BG63991B1

BG63991B1 - Фармацевтично средство, съдържащо rно киназен инхибитор

Info

Publication number: BG63991B1
Application number: BG103246A
Authority: BG
Inventors: Masayoshi Uehata; Takashi Ono; Hiroyuki Satoh; Keiji Yamagami; Toshio Kawahara
Original assignee: Yoshitomi Pharmaceutical Industries,Ltd.
Priority date: 1996-08-12
Filing date: 1999-03-12
Publication date: 2003-09-30
Also published as: ATE359822T1; RU2206321C2; HK1022436A1; BG63992B1; HU229864B1; CZ46099A3; KR100576148B1; DE69737631D1; CA2263425A1; BG107195A; PL331561A1; US6906061B2; HUP9903694A2; HUP9903694A3; US6451825B1; BG107645A; DE69737631T3; NO990622L; CZ301044B6; RU2003103606A

Abstract

Rho киназният инхибитор се прилага като средство за лечение на хипертензия, ангина пекторис, астма,заболяване на периферни органи на кръвообращението, артериосклероза, рак, възпалителни процеси, автоимунни заболявания, СПИН, остеопороза, ретинопатия, за подобряване функциите на мозъка. Чрез него се потискат цереброваскуларни контракции, осъществява се профилактика на преждевременно раждане и на инфекции на храносмилателния тракт. Rho киназният инхибитор се прилага също и като контрацептив, имуносупресант, реагент и диагностично средство.

Description

Изобретението се отнася до лечение на различни заболявания чрез използването на Rho киназен инхибитор като фармацевтично средство. Изобретението се отнася и до използване на Rho киназен инхибитор като реагент или диагностик.

Предшестващо състояние на техниката

От откритието на Ras през 1981 г. са намерени многобройни малки GTP свързващи протеини (малки G протеини), подобни на Ras, и са изучени много функции, които те притежават. Малките G протеини имат молекулно тегло 20,000-30,000 и нямат нуклонова група в ядрото. Всички те специфично свързват GDP и GTP и хидролизират така свързаните GTP (GTPase активност) (Hall, A., Science, 249, 635640, 1990; Bourne, Н. R. et al., Nature, 349, 117-127, 1991).

Повече от 50 вида гени, енкодиращи тези малки G протеини са създадени от дрожди на бозайници, образуващи суперсемейство. Малките G протеини са до голяма степен разделени в 5 групи - Ras, Rho, Rab, Arf и други, съответстващи на сходството на аминокиселинните последователности.

Rho се наричат така, защото техните гени са изолирани под формата на cDNA от нервномускулни енкодове на полипептид от морски див заек, притежаващ около 35% хомология с Ras (Ras хомология) (Madaule, Р., Cell, 41, 31-40, 1985).

Rho е специфичен ADP, рибозилиран чрез СЗ ензим, който е един от ботулиновите токсини, и стафилококов токсин EDIN, и е инактивиран (Narumiya, S. and Morii, S., Cell Signal, 5, 9-19, 1993; Sekine, A. et al., J. Biol. Chem., 264, 8602-8605, 1989). Следва, че ензимът СЗ и EDIN се използват за изучаване на въвличането на Rho в клетъчните функции от различни аспекти.

Например, фосфорилиране чрез киназа на миозинова неустойчива верига (MLC) се счита даването на възможност за актин миозиново взаимодействие и предизвикване на кон тракция на гладък мускул, като е изяснена структурата на миозиновата фосфатаза на гладкия мускул, която дефосфорилира MLC (Shimizu,, Н. et al., J. Biol. Chem. 269, 3040730411, 1994). Ясно е, че активността на миозиновата фосфатаза е подобна на тази на MLC киназа под контрола на вътреклетъчния сигнал на трансдукционната система и Rho се включва в този механизъм. На Rho границата с GTP е създадено за усилване на Са-зависима контракция в гладкия мускул обелен тип влакно (Hirata, К., J. Biol. Chem., 267, 87198722, 1992), чрез това се предлага увеличаване на Са чувствителност на гладкия мускул, като контракцията се причинява чрез инхибирането на миозиновата фосфатазна активност чрез Rho.

Потвърдено е, че съществува в Swiss ЗТЗ клетка и 3Y1 клетка, също, Rho-зависимо повишение на тирозиново фосфорилиране (Kumagai, N. et al., J. Biol. Chem, 270, 84668473, 1993) и активиране на много видове серин/треонинови кинази (Kumagai, N. et al., FEBS Lett., 366, 11-16, 1995). Предложено е присъствието на множество протеинови кинази в низходящия поток на Rho в сигналната трансдукционна пътека през Rho. ROCa (Leung, Т. et al., J. Biol. Chem., 270, 29051-29054, 1995) [друго наименование Rho-киназа, ROCK-II] и pl60ROCK (Ishizaki, T. et al., The EMBO J., 15(8), 1885-1893, 1996) [друго наименование ROCp, ROCK-I] са публикувани като серин/ треонинова киназа (Rho киназа), активирана отнапред с активността на Rho. Публикувано е, че биологичното разпределение на двата ензима е различно (Nakagawa, О, et al., FEBS Lett. 392 189-193, 1996). Публикувано е, че тази Rho киназа директно фосфорилира миозиновата фосфатаза и инхибира нейната активност (Kimura, К. et al., Sciencee, 273, 245248, 1996).

Rho е отговорна за активирането не само на протеиновата киназа, но също и на липидната киназа (Zang, J. et al., J. Biol. Chem., 268, 22251-22254, 1993) и също е предложено присъствието на фосфолипаза (PLD), активирана чрез Rho (Siddiqi, A. R. et al., J. Biol. Chem., 268, 24535-24538, 1995).

Публикуван е контрол чрез Rho на подвижността на Swiss ЗТЗ фибробласти в присъствието на серум, подвижността на кератиноцити 303R чрез HGF и ТРА (12-О-тетраде каноилфорбол 13-ацетат), публикувана е спонтанно срещаща се и хемоатрактантна междинна подвижност на неутрофили (Takai, Y. et al., Trends Biochem. Sci, 20, 227-231, 1995), и e публикуван контрол на инфилтрацията на чернодробна ракова клетка (ММ1 клетка), която е един от метастатичните ракови модели, чрез отгледан мезотелиален слой посредством активиране на Rho (Yoshioka, К. et al., FEBS Lett., 372, 25-28, 1995), чрез което се предлага въвличането на Rho в клетъчна подвижност.

Потвърдено е, че в клетките, извлечени от нерви, такива като невробластом, РС-12 клетки и други подобни, се скъсява осевия цилиндър на нервната клетка и се заобля клетката чрез лизофосфатидна киселина, което е активиране на стимуланта на Rho. Тъй като това скъсяване може да бъде инхибирано чрез обработване с ензим СЗ (Jalink, К. et al., J. Cell Biol., 126, 801-810, 1994) и образуването на кръгла структура на “podosome”, която отделя сайта, където разтваряне и абсорбция на взетата кост, поставена в чистата зона на остеокласта от околността се инхибира чрез обработване с ензима СЗ (Zhang, D. et al., J. Cell Sci., 108, 2285-2292, 1995), като е предложено широко въвличане на Rho в морфологичните промени на клетките.

Публикуваното обработване с ензима СЗ инхибира активирането на адхезията на молекула като LFA (левкоцитна функция - свързан антиген), и, подобна на това, публикуваното обработване с ензима СЗ инхибира пролиферацията на фибробласти Swiss ЗТЗ (Yamamoto, М. et al., Oncogene, 8, 1449-1455, 1993). Така, публикувано е, че Rho контролира клетъчна адхезия и клетъчно делене чрез актинов цитоскелетон, и че също е заангажирана с транскрипционния контрол на c-fos гена (Hill, С. S. et al., Cell, 81, 1159-1170, 1995) и трансформация на клетката (Khosravi-Far, R. etal., Mol. Cell Biol., 15(11), 6443-6453, 1995).

В мнение за инхибирането на инвазията на дизентерийния бацил в епителиалните клетки чрез ензим СЗ, към съвременна публикация е документирано широкото въвличане на Rho в бактерийна инфекция (Adam, Т. et al., The EMBO J., 15(13), 3315, 1996).

Публикувано е, че нивата на Rho и Rho киназата в бременни плъхове са по-високи в сравнение с небременни плъхове (Niiro, N. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 230, 356

359, 1997), и е известно широко въвличане на Rho и Rho киназата при мускулна контракция на матката при раждане. Счита се, че интегрина (Sueoka, К. etal., Fertility&Sterility, 67(5), 799-811, 1997) се включва в клетъчно-клетъчната и клетъчно-извънклетъчната матрична адхезия по време на етапите на оплождане, ембриогеназа и ембрионимплантация, като е известно, че се активира чрез Rho (Morii, N. et al., J. Biol. Chem., 267, 20921-20926, 1992).

Следва, че произведеният чист Rho се активира от получаване на сигнали от различни клетъчни мембранни рецептори и се активират Rho функции, като молекулно прехвърляне на широка редица на клетъчния феномен, такива като контракция на гладкия мускул, клетъчна подвижност, клетъчна адхезия, морфологични промени на клетката, израстване на клетката и други подобни, чрез актомиозинова система.

Контракцията на гладкия мускул се включва значително при болестни състояния като хипертензия, ангина пекторис, цереброваскуларна контракция, астма, заболяване на периферното кръвообращение, предстоящо преждевременно раждане и други подобни; клетъчната подвижност играе важна роля при инвазия и метастази на рак, артериосклероза, ретинопатия, имунна реакция и други подобни; клетъчната адхезия е широко включена при метастази от рак, възпаление, автоимунно заболяване, AIDS, оплождане и имплантация на оплодено яйце в маточната лигавица и други подобни; морфологична промяна на клетката е широко включена при мозъчно функционално заболяване, остеопороза, бактерийна инфекция на храносмилателния тракт и други подобни; и израстване на клетката е широко включено при рак, артериосклероза и други подобни. Обмислено е да се направи лекарство, което блокира функциите на Rho като терапевтично средство за тези заболявания, при които Rho играе някаква роля.

Само ензимът СЗ и EDIN могат да инхибират действията на Rho. Това са протеини, които не могат да проникват в цитоплазма, което предотвратява тяхното развитие като фармацевтично средство.

От друга страна, инхибирането на Rho киназа, която се счита, че представя низходящия поток на Rho в сигналната трансдукционна пътека през Rho, се счита, че води към инхибиране на отговори на различен клетъчен феномен, дължащ се на Rho. Специален инхибитор на Rho киназа не е известен досега.

Очаква се, че чрез търсене на съединение, което инхибира Rho киназата, такова като Rho киназен инхибитор, ще бъде ефективно средство за профилактика и/или лечение на посочените заболявания и феномена, отнасящ се до Rho , такива като хипертензия, ангина пекторис, цереброваскуларна контракция, астма, заболяване на периферното кръвообращение, преждевременна раждане, артериосклероза, рак, възпаление, имунно заболяване, автоимунно заболяване, AIDS, оплождане и имплантация на оплодено яйце в маточната лигавица, остеопороза, ретинопатия, мозъчно функционално заболяване, бактерийна инфекция на храносмилателния тракт и други подобни.

Известно е, че съединението с формула (I) е полезно като средство за профилактика и лечение на заболяване на органите и кръвообращението, церебралните, бъбречни и периферни артерии и други подобни (например, силно и дълготрайно терапевтично средство при хипертензия, ангина пекторис, бъбречно заболяване и заболяване на периферното кръвообращение, и потискащ агент на цереброваскуларна контракция и други подобни), както и като терапевтично средство при астма (Japanese Patent Unexamined Publication Ν 62-89679, Japanese Patent Unexamined Publication N 3218356, Japanese Patent Unexamined Publication N 4-273821, Japanese Patent Unexamined Publication N 5-194401, Japanese Patent Unexamined Publication N 6-41080 и WO 95/ 28387 и други).

He е известно тези съединения c формула (I) да блокират функциите на Rho или да имат Rho киназно инхибиторно действие.

Същност на изобретението

Целта на изобретението е да осигури Rho киназен инхибитор като ново фармацевтично средство. В резултат на интензивни изследвания е установено, че съединение, инхибиращо Rho киназа, има противохипертензивно действие, действие против ангина пекторис, потискащо действие при цереброваскуларна контракция, противоастматично действие, действие, подобряващо периферното кръвообращение, предотвратяващо действие при преждевремен но раждане, действие против артериосклероза, противораково действие, противовъзпалително действие, имуносупресивно действие, подобряващо действие при автоимунно заболяване, действие против AIDS, предотвратяващо действие при оплождане и имплантация на оплодено яйце, лечебно действие при остеопороза, лечебно действие при ретинопатия, подобряващо действие на функция на мозъка, предотвратяващо действие при бактерийна инфекция на храносмилателния тракт и, че Rho киназният инхибитор е полезен като фармацевтично средство, специално като терапевтично средство за хипертензия, терапевтично средство за ангина пекторис, потискащо средство за цереброваскуларна контракция, терапевтично средство за астма, терапевтично средство при заболяване на периферни органи на кръвообращението, профилактично средство при преждевременно раждане, терапевтично средство за артериосклероза, противораково лекарство, противовъзпалително средство, имуносупресант, терапевтично средство за автоимунно заболяване, лекарство против AIDS, терапевтично средство за остеопороза, терапевтично средство за ретинопатия, лекарство, подобряващо функция на мозъка, средство против забременяване и профилактично средство при инфекция на храносмилателния тракт, което е резултат от завършване на настоящото изобретение.

