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CN106974917B - 茯苓皮三萜在制备治疗肾病药物中的应用 - Google Patents

茯苓皮三萜在制备治疗肾病药物中的应用 Download PDF

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CN106974917B CN201710219904.7A CN201710219904A CN106974917B CN 106974917 B CN106974917 B CN 106974917B CN 201710219904 A CN201710219904 A CN 201710219904A CN 106974917 B CN106974917 B CN 106974917B
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Abstract

本发明针对目前肾病治疗药剂对某些病例的效果仍不理想，中药提取物毒性高的问题，提供了一种较为安全且疗效显著的茯苓皮三萜在制备治疗肾病药物中的应用，所述茯苓皮三萜为茯苓皮的乙醇提取物。本发明中茯苓皮三萜能够减轻肾脏的病变程度，减少肾病造成的尿蛋白含量，降低肌酐和尿素氮，对肾病发挥治疗作用。

Description

茯苓皮三萜在制备治疗肾病药物中的应用
技术领域
本发明属于医药制剂领域，涉及一种茯苓皮三萜在制备治疗肾病药物中的应用。
背景技术
近年来，随着环境污染加重、人们工作和生活节奏的加快、职业竞争加剧、饮食结构改变以及抗生素的滥用，慢性肾炎的发病率呈逐年上升趋势。调查结果显示，我国成年人中慢性肾病患病率为10.8％，据此估计，18岁以上人群中约有1.2亿慢性肾病患者。本病为慢性病，病程长，为害大，严重影响健康和工作，我国每年用于慢性肾炎医疗费用等经济损失，每年达数亿元，给社会生产和经济带来巨大损失。慢性肾炎是以蛋白尿、血尿、水肿及高血压为主要表现的疾病，其起病隐匿，病程迁延，不同病理类型的预后有着显著差异，大部分患者病情进展缓慢，但最终都将发展至肾衰竭，目前现代医学尚无特效治疗方法。目前在临床治疗中多以西医治疗为主，主要以激素与细胞毒药物为治疗药，激素具阳刚之性，易伤阴液，易致湿热；细胞毒药物可导致骨髓抑制、肝功能损伤，治疗效果欠佳，且副作用大。研究发现，中医药能显著缓解慢性肾炎患者的临床症状，提高患者的生活质量，改善尿蛋白定量、血尿、尿微量白蛋白等指标。
肾病综合征(nephrotic syndrome，NS)是多种病因使肾脏受损而致的一组临床综合症，是肾小球疾病的常见表现。中医无此病名，按其临床表现可归属于“水肿”、“虚劳”、“腰痛”等范畴。西医治疗NS主要应用糖皮质激素、免疫抑制剂、对症支持等方法，虽疗效尚可，但疗程长、易复发、易产生激素依赖和毒副作用。实践证明，单独用激素或并用免疫抑制剂，对某些病例的效果仍不理想，复发率较高。此外，应用激素和免疫抑制剂致使免疫功能降低功能，降低而增加感染使本病复发。
中药治疗肾病综合征历史悠久，中医将肾病综合征可分为4型，即肺脾肾阳虚型、肾气虚型、气阴两虚型、肝肾阴虚型。临床上常用于治疗此病的方药有：脾肾阳虚型可用济生肾气丸，肺肾气虚型可用香砂六君子汤，肝肾阴虚型可用知柏地黄汤，气阴两虚型可用参芪地黄汤，兼湿热用三仁汤、藿香左金汤，兼水湿用五皮饮合五苓散，兼湿浊用胃苓汤，兼血瘀用补阳还五汤，中药复方治疗取得一定效果。中药单味治疗肾病综合征主要有雷公藤，属于卫予科攀缘木植物雷公藤的根，具有祛风、除湿、杀虫功用，属于有毒药物。近年来多采用提取的雷公藤多甙治疗本病，对消除蛋白尿有较好疗效，且无耐药性。该药具有抑制免疫和抗炎作用，并能抑制肾小球系膜细胞增生，改善肾小球滤过膜的通透性。在临床治疗中，发现雷公藤多甙可造成少量患者白细胞减少，对消化系统一般有恶心、胃部不适、疼痛、腹泻等不良反映。对肾功能不全的老年患者，会加重肾功能不全症状，并引起肾功能损伤。因此，超过50岁的患者，用药时必须及时检测肝肾功能。雷公藤多甙对生殖系统影响较大，使应用受到限制，亟需开发安全有效、药效稳定、服用方便的中药新药。
