CN100348213C - 一种药物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种药物组合物及其制备方法，本发明公开的药物组合物以补骨脂、蜣螂为原料制成。补骨脂、蜣螂分别经乙醇回流提取，浓缩，得浓缩液；蜣螂浓缩液冷藏除脂，与补骨脂浓缩液合并；喷雾干燥，制粒，以欧巴代溶液进行流化床包衣，得干燥包衣颗粒，填充1号胶囊，即得本发明胶囊。本发明胶囊具有补肾温阳、活血化瘀、通利水道之功能，主治前列腺增生症，肾虚血瘀证候。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物组合物及其制备方法，特别是涉及一种治疗前列腺增生症的药物组合物及其制备方法。
背景技术
前列腺增生症(BPH)是泌尿科临床常见病。近年来前列腺增生症发病率呈上升趋势，其治疗方法有药物、热疗、手术等，但患前列腺增生症为老年患者，合并症较多，探索理想的治疗药物十分必要。同时，关于蜣螂治疗的前列腺增生症的文献报道很少，其中的有效成分尚不明确，未见其治疗前列腺增生症的药理实验研究，及有效浸出物及其制备工艺的研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的药物组合物；本发明的目的还在于提供一种药物组合物的制备方法；本发明的目的还在于提供该药物组合物的新用途。
本发明目的是通过如下技术方案实现的。
本发明药物组合物是按如下重量配比的原料药制成：
补骨脂1～5重量份 蜣螂1～5重量份；
本发明药物组合物的优选配比为：
补骨脂1重量份 蜣螂1重量份；
本发明药物组合物的优选配比为：
补骨脂1重量份 蜣螂4重量份；
本发明药物组合物的优选配比为：
补骨脂2重量份 蜣螂3重量份；
取上述本发明药物组合物，按药剂学常规工艺，直接或加入常规辅料制备成临床可接受的任何剂型，包括但不限于如下剂型当中的一种：片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、滴丸等。
本发明药物组合物的制备方法为：
称取补骨脂、蜣螂；补骨脂加70％～90％的乙醇回流提取2～3次，每次提取时间1.0～2.0小时，每次乙醇用量按体积重量比为6～10倍药材量，滤过；合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃时相对密度为1.05～1.10；蜣螂加85％～95％的乙醇回流提取1～3次，每次提取时间1.0～3.0小时，每次乙醇用量按体积重量比为6～10倍药材量，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃时相对密度为1.10～1.15，冷藏，除去表面脂肪，与补骨脂浓缩液合并；喷雾干燥，得本发明药物组合物干燥浸膏粉；取干燥浸膏粉按常规工艺制备成任何临床可接受的固体制剂：片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、滴丸等。
上述制备方法中的喷雾干燥工艺可按如下条件进行：药液温度：50℃；进液速度：200-300ml/min；进风温度：135～145℃；出风温度：80-90℃。
本发明胶囊剂的制备：按上述制备方法制备干燥浸膏粉末，取干燥浸膏粉末，以95％的乙醇为润湿剂制软材，过40目筛，50～60℃热风干燥，再以40目筛整粒，以15％的欧巴代溶液进行流化床包衣，得干燥包衣颗粒，填充1号胶囊，即得。
上述本发明胶囊剂的制备方法中流化床包衣可按如下条件进行：进液速度40-50ml/min；喷雾压力0.3(MPa)；蒸汽压力0.5(MPa)；物料温度55～50(℃)；进风温度78～68(℃)；出风温度40～35(℃)。
本发明胶囊剂的质量控制方法含有如下鉴别方法和/或含量测定方法中的一种或几种。
鉴别：A.取本发明胶囊剂内容物0.5g，加醋酸乙酯20ml，超声15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液；另取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为4∶1的正已烷-醋酸乙酯或比例为9∶1的苯一醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾甲醇溶液，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
B.取本发明胶囊剂内容物0.5g，另取蜣螂对照药材细粉1g，分别加50ml蒸馏水超声提取30分钟，滤过，滤液用盐酸调PH2-3后，通过2×10cm的强酸性阳离子交换树脂柱，先用200ml蒸馏水洗，流速1ml/min，弃去水洗液，再用100ml浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液洗脱，流速1ml/min，收集碱洗脱液，用盐酸调PH4-5，浓缩至10ml，加等体积的乙醇沉淀，冷藏24小时，过滤，滤液蒸干，残渣用50％的乙醇溶解，过滤，定容至2ml，作供试品和对照药材溶液液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，点样于同一硅胶G薄层板上，以比例为75∶15∶10的正丁醇-甲酸-水或比例为70∶20∶10的正丁醇-乙酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以吲哚醌试液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定：照高效液相色谱法《中国药典》2000年(一部)附录VID测定；
色谱条件与系统适应性试验：C18(250mm×4.6mm，5μm)柱；流动相：比例为60∶40的甲醇-水；流速：0.8ml/min：柱温：35℃；检测波长245nm；
对照品溶液的制备：称取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加甲醇制成浓度各为0.03mg/ml的混合对照品溶液；供试品溶液的制备：取装量差异项下本发明胶囊剂内容物10g，研匀，称取0.5g置于一锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声40min，放冷，再次称定重量，补充损失甲醇，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；
测定法：吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，照高效液相色谱法试验，测定峰面积，计算，即得；
本发明胶囊剂含补骨脂素不得低于0.39mg/粒，异补骨脂素不得低于0.42mg/粒。
本发明药物组合物的制备方法成本低、操作方便、制成的颗粒剂吸湿性弱，适于工业化大生产。本发明对蜣螂进行关于治疗前列腺增生症的药理实验研究，确定了有效浸出物，并对其提取工艺进行了研究。
本发明胶囊是由补骨脂、蜣螂组成，具有补肾温阳、活血化瘀、通利水道之功能，主治前列腺增生症，肾虚血瘀证候。
药效学试验结果表明：本发明胶囊能明显对抗实验大鼠、小鼠前列腺增生；能抑制前列腺腺细胞和平滑肌细胞增殖、诱导前列腺细胞调亡而缩小前列腺体积；增加前列腺间质细胞诱导型一氧化氮合酶iNOS的表达而降低其平滑肌张力；能改善血液流变性和微循环障碍；能延长醋酸所致小鼠疼痛发作的潜伏期并减少腹痛的扭体次数。
综上所述，本发明胶囊剂胶囊治疗前列腺增生症疗效肯定。临床结果表明本发明胶囊有明显改善排尿困难症状，提高尿流率，减少残余尿量等作用，具有疗效肯定，安全可靠、服用方便等优点。
下述实验例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1：蜣螂有效浸出物的研究
1.样品的制备：采用不同溶剂对蜣螂进行提取，取蜣螂药材100g(共4份)，分别用500ml的石油醚、氯仿、乙醇、水加热回流1小时，滤过，回收溶媒，浓缩，得石油醚提取物(样A)、氯仿提取物(样B)、乙醇提取物(样C)、水提取物(样D)将上述样A、B、C、D进行药效学研究。
2.蜣螂的药效学试验：
表1 蜣螂各提取部分对NE诱发的兔膀胱三角肌收缩的影响
| 组别 | 样本数(N) | 抑制率(％) |
| ABCD高特灵蒸馏水吐温-80 | 10101010101010 | 3.1850±6.010321.4730±9.1559*16.0400±4.4572*7.3300±5.706847.9650±11.1554**0.5510±8.72012.8740±8.2263 |
*P＜0.05 **P＜0.01 与蒸馏水、吐温-80组比较
统计结果：蜣螂各提取部位中，B(氯仿提取物)、C(乙醇提取物)部位对NE诱发膀胱三角肌收缩的抑制率与空白组、吐温组比较有显著差异.A(石油醚提取物)、D(水提取物)两部分与空白组及吐温-80组比较无显著差异，说明蜣螂的氯仿提取部位、乙醇提取部位为有效提取物，根据以上试验结果及实际生产的可行性，选用乙醇来提取蜣螂，为保证制剂的有效性，对蜣螂的不同浓度乙醇提取物进行药效学实验。
3.蜣螂不同浓度乙醇提取物的药效学试验
称取蜣螂100g(共三份)，分别加95％、85％、75％的乙醇500ml回流提取1小时，滤过，回收乙醇，浓缩得浸膏，按上述实验方法考察蜣螂不同浓度乙醇提取物对NE诱发的兔膀胱三角肌的影响，结果见表2
表2蜣螂不同浓度乙醇提取物对NE诱发的兔膀胱三角肌收缩的影响
| 组别 | 样本数(N) | 抑制率(％) |
| 95％乙醇提取物85％乙醇提取物75％乙醇提取物高特灵蒸馏水吐温-80 | 101010101010 | 16.5400±5.1736*14.8650±4.2022*10.5480±8.471045.1720±13.1645**2.1290±7.06873.6700±7.7491 |
*P＜0.05 **P＜0.01 与蒸馏水、吐温-80组比较
结果表明，蜣螂的95％、85％的乙醇提取物对肾上腺素诱发的家兔膀胱三角肌有显著的抑制作用，而75％的乙醇无显著的抑制作用，95％、85％的乙醇提取物的抑制作用无显著性差异。
4.蜣螂脂肪部位与非脂肪部位药效学试验
样品的制备：取蜣螂100g，加500ml浓度为85％的乙醇回流提取1小时，滤过，滤液回收乙醇至100ml，静置，冷藏24小时，分离表面脂肪，得样F，水溶液浓缩成稠浸膏得样E。
样品E和F的药效学试验：
表3除脂部位(E)和脂肪部位(F)对NE诱发的兔膀胱三角肌收缩的影响
| 组别 | 样本数(N) | 抑制率(％) |
| EF高特灵蒸馏水吐温-80 | 1010101010 | 32.5780±12.9652*9.7830±7.992444.4040±14.4813**3.2040±8.51915.3890±9.5622 |
*P＜0.05 **P＜0.01 与蒸馏水、吐温-80组比较
结果：经统计分析，E(除脂部分)与空白组、吐温-80组及F(脂肪部分)有显著性差异，与高特灵无显著性差异，效果最好：F(脂肪部分)与空白组、吐温-80无显著性差异，无药理活性，为了便于浸膏的干燥和成型，将脂肪除去。
