BG64422B1 - Бактерия lастоbacillus неlvетiсus, притежаваща висока способност да продуцира трипептид, ферментационен млечен продукт и метод за получаването му - Google Patents
Бактерия lастоbacillus неlvетiсus, притежаваща висока способност да продуцира трипептид, ферментационен млечен продукт и метод за получаването му Download PDFInfo
- Publication number
- BG64422B1 BG64422B1 BG104382A BG10438200A BG64422B1 BG 64422 B1 BG64422 B1 BG 64422B1 BG 104382 A BG104382 A BG 104382A BG 10438200 A BG10438200 A BG 10438200A BG 64422 B1 BG64422 B1 BG 64422B1
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- lactic acid
- pro
- fermentation
- milk
- strain
- Prior art date
Links
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 46
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 46
- 240000002605 Lactobacillus helveticus Species 0.000 title claims abstract description 28
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 title claims abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 166
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims abstract description 66
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 66
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 55
- DOFAQXCYFQKSHT-SRVKXCTJSA-N Val-Pro-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 DOFAQXCYFQKSHT-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims abstract description 47
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 27
- 235000013967 Lactobacillus helveticus Nutrition 0.000 claims abstract description 23
- 229940054346 lactobacillus helveticus Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 claims abstract description 23
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 claims abstract description 19
- 235000020244 animal milk Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 108010015385 valyl-prolyl-proline Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 229960000448 lactic acid Drugs 0.000 claims description 80
- 235000014048 cultured milk product Nutrition 0.000 claims description 17
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 17
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 15
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 13
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 13
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 claims description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 6
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 6
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 claims description 5
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 claims description 5
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims description 4
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 4
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 4
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 4
- 101100148606 Caenorhabditis elegans pst-1 gene Proteins 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims description 3
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims description 3
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims description 3
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims description 3
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 3
- 230000009603 aerobic growth Effects 0.000 claims description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 3
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims description 3
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 claims description 3
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 3
- 229940001941 soy protein Drugs 0.000 claims description 3
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 claims description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 claims description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 2
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 2
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000001497 healthy food Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 claims description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 claims description 2
- 235000013322 soy milk Nutrition 0.000 claims description 2
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 claims 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 claims 1
- 235000021067 refined food Nutrition 0.000 claims 1
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 abstract description 5
- 230000002180 anti-stress Effects 0.000 abstract description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 abstract 1
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 description 43
- UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 1-[1-[2-[[5-amino-2-[[1-[5-(diaminomethylideneamino)-2-[[1-[3-(1h-indol-3-yl)-2-[(5-oxopyrrolidine-2-carbonyl)amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbon Chemical compound C1CCC(C(=O)N2C(CCC2)C(O)=O)N1C(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C1CCC(=O)N1 UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 102000004270 Peptidyl-Dipeptidase A Human genes 0.000 description 19
- 108090000882 Peptidyl-Dipeptidase A Proteins 0.000 description 19
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 17
- 239000000047 product Substances 0.000 description 17
- NUHSROFQTUXZQQ-UHFFFAOYSA-N isopentenyl diphosphate Chemical compound CC(=C)CCO[P@](O)(=O)OP(O)(O)=O NUHSROFQTUXZQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 102100026819 Inositol polyphosphate 1-phosphatase Human genes 0.000 description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 11
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 10
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 10
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 235000021001 fermented dairy product Nutrition 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N Glycerol 2-phosphate Chemical compound OCC(CO)OP(O)(O)=O DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 2
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 235000021552 granulated sugar Nutrition 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 208000021822 hypotensive Diseases 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- AAXWBCKQYLBQKY-IRXDYDNUSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[(2-benzamidoacetyl)amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)C=1C=CC=CC=1)C1=CN=CN1 AAXWBCKQYLBQKY-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5-tetrahydroxypentanal Chemical compound OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100035882 Catalase Human genes 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 108010028690 Fish Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 1
- 244000290333 Vanilla fragrans Species 0.000 description 1
- 235000009499 Vanilla fragrans Nutrition 0.000 description 1
- 235000012036 Vanilla tahitensis Nutrition 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 235000020167 acidified milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 108010016268 hippuryl-histidyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000020252 horse milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 238000002810 primary assay Methods 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 1
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000011699 spontaneously hypertensive rat Methods 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/13—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using additives
- A23C9/137—Thickening substances
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/147—Helveticus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Dairy Products (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретението се отнася до ферментационен млечен продукт, съдържащ млечнокисела бактерия, способна да продуцира голямо количество лактотрипептид, и активен ингредиент с хипотензивна активност и противостресов ефект, който може да бъде приеман като храна или напитка. Млечнокиселата бактерия от Lactobacillus helveticus има специфични бактериологични свойства, при култивиране в среда на животинско мляко, съдържащо 9% тегл. чисто обезмаслено мляко, тя продуцира трипептидите Val-Pro-Pro и ІІе-Pro-Pro и количество от 60 микро g, изразено с Val-Pro-Pro за ml среда, и проявява екстрацелуларна протеиназна активност, не по-ниска от 400 U/OD590. Изобретението се отнася също до щам Lactobacillus helveticus CM4, както и до ферментационен млечен продукт, получен чрез ферментация на животинско мляко с тази млечнокисела бактерия. а
Description
Област на техниката
Изобретението се отнася до нова млечно кисела бактерия Lactobacillus helveticus, която може да продуцира с висока ефективност определен трипептид, когато се култивират в среда на животинско мляко и която притежава висока извънклетъчна протеиназна активност, до ферментационен млечен продукт, съдържащ млечнокисела бактерия, и до метод за получаване на продукта.
Предшестващо състояние на техниката
Lactobacillus helveticus се използва отдавна като обичайна изходна млечнокисела бактерия за подквасване на мляко за получаване на млечнокисели продукти. Lactobacillus helveticus има висока протеолитична активност, по-специално, неговата извънклетъчна протеиназа, притежаваща висока активност, играе важна роля при ферментацията на животинско мляко. С други думи, извънклетъчната протеиназа разгражда протеините на животинското мляко за получаване на различни пептидни фрагменти. Получените пептиди по-нататък се подлагат на въздействието на пептидази, за да станат пептиди с по-ниско молекулно тегло. Известно е, че част от пептидите, получени в среда, дължащо се на въздействието на протеиназни ензими, се възприемат от клетките на млечнокиселата бактерия и се усвояват като източник на азот. Известно е също, че някои от продуцираните пептиди в средата притежават инхибиторна активност срещу ангиотензин конвертиращия ензим (АСЕ), който причинява хипертензия (J. Daily Sci. 78:777-783 (1995)).
Тъй като пептидите за инхибиране на АСЕ активността и потискане се увеличават при кръвно налягане, известни са много ефективни пептиди, като тези, получени от продукти на разграждане на млечни протеини, соеви протеини или рибни протеини. Например, Val-Pro-Pro и Пе-Рго-Рго (съкратено означени по- долу като VPP и IPP, съответно. Тези пептиди (общо отнесени по-долу към лактотрипептидите) са известни като пептиди, притежаващи АСЕ инхибираща активност, присъстващи в подквасено с Lactobacillus helveticus мляко. Потвърдено е с експерименти, използващи спонтанно хипертен зивен плъх, че тези лактотрипептиди притежават силен хипотензивен ефект (SHR) (J. Daity Sci. 78:12531257(1995)).
Обаче, съдържащото лактотрипептиди ферментирало мляко, получено чрез ферментация на животинско мляко с обичайни щамове Lactobacillus helveticus, трудно може да бъде приемано такова, каквото е, тъй като проявява висока киселинност, която се дължи на голямото количество млечна киселина, получена в процеса на ферментация. Разреждане на ферментиралото мляко води до силно понижаване количеството на лактотрипептидите.
Затова е желателно получаване на ферментирало мляко с по-високо съдържание на лактотрипептиди в сравнение със съдържанието на млечна киселина, получена във ферментиралото мляко. С добавяне на малко количество такова ферментирало мляко към различни храни и напитки, могат да бъдат изготвени по-лесно продукти, притежаващи функцията на лактотрипептидите.и да бъдат предоставени за консумация в приемлива форма. Обаче, никой от известните щамове млечнокисела бактерия не продуцират лактотрипептид с висока ефективност.
Техническа същност на изобретението
Обект на изобретението е нов щам млечнокисела бактерия, който може да продуцира голямо количество лактотрипептид с висока ефективност по отношение на количеството на получената млечна киселина.
