CN100543138C - 重组鸡-β防御素蛋白Gal-9的制备方法 - Google Patents
重组鸡-β防御素蛋白Gal-9的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN100543138C CN100543138C CNB2006101511758A CN200610151175A CN100543138C CN 100543138 C CN100543138 C CN 100543138C CN B2006101511758 A CNB2006101511758 A CN B2006101511758A CN 200610151175 A CN200610151175 A CN 200610151175A CN 100543138 C CN100543138 C CN 100543138C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- chicken
- gal
- protein
- defensin
- gene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 101710121810 Galectin-9 Proteins 0.000 title claims abstract description 21
- 102100031351 Galectin-9 Human genes 0.000 title claims abstract description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 5
- 108010002069 Defensins Proteins 0.000 title abstract description 14
- 102000000541 Defensins Human genes 0.000 title abstract description 8
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims abstract description 26
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 12
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 8
- 241000711450 Infectious bronchitis virus Species 0.000 claims abstract description 8
- 108700011550 chicken gallinacin-9 Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 4
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims abstract description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims abstract description 4
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 6
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 6
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 claims description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 5
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 claims description 4
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 108050002883 beta-defensin Proteins 0.000 claims description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 4
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 claims description 4
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 claims description 4
- 101100275473 Caenorhabditis elegans ctc-3 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 3
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims description 3
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 claims description 3
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 claims description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 claims description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 claims description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims 2
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 claims 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 claims 1
- ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N cephalexin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@@H]3N(C2=O)C(=C(CS3)C)C(O)=O)=CC=CC=C1 ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N 0.000 claims 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 claims 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 abstract description 20
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 abstract description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 abstract description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- FFRBMBIXVSCUFS-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitro-1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C2=C1 FFRBMBIXVSCUFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明提供的是一种重组鸡-β防御素蛋白Gal-9的制备方法。本发明用分子生物学技术，从鸡体内克隆到鸡-β防御素Gal-9基因，选用合适的表达宿主在体外表达鸡-β防御素Gal-9蛋白。进一步研究发现，鸡-β防御素Gal-9蛋白具有广谱抗菌活性和免疫促进作用。采用本发明的方法得到的重组鸡Gal-9蛋白：1)能抑杀大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等菌，2)抗鸡传染性支气管炎病毒，3)经鸡口服后1周后，提高免疫鸡血清中抗鸡传染性支气管炎病毒抗体水平10-20%，提高鸡脾淋巴细胞转化率40-50%。
Description
一、技术领域
本发明涉及的是一种生物材料的制备方法，具体地说是一种具有广谱抗菌活性和免疫促进作用的生物材料的制备方法。
二、背景技术
由于饲料中饲用抗生素的广泛使用，导致抗生素在畜体和畜产品中残留，并对引起动物的抗药性，给人类健康及环境带来很大威胁。因此迫切需要一种天然的无污染的饲料添加剂应用于饲料中，促进动物生长，降低饲养成本。重组鸡-β防御素蛋白(gallinacins)Gal-9为鸡体内天然存在的，含氨基酸残基67个，具有广谱抗菌活性的小分子多肽。在体、内外具有广谱抗菌活性和免疫促进作用，为本项发明研究与应用提供了理论基础。
三、发明内容
本法明的目的在于提供一中具有广谱抗菌活性和免疫促进作用的重组鸡-β防御素蛋白Gal-9的制备方法。
本发明的目的是这样实现的：
1.根据已发表的鸡-β防御素Gal-9基因序列设计特异性引物，
上游引物：5’-GGA TCC CCG GAA TTC ATG CAG ATC CTG CCT CTC-3’，
下游引物：5`-TCA GGA ATA CCA TCG GCT CCG GCA GCA GAA-3`；
2.采用RT-PCR方法从鸡舌组织中扩增鸡β防御素Gal-9基因并克隆到PMD-T载体上，经序列测定确定其基因序列为(阴影部分为目标基因，方框内为引物，斜体分别为起始密码子与终止密码子)：
TCCTCCTCCTGATGCTCCGGGCAGAACCAGGGCTGTCCCTTGC
TCGAGGATTACCCCAGGACTGTGAGCGCCGTGGGGGCTTCTG
CTCCCACAAGTCATGTCCTCCAGGGATCGGCCGCATTGGCCTC
ATCTCTAAGGATCCCCGGGTACCGAGCTCGAATTCGTAATCAT
GGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCCGCTCACAA
TTCCACACAACATACC
3.根据鸡-β防御素Gal-9基因序列特点，用EcoRI和SalI双酶切位点将Gal-9基因亚克隆到原核表达载体PGEX-6p-1中，构建重组表达载体PGEX-6p-1-Gal-9，将其转化大肠杆菌BL21感受态细胞，Amp+筛选阳性克隆；
4.含阳性重组质粒的大肠杆菌BL21单个菌落在Amp+LB培养基中37℃振荡培养，待OD值达到0.3-0.5时加入IPTG、终浓度为0.6mM进行诱导，诱导4小时后采1ml菌样，并于4℃、5000转离心5分钟，收获细菌沉淀，在沉淀中加入1/10菌液体积的1×SDS凝胶上样缓冲液，煮沸5分钟，冰浴2分钟。
5.经亲和层析柱纯化回收Gal-9蛋白。
诱导表达后的Gal-9融合蛋白进行SDS-PAGE分析鉴定，取处理过的样品15ul/孔，进行SDS-PAGE电泳(积层胶浓度为5％，分离胶为12％)。电泳后，经考马斯亮蓝染色，甲醇-冰乙酸脱色液脱色。再通过薄层灰度扫描，确定蛋白质的表达量。获得分子量32KD的特异表达带，经蛋白质印迹分析，证明为Gal-9特异蛋白。蛋白质的表达量为40％。
经亲和层析柱纯化回收Gal-9蛋白在体内、外测定重组鸡Gal-9蛋白的抗菌与免疫作用，研究发现重组鸡Gal-9蛋白：1)能抑杀大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等菌，2)抗鸡传染性支气管炎病毒，3)经鸡口服后1周后，提高免疫鸡血清中抗鸡传染性支气管炎病毒抗体水平10-20％，提高鸡脾淋巴细胞转化率40-50％。
本发明用分子生物学技术，从鸡体内克隆到鸡-β防御素Gal-9基因，选用合适的表达宿主在体外表达鸡-β防御素Gal-9蛋白。进一步研究发现，鸡-β防御素Gal-9蛋白具有广谱抗菌活性和免疫促进作用。
四、附图说明
图1为采用RT-PCR方法从鸡舌组织中扩增鸡β防御素Gal-9基因照片；
图2为Gal-9基因薄层灰度扫描图。
五、具体实施方式
下面结合附图举例对本实用新型作更详细的描述：
1.根据已发表的鸡-β防御素Gal-9基因序列设计特异性引物，
上游引物：5’-GGA TCC CCG GAA TTC ATG CAG ATC CTG CCT CTC-3’，
下游引物：5`-TCA GGA ATA CCA TCG GCT CCG GCA GCA GAA-3`
