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Un grand nombre de substances actives ont déjà été obtenues à partir des surrémelles, C'est ainsi qu'il y a quelques années la demanderesse a isolé entre autres l'aldostérone, conjointement avec Monsieur Tadéus Reichstein.
On savait que, dans une forme particulière du syndrome adréno-génital d'origine congénitale, il se produit de grandes pertes de sel. On a émis l'hypothèse que, par suite d'une hyperplasie des surrénales, il se produit en excès un facteur de séparation du sodium. D'autres auteurs. imputaient par contre ce phénomène à un dérangement des cortico-surrénales-ayant pour conséquence une production insuffisante des stéroïdes exerçant un effet de rétention du sodium, par exemple d'aldostérone. La demanderesse est partie de la supposition qu'il existait un facteur de séparation du sodium et elle a cherché systématiquement depuis 1955 une telle substance active.
A la suite de travaux difficiles faisant appel à des méthodes particulières d'isolement et de contr8le, la demanderesse est parvenue à isoler sous une forme cristalline pure une substance d'un point de fusion de 258 à 260 qui présente la propriété d'éliminer le sodium d'organismes animaux, appelée, par la suite la "substance active'*.
Il s'est avéré de façon surprenante que cette nouvelle substance active forme des mono- et des di-esters. Les restes esters sont, par exemple, ceux d'acides carboxyliques aliphatiques ou cyolo-aliphatiques saturés ou non-saturés, d'acides carboxyliques aromatiques ou hétérocycliques, par exemple des acides formique, acétique, chloracétique, trifluoracétique, des acides carbamiques, des acides alcoxycarboxyliques, de l'acide propionique, des acides butyriques, de l'acide lactique, des acides valérianiques comme l'acide n-valérianique, ou des
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acides triméthylaoétique, diéthylacétique, des acides caprelquese comme l'acide -triméthylpropiohiqu des acides oenanthique, caprylique, pélargonique, oaprique, des acides undécyléniques> par exemplè de l'acide undécylénique propement dit,
des acides laurique, myristique, palmitique ou de l'acide stéarique, de l'
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acide oléique, des acides orotonique, undéoanique, des acides cyclopentyloyalohexyl- ou phényl-acétiques ou -propioniques, des acides hexahydrobenzoique, benzoique, des phénoxyalcane-oiquesq comme les acides phénoxy-acétique, p-chlorophénoxy-acétique, 2,4-dichloro-phénoxy-acétique, 4"'tertio-butyl-phénoxy-aoétique, 3-phénoxy-propionique, 4-phénoxy-butyriqu, des acides furanne-2-carboxylique, 5-tertio butyl-furanne>2-carboxylique, 5-bromo-furanne-2-carboxylique, des acides nicotinique, isonicotinique, ainsi que d'acides dicarboxyliques, comme les acides oxalique, succinique, maléïque, glutarique, diméthylglutarique, pimélique,
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acétone-dicarboxylique, phtalique, ''-tétrahydrophtlqùe, hexahydrophta- lique, endométhylène-tétrahydrophtalique,
endométhylène-hexahydrophtalique, endoxy-hexahydrophtalique, endoxy-tétrahydrophtalique, camphorique, cyclo-
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propane-dîcarboxylique, cyclobutane-dicarboxylique digl-yeolique, éthylène-bis- glycolique, des acides polyéthylène-bis-glycoliques,, des acides quinoléique, cinchoméronique, ainsi que de semi-esters d'éthers monoalcoyliques de polyéthylèneglycols avec les acides dicarboxyliques ci-dessus, avec des acides céto-carboxy-
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liques, comme les acides {3-oéto-carboxyliques, par exemple avec les acides acétyl-, propionyl, butyryl- ou caproyl-acétiques, avec des acides aminés comme 1' acide diéthylamino-acétique, etc.
A la place des restes d'acides carboxyliques, il peut y avoir aussi ceux d'acides sulfoniques, par exemple de l'acide méthanesulfonique ou de l'acide toluène-sulfonique, ainsi que d'acides inorganiques comme les acides phosphoriques ou sulfuriques.
Ces esters peuvent être préparés suivant des méthodes connues en elles-mêmes.. C'est ainsi qu'on peut faire réagir la substance active définie cidessus sur des acides tels que ceux indiqués précédemment ou sur leurs dérivés fonctionnels comme leurs halogénures, leurs anhydrides, les acides thioliques correspondants, ainsi que sur les cétènes correspondantes. On peut aussi utiliser des méthodes d'alcoolyse. Par un choix approprié des conditions de la réaction et de la quantité des agents utilisés, on réussit à estérifier complètement ou également à estérifier partiellement la substance active. Les diesters obtenus peuvent être partiellement hydrolysés. Cette hydrolyse a lieu, par exemple,
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par voie chimique ou enzymatique, par exemple en utilisant des agents acides ou basiques, ou par alcoolyse.
A partir des mono-esters obtenus, on peut, par une estérification subséquente, préparer des di-esters dont les restes acyles peuvent être différents l'un de l'autre.
