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WO2020203880A1 - Ｄｕｘ４の発現を調節するための化合物、方法及び医薬組成物 - Google Patents

Ｄｕｘ４の発現を調節するための化合物、方法及び医薬組成物 Download PDF

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WO2020203880A1
WO2020203880A1 PCT/JP2020/014307 JP2020014307W WO2020203880A1 WO 2020203880 A1 WO2020203880 A1 WO 2020203880A1 JP 2020014307 W JP2020014307 W JP 2020014307W WO 2020203880 A1 WO2020203880 A1 WO 2020203880A1
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WO
WIPO (PCT)
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residues
modified
certain embodiments
modified oligonucleotide
dux4
Prior art date
Application number
PCT/JP2020/014307
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English (en)
French (fr)
Inventor
新司 熊谷
貴志 屋代
荒木　友
峻幸 金川
智恵子 岡垣
古川　博之
Original Assignee
田辺三菱製薬株式会社
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Priority to SG11202110674XA priority patent/SG11202110674XA/en
Priority to US17/442,798 priority patent/US20220228140A1/en
Priority to BR112021018793A priority patent/BR112021018793A2/pt
Priority to CN202080025889.2A priority patent/CN113710283B/zh
Priority to EP20781989.7A priority patent/EP3950006A4/en
Priority to CA3135579A priority patent/CA3135579A1/en
Priority to MX2021011921A priority patent/MX2021011921A/es
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Priority to PH1/2021/552257A priority patent/PH12021552257A1/en
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    • C12N2750/14011—Parvoviridae
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    • C12N2750/14341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector

Definitions

  • the present invention relates to a compound for reducing the expression of DUX4 mRNA and protein in animals, a method using the compound, and a pharmaceutical composition containing the compound.
  • the method of the present invention is useful for treating, preventing, or alleviating DUX4-related diseases, such as facioscapulohumeral muscular dystrophy (FSHD).
  • FSHD facioscapulohumeral muscular dystrophy
  • Facioscapulohumeral muscular dystrophy is a muscular dystrophy that occurs at an estimated frequency of 1 / 20,000 worldwide and 1 / 7,500 in Europe.
  • Duchenne muscular dystrophy and muscle tonicity It is the third most common disease after sex dystrophy.
  • the first symptom is weakness of the face, upper limbs, shoulders, and upper limbs, and as it progresses, the lower limbs and lower limbs also become impaired, and in about 20% of cases, wheelchair life is reached by the age of 40. However, it may be only mild facial muscle disease).
  • There are also many complications of pain, neurological hearing loss and retinopathy About 90% of patients develop the disease by the age of 20. Severely ill patients (about 4%) show muscle weakness from infancy.
  • FSHD is classified into two types, FSHD1 and FSHD2, depending on the causative gene.
  • FSHD1 type accounts for about 95% of all FSHD patients.
  • the D4Z4 repeat region of 4q35 is genetically shortened (1 to 10 D4Z4 repeats), which causes abnormal expression of DUX4 encoded in the D4Z4 repeat region (in healthy subjects, DUX4 is Not expressed).
  • FSHD2 type causes abnormal expression of DUX4 due to SMCHD1 (DNA methylase) mutation in about 5% of all FSHD patients.
  • DUX4 has a transcription factor-like function and expresses a group of genes that cause apoptosis and muscular atrophy of muscle cells encoded downstream.
  • Non-Patent Document 1 Abnormal expression of DUX4 is due to possession of an allele called 4qA among the two alleles of 4qA and 4qB.
  • the polyadenylation site present at 4qA is required for stabilization of DUX4 mRNA (Non-Patent Document 1, Non-Patent Document 2, Non-Patent Document 3).
  • Antisense techniques are emerging as an effective means for regulating the expression of certain gene products, and therefore for some therapeutic, diagnostic, and research applications for regulating DUX4. It may prove to be incomparably useful.
  • Patent Document 1 A method of suppressing the expression of the DUX4 gene using an adeno-associated virus encoding DUX4 miRNA has been reported (Patent Document 1), but preparing the adeno-associated virus is complicated and required. It is difficult to deliver to the muscles of the whole body.
