用途 |
| CN104644882A (zh) * | 2015-01-05 | 2015-05-27 | 海南医学院 | 一种含苯乙醇苷的裸花紫珠提取物及其制备方法 |
| CN104800414A (zh) * | 2014-01-26 | 2015-07-29 | 上海医药工业研究院 | 广东紫珠中总黄酮葡萄糖醛酸苷和总苯乙醇苷的分离方法 |
| CN109369739A (zh) * | 2018-11-16 | 2019-02-22 | 山东省药学科学院 | 一种具有脑保护活性的过山蕨植物提取物及其制备方法 |
| KR20200040886A (ko) * | 2017-09-05 | 2020-04-20 | 쉬지아주앙 일링 파머서티컬 컴퍼니 리미티드 | 전통 한약 조성물에서 18가지 성분을 분리하는 방법 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20040064830A (ko) * | 2003-01-10 | 2004-07-21 | 주식회사 엘컴사이언스 | 페닐에타노이드 유도체를 포함하는 퇴행성 뇌신경계질환의 예방 및 치료용 조성물 |
-
2010
- 2010-04-09 CN CN2010101463676A patent/CN101797307B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20040064830A (ko) * | 2003-01-10 | 2004-07-21 | 주식회사 엘컴사이언스 | 페닐에타노이드 유도체를 포함하는 퇴행성 뇌신경계질환의 예방 및 치료용 조성물 |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103156867A (zh) * | 2011-12-16 | 2013-06-19 | 杏辉天力（杭州）药业有限公司 | 预防或治疗淀粉样β肽相关疾病或状况的医药组合物 |
| CN103156867B (zh) * | 2011-12-16 | 2019-04-30 | 杏辉天力（杭州）药业有限公司 | 预防或治疗淀粉样β肽相关疾病或状况的医药组合物 |
| CN103816296B (zh) * | 2012-11-19 | 2020-03-31 | 苏州润新生物科技有限公司 | 紫珠总苷提取物及其制备方法和用途 |
| WO2014075570A1 (zh) * | 2012-11-19 | 2014-05-22 | 苏州润新生物科技有限公司 | 紫珠总苷提取物及其制备方法和用途 |
| CN103816296A (zh) * | 2012-11-19 | 2014-05-28 | 苏州润新生物科技有限公司 | 紫珠总苷提取物及其制备方法和用途 |
| US10758585B2 (en) | 2012-11-19 | 2020-09-01 | Suzhou Neupharma Co., Ltd. | Beautyberry total glycosides extract and preparation method and use thereof |
| CN104800414A (zh) * | 2014-01-26 | 2015-07-29 | 上海医药工业研究院 | 广东紫珠中总黄酮葡萄糖醛酸苷和总苯乙醇苷的分离方法 |
| CN104800414B (zh) * | 2014-01-26 | 2019-03-26 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 广东紫珠中总黄酮葡萄糖醛酸苷和总苯乙醇苷的分离方法 |
| CN104644882A (zh) * | 2015-01-05 | 2015-05-27 | 海南医学院 | 一种含苯乙醇苷的裸花紫珠提取物及其制备方法 |
| KR20200040886A (ko) * | 2017-09-05 | 2020-04-20 | 쉬지아주앙 일링 파머서티컬 컴퍼니 리미티드 | 전통 한약 조성물에서 18가지 성분을 분리하는 방법 |
| EP3680248A4 (en) * | 2017-09-05 | 2021-06-16 | Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co., Ltd. | PROCEDURE FOR SEPARATING EIGHTEEN COMPONENTS IN A COMPOSITION OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE |
| KR102404533B1 (ko) | 2017-09-05 | 2022-06-02 | 쉬지아주앙 일링 파머서티컬 컴퍼니 리미티드 | 전통 한약 조성물에서 18가지 성분을 분리하는 방법 |
| CN109369739A (zh) * | 2018-11-16 | 2019-02-22 | 山东省药学科学院 | 一种具有脑保护活性的过山蕨植物提取物及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101797307B (zh) | 2011-08-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI330087B (en) | The use of wenguanguo (xanthoceras sorbifolia) saponins for the manufacture of medicament for activating brain function, mehods for preparing saponins and medical compositions thereof | |
| JP5097196B2 (ja) | 漢方薬組成物ならびにこれらの調製方法および使用 | |
| CN101721567B (zh) | 一种石菖蒲提取物及其制备方法和应用 | |
| CN101797307A (zh) | 一种含苯乙醇苷的枇杷叶紫珠提取物及其制备方法 | |
| CN105920476B (zh) | 防治阿尔茨海默病中药组合物及其制备方法 | |
| CN102283870A (zh) | 一种高纯度银杏叶组合物，含其制剂及其制备方法 | |
| WO2011003226A1 (zh) | 治疗抑郁症的药物组合物、制备方法及用途 | |
| CN108472325B (zh) | 包含蜂斗菜叶提取物的用于改善记忆力的组合物 | |
| CN101804127B (zh) | 一种防治老年痴呆症的复方中药提取物组合物 | |
| TWI472335B (zh) | 用以治療腸激躁症之山薑屬植物萃取物 | |
| CN104906212B (zh) | 具有保肝作用的枳椇子提取物及其提取分离方法和用途 | |
| EP0216936A1 (en) | Novel tannin composition | |
| CN103070927A (zh) | 莲子心及其生物碱和其衍生物的新用途 | |
| WO2012175018A1 (zh) | 一种促进神经再生的中药组合物及其制备方法和应用 | |
| IL192791A (en) | Extract of xanthoceras sorbifolia bunge and extraction and uses thereof | |
| CN101006975B (zh) | 一种丹参丹酚酸a、三七提取物的口服制剂及其制备方法和应用 | |
| CN110742917A (zh) | 沙棘油组合物及含有其的药品和保健品 | |
| CN103417606A (zh) | 一种制备治疗学习记忆力障碍的药物或保健品的制备方法及用途 | |
| WO2022135329A1 (zh) | 含有灯盏细辛、人参、麦冬、五味子的药物组合物 | |
| CN104523875B (zh) | 大枣核苷提取物及其在制备辅助改善学习记忆功能药物及保健食品中的应用 | |
| CN102988525A (zh) | 山楂核中总木脂素的制备方法及新用途 | |
| KR101509056B1 (ko) | 인삼 복합 생약 추출물, 진세노사이드 Rg2와 진세노사이드 F2를 포함하는 뇌기능 및 인지 기능 개선용 조성물 | |
| JP2012214500A (ja) | 漢方薬組成物ならびにこれらの調製方法および使用 | |
| CN101612184A (zh) | 多舌飞蓬提取物、含该提取物的组合物及制备方法和用途 | |
| CN114681563B (zh) | 含有灯盏细辛、人参、麦冬、五味子的药物组合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20110810 Termination date: 20210409 |