CN105646732A - 一种具有氧化-还原响应的透明质酸钠衍生物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种透明质酸钠巯基衍生物的制备方法，该方法为透明质酸钠通过偶联试剂4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(DMTMM)的活化作用，与胱胺发生交联反应，然后再经二硫苏糖醇还原得到透明质酸钠巯基衍生物。该透明质酸钠巯基衍生物在氧化环境下，可以形成二硫键，起到消除氧化剂和清除自由基的作用，经氧化形成的二硫键在体内较强还原条件下又能可逆的重新断开，得到巯基衍生物，因而起到维持体内氧化-还原环境平衡的作用，为注射美容、系统性疾病的早期预防以及智能药物缓释提供一种新的选择手段。
Description
技术领域
本发明涉及智能医用生物材料技术领域，是一种涉及一种透明质酸钠衍生物的制备方法，该透明质酸衍生物用于抗衰老、药物缓释、关节腔注射、注射美容等方面。
背景技术
自由基学说（Freeradicaltheory）是具有代表性的致衰学说之一。这一学说在20世纪50年代中期由著名学者HaMan首先提出，其后得到许多学者的共识。自由基是指独立存在的，含有1个或1个以上的不配对电子的任何原子或原子团，是机体正常代谢的中间产物，在机体内具有很强的氧化反应能力，且易产生连锁反应，对蛋白质、核酸、脂质等产生伤害，从而导致机体的损伤。大量的科学实验证实，氧自由基与机体损伤有着非常密切的关系。氧自由基是需氧生物细胞进行正常代谢的副产品。据统计机体每天吸入的氧气中有1%产生氧自由基。实验证明机体细胞存在少量氧自由基是维持生命所必需的，如甲状腺素的合成，必须有少量氧自由基的参与；嗜中性白细胞释放出的超氧阴离子及巨噬细胞产生的NO对杀灭外源细菌及体内坏死组织具有重要的意义。但氧自由基产生过多，或机体内的抗氧化自由基系统被大量消耗，氧自由基与抗氧自由基平衡失调时，自由基才便会引起疾病。大量的文献报道现有的诸多系统性疾病如风湿性骨关节炎、糖尿病、骨质疏松、白内障等均与氧自由基过多有密切的关系。
巯基化合物是一种具有较强还原性的活性化合物，在较低的氧化环境下即可发生反应，巯基自身氧化成二硫键化合物；而形成的二硫键在还原环境下，又可逆形成巯基。现在较常见的巯基化合物有半胱氨酸、谷胱甘肽（还原型）等。但是这类化合物均为小分子化合物，在体内易代谢，残存时间短。如何延长体内残存时间，更好地发挥巯基的抗氧化能力，是这类化合物用于抗氧化应用的关键。
透明质酸钠巯基化衍生物主要通过高分子与巯基乙酸、巯基乙醇、谷胱甘肽等含巯基基团的化合物之间发生接枝或交联反应制备而成。最常用的方法为碳二亚胺（EDC）活化羧基，进而接入巯基基团，但该方法接枝率低，对反应体系的PH依赖性高不利于产业化生产，同时由于巯基化合物花絮性质非常活泼，反应过程中极易引起巯基化合物的氧化，进而导致接枝率低；为改善上述弊端，大量的文献报道采用含二硫键的化合物进行接枝反应，然后通过二硫苏糖醇（DTT）将二硫键打断形成含有游离巯基的透明质酸衍生物，该方法解决了在接枝反应体系中巯基化合物易于氧化的弊端，但该方法首先需要在二硫键化合物的基础进行酰肼改性引入氨基，然后通过氨基与透明质酸中羧基之间的酰胺化反应形成目的产物，由此可见该种方法工艺繁琐，同时引入诸多的有机溶剂不利于后续的规模化放大及其生物相容性。
鉴于上述方法的不足，本发明采用吗啉衍生物作为偶联试剂进行制备透明质酸衍生物凝胶（以下简称DMTMM法）。DMTMM是目前较为理想的生成酰胺键的方法之一，其具有如下几个优势：1.反应活性高，单一氨基酸的接枝率可达到70%以上；2.反应温和，低温和室温下即可反应；3.对PH的依赖性弱，易于产业化生产；4.副反应少，未参加反应的吗啉衍生物不与透明质酸钠反应，且易于去除，有利于产品的质量控制。
发明内容
本发明涉及了一种巯基化透明质酸衍生物的制备，得到的透明质酸巯基衍生物，可以对体内的氧化剂或自由基起到响应，起到抗衰老、抗氧化作用。
发明的具体内容如下：
本发明采用现在较为常用的偶联试剂4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(DMTMM)，该偶联试剂具有反应活性高、低毒、易于去除等优点，主要用于活化羧基，进行酰胺键的合成制备。胱胺为有机二硫化合物，其分子的两端为氨基，均可以与羧酸形成酰胺键。
在偶联试剂DMTMM的作用下，胱胺与透明质酸钠的羧基端进行偶联反应，得到透明质酸钠衍生物，再通过二硫苏糖醇（DTT）还原，得到透明质酸的巯基衍生物。该衍生物在氧化剂存在下，有效地消除氧化剂，自身形成较好强度的水凝胶。