  • Non-Patent Document 2 A method of suppressing the expression of the DUX4 gene using a lentivirus encoding DUX4 shRNA has been reported (Non-Patent Document 2), but the preparation of the lentivirus is complicated and required for the whole body. It is difficult to deliver to the muscles of the virus. Furthermore, the in vitro gene-suppressing action on quadriceps and trapezius myocytes has 21% and 44% residual activity, which is not a sufficient effect.
  • Patent Document 2 A compound in which antisense oligonucleotides to a plurality of DUX4s are linked has been reported (Patent Document 2), but it is not a modified oligonucleotide and its inhibitory effect is not sufficient.
  • Antisense oligonucleotide compounds that bind to the splicing site of DUX4 mRNA have been reported (Patent Document 3), but since these compounds are pre-mRNA-selective containing introns, their inhibitory effect on mature mRNA is weak. In addition, it is difficult to administer to a living body because of knockdown by the Lipofection method.
  • FSHD treatment methods include rehabilitation (stretching and exercise) as symptomatic treatment, administration of NSAIDs, respiratory care, etc., but the effects are insufficient and the burden on patients is heavy. Therefore, it is an object herein to provide compounds, compositions and methods for treating FSHD.
  • the challenges of the present invention are compounds, methods, and methods for inhibiting the expression of DUX4 and for treating, ie, treating, preventing, delaying, or ameliorating DUX4-related diseases and / or their symptoms.
  • the purpose is to provide a pharmaceutical composition.
  • the compounds and pharmaceutical compositions disclosed herein also inhibit mutant DUX4s such as SNPs and splicing variants of DUX4.
  • Certain embodiments are methods of reducing the expression of DUX4 in animals (including humans), wherein the compounds containing modified oligonucleotides targeting DUX4, or compounds thereof, described herein.
  • Certain embodiments provide a method of administering to an animal a compound or pharmaceutical composition containing a modified oligonucleotide that targets DUX4 and knocking it down via a nuclear ribonuclease (such as RNase H). Further, the present invention provides a method for inhibiting transcription of DUX4 mRNA and translation of DUX4 protein by administering a compound containing the modified oligonucleotide.
  • the modified oligonucleotide is preferably distributed in muscle, and particularly preferably in skeletal muscle.
  • Certain embodiments provide a method of treating an animal with FSHD.
  • the methods of the invention further comprise administering to the animal a therapeutically effective amount of a compound or pharmaceutical composition comprising a modified oligonucleotide targeting DUX4, as described herein. ..
  • the methods of the invention include identifying animals with FSHD1 and / or FSHD2.
  • Certain embodiments provide a method of treating, i.e., treating, preventing, delaying, or ameliorating muscular atrophy / weakness. Facial expression is poor due to weakness in the cheeks, shoulders, and upper arms / Sleeping with eyes open / Difficulty in raising upper limbs / Relieving or delaying deterioration of the winged scapula. In addition, it is preferable to prevent muscle weakness in the pelvic girdle and lower limbs, and further prevent complications of neurological hearing loss and retinopathy.
  • the DUX4 mRNA has the sequence set forth in GenBank Accession No. NM_001293798.2 (incorporated herein as SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing).
  • the splicing variant of DUX4 mRNA of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing is also referred to as DUX4-FL1 or DUX4 mature mRNA.
  • the DUX4 mRNA has the sequence set forth in GenBank Accession No. NM_0013060682 (incorporated herein as SEQ ID NO: 5 in the Sequence Listing).
  • the splicing variant of DUX4 mRNA of SEQ ID NO: 5 in the Sequence Listing is also referred to as DUX4-FL2.
  • the DUX4 has the sequence set forth in GenBank Accession No. NM_0013638200.1 (incorporated herein as SEQ ID NO: 6 in the Sequence Listing).
  • the splicing variant of DUX4 mRNA of SEQ ID NO: 6 in the Sequence Listing is also referred to as DUX4-s.
  • DUX4 refers to the SNP of the splicing variant.
  • the present disclosure relates to, but is not limited to, the non-limiting numbered embodiments described in the following sections [1]-[27].