茯苓皮为多孔菌科真菌茯苓(Poriacocos(Schw.)Wolf)的干燥菌核外皮。中医学认为，茯苓味甘、淡、性平，具有利水渗湿、益脾和胃、宁心安神之功效。目前已有研究表明，茯苓皮具有免疫调节、抗肿瘤、抗惊厥、抑菌抗炎等作用。沈婵娟在《茯苓乙醇提取物对肾病综合征的药效学及药动学研究》(湖北中医药大学，2012)一文中对茯苓乙醇提取物对肾病综合征的药效学及药动学进行了研究，并指出茯苓三萜中去氢土莫酸、土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸为茯苓乙醇提取物发挥药效的物质基础。然而，与茯苓相比，茯苓皮化学成分复杂，有多糖、三萜、脂肪酸、甾醇、酶等，其中多糖和三萜类物质为主要的活性成分，有研究表明茯苓皮中的三萜类物质含量远高于茯苓菌核。申请公布号为CN 103550265 A的专利文件“一种茯苓皮有效成分的提取方法及其提取物”中公开了茯苓皮的提取物主要有效成分为3β-羟基-羊毛甾7,9(11)，24-三烯-21-酸和去氢依布里酸，与茯苓乙醇提取物中有效成分明显不同。
发明内容
针对目前肾病治疗药剂对某些病例的效果仍不理想，中药提取物毒性高的问题，本发明提供一种较为安全且疗效显著的茯苓皮三萜在制备治疗肾病药物中的应用。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。
一种茯苓皮三萜在制备治疗肾病药物中的应用，所述茯苓皮三萜的主要有效成分为3β-羟基-羊毛甾-7,9(11)，24-三烯-21-酸和去氢依布里酸。
所述肾病为肾病综合征和肾炎。
所述3β-羟基-羊毛甾7,9(11)，24-三烯-21-酸和去氢依布里酸在茯苓皮三萜中总含量为50％w.t以上。
所述茯苓皮三萜为茯苓皮的乙醇提取物，采用以下方法提取：
所述茯苓皮三萜为茯苓皮的乙醇提取物
(1)将茯苓皮用质量分数为1.0-2.0％的盐酸冲洗，然后用水冲洗至中性，晾干；
(2)将步骤(1)处理过的茯苓皮用体积分数为70％的乙醇溶液回流提取2次，每次提取时间为0.5h，茯苓皮与乙醇溶液的用量为1:10(g/ml)，合并提取液，提取液回收乙醇至干；
(3)将步骤(2)的干物质用水溶解成溶液，加入体积比为7:1.5的正丁醇和乙酸乙酯的混合物萃取，正丁醇和乙酸乙酯的混合物的体积为水溶液的1.5-2倍，有机相回收溶剂至干，得粗品；
(4)粗品用100-120质量倍的乙醇溶解，配成溶液，所得溶液上中性氧化铝层析柱，中性氧化铝的质量为粗品的15-20倍，然后用乙醇和乙酸乙酯体积比为2:5的混合物进行洗脱，乙醇和乙酸乙酯混合物的用量为氧化铝的2倍，收集洗脱液；
(5)向洗脱液中加入活性炭，活性炭用量为粗品质量的2-3％，加热至沸腾并保持30min，趁热过滤，用乙醇洗涤活性炭，合并滤液及洗液，浓缩至原体积的1/3，静置沉淀、过滤、干燥，得茯苓皮三萜。
本发明具有以下优点：
茯苓皮三萜具有抗肿瘤、抗炎、免疫调节、胰岛素增强等活性，本发明中茯苓皮三萜能够减轻肾脏的病变程度，减少肾病造成的尿蛋白含量，降低肌酐和尿素氮，对肾病发挥治疗作用。
附图说明
图1为3β-羟基-羊毛甾7,9(11)，24-三烯-21-酸和去氢依布里酸在茯苓皮三萜标准品的液相色谱图；
图2为茯苓皮三萜提取物液相色谱图；
图3为茯苓皮三萜对盐酸多柔比星致大鼠肾病综合征体重变化的影响。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明做进一步说明，但本发明不受下述实施例的限制。
实施例1 茯苓皮三萜的提取制备。
(1)将茯苓皮用质量分数为1.5％的盐酸冲洗，然后用水冲洗至中性，晾干；