说明书附图
图1灭菌前后透明质酸钠衍生物巯基含量。
图2透明质酸钠衍生物对于自由基的消除作用。
图3透明质酸钠衍生物对于谷胱甘肽的感应曲线。
具体实施方式
现结合实施例，对本发明作详细描述，但本发明的实施不仅限于此。
实施例一
将胱胺二盐酸盐0.2817g溶解于15mL水中，用盐酸调节pH为4，称取1g透明质酸钠干粉，搅拌均匀后，放4℃过夜。第二天称取DMTMM0.6918g用5mL水完全溶解并用盐酸将pH值调为4，然后加入凝胶中，待完全搅拌均匀后，4℃下反应2天。
将反应好的凝胶切成块后，用PBS缓冲液透析，每1h更换透析液1次并称重，直到凝胶质量不在增加时，终止透析，将该凝胶粉碎制粒后，用1M的NaOH水溶液调节凝胶pH值为8~10，混合均匀后，加入二硫苏糖醇1.928g，室温下过夜反应，得到的反应液用盐酸溶液调节pH到3左右后，将溶液转移到透析袋中（截留分子量40000），用1mM的盐酸和0.3M的氯化钠溶液透析2天，最后用1mM的盐酸透析1天。收集透析好的溶液并冷冻干燥，待用。
实施例二
将胱胺二盐酸盐0.2817g溶解于15mL水中，用盐酸调节pH为6，称取1g透明质酸钠干粉，搅拌均匀后，放4℃过夜。第二天称取DMTMM0.6918g用5mL水完全溶解并用盐酸将pH值调为6，然后加入凝胶中，待完全搅拌均匀后，4℃下反应2天。
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实施例三
将胱胺二盐酸盐0.2817g溶解于15mL水中，用盐酸调节pH为6.5，称取1g透明质酸钠干粉，搅拌均匀后，放4℃过夜。第二天称取DMTMM0.6918g用5mL水完全溶解并用盐酸将pH值调为6.5，然后加入凝胶中，待完全搅拌均匀后，4℃下反应2天。
将反应好的凝胶切成块后，用PBS缓冲液透析，每1h更换透析液1次并称重，直到凝胶质量不在增加时，终止透析，将该凝胶粉碎制粒后，用1M的NaOH水溶液调节凝胶pH值为8~10，混合均匀后，加入二硫苏糖醇1.928g，室温下过夜反应，得到的反应液用盐酸溶液调节pH到3左右后，将溶液转移到透析袋中（截留分子量40000），用1mM的盐酸和0.3M的氯化钠溶液透析2天，然后用1mM的盐酸透析1天。收集透析好的溶液并冷冻干燥，待用。
实施例四
将胱胺二盐酸盐0.2817g溶解于15mL水中，用盐酸调节pH为7，称取1g透明质酸钠干粉，搅拌均匀后，放4℃过夜。第二天称取DMTMM0.6918g用5mL水完全溶解并用盐酸将pH值调为7，然后加入凝胶中，待完全搅拌均匀后，4℃下反应2天。
将反应好的凝胶切成块后，用PBS缓冲液透析，每1h更换透析液1次并称重，直到凝胶质量不在增加时，终止透析，将该凝胶粉碎制粒后，用1M的NaOH水溶液调节凝胶pH值为8~10，混合均匀后，加入二硫苏糖醇1.928g，室温下过夜反应，得到的反应液用盐酸溶液调节pH到3左右后，将溶液转移到透析袋中（截留分子量40000），用1mM的盐酸和0.3M的氯化钠溶液透析2天，然后用1mM的盐酸透析1天。收集透析好的溶液并冷冻干燥，待用。
实施例五
将胱胺二盐酸盐0.5634g溶解于15mL水中，称取1g透明质酸钠干粉，搅拌均匀后，放4℃过夜。第二天称取DMTMM0.6918g用5mL水完全溶解，然后加入凝胶中，待完全搅拌均匀后，4℃下反应2天。
将反应好的凝胶切成块后，用PBS缓冲液透析，每1h更换透析液1次并称重，直到凝胶质量不在增加时，终止透析，将该凝胶粉碎制粒后，用1M的NaOH水溶液调节凝胶pH值为8~10，混合均匀后，加入二硫苏糖醇1.928g，室温下过夜反应，得到的反应液用盐酸溶液调节pH到3左右后，将溶液转移到透析袋中（截留分子量40000），用1mM的盐酸和0.3M的氯化钠溶液透析2天，然后用1mM的盐酸透析1天。收集透析好的溶液并冷冻干燥，待用。
实施例六
将胱胺二盐酸盐0.2817g溶解于15mL水中，称取1g透明质酸钠干粉，搅拌均匀后，放4℃过夜。第二天称取DMTMM1.3836g用5mL水完全溶解，然后加入凝胶中，待完全搅拌均匀后，4℃下反应2天。
将反应好的凝胶切成块后，用PBS缓冲液透析，每1h更换透析液1次并称重，直到凝胶质量不在增加时，终止透析，将该凝胶粉碎制粒后，用1M的NaOH水溶液调节凝胶pH值为8~10，混合均匀后，加入二硫苏糖醇1.928g，室温下过夜反应，得到的反应液用盐酸溶液调节pH到3左右后，将溶液转移到透析袋中（截留分子量40000），用1mM的盐酸和0.3M的氯化钠溶液透析2天，然后用1mM的盐酸透析1天。收集透析好的溶液并冷冻干燥，待用。
实施例七
