CN101330923B

CN101330923B - 治疗性疫苗

Info

Publication number: CN101330923B
Application number: CN200680046697.XA
Authority: CN
Inventors: A·普法伊费尔; C·尼古劳
Original assignee: AC Immune SA
Current assignee: AC Immune SA
Priority date: 2005-12-12
Filing date: 2006-12-08
Publication date: 2015-01-07
Anticipated expiration: 2026-12-08
Also published as: EP2380588B1; BRPI0619747B1; CN101330923A; US7807175B2; ECSP088531A; JP5249043B2; WO2007068411A2; IL191397A; RU2011141308A; CR9994A; CA2633399C; KR20080084830A; ES2407429T3; US20080267986A1; NZ568384A; TWI537000B; DK1959991T3; HK1127486A1; JP2009519915A; JP2013126993A

Abstract

本发明涉及在由淀粉样或类淀粉样蛋白质引起或与之有关的疾病和病症，包括淀粉样变的治疗上用于治疗和诊断用途的方法和组合物。特别地，本发明提供在生物中，特别是在动物中，尤其是在哺乳动物或人类中，诱发高度特异且高度有效的免疫反应的方法和组合物，所述免疫反应能够预防或减轻淀粉样变或与淀粉样变有关的症状，所述淀粉样变是一组与淀粉样斑形成有关的疾病或病症，包括继发性淀粉样变以及与年龄有关的淀粉样变，包括但不限于，神经学的病症如阿尔茨海默氏病(AD)，包括特征在于丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)。

Description

治疗性疫苗

【技术领域】

本发明涉及在由淀粉样(amyloid)或类淀粉样(amyloid-like)蛋白引起或与之有关的疾病与病症的治疗上用于治疗及诊断用途的方法和组合物，所述疾病和病症包括淀粉样变(amyloidosis)，一组与淀粉样蛋白有关之病症和异常，如阿尔茨海默氏病。

【背景技术】

淀粉样变不是单一一种疾病实体，而是一组多样的进行性疾病，其特征在于细胞外组织沉积蜡样淀粉状蛋白质(称作淀粉样蛋白)，其堆积在一或多个器官或身体系统内。随着淀粉样蛋白沉积物的增多，它们开始干扰正常的器官或身体系统功能。有至少15种不同类型的淀粉样变。主要形式是没有已知的前因的原发性淀粉样变、出现在某些其它状况之后的继发性淀粉样变、以及遗传性淀粉样变。

继发性淀粉样变发生在患有慢性感染或炎症疾病的人中，如结核病、称作家族性地中海热的细菌感染、骨感染(骨髓炎)、类风湿性关节炎、小肠炎症(肉芽肿性回肠炎)、何杰金氏病和麻风。

淀粉样蛋白沉积物通常含有三种成分。淀粉样蛋白原纤维，其占淀粉样物质的大约90％，包含数种不同类型的蛋白质之一。这些蛋白质能够折叠成所谓的″β折叠″片原纤维——一种独特的蛋白质构型，该构型显示刚果红的结合位置，导致淀粉样蛋白的独特染色特征。此外，淀粉样蛋白沉积物与淀粉样蛋白P(五角形)成分(AP)(一种与正常血清淀粉样蛋白P(SAP)有关的糖蛋白)以及与硫酸化的糖胺聚糖(GAG)(结缔组织的复杂碳水化合物)紧密相关。

许多老年性疾病以类-淀粉样蛋白质为基础或与之有关，且特征一部分在于淀粉样蛋白或类-淀粉样蛋白物质的细胞外沉积物的堆积，其促成发病以及疾病的进展。这些疾病包括但不限于神经学的病症，如阿尔茨海默氏病(AD)，包括特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)、路易氏(Lewy)体痴呆、唐氏症(Down’s syndrome)、遗传性脑出血伴有淀粉样变(Dutch型)；Guam帕金森氏症-痴呆综合征。其它以类-淀粉样蛋白质为基础或与其有关的疾病为如进行性核上性麻痹；多发性硬化症；库贾氏症(Creutzfeld-Jacob disease)、帕金森氏症、与HIV有关的痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、成年型糖尿病；老年性心脏淀粉样变；内分泌肿瘤及包括黄斑变性之其它疾病或状况。

虽然这些疾病的发病机制可能是多样的，但其特征性的沉积物通常含有许多共有的分子组分。显然这可能归因于促-炎路径的局部活化，藉此导致被激活之补体成分、急性期反应物、免疫调节剂和其它炎症介质的同时沉积(McGeer等人，1994)。

阿尔茨海默氏病(AD)是一种神经学的病症，认为它主要是因淀粉样斑——异常的蛋白质沉积物堆积在脑中——而引起。在患病个体的脑中，最常发现的淀粉样蛋白类型主要是由Aβ原纤维所构成。科学证据证实了增加的β-淀粉样蛋白质的生产及其在斑块中的堆积将导致神经细胞死亡，这助成阿兹海默氏的发生和进展。在关键性脑区域中丧失神经细胞反过来将导致神经递质的减少和记忆的损害。主要负责组成斑块的蛋白质包括淀粉样蛋白前体蛋白质(APP)和两个早老蛋白(presenilins)(早老蛋白I和早老蛋白II)。顺序切割淀粉样蛋白前体蛋白质(APP)(其在大多数的细胞中组成性表达，并被酶β和γ分泌酶分解代谢)导致释放出39至43个氨基酸的Aβ肽。APPs的降解可能增加其聚集在斑块中的倾向。尤其是Aβ(1-42)片段，其具有形成聚集物的高度倾向，这是因为在其C-末端有两个极为疏水的氨基酸残基。因此，据相信Aβ(1-42)片段在阿尔茨海默氏病中主要参与并负责神经炎性斑形成的起始，并因此具有高度的致病潜力。因此需要可靶向并消除淀粉样斑形成的特异性抗体。

阿尔茨海默氏病的症状慢慢地显现，而第一个症状可能只是轻微的健忘。在此阶段，个体可能忘记最近的事件、活动、熟悉的人或事的名字，并可能无法解决简单的数学问题。当疾病进行时，症状将更容易被注意到，并成为严重的，足以使患有阿尔茨海默氏病的人或他们的家人寻求医疗协助。阿尔茨海默氏病的中期症状包括忘记如何做简单的事，如打扮，并发展出说、理解、读或写的问题。晚期的阿尔茨海默氏病的患者可能变得焦虑或具攻击性的，可能离家走失并且最后需要完全护理。

目前，唯一确诊阿尔茨海默氏病的方式是在个体死亡之后，在尸体解剖时在脑组织中确认斑块和缠结。因此，当人仍活着的时候，医生仅能做出″可能″或″或许″是阿尔茨海默氏病的诊断。使用现有的方法，通过数种工具诊断″可能的″阿尔茨海默氏病，医师可高达90％地正确诊断阿尔茨海默氏病。医师询问关于病人的一般健康状况、过去的医疗问题和病人进行每天活动有任何困难之病史的问题。对记忆、解决问题、注意力、计算和语言的行为测试，提供了认知退化的信息，而医学测试-如血液、尿液或脊髓液的测试，以及脑部扫描，则可提供某些进一步的信息。

阿尔茨海默氏病的管理由以医药-为基础的和以非-医药为基础的治疗组成。企图改变疾病潜在病程的治疗(延迟或逆转进程)，到目前为止大多是不成功的。已经证实使神经细胞之化学信使(神经递质)的缺陷或功能障碍恢复的药物，如胆碱酯酶抑制剂(ChEIs)，可以改善症状。亦可获得处理阿尔茨海默氏病之精神病表现的医药。

胆碱酯酶抑制剂，如塔克宁(Tacrine)和利伐司他敏(Rivastgmine)，是目前唯一一类被FDA核准用来治疗阿尔茨海默氏病的药剂。这些药剂是使脑中的化学神经传递方面的缺陷或功能障碍得以恢复的药物。ChEIs阻碍了神经递质的酶降解，藉此增加脑中可用来传送神经信号之化学信使的量。对疾病早期和中期的某些人而言，药物塔克宁(康内思(COGNEX)，Morris Plains，NJ)、多奈培齐(donepezil)(爱忆欣(ARICEPT)，Tokyo，JP)、利伐司他敏(忆思能(EXELON)，East Hanover，NJ)或加兰他敏(galantamine)(利忆灵(REMINYL)，New Brunswick，NJ)，可在有限的时间内帮助防止某些症状变得更糟。已经批准另一种药物，美金胺(memantine)(盐酸美金刚(Namenda)，New York，NY)用于治疗中等至严重的阿尔茨海默氏病。此外，有些药物可帮助控制阿尔茨海默氏病的行为症状，如失眠、不安、游荡、焦虑和抑郁。治疗这些症状通常使患者较舒适，并使照顾者较容易照顾他们。不幸的是，尽管明显的治疗进展显示这类药剂一致地优于安慰剂，但疾病仍持续进展，而对智力功能的平均影响只是适度的。ChEIs亦具有副作用，包括胃肠功能障碍、肝毒性和体重丧失。

希望在了解阿尔茨海默氏病中发生的脑异常上的进步，能为获得新治疗标靶提供构架，所述标靶将更集中在改变疾病之病程和发展上。正在积极地调查许多化合物，包括抗炎药。亦正在进行使用特异性环加氧酶抑制剂(COX-2)，如伟克适(rofecoxib)和希乐葆(celecoxib)的临床试验。

其它以类-淀粉样蛋白质之堆积和沉积为基础或与其有关的疾病是轻微的认知损伤、路易氏体痴呆(LBD)、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、包涵体肌炎(IBM)和黄斑变性，特别是与年龄有关的黄斑变性(AMD)。

轻微的认知损伤(MCI)是一个一般性术语，最常被定义为细微的，但可测量的记忆障碍。患有MCI的人体验到比正常随着老年化所预期的更大的记忆问题，但尚未显示出其它的痴呆症状，如受损的判断或推理。MCI是经常反映AD之临床前阶段的一种状况。

据相信β-淀粉样蛋白沉积在内嗅皮质(EC)内，在年长者轻微的认知损伤(MCI)的发展中，扮演关键性的角色。这跟在AD于临床上变得明显时观察到CSF-A Aβ(1-42)水平明显下降是相一致的。与CSF-Aβ(1-42)相反，在MCI阶段中CSF-tau水平明显增加，且这些值随后持续升高，表示CSF-tau的增加水平可能有助于检测预期将发展出AD的MCI个体。

路易氏体痴呆(LBD)是神经变性病症，可发生在65岁以上的人中，其典型地引起认知(思考)损伤的症状，以及异常的行为改变。症状可以包括认知损伤、神经学症候、睡眠失调和自主神经功能衰竭。认知损伤在大多数的情况下是LBD的呈现特征。患者周期性发生混淆，并进行性恶化。认知能力的波动通常与注意力和警惕性的变化程度有关。认知损伤和思维的波动，可能在数分钟、数小时或数天内改变。

路易氏体由磷酸化和非磷酸化的神经丝蛋白形成；其含有突触蛋白质α-突触核蛋白(synuclein)和泛素(参与消除受损或异常的蛋白质)。除了路易氏体之外，亦可能出现路易氏神经突，其是神经细胞之细胞突起中的包涵体。在受DLB所苦之患者的脑中，可能形成淀粉样斑，然而，其在数量上倾向于比在阿尔茨海默氏病患者中所看到的少。神经原纤维缠结，AD的另一个显微病理学特点，并不是DLB的主要特征，但除了淀粉样斑之外其也常常出现。

肌萎缩性侧索硬化(ALS)之特征为上下运动神经元的变性。在某些ALS患者中，可能出现痴呆或失语(ALS-D)。痴呆最常见的是额颞叶痴呆(FTD)，其中的许多病例在齿状回和额颞叶浅层之神经元中有泛素-阳性、tau-阴性的包涵体。

包涵体肌炎(IBM)是致残性疾病，通常在超过50岁的人中发现，其中肌纤维发生炎症，并开始萎缩——但其中不涉及脑部并且患者保留其全部的智能。在患有这种最常见的渐进性老年人肌肉疾病之患者的肌肉细胞内，发现两种涉及产生淀粉样-β蛋白的酶增加，其中淀粉样-β蛋白亦增加。

其它以类-淀粉样蛋白之堆积和沉积为基础或与其有关的疾病是黄斑变性。

黄斑变性是常见的眼睛疾病，其引起视网膜中央区之黄斑(像纸一样薄的组织，位于眼睛后部，在那里有感光细胞传送视觉信号至脑)的退化。由黄斑加工处理鲜明清晰、′向前′的影象。黄斑损伤导致盲点的发展，和模糊或扭曲的影象。在美国与年龄有关的黄斑变性(AMD)是视力损伤的主因，并且对于65岁以上的人而言其为白种人中法定盲的主因。大约180万年龄在40岁及以上的美国人患有晚期AMD，还有另外730万患有中间型AMD的人有丧失视力的实质性风险。政府估计到2020年，将有290万人罹患晚期AMD。AMD的受害者通常惊讶且受挫地发现，对于该盲眼状况的原因和治疗所知是那么少。

有两种形式的黄斑变性：干性黄斑变性和湿性黄斑变性。在黄斑变性的病例中有85％诊断为干性形式，其中黄斑的细胞慢慢地开始瓦解。两眼通常均受到干性AMD的影响，虽然一眼可能丧失视力，而另一眼尚未受到影响。玻璃疣(drusen)，是视网膜下的黄色沉积物，是干性AMD的常见早期症候。当玻璃疣的数目和尺寸增加时，增加发展成晚期干性AMD或湿性AMD的风险。干性AMD可能前进并导致视力丧失而不转变为湿性疾病；然而，早期的干性AMD亦可能突然变成湿性。

湿性AMD，虽然其仅占病例的15％，但导致90％的盲眼，被认为是晚期AMD(没有早期或中间阶段的湿性AMD)。湿性AMD总是在干性疾病之后。当干性形式恶化时，有些人开始在黄斑之后出现异常的血管生长。这些血管是非常脆弱的，并将漏出液体和血液(因此是′湿的′黄斑变性)，导致迅速损害黄斑。

干性AMD一开始常常引起轻微的视力模糊。然后，视力的中心尤其可能变得模糊，且随着疾病进展，该区域变得更大。若只有一只眼睛受到影响，可能注意不到任何症状。在湿性AMD中，直线可能表现为波状，并可能迅速出现中央视力的丧失。

黄斑变性的诊断典型地涉及散瞳眼睛检查，视敏度检测，和使用称作眼底镜检(fundoscropy)的程序检查眼底以帮助诊断AMD，以及-若怀疑湿性AMD-亦可进行荧光素血管造影术。若干性AMD达到晚期，目前没有方法可防止视力丧失。然而，特别高剂量的抗氧化剂和锌的制剂，可延迟或防止中间型AMD进行至晚期。马古根(Macugen)(哌加他尼钠(pegaptanib sodium)注射剂)、射光光凝术和光动力疗法可控制黄斑中异常的血管生长和出血，这对于患有湿性AMD的一些人有帮助；然而，不能藉这些技术恢复已经丧失的视力。若视力业已丧失，存在低视力辅助物可协助改善生活质量。

与年龄有关之黄斑变性(AMD)最早的征候之一是在视网膜色素上皮(RPE)之基底层和布鲁赫膜(BM)之间有称作玻璃疣之细胞外沉积物的堆积。由Anderson等人进行的最新研究，已经证实玻璃疣含有淀粉样β蛋白 (Experimental Eye Research 78(2004)243-256)。

正在进行中的研究继续研究探讨可能促成AMD的环境、遗传和饮食因素。亦正在探讨新的治疗策略，包括视网膜细胞移植、将防止或减慢疾病进程的药物、辐射疗法、基因疗法、植入视网膜中的计算机芯片(其可帮助刺激视力)，以及将防止新血管在黄斑下生长的药剂。

因此，需要有效的治疗性疫苗组合物以及方法用于处理与淀粉样变有关之并发症，一组与淀粉样斑形成有关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变和与年龄有关的淀粉样变，包括但不限于神经学的病症(如阿尔茨海默氏病(AD))，包括特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)、路易氏体痴呆、唐氏症、遗传性脑出血伴有淀粉样变(Dutch型)；Guam帕金森氏症-痴呆综合征；以及其它以类-淀粉样蛋白质为基础或与其有关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化症；库贾氏症、帕金森氏症、与HIV有关的痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、成年型糖尿病；老年性心脏淀粉样变；内分泌肿瘤及包括黄斑变性之其它疾病或状况。特别需要特异化的和高效的治疗性疫苗以及包括该疫苗的组合物，其能够消除疾病的生理学表现，如与淀粉样蛋白或类淀粉样肽之纤维聚集有关的斑块形成。

【发明内容】

本发明提供了在生物(特别是在动物，尤其是在哺乳动物或人类)中，引发高特异性和高效之免疫反应的新颖方法和组合物，其能够预防或减轻淀粉样变，或与淀粉样变有关之症状，所述淀粉性变性为与淀粉样斑形成有关的一组疾病和病症，包括继发性淀粉样变和与年龄有关的淀粉样变，包括但不限于神经学的病症(如阿尔茨海默氏病(AD))，包括特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)、路易氏体痴呆、唐氏症、遗传性脑出血伴有淀粉样变(Dutch型)；Guam帕金森氏症-痴呆综合征；以及其它以类-淀粉样蛋白质为基础或与之有关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化症；库贾氏症、帕金森氏症、与HIV有关的痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、成年型糖尿病；老年性心脏淀粉样变；内分泌肿瘤及包括黄斑变性之其它疾病或状况。

特别地，本发明提供在表现出与淀粉样蛋白有关之疾病或状况的哺乳动物中，保持或改善(特别是恢复，更特别是完全恢复)认知记忆能力的新颖方法和组合物。

本发明的一个目的是提供治疗性疫苗组合物，以及产生这类组合物的方法，所述组合物用来治疗由淀粉样蛋白或类-淀粉样蛋白引起或与之有关的疾病和病症，包括淀粉样变，与淀粉样斑形成有关的一组疾病和病症，包括继发性淀粉样变和与年龄有关的淀粉样变，包括但不限于神经学的病症(如阿尔茨海默氏病(AD))，特别是特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)，其中所述组合物包含来自Aβ肽之N-端部分的肽片段，特别是由Aβ肽之N-端部分之13至15个连续氨基酸残基的单一或重复序列片段所组成的Aβ肽片段，且特别是由选自Aβ肽之N-端部分之残基1-15、1-14和1-13的氨基酸残基所组成的Aβ肽片段，更特别的是SEQID NO：1所示之残基1-15，包括其功能等效物，尤其是连接或并入例如脂质体之载体颗粒/佐剂，或在其中重构的此前提及的Aβ肽片段。

该连续的13至15个氨基酸残基的序列片段可由Aβ肽的N-端片段1-16、1-17、1-18或1-20获得，特别是获自分别在SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：5中所示的Aβ肽之N-端1-16或1-17片段，且其可通过缺失一至三个氨基酸残基而被打断从而产生13至15个氨基酸残基的序列片段，其中该缺失的氨基酸残基可以是邻接的氨基酸残基或彼此被至少1个氨基酸残基分开的残基，特别是若期望该抗原肽分子之整体净电荷是负的，则该缺失之氨基酸残基为不带负电荷之残基，或若期望该抗原肽分子之整体净电荷是正的，则该氨基酸残基为不带正电荷的残基。根据本发明，该13至15个氨基酸残基的连续序列片段可在抗原构建体中重复2至50次，特别是2至30次，更特别的是在2至20次之间，再更特别的是在2至16次之间，尤其是2至10次。

在本发明一个实施方案中，13至15个氨基酸残基的该连续序列片段是以聚合物之形式使用的，所述聚合物选自2-聚体、3-聚体、4-聚体、5-聚体、6-聚体、7-聚体、8-聚体、9-聚体、10-聚体、11-聚体、12-聚体、13-聚体、 14-聚体、15-聚体、16-聚体、20-聚体、30-聚体和50-聚体。

在另一实施方案中，本发明提供治疗疾病和病症之治疗性疫苗组合物及产生这类组合物的方法，该疾病或病症由淀粉样蛋白或类-淀粉样蛋白引起或与之有关，包括淀粉样变，一组与淀粉样斑形成有关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变和与年龄有关的淀粉样变，包括但不限于神经学的病症(如阿尔茨海默氏病(AD))，特别是特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)(见下文中进一步详述)，所述组合物和方法使用来自Aβ肽之N-端部分的Aβ肽片段，特别是由选自1-15、2-15、3-15、1-14、2-14、1-13；1-16(Δ2)、1-16(Δ4)、1-16(Δ5)、1-16(Δ6)、1-16(Δ8)、1-16(Δ9)、1-16(Δ10)；1-16(Δ12)、16(Δ13)、16(Δ14)、1-16(Δ15)、1-15(Δ2)、1-15(Δ4)、1-15(Δ5)、1-15(Δ6)、1-15(Δ8)、1-15(Δ9)、1-15(Δ10)；1-15(Δ12)、15(Δ13)、15(Δ14)的氨基酸残基组成的Aβ肽片段，更特别的是由SEQ ID NO：1所示之氨基酸残基1-15，以及SEQ ID NO：3所示之氨基酸残基1-16(Δ14)所组成的Aβ肽片段。

本发明亦包括与上文提及之片段基本上相同且具有与该片段实质上相同的生物活性的肽片段，特别是作为该片段之保守修饰变体的肽片段，其中的改变导致以在化学上类似的氨基酸置换一或多个氨基酸，特别是1至10个氨基酸，更特别是1至6个氨基酸，再更特别的是1至4个氨基酸，尤其是1至3个氨基酸。保守性置换表提供了功能类似之氨基酸，其是本领域熟知的，并在下文中描述。保守性置换优选以肽之整体净电荷还有肽分子上的电荷分布基本上保持不变的方式进行。

在本发明的一个实施方案中，可利用在化学上类似的带负电荷氨基酸置换带负电荷氨基酸残基1、3、7、11中的至少一个，特别是2个，更特别的是3个或甚至所有。特别地，可以用Glu分别置换在位置1和7处的Asp，以及可以用Asp分别置换在位置9和11处的Glu。

