WO2023282356A1 - 口腔用組成物、および口腔内疾患の予防または治療方法 - Google Patents

Abstract

ラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物を含む口腔用組成物が提供される。前記ラクトバチルス・プランタラムは、好ましくはＮＩＴＥ－ＢＰ－０３１９８、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３１９９、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２００、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２０１およびＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２０２から選択される少なくとも１つである。ラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物を動物の口腔に適用することを含む、口腔内疾患の予防または治療方法が提供される。

Description

口腔用組成物、および口腔内疾患の予防または治療方法

　本発明は、口腔用組成物、および口腔内疾患の予防または治療方法に関する。

　歯周病は、歯周病菌等の病原微生物によって引き起こされ、人類の多くが罹患する感染症である。歯周病を抑制するために、病原菌に対する抗菌活性を有する成分を含む組成物が開発されている。国際公開第２０１１／００７５８４号（特許文献１）には、ラクトバチルス・ラムノーサスＫＯ３株、ラクトバチルス・カゼイＹＵ３株およびラクトバチルス・パラカゼイＹＵ４株から選ばれる１種以上の細菌の菌体もしくは菌体培養物等を有効成分する口腔内疾患の予防または治療剤が開示されている。国際公開第２０１２／１０８５１８号（特許文献２）には、ラクトバチルス・ラムノーサスＫＯ１株およびラクトバチルス・ラムノーサスＫＯ３株から産生されるＫｏｇ１またはＫｏｇ３を含む口腔内疾患の予防または治療用組成物が開示されている。

　中国特許出願公開第１０８６８５７１６号明細書（特許文献３）には、ナイシンを含む練り歯磨きが開示されている。中国特許出願公開第１０５３２６６５６号明細書（特許文献４）には、ナイシンおよびポリリジンを含む口腔用抗菌組成物が開示されている。独国特許出願公開第１０２０１１１１６３２５号明細書（特許文献５）には、ラクトバチルス・クリスパタス、ラクトバチルス・ガセリおよびラクトバチルス・アシドフィルスに属する細菌の菌体またはその一部を含む口腔ケア用の組成物が開示されている。

国際公開第２０１１／００７５８４号 国際公開第２０１２／１０８５１８号 中国特許出願公開第１０８６８５７１６号明細書 中国特許出願公開第１０５３２６６５６号明細書 独国特許出願公開第１０２０１１１１６３２５号明細書

　本発明は、口腔内疾患を抑制し得る新規組成物を提供することを目的とする。

　本発明は、以下に例示する項目に関する。
［１］　ラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物を含む口腔用組成物。
［２］　食品である、［１］に記載の組成物。
［３］　前記食品は発酵食品である、［２］に記載の組成物。
［４］　洗口剤または歯磨剤である、［１］に記載の組成物。
［５］　フッ素化合物をさらに含む、［１］または［４］に記載の組成物。
［６］　前記ラクトバチルス・プランタラムは、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３１９８、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３１９９、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２００、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２０１およびＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２０２から選択される少なくとも１つである、［１］～［５］のいずれかに記載の組成物。
［７］　口腔内疾患の予防または治療用組成物である、［１］～［６］のいずれかに記載の組成物。
［８］　前記口腔内疾患は歯周病である、［７］に記載の組成物。
［９］　ラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物を動物の口腔に適用することを含む、口腔内疾患の予防または治療方法。
［１０］　前記口腔内疾患は歯周病である、［９］に記載の方法。
［１１］　ラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物を含む、歯周病の原因菌に対する増殖抑制剤または殺菌剤。
［１２］　前記歯周病の原因菌は、ポルフィロモナス・ジンジバリス、タンネレラ・フォーサイシアおよびトレポネーマ・デンティコーラから選択される少なくとも１つを含む、［１１］に記載の増殖抑制剤または殺菌剤。
［１３］　ラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物を歯周病の原因菌に接触させることを含む、歯周病菌の増殖抑制または殺菌方法。

　本発明によれば、口腔内疾患を抑制し得る組成物を提供することができる。

実験１において、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９８の（Ａ）コロニーの形状および（Ｂ）グラム染色結果を示す図である。 実験２において、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９９の（Ａ）コロニーの形状および（Ｂ）グラム染色結果を示す図である。 実験３において、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２００の（Ａ）コロニーの形状および（Ｂ）グラム染色結果を示す図である。 実験４において、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０１の（Ａ）コロニーの形状および（Ｂ）グラム染色結果を示す図である。 実験５において、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０２の（Ａ）コロニーの形状および（Ｂ）グラム染色結果を示す図である。 実験６～８において、細菌に対する抗菌活性評価試験を説明する図である。

　以下、本発明を実施するための形態について詳細に説明する。なお、本発明は、以下の実施形態に限定されるものではない。本明細書において「Ａ～Ｂ」という形式の表記は、範囲の上限下限（すなわちＡ以上Ｂ以下）を意味し、Ａにおいて単位の記載がなく、Ｂにおいてのみ単位が記載されている場合、Ａの単位とＢの単位とは同じである。

　［口腔用組成物］
　本発明の一実施形態に係る口腔用組成物は、ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍ）の菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物を含む。本発明に係る組成物は、歯周病菌に対する抗菌活性を有する。

　ラクトバチルス・プランタラムは、好ましくはＮＩＴＥ－ＢＰ－０３１９８、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３１９９、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２００、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２０１およびＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２０２から選択される少なくとも１つである。ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３１９８、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３１９９、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２００、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２０１およびＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２０２は、それぞれ受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９８（原寄託日：２０２０年４月９日）、受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９９（原寄託日：２０２０年４月９日）、受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２００（原寄託日：２０２０年４月９日）、受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０１（原寄託日：２０２０年４月９日）、受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０２（原寄託日：２０２０年４月９日）として、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ、住所：〒２９２－０８１８　千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８　１２２号室）にブダペスト条約に基づいて国際寄託されている細菌である。上記細菌は、いずれも乳酸菌の一種であるラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍ）に属する細菌である。上記細菌の菌学的性質については、後述する表１～表１０および図１～図５に示す。

　ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３１９８は発酵食品中、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３１９９、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２００、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２０１およびＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２０２は、自然環境中に存在するため、人への安全性も高いと考えられる。上記乳酸菌は、単離された細菌であってよい。

　本発明の一実施形態に係る口腔用組成物は、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３１９８、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３１９９、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２００、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２０１およびＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２０２から選択される少なくとも１種の細菌の菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物を含む。菌体は、発酵食品中または環境中から単離されたものであってもよく、培養されたものであってもよい。菌体は死菌であっても生菌であってもよい。菌体は培養液、緩衝液等に存在しているものであってもよく、これらを濃縮して液体を除いたものまたはその凍結乾燥物であってもよく、凍結ストックであってもよい。