  • a modified oligonucleotide consisting of 12 to 30 residues. At least 8 consecutive nucleobase sequences, at positions 126-147, 232-248, 1306-1325 or 1480-1495 from the 5'end of the nucleobase sequence of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1. It contains a nucleobase sequence that is complementary to its equal length portion and contains The nucleobase sequence of the modified oligonucleotide has at least 90% complementarity to its equal length portion of the nucleobase sequence of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1.
  • the modified oligonucleotide is used. It consists of a nucleobase sequence having a complementary base of the base at the 5'end to 1480 position at the 3'end of the nucleobase of SEQ ID NO: 1. Modified oligonucleotide.
  • Item [2] The modified oligonucleotide according to Item [1], wherein one or more of the modified oligonucleotides contains a modified sugar.
  • the modified sugar is selected from the group consisting of bicyclic sugars, sugars modified with 2'-O-methoxyethyl, and sugars modified with 2'-O-methyl.
  • Item [4] Item [4]
  • the bicyclic sugar is selected from the group consisting of LNA, GuNA, ALNA [Ms], ALNA [mU], ALNA [ipU], ALNA [Oxz], and ALNA [Trz]. 3] The modified oligonucleotide according to.
  • a modified oligonucleotide consisting of 12 to 30 residues. It contains at least eight contiguous nucleobase sequences, which are complementary to their equal length portion at positions 1472 to 1495 from the 5'end of the nucleobase sequence of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1.
  • the nucleobase sequence of the modified oligonucleotide has at least 90% complementarity to its equal length portion of the nucleobase sequence of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1.
  • the modified oligonucleotide comprises at least one nucleoside containing a modified sugar selected from GuNA, ALNA [Ms], ALNA [mU], ALNA [ipU], ALNA [Oxz], and ALNA [Trz]. Modified oligonucleotide.
  • modified oligonucleotide according to item [5], wherein the modified oligonucleotide further comprises a sugar modified with 2'-O-methoxyethyl and / or a sugar modified with 2'-O-methyl. nucleotide.
  • Item [7] The modified oligonucleotide according to any one of claims 1 to 6, wherein at least one of the modified oligonucleotides contains a modified nucleobase.
  • Item [8] The modified oligonucleotide according to Item [7], wherein the modified nucleobase is 5-methylcytosine.
  • Item [9] The modified oligonucleotide according to any one of Items [1] to [8], wherein at least one nucleoside-linked bond is a modified nucleoside-linked bond.
  • Item [10] The modified oligonucleotide according to Item [9], wherein the modified nucleoside bond is a phosphorothioate nucleoside bond.
  • the modified oligonucleotide is 1) Gap segment and 2) 5'wing segment and 3) Including 3'wing segment,
  • the gap segment is positioned between the 5'wing segment and the 3'wing segment.
  • Both the 5'wing segment and the 3'wing segment nucleosides contain at least one modified sugar.
  • the nucleoside of the gap segment is only a nucleoside containing no modified sugar, or is a nucleoside containing one or two nucleosides containing a modified sugar and otherwise containing no modified sugar, item [1] to The modified oligonucleotide according to any one of [10].
  • the modified oligonucleotide is The nucleic acid base sequence at positions 128 to 143 from the 5'end of the nucleic acid base sequence of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1, Nucleic acid base sequence at positions 232 to 247 from the 5'end, Nucleic acid base sequence at positions 233 to 248 from the 5'end, Nucleobase sequence from 1309 to 1323 from the 5'end, or 1480 to 1495 from the 5'end, Item 2.
  • the modified oligonucleotide according to any one of Items [1] to [11], which comprises a nucleobase sequence complementary to the above.
  • the modified oligonucleotide is gtggcgatgc ccgggt (SEQ ID NO: 75), gagattcccg cnggtg (SEQ ID NO: 78: n indicates 5-methylcytosine), ngagattcccgccggt (SEQ ID NO: 2: n indicates 5-methylcytosine), gnagttctccgcggt (SEQ ID NO: 3: n indicates 5-methylcytosine), or gnntagacagcgtngg (SEQ ID NO: 4: n indicates 5-methylcytosine) Item 4.
  • the modified oligonucleotide according to any one of Items [1] to [12], which comprises the base sequence of.