(2)将茯苓皮用体积分数为70％的乙醇溶液回流提取2次，每次提取时间为0.5h，茯苓皮与乙醇溶液的用量为1:10(g/ml)，合并提取液，提取液回收乙醇至干；
(3)将步骤(1)的干物质用水溶解成溶液，加入体积比为7:1.5的正丁醇和乙酸乙酯的混合物萃取，正丁醇和乙酸乙酯的混合物的体积为水溶液的2倍，有机相回收溶剂至干，得粗品；
(4)粗品用100-120质量倍的乙醇溶解，配成溶液，所得溶液上中性氧化铝层析柱，中性氧化铝的质量为粗品的15倍，然后用乙醇和乙酸乙酯体积比为2:5的混合物进行洗脱，乙醇和乙酸乙酯混合物的用量为氧化铝的2倍，收集洗脱液；
(5)向洗脱液中加入活性炭，活性炭用量为粗品质量的3％，加热至沸腾并保持30min，趁热过滤，用乙醇洗涤活性炭，合并滤液及洗液，浓缩至原体积的1/3，静置沉淀、过滤、干燥，得茯苓皮三萜。
实施例2 茯苓皮三萜中有效成分的测定。
对提取物中羟基-羊毛甾7,9(11)，24-三烯-21-酸和去氢依布里酸的含量进行测定，方法如下：
仪器及试药：Waters高效液相色谱系统，Water600泵，996二极管阵列检测器，M32色谱工作站，Lichrospher-C18柱，200×4.6mm，5μ(江苏汉邦科技有限公司产品)。
试剂：乙腈(色谱纯级)，3β-羟基-羊毛甾7,9(11)，24-三烯-21-酸和去氢依布里酸(山东省中药新型制剂中心制备，含量均达98.0％以上)。
检测条件：流动相：乙腈：0.5％乙酸水(80:20)，检测波长242nm。
对照品溶液的制备：精密称取3β-羟基-7,9(11),24-三烯-21-酸对照品，置10mL容量瓶中，甲醇稀释至刻度，制成228μg·mL-1的对照品溶液；精密称取去氢依布里酸对照品，置10mL容量瓶中，甲醇稀释至刻度，制成130μg·mL-1的对照品溶液。
供试品溶液的制备：取实施例1中茯苓皮三萜约40mg，精密称定，置100mL容量瓶中，甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取滤液，即得。
测定方法：精密吸取上述对照品溶液及供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪中，得到对照品的色谱图1和提取物的色谱图2。根据峰面积计算，3β-羟基-羊毛甾7,9(11)，24-三烯-21-酸含量为30.15％，去氢依布里酸含量为28.19％，两种物质共计58.34％。
实施例3 茯苓皮三萜对大鼠多柔比星肾病综合征的药效。
1材料与方法
1.1仪器和药品
WFZ UV-PC型紫外分光光度计(尤尼柯(上海)仪器有限公司)；DXL-DL代谢笼：江苏省冯氏实验动物设备有限公司；小牛血清白蛋白：西安沃尔森生物技术有限公司；考马斯亮蓝G-250：中国医药集团上海化学试剂公司；尿蛋白试纸：广东花都高尔宝生物技术有限公司；盐酸多柔比星：浙江海正药业股份有限公司，10mg/支，批号130201，临用时以注射生理盐水为溶剂，配制成2mg/ml的溶液；茯苓皮三萜采用实施例1中样品，临用时以橄榄油为溶剂，配制成10mg/ml的溶液。
1.2动物
选用健康雄性Wistar大鼠，体重158±13g，由青岛市实验动物中心提供(合格证号：SCXK(鲁)2014-0001)，所有大鼠均行动活跃、毛发光泽，两次尿蛋白定性试验阴性(干化学试纸条法)。
1.3模型的制备
Wistar大鼠25只，雄性，顺应性喂养三天，无不良反应，随机挑选20只大鼠尾静脉注射盐酸多柔比星6.5mg/kg,一周后追加注射盐酸多柔比星4mg/kg，造模期间以尿蛋白试纸检测造模情况，造模两周后，收集24小时尿液，考马斯亮蓝法测定尿蛋白含量，造模组和正常组无差异的予以剔除，造模成功大鼠随机分为正常对照组(生理盐水10ml/kg·d)、模型对照组(生理盐水10ml/kg·d)、茯苓皮三萜小剂量组(茯苓皮三萜42mg/kg·d)、茯苓皮三萜中剂量组(茯苓皮三萜为84mg/kg·d)、茯苓皮三萜高剂量组(茯苓皮三萜为168mg/kg·d)。连续给药30天。