　菌体培養物は、細菌の分泌物、代謝物等を含んでよい。菌体培養物には、細菌が産生するペプチド、タンパク質、糖、酵素、有機酸およびこれらを含む培地（液体培地および固形培地）が含まれ得る。菌体培養物は、細菌を培養した後の上清であってもよい。培養上清は、例えば細菌を培養した液体培地から遠心分離、ろ過操作等で細菌を除いて得ることができる。

　ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３１９８、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３１９９、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２００、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２０１およびＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２０２は、乳酸菌の通常の培養方法に従って培養することができる。代表的な培養方法としては、ＭＲＳ（ｄｅ　Ｍａｎ，Ｒｏｇｏｓａ　ａｎｄ　Ｓｈａｒｐｅ）液体培地またはＭＲＳ寒天培地を用いて温度３０℃で培養する方法が挙げられる。

　菌体または菌体培養物の抽出物は、上記乳酸菌の菌体または菌体培養物が有する歯周病菌に対する抗菌活性を失わないように調製される。抽出物は、例えば細菌の菌体または菌体培養物を超音波破砕、ビーズ摩砕、凍結融解、化学的溶解等の処理をすることにより得ることができる。抽出物は、菌体または菌体培養物を塩析、限外ろ過、イオン交換クロマトグラフィーまたは有機溶媒を用いた液相抽出等を行って得てもよい。これらの処理は適宜組合わせて行なうことができる。抽出物は、細菌の菌体の断片、核酸、ペプチド、タンパク質、糖および酵素を含み得る。本明細書において、細菌の菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物を「菌体調製物」とも記す。

　口腔用組成物は、口腔から体内に摂取される経口組成物であってよい。口腔用組成物は、食品であってよく、ヒト以外の動物の食品または飼料であってよい。口腔用組成物は、口腔内で使用され、使用後は口腔内から排出される組成物であってもよい。口腔用組成物は、口腔外で使用される組成物であってもよい。口腔外で使用される組成物は、例えば、義歯洗浄剤であってもよい。口腔用組成物は、例えば口腔ケア用品であってよい。

　口腔用組成物は、好ましくは経口組成物は、本発明の効果を損なわない範囲で添加成分を配合することができる。経口摂取に適した添加成分としては、水等の溶媒、糖質、タンパク質、脂質、ビタミン類、ミネラル類、生体必須微量金属（硫酸マンガン、硫酸亜鉛、塩化マグネシウム、炭酸カリウム等）、香料、食品衛生上または薬学的に許容可能な担体、食品添加物等が挙げられる。添加成分は、１種または２種以上の組み合わせを適宜選択して、必要に応じて配合することができる。

　糖質としては、糖類、加工澱粉（デキストリン、可溶性澱粉、ブリティッシュスターチ、酸化澱粉、澱粉エステル、澱粉エーテル等）、食物繊維等が挙げられる。

　タンパク質としては、全脂粉乳、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、カゼイン、ホエイ粉、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物、ホエイタンパク質分離物、α－カゼイン、β－カゼイン、κ－カゼイン、β－ラクトグロブリン、α－ラクトアルブミン、ラクトフェリン、大豆タンパク質、鶏卵タンパク質、および肉タンパク質等の動植物性タンパク質、ならびにこれらの加水分解物、ならびに、バター、乳性ミネラル、クリーム、ホエイ、非タンパク態窒素、シアル酸、リン脂質、および乳糖等の各種乳由来成分等が挙げられる。

　脂質としては、ラード、魚油等、これらの分別油、これらの水素添加油、およびこれらのエステル交換油等の動物性油脂、ならびに、パーム油、サフラワー油、コーン油、ナタネ油、ヤシ油、これらの分別油、これらの水素添加油、およびこれらのエステル交換油等の植物性油脂等が挙げられる。

　ビタミン類としては、ビタミンＡ、カロチン類、ビタミンＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＤ群、ビタミンＥ、ビタミンＫ群、ビタミンＰ、ビタミンＱ、ナイアシン、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、コリン、葉酸等が挙げられる。

　ミネラル類としては、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレン等が挙げられる。

　口腔用組成物（好ましくは経口組成物）は、溶液、懸濁液、乳濁液、粉末、ペースト、半固体成形物、固体成形物等、経口摂取可能な形態であればよい。食品（飲料を含む）としては、例えば、牛乳、植物性ミルク、乳飲料、清涼飲料、発酵乳、乳酸菌飲料、乳性飲料、調製粉乳、液体ミルク、流動食、病者用食品、冷凍食品、発酵食品、加工食品、菓子類、調味料その他の市販食品等が挙げられる。より具体的には、ヨーグルト、チーズ、アイスクリーム、氷菓、チョコレート、タブレット（錠菓）、グミ、キャンディー、ゼリー、ガム、パン、ビスケット、クラッカー、ピッツァクラスト等が挙げられる。口腔用組成物は、サプリメント、健康食品、機能性食品、特別用途食品、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、医薬用部外品、化粧品等であってもよく、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、ゼリー剤等であってもよい。

　口腔用組成物は、好ましくは口腔ケア用品は、本発明の効果を損なわない範囲で、添加成分を配合することができる。添加成分としては、例えばフッ素化合物、薬用成分、研磨剤、粘結剤、粘稠剤、界面活性剤、矯味剤、防腐剤、香料、着色剤、ｐＨ調整剤、溶剤、可溶化剤、基剤、洗浄剤、吸着剤等が挙げられる。添加成分は、組成物の剤形に応じて適宜選択し得る。添加成分は、１種または２種以上の組み合わせを適宜選択して、必要に応じて配合することができる。

　フッ素化合物としては、フッ化ナトリウム、フッ化カリウム、フッ化アンモニウム、フッ化スズ、アミンフッ化物、モノフルオロリン酸ナトリウム、モノフルオロリン酸カリウム、フッ化ケイ素ナトリウム、フッ化ケイ素カルシウム等が挙げられ、好ましくはフッ化ナトリウムまたはモノフルオロリン酸ナトリウムである。フッ素化合物は、う蝕を抑制することができる。

　フッ素化合物は、組成物中の濃度が例えばフッ素濃度として１００１ｐｐｍ～３０００ｐｐｍ、好ましくは１００１ｐｐｍ～２０００ｐｐｍ、より好ましくは１００１ｐｐｍ～１５００ｐｐｍとなる量で使用される。

　薬用成分としては、殺菌剤、抗炎症剤、血行促進剤、歯石沈着抑制剤、ステイン除去剤、知覚過敏抑制剤、ビタミン剤、生薬エキス、歯垢分解酵素等を、上記口腔用組成物に配合することができる。これらの薬効成分は、医薬品等に使用しうるものであれば特に限定されない。