  • Item [15] The following formula: GmsMmsMmsTdsAdsGdsAdsCdsAdsGdsCdsGdsTdsMmsGmsGm; Item 6. The modified oligonucleotide according to Item [13].
  • Item [18] The following formula: Item 6. The modified oligonucleotide or salt thereof according to Item [14].
  • Item [20] The following formula: Item 6. The modified oligonucleotide or salt thereof according to Item [16].
  • Item [21] The following formula: Item 6. The modified oligonucleotide or salt thereof according to Item [17].
  • Item [22] A pharmaceutical composition comprising the modified oligonucleotide according to any one of Items [1] to [21] or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • Item [23] The pharmaceutical composition according to item [22] for treating, preventing, or delaying the progression of a DUX4-related disease.
  • Item [24] The pharmaceutical composition according to item [23], wherein the DUX4-related disease is facial scapulohumeral muscular dystrophy.
  • Item [25] A DUX4-related disease in a subject, which comprises administering an effective amount of the modified oligonucleotide according to any one of items [1] to [21] to a subject in need thereof.
  • Item [26] Use of the modified oligonucleotide according to any one of Items [1] to [21] in the manufacture of a drug for treating, preventing or delaying the progression of DUX4-related diseases.
  • Item [27] Use of the modified oligonucleotide according to any one of Items [1] to [21] for the treatment, prevention or delay of the progression of DUX4-related diseases.
  • Nucleic acid refers to a molecule consisting of monomeric nucleotides.
  • nucleic acids include, but are limited to, ribonucleic acid (RNA), deoxyribonucleic acid (DNA), single-stranded nucleic acid, double-stranded nucleic acid, small interfering ribonucleic acid (siRNA) and microRNA (miRNA). Not done. Nucleic acids can also contain a combination of these elements in a single molecule.
  • Nucleobase means a heterocyclic moiety that can be paired with the base of another nucleic acid. Nucleobases include “modified nucleobases” and “unmodified nucleobases”.
  • Nucleobase sequence means a continuous sequence of nucleobases that is independent of any sugar binding or nucleobase modification.
  • Nucleoside means a nucleobase linked to a sugar. In certain embodiments, the nucleoside is linked to a phosphate group.
  • Nucleotide means a nucleoside having a phosphate group covalently bonded to the sugar portion of the nucleoside.
  • Naturally occurring nucleotides have ribose or deoxyribose sugar moieties and are covalently bonded by phosphodiester bonds via phosphate groups.
  • Oligomer compound or "oligomer” means a polymer of linked monomer subunits that can hybridize to at least one region of a nucleic acid molecule.
  • Oligonucleotide means a linked nucleoside polymer in which each nucleoside and each nucleoside bond may or may not be modified independently of each other.
  • Unmodified nucleotide means a nucleotide consisting of a naturally occurring nucleobase, a sugar moiety and an internucleoside bond.
  • the unmodified nucleotide is an RNA nucleotide (ie, ⁇ -D-ribonucleoside) or a DNA nucleotide (ie, ⁇ -D-deoxyribonucleoside), but is not limited thereto.
  • Modified nucleotide means a nucleotide having a modified sugar moiety, a modified nucleoside bond, or a modified nucleobase independently.
  • Modified nucleoside means a nucleoside independently having a modified sugar moiety or a modified nucleobase.
  • Nucleoside bond refers to a chemical bond between nucleosides.
  • Linked nucleosides means adjacent nucleosides that are bound or linked by inter-nucleoside bonds.
  • Naturally occurring nucleoside bond means a 3'-5'phosphodiester bond.
  • Modified nucleoside bond refers to a substitution or arbitrary change from a naturally occurring nucleoside bond (ie, a phosphodiester nucleoside bond). For example, there are, but are not limited to, phosphorothioate nucleoside linkages.
  • Phosphodiester bond between nucleosides means a bond between nucleosides in which the phosphodiester bond is modified by replacing one of the non-crosslinked oxygen atoms with a sulfur atom.
  • the phosphorothioate bond is an example of the modified nucleoside bond.
  • Modified nucleobase refers to any nucleobase other than adenine, cytosine, guanine, thymidine or uracil. For example, there is, but is not limited to, 5-methylcytosine.