Друг обект на изобретението е ферментирал млечен продукт, който съдържа лактотрипептида, притежаващ активности, като хипотензивна активност, и очакващ да има противостресов ефект, и щам млечнокисела бактерия, способен да продуцира голямо количество от този лактотрипептид и който може да бъде приеман с удоволствие в състава на храни или напитки, и метод за неговото получаване.
Съгласно изобретението се предлага млечнокисела бактерия от род Lactobacillus helveticus, притежаваща изброените бактериологични свойства, като тази бактерия, при култивиране в среда на животинско мляко, съдържаща 9% тегл. твърдо вещество в обезмаслено мляко, продуцира трипептидите Val-Pro-Pro и Пе-Рго-Рго в количество не по- малко от 60 pg, изразено в Val-Pro-Pro за ml среда, и тази бактерия проявява екстрацелуларна протеиназна активност не по-малко от 400 U/OD590:
Морфологични свойства:
1) Форма на клетката пръчица
2) Подвижност няма
3) Спорообразуване няма
4) Оцветяване по Грам позитивно Физиологични свойства
1) Продукция на катализа негативно
2) Продукция на индол негативно
3) Редуциране на нитрати негативно
4) Растеж в аеробна среда факултативен анаероб
5) Формиране на DL-млечна киселина от глюкоза с хомомлечна ферментация без образуване на газове
6) Разграждане на въглехидрати глюкоза + лактоза+ маноза + фруктоза + галактоза+ захарозамалтозаксилоза рамноза целобиозатрехалозамелибиозарафиноза стахиозаманитолсорбитолескулин салицин-
Съгласно изобретението предоставя се също така млечнокисела бактерия от Lactobacillus helveticus, която представлява щам Lactobacillus helveticus СМ4 (депозиран на 15 август 1997 г. в National Human-Technology Agency of Industrial Science and Technology, депозиран номер FERM BP-6060).
Съгласно изобретението предложена е също и млечнокисела бактерия Lactobacillus helveticus, притежаваща хромозомна ДНК, която дава ДНК фрагмент от 15 до 17 kb, когато посочената хромозомна ДНК се смила с рестрикционни ензими Pstl и EcoRL
Съгласно изобретението предложен е също и ферментационен млечен продукт, съдържащ ферментирало мляко, което включва посочената млечнокисела бактерия, и трипептид, избран от групата, състояща се от Val-Pro-Pro, Пе-Рго-Рго и смеси от тях. Съгласно изобретението предложен е също и метод за получаване на ферментационен млечен продукт, включващ ферментиране на среда, която съдържа хранителен продукт, избран от групата, състояща се от пептид, протеин и техни смеси, включ ващи последователностите Val-Pro-Pro и Пе-Рго-Рго, с млечнокиселата бактерия.
Пояснение на приложените фигури
Фигура 1 представлява снимка, показваща образците на електрофореза върху агарозна гел на хромозомни ДНК фрагменти от различни щамове Lactobacillus helveticus от пример 2.
Предпочитани варианти на изобретението
Млечнокиселата бактерия от изобретението принадлежи към Lactobacillus helveticus и се характеризира с това, че продуцира трипептидите Val-ProPro и Пе-Рго-Рго в количество не по-малко от 60 pg, и за предпочитане не по-малко от 70 pg Val-Pro-Pro за ml от средата, когато се култивира среда на животинско мляко, съдържаща 9% тегл. сухо вещество в обезмаслено мляко, и проявява извънклетъчна протеиназна активност не по-ниска от 400 U/OD^, за предпочитане не по-ниска от 430 U/OD590. Дефинираната лактотрипептидна продуктивност е индекс за отличаване на посочената млечнокисела бактерия от обичайната млечнокисела бактерия Lactobacillus helveticus. Например с този индекс се определя свойството на посочената млечнокисела бактерия да продуцира, при култивиране в животинско мляко, съдържащо 9% тегл. сухо вещество в обезмаслено мляко, лакготрипептиди в количество не по-малко от 60 pg, изразено с VPP за ml среда, които не биха могли да бъдат отделени от обичайната млечнокисела бактерия. Обикновено, колкото е по-ниско съдържанието на сухо вещество обезмаслено мляко в средата за култивиране, толкова по-малко е количеството на продуцираните лакготрипептиди. Колкото е по-високо съдържанието на сухо вещество в обезмаслено мляко, толкова по-голямо е количеството на лактотрипептидите.
Продуктивността на лактотрипептидите в качеството на индекс се измерва чрез етапите на инокулиране с млечнокисела бактерия на животинско мляко, като краве, козе, конско мляко и обезмасмени такива млека, съдържащи 9% тегл. твърдо вещество в безмаслено мляко, култивиране на бактерията при 37°С за 24 h за изготвяне на ферментирало мляко, центрофугиране на 1 ml ферментирало мляко при 15 000 об./min за 10 min, подлагане на супернатантата на измерване количествата на VPP и IPP и превръщането на тези количества във VPP количество. Превърнатото количество от лактотрипептида, изразено с VPP, се изчислява със следното уравнение, докол кого АСЕ инхибиторната активност на IPP за единица тегло е 1.7 пъти от VPP.
Превърнато количество лактотрипептид (pg VPP за ml) = количеството IPP (pg/ml) х 1.7 + количество от VPP (pg/ml).
Максималната лактотрипептидна продуктивност не е специално ограничена, но може да бъде достигната, когато всички Val-Pro-Pro и Пе-Рго-Рго, включени като последователности в протеина на средата, се изчерпят като трипептиди чрез разграждане.
Извънклетъчната протеиназна активност се измерва в съответствие с метода на Yamamoto et al. (Yamamoto, N. et al. J. Biochem. (1993) 114,740), основан на метода на Twining et al. (Twining, S. Anal. Biochem. 143 3410 (1984), и се изразява чрез определяне количеството на ензима, показващ 1% флуоресцентен интензитет от 1 U/OD590. Горната граница на екстрацелуларната протеиназна активност също не е ограничена, но обикновено е 800 U/OD590.
Млечнокиселата бактерия може да продуцира голямо количество от лактотрипептида, като се има предвид количеството на млечната киселина, получена по време на ферментацията. Така, ферментация с участието на тази млечнокисела бактерия води до подквасено мляко, съдържащо голямо количество от лактотрипептида, в сравнение с ферментирало мляко, съдържащо аналогично количество млечна киселина, изготвено с обичайна млечнокисела бактерия. Млечната киселина, дължаща се на такава ферментация, е DL-млечна киселина. Количеството на лактотрипептида, получен чрез ферментация с тази млечнокисела бактерия, е за предпочитане не по- малко от 30 pg VPP за 1 ml от полученото ферментирало мляко, съдържащо 0.01 g/ml DL-млечна киселина, получена по време на ферментацията. Горната граница от количеството на лактотрипептида не е специално ограничена, но е възможно за бактерията да продуцира до около 50 pg VPP за 1 ml от ферментиралото мляко, съдържащо 0.01 g DL-млечна киселина. Количеството на DL-млечна киселина е строго пропорционална на количеството на лактотрипептида. Поради това например, когато 0.02 g DLмлечна киселина се продуцира в 1 ml ферментирало мляко, количеството на лактотрипептидната продукция е за предпочитане не по- малко от 60 pg VPP. В противовес на това, чрез ферментация с обичайната млечнокисела бактерия, количеството на лактотрипептида е най-вече по-малко от 30 pg спрямо VPP за 0.01 g DL-млечна киселина в 1 ml ферментирало мляко.
Като пример за тази млечнокисела бактерия щам Lactobacillus helveticus СМ4 е депозиран като
FERM ВР-6060 на 15 август 1997 г. в Nationa; HumanTechnology Agency of Industrial Science and Technology. Щамът Lactobacillus helveticus CM4 има следните бактериологични свойства:
1. Морфологични свойства:
1) Форма на клетката пръчица
2) Подвижност няма
3) Спорообразуване няма
4) Оцветяване по Грам позитивно
2. Физиологични свойства
1) Каталазна продуктивност негативно
2) Индолова продуктивност негативно
3) Редуциране на нитрати негативно
4) Растеж в аеробна среда факултативен анаероб
5) Формиране на DL-млечна киселина от тюкоза с хомомлечна ферментация без образуване на газове
6) Разграждане на въглехидрати глюкоза+ лактоза+ маноза + фруктоза + галактоза + захарозамаптозаксилозарамноза целобиоза трехапозамелибиоза рафиноза стахиозаманитолсорбитолескулин салицинИзброените бактериологични свойства на щам СМ4 са идентични с известния щам Lactobacillus helveticus NCDO-099 при изпитване с метода на Mitsuoka et al. (Rinshoukensa 18,1163 (1974)). Обаче, по отношение на следващите свойства, които не са описани в Mitsuoka et al., СМ4 е ясно отличим от NCDO-099.