　殺菌剤としては、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩酸クロルヘキシジン、およびグルコン酸クロルヘキシジン等のカチオン性殺菌剤；ドデシルジアミノエチルグリシン等の両性殺菌剤；トリクロサン、およびイソプロピルメチルフェノール等の非イオン性殺菌剤；ならびに、ヒノキチオール等が挙げられる。

　抗炎症剤としては、β－グリチルレチン酸、グリチルレチン酸、グリチルリチン酸、グリチルリチン酸二アンモニウム、グリチルリチン酸二ナトリウム、グリチルリチン酸三ナトリウム、グリチルリチン酸二カリウム、グリチルリチン酸モノアンモニウム、ε－アミノカプロン酸、アズレンスルホン酸ナトリウム水和物、アラントイン、アラントインクロルヒドトキシアルミニウム、アルクロキサ、アラントインジヒドロキシアルミニウム、アルジオキサ、エピジヒドロコレステリン、ジヒドロコレステロール、リゾチーム塩酸塩等が挙げられる。

　血行促進剤としては、塩化ナトリウム等が挙げられる。

　歯石沈着抑制剤としては、ゼオライト、リン酸水素二ナトリウム、ピロリン酸二水素二ナトリウム、ピロリン酸ナトリウム、無水ピロリン酸ナトリウム、ピロリン酸四ナトリウム（無水）、リン酸一水素二ナトリウム、リン酸水素ナトリウム水和物、リン酸水素二ナトリウム（結晶）、リン酸三ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム等が挙げられる。

　ステイン除去剤としては、マクロゴール（マクロゴール２００、マクロゴール３００、マクロゴール４００、マクロゴール６００、マクロゴール１０００、マクロゴール１５００、マクロゴール１５４０、マクロゴール４０００、マクロゴール６０００、マクロゴール２００００など）、ポリリン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。

　知覚過敏抑制剤としては、硝酸カリウム、乳酸アルミニウム等が挙げられる。

　ビタミン剤としては、アスコルビン酸、Ｌ－アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム、ピリドキシン塩酸塩、酢酸ＤＬ－α－トコフェロール、トコフェロール酢酸エステル、ニコチン酸ｄl－α－トコフェロール、トコフェロールニコチン酸エステル等が挙げられる。

　研磨剤としては、無水ケイ酸、シリカ（結晶性シリカ又は非晶性シリカ）、シリカゲル、およびアルミノシリケート等のシリカ系研磨剤、ゼオライト、リン酸水素カルシウム無水和物、リン酸水素カルシウム２水和物、ピロリン酸カルシウム、炭酸カルシウム、水酸化アルミニウム、アルミナ、炭酸マグネシウム、第３リン酸マグネシウム、ケイ酸ジルコニウム、第３リン酸カルシウム、ハイドロキシアパタイト、第４リン酸カルシウム、ならびに、合成樹脂系研磨剤等が挙げられる。

　粘結剤としては、プルラン、ゼラチン、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カラギーナン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、ポリアクリル酸ナトリウム、アラビアガム、グアーガム、ローカストビーンガム、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、およびカルボキシビニルポリマー等の有機系粘結剤、ならびに、増粘性無水ケイ酸、およびベントナイト等の無機系粘結剤等が挙げられる。

　粘稠剤としては、多価アルコール（さらに具体的には、ソルビット、グリセリン、濃グリセリン、エチレングリコール、プロピレングリコール、１,３－ブチレングリコール、プロパンジオール(１，３－プロパンジオール)、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール等）、トレハロース、ヒアルロン酸ナトリウム、加水分解コラーゲン等が挙げられる。

　界面活性剤としては、アニオン界面活性剤では、Ｎ－アシルアミノ酸塩、α－オレフィンスルホン酸塩、Ｎ－アシルスルホン酸塩、アルキル硫酸塩（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなど）、グリセリン脂肪酸エステルの硫酸塩等が挙げられる。
　ノニオン界面活性剤としては、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンブロック共重合体、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、グリセリンエステルのポリオキシエチレンエーテル、ショ糖脂肪酸エステル、アルキロールアミド、グリセリン脂肪酸エステル、アルキルグリコシド等が挙げられる。
　両性界面活性剤としては、アルキルベタイン系界面活性剤、アミンオキサイド系界面活性剤、イミダゾリニウムベタイン系界面活性剤が挙げられる。これらの具体例としては、２－アルキル－Ｎ－カルボキシメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン、ヤシ油アルキルベタイン（ヤシ油アルキルジメチルアミノ酢酸ベタイン）、ステアリルジメチルアミノ酢酸ベタイン、ステアリルジメチルベタインナトリウム、ヤシ油脂肪酸アミドアルキルベタイン、パーム油脂肪酸アミドプロピルベタイン、ラウリン酸アミドプロピルベタイン、リシノレイン酸アミドプロピルベタイン、ステアリルジヒドロキシエチルベタイン等が挙げられる。

　矯味剤としては、例えば、Ｌ－グルタミン酸ナトリウム、サッカリン、サッカリンナトリウム、グリチルリチン酸二ナトリウム、グリチルリチン酸三ナトリウム、ショ糖、ブドウ糖、果糖、乳糖、ハチミツ、アスパルテーム、ステビア、スクラロース、キシリトール、イノシトール、Ｄ－ソルビトール、Ｄ－マンニトール、アラビトール、ラフィノース、ラクチュロース、ラクチトール、エリスリトール、還元パラチノース、パラチノース、パラチニット、アセスルファムＫ、マルトース、マルトシルトレハロース、マルチトール、ネオヘスペリジンジヒドロカルコン、ペリラルチン、ｐ－メトキシシンナミックアルデヒド、ソーマチン等が挙げられる。

　防腐剤としては、例えば、グリシン、安息香酸ナトリウム、メチルパラベン、エチルパラベン、ブチルパラベン、イソプロピルパラベン、プロピルパラベン、イソブチルパラベン、およびベンジルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル、フェノキシエタノール、およびエタノール等のアルコール類、ソルビン酸、安息香酸、デヒドロ酢酸、プロピオン酸およびこれらの塩、エチレンジアミン四酢酸塩、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム、ならびに、塩酸アルキルジアミノエチルグリシン等が挙げられる。

　香料としては、例えば、Ｌ－メントール、ペパーミント、スペアミント、フルーツ香料、ハッカ油等が挙げられる。香料は、唾液分泌を刺激するという利点も有する。

　着色剤としては、ベニバナ赤色素、クチナシ黄色素、クチナシ青色素、シソ色素、紅麹色素、赤キャベツ色素、ニンジン色素、ハイビスカス色素、カカオ色素、スピルリナ青色素、およびクマリンド色素等の天然色素、赤色３号、赤色１０４号、赤色１０５号、赤色１０６号、黄色４号、黄色５号、緑色３号、および青色１号等の法定色素、リボフラビン、銅クロロフィリンナトリウム、ならびに、二酸化チタン等が挙げられる。