实验例2：补骨脂提取工艺条件的研究
1.乙醇回流提取工艺条件的优化试验：
称取补骨脂20克(共9份)，按正交试验设计表中工艺条件进行提取，滤过，合并滤液，定容于1000ml量瓶中。
采用乙醇回流提取，以补骨脂素、异补骨脂素含量为评价指标，综合评分分别为50和50，对影响乙醇回流提取的主要因素乙醇浓度、加醇量、提取时间和提取次数进行L9(34)正交试验筛选。实验设计、安排见表4、表5。
表4乙醇提取因素水平表
| 水平 | 因素 | |||
| A乙醇浓度(％) | B乙醇量(倍) | C提取时间(小时) | D提取次数(次) | |
| 123 | 708090 | 6810 | 1.01.52.0 | 123 |
表5 L9(34)正交试验安排、结果及分析表
| 序号 | A | B | C | D | 评价指标补骨脂素含量(mg/g) | 异补骨脂素含量(mg/g) | 综合评分 | |
| 123456789 | 111222333 | 123123123 | 123231312 | 123321231 | 0.8800.9670.9890.9290.9190.9490.9920.9800.793 | 0.7250.8250.8350.7870.7760.8000.8280.8400.662 | 87.4997.8599.5593.6692.5195.4599.2999.4079.37 | |
| K1K2K3RSS | 284.89281.62278.066.837.78 | 280.44289.76274.3715.3940.06 | 282.34270.88291.3520.4770.17 | 262.31289.55292.6130.30488.04 | 综合评分补骨脂素含量/0.992×50+异补骨脂素含量/0.840×50 | |||
表6方差分析表
| 误差来源 | SS | f | MS | F | P |
| BCDA(误差) | 40.0670.17488.047.78 | 2222 | 20.0335.08244.023.89 | 5.519.0262.73 | * |
F0.05(2，2)＝19.00；F0.01(2，2)＝99.00
由正交试验结果直观分析，四个因素对提取影响的程度为D(提取次数)最大，其次为C(提取时间)、B(加醇量)、和A(醇浓度)，最佳提取工艺是A1B2C3D3。
由方差分析可知，D(提取次数)有显著性差异，但提取两次与提取三次无显著性差异，其它三个因素影响无显著性，为降低生产成本，确定最后提取工艺为A1B1C1D2，即加6倍量70％的乙醇回流提取两次，每次1小时。
2.验证试验：为确保提取工艺的合理可行，对最佳工艺条件进行三次验证试验，结果如下。
表7 乙醇提取最优工艺验证试验
| 样品 | 补骨脂素含量(mg/g) | 异补骨脂素含量(mg/g) |
| 123平均 | 0.9510.9500.9510.951 | 0.7890.7740.7750.779 |
由上表可见，验证试验结果重现性好，说明提取工艺条件基本稳定。
实验例3：蜣螂提取工艺条件的研究
1.乙醇回流提取工艺条件优化试验
称取蜣螂100g(共9份)，按正交试验设计表进行回流提取，滤过，滤液回收乙醇至100m1，静置，冷藏24小时，分离表面脂肪，溶液定容至200ml，各取20ml，水浴蒸干，残渣加50ml氯仿超声30分钟，过滤，滤液置已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，残渣于105℃烘3小时，置于干燥器中冷却0.5小时，迅速称重。
采用乙醇回流提取，以氯仿浸出物为指标，对影响乙回流提取的主要因素乙醇浓度、加醇量、提取时间、提取次数进行L9(34)正交试验筛选。实验设计、安排见表8、表9。
表8 乙醇提取因素水平表
| 水平 | 因素 | |||
| A乙醇浓度(％) | B加醇量(倍) | C提取次数(次) | D提取时间(h) | |
| 123 | 758595 | 6810 | 123 | 123 |
表9 L9(34)正交试验安排、结果及分析表
| 序号 | A | B | C | D | 评价指标(氯仿浸出物g) |
| 123456789 | 111222333 | 123123123 | 123231312 | 123321231 | 0.03080.03560.04140.07520.06870.04760.07340.05080.0591 |
| K1K2K3RSS | 0.0359330.0638330.0611000.027900.001419 | 0.0598000.0517000.0493670.010400.000180 | 0.0430670.0566330.0611670.018100.000532 | 0.052870.052200.055800.003600.000022 |
表10 方差分析表
| 误差来源 | SS | f | MS | F | P |
| ABCD(误差) | 0.0014190.0001800.0005320.000022 | 2222 | 0.0007100.0000900.0002660.000011 | 64.50678.177324.1900 | *** |
F0.05(2，2)＝19.00；F0.01(2，2)＝99.00
由正交试验结果直观分析，四个因素对提取影响的程度为A(醇浓度)最大，其次为C(提取次数)、B(加醇倍数)和D(提取时间)，最佳提取工艺是A2B1C3D3。
由方差分析可知，D(提取时间)、B(加醇量)无显著性差异，A(醇浓度)、C(提取次数)有显著性差异，为降低生产成本，确定最后提取工艺为A2B1C3D1，即加6倍量85％的乙醇回流提取3次，每次1小时。
2.验证试验 为确保提取工艺的合理可行，对最佳工艺条件进行三次验证试验，结果如下。
表11 乙醇提取最优工艺验证试验
| 样品 | 氯仿浸出物 |
| 123平均 | 0.06870.06720.06990.0686 |
由上表可见，验证试验结果重现性好，说明提取工艺条件基本稳定。
实验例4：本发明胶囊剂的颗粒的包衣研究
为改善颗粒的吸湿性，采用欧巴代防潮型包衣材料对颗粒进行包衣。
1.包衣液浓度的考察
包衣液中固形物浓度对包衣膜的形成有较大的影响，为此对不同的包衣液的固形物浓度进行筛选，结果见表12。
表12不同包衣液的固形物浓度对包衣后颗粒吸湿性的影响
| 试验号 | 包衣液中固形物浓度 | 包衣情况 | 颗粒吸湿性 |
| 123 | 10％15％20％ | 雾滴均匀，不堵塞喷嘴，时间长雾滴均匀，不堵塞喷嘴雾滴不均匀，堵塞喷嘴 | 较强弱较强 |
从上表可知，当包衣液中固形物浓度为15％时，包衣操作方便，颗粒吸湿性较弱。
2.包衣材料用量的考察
包衣材料的用量直接影响包衣膜的厚度，从而影响颗粒防潮的效果，为减少服用量及降低生产成本，在保证防潮效果的前提下，应尽量减少包衣材料的用量，为此对包衣材料的用量(与颗粒重量的百分比)进行考察，结果见表13。
表13包衣材料用量对包衣后颗粒吸湿性的影响
| 试验号 | 包衣材料的用量 | 颗粒吸湿性 |
| 123 | 3％5％7％ | 较强弱弱 |
从上表可知，当包衣材料用量为颗粒的5％时，颗粒的吸湿性能得到改善，吸湿性较弱。
3.包衣颗粒的吸湿率考察
为考查制剂质量的稳定，对薄膜包衣后的颗粒进行吸湿率的测定，方法同浸膏粉吸湿率测定。结果见表14。
表14包衣颗粒的吸湿率考察
| 吸湿时间(h) | 1 | 2 | 8 | 12 | 24 | 48 | 72 | 96 |
| 吸湿率(％) | 1.43 | 2.27 | 3.35 | 3.82 | 5.01 | 5.15 | 5.25 | 5.28 |
从上表可以看出，包衣颗粒的吸湿性大大改善，吸湿性较弱。
实验例5：本发明胶囊剂中试研究
根据筛选出的工艺条件，在四川恩威中医药研究所中试车间进行放大生产，连续试制三批中试样品，结果见下表。
表15中试生产数据
| 批号 | 投料量 | 中试生产数据 | |||||||||
| 补骨脂(kg) | 蜣螂(kg) | 欧巴代(kg) | 喷干粉量(kg) | 喷干粉收率(％) | 包衣颗粒(kg) | 包衣颗粒收率(％) | 理论生产(万粒) | 实际生产(万粒) | 成品率(％) | 平均值(％) | |
| 990601 | 10.03 | 10.03 | 0.201 | 4.03 | 20.1 | 4.13 | 97.6 | 1.2 | 1.12 | 93.3 | 93.6 |
| 990602 | 10.03 | 10.03 | 0.200 | 4.07 | 20.3 | 4.18 | 97.9 | 1.2 | 1.15 | 95.8 | |
| 990603 | 10.03 | 10.03 | 0.198 | 3.97 | 19.8 | 4.06 | 97.3 | 1.2 | 1.10 | 91.7 | |
| 备注：.欧巴代用量以喷干粉的量计算。 | |||||||||||
结果表明，该工艺连续生产的稳定性好，工艺条件易控制可行。设备通用制药设备，适合工业生产。
实验例6：本发明胶囊对丙酸睾丸酮致大鼠前列腺增生模型的影响
1.受试药物
本发明胶囊，由四川恩威中医药研究所中试车间提供，批号990601，规格：0.36g/粒，1.67g原生药/粒；用量及服法：临床上60kg体重成人每次口服4粒，一日3次，即成人日用药量为：(4粒/次×3次/日×1.67g原生药/粒)÷60kg体重＝0.33g原生药/kg体重；30天为一疗程。试验时配制方法：临用时用蒸馏水配成所需浓度药液供实验用，见表16。
保列治，每片含4一氮甾体激素化合物5mg，由美国默沙东公司生产，批号：990541，临床成人每日服用量为5mg(5mg/片，每日1次，每次1片)，即0.083mg/Kg，实验中大鼠给药剂量为1.67mg/Kg，相当于人用量的20倍。
各种药物临用前均按其给药剂量以蒸馏水配制成混悬液，按10ml/Kg给药。
表16本发明胶囊的配制方法与给药剂量计算
| 受试品 | 药物浓度(g原生药/dl) | 给药体积(ml/kg) | 给药剂量(g原生药/dl) | 相当于临床剂量的倍数(倍) |
| 本发明胶囊本发明胶囊本发明胶囊保列治片生理盐水 | 66.633.316.70.0167- | 1010101010 | 6.663.331.670.00167- | 2010520- |
2.实验方法
BPH动物模型的制备及给药方法 空白组大鼠经3‰戊巴比妥钠以10ml/Kg剂量腹腔注射麻醉后，无菌手术切开下腹部，游离睾丸，但不切除睾丸，术后5天自然恢复后作为空白组。治疗组及模型组大鼠经3‰戊巴比妥钠以10ml/Kg剂量腹腔注射麻醉后，无菌切除双侧睾丸，经5天自然恢复后，按体重随机分为5组。其中，丙酸睾丸酮加本发明胶囊高剂量组、丙酸睾丸酮加本发明胶囊中剂量组、丙酸睾丸酮加本发明胶囊低剂量组、丙酸睾丸酮加保列治组：每日均经皮下注射丙酸睾丸酮0.5mg，并按照表16所列给药剂量给药，1次/d；模型组：每日经皮下注射丙酸睾丸酮0.5mg，并灌胃给予蒸馏水10ml/Kg，1次/d；空白组：每日经皮下注射注射用水0.1ml，并灌胃给予蒸馏水10ml/Kg，1次/d。连续给药30d(中间每周称重1次以调整给药量)，于末次给药24h后，称大鼠体重后经股动脉放血处死，摘取前列腺，称重量，并测量前列腺体积(水取代法)及前列腺指数(每100g体重前列腺重)。