7) Извънклетъчна протеиназна активност, не по-малка от 400 U/OD}90
8) Лактотрипептидна продуктивност; продуциране на два вида трипептиди (VPP и IPP) в количество от 60 pg или повече VPP за ml ферментирала течност при култивиране в среда, съдържаща 9% тегл. обезмаслено мляко при 37°С за 24 h. Лактогрипептидната продуктивност в 8) се измерва с помощ та на обезмаслено мляко като твърдо вещество на безмаслено мляко.
Щамът млечнокисела бактерия от изобретението може да бъде получен чрез следния скрининг и измерване на екстрацелуларна протеиназна активност.
1. Първичен скрининг (Подбор на щам чрез измерване на висока АСЕ инхибиторна активност в подквасеното мляко)
Щамовете за изследване се култивират в среда на 9% тегл. обезмаслено мляко при 37°С за 24 h. След завършване на култивирането се измерват броят на млечнокиселите бактерии, киселинността на млечната киселина и АСЕ инхибиторната активност. Подбират се щамове, продуциращи lxl 08 клетки/ml или повече от млечнокиселата бактерия, и проявяващи киселинност на млечната киселина от 1.6% тегл. или повече и АСЕ инхибиторна активност от 40 единици/ml или повече. АСЕ инхибиторната активност се измерва по метода на Cushman and Cheung (Cushman, D. W. and Cheung, H. S. Pharmacol., 20 1637(1971)).
2. Вторично изследване (Подбор на щам, притежаващ висока лактотрипептидна продуктивност)
Културалните течности от щамовете, избрани при първичното изследване, се центрофугират при 15,000 rpm за 10 min и получените супернатанти се подлагат на ВЕТХ за количествено определяне на лактотрипептида. Избират се щамове, които продуцират не по-малко от 50 pg VPP за ml.
3. Измерване на екстрацелуларна протеиназна активност. Всеки от щамовете, избрани при вторичното изследване се култивира в среда на 9% тегл. обезмаслено мляко, при поддържане на pH при стойност 6. Проба се взима в средата на логаритмичната фаза на растеж и се смесва допълнително с 1%тегл. натриев цитрат, като се центрофугира при 5,000 rpm за 10 min за събиране на клетки. Събраните клетки се промиват с 50 тМ β-глицерофосфорна киселина и се суспендират в 50 mM Tris- НС1 буфер (pH 7.8) за довеждане на мътност до 1 (OD590). След това се измерва протеиназната активност на клетъчната повърхност. Потвърждава се, че резултатът е корелативен с лакютрипептидната продуктивност на щамовете, измерена във вторичното изследване.
Щамът млечнокисела бактерия от Lacto-bacillus helveticus, избран с помощта на описания метод, може да бъде определена и отличена от други щамове млечнокисели бактерии чрез например посочената лактотрипептидна продуктивност и екстрацелуларна протеиназна активност.
Млечнокиселата бактерия от изобретението за предпочитане има, в допълнение към посочената лактотрипептидна продуктивност и екстрацелуларна протеиназна активност, хромозомна ДНК, която дава ДНК фрагмент от 15 до 17 kb, когато хромозомната ДНК се смила с рестрикционните ензими Pstl и EcoRI. Поради това, млечнокиселата бактерия от изобретението може ясно да бъде отличена от други щамове на същия вид чрез изпитване дали щамът притежава ДНК, която дава такъв ДНК фрагмент.
Съществуването на ДНК фрагмента с 15 до 17 kb може да бъде потвърдено чрез екстрахиране на хромозомната ДНК от млечнокиселата бактерия в съответствие с метода на Leenhouts et al. (Leenhouts, K. (1990) Appl. Environ. Microbiol. 56:2726), чрез разграждане на хромозомната ДНК с EcoRI и Pstl, провеждане на 0.8% агарозна гел електрофореза на смлените фрагменти и анализ на получените образци на електрофорезата. При електрофореза, съществуването на ДНК фрагмента отчетливо се потвърждава чрез подлагане на ДНК от λ фага, смляна с рестрикционния ензим Hind III на паралелна електрофореза като маркер за размер.
Ферментационният млечен продукт от изобретението съдържа като необходим компонент ферментирало мляко, съдържащо млечнокиселата бактерия и трипептида, избран от групата, състояща се от VPP, IPP и смес от тях. С други думи, ферментационният млечен продукт от изобретението съдържа ферментирало мляко, съдържащо лактотрипептида и млечнокиселата бактерия, и е получен чрез ферментация на среда, включваща хранителен продукт, съставен от пептида и/или протеини, включващи последователността VPP и/или IPP с млечнокиселата бактерия от изобретението. Така, съдържанието на млечнокиселата бактерия и трипептида може да бъде по подходящ начин избрано в съответствие с вида на ферментационния млечен продукт, който следва да бъде получен. Този ферментационен млечен продукт може да съдържа ферментационния продукт сам по себе си, разреден ферментационен продукт или пречистен ферментационен продукт.
Ферментационният млечен продукт от изобретението съдържа DL-млечна киселина, получена по време на ферментацията. Ферментационният млечен продукт от изобретението за предпочитане съдържа лактотрипептида в количество от 30 до 50 pg VPP по отношение на 0.01 g DL-млечна киселина. Количеството на DL-млечната киселина е строго пропорционално на количеството на лактотрипептида. Така, ако ферментационният млечен продукт съдържа концентрирано ферментирало мляко и съ държа, например 0.02 g DL-млечна киселина, количеството на лактотрипептида е за предпочитане от 60 до 100 pg VPP. Ако ферментационният млечен продукт съдържа разредено ферментирало мляко и съдържа например, 0,005 g DL-млечна киселина, количеството на лактотрипептида е за предпочитане 15 до 25 pg VPP. Макар, че ферментационният млечен продукт от изобретението може да съдържа L-млечна киселина, която е хранителна добавка за регулиране на киселинността, тази L-млечна киселина може да бъде отличена от DL-млечната киселина, получена по време на ферментацията.
Млечнокиселата бактерия във ферментационния млечен продукт от изобретението може както да бъде стерилизирана след ферментацията, така и да бъде съхранявана жизнеспособна без стерилизиране.
Ферментационният млечен продукт от изобретението може да бъде кисело мляко, съдържаща мляко подкиселена напитка, сирене, обработени продукти, съдържащи ферментирало мляко, и здравословни храни, съдържащи ферментирало мляко. Така, ферментационният продут от изобретението може да съдържа, в допълнение към ферментиралото мляко като необходим компонент, различни продукти, които обикновено се добавят за получаване на техни разновидности. Ферментационният млечен продукт от изобретението може да бъде под твърда форма, например прахове, гранули и таблетки, или течности като паста, гел или течност.
Методът за получаване на ферментационен млечен продукт от изобретението включва ферментация с млечнокиселата бактерия на среда, съдържаща хранителен материал, избран от групата, състояща се от пептид, протеин и техни смеси, включително Val-Pro-Pro и/или Пе-Рго-Рго като частоттехните последователност.
Хранителният продукт в средата може да бъде от който и да е вид, доколкото съдържа пептиди и/ или протеини, включително, като част от тяхната последователност, VPP и/или IPP. Например, хранителният продукт може да бъде животинско мляко, млечен казеин, пшеница, пшеничен протеин, царевица, царевичен протеин, соя, соево мляко, обезмаслена соя, соев протеин, или смеси от тях. По-специално, за предпочитане се използва хранителен материал, съдържащ животинско мляко като краве, козе, конско или обезсметанени такива млека. Съдържанието на чистото обезмаслено мляко в животинското мляко не е специално ограничено, но е обикновено от 5 до 20% тегл.
Няма специално ограничение за количество то на млечнокиселата бактерия, с която се инокулира средата. Количеството за инокулация е обикновено около 105 до 107 клетки от млечнокиселата бактерия за 1 g от посочения специфичен хранителен продукт в средата.
Ферментацията може да бъде осъществена при 25 до 50°С, за предпочитане 30 до 45°С, за 6 до 30 h-и за предпочитане 10 до 24 h, в pH интервал за предпочитане 3.0 до 4.0, и особено предпочитано З.ОдоЗ.5.