Lorsqu'on a isolé pour la première fois la nouvelle substance active, on a obtenu, à partir de 1000 kg de surrénales de porcs, un milligramme du nouveau composé sous forme cristalline pure. Sur la base d'autres données, on peut estimer que la proportion de cette substance active est d'environ 30 mg pour 1000 kg de surrénales. Il est clair qu'on me peut pas disposer de quantités sffisan- tes de cette glande comme matière de départ pour mettre la nouvelle substance active ou ses esters à la disposition des malades, en tant que médicaments. On a en conséquence cherché à établir la constitution du composé cristallin pur, afin d'ouvrir éventuellement de nouvelles voies pour sa préparation. Comme il a été exposé ci-dessus, il s'est avéré que la nouvelle substance active formait des mono- et des di-esters.
On a alors trouvé que ces nouveaux composés étaient
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l'alloprégmane-316a diol-20-one de formule:
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et les esters correspondais.
D'autres essais ont montré que l'isomère 5ss de la substance active,
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la prégae-3, I6 al-20-one de formule:
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possédait aussi la propriété d'éliminer le sodium d'organismes animaux.
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Les pnégnane-3fi,16 -àiol-20-ones indiquées ci-dessus sont nouvelles.
On connaît leurs 3fi-aaésafies ainsi que leurs 3i,16cx-diacêtatesa Leur préparation a lieu en réduisant l'éther 3fi-aaétate-16 -benzyliqne correspondant et en faisant agir des agents d'aoétylation sur les 3)3-acétates des prégnane-3P.16a- dihydroxy-20-ones formées (H. Hirschmann et collaborateurs, "Jo Orge Chem." 20,
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572, (1955), "J. of. Am. Chem. SOC.". 78, 3755 (1956})0 En outre, le 3-acétate de l'alloprégnane-3,16tx-diol-20-one a été transformé en 3-aaétate,16-benzoate.
On ne savait pas toutefois que ces acétates possédaient un effet thérapeutique. On ne pouvait donc pas s'attendre à ce qu'ils aient un rapport quelconque avec le facteur d'élimination du sodium des surrénales.
La présente invention a pour objet la préparation d'esters des pré-
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g nane-3'16a-d.iol-20-ones de formule:
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notamment du 59-isomère, l'alloprégnane-3ss,16a-diol-20-one, les monoesters ne présentant le reste acétyle qu'en position 16, les diesters ne le présente au plus qu'une fois et, lorsque ce reste se trouve dans ces esters en même temps que le reste benzoyle, il est en position 16. Ces composés renferment, de préférence, les restes des acides indiqués ci-dessus. Leur préparation a lieu suivant les indications ci-dessus.
L'invention concerne également les formes d'exécution du procédé suivant lesquelles on part d'un composé obtenu comme produit intermédiaire à un stade quelconque du procédé, puis effectue les phases encore manquantés dudit procédé.
Ces nouveaux esters peuvent être utilisés comme produits intermédiaires pour la préparation des prégnane-3ss,16a-diol-20-ones, par exemple pour les purifier. Ils possèdent toutefois aussi, comme la nouvelle substance active, la propriété d'éliminer le sodium, chez le rat, sans avoir d'influence notable sur le potassium' de la quantité d'urine élimihée pendant la durée de l'expérience.
La détermination de l'élimination des électrolytes (sodium et potassium) et de l'élimination de l'eau, est effectuée, par exemple, suivant les conditions expérimentales décrites dans la publication de P. Desaulles et R. Meier ("Schweiz.
Med. Wschr.3 86, Supplo au cahier 37, page 1060 (1956)). Particulièrement précieux sont les esters dont le reste acyle présente un groupe aquasolubilisant, comme le groupe carboxylique, ou un groupe aminogène, par exemple les esters dont le reste acyle est le reste d'un acide glutarique, tétrahydrophtalique, ou, en premier lieu, de l'acide succinique, sous la forme de leurs sels avec des bases inorganiques ou organiques, comme leurs sels de sodium ou leurs sels avec la triéthanolamine, ou, dans le cas de la présence d'un groupe basique, sous la forme de leurs sels avec des acides, par exemple avec les hydracides halogènes.
Ils peuvent, par suite, être utilisés comme médicaments, par exemple pour rétablir un équilibre sodique desorganisé, notamment lors de la rétention du sodium, par exemple dans le cas d'oedèmes, de troubles circulatoires, y compris la tension sanguine surélevée.
Pour l'application en médecine humaine ou vétérinaire, on prépare suivant des méthodes connues en elles-mêmes des mélanges de substances qui renferment les esters indiqués des prégnane-3ss,16a-diol-20-ones et des excipients solides ou liquides, par exemple en utilisant des matières de support pharmaceutiques, organiques ou inorganiques, appropriées pour une application parentérale, entérale ou topique. On envisage les substances ne réagissant pas sur les produits du procédé, comme l'eau, les huiles végétales, les alcools benzyliques, les polyéthylène-glycols, la gélatine, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le talc, la vaseline, la cholestérine, ou d'autres excipients.
On prépare notamment des préparations pour l'administration parentérale, de préférence des solutions, en premier lieu des solutions huileuses ou aqueuses, ainsi que des suspensions, des émulsions ou des implantats;'pour l'application entérale, on prépare en outre des comprimés ou des dragées, et pour l'application topique également des onguents ou des crèmes. Le cas échéant, on peut stériliser ces préparations ou leur ajouter des substances auxiliaires, telles que des agents de conservation, de stabilisation, des agents mouillants, ou émulsifiants, des sels servant à faire varier la pression osmotique, ou des tampons. La teneur de ces préparations, par exemple celle d'une ampoule ou d'un comprimé, est de 0,1 à
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200 mg.