3.实验结果
3.1对大鼠前列腺重量、体积的影响
结果见表17。
表17本发明胶囊对大鼠前列腺重量、体积、指数的影响
| 组别 | n | 大鼠体重(g) | 前列腺重量(g) | 前列腺体积(ml) | 前列腺指数(％) |
| 空白组模型组本发明胶囊高剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊低剂量组保列治组 | 10101010910 | 309.00±19.69313.5±19.59317±24.06311.5±17.49307.78±13.26310.5±17.23 | 0.86±0.2△△△1.49±0.330.92±0.09△△△0.99±0.19△△△1.12±0.24△△0.94±0.12△△△ | 0.75±0.13△△△1.32±0.290.81±0.12△△△0.90±0.20△△△1.02±0.20△△0.87±0.13△△△ | 0.28±0.06△△△0.50±0.150.29±0.04△△△0.32±0.06△△△0.36±0.08△△0.31±0.05△△△ |
注：经t检验，与模型组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001
由表17可见，造模后各组大鼠体重无显著性差异。模型组大鼠前列腺重量、体积、前列腺指数明显高于空白组(P＜0.001)，表明造模成功。本发明胶囊6.66g生药/kg，3.33g生药/kg组，及保列治组与模型组比较，可极显著降低前列腺重量，缩小前列腺体积，降低前列腺指数(P＜0.001)。本发明胶囊1.67g生药/kg组可显著降低前列腺重量，缩小前列腺体积，降低前列腺指数(P＜0.01)。
3.2对大鼠前列腺组织结构的影响
取相同部位前列腺组织。以10％福尔马林浸泡3d。常规石蜡包埋，连续切片，切片厚度4μm，其中第一张切片作常规HE染色，观察前列腺组织结构变化。模型组与空白组相比腺体排列密集，腺体腔变大，腺上皮变厚，部分腺体扩张，部分呈乳头状突向腔内，腔内分泌物增多，上皮细胞部分呈复层，细胞核圆或呈卵园型，可见核仁，间质小血管扩张充血；间质平滑肌增多。本发明胶囊各剂量组及保列治组可见腺腔直径及腺腔壁厚度较模型组小，腔内分泌物减少，间质组织平滑肌较疏松。
3.3 对大鼠前列腺腺体、间质面积，腺上皮厚度等的影响
在40×镜下随机选取5个视野，用MIAS-2000型图形图像分析系统计算5个视野内腺体数目，测量每个腺体周长，测量腺体、间质面积，腺体壁面积、腺体壁核度。再计算腺体与间质面积比(腺体面积/间质面积)，腺体总体积，间质总体积。统计结果如表18、19、20、21所示。
表18本发明胶囊对大鼠前列腺腺体数目、周长、面积的影响
| 组别 | n | 腺体数目(个) | 腺体周长(μm) | 腺体面积(μm2) |
| 空白组模型组本发明胶囊高剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊低剂量组保列治组 | 10101010910 | 21.75±4.83△13.13±1.8125.63±3.99△△24.13±3.27△△23.13±2.64△△26.88±3.83△△ | 637.31±25.34△△866.46±82.67640.31±61.77△△659.83±45.01△△649.35±52.04△△640.41±29.51△△ | 27622.49±4978.95△△48199.79±5001.6326462.84±5401.59△△27112.97±2797.95△△27390.64±3676.22△△25812.95±3913.77△△ |
注：经t检验，与模型组相比△P＜0.05，△△P＜0.01。
由表18可见，模型组腺体平均周长、面积均较空白组明显增大，5个视野内腺体数目较空白组明显减少。本发明胶囊6.66g生药/kg，3.33g生药/kg，1.67g生药/kg组及保列治组与模型组相比，均可显著降低腺体平均面积、平均周长，并显著增加5个视野内腺体总数目(P＜0.01)。
表19本发明胶囊对5个视野内腺体、间质总面积，腺体间质比的影响
| 组别 | n | 腺体总面积(μm2) | 间质总面积(μm2) | 腺体/间质面积比 |
| 空白组模型组本发明胶囊大剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊小剂量组保列治组 | 10101010910 | 919095.80±49080.81△△1055111.00±49144.101003549.00±67053.711031446.02±51004.89994952.10±60005.83993740.80±70394.63 | 400613.30±48081.03△△265303.30±49144.10316864.60±67053.71288967.80±51004.89325461.90±60005.83326673.30±70394.63 | 2.34±0.40△4.13±0.933.31±0.793.70±0.853.17±0.733.21±0.93 |
注：经t检验，与模型组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01
由表19可见，模型组大鼠前列腺5个视野内腺体总面积较空白组明显增大(P＜0.01)，而间质总面积较空白组显著减小，故腺体间质面积比明显大于空白组。本发明胶囊各剂量组及保列治组腺体总面积、腺体间质面积比与模型组相比有降低的趋势，间质总面积与模型组相比有增高的趋势，但均无统计学意义。
表20本发明胶囊对前列腺腺体、间质总体的影响
| 组别 | n | 腺体总体积(ml) | 间质总体积(ml) |
| 空白组模型组本发明胶囊高剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊低剂量组保列治组 | 10101010910 | 0.51±0.13△△1.10±0.170.59±0.16△△0.61±0.11△△0.67±0.15△△0.69±0.16△△ | 0.22±0.05△0.29±0.090.18±0.03△△0.18±0.05△△0.22±0.07△0.22±0.06△ |
注：经t检验，与模型组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01。
由表20可见，模型组大鼠前列腺腺体、间质总体积均明显大于空白组。本发明胶囊各剂量组及保列治组与模型组相比，可明显降低前列腺腺体及间质总体积(P＜0.01，P＜0.05)。
结合表19及表20，模型组大鼠腺体面积高于空白组而间质面积低于空白组，但模型组大鼠前列腺腺体及间质总体积均高于空白组而以腺体面积更为明显。说明由睾酮导致的前列腺增生，腺体及间质组织均出现增生而以腺体增生为主。本发明胶囊各剂量组及保列治组均可降低前列腺腺体及间质组织的体积，对腺体间质面积比无影响。
表21本发明胶囊对大鼠前列腺腺体壁核度、面积、积分光密度的影响
| 组别 | n | 腺壁面积(μm2) | 腺壁核度 | 腺壁积分光密度(IU) |
| 空白组模型组本发明胶囊高剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊低剂量组保列治组 | 10101010910 | 3189.75±990.92△△8613.87±2758.644549.88±761.23△4521.24±814.11△3650.81±1669.14△3963.39±1160.25△ | 99.67±10.41△121.78±9.36123.84±4.30117.46±6.25117.43±7.62116.86±9.12 | 626814.50±191528.60△△1297336.01±436458.50659125.80±108514.10△△694196.20±120324.10△△664627.60±125778.80△△614857.70±161349.20△△ |
注：经t检验，与模型组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01。
腺体壁核度及积分光密度代表腺上皮细胞的密集程度。由表21可见，模型组腺体壁面积、核度及积分光密度均较空白组明显增高。本发明胶囊各剂量组及保列治组腺壁面积及积分光密度均较模型组降低，表明本发明胶囊各剂量组及保列治组腺体壁面积及腺上皮细胞密集程度均较模型组降低。
3.4本发明胶囊对前列腺组织结构影响的体视学研究
在40×镜下随机选取5个视野，用MIAS-2000型图形图像分析系统计算腺体及腺体腔的单位体积粒子平均直径
平均曲率
粒子表面积/粒子体积(Rsv)、数密度(Nv)、体积密度(Vv)、单位体积粒子平均表面积
单位体积粒子平均体积
表面积密度(Sv)、球形因子(S.g)等指标。
①本发明胶囊对大鼠前列腺腺体体视学的影响
(1)本发明胶囊对腺体密度参数的影响，结果如表22所示。
表22本发明胶囊对Vv、Sv及Nv的影响
| 组别 | n | 腺体数密度(1/mm3) | 腺体体积密度 | 腺体表面积密度(1/mm) |
| 空白组 | 10 | 258.17±78.05△ | 1.37±0.11 | 40.83±5.53 |
| 模型组 | 10 | 119.09±22.81 | 1.48±0.11 | 33.92±3.66 |
| 本发明胶囊高剂量组 | 10 | 319.96±77.91△△ | 1.59±0.12 | 48.65±3.63△△ |
| 本发明胶囊中剂量组 | 10 | 296.56±56.08△△ | 1.53±0.09 | 47.51±4.70△△ |
| 本发明胶囊低剂量组 | 9 | 278.35±52.06△△ | 1.47±0.07 | 44.78±2.93△ |
| 保列治组 | 10 | 346.16±83.40△△ | 1.61±0.09 | 51.92±5.90△△ |
注：经t检验，与模型组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01
数密度(Nv)指单位参照体积中含有的某相粒子数，表面积密度(Sv)指单位参照体积中某相所占的表面积多少，体积密度(Vv)指单位参照体积中某相所占的体积。由表22可见，模型组腺体Nv较空白组减少，本发明胶囊各剂量组及保列治Nv组较模型组均明显增多。模型组腺体Vv和Sv与空白组相比，均无统计学意义。本发明胶囊各剂量组及保列治组Nv和Sv均较模型组增加(P＜0.01)，但Vv与模型组相比无显著性差异。
说明，本发明胶囊各剂量组及保列治组单位体积内腺体数目、腺体表面积增加，但单位体积内腺体体积无明显变化。
(2)本发明胶囊对腺体形状参数的影响，结果如表23所示。
表23本发明胶囊对Rsv、S.g、
的影响