Ферментацията се осъществява за предпочитане така, че количеството на лактотрипептида да е не по-малко от 60 pg VPP за ml от полученото в резултат ферментирало мляко. По-специално, когато като среда се използва краве мляко с 9% тегл. сухо вещество обезмаслено мляко, ферментация при 25 до 40°С за 12 до 48 h води до съдържание във ферментиралото мляко на количество не по-малко от 70 pg VPP за ml. Съдържанието на чистото обезмаслено мляко в средата е строго пропорционално на получавания лактотрипептид. Например, ако хранителният материал съдържа 5% тегл. сухо вещество обезмаслено мляко, ферментацията при посочените условия ще доведе до получаване на лактотрипептида в количество от около 33.3 pg VPP за ml.
Ферментиралото мляко, получено чрез посочената ферментация, може да бъде смесено с продукта такъв, какъвто е. Ако е необходимо, ферментиралото мляко може да бъде подложено на разреждане или пречистване преди смесването. Ферментиралото мляко може да бъде охладено и съхранявано на 5°С и след това да се добави с други компоненти за получаване на продукт, като например замразен продукт. Алтернативно, ферментиралото мляко може да бъде подложено на термично стерилизиране, и ако е необходимо, разпрашен чрез разпрашително сушене за получаване на продукт за разпространяване при обичайна температура.
Доколкото ферментационният млечен продукт от изобретението съдържа ферментиралото мляко, получено чрез ферментация с млечнокиселата бактерия, той може да бъде използван за лесно получаване на продукти, притежаващи високо съдържание на лактотрипептида по отношение съдържанието на млечна киселина, в подходяща форма за приемане. Ферментационният млечен продукт се очаква да проявява хипотензивния и противостресов ефект на лактотрипептида, когато се приема от хора.
Доколкото млечнокиселата бактерия от изобретението може да продуцира голямо количество от лактотрипептида чрез култивирането и в специ фичен хранителен материал, бактерията е приложима за получаване на разнообразни ферментационни млечни продукти, функционални храни, здравословни храни, храни за специфично здравно приложение, храни за специално приложение за възрастни хора, и материали за тях, притежаващи хипотензивния и облекчаващ стреса ефект на лактогрипептида.
Примери за изпълнение на изобретението
Изобретението ще бъде обяснено по-подробно с примерите за изпълнение, без да се ограничава до тях.
Сред използваните в примерите щамове Lactobacillus helveticus, щам СМ4 е депозиран в National Institut of Bioscience and Human-Technology Agency of Industrial Science and Technology и му e присъден номер FERM BP-6060, ATCC15009, NCDO099,JCM1006, ATCC10797,JCM1062,JCM1103, JC1120 и JCM1004 са публично достъпни щамове. Щамове, различни от посочените и използвани в примерите, са избрани от щамовата колекция на заявителя.
Пример 1.
(Подбор на щамове, даващи ферментирало мляко с висока АСЕ инхибиторна активност)
Изследвани са 36 щама Lactobacillus helveticus, изолирани от различни млечни продукти. АСЕ инхибиторна активност на мляко, ферментирало с всеки от щамовете, се измерва по следната процедура. Всеки от щамовете Lactobacillus helveticus се култивира в среда на 9% тегл. сухо вещество в обезмаслено мляко при 37°С за 24 h. Културалната среда се добавя към свежа среда от същия тип в такова количество, че новата среда да съдържа 3% тегл. от културалната среда. Ферментацията се осъществява по-нататък при 37°С за 24 h. След завършване на ферментацията се измерват киселинността на млечната киселина (wt%), количеството на пептида в суроватката (mg/ml), броят на клетките и АСЕ инхибиторната активност (U/ml). Резултатите са показани в таблица 1.7 щама освен 36-те щама имат много слаба ферментационна активност. 15 щама продуцират ферментирало мляко с киселинността на млечната киселина, генерирана не по-малко от 1.6% тегл. Освен тези 15 щама, са избрани 8 щама, притежава щи АСЕ инхибиторна активност не по-малка от 40 U/ml суроватка в тяхното ферментирало мляко.
(Измерване на АСЕ инхибиторна активност на ферментирало мляко)
АСЕ инхибиторна активност се измерва в съответствие с метода на Cushman and Cheung (Cushman,D. W. and Cheung, H. S. Pharmacol., 20 1637 (1971)). C други думи, всяко ферментирало мляко се центрофугира при 15,000 rpm за 5 min за получаване на супернатантата (суроватка). Суроватката се разрежда по подходящ начин за измерване. 80 μΐ от разредената суроватка се поставят в епруветка, смесват се с 0.2 ml 0.1 М буфер с борна киселина (съдържащ 0,3 М, NaCl, pH 7.3), съдържащ 5 тМ хипурил хистидин левцин (Hip- His- Leu, произведена от SIG-МА CHEMICALS CO.) като субстрат, и допълнтелно се смесва с 20 μΐ ензимен разтвор (0.1 U/ml, произведен от SIGM CHEMICALS CO.). Получената в резултат смес взаимодейства при 37°С за 30 min и след това се смесва с 250 μΐ IN солна киселина за завършване на реакцията. След това сместа се смесва с 1.7 ml етилацетат, разбърква се за 20 s и след това се центрофугира при 3 000 rpm за 10 min за получаване на 1.4 ml от етилацетатната фаза (горния слой). Горният слой се нагрява при 120°С за 40 min за отстраняване на разтворителя, смесва се с 1 ml дистилирана вода и се разбърква за около 20 s. Екстрахираната хипурилова киселина се измерва за абсорбция при 228 nm. Ензимната активност в единици се изчислява по следното уравнение с количеството, което дава 50% инхибиране на АСЕ активност, определено като една единица.
Количество от ензима (единица) = ((А-В) / (АС))х 100x1/50
А: Абсорбция при 228 nm без проба
В: Абсорбция при 228 с проба
С: Абсорбция при 228 без ензим и без проба (Количествен анализ на пептидите във ферментиралото мляко)
Количествен анализ на пептидите се осъществява в съответствие с метода ОРА (Charch, Е С. et al. J. Dairy Sci. 66 1219 (1883)). Като стандартно вещество за получаване на калибрационната крива се използва казеин, разграден с трипсин.
Таблица 1
| Щамове | Киселинност (wt%) | Количество лептиди (mp/ml) | Брой клетки (х10* клетки/ml) | АСЕ инхибиторна активност (IMiil) |
| Щам 1 | ||||
| Щам 2 | ||||
| ЩамЗ | ||||
| Щам 4 | ||||
| Щам 5 | ||||
| Щам 6 | ||||
| Щам 7 | ||||
| Щам 8 | 0.498 | 1.59 | 0.29 | 26.4 |
| Щам 9 | 2.022 | 1.99 | 9.53 | 34.5 |
| Щам 10 | 1.709 | 2.10 | 8.53 | 24.5 |
| Щам 11 | 0.615 | 1.76 | 1.28 | 29.1 |
| Щам 12 | 0.411 | 1.35 | 0.38 | 17.6 |
| Щам 13 | 0.917 | 1.57 | 3.63 | 19.9 |
| Щам 14 | 1.026 | 1.71 | 5.78 | 9.4 |
| Щам 15 | 0.517 | 1.59 | 0.56 | 26.9 |
| Щам 16 | 1.532 | 4.69 | 5.97 | 102.5 |
| Щам 17 | 2.101 | 2.01 | 6.09 | 98.9 |
| Щам 18 | 1.783 | 1.94 | 5.38 | 21.9 |
| Щам 19 | 1.955 | 1.69 | 5.31 | 100.6 |
| Щам 20 | 2.095 | 1.74 | 7.16 | 61.4 |
| Щам 21 | 1.963 | 2.03 | 6.05 | 125.3 |
| Щам 22 | 1.798 | 2.85 | 6.19 | 54.2 |
| Щам 23 | 1.604 | 2.32 | 6.81 | 36.6 |
| Щам 24 | 1.932 | 1.77 | 7.97 | 47.7 |
| Щам 25 | 1.885 | 1.51 | 4.91 | 18.3 |
| Щам 26 | 1.862 | 1.46 | 5.69 | 26.2 |
| Щам 27 | 1.063 | 3.01 | 2.78 | 76.9 |
| Щам 28 | 0.457 | 1.98 | 0.50 | 52.4 |
| Щам 29 | 0.516 | 2.55 | 1.13 | 92.6 |
| JCM1006 | 1.872 | 2.35 | 6.97 | 48.5 |
| JCM1062 | 1.109 | 2.60 | 8.50 | 78.4 |
| JCM1103 | 1.244 | 1.36 | 3.69 | 31.0 |
| АТСС10797 | 1.359 | 2.11 | 8.56 | 13.8 |
| АТСС15009 | 1.454 | 1.81 | 5.16 | 16.6 |
| NCDO- 099 | 1.769 | 2.76 | 6.59 | 25.5 |
| СМ4 | 1.635 | 3.12 | 4.44 | 130.0 |
(Подбор на щамове, притежаващи висока лактотрипептидна продуктивност)
След това 8-те щама, които дават ферментирало мляко с висока АСЕ инхибиторна активност, както са избрани по- горе, се измерват за VPP и IPP.
