BRPI0613731A2

BRPI0613731A2 - composição farmacêutica, recipiente enchido previamente, bem como uso de um açúcar para aprimorar a recuperação e/ou aumentar a atividade biológica de um membro da superfamìlia tgf-beta

Info

Publication number: BRPI0613731A2
Application number: BRPI0613731-8A
Authority: BR
Inventors: Mark Ferguson; Sharon O'kane; Hugh Laverty; Nick Occleston; Jane Kelly; Wayne Burrill
Original assignee: Renovo Ltd
Priority date: 2005-07-12
Filing date: 2006-07-12
Publication date: 2011-02-01
Also published as: IL188352A0; JP2009501200A; KR20080031394A; US7691816B2; WO2007007095A2; CA2614754A1; WO2007007095A3; US20080176799A1; AU2006268088B2; EP1915169A2; AU2006268088A1

Abstract

COMPOSIçãO FARMACêUTICA, RECIPIENTE ENCHIDO PREVIAMENTE, BEM COMO USO DE UM AçúCAR PARA APRIMORAR A RECUPERAçãO E/OU AUMENTAR A ATIVIDADE BIOLóGICA DE UM MEMBRO DA SUPERFAMìLIA TGF-BETA. A presente invenção refere-se com posições farmacêuticas compreendendo membros da superfamília TGF-<225> e açúcares, as composições permitem melhorar a recuperação e/ou aumentar a atividade biológica do TGF-<225> incorporado nas mesmas. A invenção também refere-se a usos de açúcares para melhorar a recuperação ou aumentar a atividade biológica de membros da superfamília TGF-<225> em uma composição farmacêutica. Também são descritos usos das composições farmacêuticas, particularmente com referência a cura de ferida e fibrose. Além disso, a invenção descreve medicamentos para a prevenção ou redução de dor de injeção.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, RECIPIENTE ENCHIDO PREVIAMENTE, BEM COMOUSO DE UM AÇÚCAR PARA APRIMORAR A RECUPERAÇÃO E/OUAUMENTAR A ATIVIDADE BIOLÓGICA DE UM MEMBRO DA SUPERFAMÍLIATG F-BETA".

A presente invenção refere-se a composições farmacêuticascompreendendo membros da superfamília TGF-β. Particularmente, ainvenção proporciona composições farmacêuticas aprimoradas compreen-dendo membros da superfamília TGF-β, em que as composiçõesproporcionam recuperação aprimorada dos membros da superfamília TGF-βe/ou atividade biológica aprimorada dos membros da superfamília TGF-βincorporados nas composições. A invenção também proporciona métodosutilizando as composições farmacêuticas referidas. Além disso, a invençãotambém proporciona medicamentos para a prevenção ou redução da dor de injeção.

Os Fatores de Crescimento Transformantes-Betas (TGF^s)representam uma família de citocinas tendo diversas atividades biológicas.

Os TGF-βε pertencem a um grupo mais amplo de citocinas relacionadasconhecidas como a superfamília TGF-β. Membros da superfamília TGF-βincluem activinas, proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs), hormônio anti-Mallerian (AMH), subfamília de fator neurotrófico derivado da linhagem decélulas gliais (GDNF) e a subfamília de fator crescimento diferenciação(GDF). Os membros da superfamília TGF-β compartilham similaridadesestruturais, tais como um motivo de nó de cisteína comum, bem comocaminhos de transdução de sinalização comuns. Exemplos ilustrativos demembros da superfamília TGF- são mostrados na Figura 1.

As atividades biológicas de membros da TGF-β superfamília têmutilidade em muitos contextos terapêuticos diferentes, e por conseguinte hámuito interesse na aplicação farmacêutica de membros da superfamíliaTGF-β.

TGF-βτ, TGF^2 e TGF^3 são conhecidos por desempenharemfunções cruciais na regulação da reação de cura de ferida, enquanto aosteoindução modulada por BMPs é útil na aplicação terapêutica deformação, cura e remodelagem óssea.TGF-βι tem usos na prevenção e/ou no tratamento deescleroderma, distúrbios de angiogênese, doença renal, osteoporose,doença dos ossos, glomerulonefrite e doença renal.

TGF-P2 pode ser usado no tratamento de glioma, câncerpulmonar de células não-pequenas, tumor do pâncreas, tumores sólidos,tumor do cólon, tumor de ovário, degeneração macular relacionada com aidade, lesão ocular, osteoporose, retinopatia, úlceras, carcinoma, inflamaçãoda boca e escleroderma.

TGF-p3 pode ser usado no tratamento de distúrbios fibróticos,escleroderma, distúrbios de angiogênese, restenose, adesões,endometriose, doença isquêmica, indução óssea e cartilaginosa, fertilizaçãoin vitro, mucosite oral, doença renal, prevenção, redução ou inibição decicatrização, reforço de reconexão neuronal no sistema nervoso central eperiférico, prevenção, redução ou inibição de complicações de cirurgia ocular(tal como cirurgia de LASIK ou PRK).

Muitos outros membros da superfamília TGF-β também sãoconhecidos por terem aplicações terapêuticas. Por exemplo, foi sugerido queo fator neurotrófico derivado da linhagem de células gliais (GDNF) é útil notratamento de muitas doenças neurodegenerativas e neurológicas (tais comodoença de Parkinson, doença neuronal motora, doença de Alzheimer, ecorea de Huntington) bem como na cura de feridas, no tratamento de tecidocicatricial e em aplicações oculares no tratamento de tecido comeal e de doença corneal.

Artemina (a qual também é conhecida como neublastina ouenovina) é adequada para uso na prevenção e/ou no tratamento de doençaneurodegenerativa, dor neuropática e neuropatia.

Neurturina tem aplicações terapêuticas na doença de Parkinsone em outras doenças neurológicas.

Acredita-se que a persefina tenha utilidade terapêutica notratamento de condições tais como inflamação, esclerose múltipla,neoplasma, cura de feridas e outras lesões, síndrome da imunodeficiênciaadquirida (AIDS), infecções bacterianas, virais e diversas, deficiência imune,doença de Alzheimer, corea de Huntington, doença de Parkinson, isquemiacerebrovascular, e doenças degenerativas.BMP 15 (também conhecido como Fator de Diferenciação doCrescimento 9B) é útil no tratamento da infertilidade feminina, na contracep-ção, bem como em casos de lesão óssea e na cura de feridas.

O membro da superfamília GDF9 tem utilidade terapêutica notratamento da infertilidade feminina.

Nodal pode ser usado no tratamento de doença muscular, oste-oporose, osteoartrite, cura de feridas, doença periodontal e doença do tecidoconjuntivo.

BMP3 tem usos médicos nos campos de lesão óssea, osteopo-rose, cura de feridas, lesão do sistema nervoso, doença neurodegenerativa,doença de Parkinson, doença cerebrovascular e doença renal. BMP3b podeser usado no tratamento de complicações do parto.

BMP-5 pode ser usado para tratar muitas das mesmas indica-ções de BMP-3, bem como osteoporose, doença do tecido conjuntivo, lesãoinclusive cura de feridas, doença dos ossos, doença dental, osteoartrite, do-ença periodontal, isquemia cerebrovascular, insuficiência renal e lesão cerebral.

GDF-5 (também conhecido como fator morfogenético derivadode cartilagem) pode ser usado no tratamento de artrite, artropatia, e neo-plasma.

BMP10 pode ser usado para tratar osteoporose, cura de feridas,úlcera, doença periodontal, doença dos ossos, queimaduras, doença do te-cido conjuntivo, tumor ósseo, lesão óssea e neoplasma.

BMP-8 (também conhecido como proteína osteogênica 2) podeser usado no tratamento de doença dos ossos.

BMP-6 has aplicações terapêuticas no tratamento de isquemiacerebrovascular e câncer.

BMP-7 pode ser usado no tratamento de doença renal, calcifi-cação, doença dental, doença neuronal motora, doença de Parkinson, doen-ça periodontal, doenças ósseas, isquemia cerebrovascular, falência renal,lesão cerebral, tecido cicatricial, doença musculoesquelética, e osteoporose.

BMP-2 pode ser usado para tratar osteoporose, doenças ósseasinclusive doenças musculosqueléticas e doença periodontal.

BMP-4 pode ser usado no tratamento de doenças renais.

GDF-3 tem usos terapêuticos no tratamento de distúrbios imu-nes, ao passo que GDF-1 pode ser usado no tratamento de lesões do siste-ma nervoso, esclerose múltipla e doenças neurológicas.

GDF-8 (também conhecido como miostatina) pode ser usado naprevenção e/ou no tratamento de doença de debilitação muscular e diabetesnão-insulino dependente.

A família de proteínas inibina pode ser usada para tratar infertili-dade, doença hematológica, anemia, carcinoma, leucemia e hiperfosfatemiae cânceres, bem como em contracepção.

Activina tem usos terapêuticos nos campos do escleroderma,distúrbios de angiogênese, cicatrização e fibrose, restenose, adesões, en-dometriose, doença isquêmica, indução óssea e cartilagionosa, fertilização invitro, mucosite oral e cura de feridas.

GDF-15 pode ser usado para tratar doença de Parkinson, doen-ça de Alzheimer, escquizofrenia, isquemia cerebrovascular, demência, dis-túrbios imunes e neoplasma.

Fator inibitório Mülleriano (MIF), o qual também é conhecidocomo hormônio anti-Mülleriano ou MIS, pode ser usado nos campos de cân-cer incluindo metástase, leucemia linfóide, tumor de próstata, tumor do colouterino, tumor de mama, tumor ocular, tumor de ovário, doença endócrina,hemangioma, endometriose, inflamação, melanoma, neoplasma, carcinoma,tumor de pele, tumor do trato genital feminino, doença do sistema genitalmasculino, disfunção eretil e síndrome da angústia respiratória.

Ebaf (também conhecido como Lefty) pode ser usado no trata-mento de doença capilar incluindo alopecia, escleroderma, fibrose, distrofiamuscular, neoplasma, doença autoimune, tratamento de tecido cicatricial,cirrose, fibrose pulmonar, melanoma e carcinoma.

Apesar da necessidade bem-reconhecida das composições far-macêuticas compreendendo membros da superfamília TGF-β há muitos pro-blemas reconhecidos associados com as composições atualmente existen-tes. Entre estes problemas estão a incapacidade comum para recuperar umaproporção de um membro da superfamília TGF-β incorporado em uma dadacomposição (um problema o qual pode surgir como um resultado da adsor-ção do membro da superfamília TGF-β ao material de um recipiente no quala composição é armazenado), e uma redução com o tempo geralmente ob-servada da atividade biológica de membros da superfamília TGF-β incorpo-rados e armazenados nas composições. Isto também tem importantes impli-cações na fabricação de qualquer terapêutico de membros da superfamíliaTGF-β.

É um objetivo da presente invenção prevenir ou mitigar no mí-nimo parte dos problemas associados com as composições farmacêuticasda técnica anterior compreendendo membros da superfamília TGF-β.

De acordo com a presente invenção é proporcionada uma com-posição farmacêutica compreendendo um membro da superfamília TGF-β eum açúcar proporcionado em concentração suficiente para permitir aprimo-rada recuperação e/ou aumento da atividade biológica do membro da super-família TGF-β.

A presente invenção também proporciona uso de um açúcar pa-ra melhorar a recuperação e/ou aumentar a atividade biológica de um TGF-βmembro da superfamília incorporado em uma composição farmacêutica. Se-rá reconhecido que o aumento na atividade biológica pode ser avaliado de-pois de recuperação do TGF-β da composição. Preferencialmente a quanti-dade de um membro da superfamília TGF-β recuperado da composição far-macêutica pode ser aumentada, e este membro da superfamília TGF-β re-cuperado pode ter aumento da atividade biológica. Açúcares adequados emembros da superfamília TGF-β (e concentrações tanto de açúcares quantode membros da superfamília) para uso de acordo com este aspecto da in-venção podem ser selecionados com base em quaisquer das consideraçõesdeterminados alhures neste relatório descritivo com referência a quaisquerdos aspectos ou modalidades da invenção. Em particular TGF^3 pode serum membro da superfamília adequado, e maltose pode ser um açúcar prefe-rencial. A combinação de maltose e TGF^3 pode ser particularmente prefe-rencial.

Preferencialmente um TGF-β membro da superfamília incorpo-rado em uma composição farmacêutica de acordo com a invenção apresen-tará aumento da atividade biológica (isto é, a atividade biológica exibida porum membro da superfamília TGF-β incorporado em uma composição farma-cêutica da invenção será maior do que para a mesma quantidade do mesmomembro da superfamília incorporado em uma composição da técnica anteri-or).

Ainda mais preferencialmente uma composição farmacêutica dainvenção deve possibilitar aprimorada recuperação de um membro da super-família TGF-β que tenha sido incorporado, e o membro da superfamília a-presentará adicionalmente aumento da atividade biológica.

Os inventores descobriram que os efeitos benéficos conferidospelas composições farmacêuticas de acordo com a invenção podem ser ob-tidos usando qualquer açúcar testado até o momento. No entanto, pode serpreferencial que as composições farmacêuticas de acordo com a invençãocompreendem um açúcar selecionado entre o grupo compreendendo malto-se, sacarose glicose e manose. Mais preferencialmente o açúcar utilizadoem composições farmacêuticas de acordo com a invenção pode ser selecio-nado entre o grupo compreendendo maltose e sacarose, e ainda mais prefe-rencialmente o açúcar é maltose.

Para a evitação de dúvida, termos como "composições farma-cêuticas da invenção" (ou semelhantes) são pretendidos para englobar nãosomente composições conforme definido no primeiro, no terceiro e no quartoaspectos da invenção, mas também composições farmacêuticas fabricadasde acordo com os usos da invenção.

A presente invenção se baseia na descoberta dos inventores deque composições farmacêuticas compreendendo membros da superfamíliaTGF-β na presença de açúcares adequados, ou concentrações adequadasde açúcares, proporcionam uma série de vantagens surpreendentes quandocomparadas com composições farmacêuticas conhecidas da técnica anteri-or. Estas vantagens incluem um aumento de duas a cinco vezes na recupe-ração de membros da superfamília TGF-β a partir de composições farma-cêuticas da invenção, bem como um aumento de quatro vezes na atividadebiológica de membros da superfamília TGF-β incorporados em semelhantescomposições.

Em uma modalidade preferencial da invenção é proporcionadauma composição farmacêutica compreendendo um membro da superfamíliaTGF-β e um açúcar, o açúcar estando presente em uma concentração demais de 50 mg/ml, para uso como um medicamento. Uma composição deacordo com a invenção pode compreender um açúcar proporcionado emuma concentração de entre 51 e 200 mg/ml, preferencialmente em uma con-centração de entre 60 e 150 mg/ml, mais preferencialmente em uma concen-tração de entre 70 e 100 mg/ml, ainda mais preferencialmente em uma con-centração de entre 80 e 95 mg/ml, e o mais preferencialmente em uma con-centração de entre 85 a 90 mg/ml.

Em uma modalidade adicionalmente preferencial da invenção éproporcionada uma composição farmacêutica compreendendo um membroda superfamília TGF-β e um açúcar selecionado entre o grupo compreen-dendo glicose e manose, para uso como um medicamento.

Previamente, a técnica anterior sugeriu que o álcool de açúcarmarmitol representa um excipiente preferencial para uso em composiçõesfarmacêuticas compreendendo membros da superfamília TGF-β. Os invento-res descobriram que composições farmacêuticas de acordo com a presenteinvenção proporcionam vantagens e efeitos benéficos mesmo quando com-paradas com estas composições preferenciais da técnica anterior. Na verda-de, as composições da invenção surpreendentemente eficazes possibilitamrecuperação duas a cinco vezes aumentada de um membro da superfamíliaTGF-β incorporado comparadas com as formulações referidas à base demanitol, bem como um aumento na atividade biológica de até quatro vezes.

As composições de acordo com a invenção proporcionam bene-fícios acima da técnica anterior tanto em termos da aprimorada recuperaçãode membros da superfamília TGF-β quanto da aumentada atividade biológi-ca inerente de membros da superfamília TGF-β incorporados em semelhan-tes composições. A técnica anterior não contém indicação de que açúcarespodem ser usados para o grande efeito referido, e com certeza não contémsugestão de que o uso de composições compreendendo açúcares em umaconcentração de mais de 50 mg/ml proporcionam quaisquer das vantagensidentificadas pelos inventores.

A aumentada recuperação de membros da superfamília TGF-βincorporados em composições de acordo com a invenção confere muitasvantagens importantes em relação às composições conhecidas reveladaspreviamente na técnica anterior. Não há nada na técnica anterior para suge-rir que açúcares selecionados entre o grupo compreendendo glicose e ma-nose podem proporcionar estas vantagens identificadas pelos presentes in-ventores.