　ｐＨ調整剤としては、ギ酸、乳酸、酢酸、塩酸、硫酸、硝酸、クエン酸、リン酸、リンゴ酸、グルコン酸、マレイン酸、コハク酸、グルタミン酸、ピロリン酸、酒石酸、酢酸水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸水素ナトリウム、リン酸、リン酸ナトリウム、リン酸一水素ナトリウム、およびリン酸二水素ナトリウムリン酸二水素カリウム等の酸、アルカリ、および緩衝剤等が挙げられる。

　溶剤としては、水、ならびに、エタノール、およびプロパノールなどの低級アルコール等が挙げられる。

　可溶化剤は、水への上記添加剤または薬効成分の溶解を促進させるために添加してもよい。そのような可溶化剤の例として、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ブチレングリコール、およびポリエチレングリコール等の多価アルコール類等を挙げることができる。

　基剤としては、炭酸水素ナトリウム等が挙げられる。

　洗浄剤としては、ポリリン酸ナトリウムなどを挙げることができる。

　吸着剤としては、β－シクロデキストリンなどを挙げることができる。

　口腔用組成物は、例えば洗口剤（マウスウォッシュ）、歯磨剤（練歯磨、液体歯磨、歯磨粉等）、口中清涼剤、ガム剤、トローチ剤、バッカル錠、歯肉付着性テープ製剤、口腔内用ゲル製剤、口腔内用軟膏、口腔内用スプレー剤、口腔内用パスタ剤、口腔内用ペースト剤、口腔用丸剤、口腔内用錠剤、口腔用散剤、口腔内用粉剤、口腔内用液剤、口腔内用懸濁剤、口腔内用乳剤、口腔内用顆粒剤、口腔内用カプセル剤、義歯洗浄剤が挙げられる。口腔用組成物は、好ましくは洗口剤または歯磨剤である。口腔用組成物は、医薬部外品、衛生用品または化粧品であってもよい。

　口腔用組成物の製造方法は特に限定されない。口腔用組成物は、一般的な経口組成物および口腔ケア用品等が製造される任意の製造方法によって製造されてよい。口腔用組成物の製造方法は、例えば一般的な経口組成物および口腔ケア用等の製造方法のいずれかの工程において、上記乳酸菌の菌体調製物を添加する工程を含んでよい。また、口腔用組成物の製造方法は、例えば、製造された経口組成物および口腔ケア用品等に、上記乳酸菌の菌体調製物を添加する工程を含んでよい。口腔用組成物は、上記乳酸菌の菌体調製物そのものであってもよい。口腔用組成物は、上記乳酸菌の菌体調製物を経口組成物および口腔ケア用品等に付着、吸収または混合させやすくするための液体、展着剤等を含んでよい。

　口腔用組成物に含まれる上記乳酸菌の菌体調製物の量は、歯周病菌に対する抗菌活性を示す程度であれば特に限定されない。口腔用組成物中の上記乳酸菌の菌体調製物の合計量は、例えば１×１０^３～１×１０^１２ｃｆｕ（コロニー形成単位）／ｇであってもよく、１×１０^４～１×１０^１２ｃｆｕ／ｇであってもよく、１×１０^５～１×１０^１２ｃｆｕ／ｇであってもよい。上記コロニー形成単位は、寒天平板培養法によって求めることができる。口腔用組成物中の上記乳酸菌の菌体調製物の合計量（含有割合）は、口腔用組成物重量に対して０．０００１質量％～３０質量％、好ましくは０．００１質量％～１０質量％であってよい。口腔用組成物中の上記乳酸菌の菌体調製物の合計の濃度は、０．１～１００,０００ｐｐｍであってもよく、１～１００,０００ｐｐｍであってもよく、１０～１００,０００ｐｐｍであってもよい。当該合計量は、天秤等で秤量可能である。

　口腔用組成物は、動物へ適用し得る。動物は、ヒトまたはヒト以外の動物であってよい。動物は、哺乳類を含む。哺乳類は、齧歯目、ウサギ目、食肉目、鯨偶蹄目、奇蹄目、霊長目を含んでよい。より具体的には上記哺乳類は、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ハリネズミ、フェレット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヤギ、ウマ、ヒツジ、サル、オランウータン、チンパンジー等が挙げられる。動物は、ペット、家畜または実験動物であってもよい。

　本発明の一実施形態は、口腔用組成物の製造におけるラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物の使用である。

　本発明に係る口腔用組成物は、口腔内疾患の予防または治療用組成物であってもよい。本明細書において、治療には、症状の緩和、症状の好転および完治を含む。予防または治療用組成物は、医薬品または動物用医薬品、医薬部外品、化粧品等であってよい。

　ラクトバチルス・プランタラムは、口腔内疾患の原因菌に対して抗菌活性を示すため、ラクトバチルス・プランタラムを用いて口腔内疾患を予防または治療することができる。口腔内疾患としては、歯肉炎、および歯周炎等の歯周病；う蝕；口腔カンジダ症；粘膜炎；舌炎；口唇炎；ならびに、口角炎等が挙げられる。歯周病の原因菌としては、ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ　ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ；以下、「Ｐ．ｇ．菌」ともいう。）、タンネレラ・フォーサイシア（Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ　ｆｏｒｓｙｔｈｉａ；以下、Ｔ．ｆ．菌」ともいう。）、トレポネーマ・デンティコーラ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ　ｄｅｎｔｉｃｏｌａ；以下、「Ｔ．ｄ．菌」ともいう。）、プレボテラ・インターメディア（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ　ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）、アクチノバチルス・アクチノミセテムコミタンス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）等が挙げられる。う蝕の原因菌としては、ストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｍｕｔａｎｓ）、ストレプトコッカス・ソブリナス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｏｂｒｉｎｕｓ）等が挙げられる。カンジダ菌としては、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・グラブラータ（Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ　ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）等が挙げられる。

　歯周病の原因菌のうち、Ｐ．ｇ．菌、Ｔ．ｆ．菌およびＴ．ｄ．菌は、歯周病を重症化させる菌として知られている。ラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物は、悪性度が高い上記３つの歯周病菌の全てに対して抗菌活性を有する。従って、ラクトバチルス・プランタラムの菌体調製物を含む組成物は、口腔内疾患の予防または治療に効果的である。ラクトバチルス・プランタラムの菌体調製物を含む組成物は、抗生物質（ミノサイクリン等）および化学殺菌剤（塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、イソプロピルメチルフェノール（ＩＰＭＰ）等）より口腔常在菌への影響が少ない。このため、ラクトバチルス・プランタラムの菌体調製物を含む組成物は、口腔微生物叢のバランスを崩しにくい。ラクトバチルス・プランタラムの菌体調製物は、歯垢形成を促進する細菌の増殖も抑制することができる。歯垢形成を促進する細菌としては、例えば、ストレプトコッカス・ゴルドニ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｇｏｒｄｏｎｉｉ；以下、「ゴルドニ菌」ともいう。）が挙げられる。