Установено, че съединение, което инхибира Rho киназа, е полезно като реагент за изучаването на Rho и Rho киназа и като диагностично средство за заболявания, свързани с тях, което е резултат от завършване на настоящото изобретение.

Изобретението предвижда следното.

(1) Фармацевтично средство, съдържащо Rho киназен инхибитор.

(2) Фармацевтично средство, съдържащо Rho киназен инхибитор, което е най-малко едно, избрано от групата, включваща терапевтично средство за хипертензия, терапевтично средство за ангина пекторис, потискащо средство на цереброваскуларна контракция, терапевтично средство за астма, терапевтично средство при заболяване на периферни органи на кръвообращението, терапевтично средство за артериосклероза, противораково лекарство, противовъзпалително средство, имуносупресант, терапевтично средство за автоимунно заболяване, лекарство против AIDS, терапевтично средство за остеопороза, терапевтично средство за ретинопатия, лекарство, подобряващо функция на мозъка, профилактично средство при преждевременно раждане, средство против забременяване и профилактично средство при инфекция на храносмилателния тракт.

(3) Фармацевтичен състав, съдържащ терапевтично ефективно количество Rho киназен инхибитор и фармацевтично приемлив адитив.

(4) Реагент, съдържащ Rho киназен инхибитор.

(5) Диагностично средство, съдържащо Rho киназен инхибитор.

(6) Rho киназен инхибитор, съдържащ амидно съединение с формула

О Rb

I I ®

Ra— С-- N--Rc ^w в която Ra е група с формулата

(Ь)_;

RS

във формулите (а) и (b), R е водород, алкил или циклоалкил, циклоалкилалкил, фенил или аралкил, който по избор има заместител в пръстена, или група с формула

NR⁷ ___/ «Ч \ R⁶ заместен азотен атом, R² е водород или алкил, R³ и R⁴ са еднакви или различни и всеки е водород, алкил, аралкил, халоген, нитро, амино, алкиламино, ациламино, хидрокси, алкокси, аралкилокси, циано, ацил, меркапто, алкилтио, аралкилтио, карбокси, алкоксикарбонил, карбамоил, алкилкарбамоил, или азид, и А е група с формула в която R⁶ е водород, алкил или формула: -NR’NR⁹, в която R⁸ и R’ са еднакви или различни и всеки е водород, алкил, аралкил или фенил, R⁷ е водород, алкил, аралкил, фенил, нитро или циано, или R⁶ и R⁷ в комбинация представляват група, образуваща хетероцикъл, по избор притежаващ в пръстена кислороден атом, серен атом или по избор заместен азотен атом, R¹ е водород, алкил или циклоалкил, циклоалкилалкил, фенил или аралкил, който по избор има заместител в пръстена, или R и R¹ в комбинация образуват заедно със съседния азотен атом група, образуваща хетероцикъл, по избор притежаващ в пръстена кислороден атом, серен атом или по избор

R¹⁰

I — (CHJUQmiCHjJn-- (е)

R в която R¹⁰ и R” са еднакви или различни и всеки е водород, алкил, халоалкил, аралкил, хидроксиалкил, карбокси, или алкоксикарбонил, или R¹⁰ и R¹' в комбинация показ40 ват група, която образува циклоалкил и I, ш и η са всеки 0 или цяло число 1-3, във формулата (с), L е водород, алкил, аминоалкил, моно или диалкиламиноалкил, тетрахидрофурфурил, карбамоилалкил, фталимидоалкил, амидино или група с формулата о

в която В е водород, алкил, алкокси, аралкил, аралкилокси, аминоалкил, хидроксиалкил, алканоилоксиалкил, алкоксикарбонилалкил, α-аминобензил, фурил, пиридил, фенил, фениламино, стирил или имидазопиридил, Q¹ е водород, халоген, хидрокси, аралкилокси или тиенилметил, W е алкилен, Q² е водород, халогеун, хидрокси или аралкилокси, X е алкилен, Q³ е водород, халоген, хидрокси, алкокси, нитро, амино, 2,3-дихидрофурил или 5-метил-З-оксо2,3,4,5-тетрахидропиридазин-6-ил; и Y е единична връзка, алкилен или алкенилен, и във формулата (с) пунктираната линия е единична връзка или двойка връзка, и R⁵ е водород, хидрокси, алкокси, алкоксикарбонилокси, алканоилокси или аралкилоксикарбонилокси; Rb е водород, алкил, аралкил, аминоалкил или моно- или диалкиламиноалкил; и Rc е по избор заместен хетероцикъл, съдържащ азот, негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол.

(7) Фармацевтично средство, съдържащо съединение с формула (I), негов изомер и/ или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол, което е терапевтично средство за най-малко едно заболяване, избрано от групата, включваща хипертензия, ангина пекторис, цереброваскуларна контракция, астма и заболяване на периферната кръвоносна система, които са причинени от Rho киназа.

(8) Фармацевтично средство, съдържащо съединение с формула (I), негов изомер и/ или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол, което е наймалко едно терапевтично средство, избрано от групата, включваща терапевтично средство за артериосклероза, противораково лекарство, противовъзпалително средство, имуносупресант, терапевтично средство за автоимунно заболяване, лекарство против AIDS, терапевтично средство за остеопороза, терапевтично средство за ретинопатия, лекарство, подобряващо функция на мозъка, профилактично средство при преждевременно раждане, средство против забременяване и профилактично средство при инфекция на храносмилателния тракт.

(9) Реагент, притежаващ Rho киназа инхибиторна активност, който съдържа съединение с формула (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол.

(10) Диагностично средство за заболяване, причинено от Rho киназа, което съдържа съединение с формула (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол.

(27) Използване на Rho киназен инхибитор за производство на терапевтично средство за заболяване, лечимо чрез инхибиране на Rho киназа.

(28) Използване на Rho киназен инхибитор от горната точка (27), където заболяването, лечимо чрез инхибирането на Rho киназата, е най-малко едно заболяване, избрано от групата, включваща хипертензия, ангина пекторис, цереброваскуларна контракция, астма, заболяване на периферното кръвообращение, артериосклероза, рак, възпаление, имунно заболяване, автоимунно заболяване, AIDS остеопороза, ретинопатия, заболяване на функция на мозъка, преждевременно раждане, оплождане и имплантация на оплодено яйце и инфекция на храносмилателния тракт.

(29) Използване на съединение с формула (I), негов изомер и/или фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол за производство на терапевтично средство за най-малко на едно заболяване, избрано от групата, включваща хипертензия, ангина пекторис, цереброваскуларна контракция, астма и заболяване на периферното кръвообращение, причинени от Rho киназа, и артериосклероза, рак, възпаление, имунно заболяване, автоимунно заболяване, AIDS, остеопороза, ретинопатия, заболяване на функция на мозъка, преждевременно раждане, оплождане и имплантация на оплодено яйце и инфекция на храносмилателния тракт.

(32) Търговска опаковка, включваща Rho киназен инхибитор и писмени указания, свързани с нея, като писмените указания посочват, че Rho киназният инхибитор може или ще бъде използван за най-малко едно заболяване, избрано от групата, включваща хипертензия, ангина пекторис, цереброваскуларна контракция, астма, заболяване на периферното кръвообращение, артериосклероза, рак, възпаление, имунно заболяване, автоимунно заболяване, AIDS, остеопороза, ретинопатия, заболяване на функция на мозъка, преждевременно раждане, оплождане и имплантация на оплодено яйце и инфекция на храносмилателния тракт.

(33) Търговска опаковка, включваща съединение с формула (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол и писмени указания, свързани с нея, като писмените указания посочват, че съединението може или ще бъде използвано за лечение най-малко на едно заболяване, избрано от групата, включваща хипертензия, ангина пекторис, цереброваскуларна контракция, астма и заболяване на периферното кръвообращение, които са причинени от Rho киназа, и артериосклероза, рак, възпаление, имунно заболяване, автоимунно заболяване, AIDS, остеопороза, ретинопатия, заболяване на функция на мозъка, преждевременно раждане, оплождане и имплантация на оплодено яйце и инфекция на хранителния тракт.

Подробно описание на изобретението

Rho киназното инхибиторно действие, противохипертензивното действие, действието против ангина пекторис, потискащото действие на цереброваскуларна контракция, действието против астма, подобряващото действие на периферното кръвообращение, предотвратяващото действие при преждевременно раждане, действието против артериосклероза, противораковото действие, противовъзпалителното действие, имуносупресивното действие, подобряващото действие при автоимунно заболяване, действието против AIDS, предотвратяващото действие при оплождане и имплантация на оплодено яйце, предотвратяващото действие при бактерийна инфекция на храносмилателния тракт, лечебното действие при остеопороза, лечебното действие при ретинопатия и подобряващото действие на мозъчна функция от настоящото изобретение могат да бъдат потвърдени чрез Rho киназна инхибиторна активност, вазохипотонично действие, релаксиращо действие на трахеята, усилващото действие на периферния кръвен поток, инхибиторното действие при клетъчната адхезионна индукция, инхибиторното действие при злокачествени туморни метастази, инхибиторното действие при костна резорбция, миша алогенна MLR инхибиторна активност, инхибиторно действие при ангиогенезис, инхибиторно действие при пролиферация на васкуларна стомашна мускулна клетка и други подобни.

Заболяването, свързано с Rho, срещу което новият Rho киназен инхибитор е ефективен, включва, например, болестни симптоми на хипертензия, ангина пекторис, цереброваскуларна контракция, астма, заболяване на периферното кръвообращение, преждевременно раждане, артериосклероза, рак, възпаление, имунно заболяване, автоимунно заболяване, AIDS, бактерийна инфекция на храносмилателния тракт, остеопороза, ретинопатия, заболяване на функция на мозъка и други подобни, както и биологичен феномен, такъв като оплождане и имплантация на оплодено яйце.

Както е използвана тук, чрез Rho киназата от настоящото изобретение се означава серин/треонинова киназа, активирана отнапред с активността на Rho, който е илюстриран чрез посочените ROCa (ROCKII), pl60ROCK(ROCP, ROCK-I) и други протеини, притежаващи серии/ треонинова киназна активност.

Рак включва костно-мозъчна левкемия, лимфоцитна левкемия, рак на стомаха, рак на червата, белодробен рак, рак на панкреаса, чернодробен рак, рак на хранопровода, рак на яйчниците, рак на гърдата, рак на кожата, цервикален рак, орхионкус, невробластом, пикочен епиталиален рак, множествен миелом, рак на матката, меланом, церебрален тумор и други подобни, и противоракови средства за инхибиране на образуването, инфилтрирането, метастазите, израстването и други подобни на тези тумори.

Имунното заболяване включва алергични заболявания, отхвърляне при трансплантация на орган и други подобни.

Автоимунното заболяване включва ставен ревматизъм, обща еритрематодна кожна туберколоза, заболяване на Sjogren, множествена склероза, тежка псевдопаралитична миостения, диабет тип I, ендокринно очно заболяване, първична цироза на жлъчката, заболяване на Crohn, гломерулонефрит, саркоидоза, псориазис, пенфигус, хиопластична анемия, първична тромбоцитопенична пурпура и други подобни.

Бактерийна инфекция на храносмилателния тракт означава различни заболявания, причинени от инвазия на Salmonella, дизентерийни бацили, чревни патогенни Escherichia coli и други подобни в епителиалните клетки на чревната слизеста обвивка.

Ретинопатия означава ангиопатична ретинопатия, артерийносклерозна ретинопатия, централна ангиоспастична ретинопатия, централна серозна ретинопатия, завита навътре ретинопатия, диабетна ретинопатия, диспротеинемична ретинопатия, хипертонична ретинопатия, левкемична ретинопатия, липемична ретинопатия, пролиферативна ретинопатия, бъбречна ретинопатия, сърповидна ретинопатия, токсемична ретинопатия при бременост и други подобни.

Заболяване на функция на мозъка включва психично състояние, дължащо се на церебрална хеморагия, церебрална тромбоза, церебрална емболия, субарахмоидална хеморагия, преходен церебрален исхимичен удар, хипертензивна енцефалопатия, церебрална артериосклероза, субдурален хематом, екстрадурален хематом, церебрална хипоксия, церебрален едем, церебритис, церебрален тумор, външно нараняване на главата, душевно заболяване, метаболитно отравяне, лекарствено отравяне, темпорално респираторно задържане, дълбока анестезия по време на операция, телесно заболяване и други подобни, и усложнение, намалено внимание, хиперактивност, логопатия, забавено психично развитие, забравяне, деменция (включително блуждаене, нощен делириум, агресивно поведение и други подобни, свързани с деменция), причинена от посочените заболявания.

Rho киназният инхибитор от настоящото изобретение е ефективен като фармацевтично средство, по-специално като средство за профилактика и лечение на тези заболявания, причинени от Rho, такова като терапевтично средство за хипертензия, терапевтично средство за ангина пекторис, супресивно средство за цереброваскуларна контракция, терапевтично средство за астма, терапевтично средство за заболяване на периферното кръвообращение, профилактично средство за преждевременно раждане, терапевтично средство за артериосклероза, лекарство против рак, средство против възпаление, имуносупресант, терапевтично средство за автоимунно заболяване, лекарство против AIDS, средство против забременяване, профилактично средство при инфекция на храносмилателния тракт, терапевтично средство за остеопороза, терапевтично средство за ретинопатия и лекарство, подобряващо функция на мозъка.