| 组别 | n | 粒子表面积/粒子体积(1/mm) | 平均曲率(1/mm) | 单位体积粒子平均表面积(μm2) | 球形因子 |
| 空白组模型组本发明胶囊高剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊低剂量组保列治组 | 10101010910 | 29.75±2.56△△23.014±2.2531.40±3.43△△31.11±1.71△△30.43±2.52△△32.38±3.94△△ | 7.83±0.91△△5.74±0.497.77±0.76△△7.51±0.49△△7.65±0.66△△7.65±0.35△△ | 165734.96±29873.69△△289198.74±30009.81158777.13±32409.51△△162677.83±16787.72△△164343.85±22057.35△△154877.73±23483.20△△ | 0.79±0.050.76±0.110.75±0.050.72±0.050.76±0.070.72±0.07 |
注：经t检验，与模型组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01。
粒子表面积/粒子体积(Rsv)指某相结构的表面积与其体积之比，即比表面，平均曲率
反应表面弯曲的程度，单位体积粒子平均表面积
指单位体积内某项粒子表面积大小的平均值，球形因子(S.g)表示粒子形状与球形的接近程度，S.g越接近1，粒子形态越接近球形。
由表23可见，各组间腺体与球形的接近程度无差异。模型组腺体比表面及腺体弯曲程度较空白组降低，而单位体积内腺体表面积较空白组增大。本发明胶囊各剂量组及保列治组腺体比表面及腺体弯曲程度较模型组显著增大(P＜0.01)，而单位体积内腺体平均表面积较模型组显著降低(P＜0.01)。
说明，本发明胶囊各剂量及保列治治疗后可使单位体积内腺体平均表面积显著降低，而使弯曲程度及比表面显著增大。
(3)本发明胶囊对腺体尺寸参数的影响，结果见表24。
表24本发明胶囊对腺体
的影响
| 组别 | n | 单位体积粒子平均体积(μm3) | 单位体积粒子平均直径(μm) |
| 空白组模型组本发明胶囊高剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊低剂量组保列治组 | 10101010910 | 5674785.56±1433398.86△△12742519.58±2304848.815218002.18±1715342.56△△5262372.28±769586.94△△5474942.36±1109622.71△△4921213.80±1337466.81△△ | 202.97±17.01△△262.93±25.28193.27±22.79△△193.36±10.08△△198.30±15.88△△187.72±22.85△△ |
注：经t检验，与模型组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01。
单位体积粒子平均直径
指单位体积内某三维粒子的平均直径、单位体积粒子平均体积
指单位体积内某类粒子的平均体积。由表24可见，模型组
和
均较空白组明显增高，本发明胶囊各剂量组及保列治组
和
均较模型组降低。说明，给予本发明胶囊及保列治后，腺体平均体积缩小，腺体平均直径变小(P＜0.01)。
综合表22、23、24可见，经本发明胶囊各剂量及保列治治疗后，腺体平均体积、平均直径及平均表面积缩小，单位体积内腺体数目及表面积增大，腺体弯曲程度及比表面增大。
②本发明胶囊对大鼠前列腺腺体壁体视学的影响。
(1)本发明胶囊对大鼠前列腺腺体壁密度参数的影响，结果如表25所示。
表25本发明胶囊对腺体壁Sv、Vv及Nv的影响
| 组别 | n | 表面积密度(1/mm) | 体积密度 | 数密度(1/mm3) |
| 空白组模型组本发明胶囊大剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊小剂量组保列治组 | 10101010910 | 78.98±15.99△55.56±7.6084.03±15.27△△85.22±14.15△△81.49±6.28△93.37±19.08△△ | 0.16±0.03△△0.27±0.090.27±0.040.25±0.030.24±0.050.25±0.08 | 28088.61±17689.90△3546.305±2976.757202.00±3732.3811040.06±7249.5511914.42±7477.8114409.29±10781.49 |
注：经t检验，与模型组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01。
由表25可见，模型组腺体壁Sv和Nv较空白组减少，Vv较空白组增加。本发明胶囊各剂量组及保列治组Sv较模型组明显增多(P＜0.01)，而Nv与模型组相比有增多的趋势，Vv与模型组相比有降低的趋势，但均无统计学意义。
说明，给予本发明胶囊各剂量及保列治后，单位体积内腺体壁表面积增加。
(2)本发明胶囊对腺体壁形状参数的影响，结果如表26所示。
表26本发明胶囊对腺体壁Rsv、S.g、
的影响
| 组别 | n | 粒子表面积/粒子体积(1/mm) | 平均曲率(1/mm) | 单位体积粒子平均表面积(μm2) | 球形因子 |
| 空白组模型组本发明胶囊大剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊小剂量组保列治组 | 10101010910 | 495.66±139.07△△231.73±83.78310.52±44.68346.58±96.93363.02±90.60△404.09±136.67△△ | 24.55±11.11△△9.24±3.859.96±3.5312.41±3.3914.29±5.9112.59±5.49 | 4586.38±3771.85△△23286.26±11811.9113753.56±4775.22△△10596.84±5497.46△△9170.20±4665.57△△10435.55±7319.40△△ | 0.15±0.060.13±0.050.10±0.030.11±0.010.12±0.030.10±0.03 |
注：经t检验，与模型组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01。
由表26可见，各组间腺体壁与球形的接近程度无差异。模型组腺体壁比表面及腺体壁弯曲程度较空白组降低，而单位体积内腺体壁平均表面积较空白组增大。本发明胶囊小剂量组及保列治组腺体壁比表面较模型组显著增大，本发明胶囊各剂量组及保列治组单位体积内腺体壁平均表面积较模型组降低(P＜0.01)。而腺体壁弯曲程度与模型组相比无差异。
说明，经本发明胶囊各剂量及保列治治疗后可使单位体积内腺体壁平均表面积降低，而使腺体壁比表面增大，但对腺体壁弯曲程度及与球形的接近程度无影响。
(3)本发明胶囊对腺体尺寸参数的影响，结果见表27。
表27本发明胶囊对腺体壁
的影响
| 组别 | n | 单位体积粒子平均体积(μm3) | 单位体积粒子平均直径(μm) |
| 空白组 | 10 | 11475.13±12009.42△△ | 12.95±3.50△△ |
| 模型组本发明胶囊大剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊小剂量组保列治组 | 101010910 | 130478.08±100924.4746305.66±20658.23△△36139.22±26178.49△△28575.17264±17267.49△△37553.19±43451.82△△ | 29.46±11.6119.70±3.07△△18.43±4.69△△17.40±4.05△△17.02±7.64△△ |
注：经t检验，与模型组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01。
由表27可见，模型组
和
均较空白组明显增高，本发明胶囊各剂量组及保列治组
和
均较模型组降低(P＜0.01)。说明，本发明胶囊及保列治治疗后，腺体壁平均体积缩小，腺体壁平均直径变小。
综合表25、26、27可见，经本发明胶囊各剂量及保列治治疗后，腺体壁平均体积及平均表面积缩小，而单位体积内腺体壁表面积增大。但本发明胶囊小剂量及保列治纽腺体壁比表面增大。
4结论
4.1动物模型的评价 本实验采用公认的BPH造模方法(大鼠去势后注射睾酮导致BPH造模法)。结果表明，模型组大鼠前列腺重量、体积、指数均较空白组增加，光镜及体视学研究结果均与上述结论相符。模型动物给予保列治后，上述各项指标均得以不同程度的恢复。人类BPH间质增生较明显，本模型大鼠的间质也明显增生，说明本模型与人BPH符合，模型是成功的。4.2本发明胶囊的疗效评价模型动物给予本发明胶囊各剂量组及保列治均可缩小前列腺体积，降低前列腺重量及指数。镜下观察及计算可知本发明胶囊各剂量组及保列治组可缩小腺体及间质总体积，缩小腺体面积、周长，腺体壁面积，降低腺体上皮细胞的密集程度。体视学研究表明，腺体及腺体壁的平均体积、平均直径、平均表面积缩小，单位体积内腺体及腺体壁面积、数目、比表面增大。说明本发明胶囊对于丙酸睾丸酮所致的大鼠前列腺增生模型具有明显的对抗作用。
实验例7.本发明胶囊对丙酸睾丸酮致大鼠前列腺增生模型前列腺细胞增殖(细胞增殖标记物抗原Ki-67)的影响
1.实验方法
1.1 BPH动物模型的制备及给药方法：见实验例6。
1.2免疫组化染色
SP法染色，按试剂盒说明书操作，以试剂盒中提供的阳性片为阳性对照，以PBS液替代一抗、二抗作为阴性对照。200×镜下观察，每张切片取5个视野，细胞胞核中出现棕黄色颗粒为Ki-67阳性细胞，每个标本上数100个细胞，计算阳性细胞数，算出相应指数；阳性细胞着色面积及着色深浅以MIAS-2000型图形图像分析系统进行分析。
2.结果
Ki-67阳性着色为细胞核着棕黄色。在正常大鼠前列腺组织中Ki-67阳性着色于腺上皮细胞；在模型组Ki-67阳性主要着色于上皮全层及间质组织，染色较深；去势组腺上皮及间质组织Ki-67阳性着色面积较少，染色较浅；本发明胶囊6.66g生药/kg，3.33g生药/kg，1.67g生药/kg组及保列治组Ki-67阳性主要着色于腺上皮细胞，但染色较浅，明显低于模型组。如表28所示。
表28 本发明胶囊对大鼠前列腺组织Ki-67的影响
| 组别 | n | 指数(％) | 平均黑度 | 平均面积(μm2) | 积分光密度(IU) |