1.4指标检测
分别于造模前的前1天、造模后的第7天、第14天，以及给药后的第7天、第14天、第21天、第30天将大白鼠置于清洁的代谢笼中，禁食，自由饮水的条件下留取24h尿样，用蛋白试纸测定尿蛋白的含量，同时测量大鼠的体重变化及食量、体毛、大便、精神状态、水肿等一般性的指标变化。
1.5统计学分析
采用SPSS 19.0软件做统计处理，计量资料用均数±标准差(X±s)表示，数据统计用单因素方差分析，组间两两比较。以p＜0.05为差异显著标准。
2结果
2.1对大鼠体重的影响
茯苓皮三萜对盐酸多柔比星致大鼠肾病综合征体重变化的影响，见表1，图3。与正常组相比较，模型组大鼠在注射盐酸多柔比星后体重明显下降(p<0.01)。在灌胃后第7天，茯苓皮三萜灌胃组体重较模型组明显增长。与模型组相比较，用药组差异不明显。
表1 茯苓皮三萜对盐酸多柔比星致大鼠肾病综合征体重变化的影响
组别 正常(g) 模型(g) 低剂量组(g) 中剂量组(g) 高剂量组(g)
造模前1天 163.6±4.7 172.7±8.1 158.0±10.5 162.0±12.1 162.3±10.5
造模后7天 208.0±5.96 180.0±2.8<sup>**</sup> 174.7±23.8<sup>*</sup> 180.0±17.4<sup>*</sup> 166.0±12.1<sup>*</sup>
造模后14天 239.4±5.0 187.0±12.2<sup>**</sup> 170.0±28.1<sup>*</sup> 194.5±23.1<sup>*</sup> 184.3±7.5<sup>*</sup>
药后7天 252.8±3.6 187.2±16.9<sup>**</sup> 172.6±73.6<sup>*</sup> 224.6±23.1<sup>*</sup>△ 218.0±3.4<sup>*</sup>△
药后14天 252.8±6.5 180.7±27.7<sup>**</sup> 173.6±36.4<sup>*</sup> 228.6±33.5<sup>*</sup> 218.0±3.4<sup>*</sup>△
药后21天 261.6±9.3 173.0±28.8<sup>**</sup> 173.6±36.4<sup>*</sup>△ 223.3±64.0<sup>*</sup> 252.0±10.1<sup>*</sup>△
药后30天 268.6±5.0 169.2±29.8<sup>**</sup> 181.3±25.5<sup>*</sup> 226.6±57.7<sup>*</sup>△ 255.3±5.6<sup>*</sup>△△
与正常组相比较，*p<0.05,**p<0.01，与模型组相比较，△P<0.05,△△P<0.01。
2.2对大鼠肾病综合征一般指标的影响
尾静脉注射盐酸多柔比星的20只大鼠第7天开始出现不同程度的情绪躁动，饮食减少，体毛凌乱无光泽及尾部红肿，于第10天开始出现烂尾现象。各治疗组在给药中期上述症状较轻，在给药后期健康状况与正常组比较无明显差异。
2.3对大鼠尿蛋白的影响
茯苓皮三萜对盐酸多柔比星致大鼠肾病综合征大鼠尿蛋白影响见表2-表8。由表中数据可知，注射盐酸多柔比星后，大鼠的尿蛋白较正常组明显增加，在给药后14天出现典型肾病综合征表现。茯苓皮三萜灌胃后，茯苓皮三萜灌胃组的尿蛋白量较模型组减少，其中高剂量组改善明显。表2-表8中，“+”代表尿里有尿蛋白为0.3g/L；"++"代表尿里有尿蛋白为1.0g/L；“+++"代表尿里有尿蛋白为3.0g/L；“++++”代表尿里有尿蛋白为20g/L。
表2 造模前1天24h尿蛋白检测结果
正常 模型 低 中 高
1 - - - - -
2 - - - - -
3 - - - - -
4 - - - - -