ml от ферментиралото мляко се центрофугира при 15,000 rpm за 10 min. Получената супернатанта, т.е. суроватка, се събира. 0.3 ml от суроватката се подлагат на Sep-Рак Cartridge (произведена от
Waters Inc.) адсорбция, промиват се с дестилирана 45 вода и след това се елуират с 5 ml метанол. Елюатьт се изсушава при центрофугиране и редуцирано налягане. Изсушеният продукт се разтваря в 0.3 ml 0.05% воден разтвор на трифлуороцетна киселина и се подлага на ВЕТХ (високоефективна течна хроматография) анализ при следните условия. Резултатите са показани в таблица 2. Използваната апаратура е: Детектор Hitachi
L4000 UV (при 215 nm), L6200 помпа, L5030 колонна сушилня (35°С).
Условия на елюацията: скорост на потока
0.5 ml/min.
Елюент: воден разтвор, съдържащ 0.3 М NaCl 5 и 0.05% трифлуороцетна киселина
Колона: Asahipak GS320 (Ф 3.9 х 600 mm).
Докато АСЕ инхибиторната активност на IPP за единица тегло е 1.7 пъти в сравнение с VPP, количеството на лактотрипептидите VPP се изчислява от измерените количества IPP по следното уравнение. Резултатите са показани в таблица 2.
Превърнато количество лактотрипептид (pg VPP за ml) = Количеството IPP (pg/ml) х 1.7 + Количество VPP (pg/ml)
Таблица 2
| Щамове | Количество пептид (gg/ml суроватка) | Киселинност (wt%) | ||
| VPP | IPP | Количество лагтотрипеггтид, изразено cVPP | ||
| Щам 17 | 15.2 | 11.1 | 34.0 | 1.5 |
| Щам 19 | 11.2 | 7.3 | 23.7 | 1.4 |
| Щам 20 | 13.0 | 8.1 | 26.8 | 1.6 |
| Щам 21 | 16.6 | 11.4 | 36.0 | 1.6 |
| Щам 22 | 15.8 | 12.1 | 36.3 | 1.5 |
| Щам 24 | 12.6 | 8.7 | 27.4 | 1.6 |
| JCM1006 | 12.9 | 8.3 | 28.6 | 1.3 |
| СМ4 | 38.5 | 23.5 | 78.5 | 1.9 |
Ферментиралото с СМ4 мляко има най-голямо количество лактотрипептиди, изразени с VPP, т.е.
78.5 pg/ml суроватка. Други седем щама дават средното количество от 34.2 pg/ml суроватка.
(Измерване на извънклетъчната протеиназа)
Извънклетъчната протеиназна активност се измерва за 16 щама, които дават относително добри резултати за ферментационни способности, показани в таблица 1. Измерването се провежда по метода на Yamamoto et al. (Yamamoto, N. et al. J. Biochem. (1993) 114,740), основан на метода на Twining et al. (Twining, S. Anal. Biochem. 143 3410 (1984)). C други думи, всеки щам се култивира в среда на 9% тегл. обезмаслено мляко при pH, поддържано на 6. Пробата е взета в средата на логаритмичната растежна фаза и се смесва с натриев цитрат така, че крайната концентрация е 1 % тет. за проясняване на млечната среда. Сместа се центрофугира при 5,000 rpm за 10 min за събиране на клетките. Клетките се промиват с 50 тМ β-глицерофосфат, и се суспендират в 50 mM Tris- НС1 буфер (pH 7.8) за довеждане стойността на OD до 1 (OD590, т.е. измерено с абсорбция при 590 nm). 30 μΐ от суспенсията се смесват с 20 μΐ 0.4% флуоресцеин-казеин (произведен от SIGMA Chemicals Co.), и се инкубират при 42°С за 1 h. Сместа по-нататък се смесва със 120 μΐ 5% трихлороцетна киселина, оставя се да престои 20 min и се центрофугира при 15,000 rpm за 10 min. 60 μΐ от супернатантата се добавят към 3 ml 500 mM Tris- НС1 буфер (pH 8.3) и неговият флуоресцентен интензитет се измерва чрез определяне на флуоресценция30 та от 525 nm, продуцирана при възбуждаща дължина на вълната 490 nm. Екстрацелуларна протеиназна активност в една единица се изчислява с количеството от ензима, което показва 1% флуоресцентен интензитет при посочените условия, определени като 35 една единица. Резултатите са посочени в таблица 3.
Таблица 3
| Щамове | U/ODseo |
| Щам 17 | 136.7 |
| Щам 18 | 102.8 |
| Щам 19 | 103.2 |
| Щам 20 | 89.8 |
| Щам 21 | 80.1 |
| Щам 22 | 243.3 |
| Щам 23 | 116.6 |
| Щ ам 24 | 118.6 |
| Щам 25 | 192.6 |
| Щам 26 | 108.4 |
| JCM1006 | 185.7 |
| JCM1062 | 96.5 |
| JCM1103 | 176.3 |
| АТСС15009 | 168.1 |
| АТСС10797 | 106.5 |
| NCDO-099 | 229.7 |
| СМ4 | 452.6 |
Активността на Lactobacillus helveticus СМ4 е най-висока, т.е. 450 U/OD590. Средната активност за други 16 щама е 141 U/OD590, която е около една трета от тази на щам СМ4.
Пример 2. От 11 щама, освен 36-те щама Lactobacillus helveticus, избрани в пример 1, се екстрахира хромозомна ДНК в съответствие с метода на Leenhouts et al. (Leenhouts, K. (1990) Appl. Environ. Microbiol. 56:2727), смила се c няколко рестрикционни ензима и се подлага на 0.8% агарозна гел електрофореза за анализ на електрофорезната проба.
Като резултат, характерен ДНК фрагмент се наблюдава сред ДНК фрагменти от хромозома на щам СМ4, разграден с EcoRI и Pstl (показано със стрелка 1 на фиг. 1). Такъв фрагмент не е наблюдаван във фрагментите от хромозоми на щамове, различни от СМ4, и по- къси фрагменти от характерния фрагмент на СМ4 са наблюдавани в повечето други щамове (показани със стрелка 2 на фиг. 1). Молекулното тегло на характерния фрагмент се измерва чрез сравнителна електрофореза на продукти на разграждане на ДНК на фага λ с Hind III като маркери за размер (23.1 kb, 9.4 kb, 4.4 kb, 2.3 kb и 2.0 kb по реда на повишаваща се подвижност), и е установено, че са около 16 kb. Така се потвърждава, че щам СМ4 има хромозомна ДНК, която дава ДНК фрагмент, притежаващ молекулно тегло от около 16 kb, чрез разграждане с EcoRI и Pstl. Потвърждава се също, че други щамове, различни от СМ4, имат хромозомна ДНК, която дава общ ДНК фрагмент, притежаващ молекулно тегло от около 13 kb.
Пример 3. Ферментирало мляко се получава с щам Lactobacillus helveticus СМ4, избран в пример 1. Щам СМ4 се култивира в 100 g 9% тегл. обезмаслено мляко при 37°С за 12 h. След това 3 kg прасна среда се инокулира с културално обезмаслено мляко, и се култивира при 37°С за 12 h. След завършване на ферментацията цялото ферментирало мляко (брой клетки на СМ4 щам: 6.3 х 108 клетки/ml) се използва като изходна култура за ферментация на 100 kg 9% тегл. обезмаслено мляко при 32°С за 20 h. След завършване на ферментацията във ферментиралото мляко се съдържат 74.8 g/ml лакготрипептиди. Съдържанието на млечна киселина е 1.9% тегл.
kg от полученото ферментирало мляко се смесват с 4 kg гранулирана захар, 3 kg вода и 0.15 kg метоксипектин и се хомогенизира за получаване на 50 kg кисело млечна напитка. Напитката има приятен мек вкус, pH 3.6 и 4.6 х 108 клетки/g живи СМ4 клетки.