A pessoa versada reconhecerá que há certos contextos nosquais derivados, variantes e sais de açúcares farmaceuticamente aceitáveisadequados também podem ser usados nas composições farmacêuticas dainvenção. Derivados, variantes ou sais adequados podem ser os de um açú-car selecionado entre o grupo compreendendo maltose, sacarose glicose emanose, e em particular os à base de açúcares selecionados entre o grupocompreendendo maltose e sacarose (mais preferencialmente no açúcar mal-tose). No entanto, os inventores acreditam que os benefícios identificadossão o mais mais prontamente conferidos por uso dos próprios açúcares. Istoestá em contraste com, e deve ser diferenciado de, o uso sugerido na técni-ca anterior de agentes tais como álcoois de açúcares. Acompanhando estasvantagens será reconhecido que álcoois de açúcares não devem ser usadosde acordo com a presente invenção.

Os inventores descobriram que as composições farmacêuticasde acordo com a invenção são adequadas para uso com qualquer membroda superfamília TGF-β. Por conseguinte, exceto por onde o contexto requerde modo diverso, referências a TGF-β ou TGF-βε podem ser tomadas paraenglobar referência a qualquer membro da superfamília TGF-β. Será reco-nhecido que tais referências devem ser tomadas para englobar todos osmembros conhecidos da superfamília, e no mínimo todos os membros dasuperfamília TGF-β determinados na Figura 1. Preferencialmente o membroda superfamília TGF-β incorporado em composições farmacêuticas de acor-do com a presente invenção pode ser selecionado entre o grupo compreen-dendo TGF-βι, TGF^2 eTGF^3 (correspondente às Seqüências IDs No.s 1,2 e 3 respectivamente conforme mostrado na Figura 2). Ainda mais prefe-rencialmente o membro da superfamília TGF-β é TGF^3.

A pessoa versada reconhecerá adicionalmente que as composi-ções farmacêuticas da invenção podem incorporar mais de um membro dasuperfamília TGF-β. As composições referidas incorporando múltiplos mem-bros da superfamília TGF-β podem ser preferenciais em contextos onde sedeseja tirar vantagem de combinações de membros da superfamília TGF-βtendo uma interação aditiva ou sinérgica em seus efeitos terapêuticos oubiológicos combinados. Por conseguinte, exceto por onde o contexto requerde modo diverso, referências a um membro da superfamília TGF-β, e parti-cularmente um membro da superfamília TGF-β incorporado em uma compo-sição farmacêutica da invenção, devem ser tomadas também para englobarcomposições incorporando dois ou mais membros da superfamília TGF-β.

É de conhecimento geral daqueles versados na técnica que pro-teínas tais como membros da superfamília TGF-β têm uma tendência parainteragir, particularmente com componentes hidrofóbicos de uma composi-ção ou recipiente de armazenamento, de tal modo que não estejam disponí-veis para exercer suas atividades biológicas ou terapêuticas na administra-ção de uma composição na qual eles são incorporados. Este problema éexacerbado no armazenamento de composições contendo da superfamíliaTGF-β membros. O armazenamento de tais composições aumenta a inaces-sibilidade do membro da superfamília TGF-β incorporado deste modo. Acre-dita-se que a incidência de ligação das moléculas do membro da superfamí-lia TGF-β dentro da composição, bem como a componentes de um recipien-te no qual a composição é armazenada, aumenta com o tempo de armaze-namento. A ligação das moléculas do membro da superfamília TGF-β, querdentro da própria composição ou a outros substratos (tais como recipientesde armazernamento), resulta em uma falta de disponibilidade das moléculasligadas para obter sua atividade biológica e/ou terapêutica. Depois de pro-longado armazernamento a redução na atividade biológica e/ou terapêuticadisponíveis do membro da superfamília TGF-β incorporado pode se tornartão acentuada que a composição é tornada biologicamente e/ou terapeuti-camente ineficaz.

Em comparação com composições farmacêuticas conhecidas,tais como aquelas usando manitol como um excipiente, composições farma-cêuticas de acordo com a presente invenção possibilitam a recuperação deuma proporção significativamente maior da quantidade total do membro dasuperfamília TGF-β incorporado originalmente em uma composição farma-cêutica. Para os presentes fins, "recuperação" de um membro da superfamí-lia TGF-β a partir de uma composição pode ser tomada para se referir à pro-porção do membro da superfamília TGF-β incorporado na composição queestá disponível para exercer uma atividade terapêutica e/ou biológica naadministração da composição. Um modelo pelo qual a recuperação de ummembro da superfamília TGF-β a partir de uma composição farmacêutica deinteresse (quer uma composição da técnica anterior ou uma composição dainvenção) pode ser investigada é descrito na seção de Resultados Experi-mentais abaixo. Será reconhecido que, embora o principal benefício de au-mento da recuperação se situe no aumento da atividade biológica que po-dem ser exercida, ao avaliar a recuperação o método usado não precisamedir a atividade biológica. Métodos adequados podem, ao invés, se basearem indicações químicas ou físicas quanto à quantidade de um membro dasuperfamília TGF-β recuperado (por exemplo, o peso recuperável).

Conforme mencionado acima, os inventores descobriram quecomposições farmacêuticas de acordo com a presente invenção possibilitamum aumento de duas a cinco vezes na recuperação de membros da super-família TGF-β1 incorporados quando comparados com composições à basede manitol. Os resultados referidos podem ser obtidos usando composiçõesutilizando açúcares em uma concentração de mais de 50 mg/ml. Tipicamen-te composições farmacêuticas usando sacarose ou manose possibilitam umaumento de duas a três ou mais vezes em membros da superfamília TGF-βrecuperáveis comparadas com a técnica anterior. O aumento da recupera-ção obtido usando manose comparada com manitol salienta os benefícios deusar açúcares ao contrário de álcoois de açúcares.

Em conseqüência de sua capacidade para permitir aprimoradarecuperação de membros da superfamília TGF-β incorporados nas composi-ções, as composições farmacêuticas de acordo com a presente invençãoconferem acentuadas vantagens comparadas com composições da técnicaanterior. Será reconhecido que, de modo a ser capaz de recuperar umaquantidade terapeuticamente eficaz de um membro da superfamília TGF-βna administração de uma composição da técnica anterior, é necessário in-corporar na composição uma maior quantidade do membro da superfamíliaTGF-β do que a quantidade terapeuticamente eficaz que se deseja recuperar(uma vez que uma certa proporção da quantidade total do membro da super-família TGF-β incorporada na composição da técnica anterior será tornadairrecuperável, por exemplo, através de ligação com a composição ou ao re-cipiente de armazenamento). Por conseguinte, a composição da técnica an-terior deve ser fabricada de tal modo que incorpore uma quantidade totalequivalente à soma de:

i) a quantidade terapeuticamente eficaz do membro da superfamí-lia TGF-β; e

ii) a quantidade do membro da superfamília TGF-β que será torna-da irrecuperável.

Como as composições farmacêuticas da invenção possibilitammaior recuperação de membros da superfamília TGF-β incorporados, podeser relativamente reduzida a quantidade total do membro da superfamíliaTGF-β que deve ser incorporada em semelhantes composições na fab rica-ção (de modo a permitir a recuperação da quantidade terapeuticamente efi-caz desejada do membro da superfamília TGF-β). Será reconhecido que acapacidade para obter um efeito terapêutico desejado por uso de uma com-posição farmacêutica incorporando uma quantidade relativamente menor deum membro da superfamília TGF-β proporciona consideráveis vantagenscomerciais em relação à técnica anterior.Apesar do progresso possibilitando crescente eficiência e efetivi-dade de custo na fabricação de proteínas terapeuticamenrte úteis tais comomembros da superfamília TGF-β, estas proteínas biologicamente e terapeu-ticamenrte ativas permanecem relativamente caras de produzir e são tipica-mente os componentes mais cartos de composições farmacêuticas nasquais são incorporados. Em contraste, os açúcares representam compostosrelativamente baratos para serem usados em composições farmacêuticas.Será reconhecido que as composições da invenção, nas quais a quantidadede um membro da superfamília TGF-β recuperável da composição é aumen-tada por meio da incorporação na composição de açúcares relativamentebaratos, proporcionam consideráveis benefícios econômicos em relação àscomposições conhecidas na técnica anterior.

A aumentada recuperação de membros da superfamília TGF-βincorporados em composições farmacêuticas de acordo com a invençãotambém significa que as composições referidas têm "vida de prateleira" au-mentada comparadas com as composições conhecidas. Será reconhecidoque a capacidade para recuperar uma maior proporção de um membro dasuperfamília TGF-β a partir de uma composição da invenção que tenha sidoarmazenada significa que as composições de acordo com a presente inven-ção podem ser usadas por um período mais longo depois de sua fabricaçãodo que é o caso com as composições da técnica anterior. Por exemplo, atendência de membros da superfamília TGF-β incorporados em composi-ções da técnica anterior de se tornarem irrecuperáveis das composições de-pois de um período de armazenamento prolongado é dramaticamente redu-zida quando se usa as composições da presente invenção. Este aumento davida de prateleira é adicionalmente aumentado pelo notável aumento na ati-vidade biológica inerente de membros da superfamília TGF-β incorporadosem composições da invenção discutidas abaixo.

Além da aprimorada recuperação de membros da superfamíliaTGF-β a partir de composições farmacêuticas de acordo com a presente in-venção, os inventores descobriram surpreendentemente que as composi-ções farmacêuticas de acordo com a invenção também são capazes de au-mentar beneficamente a atividade biológica inerente de membros da super-família TGF-β incorporados nas mesmas.

A atividade biológica inerente de um membro da superfamíliaTGF-β incorporado em algumas composições farmacêuticas da invençãopode ser medida, por exemplo, com referência à capacidade do membro dasuperfamília TGF-β para inibir a proliferação de células epiteliais de pulmãode mink (MLECs). Um modelo pelo qual a atividade biológica inerente de ummembro da superfamília TGF-β incorporado em uma composição de interes-se pode ser determinada é apresentado na seção de Resultados Experimen-tais abaixo.

Alternativamente, a atividade biológica inerente a ser avaliadapode ser uma atividade que é específica para o membro da superfamíliaTGF-β em questão. Por exemplo, no caso de composições farmacêuticas dainvenção incorporando o membro da superfamília TGF-β preferencial, TGF-β3, a atividade biológica inerente pode ser a capacidade para reduzir e/ouinibir cicatrização ou fibrose.

Os inventores descobriram que membros da superfamília TGF-βincorporados em composições farmacêuticas de acordo com a presente in-venção apresentam até cinco vezes a atividade biológica demonstrada pormembros da superfamília TGF-β incorporados em composições da técnicaanterior. Este acentuado aumento na atividade biológica de membros da su-perfamília TGF-β incorporados em composições farmacêuticas da invençãorepresenta uma surpreendente e importante vantagem destas composições.

Na verdade, não há nada na técnica anterior que sugira que as composiçõesfarmacêuticas de acordo com a presente invenção devem ser capazes deaumentar a atividade biológica de membros da superfamília TGF-β incorpo-rados nas mesmas.

Será prontamente reconhecido que a aprimorada atividade bio-lógica exibida por membros da superfamília TGF-β incorporados em compo-sições farmacêuticas de acordo com a invenção será particularmente vanta-josa em contextos nos quais é desejável utilizar a atividade biológica demembros da superfamília TGF-β terapeuticamente. Como quase todas asaplicações terapêuticas dos membros da superfamília TGF-β se baseiam naatividade biológica do membro da superfamília, o aumento da atividade bio-lógica de membros da superfamília TGF-β incorporados em composições deacordo com a invenção corresponde diretamente a um aumento na atividadeterapêutica.

Há muitos contextos terapêuticos nos quais é de conhecimentocomo empregar composições farmacêuticas incorporado membros da super-família TGF-β. Exemplos de semelhantes contextos incluem o tratamento decura de ferida; a prevenção e/ou o tratamento de cicatrização; a prevençãoe/ou o tratamento de fibrose; a aceleração de cura de ferida; a promoção deregeneração epitelial; a inibição de cicatrização e/ou fibrose; e aplicaçõesterapêuticas de osteoindução (por exemplo, osteoindução na construçãoóssea; cura; e/ou remodelagem) e nos outros contextos terapêuticos descri-tos na introdução.

Os inventores descobriram que composições farmacêuticas deacordo com a presente invenção são particularmente adequadas para usono contexto de cura de ferida e/ou fibrose. Composições farmacêuticas deacordo com a invenção são adequadas para uso na promoção de cura deferida com reduzida cicatrização; na prevenção e/ou o tratamento de fibrose;na inibição de cicatrização e/ou fibrose; na aceleração de cura de ferida; ena promoção de regeneração epitelial. Por conseguinte será reconhecidoque composições farmacêuticas de acordo com a presente invenção podemser usadas na preparação de medicamentos para:

i) a promoção de cura de ferida com reduzida cicatrização; e/ou

ii) a prevenção e/ou o tratamento de fibrose; e/ou

iii) a inibição de cicatrização e/ou fibrose; e/ou

iv) a aceleração da cura de ferida; e/ou

v) a promoção de regeneração epitelial.

Será reconhecido que os benefícios em termos de aprimoradarecuperação de membros da superfamília TGF-β a partir das composiçõesda invenção e o aumento da atividade biológica de membros da superfamíliaTGF-β incorporados em semelhantes composições podem ser (em no mini-mo alguma extensão) separados uns dos outros de acordo com a maneirana qual as composições farmacêuticas são formuladas. Em outras palavras,podem ser produzidas composições de acordo com a presente invenção nasquais:

i) a composição proporciona os benefícios tanto de aprimoradarecuperação do membro da superfamília TGF-β incorporado na mesma,quanto aumento da atividade biológica do membro da superfamília TGF-β;ou

ii) a composição proporciona os benefícios de aprimorada recupera-ção do membro da superfamília TGF-β incorporado na mesma, mas não deaumento da atividade biológica; ou

iii) a composição não proporciona aprimorada recuperação do mem-bro da superfamília TGF-β, mas proporciona aumento da atividade biológicado mesmo.

Exemplos ilustrando estas várias opções são proporcionadosabaixo.

Por exemplo, composições de acordo com o primeiro aspectoda invenção pode compreender preferencialmente um membro da superfa-mília TGF-β e um açúcar em uma concentração eficaz (por exemplo, maiordo que 50 mg/ml) tanto durante armazenamento da composição, para ospresentes fins tomado englobando o tempo que ocorre entre a fabricação dacomposição e seu uso eventual, quanto também na ocasião na qual a com-posição é administrada. As composições referidas de acordo com este as-pecto da invenção se beneficiam das vantagens de aprimorada recuperaçãodo membro da superfamília TGF-β durante e depois de armazenamento, etambém de aumento da atividade biológica do membro da superfamília TGF-β quando administrado.

Será reconhecido que composições de acordo com a presenteinvenção também englobam as composições nas quais o açúcar está pre-sente em uma concentração eficaz (por exemplo, maior do que 50 mg/ml)durante o armazenamento, mas em que o açúcar está presente em umamenor concentração por ocasião da administração. Um exemplo típico deuma situação semelhante é aquela na qual a composição é diluída antes desua administração. Embora composições de acordo com esta modalidade dainvenção do não compreendam um açúcar em uma concentração eficaz (porexemplo, maior do que 50 mg/ml) por ocasião da administração da composi-ção, as composições ainda se beneficiam da aumentada recuperação domembro da superfamília TGF-β depois do armazenamento, e também doaumento da atividade biológica do membro da superfamília TGF-β por oca-sião de sua recuperação.

Em uma modalidade adicional de composições de acordo com apresente invenção, a concentração eficaz (por exemplo, maior do que 50mg/ml) do açúcar somente pode ser estabelecida relativamente logo antesda composição ser administrada. Um exemplo típico de uma composição deacordo com esta modalidade pode ser aquela na qual um solvente é adicio-nado a uma composição "seca" de modo diverso antes da administraçãopara produzir uma composição na qual o açúcar tem a concentração eficazrequerida (por exemplo, maior do que 50 mg/ml). Composições de acordocom esta modalidade da invenção proporcionam membros da superfamíliaTGF-β tendo atividade biológica surpreendentemente elevada (comparadascom composições da teécnica anterior) no sítio no qual são administradas.

Os problemas associados com a recuperação de membros da superfamíliaTGF-β depois de armazenamento associado com as composições da técnicaanterior podem ser prevenidos pelo armazenamento da composição em umestado seco relativamente inerte.