| 空白组模型组本发明胶囊高剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊小剂量组保列治组 | 10101010910 | 11.50±2.7341.88±12.67△△21.38±3.58△※※21.88±4.44△※※24.75±5.28△※※23.88±4.55△※※ | 97.40±22.31116.19±3.24△99.12±6.79※94.20±8.14※93.08±8.55※100.83±5.32※ | 139.31±20.48211.37±42.54△144.62±24.34※146.01±14.28※132.18±15.50※115.66±15.26△※※ | 34229.68±16416.27142208.20±69749.06△△56459.79±15023.75※※58306.39±13974.00※※60984.09±8494.75△※※46543.63±7069.07△※※ |
注：经t检验，与空白组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型组比较，※P＜0.05，※※P＜0.01。
由上表可见，模型组Ki-67指数、阳性细胞核平均面积、Ki-67染色黑度、积分光密度均高于空白组；本发明胶囊6.66g生药/kg，3.33g生药/kg，1.67g生药/kg组及保列治组上述各项指标均低于模型组。表明模型动物给予各剂量的本发明胶囊及保列治后能缩小前列腺体积的机理与其能抑制前列腺细胞增殖有关。
3 结论
本研究以免疫组化结合计算机图像分析系统进行定量分析的结果表明，本发明胶囊6.66g生药/kg，3.33g生药/kg，1.67g生药/kg组均明显抑制了前列腺组织中Ki-67的表达(P＜0.01)，进而抑制了前列腺上皮及间质细胞的增殖。
实验例8.本发明胶囊对丙酸睾丸酮致大鼠前列腺增生模型前列腺组织B细胞淋巴瘤蛋白(bcl-2蛋白)表达的影响
1.实验方法
1.1 BPH动物模型的制备及给药方法 见实验例6。
1.2免疫组化染色
SP法染色，按试剂盒说明书操作，以试剂盒中提供的阳性片为阳性对照，以PBS液替代一抗、二抗作为阴性对照。20倍镜下观察，每张切片取10个视野，细胞胞浆中出现棕黄色颗粒为bcl-2阳性细胞。以MIAS-2000型图形图像分析系统进行分析。
2.结果
bcl-2蛋白阳性着色为细胞浆着棕黄色。在正常大鼠前列腺组织中bcl-2蛋白阳性着色沿腺上皮基底细胞层分布；在模型组大鼠前列腺组织中bcl-2蛋白阳性着色于上皮全层及间质组织，染色较深；在本发明胶囊各剂量组及保列治组bcl-2蛋白阳性主要着色于腺上皮细胞，但染色较浅，明显低于模型组。各组前列腺组织中bcl-2蛋白表达情况如表29所示。
表29 本发明胶囊对大鼠前列腺组织bcl-2的影响
| 组别 | n | 平均黑度 | 阳性细胞总面积(μm2) | 积分光密度(×107IU) |
| 空白组模型组本发明胶囊高剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊小剂量组保列治组 | 10101010910 | 66.97±8.3190.99±7.15△△80.35±5.81△△※※81.08±6.71△△※※77.50±7.61△△*※81.60±7.65△△※ | 17366.75±6188.8068552.13±37850.12△△15062.38±5679.18※17766.88±9809.76※19730.25 ±5564.69※30968.13±9080.42※ | 0.49±0.161.43±0.68△△0.40±0.13※※0.48±0.25※※0.53±0.14※※0.77±0.20※※ |
注：经t检验，与空白组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型组比较，※P＜0.05，※※P＜0.01。
3.结论
本研究以免疫组化结合计算机图像分析系统进行定量分析的结果表明，本发明胶囊6.66g生药/kg，3.33g生药/kg，1.67g生药/kg组均明显抑制了前列腺组织中bcl-2蛋白的表达(P＜0.01)，进而诱导了前列腺上皮及间质细胞的凋亡。
实验例9：本发明胶囊对丙酸睾丸酮致大鼠前列腺增生模型前列腺平滑肌组织的影响
1.实验方法
1.1 BPH动物模型的制备及给药方法 见实验例6。
1.2免疫组化染色
SP法染色，按试剂盒说明书操作，以试剂盒中提供的阳性片为阳性对照，以PBS液替代一抗、二抗作为阴性对照。20倍镜下观察，每张切片取10个视野，细胞胞浆中出现棕黄色颗粒为α-SMA阳性细胞。以MIAS-2000型图形图像分析系统进行分析。
2.结果
α-SMA阳性着色为细胞浆着棕黄色。在正常大鼠前列腺组织中α-SMA蛋白阳性着色于间质平滑肌细胞；在模型组大鼠前列腺组织中α-SMA阳性着色于间质平滑肌细胞及腺上皮基底细胞，染色较深：在本发明胶囊各剂量组及保列治组α-SMA阳性主要着色于间质平滑肌细胞及腺上皮基底细胞，但染色较浅，明显低于模型组。各组前列腺组织中α-SMA表达情况如表30所示。
表30 本发明胶囊对大鼠前列腺组织a-SMA的影响
| 组别 | n | 平均黑度 | 阳性细胞总面积(μm2) | 积分光密度(IU) |
| 空白组模型组本发明胶囊高剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊低剂量组保列治组 | 10101010910 | 90.43±4.2292.10±6.3683.43±4.40△△※※85.55±6.56△※83.38±3.03△△※※85.63±3.42※ | 50885.75±19484.48206608.63±88195.31△43861.50±25048.04※50742.13±17034.55※37638.13±10924.82※41011.00±12866.93※ | 12785045.22±440415.3543882560.14±189440.58△△11568247.48±557043.60※※12103648.44±377655.92※※9492615.36±256338.52※※10852246.69±286055.19※※ |
注：经t检验，与空白组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型组比较，※P＜0.05，※※P＜0.01。
3.结论
本研究表明，睾酮致大鼠前列腺增生模型的前列腺平滑肌组织明显增生，给予本发明胶囊6.66g生药/kg，3.33g生药/kg，1.67g生药/kg平滑肌成分明显减少(P＜0.01)，说明本发明胶囊可抑制前列腺平滑肌细胞的增生，进而缓解BPH的静力性因素。
实验例10：本发明胶囊对丙酸睾丸酮致大鼠前列腺增生模型前列腺间质组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响
1.实验方法
1.1 BPH动物模型的制备及给药方法 见实验例6。
1.2免疫组化染色
SP法染色，按试剂盒说明书操作，以试剂盒中提供的阳性片为阳性对照，以PBS液替代一抗、二抗作为阴性对照。20倍镜下观察，每张切片取10个视野，细胞胞浆中出现棕黄色颗粒为iNOS阳性细胞。以MIAS-2000型图形图像分析系统进行分析；
2.结果
iNOS阳性着色为细胞浆着棕黄色。实验各组间质组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)均有表达。各组前列腺组织中iNOS表达情况如下表所示。
表31 本发明胶囊对大鼠前列腺间质组织iNOS的影响
| 组别 | n | 平均黑度 | 阳性细胞总面积(μm2) | 积分光密度(×107IU) |
| 空白组模型组本发明胶囊高剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊低剂量组保列治组 | 10101010910 | 94.26±8.6487.97±7.03107.89±6.83△△※※96.53±10.99※119.55±9.68△△※※116.27±10.95△△※※ | 137289.50±58216.6055041.25±35300.12△△117269.50±50149.42※※66976.50±2 1405.07△△82578.38±43626.28△137710.25±55676.46※※ | 2.63±0.81.22±0.7△△2.05±0.7※※1.36±0.3△△※1.52±0.8△△※2.4±0.9※※ |
注：经t检验，与空白组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型组比较，※P＜0.05，※※P＜0.01。
如上表所示，空白组大鼠前列腺间质组织中iNOS阳性着色较浅，着色面积较小；而模型组大鼠前列腺间质组织中iNOS阳性着色黑度较空白组浅，着色面积较空白组小，积分光密度较空白组低；本发明胶囊各剂量组及保列治组iNOS阳性着色黑度、面积与积分光密度均显著高于模型组。
3.结论
本研究以免疫组化结合计算机图像分析系统进行定量分析的结果表明，本发明胶囊6.66g生药/kg，3.33g生药/kg，1.67g生药/kg组均可增加前列腺间质组织中iNOS的表达，说明本发明胶囊治疗BPH的作用机理之一是通过增加对前列腺平滑肌松弛有介导作用的NOS而缓解BPH的动力性因素。
实验例11：本发明胶囊对丙酸睾丸酮致大鼠前列腺增生模型前列腺上皮组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响
1.实验方法
1.1 BPH动物模型的制备及给药方法
见实验例6。
1.2免疫组化染色
SP法染色，按试剂盒说明书操作，以试剂盒中提供的阳性片为阳性对照，以PBS液替代一抗、二抗作为阴性对照。20倍镜下观察，每张切片取10个视野，细胞胞浆中出现棕黄色颗粒为iNOS阳性细胞。以MIAS-2000型图形图像分析系统进行分析。
2.结果
iNOS阳性着色为细胞浆着棕黄色。实验各组iNOS均阳性着色于腺上皮全层，各组前列腺上皮组织中iNOS表达情况如下表所示。
表32 本发明胶囊对大鼠前列腺组织iNOS的影响
| 组别 | n | 平均黑度 | 阳性细胞总面积(μm2) | 积分光密度(×107IU) |
| 空白组模型组本发明胶囊高剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊低剂量组保列治组 | 10101010910 | 116.16±7.2197.07±9.55△113.50±2.61※110.33±5.22※113.45±8.11※111.44±11.71※ | 303273.63±115330.67133700.25±58973.89△△274815.63±74446.60※※228822.13±82908.87※197807.50±70981.70△295826.50±29558.86※※ | 4.46±1.62.32±0.7△△4.20±1.1※※3.63±1.13.12±1.04.54±0.3※※ |
注：经S-N-K检验，与空白组比较，△AP＜0.05，△△P＜0.01；与模型组比较，※P＜0.05，※※P＜0.01。
如上表所示，模型组前列腺上皮组织染色较浅，着色面积较小，积分光密度较小。本发明胶囊各剂量组及保列治组iNOS染色平均黑度明显高于模型组；本发明胶囊6.66g生药/Kg、3.33g生药/Kg组及保列治组阳性细胞总面积较模型组大。本发明胶囊6.66g生药组及保列治组积分光密度较模型组大，本发明胶囊3.33g生药、1.67g生药组积分光密度与模型组相比无显著性差异。