将胱胺二盐酸盐0.5634g溶解于15mL水中，称取1g透明质酸钠干粉，搅拌均匀后，放4℃过夜。第二天称取DMTMM1.3836g用5mL水完全溶解，然后加入凝胶中，待完全搅拌均匀后，4℃下反应2天。
将反应好的凝胶切成块后，用PBS缓冲液透析，每1h更换透析液1次并称重，直到凝胶质量不在增加时，终止透析，将该凝胶粉碎制粒后，用1M的NaOH水溶液调节凝胶pH值为8~10，混合均匀后，加入二硫苏糖醇1.928g，室温下过夜反应，得到的反应液用盐酸溶液调节pH到3左右后，将溶液转移到透析袋中（截留分子量40000），用1mM的盐酸和0.3M的氯化钠溶液透析2天，然后用1mM的盐酸透析1天。收集透析好的溶液并冷冻干燥，待用。
实施例八
将胱胺二盐酸盐0.2817g溶解于15mL水中，称取1g透明质酸钠干粉，搅拌均匀后，放4℃过夜。第二天称取DMTMM0.6918g用5mL水完全溶解，然后加入凝胶中，待完全搅拌均匀后，4℃下反应2天。
将反应好的凝胶切成块后，用PBS缓冲液透析，每1h更换透析液1次并称重，直到凝胶质量不在增加时，终止透析，将该凝胶粉碎制粒后，用1M的NaOH水溶液调节凝胶pH值为8~10，混合均匀后，加入二硫苏糖醇0.3856g，室温下过夜反应，得到的反应液用盐酸溶液调节pH到3左右后，将溶液转移到透析袋中（截留分子量40000），用1mM的盐酸和0.3M的氯化钠溶液透析2天，然后用1mM的盐酸透析1天。收集透析好的溶液并冷冻干燥，待用。
实施例九
将胱胺二盐酸盐0.5634g溶解于15mL水中，称取1g透明质酸钠干粉，搅拌均匀后，放4℃过夜。第二天称取DMTMM0.6918g用5mL水完全溶解，然后加入凝胶中，待完全搅拌均匀后，4℃下反应2天。
将反应好的凝胶切成块后，用PBS缓冲液透析，每1h更换透析液1次并称重，直到凝胶质量不在增加时，终止透析，将该凝胶粉碎制粒后，用1M的NaOH水溶液调节凝胶pH值为8~10，混合均匀后，加入二硫苏糖醇3.856g，室温下过夜反应，得到的反应液用盐酸溶液调节pH到3左右后，将溶液转移到透析袋中（截留分子量40000），用1mM的盐酸和0.3M的氯化钠溶液透析2天，然后用1mM的盐酸透析1天。收集透析好的溶液并冷冻干燥，待用。
实施例十
由实施例一、二得到的样品经蒸汽灭菌(121℃、20min)后，分别取灭菌前后的样品，采用Ellman试剂进行巯基含量检测。分析结果，该透明质酸巯基衍生物热稳定性较好，可以进行终端灭菌。
实施例十一
由实施例十得到的样品，配制不同的浓度梯度，测定其还原力的大小，并将样品的还原能力与0.01mg/mL抗坏血酸（Vc）的还原能力进行对比。对比测定结果发现，当透明质酸巯基衍生物的浓度为0.3mg/mL时，其还原能力与0.01mg/mL抗坏血酸（Vc）的还原能力相当。
Claims (8)
1.一种透明质酸巯基衍生物的制备方法，其主要特征为使用透明质酸钠为原料，胱胺为修饰试剂，采用4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(DMTMM)为偶联试剂，制备透明质酸钠衍生物，该衍生物经二硫苏糖醇还原后，得到透明质酸钠巯基衍生物。
2.如权利要求1所述，使用的修饰试剂为胱胺或胱胺盐酸盐，与透明质酸钠的比例为1/10～2/1（mol/mol）。
3.如权利要求1所述，用于反应的溶液体系的pH为3~9。
4.如权利要求1所述，使用的透明质酸钠起始反应浓度为5～15%（m/m%）。
5.如权利要求1所述，使用的偶联试剂为4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(DMTMM)，偶联剂与透明质酸钠的比例为1/10～2/1（mol/mol）。
6.如权利要求1所述，反应的温度范围为4～50℃。
7.如权利要求1所述，反应的时间范围为4～120h。
8.如权利要求1所述，二硫苏糖醇的加入量与透明质酸钠的比例为1/1~10/1（mol/mol）。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113735992A (zh) * | 2016-08-03 | 2021-12-03 | 高德美研究及发展公司 | 使糖胺聚糖交联的方法 |
| US20220105020A1 (en) * | 2019-06-26 | 2022-04-07 | Bioregen Biomedical (Changzhou) Co., Ltd. | Hyaluronic acid skin care composition and preparation method and application thereof |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101367884A (zh) * | 2008-09-25 | 2009-02-18 | 复旦大学 | 一种半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物及其制备方法和应用 |