5 - - - - -
表3 造模后7天24h尿蛋白检测结果
正常 模型 低 中 高
1 - + + + +
2 + + + ++ +
3 - + + + +
4 - ++ + + +
5 - + ++ + +
表4 造模后14天24h尿蛋白检测结果
正常 模型 低 中 高
1 - ++ ++ ++ +++
2 - +++ +++ +++ +++
3 - +++ ++ ++ ++
4 - +++ +++ +++ ++
5 - +++ +++ +++ ++
表5 药后7天24h尿蛋白检测结果
正常 模型 低 中 高
1 - +++ +++ +++ ++
2 - +++ ++ +++ ++
3 - +++ + +++ +++
4 - +++ ++ +++ ++
5 - +++ +++ +++ ++
表6 药后14天24h尿蛋白检测结果
正常 模型 低 中 高
1 - +++ +++ ++ ++
2 - ++++ ++ ++ ++
3 - ++++ + ++ +++
4 - 死亡 +++ ++ ++
5 - ++++ +++ +++ ++
表7 药后21天24h尿蛋白检测结果
正常 模型 低 中 高
1 + ++++ +++ ++ ++
2 - ++++ +++ ++ ++
3 - ++++ + ++ ++
4 - 死亡 +++ +++ ++
5 - ++++ ++ ++ 死亡
表8 药后30天24h尿蛋白检测结果。
正常 模型 低 中 高
1 - ++++ +++ +++ ++
2 - ++++ +++ +++ ++
3 - ++++ 死亡 ++ ++
4 -- 死亡 +++ ++ ++
5 - ++++ +++ +++ 死亡
盐酸多柔比星诱导大鼠肾病综合征在病理上属微小病变形肾病，以后逐渐演变为局灶性肾小球硬化。当给大鼠2次尾静脉注盐酸多柔比星后可引起大鼠烂尾，饮食减少，情绪躁动、体重减少等一般性指标的改变。其中体重是动物实验中一个重要的非特异性观察指标，可综合地反应动物机体中毒反应。实验中注射盐酸多柔比星后，大鼠的体重增长速度明显减慢，出现尿蛋白现象，灌胃后体重增长速度恢复，低(42mg/kg·d)、中(84mg/kg·d)、高(168mg/kg·d)三个剂量组都能显著降低尿蛋白水平，尤以高剂量组效果最为明显。以上结果表明，茯苓皮三萜可通过减轻肾脏的病变程度，减少尿蛋白含量，对肾病综合征发挥治疗作用。
实施例4 茯苓皮三萜对大鼠肾炎的药效。
1试验材料
1.1仪器与药品
代谢笼，苏州市冯氏实验动物设备有限公司；PL303电子天平，Mettler-Totado公司制造；UV-2100型紫外可见分光光度计，上海合利仪器有限公司；DDL-5低速冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂生产；S-DK-600电热恒温三用水温箱，上海贺德实验设备有限公司生产；Thermo可调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司。
茯苓皮三萜，山东省中医药研究院制剂室提供；醋酸地塞米松片，浙江仙琚制药股份有限公司，批号：120615；弗氏完全佐剂，美国Sigma产品，批号：CAS9007-81-2，规格：10mL/支，济南凯琪生物技术有限公司提供；戊巴比妥钠：Union进口分装，上海化学试剂采购供应站分装，批号：86-01-22；0.9％氯化钠注射液，山东鲁抗辰欣药业有限公司生产，批号20111011；目测尿蛋白试纸，广州市花都高尔宝生物技术有限公司(澳大利亚独资)生产，批号20120702；尿蛋白定量试剂盒，批号20121214；尿素氮试剂盒(脲酶法)，批号20130110；肌酐试剂盒，批号20130111，均由南京建成生物工程研究所提供。
1.2动物
Wistar大鼠85只，SPF级，雌雄各半，体重180±20g，山东大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK(鲁)20090001。尿蛋白测试全部为阴性。