　予防または治療用組成物は、口腔内疾患の原因菌に対する他の抗菌薬および抗生物質を含んでもよく、含まなくてもよい。予防または治療用組成物の剤型および製造方法は、上記組成物の剤型および製造方法と同じであってよい。予防または治療用組成物におけるラクトバチルス・プランタラムの菌体調製物の含有量は、歯周病菌に対する抗菌活性を示す程度であれば特に限定されず、上記口腔用組成物における含有量と同じ範囲であってよい。

　本発明の一実施形態は、口腔内疾患の予防または治療用組成物の製造におけるラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物の使用である。

　［口腔内疾患の予防または治療方法］
　本発明の一実施形態に係る口腔内疾患の予防または治療方法は、ラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物を動物の口腔に適用することを含む。動物は、ヒトまたはヒト以外の動物であってよい。口腔内疾患としては、歯肉炎、および歯周炎等の歯周病；う蝕；口腔カンジダ症；粘膜炎；舌炎；口唇炎；ならびに、口角炎等が挙げられる。ラクトバチルス・プランタラムの菌体調製物は、経口摂取されてもよく、口腔内で使用後、口腔外に排出されてもよい。ラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物は、上記口腔内組成物として供給されてもよい。

　本発明の一実施形態は、口腔内疾患の予防または治療のためのラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物の使用である。

　［歯周病の原因菌に対する増殖抑制剤または殺菌剤、および歯周病の原因菌の増殖抑制方法または殺菌方法］
　本発明の一実施形態に係る歯周病の原因菌に対する増殖抑制剤または殺菌剤は、ラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物を含む。歯周病の原因菌は、例えばポルフィロモナス・ジンジバリス、タンネレラ・フォーサイシアおよびトレポネーマ・デンティコーラから選択される少なくとも１つを含む。ラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物は、歯周病の原因菌を増殖抑制または殺菌することができ、特に上記３つの原因菌の全てに対する抗菌活性を有する。増殖抑制剤または殺菌剤は、上記口腔用組成物と同じ形態であってよい。増殖抑制剤または殺菌剤は、口腔内疾患の原因菌に対する他の抗菌薬および抗生物質を含んでもよく、含まなくてもよい。

　増殖抑制剤または殺菌剤に含まれる上記乳酸菌の菌体調製物の含有量は特に限定されないが、例えば１×１０^３～１×１０^１２ｃｆｕ／ｍＬであってもよく、１×１０^５～１×１０^１２ｃｆｕ／ｍＬであってもよく、１×１０^７～１×１０^１２ｃｆｕ／ｍＬであってもよい。上記コロニー形成単位は、寒天平板培養法によって求めることができる。増殖抑制剤または殺菌剤に含まれる上記乳酸菌の菌体調製物の合計の濃度は、特に限定されず、０．１～１００，０００ｐｐｍであってもよく、１～１００，０００ｐｐｍであってもよく、１０～１００，０００ｐｐｍであってもよい。当該合計の濃度は、天秤等で秤量可能である。

　本発明の一実施形態に係る歯周病の原因菌の増殖抑制または殺菌方法は、ラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物を歯周病の原因菌に接触させることを含む。ラクトバチルス・プランタラムの菌体調製物と歯周病の原因菌とを接触させる方法は特に限定されず、例えば歯周病の原因菌が存在する環境にラクトバチルス・プランタラムの菌体調製物を添加してもよく、歯周病の原因菌が存在する物体をラクトバチルス・プランタラムの菌体調製物を含む液体に浸漬してもよく、歯周病の原因菌が感染した宿主にラクトバチルス・プランタラムの菌体調製物を含む組成物を経口投与してもよい。ラクトバチルス・プランタラムの菌体調製物は、歯周病の原因菌の増殖抑制剤または殺菌剤の形態で供給されてもよい。

　本発明の一実施形態は、歯周病の原因菌の増殖抑制剤または殺菌剤の製造におけるラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物の使用である。本発明の一実施形態は、歯周病の原因菌の増殖抑制または殺菌のためのラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物の使用である。

　以下、実施例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

　［実験１：ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９８の分離および同定］
　分離源（イカ塩辛）を滅菌水と共に摩砕した。摩砕液を適宜希釈して１／２ＭＲＳ液体培地に添加し、集積培養した。集積培養液を炭酸カルシウム含有のＭＲＳ寒天培地に塗抹し、ハローを形成した微生物を分離した。以下、この分離株を分離株Ａという。過酸化水素に分離株Ａの培養液を懸濁したところ、気泡が発生しなかった。分離株Ａは、カタラーゼ活性を有しないことから、乳酸菌であることが確認された。

　１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子解析、形態観察および生理・生化学的性状試験によって、分離株Ａを同定した。
　（１）１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子解析
　分離株ＡからゲノムＤＮＡを抽出し、得られたゲノムＤＮＡを鋳型として、クローニング用フォワードプライマー９Ｆおよびクローニング用リバースプライマー１５１０Ｒ（中川恭好他：遺伝子解析法　１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列決定法、日本放線菌学会編、放線菌の分類と同定、８８－１１７ｐｐ．日本学会事務センター、２００１）を用いて１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子のＰＣＲ増幅を行った。ＰＣＲ増幅はＴｋｓ　Ｇｆｌｅｘ　ＤＮＡ　ポリメラーゼ（タカラバイオ社製）を用いて行い、ＰＣＲ後の増幅産物を精製した。

　精製したＰＣＲ後の増幅産物を用いてサイクルシーケンス反応を行った。サイクルシーケンス反応は、ＢｉｇＤｙｅ　Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ　ｖ３．１　Ｃｙｃｌｅ　Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　Ｋｉｔを用いて行った。得られた反応液を精製し、精製液をＤＮＡシーケンス解析（３１３０ｘｌ　ＤＮＡ　Ａｎａｌｙｚｅｒ）に供して、分離株Ａから抽出した鋳型ＤＮＡの１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列を決定した。シークエンス解析用プライマーとしては、９Ｆ、５１５Ｆ、１０９９Ｆ、５３６Ｒ、９２６Ｒ、１５１０Ｒ（中川恭好他：遺伝子解析法　１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列決定法、日本放線菌学会編、放線菌の分類と同定、８８－１１７ｐｐ．日本学会事務センター、２００１）を用いた。

