CN101367884A - 一种半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属高分子材料技术领域，具体涉及一种半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物及其制备方法和应用。透明质酸溶液中加入1－乙基－3－(3－二甲氨基丙基)－碳二亚胺盐酸盐(EDAC)及N－羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化其羧基，加入半胱胺盐酸盐，使其氨基与透明质酸的羧基形成酰胺键，调节各物质的配比及反应条件，获得不同巯基含量的巯基化透明质酸偶合物。本发明扩展了该巯基化反应的应用范围，偶合物黏膜黏附性及生物相容性较好，具有较强的原位凝胶性质，为非注射制剂及组织工程等提供优良的生物黏附性材料。
Description
技术领域
本发明属高分子材料技术领域，具体涉及一种半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物及其制备方法和应用。
背景技术
巯基化聚合物(Thiomer)是一类亲水性高分子聚合物的侧链经巯基化合物修饰所得的产物，是一种新型的黏膜黏附性材料。生理条件下其可与黏膜黏液层糖蛋白中富含半胱氨酸的区域形成二硫键，以共价键紧密结合于黏膜，延长药物在体内的滞留时间，提高药物的局部浓度，促进药物吸收。此外，巯基化聚合物具有原位凝胶性质，其分子内可形成二硫键，以致流变学性质改变。目前，已开发了阳离子巯基化聚合物如壳聚糖-半胱氨酸、壳聚糖-巯基乙酸、壳聚糖-硫代-脒偶合物等，阴离子巯基化聚合物如聚丙烯酸-半胱氨酸、聚丙烯酸-半胱胺、聚丙烯酸-高半胱氨酸、羧甲基纤维素钠-半胱氨酸、海藻酸钠-半胱氨酸偶合物等。与相应未修饰聚合物相比，巯基化聚合物的黏膜黏附性可增加2～140倍。该聚合物可制成微球、纳米粒、凝胶、骨架片等给药载体，用于多种亲水性药物的非注射给药。此外，巯基化聚合物也可应用于制备组织工程支架。
透明质酸是一种大分子酸性黏多糖，广泛存在于生物体的结缔组织中，具有较好的生物相容性和生物降解性，可应用于组织工程和医药领域。通过交联、酯化、接枝等方法对透明质酸进行化学修饰，可提高其机械强度，减缓其在组织内的降解速度，进一步扩大其应用前景。Krum K.等(Int J Pharm，2007，343：48-58)通过1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐/N-羟基琥珀酰亚胺介导，将L-半胱氨酸乙酯键合于透明质酸的羧基上，制得透明质酸-半胱氨酸乙酯偶合物。每克聚合物的游离巯基含量大于200μmol/g，二硫键含量约为85μmol/g，其黏膜黏附性比未修饰的透明质酸提高了6.5倍，抗酶解能力增强，作为亲水性大分子药物的载体，可能具有较好的缓控释作用。透明质酸-半胱氨酸乙酯偶合物的二硫键含量较低，其原位凝胶性较差。
发明内容
本发明的目的是提供一种半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
本发明的另一个目的是提供一种半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物的制备方法。
本发明还有一个目的是提供一种半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物的应用，以克服现有技术的不足和缺陷。
本发明的构思如下：
本发明以可生物降解的透明质酸为原料，以1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)及N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化其羧基，加入半胱胺盐酸盐，使其氨基与透明质酸的羧基形成酰胺键，制得巯基化透明质酸偶合物。
合成巯基化透明质酸偶合物的过程如下：
本发明的技术方案如下：
本发明的半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物，以透明质酸为骨架，半胱胺共价结合至透明质酸。
所述的透明质酸的分子量为1.98×104～1×106g/mol。
所述的半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物，相对每克偶合物，共价连接的游离巯基基团为10～200μmol/g，二硫键为120～500μmol/g。
所述的半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物，其0.5％～3％的水溶液黏度比未修饰透明质酸高5～100倍。
本发明的半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物，其制备方法如下：
(1)0.4％～1％质量百分比的透明质酸钠水溶液中加入终浓度为0.19％～1.9％ 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.12％～1.2％N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH5～6，搅拌30～120min；
(2)按透明质酸与半胱胺盐酸盐质量比32:1～1:4投料，调节反应液pH 3～5，避光反应4～12h，反应结束后，透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
所述的透明质酸的分子量为1.98×104～1×106g/mol。
步骤(1)中优选反应时间为40～60min，时间过短反应不完全，时间过长产物不稳定。
步骤(2)中优选透明质酸与半胱胺盐酸盐质量比为8:1～1:2，透明质酸与半胱胺盐酸盐质量比过高，则羧基的取代度过低；透明质酸与半胱胺盐酸盐质量比过低，则过量的半胱胺盐酸盐在后续纯化处理中较难除净。
步骤(2)中优选的反应时间为5～8h，时间过短反应不完全，时间过长则产物易被氧化。
本发明的半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物可应用于给药系统、细胞培养和组织工程。
本发明的优点在于：
(1)本发明的偶合物的水溶液由于二硫键较多而使溶液黏度增加，生理条件下呈凝胶，可开发成原位凝胶制剂；
(2)组成偶合物的材料均为天然可生物降解材料，具有无毒性、无免疫原性和抗原性、生物相容性良好的特点；
(3)本发明的偶合物具有较好的亲水性，可作为亲水性药物的载体，以化学键结合于黏膜黏液层，提高药物的体内滞留时间，增加药物的局部浓度，提高药物的生物利用度；
(4)本发明的偶合物相对于透明质酸机械性能提高，抗酶解能力增强，用作组织工程材料，可减缓其体内降解速率。
具体实施方式
通过下面的具体实施例可进一步了解本发明。但它们不是对本发明的限定。
实施例1
将200mg分子量为5×105Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得0.4％透明质酸溶液，分别加入终浓度为0.96％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.58％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 5.5，搅拌45min；加入400mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 4.75，避光反应5h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例2
将300mg分子量为1.98×104Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得0.6％透明质酸溶液，分别加入终浓度为0.19％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.12％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH5，搅拌30min；加入300mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH3，避光反应4h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例3
将400mg分子量为1×105Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得0.8％透明质酸溶液，分别加入终浓度为0.48％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.29％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 5.5，搅拌40min；加入200mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 4，避光反应5h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例4
将200mg分子量为1×106Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得0.4％透明质酸溶液，分别加入终浓度为1.4％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.86％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 6，搅拌60min；加入800mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 5，避光反应6h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例5