Съединенията с формула (I) имат висок афинитет към Rho киназа. Радиоактивните вещества (радиолиганд) са индустриално полезни като селективен радиолиганд на Rho киназа. Съединенията с формула (I) и техните модифицирани съединения (например, радиолиганд на тези съединения и други подобни), които са Rho киназни инхибтори, са полезни като реагенти за изучаване на Rho и Rho киназа и като диагностични средства за заболявания, свързани с тях.

Съединението, използвано като Rho киназен инхибитор от изобретението може да бъде всяко, ако има Rho киназна инхибиторна активност. Например, използвани са съединенията с формула (I).

В описанието всеки символ от формула (I) е определен, както следва.

Алкил при R и R¹ е алкил с права или разклонена верига, притежаващ 1 до 10 въглеродни атома, който е илюстриран с метил, етил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, вторичен бутил, третичен бутил, пентил, хексил, хептил, октил, нонил, децил и други подобни, с предпочитание дадено на алкил, притежаващ 1 до 4 въглеродни атома.

Циклоалкилът при R и R¹ има 3 до 7 въглеродни атома и е илюстриран с циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклохексил, циклохептил и други подобни.

Циклоалкилалкилът при R и R¹ е този, при който циклоалкиловата верига е посоченият циклоалкил, притежаващ 3 до 7 въглеродни атома и алкиловата верига е алкил с права или разклонена верига, притежаващ 1 до 6 въглеродни атома (например, метил, етил, пропил, изопропил, бутил, пентил, хексил и други подобни), който е илюстриран с циклопропилметил, циклобутилметил, циклопентилметил, циклохексилметил, циклохептилметил, циклопропилетил, циклопентилетил, циклохексилетил, циклохептилетил, циклопропилпропил, циклопентилпропил, циклохексилпропил, циклохептилпропил, циклопропилбутил, циклопентилбутил, циклохексилбутил, циклохептилбутил, циклопропилхексил, циклопентилхексил, циклохексилексил, циклохептилхексил и други подобни.

Аралкилът при R и R¹ е този, при който алкилова верига е алкил, притежаващ 1 до 4 въглеродни атома и е илюстриран с фенилалкил, такъв като бензил, 1-фенилетил, 2-фенилетил, 3-фенилпропил, 4-фенилбутил и други подобни.

Заместителят на по избор заместен циклоалкил, циклоалкилалкил, фенил и аралкил в пръстена при R и R¹ е халоген (например, хлор, бром, флуор и йод), алкил (също както алкил при R и R¹), алкокси (алкокси с права или разклонена верига, притежаващ 1 до 6 въглеродни атома, такъв като метокси, етокси, пропокси, изопропокси, бутокси, изобутокси, вторичен бутокси, третичен бутокси, пентилокси, хексилокси и други подобни), аралкил (също както аралкил при R и R¹) или халоалкил (алкил при R и R¹, който е заместен с 1-5 халогена, и илюстриран с флуорометил, дифлуорометил, трифлуорометил, 2,2,2-трифлуороетил, 2,2,3,3,3-пентафлуоропропил и други подобни), нитро, амино, циано, азид и други подобни.

Групата, образувана от R и R¹, в комбинация заедно със съседния азотен атом, чийто хетероциклични форми по избор притежават в пръстена си кислороден атом, серен атом или по избор заместен азотен атом, е да предпочитане 5 или 6-членен пръстен и свързан пръстен. Примери включват 1 -пиролидинил, пиперидино, 1-пиперазинил, морфолино, тиоморфолино, 1-имидазолил, 2,3-дихидротиазол-3-ил и други подобни. Заместителят на по избор заместеният азотен атом е илюстриран с алкил, аралкил, халоалкил и други подобни. Както са използвани тук, алкил, аралкил и халоалкил са определени както за R и R¹.

Алкилът при R² е както е определен за

RhR¹.

Халогенът, алкилът, алкокси и аралкилът R³ и R⁴ са както са определени за R и R¹.

Ацилът при R³ и R⁴ е алканоил, притежаващ 2 до 6 въглеродни атома (например, ацетил, пропионил, бутирил, валерил, пивалоил и други подобни), бензоил или фенилалканоил, при който алканоиловата верига има 2 до 4 въглеродни атома (например, фенилацетил, фенилпропионил, фенилбутирил и други подобни).

Алкиламино при R³ и R⁴ е този, при който алкиловата верига е алкиламино, притежаващ права или разклонена верига, имаща 1 до 6 въглеродни атома. Примери за това включ ват метиламино, етиламино, пропиламино, изопропиламино, бутиламино, изобутиламино, вторичен бутиламино, третичен бутиламино, пентиламино, хексиламино и други подобни.

Ациламинът при R³ и R⁴ е този, при който ациловата верига е алканоил, притежаващ 2 до 6 въглеродни атома, бензил или алканоиловата верига е фенилалканоил, притежаващ 2 до 4 въглеродни атома и други подобни, който е илюстриран с ацетиламино, пропиониламино, бутириламино, валериламино, пивалоиламино, бензоиламино, фенилацетиламино, фенилпропиониламино, фенилбутириламино и други подобни.

Алкилтио при R³ и R⁴ е този, при който алкиловата верига е алкил с права или разклонена верига, притежаващ 1 до 6 въглеродни атома, който е илюстриран с метилтио, етилтио, пропилтио, изопропилтио, бутилтио, изобутилтио, вторичен бутилтио, третичен бутилтио, пентилтио, хексилтио и други подобни.

Аралкилокси при R³ и R⁴ е този, при който алкиловата верига е алкил, притежаващ 1 до 4 въглеродни атома, който е илюстриран с бензилокси, 1-фенилетилокси, 2фенилетилокси, 3-фенилпропилокси, 4фенилбутилокси и други подобни.

Аралкилтио при R³ и R⁴ е този, при който алкиловата верига е алкил, притежаващ 1 до 4 въглеродни атома, който е илюстриран с бензилтио, 1-фенилетилтио, 2-фенилетилтио, 3фенилпропилтио, 4-фенилбутилтио и други подобни.

Алкоксикарбонил при R³ и R⁴ е този, при който алкокси веригата е алкокси с права или разклонена верига, притежаващ 1 до 6 въглеродни атома, който е илюстриран с метоксикарбонил, етоксикарбонил, пропоксикарбонил, изопропоксикарбонил, бутоксикарбонил, изобутоксикарбонил, вторичен бутоксикарбонил, третичен бутоксикарбонил, пентилоксикарбонил, хексилоксикарбонил и други подобни.

Алкилкарбамоил при R³ и R⁴ е карбамоил моно- дизаместен с алкил, притежаващ 1 до 4 въглеродни атома, който е илюстриран с метилкарбамоил, диметилкарбамоил, етилкарбамоил, диетилкарбамоил, пропилкарбамоил, дипропилкарбамоил, бутилкарбамоил, дибутилкарбамоил и други подобни.

Алкокси при R¹ е както е определено за

RhR¹.

Алкоксикарбонилокси при R⁵ е този, при който алкокси веригата е алкокси с права или разклонена верига, притежаваща 1 до 6 въглеродни атома, който е илюстриран с метоксикарбонилокси, етоксикарбонилокси, пропоксикарбонилокси, изопропоксикарбонилокси, бутоксикарбонилокси, изобутоксикарбонилокси, вторичен бутоксикарбонилокси, третичен бутоксикарбонилокси, пентилоксикарбонилокси, хексилоксикарбонилокси и други подобни.

Алканоилокси при R⁵ е този, при който алканоиловата верига е алканоил, притежаващ 2 до 6 въглеродни атома, който е илюстриран с ацетилокси, пропионилокси, бутирилокси, валерилокси, пивалоилокси и други подобни.

Аралкилоксикарбонилокси при R⁵ е този, при който аралкилната верига е аралкил, притежаващ С,-С₄ алкил, който е илюстриран с бензилоксикарбонилокси, 1 фенилетилоксикарбонилокси, 2-фенилетилоксикарбонилокси, 3фенилпропилоксикарбонилокси, 4 фенилбутилоксикарбонилокси и други подобни.

Алкил при R⁶ е както е определен за R и R*; алкил при R⁸ и R’ е както е определен за R и R¹; и аралкил при R⁸ и R’ е както е определен за R и R¹;

Алкил при R⁷ е както е определен за R и R¹ и аралкил при R’ и е както е определен за R и R¹;

Групата, образувана от R⁶ и R⁷ в комбинация, чиито хетероциклични форми по избор притежават в пръстена си кислороден атом, серен атом или по избор заместен азотен атом, е имидазол-2-ил, тиазол-2-ил, оксазол-2-ил, имидазолин-2-ил, 3,4,5,6-тетрахидропиридин-2ил, 3,4,5,6-тетрахидропиримидин-2-ил, 1,3-оксазолин-2-ил, 1,3-тиазолин-2-ил, или по избор заместен бензоимидазол-2-ил, бензотиазол-2-ил, бензоксазол-2-ил и други подобни, притежаващи заместител, такъв като халоген, алкил, алкокси, халоалкил, нитро, амино, фенил, аралкил и други подобни. Използваните тук халоген, алкил, алкокси, халоалкил и аралкил са както са определени за R и R'.

Заместителят на посочения по избор заместен азотен атом е илюстриран с алкил, аралкил, халоалкил и други подобни. Използваните тук алкил, аралакил и халоалкил са както са определени за R и R*.

Хидроксиалкил при R¹⁰ и R¹¹ е алкил с права или разклонена верига, притежаващ 1 до 6 въглеродни атома, който е заместен с 1 до 3 хидрокси групи, който е илюстриран с хидроксиметил, 2-хидроксиетил, 1-хидроксиетил, 3хидроксипропил, 4-хидроксибутил и други подобни. Алкил при R¹⁰ и R¹¹ е както е определен за R и R¹; халоалкил и алкоксикарбонил при R¹⁰ и R¹¹ са както са определени за R и R¹; аралкил при R¹⁰ и R¹¹ е както е определен за R и R¹; и циклоалкилът, образуван от R¹⁰ и R¹¹ в комбинация е същия, както циклоалкилът при RhR¹.

Алкилът при L е както е определен за R и R¹.

Аминоалкилът при L е алкил с права или разклонена верига, притежаващ 1 до 6 въглеродни атома, който е заместен с аминогрупа, който е илюстриран с аминометил, 2аминоетил, 1-аминоетил, 3-аминопропил, 4-аминобутил, 5-аминопентил, 6-аминохексил и други подобни.

Моно- или диалкиламиноалкил при L е моно- или ди-заместен аминоалкил с алкил, притежаващ 1 до 4 въглеродни атома, който е илюстриран с метиламинометил, диметиламинометил, етиаламинометил, диетиламинометил, пропиламинометил, дипропиламинометил, бутиламинометил, дибутиламинометил, 2-диметиаминоетил, 2-диетиламиноетил и други подобни.

Карбамоилалкил при L е алкил с права или разклонена верига, притежаващ 1 до 6 въглеродни атома, заместен с карбамоил, който е илюстриран с карбамоилметил, 2-карбамоилетил, 1-карбамоилетил, 3-карбамоилпропил, 4-карбамоилбутил, 5-карбамоилпентил, 6карбамоилхексил и други подобни.

Фталимидоалкилът при L е алкил с права или разклонена верига, притежаващ 1 до 6 въглеродни атома, който е заместен с фталимид. Примери за него включват фталимидометил, 2-фталимидоетил, 1-фталимидоетил, 3-фталимидопропил, 4-фталимидобутил, 5-фталимидопентил, 6-фталимвдохексил и друга подобни.

Алкилът при В е както е определен за R и R¹.

Алкокси при В е както е определен за R hR¹.

Аралкилът при В е както е определен за R и R¹.

Аралкилокси при В е както е определен за R³ и R⁴.

Аминоалкилът при В е както е определен за L.

Хидроксиалкилът при В е както е определен за R¹⁰ и R¹¹.

Алканоилоксиалкилът при В е този, при който алкил с права или разклонена верига, притежаващ 1 до 6 въглеродни атома е заместен с алканоилокси, притежаващ алканоилова верига, имаща 2 до 6 въглеродни атома, който е илюстриран с ацетилоксиметил, пропионилоксиметил, бутирилоксиметил, валерилоксиметил, пивалоилоксиметил, ацетилоксиетил, пропионилоксиетил, бутирилоксиетил, валерилоксиетил, пивалоилоксиетил и други подобни.

Алкоксикарбонилалкилът при В е този, при който алкил с права или разклонена верига, притежаващ 1 до 6 въглеродни атома е заместен с алкоксикарбонил, имащ алкокси верига, притежаваща 1 до 6 въглеродни атома, който е илюстриран с метоксикарбонилметил, етоксикарбонилметил, пропоксикарбонилметил, изопропоксикарбонилметил, бутоксикарбонилметил, изобутоксикарбонилметил, вторичен бутоксикарбонилметил, третичен бутоксикарбонилметил, пентилоксикарбонилметил, хексилоксикарбонилметил, метоксикарбонилетил, етоксикарбонилетил, пропоксикарбонилетил, изопропоксикарбонилетил, бутоксикарбонилетил, изобутоксикарбонилетил, вторичен бутоксикарбонилетил, третичен бутоксикарбонилетил, пентилоксикарбонилетил, хексилоксикарбонилетил и други подобни.

Халогенът при Q¹, Q² и Q³ е както е определен за R и R¹.

Аралкилокси при Q¹ и Q² е както е определен за R³ и R⁴.