在本发明特定的一个实施方案中，提供治疗性疫苗组合物和产生这类组合物的方法，所述组合物包含来自Aβ肽之N-端部分的Aβ肽片段，特别是由选自1-15、2-15、3-15、1-14、2-14、1-13；1-16(Δ2)、1-16(Δ4)、1-16(Δ5)、 1-16(Δ6)、1-16(Δ8)、1-16(Δ9)、1-16(Δ10)；1-16(Δ12)、16(Δ13)、16(Δ14)、1-16(Δ15)、1-15(Δ2)、1-15(Δ4)、1-15(Δ5)、1-15(Δ6)、1-15(Δ8)、1-15(Δ9)、1-15(Δ10)；1-15(Δ12)、15(Δ13)、15(Δ14)的氨基酸残基所组成的Aβ肽片段，Aβ_1-16(Δ15)肽抗原，更特别的是Aβ_1-16(Δ14)或Aβ_1-16(Δ13)肽抗原，再更特别的是Aβ_1-14肽抗原，特别是Aβ_1-15肽抗原，尤其是由在SEQ ID NO：1中所示之氨基酸残基1-15和在SEQ ID NO：3中所示之氨基酸残基1-16(Δ14)所组成的Aβ肽片段，所述组合物用于治疗由淀粉样蛋白或类-淀粉样蛋白引起或与之有关的疾病和病症，包括淀粉样变，一组与淀粉样斑形成有关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变和与年龄有关的淀粉样变，包括但不限于神经学的病症(如阿尔茨海默氏病(AD))，特别是特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况(例如轻微的认知损伤(MCI))。

在本发明特定的一个实施方案中，提供治疗性疫苗组合物以及产生治疗性疫苗组合物的方法，用于保持或改善，特别是完全恢复罹患记忆损伤之动物，特别是哺乳动物或人类的认知记忆能力，所述组合物和方法使用来自Aβ肽之N-端部分的Aβ肽片段，特别是由选自1-15、2-15、3-15、1-14、2-14、1-13；1-16(Δ2)、1-16(Δ4)、1-16(Δ5)、1-16(Δ6)、1-16(Δ8)、1-16(Δ9)、1-16(Δ10)；1-16(Δ12)、16(Δ13)、16(Δ14)、1-16(Δ15)、1-15(Δ2)、1-15(Δ4)、1-15(Δ5)、1-15(Δ6)、1-15(Δ8)、1-15(Δ9)、1-15(Δ10)；1-15(Δ12)、15(Δ13)、15(Δ14)的氨基酸残基所组成的Aβ肽片段，特别是Aβ_1-16(Δ15)肽抗原，更特别的是Aβ_1-16(Δ14)或Aβ_1-16(Δ13)肽抗原，再更特别的是Aβ_1-14肽抗原，特别是Aβ_1-15 肽抗原，尤其是由在SEQ ID NO：1中提供之氨基酸残基1-15和在SEQ IDNO：3中提供之氨基酸残基1-16(Δ14)所组成的Aβ肽片段。

本发明的再一目的是提供通过对动物，特别是哺乳动物或人类，施用根据本发明并如同本文中描述之疫苗组合物而治疗由淀粉样蛋白或类-淀粉样蛋白引起或与之有关的疾病和病症的方法，所述疾病或病症包括淀粉样变，一组与淀粉样斑形成有关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变和与年龄有关的淀粉样变，包括但不限于神经学的病症(如阿尔茨海默氏病(AD))，特别是特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况(例如轻微的认知损伤(MCI))。

在本发明特定的一个实施方案中，提供通过对动物，特别是哺乳动物或人类，施用根据本发明并如同本文中描述之疫苗组合物，保持或增加罹患记忆损伤之动物，特别是哺乳动物或人类的认知记忆能力，特别是完全恢复认知记忆能力的方法。

本发明再一目的是使用根据本发明并如同本前文中描述之Aβ肽抗原，提供治疗性疫苗组合物和产生这类组合物的方法，以及治疗由淀粉样蛋白或类-淀粉样蛋白引起或与之有关的疾病和病症的方法，其中所述疾病和病症包括淀粉样变，一组与淀粉样斑形成有关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变和与年龄有关的淀粉样变，包括但不限于神经学的病症(如阿尔茨海默氏病(AD))，特别是特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况(例如轻微的认知损伤(MCI))，其中所述Aβ肽抗原特别是来自Aβ肽之N-端部分的Aβ肽片段，特别是由选自1-15、2-15、3-15、1-14、2-14、1-13；1-16(Δ2)、1-16(Δ4)、1-16(Δ5)、1-16(Δ6)、1-16(Δ8)、1-16(Δ9)、1-16(Δ10)；1-16(Δ12)、16(Δ13)、16(Δ14)、1-16(Δ15)、1-15(Δ2)、1-15(Δ4)、1-15(Δ5)、1-15(Δ6)、1-15(Δ8)、1-15(Δ9)、1-15(Δ10)；1-15(Δ12)、15(Δ13)、15(Δ14)的氨基酸残基所组成之Aβ肽片段，特别是Aβ_1-16(Δ15)肽抗原，更特别的是Aβ_1-16(Δ14)或Aβ_1-16(Δ13)肽抗原，再更特别的是Aβ_1-14肽抗原，特别是Aβ_1-15肽抗原，尤其是由在SEQ IDNO：1中提供之氨基酸残基1-15和在SEQ ID NO：3中提供之氨基酸残基1-16(Δ14)所组成的Aβ肽片段，其中所述Aβ肽抗原是经修饰的，其中所述修饰使其能够维持并稳定特征在于具有平衡比例的α-螺旋及/或β-片层及/或无规卷曲部分的确定构象，并能够在所处理的动物中诱导高特异性的免疫反应。

根据本发明并如同在前文中描述的疫苗组合物，当施用给动物，特别是哺乳动物，尤其是人类时，主要产生非炎症性Th2亚型的抗体，例如IgG1和IgG2b同种型，及/或独立于T-细胞的IgG亚型的抗体，例如IgG3，并且/或在脑中不引起炎症标记物明显增加，特别是选自IL-1β、IL-6、IFN-γ和TNFα的炎症标记物。

在本发明的再一具体实施方案中，根据本发明并如同前文中描述的疫苗，当施用给动物，特别是哺乳动物，尤其是人类时，在脑中引起不溶性、斑块-相关之Aβ1-40和Aβ1-42的明显降低。

在本发明的再一实施方案中，根据本发明并如同前文中描述的疫苗，当施用给动物，特别是哺乳动物，尤其是人类时，在脑中导致可溶性Aβ1-42水平的明显降低。

还提供根据本发明并如同前文中描述的疫苗，其当施用给罹患与淀粉样蛋白有关之状况(特征为丧失认知记忆能力)的动物，特别是哺乳动物或人类时，引起认知记忆能力保持的增加。本发明还涉及根据本发明并如同前文中描述的疫苗，其当施用给罹患与淀粉样蛋白有关之状况(特征为丧失认知记忆能力)的动物，特别是哺乳动物或人类时，导致认知记忆能力的完全恢复。

特别地，根据本发明并如同前文中描述之Aβ肽抗原，特别是得自Aβ肽之N-端部分的Aβ肽片段，特别是由选自1-15、2-15、3-15、1-14、2-14、1-13；1-16(Δ2)、1-16(Δ4)、1-16(Δ5)、1-16(Δ6)、1-16(Δ8)、1-16(Δ9)、1-16(Δ10)；1-16(Δ12)、16(Δ13)、16(Δ14)、1-16(Δ15)、1-15(Δ2)、1-15(Δ4)、1-15(Δ5)、1-15(Δ6)、1-15(Δ8)、1-15(Δ9)、1-15(Δ10)；1-15(Δ12)、15(Δ13)、15(Δ14)的氨基酸残基所组成的Aβ肽片段，特别是Aβ_1-16(Δ15)肽抗原，更特别的是Aβ_1-16(Δ14)或Aβ_1-16(Δ13)肽抗原，再更特别的是Aβ_1-14肽抗原，特别是Aβ_1-15肽抗原，尤其是由在SEQ ID NO：1中提供之氨基酸残基1-15和在SEQ IDNO：3中提供之氨基酸残基1-16(Δ14)所组成的Aβ肽片段，结合于载体上，或并入载体中，或在载体中重构，其中该载体为例如小泡、颗粒体或分子，特别是脂质体。

本发明之免疫原性组合物可包含脂质体，其通过在根据本发明之经纯化或部分经纯化或经修饰之抗原肽的存在下重构脂质体来制造。此外，可将肽片段重构于脂质体内。本发明亦包括经修饰而得以增加其抗原性之抗原肽片段。例如，可将抗原性部分和佐剂与肽连接，或与肽混合。抗原性部分和佐剂的实例，包括但不限于亲脂性的胞壁酰二肽衍生物、非离子性嵌段聚合物、氢氧化铝或磷酸铝佐剂，及其混合物。

在本发明的另一实施方案中，借着有助于插入脂质体载体/免疫佐剂的脂双层内的亲脂性或疏水性部分，修饰根据本发明并如同前文中描述之Aβ肽抗原，特别是得自Aβ肽之N-端部分的Aβ肽片段，特别是由选自1-15、2-15、3-15、1-14、2-14、1-13；1-16(Δ2)、1-16(Δ4)、1-16(Δ5)、1-16(Δ6)、1-16(Δ8)、1-16(Δ9)、1-16(Δ10)；1-16(Δ12)、16(Δ13)、16(Δ14)、1-16(Δ15)、1-15(Δ2)、1-15(Δ4)、1-15(Δ5)、1-15(Δ6)、1-15(Δ8)、1-15(Δ9)、1-15(Δ10)；1-15(Δ12)、15(Δ13)、15(Δ14)的氨基酸残基所组成的Aβ肽片段，特别是Aβ_1-16(Δ15)肽抗原，更特别的是Aβ_1-16(Δ14)或Aβ_1-16(Δ13)肽抗原，再更特别的是Aβ_1-14肽抗原，特别是Aβ_1-15肽抗原，尤其是由在SEQ ID NO：1中提供之氨基酸残基1-15和在SEQ ID NO：3中提供之氨基酸残基1-16(Δ14)所组成的Aβ肽片段，其中所述亲脂性或疏水性部分特别是如下亲脂性或疏水性部分，其作为将肽锚定在脂质体双层中的锚起作用，并具有导致肽在紧靠脂质体表面的位置上定位并稳定的尺寸。

在本发明再一实施方案中，亲脂性或疏水性部分是脂肪酸、甘油三酯或磷脂，尤其是其中脂肪酸的碳主链具有至少10个碳原子的脂肪酸、甘油三酯或磷脂。特别地，亲脂性或疏水性部分是碳主链至少有大约14个碳原子且不超过大约24个碳原子的脂肪酸，其中落入此范围的每个碳原子数目亦属于本发明之一部分。更特别地，亲脂性或疏水性部分具有至少14个碳原子，尤其是16个碳原子的碳主链。疏水性部分的实例，包括但不限于棕榈酸、硬脂酸、肉荳蔻酸、月桂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸。在本发明一个实施方案中，该亲脂性或疏水性部分是棕榈酸。

在本发明再一实施方案中，该疏水性部分是棕榈酸，且脂质体制备物可额外含有佐剂，例如脂质A、明矾、磷酸钙、白介素1及/或多糖类和蛋白质的微囊，特别是去毒的脂质A，如单磷酰或二磷酰脂质A或明矾。

本发明的再一目的是提供使用根据本发明并如同前文中描述之免疫原性抗原肽的治疗性疫苗组合物以及产生这类组合物的方法，所述组合物用于治疗由淀粉样蛋白或类-淀粉样蛋白引起或与其有关的疾病和病症，包括淀粉样变，一组与淀粉样斑形成有关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变和与年龄有关的淀粉样变，包括但不限于神经学的病症(如阿尔茨海默氏病(AD))，特别是用于保持、增加或恢复罹患记忆损伤之动物，特别是哺乳动物或人类的认知记忆能力；并提供治疗所述淀粉样变的方法，其中β-淀粉样肽抗原是在脂质体中重构的根据本发明并如同前文中描述之棕榈酰化的Aβ肽抗原，特别是得自Aβ肽之N-端部分的棕榈酰基化之Aβ肽片段，特别是由选自1-15、2-15、3-15、1-14、2-14、1-13；1-16(Δ2)、1-16(Δ4)、1-16(Δ5)、1-16(Δ6)、1-16(Δ8)、1-16(Δ9)、1-16(Δ10)；1-16(Δ12)、16(Δ13)、16(Δ14)、1-16(Δ15)、1-15(Δ2)、1-15(Δ4)、1-15(Δ5)、1-15(Δ6)、1-15(Δ8)、1-15(Δ9)、1-15(Δ10)；1-15(Δ12)、15(Δ13)、15(Δ14)的氨基酸残基组成之棕榈酰基化的Aβ肽片段，特别是棕榈酰基化的Aβ_1-16(Δ15)肽抗原，更特别的是棕榈酰基化的Aβ_1-16(Δ14)或Aβ_1-16(Δ13)肽抗原，再更特别的是棕榈酰基化的Aβ_1-14肽抗原，特别是棕榈酰基化的Aβ_1-15肽抗原，尤其是由在SEQ ID NO：1中提供之氨基酸残基1-15和在SEQ ID NO：3中提供之氨基酸残基1-16(Δ14)所组成的棕榈酰基化之Aβ肽片段，其借着共价连接棕榈酰基残基，特别是2至4个棕榈酰基残基，更特别的是4个棕榈酰基残基而修饰，其中所述棕榈酰基残基经由一或多个，特别是经由一或两个适宜的氨基酸残基，如赖氨酸、谷氨酸或半胱氨酸，或任何其它适用于偶联棕榈酰基残基与抗原肽的氨基酸残基，分别与肽抗原的每一端偶联。

在本发明一个实施方案中，在单一的脂质体中重构通过在肽每一端共价连接棕榈酰基残基而修饰的2或多个棕榈酰基化之Aβ肽抗原分子。

本发明提供新颖方法和包含免疫原性抗原肽的免疫原性组合物，当施用给罹患与淀粉样蛋白有关之状况，特别是特征为丧失认知记忆能力的状况，例如轻微的认知损伤(MCI)的动物，特别是哺乳动物或人类时，所述组合物在该动物或人类中诱导免疫反应。利用根据本发明之治疗性疫苗的治疗，导致保持或增加认知记忆能力，特别是完全恢复认知记忆能力。

本发明的另一目的是提供治疗性疫苗组合物和使用免疫原性抗原肽产生这类组合物的方法，所组合物用于在动物，特别是哺乳动物或人类中诱导免疫反应；并提供借着对动物或人类施用治疗性疫苗组合物(其包含根据本发明并如同前文中描述之Aβ肽抗原，特别是得自Aβ肽之N-端部分的棕榈酰基化之Aβ肽片段，特别是由选自1-15、2-15、3-15、1-14、2-14、1-13；1-16(Δ2)、1-16(Δ4)、1-16(Δ5)、1-16(Δ6)、1-16(Δ8)、1-16(Δ9)、1-16(Δ10)；1-16(Δ12)、16(Δ13)、16(Δ14)、1-16(Δ15)、1-15(Δ2)、1-15(Δ4)、1-15(Δ5)、1-15(Δ6)、1-15(Δ8)、1-15(Δ9)、1-15(Δ10)；1-15(Δ12)、15(Δ13)、15(Δ14)的氨基酸残基所组成的棕榈酰基化之Aβ肽片段，特别是棕榈酰基化的Aβ_1-16(Δ15)肽抗原，更特别的是棕榈酰基化的Aβ_1-16(Δ14)或Aβ_1-16(Δ13)肽抗原，再更特别的是棕榈酰基化的Aβ_1-14肽抗原，特别是棕榈酰基化的Aβ_1-15肽抗原，尤其是由在SEQ ID NO：1中提供之氨基酸残基1-15和在SEQ ID NO：3中提供之氨基酸残基1-16(Δ14)所组成的棕榈酰基化之Aβ肽片段)，在该动物，特别是哺乳动物或人类中诱导免疫反应的方法，其中所述动物或人类患有与淀粉样蛋白有关并且特征为丧失认知记忆能力之状况，例如轻微的认知损伤(MCI)，该免疫反应的诱导使得可以保持或增加，特别是完全恢复经治疗的动物或人类的认知记忆能力。

如同前文中描述之抗原肽，特别是得自Aβ肽之N-端部分的Aβ肽片段，特别是由选自1-15、2-15、3-15、1-14、2-14、1-13；1-16(Δ2)、1-16(Δ4)、1-16(Δ5)、1-16(Δ6)、1-16(Δ8)、1-16(Δ9)、1-16(Δ10)；1-16(Δ12)、16(Δ13)、16(Δ14)、1-16(Δ15)、1-15(Δ2)、1-15(Δ4)、1-15(Δ5)、1-15(Δ6)、1-15(Δ8)、1-15(Δ9)、1-15(Δ10)；1-15(Δ12)、15(Δ13)、15(Δ14)的氨基酸残基所组成的Aβ肽片段，特别是Aβ_1-16(Δ15)肽抗原，更特别的是Aβ_1-16(Δ14)或Aβ_1-16(Δ13)肽抗原，再更特别的是Aβ_1-14肽抗原，特别是Aβ_1-15肽抗原，尤其是由在SEQ IDNO：1中提供之氨基酸残基1-15和在SEQ ID NO：3中提供之氨基酸残基1-16(Δ14)所组成的Aβ肽片段，亦为本发明的一部分。

亦作为本发明的一部分的是根据本发明并如同前文中描述之棕榈酰基化的Aβ肽抗原，特别是得自Aβ肽之N-端部分的棕榈酰基化之Aβ肽片段，特别是由选自1-15、2-15、3-15、1-14、2-14、1-13；1-16(Δ2)、1-16(Δ4)、1-16(Δ5)、1-16(Δ6)、1-16(Δ8)、1-16(Δ9)、1-16(Δ10)；1-16(Δ12)、16(Δ13)、 16(Δ14)、1-16(Δ15)、1-15(Δ2)、1-15(Δ4)、1-15(Δ5)、1-15(Δ6)、1-15(Δ8)、1-15(Δ9)、1-15(Δ10)；1-15(Δ12)、15(Δ13)、15(Δ14)的氨基酸残基所组成的棕榈酰基化之Aβ肽片段，特别是棕榈酰基化的Aβ_1-16(Δ15)肽抗原，更特别的是棕榈酰基化的Aβ_1-16(Δ14)或Aβ_1-16(Δ13)肽抗原，再更特别的是棕榈酰基化的Aβ_1-14肽抗原，特别是棕榈酰基化的Aβ_1-15肽抗原，尤其是由在SEQ ID NO：1中所示之氨基酸残基1-15和在SEQ ID NO：3中所示之氨基酸残基1-16(Δ14)所组成的棕榈酰基化之Aβ肽片段，所述肽抗原着共价连接棕榈酰基残基，特别是2至4个棕榈酰基残基，更特别的是4个棕榈酰基残基而修饰，其中所述棕榈酰基残基经由一或多个，特别是经由一或两个适宜的氨基酸残基，如赖氨酸、谷氨酸或半胱氨酸，或任何其它适用于偶联棕榈酰基残基与抗原肽的氨基酸残基，分别与肽抗原的每一端偶联。

在本发明一个具体实施方案中，在单一的脂质体中重构2或多个借着在肽的每端共价连接棕榈酰基残基而修饰的棕榈酰基化之Aβ肽抗原分子。

本发明还包括如同前文中描述的与载体连接或并入载体中或在其中重构的抗原肽，所述载体为例如小泡、颗粒体或分子，特别是脂质体，特别是表现为与载体连接或并入载体中或在载体中重构的得自Aβ肽之N-端部分的Aβ肽片段，特别是由选自1-15、2-15、3-15、1-14、2-14、1-13；1-16(Δ2)、1-16(Δ4)、1-16(Δ5)、1-16(Δ6)、1-16(Δ8)、1-16(Δ9)、1-16(Δ10)；1-16(Δ12)、16(Δ13)、16(Δ14)、1-16(Δ15)、1-15(Δ2)、1-15(Δ4)、1-15(Δ5)、1-15(Δ6)、1-15(Δ8)、1-15(Δ9)、1-15(Δ10)；1-15(Δ12)、15(Δ13)、15(Δ14)的氨基酸残基所组成的Aβ肽片段，特别是Aβ_1-16(Δ15)肽抗原，更特别的是Aβ_1-16(Δ14)或Aβ_1-16(Δ13)肽抗原，再更特别的是Aβ_1-14肽抗原，特别是Aβ_1-15肽抗原，尤其是由在SEQ ID NO：1中提供之氨基酸残基1-15和在SEQ ID NO：3中提供之氨基酸残基1-16(Δ14)所组成的Aβ肽片段，其中所述载体为例如如同前文中描述之小泡、颗粒体或分子。

不旨在受特定的理论的束缚，合理地推测，由本发明之治疗性疫苗组合物诱导的免疫反应可在动物或人类中导致针对免疫原性剂的T-细胞及其它反应性免疫细胞受到刺激，特别是导致产生高特异性和高效的抗体，所述抗体能够特异地识别并结合来自一系列β-淀粉样蛋白抗原之特定表位，该抗体当与抗原结合时在所治疗之动物或人类中介导及/或诱导可观察到的保持、增加且特别是完全恢复认知记忆能力的效应。

本发明还提供疫苗组合物，当将其施用给动物，特别是哺乳动物或人类时，在所治疗之动物或人类中诱导抗体的产生，其中所述抗体通过靶向并特异地结合位于β-淀粉样蛋白之表位区中的表位(特别是限于氨基酸残基aa_n-aa_m内的Aβ多肽之表位区，其中n是2至15之间的整数，特别是5至15之间，更特别的是8至15之间，再更特别的是10至15之间的整数，且m是3至17之间的整数，特别是6至17之间，更特别的是9至17之间，再更特别的是11至17之间的整数，其中n和m不能是相同的数目，且n必须总是为比m小的数目，而且n和m之间的差异≥2)，直接且特异地结合β-淀粉样蛋白纤维，例如包含Aβ单体肽1-39；1-40、1-41、1-42或1-43的纤维，特别是包含Aβ_1-42单体肽的纤维，并/或能够诱导预先形成的高分子聚合物淀粉样蛋白原纤维或丝的溶解，所述高分子聚合物借着淀粉样蛋白单体肽，特别是β-淀粉样蛋白单体肽，例如Aβ单体肽1-39；1-40、1-41、1-42或1-43，尤其是Aβ_1-42单体肽的聚集而形成。