　分離株Ａの１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列を微生物同定システム「ＥＮＫＩ」（テクノスルガ・ラボ社製）を用いて、微生物同定データベースＤＢ－ＢＡ１５．０（テクノスルガ・ラボ社製）、国際塩基配列データベース（ＤＤＢＪ／ＥＮＡ（ＥＭＢＬ）／ＧｅｎＢａｎｋ）に対してＢＬＡＳＴ相同性検索を行った。分離株Ａの１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｅｎｔｏｓｕｓ（ＪＣＭ１５５８）の１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に対して同一性９９．８７％、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍ　ｓｕｂｓｐ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＪＣＭ１１４９）の１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に対して同一性９９．８７％、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐａｒａｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＤＳＭ１０６６７）の１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に対して同一性９９．７３％を示した。しかし、分離株Ａの１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列と完全に一致する１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子を持つ微生物は存在しなかった。

　（２）形態観察および生理・生化学的性状試験
　ＭＲＳ寒天培地に分離菌Ａを塗布し、温度３０℃で４８時間好気培養し、以下の方法で細胞形態、グラム染色性、運動性およびコロニー形態を観察した。細胞形態は、光学顕微鏡ＢＸ５０Ｆ４（オリンパス社製）によって観察した。グラム染色ではフェイバーＧ「ニッスイ」（日水製薬社製）を用いた。コロニー形態は、実体顕微鏡ＳＭＺ８００Ｎ（ニコン社製）によって観察した。Ｂａｒｒｏｗ＆Ｆｅｌｔｈａｍ（Ｃｏｗａｎ　ａｎｄ　Ｓｔｅｅｌ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｂａｃｔｅｒｉａ，３ｒｄ　ｅｄ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ：Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ；１９９３．）に記載の方法に基づき、カタラーゼ反応、オキシダーゼ反応、ブドウ糖からの酸／ガス産生およびブドウ糖の酸化／発酵（Ｏ／Ｆ）について試験を行った。ＡＰＩ５０ＣＨＢキット（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ社製、フランス）を用いて、細菌の生理・生化学的性状反応を調べた。

　図１の（Ａ）に示すように、分離株Ａは円形のコロニーを形成した。図１の（Ｂ）に示すように、分離株Ａはグラム染色性が陽性であった。分離株Ａの生理・生化学的性状試験および発酵性試験の結果を表１および表２に示す。分離株Ａは運動性を示さないグラム陽性の桿菌で、芽胞を形成せず、カタラーゼ反応およびオキシダーゼ反応は陰性を示し、グルコースを発酵した。これらの性状は、１６Ｓ　ｒＤＮＡ部分塩基配列解析の結果、帰属の可能性が示されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属の性状と一致した。ＡＰＩキットを用いて行った発酵性試験の結果、分離株Ａはガラクトース、フラクトースおよびメレチトース等を発酵し、グリセロール、Ｄ－キシロース等を発酵しなかった。分離株Ａは、アルギニンジヒドロラーゼ活性を示さず、１５℃で生育した。これらの性状は、１６Ｓ　ｒＤＮＡ部分塩基配列解析の結果、帰属が示唆されたＬ．ｐｅｎｔｏｓｕｓおよびＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍのうち、グリセロールおよびＤ－キシロースの発酵を示さない点がＬ．ｐｅｎｔｏｓｕｓと異なり、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍの性状と一致した。従って、分離株ＡはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍに属する新規分離株であることがわかった。分離株ＡをＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９８として国際寄託した。

　［実験２：ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９９の分離および同定］
　分離源として、レンブを用いた以外は、実験１と同じ方法により、分離株Ｂを分離した。分離株Ｂの同定を実験１と同じ方法によって行なった。

　分離株Ｂの１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｅｎｔｏｓｕｓ（ＪＣＭ１５５８）の１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に対して同一性１００．０％、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍ　ｓｕｂｓｐ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＪＣＭ１１４９）の１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に対して同一性１００．０％、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐａｒａｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＤＳＭ１０６６７）の１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に対して同一性９９．８０％を示した。

　図２の（Ａ）に示すように、分離株Ｂは円形のコロニーを形成した。図２の（Ｂ）に示すように、分離株Ｂはグラム染色性が陽性であった。分離株Ｂの生理・生化学的性状試験および発酵性試験の結果を表３および表４に示す。分離株Ｂは運動性を示さないグラム陽性の桿菌で、芽胞を形成せず、カタラーゼ反応およびオキシダーゼ反応は陰性を示し、グルコースを発酵した。これらの性状は、１６Ｓ　ｒＤＮＡ部分塩基配列解析の結果、帰属の可能性が示されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属の性状と一致した。ＡＰＩキットを用いて行った発酵性試験の結果、分離株Ｂはガラクトース、フラクトース、α－メチル－Ｄ－マンノシドおよびメレチトース等を発酵し、グリセロール、Ｄ－キシロース等を発酵しなかった。分離株Ｂは、アルギニンジヒドロラーゼ活性を示さず、１５℃で生育した。これらの性状は、１６Ｓ　ｒＤＮＡ部分塩基配列解析の結果、帰属が示唆されたＬ．ｐｅｎｔｏｓｕｓおよびＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍのうち、グリセロールおよびＤ－キシロースの発酵を示さない点がＬ．ｐｅｎｔｏｓｕｓと異なり、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍの性状と一致した。従って、分離株ＢはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍに属する新規分離株であることがわかった。分離株ＢをＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９９として国際寄託した。

　［実験３：ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２００の分離および同定］
　分離源として、アダンを用いた以外は、実験１と同じ方法により、分離株Ｃを分離した。分離株Ｃの同定を実験１と同じ方法によって行なった。

　分離株Ｃの１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｅｎｔｏｓｕｓ（ＪＣＭ１５５８）の１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に対して同一性９９．８７％、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍ　ｓｕｂｓｐ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＪＣＭ１１４９）の１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に対して同一性９９．８７％、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐａｒａｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＤＳＭ１０６６７）の１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に対して同一性９９．６６％を示した。しかし、分離株Ｃの１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列と完全に一致する１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子を持つ微生物は存在しなかった。

　図３の（Ａ）に示すように、分離株Ｃは円形のコロニーを形成した。図３の（Ｂ）に示すように、分離株Ｃはグラム染色性が陽性であった。分離株Ｃの生理・生化学的性状試験および発酵性試験の結果を表５および表６に示す。分離株Ｃは運動性を示さないグラム陽性の桿菌で、芽胞を形成せず、カタラーゼ反応およびオキシダーゼ反応は陰性を示し、グルコースを発酵した。これらの性状は、１６Ｓ　ｒＤＮＡ部分塩基配列解析の結果、帰属の可能性が示されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属の性状と一致した。ＡＰＩキットを用いて行った発酵性試験の結果、分離株Ｃはガラクトース、フラクトース、α－メチル－Ｄ－マンノシドおよびメレチトース等を発酵し、グリセロール、Ｄ－キシロース等を発酵しなかった。分離株Ｃは、アルギニンジヒドロラーゼ活性を示さず、１５℃で生育した。これらの性状は、１６Ｓ　ｒＤＮＡ部分塩基配列解析の結果、近縁と示されたＬ．ｐｅｎｔｏｓｕｓおよびＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍのうち、グリセロールおよびＤ－キシロースの発酵を示さない点がＬ．ｐｅｎｔｏｓｕｓと異なり、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍの性状と一致した。従って、分離株ＣはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍに属する新規分離株であることがわかった。分離株ＣをＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２００として国際寄託した。