Алкокси при Q³ е както е определен за R и R¹.

Алкиленът при W, X и Y е алкилен с права или разклонена верига, притежаващ 1 до 6 въглеродни атома, който е илюстриран с метилен, етилен, триметилен, пропилен, тетраметилен, пентаметилен, хексаметилен и други подобни.

Алкениленът при Y е алкенилен с права или разклонена верига, притежаващ 2 до 6 въглеродни атома, който е илюстрирана с винилен, пропенилен, бутенилен, пентенилен и други подобни.

Алкилът при Rb е както е определен за

RhR’.

Аралкилът при Rb е както е определен за R и R¹.

Аминоалкилът при Rb е както е определен за L.

Моно- или диалкиламиноалкилът при Rb е както е определен за L.

Когато хетероцикълът е единичен пръстен, съдържащ азот при Rc, е пиридин, пиримидин, триазин, пиразол, триазол и други подобни, и когато той е кондензиран пръстен, той е илюстриран с пиролопиридин (например, 1Н-пироло [2,З-b] пиридин, 1 Н-пироло [3,2-Ь] пиридин, 1 Н-пироло [3,4-Ь] пиридин и други подобни), пиразолопиридин (например, 1Н-пиразоло [3,4-Ь] пиридин, 1 Н-пиразоло [4,З-b] пиридин и други подобни), имидазопиридин (например, 1Н-имидазо [4,5] пиридин и други подобни) , пиролопиримидин (например, 1 Н-пироло [2,З-d] пиримидин, 1 Н-пироло [3,2-d] пиримидин, 1 Н-пироло [3,4-d] пиримидин и други подобни), пиразолопиримидин (например, 1Н-пиразоло [3,4-d] пиримидин, пиразоло [ 1,5-а] пиримидин, 1 Н-пиразоло [4,З-d] пиримидин и други подобни), имидазопиримидин (например, имидазо [1,2-а] пиримидин, 1Н-имидазо [4,5-d] пиримидин и други подобни), пиролотриазин (например, пироло[1,2-а]-1,3,5-триазин, пироло[2,1П-1,2,4-триазин), пиразолотриазин (например, пиразоло [ 1,5-а] -1,3,5-триазин и други подобни), триазолопиридин (например, 1Н-1,2,3-триазоло [4,5-Ь] пиридин и други подобни), триазолопиримидин (например, 1,2,4-триазоло[1,5а] пиримидин, 1,2,4-триазоло [4,3-а] пиримидин, 1Н-1,2,3-триазоло [4,5-d] пиримидин и други подобни), цинолин, хиназолин, хинолин, пиридопиридазин (например, пиридо [2,3-с] пиридазин и други подобни, пиридопирозин (например, пиридо[2,З-b]пиразин и други подобни), пиридопиримидин (например, пиридо [2,З-d] пиримидин, пиридо [3,2-d] пиримидин и други подобни) , пиримидопиримидин (например, пиримидо [4,5-d] пиримидин, пиримидо [5,4-d] пиримидин и други подобни), пиразинопиримидин (например, пиразино [2,З-d] пиримидин и други подобни), нафтиридин (например, 1,8-нафти ридин и други подобни), тетразолопиримидин (например, тетразоло[1,5-а] пиримидин и други подобни), тиенопиридин (например, таено [2,З-b] пиридин и други подобни), тиенопиримидин (например, тиено[2,3-с!]пиримидин и други подобни), тиазолопиридин (например, тиазоло [4,5-Ь] пиридин, тиазоло [5,4-Ь]пиридин и други подобни), тиазолопиримидин (например, тиазоло [4,5-d] пиримидин, тиазоло [5,4-d] пиримидин и други подобни), оксазолопиридин (например, оксазоло [4,5-Ь] пиридин, оксазоло[5,4-Ь]пиридин и други подобни), оксазолопиримидин (например, оксазоло [4,5-d] пиримидин, оксазоло [5,4-d] пиримидин и други подобни), фуропиридин (например, фуро [2,З-Ь] пиридин, фуро [3,2-Ь] пиридин и други подобни), фуропиримидин (например, фуро [2,З-d] пиримидин, фуро [3,2-d] пиримидин и други подобни), 2,3-дихидропиролопиридин (например, 2,3дихидро-1 Н-пироло [2,З-Ь] пиридин, 2,3-дихидро-1Н-пироло[3,2-Ь]пиридин и други подобни), 2,3-дихидропиролопиримидин (например, 2,3дихидро-1 Н-пироло [2,З-d] пиримидин, 2,3-дихидро-1 Н-пироло [3,2-d] пиримидин и други подобни) , 5,6,7,8-тетрахидропиридо [2,З-d] пиримидин , 5,6,7,8 -тетрахидро-1,8 -нафтиридин, 5,6,7,8-тетрахидрохинолин и други подобни. Когато тези пръстени образуват хидрогениран ароматен пръстен, въглеродният атом в пръстена може да бъде карбонил и включва, например, 2,3-дихидро-2-оксопиролопиридин, 2,3-дихидро-2,3-диоксопиролопиридин, 7,8-дихидро7-оксо-1,8-нафтиридин, 5,6,7,8-тетрахидро-7-оксо-1,8-нафтиридин и други подобни.

Тези пръстени могат да бъдат заместени със заместител като халоген, алкил, алкокси, аралкил, халоалкил, нитро, амино, алкиламино, циано, формил, ацил, аминоалкил, моноили диалкиламиноалкил, азид, карбокси, алкоксикарбонил, карбамоил, алкилкарбамоил, алкоксиалкил (например метоксиметил, метоксиетил, метоксипропил, етоксиметил, етоксиетил, етоксипропил и други подобни), по избор заместен хидразин и други подобни.

Както е използван тук, заместителят на по избор заместения хидразин включва алкил, аралкил, нитро, циано и други подобни, при което алкилът и аралкилът са както са определени за R и R’ и илюстрирани с метил хидразино, етил, хидразино, бензил хидразино и други подобни.

Съединението, използвано като Rho киназен инхибитор от настоящото изобретение е, например, съединение с формула (I), което е илюстрирано чрез следните съединения.

(1) 4-(2-пиридилкарбамоил) пиперидин (2) 1-бензилоксикарбонил-4-(4-пиридилкарбамоил) пиперидин (3) 1 -бензоил-4- (4-пиридилкарбамоил) пиперидин (4) 1 -пропил-4- (4-пиридилкарбамоил) пиперидин (5) [3- (2- (2-тиенилметил) фенокси) -2хидроксипропил] -4- (4-пиридилкарбамоил) -пиперидин (6) 4-(4-пиридилкарбамоил) пиперидин (7) 1 -бензил-4- (4-пиридилкарбамоил) 1,2,5,6-тетрахидропиридин (8) 3-(4-пиридилкарбамоил) пиперидин (9) 1-бензил-З-(4-пиридилкарбамоил) пиперидин (10) 1 - (2- (4-бензилоксифенокси) етил-4(N-бензилкарбамоил) пиридин (11) 1 -формил-4- (4-пиридилкарбамоил) пиперидин (12) 4- (3-пиридилкарбамоил) пиперидин (13) 1 -изопропил-4- (4-пиридилкарбамоил) пиперидин (14) 1-метил-4- (4-пиридилкарбамоил) пиперидин (15) 1 -хексил-4- (4-пиридилкарбамоил) пиперидин (16) 1 -бензил-4- (4-пиридилкарбамоил) пиперидин

17) 1-(2-фенилетил)-4-(4-пиридилкарбамоил) пиперидин (18) 1 - (2 (4-метоксифенил) етил) -4- (4-пиридил карбамоил) пиперидин (19) 1 - (2 (4-метоксифенил) етил) -4- (2-пиридилкарбамоил)пиперидин (20) 1 - (2 (4-хлорофенил) етил) -4- (4-пиридилкарбамоил)пиперидин (21) 1-дифенилметил-4-(2-пиридилкарбамоил)пиперидин (22) 1 - [2- (4- (5-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидропиридазин-6-ил) фенил) етил] -4- (2-пиридилкарбамоил)пиперидин (23) 1 - (4 (4,5-дихидро-2-фурил) фенил) 4- (4-пиридилкарбамоил) пиперидин (24) 1 - (2-нитрофенил) -4- (4-пиридилкар12 бамоил)пиперидин (25) 1 - (2-аминофенил) -4- (4-пиридилкарбамоил)пиперидин (26) 1-никотиноил-4-(4-пиридилкарбамоил)пиперидин (27) 1 -изоникотиноил-4- (4-пиридилкарбамоил)пиперидин (28) 1 - (3,4,5-триметоксибензоил) -4- (4пиридилкарбамоил)пиперидин (29) 1 -ацетил-4- (4-пиридилкарбамоил)пиперидин (30) 1 - (3- (4-флуоробензоил) пропил) -4(4-пиридилкарбамоил)пиперидин (31) 1 - (3- (4-флуоробензоил) пропил) -4(2-пиридилкарбамоил)пиперидин (32) 1 - (1 - (4-хидроксибензоил) етил) -4- (2пиридилкарбамоил)пиперидин (33) 1 - (1 - (4-бензоилоксибензоил) етил) -

4- (2-пиридилкарбамоил) пиперидин (34) 1 - (2- (4-хидроксифенокси) етил) -4(2-пиридилкарбамоил)пиперидин (35) 1 - (4- (4-флуорофенил) -4-хидроксибутил) -4- (4-пиридилкарбамоил) пиперидин (36) 1 - (1 -метил-2- (4-хидроксифенил) -2хидроксиетил) -4- (2-пиридилкарбамоил) -пиперидин (37) 1 -цианамил-4- (2-пиридилкарбамоил) пиперидин (38) 1-(2-хидрокси-З-феноксипропил)-4(4-пиридилкарбамоил)пиперидин (39) 1 - (2-хидрокси-З-феноксипропил) -4(3-пиридилкарбамоил)пиперидин (40) 1 - (2-хидрокси-З-феноксипропил) -4(2-пиридилкарбамоил)пиперидин (41) 1 - (2-фенилетил) -4- [N - (2-пиридил) N- (2- (Ν,Ν-диметиламино) етил) -карбамоил] пиперидин (42) 1-бензилоксикарбонил-4-(2-пиридилкарбамоил) пиперидин (43) 1 - (3-хлорофенил) карбамоил-4- (4пиридилкарбамоил)пиперидин (44) 1- [N-(2-nHpnami)-N-(2-(N,N-flHMeтиламино) етил) -кармалоил] пиперидин (45) 1 -метил-4- (4-пиридилкарбамоил) 1,2,5,6-тетрахидропиридин (46) 1-никотиноил-3-(4-пиридилкарбамоил)пиперидин (47) 1 - [2- (4-флуоробензоил) етил ] -4- (4пиридилкарбамоил)пиперидин (48) 1-(6-хлор-2-метилимидазо[1,2-а]пи ридин-3-карбонил) -4- (4-пиридилкарбамоил) пиперидин (49) 1-(4-нитробензил)-4-(4-пиридилкарбамоил) пиперидин (50) 1 -хексил-4- (4-пиридилкарбамо- ил) пиперидин (51) 1-бензоилоксикарбонил-4-(2-хлор-4пиридилкарбамоил)пиперидин (52) 4- (2-хлор-4-пиридилкарбамоил) пиперидин (53) 1-(2-хлорникотиноил)-4-(4-пиридилкарбамоил) пиперидин (54) 3-(2-хлор-4-пиридилкарбамоил) пиперидин (55) 1 - (4-фталимидобутил) -4- (4-пиридилкарбамоил) пиперидин (56) 1-(3,5-ди-тетра-бутил-4-хидроксицинамоил) -4- (4-пиридилкалбамоил) пиперидин (57) 1-карбамоилметил-4-(4-пиридилкарбамоил) пиперидин (58) 1-бензилоксикарбонил-4-(5-нитро-2пиридилкарбамоил)пиперидин (59) 4-(5-нитро-2-пиридилкарбамоил) пиперидин (60) транс-4-бензилоксикарбоксамидометил-1 - (4-пиридилкарбамоил) циклохексан (61) транс-4-аминометил-1 - (4-пиридилкарбамоил)циклохексан (62) транс-4-формамидометил-1-(4-пиридилкарбамоил) циклохексан (63) транс-4-диметиламинометил-1- (4-пиридилкарбамоил) циклохексан (64) N-бензилиден-транс-(4-пиридилкарбамоил) циклохексилметиламин (65) транс-4-бензиламинометил-1-(4-пиридилкарбамоил) циклохексан (66) транс-4-изопропиламинометил-1-(4пиридилкарбамоил) циклохексан (67) транс-4-никотиноиламинометил-1-(4пиридилкарбамоил) циклохексан (68) транс-4-циклохексиламинометил-1(4-пиридилкарбамоил) циклохексан (69) транс-4-бензилоксикарбоксамид-1 (4-пиридилкарбамоил) циклохексан (70) транс-4-амино-1-(4-пиридилкарбамо- ил) циклохексан (71) транс-4-(1-аминоетил-1- (4-пиридилкарбамоил) циклохексан (72) транс-4-аминометил-цис-2-метил-1 (4-пиридилкарбамоил) циклохексан (73) (+) -транс-4- (1 -бензилоксикарбокса мидопропил) -1 -циклохексанкарбонова киселина (74) (+) -транс-4- (1 -бензилоксикарбоксамидопропил) -1 - (4-пиридилкарбамоил) -циклохексан (75) (-) -транс-4- (1 -бензилоксикарбоксамидопропил) -1 - (4-пиридилкарбамоил) -циклохексан (76) (+) -транс-4- (1 -аминопропил-1 - (4пиридилкарбамоил) циклохексан (77) (-)-транс-4-(1-аминопропил-1-(4-пиридилкарбамоил) -циклохексан (78) (-) -транс-4- (1 -бензилоксикарбоксамидоетил-1 - (4-пиридилкарбамоил) -циклохексан (79) (+) -транс-4- (1 -бензилоксикарбоксамидоетил-1 - (4-пиридилкарбамоил) -циклохексан (80) (+) -транс-4- (1 -аминоетил-1 - (4-пиридилкарбамоил) циклохексан (81) (-) -транс-4- (1 -аминоетил-1 - (4-пиридилкарбамоил) -циклохексан (82) транс-4-(4-хлорбензоил) аминометил1 - (4-пиридилкарбамоил) -циклохексан (83) транс-4-аминометил-1 - (2-пиридилкарбамоил) циклохексан (84) транс-4-бензилоксикарбоксамидометил-1 - (2-пиридил карбамоил) -циклохексан (85) транс-4-метиламинометил-1- (4-пиридилкарбамоил) циклохексан (86) транс-4-(Ь1-бензил-М-метиламино)метил-1 - (4-пиридилкарбамоил) циклохексан (87) транс-4-аминометил-1 - (3-пиридилкарбамоил) циклохексан (88) транс-4-аминометил-1-[(3-хидрокси2-пиридил) карбамоил] циклохексан (89) транс-4-бензилоксикарбоксамидометил-1 - (3-пиридилкарбамоил) -циклохексан (90) транс-4-бензилоксикарбоксамидометил-1 - [ (З-бензилокси-2-пиридил) -карбамоил] циклохексан (91) транс-4-фталимидометил-1- (4-пиридилкарбамоил) циклохексан (92) транс-4-бензилоксикарбоксамидометил-1 - (З-метил-4-пиридилкарбамоил) -циклохексан (93) транс-4-аминометил-1 - (З-метил-4пиридилкарбамоил) циклохексан (94) 4-(транс-4-бензилоксикарбоксамидометилциклохексилкарбонил)амино-2,6-диметилпиридин-М-оксид (95) 4-(транс-4-аминометилциклохексил- карбонил) амино-2,6-диметилпиридин-К -оксид (96) транс-4-аминометил-1 - (2-метил-4пиридилкарбамоил) циклохексан (97) транс-4- (1 -бензилоксикарбоксамидоетил) -1 - (4-пиридилкарбамоил) -циклохексан (98) транс-4-(1-амино-1-метилетил)-1-(4пиридилкарбамоил) циклохексан (99) транс-4- (2-аминоетил) -1 - (4-пиридилкарбамоил) циклохексан (100) транс-4- (2-амино-1 -метилетил) -1 (4-пиридилкарбамоил) циклохексан (101) транс-4- (1 -аминопропил) -1 - (4-пиридилкарбамоил) циклохексан (102) транс-4-аминометил-транс-1-метил-