L'invention concerne également à titre de produits industriels nouveaux les composés conformes à ceux obtenus par la mise en ouvre du procédé défini ci-dessus.
L'invention est décrite plus en détail dans les exemples non limitatifs qui suivent, dans lesquels les températures sont indiquées en degrés centigrades.
Exemple 1
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On chauffe pendant peu de temps) à,50 100 mg à'alloprégnane-3µ, 16a-diol-20-one avec 4 cm3 de pyridine et 2 cm3 d'anhydride propionique, puis laisse reposer pendant 60 heures à 20 . Après avoir éliminé la pyridine et l'anhydride propionique en excès par distillation sous vide, on ajoute de'l'eau et extrait à l'éther. On lave la solution éthérée avec de l'acide chlorhydrique dilué, avec une solution diluée d'hydroxyde de sodium et à l'eau jusqu'à neutralité, la sèche sur du sulfate de sodium et éliminé le solvant par distillation. Après recristallisation dans un mélange de méthanol et d'eau, le résidu fournit
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le 316a-dipropianate de l alloprégnane-316a diol-20-onei d'un point de fusion de 109-111 .
Exemple 2
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Dans 4 am3 e pyridine, on dissout 100 mg d'alõprégnane-3µ,16 - diol-20-one, ajoute 2 cm3 de chlorure de benzoyle dans 2 cm de benzène, puis, après avoir chauffé peu de temps à 40 , laisse reposer pendant 62 heures à 20 . Après avoir éliminé la pyridine par distillation sous vide, on ajoute de l'eau,
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épuise à l'éther et traite comme décrit .dans l'exemple 1. Le 3fi,16 -dibenzoate d'alloprégnane-3i16tx-diol-20-one que l'on obtient cristallise dans le méthanol ou dans un mélange de benzène et d'éther et fond à 224-226 .
Exemple 3
Dans 25 cm3 de benzène et 25 cm3 de pyridine, on laisse 500 mg d'
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allvprégnane-3,16a-diol-20-one reposer pendant 20 heures à 22 C avec 0,25 em3 de chlorure de benzoyle dans 5 cm3 de benzène. Tout en refroidissant, on ajoute ensuite du méthanol au mélange et évapore sous vide jusqu'à 60 Co On reprend le résidu dans du benzène, lave la solution benzénique avec de l'acide chlorhydrique binormal puis avec de l'eau jusqu'à neutralité, la sèche, évapore le solvant et l'on adsorbe le résidu dans un mélange de benzène et d'éther de pétrole (1:1) sur 30 g d'oxyde d'aluminium neutre.
Après avoir préalablement lavé avec du benzène et avec un mélange de benzène et d'éther (9:1), on peut éluer le 3-
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monobenzoate de 1 alloprégnane-316cx-diol-20-one avec de l'éther et avec un mélange'de chlorure de méthylène et d'acétone (9:1), puis le recristallise dans un mélange de benzène et d'éther.
Dans 0,5 cm3 de pyridine et 0,2 cm3 d'anhydride acétique, on laisse
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reposer pendant 20 heures, à 20 , 50 mg de 3P"inonobenzoate d al7,oprégnane-31x- diol-20-one. 'Après avoir ajouté peu d'eau,'avoir éliminé la pyridine et l'acide acétique par évaporation sous vide, on dissout le résidu dans de l'éther, puis lave la solution à l'eau, avec de l'acide chlorhydrique dilué et avec une solution de bicarbonate de sodium jusqu'à neutralité.
Après élimination du solvant, le résidu fournit par reoristallisation dans un mélange d'éther et d'hexane, le
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3µ-benzoate-16 -aaétate pur de iiailoprégnane-3µ,16 -àiol-20-oneo Exemple 4 Dans 20 a]# 3 de pyridine, on dissout 300 mg dtallorégnane-316cx-diol- 20-one et laisse reposer pendant 60 heures à 20 avec 0,15 cm de chlorure de l'
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acide triméthylacétique. On ajoute un peu de méthanol au mélange, concentre sous
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vide jusqu'à 60 C et lave alors en solution éthérée avec une solution binormale de carbonate de sodium et à l'eau jusqu'à neutralité. Après avoir séché la solution éthérée sur du sulfate de sodium et avoir éliminé le solvant par distillation, on reprend le résidu dans du benzène et chromatographie sur 15 g d' oxyde d'aluminium neutre.
Après avoir préalablément lavé avec du benzène et avec un mélange de benzène et d'éther (9:1), on peut éluer, avec des mélanges de ben-
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zène et d'éther (9:1,) et (1:1), le 3(3-triméthylacêtate d'alloprégnane-3,16a- diol-20-one fondant à 192-198 , et le recristallise ensuite dans un mélange d' acétone et d'éther.
.Dans 0,5 cm3 de pyridine et 0,3 cm3 d'anhydride acétique, on laisse
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reposer pendant 36 heures, à 20 , 80 mg de 3p-monotriméthylacétate d'alloprégnane- 3,16ct d.bl-20-oneo Après avoir ajouté peu d'eau et avoir évaporé la pyridine et l'acide acétique, on reprend le résidu dans de l'éther, puis lave la solution avec de l'acide chlorhydrique dilué, avec une solution froide de carbonate'de,so- dium et à l'eau jusqu'à neutralité. Par recristallisation dans un mélange d' éther et d'hexane, le résidu obtenu après séchage et distillation fournit le 3ss-
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triméthyl-acétate-l6oc-acétate de 1'alloprégnane-3fi,16 -diol-20-one.