2试验方法
2.1制备肾皮质加弗氏完全佐剂悬液
取Wistar大鼠，雌雄各半，1％戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉，在无菌条件下剖开腹腔，结扎肾动脉，自结扎处向肾脏插管，剪断肾静脉，经插管用生理盐水反复冲洗肾脏，使之成灰白色，取下肾脏，取肾皮质用匀浆器磨成匀浆，每次取皮质匀浆10g，加弗氏完全佐剂20ml，缓缓加入生理盐水40ml，置乳钵研匀，使乳化均匀完全。
2.2主动型Heymann肾炎模型建立
取180～220g Wistar大鼠，雌雄各半，选取经尿液检查尿蛋白全部阴性者50只，预留10只作为正常对照组，其余各组大鼠均腹腔注射上述同种大鼠肾皮质加弗氏完全佐剂悬液进行免疫，2mL/只，2周注射1次，共5次。于注射肾皮质弗氏完全佐剂悬液5次后将各组大鼠放入代谢笼收集24h尿液，分光光度法测定各组大鼠24h尿蛋白定量，动物出现蛋白尿表明造模成功。
2.3分组与给药
造模成功大鼠随机分为模型对照组、地塞米松阳性对照组、茯苓皮三萜低、高剂量组，每组8只。茯苓皮三萜低、高剂量组分别为0.162g/kg、0.486g/kg，地塞米松组5mg/kg，各药物组灌胃给药，给药容积为10mL/kg，每日1次，连续给药15d，正常对照组和模型对照组动物给予等容积蒸馏水。
正常对照组和模型对照组灌胃同体积的蒸馏水，每日给药1次，连续给药15d。
2.3观察指标
2.3.1 24h尿蛋白定量
分别在造模成功给药处理后5d、10d、15d，将各组大鼠分别置于清洁的代谢笼中，禁食、自由饮水条件下收集24h尿液，记录尿量，采用分光光度法测定大鼠尿蛋白浓度，计算24h尿蛋白含量。
2.3.2肾功能指标检测
给药15d后，禁食不禁水12h，腹主动脉取血6mL，其中3mL置肝素钠抗凝管中，3000r/min，离心15min，分离血浆；另外3mL血液自凝后，3000r/min，离心15min，分离血清，置-20℃冰柜保存，备测血清肌酐和血浆尿素氮含量。
2.4统计学处理
所有实验数据以均数±标准差(X±s)表示，应用SPSS19.0统计软件包对数据进行统计分析，两两比较采用t检验，取P<0.05作为差异显著性界值。
3实验结果
3.1茯苓皮三萜对肾炎模型大鼠24h尿蛋白定量的影响
由表9结果可见：与正常对照组比较，模型对照组大鼠各时间点24h尿蛋白含量明显高于正常对照组，表明肾炎模型复制成功。与模型对照组大鼠比较，给药15d，茯苓皮三萜高剂量组大鼠24h尿蛋白含量明显降低，说明茯苓皮三萜对Heymann肾炎尿蛋白具有降低作用。
表9 茯苓皮三萜对肾炎模型大鼠24h尿蛋白定量的影响
Figure BDA0001263399340000091
与模型对照组比较：*p<0.05，***p<0.001。
3.2茯苓皮三萜对肾炎模型大鼠尿素氮、肌酐的影响
由表10结果可见：与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清肌酐和血浆尿素氮含量均显著升高(P＜0.001)，表明造模成功。与模型对照组比较，茯苓皮三萜高剂量组大鼠血清肌酐和血浆尿素氮均明显降低(P＜0.05)，表明茯苓皮三萜可以降低肾炎大鼠肌酐和尿素氮。
表10 茯苓皮三萜对肾炎模型大鼠尿素氮、肌酐的影响
与模型对照组比较:*p<0.05，***p<0.001。
实施例5 茯苓皮三萜滴丸的制备。
采用熔融法制备茯苓皮三萜滴丸：将茯苓皮三萜加入到熔融的基质中，搅拌均匀，滴入至装有冷凝剂的冷凝管中，即得。具体制备方法如下：
(1)称取60gPEG6000和7g吐温-80在90℃下水浴熔融，制成基质，加入30g实施例1中提取的茯苓皮三萜。
(2)以5cm为滴距，以温度为20℃的二甲基硅油为冷凝剂，冷却柱高度为65cm，以25粒/min的速度，滴制获得滴丸。