- (4-пиридилкарбамоил) циклохексан (103) транс-4-бензиламинометил-цис-2метил-1 - (4-пиридилкарбамоил) циклохексан (104) транс-4- (1 -бензилоксикарбоксамид-

-метилетил) -1 - (4-пиридилкарбамоил) циклохексан (105) транс-4-бензилоксикарбоксамидометил-1 - (Н-метил-4-пиридилкарбамоил) циклохексан (106) транс-4-(1-ацетамид-1-метилетил)1 - (4-пиридилкарбамоил) циклохексан (107) транс-N-(6-амино-4-пиримидил)-4аминометилциклохексанкарбоксамид (108) транс-N-U Н-пироло [2,3-Ь]пиридин-4-ил)-4-аминометилциклохексанкарбоксамид (109) (+) -транс-N- (1 Н-пироло [2,З-b] пиридин-4-ил) -4- (1 -аминоетил) циклохексанкарбоксамид (110) транс-М-(1Н-пироло[2,3-Ь]пиридин-4-ил) -4- (1 -амино-1 -метилетил) -циклохексанкарбоксамид (111) транс-N-(1 Н-пиразоло [3,4-Ь]пиридин-4-ил) -4-аминометилциклохексанкарбоксамид (112) (+) -транс-N- (1 Н-пиразоло [3,4Ь] пиридин-4-ил) -4- (1 -аминоетил) циклохексанкарбоксамид (113) транс-N-(1 Н-пиразоло [3,4-Ь]пиридин-4-ил) -4- (1 -амино-1 -метилетил) -циклохексанкарбоксамид (114) (+) -транс-N- (2-амино-4-пиридил) 4- (1 -аминоетил) циклохексанкарбоксамид (115) транс-N - (1 Н-пиразоло [3,4-d] пиримидин-4-ил)-4-аминометилциклохексанкарбоксамид (116) (+)-транс-№(1Н-пиразоло[3,4d] пиримидин-4-ил) -4- (1 -аминоетил) циклохексанкарбоксамид (117) транс-N- (1 Н-пиразоло [3,4-d] пиримидин-4-ил) -4- (1-амино-1-метилетил) циклохексанкарбосамид (118) транс-N- (4-пиримидинил) -4-аминометилциклохексанкарбоксамид (119) транс-N- (З-амино-4-пиридил) -4аминометилциклохексанкарбоксамид (120) транс-N- (7Н-имидазо [4,5-d] пиримидин-6-ил)-4-аминометилциклохексанкарбоксамид (121) транс-N- (ЗН-1,2,3-триазоло [4,5d] пиримидин-7-ил) -4-аминометилциклохексанкарбоксамид (122) транс-N- (1 -бензил-1 Н-пиразоло [3,4-Ь] пиридин-4-ил) -4-аминометилциклохексанкарбоксамид (123) транс-N- (1 Н-5-пиразолил) -4-аминометилциклохексанкарбоксамид (124) транс-N-(1 Н-пиразоло[3,4,-Ь]пиридин-4-ил)-4-аминометилциклохексанкарбоксамид (125) транс-N- (4-пиразинил) -4-аминометилциклохексанкарбоксамид (126) транс-N- (7Н-пироло [2,З-d] пиримидин-4-ил) -4-аминометилциклохексанкарбоксамид (127) транс-N- (2-амино-4-пиридил) -4аминометилциклохексанкарбоксамид (128) транс-N-(таено [2,З-d] пиримидин-4ил)-4-аминометилциклохексанкарбоксамид (129) транс-N-(5-метил-1,2,4-триазоло [1,5-а] пиримидин-7-ил-4-аминометилциклохексанкарбоксамид (130) транс-N- (З-циано-5-метилпиразоло [ 1,5-а] пиримидин-7-ил) -4-аминометилциклохексанкарбоксамид (131) транс-№(1Н-пиразоло [3,4-Ь] пиридин-4-ил) -4- (1 -амино-1 -метилетил) -циклохексанкарбоксамид (132) транс-N- (2- (1 -пиролидинил) -4-пиридил) -4-аминометилциклохексанкарбоксамид

133) транс-N- (2,6-диамино-4-пиримидил)-4-аминометилциклохексанкарбоксамид (134) (+) -транс-N- (7-метил-1,8-нафтиридин-4-ил) -4- (1 -аминоетил) циклохексанкарбоксамид (135) транс-N- (1 -бензилоксиметилпироло [2,З-b] пиридин-4-ил)4-аминометилциклохек- санкарбоксамид (136) (+)-транс-№(1-метилпироло[2,3Ь] пиридин-4-ил) -4- (1 -аминоетил) -циклохексанкарбоксамид (137) транс-N-бензил-N- (2-бензиламино4-пиридил (-4-(1 -амино-1 -метилетил) -циклохексанкарбоксамид (138) транс-N- (2-азид-4-пиридил) -4-аминометилциклохексанкарбоксамид (139) транс-N-(2,3-дихидро-1 Н-пироло [2,З-Ь] пиридин-4-ил) -4-еаминометилциклохексанкарбоксамид (140) транс-N-(2,3-дихидро-1 Н-пироло [2,З-Ь] пиридин-4-ил) -4- (1 -амино-1 -метилетил) циклохексанкарбоксамид (141-1) транс-N-(2-карбокси-4-пиридил)4-аминометилциклохексанкарбоксамид (141-2) (R) - (+) -транс-N- (З-бром-1 Н-пироло [2,З-Ь] пиридин-4-ил) -4- (1 -аминоетил) -циклохексанкарбоксамид (142) транс-N- (1 Н-пироло [2,З-Ь] пиридин-4-ил) -4-гуанидинометалциклохексанкарбоксамид (143) транс-N-(1Н-пиразало[3,4-Ь]пиридин-4-ил)-4-гуанидинометилциклохексан-карбоксамид (144) транс-N-(4-пиридил)-4-гуанидинометилциклохексанкарбоксамид (145) транс-N-(1-метилпироло [2,З-b] пиридин-4-ил) -4- (гуанидинометил) -циклохексанкарбоксамид (146) транс-N- (1 Н-пироло [2,З-Ь] пиридин-4-ил) -4- (2-имидазолин-2-ил)аминометилциклохексанкарбоксамид (147) транс-N- (1 -бензилоксиметалпироло [2,З-Ь] пиридин-4-ил) -4-гуанидинометил-циклохексанкарбоксамид (148) транс-N-(2-амино-4-пиридил)-4-гуанидинометилциклохексанкарбоксамид (149) транс-N- (1 -бензилоксиметил-1Нпироло [2,З-Ь] пиридин-4-ил) -4- (2-имидазолин-2ил) аминометилцикл охексанкарбоксамид (150) транс-N- (1 Н-пироло [2,З-Ь] пиридин-4-ил) -4- (3-бензилгуанидинометил) циклохексанкарбоксамид (151) транс-N- (1 Н-пироло [2,З-Ь] пиридин -4-ил) -4- (3-фенилгуанидинометил) -циклохексанкарбоксамид (152) транс-№(1Н-пироло[2,3-Ь]пиридин-4-ил] -4-(3-пропилгуанидинометил)-цикло15 хексанкарбоксамид (153) транс-N- (1 Н-пироло [2,З-b] пиридин-4-ил) -4- (3-октилгуанидинометил) -циклохексанкарбоксамид (154) транс-N-(1-бензилоксиметилпироло [2,З-Ь] пиридин-4-ил) -4- (2-бензил-З-етилгуанидинометил) циклохксанкарбоксамид (155) транс-N- (1 Н-пироло [2,З-b] пиридин-4-ил) -4- (имидазол-2-ил) аминометилциклохексанкарбоксамид (156) транс-N-(1 Н-пироло [2,З-b] пиридин-4-ил) -4- (тиазол-2-ил) аминометилциклохексанкарбоксамид (157) (R) - (+) -N- (4-пиридил) -4- (1 -аминоетил)бензамид (158) N- (4-пиридил) -4- (1 -амино-1 -метилетил) бензамид (159) N-(4-пиридил)-4-аминометил-2-бензилоксибензамид (160) N - (4-пиридил) -4-аминометил-2етоксибензамид (161) (R) - (-) -N- (4-пиридил) -4- (1 -аминоетил) -3-нитробензамд (162) (R) - (-) -N-(4-пиридил) -З-амино-4(1 -аминетил) бензамид (163) (R)-(+)-N-(4-пиридил)-4-(1-аминоетил) -3-хлоробензамид (164) N-(4-пиридил)-3-аминометилбензамид (165) (R)-(+)-N-(lH-nnpoao[2,3-b] пиридин-4-ил) -4- (аминоетил) бензамид (166) (R) - (+) -N- (1 Н-пиразоло [3,4-Ь] пиридин-4-ил) -4- (аминоетил) бензамид (167) N-(1 Н-пиразоло [3,4-Ь] пиридин-4ил) -4-гуанидинометилбензамид (168) N- (4-пиридил) -4-гуанидинометилбензамид (169) (R)- (+)-N-(4-пиридил)-4-(1-аминоетил) -3-флуоробензамид (170) N-(4-пиридил)-4-аминометилбензамид (171) N- (4-пиридил) -4-аминометил-2хидроксибензамид (172) М-(4-пиридил)-4-(2-аминоетил)бензамид (173) N-(4-пиридил)-4-аминометил-З-нитробензамид (174) N-(4-пиридил)-З-амино-4-аминометилбензамид (175) (S) - (-) -N- (4-пиридил) -4- (1 -аминоетил) бензамид (176) (S) - (-) -N- (4-пиридил) -2- (1 -аминоетил) бензамид (177) (R) - (+) -N- (4-пиридил) -4- (1 -аминоетил) -2-хлоробензамид (178) (R) - (+) -N- (1 Н-пироло [2,З-b] пиридин-4-ил) -4- (1 -3-пропилгаунидино) -етил) бензамид (179) (R) - (-) -N- (1 Н-пироло [2,З-b] пиридин-4-ил) -4- (1 -аминоетил) -3-азидбензамид (180) (R) - (+) -N- (4-пиридил) -4- (1 -аминоетил) -2-нитробензамид (181) (R) - (-) -N- (4-пиридил) -4- (1 -аминоетил) -3-етоксибензамид (182) (R) -(+) -N-(З-йод-1 Н-пироло [2,3Ь] пиридин-4-ил) -4- (1 -аминоетил) бензамид (183) (Ю-(+)-К-(3-йод-1Н-пироло[2,3-