Na verdade, esta modalidade da invenção é tão vantajosa que,de acordo com um terceiro aspecto da invenção, é proporcionada uma com-posição solúvel farmacêutica compreendendo membro da superfamília TGF-β e um açúcar, em que o açúcar é proporcionado em uma proporção tal que,na dissolução da composição para obter uma solução fisiológica, o açúcar éproporcionado em concentração suficiente para permitir aprimorada recupe-ração e/ou aumento da atividade biológica do membro da superfamília TGF-β. Preferencialmente o açúcar é proporcionado em uma proporção tal que,na dissolução da composição para obter uma solução fisiológica a concen-tração do açúcar é maior do que 50 mg/ml. Preferencialmente o açúcar podeser maltose.

Preferencialmente uma composição farmacêutica de acordocom este terceiro aspecto da invenção pode ser uma composição farmacêu-tica hidrossolúvel. Uma solução fisiológica de acordo com este terceiro as-pecto da invenção pode ser uma solução tendo concentração fisiológica ouosmolaridade. Por exemplo, uma composição solúvel farmacêutica de acor-do com este aspecto da invenção adequada para injeção em mamíferos po-de, na dissolução da composição, obter uma osmolaridade de aproximada-mente 290 miliosmolar (osmol por litro). Será reconhecido que as composi-ções de acordo com este terceiro aspecto da invenção conferem todas asvantagens relativas a aumento da atividade biológica do membro da super-família TGF-β incorporados na mesma que são encontrados em composi-ções de acordo com o primeiro e o segundo aspectos da invenção. Por con-seguinte, composições de acordo com este terceiro aspecto da invenção sãoadequadas para todos os usos médicos e/ou terapêuticos descritos acimaem relação a composições de acordo com o primeiro e o segundo aspectosda invenção.

Um dos fatores determinantes se ou não uma composição éconsiderada adequada para injeção segura em mamíferos tais como sereshumanos é a concentração de íons sódio presentes na composição por oca-sião da administração. Por conseguinte, em um quatro aspecto da invenção,é proporcionada uma composição solúvel farmacêutica compreendendo ummembro da superfamília TGF-β, uma fonte de íons sódio, e um açúcar, asquantidades da fonte de íons sódio e do açúcar sendo tais que na dissoluçãoda composição para produzir uma concentração de sódio de entre 130 e 160mEq/L, a concentração do açúcar é suficiente para permitir aprimorada re-cuperação e/ou aumento da atividade biológica do membro da superfamíliaTGF-β. Preferencialmente, as quantidades da fonte de íons sódio e do açú-car são tais que na dissolução da composição para produzir uma concentra-ção de sódio de entre 130 e 160 mEq/L a concentração do açúcar é maiordo que 50 mg/ml. Preferencialmente o açúcar pode ser maltose. Fontes deíons sódio adequadas para uso em composições farmacêuticas injetáveisserão de conhecimento geral das pessoas versadas na técnica. Preferenci-almente composições de acordo com este quatro aspecto da invenção po-dem ser composições hidrossolúveis. Será adicionalmente reconhecido queestas composições do quatro aspecto da invenção também podem ser em-pregadas de acordo com os usos médicos e/ou terapêuticos descritos acima.

Além do uso de composições farmacêuticas de acordo com ainvenção em aplicações terapêuticas, a pessoa versada também reconhece-rá que o aumento da atividade biológica exibida por composições de acordocom a invenção também podem ser de benefício em contextos nos quais aatividade biológica de membros da superfamília TGF-β deve ser utilizadapara fins não terapêuticos. Tipicamente, os usos não terapêuticos referidosde membros da superfamília TGF-β podem se relacionar com seu uso parafins de pesquisa ou experimentais. Por conseguinte, a invenção tambémproporciona composições conforme mencionado no primeiro, no segundo ouno terceiro aspectos da invenção para uso diferente de como um medica-mento, e particularmente para uso de pesquisa e/ou experimental.

Os inventores descobriram que embora as vantagens conferidaspelas composições farmacêuticas de acordo com a presente invenção sejamtornadas disponíveis através de todas as formulações testadas, as composi-ções farmacêuticas da invenção são particularmente vantajosas quando ascomposições são formuladas para administração por injeção. Mais preferen-cialmente, as composições farmacêuticas de acordo com a invenção podemser formuladas para injeção intradérmica, ou podem ser formuladas parainjeção subcutânea. Formulações típicas adequadas para injeção intradér-mica e/ou injeção subcutânea serão de conhecimento geral daqueles versa-dos na técnica.

As composições farmacêuticas de acordo com a invenção ade-quadas para administração parenteral localizada (por exemplo, intradérmica,intramuscular ou subcutânea) e administração parenteral sistêmica (por e-xemplo, intravenosa e intra-arterial) podem ser preparadas misturando ummembro da superfamília TGF-β e açúcar (ambos tendo o grau desejado depureza) com veículos, excipientes ou estabilizantes fisiologicamente aceitá-veis opcionais sob a forma de formulações de pós Iiofilizados e não Iiofiliza-dos para reconstituição antes do uso, soluções aquosas e não-aquosas, eformulações semi-sólidas. Veículos aceitáveis, incluindo excipientes, sãonão-tóxicos para os receptores nas dosagens e concentrações empregadas,e incluem, mas não estão limitados a, tampões tais como fosfatos, citratos, eoutros ácidos orgânicos; antioxidantes incluindo ácido ascórbico e metionina;modificadores da tonicidade tais como cloreto de sódio, glicerol, e conser-vantes; preservantes tais como cloreto de octadecildimetilbenzil amônio; clo-reto de hexametônio; cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio; fenol,álcool butílico ou benzílico; alquil parabenos tais como metil e/ou propil e/oubutil parabeno; catecol; resorcinol; cicloexanol; 3-pentanol; e m-cresol); poli-peptídeos de baixo peso molecular (compreendendo menos de cerca de dezresíduos aminoácido); proteínas, tais como albumina sérica, gelatina, ou i-munoglobulinas; polímeros hidrofílicos tais como polivinilpirrolidona; aminoá-cidos tais como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina, ou lisina;carboidratos incluindo dextrinas; agentes quelantes tais como EDTA; contra-íons formadores de sais tais como sódio; complexos metálicos (por exemplo,complexos Zn-proteína); tensoativos aniônicos tais como sabões de ácidosgraxos, sulfatos de acila, sulfossuccinatos de acila; tensoativos catiônicos,tais como aminas primárias, secundárias, terciárias, ou quaternárias de al-quila; tensoativos não-iônicos, por exemplo, ésteres de sorbitano ou ésterespolietoxilados de ácidos de acila, copolímeros de óxido de polietileno e óxidode polipropileno.

A título de exemplo, uma composição farmacêutica da invençãosob a forma de uma solução estéril adequada para administração parenteral,pode incluir os seguintes constituintes além do membro da superfamíliaTGF-β e açúcar:

0,01 M a 0,1 M de tampão de fosfato, e

Cloreto de sódio até 0,9% em peso/vol (para obter iso-tonicidade com sangue, 290-300 mOsm/L), e

0,1 mg/ml de monooleato de sorbitano de polioxietileno (Twe-en™ 80).

Pode ser preparada uma "torta" de pó Iiofilizado (secado porcongelamento) da solução acima.

Uma composição farmacêutica semelhante de acordo com a in-venção pode ser apresentada sob a forma de um frasco, uma ampola, ouuma seringa enchida previamente de, ou; uma solução estéril, uma suspen-são estéril ou qualquer outra forma farmaceuticamente aceitável de apresen-tação conveniente para liberação de fármaco parenteral localizada.

A aprimorada recuperação e aumento da atividade biológica demembros da superfamília TGF-β incorporados em composições farmacêuti-cas de acordo com a invenção geralmente significa que podem ser usadascomo uma alternativa a abordagens existentes, tais como liofilização, usadapara aumentar a vidas de prateleira de composições contendo membros dasuperfamília TGF-β. Por conseguinte, geralmente pode ser preferencial queuma composição farmacêutica da invenção não seja liofilizada. No entanto,pode ser desejável que técnicas conhecidas, tais como liofilização, sejamusadas de acordo com as composições da invenção. Estas técnicas podemprolongar ainda mais a vida de prateleira das composições farmacêuticas dainvenção, e podem ser usadas para produzir, por exemplo, um pó Iiofilizadoestéril (secado por congelamento) adequado para reconstituição.

As composições farmacêuticas de acordo com a invenção po-dem ser formuladas para uso no olho (por exemplo, como gotas oculares),ou como instilados intraperitoneais.

Alternativamente, ou adicionalmente, composições farmacêuti-cas de acordo com a invenção podem ser formuladas para administraçãotópica. A administração tópica de composições farmacêuticas de acordo coma invenção pode ser particularmente preferencial no contexto de tratamentode seguimento para um sítio no qual o membro da superfamília TGF-β estáexercendo um efeito terapêutico.

As composições farmacêuticas da invenção adequadas paraadministração tópica (por exemplo, transdérmica/cutânea, ocular, ótica, na-sal, faringeana, bucal, retal, vaginal, uretral) podem ser preparadas mistu-rando um membro da superfamília TGF-β e um açúcar (ambos tendo o graudesejado de pureza) com veículos, excipientes ou estabilizantes fisiologica-mente aceitáveis opcionais sob a forma de formulações de póes Iiofilizadosou não-liofilizados, soluções aquosas ou não-aquosas, disper-sões/suspensões aquosas ou não-aquosas, incluindo emulsões e formula-ções semi-sólidas. Veículos aceitáveis, incluindo excipientes, são não-tóxicos para os receptores nas dosagens e concentrações empregadas, eincluem, mas não estão limitados a, água purificada, solução salina, soluçãosalina tamponada com fosfato (PBS) solução de Ringer, solução de Iactatode Ringer, soluções hidro-alcoólicas, polietileno glicol (PEG), propileno glicol(PG), fosfatos, acetatos, gelatina, colágenos, Carbopol 934TM (BF GoodrichCorp.), óleos e ceras vegetais e sintéticos, tensoativos aniônicos tais comosabões de ácidos graxos, sulfatos de acila, ou sulfossuccinatos de acila; ten-soativos catiônicos, tais como aminas primárias, secundárias, terciárias, ouquaternárias de alquila; tensoativos não-iônicos, por exemplo, ésteres desorbitano ou ésteres polietoxilados de ácidos de acila, copolímeros de oxidode polietileno e oxido de polipropileno, e semelhantes. Composições farma-cêuticas da invenção podem incluir adicionalmente conservantes, estabili-zantes, antioxidantes, antimicrobianos e agentes de tamponamento adequa-dos, por exemplo, metil e/ou propil e/ou butil parabenos, hidróxi anisol butila-do (BHA), hidróxi tolueno butilado (BHT), ácido cítrico, ácido ascórbico, esemelhantes. Bases de emulsão, creme ou pomada úteis em formulaçãopodem incluir cremes e emulsões de base aquosa (óleo-em-água), cremes eemulsões à base de óleo (água-em-óleo), pomadas (hidrocarboneto emulsi-ficante e não-emulsificante), géis, hidrogéis, e semelhantes. Outras formula-ções para liberação tópica podem incluir aerossóis, bandagens, e outros cu-rativos para ferida. Alternativamente a composição farmacêutica da invençãopode ser incorporada ou encapsulada em uma membrana ou matriz polimé-rica adequada, proporcionando deste modo um dispositivo de liberação paraliberação gradual adequado para colocação sobre, ou implantação próximoa, um sítio a ser tratado.

Uma composição farmacêutica da presente invenção sob a for-ma de uma formulação de hidrogel semi-sólido adequada para administra-ção tópica pode compreender adicionalmente os constituintes seguintes (a-lém do membro da superfamília TGF-β e açúcar):

0,1% em peso/ensaio a 2,0% em peso/ensaio de hidróxi celulo-se, e

0,1% em peso/ensaio a 1,0% em peso/ensaio de Carbopol934™ (BF Goodrich Corp.), e

a 20% em peso/ensaio de propileno glicol, e

0,005% em peso/ensaio a 0,020% em peso/ensaio de metil pa-rabeno, e

rabeno, e

0,005% em peso/ensaio a 0,020% em peso/ensaio de propil pa-

Hidróxido de sódio ou ácido clorídrico q.s. ad pH 4 -10Água purificada, q.s. ad 100% em peso/ensaio

As composições farmacêuticas adequadas da invenção podemser apresentadas sob a forma de um frasco, uma jarra, um tubo, um spray,de, ou; uma solução estéril; um pó para reconstituição estéril Iiofilizado ounão liofilizado, uma dispersão/suspensão estéril, um semi-sólido estéril, ouqualquer outra forma farmaceuticamente aceitável de apresentação conve-niente para liberação tópica de fármacos.

As composições farmacêuticas da invenção adequadas paraadministração oral podem ser preparadas misturando o membro da super-família TGF-β e açúcar (ambos tendo o grau desejado de pureza) com veí-culos, excipientes ou estabilizantes fisiologicamente aceitáveis opcionais soba forma de formulações em pó ou grânulo, soluções aquosas ou não-aquosas, formulações de dispersões/suspensões áquosas ou não-aquosasincluindo emulsões, formulações semi-sólidas, formulações de comprimidos(revestidos ou não revestidos) ou cápsulas (duras ou moles) tendo caracte-rísticas de ou liberação imediata e/ou liberação modificada (entéri-ca/retardada/gradual). Veículos aceitáveis, incluindo excipientes, são não-tóxicos para receptores nas dosagens e concentrações empregadsa, e in-cluem, mas não estão limitadas a, água purificada, solução salina, soluçãosalina tamponada com fosfato (PBS) solução de Ringer, solução de Iactatode Ringer, soluções hidro-alcoólicas, celulose e derivados celulósicos, amidoe amidos modificados, polietileno glicol (PEG), propileno glicol (PG)1 fosfa-tos, acetatos, gelatina, colágenos, Carbopol 934TM (BF Goodrich Corp.), óleose ceras vegetais e sintéticos, tensoativos aniônicos tais como sabões de áci-dos graxos, sulfatos de acila, ou sulfossuccinatos de acila acila; tensoativoscatiônicos, tais como aminas de alquila primárias, secundárias, terciárias, ouquaternárias; tensoativos não-iônicos, por exemplo, ésteres de sorbitano ouésteres polietoxilados de ácidos de acila, copolímeros de oxido de polietilenoe oxido de polipropileno, e semelhantes.

O membro da superfamília TGF-β pode ser dispersado dentrode uma formulação líquida ou como uma suspensão dentro do líquido (porexemplo, como uma suspensão coloidal), ou dissolvida dentro do líquidocomo uma solução. Para os presentes fins, uma solução pode ser conside-rada como sendo caracterizada como compreendendo um solvente líquidoatravés do qual é dispersada uma distribuição homogênea de um membroda superfamília TGF-β que não sedimentará subseqüentemente da solução.

As composições farmacêuticas de acordo com a presente in-venção podem compreender preferencialmente soluções aquosas. Compo-sições farmacêuticas adequadas podem ser composições líquidas, ou alter-nativamente podem compreender adicionalmente agentes espessantes detal modo uma seja formada composição semi-sólida ou de gel. Agentes es-pessantes adequados são de conhecimento geral daqueles versados natécnica, e incluem metil celulose. O uso de agentes espessantes em compo-sições farmacêuticas de acordo com o primeiro, segundo, ou terceiro aspec-tos da invenção pode ser vantajoso em uma série de contextos. Particular-mente, o uso de agentes espessantes em composições da invenção podeser vantajoso para assegurar que a composição é retida no local no qual éadministrada e no qual é desejado para a composição ter seu efeito biológi-co e/ou terapêutico. Esta vantagem é de benefício em relação a medicamen-tos tópicos, e pode ser aplicável tanto a medicamentos para aplicação exter-na (tais como cremes ou géis espessados) quanto a medicamentos paraaplicação interna (por exemplo, géis espessados para injeção local). Seráreconhecido que formulações tixotrópicas de composições farmacêuticas deacordo com a invenção podem ser benéficas em uma série de aplicações,por exemplo, no uso de sprays nasais ou inaladores usados para administrarcomposições aos pulmões (as quais podem ser relativamente inacessíveisde modo diverso) para a prevenção e/ou o tratamento de fibrose pulmonarou cicatrização.

As composições farmacêuticas da invenção podem ser propor-cionadas preferencialmente em recipientes enchidos previamente contendoa composição. Os recipientes enchidos previamente referidos proporcionamvantagens em termos de sua capacidade para prontamente liberar composi-ções, e particularmente composições pré-esterilizadas, na localização naqual a composição deve ser empregada. Recipientes adequados podem serselecionados com referência à formulação escolhida e o método ou a viapela qual a composição deve ser administrada, e tipicamente incluirão reci-pientes tais como frascos ou seringas. A provisão de composições farma-cêuticas compreendendo membros da superfamília TGF-β em semelhantesrecipientes enchidos previamente foi comprometida previamente pela ten-dência para a proteína do membro da superfamília TGF-β aderir às paredesdo recipiente com o tempo. Além disso, a tendência de membros da super-família TGF-β armazenados em recipientes para degenerar e peder ativida-de com o tempo também limitou a adequabildade de composições compre-endendo membros da superfamília TGF-β para serem enchidos previamentee armazenados deste modo. Portanto as composições farmacêuticas dapresente invenção proporcionam uma solução para deficiências da técnicaanterior que previamente evitaram ou desencorajaram a provisão de recipi-entes previamente preenchidos desejáveis de modo diverso, e particular-mente recipientes contendo composições estéreis.