将500mg分子量为1.98×104Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得1％透明质酸溶液，分别加入终浓度为1.9％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和1.2％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 5，搅拌90min；加入15.6mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 3，避光反应8h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例6
将300mg分子量为1×106Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得0.6％透明质酸溶液，分别加入终浓度为0.19％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.12％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 5.5，搅拌120min；加入18.8mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 4，避光反应10h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例7
将400mg分子量为5×105Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得0.8％透明质酸溶液，分别加入终浓度为0.48％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.29％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 6，搅拌30min；加入50mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 4.75，避光反应12h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例8
将500mg分子量为1×105Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得1％透明质酸溶液，分别加入终浓度为0.96％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.58％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 5，搅拌40min；加入125mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 5，避光反应4h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例9
将400mg分子量为1×105Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得0.8％透明质酸溶液，分别加入终浓度为1.4％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.86％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 5.5，搅拌45min；加入12.5mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 4，避光反应6h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例10
将500mg分子量为5×105Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得1％透明质酸溶液，分别加入终浓度为1.9％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和1.2％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 6，搅拌60min；加入31.2mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 4.75，避光反应8h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例11
将200mg分子量为1×106Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得0.4％透明质酸溶液，分别加入终浓度为0.19％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.12％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 5，搅拌90min；加入25mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 5，避光反应10h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例12
将300mg分子量为1.98×104Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得0.6％透明质酸溶液，分别加入终浓度为0.48％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.29％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 5.5，搅拌120min；加入75mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 3，避光反应12h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例13
将500mg分子量为5×105Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得1％透明质酸溶液，分别加入终浓度为0.96％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.58％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 6，搅拌30min；加入250mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 3，避光反应5h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例14
将200mg分子量为1×106Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得0.4％透明质酸溶液，分别加入终浓度为1.4％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.86％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 5，搅拌40min；加入200mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 4，避光反应6h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例15
将300mg分子量为1.98×104Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得0.6％透明质酸溶液，分别加入终浓度为1.9％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和1.2％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 5.5，搅拌45min；加入600mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 4.75，避光反应8h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例16
将400mg分子量为1×105Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得0.8％透明质酸溶液，分别加入终浓度为0.19％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.12％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 6，搅拌60min；加入1600mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 5，避光反应10h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例17