Exemple 5 Dans 2 cm3 de pyridine, on dissout 50 mg d'alloprégnane-3(316oc-diol- 20-one et laisse reposer pendant 18 heures à 20 avec 0,158 cm3 d'anhydride acétique à 10% dans du benzène. Le résidu neutre obtenu après traitement (comme dans l'exemple 4) et pesant 51 mg est soumis sur 50 feuilles de papier Whatman .N 1 (largeur 19 cm, longueur 45 om) à une chromatographie préparatoire sur papier, effectuée à 38 C avec le système éther de pétrole-benzène-méthanol-eau (33: 17:40:10), afin de séparer du 3,16-diapétate et du 3-monoacétaté de la matière de départ qui n'a pas réagi.
La zone qui présente un indice Rf de 0,45 à 0,60 est éluée avec un mélange de méthanol et d'eau; après évaporation, on obtient sous forme pure, par recristallisation dans un mélange d'acétone et d'éther, le
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16a-mono-acétate de 1 alloprégnane-3i,16cx-diol-20-one qui fond à 259-2619. Dans le système indiqué, ce composé migre à peu près comme la oortexone, présente en ultra-violet une fluorescence bleue avec le trichlorure d'antimoine et une réaction colorée jaune avec la dinitrophénylhydrazineo
Exemple 6
On laisse reposer pendant 5 heures à 20 , avec 5 cm3 d'une solution
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saturée de bicarbonate de sodium et 15 cm3 d'eau, 50 mg de 3p,l6a-diaoétate d'alloprégnanem3(3,16a diôl20-one en solution dans 10 cm3 de méthanol.
Après évapo- ration sous vide, reprise du résidu dans un mélange d'éther et de chloroforme (3:1), lavage à neutralité et élimination du solvant par distillation, on chromatographie le résidu sur 50 feuilles de papier Whatman N 1 avec le système éther de pétrole-méthanol-eau (la:8:2), à 30 C, en'descendant, puis élue la zone présentant un indice Rf de 0,35 à 0,45 avec un mélange de méthanol et d'eau. Par évaporation sous vide et recristallisation dans un mélange d'acétone et d'éthers
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l'éluat fournit le 16-monoacétat's cl'alloprégnane-3p.16oc-diol-20-one décrit dans l'exemple 50
Exemple 7
Dans 100 cm3 de pyridine, on chauffe pendant 4 heures à l'ébullition,
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sous atmosphère d'azote, 2,0 g d'alloprégnane-3'1 d.olm2one et 4,8 g d'an- hydride succinique.
On refroidit la solution réactionnelle limpide et élimine largement la pyridine par distillation sous vide. On dissout le résidu cristallin dans du chloroforme, lave l'extrait, d'abord à plusieurs reprises avec de l' acide chlorhydrique dilué, puis à l'eau, et extrait les produits réactionnels acides avec une solution demi-normale de bicarbonate de sodium renfermant un peu d'une solution de carbonate de sodium.
On acidifie les extraits alcalins avec
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de l'acide chlorhydrique dilué et les extrait au chloroformée On lave la solution chloroformique à l'eau, la sèche sur du sulfate de sodium et l'évapore
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On obtient 3,12 g de 3el6-di-hemi-succinate d'alloprêgnane-3i,l6cx-diol-20-one qui, après avoir été recristallisé une fois dans de l'acétate d'éthyle, fond à 195- 196 Ce produit est soluble dans une solution décinormale de 'bicarbonate de sodium.
Pour préparer le sel de sodium soluble dans l'eau, on dissout 0,2 g
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de 3,16-di-hemisocïnate d'allopiégnane-3µ,16 -diol-20-one dans 8,0 cm d'une solution décinormale de bicarbonate de sodium. La solution est filtrée et lyophilisée. On obtient 0,22 g du sel disodique du 3,16-di-hemi-suodinate d'allopré - nane-3p,16a-cliol-20-one. Le pH de la solution aqueuse à 1% se situe à 6,3, me- suré avec un papier Lyphan N 670.
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D'une manière analogue, on obtient, à partir du 3,16-di-hemisuccinate d'alloprégnanè-3µ,16 -diôl-20-one et de triéthanolamine, le sel triéthanjolaminique, soluble dans l'eau, du 3,16-di-hemisuccinate d'alloprégnane-3',l6tx- diol-20-oneo
Exemple 8
Dans 5 cm3 de pyridine, on laisse reposer pendant 3 jours à la température ambiante, sous atmosphère d'azote, avec ? g d'anhydride succinique,
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0,44 g du 3-monobenzoate d'alloprégnane-3(3,l6(X-diol-20-one décrit dans l'exemple 3. On verse dans de l'eau, reprend dans de l'acétate d'éthyle et lave la solution avec de l'acide chlorhydrique dilué et de l'eau jusqu'à ce qu'elle soit exempte de pyridine.
Après séchage sur du sulfate de sodium et élimination du
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solvant par distillation, on obtient 0,54 g de 3-benzoate-16-hemisuccinate d'alloprégna,né-3,16a cLi.ol-24-one o
Exemple 9 Sous atmosphère d'azote, on chauffe pendant 4 heures, à l'ébullition,
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6,6 g d'alloprégnane-3P,16a-diol-20-one, 6,0 g d'anhydride tétrahydrophtalique et 150 om3 de pyridine. Après refroidissement, on élimine la pyridine par distillation sous vide, à une température de bain de 40 à 60 . On reprend le résidu dans de l'acétate d'éthyle renfermant un peu de méthanol. On lave l'extrait avec de l'acide chlorhydrique dilué et de l'eau, jusqu'à ce qu'il soit exempt de pyridine, et extrait alors les produits réactionnels ,acides à l'aide d'une solution diluée de bicarbonate de sodium.