3.结论
本研究以免疫组化结合计算机图像分析系统进行定量分析的结果表明，本发明胶囊明显抑制了前列腺上皮组织中iNOS的表达。说明本发明胶囊治疗BPH的作用机理之一是增加前列腺上皮组织中iNOS的表达，诱导其细胞凋亡，而缩小前列腺体积，进而缓解BPH的静力性因素。
实验例12：本发明胶囊对丙酸睾丸酮致小鼠前列腺增生模型的影响
1.实验方法
选用健康合格的全雄昆明种小鼠110只，按体重随机分成模型组和空白组，模型组84只，空白组26只。模型组每日皮下注射10mg/kg丙酸睾丸酮，空白组于皮下注射等容积注射用水，共注射10天。10天后将模型组及正常组各随机抽取12只小鼠处死，取下前列腺，称量并计算前列腺重及前列腺指数以确定造模成功。然后将剩余模型组小鼠再随机分成5组，分别为本发明胶囊大、中、小剂量组，模型组及保列治对照组。各试药组按表33所示灌胃(模型组灌胃等容生理盐水)并每日于皮下按10mg/kg的标准注射丙酸睾丸酮。空白组于皮下注射等容积注射用水并同时灌胃给予等容积生理盐水。连续20天。20天后处死全部动物，称量并记录每只小鼠的体重及前列腺重量，计算前列腺指数。
表33 本发明胶囊的配制方法与给药剂量计算
| 受试品 | 药物浓度(g原生药/dl) | 给药体积(ml/kg) | 给药剂量(g原生药/kg) | 相当于临床剂量的倍数(倍) |
| 本发明胶囊本发明胶囊本发明胶囊保列治片生理盐水 | 66.633.316.70.0167- | 1010101010 | 6.663.331.670.00167- | 2010520- |
取相同部位前列腺组织，以10％福尔马林浸泡3d。常规石蜡包埋、切片，切片厚度4μm，作常规HE染色，在40×镜下观察前列腺组织结构变化。并用MIAS-2000型图形图像分析系统计算1个视野内每个腺体周长、面积、等效圆直径、最大直径。再测量整个视野内全部腺体面积(腺体总面积)、全部间质面积(间质总面积)，并计算腺体与间质面积比(腺体面积/间质面积)。
2.结果
2.1 本发明胶囊对小鼠前列腺重量及指数的影响
结果见表34、35
表34造模10天后小鼠前列腺重、前列腺指数的比较
| 组别 | n | 体重 | 前列腺重 | 前列腺指数 |
| 模型组空白组 | 1212 | 31.13±2.2628.47±4.53 | 0.099±0.0330.057±0.016△△ | 0.032±0.00970.020±0.0058△△ |
注：经t检验，与模型组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01。
如上表所示，造摸后模型组与空白组相比体重无显著差别；模型组造模10天后前列腺重、前列腺指数均显著高于空白组，说明造模型成功。
表35本发明胶囊对小鼠前列腺重、前列腺指数的影响
| 组别 | n | 小鼠体重(g) | 前列腺重量(g) | 前列腺指数(％) |
| 空白组模型组本发明胶囊高剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊低剂量组保列治组 | 121311121212 | 32.90±3.4234.04±5.0532.97±3.8434.64±4.4535.88±5.4535.53±2.66 | 0.063±0.015△△0.088±0.0240.064±0.015△△0.063±0.017△△0.066±0.018△0.068±0.019△ | 0.019±0.0057△0.026±0.00780.020±0.0054△0.019±0.0046△0.018±0.0041△△0.019±0.0051△ |
注：经t检验，与模型组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01
如上表所示，模型组小鼠前列腺重量、前列腺指数明显高于空白组，说明造模型成功。本发明胶囊6.66g生药/kg，3.33g生药/kg，1.67g生药/kg组及保列治组可明显降低前列腺重量、前列腺指数(P＜0.05，0.01)。
2.2本发明胶囊对小鼠前列腺组织结构的影响
模型组与空白组相比腺体排列密集，腺体腔变大，腺上皮变厚，部分腺体扩张，部分呈乳头状突向腔内，腔内分泌物增多，上皮细胞部分呈复层，细胞核圆或呈卵园型，间质小血管扩张充血；间质平滑肌增多。本发明胶囊各剂量组及保列治组可见腺腔直径及腺腔壁厚度较模型组小，腔内分泌物减少，间质组织平滑肌较疏松。
2.3 本发明胶囊对小鼠前列腺腺体平均面积、周长的影响
结果见表36
表36本发明胶囊对小鼠前列腺腺体平均面积和周长的影响
| 组别 | n | 腺体面积(μm2) | 腺体周长(μm) |
| 空白组模型组本发明胶囊大剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊小剂量组保列治组 | 121311121212 | 2808.91±1276.62△△5228.63±2579.362712.15±851.73△△3487.44±919.62△△3169.16±803.24△△3131.41±1165.51△△ | 209.76±57.33△△283.00±72.64203.21±36.98△△224.47±30.36△△208.84±25.67△△210.70±41.83△△ |
注：经t检验，与模型组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01。
如上表所示，模型组腺体平均面积、周长均较空白组大(P＜0.01)，说明模型是成功的。本发明胶囊各剂量组及保列治组与模型组相比，可显著降低腺体平均面积、平均周长(P＜0.01)。说明本发明胶囊各剂量组与保列治组均可缩小腺体及腺腔面积。
2.4本发明胶囊对小鼠前列腺腺体等效圆直径及最大直径的影响
结果见表37
表37本发明胶囊对小鼠前列腺腺体等效圆直径和最大直径的影响
| 组别 | n | 腺体等效圆直径(μm) | 腺体最大直径(μm) |
| 空白组模型组本发明胶囊大剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊小剂量组保列治组 | 121311121212 | 52.08±12.54△△69.85±12.3352.22±9.05△△58.06±7.99△54.92±5.91△△57.28±10.44△△ | 73.06±15.93△△99.63±27.6972.94±11.68△△78.91±10.97△△71.25±7.98△△77.87±16.10△△ |
注：经t检验，与模型组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01。
如上表所示，模型组腺体等效园直径及最大直径均明显高于空白组(P＜0.01)，说明模型是成功的。本发明胶囊各剂量组及保列治组与模型组相比，均可显著降低腺体平均等效圆直径和最大直径(P＜0.05，0.01)。
2.5 本发明胶囊对小鼠前列腺腺体总面积、间质总面积及腺体间质面积比的影响
结果见表38
表38 本发明胶囊对腺体总面积、间质总面积、腺体间质面积比的影响
| n | 腺体总面积(μm2) | 间质总面积(μm2) | 腺体间质面积比 | |
| 空白组模型组本发明胶囊大剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊小剂量组保列治组 | 121311121212 | 69475.25±18945.3287961.38±28811.7185025.91±25675.0775845.75±19333.2184907.33±25359.3670820.00±17901.52 | 154783.80±45857.02△△107556.70±35404.23134266.50±34380.72124544.40±50784.98147902.20±42341.21△△129426.30±41397.85 | 0.49±0.19△△0.97±0.640.68±0.240.70±0.300.65±0.31△0.61±0.27△ |
注：经t检验，与模型组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01。
如表所示：模型组大鼠前列腺视野内腺体总面积较空白组增大，而间质总面积较空白组显著减小，故腺体间质面积比明显大于空白组。本发明胶囊各剂量组及保列治组腺体总面积、腺体间质面积比与模型组相比有降低的趋势，间质总面积与模型组相比有增高的趋势，但无统计学意义。
3.结论：
本发明胶囊6.66g生药/kg，3.33g生药/kg，1.67g生药/kg组及保列治组均可降低小鼠前列腺重量及指数。镜下观察及计算可知本发明胶囊各剂量组及保列治组可缩小腺体面积、周长、等效园直径、最大直径，同时可使间质组织平滑肌疏松。本发明胶囊各剂量组及保列治组对视野内腺体、间质总面积以及腺体间质面积比无显著影响，提示本发明胶囊各剂量组及保列治组在缩小前列腺腺体的同时对间质也有一定的缩小。表明本发明胶囊对丙酸睾丸酮致小鼠前列腺增生模型具有显著的对抗作用。
实验例13.本发明胶囊对“血瘀”大鼠血液流变性的影响
体重140～180g的SD大鼠60只，雌雄各半，在本实验室喂养一周后，按性别、体重随机分为6组。按表39所列剂量灌胃给药，每日一次，连续给药7天，给药容积为1ml/100g，模型组与对照组灌服等容积4％淀粉溶液。末次给药后1小时，自尾静脉快速推注10％高分子右旋糖酐0.7ml/kg，1小时后从大鼠眼眶静脉丛取血于肝素抗凝管中，用R-80A血液流变仪测定血液流变学多项指标。
表39 本发明胶囊及丹参片的配制方法与给药剂量计算
| 受试品 | 药物浓度(g原生药/kg) | 给药体积(ml/kg) | 给药剂量(g原生药/kg) | 相当于临床剂量的倍数(倍) |
| 本发明胶囊本发明胶囊本发明胶囊复方丹参片生理盐水 | 66.633.316.730片/dl- | 1010101010 | 6.663.331.673片- | 2010520- |
实验结果见表40、41。
表40本发明胶囊对“血瘀”大鼠血浆粘度、红细胞压积的影响
| 组别 | n | 血浆粘度(mpos) | 红细胞压积(L/L) |
| 空白组模型组本发明胶囊大剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊小剂量组复方丹参片组 | 101010101010 | 1.47±0.052.0±0.04△△△1.90±0.03***1.90±0.08***1.95±0.03***1.77±0.07*** | 0.41±0.220.54±0.05△△△0.54±0.050.55±0.050.54±0.040.53±0.05 |
△△△表示与空白组比较：p＜0.01。***表示与模型组比较p＜0.01。
表41 本发明胶囊对“血瘀”大鼠全血粘度的影响
| 组别 | n | 1/200s | 1/30s | 1/5s | 1s |