Пример 4.26.5 kg от ферментиралото мляко, получено в пример 3, се смесват с 45.0 kg гранулирана захар, 4.7 kg високомалтозен сироп и 13.8 kg вода. Към сместа се добавят 10kg от 3% тегл. високометоксипектинов разтвор при разбъркване. Получената в резултат смес се хомогенизира с помощта на лабораторен хомогенизагор (произведен от ATV GAULIN, IVC., Model 15М-8ВА) при налягане 150 kg'cm2 и скорост на потока 1500 ml/min. Хомогенизираната течност се смесва с ванилов ароматизатор и се стерилизира чрез нагряване до 85°С. Стерилизираното по този начин ферментирало мляко се налива в стъклена бутилка, докато е горещо. Измерва се съдържанието на лактотрипептида в стерилизирания ферментирал млечен продукт. Установено е, че съдържанието на лактотрипептида съответства на това на ферментиралото мляко преди стерилизация. Установено е също, че съдържанието на млечна киселина е 0,5% тегл.
Claims (11)
1) Каталазна продуктивност негативно
1) Форма на клетката пръчица
1. Млечнокисела бактерия от Lactobacillus helveticus, притежаваща следните бактериологични свойства, която при култивиране в среда от животинско мляко, съдържащо 9% тегл. сухо вещество от обезмаслено мляко, продуцира третираните Val-Pro-Pro и Пе-Рго-Рго и в количество не по-малко от 60 pg, изразено с Val-Pro-Pro за ml среда, като бактерията проявява екстрацелуларна протеиназна активност не по-малко от 400 U/OD590 и притежава следните:
Морфологични свойства
2. Млечнокисела бактерия от Lactobacillus helveticus съгласно претенция 1, където посочената млечнокисела бактерия е щам Lactobacillus helveticus СМ4 (депозиран в National Institute of Biosciensce and Human-Technology Agency of Industrial Science and Technology под № FERM BP-6060), продуцент на триптид.
2) Индолова продуктивност негативно
2) Подвижност няма
3. Млечнокисела бактерия от Lactobacillus helveticus съгласно претенция 1, където посочената бактерия притежава хромозомна ДНК, която дава ДНК фрагмент от 15 до 17 kb при смилане с рестрикционни ензими Pstl и EcoRI.
3) Редуциране на нитрати негативно
3) Спорообразуване няма
4. Ферментационен млечен продукт, включващ млечнокиселата бактерия от претенция 1 и трипептид, избран от групата, състояща се от Val-ProРго, Пе-Рго-Рго и техни смеси.
4) Растеж в аеробна среда факултативен анаероб
4) Оцветяване по Грам позитивно
Физиологични свойства
5. Ферментационен млечен продукт съгласно претенция 4, съдържащ още и DL-млечна кисели на, където посоченият продукт съдържа 30 до 50 pg от посочения трипептид по отношение на Val-ProРго за 0.01 g от посочената DL-млечна киселина.
5) Формиране на DL-млечна киселина от глюкоза с хомомлечна ферментация без образуване на газове
6. Ферментационен млечен продукт съгласно претенция 4, където млечнокиселата бактерия от претенция 1 е жизнеспособна.
6) Разграждане на въглехидрати глюкоза + лактоза + маноза + фруктоза + галактоза + захарозамалтозаксилозарамноза целобиоза трехалозамелибиоза рафиноза стахиозаманитолсорбитолескулинсалицин-
7. Ферментационен млечен продукт е избран от групата, състояща се от кисело мляко, млечнокисели напитки, сирене, преработени храни, съдържащи ферментирало кисело мляко, и здравословни храни, съдържащи ферментирало кисело мляко.
8. Метод за продуциране на ферментационен млечен продукт съгласно претенция 4, характеризиращ се с това, че протича ферментиране на среда, която съдържа хранителен продукт, избран от група, състояща се от пептид, протеин и техни смеси, включващи последователност Val-Pro-Pro и Пе-РгоРго, с млечнокиселата бактерия от претенция 1.
9. Метод съгласно претенция 8, характеризиращ се с това, че посоченият хранителен продукт е избран от група, състояща се от животинско мляко, млечен казеин, царевица, царевичен протеин, пшеница, пшеничен протеин, соя, соево мляко, обезмаслена соя, соев протеин и техни смеси.
10. Метод съгласно претенция 8, характеризиращ се с това, че ферментацията протича при 25 до 50°С за 6 до 60 h.
11. Метод съгласно претенция 8, характеризиращ се с това, че ферментацията протича при такива условия, че количеството на трипептидите ValPro-Pro и Пе-Рго-Рго, продуцирани в получения ферментационен продукт, е 60 pg, изразено с Val-ProPro за ml.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9277949A JP3028411B2 (ja) | 1997-09-26 | 1997-09-26 | トリペプチド高生産性ラクトバチルス・ヘルベチカス乳酸菌 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BG104382A BG104382A (bg) | 2000-12-29 |
| BG64422B1 true BG64422B1 (bg) | 2005-01-31 |
Family
ID=17590526
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BG104382A BG64422B1 (bg) | 1997-09-26 | 2000-04-26 | Бактерия lастоbacillus неlvетiсus, притежаваща висока способност да продуцира трипептид, ферментационен млечен продукт и метод за получаването му |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6534304B1 (bg) |
| EP (1) | EP1016709B1 (bg) |
| JP (1) | JP3028411B2 (bg) |
| KR (1) | KR100404154B1 (bg) |
| CN (1) | CN1149279C (bg) |
| AR (1) | AR017153A1 (bg) |
| AT (1) | ATE294230T1 (bg) |
| AU (1) | AU734422B2 (bg) |
| BG (1) | BG64422B1 (bg) |
| BR (1) | BR9813218A (bg) |
| CA (1) | CA2304985C (bg) |
| CZ (1) | CZ291067B6 (bg) |
| DE (1) | DE69829983T2 (bg) |
| ES (1) | ES2237834T3 (bg) |
| HU (1) | HU225980B1 (bg) |
| IN (1) | IN188418B (bg) |
| MY (1) | MY118157A (bg) |
| PL (1) | PL188675B1 (bg) |
| PT (1) | PT1016709E (bg) |
| SK (1) | SK284755B6 (bg) |
| TR (1) | TR200000854T2 (bg) |
| TW (1) | TW526268B (bg) |
| WO (1) | WO1999016862A1 (bg) |
| ZA (1) | ZA988659B (bg) |
Families Citing this family (53)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK1142481T4 (da) | 1999-01-11 | 2009-12-21 | Calpis Co Ltd | Fremgangsmåde til fremstilling af fermenteret mælk indeholdende et peptid, der inhiberer et angiotensinomdannende enzym og fremgangsmåde til fremstilling af mælkeserum |
| FR2793257B1 (fr) | 1999-05-06 | 2001-07-27 | Gervais Danone Sa | Bacteries lactiques a proprietes anxiolytiques, et leurs utilisations |
| FI113741B (fi) * | 1999-11-01 | 2004-06-15 | Valio Oy | Menetelmä verenpainetta alentavia peptidejä sisältävän tuotteen valmistamiseksi |
| JP4633876B2 (ja) * | 1999-11-11 | 2011-02-16 | カルピス株式会社 | トリペプチドの製造方法 |
| FI112031B (fi) | 2002-02-25 | 2003-10-31 | Valio Oy | Biologisesti aktiivisen tuotteen uusi käyttö |
| EP1492409A2 (en) * | 2002-04-03 | 2005-01-05 | Chr. Hansen A/S | Peptides with anti-hypertensive properties |
| WO2004015125A1 (en) * | 2002-08-09 | 2004-02-19 | Chr. Hansen A/S | Process for preparing peptides with anti-hypertensive properties |
| CN1735347A (zh) | 2003-01-06 | 2006-02-15 | 荷兰联合利华有限公司 | 含有三肽vpp和/或ipp的发酵乳制品 |