Conforme previamente indicado, as composições farmacêuticasda invenção são convenientes para aplicação terapêutica. Por conseguinte,em um quinto aspecto da invenção é proporcionado um método de tratamen-to compreendendo administrar a um indivíduo que necessite da atividadeterapêutica de um membro da superfamília TGF-β uma quantidade terapêu-tica de uma composição de acordo com o primeiro, segundo, terceiro ouquarto aspectos da invenção. A atividade terapêutica deve ser entendidacomo englobando terapia profilática, incluindo a prevenção de doenças oucondições que podem ser tratadas usando a atividade terapêutica do mem-bro da superfamília TGF-β.

Um uso preferencial das composições farmacêuticas de acordocom a invenção é no contexto de cura de feridas e/ou prevenção/redução decicatriz. Os inventores descobriram que as composições farmacêuticas dainvenção podem ser usadas na prevenção e/ou inibição de cicatrização. Al-ternativamente ou adicionalmente as composições farmacêuticas da inven-ção podem ser usadas na prevenção e/ou no tratamento de fibrose. As com-posições farmacêuticas da invenção também podem ser usadas para pro-mover a cura de feridas. Na estimulação da cura de feridas e/ou na preven-ção ou inibição de formação de cicatriz pode ser preferencial ou necessárioadministrar a composição farmacêutica antes ou depois da formação de umaferida. Por conseguinte, a composição farmacêutica estará presente na áreaferida, ou através de sua introdução na ferida, ou através da formação daferida em um sítio onde a composição farmacêutica já está presente (emvirtude de administração anterior). Portanto será reconhecido que as compo-sições farmacêuticas de acordo com a invenção podem ser formuladas pre-ferencialmente de tal modo que sejam bem toleradas pelo sítio ferido. For-mulações para aplicação em feridas podem fazer uso preferencialmente deum veículo farmacêutico que é relativamente "brando". Veículos adequadospodem ser biocompatíveis, biodegradáveis e biorreabsorvíveis e biorressol-víveis. Formulações preferenciais podem excluir substâncias que estimulaminflamação, e podem incluir preferencialmente agentes antiinflamatórios.

Um método adequados pelo qual podem ser avaliada a preven-ção e/ou inibição de cicatrização é descrito no requerimento co-pendentedos inventores publicado como patente internacional No. WO 2006/064207.

Tão benéfico é o uso de composições farmacêuticas de acordocom a invenção na cura de feridas e inibição de cicatrização que, em umsexto aspecto da invenção, é proporcionado um método para promover curade ferida e/ou inibir a formação de cicatriz, o método compreendendo admi-nistrar a um paciente que necessite de semelhante promoção e/ou inibiçãouma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêuticade acordo com o primeiro, segundo, terceiro ou quarto aspectos da inven-ção. No contexto da presente invenção, promoção de cura pode ser conside-rada para englobar um aumento no índice de cura é/ou um aumento na qua-lidade da cura. A inibição da formação de cicatriz pode ser considerada paraenglobar qualquer grau de inibição (o qual pode variar de inibição parcial atéinibição total) de cicatrização associada com cura de ferida ou outros pro-cessos fibróticos caracterizados pela deposição anormal ou excessiva detecido fibroso. As composições farmacêuticas e métodos de tratamento dainvenção podem ser particularmente úteis na prevenção, redução, inibiçãoou no tratamento de cicatrização (fibrose) associada com distúrbios fibróticosselecionados entre o grupo consistindo em: fibrose da pele; escleroderma;fibrose sistêmica progressiva; fibrose pulmonar; fibrose muscular; fibroserenal; glomerulosclerose; glomerulonefrite; fibrose uterina; fibrose renal; cir-rose hepática, fibrose hepática; doença pulmonar obstrutiva crônica; fibrosedepois de enfarte do miocárdio; fibrose do sistema nervoso central, tal comofibrose depois de derrame; fibrose associada com distúrbios neuro-degenerativos tais como Doença de Alzheimer ou esclerose múltipla; fibroseassociada com vitreorretinopatia proliferativa (PVR); restenose; endometrio-se; doença isquêmica e fibrose por radiação. Os medicamentos e métodosde tratamento da invenção também podem ser úteis na prevenção, reduçãoou no tratamento de fibrose associada com artrite reumatóide.

Prevenção e/ou tratamento de acordo com a presente invençãopodem ser particularmente úteis no caso de feridas em risco de uma reaçãode cicatrização ou cura de ferida aberrantes. Por exemplo, prevenção e/outratamento de acordo com o sexto aspecto da invenção podem ser particu-Iarmente preferenciais no tratamento de feridas crônicas (tais como úlceras)ou de feridas predispostas a desenvolvimento em feridas crônicas (por e-xemplo, feridas de diabéticos, nos idosos ou em pacientes com polifarmá-cia).

Prevenção e/ou tratamento de acordo com o sexto aspecto dainvenção também podem ser de particular benefício no tratamento de cicatri-zes patológicas (tais como quelóide ou cicatrizes hipertróficas) ou de feridaspredispostas ao desenvolvimento de cicatrizes patológicas (tais como feridasde queimadura, as feridas de crianças, as feridas de indivíduos Afro-Caribenhos ou Mongolóides, ou feridas em posições de elevada tensão dapele).

As composições farmacêuticas de acordo com a presente in-venção são particularmente convenientes para administração na pele, porexemplo, no tratamento de feridas dérmicas. No entanto, as composiçõespodem ser usadas de modo eficaz no tratamento de outros tipos de feridaincluindo, mas não limitados a, feridas dos olhos; feridas do sistema digesti-vo; feridas do sistema nervoso; feridas do sistema genito-urinário; feridas dosistema respiratório; feridas dos rins; feridas de tendões e ligamentos; e feri-das do coração ou do sistema circulatório, adesões formadas depois de le-são e restenose. Os inventores acreditam que composições farmacêuticas emétodos de tratamento da invenção são adequados para uso na pele; usono olho (incluindo a prevenção, redução ou inibição de cicatrização resultan-te de cirurgia dos olhos tal como cirurgia de LASIK ou PRK); uso em vasossangüíneos; uso no sistema nervoso periférico ou central (onde a prevenção,redução ou inibição de cicatrização pode reforçar a reconexão neuronal);uso em tendões, ligamentos ou músculo; uso na cavidade oral, incluindo oslábios e o palato (tal como na prevenção, redução ou inibição de cicatrizaçãoresultante de tratamento de fenda Iabial ou do palato); uso nos órgãos inter-nos tais como o fígado, coração, cérebro, tecidos digestivos e tecidos repro-dutivos; e uso em cavidades corporais tais como a cavidade abdominal, acavidade pélvica e a cavidade torácica (onde a prevenção, redução ou inibi-ção de cicatrização pode reduzir o número de incidências de formação deadesão e/ou o tamanho das adesões formadas). Os medicamentos e méto-dos da invenção podem ser usados para prevenir, reduzir ou inibir adesões,tais como aqueles que ocorrem no abdômen, na pelve ou na espinha dorsal.É particularmente preferencial que os medicamentos e métodos da invençãosejam usados para prevenir, reduzir ou inibir a cicatrização da pele (cicatri-zação dérmica).

As composições farmacêuticas da presente invenção podem seradministradas preferencialmente antes do ferimento e/ou do início da cicatri-zação (a qual para os presentes fins deve ser tomada para incluir fibroseassociada com distúrbios fibróticos). A composição farmacêutica pode seradministrada até 24 horas antes do ferimento, preferencialmente até dezhoras antes do ferimento, mais preferencialmente até cinco horas antes doferimento, e ainda mais preferencialmente até uma hora antes do ferimento.

Será reconhecido que a administração de composições farmacêuticas deacordo com a invenção antes do ferimento ou do inicio da cicatrização é departicular utilidade no caso de feridas eletivas (tais como aquelas associadasa procedimentos cirúrgicos) ou situações nas quais há um risco reconhecidoda iniciação da cicatrização (isto é, predisposição a fibrose ou exposição aestímulos prováveis de induzir fibrose).

Como uma alternativa, a composição farmacêutica pode seradministrada depois do ferimento ou do início da cicatrização. No caso deadministração da composição farmacêutica depois do ferimento, pode serpreferencial que a composição farmacêutica seja administrada imediatamen-te depois do ferimento, ou no mínimo tão logo quanto praticável depois doferimento (por exemplo, depois da admissão de um paciente ferido aos cui-dados de um clínico). No caso de administração da composição farmacêuti-ca depois do início da cicatrização, tal como cicatrização surgindo em con-seqüência de um distúrbio fibrótico, a composição preferencialmente podeser administrada imediatamente depois da iniciação da cicatrização ser re-conhecida. Em qualquer caso a composição farmacêutica preferencialmentepode ser administrada até uma semana depois do ferimento ou do início dacicatrização, mais preferencialmente até 24 horas depois do ferimento ou doinício da cicatrização, ainda mais preferencialmente até cinco horas, aindamais preferencialmente até cinco horas, e ainda mais preferencialmente atéuma hora depois do ferimento ou do início da cicatrização.As composições farmacêuticas de acordo com a invenção po-dem ser formuladas para aplicação tópica. Formulações adequadas de a-cordo com esta modalidade da invenção podem incluir formulações líquidas,em creme, pomada ou gel, ou formulações de spray ou aerossol.

Os métodos ou medicamentos da invenção podem ser usadosprofilaticamente, em sítios onde não existe ferida mas onde deve ser forma-da uma ferida que de outro modo daria origem a uma cicatriz ou ferida crôni-ca. A título de exemplo medicamentos de acordo com a invenção podem seradministrados a sítios que devem sofrer ferimento em conseqüência de pro-cedimentos eletivos (tais como cirurgia), ou a sítios que se acredita que este-jam em elevado risco de ferimento. Pode ser preferencial que os medica-mentos da invenção sejam administrados ao sítio imediatamente antes daformação de uma ferida (por exemplo, no período até seis horas antes deferimento) ou os medicamentos podem ser administrados em um períodoanterior antes do ferimento (por exemplo, até 48 horas antes de uma feridaser formada). A pessoa versada reconhecerá que os momentos de adminis-tração ainda mais preferenciais antes da formação de uma ferida serão de-terminados com referência a uma série de fatores, incluindo a formulação ea via de administração do medicamento selecionado, da dosagem do medi-camento a ser administrado, do tamanho e da natureza da ferida a ser for-mada, e do estado biológico do paciente (os quais podem ser determinadoscom referência a fatores tais como a idade, a saúde, e a predisposição dopaciente a complicações na cura ou cicatrização adversa). O uso de méto-dos e medicamentos profiláticos de acordo com a invenção é uma modalida-de preferencial da invenção, e é particularmente preferencial na promoçãode cura acelerada de ferida com reduzida cicatrização no contexto de feridascirúrgicas.

Os métodos e medicamentos da invenção também têm a capa-cidade de promover cura acelerada de ferida com reduzida cicatrização seadministrados depois de uma ferida ter sido formada. É preferencial que areferida administração deva ocorrer tão cedo quanto possível depois de for-mação da ferida, mas os agentes da invenção têm a capacidade de promo-ver cura acelerada de ferida com reduzida cicatrização em qualquer momen-to até o processo de cura ter sido completado (isto é, mesmo no caso de queuma ferida já tenha sido parcialmente curada, os métodos e medicamentosda invenção podem ser usados para promover cura acelerada de ferida comreduzida cicatrização com respeito à porção não curada remanescente). Se-rá reconhecido que a "janela" na qual os métodos e medicamentos da inven-ção podem ser usados para promover cura acelerada de ferida com reduzidacicatrização depende da natureza da ferida em questão (incluindo o grau dedano que ocorreu, e do tamanho da área ferida). Portanto no caso de umagrande ferida os métodos e medicamentos da invenção podem ser adminis-trados relativamente tardiamente na resposta de cura e ainda serem capa-zes de promover cura acelerada de ferida com reduzida cicatrização. Os mé-todos e medicamentos da invenção podem ser administrados preferencial-mente, por exemplo, dentro das primeiras 24 horas depois de uma ferida serformada, mas ainda podem promover cura acelerada de ferida com reduzidacicatrização caso administrados até dez, ou mais, dias depois do ferimento.

Os métodos e medicamentos da invenção podem ser adminis-trados em uma ou mais ocasiões conforme necessário de modo a promovercura acelerada de ferida com reduzida cicatrização. Por exemplo, quantida-des terapeuticamente eficazes dos medicamentos podem ser administradasa uma ferida tão freqüentemente quanto necessário até o processo de curater sido completado. A título de exemplo, os medicamentos da invenção po-dem ser administrados diariamente ou duas vezes ao dia a uma ferida porno mínimo os primeiros três dias depois da formação da ferida.

Ainda mais preferencialmente os métodos ou medicamentos dainvenção podem ser administrados tanto antes quanto depois da formaçãode uma ferida. Os inventores descobriram que administração dos medica-mentos da invenção imediatamente antes da formação de uma ferida, segui-da por administração diária dos agentes referidos nos dias depois de feri-mento, é particularmente eficaz na promoção de cura acelerada de feridacom reduzida cicatrização.

Será reconhecido que a quantidade de uma composição farma-cêutica de acordo com a invenção que seria aplicada a uma ferida dependede uma série de fatores tais como a atividade biológica e a biodisponibilida-de do membro da superfamília TGF-β incorporado no medicamento. Isto porsua vez pode depender de fatores tais como a identidade do membro da su-perfamília TGF-β e do modo de administração da composição. Outros fato-res na determinação de uma quantidade terapêutica adequada de uma com-posição de acordo com a invenção podem incluir:

i) A meia-vida do membro da superfamília TGF-β no sujeito sendotratado.

ii) A condição específica a ser tratada (por exemplo, ferimento a-gudo, feridas crônicas ou distúrbios fibróticos).

iii) A idade do sujeito sendo tratado.

A freqüência de administração das composições de acordo coma invenção será influenciada pelos fatores mencionados acima e particular-mente pela meia-vida do membro da superfamília TGF-β incorporado nacomposição dentro do sujeito sendo tratado.

Geralmente, quando as composições farmacêuticas de acordocom a invenção devem ser usadas no tratamento de feridas existentes, acomposição deve ser administrada tão logo a ferida tenha ocorrido (ou nocaso de feridas que não são imediatamente evidentes, tais como aquelas emsítios corporais internos, tão logo a ferida tenha sido diagnosticada). A tera-pia com composições ou métodos de acordo com a invenção deve continuaraté o processo de cura ter sido promovido (e/ou a cicatrização inibida) até asatisfação do clínico.

Conforme mencionado acima, a freqüência de administração dascomposições de acordo com a invenção dependerá da meia-vida biológicado membro da superfamília TGF-β incorporado nas mesmas. Tipicamenteuma composição de acordo com a invenção formulada como um creme oupomada deve ser administrada a um tecido alvo de tal modo que a concen-tração do membro da superfamília TGF-β no tecido alvo é mantida em umnível adequado para ter um efeito terapêutico. Isto pode requerer adminis-tração diária ou mesmo várias vezes ao dia.As composições farmacêuticas de acordo com a invenção po-dem ser administradas por qualquer via adequada capaz de obter um efeitobiológico ou terapêutico desejado (tal como a promoção de cura de ferida ouinibição de cicatrização), mas é preferencial que as composições sejam ad-ministradas localmente no sítio no qual a atividade é requerida, por exemplo,por injeção.

Os inventores descobriram que a promoção de cura aceleradade ferida e/ou a inibição de cicatrização usando composições farmacêuticasde acordo com a presente invenção é particularmente aprimorada por apli-cação tópica da composição a uma ferida (ou, no caso de aplicação profiláti-ca, a um tecido ou sítio onde uma ferida deve ser formada).

As composições farmacêuticas de acordo com a invenção podetomar uma série de formas diferentes dependendo, em particular, da manei-ra na qual elas devem ser usadas. Portanto, por exemplo, podem estar sob aforma de um líquido, pomada, creme, gel, hidrogel ou aerossol. Todas ascomposições referidas são adequadas para aplicação tópica a uma ferida, aqual é um meio preferencial de administrar agentes da invenção a um sujeito(pessoa ou animal) que necessite de tratamento.