| 空白组模型组本发明胶囊大剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊小剂量组复方丹参片组 | 101010101010 | 4.35±0.316.54±0.78△△△5.75±1.056.45±1.226.04±0.275.20±0.82*** | 5.99±0.499.09±1.28△△△8.23±1.218.98±1.728.31±1.076.93±1.11*** | 10.93±1.1717.15±3.30△△△15.87±1.8316.66±3.4915.10±1.7211.99±2.04*** | 26.05±3.6142.30±10.27△△△39.98±4.6740.34±9.6735.87±3.9327.05±5.09*** |
△△△表示与空白组比较：p＜0.01。***表示与模型组比较p＜0.01。
结果表明：大鼠注射高分子右旋糖酐后，出现血液流变学特性的明显改变，全血粘度、血浆粘度、红细胞压积均显著增高(P＜0.01)。本发明胶囊6.66g生药/kg，3.33g生药/kg，1.67g生药/kg均可以显著降低“血瘀”大鼠的血浆粘度(P＜0.01)。
实验例14.本发明胶囊对小鼠肠系膜微循环的影响
昆明种小鼠60只，雌雄各半，按性别、体重随机分为5组，每组12只。按表42所列剂量值灌胃给药，给药容积为0.2ml/10g，对照组灌服等容积4％淀粉悬浮液。每天给药一次，连续给药7天，末次给药1小时后，用戊巴比妥钠50mg/kg腹腔注射小鼠，使之麻醉，剖腹，轻轻拉出肠系膜放在有机玻璃观察台上，滴入适量台氏液(37℃恒温)。用WX-6型多部位微循环仪先观察毛细血管开放数，测量第三级分枝细动脉(A3)和细静脉(V3)的管径，观察血液流态(采用田氏定量法，分七个等级及相应的权分：线流0、线粒流0.2、粒线流0.4、粒流0.8、粒缓流1.6、粒摆流4、停滞6，按权分计量)。随即于同一部位滴加1∶10000肾上腺素(Adr)15μl，镜下观察滴Adr后1、5、10、15分钟后A3、V3管径变化。
表42 本发明胶囊及丹参片的配制方法与给药剂量计算
| 受试品 | 药物浓度(g原生药/kg) | 给药体积(ml/kg) | 给药剂量(g原生药/kg) | 相当于临床剂量的倍数(倍) |
| 本发明胶囊本发明胶囊本发明胶囊复方丹参片 | 33.316.78.3515片/dl | 20202020 | 6.663.331.673片/Kg | 2010520 |
实验结果见表43、表44、表45、表46。
表43本发明胶囊对毛细血管开放数的影响
| 组别 | 剂量(g原生药/kg) | 动物数(只) | 毛细血管开放数(支) | |
| 滴Adr前 | 滴Adr后 | |||
| 对照本发明胶囊本发明胶囊本发明胶囊复方丹参片 | 6.663.331.673片/kg | 1212121212 | 6.8±1.68.2±2.07.3±1.88.1±2.18.1±1.8 | 6.8±1.48.8±3.48.1±2.68.6±3.29.0±2.6* |
与对照组比较，*P＜0.05
表44本发明胶囊对血液流态的影响
| 组别 | 剂量(g原生药/kg) | 动物数(只) | 流态权分值 | ||||
| 滴Adr前 | 滴Adr后(分) | ||||||
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||
| 对照本发明胶囊本发明胶囊本发明胶囊复方丹参片 | -6.663.331.673片/kg | 1212121212 | 0±00±00±00±00±0 | 1.3±0.90.7±0.4*0.7±0.2*0.7±0.2*0.6±0.4* | 1.4±0.90.6±0.4*0.7±0.5*0.7±0.3*0.6±0.4* | 1.0±0.40.6±0.4*0.5±0.4*0.7±0.60.4±0.4** | 0.5±0.40.3±0.30.5±0.40.4±0.40.3±0.3 |
与对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。
表45本发明胶囊对A3管径的影响
| 组别 | 剂量(g生药/kg | 动物数(只) | A3管径(μm) | ||||
| 滴Adr前 | 滴Adr后(分) | ||||||
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||
| 对照本发明胶囊本发明胶囊本发明胶囊复方丹参片 | -6.663.331.673片/kg | 1212121212 | 56.9±18.561.4±22.663.6±15.161.3±10.959.0±17.2 | 1.9±1.57.4±5.0**5.7±3.3**6.3±5.4*8.2±5.5** | 9.0±6.313.0±6.112.6±9.613.4±7.018.2±11.1* | 26.3±17.031.8±18.123.1±16.526.8±21.541.2±21.0 | 37.6±20.356.1±26.338.4±23.843.6±22.950.3±25.0 |
与对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。
表46 本发明胶囊对V3管径的影响
| 组别 | 剂量(g生药/kg) | 动物数(只) | V3管径(μm) | ||||
| 滴Adr前 | 滴Adr后(分) | ||||||
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||
| 对照本发明胶囊本发明胶囊本发明胶囊复方丹参片 | -6.663.331.673片/kg | 1212121212 | 101.4±33.893.6±31.299.9±352110.3±26990.9±27.8 | 62 2±25.854.5±38.750.1±27.963.7±35.550.9±23.3 | 60.1±25.844.6±20.651.5±33.063.2±36.157.5±15.2 | 77.4±29.160.6±30.454.6±34.472.1±3.2177.6±21.0 | 37.6±20.389.3±36.456.8±44.781.9±37.286.3±25.6 |
结果表明本发明胶囊6.66g生药/kg，3.33g生药/kg，1.67g生药/kg均能显著减轻Adr对血管的收缩作用(P＜0.05)，改善血液状态，拮抗Adr对A3的收缩作用(P＜0.01)，并增加毛细血管开放数。
实验例15.本发明胶囊对醋酸所致小鼠疼痛的影响
取昆明种小鼠50只，按体重随机分成5组，每组10只。分别为本发明胶囊大、中、小剂量组，阳性对照组及空白组。按表47所列剂量灌胃给药。连续三天。末次灌胃1小时后，将室温恒定在20℃左右，于每只受试动物的腹腔注射0.6％的醋酸溶液0.2ml/只，观察小鼠扭体反应，指标为小鼠出现腹部内凹，躯干与后肢伸张，臀部高起。观察每只小鼠扭体反应的潜伏期(注药完毕到出现第一次扭体的时间)，30分钟内每只小鼠的扭体次数，并按下式计算扭体抑制率。结果见表47。
表47 本发明胶囊的配制方法与给药剂量计算
| 受试品 | 药物浓度(g原生药/dl) | 给药体积(ml/kg) | 给药剂量(g原生药/kg) | 相当于临床剂量的倍数(倍) |
| 本发明胶囊本发明胶囊本发明胶囊盐酸曲马多生理盐水 | 66.633.316.70.1- | 1010101010 | 6.663.331.670.01- | 20105-- |
表48 本发明胶囊对醋酸溶液所致小鼠扭体的影响
| 组别 | n | 体重(g) | 扭体潜伏期(s) | 30分钟内扭体次数 | 抑制率 |
| 空白组本发明胶囊大剂量组本发明胶囊中剂量组本发明胶囊小剂量组阳性对照组 | 1010101010 | 25.36±2.3826.09±2.4925.07±2.2924.97±2.7725.47±2.31 | 126.60±45.85373.10±110.06△△227.00±54.39△△235.70±73.95△△701.10±461.66△△ | 27.20±10.6618.00±4.32△20.09±4.1925.00±5.357.60±6.15△△ | ----33.82％23.16％8.09％72.59％ |
注：经t检验，与空白组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01
如表所示，本发明胶囊6.66g生药/kg，3.33g生药/kg，1.67g生药/kg组与空白组相比其扭体潜伏期均有显著差异(P＜0.01)。本发明胶囊6.66g生药/kg组30分钟内扭体次数与空白组相比有显著差异(P＜0.05)。
结果表明本发明胶囊各剂量组能明显延长醋酸所致小鼠疼痛发作的潜伏期；本发明胶囊6.66g生药/kg组还能减少醋酸所致小鼠腹痛的扭体次数。
实验例16：本发明胶囊临床研究
为评估本发明胶囊对良性前列腺增生症(BPH)的疗效和安全性，于1999年9月至2000年3月对30例BPH进行了临床观察。治疗观察1月。病例选择标准、前列腺增生诊断标准均参照《中药新药临床研究指导原则》(1997)。临床试验结果如下。
1.总疗效：显效11例(36.67％)，进步15例(50％)，无效4例(13.33％)。
2.I-PSS、生活质量指数(QOL)的变化：
表49 I-PSS及QOL变化
| n | I-PPS(分) | QOL(分) | ||
| 疗前 | 疗后 | 疗前 | 疗后 | |
| 30 | 23.4±6.2 | 8.9±6.3** | 3.8±0.8 | 2.6±0.8** |
注：*表示与治疗前比较p＜0.05，**表示与治疗前比较p＜0.01(下同)。
3.尿流率的变化
表50最大尿流率(Qmax)、平均尿流率(AFR)比较
| n | Qmax(ml/s) | AFR(ml/s) | ||
| 疗前 | 疗后 | 疗前 | 疗后 | |
| 30 | 9.3±2.8 | 15.2±3.7** | 5.4±2.2 | 9.5±2.3** |
注：p值表示同上。
4.残余尿量(PVR)的变化
表51残余尿量(PVR)比较
| N | 疗前 | 疗后 |
| 30 | 56.0±21.5 | 29.8±14.2** |
注：p值表示同上。
5.前列腺体积变化
表52前列腺体积(ml)比较
| N | 疗前 | 疗后 |
| 30 | 35.5±11.5 | 34.2±9.2 |
6.中医症状变化
表53治疗前后中医症状积分比较(分)
| n | 疗前 | 疗后 | |
| 夜尿频数尿线状况小腹症状 | 303030 | 1.82±0.811.87±0.771.63±0.98 | 0.72±0.45*0.76±0.38*0.74±0.41* |
注：P值表示同上
从上表可看出，克癃胶囊对中医主要症状夜尿频数，排尿困难，小腹症状有明显改善作用。