Ь] пиридин-4-ил) -4- (1 -аминоетил) -3-азидбензамид (184) (R) -(-)-N- (4-пиридил) -4- (1 -аминоетил) -3-хидроксибензамид (185) N- (1 Н-пиразоло [3,4-Ь] пиридин-4ил) -4-гуанидонометил-З-нитробензамид (186) (R) -N- (1 Н-пиразоло [3,4-Ь] пиридин-4-ил) -4- (1 -гуанидиноетил) -3-нитробензамид (187) (R) -N- (1 Н-пиразоло [3,4-Ь] пиридин-4-ил) -4- (1 -аминоетил) -2-нитробензамид (188) N- (1 Н-пиразоло [3,4-Ь] пиридин-4ил) -4-гаунидинобензамид (189) (R)-N-(1 Н-пиразоло [3,4-Ь] пиридин-4-ил) -4- (1 -аминоетил) -3-нитробензамид (190) (R) -N-(1Н-пиразоло[3,4-Ь]пиридин-4-ил) -4- (1 -гуанидиноетил) бензамид (191) N- (1 Н-пиразоло [3,4-Ь] пиридин-4ил) -4- (1 -амино-2-хидроксиетил) бензамид (192) N-UH-пиразоло[3,4-Ь] пиридин-4ил) -4-аминометил-З-нитробензамид (193) N- (1 Н-пироло [2,З-b] пиридин-4ил) -4-пиперидинкарбоксамид (194) N-(1 Н-пиразоло [3,4-Ь] пиридин-4ил) -4-пиперидинкарбоксамид (195) N-(1 Н-пиразоло [3,4-Ь] пиридин-4ил) -1 -аминоацетил-4-пиперидинкарбоксамид (196) Н-(1-метоксиметил-1Н-пиразоло[3,4Ь] пиридин-4-ил) -4-пиперидинкарбоксамид (197) N- (2,3-дихидро-1 Н-пироло [2,3Ь] пиридин-4-ил) -4-пиперидинкарбоксамид (198) N- (1 Н-пироло [2,3,Ь] пиридин-4ил) -1 - (2-фенилетил) -4-пиперидинкарбоксамид (199) N- (1 Н-пироло [2,З-b] пиридин-4ил) -1 -амидино-4-пиперидинкарбоксамид (200) ^(1Н-пироло[2,3-Ь]пиридин-4-ил-

- (3-фенилпропил) -4-пиперидинкарбоксамид (201) N- (1 Н-пироло [2,З-b] пиридин-416 ил) -1 -бензил-4-пиперидинкарбоксамид (202) Ν- (1 Н-пиразоло [3,4-b] пиридин-4ил) -1 - (2-фенилетил) -4-пиперидинкарбоксамид (203) N-(1 Н-пиразоло [3,4-Ь] пиридин-4ил) -1 - (3-фенилпропил) -4-пиперидинкарбоксамид

Предпочитани са съединенията (80), (109), (110), (112), (115), (142), (143), (144), (145), (153), (157), (163), (165), (166) и (179).

Съединението, използвано като Rho киназен инхибитор от настоящото изобретение, може да бъде фармацевтично приемлива, получена чрез добавяне на киселина, сол. Киселината е илюстрирана чрез неограничена киселина, такава като солна, бромна, сярна и подобни и органична киселина като метансулфонова, фумарова, малеинова, бадемена, лимонена, винена, салицилова и подобни. Съединението, притежаващо карбоксилна група, може да бъде превърнато в сол с метал, такъв като натрий, калий, калций, магнезий, алуминий и други подобни или сол с аминокиселина, такава като лизин и подобни. В допълнение техните монохидрат, дихидрати, 1/2 хидрати, 1/3 хидрати, 1/4 хидрати, 2/3 хидрати, 3/2 хидрати и други също са включени в настоящото изобретение.

Съединението с формула (I) може да бъде синтезирано съгласно метода, описан в JP 6289679,JP 3-218356,JP 5-194401,JP 6-41080, W095/28387 и други.

Когато Rho киназният инхибитор от настоящото изобретение се използва като фармацевтично, по-специално като терапевтично средство за хипертензия, терапевтично средство за ангина петрокис, потискащо средство за цереброваскуларна контракция, терапевтично средство за астма, терапевтично средство за заболяване на периферното кръвообръщение, профилактично средство при преждевременно раждане, терапевтично средство за артериосклероза, противораково лекарство, портивовъзпалително средство, имуносупресант, терапевтично средство за автоимунно заболяване, средство против забременяване, профилактично средство при инфекция на храносмилателния тракт, лекарство против AIDS, терапевтично средство за остеопороза, терапевтично средства за ретинопатия или лекарство, подобряващо функция на мозъка, той може да бъде получен като обикновено фармацевтично средство. Например Rho киназният инхибитор от настоящото изобретение се смесва с фармацевтично приемлив носител, (например инертен пълнител, свързващо вещество, средство за разлагане, коригиращо вещество, модификатор на фармацевтичния препарат, емулгатор, разредител, разтворител и други), за да се получи фармацевтичен състав или фармацевтичен препарат под формата на таблетка, пилюла, прах, гранула, капсула, пастила, сироп, течност, емулсия, суспензия, инжекция (например течност суспензия и други подобни) , супозитории, лекарство, което се инхалира, перкутанен абсорбент, капки за очи, мехлем за очи и други подобни в подходяща форма за орално или парентерално приложение.

Когато се получава твърд препарат, се използват адитиви, такива като захароза, лактоза, целулозна захар, D-манитол, малтитол, декстран, нишестета, агар, аргинати, хитини, хитозани, пектини, траганат, гума арабика, желатини, колагени, казеин, алмубин, калциев фосфат, сорбитол, глицин, карбоксимелитцелулоза, поливинилпиролидон, хидроксипропилцелулоза, хидроксипропилметилцелулоза, глицерол, полиетиленгликол, натриев хидрогенкарбонат, магнезиев стеарат, талк и други подобни. Таблетките могат да бъдат прилагани с типично покритие, където е необходимо, за да се получат таблетки, покрити със захар, интестинални таблетки, таблетки, покрити с филм, двуслойни и многослойни таблетки.

Когато се получава полутвърд препарат, се използват животински и растителни мазнини и масла (например, маслинено, царевично, рициново масло и други подобни), минерални мазнини и масла (например, вазелин, бял вазелин, твърд парафин и подобни), восък (например масло от жожоба, карнаубски восък, пчелен восък и други подобни), синтетични или полусинтетични естери на глицеринови мастни киселини (например лауринова, миристинова, палмитинова киселина и други) и подобни. Примери на такива търговски достъпни продукти включват Witepsol (произведен от Dynamitnovel Ltd.), Farmazol (NOF Corporation) и подобни.

Когато се получава течен препарат, се използва конкурентно адитив, такъв като натриев хлорид, глюкоза, собритол, глицерол, маслинено масло, пропилен гликол, етилов алкохол и други подобни. Когато се получава ин17 жекция, се използва стерилен воден разтвор, такъв като физиологичен разтвор, изотонизираща течност, маслообразна течност (например, сусамено и соево масло) и подобни. Където е необходимо конкурентно може да бъде използвано подходящо суспендиращо средство, такова като натриева карбоксиметилцелулоза, нейонно повърхностно активно вещество, разтворител (например бензилов бензоат и бензинов алкохол) и други подобни. Освен това, когато се получават капки за очи, се използва водна течност или разтвор, който е специален стерилен инкетабилен воден разтвор. Течността за капки за очи може подходящо да съдържа различни адитиви, такива като буфер (предпочитани са боратен, ацетатен, карбонатен буфер и подобни за по-малко възпаление), изотонизиращо средство, разтворител, консервиращо средство, сгъстител, хелатообразуващо средство, pH регулатор (за предпочитане, pH обикновено се довежда до около 6-8.5) и ароматно средство.

Съдържанието на активния компонент в този препарат е 0.1 - 100% тегл. по-подходящо 1-50% тегл. от препарата. Всеки отделен вариант е в зависимост от състоянието, телесното тегло, възрастта и други подобни на пациента, обикновено 1-500 mg от активния компонент се прилага орално на ден при възрастен за една или няколко дози.

Методът за получаване на фармацевтичният препарат от настоящото изобретение е обяснен в следващото изложение.

Пример 1 за състав в mg: таблетки

Съединение съгласно изобретението 10.0mg

Лактоза 50.0mg

Царевично нишесте 20.0mg

Кристална целулоза 29.7mg

Поливинилпиролидон КЗО 5.0 mg

Талк 5.0mg

Магнезиев стеарат 0.3mg

Съединението съгласно изобретението, лактозата, царевичното нишесте и кристалната целулоза се смесват, разбъркват с поливинилпиролидон КЗО до пастообразен разтвор и се пропуска през сито 20-mesh за гранулиране. След изсушаване при 50°С за 2 h гранулите се прекарват през сито 24-mesh и се добавят талк и магнезиев стеарат. Като се използва щанца 7 се получават таблетки, тежащи 120 mg всяка.

Пример 2 за състав в mg, капсули
Съединение съгласно
изобретението	10.0
Лактоза	70.0
Царевично нишесте	35.0
Поливинилпиролидон КЗО	2.0
Талк	2.7
Магнезиев стеарат	0.3
	120.0

Съединението съгласно изобретението, лактозата, царевичното нишесте се смесват, разбъркват с поливинилпиролидон КЗО до пастообразен разтвор и се пропускат през сито 20mesh за гранулиране. След изсушаване при 50°С за 2 h, гранулите се прекарват през сито 24-mesh и се добавят талк и магнезиев стеарат. Сместа се напълва в здрави капсули (No 4), за да се получат капсули, тежащи 120 mg.

Фармакологичното действие на фармацевтичния препарат от настоящото изобретение се обяснява по следния начин в експерименталните примери.

Експериментален пример 1: Rho киназно инхибиторно действие (инхибиране на Rho киназа от волска аорта на гръдния кош).

Rho киназата се получава от волска аорта на гръдния кош чрез частично очистване, както следва. Артерията се смила и хомогенизира с 9-кратно количество от 50 тМ трис-хидроксиметиламинометан (Tris) (рН = 7.4), 1 тМдитиотрейтол, 1 mM EDTA, 1 mM EDTA, 100 μΜ р-амидинофенилметилсулфонил флуорид, 5 μΜ леупептин и 5 μΜ пепстатин А. Хомогенатьт се центрофугира (10, 000 х g, 30 min), за да се получи супернатанта. Супернатантата се адсорбира върху хидроксиапатитна колона. Колоната се промива с 0.2М фосфатен буфер (pH = 6.8). Стандартният продукт от Rho киназа се еулира с 0.4М фосфатен буфер (pH = 6.8). Rho киназата се анализира както следва.

Реакционна смес (общо количество 50 μΐ), съдържаща 50 mM Tris, 1 тМ EDTA, 5 тМ MgCl₂,50 pg/ml хистон, 10 μΜ GTP8S, 100 μg/ml Rho, 2 μΜ [³²Ρ]ΑΤΡ, Rho киназата (3 μΐ), получена по-горе и изследваното съединение реагират при 30°С в продължение на 5 min. Реакцията завършва чрез добавяне на 25% разтвор на трихлороцетна киселина (ТСА) (1 ml) и сместа се изстудява при 4°С за 30 min. След това сместа се филтрира през филтърна мембрана (HAWP type, Millipore) и радиоактивност18 та се изчислява с течен сцинтилационен брояч. Инхибиторното действие на изследваното съединение се изчислява от следната формула, ба зираща се на сравняването на радиоактивността с проба без изследваното съединение (контрола) . Резултатите са показани в таблица 1.

cpm nog контрол-срт β присъствие на изсл.съед.

Инхибиране(%) = х 100 срт под контрол

Таблица 1

Изследвано съединение	Инхибиране %
Съединение 109.2НС1	(ΙμΜ)	81
	(10μΜ)	100
Съединение 165.2HCL3/2H₂O	(10μΜ)	100
Съединение 80.2НС1.Н₂О	(ΙΟμΜ)	100

Експериментален пример 2: Rho киназно инхибиторно действие (инхибиране на Rho киназа (pl60ROCK) от човешки тромбоцит)).

Човешки тромбоцит pl60ROCK се изолира по метода на Ishizaki и други (Ishizaki Т et al., The EMBO J., 15(8), 1885-1893, 1996).

Киназният анализ включва следните етапи. Реакционна смес (общо количество 30 μΐ), съдържаща 50 mM Hepes-NaOH (рН=7,4), 10 тМ MgCl₂, 5 тМ МпС1₂, 2 тМ дитиотрейтол, 0.02% Brij35, 1 μΜ [γ-³²Ρ]ΑΤΡ, 330 pg/ml хистон, p 160ROCK (2 μΐ), изолирана по метода на

Ishizaki и други и изследваното съединение се инкубират при 30°С за 20 пйп.Разтворът се смесва с 1/3 количество от 4 х Laemmli буферна проба, кипи 5 min и се прилага спрямо SDS-PAGE. Телът се оцветява с Coomassie Brilliant Blue и се изсушава. Лентата от хистон се нарязва и се анализира за радиоактивност. Изследваното съединение се оценява по същия начин, както в експериментален пример 1, и концентрацията на всяко изследвано съединение, необходимо за 50% инхибиране, се изчислява като IC50 (μΜ). Резултатите са показани в таблица 2.