  • Unmodified nucleobase means the purine bases adenine (A) and guanine (G), and the pyrimidine bases thymine (T), cytosine (C) and uracil (U).
  • Modified oligonucleotide means an oligonucleotide containing at least one of the modified nucleosides and / or the linkage between the modified nucleosides.
  • Salt is a general term for compounds in which one or more dissociable hydrogen ions contained in an acid are replaced with cations such as metal ions and ammonium ions.
  • a salt of a modified oligonucleotide a phosphorothioate bond is used as a salt of a modified oligonucleotide.
  • salts eg, sodium salts, magnesium salts
  • inorganic ions eg, sodium ions, magnesium ions
  • functional groups eg, amino groups
  • “Sugar” or “sugar moiety” means a natural sugar moiety or a modified sugar moiety.
  • Natural sugar moiety means sugar found in DNA (2'-H) or RNA (2'-OH).
  • Modified sugar refers to a substitution or change from the natural sugar moiety.
  • Examples of the modified sugar include a substituted sugar moiety and a substitute sugar moiety.
  • Substituted sugar moiety means a furanosyl other than the natural sugar of RNA or DNA.
  • 2'-O-methoxyethyl (as well as 2'-MOE and 2'-O (CH 2 ) 2- OCH 3 ) refers to the O-methoxy-ethyl modification at the 2'position of the furanosyl ring.
  • the sugar modified with 2'-O-methoxyethyl is a modified sugar.
  • 2'-O-methoxyethyl nucleotide means a nucleotide containing a sugar moiety modified with 2'-O-methoxyethyl.
  • 2'-O-methyl refers to the O-methyl modification at the 2'position of the furanosyl ring.
  • the 2'-O-methyl modified sugar is a modified sugar.
  • 2'-O-methyl nucleotide means a nucleotide containing a sugar moiety modified with 2'-O-methyl.
  • the "sugar substitute" for the "substitute sugar portion” is intended to indicate the replacement of only the sugar unit (furanose ring).
  • the sugar substitute can replace the naturally occurring sugar moiety of the nucleoside, so that the resulting nucleoside subunits are linked to each other and / or to other nucleosides to form a complementary oligomeric compound. It is possible to form an oligomer compound that can hybridize with.
  • Such structures are rings containing different numbers of atoms than furanosyl (eg, 4, 6 or 7-membered rings); oxygen replacement of furanosyl with non-oxygen atoms (eg, carbon, sulfur or nitrogen); or of atomic number. Includes both change and oxygen replacement.
  • Such structures can also include substitutions corresponding to those described for the substituted sugar moiety (eg, a 6-membered carbocyclic bicyclic sugar substitute optionally containing additional substituents).
  • Sugar substitutes also include more complex sugar replacements (eg, acyclic peptide nucleic acids).
  • Sugar substitutes include, but are not limited to, morpholino, cyclohexenyl and cyclohexitol.
  • Bicyclic sugar means a furanosyl ring modified by cross-linking two different carbon atoms existing on the same ring.
  • bicyclic sugar means a modified sugar in which the 2'and 4'positions of the furanosyl ring are modified by cross-linking.
  • Bicyclic nucleic acid refers to a nucleoside or nucleotide in which the furanose portion of the nucleoside or nucleotide comprises a "bicyclic sugar".
  • LNA means a nucleoside or nucleotide commonly referred to as a 2', 4'-locked nucleic acid, eg, the general formula: [During the ceremony, B is a nucleobase; X and Y are independently hydrogen atoms, hydroxyl-protecting groups, optionally substituted phosphate groups, covalent bonds to phosphorus moieties or supports, etc.] Examples include nucleosides or nucleotides represented by (see WO 98/39352). A typical specific example is the following formula: Nucleotides or nucleotides indicated by.
  • “GuNA” is the following formula: [In the formula, B is a nucleic acid base, and R 3 , R 4 , R 5 and R 6 are each independently a hydrogen atom or a C 1-6 alkyl group which may be substituted with one or more substituents. Yes, R 7 and R 8 are independently hydrogen atoms, hydroxyl protecting groups, optionally substituted phosphate groups, covalent bonds to phosphorus moieties or supports, etc., and R 9 , R 10 , R Each of 11 is a C 1-6 alkyl group or an amino protecting group which may be independently substituted with a hydrogen atom or one or more substituents. ] A nucleoside or nucleotide represented by. (See, for example, International Publication No. 2014/046212, International Publication No. 2017/047816).