As composições farmacêuticas de acordo com a invenção po-dem ser proporcionadas em um curativo ou emplastro estéril, o qual podeser usado para cobrir um sítio no qual se deseja que o membro da superfa-mília TGF-β incorporado na composição deve ter um efeito biológico ou te-rapêutico. Será reconhecido que as vantagens proporcionadas pelas com-posições farmacêuticas de acordo com a invenção, em termos de vida deprateleira aprimorada, aumentada recuperação e/ou aumento da atividadebiológica do membro da superfamília TGF-β incorporado, significa que ascomposições referidas são particularmente adequadas para incorporaçãoem emplastros ou curativos pré-preparados.

As composições farmacêuticas de acordo com a invenção sãoparticularmente adequadas para incorporação dentro de dispositivos de libe-ração lenta ou retardada, uma vez que as composições têm a capacidade deprevenir muitas das desvantagens normalmente associadas com o armaze-namento de composições incorporando membros da superfamília TGF-β.

Dispositivos adequados podem ser dispostos, por exemplo, sobre ou inseri-dos sob a pele e a composição incorporando o membro da superfamíliaTGF-β liberado durante dias, semanas ou mesmo meses. Um dispositivosemelhante pode ser particularmente útil para pacientes que requerem ad-ministração de longo termo do membro da superfamília TGF-β. Exemplos decondições que podem se beneficiar particularmente de semelhante adminis-tração de longo termo de composições farmacêuticas de acordo com a in-venção incluem o tratamento de feridas crônicas ou de feridas agudas ex-tensivas (tais como queimaduras) e o tratamento de condições fibróticas es-tabelecidas.

Doses diárias de composições farmacêuticas de acordo com ainvenção podem ser administradas como uma única administração (por e-xemplo, uma injeção diária ou uma aplicação diária de uma formulação tópi-ca). Alternativamente, composições farmacêuticas de acordo com a inven-ção pode requerer administração duas vezes ou mais vezes durante um dia.

Em uma alternativa adicional, um dispositivo de liberação lenta pode ser u-sado para proporcionar a um paciente uma dose adequada de uma compo-sição farmacêutica de acordo com a invenção sem a necessidade de admi-nistrar doses repetidas.

Veículos líquidos podem ser usados na preparação de soluções,suspensões, emulsões, xaropes, elixires e composições pressurizadas. Oagente da invenção pode ser dissolvido ou suspendido em um veículo líqui-do farmaceuticamente aceitável tal como água, um solvente orgânico, umamistura de tanto óleos quanto gorduras farmaceuticamente aceitáveis assimcomo de ambos. É preferencial que composições farmacêuticas líquidas deacordo com a invenção sejam proporcionadas como soluções aquosas.

O veículo líquido pode conter outros aditivos farmacêuticos ade-quados tais como solubilizantes, emulsificantes, tampões, conservantes, a-doçantes, agentes flavorizantes, agentes de suspensão, agentes espessan-tes, colorantes, reguladores da viscosidade, estabilizantes ou osmo--reguladores. Exemplos adequados de veículos líquidos para administraçãooral e parenteral incluem água (parcialmente contendo aditivos conformeacima, por exemplo, derivados celulósicos, preferencialmente solução car-boximetil celulose de sódio), álcoois (incluindo álcoois monoídricos e álcooispoliídricos, por exemplo, glicóis) e seus derivados, e óleos (por exemplo,óleo de coco fracionado e óleo de araquis). Para administração parenteral, oveículo também pode ser um éster oleoso tal como oleato de etila e miristatode isopropil. Veículos líquidos estéreis são úteis em composições em formalíquida estéril para administração parenteral. O veículo líquido para composi-ções pressurizadas pode ser hidrocarboneto halogenado ou outro propelentefarmaceuticamente aceitável.

Composições farmacêuticas líquidas da invenção formuladascomo soluções ou suspensões estéreis podem ser administradas por injeçãointramuscular, intratecal, epidural, intraperitoneal, intradérmica ou subcutâ-nea. Soluções estéreis também podem ser administradas por via intraveno-sa. Será reconhecido que composições injetáveis de acordo com a invençãotambém podem incluir aglutinantes, agentes de suspensão e preservantesconforme necessário. Exemplos adequdos de semelhantes agentes serão deconhecimento geral daqueles versados na técnica.

Os inventores também descobriram que composições farmacêu-ticas de acordo com a invenção são adequadas para administração oral.Formulações adequadas para uso de acordo com esta modalidade da inven-ção incluem enxaguatórios bucais e semelhantes. Composições farmacêuti-cas administradas por via oral de acordo com a invenção podem ser usadasna prevenção e/ou no tratamento de mucosite, úlceras (incluindo úlcerasgastrointestinais e estomacais) Doença de Chrohn e colite ulcerativa.

As composições farmacêuticas de acordo com a invenção sãoadequadas para administração no olho. Por conseguinte uma preferencialformulação de composições da invenção para semelhante uso pode ser soba forma de gotas oculares. É sabido que membros da superfamília TGF-βtais como TGF-P3 podem ser usados na promoção de cura acelerada de fe-rida com reduzida cicatrização na córnea. Feridas corneais podem resultarde trauma do olho que surge em conseqüência de lesão acidental (conformeconsiderado acima) ou em conseqüência de operações cirúrgicas (por e-xemplo, cirurgia a laser sobre a córnea).

As composições farmacêuticas da invenção podem ser usadasem uma série de sítios "internos" (isto é, sítios que ocorrem dentro do corpo,ao invés de sobre uma superfície externa). Portanto, por exemplo, medica-mentos de acordo com a invenção podem ser formulados para inalação parauso no nariz, nos pulmões ou outros epitélios respiratórios. Exemplos ondepode ser desejável usar as composições farmacêuticas da invenção nestamaneira incluem o tratamento de feridas internas, e a prevenção e/ou o tra-tamento de cicatrização ou fibrose no sistema respiratório.

O uso em sítios corporais internos de composições farmacêuti-cas de acordo com a presente invenção também pode ser vantajoso no tra-tamento de feridas em risco elevado de formar adesões. As adesões referi-das são um resultado comum de lesões ou feridas nos sistemas digestivo ougenitourinário, e podem levar a danosa perda de função em tecidos afetados.

Procedimentos conhecidos, tais como aqueles empregados con-vencionalmente pela indústria farmacêutica (por exemplo, experimentação invivo, provas clínicas, e etc.), podem ser usados para estabelecer formula-ções específicas ou preferenciais de composições farmacêuticas de acordocom a invenção, bem como regimes terapêuticos precisos para administra-ção de semelhantes composições (tais como doses diárias do membro dasuperfamília TGF-β incorporado na composição e a freqüência e via de ad-ministração da composição).

Uma dose diária adequada de uma composição farmacêutica deacordo com a invenção para uso em cura de ferida depende de uma série defatores inclusive (mas não limitados a) a atividade terapêutica desejada a serobtida pela composição (por exemplo, aceleração da cura e/ou a prevençãoou inibição de cicatrização); a identidade do membro da superfamília TGF-βincorporado na composição; a natureza do tecido ferido; a área e/ou profun-didade da ferida a ser tratada; a gravidade da ferida; e a presença ou ausên-cia de fatores predisponentes para cicatriz patológica ou formação de feridacrônica. Tipicamente uma dose adequada de um membro da superfamíliaTGF-β (tal como TGF-P3) a ser administrada por meio de uma composiçãofarmacêutica de acordo com a invenção estará dentro da faixa de 0,001 ng a100 mg do membro da superfamília por 24 horas, embora este número pos-sa ser modificado para cima ou para baixo em resposta aos fatores resumi-dos acima. A quantidade do membro da superfamília TGF-β administradopor meio da composição farmacêutica da invenção pode ser preferencial-mente de 50 a 500 ng por centímetro linear de lesão de tecido.

Geralmente, as composições farmacêuticas de acordo com a in-venção devem ser formuladas de tal modo que, quando administradas auma ferida, é obtida uma concentração do membro da superfamília TGF-βincorporado (por exemplo, TGF-P3) de entre IO ng/100 μΙ e 500 ng/100 μΙ porcentímetro linear. Preferencialmente o membro da superfamília TGF-β podeser proporcionado em concentrações de entre 50 ng/100 μΙ e 250 ng/100 μΙpor centímetro linear.

A pessoa versada reconhecerá que a concentração de um mem-bro da superfamília TGF-β que pode ser desejável produzir em um tecido aser tratado por administração de uma composição farmacêutica de acordocom a invenção será dependente da potência do membro da família, e dostipos de célula e tecido em particular que se deseja tratar.

No caso de tipicamente um membro da superfamília (tal comoTGF^3) de 110 a 170 aminoácidos de extensão pode ser preferencial queas composições farmacêuticas da invenção sejam administradas para obteruma concentração local de aproximadamente 19 nM a 100 nM, e mais prefe-rencialmente entre 19,664 nM e 98,321 nM, no tecido a ser tratado.

As composições farmacêuticas de acordo com a invenção po-dem ser usadas terapeuticamenrte como uma monoterapia, ou seja a ativi-dade terapêutica desejada sendo produzida somente através do uso decomposições farmacêuticas de acordo com a invenção. Alternativamente osmétodos ou composições farmacêuticas da invenção podem ser usados emcombinação com outros compostos ou tratamentos para obter o efeito tera-pêutico desejado. Tratamentos adequados que podem ser usados como par-tes de semelhante terapias de combinação dependerão do efeito terapêuticoque se deseja obter, mas serão de conhecimento geral daqueles versadosna técnica.

Uma vantagem altamente surpreendente das composições far-macêuticas da invenção (e dos métodos de tratamento usando semelhantescomposições) é que os inventores descobriram que a administração destascomposições por injeção está associada com dor de injeção e eritema gran-demente reduzidos comparados com os observados na administração decomposições da técnica anterior. Este benefício é altamente vantajoso umavez que as composições farmacêuticas da invenção são altamente adequa-das para administração por injeção.

No entanto, os inventores acreditam que a vantagem de reduzidador de injeção também pode ser obtida usando composições farmacêuticasque não compreendem membros da superfamília TGF-β.

Por conseguinte, em um sétimo aspecto da presente invenção éproporcionado o uso de um açúcar na fabricação de um medicamento para aprevenção ou redução da dor de injeção.

Este sétimo aspecto da invenção se baseia na surpreendentedescoberta dos inventores de que composições farmacêuticas compreen-dendo açúcares dão origem a reduzida dor quando administradas a um su-jeito. Particularmente, os inventores descobriram que composições farma-cêuticas injetáveis compreendendo açúcares dão origem a reduzida dor deinjeção quando injetadas em um sujeito, e em uma modalidade preferencialda invenção é proporcionado o uso de um açúcar na preparação de um me-dicamento injetável para a prevenção ou redução da dor de injeção.

Em um oitavo aspecto da invenção é proporcionado um métodopara prevenir ou reduzir dor de injeção compreendendo administrar a umpaciente que necessite de semelhante prevenção ou redução da dor umaquantidade eficaz de um medicamento compreendendo um açúcar. É prefe-rencial que medicamentos administrados de acordo com este aspecto dainvenção sejam medicamentos injetáveis.

Medicamentos de acordo com, ou adequados para uso em, es-tes aspectos da invenção, podem ser fabricados e formulados de acordocom técnicas e formulações descritas com referência a aspectos preceden-tes da invenção.

A dor da injeção é um problema médico reconhecido de modogeral, e é um dos efeitos colaterais ainda mais importantes influindo contra ouso de produtos farmacêuticos ou composições injetáveis, e a dor da injeção(ou o medo da dor da injeção) pode causar considerável ansiedade em paci-entes que necessitam de injeções. Para os presentes fins, a dor da injeçãopode ser tomada para se referir a dor associada com a introdução de agu-lhas hipodérmicas, catéteres, cânulas, e outros dispositivos semelhantes nocorpo de um sujeito.

Freqüentemente é necessário administrar injeções em pacientesem sítios que já estão sujeitos a sensações de dor e isto pode exacerbar onível de dor percebida pelo recebedor da injeção. Exemplos de semelhantessituações incluem injeções em sítios de ferida, injeções associadas com otratamento de infecções, e injeções associadas com tratamento de doençasautoimunes. Em muitos destes casos inflamação existente no sítio onde ainjeção deve ocorre pode aumentar a percepção por um paciente de dor as-sociada com a injeção.

Mesmo na ausência de inflamação ou outros fatores predispondoa elevada dor de injeção, a aversão natural de pacientes à dor de injeçõestem uma série de efeitos nocivos. É reconhecido que a dor de injeção é umadas principais razões subjacentes porque os pacientes não podem iniciar oucompletar regimes terapêuticos nos quais os medicamentos são administra-dos por injeção. No caso de bebês e crianças pequenas a reação adversado sujeito também pode ser traumática para os pais ou responsáveis pelosujeito que está recebendo a injeção.

Estes problemas associados com a dor de injeção podem serparcialmente (ou mesno totalmente) aliviados por medicamentos fabricadosde acordo com o sétimo aspecto da invenção, ou métodos de tratamento deacordo com o oitavo aspecto da invenção.

Os inventores acreditam que as vantagens proporcionadas pormedicamentos fabricados de acordo com o sétimo aspecto da presente in-venção também são proporcionadas por todos os medicamentos da inven-ção (isto é, medicamentos de acordo com os outros aspectos da invenção).

Portanto, exceto por onde o contexto requer de modo diverso, as vantagensdescritas abaixo em relação aos medicamentos do sétimo aspecto da inven-ção (e os métodos do oitavo aspecto da invenção) devem ser consideradaspara serem proporcionadas por todas as composições farmacêuticas da in-venção (uma vez que todas compreendem os açúcares que se acredita quesejam responsáveis pela prevenção ou redução da dor de injeção).

Uma das vantagens notáveis dos medicamentos da invenção ésua ação muito rápida na prevenção ou redução da dor de injeção. Medica-mentos da invenção têm a capacidade de exercer sua atividade contra dorde injeção quase instantaneamente em sua injeção em um paciente. Porconseguinte, medicamentos fabricados de acordo com a invenção têm a ca-pacidade de prevenir ou reduzir de modo eficaz a dor de injeção que surgiriade modo diverso em conseqüência da injeção através da qual os medica-mentos são administrados a um paciente.

Será reconhecido que a ação imediata de medicamentos fabri-cados de acordo com a invenção proporciona muitas vantagens em um con-texto clínico. Usando medicamentos fabricados de acordo com a invençãonão é necessário pré-tratar um paciente ou sítio de injeção de modo a aliviarou prevenir dor de injeção. Isto é de considerável importância uma vez quemuitos profissionais médicos agem sob considerável pressão de tempo, e ogasto de tempo adicional associado com regimes de pré-tratamento existen-tes que visavam reduzir dor de injeção é um dos principais fatores que influ-encia de modo adverso o emprego de semelhantes regimes na prática. Naverdade, mesmo a percepção de que o uso de regimes de pré-tratamentoexistentes requer considerável gasto de tempo evita sua aplicação mais am-pla. Como os medicamentos da invenção podem ser administrados por meioda própria injeção cuja dor se deseja reduzir será reconhecido que seu usonão acrescenta tempo adicional ao processo de administração da injeção.

A pessoa versada reconhecerá imediatamente que medicamen-tos fabricados de acordo com os métodos da invenção (e particularmente osfabricados de acordo com o sétimo aspecto da invenção) podem ser usadoscomo "veículos" incorporando outros agentes ativos. Incorporando estes a-gentes ativos adicionais em medicamentos fabricados de acordo com a in-venção é possível administrar os agentes ativos a um paciente por meio deinjeção com a vantagem de que o paciente ao qual o medicamento estásendo administrado experimenta dor da injeção reduzida. Por conseguinte, éuma modalidade preferencial da invenção que medicamentos fabricados deacordo com a invenção compreendam adicionalmente um agente ativo a seradministrado com dor de injeção reduzida.

Um "agente ativo" conforme considerado no contexto desta mo-dalidade da invenção deve ser tomado para incluir:

i) todos os agentes ativos terapêuticos adequados;

ii) todos os agentes ativos anestésicos adequados;

iii) todos os agentes ativos diagnósticos adequados; e

iv) todos os agentes ativos cosméticos adequados.

Será reconhecido que membros da superfamília TGF-β constitu-em agentes ativos preferenciais que podem ser incorporados em medica-mentos e composições farmacêuticas da invenção. Exemplos específicos eilustrativos adicionais de agentes ativos adequados que podem ser incorpo-rados vantajosamente em medicamentos fabricados de acordo com a inven-ção são considerados abaixo.

Como açúcares usados na fabricação de medicamentos de a-cordo com a invenção são geralmente substâncias inertes podem ser com-binados em medicamentos com muitos agentes ativos adequados sem rea-ção adversa. Açúcares usados em medicamentos fabricados de acordo coma invenção não tendem a comprometer a atividade de outros agentes ativosque podem ser incorporados nos medicamentos, nem tendem a reduzir avida de prateleira de composições compreendendo os agentes ativos referi-dos.