Les extraits obtenus au bicarbonate de sodium sont filtrés et acidifiés avec de l'acide chlorhydrique dilué.
Le produit réactionnel qui a précipité est séparé par essorage, lavé à fond à l'eau, puis séché. Le rendement est de 12,2 g de 3,16-di-hemi-tétrahydrophta-
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late dalloprégnane-3g16a diol-20-one.
Pour la préparation du sel disodique, soluble dans l'eau, du 3,16di-hemitétrahydrophtalate d &lloprégnane-3,lCoc-diol-20-one, on ajoute, en refroidissant à la glace, 20 cm d'une solution décinormale d'hydroxyde de sodium à 0,64 g de 3,16-di-hemitétrahydrophtalate d'alloprégnane-3p,16 -diol-20-one en solution dans 5 cm 3 d'éthanol. La solution filtrée est lyophilisée suivant la technique connue. On obtient 0,69 g du sel disodique du 3,16-di-hemitétrahydro-
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phtalate d'alloprêgnane-3µ,16 màiol-20-one.
D'une manière analogue, on obtient, à partir du 3,16-di-hemitétrahydrophtalate d alloprégnane-3,16oc diol-20-one et de triéthanolamine, le sel triéthanolâminique du 3,16-di-hemitétrahydrophtalate d alloprégnane-3'16a-d.ial-20-oneo
Exemple 10 Sous atmosphère d'azote, on chauffe pendant 6 heures à l'ébullition,
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3,34 g d'alloprégnane73016a-diol-20-one, 2,2 g d'anhydride fi,1µ-diméthylglutari- que et 100 cm3 de pridine. On refroidit et évapore la solution réactionnelle
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sous vide à une température de bain de 40 à 60 . On reprend le résidu dans du chloroforme et lave l'extrait aveo de l'acide chlorhydrique dilué et de l'eau jusqu'à ce qu'il soit exempt de pyridine. On extrait les produits réactionnels acides avec une solution diluée, glacée, de bicarbonate de sodium.
Après avoir filtré les extraits obtenus au bicarbonate de sodium, on les acidifie avec de l'acide chlorhydrique dilué. Le produit réactionnel qui a précipité est séparé
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par essorage, lavé à l'eau et séché. On obtient 6 g de 3,6-di-hemi-fi,fi-diméthylglutarate d'alloprégnane-3p,16a-diol-20-one Pour la préparation du sel disodique soluble dans l'eau, on dissout 6,19 g de 3,16-di-hemi,-diméthylglutarate d alloprégnane-3,16a-diol-20-one dans 50 om3 d'éthanol et ajoute au tout 222 cm3 d'une-solution déoinormale d'hydroxyde de sodium refroidie à la glace. Après avoir filtré la solution, on la soumet à la technique connue du séchage à l'état congelé.
On obtient 6,6 g du
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sel disodique du 3,16-di-hemi-fi,µ-diméthylglutanate d alloprégnane-3,16a-diol- 20-oneo
D'une manière analogue, on obtient, à partir de diéthanolamine et
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de 3,16-di-hemi-p,p-diméthylglutarate d alloprégnane-3sl6ot-diol-20-one, le sel diéthanolaminique, soluble dans l'eau, du 3,16-di-hemi-fi,fi-diméthylglutarate d' alloprégnane-3,I6o diolm2d-one,
Exemple 11 On chauffe pendant 6 heures à l'ébullition, sous atmosphère d'azote,
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3,34 g d'aliôpoeégnane-3fi,16 -àiol-20-one, 5 g d'anhydride diglycolique et 100 cm3 de pyridine. Pour isoler le produit réactionnel, on opère comme, on l'a indiqué à l'exemple 10. On obtient 5,5 g du 3,16-di-hemidiglycolate d'alloprég-
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nane-3fi,16 -diol-20-one.
Pour la préparation du sel disodique soluble dans l'eau, on dissout 5,67 g de 3916-di-hemidiglycolate d'alloprégnane-3P,16a-diol-20-one dans 22 cm d'une solutiôn,déainormale de bicarbonate de sodium, en refroidissant, puis on lyophilise. On obtient ainsi 6 g du sel disodique du 3,16-di-hemidiglycolate d'alloprégnane-3fi,16 -diol-20-oneo D'une manière analogue, on obtient à partir d'éphédrine et de 3,16di-hemidiglyoolate d alloprégnane-3,16oc-diol-20one, le sel di-éphédrinique du 3,16-di-hemidiglycola,te d alloprêgnane-3,16a diol-20-oneq Exemple 12 Dans 25 cm3 de pyridine renfermant 7 cm triéthylaminei on chauffe pendant 5 heures à l'ébullition, sous atmosphère d'azote, 0,33 g d'alloprégnane-
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3,16cx-diol-20-one et 0,6 g d'anhydride oamphorique.
Après refroidissement, on élimine le solvant sous vide par évaporation à une' température de bain de 40 à 60 et reprend le résidu dans un mélange d'acétate d'éthyle et de'méthanol (9:1).