在本发明一个实施方案中，抗体与在包含氨基酸残基1-10，特别是氨基酸残基1-9的β-淀粉样蛋白之表位区内的表位结合。

所述抗体亦特异地结合可溶性淀粉样蛋白单体和寡聚体肽，特别是选自Aβ肽1-39；1-40、1-41、1-42或1-43，尤其是Aβ_1-42的β-淀粉样蛋白单体或寡聚体肽，并抑制Aβ单体或寡聚体聚集成高分子聚合物原纤维。

在再一实施方案中，本发明提供抗体，特别是单克隆抗体，包括其任何功能等效抗体或功能部分，所述抗体具有至少一种选自抑制聚集、解聚作用、诱导构象转换、识别及直接结合处于4-16区中，特别是1-9区中的表位的特性，尤其是二或二种以上所述该特性的组合。更特别地，提供抗体，特别是单克隆抗体，包括其任何功能等效抗体或功能部分，所述抗体显示对1-16和29-40区的组合反应性(更特别的是对1-16和22-35区)，即它能够识别并结合两个所述区域，分别是1-16和29-40区或1-16和22-35区，并具有至少一种在前文中提及的特性，即抑制聚集、解聚、诱导构象转换，特别是二或二种以上的所述特性。

被根据本发明之疫苗组合物诱导并可从免疫接种之动物或产生抗体之杂交瘤细胞系中获得的抗体，亦为本发明的一部分。

在一个实施方案中，本发明提供抗体(包括其任何功能等效抗体或功能部分)，特别是单克隆抗体(包括其任何功能等效抗体或功能部分)，其可通过以根据本发明并如同前文描述之疫苗组合物，特别是包含Aβ_1-16(Δ15)肽抗原，更特别的是Aβ_1-16(Δ14)或Aβ_1-16(Δ13)肽抗原，再更特别的是Aβ_1-14肽抗原，尤其是Aβ_1-15肽抗原的疫苗组合物，免疫适当的动物而获得，其中所述抗体是双功能抗体，并且当与淀粉样蛋白单体肽，特别是β-淀粉样蛋白单体肽，例如Aβ单体肽1-38、1-39；1-40、1-41、1-42或1-43，尤其是Aβ_1-42单体肽共同孵育时，抑制Aβ单体聚集成高分子聚合物原纤维，此外，当与预先形成之高分子聚合物淀粉样蛋白原纤维或丝(其由淀粉样蛋白单体肽，特别是β-淀粉样蛋白单体肽，例如Aβ单体肽1-38、1-39；1-40、1-41、1-42或1-43，尤其是Aβ_1-42单体肽的聚集而形成)共同孵育时，能够使预先形成的聚合物原纤维或丝解聚。

在一个具体实施方案中，本发明提供对Aβ1-42单体肽显示出高度特异性，但对Aβ_1-38、Aβ_1-39、Aβ_1-40及/或Aβ_1-41单体肽基本上不显示或仅显示很小的交叉-反应性的抗体，特别是双功能抗体，尤其是单克隆抗体，特别是双功能单克隆抗体，包括其任何功能等效抗体或其功能部分；特别是如下抗体，尤其是单克隆抗体，包括其任何功能等效抗体或其功能部分，其中与Aβ_1-38、Aβ_1-39、Aβ_1-40、Aβ_1-41相比较，该抗体对淀粉样蛋白肽Aβ_1-42的敏感性高多达100倍，特别是50至100倍，更特别的是80至100倍，尤其是100倍，且与Aβ_1-38相比较，该抗体对淀粉样蛋白肽Aβ_1-42的敏感性高多达1000倍，特别是500至1000倍，更特别的是800至1000倍，尤其是1000倍，并因此能够在体外及在体内抑制促淀粉样变(amyloidogenic)单体肽，尤其是淀粉样蛋白肽Aβ_1-42的聚集。

在本发明另一实施方案中，抗体，特别是双功能抗体，尤其是单克隆抗体，特别是双功能单克隆抗体，包括其任何功能等效抗体或其功能部分，对淀粉样蛋白肽Aβ_1-42具有高结合敏感性，并能够检测浓度低至至少0.001微克的Aβ_1-42纤维，特别是在0.5微克至0.001微克之间的浓度范围内，更特别的是在0.1微克到0.001微克之间，尤其是0.001微克的浓度。

在本发明极特别的一个实施方案中，提供抗体，特别是单克隆抗体，包括其任何功能等效抗体或其功能部分，所述抗体能够检测出低至最低浓度0.001微克之Aβ_1-42纤维，和低至最低浓度0.1微克之Aβ_1-40纤维，以及低至最低浓度1微克之Aβ_1-38纤维。

根据本发明并如同前文描述之抗体与促淀粉样变单体肽，特别是淀粉样蛋白形式(1-42)的结合，导致抑制促淀粉样变肽单体聚集成高分子原纤维或丝。经由抑制促淀粉样变单体肽的聚集，根据本发明之抗体能够防止或减缓淀粉样斑的形成，特别是淀粉样形式(1-42)(已知其借着改变构象而变成不可溶的，且为在患病动物或人类之脑中淀粉样斑的主要部分)。

在一个特定实施方案中，本发明涉及单克隆抗体，包括其任何功能等效抗体或其功能部分，所述抗体具有由在2005年12月8日以DSM ACC2756保藏之杂交瘤细胞系EJ 7H3产生之抗体的特征性性质。

更特别地，本发明涉及由在2005年12月8日以DSM ACC2756保藏之杂交瘤细胞系EJ 7H3产生的单克隆抗体，包括其任何功能等效抗体或其功能部分。

本发明的再一目的是提供通过对受如下病症侵袭并因此需要治疗之动物，特别是哺乳动物或人类，施用根据本发明之超分子抗原构建体，预防、治疗或减轻淀粉样变的影响的方法，所述方法通过特别是包含本发明的超分子抗原构建体的疫苗组合物而进行，其中所述淀粉样变为一组与淀粉样斑形成有关的疾病或病症，包括继发性淀粉样变，以及与年龄有关之淀粉样变，包括但不限于神经学的病症(如阿尔茨海默氏病(AD))，包括特征在于丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)、路易氏体痴呆、唐氏症、遗传性脑出血伴有淀粉样变(Dutch型)；Guam帕金森氏症-痴呆综合征；以及其它以类-淀粉样蛋白质为基础或与其有关的疾病，如进行性核上性麻痹；多发性硬化症；库贾氏症、帕金森氏症、与HIV有关的痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、成年型糖尿病；老年性心脏淀粉样变；内分泌肿瘤及包括黄斑变性之其它疾病或状况，特别是特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)。

在本发明另一实施方案中，提供制备疫苗组合物的方法，该疫苗组合物可用于在生物，特别是受如下病症、疾病或状况侵袭并因此需要治疗之动物或人类中诱导免疫反应，用于预防、治疗或减轻淀粉样变(一组与淀粉样斑形成有关的疾病或病症，包括继发性淀粉样变，以及与年龄有关之淀粉样变，包括但不限于神经学的病症(如阿尔茨海默氏病(AD))，包括特征在于丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)、路易氏体痴呆、唐氏症、遗传性脑出血伴有淀粉样变(Dutch型)；Guam帕金森氏症-痴呆综合征；以及其它以类-淀粉样蛋白质为基础或与其有关的疾病，如进行性核上性麻痹；多发性硬化症；库贾氏症、帕金森氏症、与HIV有关的痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、成年型糖尿病；老年性心脏淀粉样变；内分泌肿瘤及包括黄斑变性之其它疾病或状况，特别是特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI))之影响。

因此，在本发明再一实施方案中，提供制备治疗性疫苗组合物的方法，所述组合物用于预防、治疗或减轻淀粉样变的影响，所述淀粉样变为一组与淀粉样斑形成有关的疾病或病症，包括继发性淀粉样变，以及与年龄有关之淀粉样变，包括但不限于神经学的病症(如阿尔茨海默氏病(AD))，包括特征在于丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)、路易氏体痴呆、唐氏症、遗传性脑出血伴有淀粉样变(Dutch型)；Guam帕金森氏症-痴呆综合征；以及其它以类-淀粉样蛋白质为基础或与其有关的疾病，如进行性核上性麻痹；多发性硬化症；库贾氏症、帕金森氏症、与HIV有关的痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、成年型糖尿病；老年性心脏淀粉样变；内分泌肿瘤及包括黄斑变性之其它疾病或状况，特别是特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)，所述方法包括将根据本发明之抗体配制成在药学上可接受之形式。

在一个特定的实施方案中，本发明利用抗原呈递，结果提高优选抗原构象的暴露和稳定化，最后导致高特异性的免疫反应并产生具有独特性质的抗体。

在一个实施方案中，本发明提供免疫原性组合物，其包含超分子抗原构建体，所述构建体包含根据本发明并如同前文中描述之β-淀粉样蛋白肽抗原，典型地β-淀粉样蛋白肽的N-端部分，其中该抗原肽以如下方式修饰，该方式使其能够维持并稳定该抗原之确定构象，特别是特征为具有平衡比例之无规卷曲、α-螺旋和β-片层部分的构象。当将该确定的构象导入动物或人类中时，其诱导出强的高度特异的免疫反应。

在本发明另一实施方案中，根据本发明之疫苗组合物除了Aβ肽抗原，特别是如同前文中描述的本发明之Aβ肽抗原之外，还可包含补体激活的抑制剂。因此，本发明涉及治疗下列疾病和病症的疫苗组合物和产生这类组合物的方法，该疾病和病症由淀粉样蛋白或类淀粉样蛋白引起或与其有关，包括淀粉样变，一组与淀粉样斑形成有关的疾病或病症，包括继发性淀粉样变，以及与年龄有关之淀粉样变，包括但不限于神经学的病症，如阿尔茨海默氏病(AD)，特别是特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)，所述组合物包含来自Aβ肽之N-端部分的肽片段，特别是由特别是来自Aβ肽之N-端部分的7至16个连续氨基酸残基，尤其是13至16个连续氨基酸残基的单一或重复序列所组成的Aβ肽片段，特别是由选自来自Aβ肽之N-端部分的残基1-16、1-15、1-14和1-13的氨基酸残基所组成的Aβ肽片段，更特别的是由在SEQ ID NO：1中提供的残基1-15组成的Aβ肽片段，包括其功能相等的片段，尤其是连接于或并入载体颗粒/佐剂(例如脂质体)或在其中重构的之前提及的Aβ肽片段，以及补体系统之抑制剂，特别是补体路径的抑制剂(其选自膜调节蛋白质的可溶性形式、抗补体蛋白质的人源化抗体、作用在补体路径之各种阶段的小分子抑制剂，以及在转基因动物中表达的人类补体调节剂)。

该13至15个氨基酸残基的连续序列片段可在根据本发明之构建体中重复2至50次，特别是2至30次，更特别的是2至20次，再更特别的是2至16次，尤其是2至10次。

在本发明的一个具体实施方案中，为前文提及之治疗性疫苗组合物之组分的补体激活抑制剂，是选自可溶性人类补体受体1、抗-人类补体蛋白质C5，例如人源化的抗C5单克隆抗体或人源化单克隆抗体之单链片段、C1-酯酶抑制剂-N和天然人类C1抑制剂的化合物。

本发明还包括如同前文提及之根据本发明的疫苗组合物，除了Aβ肽片段，特别是根据本发明之Aβ肽片段之外，其还包含血红蛋白的别构剂，其中所述别构剂当在红细胞中时可触发O₂/血红蛋白亲和力的降低，从而使得可以随后以调节的方式将氧释放至组织。

因此，本发明涉及用于治疗疾病和病症之疫苗组合物以及产生这类组合物的方法，该疾病和病症由淀粉样蛋白或类淀粉样蛋白引起或与之有关，包括淀粉样变，一组与淀粉样斑形成有关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变以及与年龄有关之淀粉样变，包括但不限于神经学的病症，如阿尔茨海默氏病(AD)，特别是特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)，所述组合物包含来自Aβ肽之N-端部分的肽片段，特别是由特别是来自Aβ肽之N-端部分的7至16个连续氨基酸残基(尤其是13至16个连续氨基酸残基)的单一或重复序列片段所组成的Aβ肽片段，特别是由选自来自Aβ肽之N-端部分的残基1-16、1-15、1-14和1-13的氨基酸残基所组成的Aβ肽片段，更特别的是由在SEQ ID NO：1中提供的残基1-15组成的Aβ肽片段，包括其功能相等的片段，特别是借着在肽的每一端共价连接棕榈酰基残基(结果产生2至4个，特别是4个棕榈酰基残基)而修饰的之前提及的Aβ肽片段，尤其是连接于或并入载体颗粒/佐剂(例如脂质体)，或在其中重构的如同前文提及之Aβ肽片段，连同触发O₂/血红蛋白亲和力下降以致氧气随后被释放至器官组织化合物。该13至15个氨基酸残基的连续序列片段可在根据本发明之构建体中重复2至50次，特别是2至30次，更特别的是在2至20次，再更特别的是2至16次，尤其是2至10次。

特别地，适用在根据本发明之组合物中的化合物是选自降血脂药，例如氯贝酸(clofibric acid)或苯扎贝特(bezafibrate)，包括苯扎贝特衍生物 LR16和L35、脲衍生物，例如[2-[4[[(芳基氨基)羰基]-氨基]苯氧基]-2-甲基丙酸，血红蛋白的别构剂的那些。

调节O₂/血红蛋白亲和力之化合物还可以是包含血红蛋白别构部位之阴离子配体，其中该阴离子配体包含内部的焦磷酸环，任选地以及无毒性的阳离子，例如Ca²⁺和Na⁺的化合物。

更特别地，本发明涉及如同前文提及之根据本发明的治疗性疫苗组合物，除了根据本发明之Aβ肽片段之外，其还包含肌醇六磷酸(IHP)衍生物(包含内部的焦磷酸环，任选地以及无毒性的阳离子，例如Ca²⁺和Na⁺)。

在另一实施方案中，提供根据本发明并如同前文提及的疫苗组合物，除了Aβ肽片段，特别是根据本发明的Aβ肽片段之外，还包含补体激活系统的抑制剂(特别是选自膜调节蛋白质的可溶性形式、抗补体蛋白质的人源化抗体、作用在补体路径之各种阶段的小分子抑制剂，以及在转基因动物中表达的人类补体调节剂的补体路径之抑制剂)以及血红蛋白的别构剂(其降低O₂/血红蛋白亲和力，使得更多的氧随后以调节的方式释放至组织)的组合。

因此，本发明还涉及治疗疾病和病症之疫苗组合物以及产生这类组合物的方法，该疾病和病症由淀粉样蛋白或类淀粉样蛋白引起或与之有关，包括淀粉样变，一组与淀粉样斑形成有关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变以及与年龄有关之淀粉样变，包括但不限于神经学的病症，如阿尔茨海默氏病(AD)，特别是特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)，所述组合物包含来自Aβ肽之N-端部分的肽片段，特别是由特别是来自Aβ肽之N-端部分的7至16个连续氨基酸残基(尤其是13至16个连续氨基酸残基)的单一或重复序列所组成的Aβ肽片段，特别是由选自来自Aβ肽之N-端部分的残基1-16、1-15、1-14和1-13的氨基酸残基所组成的Aβ肽片段，更特别的是在SEQ ID NO：1中提供的残基1-15，包括其功能相等的片段，特别是通过在肽的每一端共价连接棕榈酰基残基而修饰的之前提及的Aβ肽片段(结果产生2至4个，特别是4个棕榈酰基残基)，尤其是连接或并入载体颗粒/佐剂，例如脂质体或在其中重构的如同前文提及之Aβ肽片段，连同补体系统的抑制剂，特别是补体激活的抑制剂(选自膜调节蛋白质的可溶性形式、抗补体蛋白质的人源化抗体、作用在补体路径之各种阶段的小分子抑制剂，以及在转基因动物中表达的人类补体调节剂)，以及化合物，特别是血红蛋白的别构剂(其降低O₂/血红蛋白亲和力，使得更多的氧以受调节的方式随后释放至组织)。

在另一实施方案中，提供治疗与淀粉样蛋白有关之疾病或状况的方法，包括对罹患这类疾病或状况的动物，特别是哺乳动物，尤其是人类，施用根据本发明并如同前文描述之治疗性疫苗组合物，特别是包含Aβ_1-15肽抗原，更特别的是棕榈酰基化之Aβ_1-15肽抗原的疫苗组合物。

在本发明一个实施方案中，该疫苗组合物的施用主要导致非炎性亚型，特别是非炎性Th2亚型的抗体的产生，例如IgG1和IgG2b同种型。

在再一特定实施方案中，该疫苗组合物的施用主要导致独立于T-细胞之IgG亚型抗体的产生，特别是IgG3同种型。

在本发明另一实施方案中，该疫苗组合物的施用不会在脑中导致炎症标记的明显增加，特别是选自IL-1β、IL-6、IFN-γ和TNFα的炎症标记。

在本发明另一实施方案中，该疫苗组合物的施用导致脑中不可溶的与斑块有关之Aβ1-40和Aβ1-42的明显降低。

在本发明另一实施方案中，该疫苗组合物的施用导致脑中可溶性Aβ1-42的水平降低。

特别地，与淀粉样蛋白-有关之疾病或状况选自包括，但不限于神经学病症(如阿尔茨海默氏病(AD))，包括特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)、路易氏体痴呆、唐氏症、遗传性脑出血伴有淀粉样变(Dutch型)；Guam帕金森氏症-痴呆综合征；以及其它以类-淀粉样蛋白质为基础或与之有关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化症；库贾氏症、帕金森氏症、与HIV有关的痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、成年型糖尿病；老年性心脏淀粉样变；内分泌肿瘤及包括黄斑变性之其它疾病或状况。

更特别地，与淀粉样蛋白有关之疾病或状况是阿尔茨海默氏病。

在本发明另一特定的实施方案中，提供根据本发明并如同前文所述用于治疗与淀粉样蛋白有关之疾病或状况的方法，其中将该疫苗组合物施用给罹患与淀粉样蛋白有关并且特征为丧失认知记忆能力之状况的动物，特别是哺乳动物或人类，导致保持、增加，特别是完全恢复认知记忆能力。

在另一实施方案中，提供治疗与淀粉样蛋白有关之疾病或状况的方法，包括对罹患这类疾病或状况的动物，特别是哺乳动物，尤其是人类，施用包含根据本发明并如同前文描述之抗原构建体以及补体系统之抑制剂的治疗性疫苗组合物，其中特别以如下方式施用该疫苗组合物，所述方式使得可以相伴地、间歇地或相续地施用补体抑制剂和抗原构建体。

在一个特定的实施方案中，在利用抗原构建体接种之前，施用补体抑制剂，特别是在始于接种之前不超过20小时到终于临接种之前的时间窗内施用补体抑制剂。

在另一特定的实施方案中，在利用抗原构建体接种之后，在始于紧接接种之后到终于疫苗施用之后一天的时间窗内施用补体抑制剂。

在本发明的另一实施方案中，提供制备用于治疗与淀粉样蛋白有关之疾病或状况之药物的方法，包括使用根据本发明并如同前文描述之疫苗组合物。

在阅读下列对所公开的实施方案的详细描述及后附权利要求后，本发明的这些及其它目的、特征和优点将变得明显。

【发明详述】

当在本文中使用时，术语″多肽″、″肽″和″蛋白质″可交替使用，并限定为意指由通过肽键连接之氨基酸组成的生物分子。

术语″肽″为氨基酸链(通常是L-氨基酸)，其中的氨基酸的α碳经由通过一氨基酸的α碳之羧基与另一个氨基酸的α碳之氨基之间的缩合反应形成的肽键而连接。位于链一端(即氨基端)的末端氨基酸具有游离的氨基基团，而位于链另一端(即羧基端)的末端氨基酸具有游离的羧基基团。如此，术语″氨基端″(缩写为N-端)意指在肽之氨基末端处氨基酸上的游离α-氨基，或在肽中任何其它位置上的氨基酸的α-氨基基团(当参与肽键时为亚氨基)。同样地，术语″羧基端″(缩写为C-端)意指在肽之羧基末端处氨基酸上的游离羧基，或在肽中任何其它位置上之氨基酸的羧基基团。

通常，按顺序将构成肽的氨基酸编号，从氨基端开始并朝着肽之羧基端的方向增加。因此，当说一个氨基酸在另一个″之后″时，该氨基酸比前面的氨基酸更靠近肽之羧基端。

在本文中使用的术语″残基″，意指借着酰胺键并入肽中的氨基酸。该氨基酸可以是天然存在的氨基酸，或者除非另行限定否则可包括与天然存在之氨基酸以类似方式起作用的天然氨基酸的已知类似物(即氨基酸模拟物)。此外，酰胺键模拟物包括本领域技术人员已熟知的肽主链修饰。

在本文中使用的词组″基本上由…所组成″，排除任何实质上将改变该词组所提及之肽的基本特性的成分。因此，肽″基本上由…所组成″的表述，排除了任何实质上将改变该肽之生物活性的氨基酸替代、添加或缺失。

而且，本领域技术人员将明了如上文所提及的，在编码序列中改变、添加或缺失单一氨基酸或少量百分比的氨基酸(典型地低于5％，更典型地低于1％)的单独替代、缺失或添加，是保守性修饰变化，其中这些改变导致氨基酸被化学上类似的氨基酸替代。保守性置换表提供了功能相似的氨基酸，其为本领域中已熟知的。下列六组分别含有彼此为保守性置换的氨基酸：

1)丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；

2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；

3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；

4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；

5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)；和

6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。

词组″分离的″或″在生物学上纯的″意指该物质实质上或基本上不含在其自然状态下发现的正常伴随它之成分。因此，在本文中描述之肽不含在其原来环境中正常与其结合的物质。典型地，在本文中描述之分离的免疫原性肽按照银染凝胶上的条带强度的测量，为纯度至少大约80％，通常是至少大约90％，优选至少大约95％。