Таблица 2

Изследвано съединение	1Ся(рМ)
Съединение 80.2HCLH₂O	1.5
Съединение 109.2HQ	0.11
Съединение 143.2HCLH₂O	1.6

Експериментален пример 3: Rho киназно инхибиторно действие (инхибиране на pl60ROCK и ROCKII

Стандартните ензимни продукти на pl60ROCK (Ishizaki Т et al., The EMBO J., 15(8), 1885-1893, 1996) и ROCKII (Nakagawa 0 et al., FEBS Lett. 392 189-193, 1996) се получават по следния начин. Клетки COS се посяват в блюда 3.5 cm и се инкубират цяла нощ. Като се използва липофектамин, се преобразуват изразните вектори на pl60ROCK и ROCKII (pCAG-myc-pl60ROCK и р160ЯОСКи pCAG-mycROCKII: виж Ishizaki Т et al., The EMBO J., 15(8), 1885-1893, 1996 и Nakagawa 0 et al., FEBS Lett. 392 189-193, 1996. След инкубиране в продължение на 20 h клетките се промиват един път с ледено охладен PBS и се лизират върху лед за 20 min, като се използва лизисен буфер (20 тМ Tris-HCl), 1 тМ EDTA, 1 тМ EGTA, 5 Mm MgClj, 25 тМ NaF, 10 тМ β глицерофосфат, 5 тМ натриев пирофорфат, 0.2 тМ фенилметилсулфонилов флуорид, 2 тМ дитиотрейтол, 0.2 тМ натриев ванадат, 0.05% тритон Х-100, 0.1 μΜ каликулин А). Лизатът се центрофугира при

10,000 х g в продължение на 10 min и супернатантата се възстановява. Към супернатантата се добавя 9Е10 anti-myc epitope антитяло (виж Ishizaki Т et al., The EMBO J., 15(8), 1885-1893, 1996) и сместа се разклаща в продължение на 2 h. След това се добавя протеина G-сефароза и сместа се разклаща в продължение на още 2 h.

Суспензията се центрофугира при 1,000 х g за 5 min и получените гранули се промиват 3 пъти с лизинов буфер и един път с киназен буфер (50 тМ Hepes-NaOH (pH = 7.4), 10 тМ MgClj, 5 тМ МпС1₂, 2 тМ дитиотрейтол, 0.02% Brij 35).

Гранулите се суспендират в киназния буфер, за да се получи стандартния ензимен продукт. Киназата е анализира по следния метод, показан в експериментален пример 2, в който стандартният ензимен продукт, получен в този експериментален пример, се използва вместо човешката тромбоцитна Rho киназа (pl60ROCK). Концентрацията на всяко изследвано съединение, необходима за 50% инхибиране, се изчислява като IC50 (μΜ). Резултатите са показани в таблица 3.

Таблица 3

Изследвано съединение	ICjoipM)
pl60ROCK	ROCK-II
Съединение 8й.2НС1.Н_гО	0.63	056
Съединение 109.2НС1	0.095	0.048
Съединение 143. 2HQ.H₂O	0.88	0.47

Експериментален пример 4: съдоразширяващо действие

Мъжки зайци (телесно тегло 1.9- 3.0 kg) се анестезират с натриев пентобарбитал и кръвта се изцежда, след което аортата от гръдния кош се отделя. Приготвят се проби от аротата под формата на кръгове с ширина около 2 mm и се закачват в баня на Magnus (40 ml), напълнена с Kreds-Henseleit разтвор (37°С, NaCl 117 mM; ₄₅ КС1 4.7 тМ; СаС1₂ 2.5 тМ; MgSO₄ 1.2 тМ;

NaHCO₃ 24.8;КН₂РО₄1.2 тМ; глюкоза П.тМ) с тежест от 2 g. Банята постоянно барботира със смесен газ (95% О₂ + 5% СО₂ газ). Разтягането на препарата се измерва с изомерен 5θ трансдуктор (ТВ-611Тр Nippon Koden). Препаратът се свива с фенилферин (ΙΟ⁶ М), и след това свиването се стабилизира, изследваното съединение се добавя чрез натрупване и се наблюдава отпускащо действие. Отпускащото действие на изследваното съединение се изчислява чрез изразяване на концентрацията на изследваното съединение, необходима за 50% отпускане, като IC50 (μΜ) срещу кионтракцията с февилферин като 100%. Резултатите са показани в таблица 4.

Експериментален пример 5: ефект върху контракция чрез ацетилхолин върху образец от трахея, отделена от морско свинче.

Мъжки морски свинчета Hartley (телесно тегло 260-390 g) се анестезират чрез перитонеално приложение на натриев пентобаритал (100 mg/kg) и кръвта се изцежда, след което аортата от гръдния кош се отделя. Открива се предния хрущял от трахеята и се отрязва лента с ширина на ивицата 3 mm, за да се получи образеца. Образецът се закачва в баня на Magnus (40 ml), напълнена с KrebsHenseleit разтвор (NaCl 117 mM; КС1 4.7 тМ СаС1₂ 2.5 тМ; MgSO₄1.2 тМ; NaHCO₃ 24.8 тМ;

КН₂РО₄ 1.2 тМ; глюкоза 11.0 тМ) с тежест от 1 g. Банята постоянно барботира със смесен газ (95% О₂ + 5% СО₂ газ). Разтягането на ивицата се измерва с изомерен трансдуктор (ТВ-611Т, Nippon Koden) и се описва върху ре10 гисгриращ уред (Ti-102, Tokai Irika). Ивицата се свива с ацетилхолин (10^-4 М), и след това свиването се стабилизира, изследваното съединение се добавя чрез натрупване и се наблюдава отпускащо действие. Отпускащото действие на изследва15 ното съединение се изчислява и изразява чрез концентрацията на изследваното съединение необходима за 50% отпускане като IC50 (μΜ) срещу максималния отговор с папаверин (10“* М) като 100%. Резултатите са показани в таблица 4.

Таблица 4.

Изследвано съединение Съдоразш.дейст.(цМ)	Отпуск.дейст.на трах-(цМ)
Съединение80.2НС1Н₂О	0.70	0.56
Съединение109.2НС1	0.1	0.043
Сьединение165.2НСХЗ/2Н₂О	0.051	0.066
Съединение! 79.2НВг. 1/2Н₂О	0.03	0.029

Експериментален пример 6: нарастващо действие на периферния кръвен поток.

Венозно се инжектира стрептозотоцин (STZ, 65 mg/kg) в мъжки плъхове SD (телесно тегло 200-300 g), за да се подготвят диабетични плъхове. Един месец по-късно плъховете с диабет, индуциран чрез STZ, се анестезират с натриев пентобарбитал и кръвният поток в кожата на задния крайник се измерва с лазерен уред за измерване потока на кръвта (ALF21R, Advance). Изследваното съединение се прилага венозно чрез катетър, настанен в сънните артерии, и се наблюдава нарастващото действие на кръвния поток в кожата на задния крайник. Нарастващото действие на кръвния поток от изследваното съединение се изразява чрез увеличаване в проценти спрямо кръвния поток преди прилагането му. Резултатите са показани в таблица 5.

Таблица 5.

Изследвано съединение	Увеличаване в кожата на кръвния поток ± стандартно отклонение ( % )
Съединение 80.2HCLH₂O	Ояв)	135.0413.4
Съединение 157.HCLH₂O	(ΐ με)	211.6413.6
Съединение 165.2HCL3/2H₂O	(0.03 pg)	135.840.0
	(0.1 pg)	144.740.0
Съединение 166.2HCLH₂O	(0-3 Mg)	143.2425.4
	(ipg)	165.94423

Експериментален пример 7: Инхибране на VLA (много напреднало антигеново) интегриново активиране.

Измерва се индексът на активирането чрез VLA интегрин, форбол естер-индуцирана адхезия на СЕМ клетки (човешка клетка тип Т, доказана клетка) към фибронектин, който е лиганд на VLA интегрина. Инхибираното действие върху индуцираната адхезия чрез изследваното съединение се определя по следния метод.

Таблица 6.

Изследвано съединение	Концентрация(мМ)	Инхибиране на адхезионна индукция (%)
Съединение80.2НО.Н₂О	100	70
Сьединение109.2НС1	100	67
Съединение 143.2HCLH₂O	100	77
Съединение165.2НС1.3/2Н₂О 10	40
Анти-βΐ антитяло	20 Mg/ml	118
IgGl	20 pg/ml	-25

Експериментален пример 8. Инхибиране на костна резорбция (in vitro)

Определяне на in vitro инхибиране на костна резорбция, като се използва бедрена кост от мишка, по метод, посочен по-долу.

Бедрената кост на мъжка мишка ICR на възраст 3-6 седмици асептично се отделя и кухината на костния мозък на костта се промива със среда F12, съдържаща 10% горещ инактивиран ембрионален волски серум, пеницилин G калций (100 части/ml), канамицинов сулфат (60 pg) и 0.15% натриев хидрогенкарбонат (по-долу средата е отбелязана като хранителен разтвор). След промиване на кухината на костния мозък на костта и след отделяне на меката тъкан, полепнала към костта, костта се подлага на инхибиране. Изследваното съединение на един път се разтваря в диметил сулфоксид (DMSO), за да се получи разтвор 10 mg/ml, който се разрежда 1000-кратно с хранителния разтвор, за да се получи разтвор 10 pg/ml. Изследваните съединения се добавят 5 съответно към концентрацията, показана в таблица 7, и като се използва този хранителен разтвор (1.2 ml), бедрената кост на мишката се инкубира в 24-гнездово блюдо за 6 дни при условията на 5% газ СО₂, 95% въздух. След за10 вършване на инкубирането, хранителната супернатанта се възстановява и количеството на калция, суспендиран в хранителната супернатанта се определя количествено по хелатния метод, като се използва о-крезалфталеин. Инхибиторното действие на костната резорбция от изследваното съединение се изчислява по следната формула, като се използва инкубирането на бедрената кост, без добавяне на изследваното съединение като контрола.

Инхибиране на костна резорбция (%)

Количество на свободен Са без добавяне на изслед- вано съединение	Количество на свободен Са с добавяне на изслед- вано съединение
Количество на свободен	Количество на Са
Са без добавяне на изслед-	в културата
вано съединение

СЕМ клетки се промиват със среда RPMI1640, съдържаща 0.5% волски серумен албумин (BSA), 10 mM HEPES, 2 тМ L-глутамин, 1 тМ натриева сол на пирогроздена киселина, 60 pg/ml канамицинов сулфат и 1.5 mg/ml натриев хидрогенкарбонат (по-долу тази среда е отбелязана като хранителен разтвор) и се суспендират в тази среда, за да се използват в следващия експеримент. Към всяко гнездо на 96-гнездово блюдо, покрито с човешки фибронектин, се добавят СЕМ клетки (5 х 10⁴) и изследваното съединение се разтваря в хранителния разтвор (крайна концентрация 1-100 μΜ) в количеството от 100 μΐ, блюдото престоява при 37°С lh. РМА (форбол 12-миристат 13ацетат, ТРА; крайна концентрация 10 ng/ml) и изследваното съединение се добавят към количеството от 200 μΐ, и блюдото престоява при 37°С 30 min. Всяко гнездо се промива двукратно с хранителния разтвор (200 μ!) при 37°С и се определя LDH (лактатна дехидрогеназа) активността на клетките, прилепнали към блюдото, чрез което се измерва количеството на прилепналите клетки. Базирано върху получените резултати чрез посоченият метод, инхибираното действие на изследваното съединение върху индуцираната адхезия се изчислява по посочената по-долу формула. Резултатите са показани в таблица 6.

Инхибиране (%) на адхезионна индукция ^я (а-b) / (а-с) х 100 а - брой на прилепнали клетки с прибавяне на РМА b = брой на прилепнали клетки с прибавяне на изследвано съединение РМА с = брой на прилепнали клетки без стимулиране

Този експеримент е направен с 4 случаи във всяка група. Като контрола се използва същото количество DMSO самостоятелно, както в случая с добавянето на изследваното съединение.

Резултатите са показани в таблица 7.

Експериментален пример 9: инхибиране на миша алогенна смесена лимфоцитна реакция

Миша алогенна смесена лимфоцитна реакция (по-долу отбелязана като миша алогенна MLR) се извършва чрез смесена култура (равно съотношение) на клетка от далак на мишка BALB/c като реакционна слетка и клетка от далак на мишка C57BL/6 обработена с митомицин С като стимулирана клетка.

Реакционните клетки се приготвят по следния метод. Отделя се далак от мишка BALB/ с на възраст 5-6 седмици и се обработва със среда RPMI1640 (съдържаща канамицин сулфат (60 pg/ml), пеницилин G калай (100 единици/ml), N-2- хидроксиетилпиперазин-1Ч’-2-етансулфонат (10 тМ), 0.1% натриев хидрогенкарбонат и L-глутамин (2 тМ), допълнена с 5% горещ инактивиран ембрионален волски серум (FBS |, за да се получи едноклетъчна суспензия от клетката на далака. След хемолизната обработка суспензията се нагласява до 10’ клетки/ml със среда RPMI1640, съдържаща 10·⁴ М 2-меркаптопетанол и 10% FBS и се използва като реакционна клетъчна суспензия.

Реакционната клетъчна суспензия (50 μΐ), получена по горния метод, стимулирана клетъчна суспензия (50 μΐ) и изследваното съединение (100 μΐ), получени като се използва сре да RPMI 1640, съдържаща 10% FBS, се добавят към 96-гиездово блюдо и се инкубират при 37°С под 5% газ СО₂, 95% въздух продължение на 4 дни.

Прилага се пигментен анализ, като се използва 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолен бромид (МТТ) за определянето на лимфоцитна трансформационна реакция.