　［実験４：ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０１の分離および同定］
　分離源として、ギランイヌビワを用いた以外は、実験１と同じ方法により分離株Ｄを分離した。分離株Ｄの同定を実験１と同じ方法によって行なった。

　分離株Ｄの１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｅｎｔｏｓｕｓ（ＪＣＭ１５５８）の１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に対して同一性９９．９３％、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍ　ｓｕｂｓｐ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＪＣＭ１１４９）の１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に対して同一性９９．９３％、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐａｒａｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＤＳＭ１０６６７）の１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に対して同一性９９．７３％を示した。しかし、分離株Ｄの１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列と完全に一致する１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子を持つ微生物は存在しなかった。

　図４の（Ａ）に示すように、分離株Ｄは円形のコロニーを形成した。図４の（Ｂ）に示すように、分離株Ｄはグラム染色性が陽性であった。分離株Ｄの生理・生化学的性状試験および発酵性試験の結果を表５および表６に示す。分離株Ｄは運動性を示さないグラム陽性の桿菌で、芽胞を形成せず、カタラーゼ反応およびオキシダーゼ反応は陰性を示し、グルコースを発酵した。これらの性状は、１６Ｓ　ｒＤＮＡ部分塩基配列解析の結果、帰属の可能性が示されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属の性状と一致した。ＡＰＩキットを用いて行った発酵性試験の結果、分離株Ｄはガラクトース、フラクトースおよびメレチトース等を発酵し、グリセロール、Ｄ－キシロース等を発酵しなかった。分離株Ｄは、アルギニンジヒドロラーゼ活性を示さず、１５℃で生育した。これらの性状は、１６Ｓ　ｒＤＮＡ部分塩基配列解析の結果、帰属が示唆されたＬ．ｐｅｎｔｏｓｕｓおよびＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍのうち、グリセロールおよびＤ－キシロースの発酵を示さない点がＬ．ｐｅｎｔｏｓｕｓと異なり、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍの性状と一致した。従って、分離株ＤはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍに属する新規分離株であることがわかった。分離株ＤをＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０１として国際寄託した。

　［実験５：ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０２の分離および同定］
　分離源として、マツボックリを用いた以外は、実験１と同じ方法により分離株Ｅを分離した。分離株Ｅの同定を実験１と同じ方法によって行なった。

　分離株Ｅの１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｅｎｔｏｓｕｓ（ＪＣＭ１５５８）の１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に対して同一性９９．９３％、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍ　ｓｕｂｓｐ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＪＣＭ１１４９）の１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に対して同一性９９．９３％、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐａｒａｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＤＳＭ１０６６７）の１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に対して同一性９９．７３％を示した。しかし、分離株Ｅの１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列と完全に一致する１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子を持つ微生物は存在しなかった。

　図５の（Ａ）に示すように、分離株Ｅは円形のコロニーを形成した。図５の（Ｂ）に示すように、分離株Ｅはグラム染色性が陽性であった。分離株Ｅの生理・生化学的性状試験および発酵性試験の結果を表９および表１０に示す。分離株Ｅは運動性を示さないグラム陽性の桿菌で、芽胞を形成せず、カタラーゼ反応およびオキシダーゼ反応は陰性を示し、グルコースを発酵した。これらの性状は、１６Ｓ　ｒＤＮＡ部分塩基配列解析の結果、帰属の可能性が示されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属の性状と一致した。ＡＰＩキットを用いて行った発酵性試験の結果、分離株Ｅはガラクトース、フラクトース、α－メチル－Ｄ－マンノシドおよびメレチトース等を発酵し、グリセロール、Ｄ－キシロース等を発酵しなかった。分離株Ｅは、アルギニンジヒドロラーゼ活性を示さず、１５℃で生育した。これらの性状は、１６Ｓ　ｒＤＮＡ部分塩基配列解析の結果、帰属が示唆されたＬ．ｐｅｎｔｏｓｕｓおよびＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍのうち、グリセロールおよびＤ－キシロースの発酵を示さない点がＬ．ｐｅｎｔｏｓｕｓと異なり、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍの性状と一致した。従って、分離株ＥはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍに属する新規分離株であることがわかった。分離株ＥをＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０２として国際寄託した。

　［実験６：歯周病の原因菌に対するラクトバチルス・プランタラムの抗菌活性評価試験］
　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９８、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９９、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２００、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０１およびＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０２の菌体調製物が、歯周病の原因菌の増殖を抑制するかを検証した。

　図６を参照して実験方法を説明する。表１１に記載の培地および培養条件に従って、歯周病の原因菌（Ｐ．ｇ．菌、Ｔ．ｆ．菌およびＴ．ｄ．菌）を前培養した。歯周病の原因菌をＧＡＭ　ｂｒｏｔｈに懸濁し、ＭｃＦａｒｌａｎｄ　Ｎｏ．０．５（約１×１０^８～２×１０^８ｃｆｕ／ｍＬ）となるように調整した。これをさらに１０倍希釈して歯周病の原因菌の菌液１１（約１×１０^７～２×１０^７ｃｆｕ／ｍＬ）とした。１００μＬの歯周病菌の菌液１１を測定用寒天培地１２に滴下し、コンラージ棒で均一に塗布した。寒天培地の表面が乾いたら、１０μＬのラクトバチルス・プランタラムの菌体調製物１３を滴下し、３５℃で嫌気性環境下で培養した。Ｐ．ｇ．菌は５日間、Ｔ．ｆ．菌は７日間、Ｔ．ｄ．菌は４日間培養した。ラクトバチルス・プランタラムの菌体調製物が歯周病の原因菌に対する抗菌活性を有するとき、生育阻止円１４が形成される。ラクトバチルス・プランタラムの菌体調製物は、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９８、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９９、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２００、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０１およびＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０２のいずれかの乳酸菌をＭＲＳ　Ｂｒｏｔｈで温度３０℃で培養し、遠心分離によって菌体を沈殿させた培養上清（菌体培養物）を用いた。Ｐ．ｇ．菌、Ｔ．ｆ．菌およびＴ．ｄ．菌に対する抗菌活性の結果を表１２、１３および１４にそれぞれ示す。ネガティブコントロールとして乳酸菌用培地（ＭＲＳ　Ｂｒｏｔｈ）を用いた。ポジティブコントロールとして、メロペネム１０μｇ／６ｍｍφを含むセンシ・ディスク「ＭＥＰＭ」（日本ベクトン・ディッキンソン社製）またはキノロン系抗菌剤レボフロキサシン１０μｇ／６ｍｍφを含むセンシディスク「ＬＶＦＸ」（日本ベクトン・ディッキンソン社製）を用いた。ＡＴＣＣ－１１４５４は、ナイシンＡを産生する乳酸菌（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓ）である。ナイシンＡ産生株は、ラクトバチルス・プランタラムと同じ方法で培養し、培養上清を調整した。