可借着本领域中已熟知的许多方法，指示蛋白质的纯度或均一性，如蛋白质样品的聚丙烯酰胺凝胶电泳，随后以染色显影。为了某些目的需要高分辨率，可利用HPLC或类似的纯化方法。

当免疫原性肽之长度是相对上较短的(即小于大约50个氨基酸)时，通常可使用标准化学肽合成技术来合成它们。

其中将序列之C-端氨基酸附着在不溶性支持物上接着顺序加入序列中剩余氨基酸的固相合成，是在本文中描述之免疫原性肽的优选化学合成法。固相合成的技术为本领域技术人员已知。

或者，使用重组核酸方法学合成在本文中描述之免疫原性肽。通常，这涉及制造编码该肽的核酸序列，将核酸放在表达盒中处于特定启动子的控制之下，在宿主中表达该肽，分离该表达的肽或多肽，且若需要将该肽复性。在文献中可以找到足以引导本领域技术人员实施这类程序的技术。

一旦表达后，便可根据标准程序纯化重组的肽，包括硫酸铵沉淀、亲和层析、柱层析法、凝胶电泳及其类似者。具有大约50％到95％均一性的实质上纯的组合物是优选的，而作为治疗剂使用时最优选80％至95％或更高的均一性。

本领域技术人员将明了在化学合成、生物学表达或纯化之后，该免疫原性肽可能具有实质上与组成肽之天然构象不同的构象。在此情况下，通常需要将该抗增殖性肽变性和还原，然后使该肽重折叠成优选构象。使蛋白质还原和变性以及诱导重折叠的方法为本领域技术人员已熟知的。

纯化的蛋白质的抗原性可通过例如证明与免疫血清，或与抗该蛋白质本身而产生之抗血清的反应而证实。

当在本文中使用时″a″、″an″和″the″被定义为指″一或多个″并包括复数，除非在前后文中是不适合的。

当在本文中使用时，″检测″指使用已知的技术来检测生物学分子，如免疫化学或组织学的方法，并指定性或定量地确定所研究之生物分子的存在或浓度。

″分离的″意指生物学分子不含至少一些与其天然存在于一起的成分。

当在本文中使用时，术语″抗体″是本领域公认的术语，应理解为指与已知抗原结合的分子或分子之活性片段，特别是免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫学活性部分，即含有免疫特异地与抗原结合之结合部位的分子。根据本发明之免疫球蛋白可以是任何类(IgG、IgM、IgD、IgE、IgA和IgY)或型(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚型的免疫球蛋白分子。

本发明之范围内术语″抗体″旨在包括单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、双特异性抗体、猿源化抗体、人抗体和人源化抗体，及其活性片段。与已知抗原结合之分子的活性片段之实例，包括Fab和F(ab′)₂ 片段，包括Fab免疫球蛋白表达文库的产物，以及上文提及之任何抗体和片段的表位结合片段。

可借着各种技术，从本发明之抗体来衍生这些活性片段。例如，可利用酶，如胃蛋白酶切割纯化的单克隆抗体，并进行HPLC凝胶过滤。然后收集含有Fab片段的适当级分，并借着膜过滤及其类似法浓缩。关于分离抗体之活性片段的普通技术的进一步说明，参见例如Khaw，B.A.等人J.Nucl.Med.23：1011-1019(1982)；Rousseaux等人Methods Enzymology，121：663-69，Academic Press，1986。

″人源化抗体″意指一类经过工程化改造的抗体，其具有衍生自非-人类供体免疫球蛋白的CDRs，且该分子剩下的免疫球蛋白-衍生部分则衍生自一(或多种)人类免疫球蛋白。此外，可改变构架支持残基以保留结合亲和力。获得″人源化抗体″的方法为本领域技术人员已熟知的。(参见例如Queen等人，Proc.Natl Acad Sci USA，86：10029-10032(1989)，Hodgson等人，Bio/Technology，9：421(1991))。

亦可借着新颖的遗传工程方法，获得″人源化抗体″，所述方法能够在大动物，例如兔子中，产生亲和力-成熟的人样多克隆抗体(http://www.rctech.com/bioventures/therapeutic.php)。

在本领域中亦充分明了″单克隆抗体″该术语，其指在实验室中从单个克隆大量产生的，且只识别一种抗原的抗体。通常借着将正常短命的产生抗体的B细胞与快速-生长的细胞，如癌细胞(有时称为″永生化″细胞)融合，来制造单克隆抗体。所得的杂种细胞或杂交瘤迅速扩增，形成产生大量抗体的克隆。

在本发明之范围中，″功能等效抗体″应理解为指与上文提及并在本文中描述之抗体实质上共有至少一种主要功能特性的抗体，所述特性包括：对β-淀粉样蛋白，特别是Aβ_1-42蛋白质，更特别的是Aβ_1-42蛋白质之4-16表位区域的结合特异性；在体外的免疫反应性；抑制Aβ_1-42单体聚集成高分子聚合物原纤维，及/或使预先形成之Aβ_1-42聚合物原纤维解聚，及/或β-片层破坏特性；以及在预防性或治疗性施用时，减轻与淀粉样变有关的病症的影响，所述病症为一组与淀粉样斑形成有关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变和与年龄有关的淀粉样变，包括但不限于神经学的病症(如阿尔茨海默氏病(AD))，包括特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)、路易氏体痴呆、唐氏症、遗传性脑出血伴有淀粉样变(Dutch型)；Guam帕金森氏症-痴呆综合征；以及其它以类-淀粉样蛋白质为基础或与之有关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化症；库贾氏症、帕金森氏症、与HIV有关的痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、成年型糖尿病；老年性心脏淀粉样变；内分泌肿瘤及包括黄斑变性之其它疾病或状况。该抗体可以是任何类型，如IgG、IgM或IgA等等，或任何亚型，如IgG1、IgG2a等等，以及在上文中提及或本领域中已知的其它亚型。此外，抗体可借着任何方法，像是噬菌体展示而产生，或在任何生物或细胞系中产生，包括细菌、昆虫、哺乳动物或可以产生具有想要特征之抗体，如人源化抗体的其它类型之细胞或细胞系。亦可借着组合来自不同物种的Fab部分和Fc区，形成抗体。

″抗原″一词意指可在生物，特别是动物，更特别的是包括人类的哺乳动物中引起免疫反应的实体或其片段。该术语包括免疫原和负责抗原性或抗原决定簇的区域。

当在本文中使用时，″可溶性″一词意指部分或完全溶解于含水溶液中。

当在本文中使用时，″免疫原性″一词意指可以在人类或动物中诱发或增强针对该免疫性原剂之抗体、T-细胞和其它反应性免疫细胞的产生并助成免疫反应的物质。

当个体对施用的本发明之免疫原性组合物产生足够的抗体、T-细胞和其它反应性免疫细胞以缓和或减轻待治疗的病症时，发生免疫反应。

″杂交瘤″一词为本领域公知的，并为本领域技术人员所了解的，意指通过融合产生抗体之细胞和永生化细胞，例如多发性骨髓瘤细胞，而产生的细胞。该杂种细胞能够产生抗体的持续供给。对于融合方法的更详细地描述，参见上文″单克隆抗体″的定义以及下文实施例。

当在本文中使用时″载体″一词意指抗原肽或超分子构建体能够并入其中或能够与之结合的结构，藉此可以将抗原肽或该肽的一部分呈递或暴露给人类或动物的免疫系统。任何可适用在动物或人类治疗中的颗粒，例如小泡、颗粒或颗粒体，均可用来作为本发明之前后文中的载体。

″载体″一词还包括递送方法，其中可借着递送机制将包含抗原肽的超分子抗原构建体组合物运送至想要之处。这类递送系统的一个实例利用胶体金属，如胶体金。

可在本发明之超分子抗原构建体组合物中使用的载体蛋白质包括，但不限于麦芽糖结合蛋白质″MBP″；牛血清白蛋白″BSA″；匙孔血蓝蛋白″KLH″；卵清蛋白；鞭毛蛋白；甲状腺球蛋白；任何物种的血清白蛋白；任何物种的γ球蛋白；同基因细胞；带有Ia抗原的同基因细胞；以及D-及/或L-氨基酸的聚合物。

在根据本发明之超分子抗原构建体中，脂质体可具有双重功能，因为它可用来作为包含前述超分子构建体的载体，并同时亦具有佐剂的功能，在欲利用根据本发明之治疗性疫苗治疗的标靶动物或人类中增加或刺激免疫反应。亦应理解本发明之超分子抗原构建体组合物还可含有额外的佐剂，包括但不限于匙孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)和其它佐剂，例如脂质A、明矾、磷酸钙、白介素1及/或多糖类和蛋白质的微囊，特别是去毒的脂质A(例如单磷酰或二磷酰脂质A)或明矾，还有防腐剂、稀释剂、乳化剂、稳定剂，以及其它在现有技术中已知并用于疫苗中的成分。此外，在本发明之组合物中可使用本领域中已知的任何佐剂系统。这类佐剂包括，但不限于弗氏(Freund′s)不完全佐剂、弗氏完全佐剂、多分散的β-(1，4)连接之乙酰化甘露聚糖(″醋孟南(Acemannan)″)、泰特克斯(TITERMAX)(得自CytRx Corporation的聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物佐剂)、得自ChironCorporation的经修饰之脂质佐剂、得自Cambridge Biotech的皂苷衍生物佐剂、杀死的百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)、革兰氏阴性细菌的脂多糖(LPS)、大的聚合物阴离子，如硫酸葡聚糖，以及无机凝胶，如明矾、氢氧化铝或磷酸铝。

而且，″有效量″一词意指当施用给人类或动物时，诱发免疫反应之抗原性/免疫原性组合物的量。本领域技术人员依据常规的程序可以容易地确定有效量。

″超分子抗原构建体″一词意指根据本发明并如同前文描述的抗原构建体。特别地，″超分子抗原构建体″意指包含根据本发明并如同前文描述之Aβ肽抗原的抗原构建体，所述Aβ肽抗原特别是得自Aβ肽之N-端部分的Aβ肽片段，特别是由选自1-15、2-15、3-15、1-14、2-14、1-13；1-16(Δ2)、1-16(Δ4)、1-16(Δ5)、1-16(Δ6)、1-16(Δ8)、1-16(Δ9)、1-16(Δ10)；1-16(Δ12)、16(Δ13)、16(Δ14)、1-16(Δ15)、1-15(Δ2)、1-15(Δ4)、1-15(Δ5)、1-15(Δ6)、1-15(Δ8)、1-15(Δ9)、1-15(Δ10)；1-15(Δ12)、15(Δ13)、15(Δ14)的氨基酸残基组成的Aβ肽片段，特别是Aβ_1-16(Δ15)肽抗原，更特别的是Aβ_1-16(Δ14)或Aβ_1-16(Δ13)肽抗原，再更特别的是Aβ_1-14肽抗原，特别是Aβ_1-15肽抗原，尤其是由在SEQ ID NO：1中提供之氨基酸残基1-15以及在SEQ ID NO：3中提供之氨基酸残基1-16(Δ14)所组成的Aβ肽片段，其中所述抗原肽通过连接或并入载体(例如小泡、颗粒体或分子，但特别是脂质体)中或在载体中重构来呈递。更特别地，借着亲脂性或疏水性部分修饰根据本发明之抗原肽，其中所述部分有助于插入脂质体载体/免疫佐剂的脂双层内；特别是借着亲脂性或疏水性部分，包括但不限于脂肪酸、甘油三酯或磷脂，尤其是其中脂肪酸的碳主链具有至少10个碳原子的脂肪酸、甘油三酯或磷脂，修饰本发明抗原肽，其中所述部分作为将肽锚定在脂质体双层内的锚起作用，并具有可导致肽在紧靠脂质体表面的位置定位并稳定的尺寸。

例如，可以以胃肠外，特别是腹膜内、静脉内、皮下和肌内之方式，以每个患者大约1.0微克到10.0毫克的范围(该范围不旨在构成限制)，施用根据本发明之超分子抗原构建体组合物。引发免疫反应所需之组合物的实际用量，将随每个个体患者，视施用之组合物的免疫原性和个体的免疫反应而改变。结果，将由例行的实验并以本领域技术人员的训练和经验为基础，确定施用给个体的具体量。

可使用根据本发明之超分子抗原构建体制备疫苗组合物，用于在生物，特别是动物或人类中诱导免疫反应，用于预防、治疗或减轻淀粉样变的影响，所述淀粉样变为一组与淀粉样斑形成有关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变和与年龄有关的淀粉样变，包括但不限于神经学的病症(如阿尔茨海默氏病(AD))，包括特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)、路易氏体痴呆、唐氏症、遗传性脑出血伴有淀粉样变(Dutch型)；Guam帕金森氏症-痴呆综合征；以及其它以类-淀粉样蛋白质为基础或与之有关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化症；库贾氏症、帕金森氏症、与HIV有关的痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、成年型糖尿病；老年性心脏淀粉样变；内分泌肿瘤及包括黄斑变性之其它疾病或状况，特别是特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)。

因此，本发明的一个目的是提供预防、治疗或减轻淀粉样变的影响的方法，该方法通过对受这类病症侵袭并因此需要这类治疗的动物，特别是哺乳动物或人类，施用根据本发明之超分子抗原构建体，特别是包括根据本发明之超分子抗原构建体的疫苗组合物来实施，其中所述淀粉样变为一组与淀粉样斑形成有关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变和与年龄有关的淀粉样变，包括但不限于神经学的病症(如阿尔茨海默氏病(AD))，其包括特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)、路易氏体痴呆、唐氏症、遗传性脑出血伴有淀粉样变(Dutch型)；Guam帕金森氏症-痴呆综合征；以及其它以类-淀粉样蛋白质为基础或与其有关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化症；库贾氏症、帕金森氏症、与HIV有关的痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、成年型糖尿病；老年性心脏淀粉样变；内分泌肿瘤及包括黄斑变性之其它疾病或状况，特别是特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)。

在本发明的另一实施方案中，提供制备疫苗组合物的方法，所述组合物用于在患有如下病症、疾病或状况并由此需要治疗的生物，特别是动物或人中诱导免疫反应，用于预防、治疗或减轻淀粉样变的影响，所述淀粉样变为一组与淀粉样斑形成有关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变和与年龄有关的淀粉样变，包括但不限于神经学的病症(如阿尔茨海默氏病(AD))，其包括特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)、路易氏体痴呆、唐氏症、遗传性脑出血伴有淀粉样变(Dutch型)；Guam帕金森氏症-痴呆综合征；以及其它以类-淀粉样蛋白质为基础或与其有关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化症；库贾氏症、帕金森氏症、与HIV有关的痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、成年型糖尿病；老年性心脏淀粉样变；内分泌肿瘤及包括黄斑变性之其它疾病或状况，特别是特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)。

在本发明的再一实施方案中，因此提供制备用于预防、治疗或减轻淀粉样变的影响的组合物的方法，其中所述淀粉样变为一组与淀粉样斑形成有关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变和与年龄有关的淀粉样变，包括但不限于神经学的病症(如阿尔茨海默氏病(AD))，包括特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)、路易氏体痴呆、唐氏症、遗传性脑出血与淀粉样变(Dutch型)；Guam帕金森氏症-痴呆综合征；以及其它以类-淀粉样蛋白质为基础或与之有关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化症；库贾氏症、帕金森氏症、与HIV有关的痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、成年型糖尿病；老年性心脏淀粉样变；内分泌肿瘤及包括黄斑变性之其它疾病或状况，特别是特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)，所述方法包括将根据本发明之抗体配制成在药学上可接受的形式。

在一个实施方案中，本发明利用抗原呈递，结果提高了优选的抗原构象的暴露和稳定化，最后导致高特异性的免疫反应并产生具有独特性质的抗体。

在一实施方案中，本发明提供免疫原性组合物，其包含超分子抗原构建体，所述构建体含有根据本发明并如同前文中描述之β-淀粉样蛋白肽抗原，典型地β-淀粉样蛋白肽的N-端部分，其中该抗原肽以如下方式被修饰，该方式使其能够维持并稳定该抗原之确定的构象，特别是特征为具有平衡比例之无规卷曲、α-螺旋和β-片层部分的构象。当导入动物或人体中时，该确定构象诱导出强有力且高度特异的免疫反应。

一种使抗原肽之期望构象得以形成和稳定的方式是，呈递连接或并入或重构(部分或完全地)于载体中的抗原肽，该载体为例如小泡、颗粒体或分子，或任何其它适合作为抗原肽之载体/佐剂的工具。在本发明的一个特定的实施方案中，借着弱的交互作用，例如范德华氏力、疏水或静电交互作用，或二或二种以上所述交互作用之组合，抗原肽连接或并入或重构于载体中，从而该肽得以以特定的构象进行呈递，其中所述构象借着限制该抗原肽的三维移动自由度而维持并稳定，以致于构象改变被阻止或受到严重限制。

当使用小泡、颗粒或颗粒体，例如脂质体作为载体/佐剂时，可选择抗原肽的组合物，使得其整体净电荷与该肽待结合之载体/佐剂表面的相同。在带相同电荷的载体/佐剂表面与抗原肽之间，但特别是在带相同电荷的载体表面和构成抗原肽的氨基酸残基之间，且更特别的是在带相同电荷的载体表面和包含在抗原肽中的带相同电荷的氨基酸残基之间，静电推斥力生效，这可导致抗原肽采取保证其高生物活性的确定高特异且稳定之构象。结果，该抗原肽以具有高生物活性之构象被暴露并呈递，这样它容许标靶生物的免疫系统自由地与生物活性构象之抗原构建体中所含有的抗原决定簇产生交互作用，这导致强有力且为构象-特异的免疫反应，结果例如在标靶生物中产生高抗体效价。

通过小心地调整在一边之抗原肽和另一边之该肽待结合、并入或重构于其中的载体的整体净电荷，将暴露在载体表面上或紧靠载体表面的抗原肽以如下构象呈递，其中所述构象通过在带相同电荷的载体表面和抗原肽之间，具体地在带相同电荷的载体表面和组成该抗原肽之氨基酸残基之间，更具体地在带相同电荷的载体表面和该抗原肽中所含有之带相同电荷的氨基酸残基之间生效的静电推斥力而得以诱导和稳定化。这导致抗原构建体被呈递，致使其可以被标靶生物的免疫防御机器自由地接近，并因此当施用给动物或人类时，能够诱导强有力且高度特异的免疫原性反应。借着使用脂质体当作载体可以进一步增加免疫原性反应，该脂质体可具有佐剂之功能，在欲利用根据本发明之治疗性疫苗治疗的标靶动物或人中增加或刺激免疫反应。任选地，此外，脂质体可含有其它佐体，例如脂质A、明矾、磷酸钙、白介素1及/或多糖类和蛋白质的微囊，特别是去毒的脂质A，像是单磷酰或二磷酰脂质A或明矾。

在本发明一个特定实施方案中，使用在脂质体中重构的根据本发明并如同前文描述之抗原肽，特别是整体净电荷为负的抗原肽，所述脂质体特别是组分经选择以致该脂质体头部基团之净整体电荷为负的脂质体。特别地，该脂质体由选自二肉荳蔻酰基磷脂酰胆碱(DMPC)、二荳蔻酰基磷脂酰乙醇胺(DMPEA)、二肉荳蔻酰基磷脂酰甘油(DMPG)和胆固醇的组分组成，并任选地可以还含有单磷酰脂质A或任何适用于本发明之范围的其它佐剂，例如明矾、磷酸钙、白介素1及/或多糖和蛋白质的微囊。

在本发明另一特定的实施方案中，提供与能够插入载体/佐剂内之锚类分子共价结合的根据本发明并如同前文描述之经修饰的肽抗原，藉此可以将该肽固定在载体/佐剂上，并在载体/佐剂分子的表面上或紧靠该表面呈递该肽，以致于如同前文中描述的，静电力可以生效。

当使用脂质体作为载体/佐剂时，抗原肽构建体通常具有疏水性的尾巴，在形成时其插入脂质体膜内。此外，亦可修饰抗原肽，使其含有疏水性尾巴以便其能够被插入脂质体内。

本发明之超分子抗原构建体通常包含经修饰而提高抗原性效果的肽，其中可经由聚乙二醇化作用(使用聚乙二醇或经修饰之聚乙二醇)修饰该肽，或经由其它方法修饰，像是棕榈酸(如同前文中之描述)，聚-氨基酸(例如聚-甘氨酸、聚-组氨酸)、聚-糖(例如聚半乳糖醛酸、聚乳酸、聚乙交酯、几丁质、脱乙酰壳多糖)、合成的聚合物(聚酰胺、聚氨基甲酸酯、聚酯)或共-聚物(例如聚(甲基丙烯酸)和N-(2-羟基)丙基甲基丙烯酰胺)，等等。

在本发明一个特定的实施方案中，提供根据本发明并如同前文描述之抗原肽，其中该抗原肽经修饰含有疏水性尾巴以致该肽能插入脂质体内。特别地，可借着有助于插入载体/佐剂的脂双层内的亲脂性或疏水性部分修饰β-淀粉样蛋白肽。本发明之亲脂性或疏水性部分可以是脂肪酸、甘油三酯和磷脂，特别是其中脂肪酸碳主链具有至少10个碳原子的脂肪酸、甘油三酯和磷脂，特别是具有碳主链至少大约14个碳原子且不超过大约24个碳原子之脂肪酸的亲脂性部分，更特别的是具有碳主链至少约为14个碳原子的疏水性部分。疏水性部分的实例包括，但不限于棕榈酸、硬脂酸、肉荳蔻酸、月桂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸和胆固醇或DSPE。在本发明一个特定的实施方案中，该疏水性部分是棕榈酸。

棕榈酰基化作用，在提供使肽在脂质体双层中固定的锚的同时，因为C_16:0脂肪酸部分的相对低的长度，导致呈递之肽暴露在脂质体表面上或紧靠脂质体表面。因此，加工该抗原的细胞将不得不摄取具有肽的整个脂质体。在本发明另一实施方案中，使用PEG来制备超分子构建体，其中将游离的PEG末端共价结合至磷脂酰乙醇胺的分子上(在此处脂肪酸可以是：肉荳蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸等等，或其组合)。可在由磷脂和胆固醇(各种摩尔比例的磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、胆固醇)所组成的脂质体中重构该超分子结构。可使用其它的磷脂。以大约40微克/皮摩尔磷脂的浓度使用脂质A。