| TWI344371B (en) * | 2003-03-18 | 2011-07-01 | Suntory Holdings Ltd | Angiotensin-converting enzyme inhibitory peptides |
| US7718171B2 (en) | 2003-04-07 | 2010-05-18 | Chr. Hansen A/S | Reducing heart rate in mammals using milk derived fermentation products produced using Lactobacillus helveticus |
| AU2004237455B2 (en) | 2003-05-05 | 2007-08-02 | Dsm Ip Assets B.V. | Hydrolysed casein product comprising tripeptides IPP and/ or VPP |
| JP4680571B2 (ja) * | 2003-12-25 | 2011-05-11 | カルピス株式会社 | 経口摂取用保湿剤 |
| TW200533299A (en) * | 2004-03-31 | 2005-10-16 | Calpis Co Ltd | Functional food for improving endogenous rhythm of melatonin secretion, and functional food for improving circadian rhythm |
| TW200536552A (en) | 2004-03-31 | 2005-11-16 | Calpis Co Ltd | Hepatopathy preventive or inhibitory agents and functional food for preventing or inhibiting hepatopathy |
| JP4723501B2 (ja) * | 2004-07-05 | 2011-07-13 | カルピス株式会社 | ペプチド混合物の製造法、抗高血圧ペプチド含有発酵乳の製造法及び抗高血圧ペプチド製剤の製造法 |
| AU2005279163B2 (en) | 2004-09-03 | 2012-02-02 | Chr. Hansen A/S | Fermented milk or vegetable proteins comprising receptor ligand and uses thereof |
| JPWO2006095764A1 (ja) * | 2005-03-09 | 2008-08-14 | カルピス株式会社 | 皮膚における紫外線感受性抑制剤及び機能性飲食品 |
| KR20080019059A (ko) * | 2005-06-24 | 2008-02-29 | 칼피스가부시키가이샤 | 표피세포 분화 및 각화 촉진제, 및 표피 각화 촉진용기능성 음식품 |
| CA2616789A1 (en) * | 2005-07-26 | 2007-02-01 | Calpis Co., Ltd. | Process for production of fermented milk and fermented milk beverage/food |
| CN1903052B (zh) * | 2005-07-26 | 2010-04-28 | 天津科技大学 | 具有酪蛋白磷酸肽、抗血管紧张素转化酶肽和低聚半乳糖乳清粉的制备方法 |
| JPWO2007094340A1 (ja) | 2006-02-14 | 2009-07-09 | カルピス株式会社 | 血管拡張剤 |
| KR101048663B1 (ko) * | 2006-02-14 | 2011-07-12 | 칼피스가부시키가이샤 | 동맥경화 예방제, 혈관 내막의 비후 억제제 및 혈관 내피 기능 개선제 |
| EP1820851B9 (fr) | 2006-02-20 | 2012-06-27 | Compagnie Gervais Danone | Souches de Lactobacillus helveticus ne fermentant pas le lactose |
| ATE503388T1 (de) * | 2006-02-20 | 2011-04-15 | Gervais Danone Sa | Neue lactobacillus helveticus stämme |
| ES2323087T3 (es) * | 2006-02-20 | 2009-07-06 | Compagnie Gervais Danone | Nuevas cepas de lactobacillus helveticus. |
| EP1820849B1 (fr) | 2006-02-20 | 2009-01-21 | Compagnie Gervais Danone | Nouvelles souches de Lactobacillus helveticus |
| EP2040732A4 (en) * | 2006-05-15 | 2009-08-19 | Valio Ltd | NEW USE OF THERAPEUTICALLY USEFUL PEPTIDES |
| PL2034848T3 (pl) | 2006-06-16 | 2017-08-31 | Dupont Nutrition Bioscences Aps | Bakteria Streptococcus thermophilus |
| AU2007292786B2 (en) * | 2006-09-04 | 2013-02-14 | Megmilk Snow Brand Co., Ltd. | Agent for accelerating the increase in and/or preventing the decrease in blood adiponectin level, and visceral fat accumulation inhibitor |
| JP2008214253A (ja) | 2007-03-02 | 2008-09-18 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 内臓脂肪減少剤 |
| CN101641113A (zh) * | 2007-03-27 | 2010-02-03 | 卡尔皮斯株式会社 | 心力衰竭预防剂 |
| TWI414305B (zh) * | 2007-03-27 | 2013-11-11 | Calpis Co Ltd | 腎衰竭預防劑 |
| JP2011524744A (ja) * | 2008-06-12 | 2011-09-08 | ネステク ソシエテ アノニム | 降圧ペプチドを産生するためのラクトバチルス・ヘルベティカス株 |
| ES2383780T3 (es) * | 2008-12-29 | 2012-06-26 | Unilever N.V. | Productos de confitería congelados que comprenden teobromina y cafeína |
| WO2011095389A1 (en) * | 2010-02-04 | 2011-08-11 | Unilever Nv | Use of theobromine for lowering central blood pressure |
| US11806352B2 (en) | 2010-05-19 | 2023-11-07 | Upfield Europe B.V. | Theobromine for increasing HDL-cholesterol |
| JP2010183918A (ja) * | 2010-06-01 | 2010-08-26 | Calpis Co Ltd | トリペプチドの製造方法 |
| JP5797891B2 (ja) * | 2010-11-09 | 2015-10-21 | カルピス株式会社 | Ｎｏｎ−ｄｉｐｐｅｒ型血圧日内変動による疾病発症リスク軽減剤 |
| AU2011327288B2 (en) * | 2010-11-09 | 2015-05-07 | Asahi Group Holdings, Ltd. | Lactobacillus helveticus having high proteolysis activity |
| RU2453593C1 (ru) * | 2011-04-21 | 2012-06-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Бифилюкс" | Штамм lactobacillus helveticus, используемый для получения продукции, содержащей лактобактерии |
| US20120328735A1 (en) * | 2011-06-24 | 2012-12-27 | Naoto Uchida | Process for preparing casein-derived peptides by fermentation of lactic acid bacteria |
| DE202012012998U1 (de) | 2011-08-31 | 2014-06-13 | Daniel Elias | Bioaktive, regenerative Mischung zur Herstellung eines Ergänzungsnahrungsmittels |
| US10375972B2 (en) | 2012-08-22 | 2019-08-13 | Kraft Foods Group Brands Llc | Processed cheese with cultured dairy components and method of manufacturing |
| CN102960444A (zh) * | 2012-11-19 | 2013-03-13 | 陕西科技大学 | 一种基于瑞士乳杆菌发酵的含ace抑制肽的羊奶的制备方法 |
| CN104450574B (zh) * | 2014-12-10 | 2017-05-10 | 生合生物科技（南京）有限公司 | 一种瑞士乳杆菌lh43及其制作乳酸菌饮料的方法 |
| RU2577112C1 (ru) * | 2014-12-25 | 2016-03-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Горский государственный аграрный университет" | Штамм lactobacillus helveticus вкпм в-11175, полученный на доступных питательных средах |
| CN107674848A (zh) * | 2017-09-20 | 2018-02-09 | 云南乍甸乳业有限责任公司 | 一种酸奶发酵菌种的制备方法 |
| CN111227049B (zh) * | 2018-11-29 | 2022-08-12 | 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 | 一种维持褐色植物基酸奶货架期内组织状态稳定性的方法 |
| CN109517763B (zh) * | 2018-12-27 | 2022-03-22 | 内蒙古农业大学 | 瑞士乳杆菌h11及其应用 |
| CN110226687A (zh) * | 2019-06-12 | 2019-09-13 | 宁波依萃健生物科技有限公司 | 一种解酒护肝组合物及制备方法 |
| ES2932606T3 (es) * | 2019-12-30 | 2023-01-23 | Gervais Danone Sa | Streptococcus thermophilus negativa para sacarosa para su utilización en la preparación de productos fermentados |
| CN111979286B (zh) * | 2020-08-31 | 2021-11-26 | 鲁东大学 | 一种发酵法与酶法联合制备贝类高f值寡肽的方法 |
| CN112616925A (zh) * | 2020-12-30 | 2021-04-09 | 光明乳业股份有限公司 | 一种双蛋白发酵乳及其制备方法 |
Family Cites Families (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3846560A (en) | 1971-07-22 | 1974-11-05 | Quaker Oats Co | Process of making a base for protein beverages |
| US3876806A (en) | 1971-10-14 | 1975-04-08 | Quaker Oats Co | Process for the preparation of acid soluble polypeptides and carbonated beverages containing same |
| US4107334A (en) | 1976-10-13 | 1978-08-15 | Pfizer Inc. | Modified protein |
| CH636248A5 (fr) | 1979-03-09 | 1983-05-31 | Nestle Sa | Procede de preparation d'un hydrolysat de proteines purifie. |
| JPS60262561A (ja) | 1984-06-08 | 1985-12-25 | House Food Ind Co Ltd | 大豆蛋白質水溶液の処理方法 |
| US4585757A (en) | 1984-07-27 | 1986-04-29 | Texas Tech University Health Sciences Center | Hypotensive active peptides |
| US4687840A (en) | 1986-02-11 | 1987-08-18 | Texas Tech University Health Sciences Center | Hypotensive active peptides |
| GB8823429D0 (en) * | 1988-10-05 | 1988-11-09 | Agricultural Genetics Co | Method for accelerated ripening of cheddar & related hard type cheese |
| MY109493A (en) | 1989-07-07 | 1997-02-28 | Nestle Sa | Protein hydrolysis. |