2.采用RT-PCR方法从鸡舌组织中扩增鸡β防御素Gal-9基因并克隆到PMD-T载体上，经序列测定确定为鸡-β防御素Gal-9基因。(阴影部分为目的基因序列，其余为载体，方框内为引物，斜体分别为起始密码子与终止密码子)：
CTCTTTGCTG
TCCTCCTCCTGATGCTCCGGGCAGAACCAGGGCTGTCCCTTGC
TCGAGGATTACCCCAGGACTGTGAGCGCCGTGGGGGCTTCTG
CTCCCACAAGTCATGTCCTCCAGGGATCGGCCG
TGCTCCAAGGAAGACTTCTGCTGCCGGAGCCGATGGTA
GA
AAGCTTGGGA
ATCTCTAAGGATCCCCGGGTACCGAGCTCGAATTCGTAATCAT
GGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCCGCTCACAA
TTCCACACAACATACC
3.原核表达载体的构建：根据鸡-β防御素Gal-9基因序列特点，用EcoRI和SalI双酶切位点将Gal-9基因亚克隆到原核表达载体PGEX-6p-1中，构建重组表达载体PGEX-6p-1-Gal-9，将其转化大肠杆菌BL21感受态细胞，Amp+筛选阳性克隆。小量法提取质粒进行酶切和PCR鉴定后送交上海生物工程公司进行序列测定。
4.Gal-9融合蛋白的诱导表达：含阳性重组质粒的大肠杆菌BL21单个菌落在Amp+LB培养基中37℃振荡培养。待OD值达到0.3~0.5时加入IPTG(终浓度为0.6mM)进行诱导。诱导4h后采1ml菌样，并于4℃、5000转离心5分钟，收获细菌沉淀。在沉淀中加入1/10菌液体积的1×SDS凝胶上样缓冲液，煮沸5分钟，冰浴2分钟。
5.SDS-PAGE 分析鉴定 取处理过的样品15ul/孔，进行SDS-PAGE电泳(积层胶浓度为5％，分离胶为12％)。电泳后，经考马斯亮蓝染色，甲醇-冰乙酸脱色液脱色。再通过薄层灰度扫描，确定蛋白质的表达量。获得分子量32KD的特异表达带，经蛋白质印迹分析，证明为Gal-9特异蛋白。蛋白质的表达量为40％。
6.经亲和层析柱纯化回收Gal-9蛋白(试剂盒采用GST.BindTMKitsNovagen，Meliate of Inc.an A rck KgaA，Darmstadt，Germany)，并在体、内外测定重组鸡Gal-9蛋白的抗菌与免疫作用，研究发现重组鸡Gal-9蛋白：1)能抑杀大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等菌，2)抗鸡传染性支气管炎病毒，3)经鸡口服后1周后，提高免疫鸡血清中抗鸡传染性支气管炎病毒抗体水平10-20％，提高鸡脾淋巴细胞转化率40-50％。
序列表
阴影部分为目的基因序列，其余为载体，方框内为引物，斜体分别为起始密码子与终止密码子：
Claims (1)
1、一种重组鸡-β防御素蛋白Gal-9的制备方法，其特征是：
(1)根据已发表的鸡-β防御素Gal-9基因序列设计特异性引物，
上游引物：5’-GGA TCC CCG GAA TTC ATG CAG ATC CTG CCT CTC-3’，
下游引物：5`-TCA GGA ATA CCA TCG GCT CCG GCA GCA GAA-3`；
(2)采用RT-PCR方法从鸡舌组织中扩增鸡β防御素Gal-9基因并克隆到PMD-T载体上，经序列测定得如下基因序列：
TCTAAGGATCCCCGGGTACGGAGCTCGAATTCGTAATCATGGT
CATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCCGCTCACAATTCC
ACACAACATACC
其中：阴影部分为目标基因，方框内为引物，斜体分别为起始密码子与终止密码子；
(3)根据鸡-β防御素Gal-9基因序列特点，用EcoRI和SalI双酶切位点将Gal-9基因亚克隆到原核表达载体PGEX-6p-1中，构建重组表达载体PGEX-6p-1-Gal-9，将其转化大肠杆菌BL21感受态细胞，Amp+筛选阳性克隆；
(4)含阳性重组质粒的大肠杆菌BL21单个菌落在Amp+LB培养基中37℃振荡培养，待OD值达到0.3-0.5时加入IPTG、终浓度为0.6mM进行诱导，诱导4小时后采1ml菌样，并于4℃、5000转离心5分钟，收获细菌沉淀，在沉淀中加入1/10菌液体积的1×SDS凝胶上样缓冲液，煮沸5分钟，冰浴2分钟，进行SDS-PAGE分析鉴定，取处理过的样品15ul/孔，进行SDS-PAGE电泳，积层胶浓度为5％，分离胶为12％，电泳后，经考马斯亮蓝染色，甲醇-冰乙酸脱色液脱色，再通过薄层灰度扫描，确定蛋白质的表达量，获得分子量32KD的特异表达带，经蛋白质印迹分析，证明为Gal-9特异蛋白，蛋白质的表达量为40％；
(5)经亲和层析柱纯化回收Gal-9蛋白，并在体内、外测定重组鸡Gal-9蛋白的抗菌与免疫作用，研究发现重组鸡Gal-9蛋白：1)能抑杀大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌，2)抗鸡传染性支气管炎病毒，3)经鸡口服后1周后，提高免疫鸡血清中抗鸡传染性支气管炎病毒抗体水平10-20％，提高鸡脾淋巴细胞转化率40-50％。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2006101511758A CN100543138C (zh) | 2006-12-20 | 2006-12-20 | 重组鸡-β防御素蛋白Gal-9的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2006101511758A CN100543138C (zh) | 2006-12-20 | 2006-12-20 | 重组鸡-β防御素蛋白Gal-9的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101008010A CN101008010A (zh) | 2007-08-01 |
| CN100543138C true CN100543138C (zh) | 2009-09-23 |
Family
ID=38696670