On lave la solution d'acétate d'éthyle à l'acide chlorhydrique dilué et à l'eau.
On extrait les produits réactionnels acides à l'aide d'une solution diluée, glacée, de bicarbonate de sodium. Les extraits obtenus au bicarbonate,de sodium sont acidifiés avec de l'acide chlorhydrique dilé. On sépare par essorage le produit réactionnel qui a précipité, le lave à l'eau et le sèche. Le rendement
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est de 0,5 g de 3916-di-hemicamphorate d'alloprégnane-3,16 diol-20-onea
Exemple 13 On chauffe pendant 6 heures à 110-120 sous atmosphère d'azote,
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0,335 g d alloprgnane-3S,16a-diol-20-ne, 0,6 g d'anhydride endoxy-tétrahydro- phtalique, 25 cm@ de collidine et 5 cm@ de diéthylamine. Pour isoler le pro- duit réactionnel, on opère comme on l'a indiqué à l'exemple 12.
On obtient 0,6
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g du 3,16-di-hemi-endoxy-tétrahydrophtalate d alloprégnane-3,16ec-diol-20-oneo
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D'une manière analogue, on obtient, avec un rendement de 82%, à par-
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tir dalloprégnane-316cx-diol-20-one et d'anhydride endoxy-hexahydro-phtalique, le 3-16-di-hemiendo,r hegahydro-phtalate d'alloprégnane-3p,l6a-diol-20-one.
Exemple 14 On chauffe pendant 8 heures à 110-120 , sous atmosphère d'azote, 0,335
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g d'alloprégnane-2fl6cx-diol-20-one 0,6 g d'anhydride endométhylène-tétrahydro- phtalique et 25 cm de collidine. On refroidit la solution réactionnelle lim- 'pide et la concentre sous vide à une température de bain de 40 à 70 . On reprend le résidu dans un mélange d'acétate' d'éthyle et de méthanol (9: 1) et ,lave la solution à l'acide chlorhydrique dilué et à l'eau. On extrait les produits réactionnels acides avec une solution diluée de bicarbonate de sodium, et, après avoir filtré, précipite à nouveau à l'aide de chlorhydrique dilué. On essore,
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lave à l'eau et sèche.
Le rendement est de 0,6 g de 3s1&-di-hemi.endométhylènetétrahydrophtalate d.''alloprégnane-3'l6cx-diol-20-onea D'une manière analogue, on obtient, avec un rendement de 80%, à partir d'alloprégna.ne-'16a-diol-20-one et d'anhydride endométhylène-hexahydro-phtalique ,¯le 3,16-àihemi-endomêthylène-hexahyàrophtalate d'alloprégnane-3µ,16 -diol- 20-one.
Exemple 15
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Dans 20 om3 de pyridine, on dissout 0,335 g à'allopnêgnane-3µ,16 diol-20-one et 0,64 g d'anhydride éthylène-bis-glycolique, puis chauffe le tout pendant 9 heures à l'ébullition sous atmosphère d'azote. La solution réactionnelle limpide, refroidie, est concentrée sous vide à une température de bain de 40'à 60 . On reprend le résidu dans de l'acétate.d'éthyle, lave la solution avec de l'acide chlorhydrique dilué e,t de l'eau jusqu'à ce qu'elle soit exempte de pyridine, la sèche et l'évapore.
Par dissolution dans l'acétate d'éthyle ou dans un mélangede chlorure de méthylène et d'éther de pétrole, il cristallise le 3,16
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-di-hemi#éthylène-bis-giyoolate de l'alloprégnane-3@,160E-diol-20-oneo
Exemple 16
On sèche pendant une heure et demie sous vide, à 80 , 0,7 g d'éther monométhylique du polyéthylène-glycol d'une poids moléculaire moyen de 350 et
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1 amène à réagir sur 0,3 g d'anhydride tétrahydrophtalique en chauffant pendant 4 heures à 170 sous atmosphère d"azote, ce qui fait qu'il se forme, avec un rendement presque quantitatif, l'hemitétrahydrophtalate du méthoxy polréthyl.ène-gly- col-"350"o L'ester acide est transformé en chlorure d'acide par une ébullition d'une heure avec 1 g de chlorure de thionyle,
et le chlorure de thionyle en excès est complètement éliminéo
On dissout le chlorure d'acide obtenu dans 50 cm3 de benzène et in-
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troduit le tout à 00 dans un mélange formé par 0,3 g d alloprégnane-3(16a diol- 20-one dans 50 cm de benzène et 50 cm de pyridine. On chauffe lentement à la température ambiante et laisse le mélange réactionnel reposer pendant 20 heures.
On sépare le,, chlorhydrate de pyridine qui s'est formé. On secoue le filtrat successivement avec 6 portions formées chacune de 1 g d'oxyde d'aluminium. On filtre la suspension et évapore complètement. Après élimination-des restes de solvant sous un vide poussé, le produit obtenu présente une pureté d'environ 90%, comme on peut s'en rendre compte à l'aide d'une chromatographie de comparaison
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sur papier, effectuée avec de l'alloprégnane-3P,16a-diol-20-one. Le 3,16-bisméthoxypolyéthylène-glyool-"350"- tétrahydrophtalate d'allopnégnané-3µ,16 -diol- 20-one obtenu est bien soluble dans l'eau.