След завършване на отглеждането супернатаитата (100 μΐ) във всяко гнездо се отделя, и към всяко гнездо се добавя 5 mg/ml МТТ разтвор (20 μΐ), след което следва инкубиране при 37°С за 4 h. След това се добавя 0.01 N разтвор на солна киселина (100 μΐ), съдържащ 10% натриев додецил сулфат и сместа се инкубира при 37°С цяла нощ. Получените виолетови кристали от формазан се разтварят и абсорбцията при 550 пт се измерва, като се използва абсорбционен измерителен уред за микроблюдо, която се използва като индекс на лимфоцитната трансформационна реакция на мишата алогенна MLR. Инхибирането на мишата алогенна MLR се сравнява чрез изчисляване на процентното инхибиране по посочената по-долу формула. Резултатите се показани в таблица 7.

Инхибиране (%)—

абсорбция на MLR с доба-	абсорбция на реаги-
Вяне на изследвано съедин. -	рали самосгл-клетки
абсорбция на MLR без до-	абсорбция на реаги-
бавяне на изследвано съед.	рали самост.клшпки

Таблица 7.

Изследвано съединение	Инхибиране на костна резорбция % (μΜ )	Инхибит. акт. на миша алогенна MLR 1Сю(цМ)
Съединение 80.2НСШ₂О	40.9(100)	9.6
Съединение 109.2HG	42.6(100)	1.6
Съединение 112.2НО	75.7(100)	4.4
Съединение 110.2HQ.HjO	74.0(100)	1.1
Съединение 142.2HCLH₂O	44.2(100)
Съединение 143.2HCLHjO	39.4(100)

Експериментален пример 10: Инхибиране на клетъчно израстване на SK-Mel-28 меланом

Човешки SK-Mel-28 меланом (10⁴ клетки) и изследваното съединение се суспендират в среда RPMI1640, съдържаща 100 μΐ от 10% FBS, и се инкубират в 96-гнездово блюдо при 37°С под 5% газ СО₂ в продължение на 72 h. След инкубацията 10 μΐ от МТТ (5 mg/ml) се добавят към всяко гнездо и клетките се инкубират при 37°С под 5% газ СО₂ в продължение на 4 h. След това 10% натриев додецил сулфат и 0.01 N разтвор на солна киселина се добавят по 10 μΐ към съответните гнезда. След това блюдото престоява цяла нощ, абсорбцията при 570 пт се измерва, като се използва измервателен уред за микроблюдо и процентното инхибиране (% цитоксичност) се изчислява до посочената формула. Резултатите са показани в таблица 8.

Цитотоксичносгга срещу отгледаните човешки туморни клетки се потвърждава по пиплентния метод (Carmichael et al., Cancer Res., 47, 936-942, 1987: Mosman, J .Immunol. Methods, 65,55-63,1983), като се използва 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,510 дифенилтетразолинов бромид (МТТ).

Изследваното съединение се разтваря в диметил сулфоксид и се разрежда със среда RPMI1640 преди използване. Крайната диметил сулфоксидна концентрация се нагласява 15 на не повече от 0,25%.

Абсорбция-когато се добавя изследв. сьедин.

Инхибиране(%)= 1 х 100

Абсорбция^огато не се добавя изследв. съед.

Таблица 8.

Изследвано съединение Инхибиране на клетъчно израст. ICjo(gM)
Съединение 115.2НВг.1/4Н₂О	9
Съединение 109.2HQ	58
Съединение 142.2На.Н₂О	59
Съединение 145.2HCLH₃O	62

Експериментален пример 11. Инхибиране на авгигогенеза

Инхибирането на ангигогенеза се оценява, като се използва инхибирането на образуването на лумен във васкуларна ендотелиална клетка като индекс. Съществува специфичност, нормални човешки тъмнокафяви васкуларни ендотелиални клетки (KURABO INDUSTRIES LTD.) се суспендират в E-GMUV среда при 5.5 х104 клетки/ml и 400 1 от нея се добавят върху матригелно блюдо (EHS sarcoma-derived reconstructed basement membrane, Collaborative

Biomedical Products). След това се добавя изследваното съединение (1 тМ разтвор, 4 μΐ) и клетките се инкубират при 37°С под 5% газ 45 СО₂ в продължение на 18 h. След завършване на инкубирането броят на лумените за предварително определена площ се преброява под микроскоп. Тъй като броят на лумените нараства, чрез инхибирането на образуването на лу50 мени изследваното съединение се оценява чрез сравнение на броя лумени с контролата. Резултатите са показани в таблица 9.

Таблица 9.

Изследвано съединение	Брой на лумени ( 10 μΜ)
Съединение 1O9.2HQ	153%
Съединение 80.2HQ.H₂O	174%
Съединение 110.2HCLH₂O	203%
Съединение 165.2HCL3/2H₂O	222%

Експериментален пример 12: Инхибиране на израстване на клетка на васкуларен гладък мускул.

Отделянето от артерията на плъх и отглеждането на клетка на гладък мускул (SMC) се извършва по метода на Ross (Ross, R. and Glomset, J. A., N. Engl. J. Med., 295, 369-420, 1976). Убиват се мъжки плъхове wistar (на възраст 10 седмици) чрез отрязване на сънните артерии и се изважда аортата от гърдите. След отделяне на мастни тъкани около външната обвивка и обелване на интима, артерията се смила и инкубира в 10% ембрионален волски серум (FBS) - съдържащ DMEM среда при 37°С под газ 5% СО₂. Седем дни по-късно израсналите клетки се отделят чрез обработване на трипсин, промиват се с фосфатно буфериран физиологичен разтвор (PBS) и се инкубират в 10% FBS - съдържащ DMEM среда в културален флакон 80 cm². Клетките от субкултура 2 се суспендират в 10% FBS, съдържащ DMEM среда при 5 х 10⁴ клетки/ ml и 25 100 μΐ от нея на гнездо се добавят към 96 гнездово, покрито с колаген блюдо, която се инкубира при 37°С под газ 5% СО₂ в продължение на 1 ден. Изследваното съединение се разрежда подходящо с диметил сулфоксид 30 (DMSO) и се добавя към 96 - гнездовото блюдо. Концентрацията на DMSO в средата се нагласява на 1 %. След 48 h се добавя 10 μΐ от МТТ разтвора (5 mg/ml) и 4 h по-късно се добавя 10% натриев додецил сулфат -0.01 N 35 солна киселина (50 μΐ). Абсорбцията при 570 nm се измерва иа следващия ден с имуноизмервателен уред.

Инхибиторното действие на изследваното съединение спрямо SMC израстването е по40 казано чрез процентно инхибиране, изчислено по следната формула. Резултатите са показани в таблица 10.

Инхибиране/%)= 1 Абсорбция когато се добавя изследв.съедин.

ΐ Абсорбция когато ие се добавя изследв.съед.

Таблица 10.

изследвано съединение	ΙΟοίμΜ)
съединение 153.2НС1	27
съединение 157.2HCLH₂O	55
съединение 165.2ΗΟ.3/2Η₂0	38
съединение 163.2НВг	63

Експериментален пример 13: Акутна токсичност

Съединение 109.2НС1 и съединение 143.2НС1.Н₂О се прилагат съответно интреперитонеално спрямо мишка ddY и тя се наблюдава в продължение на 5 дни. Интраперитонеалното прилагане на 30 mg/kg не предизвиква смърт.

Горните примерни състави и фармакологични експерименти показват, че съединенията с формула (I) имат силно Rho киназно инхибиторно действие. Тези Rho киназни инхибитори имат съдоразширяващо действие, отпускащо действие на трахеята, действие, увеличаващо периферния кръвен поток, инхибиращо действие на клетъчна адхезионна индукция, инхибиторно действие спрямо туморни клетки при метастази, инхибиторно действие на костна резорбция, инхибиторна активност при миша алогенна MLR, инхибиторно действие спрямо израстване на туморна клетка, инхибиторно действие на ангиогенеза, инхибиторно действие спрямо израстване на клетка от васкуларен гладък мускул и други различни действия. Ето защо те са полезни като фармацевтични средства, в частност, терапевтично средство за хипертензия, терапевтично средство за ангина пекторис, потискащо средство при цереброваскуларна контракция, терапевтично средство за астма, терапевтично средство за заболяване на периферното кръвообръщение, профилактично средство при преждевременно раждане, терапевтично средство за артериосклероза, противораково лекарство, противовъзпалително средство, имуносупересант, терапевтично средство за автоимунно заболяване, лекарство против AIDS, средство против забременяване, профилактично средство при инфекция на храносмилателния тракт, терапевтично средство за остеопороза, терапевтично 2θ средство за ретинопатия и лекарство, подобряващо функция на мозъка.

Тъй като Rho киназните инхибитори от настоящото изобретение притежават силна Rho киназна инхибиторна активност, те също са 25 полезни като реагенти за изучаването на връзката между Rho и Rho киназата и като диагностични средства за заболявания, свързани с тях.

Това описание се основава на описание No 212409/1996, картотекирано в Япония, основните идеи на което са посочени тук.

Claims

1. Rho кииазен инхибитор, характеризиращ се с това, че съдържа амидно съединение с формула I о Rb

I

Ra — С-- N —Rc (I) в която

Ra е група с формулата

45 _RR

N—АMSB _R/(а)

R³ във формулите (а) и (Ь),

R е водород, алкил или циклоалкил, циклоалкилалкил, фенил, или аралкил, който по избор има заместител в пръстена, или група с формулата

NR⁷ в която R⁶ е водород, алкил или формула -NR’NR’, в която R⁸ и R’ са еднакви или различни и всеки е водород, алкил, аралкил или фенил, R⁷ е водород, алкил, аралкил, фенил, нитро или циано, или R⁶ и R⁷ в комбинация представляват група, образуваща хетероцикъл, по избор притежаващ в пръстена, кислороден атом, серен атом или по избор заместен азотен атом,

R¹ е водород, алкил или циклоалкил, циклоалкилалкил, фенил или аралкил, който по избор има заместител в пръстена, или

R и R¹ в комбинация образуват, заедно със съседния азотен атом, група, образуваща хетероцикъл, по избор притежаваща в пръстена кислороден атом, серен атом или по избор заместен азотен атом,

R² е водород или алкил,

R³ и R⁴ са еднакви или различни и всеки е водород, алкил, аралкил, халоген, нитро, амино, алкиламино, ациламино, хидрокси, алкокси, аралкилокси, циано, ацил, меркапто, алкилтио, аралкилтио, карбокси, алкоксикарбонил, карбамоил, алкилкарбамоил, или азид, и

А е група с формулата

R'°

I — (CHJKCJm (CH_a)n--- (_е) в която R¹⁰ и R¹¹ са еднакви или различни и всеки е водород, алкил, халоалкил, аралкил, хидроксиалкил, карбокси, или алкоксикарбонил, или R¹⁰ и R¹¹ в комбинация показват група, която образува циклоалкил и 1, m и η са всеки 0 или цяло число 1-3,

Rb е водород, алкил, аралкил аминоалкил или моно- или диалкиламиноалкил; и

Rc е по желание заместен пиридин, тиразин, пиримидин, пиролопиридин, пиразолопиридин, пиразолопиримидин, 2,3-дихидропиролопиридин, имидазопиридин, пиролопирими дин, имидазопиримидин, пиролотриазин, пиразолотриазин, триазолопиридин, триазолопиримидин, или 2,3-дихидропиролопиримидин, негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол.

2. Терапевтично средство за хипертензия, причинена от Rho киназа, включващо съединение с формулата (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол.

3. Терапевтично средство за ангина пекторис, причинена от Rho киназа, включващо съединение с формулата (I), негов изомер и/ или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол.

4. Потискащо средство за цереброваскуларна контракция, причинена от Rho киназа, включващо съединение с формула (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол.

5. Терапевтично средство за астма, причинена от Rho киназа, включващо съединение с формулата (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол.

6. Терапевтично средство при заболяване на периферното кръвообръщение, причинено от Rho киназа, включващо съединение с формула (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол.

7. Терапевтично средство за артериосклероза, включващо съединение с формулата (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол.

8. Противораково лекарство, включващо съединение с формула (I), негов изомер и/ или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол.

9. Противовъзпалително средство, включващо съединение с формула (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол.

10. Имуносупресант, включващ съединение с формула (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол.

11. Терапевтично средство за автоимунно заболяване, включващо съединение с формула (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол.

12. Лекарство против AIDS, включващо съединение с формула (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол.

13. Терапевтично средство за остеопороза, включващо съединение с формула (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена, с добавяне на киселина, сол.

14. Терапевтично средство за ретинопатия, включващо съединение с формула (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол.

15. Лекарство, подобряващо функцията на мозъка, включващо съединение с формула (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива,получена с добавяне на киселина, сол.

16. Профилактично средство при преждевременно раждане, включващо съединение с формула (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол.

17. Средство против забременяване, включващо съединение с формула (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, по-

5 лучена с добавяне на киселина, сол.

18. Профилактично средство при инфекция на храносмилателния тракт, включващо съединение с формула (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с

10 добавяне на киселина, сол.

19. Реагент, притежаващ Rho киназна инхибиторна активност, включващ съединение с формула (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне

15 на киселина, сол.

20. Диагностично средство на заболяване, причинено от Rho киназа, включващо съединение с формула (I), негов изомер и/или негова фармацевтично приемлива, получена с добавяне на киселина, сол.