Medicamentos fabricados de acordo com a invenção proporcio-nam muitas vantagens em relação aos anestésicos locais que são usadoscomumente em muitas estratégias existentes para a prevenção ou reduçãoda dor de injeção. Uma vantagem importante conferida por medicamentosfabricados de acordo com a invenção é que os medicamentos (sendo base-ados em torno do uso de açúcares) carregam um risco muito menor de rea-ções adversas do que as preparações anestésicas existentes. Diretrizes daOrganização Mundial de Saúde sugerem que em uma série de contextosonde são empregados anestésicos locais se recomenda que a presente e-quipe médica seja treinada no uso de anestésicos, e também que seja pro-porcionado equipamento de emergência, inclusive oxigênio e equipamentode ressuscitação, no local. Conforme será reconhecido, satisfazer estes re-quisitos envolve custo considerável, tanto em termos de treinamento quantode equipamento necessário.

Em contraste, medicamentos preparados de acordo com a pre-sente invenção são tanto seguros quanto fáceis de usar. Pessoas adminis-trando medicamentos fabricados de acordo com a invenção não requeremtreinamento anestésico específico, simplesmente a capacidade de realizarinjeções. O conhecimento necessário para dar injeções pode ser prontamen-te ensinado aos pacientes, e como não há necessidade de provisão de equi-pamento de emergência os pacientes são capazes de auto-administrar osmedicamentos, e portanto obter os benefícios de redução da dor de injeção,dentro de sua próprias casa.

Os açúcares usados em medicamentos fabricados de acordocom a invenção geralmente não são associados com reação de sensibilida-de perigosas que podem ocorrer com anestésicos comumente usados emestratégias existentes antidor de injeção. A título de exemplo, a hipersensibi-Iidade a lignocaína (um anestésico local comumente usado) é geralmentereconhecida como um importante efeito colateral adverso do uso deste anes-tésico local.

Injeções intravasculares de quantidades mesmo pequenas deanestésico local podem produzir níveis sangüíneos potencialmente tóxicos.Por conseguinte é um objetivo reconhecido de estudo produzir medicamen-tos capazes de reduzir dor de injeção sem a necessidade de administraçãode anestésicos locais. Medicamentos deste tipo podem ser de particular usoem tecidos, tais como a boca, que contêm muitos vasos sangüíneos, e por-tanto estão associados com um risco elevado de injeção intravascular aci-dental.

Em contraste, o efeito de medicamentos fabricados de acordocom a presente invenção é proporcionado por açúcares os quais são pron-tamente metabolizados, e os quais são geralmente associados com um riscomuito baixo de reações adversas. Por conseguinte é uma modalidade prefe-rencial da invenção que os medicamentos sejam usados na prevenção ouredução da dor de injeção em pacientes predispostos a elevada sensibilida-de a anestésicos locais, e particularmente preferencialmente naqueles pre-dispostos a hipersensibilidade a lignocaína.

Uma vantagem adicional de medicamentos fabricados de acor-do com a presente invenção, quando comparados com o uso de anestésicoslocais descritos na técnica anterior, é que os medicamentos da invenção nãocausam constrição dos vasos sangüíneos, que comumente ocorre em con-seqüência da administração de anestésicos locais conhecidos. A constriçãodos vasos sangüíneos referida (a qual pode particularmente ser causada porpré-administração de anestésicos locais) pode tornar difícil a administraçãode injeções intra-vasos sangüíneos. Esta desvantagem é prevenida por me-dicamentos fabricados de acordo com a presente invenção. Na verdade, ouso de medicamentos fabricados de acordo com a presente invenção naprevenção ou redução da dor de injeção associada com injeções intra-vasossangüíneos constitui uma modalidade preferencial da invenção.

Medicamentos fabricados de acordo com a invenção tambémconstituem um modo de custo notavelmente eficaz para reduzir a dor de in-jeção. Em contraste com anestésicos locais caros, agentes refrigerantes, esemelhantes usados em estratégias existentes designadas para reduzir dorde injeção, os medicamentos fabricados de acordo com a invenção utilizamaçúcares relativamente econômicos. Por conseguinte medicamentos fabri-cados de acordo com a invenção oferecem uma vantagem notável em rela-ção à técnica anterior em virtude do seu baixo custo fabricação.Medicamentos fabricados de acordo com a invenção podem serde particular vantagem para indivíduos necessitando de administração repe-titiva de injeções. Por exemplo, os medicamentos da invenção podem serparticularmente adequados para uso por diabéticos. Quando usados por in-divíduos sofrendo de diabetes, medicamentos fabricados de acordo com osétimo aspecto da invenção podem ser usados para reduzir a dor de injeçãoassociada com injeções requeridas para o controle ou a regulação do diabe-tes, tais como injeções de insulina ou glucagon. Será reconhecido que medi-camentos da invenção incorporando membros da superfamília TGF-β, taiscomo TGF-P3, podem ser particularmente preferenciais para uso por pacien-tes requerendo injeções repetidas em sítios de cura de ferida. Em particularestes podem ser úteis para pacientes sofrendo de condições de cura de feri-da aberrante, tais como sofrendo de feridas crônicas ou de cicatrizes patoló-gicas.

Conforme mencionado acima, os inventores descobriram que osefeitos benéficos conferidos por composições farmacêuticas de acordo coma invenção podem ser obtidos usando qualquer açúcar testado até o mo-mento. Na verdade, os inventores descobriram que sais de açúcares ou de-rivados podem ser usados de modo eficaz na fabricação de medicamentosde acordo com a invenção. No entanto, pode ser preferencial que as compo-sições farmacêuticas de acordo com a invenção compreendam um açúcarselecionado entre o grupo compreendendo maltose, sacarose, glicose e ma-nose. Mais preferencialmente o açúcar utilizado nas composições farmacêu-ticas de acordo com a invenção pode ser selecionado entre o grupo compre-endendo maltose e sacarose, e ainda mais preferencialmente o açúcar émaltose. O uso de maltose proporciona vantagens particulares pelo fato deque demonstra a maior eficácia não somente prevenindo dor de injeção, mastambém reduzindo os efeitos de eritema que podem ser associados de mododiverso com injeções.

Exceto por onde o contexto requer de modo diverso, referênciasa açúcares no contexto de medicamentos para a redução de dor de injeçãotambém deve ser tomado para englobar sais farmaceuticamente aceitáveis,derivados e variantes de açúcares. Os sais, derivados e variantes referidospreferencialmente podem ser sais, derivados ou variantes de açúcares sele-cionados entre o grupo compreendendo maltose, manose, sacarose e glico-se, ainda mais preferencialmente maltose.

Pode ser preferencial que um medicamento fabricado de acordocom a invenção pode compreender um açúcar proporcionado em uma con-centração de mais de 50 mg/ml. Os medicamentos referidos podem compre-ender um açúcar em uma concentração de entre 51 e 200 mg/ml, preferen-cialmente em uma concentração de entre 60 e 150 mg/ml, mais preferenci-almente em uma concentração de entre 70 e 100 mg/ml, ainda mais prefe-rencialmente em uma concentração de entre 80 e 95 mg/ml, e ainda maispreferencialmente em uma concentração de entre 85 e 90 mg/ml.

Alternativamente ou adicionalmente, um medicamento fabricadode acordo com a invenção pode compreender um açúcar proporcionado emuma concentração de entre 0,001 e 5 M, ou de entre 0,005 e 2 M. Preferen-cialmente o açúcar é proporcionado em uma concentração de entre 0,01 e 1M, mais preferencialmente em uma concentração de entre 0,1 e 0,5, aindamais preferencialmente em uma concentração de entre 0,2 e 0,4, e aindamais preferencialmente em uma concentração de cerca de 0,25 M.

Medicamentos fabricados de acordo com a presente invençãosão particularmente adequados para administração na pele, por exemplo,por injeção intradérmica ou subcutânea. No entanto, os medicamentos tam-bém podem ser usados de modo eficaz na prevenção ou redução da dor deinjeção associada com injeções em outros locais do corpo, por exemplo, in-jeções administrada no olho; injeções administrada na boca e no sistemadigestivo; injeções administradas no sistema nervoso; injeções no sistemagenitourinário; ou injeções no sistema respiratório; rins; tendões; ligamentos;coração ou sistema circulatório.

Os medicamentos da invenção são particularmente adequadospara uso em injeções em sítios onde inflamação existente pode aumentar demodo diverso o grau de dor de injeção que é percebido por um paciente re-cebendo uma injeção. Por conseguinte os medicamentos da invenção po-dem ser usados preferencialmente para a prevenção ou redução da dor deinjeção em injeção em um sítio inflamado. Os sítios inflamados referidos po-dem incluir sítios de feridas ou abrasões, sítios artríticos (incluindo sítios deinjeção sujeitos a osteoartrite, artrite reumatóide, e espondiloartropatias);sítios inflamados associados com esclerose múltipla; sítios sujeitos a umareação alérgica (incluindo rinite alérgica/sinusite; alergias de pele inclusiveurticária/outras erupções semelhantes; angioedema; dermatite ectópica; in-flamação associada com alergias alimentares; inflamação associada comalergias a fármacos ou alergias a insetos; ou inflamação associada com ou-tros distúrbios alérgicos específicos tais como mastocitose), condições auto-imunes (inclusive lúpus eritematoso sistêmico; dematomiosite e polimiosite);neuropatias inflamatórias tais como polineuropatias de Guillain Barre e in-flamatórias; vasculite tal como poliarterite nodosa ou granulomatose de We-gener; e outras condições autoimunes tais como polimialgia reumática; arte-rite temporal, síndrome de Sjogren's; doença de Bechet; síndrome de Churg-Strauss e arterite de Takayasu.

Os medicamentos da invenção também podem ser de benefícioem casos de injeção em sítios de inflamação cardiovascular, inflamação gas-trointestinal, infecção ou outros sítios envolvendo uma reação imune, distúr-bios neuroinflamatórios e sítios de transplante.

É um risco reconhecido do uso de anestésicos locais conven-cionais que, quando usados sobre pele rompida tal como a encontrada emáreas inflamadas, feridas ou infectadas, há uma tendência para aumentadacaptação de anestésico através da pele rompida para levar ao desenvolvi-mento de uma reação sistêmica, ao invés de local. Isto é particularmentenotável no caso de anestésicos locais aplicados topicamente.

Em contraste, medicamentos fabricados de acordo com a in-venção conferem uma acentuada vantagem em termos de sua aprimoradasegurança uma vez que, mesmo no caso de captação sistêmica, os açúca-res usados em sua preparação não são associados com quaisquer efeitosde doença. Por conseguinte é uma modalidade preferencial da invenção queos medicamentos sejam usados na prevenção ou redução da dor de injeçãoassociada com injeções em sítios de pele rompida. É particularmente prefe-rencial, conforme mencionado alhures, que medicamentos fabricados deacordo com a invenção sejam usados na prevenção ou redução da dor deinjeção associada com injeções em sítios de inflamação; sítios de ferida (in-cluindo sítios de transplante); ou áreas infectadas.

Medicamentos fabricados de acordo com a invenção podem in-corporar agentes ativos que são benéficos no tratamento e/ou manejo deáreas feridas. Exemplos de agentes ativos que podem ser vantajosamenteincorporados em medicamentos a serem administrados por injeção em sítiosde ferida incluem:

i) Agentes ativos terapêuticos, particularmente aqueles tendo umefeito benéfico sobre cura de ferida ou formação de cicatriz. Agentes ativosterapêuticos adequados podem ser capazes de promover ou acelerar a rea-ção de cura de ferida e/ou capazes de prevenir ou inibir a formação de cica-triz. Exemplos de semelhantes agentes ativos terapêuticos adequados inclu-em membros da superfamília TGF-β (conforme discutido em mais detalhesabaixo) e agentes capazes de neutralizar a função de fatores de crescimentofibrogênico.

ii) Agentes ativos anestésicos. Há uma série de contextos nosquais pode ser vantajoso administrar agentes ativos anestésicos a áreasferidas, por exemplo, para facilitar a limpeza, o fechamento ou medicamentoda ferida.

Agentes ativos terapêuticos tendo um efeito benéfico sobre curade ferida adequados para incorporação em medicamentos fabricados de a-cordo com a presente invenção devem ser tomados para englobar qualquersubstância tendo um efeito benéfico sobre cura de ferida. Substâncias tendoum efeito benéfico sobre cura de ferida podem incluir, por exemplo, substân-cias capazes de iniciar ou estimular a reação de cura de ferida que ocorrenaturalmente, bem como as substâncias capazes de acelerar a reação decura de ferida.

Em um nono aspecto da invenção é proporcionado um métodopara prevenir ou reduzir dor de injeção associada com administração de umainjeção em um sítio de ferida, o método compreendendo administrar, porinjeção em um sítio de ferida, uma quantidade terapeuticamente eficaz deum medicamento compreendendo um açúcar a um paciente que necessitede semelhante prevenção ou redução da dor de injeção. A quantidade tera-peuticamente eficaz no contexto deste aspecto da invenção será uma quan-tidade de um medicamento suficiente para prevenir ou reduzir a dor de inje-ção percebida pelo paciente ao qual o medicamento é administrado. Medi-camentos a serem administrados de acordo com este aspecto da invençãopreferencialmente podem compreender adicionalmente um agente ativo a-dequado para a promoção de cura de ferida e/ou para a prevenção de for-mação de cicatriz. Exemplos preferenciais de semelhantes agentes ativospodem incluir membros da superfamília TGF-β, e mais preferencialmentepodem incluir TGF-P3.

Será reconhecido por aqueles versados na técnica que medi-camentos fabricados de acordo com a presente invenção e compreendendoum agente ativo de benefício para o processo de cura de ferida também po-dem ser administrados a um paciente antes do ferimento. Agentes ativosadequados podem incluir aqueles capazes de promover cura e/ou de preve-nir ou inibir a formação de cicatriz, tal como membros da superfamília TGF-β. Alternativamente, ou adicionalmente, medicamentos fabricados de acordocom a presente invenção podem conter um anestésico útil na prevenção dedor que pode ser causada de modo diverso por uma ferida a ser formada.

Será reconhecido que um dos procedimentos médicos maiscomuns que dão origem a dor de injeção é a administração por injeção deagentes anestésicos. Embora os agentes referidos possam ser capazes dereduzir dor de modo eficaz uma vez que tenham sido administrados e tenhadecorrido tempo suficiente para permitir que os mesmos obtenham sua ativi-dade anestésica, a injeção pela qual são administrados é freqüentementeuma causa de dor considerável para o receptor.

Embora seja um objetivo de algumas modalidades da invençãoproporcionar um meio pelo qual evitar ou reduzir o uso de anestésicos co-nhecidos, particularmente em contextos nos quais seu uso pode dar origema efeitos colaterais indesejáveis e/ou perigosos, será reconhecido pela pes-soa versada que medicamentos fabricados de acordo com a presente inven-ção podem ser usados como "veículos" adequados para agentes ativos a-nestésicos (tais como anestésicos injetáveis). Quando usados deste modomedicamentos fabricados de acordo com a invenção servem para prevenirou reduzir dor de injeção que estaria associada de modo diverso com admi-nistração do agente ativo anestésico. Portanto, em uma modalidade prefe-rencial alternativa um medicamento fabricado de acordo com a invenção po-de compreender adicionalmente um agente ativo anestésico. Para os fins dapresente invenção um agente ativo anestésico adequado para incorporaçãoem medicamentos fabricados de acordo com a presente invenção pode sertomado para ser qualquer substância tendo propriedades anestésicas. Umagente ativo anestésico adequado para incorporação em medicamentos fa-bricados de acordo com a invenção podem ser um anestésico local injetável.

Em uma modalidade particularmente preferencial da invenção o agente ativoanestésico é o anestésico local lignocaína.

Medicamentos fabricados de acordo com esta modalidade dainvenção são adequados para uso em todos os contextos nos quias anesté-sicos podem ser administrados por injeção. Exemplos de semelhantes con-textos serão de conhecimento geral das pessoas versadas e são considera-dos alhures na especificação.

No entanto, há uma série de contextos nos quais medicamentosfabricados de acordo com a invenção particularmente beneficamente usadospara prevenir ou reduzir dor de injeção associada com a injeção de anesté-sicos locais.

Portanto em um exemplo preferencial, medicamentos fabricadosde acordo com a presente invenção podem ser usados para prevenir ou re-duzir dor de injeção associada com a injeção de anestésicos locais na boca.Foi demostrado que dor de injeção associada cmo injeção de anestésicoslocais na boca é particularmente traumática para pacientes e acredita-se queeste aumento em trauma surja em conseqüência do fato de que a dor é per-cebida como associada com a cabeça do paciente. Esta localização tantoaumenta o grau da dor de injeção percebida pelo paciente quanto tambémamplifica o aborrecimento de semelhante dor. Além disso, a percepção dedor aumentada pelo paciente também exacerba o trauma experimentado porum profissional médico ou dentário administrando semelhantes injeções.