本发明的另一个目的是提供包含超分子抗原构建体的疫苗组合物，所述构建体包含根据本发明并如同前文描述之抗原肽，其中该肽被修饰从而得以提高抗原性效果，其中经由聚乙二醇化作用(使用聚乙二醇或经修饰之聚乙二醇)修饰该肽，特别是得自Aβ肽之N-端部分的Aβ肽片段，特别是由选自1-15、2-15、3-15、1-14、2-14、1-13；1-16(Δ2)、1-16(Δ4)、1-16(Δ5)、1-16(Δ6)、1-16(Δ8)、1-16(Δ9)、1-16(Δ10)；1-16(Δ12)、16(Δ13)、16(Δ14)、1-16(Δ15)、1-15(/2)、1-15(Δ4)、1-15(Δ5)、1-15(Δ6)、1-15(Δ8)、1-15(Δ9)、1-15(Δ10)；1-15(Δ12)、15(Δ13)、15(Δ14)的氨基酸残基所组成的Aβ肽片段，Aβ_1-16(Δ15)肽抗原，更特别的是Aβ_1-16(Δ14)或Aβ_1-16(Δ13)肽抗原，再更特别的是Aβ_1-14肽抗原，特别是Aβ_1-15肽抗原，尤其是由在SEQ ID NO：1中提供之氨基酸残基1-15和在SEQ ID NO：3中提供之氨基酸残基1-16(Δ14)所组成的Aβ肽片段，或经由其它方法修饰，像是聚-氨基酸(例如聚-甘氨酸、聚-组氨酸)、聚-糖(例如聚半乳糖醛酸、聚乳酸、聚乙交酯、几丁质、脱乙酰壳多糖)、合成的聚合物(聚酰胺、聚氨基甲酸酯、聚酯)，或共-聚物(聚(甲基丙烯酸)和N-(2-羟基)丙基甲基丙烯酰胺)，等等。

在本发明的另一实施方案中，根据本发明并如同前文描述之β-淀粉样蛋白肽抗原，是在脂质体中重构的、通过在肽每一端共价连接棕榈酰基残基(导致2至4，特别是4个残基)而修饰的来自Aβ肽之N-末端部分的棕榈酰基化之Aβ肽片段，特别是由选自1-15、2-15、3-15、1-14、2-14、1-13；1-16(Δ2)、1-16(Δ4)、1-16(Δ5)、1-16(Δ6)、1-16(Δ8)、1-16(Δ9)、1-16(Δ10)；1-16(Δ12)、16(Δ13)、16(Δ14)、1-16(Δ15)、1-15(Δ2)、1-15(Δ4)、1-15(Δ5)、1-15(Δ6)、1-15(Δ8)、1-15(Δ9)、1-15(Δ10)；1-15(Δ12)、15(Δ13)、15(Δ14)的氨基酸残基所组成的棕榈酰基化之Aβ肽片段，特别是棕榈酰基化之Aβ_1-16(Δ15)肽抗原，更特别的是棕榈酰基化之Aβ_1-16(Δ14)或Aβ_1-16(Δ13)肽抗原，再更特别的是棕榈酰基化之Aβ_1-14肽抗原，特别是棕榈酰基化之Aβ_1-15肽抗原，尤其是由在SEQ ID NO：1中提供之氨基酸残基1-15和在SEQ ID NO：3中提供之氨基酸残基1-16(Δ14)所组成的棕榈酰基化之Aβ肽片段。可使用该棕榈酰基化之抗原构建体来治疗淀粉样变，一组与淀粉样斑形成有关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变，以便减轻与该疾病有关的症状，或恢复到存在于未受该疾病侵袭之健康个体中的状况。

在某些实施方案中，本发明之超分子抗原构建体包括如同前文描述之抗原肽序列，该肽在每端与至少一个，特别是在每一端与1或2个聚乙二醇化之赖氨酸共价连接。PEG(聚乙二醇)链的长度可从n＝8变化至n＝150,000或更多，特别是从n＝10至n＝80,000，更特别的是从n＝10至n＝10,000。在本发明特定的实施方案中，PEG链的长度不超过n＝45，特别是在n＝5到n＝40之间，更特别的是在n＝10到n＝30之间，再更特别的是n＝10。

可用在本发明之组合物中的脂质体包括本领域技术人员已知的那些。可使用任何可用来制造脂质体的标准脂质。可使用标准双层和多层脂质体来制造本发明之组合物。虽然可使用本领域技术人员已知的任何制造脂质体的方法，但最优选脂质体根据Alving等人，Infect.Immun.60：2438-2444，1992的方法制造，在此外以引用的方式将该文献并入本文中。脂质体可任选地含有佐剂或免疫调节剂或两者。优选的免疫调节剂是脂质A，特别是去毒的脂质A，例如单磷酰或二磷酰脂质A。

脂质体可具有双重功能，因为它可用来作为包含如同前文描述之超分子构建体的载体，同时可以作为佐剂起作用以在利用根据本发明之治疗性疫苗治疗的标靶动物或人类中增加或刺激免疫反应。任选地，脂质体可以还含有另外的佐剂或/及免疫调节剂或两者，像脂质A、明矾、磷酸钙、白介素1及/或多糖和蛋白质的微囊，特别是脂质A，更特别的是去毒的脂质A，如单磷酰或二磷酰脂质A，或明矾。

特别地，借着对受如下病症侵袭并因此需要治疗的动物，特别是哺乳动物或人类，施用根据本发明之超分子抗原构建体，特别是包括根据本发明之这类超分子抗原构建体的疫苗组合物，治疗与年龄有关之淀粉样变，包括神经学的病症(如阿尔茨海默氏病(AD))，包括特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)、路易氏体痴呆、唐氏症、遗传性脑出血伴有淀粉样变(Dutch型)；Guam帕金森氏症-痴呆综合征；以及其它以类-淀粉样蛋白质为基础或与之有关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化症；库贾氏症、帕金森氏症、与HIV有关的痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、成年型糖尿病；老年性心脏淀粉样变；内分泌肿瘤及包括黄斑变性之其它疾病或状况，特别是特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)，尤其是阿尔茨海默氏病——其症状表现为轻微健忘到完全丧失记忆。

可将包含根据本发明并如同前文描述之超分子抗原构建体的本发明组合物，制备成液态溶液或注射用悬浮液形式，或适合在注射之前溶解的固体形式，例如在使用本发明之组合物的药盒(如同下文的描述)中。

将包含超分子抗原构建体的本发明组合物施用给罹患与淀粉样蛋白有关之疾病的人类或动物，在该人类或动物中诱导免疫反应，以便减轻与该疾病有关之症状，或恢复到存在于未受该疾病侵袭之健康个体中的状况。

可以借着任何适当的标准施用路径，将本发明之组合物施用给人类或动物。通常，可借着局部、口服、经直肠、经鼻或胃肠外(例如静脉内、皮下或肌内)路径施用该组合物。此外，可将该组合物并入缓释基质，如生物可降解的聚合物中，将该聚合物埋植在期望的递送位置的附近，例如在肿瘤部位附近。该方法包括单一剂量的施用、按预定时间间隔之重复剂量的施用，以及一段预定时间的持续施用。

特别地，胃肠外施用根据本发明之抗原肽组合物，特别是借着腹膜内、静脉内、皮下和肌内注射进行。

组合物之剂量将视待治疗之状况、所使用的特定组合物，以及其它的临床因素，如患者的体重、尺寸和状况、体表面积、欲施用之特定化合物或组合物、其它将同时施用的药物和施用路径而定。

可与用于疾病治疗的其它生物活性物质和方法联合施用根据本发明之治疗性疫苗组合物。其它生物活性物质可以是以混合物之形式业已包含根据本发明之治疗性疫苗的同一组合物的一部分，其中将该治疗性疫苗与其它生物活性物质混合，或可以将它们与相同的在药学上可接受之溶剂及/或载体混合，或它们可以作为不同组合物的一部分分开提供，这些组合物可以分开或一起以组分包的形式来提供。

可同时、间歇或相继地，施用根据本发明之治疗性疫苗组合物与其它生物活性物质(一种或多种)。例如，可以将第一额外的生物活性物质在施用根据本发明之治疗性疫苗组合物的同时施用，或在施用治疗性疫苗之后或之前相继施用。若选择其中与至少一种根据本发明之治疗性疫苗一起施用一种以上额外的生物活性物质的施用方案，则这些化合物或物质可以以各种组合，一部分同时、一部分相继施用。

本发明的另一个目的是提供根据本发明之治疗性疫苗以及任选地一或多种其它生物活性物质的混合物，以及使用根据本发明之治疗性疫苗或其混合物，包括含有该治疗性疫苗或治疗性疫苗之混合物的组合物，来预防及/或治疗淀粉样变及/或减轻淀粉样变的影响的方法，所述淀粉样变为一组与淀粉样斑形成有关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变和与年龄有关的淀粉样变，例如包括但不限于神经学病症的疾病，如阿尔茨海默氏病(AD)，包括特征为丧失认知记忆能力之疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)、路易氏体痴呆、唐氏症、遗传性脑出血伴有淀粉样变(Dutch型)；Guam帕金森氏症-痴呆综合征；以及其它以类-淀粉样蛋白质为基础或与之有关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化症；库贾氏症、帕金森氏症、与HIV有关的痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、成年型糖尿病；老年性心脏淀粉样变；内分泌肿瘤及包括黄斑变性之其它疾病或状况。

根据本发明之混合物，除了根据本发明之治疗性疫苗之外，尚可包括生物活性物质，例如用在淀粉样变(一组与淀粉样蛋白或类-淀粉样蛋白，如涉及阿尔茨海默氏病的Aβ蛋白质有关的疾病和病症)之药物中的已知化合物，包括针对免疫原性肽抗原产生的抗体，特别是针对以超分子抗原构建体形式呈递之免疫原性抗原产生的抗体，更特别的是根据本发明并如同本文中公开的抗体。

在本发明另一实施方案中，其它生物活性物质或化合物亦可以是治疗剂，其可用来治疗由淀粉样蛋白或类-淀粉样蛋白引起，或与之有关的疾病和病症，包括由β淀粉样蛋白引起之淀粉样变，或可用在其它神经学病症的药物治疗上。

其它生物活性物质或化合物，可借着与根据本发明之治疗性疫苗相同或类似的机制，或借着无关的作用机制，或借着多种相关的及/或无关之作用机制，发挥其生物作用。

通常，其它生物活性化合物可包括神经元-传递促进剂、精神治疗药物、乙酰胆碱酯酶抑制剂、钙-通道阻断剂、生物胺、苯并二氮杂、镇定剂、乙酰胆碱合成、储存或释放促进剂、乙酰胆碱突触后受体激动剂、单胺氧化酶-A或-B抑制剂、N-甲基-D-天冬氨酸谷氨酸受体拮抗剂、非类固醇消炎药、抗氧化剂和5-羟色胺能受体拮抗剂。

特别地，根据本发明之混合物可包含至少一种其它的生物活性化合物连同根据本发明之治疗性疫苗，以及任选地在药学上可接受之载体及/或稀释剂及/或赋形剂，其中所述其它生物活性化合物选自由对抗氧化应激之化合物、抗-细胞凋亡化合物、金属螯合剂、DNA修复的抑制剂，如哌仑西平(pirenzepin)，以及代谢物，3-氨基-1-丙烷磺酸(3APS)、1，3-丙烷二磺酸盐(1，3PDS)、分泌酶活化剂、β-和γ-分泌酶抑制剂、tau蛋白质、神经递质、β片层形成阻断剂(β-sheet breaker)、抗-炎症分子或胆碱酯酶抑制剂(ChEI)，如塔克宁、利伐司他敏、多奈培齐及/或加兰他敏和其它药物，以及营养增补剂所组成之组。

在再一实施方案中，根据本发明之混合物可包括烟酸或美金胺，连同根据本发明之治疗性疫苗，和任选地在药学上可接受之载体及/或稀释剂及/或赋形剂。

在本发明另一实施方案中，提供包含″非典型抗精神病药物″连同根据本发明之治疗性疫苗和任选地在药学上可接受之载体及/或稀释剂及/或赋形剂的混合物，其中所述药物为例如氯扎平(clozapine)、齐拉西酮(ziprasidone)、利螺环酮(risperidone)、阿立哌唑(aripiprazole)或奥兰扎平(olanzapine)，用来治疗阳性和阴性精神症状，包括幻觉、妄想、思维失调(显示为明显的语无伦次、思考出轨、离题)，以及行为古怪或行为混乱，以及快感缺乏、变平淡的情感、冷漠和社会退缩。

在本发明一个实施方案中，根据本发明并如同前文描述之组合物和混合物，分别包含在治疗上或在预防上有效量的根据本发明之疫苗和生物活性物质。

在例如WO2004/058258(主要参见第16和17页)中，描述了适合用在该混合物中与根据本发明之疫苗联合的其它化合物，包括治疗性药物标靶(第36-39页)、链烷磺酸和链烷醇硫酸(第39-51页)、胆碱酯酶抑制剂(第51-56页)、NMDA受体拮抗剂(第56-58页)、雌激素(第58-59页)、非类固醇消炎药(第60-61页)、抗氧化剂(第61-62页)、过氧化物酶体增殖物-激活受体(PPAR)激动剂(第63-67页)、降胆固醇药物(第68-75页)；淀粉样蛋白抑制剂(第75-77页)、淀粉样蛋白形成抑制剂(第77-78页)、金属螯合剂(第78-79页)、抗-精神病药物和抗-抑郁药(第80-82页)、营养增补剂(第83-89页)，以及增加生物活性物质在脑中的利用度的化合物(参见第89-93页)和前药(第93和94页)，将该文献以引用的方式并入本文中，尤其是在上文所指页数中提到的化合物。

早已知道利用正常的宿主蛋白质对动物或人类宿主进行免疫接种，可导致对抗该宿主蛋白质之自身-抗体的形成，结果产生统称为自身免疫病的病症。Aβ及其APP前体蛋白质是这类正常的蛋白质。因此在接种时使用这些宿主蛋白质，有可能产生不想要的副作用。在文献中有一些证据显示Aβ可以激活神经炎性反应，其可能部份是由补体系统的过度激活所致，该补体系统在患有阿尔茨海默氏病或其它神经变性疾病的患者中业已被高度激活。

处于β-片层构象的人类Aβ是人类补体系统的有力活化剂。其与人类补体C1q的胶原蛋白尾强力地结合。该补体系统的过度激活可导致宿主的天然防御系统转向，并导致细胞和组织(包括神经元及其突起)的自我破坏。例如膜攻击复合物(MAC)，其为宿主天然防御系统的一部分，并借着把自己插入侵入的细菌和病毒内对宿主产生对抗该细菌和病毒的保护作用，当过度激活时，其可以把自己插入宿主细胞内，并引起自我破坏。过度激活还可以引起对小胶质细胞的刺激，产生有毒性的化合物，如氧-自由基和有害的蛋白酶。

因此，本发明的再一目的是防止经由以自身抗原接种罹患自身免疫疾病之动物或人类而引起的可能的副作用，如神经学并发症，其中该自身抗原有可能进一步刺激已经过度-激活之补体系统。这在本发明之范围内，可借着与补体抑制剂联合施用Aβ肽抗原，特别是棕榈酰基化之Aβ肽抗原，更特别的是棕榈酰基化之Aβ_1-15肽抗原，尤其是棕榈酰基化之Aβ_1-15肽抗原(ACI-24，Aβ_1-15)而达成。

因此，本发明另一实施方案是提供疫苗组合物，其除了Aβ肽抗原，特别是根据本发明并如同前文描述的Aβ肽抗原之外，尚包括补体系统的抑制剂。

补体抑制剂可以是选自可溶性人类补体受体1、抗-人类补体蛋白质C5，例如人源化抗C5单克隆抗体或人源化单克隆抗体的单-链片段、C1-酯酶抑制剂-N和天然人类C1抑制剂的化合物。

最近强调Aβ和脑血管疾病的共病、Aβ和动脉粥样硬化的关联、与淀粉样血管病有关之认知损伤、重大的脑微血管病变和在阿尔茨海默氏病中跨越血脑屏障清除Aβ的缺陷，所有这些全说明在阿尔茨海默氏病中，血管病症是慢性神经变性状况的一个重要特征(Zlokovic，B.：(2005)Trends inNeurosciences 28，202-208)。因此，神经血管功能障碍可能在阿尔茨海默氏病的发病机制中具有主要的作用。

有大量的证据证实在阿尔茨海默氏病的认知衰退与脑血管病症之间存在强相关性(Torre，de la，J.C.：(2004)Neurol.Res.26，517-524，Gorelick，P.B.：(2004)Stroke 35，2620-2622)。已经在阿尔茨海默氏病中描述了降低的微血管密度、增加的破裂血管的数目、血管直径的明显改变等等(Bailey，T.L.等人：(2004)Neurol.Res.26，573-578Farkas，E.，和Luiten，P.G.：(2001)Prof.Neurobiol.64，575-611)。

数项研究，包括以大群体为基础的Rotterdam研究(Greenberg，S.M等人：(2004)Stroke 35，2616-2619)，已经显示血管危险因素可能在老年导致的所谓″血管性痴呆″中负责认知衰退。阿尔茨海默氏病和血管性痴呆的几种危险因素是重叠的，包括暂时性缺血发作、动脉粥样硬化、心脏病、高血清黏性等等。

血管性痴呆的发生，是脑中血管变窄或阻塞而引起的氧气剥夺之后脑组织损伤的结果，且其为第二常见的痴呆形式。患者经常患有阿尔茨海默氏病和血管性痴呆两者。估计在EU有170万人，在USA有55000人罹患血管性痴呆。

尽管血流受损但可以使脑中的正常O₂-压恢复的治疗，对阿尔茨海默氏病的演变可能有显著的影响，并可以急剧地降低血管性痴呆。

因此，本发明的另一实施方案，提供除了Aβ肽抗原，特别是根据本发明并如同前文描述的Aβ肽抗原之外，尚包括诱发O₂/血红蛋白亲和力降低从而使氧气可以得以随后释放至器官组织之化合物的疫苗组合物。

特别地，调节O₂/血红蛋白亲和力的化合物可以是选自降血脂药物(例如氯贝酸或苯扎贝特，包括苯扎贝特衍生物LR16和L35)、脲衍生物(例如[2-[4[[(芳基氨基)羰基]-氨基]苯氧基]-2-甲基丙酸)，血红蛋白的别构剂(例如2，3-二磷酸甘油酸(DPG)、肌醇六磷酸(IHP)及磷酸吡哆醛)所组成之组的化合物。

更特别地，调节O₂/血红蛋白亲和力的化合物可以是包含血红蛋白别构部位之阴离子配体的化合物，其中该阴离子配体包括内部的焦磷酸环，任选地以及无毒性的阳离子。

再更特别的是，调节O₂/血红蛋白亲和力的化合物为肌醇六磷酸(IHP)衍生物，其包括至少一个内部的焦磷酸环，任选地以及无毒性的阳离子。

为了留存由补体抑制剂和调节O₂/血红蛋白亲和力之化合物分别在减轻过度激活的补体系统和脑血管病症之可能有害影响方面的有利影响，本发明提供疫苗组合物，其中联合地包括Aβ肽抗原，特别是根据本发明并如同前文描述之Aβ肽抗原，以及补体系统之抑制剂和调节O₂/血红蛋白亲和力的化合物，特别是血红蛋白的别构剂。

包括Aβ肽抗原，特别是根据本发明并如同前文描述之Aβ肽抗原的根据本发明之疫苗组合物，可伴随地、间歇地或相续地与补体抑制剂及/或调节O₂/血红蛋白亲和力之化合物一起施用，相应地减轻过度激活之补体系统和脑血管病症可能的有害影响。例如，根据本发明之疫苗组合物可与补体抑制剂同时施用，或在施用疫苗之后或之前相续施用。若选择其中与至少一种根据本发明之疫苗一起施用补体抑制剂和调节O₂/血红蛋白亲和力之化合物，特别是血红蛋白之别构剂的应用方案，则这些化合物或物质可以以各种组合方式部分同时、部分相续地施用。

本发明的另一目的是提供根据本发明之疫苗与补体抑制剂及/或调节O₂/血红蛋白亲和力之化合物，特别是血红蛋白之别构剂的混合物，以及使用根据本发明之疫苗或其混合物，包括含有该疫苗之组合物，或根据本发明之疫苗和补体抑制剂及/或调节O₂/血红蛋白亲和力之化合物，特别是血红蛋白之别构剂的混合物，来预防及/或治疗淀粉样变，及/或减轻淀粉样变的影响的方法，所述淀粉样变是一组与淀粉样斑形成有关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变和与年龄有关的淀粉样变，例如包括但不限于神经学的病症，如阿尔茨海默氏病(AD)、路易氏体痴呆、唐氏症、遗传性脑出血伴有淀粉样变(Dutch型)；Guam帕金森氏症-痴呆综合征；以及其它以类-淀粉样蛋白质为基础或与之有关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化症；库贾氏症、帕金森氏症、与HIV有关的痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、成年型糖尿病；老年性心脏淀粉样变；内分泌肿瘤及其它，包括黄斑变性。

可以依据在Nicolau等人(2002)Proc Natl.Acad Sci USA 99，2332-2337中报告的方法，合成经修饰之淀粉样蛋白1-15肽。在Nicolau等人中报告的方法，涉及借着在树脂上将亲脂性或疏水性部分嫁接到预先-形成之肽的末端氨基酸残基上，来修饰抗原肽。特别地，使用已知的偶联化学，将经过保护的氨基酸，特别是Fmoc-保护之氨基酸，连接到树脂上。移除保护基，并偶联第二个经保护的氨基酸残基。然后使用标准的自动肽合成(其使用已知的保护化学，特别是Fmoc/tBu化学，和标准侧链保护基)，借着偶联上淀粉样蛋白Aβ_1-42的氨基酸1至15，产生具有在SEQ ID NO：1中提供之序列的肽片段，合成Aβ抗原肽，特别是Aβ_1-15抗原肽。在最后的步骤中，将两个另外的保护的氨基酸偶联至生长中的肽片段上。然后可以选择性地切下Mtt基团，并偶联棕榈酸。在洗涤树脂之后，使用标准方法移除保护基，并同时切除树脂，接着将侧链脱保护。可获得高纯度的终产物，可以借着本领域中已知的方法证实其身分，例如电喷雾质谱分析。