| CN103087333A (zh) * | 2012-11-13 | 2013-05-08 | 西安交通大学 | 一种可快速解离型温敏性透明质酸水凝胶的制备方法 |
| CN103613686A (zh) * | 2013-11-12 | 2014-03-05 | 广州市一杰医药科技有限公司 | 巯基化透明质酸的制备方法及其应用 |
| US20140294752A1 (en) * | 2013-04-01 | 2014-10-02 | Research & Business Foundation Sungkyunkwan University | Method for nucleic acid delivery using hyaluronic acid |
| CN104162169A (zh) * | 2014-09-02 | 2014-11-26 | 国家纳米科学中心 | 一种药物组合物及其制备方法和用途 |
-
2014
- 2014-12-02 CN CN201410715273.4A patent/CN105646732A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101367884A (zh) * | 2008-09-25 | 2009-02-18 | 复旦大学 | 一种半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物及其制备方法和应用 |
| CN103087333A (zh) * | 2012-11-13 | 2013-05-08 | 西安交通大学 | 一种可快速解离型温敏性透明质酸水凝胶的制备方法 |
| US20140294752A1 (en) * | 2013-04-01 | 2014-10-02 | Research & Business Foundation Sungkyunkwan University | Method for nucleic acid delivery using hyaluronic acid |
| CN103613686A (zh) * | 2013-11-12 | 2014-03-05 | 广州市一杰医药科技有限公司 | 巯基化透明质酸的制备方法及其应用 |
| CN104162169A (zh) * | 2014-09-02 | 2014-11-26 | 国家纳米科学中心 | 一种药物组合物及其制备方法和用途 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MATTEO D’ESTE ET AL.: ""A systematic analysis of DMTMM vs EDC/NHS for ligation of amines to Hyaluronan in water"", 《CARBOHYDRATE POLYMERS》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113735992A (zh) * | 2016-08-03 | 2021-12-03 | 高德美研究及发展公司 | 使糖胺聚糖交联的方法 |
| US11807726B2 (en) | 2016-08-03 | 2023-11-07 | Centre National De La Recherche Scientifique | Method of crosslinking glycosaminoglycans |
| CN113735992B (zh) * | 2016-08-03 | 2023-12-05 | 国家科学研究中心 | 使糖胺聚糖交联的方法 |
| US20220105020A1 (en) * | 2019-06-26 | 2022-04-07 | Bioregen Biomedical (Changzhou) Co., Ltd. | Hyaluronic acid skin care composition and preparation method and application thereof |
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