Medicamentos fabricados de acordo com a invenção tambémpodem ser usados para a prevenção ou redução da dor de injeção associa-da com injeções de anestésico em outros sítios ou nas cabeças dos pacien-tes, particularmente com injeção de anestésico em sítios sobre a face dospacientes.

Conforme descrito previamente, os medicamentos da invençãotambém podem ser usados como "veículos" para agentes ativos diagnósti-cos, deste modo reduzindo ou prevenindo dor de injeção que pode ser asso-ciada de modo diverso com a administração do agente ativo diagnóstico.Exemplos de agentes ativos diagnósticos que podem ser administrados porinjeção, e que portanto podem ser vantajosamente incorporados em medi-camentos fabricados de acordo com a invenção incluem agentes radiopacos.Os agentes ativos diagnósticos referidos são administrados a um pacientepor modo de injeção (por exemplo, nos vasos sangüíneos ou no fluido cere-brospinal) e sua capacidade para absorver raios X usados como um auxíliopara diagnose. Exemplos de agentes ativos diagnósticos adequados quepodem ser incorporados em medicamentos fabricados de acordo com a in-venção incluem diatrizoatos, iohexol, iopamidol, iotalamato, ioversol, ioxagla-to, e metrizamida. Estes agentes ativos diagnósticos radiopacos podem serusados no diagnóstico de doenças ou condições tais como problemas dotrato biliar, doenças dos vasos sangüíneos, doenças dos vasos sangüíneosdo cérebro, doenças dos vasos sangüíneos do coração, doenças cerebrais etumores, lesões de mama, doença do coração, fluxo reduzido de fluido cere-brospinal no cérebro, doenças renais, doenças das articulações, doençashepáticas, doenças do pâncreas, doenças espinhais tais como doenças dodisco espihnal, doenças do baço, problemas estomacais e intestinais, ouproblemas do trato urinário.

Medicamentos fabricados de acordo com a invenção podem in-corporar vantajosamente agentes ativos cosméticos. Há muitos agentes ati-vos cosméticos que são tipicamente administrados a pacientes por meio deinjeção. Por exemplo, injeções de toxina botulínica (mais comumente conhe-cidas como injeções de "botox") são geralmente administradas por injeçãointradérmica da toxina em um sítio requerido de um paciente. Injeções detoxina botulínica são freqüentemente administradas em sítios sobre a faceou o pescoço de pacientes sendo tratados, e esta administração é normal-mente associada com dor de injeção que pode ser aliviada pela incorpora-ção de toxina botulínica em medicamentos fabricados de acordo com a invenção.

Outro procedimento cosmético envolvendo administração deagentes ativos cosméticos por injeção, e portanto dor de injeção associada,é a injeção de enchimentos cosméticos. Estes agentes ativos (os quais tipi-camente incluem colágeno, ácido hialurônico, gordura e outras substânciasrelacionadas) podem ser administrados por injeção em sítios onde é desejá-vel "encher" a pele, por exemplo, preenchimento de rugas associadas comenvelhecimento, aumentando o perfil dos lábios, ou preenchimento de cica-trizes tais como as provocadas por acne. A dor de injeção associada com aadministração de enchimentos cosméticos pode ser prevenida ou reduzidapela incorporação de enchimentos cosméticos adequados em medicamentosfabricados de acordo com a invenção.

Os inventores descobriram que a prevenção ou redução da dorde injeção é proporcionada por medicamentos fabricados de acordo com ainvenção com referência a todas as vias de injeção investigadas.

A título de exemplo, os inventores descobriram que medicamen-tos de acordo com a invenção podem ser usados para a prevenção ou redu-ção da dor de injeção associada com injeção intradérmica. Por conseguinte,em uma modalidade preferencial da invenção um medicamento adequadopode ser um medicamento injetável intradermicamente para a prevenção ouredução da dor de injeção associada com injeção intradérmica.

Os inventores também descobriram que medicamentos de a-cordo com a invenção podem ser usados para a prevenção ou redução dador de injeção associada com injeção subcutânea. Por conseguinte, em ou-tra modalidade preferencial da invenção um medicamento adequado podeser um medicamento injetável por via subcutânea para a prevenção ou redu-ção da dor de injeção associada com injeção subcutânea.

Os inventores adicionalmente descobriram que medicamentosde acordo com a invenção podem ser usados para a prevenção ou reduçãoda dor de injeção associada com injeção intravenosa. Conforme mencionadopreviamente, medicamentos fabricados de acordo com a invenção podemser vantajosamente usados em injeções intra-vasos sangüíneos uma vezque têm a capacidade de prevenir ou reduzir dor de injeção sem contribuirpara constricção dos vasos sangüíneos. Por conseguinte, em uma modali-dade adicionalmente preferencial da invenção, um medicamento adequadopode ser um medicamento injetável por via intravenosa para a prevenção ouredução da dor de injeção associada com injeção intravenosa.

Os inventores ainda adicionalmente descobriram que medica-mentos de acordo com a invenção podem ser usados para a prevenção ouredução da dor de injeção associada com injeção intramuscular. Por conse-guinte, em uma modalidade ainda adicionalmente preferencial da invençãoum medicamento adequado pode ser um medicamento injetável por via in-tramuscular para a prevenção ou redução da dor de injeção associada cominjeção intramuscular.

Os inventores ainda adicionalmente descobriram que medica-mentos de acordo com a invenção podem ser usados para a prevenção ouredução da dor de injeção associada com injeção intraperitoneal. Por conse-guinte, em uma modalidade ainda adicionalmente preferencial da invençãoum medicamento adequado pode ser um medicamento injetável por via in-traperitoneal para a prevenção ou redução da dor de injeção associada cominjeção intraperitoneal.

É particularmente preferencial que medicamentos fabricados deacordo com a invenção podem ser formulados para injeção intradérmica, oupodem ser formuladas para injeção subcutânea. Formulações típicas ade-quadas para injeção intradérmica e/ou injeção subcutânea serão de conhe-cimento geral daqueles versados na técnica.

Embora as composições farmacêuticas e os métodos de trata-mento da presente invenção sejam particularmente adequados para uso emseres humanos, e tenham sido largamente descritos com referência a seme-lhante uso, será reconhecido que também são suscetíveis a uso em animaisnão humanos; e particularmente em animais domésticos ou agrícolas taiscomo cães, gatos, gado vacum e cavalos.

A invenção será adicionalmente descrita, a título de exemplo,com referência aos Resultados Experimentais e Figuras anexados, nasquais:

A Figura 1 ilustra membros da superfamília TGF-p, e as rela-ções entre membros da superfamília;

A Figura 2 ilustra as seqüências de aminoácidos dos membrosda superfamília TGF-β TGF-P1 (Seqüência ID No. 1), TGF-p2 (Seqüência IDNo. 2) e TGF-P3 (Seqüência ID No. 3); e

A Figura 3 ilustra, nos painéis 3A a 3J, os resultados de experi-mentos para comparar a atividade biológica inerente do membro da super-família TGF-β TGF-P3 quando incorporado em composições farmacêuticasde acordo com a invenção, ou em composições farmacêuticas da técnicaanterior. A Figura 3A mostra uma primeira curva padrão gerada usando aformulação da técnica anterior DS11, na qual TGF-p3 tem uma IC50 de34,793 pg/mL. A Figura 3B mostra uma segunda curva padrão gerada usan-do a formulação da técnica anterior DS11, na qual TGF-p3 tem uma IC50 de24,136 pg/mL A Figura 3C mostra uma terceira curva padrão gerada usandoa formulação da técnica anterior DS 11, na qual TGF-P3 tem uma IC50 de22,055 pg/mL. A Figura 3D mostra uma quarta curva padrão gerada usandoa formulação da técnica anterior DS11, na qual TGF-p3 tem uma IC50 de30,562 pg/mL. A Figura 3E mostra uma quinta curva padrão gerada usandoa formulação da técnica anterior DS11, na qual TGF-P3 tem uma IC50 de39,973 pg/mL. A Figura 3F mostra uma primeira curva padrão gerada usan-do uma formulação de maltose de acordo com a invenção, na qual TGF-p3tem uma IC50 de 8,758 pg/mL. A Figura 3G mostra uma segunda curva pa-drão gerada usando uma formulação de maltose de acordo com a invenção,na qual TGF-p3 tem uma IC5o de 5,957 pg/mL. A Figura 3H mostra uma ter-ceira curva padrão gerada usando uma formulação de maltose de acordocom a invenção, na qual TGF^3 tem uma IC5o de 7,72 pg/mL. A Figura 31mostra uma quarta curva padrão gerada usando uma formulação de maltosede acordo com a invenção, na qual TGF-p3 tem uma IC50 de 7,31 pg/mL. AFigura 3J mostra uma quinta curva padrão gerada usando uma formulaçãode maltose de acordo com a invenção, na qual TGF^3 tem uma IC50 de6,798 pg/mL.

A Tabela 1 compara a quantidade de um membro da superfamí-Iia TGF-β recuperável a partir de composições farmacêuticas da invençãocom a quantidade recuperável a partir de composições conhecidas da técni-ca anterior;

A Tabela 2 compara a atividade biológica de membro da super-família TGF-β recuperados a partir de composições farmacêuticas de acordocom a invenção com a atividade biológica de membro da superfamília TGF-βrecuperados a partir de composições da técnica anterior conhecidas;

A Tabela 3 mostra os resultados de uma avaliação da dor da in-jeção comparando os resultados ontidos usando medicamentos fabricadosde acordo com a invenção com resultados obtidos usando composições datécnica anterior; e

A Tabela 4 resume os resultados mostrados na Tabela 4.

RESULTADOS EXPERIMENTAIS

Material em volume de TGF^3

O membro da superfamília TGF-β TGF^3 foi fornecido em umasolução de matéria-prima em uma concentração de 9,1 mg/mL em ácido a-cético a 20 mM e 20% (em vol/vol) de álcool isopropílico. Esta solução dematéria-prima foi diluída serialmente para produzir composições incorporan-do o membro da superfamília TGF-β TGF^3. As concentrações de TGF^3incorporadas nas composições usadas nos seguintes experimentos foramconforme descrito abaixo.

A. Recuperação de TGF^3 de seringas enchidas previamente con-tendo composições farmacêuticas.

O experimento seguinte investigou a recuperação do membro dasuperfamília TGF-β TGF-p3 das seringas enchidas previamente contendocomposições quer de acordo com a invenção, quer de acordo com a técnicaanterior.

Al. Produção de seringas enchidas previamente.

Composições incorporando o membro da superfamília TGF-βTGF-P3 em uma concentração de 1 μg/100 μΙ_ foram produzidas por diluiçãoasséptica serial a partir do material em volume descrito acima. Os diluentesusados para produzir as composições de ensaio de acordo com a presenteinvenção foram como se segue:

i) 0,25 M de maltose (equivalente a 90 mg/ml);

ii) 0,25 M de glicose (equivalente a 45 mg/ml);

iii) 0,25 M de sacarose (equivalente a 86 mg/ml); e

iv) 0,25 M de manose (equivalente a 45 mg/ml).

Para fins de comparação, uma composição representando com-posições preferenciais da técnica anterior foi produzida por diluição da solu-ção de matéria-prima para produzir uma solução a 1 μg/100 μΙ_ de TGF-P3em DS11 (um diluente compreendendo solução salina tamponada com fos-fato PBS e 5% (em peso/ensaio) de manitol).

Amostras de 750 μί de cada uma das composições formadasforam colhidas em seringas estéreis individuais de I mL. Portanto cada se-ringa continha uma quantidade definida de uma composição experimental oude comparação na qual foi incorporada uma quantidade conhecida do mem-bro da superfamília TGF-β TGF-p3. As seringas contendo as composiçõesda invenção e aquelas contendo a composição da técnica anterior foram emseguida armazenadas a 4°C por uma semana. Estas condições de armaze-namento experimental proporcionaram um modelo da maneira típica na qualas composições farmacêuticas são armazenadas refrigeradas antes de suaaplicação terapêutica.

De modo a avaliar a quantidade de TGF^3 recuperável a partirdas composições da invenção e composição da técnica anterior, os conteú-dos das seringas foram recuperados (através de expulsão da seringa) e aquantidade de proteína TGF^3 recuperável foi avaliada por ELISA conformedescrito abaixo.

A2. Avaliação de recuperação de TGF-β por ELISA

O seguinte ensaio foi usado para comparar a recuperação domembro da superfamília TGF-β TGF-p3 a partir de composições farmacêuti-cas de acordo com a invenção com a quantidade de TGF-P3 recuperável apartir de composições da técnica anterior. O ensaio pode ser prontamenteadaptado, por substituição de anticorpos de captura e de detecção adequa-dos e uso de uma curva padrão adequada, para permitir a avaliação da re-cuperação de outros membros da superfamília TGF-β a partir de composi-ções farmacêuticas de interesse (por exemplo, outras composições de acor-do com a invenção, ou outras composições controle conhecidas da técnicaanterior).

A2.1. Preparação de lâminas para ELISA.

Lâminas de noventa e seis cavidades (Falcon 353912) foramrevestidas com 100 μί./cavidade de um de anticorpo captura monoclonal an-ti-TGF^3 (R&D Systems MAB643) diluído em PBS para uma concentraçãode 2 μg/mL. As lâminas foram em seguida seladas e incubadas de um diapara o outro em temperatura ambiente para permitir que o anticorpo venha aaderir às cavidades. Depois de incubação cada cavidade foi aspirada e lava-da três vezes com 300 pL/cavidade (cada lavagem) de tampão de lavagem(compreendendo 0,05% (v/v) de Tween 20 em PBS, pH 7.4). Sítios de liga-ção de proteína não-específicos foram bloqueados pela adição de 150pL/cavidade de PBS contendo 1% (em peso/vol) de BSA, 5% (em peso/vol)de sacarose e 0,05% (em peso/vol) de azida de sódio. Cavidades contendoesta solução foram incubadas em temperatura ambiente por uma hora.

A2.2. Preparação da Curva Padrão de TGF-P3

Todas as diluições de amostras e padrão foram preparadas emou solução a 0,25 M de açúcar (isto é, maltose, glicose, manose ou sacaro-se) ou diluente ELISA (0,1% (em peso/vol) de BSA, 0,05% (v/v) de Tween 20em solução salina Tris-tamponada pH 7.3).Foi preparada uma série padrão de TGF-P3 usando TGF-p3 re-combinante humano (R&D Systems 243-B3) ou TGF-P3 (da solução de ma-téria-prima em uma concentração de 9,1 mg/mL em 20 mM de ácido acéticoe 20% (v/v) de álcool isopropílico), variando de 31,25 pg/mL a 2000 pg/mL.

A2.3. Prova de Recuperação

Um ensaio de 100 μL ou das soluções de amostra ou de padrãofoi adicionado a cada cavidade. A lâmina foi em seguida selada e incubadapor 1,5 hora em temperatura ambiente. As cavidades foram em seguida as-piradas e lavadas um total de três vezes com 300 pL/cavidade de tampão delavagem (conforme acima) para cada lavagem.

Uma vez que as cavidades tinham sido aspiradas e lavadas, umensaio de 100 μΙ_ de anticorpo de detecção anti-TGF-p3 biotinilado (R&DSystems BAF243) diluído para 100 ng/mL em diluente ELISA (como antes)foi adicionado a cada cavidade. A lâmina foi em seguida selada e incubadapor 1,5 hora em temperatura ambiente. As cavidades foram em seguida as-piradas e lavadas um total de três vezes com 300 pUcavidade de tampão delavagem (como antes) apra cada lavagem. Um ensaio de 100 pL/cavidadede Estreptavidina HRP (Dako P0397) diluído a 1:5000 em diluente ELISA foiem seguida adicionado a cada cavidade, e a lâmina foi selada e incubadapor 30 minutos em temperatura ambiente. As cavidades foram em seguidaaspiradas e lavadas um total de três vezes, usando 300 pL/cavidade detampão de lavagem para cada lavagem. Um ensaio de 100 μί, de Soluçãode Substrato (R&D Systems DY999) foi em seguida adicionado a cada cavi-dade, a lâmina foi coberta e incubada por 20 minutos em temperatura ambi-ente. Um ensaio de 50 μί, de Solução de Interrupção (0,5 M de H2SO4) foiem seguida adicionado a cada cavidade. A densidade ótica do conteúdo decada cavidade foi em seguida determinada, dentro de 30 minutos, usandouma leitora de microlâminas em um comprimento de onda de 450 nm (corre-ção de comprimento de onda ajustada para 570 nm). A quantidade de TGF-β3 presente nas amostras, representando TGF-P3 recuperável a partir dascomposições, foi em seguida determinada por referência à curva padrão. Osresultados são expressados na Tabela 1 abaixo, como o aumento em vezesde material recuperado da seringa comparado com a formulação DS11 (ma-nitol) representativa de composições preferenciais conhecidas da técnicaanterior.