将200mg分子量为1×106Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得0.4％透明质酸溶液，分别加入终浓度为0.48％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.29％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 5，搅拌90min；加入6.2mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 4，避光反应12h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例18
将300mg分子量为1.98×104Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得0.6％透明质酸溶液，分别加入终浓度为0.96％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.58％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 5.5，搅拌120min；加入18.8mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 4.75，避光反应4h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例19
将400mg分子量为1×105Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得0.8％透明质酸溶液，分别加入终浓度为1.4％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.86％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 6，搅拌30min；加入50mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 5，避光反应4h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCI的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例20
将500mg分子量为5×105Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得1％透明质酸溶液，分别加入终浓度为1.9％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和1.2％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 5，搅拌40min；加入125mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 3，避光反应5h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例21
将300mg分子量为1.98×104Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得0.6％透明质酸溶液，分别加入终浓度为0.19％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.12％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 5.5，搅拌60min；加入150mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 4.75，避光反应6h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCI溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例22
将400mg分子量为1×105Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得0.8％透明质酸溶液，分别加入终浓度为0.48％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.29％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH6，搅拌90min；加入400mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 5，避光反应8h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例23
将500mg分子量为5×105Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得1％透明质酸溶液，分别加入终浓度为0.96％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.58％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 5，搅拌120min；加入1000mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 3，避光反应10h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例24
将200mg分子量为1×106Da的透明质酸钠溶于50ml去离子水，得0.4％透明质酸溶液，分别加入终浓度为1.4％的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.86％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解后调pH 5.5，搅拌45min；加入800mg半光胺盐酸盐，调节反应液pH 4，避光反应12h。反应结束后，反应混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH 4)、含1％NaCl的HCl溶液(pH 4)、HCl溶液(pH 4)透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
实施例25
实施例1所得的半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物分别溶解于0.2M磷酸盐缓冲液(pH5.8、6.8、7.4)中，终浓度为0.5％，37℃下0～6h内用旋转式黏度计分别测定溶液的黏度，结果如表1所示。结果表明，溶液pH高于6时，6h内聚合物溶液的黏度比起始时间点黏度提高100倍以上。
表1 聚合物溶液浓度(终浓度为0.5％)
Claims (13)
1.一种半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物，其特征在于以透明质酸为骨架，半胱胺的氨基与透明质酸的羧基共价结合成酰胺键。
2.根据权利要求1所述的偶合物，其特征在于相对每克聚合物偶合物，共价连接的游离巯基基团为10～200μmol/g，二硫键为120～500μmol/g。
3.根据权利要求1所述的偶合物，其特征在于所述的透明质酸的分子量为1.98×104～1×106g/mol。
4.根据权利要求1所述的偶合物，其特征在于其0.5％～3％的水溶液黏度比未修饰透明质酸高5～100倍。
5.如权利要求1所述的半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物的制备方法，其特征在于按如下步骤制备：
(1)0.4％～1％透明质酸钠水溶液中加入终浓度为0.19％～1.9％ 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐和0.12％～1.2％ N-羟基琥珀酰亚胺，溶解后调pH至5～6，搅拌30～120min；其中透明质酸钠中透明质酸的分子量为1.98×104～1×106g/mol；
(2)按透明质酸与半胱胺盐酸盐质量比32:1～1:4投料，调节反应液pH 3～5，避光反应4～12h，反应结束后，透析，冷冻干燥，得半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物。
6.根据权利要求5所述的巯基化透明质酸偶合物的制备方法，其特征在于步骤(1)中反应时间为40～60min。
7.根据权利要求5所述的巯基化透明质酸偶合物的制备方法，其特征在于步骤(2)中透明质酸与半胱胺盐酸盐质量比为8:1～1:2。
8.根据权利要求5所述的巯基化透明质酸偶合物的制备方法，其特征在于步骤(2)中反应时间为5～8h。
9.如权利要求1～4中任一项的半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物在给药系统中的应用。
10.如权利要求1～4中任一项的半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物在细胞培养中的应用。
11.如权利要求1～4中任一项的半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物在组织工程中的应用。
12.包含权利要求1～4中任一项的半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物作为生物细胞或组织的支承物。
13.权利要求1～4中任一项的半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物或权利要求12的支承物在制备植入物的应用。
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