根据本发明之亲脂性或疏水性部分，可以是脂肪酸、甘油三酯或磷脂，其中脂肪酸碳主链具有至少10个碳原子。特别地，亲脂性或疏水性部分是碳主链具有至少大约14个碳原子且不超过大约24个碳原子的脂肪酸，在该范围内的每个单独的碳原子数目亦为本发明的一部分。更特别地，亲脂性或疏水性部分具有至少14个碳原子的碳主链，尤其是16个碳原子。疏水性部分的实例包括，但不限于棕榈酸、硬脂酸、肉荳蔻酸、月桂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸。在本发明一个特定的实施方案中，亲脂性或疏水性部分是棕榈酸。

然后可按照在Nicolau等人，2002中的描述，制备根据本发明之脂质体抗原。可在由脂质体，特别是以二肉荳蔻酰基磷脂酰胆碱(DMPC)、二肉荳蔻酰基磷脂酰乙醇胺(DMPEA)、二肉荳蔻酰基磷脂酰甘油(DMPG)和胆固醇制造，并任选地含有单磷酰脂质A之脂质体组成的构建体中，重构经修饰的淀粉样蛋白Aβ抗原肽，特别是经修饰之Aβ_1-15抗原肽。

在本发明一个特定的实施方案中，使用带有脂质A的脂质体作为佐剂，制备抗-淀粉样蛋白疫苗。特别是以0.9∶1.0∶0.7之比例，混合二肉荳蔻酰基磷脂酰-胆碱、-甘油和胆固醇。然后加入适当浓度的强免疫调节剂，例如单磷酰脂质A，所述浓度特别是在每毫摩尔30至50毫克之间的浓度，更特别的是每毫摩尔40毫克磷脂。然后以1∶30到1∶200的肽对磷脂之摩尔比例，特别是1∶50到1∶120的摩尔比例，更特别的是以1∶100，加入经修饰之抗原性Aβ肽。例如经由蒸发，移除溶剂，并以无菌的缓冲溶液，例如PBS，水化所得的薄膜。

亦可借着在例如Wagner等人(2002)Journal of Liposome Research第12(3)卷，第259-270页中描述的交叉流注射技术，制备脂质体。在脂质溶液注射至含水缓冲系统中的期间，脂质有形成″沉淀物″的倾向，随后自我排列为小泡。所得的小泡尺寸视诸如脂质浓度、搅拌速率、注射速率和所选择的脂质等因素而定。该制备系统由交叉流注射模块、极性相(例如PBS缓冲溶液)的容器、乙醇/脂质溶液容器和加压设备，特别是氮气加压设备所组成。在将水性或极性溶液泵过交叉流注射模块时，施加变化的压力，将乙醇/脂质溶液注射到极性相内。

为了判定经修饰之Aβ抗原构建体的免疫原性，以抗原肽免疫选自小鼠、大鼠、兔子、猪、鸟等等所组成之群的适当动物，特别是小鼠，尤其是C57BL/6小鼠。借着在免疫之后，按适当的时间间隔，使用免疫测定法，例如ELISA测定法，探测血清样品，判定抗原构建体的免疫原性。

使用经修饰之抗原构建体，特别是棕榈酰基化的抗原构建体，更特别的是棕榈酰基化之Aβ_1-15构建体，免疫罹患与淀粉样变(一组与淀粉样斑形成有关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变和与年龄有关的淀粉样变，包括但不限于神经学的病症，如阿尔茨海默氏病(AD)，包括特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)、路易氏体痴呆、唐氏症、遗传性脑出血伴有淀粉样变(Dutch型)；Guam帕金森氏症-痴呆综合征；以及其它以类-淀粉样蛋白质为基础或与之有关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化症；库贾氏症、帕金森氏症、与HIV有关的痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、成年型糖尿病；老年性心脏淀粉样变；内分泌肿瘤及包括黄斑变性之其它疾病或状况)有关之症状的动物，特别是哺乳动物或人类，其中所述淀粉样变特别是特征为丧失认知记忆能力的疾病或状况，例如轻微的认知损伤(MCI)，或任何其它与淀粉样蛋白有关的病症。

可以借着任何适当的标准施用路径，将根据本发明之超分子抗原构建体，特别是根据本发明之包括这类超分子抗原构建体的疫苗组合物，施用给动物，特别是哺乳动物或人类。通常，可借着局部、口服、经直肠、经鼻或胃肠外(例如静脉内、皮下或肌内)路径，施用该组合物。此外，可将该组合物并入缓释基质，如生物可降解的聚合物中，将该聚合物埋植在想要递送的位置附近，例如肿瘤部位的附近。该方法包括单一剂量的施用、按预定时间间隔之重复剂量的施用，以及一段预定时间的持续施用。

在本发明一个特定的实施方案中，以重复剂量，特别是以1至15个剂量，更特别的是以2至10个剂量，更特别的是以3至7个剂量，且再更特别的是以4至6个剂量，在1至10周的时间间隔，特别是在1至6周的时间间隔，更特别的是在1至4周的时间间隔，再更加的是在2至3周的时间间隔中，施用根据本发明之抗原构建体，特别是以药学上可接受之形式包括该抗原构建体之疫苗组合物。可以在加强之后的适当时间，特别是在加强之后3至10天，更特别的是在加强之后4至8天，且更特别的是在加强之后5至6天，采取血液样品，并使用已知的方法，特别是常用的免疫测定法之一，例如ELISA测定法，判定抗原构建体的免疫原性，以监视免疫反应。

利用根据本发明之抗原构建体，特别是采取药学上可接受之形式的包括根据本发明之抗原构建体的疫苗组合物进行免疫，在经过治疗之动物或人类中导致显著且高度特异的免疫反应。

将本发明之超分子抗原构建体组合物施用给人类或动物，诱导对抗原剂，如传染性生物，或对其他病理学状况，如β-淀粉样蛋白聚集(阿尔茨海默氏病)或过度增殖病症，如癌症之抗原物质的免疫力。免疫了的人类或动物发展出循环抗体对抗传染性生物，藉此使其刺激疾病的能力降低或失活。

亦可使用本发明之组合物来产生对抗抗原肽的抗体。将所得的抗体施用给个体，以被动免疫它们从而对抗各种疾病或病症，包括但不限于与淀粉样蛋白有关的疾病。

因此，在本发明一个特定的实施方案中，使用本发明之超分子抗原构建体组合物可以产生一组对各种病症特异的单克隆抗体或多克隆抗体，所述病症包括例如阿尔茨海默氏病。可以借着本领域技术人员已熟知的方法制造抗体。

可以借着任何适当的方式，优选借着注射，对人类或动物施用本发明之组合物。例如，借着皮下注射施用在脂质体中重构的经修饰之抗原肽。无论是内部产生的或由外在来源提供的循环抗体都可以与抗原结合，并降低或失活其刺激疾病的能力。

在某些实施方案中，超分子抗原构建体包括具有β-淀粉样蛋白之氨基酸序列的肽。该肽亦可以包括或相应于整个淀粉样蛋白β肽及其活性片段。此外，可用于本发明之肽还可以包括Aβ。

本发明还提供产生根据本发明之抗体，包括其任何功能等效抗体或其功能部分的方法，特别是产生根据本发明之单克隆抗体，包括任何功能等效抗体或其功能部分的方法，该方法包括针对超分子抗原构建体产生抗体，特别是单克隆抗体，该超分子抗原构建体包含与根据本发明并如同前文描述之Aβ肽抗原的氨基酸序列相应的抗原肽，特别是Aβ1-16(Δ15)肽抗原，更特别的是Aβ1-16(Δ14)或Aβ1-16(Δ13)肽抗原，再更特别的是Aβ1-14肽抗原，尤其是β-淀粉样蛋白肽Aβ_1-15，该抗原肽以疏水性部分，例如棕榈酸，或亲脂性部分，例如聚乙二醇(PEG)或两者的组合修饰之，其中该疏水性和亲脂性部分分别经由至少一个氨基酸与抗原肽的每端共价结合，特别是经由1或2个氨基酸偶联至抗原肽每一端的末端氨基酸残基上，其中所述用于连接的氨基酸为例如赖氨酸，或任何其它能够作为连接工具将疏水性和亲脂性部分与肽片段偶联在一起的适当氨基酸或氨基酸类似物，例如谷氨酸和半胱氨酸。

借着该方法获得的抗体，特别是单克隆抗体，当施用给罹患记忆损伤之动物，特别是哺乳动物或人类时，能够在经过治疗之动物、哺乳动物或人类中，保持或增加认知记忆能力。本发明另一方面提供针对超分子抗原构建体产生的抗体，包括其任何功能等效抗体或其功能部分，或更特别地，单克隆抗体，包括其任何功能等效抗体或其功能部分，该超分子抗原构建体包含与根据本发明并如同前文描述之Aβ肽抗原之氨基酸序列相应的抗原肽，特别是Aβ1-16(Δ15)肽抗原，更特别的是Aβ1-16(Δ14)或Aβ1-16(Δ13)肽抗原，再更特别的是Aβ1-14肽抗原，尤其是β-淀粉样蛋白肽Aβ_1-15，所述抗原肽以疏水性部分，例如棕榈酸，或亲脂性部分，例如聚乙二醇(PEG)或两者的组合修饰之，其中该疏水性和亲脂性部分分别经由氨基酸，例如赖氨酸或任何其它能够作为连接分子起作用的适当氨基酸或氨基酸类似物，与抗原肽的每一端共价结合。当使用PEG作为亲脂性部分时，游离的PEG末端与磷脂酰乙醇胺或任何其它适合用来作为锚定元件使抗原构建体埋入脂质体双层中的化合物共价结合。

实施例

实施例1：合成四(棕榈酰基赖氨酸)-Aβ_1-15肽抗原

1.1合成方案1：

依据经过改良之先前报告的方法(Nicolau等人2002)，合成棕榈酰基化的淀粉样蛋白1-15肽。该新颖方法涉及在树脂上，将棕榈酸移植到预先形成之肽的末端Lys残基上，而非通过逐步固相合成而并入经修饰之氨基酸Fmoc-Lys(Pal)-OH。该新颖的方法改善偶联效率，并提供纯度高相当多的产物。因此，使用HBTU偶联化学，将正交保护的氨基Fmoc-Lys(Mtt)-OH连接至Wang树脂上。使用在DMF中之20％哌啶移除Fmoc基团，并偶联第二残基Fmoc-Lys(Mtt)-OH。然后使用标准自动肽合成(使用Fmoc/tBu化学和标准侧链保护基)，偶联上接下来的15个氨基酸。最后，偶联的最后两个氨基酸是Fmoc-Lys(Mtt)-OH。然后使用在二氯甲烷中之1％TFA，选择性地切除Mtt基团，然后使用HBTU偶联棕榈酸。在冲洗树脂之后，以在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中之20％哌啶移除Fmoc基团，最后在标准条件下，使用TFA同时进行树脂的切除和侧链的脱保护。在冷的乙醚中研制，得到白色固体状之产物。电喷雾质谱分析证实产物的身分(预期的m/z：1097.9([M]3+)；实验值：1096.8([M-3H]3+)，没有检测到其它的三-、二-或单-棕榈酰基化之肽。

1.2合成方案2：

可使用另一种方法合成四(棕榈酰基赖氨酸)-Aβ_1-15肽抗原，其以在树脂上将棕榈酸移植到预先形成之肽的末端赖氨酸残基上为基础。因此，将正交保护的氨基酸Fmoc-Lys(ivDde)-OH偶联在2-氯三苯甲基树脂上。在Fmoc脱保护之后，使用Fmoc/tBu化学和标准氨基酸侧链保护基偶联第二个Fmoc-Lys(ivDde)-OH，接着是15个标准自动肽合成循环。在偶联最后两个Fmoc-Lys(ivDde)-OH残基之后，使用在DMF中之20％哌啶移除Fmoc基团，并使用二碳酸叔丁酯以Boc基团保护N-末端。然后以在DMF中之3％肼处理，以化学选择之方式移除ivDde保护基，并使用各18小时的两次偶联，使用HBTU将棕榈酸偶联到这四个赖氨酸残基上。在冲洗树脂之后，在标准条件下使用TFA/TIPS将侧链脱保护。冷乙醚中研制，得到白色固体状之产物。MALDI-Tof证实产物的身分，没有检测到其它的三-、二-或单-棕榈酰基化之肽。

使用如在US 6843942号和EU 1337322号中描述的方法，制备脂质体疫苗。

实施例2：合成N-和C-末端脂质-PEG β-淀粉样蛋白肽抗原

棕榈酰基化作用，尽管提供将肽固定在脂质体双层上的锚，但因为C_16:0 脂肪酸部分相对上降低的长度，导致该肽实际上是放在脂质体表面上。因此，加工该抗原的细胞，将必须摄取带有该肽的整个脂质体，结果可能产生相对上较慢的免疫反应。

欲促进免疫反应，已经应用其它的锚/间隔臂以在脂质体中重构肽，例如聚乙二醇(PEG)。将PEG共价连接在结合在该肽两端的赖氨酸残基上。在链(PEGn＝70)的另一端，共价连接磷脂酰乙醇胺(PEA)，其作为锚定元件在脂质体双层中起作用。因此，该脂质体仍具有佐剂之功能，而该肽又离脂双层足够远以致可以被单独加工，并因此与棕榈酰基化之抗原相比较，增加了它的免疫原性。

用于肽在N-α-位置处之单-聚乙二醇化的方法为已知并广泛使用的。亦已经描述了依据固相或肽-移植方法的、中等大小的肽在内部、N-或C-末端氨基酸残基处的位置-特异性单-聚乙二醇化作用。

为了避免位阻的问题，在溶液相中进行该反应。成功的方法涉及使用标准Fmoc/tBu氨基酸侧链保护来合成肽序列。至于那些含有内部Lys或His残基的肽序列(1-16，1-15)，在每个末端加入正交保护的Lys(ivDde)。在C-末端加入额外的Gly，以促进合成。利用在DMF中的20％哌啶移除Fmoc基团，并使用醋酸酐进行N-乙酰化。利用在DMF中之3％肼水合物选择性切割ivDde基团1小时。比起较广泛使用的Wang树脂，2-氯三苯甲基树脂更有利，因为发现它对肼解作用的抵抗力高很多。此外，2-氯三苯甲基树脂对酸极为敏感，并因此不像Wang树脂，其使得能够分离经保护的肽。确实，必须在溶液相中进行偶联反应，因为与树脂结合之肽与预先-活化之聚乙二醇化的脂质试剂DSPE-PEG-SPA的偶联不产生任何偶联产物。因此，在温和条件(醋酸/三氟乙醇/二氯甲烷，1∶1∶8，1小时，室温)下，从树脂上选择性切下，得到内部经保护的肽。

在DMSO和过量的碱中，成功地进行了衍生自序列1-16，1-15之肽与DSPE-PEG-SPA的溶液相偶联。然后借着加入过量的乙醇胺2小时使该反应淬灭，并将该溶液冷冻干燥。

借着HPLC纯化(半制备性逆相C₄柱)，得到纯度50-70％的N-和C-末端PEG-脂质缀合物，借着MALDI证实了其身分。在偶联反应的容易进行程度上，每个序列均显示相当大的变化，并因此调整条件(温度、DSPE-PEG-SPA的摩尔当量数、时间)。为了从想要的产物中分离过量的DSPE-PEG-SPA，应用HPLC纯化。在最后的侧链脱保护之前，可借着使用阳离子-交换层析法分离单-和二-偶联产物。经过后续的肽侧链脱保护和分离过量的淬灭的DSPE-PEG-SPA，导致以可接受之纯度分离到想要的缀合物。

聚乙二醇化和棕榈酰基化的抗原

Aβ_1-15(ACI-24)

H2N-Lys-Lys-Asp(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Phe-Arg(Pbf)-His(Trt)-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Gly-Tyr(tBu)-Glu(OtBu)-Val-His(Trt)-His(Trt)-Gln(Trt)-Lys(Boc)-Lys-Lys-OH

Aβ_1-16(ACI-01)

Ac-Lys-Asp(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Phe-Arg(Pbf)-His(Trt)-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Gly-Tyr(tBu)-Glu(OtBu)-Val-His(Trt)-His(Trt)-Gln(Trt)-Lys(Boc)-Lys-Gly-OH

Aβ_1-16(Δ14)(ACI-02)

Ac-Lys-Asp(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Phe-Arg(Pbf)-His(Trt)-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Gly-Tyr(tBu)-Glu(OtBu)-Val-His(Trt)-Gln(Trt)-Lys(Boc)-Lys-Gly-OH

Aβ_22-35(ACI-11)

Ac-Lys-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Lys-Gly-OH

Aβ_29-40(ACI-12)

Ac-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-Lys-Gly-OH

实施例3：结构和构象分析

3.1分析重构的抗原的构象

欲将抗原Aβ1-15锚定在脂质体表面上，按照先前的描述(Nicolau，C.等人，2002)，在肽的每端使用棕榈酰基化之赖氨酸串联。

棕榈酸的脂肪酸含有16个碳原子，已经显示其具有适合稳定插入脂质体双层内的长度。在该构建体中，因为C16脂肪酸部分的长度，该肽实际上躺在脂质体的表面上。为了使抗原肽以不同之构象与脂质体-脂质A结合，已经使用其它的锚/间隔臂，也就是聚乙二醇(有77个重复单位的PEG)，以在脂质体中重构肽Aβ1-16(ACI-01)。借着圆二色性，测量了在脂质体锚和Aβ肽之间的间隔臂，对在脂质体中重构之淀粉样蛋白序列的二级构象的影响(图1a)。PEG化的Aβ1-16似乎为无规卷曲或松散的蛋白质构象(在210nm处为负信号，并在到260nm时慢慢接近0轴)，而棕榈酰基化的肽Aβ1-15含有相当大部分的β-片层构象(到210nm为正信号，然后与0轴相交，并在到260nm时再次接近0轴)。因此，似乎，棕榈酰基化之肽与脂质体表面的更为接近性可能强制地造成确定的二级构象。这可能是因为肽与脂质体表面的静电相互作用(对于PEG化的肽，这明显是不可能的)所致。

3.2在脂质体中重构之棕榈酰基化的β-淀粉样蛋白1-15的结构分析

欲分析不同的接头分子对在脂质体中重构之β-淀粉样蛋白1-15肽的构象的影响，进行NMR分析(图1b和1c)。在这里分别使用棕榈酸和聚乙二醇(PEG，n＝77)作为连接至脂质体的接头分子或锚。

关于NMR研究，通过涡旋，将包含在脂质体中重构之棕榈酰基化之淀粉样蛋白1-15(ACI-24)和聚乙二醇化的Aβ_1-16抗原(ACI-01)肽的样品匀浆化，并借着离心(在4℃下以3000rpm进行3*90分钟)，增加该溶液之浓度，并将所得的湿沉淀物移至MAS转子内。借着以1mM之浓度将ACI-01和ACI-24肽制备物悬浮于pH 7.2的PBS缓冲溶液中，制备其它样品，并制备无接头的肽序列在相同缓冲溶液中的4mM溶液。在每个样品中加入10％D₂O。

在以500.13MHz(11.4T)的频率操作的、并装有4mm三重共振(¹H/¹³C/²H)HR-MAS探头的Bruker Avance 500光谱分析仪上纪录¹HHR-MAS NMR谱。将每个样品导入配有50微升圆柱形插入物的4毫米ZrO₂ 转子内。对于所有的NMR实验，样品以等于谱宽(6250Hz)的频率旋转，这从谱中清除了旋转边带。利用预饱和和Watergate序列(Piotto，M.等人(1992)；Piotto，M.等人(2005))，并借着累积1000-1500次扫描，获得一维质子NMR谱。流入探头中的bearing air的温度设定在295K，以确保在样品中为298K。

图1b和1c证实在棕榈酰基化和聚乙二醇化之β-淀粉样蛋白肽之一维质子NMR谱上存在差异。可在8.00和8.25ppm处观察到两个显著的差异。因为两种肽除了第16位的赖氨酸外，具有完全相同的氨基酸序列，在8.00和8.25ppm处的这些差异表明在二级结构上的差异，因为赖氨酸不应该在芳香族氨基酸残基之该光谱区中产生正信号。

通过在芳香族氨基酸残基之区域中的一维质子NMR光谱证实，根据本发明之超分子构建体的特殊设计导致当在脂质体中重构时，淀粉样蛋白抗原肽具有独特的、高度特异且重要之二级结构，该结构随着不同的接头分子而有所不同。这可能意味着接头/锚迫使肽被固定成某种或确定的二级结构，该结构视所使用之接头分子而定。在使用这些分子作为疫苗进行主动免疫的情况下，针对这些结构不同之抗原产生的抗体可能将是抗原-和构象-特异的。

在棕榈酰基化之Aβ_1-15和聚乙二醇化之Aβ_1-16抗原免疫APP×PS-1小鼠(参见以下的实施例)之后，借着ELISA和ORT获得的先前数据(ORT，物体识别任务，一种认知记忆测试)显示，仅有棕榈酰基化之抗原能在阿尔茨海默氏病的疾病模式中使记忆损伤得以恢复，虽然两者皆表现出相同的免疫原性。呈递相同肽的这两个抗原在体内引起两种不同之功能抗体的可能机制，最有可能与因为接头技术造成的呈递的肽具有不同二级结构有关。

实施例4：定量外部-和内部-取向的重构肽

借着以荧光胺(FLA)-为基础的测定法，估计在ACI-01和ACI-24中重构的肽的量，荧光胺特异地与伯胺反应，形成高度荧光的共价加成物(Udenfriend，S.等人，1972)。预期FLA与ACI-24中Pal1-15肽的N-端，以及与ACI-01中之Lys-16反应。