| NL9000422A (nl) | 1990-02-21 | 1991-09-16 | Nl Zuivelonderzoek Inst | Werkwijze voor de bereiding van een gefermenteerd melkprodukt. |
| EP0445606B1 (en) | 1990-02-27 | 1997-01-22 | The Agency of Industrial Science and Technology | Novel oligopeptides, pharmaceutical composition and food containing the same, and use of oligopeptides |
| EP0457565B1 (en) | 1990-05-18 | 1997-07-30 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Milk-protein hydrolyzates and compositions for use as hair and skin treating agent |
| JP2571734B2 (ja) | 1991-08-23 | 1997-01-16 | 株式会社ヤクルト本社 | 乳酸菌飲料 |
| US5486461A (en) | 1991-11-08 | 1996-01-23 | Novo Nordisk A/S | Casein hydrolyzate and method for production of such casein hydrolyzate |
| FI94088C (fi) | 1992-03-13 | 1995-07-25 | Valio Oy | Menetelmä fenyylialaniinin poistamiseksi proteiinipitoisista koostumuksista |
| US5418218A (en) | 1992-07-10 | 1995-05-23 | The University Of Maryland At Baltimore | Histidyl-proline diketopiperazine (cyclo his-pro) a cns-active pharmacologic agent |
| JP2782142B2 (ja) | 1992-07-23 | 1998-07-30 | カルピス株式会社 | アンジオテンシン変換酵素阻害剤及びその製造法 |
| JP2782153B2 (ja) * | 1992-11-09 | 1998-07-30 | カルピス株式会社 | アンジオテンシン変換酵素阻害ペプチドの製造法 |
| US5656268A (en) | 1995-04-21 | 1997-08-12 | Sorodsky; Michael | Biological product |
| US5618689A (en) | 1995-05-25 | 1997-04-08 | Nestec S.A. | Enhanced procedures for preparing food hydrolysates |
| US6372282B1 (en) | 1996-12-23 | 2002-04-16 | Dsm N.V. | Method for producing a protein hydrolysate |
| US6221423B1 (en) | 1998-04-13 | 2001-04-24 | Protein Technologies Int'l Inc. | Short-chained peptide material |
| WO2001068114A1 (en) | 2000-03-10 | 2001-09-20 | Monsanto Company | Novel peptides with anti-hypertensive activity |
| WO2001068113A1 (en) | 2000-03-10 | 2001-09-20 | Monsanto Technology Llc | Anti-hypertensive peptides |
| WO2001068672A1 (fr) | 2000-03-13 | 2001-09-20 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Hydrolysats proteiques, procede de preparation associe et boissons et aliments contenant ces hydrolysats proteiques |
| US20030040475A1 (en) | 2001-01-16 | 2003-02-27 | Yasuhiro Toba | Agents for improving lipid metabolism and reducing high blood pressure |
| US6815426B2 (en) | 2001-02-16 | 2004-11-09 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Angiogenesis-inhibitory tripeptides, compositions and their methods of use |
| WO2002071854A1 (en) | 2001-03-09 | 2002-09-19 | Unilever N.V. | Fermented milk product |
| US6589574B2 (en) | 2001-03-19 | 2003-07-08 | Council Of Scientific & Industrial Research | Process for preparation of protein-hydrolysate from milk protein |
-
1997
- 1997-09-26 JP JP9277949A patent/JP3028411B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-02-05 AU AU57802/98A patent/AU734422B2/en not_active Ceased
- 1998-02-05 PL PL98339343A patent/PL188675B1/pl unknown
- 1998-02-05 ES ES98901520T patent/ES2237834T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-05 TR TR2000/00854T patent/TR200000854T2/xx unknown
- 1998-02-05 KR KR10-2000-7003224A patent/KR100404154B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-05 CN CNB988115301A patent/CN1149279C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-05 US US09/508,840 patent/US6534304B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-05 SK SK435-2000A patent/SK284755B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-02-05 AT AT98901520T patent/ATE294230T1/de active
- 1998-02-05 DE DE69829983T patent/DE69829983T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-05 BR BR9813218-0A patent/BR9813218A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-02-05 PT PT98901520T patent/PT1016709E/pt unknown
- 1998-02-05 HU HU0003744A patent/HU225980B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1998-02-05 CA CA002304985A patent/CA2304985C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-05 CZ CZ20001082A patent/CZ291067B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-02-05 WO PCT/JP1998/000481 patent/WO1999016862A1/ja active IP Right Grant
- 1998-02-05 EP EP98901520A patent/EP1016709B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-17 IN IN2795DE1998 patent/IN188418B/en unknown
- 1998-09-22 TW TW087115782A patent/TW526268B/zh not_active IP Right Cessation
- 1998-09-23 MY MYPI98004363A patent/MY118157A/en unknown
- 1998-09-25 AR ARP980104806A patent/AR017153A1/es active IP Right Grant
- 1998-09-25 ZA ZA988659A patent/ZA988659B/xx unknown
-
2000
- 2000-04-26 BG BG104382A patent/BG64422B1/bg unknown
-
2002
- 2002-12-05 US US10/310,628 patent/US7282354B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| BG64422B1 (bg) | Бактерия lастоbacillus неlvетiсus, притежаваща висока способност да продуцира трипептид, ферментационен млечен продукт и метод за получаването му | |
| KR100704441B1 (ko) | 항고혈압성 디펩타이드 및 트리펩타이드를 생산하는락토바실러스 헬베티쿠스 | |
| US20230413837A1 (en) | Streptococcus thermophilus producing gamma-aminobutyric acid and application thereof | |
| RU2109054C1 (ru) | Консорциум бифидобактерий bifidobacterium bifidum 791, b. longum b 379 m, b. breve 79-119, b. infantis 73-15, b. adolescentis г 7513 для приготовления кисломолочных, неферментированных пищевых продуктов и бактерийных препаратов | |
| CN109517763B (zh) | 瑞士乳杆菌h11及其应用 | |
| CN110129243B (zh) | 豆酸奶适制性菌株、菌剂及其应用 | |
| RU2422509C2 (ru) | ЛАКТОЗОНЕГАТИВНЫЕ ШТАММЫ Lactobacillus helveticus, СПОСОБНЫЕ ОБРАЗОВЫВАТЬ ГИПОТЕНЗИВНЫЕ ТРИПЕПТИДЫ IPP И VPP, И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, ПРИМЕНЕНИЕ ШТАММОВ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ КИСЛОМОЛОЧНОГО ПРОДУКТА, КИСЛОМОЛОЧНЫЙ ПРОДУКТ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ | |
| WO2018220104A1 (en) | Method of producing streptococcus thermophilus mutant strains | |
| JP4313615B2 (ja) | 免疫賦活活性及びγ−アミノ酪酸産生能を有する新規乳酸菌、及びその利用。 | |
| CN109266572B (zh) | 生产谷氨酰胺转氨酶的干酪乳杆菌诱变菌及其用途 | |
| CN112391297B (zh) | 一种降解展青霉素的产朊假丝酵母、生物制剂及其应用 | |
| CN101328471B (zh) | 青春双歧杆菌grx066及其用途 | |
| CN115927075B (zh) | 一株具高ace抑制活性的嗜热链球菌及其应用 | |
| CN119286742B (zh) | 一种德氏乳杆菌乳酸亚种yn-01及由其制备的产品和应用 | |
| MXPA00002575A (en) | Lactobacillus helveticus bacterium having high capability of producing tripeptide, fermented milk product, and process for preparing the same | |
| Mohammadzadeh et al. | Exploring the probiotic properties of Lactiplantibacillus pentosus and gamma-aminobutyric acid production for cheese development | |
| PL241893B1 (pl) | Sposób przeprowadzenia selekcji mikroorganizmów proteolitycznych, sposób wytwarzania hydrolizatu białek serwatkowych, zawierającego bioaktywne peptydy i hydrolizat białek serwatkowych |