La nouvelle substance active utilisée dans les exemples ci-dessus peut être isolée par exemple comme suit à partir de surrénales:
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On extrait 500 kg de surrénales fraîches ou frigorifiées de boeufs ou de porcs suivant l'un des procédés connus,de préférence suivant Cartland et Kuizenga ("J. Biolo Chem.3 116; 57 (1936)), le dégraissage étant fait à l'éther de pétrole.
Suivant la qualité des glandes, on obtient alors 4 à 25 kg d'ex= trait brut qu'on dégraisse ensuite à fond suivant le schéma 1, par répartition suivant le procédé à contre-courant entre de l'alcool aqueux, par exemple du mé- thanol à 60%, et de l'éther dé pétrole, On extrait ensuite la phase méthanolique aqueuse, également suivant le procédé à contre-courant, à deux reprises, avec un volume moitié de chloroforme (schéma 1). Après avoir été réunies, lavées avec de l'acide chlorhydrique dilué et une solution de bicarbonate de sodium et avoir été séchées sur du sulfate de sodium, les solutions chloroformiques désignées par les lettres a2 et b2 sont évaporées sous vide à une température inférieure à 50 .
On obtient de cette manière 64 g d'un extrait A riche en stéroïdes et 47 g d'un extrait B pauvre en stéroides. L'extrait A sert de substance de départ pour le présent procédé.
On soumet 64 g de l'extrait A indiqué à une chromatographie sur 2,0 kg de gel de silice .renfermant 20% d'eau, en éluant avec du chloroforme, avec des mélanges de chloroforme et d'acétone, avec de l'acétone et avec du méthanol.
Des essais préalables avaient montré que la séparation se faissait ainsi nota- blement plus rapidement, d'une, façon plus ménagée et avec un meilleur rendement que par répartition sur du kieselgur. La vitesse de passage est d'environ 1000 cm par heure et par fraction. Les fractions éluées avec 1 à 5% d'acétone dans le chloroforme et qui renferment de la corticostérone, de la 17-hydroxy-cortexone et de la 11-déhydro-corticostérone sont réunies et chromatographiées à nouveau sur 1,5 kg de gel de silice renfermant 90% d'eau. La nouvelle substance active se trouve dans les fractions 6 à 8 obtenues par élution avec 3 à 4,5% d'acétone dans du chloroforme.
Dans l'acétone, ces fractions fournissent déjà de grandes quantités de cristallisais qui, par la suite, s'avèrent exempts de la nouvelle substance activée Les 9,45 g des lessives-mères sont séparés par une chromatographie en blocs effectuée sur du papier Whatman N 1 (19 x 37 cm) (160 à 170 feuilles par bloc et 10 mg par feuille) avec le système formamide/mélange'de benzène et de chloroforme (1:1).- Par suite de la séparation précise et rapide, ce procédé s'avère extrêmement utile pour isoler la substance active.
Bien qu'on ne puisse pas déceler la substance active elle-même, à ce stade de la purification, par une réaction colorée, on réussit quand-même à déterminer facilement les zones des divers blocs qui la renferment au moyen d' un colorant pilote F¯ (4-nitro-2'-méthyl-4'-diéthanolamincazobenzène) et en observant en même temps les diverses feuilles à l'écran de fluorescence où 1 on peut identifier la 11-déhydro-corticostérone se trouvant dans D'extrait (migrant devant la substance active) et la corticostérone ou la 17-hydroxy-cortexone (migrant aussitôt après la substance active).
La matière se trouvant sur les zones découpées est éluée d'une manière usuelle avec du méthanol aqueux et extraite au chloroforme de la solution obtenue .
Ensuite on rechromatographie sur des feuilles isolées avec le système propylène-glycol/toluène; on développe jusqu'à ce que le colorant F ait parcouru environ les 3/4 de la longueur du papier. La zone de la substance active se trouve toujours à peu près à mi-chemin entre F et la ligne de départ et est limitée par deux lignes RF5 0,35 et RF@ 0,6. A part le colorant, une bande présentant une fluorescence faiblement verdâtre en ultra-violet aussit8t après la zone de la substance active est dans la plupart des cas utile pour localiser la substance active; les substances présentant une absorption en ultra-violet à 240 mu ne sont plus décelables à ce stade de purification.
Par contre, il est possible, après avoir fait agir du trichlorure d'antimoine, de rendre visible la substance active proprement dite à l'aide d'une fluorescence faiblement bleue à violetbleu en ultra-violet.
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L'éluat de cette zone fournit facilement un cristallisât brut avec l'acétone ou avec un mélange d'acétone et d'éther. En procédant à une seule recristallisation dans un mélange de méthanol et d'acétone et en lavant les cristaux avec de l'acétone et avec un mélange d'acétone et d'éther, on obtient la substance active pure, unitaire, qui fond à 258-260 . La substance active cristallise dans le méthanol, l'acétone, l'acétate d'éthyle, le dioxanne ou le tétrahydrofuranne, avec ou sans addition d'eau, en de petites paillettes minces.
Les cristaux commencent à sublimer à'partir de 210 environ, subliment fortement à partir de 230 environ et fondent à 258-260 ; par suite de la forte sublimation précitée, le point de fusion n'est.pas facile à déterminer.