为了从在脂质体中的那些肽中分离游离肽，使样品接受超离心，并使用FLA测定法分析所得之上清液的肽含量。在ACI-01及ACI-24上清液中均没有检测到游离肽。对ACI-24和ACI-01两者，以FLA标记沉淀的级分显示出对于与脂质体中之肽的反应有极高的选择性。为了判定出现在脂质体表面上的肽总量，在Triton X-100(2％在PBS中)的存在下重复该测定法，以破坏脂质双层。这导致标记的显著增加；说明有大约63％的肽暴露在外膜表面上。另一方面，以FLA标记ACI-01仅在1.2mM FLA处达到平台，在该浓度下，当在有或无Triton X-100之下进行该测定时，发射均是相同的。这证实所有的肽均暴露在PEG化之疫苗ACI-01的表面上。

实施例5：比较聚乙二醇化和棕榈酰基化之抗原在野外型C57BL/6小鼠中的免疫原性(ELISA)

按照描述(Nicolau等人，2002)制备脂质体抗原。在由脂质体所组成的构建体中重构抗原聚乙二醇化之Aβ_1-16(Δ14)、Aβ_4-11和棕榈酰基化之Aβ_1-15，该脂质体由二肉荳蔻酰基磷脂酰胆碱(DMPC)、二肉荳蔻酰基磷脂酰乙醇胺(DMPEA)、二肉荳蔻酰基磷脂酰甘油(DMPG)和胆固醇(0.9∶0.1∶0.1∶0.7摩尔比例)制造，并以40毫克/mM磷脂含有单磷酰脂质A(Sigma-Aldrich，StLouis，MO，USA)。

以2周的间隔，使用聚乙二醇化之Aβ_1-16(Δ14)、Aβ_4-11和棕榈酰基化之Aβ_1-15(ACI-24)抗原免疫C57BL/6小鼠。以每种抗原免疫10-12只动物。在加强之后5天采取血清，并以数个稀释度的血清进行ELISA。比较结果显示不同抗原的免疫原性。

ELISA数据显示脂质体PEG-Aβ_1-16(Δ14)明显比棕榈酰基化之Aβ_1-15更具免疫原性。额外的明矾在小鼠中不提高PEG-Aβ_1-16(Δ14)的免疫原性。与PEG-Aβ_1-16(Δ14)相比较，由PEG-Aβ_4-11诱导之抗体反应较慢。

因为将较快免疫反应转换为较高记忆能力存在问题，在双重转基因阿尔茨海默氏病小鼠模式中，比较聚乙二醇化之抗原与棕榈酰基化之抗原。

可按照在US6843942号和EP1337322号中的描述，使用另一种方法。

实施例6：比较聚乙二醇化对棕榈酰基化之抗原在阿尔茨海默氏病小鼠模式中的免疫原性(ELISA)

6.1对于体内免疫研究，将APP717 C57BL/6×PS-1 A246E FVB小鼠(APP×PS-1小鼠)按单个个体笼养，双盲随机化，进行年龄匹配，并借着PCR进行基因型分型

使用年轻的(3-4个月)雌性小鼠，该小鼠为双重转基因小鼠品系，其表达突变的人类淀粉样蛋白前体蛋白质(APP-V717I)和突变的人类早老蛋白-1(PS1-A246E)，两者均在小鼠thy1基因启动子的控制之下并在F1(FVB×C57BI)遗传背景中。所有小鼠均在3周龄时借着聚合酶链式反应(PCR)定出基因型，并给予每只小鼠独特的标记。在研究开始时以及在盲目随机分至不同的实验中之前进行第二次PCR，由此所有小鼠在其一生中均进行两次基因型分型。小鼠可自由饮水并摄取标准小鼠饲料(Muracon-G，Trouw Nutrition，Gent，Belgium)。根据当地的动物福利法令，在颠倒的昼-夜律下将小鼠笼养在标准金属笼中。在开始行为测试之前5天，将小鼠关在macrolon2型笼子里，并运送至行为实验室，使其适应并习惯测试实验室的环境。

6.2免疫

使用带有脂质A的脂质体作为佐剂，制备抗-淀粉样蛋白的疫苗(Nicolau等人，2002)。以0.9∶1.0∶0.7之摩尔比例，混合二肉荳蔻酰基磷脂酰-胆碱、-甘油和胆固醇。以每毫摩尔磷脂40毫克的浓度，加入单磷酰脂质A，一种强免疫调节剂。以肽对磷脂为1∶100之摩尔比例，加入棕榈酰基化和聚乙二醇化的肽。蒸发溶剂，并利用无菌的PBS(pH 7.3)水合所得的薄膜至4毫摩尔之终磷脂浓度。

以2周的间隔，使用棕榈酰基化的(ACI-24，Aβ_1-15)和聚乙二醇化的(ACI-01，Aβ_1-16)抗原免疫APP×PS-1小鼠(每2周一次共5次，腹膜内接种)。在每个实验组中，借着腹膜内注射(每次注射200微升，含有8纳摩尔的肽)，以每种抗原免疫10只动物。使用空的脂质体作为对照。定期并在加强之后5天采取血清(每2周一次)，以数种稀释度的血清进行抗-淀粉样蛋白ELISA。比较结果显示不同抗原的免疫原性。

在第六次抗原接种之后5天，在棕榈酰基化以及在聚乙二醇化的脂质体/Aβ抗原免疫之APP×PS-1小鼠中，可实现明显的免疫反应。但与健康C57BL/6小鼠中的免疫反应不同，在疾病模型中聚乙二醇化之抗原不比棕榈酰基化的抗原引起更高的抗体效价。

利用ACI-24，抗Aβ-特异的IgG免疫反应较迅速地增加，在5周之后达到峰值。两种疫苗诱发显著不同的免疫球蛋白类型和同种型，棕榈酰基化的ACI-24抗原导致较高效价的IgG，而PEG化之ACI-01诱发较多IgM型抗体。亦就IgG同种型，分析得自所有动物的最后血液样品。

借着ELISA鉴定Aβ_1-42-特异的IgG和IgM抗体。用10微克/毫升之淀粉样蛋白β_1-42包被板子在4℃下过夜。在以PBS-0.05％吐温20冲洗各孔，并以1％BSA封闭之后，将系列稀释的血清加至板中，并在37℃下温育2小时。在冲洗之后，将板子与磷酸酶-缀合之抗-小鼠Ig(IgG，完整的抗体，Sigma-Aldrich St.Louis，MO，USA)或同种型特异的抗体(IgM、IgG1、IgG2a和IgG3，购自Pharmingen BD，San Diego，CA，USA和得自ZymedLaboratories，San Francisco，CA的IgG2b)一起在37℃下温育2小时。在最后的冲洗之后，将板子与PNPP(对-硝基-苯基-磷酸盐)，磷酸酶底物一起温育，并使用ELISA板读取器在405nm处读板。参考得自免疫的成年小鼠的经滴定的血清合并物的系列稀释物，或市售抗体之系列稀释物(6E10，ChemiconInternational，Temecula，CA，USA)来表示结果。或者，以在如下稀释度的OD值表示结果，在所述稀释度没有血清处在饱和水平(表1)。

表1.

	IgG1 对照	ACI-01	ACI-24	IgG2a 对照	ACI-01	ACI-24	IgG2b 对照	ACI-01	ACI-24
										平均值	0.1	0.11	1.33	0.15	0.22	0.55	0.59	1.81	2.88
SD	0.01	0.02	0.98	0.03	0.03	0.77	0.12	1.23	0.82

	IgG3 对照	ACI-01	ACI-24
				平均值	0.1	0.63	2.05
SD	0.00	0.22	0.39

ACI-24主要导致IgG1和IgG2b同种型，两者皆是主要的非炎性Th2亚型，ACI-24亦导致IgG3，其为独立于T-细胞的IgG亚型。除了一只接种ACI-24疫苗的动物之外，两种疫苗均仅诱导极低水平的IgG2a(Th1)。

借着ELISA，使用覆盖Aβ1-42之完整氨基酸序列的、包括总共33个生物素化之肽的肽库，进行所得之抗体的表位作图，并使用生物素化的完整β肽作为阳性对照组。以两种疫苗ACI-01和ACI-24免疫，导致具有相同表位的抗-Aβ抗体，所述表位由Aβ的氨基酸1-9(肽1)限定。此外，我们借着测量所得之抗-Aβ抗血清对聚合Aβ的特异性结合，借着对Aβ1-42纤维进行适应性的ELISA测定，分析了最终的构象依赖性。与由利用ACI-01免疫之小鼠产生之抗血清相比，ACI-24免疫导致显著更高效价的识别Aβ1-42纤维之抗-Aβ抗体(表2)。从所得的结果中，可以得知利用ACI-01和ACI-24免疫产生之免疫反应，不仅在其效价、亚型和Ig-同种型上有差异，在其构象特异性上亦是不同的。

表2.

	对照	ACI-01	ACI-24
				SEM	2049.0± 46.7	3426.2± 221.9	7770.6± 2090.1
统计学ANOVA		p＜0.05	p＜0.01

实施例7：比较聚乙二醇化对棕榈酰基化之抗原在阿尔茨海默氏病之小鼠模型中的识别能力(ORT)

7.1在APP×PS-1阿尔茨海默氏病之小鼠模型中，对非-空间的、海马依赖性记忆能力之改善的影响

欲分析在APP×PS-1阿尔茨海默氏病之小鼠模型中通过使用棕榈酰基化(ACI-24，Aβ_1-15)和聚乙二醇化(ACI-01，Aβ_1-16)抗原进行主动抗-Aβ1-16/1-15免疫接种而实施免疫的3个月时间内，对非-空间的海马依赖性记忆能力之改善的影响，基本上按照描述(Tang等人1999；Rampon等人2000)进行物体识别测验(ORT)。使用ANOVA Turkey-Kramer多重比较检验，按照描述(Moechars，D.等人(1999)和(1996))，进行统计学分析。使用用于Windows的GraphPad InStat 3.06版，GraphPad软件，San DiegoCalifornia USA.www.graphpad.com.进行该检验。

简言之，三个月的免疫计划安排如下：每2周一次接种ACI-01和ACI-24，共计六次。一组小鼠接受空的脂质体，作为对照。使小鼠习惯树脂玻璃(Plexiglas)开放场箱子(52×52×40cm)1小时，该箱子具有黑色的垂直壁和半透明的地板，由放在盒子下的灯微弱地照亮。第二天将动物放在相同的盒子里，并接受10分钟技能训练。在训练期间，将小鼠单个地放在有A物体(弹珠或骰子)的开放场中，并测量花费在探索A物体上的时间(动物的口鼻部朝向该物体且距离＜1公分的时间)。在3小时之后进行的10分钟的保持训练期间(第二项训练)，将新物体(B物体：弹珠或骰子)与已熟悉的物体(A物体)一起放在开放场中。记录动物花费在探索两个物体上的时间(tA和tB)。使用识别指数(RI)，其被定义为探索新物体所花费之时间对探索两个物体所花费之时间的比例[(tB/(tA+tB))×100]，由此测量非空间记忆。按照描述((Moechars等人1999；Moechars等人1996))，使用ANOVA单因素来进行统计学分析。

以2周之间隔，使用棕榈酰基化(ACI-24)和聚乙二醇化(ACI-01)之抗原免疫APPXPS-1小鼠。以每种抗原(每次腹膜内注射200微升，100微克肽)腹膜内免疫10只3月龄的动物，并以空的脂质体作为对照。在加强之后5天采取血清，并以数个稀释度的血清进行ELISA。比较结果显示不同抗原的免疫原性。

在非空间视觉识别记忆的典型试验中，评估以棕榈酰基化(ACI-24)和聚乙二醇化(ACI-01)之Aβ抗原免疫的APP×PS-1转基因小鼠的认知能力，方式是使动物接受已知依赖于海马活动的物体识别任务((Tang等人1999)，(Rampon等人2000))。基本上，在训练所有的小鼠熟悉给定的物体之后3小时，借着使它们面对熟悉物体之外位于该熟悉物体旁边的新物体，测试它们的记忆保持。

与对照处理的APP×PS-1小鼠相比较，以棕榈酰基化之Aβ_1-15抗原(ACI-24)免疫，可显著地增加APPxPS-1小鼠的记忆保持或认知记忆能力(76.1±3.9％相对于对照的49.1±4.5％；粘)。这证实ACI-24免疫的小鼠至少持续3小时识别并记得最初的物体，藉此引起其动机及其探索能力，当与健康的未-处理和未经转基因之野生型小鼠(61.8±5.1％)相比较时，就像健康的，年龄、性别和品系匹配的小鼠一样是完好的。虽然ACI-01肽只比ACI-24肽长一个C-末端氨基酸(第16位赖氨酸)，且在这些疫苗之间仅有接头技术不同，但利用聚乙二醇化之Aβ_1-16抗原(ACI-01)的免疫作用未表现出任何与ACI-24相当的记忆恢复(45.6±6.2％)。

表3

	对照	ACI-01	ACI-24	健康的
					SEM	49.1±4.5	45.6±6.2	76.1±3.9	61.8±5.1
统计学		n.s.^*相对于对照	p＜0.05相对于对照	n.s.^*相对于对照

n.s.^*：不显著

7.2不同抗体类型IgM和IgG对认知功能的可能贡献

欲分析不同抗体类型IgM和IgG对认知功能的可能贡献，进行相关性分析。

IgM抗体与记忆能力无关(r²＝0.2333)，但所得的IgG型抗体分两阶段与记忆能力的等级(ORT指数)粗略相关(r²＝0.857)。在0到20的ORT指数之间，观察到较线性的关系，而在超过20的ORT指数下，该相关性进入饱和阶段。这可能表明不能通过血-脑屏障的IgM抗体，对记忆的恢复没有贡献。相反的，IgG抗体可以视其亚型而跨越血脑屏障，并与记忆改善有关。

欲评估ACI-24免疫作用在APP×PS-1小鼠的脑中对改变可溶性和不可溶淀粉样蛋白肽之含量的能力，在脑匀浆物之可溶性级分中，借着特异的ELISA测量人类Aβ1-40和Aβ1-42。使用市售的ELISA药盒(淀粉样蛋白β40或β42ELISA，The Genetics Company，Zurich，Switzerland)。根据制造商的方案进行ELISA。借着与利用合成之Aβ1-40或Aβ1-42制成的标准曲线比较吸光度，定量样品的Aβ含量(表4)。

表4.

	可溶性Aβ	可溶性Aβ42	不可溶Aβ40	不可溶Aβ42
					对照	2.6±0.6	3.1±1.0	3.0±0.1	3.0±0.04
ACI-24	2.1±0.8	2.1±0.9	2.0±0.1.	2.0±0.07
					统计学 ANOVA	n.s.	p＜0.01	p＜0.05	p＜0.05

n.s.^*：不显著

以平均值表示数据(Aβng/g脑匀浆物±SEM)

以ACI-24免疫导致不可溶的、与斑块有关的Aβ1-40和Aβ1-42的明显降低。可溶性Aβ1-42的量亦明显降低，而可溶性Aβ1-40的量仅显示有减少的倾向。

实施例8：以ACI-01和-24免疫不引起炎症反应

借着以特异的ELISA测量局部产生的炎症性细胞因子IL-1β、IL-6、IFN-γ和TNFα，评估两种脂质体疫苗，ACI-01和ACI-24的安全性。使用夹心ELISA，根据制造商的手册(均为R&D Systems，Minneapolis.MN， USA)，测量在总脑匀浆物中之TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-1β的水平。参考重组细胞因子之系列稀释物，以pg/ml表示结果。借着定量免疫组织化学法，评估在脑中下托区中激活的小神经胶质细胞(MHCII)和星形胶质增生(GFAP)的程度。

以ACI-01或ACI-24免疫未显著增加脑中IL-1β、IL-6、IFN-γ和TNFα的水平。相似地，当以ACI-24免疫时，未观察到星形胶质增生的差异，而在3个月的免疫期之后，激活的小神经胶质的范围显示有降低的倾向。

实施例9：制造mAbs：

以2周的间隔，使用棕榈酰基化之抗原(ACI-24，Aβ_1-15)免疫C57BL/6小鼠。以每种抗原免疫10-12只动物(注射体积：200微升，含有8纳摩尔肽)。在处死动物之前4天，进行最后一次注射。在5次加强之后，选择具有治疗效价的小鼠(当1∶5,000稀释的血清在ELISA中呈阳性时)，进行融合。从经免疫的动物中收获脾脏细胞，并借着将致敏之脾脏细胞与骨髓瘤细胞系融合，产生杂交瘤。使用已熟知的Kohler和Milstein(Nature 256：495-497(1975))以及Harlow和Lane(Antibodies：A Laboratory Manual(Cold SpringHarbor Laboratory，New York 1988))的方法，进行得自脾脏之小鼠B-淋巴细胞与骨髓瘤细胞系SP2-0(ATCC，Manassas，VA)之细胞的融合。

借着加入聚乙二醇诱导细胞融合。然后以传统方式，例如使用有限稀释，克隆所得的杂种细胞，选出产生IgG的杂交瘤克隆系，并借着ELISA测试其对Aβ_1-42肽的特异结合，培养所得的产生想要单克隆抗体之克隆。

借着将细胞铺在含有次黄嘌呤、氨甲碟呤和胸腺嘧啶核苷(HAT)的选择培养基中，以化学方式选择如此获得的杂交瘤。

随后就产生对抗特定的与淀粉样蛋白有关之疾病或病症的单克隆抗体的能力，筛选杂交瘤。克隆产生感兴趣的抗体的杂交瘤，扩大并冷冻储存以供未来生产。优选的杂交瘤产生具有IgG同种型之单克隆抗体，更优选的是IgG2同种型。

实施例10：抗体mACI-24-Ab4的特异性确定

欲分析抗体ACI-24-Ab4的特异性，将不同浓度的预先形成之淀粉样蛋白1-42、1-40和1-38原纤维点在Hybond ECL硝化纤维素膜(AmershamBiosciences)上。在以10％奶粉和0.7％吐温20封闭之后，在室温下将该膜与20微克/毫升的一级抗体一起温育2小时。在冲洗之后，在室温下将该膜与辣根过氧化物酶缀合的绵羊抗-小鼠IgG抗体(Amersham Biosciences)一起温育1小时，冲洗并与化学发光溶液一起温育，接着以该膜使X-光片曝光。

欲测量mAb(mACI-24-Ab4)与淀粉样蛋白β1-42纤维的结合，在37℃下7天预先形成Aβ1-42、1-40和1-38纤维，并将其点在膜上。使用20微克/毫升的抗体测量结合能力，并借着与辣根过氧化物酶缀合的绵羊抗-小鼠IgG抗体接触20分钟，检测已结合的抗体。

正如可借着点印迹分析证明的，抗体mACI-24-Ab4以不同的灵敏度和不同的预先形成之Aβ纤维结合。比起Aβ_1-40或Aβ_1-38，抗体对Aβ_1-42纤维显示出最高的结合灵敏度。其能够检测至少0.001微克的Aβ_1-42纤维，而抗体对Aβ_1-40纤维的检测限是至少0.1微克，对Aβ_1-38纤维则是1微克，这意味着对这些类型的淀粉样蛋白纤维的灵敏度低100倍到1000倍。这些数据证实抗体ACI-24-Ab4对淀粉样蛋白形式(1-42)有高至少100倍的灵敏度，已知该形式借着改变二级构象而变成不可溶的，并在阿尔茨海默氏病患者的脑中是淀粉样斑的主要部分。

实施例11：借着密度-梯度超离心的分级分离

借着密度-梯度超离心(Rzepecki等人，2004)，研究单克隆抗体在抑制Aβ_1-42纤维聚合和造成Aβ_1-42纤维解聚上的性质，该密度-梯度超离心系以下列原理为基础：在有或无抗体之下温育之后分布着不同尺寸之所得的肽纤维，接着在预先形成的梯度(OptiPrep^TM)上进行SDS-PAGE沉降分析。同时可以分析预先形成之Aβ-纤维的群体、共同温育之抗体的解聚和聚集抑制特性、以及抗体对纤维之结合作用，是本方法的明显优点。

在解聚和抑制试验中，分析所有针对Aβ_1-15产生的单克隆抗体(mACI-24-Ab4)。

关于对Aβ_1-42聚集的抑制作用，以两种不同的摩尔比例(单体Aβ_1-42比MAb高30或100倍的摩尔比例)，将Aβ_1-42单体与mAbs一起温育，Aβ之终浓度为50μM。在37℃下温育24小时之后，将样品覆盖在不连续梯度的Optiprep^TM上，并在4℃下以259000g离心试管3小时。收获15个级分(各140微升)，级分1是最低密度的级分，来自梯度的顶端，而级分15是密度最高的级分，来自梯度的底部。亦采集沉淀物。借着SDS-PAGE分析收集到的级分，并以银染色。抑制试验用的Aβ_1-42浓度比用于解聚试验的低五倍，这可以降低淀粉样蛋白的聚集运动，并确保在线性相中测量。

不添加mAb，Aβ肽在24小时温育时间之后聚集，并在级分13到沉淀中发现大多数的该蛋白质(沉淀，在12中极少)，证明Aβ肽单体的完全聚合。成功且明显地抑制聚集，应该导致小纤维或寡聚物，其应在较低密度之级分中找到。在聚集试验中，mACI-24-Ab4引起主要条带(最强条带)从13移至11和12，以及在级分13至沉淀中之条带的显著溶解。这些意味着mACI-24-Ab4展现强有力之抑制Aβ肽单体聚合成纤维的能力，并显示与Aβ纤维的特异结合(在级分11和12中)。

至于借着与MAbs共同温育对预先形成之Aβ_1-42原纤维的解聚作用(以两种不同的摩尔比例1∶30和1∶100，MAb+单体Aβ_1-42，Aβ终浓度为246uM)，在37℃下温育样品24小时。在24小时之后，按照以上以及以前所述(Rzepecki等人，2004)，借着超离心将样品分级分离，并借着SDS-PAGE分开。

与聚集试验类似，借着Aβ_1-42原纤维单独于级分12至P(沉淀)中的分布，可以证明完全的纤维聚合。在此处当与预先形成之纤维共同温育时，纤维朝向较低密度的级分迁移，将表明抗体的解聚活性。以1∶100之摩尔比例加入mACI-24-Ab4，显示大多数淀粉样蛋白纤维从12移至11。因此，mACI-24-Ab4亦显示出强的解聚活性。