  • ANA [mU] is the following general formula (I): [During the ceremony, B is a nucleobase; R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are C 1-6 alkyl groups, each independently substituted with a hydrogen atom or one or more substituents; R 5 and R 6 are independent hydrogen atoms, hydroxyl-protecting groups, or optionally substituted phosphate groups, covalent bonds to phosphorus moieties or supports, etc .; m is 1 or 2; X is the following formula (II-1): Is the group indicated by; Symbols described in formula (II-1): Indicates the binding point with the 2'-amino group; One of R 7 and R 8 is a hydrogen atom and the other is a methyl group that may be substituted with one or more substituents.
  • a nucleoside or nucleotide represented by (see, eg, Japanese Patent Application No. 2018-212424).
  • a typical embodiment is a nucleoside or nucleotide in which one of R 7 and R 8 is a hydrogen atom and the other is an unsubstituted methyl group.
  • ANA [ipU] is a nucleoside or nucleotide represented by the general formula (I) defined in the above “ALNA [mU]", and in the formula, X is the following formula (II-1): Is the group indicated by; One of R 7 and R 8 is a hydrogen atom and the other is an isopropyl group which may be substituted with one or more substituents (see, eg, Japanese Patent Application No. 2018-212424).
  • a typical embodiment is a nucleoside or nucleotide in which one of R 7 and R 8 is a hydrogen atom and the other is an unsubstituted isopropyl group.
  • ANA [Trz] is a nucleoside or nucleotide represented by the general formula (I) defined in the above “ALNA [mU]", and in the formula, X is the following formula (II-2): It is a group indicated by; A is a triazolyl group that may be substituted with one or more substituents (see, eg, Japanese Patent Application No. 2018-212424). A typical embodiment is a triazolyl group in which A may have one or more methyl groups, more specifically a 1,5-dimethyl-1,2,4-triazole-3-yl group. , Nucleoside or nucleotide.
  • ANA [Oxz] is a nucleoside or nucleotide represented by the general formula (I) defined in the above “ALNA [mU]", and in the formula, X is the following formula (II-2): It is a group indicated by; A is an oxadiazolyl group that may be substituted with one or more substituents (see, eg, Japanese Patent Application No. 2018-212424). A typical embodiment is an oxadiazolyl group in which A may have one or more methyl groups, more specifically a 5-methyl-1,2,4-oxadiazole-3-yl group. There are nucleosides or nucleotides.
  • ANA [Ms] is a nucleoside or nucleotide represented by the general formula (I) defined in the above “ALNA [mU]”, and in the formula, X is the following formula (II-3): It is a group indicated by; M is a sulfonyl group substituted with a methyl group which may be substituted with one or more substituents (see, eg, Japanese Patent Application No. 2018-212424).
  • a typical embodiment is a nucleoside or nucleotide in which M is a sulfonyl group substituted with an unsubstituted methyl group.
  • 5-Methylcytosine means cytosine modified with a methyl group bonded to the 5-position.
  • 5-Methylcytosine is a modified nucleobase.
  • Single-strand oligonucleotide means an oligonucleotide that is not hybridized with a complementary strand.
  • DUX4 means a transcription factor nucleic acid or protein, which is also called Double homeobox4.
  • Examples of DUX4 include various splicing variants transcribed from the DUX4 gene, or single nucleotide polymorphisms (SNPs) thereof, and DUX4 may be the variants and / or SNPs thereof.
  • Human DUX4-s (SEQ ID NO: 6 in the Sequence Listing) consists of short exon 1 (exon 1s), exon 2 and exon 3 by atypical splicing donor sites within exon 1 and encodes a non-toxic short DUX4 protein. To do. Human DUX4-FL consists of exons 1, exons 2, and exons 3 and encodes a full-length DUX4 protein.