实验结果表明病人主观症状明显改善，I-PSS评分降低62.0％，生活质量指数(QoL)下降31.9％(p＜0.01)；最大尿流率(MRF)和平均尿流率(AFR)分别提高63.7％、75.1％(p＜0.01)；24例残余尿(PVR)下降46.8％(p＜0.01)。10病人于治疗前和治疗结束时检测了其血、尿、大便常规，以及肝功、肾功、心电图。均无明显变化。治疗期间未出现不良反应。认为本发明胶囊治疗BPH安全有效。
本发明下述实施例均能达到上述实验例的效果。
实施例1：
取补骨脂1千克、蜣螂4千克，加入辅料，按药剂学常规制备工艺制成片剂。
实施例2：
取补骨脂5千克、蜣螂1千克，加入辅料，按药剂学常规制备工艺制成丸剂。
实施例3：
取补骨脂2千克、蜣螂3千克，加入辅料，按药剂学常规制备工艺制成胶囊剂，每粒0.36克，每日3次，每次4粒。
实施例4：本发明胶囊剂的制备
称取补骨脂836g、蜣螂836g、欧巴代17.1g；
补骨脂加70％的乙醇回流提取2次，第一次加7倍量，提取1小时，滤过；第二次加6倍量，提取1小时，滤过；合并滤液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.05(60℃)；
蜣螂加85％的乙醇回流提取3次，第一次加7倍量，提取1小时，滤过；第二次加6倍量，提取1小时，滤过；第三次再加6倍量，提取1小时，滤过；合并滤液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.10(60℃)；冷藏24小时，除去表面脂肪，与补骨脂浓缩液合并，加入乙醇，使乙醇浓度达40％；按以下条件进行喷雾干燥，药液温度：50℃；进液速度：200-300ml/min；进风温度：135～145℃；出风温度：80-90℃；
收集干燥浸膏粉末，以95％的乙醇为润湿剂制软材，过40目筛，50～60℃热风干燥，再以40目筛整粒；以15％的欧巴代溶液按以下条件对颗粒进行流化床包衣，进液速度40-50ml/min；喷雾压力0.3(MPa)；蒸汽压力0.5(MPa)：物料温度55～50(℃)；进风温度78～68℃)；出风温度40～35℃)；得干燥包衣颗粒，填充1号胶囊，即得胶囊1000粒(0.36g/粒)。口服，一次4粒，一日3次。
实施例5：本发明片剂的制备
取补骨脂1千克、蜣螂4千克；
补骨脂加90％的乙醇回流提取3次，第一次提取时间1.0小时，乙醇用量按体积重量比为10倍药材量，第二次提取时间1.0小时，乙醇用量按体积重量比为8倍药材量，第三次提取时间2.0小时，乙醇用量按体积重量比为6倍药材量，滤过；合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃时相对密度为1.05；
蜣螂加95％的乙醇回流提取1次，提取时间3.0小时，乙醇用量按体积重量比为8倍药材量，滤过；合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃时相对密度为1.10；冷藏24小时，除去表面脂肪，与补骨脂浓缩液合并；按以下条件进行喷雾干燥，药液温度：50℃；进液速度：200-300ml/min；进风温度：135～145℃；出风温度：80-90℃，得本发明药物组合物干燥浸膏粉；取干燥浸膏粉，按常规工艺制备成片剂。
实施例6：本发明丸剂的制备
取补骨脂2千克、蜣螂3千克；
称取补骨脂、蜣螂，补骨脂加80％的乙醇回流提取2次，每次提取时间2.0小时，每次乙醇用量按体积重量比为8倍药材量，滤过；合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃时相对密度为1.10；
蜣螂加90％的乙醇回流提取2次，每次提取时间2小时，按体积重量比第一次乙醇用量为10倍药材量，第二次乙醇用量为8倍药材量，滤过；合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃时相对密度为1.10；冷藏，除去表面脂肪，与补骨脂浓缩液合并；按以下条件进行喷雾干燥，药液温度：50℃；进液速度：200-300ml/min；进风温度：135～145℃；出风温度：80-90℃，得本发明药物组合物干燥浸膏粉；取干燥浸膏粉，按常规工艺制备成丸剂。
Claims (19)
1、一种药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下重量配比的原料药制成：
补骨脂1～5重量份 蜣螂1～5重量份。
2、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下重量配比的原料药制成：
补骨脂1重量份 蜣螂4重量份。
3、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物由如下重量配比的原料药制成：
补骨脂2重量份 蜣螂3重量份。
4、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物由如下重量配比的原料药制成：
补骨脂1重量份 蜣螂1重量份。
5、如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物，其特征在取该药物组合物，直接或加入常规辅料，按药剂学常规工艺制备成临床可接受的固体制剂：片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂或滴丸。
6、如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：
称取补骨脂、蜣螂；补骨脂加70％～90％的乙醇回流提取2～3次，每次提取时间1.0～2.0小时，每次乙醇用量按体积重量比为6～10倍药材量，滤过；合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃时相对密度为1.05～1.10；蜣螂加85％～95％的乙醇回流提取1～3次，每次提取时间1.0～3.0小时，每次乙醇用量按体积重量比为6～10倍药材量，滤过；合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃时相对密度为1.10～1.15；冷藏，除去表面脂肪，与补骨脂浓缩液合并；喷雾干燥，得本发明药物组合物干燥浸膏粉；取干燥浸膏粉按常规工艺制备成临床可接受的固体制剂：片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂或滴丸。
7、如权利要求6所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：
称取补骨脂、蜣螂；补骨脂加90％的乙醇回流提取3次，第一次提取时间1.0小时，乙醇用量按体积重量比为10倍药材量，第二次提取时间1.0小时，乙醇用量按体积重量比为8倍药材量，第三次提取时间2.0小时，乙醇用量按体积重量比为6倍药材量，滤过；合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃时相对密度为1.05；蜣螂加95％的乙醇回流提取1次，提取时间3.0小时，乙醇用量按体积重量比为8倍药材量，滤过；合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃时相对密度为1.10；冷藏，除去表面脂肪，与补骨脂浓缩液合并；喷雾干燥，得本发明药物组合物干燥浸膏粉；取干燥浸膏粉按常规工艺制备成片剂。
8、如权利要求6所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：
称取补骨脂、蜣螂，补骨脂加80％的乙醇回流提取2次，每次提取时间2.0小时，每次乙醇用量按体积重量比为8倍药材量，滤过；合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃时相对密度为1.10；蜣螂加90％的乙醇回流提取2次，每次提取时间2小时，按体积重量比第一次乙醇用量为10倍药材量，第二次乙醇用量为8倍药材量，滤过；合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃时相对密度为1.15；冷藏，除去表面脂肪，与补骨脂浓缩液合并；喷雾干燥，得本发明药物组合物干燥浸膏粉；取干燥浸膏粉按常规工艺制备成丸剂。
9、如权利要求6所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：
称取补骨脂、蜣螂；补骨脂加70％的乙醇回流提取2次，第一次加7倍量，提取1小时，滤过；第二次加6倍量，提取1小时，滤过；合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃时相对密度为1.05；蜣螂加85％的乙醇回流提取3次，第一次加7倍量，提取1小时，滤过；第二次加6倍量，提取1小时，滤过；第三次再加6倍量，提取1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃时相对密度为1.10，冷藏，除去表面脂肪，与补骨脂浓缩液合并；进行喷雾干燥，收集干燥浸膏粉末，以95％的乙醇为润湿剂制软材，过40目筛，50～60℃热风干燥，再以40目筛整粒；以15％的的欧巴代溶液对颗粒进行流化床包衣，得干燥包衣颗粒，填充1号胶囊，即得。
10、如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物在制备治疗前列腺增生症药物中的应用。
11、如权利要求10所述的药物组合物的应用，其特征在于治疗前列腺增生症是指肾虚血瘀证。
12、如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物在制备具有抑制前列腺上皮及间质细胞的增殖作用的药物中的应用。
13、如权利要求12所述的应用，其特征在于抑制前列腺上皮及间质细胞的增殖是指抑制前列腺组织中Ki-67的表达。
14、如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物在制备具有抑制前列腺组织中bcl-2蛋白的表达或诱导前列腺上皮及间质细胞凋亡作用的药物中的应用。
15、如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物在制备具有抑制前列腺平滑肌细胞的增生作用的药物中的应用。
16、如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物在制备具有增加前列腺间质组织中iNOS的表达作用的药物中的应用。
17、如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物在制备具有降低血浆粘度作用的药物中的应用。
18、如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物在制备具有减轻Adr对血管的收缩作用或拮抗Adr对A3受体的收缩作用的药物中的应用。
19、如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物在制备具有镇痛作用的药物中的应用。
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