　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９８、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９９、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２００、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０１およびＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０２の菌体培養物はいずれも、Ｐ．ｇ．菌、Ｔ．ｆ．菌およびＴ．ｄ．菌の生育培地の全てに生育阻止円を形成させた。ラクトバチルス・プランタラムの菌体培養物はいずれも、Ｐ．ｇ．菌、Ｔ．ｆ．菌およびＴ．ｄ．菌の増殖を抑制できることが示された。一方、ナイシンＡ産生株の培養上清は、Ｔ．ｄ．菌の増殖を抑制したが、Ｐ．ｇ．菌およびＴ．ｆ．菌の増殖を抑制することができなかった。

　［実験７：歯垢形成を促進する菌に対するラクトバチルス・プランタラムの抗菌活性評価試験］
　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９８、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９９、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２００、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０１およびＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０２の菌体調製物が、歯垢形成を促進する菌の増殖を抑制するかを検証した。

　実験７は、抗菌活性を検証する細菌として、ゴルドニ菌を用いたこと以外は、実験６と同様の方法で行った。表１５に記載の培地および培養条件に従って、ゴルドニ菌を前培養した。ゴルドニ菌をＧＡＭ　ｂｒｏｔｈに懸濁し、ＭｃＦａｒｌａｎｄ　Ｎｏ．０．５（約１×１０^８～２×１０^８ｃｆｕ／ｍＬ）となるように調整した。これをさらに１０倍希釈してゴルドニ菌の菌液１１（約１×１０^７～２×１０^７ｃｆｕ／ｍＬ）とした。１００μＬのゴルドニ菌の菌液１１を測定用寒天培地１２に滴下し、コンラージ棒で均一に塗布した。寒天培地の表面が乾いたら、１０μＬのラクトバチルス・プランタラムの菌体調製物１３を滴下し、３５℃で２４時間培養した。ゴルドニ菌に対する抗菌活性の結果を表１６に示す。ネガティブコントロールとして乳酸菌用培地（ＭＲＳ　Ｂｒｏｔｈ）を用いた。ポジティブコントロールとして、テトラサイクリン３０μｇ／６ｍｍφを含むセンシ・ディスク「ＴＣ」（日本ベクトン・ディッキンソン社製）を用いた。ＡＴＣＣ－１１４５４は、ナイシンＡを産生する乳酸菌（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓ）である。

　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９８、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９９、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２００、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０１およびＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０２の菌体培養物はいずれも、ゴルドニ菌の生育培地に生育阻止円を形成させた。ラクトバチルス・プランタラムの菌体培養物は、ラクトバチルス・プランタラムの増殖を抑制できることが示された。

　［実験８：口腔常在菌に対するラクトバチルス・プランタラムの抗菌活性評価試験］
　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９８、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９９、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２００、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０１およびＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０２の菌体調製物が、口腔常在菌の増殖を抑制するかを検証した。

　実験８は、抗菌活性を検証する細菌として、サリバリウス菌を用いたこと以外は、実験６と同様の方法で行った。表１７に記載の培地および培養条件に従って、サリバリウス菌を前培養した。サリバリウス菌をＧＡＭ　ｂｒｏｔｈに懸濁し、ＭｃＦａｒｌａｎｄ　Ｎｏ．０．５（約１×１０^８～２×１０^８ｃｆｕ／ｍＬ）となるように調整した。これをさらに１０倍希釈してサリバリウス菌の菌液１１（約１×１０^７～２×１０^７ｃｆｕ／ｍＬ）とした。１００μＬのサリバリウス菌の菌液１１を測定用寒天培地１２に滴下し、コンラージ棒で均一に塗布した。寒天培地の表面が乾いたら、１０μＬのラクトバチルス・プランタラムの菌体調製物１３を滴下し、３５℃で２４時間培養した。サリバリウス菌に対する抗菌活性の結果を表１８に示す。ネガティブコントロールとして乳酸菌用培地（ＭＲＳ　Ｂｒｏｔｈ）を用いた。ポジティブコントロールとして、テトラサイクリン３０μｇ／６ｍｍφを含むセンシ・ディスク「ＴＣ」（日本ベクトン・ディッキンソン社製）を用いた。ＡＴＣＣ－１１４５４は、ナイシンＡを産生する乳酸菌（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓ）である。

　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９８、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３１９９、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２００、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０１およびＮＩＴＥ　ＢＰ－０３２０２の菌体培養物はいずれも、サリバリウス菌の生育培地に生育阻止円を形成させなかった。ラクトバチルス・プランタラムの菌体培養物は、口腔常在菌への影響が少ないことが示された。一方、テトラサイクリンは、口腔常在菌の増殖も抑制した。

　１１　歯周病の原因菌、歯垢形成を促進する菌又は口腔常在菌の菌液、１２　測定用寒天培地、１３　ラクトバチルス・プランタラムの菌体調製物、１４　生育阻止円。

Claims (13)

1. 　ラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物を含む口腔用組成物。
2. 　食品である、請求項１に記載の組成物。
3. 　前記食品は発酵食品である、請求項２に記載の組成物。
4. 　洗口剤または歯磨剤である、請求項１に記載の組成物。
5. 　フッ素化合物をさらに含む、請求項１または４に記載の組成物。
6. 　前記ラクトバチルス・プランタラムは、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３１９８、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３１９９、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２００、ＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２０１およびＮＩＴＥ－ＢＰ－０３２０２から選択される少なくとも１つである、請求項１または２に記載の組成物。
7. 　口腔内疾患の予防または治療用組成物である、請求項１～４のいずれか１項に記載の組成物。
8. 　前記口腔内疾患は歯周病である、請求項７に記載の組成物。
9. 　ラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物を動物の口腔に適用することを含む、口腔内疾患の予防または治療方法。
10. 　前記口腔内疾患は歯周病である、請求項９に記載の方法。
11. 　ラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物を含む、歯周病の原因菌に対する増殖抑制剤または殺菌剤。
12. 　前記歯周病の原因菌は、ポルフィロモナス・ジンジバリス、タンネレラ・フォーサイシアおよびトレポネーマ・デンティコーラから選択される少なくとも１つを含む、請求項１１に記載の増殖抑制剤または殺菌剤。
13. 　ラクトバチルス・プランタラムの菌体もしくは菌体培養物またはこれらの抽出物を歯周病の原因菌に接触させることを含む、歯周病菌の増殖抑制または殺菌方法。

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