A3. Resultados do ensaio de Recuperação

O TGF-P3 recuperável detectado em uma formulação dePBS/Manitol (DS11) foi 284,8 (± 0,03) ng/100 μL.

O aumento múltiplo na recuperação de TGF-p3 das seringas contendo com-posições de acordo com a invenção depois de uma semana de armazena-mento a 4°C (comparado com recuperação de TGF-p3 de seringas contendoa formulação de DS11 submetida às mesmas condições de armazenamento)é mostrado abaixo na Tabela 1.

Os resultados indicam claramente que as composições farma-cêuticas de acordo com a presente invenção possibilitam recuperação gran-damente aumentada do membro da superfamília TGF-β incorporado nasmesmas comparadas com o nível de recuperação possível usando composi-ções preferenciais conhecidas da técnica anterior.

Tabela 1

<table>table see original document page 58</column></row><table>

B. Atividade Biológica dos membros da superfamília TGF-β incor-porados em composições farmacêuticas de acordo com o primeiro as-pecto da invenção.

A atividade biológica inerente do membro da superfamília TGF-βTGF^3 incorporado em composições da invenção foi determinada de acordocom o seguinte ensaio, o qual utiliza a capacidade de membros da superfa-mília TGF-β para inibir a proliferação de células epiteliais de pulmão de Mink.A atividade biológica do membro da superfamília TGF-β incorporado podeser então avaliada determinando o valor da sua IC50 (a concentração na qualse observa 50% de inibição da reação de proliferação celular).Este ensaio representa um meio adequado pelo qual pode serdeterminada a atividade biológica de outros membros de TGF-β incorpora-dos em composições da invenção, ou em composições conhecidas usadaspara fins de comparação.

BI. Detalhes experimentais do ensaio Prova da Atividade Biológica.

Em resumo, a atividade biológica de TGF-P3 incorporada emuma composição de acordo com o primeiro aspecto da invenção foi determi-nada por medição da inibição da proliferação de células epiteliais pulmona-res de Mink (Mv-I-Lu) (ATCC Cat no CCL-64) produzida pelo membro dasuperfamília TGF-β. A inibição da proliferação foi avaliada usando um rea-gente MTT (Sigma Cat No M2279). MTT é Brometo de 3-(4,5-dimetil-2- tia-zolil)-2,5-difenil-2H-tetrazólio, um sal de tetrazólio solúvel que é convertidoem seu produto de formazano insolúvel pela atividade metabólica (deidroge-nases mitocondriais) das células. Os cristais de formazano insolúveis sãosolubilizados com isopropanol acidificado e a intensidade da solução resul-tante é medida colorimetricamente em um comprimento de onda de 570 nm.

Em resumo, Ix104/ml de células epitelial pulmonares de Minkforam inoculadas em lâminas de 96 cavidades em 100 μΙ_ de meio de cultura(DMEM + 10% (v/v) de Soro Bovino Fetal, 20 mM de Glutamina, 0,1 M deHepes) por cavidade. As células foram incubadas a 37°C em 5% (v/v) deCO2, e deixadas para fixar por 24 horas. TGF-p3 foi diluído logo antes do uso(isto é, sem armazemamento) em DS11, compreendendo solução salinatamponada com fosfato (PBS) contendo 5% (em peso/vol) de manitol, ou0,25 M de maltose para gerar curvas padrão em dez vezes a concentraçãode ensaio final de 1,9-500 pg/mL. As amostras foram em seguida adicional-mente diluídas a 1:5 em meio de cultura celular antes da adição de 100 μΙ_destas amostras a cada cavidade contendo 100 μΙ_ de meio de cultura celu-lar (resultando em uma diluição adicional de 1:2 na cavidade e portanto con-centrações de ensaio finais de 1,9-500 pg/mL). As células de cada cavidadeforam em seguida expostas a amostras por cinco dias a 37°C em 5% (v/v)de CO2. Ao final da exposição, 50 μΙ_ de reagente MTT (2 mg/mL de matéria-prima diluída em PBS) foi em seguida adicionado a cada cavidade. As lâmi-nas foram em seguida incubadas por um adicional de quatro horas a 37°Cem 5% (v/v) CO2- Depois deste período o sobrenadante de cada cavidade foiremovido e os cristais de formazano precipitados foram dissolvidos pela adi-ção de 100 μLycavidade de isopropanol ácido. O MTT solubilizado em cadacavidade foi em seguida quantificado usando uma leitora de lâminas de 96cavidades em um comprimento de onda de 570 nm. Os dados foram plota-dos usando XLFit 3 e os valores da IC5o calculados por cinco curvas indivi-duais para cada formulação. O valor da IC50 para cada formulação foi emseguida expressado como a média (± desvio padrão) destas curvas padrãoindividuais.

B2. Resultados da Prova de Atividade Biológica.

Os resultados de cinco repetições da prova de atividade biológi-ca usando tanto uma composição conhecida da técnica anterior (Figuras 3Aa 3E) quanto uma composição da invenção (Figuras 3F a 3J) são mostradosna Figura 3. As médias (± o desvio padrão) das curvas individuais mostradasna Figura 3 são proporcionadas na Tabela 2.

Os resultados claramente ilustram que o valor da IC50 (para ainibição da proliferação de células epiteliais de pulmão de mink) de TGF-P3incorporado em composições farmacêuticas de acordo com a invenção égrandemente reduzido comparado com o valor obtido para TGF-P3 incorpo-rado em composições da técnica anterior preferenciais. Esta redução no va-lor da IC50 indica que a quantidade do membro da superfamília TGF-β TGF-β3 requerido para obter 50% da atividade biológica exercida pela citocina éreduzida quando incorporada nas composições farmacêuticas da invenção.Por conseguinte, pode ser visto que a atividade biológica do membro da su-perfamília TGF-β incorporado nas composições da invenção é muito aumen-tada em relação à atividade biológica que pode ser obtida usando composi-ções da técnica anterior.Tabela 2

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D. Sumário dos Estudos AeB

Composições farmacêuticas de acordo com a presente invençãopermitem níveis surpreendentemente elevados de recuperação de membrosda superfamília TGF-β incorporados nas composições comparadas com ascomposições preferenciais descritas na técnica anterior.

Além disso, a atividade biológica dos membros da superfamíliaTGF-β incorporados nas composições é surpreendentemente aumentadacomparada com membros da superfamília TGF-β incorporados nas compo-sições da técnica anterior.

E. Avaliação de Dor Localizada e Eritema Associados comInjeção Intradérmica de Formulações

Foi conduzido um estudo para avaliar dor localizada e eritemaassociados com injeção intradérmica de medicamentos fabricados de acordocom a invenção e a dor e o eritema associados com injeções controle decomposições da técnica anterior.

Soluções injetáveis experimentais foram preparadas conformedescrito acima.

Em resumo, um ensaio de 100 μL, de cada formulação descritaacima foi injetado por via intradérmica na face interna dos braços superioresde um voluntário. Além do controle DS11 descrito acima, uma solução doanestésico local conhecido lignocaína também foi usada como um controleadicional. A dor na injeção e o eritema foram classificados pelo voluntário epor um clínico.

Foram empreendidas avaliações separadas de dor local e eri-tema associados com cada uma das soluções mostradas na Tabela 3. Tantoo voluntário quanto o clínico empreenderam estas avaliações. A extensão dador ou eritema associados com as diferentes formulações usadas foi classifi-cada com base nas seguintes categorias (listadas por gravidade ascendente):

i) nenhuma

ii) mínima

iii) leve

iv) acentuada

Os resultados da avaliação são mostrados na Tabela 3 e estessão adicionalmente resumidos na Tabela 4.

Os resultados indicam que medicamentos fabricados de acordocom a invenção consistentemente dão origem a redução da dor de injeçãoquando comparados com composições injetáveis conhecidas da técnica an-terior.

Os resultados claramente ilustram a adequabilidade de medi-camentos fabricados de acordo com a invenção para uso como veículos ca-pazes de reduzir a dor de injeção que de outro modo seria associada cominjeção de outras substâncias. Isto é particularmente ilustrado pelo achadode que medicamentos de acordo com a invenção que incorporaram manitolderam origem a menos dor de injeção do que deram injeções de composi-ções à base de manitol somente.

F. Sumário do Estudo E

Medicamentos fabricados de acordo com a presente invençãopossuem uma surpreendente capacidade para prevenir ou reduzir dor deinjeção. Esta capacidade é exibida tanto em comparação com agentes anes-tésicos conhecidos (tais como lignocaína) quanto em comparação com me-dicamentos injetáveis preferenciais existentes (tais como a formulação DS11à base de manitol). As propriedades benéficas de medicamentos fabrocadpsde acordo com a invenção são apresentadas em todos os açúcares testadosaté o momento, mas não são apresentadas por uma formulação consistindodo álcool de açúcar manitol.Tabela 3

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Tabela 4

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Claims

1. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de quecompreende um membro da superfamília TGF-β e um açúcar proporcionadoem concentração suficiente para permitir aprimorada recuperação e/ouaumento da atividade biológica do membro da superfamília TGF-β.

2. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1,caracterizada pelo fato de que o açúcar é selecionado entre o grupocompreendendo maltose, sacarose, glicose e manose.

3. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pelo fato de que o açúcar é maltose.

4. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pelo fato de que o açúcar é selecionado entre o grupocompreendendo glicose e manose.

5. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o açúcar está presenteem uma concentração de mais de 50 mg/mL.

6. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 5,caracterizada pelo fato de que o açúcar está presente em uma concentraçãode entre 51 e 200 mg/mL.

7. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 5,caracterizada pelo fato de que o açúcar está presente em uma concentraçãode entre 60 e 150 mg/mL.

8. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 5,caracterizada pelo fato de que o açúcar está presente em uma concentraçãode entre 70 e 100 mg/mL.

9. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 5,caracterizada pelo fato de que o açúcar está presente em uma concentraçãode entre 80 e 95 mg/mL.

10. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 5,caracterizada pelo fato de que o açúcar está presente em uma concentraçãode entre 85 e 90 mg/mL.

11. Composição farmacêutica solúvel, caracterizada pelo fato deque compreende um membro da superfamília TGF-β e um açúcar, em que oaçúcar é proporcionado em uma proporção tal que, na dissolução dacomposição para obter uma solução fisiológica, o açúcar é proporcionadoem concentração suficiente para permitir aprimorada recuperação e/ouaumento da atividade biológica do membro da superfamília TGF-β.

12. Composição solúvel de acordo com a reivindicação 11,caracterizada pelo fato de que o açúcar é proporcionado em uma proporçãotal que na dissolução da composição para obter uma solução fisiológica, aconcentração do açúcar é maior do que 50 mg/ml_.

13. Composição farmacêutica solúvel, caracterizada pelo fato deque compreende um membro da superfamília TGF-β, uma fonte de íonssódio, e um açúcar, as quantidades da fonte de íons sódio e do açúcarsendo tais que na dissolução da composição para produzir umaconcentração de sódio de entre 130 e 160 mEq/L, a concentração do açúcaré suficiente para permitir aprimorada recuperação e/ou aumento da atividadebiológica do membro da superfamília TGF-β.

14. Composição solúvel de acordo com a reivindicação 13,caracterizada pelo fato de que as quantidades da fonte de íons sódio e doaçúcar são tais que na dissolução da composição para produzir umaconcentração de sódio de entre 130 e 160 mEq/L, a concentração do açúcaré maior do que 50 mg/ml_.

15. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 14, caracterizada pelo fato de que o membro dasuperfamília TGF-β é selecionado entre o grupo compreendendo TGF-β!,TGF^eTGF-P3.

16. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 15,caracterizada pelo fato de que o membro da superfamília TGF-β é TGF^3.

17. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 16, caracterizada pelo fato de que a composição é parauso na cura de feridas.

18. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 17,caracterizada pelo fato de que a composição é para uso para promover curade feridas e/ou para prevenir ou inibir a formação de cicatriz.

19. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 18, caracterizada pelo fato de que a composição éformulada para administração por injeção.

20. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 19,caracterizada pelo fato de que a composição é formulada para administraçãopor injeção intradérmica.

21. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 19,caracterizada pelo fato de que a composição é formulada para administraçãopor injeção subcutânea.

22. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 19,caracterizada pelo fato de que a composição é formulada para administraçãopor injeção intravenosa.

23. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 19,caracterizada pelo fato de que a composição é formulada para administraçãopor injeção intramuscular.

24. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 23, caracterizada pelo fato de que a composição éformulada para administração como um instilado intraperitoneal.

25. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 24, caracterizada pelo fato de que a composição éformulada para administração como uma gota ocular.

26. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 25, caracterizada pelo fato de que a composição éformulada para administração através de um stent.

27. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 26, caracterizada pelo fato de que a composição éformulada para administração por um veículo de liberação lenta.

28. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 27, caracterizada pelo fato de que a composiçãocompreende um agente espessante.

29. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 28, caracterizada pelo fato de que a composiçãocompreende um agente tixotrópico.

30. Recipiente enchido previamente, caracterizado pelo fato deque compreende uma composição farmacêutica, como definida em qualqueruma das reivindicações 1 a 29.

31. Recipiente enchido previamente, de acordo com areivindicação 30, caracterizado pelo fato de que o recipiente é uma seringa.

32. Recipiente enchido previamente, de acordo com areivindicação 30, caracterizado pelo fato de que o recipiente é um frasco.

33. Método de tratamento, caracterizado pelo fato de quecompreende administrar a um indivíduo que necessite da atividadeterapêutica de um membro da superfamília TGF-β, uma quantidadeterapêutica de uma composição como definida em qualquer uma dasreivindicações 1 a 29.

34. Método para promover cura de ferida e/ou inibir a formaçãode cicatriz, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrara um paciente que necessite de semelhante promoção e/ou inibição, umaquantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica comodefinida em qualquer uma das reivindicações 1 a 29.

35. Uso de um açúcar, caracterizado pelo fato de ser paraaprimorar a recuperação e/ou aumentar a atividade biológica de um membroda superfamília TGF-β, incorporado em uma composição farmacêutica.

36. Uso de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelofato de que o açúcar é selecionado entre o grupo consistindo em maltose,saca rose, glicose e manose.

37. Uso de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelofato de que o açúcar é maltose.

38. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a-37, caracterizado pelo fato de que o açúcar está presente em umaconcentração de mais de 50 mg/mL

39. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a-38, caracterizado pelo fato de que o membro da superfamília TGF-β éselecionado entre o grupo consistindo de TGF-P1, TGF-p2 e TGF^3.

40. Uso de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelofato de que o membro da superfamília TGF-β é TGF-p3.

41. Uso de um açúcar, caracterizado pelo fato de ser nafabricação de um medicamento para a prevenção ou redução de dor deinjeção.

42. Uso de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelofato de que o açúcar é selecionado entre o grupo compreendendo maltose,sacarose, glicose e manose.

43. Uso de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelofato de que o açúcar é maltose.

44. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 41 a 43, caracterizado pelo fato de que o açúcar é proporcionado em umaconcentração de mais de 50 mg/mL.

45. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 41 a 44, caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um medicamentoinjetável.

46. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 41 a 45, caracterizado pelo fato de que o medicamento adicionalmentecompreende um agente ativo terapêutico.

47. Uso de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelofato de que o medicamento compreende um agente ativo terapêutico capazde promover cura de ferida.

48. Uso de acordo com a reivindicação 46 ou 47, caracterizadopelo fato de que o medicamento compreende um agente ativo terapêuticocapaz de reduzir cicatrização.

49. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 46 a 48, caracterizado pelo fato de que o agente ativo terapêutico compreendeum membro da superfamília TGF-β.

50. Uso de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pelofato de que o membro da superfamília TGF-β é selecionado entre o grupocompreendendo TGF-βι, TGF^2 e TGF^3.

51. Uso de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelofato de que o membro da superfamília TGF-β é TGF-p3.

52. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 41 a-51, caracterizado pelo fato de que o medicamento adicionalmentecompreende um agente ativo anestésico.

53. Uso de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelofato de que o agente ativo anestésico é um anestésico local injetável.

54. Uso de acordo com a reivindicação 53, caracterizado pelofato de que o medicamento adicionalmente compreende lignocaína.

55. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 41 a-54, caracterizado pelo fato de que o medicamento adicionalmentecompreende um agente ativo cosmético.

56. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 41 a-55, caracterizado pelo fato de que o medicamento adicionalmentecompreende um agente ativo diagnóstico.