实施例12：在阿尔茨海默氏病的小鼠模型中，棕榈酰基化之抗原和补体激活抑制剂在识别能力保持试验中的联合应用

为了防止经由接种进一步刺激业已过度-激活之补体系统所引起的可能副作用，如神经学的并发症，将棕榈酰基化之抗原(ACI-24，Aβ_1-15)与补体抑制剂联合施用，该补体抑制剂选自TP10(可溶性人类补体受体1)、艾可里单抗(Eculizumab)(抗-人类补体蛋白质C5)、佩希里单抗(Pexelizumab)(抗-C5补体)、天然C1抑制剂塞特(Cetor)C1-esteraseremmer-N)和天然人类C1抑制剂。

在以棕榈酰基化之(ACI-24，Aβ_1-15)抗原对人类患者接种之前，或之后马上施用补体抑制剂。

在以棕榈酰基化之(ACI-24，Aβ_1-15)抗原接种之前施用补体抑制剂的应用方案中，在始于接种之前不超过20小时到终于临接种之前的时间窗内施用抑制剂化合物(应用方案1)。

在以棕榈酰基化之(ACI-24，Aβ_1-15)抗原接种之后施用补体抑制剂的应用方案中，在始于接种之后马上到终于疫苗施用之后一天的时间窗内施用补体抑制剂。

12.1TP10(可溶性人类补体受体1)

在利用TP10的人类试验中，发现优选在CPB之后将TP10之浓度维持在100微克/毫升到160微克/毫升之间的范围内24小时。为了达到这样的浓度范围，历经0.5小时给予10毫克/公斤之起始剂量，接着历经23.5小时给予10毫克/公斤是最适当的(Li JS，Am Heart J.20041月；147(1)：173-80)。

依据应用方案1，在已经达到想要的TP10浓度之后，或者根据应用方案2，在施用10毫克/公斤TP10之起始剂量之前，进行棕榈酰基化之(ACI-24，Aβ_1-15)抗原的疫苗接种。

12.2艾可里单抗(抗-人类补体蛋白质C5)

每周借着输液施用艾可里单抗(600毫克)，持续4周，在一周之后为900-毫克的剂量，然后每隔一周再给900毫克-剂量，至第12周(Hillmen P，N EnglJ Med.20042月5日；350(6)：552-9)。

至于长期治疗，艾可里单抗可以以每12至14天900毫克之剂量施用(HillA，Blood.200510月1日；106(7)：2559-65.Epub 20056月28日)。

依据应用方案1，在已经施用第一个600毫克剂量之艾可里单抗之后，或者依据应用方案2，在给予600毫克艾可里单抗之起始剂量之前，进行棕榈酰基化之(ACI-24，Aβ_1-15)抗原的疫苗接种。

在某些情况下，可能更为适合的是，仅在第4周之后使用应用方案1，此时前4回合的艾可里单抗施用已结束，并在人体内达到稳定的稳态浓度。

12.3佩希里单抗(抗-C5补体)

历经10分钟以2.0毫克/公斤冲击剂量(bolus)静脉内给予佩希里单抗，该冲击剂量施用之后可历经20小时输注1.0毫克/公斤(http://circ.ahajournals.org/cgi/content/full/106/23/2986-a)或输注0.05毫克/公斤/小时持续24小时。

依据应用方案1，在已经施用第一个2.0毫克/公斤冲击剂量的佩希里单抗之后，或者依据应用方案2，在给予最初的2.0毫克/公斤冲击剂量的佩希里单抗之前，进行棕榈酰基化之(ACI-24，Aβ_1-15)抗原的疫苗接种。

在某些情况下，可能更适合的是，仅在第2次通过输注的应用已完成并在人体内达到稳定的稳态浓度之后，使用应用方案1。

12.4天然的人类C1抑制剂

可以以6.25至100单位/公斤之剂量施用C1抑制剂(van Doorn MB，Allergy Clin Immunol.200510月；116(4)：876-83。Epub 20058月8日)。

或者，可以以500到1000国际单位的剂量，施用巴氏灭菌过的C1酯酶抑制剂浓缩物(De Serres J，Transfus Apher Sci.200312月；29(3)：247-54)；(Bork K，Arch Intern Med.20013月12日；161(5)：714-8)。

亦可在1小时输液中静脉内给予C1-抑制剂，从6000国际单位开始，以12小时之间隔，接着给予3000国际单位、2000国际单位和1000国际单位(Caliezi C，Crit Care Med.2002年8月；30(8)：1722-8)。

最后，可每三天一次，以每公斤体重25血浆单位之浓度，静脉内施用蒸气加热的抑制剂浓缩物形式的C1-抑制剂(Waytes AT，N Engl J Med.1996年6月20日；334(25)：1630-4)。

依据应用方案1，在已经施用C1-抑制剂之后，或者依据应用方案2，在给予C1抑制剂之起始剂量之前，进行棕榈酰基化之(ACI-24，Aβ_1-15)抗原的疫苗接种。

12.5天然的C1抑制剂塞特(C1-esteraseremmer-N)

以1000单位、1500单位或2000单位，施用C1-esteraserem mer-N或塞特，并在稍后施用相同剂量的其它产物。

依据应用方案1，在已经施用第二个剂量之后，或者依据应用方案2，在给予1000单位、1500单位或2000单位C1-esteraserem mer-N或塞特的起始剂量之前，进行棕榈酰基化之(ACI-24，Aβ_1-15)抗原的疫苗接种。

申请人或代理机构卷号：L3018PCT BS

国际申请号：新PCT申请

与保藏的微生物或其它生物材料的说明

(PCT第13bis条)

PCT/RO/134表(1998年7月；2004年1月再版)

【附图简单说明】

图1a：两种脂质体疫苗的设计和生物物理表征，所述疫苗含有具有全长淀粉样蛋白β1-42肽的前15个(ACI-24，Aβ1-15)和16个(ACI-01，Aβ1-16)氨基酸的肽免疫原。b)ACI-01含有Aβ1-16，该肽在两侧各有一个聚乙二醇化的赖氨酸残基，在PEG链(a)的另一端带有DSPE作为脂质体锚。至于ACI-24(b)，在Aβ1-15的每一端共价连接两个末端的棕榈酰基化之赖氨酸残基，以使抗原在脂质体(a)内重构并锚定在其中。c)两个在脂质体中重构之抗原的CD谱。ACI-01显示的光谱，表明无规卷曲或松散的蛋白质构象(从210nm为负信号，并到260nm慢慢达到0轴)，而ACI-24谱含有相当大部分的β结构(从210nm为正信号，然后与0轴交叉，然后到260nm再度接近0轴)。为了CD谱分析，在脂质体中重构β-淀粉样蛋白样品(ACI-01和-24)，并借着使用探头超声仪，在0.9865毫克/毫升之肽浓度下(1毫升在PBS中)超声。在具有0.1cm光程长度之石英比色杯的Dichrograph(JASCO J-810)上记录CD谱。在25℃下以20nm/分钟之扫描速度，该谱窗口是190-260nm，并以椭圆度以θ(mdeg)单位表示原始数据。

图1b：¹H波谱区，包括A.ACI-01疫苗、B.ACI-24疫苗、C.1mM ACI-01、D.1mM ACI-24和E.4mM Ab1-15肽(在PBS缓冲溶液，pH 7.2中)之肽酰胺质子和芳香族侧链的魔角旋转NMR谱。

图1c：一维1H NMR谱，来自9至5.5ppm之聚乙二醇化(黑色)和棕榈酰基化(蓝色)之β-淀粉样蛋白1-15。合成肽，分别与棕榈酸或聚乙二醇共价连接，并在PBS中重构。至于NMR分析，离心样品，并从9到0.2ppm记录总谱。

图2：分析利用脂质体中的聚乙二醇化(ACI-01)或棕榈酰基化(ACI-24)抗原免疫之APP×PS-1小鼠之血清中的淀粉样蛋白-特异性效价，与以空脂质体免疫的小鼠(对照)相比较。a)以ACI-24免疫，仅在两次免疫之后和在第一次之后3周，产生高水平的淀粉样蛋白-特异之IgG抗体(a，左)，且在5周之后达到最大值。而以ACI-01免疫产生高水平的淀粉样蛋白-特异之IgM抗体(a，右)，在7周后达到最大，但与ACI-24相比，仅有低IgG水平(a，左，p＜0.5)。

保藏：

依据布达佩斯条约，在“德国微生物和培养物保藏中心(DSMZ)”(Braunschweig，Mascheroder Weg 1B，38124 Branuschweig)，保藏下列的杂交瘤细胞系：

杂交瘤细胞系名	抗体名	保藏日期	保藏号
				EJ 7H3	mACI-24-Ab4	2005年12月8日	DSM ACC2756

参考文献

Alving等，Infect.Immun.60：2438-2444，1992

Bork K，Arch Intern Med.2001 Mar 12；161(5)：714-8

Caliezi C，Crit Care Med.2002 Aug；30(8)：1722-8.

De Serres J，Transfus Apher Sci.2003 Dec；29(3)：247-54

Doorn MB van，，Allergy Clin Immunol.2005 Oct；116(4)：876-83.Epub2005 Aug 8

Harlow和Lane(Antibodies：A Laboratory Manual(Cold Spring HarborLaboratory，New York 1988)

FYLAKTAKIDOU，K.C.，LEHN，J.-M.GREFERATH，R.NICOLAU，C.，

″Inositol tripyrophosphate：a new membrane permeant allosteric effectorof haemoglobin″，Bioorg.Med.Chem.Lett.，15，1605-1608，2005.Hodgson等，Bio/Technoloy，9：421(1991)

Khaw，B.A.等J.Nucl.Med.23：1011-1019(1982)

Kohler和Milstein(Nature 256：495-497(1975)

Moechars，D.，Dewachter，I.，Lorent，K.，Reverse，D.，Baekelandt，V.，Naidu，A.，Tesseur，I.，Spittaels，K.，Haute，C.V.，Checler，F.，Godaux，E.，Cordell，B.和Van Leuven，F.：1999，J.Biol.Chem.274，6483-6492.

Moechars，D.，Lorent，K.，De Strooper，B.，Dewachter，I.，& Van Leuven，F.Expression in brain of amyloid precursor protein mutated in thealpha-secretase site causes disturbed behavior，neuronal degeneration andpremature death in transgenic mice.EMBO J.15，1265-1274(1996).

Hill A，Blood.2005 Oct 1；106(7)：2559-65.Epub 2005 Jun 28.

Hillmen P，N Engl J Med.2004 Feb 5；350(6)：552-9.

Li JS，Am Heart J.2004Jan；147(1)：173-80

Moechars，D.，Lorent，K.，De Strooper，B.，Dewachter，I.和Van Leuven，F.：1996，EMBO J.15，1265-1274.

Nicolau，C.，Greferath，R.，Balaban，T.S.，Lazarte，J.E.，和Hopkins，R.J. (2002).Proc Natl Acad Sci USA 99，2332-2337.

Piotto，M.，Saudek，V.，& Sklenar，V.Gradient-tailored excitation forsingle-quantum NMR spectroscopy of aqueous solutions.J.Biomol.NMR2，661-665(1992).

Piotto，M.，Elbayed，K.，Wieruszeski，J.M.，和Lippens，G.Practical aspectsof shimming a high resolution magic angle spinning probe.J.Magn Reson.173，84-89(2005).

Queen等，Proc.Natl Acad Sci USA，86：10029-10032(1989)

Rampon，C.，Tang，Y.P.，Goodhouse，J.，Shimizu，E.，Kyin，M.和Tsien，J.Z.：2000，Nat.Neurosci.3，238-244.

Rzepecki等，2004

Rousseaux等Methods Enzymology，121：663-69，Academic Press，1986

Tang，Y.P.，Shimizu，E.，Dube，G.R.，Rampon，C.，Kerchner，G.A.，Zhuo，M.，Liu，G.和Tsien，J.Z.：1999，Nature 401，63-69.

B Teisseire，C Ropars，M C Villeréal，和C Nicolau，<<Long-termphysiological effects of enhanced O2 release by inositolhexaphosphate-loaded erythrocytes.”Proc Natl Acad Sci USA.1987October；84(19)：6894-6898

Teisseire B，Ropars C，Villeréal MC，Nicolau C.Long-term physiologicaleffects of enhanced O2 release by inositol hexaphosphate-loadederythrocytes.Proc Natl Acad Sci U S A.1987 Oct；84(19)6894-6898.

Udenfriend，S.等Fluorescamine：a reagent for assay of amino acids，peptides，proteins，and primary amines in the picomole range.Science 178，871-872(1972).

Wagner等(2002)Journal of Liposome Research Vol 12(3)，pp 259-270

Waytes AT，N Engl J Med.1996 Jun 20；334(25)：1630-4

US-P 6843942

EPA 1337322

序列表

<110>AC免疫公司

<120>治疗性疫苗

<130>L3028PCT

<150>EP 05027091.7

<151>2005-12-12

<150>EP 06009098.2

<151>2006-05-02

<160>6

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>15

<212>PRT

<213>人类(Homo sapiens)

<220>

<223>抗原肽AB_1-15

<400>1

Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln

15

<210>2

<211>16

<212>PRT

<213>人类

<220>

<223>抗原肽AB_1-16

<400>2

Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys

16

<210>3

<211>15

<212>PRT

<213>人类

<220>

<223>抗原肽AB_1-16(A14)

<400>3

Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His Gln Lys

15

<210>4

<211>8

<212>PRT

<213>人类

<220>

<223>抗原肽AB_4-11

<400>4

Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu 8

<210>5

<211>13

<212>PRT

<213>人类

<220>

<223>抗原肽AB_22-35

<400>5

Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile Gly Leu 13

<210>6

<211>12

<212>PRT

<213>人类

<220>

<223>抗原肽AB_29-40

<400>6

Gly Ala Ile Ile Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val 12

Claims

1.一种制备治疗性疫苗组合物的方法，其包括使用被亲脂性或疏水性部分修饰的Aβ_1-15抗原肽抗原，其中该Aβ肽抗原按如下方式制备：(a)在树脂上利用标准的自动肽合成而预先形成肽，(b)然后通过在树脂上将亲脂性或疏水性部分嫁接到该预先形成的肽的末端氨基酸残基上而进行修饰，其中该亲脂性或疏水性部分是具有至少10个碳原子之碳主链的脂肪酸。

2.权利要求1的方法，其中该治疗性疫苗组合物包含单一或重复的SEQ ID NO：1所示Aβ_1-15肽抗原。

3.权利要求1的方法，其中该Aβ肽抗原在载体中重构。

4.权利要求3的方法，其中该Aβ肽抗原在脂质体中重构。

5.权利要求1的方法，其中该疏水性部分是棕榈酸。

6.权利要求4的方法，其中该脂质体制备物含有佐剂。

7.权利要求6的方法，其中该佐剂为单磷酰脂质A。

8.一种制备治疗性疫苗组合物的方法，其包括使用免疫原性Aβ_1-15抗原肽，其中该Aβ_1-15肽抗原为经过共价连接的棕榈酰基化的氨基酸残基而修饰并在脂质体中重构的棕榈酰基化的Aβ_1-15肽抗原，其中该Aβ_1-15肽抗原通过如下方式制备：(a)在树脂上利用标准的自动化肽合成而预先形成肽，(b)然后通过在树脂上将棕榈酸部分嫁接到该预先形成的肽的末端氨基酸残基上而进行修饰。

9.权利要求1-5和8中任一项的方法，其中该Aβ_1-15肽抗原是经分别共价连接于该肽之N-和C-端的2个棕榈酰基化氨基酸残基修饰的。

10.权利要求1-5和8中任一项的方法，其中该Aβ_1-15肽抗原是经4个棕榈酰基化氨基酸残基修饰的，其中该肽之N-和C-端分别共价连接2个棕榈酰基化氨基酸残基。

11.权利要求1-5和8中任一项的方法，其中经在该肽每端共价连接棕榈酰基残基而修饰的2或2个以上棕榈酰基化Aβ_1-15肽抗原分子在单一脂质体中重构。

12.权利要求9或10的方法，其中该疫苗组合物用于对罹患阿尔茨海默氏病的动物或人类进行治疗，该治疗导致认知记忆能力保持的增加。

13.一种制备包含被亲脂性或疏水性部分修饰的Aβ_1-15抗原肽的抗原构建体的方法，包括步骤：

(a)通过在树脂上标准的自动化肽合成而预先形成该Aβ_1-15肽抗原，和

(b)通过在树脂上将亲脂性或疏水性部分嫁接到该预先形成的Aβ_1-15肽的末端氨基酸残基上而修饰该预先形成的Aβ_1-15肽抗原，

其中该亲脂性或疏水性部分是具有至少10个碳原子之碳主链的脂肪酸。

14.通过权利要求13的方法制备的抗原构建体。

15.权利要求14的抗原构建体，其包含修饰的Aβ_1-15抗原肽，其中该Aβ_1-15抗原肽被亲脂性或疏水性部分修饰，该构建体用来治疗阿尔茨海默氏病，其中该Aβ肽抗原通过如下方式制备：在树脂上标准的自动化肽合成而预先形成该Aβ_1-15肽，并通过在树脂上将亲脂性或疏水性部分嫁接到该预先形成的Aβ肽的末端氨基酸残基上而修饰，其中该亲脂性或疏水性部分是具有至少10个碳原子之碳主链的脂肪酸。

16.权利要求15的抗原构建体，其包含单一或重复的SEQ ID NO：1所示之Aβ_1-15肽抗原。

17.权利要求14至16中任一项的抗原构建体，其中该Aβ1-15肽抗原以结合载体或佐剂或者在其中重构的形式呈递。

18.权利要求17的抗原构建体，其中该Aβ_1-15肽抗原以在脂质体中重构的形式呈递。

19.权利要求14的抗原构建体，其中该疏水性部分是棕榈酸。

20.权利要求18的抗原构建体，其中该脂质体制备物含有佐剂或免疫调节剂或佐剂和免疫调节剂两者。

21.权利要求20的抗原构建体，其中该免疫调节剂为脂质A。

22.一种疫苗组合物，其包含权利要求14-21之任一项的抗原构建体。

23.权利要求22的疫苗组合物，其中该脂质体制备物含有佐剂或免疫调节剂或佐剂和免疫调节剂两者。

24.权利要求23的疫苗组合物，其中该免疫调节剂为去毒的脂质A。

25.疫苗组合物，其用来治疗阿尔茨海默氏病，包含免疫原性Aβ_1-15抗原肽，其中该Aβ_1-15肽抗原为经过在该肽的每一末端共价连接的棕榈酰基残基而修饰并在脂质体中重构的棕榈酰基化之Aβ_1-15肽抗原。

26.权利要求25的疫苗组合物，其中经在该肽每一端共价连接棕榈酰基残基而修饰的2或2个以上棕榈酰基化Aβ_1-15肽抗原在单一脂质体中重构。

27.权利要求22-26中任一项的疫苗组合物，当将其施用给动物或人类时，导致独立于T-细胞的IgG亚型的抗体产生。

28.权利要求27的疫苗组合物，其中该抗体是IgG3同种型。

29.权利要求22-26中任一项的疫苗组合物，当将其施用给选自哺乳动物的动物或人时，不引起脑中炎症标记的显著增加。

30.权利要求29的疫苗组合物，其中该标记选自IL-1β、IL-6、IFN-γ和TNFα。

31.权利要求22-26中任一项的疫苗组合物，当将其施用给动物或人类时，导致脑中不可溶的、与斑块有关的Aβ_1-40和Aβ_1-42的显著减少。

32.权利要求22-26中任一项的疫苗组合物，当将其施用给动物或人类时，导致脑中可溶性Aβ_1-42的水平显著降低。

33.权利要求22-26中任一项的疫苗组合物，其用于治疗阿尔茨海默氏病。

34.权利要求22-26中任一项的疫苗组合物，当将其施用给罹患阿尔茨海默氏病的动物或人类时，导致认知记忆能力保持的增加。

35.权利要求22-26中任一项的疫苗组合物，当将其施用给罹患阿尔茨海默氏病的选自哺乳动物的动物或人类时，导致认知记忆能力的完全恢复。

36.权利要求19的抗原构建体或权利要求25-26中任一项的疫苗组合物在制备用于治疗阿尔茨海默氏病的药物中的用途，其中所述药物施用给患有阿尔茨海默氏病的动物或人。

37.权利要求36的用途，其中所述抗原构建体或所述疫苗组合物的施用导致独立于T-细胞的IgG亚型抗体的产生。

38.权利要求37的用途，其中该抗体是IgG3同种型。

39.权利要求36-38中任一项的用途，其中所述抗体为2005年12月8日保藏的、保藏号为DSM ACC2756的杂交瘤细胞系EJ 7H3产生的抗体。

40.权利要求36或37的用途，其中所述药物施用不引起脑中炎症标记的显著增加。

41.权利要求40的用途，其中所述标记选自IL-1β、IL-6、IFN-γ及TNFα。

42.权利要求36-38任一项的用途，其中所述药物的施用导致脑中不可溶性、与斑块有关的Aβ_1-40及Aβ_1-42的显著减少。

43.权利要求36-38任一项的用途，其中所述药物的施用导致脑中可溶性Aβ_1-42之水平显著降低。

44.权利要求36-38任一项的用途，其中对罹患阿尔茨海默氏病的动物或人类施用所述药物，导致认知记忆能力保持的增加。

45.权利要求36-38任一项的用途，其中对罹患阿尔茨海默氏病的动物或人类施用所述药物，导致认知记忆能力的完全恢复。

46.权利要求14-21中任一项的抗原构建体或权利要求22-26中任一项的疫苗组合物在制备用于在罹患阿尔茨海默氏病之动物或人类中施用时诱导免疫反应的药物中的用途。

47.一种抗体或抗体混合物，其可从以权利要求14-21中任一项的抗原构建体或权利要求22-26中任一项之疫苗组合物免疫的动物中获得，

其中所述抗体为2005年12月8日保藏的、保藏号为DSM ACC2756的杂交瘤细胞系EJ 7H3产生的抗体。

48.权利要求47的抗体在制备用于治疗阿尔茨海默氏病的药物中的用途，其中所述药物施用给患有阿尔茨海默氏病的动物或人。