Le spectre ultra-violet de la substance active ne présente pas d'absorption caractéristique à 240 mu, mais seulement une très faible absorption à 287 mu (E1 cm = 1,65). Le spectre infra-rouge dans le chloroforme montre des bandes caractéristiquesà 2,77 (OH), 3,43 u et 3,52 u (CH, fort), à 5,87 u (dans le domaine C=O), 6,92 u, 7,2' u, 7,40 u et 9,70 u.
Cette nouvelle substance active est d'une polarité analogue à celle de la corticostérone. On a rassemblé ci-après le résultat de quelques réactions colorées (toutes les données se rapportent à 10 Y de substance par cm2 de papier).
SbCl3 ; bleu (ultra-violet) Ultra-violet (240 mu) - Pouvoir réducteur ('bleu de tétrazolium)Fluorescence avec NaOH (#4-3-céto- stéroïdes) - Dinitrophénylhydraine + (jaune) Zimmermann (17-cétostéroïdesà - Tétrachlorure d'étain - Iode/iodure de potassium (+ éther)- FeCl3-K3Fe(CN)6 (pour les énols) - Ninhydrine schéma 1 Dégraissage de l'extrait brut de'surrénales 22,5 kg d'extrait brut obtenu à partir de 500 kg de surrénales de pores. Dissolution dans 200 litres d'éther de pétrole et séparation de fractions insolubles par filtration.
Extraction à contre-courant avec du méthanol aqueux à 60% (avec 5 g de NaCl/1) dans un extracteur Luwesta EG 2006 : vitesse de passage de la phase d'éther de pétrole 600 litres par heure, température 18-31 C, rapport volumétrique des phases méthanoliques aqueuses et des phases d'éther de pétrole 3,6-4,1
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Extrait méthanolique a Extrait méthanolique b Lavage des extraits méthanoliques avec de l'éther de pétrole dans un extracteur Luwesta : vitesse de passage des phases méthanoliques, environ 300 litres par heure, température 25 0; rapport volumétrique a/éther de pétrole = 2,6, put éther de pétrole = 3e7- Solution Solution méthanolique a1 méthanolique bl jeter l'éther . # de pétrole Réextraction des solutions méthanoliques lavées, avec du chloroforme, dans un extracteur Luwesta :
vitesse de passage des phases méthanoliques, environ 260 litres par heure, température 25 C, rapport volumétrique du chloroforme à ou bl i 2,1- Extrait Extrait chloroformique a2 chloroformique b2 jeter le méthanol aqueux Concentrer les extraits chloroformiques sous vide, laver à neutralité, sécher et évaporer, finalement sous un vide poussé: '' Extrait A : 64 g Extrait B :
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Exemple 17
Si, dans les exemples ci-dessus, on remplace l'alloprégnane-3ss,16a- diol-20-one par de la prégnane-3,16a-diol-20-one, on obtient alors les esters correspondants, par exemple le 3,16-dipropionate, le 3,16 dibenzoate, le 3,16dihemisuccinate de la prégnane-3,16a-diol-20-one,
La substance de départ peut être obtenue par exemple comme suit :
Dans 30 cm3 d'acide acétique glacial, on dissout 500 mg de 16a,17a- époxy-prégnane-3ss-ol-20-one, ajoute une suspension de 15 équivalents d'acétate de chrome-(2) dans 30 cm d'eau et secoue pendant 15 heures à 20 après avoir fait le vide,dans le récipient. On verse le contenu du ballon dans 200 cm d' eau et extrait jusqu'à épuisement avec un mélange d'éther et de chloroforme (3: 1).
Après séchage ,et élimination du solvant par distillation, on obtient un résidu cristallin qui, par recristallisation dans un mélange d'acétone et d'éther, fournit la prégnange-3ss,16a-diol-20-one pure qui'fond à 198-199 et présente un pou- voir rotatoire spécifique (a)D = + 53 (dans un mélange de méthanol et de chloroforme (1:1). @D
La 16a,17a-époxy-àrégnane-3ss-ol-20-one utilisée comme substance de départ peut être obtenue par une dégradation de l'acétate de sarsasapogénine en
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3(3-acétate de la Ll16¯prégnane -3-0l-20-.one, suivie d'une époxylation en posi- tion 16,17 et d'une hydrolyse de ce dernier composé.
Exemple 18 Ampoules huileuses,(pour injection) 3,16-dipropionate
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d'alloprégnane-3pgl6a-diol-20-one 15 mg huile de sésame neutre et exempte de peroxyde, jusqu'à 1 cm
Exemple 19 Ampoules cristallines (pour injection) 3-triméthylacétate-16-acétate
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d alloprégnane-3,16a-diol-20-one 15 mg oarboxyméthyloellulose (sel de sodium) 5,00 mg chlorure de sodium 7,50 mg phosphate primaire de sodium 2,00 mg Merthiolates 0,01 mg Tween 20 1,00 mg eau distillée, jusqu'à 1,00 cm3
Exemple 20 Comprimés 3,16-di-hemisuccinate
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d'alloprégnane-3Pel6a-diol-20-one 20,00 mg lactose 100,00 mg gélatine 2,00 mg amidon 67,00 mg stéarate de magnésium 0,60 mg talc 10,40 mg
200,
00 mg
La substance active peut aussi être combinée avec la cortisone, l'hydrocortisone, la prednisone, la prednisolone, la 9a-fluoro-prédnisone, et la 9a-
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fluoro-prednisolone, la 9a fluoro-l6oc-hydror prednisone et la 9a-fluoro-16a hydroxy-prednisolone, et avec les esters de ces composés.
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.