所制滴丸为近圆形，比较圆整，无拖尾、无粘连，硬度良好。丸重差异及崩散时限符合中国药典关于滴丸剂的规定。
实施例6 茯苓皮三萜分散片的制备。
称取前各原料过150目筛，按照下列配方称取各原料，混合均匀，加入压片机料斗，调整压片机压力，进行压片，获得茯苓皮三萜分散片。
茯苓皮三萜 30.0g；
交联羧甲基淀粉钠 2.3g；
交联聚维酮-XL 4.7g；
微粉硅胶 3.0g；
微晶纤维素 30.0g；
纤维素乳糖 30.0g。
所制分散片片重为0.5g±5％，硬度为100N；片重差异、脱落率、崩散时限、溶出度均符合中国药典关于分散片的规定。
实施例7 茯苓皮三萜注射乳剂的制备。
(1)称取2g茯苓皮三萜、12g大豆卵磷脂、4g油酸加入100g注射用大豆油，加热至60℃混合均匀成为油相；
(2)称取20g Pluronic F68、22g甘油加入840ml水混合均匀溶解成水相；
(3)将步骤(2)中水相在高速剪切下缓慢加入步骤(1)的油相中，然后高压匀质15次，0.45μm微膜过滤，充氮气，灭菌后得茯苓皮三萜注射乳剂。
制得的乳剂无破乳，常温储存90天后乳剂稳定。

Claims (2)

1.一种茯苓皮三萜在制备治疗肾病药物中的应用，其特征在于，所述茯苓皮三萜的主要有效成分为3β-羟基-羊毛甾-7，9(11)，24-三烯-21-酸和去氢依布里酸；所述3β-羟基-羊毛甾7，9(11)，24-三烯-21-酸和去氢依布里酸在茯苓皮三萜中总含量为50％w.t以上；
所述肾病为肾病综合征和肾炎；
所述茯苓皮三萜为茯苓皮的乙醇提取物，采用以下方法提取：
(1)将茯苓皮用质量分数为1.0-2.0％的盐酸冲洗，然后用水冲洗至中性，晾干；
(2)将步骤(1)处理过的茯苓皮用体积分数为70％的乙醇溶液回流提取2次，每次提取时间为0.5h，茯苓皮与乙醇溶液的用量为1∶10(g/ml)，合并提取液，提取液回收乙醇至干；
(3)将步骤(2)的干物质用水溶解成溶液，加入体积比为7∶1.5的正丁醇和乙酸乙酯的混合物萃取，正丁醇和乙酸乙酯的混合物的体积为水溶液的1.5-2倍，有机相回收溶剂至干，得粗品；
(4)粗品用100-120质量倍的乙醇溶解，配成溶液，所得溶液上中性氧化铝层析柱，中性氧化铝的质量为粗品的15-20倍，然后用乙醇和乙酸乙酯体积比为2∶5的混合物进行洗脱，乙醇和乙酸乙酯混合物的用量为氧化铝的2倍，收集洗脱液；
(5)向洗脱液中加入活性炭，活性炭用量为粗品质量的2-3％，加热至沸腾并保持30min，趁热过滤，用乙醇洗涤活性炭，合并滤液及洗液，浓缩至原体积的1/3，静置沉淀、过滤、干燥，得茯苓皮三萜。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述治疗肾病药物的剂型包括口服剂型和注射剂型。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1084395A (zh) * 1992-09-25 1994-03-30 关岩华 一种治疗肾炎药的生产方法
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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1084395A (zh) * 1992-09-25 1994-03-30 关岩华 一种治疗肾炎药的生产方法
CN101020040A (zh) * 2007-03-19 2007-08-22 殷彬 一种治疗肝肾综合症的中药
CN101361954A (zh) * 2008-09-28 2009-02-11 韩俊杰 一种治疗老年肾炎的中药配方
CN105617051A (zh) * 2014-10-29 2016-06-01 蒋才维 治疗急性肾炎的中药

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