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB2006101511758A Expired - Fee Related CN100543138C (zh) | 2006-12-20 | 2006-12-20 | 重组鸡-β防御素蛋白Gal-9的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN100543138C (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104388390B (zh) * | 2014-11-17 | 2017-07-07 | 武汉市畜牧兽医科学研究所 | 一种稳定高效表达鸡防御素10的细胞系及复合制剂及应用 |
| CN107022549B (zh) * | 2017-04-19 | 2021-06-01 | 华中农业大学 | 黄颡鱼β防御素基因及其β防御素抗菌肽及其应用 |
| CN107287203B (zh) * | 2017-05-24 | 2019-10-01 | 华中农业大学 | 优化的动物蛋白基因ocx-36及其原核表达载体的构建 |
-
2006
- 2006-12-20 CN CNB2006101511758A patent/CN100543138C/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| Bioinformatic discovery and initial characterisation of nine novel antimicrobial peptide genes in the chicken. Lynn DJ., Higgs R., Gaines S., Tierney J., James T., Lloyd AT., Fares MA., Mulcahy G., Farrelly CO.Immunogenetics,No.56. 2004 |
| Bioinformatic discovery and initial characterisation of nine novel antimicrobial peptide genes in the chicken. Lynn DJ., Higgs R., Gaines S., Tierney J., James T., Lloyd AT., Fares MA., Mulcahy G., Farrelly CO.Immunogenetics,No.56. 2004 * |
| 广西黄鸡β-防御素Gal-4基因的克隆和体内诱导表达. 谢青梅，陈燕珊，马静云，陈俊伟，毕英佐，曹永长.中国兽医科学，第36卷第8期. 2006 |
| 广西黄鸡β-防御素Gal-4基因的克隆和体内诱导表达. 谢青梅，陈燕珊，马静云，陈俊伟，毕英佐，曹永长.中国兽医科学，第36卷第8期. 2006 * |
| 重组Gallinacin-3的克隆及在大肠杆菌中的表达. 赵建增，乔彦良，李朝阳.中国兽药杂志，第40卷第2期. 2006 |
| 重组Gallinacin-3的克隆及在大肠杆菌中的表达. 赵建增，乔彦良，李朝阳.中国兽药杂志，第40卷第2期. 2006 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101008010A (zh) | 2007-08-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108396030B (zh) | 凡纳滨对虾抗菌肽基因Lv-BigPEN及其重组蛋白和应用 | |
| CN100543138C (zh) | 重组鸡-β防御素蛋白Gal-9的制备方法 | |
| CN111004317B (zh) | 一种犬重组干扰素α7及其制备方法与应用 | |
| CN110256570A (zh) | 一种重组融合抗菌肽及应用 | |
| CN111529686B (zh) | 一种来源于鳜鱼的半乳糖凝集素-9在制备抑菌剂中的应用 | |
| CN103387992A (zh) | 编码重组猪β-防御素-1的基因及猪β-防御素-1的制备方法 | |
| CN103570832B (zh) | 一种抗副猪嗜血杆菌的猪源嵌合抗体及其构建方法和应用 | |
| CN104072597B (zh) | 南美白对虾LvDJ‑1蛋白及其编码基因与应用 | |
| CN101007852A (zh) | 天然抗菌剂－重组鸡－β防御素Gal－9－Gal－8双分子蛋白的制备方法 | |
| CN102898512A (zh) | 一种重组菌丝霉素及其制备方法和用途 | |
| CN102061303A (zh) | 两种海洋动物抗菌肽基因的融合表达产物及其制备方法 | |
| CN110755605A (zh) | 一种柱状黄杆菌转基因工程口服疫苗、使用方法和应用 | |
| CN105567714A (zh) | 一种重组牦牛溶菌酶及其制备方法和用途 | |
| CN116445310A (zh) | 一种双黏附素-抗菌肽共表达重组酵母及其应用 | |
| CN108752431A (zh) | 杂合抗菌肽Mel-MytB及其应用 | |
| CN110317821B (zh) | 一种融合蛋白thg及其应用 | |
| CN111053890B (zh) | 来源于鳜鱼的半乳糖凝集素-8在制备抑菌剂中的应用 | |
| CN101402954A (zh) | 一种用毕赤嗜甲醇酵母表达重组猪乳铁蛋白n叶的方法 | |
| CN1584035A (zh) | 一种用毕赤甲醇酵母表达重组猪乳铁蛋白及其肽的方法 | |
| CN107056948B (zh) | 抗菌肽融合蛋白及其制备方法和应用 | |
| CN111154792A (zh) | 一种隐孢子虫蛋白激酶660 c端蛋白的制备及其应用 | |
| CN112812165B (zh) | 一种水虻抗菌肽Hidefensin1及应用 | |
| CN111321150B (zh) | 一种LvCTL4基因及编码的蛋白质、蛋白质的获取方法、表达载体、重组菌和应用 | |
| CN117659213B (zh) | 胸腺肽α1和IgY Fc的融合蛋白、重组表达载体和工程菌及应用 | |
| CN117624382B (zh) | 一种利用毕赤酵母表达的重组绵羊β防御素2蛋白及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20090923 Termination date: 20101220 |