  • DUX4-FL includes DUX4-FL1 (SEQ ID NO: 1 in the sequence listing), which is a mature mRNA that does not contain intron 1, and DUX4-FL2 (SEQ ID NO: 5 in the sequence listing), which contains intron 1.
  • DUX4-FL1 SEQ ID NO: 1 in the sequence listing
  • DUX4-FL2 SEQ ID NO: 5 in the sequence listing
  • DUX4 mRNA is also expressed in normal testis, but in addition to DUX4-FL, splicing variants of exon 1, exon 2, exon 6, and / or exon 1, exon 2, exon 4, exon 5, Exon 6 and exon 7 splicing variants are expressed (see Non-Patent Document 1 above).
  • the DUX4 protein functions as a transcription factor, and examples of genes whose transcription is regulated by DUX4 include MBD3L2, ZSCAN4, TRIM43, DEFB103, and ZNF217 (see Non-Patent Document 2).
  • DUX4 mRNA targeted by the modified oligonucleotide of the present invention for example, human DUX4 is preferable, DUX4-FL is more preferable, and DUX4-FL1 described in SEQ ID NO: 1 in the sequence listing is even more preferable. Further, as the target site of the modified oligonucleotide for DUX4 of the present invention, exon 1, intron 1, exon 2, intron 2, and exon 3 are preferable.
  • the DUX4 gene is expressed by fusing with other genes due to chromosomal abnormalities such as translocation.
  • Other genes include, for example, IGH (Yasuda et al., Nature Genetics 48 (5), 569 (2016)), CIC (Yoshimoto et al., Cancer research 77, 2927 (2017)), EWSR1 (Sirvent et al., Cancer Genetics and Cytogenetics 195). , 12 (2009)) have been reported, and are considered to be the causative genes of B-cell acute lymphoblastic leukemia, differentiated round cell sarcoma, and fetal rhabdomyosarcoma, respectively.
  • the modified oligonucleotides of the present invention also include compounds that target these fusion genes.
  • “Expression of DUX4" means the level of mRNA transcribed from the gene encoding DUX4, or the level of protein translated from that mRNA. Expression of DUX4 can be determined by methods known in the art such as Northern or Western blots, PCR.
  • DUX4 nucleic acid means any nucleic acid encoding DUX4.
  • the DUX4 nucleic acid is a DNA sequence encoding DUX4, an RNA sequence transcribed from DNA encoding DUX4 (including genomic DNA containing introns and exons), and mRNA encoding DUX4. Contains precursor or spliced mature mRNA.
  • the DNA sequence and RNA sequence of a gene generated by fusion of the DUX4 gene and another gene are included.
  • DUX4 mRNA means mRNA encoding the DUX4 protein.
  • Continuous nucleobase and “consecutive nucleobase” mean nucleobases directly adjacent to each other.
  • “Complementary” means the ability of the first nucleic acid and the second nucleic acid to form a pair between nucleobases.
  • “Completely complementary (also referred to as complementarity)” or “100% complementary (also referred to as complementary)” means that all of each nucleobase in the nucleic acid base sequence of the first nucleic acid is the second of the second nucleic acid. It means that it has a complementary nucleobase in the nucleobase sequence of.
  • the first nucleic acid is a modified oligonucleotide and the target nucleic acid is a second nucleic acid.
  • Hybridization means annealing of complementary nucleic acid molecules.
  • complementary nucleic acid molecules include modified oligonucleotides and target nucleic acids.
  • Specifically hybridizable has sufficient complementarity between the modified oligonucleotide and the target nucleic acid to induce the desired effect, while under conditions where specific binding is desired, ie. Refers to modified oligonucleotides that have minimal or no effect on non-target nucleic acids under physiological conditions in the case of in vivo assays and therapeutic procedures.
  • mismatch or “non-complementary nucleobase” refers to the case where the nucleobase of the first nucleic acid cannot be paired with the corresponding nucleobase of the second or target nucleobase.
  • Targeting or “targeting” means the process of designing and selecting a modified oligonucleotide that specifically hybridizes to the target nucleic acid and induces the desired effect.
  • Target nucleic acid refers to nucleic acids that can be targeted by modified oligonucleotides.
  • the target nucleic acid comprises a region of DUX4 nucleic acid.
  • Target segment means the nucleotide sequence of the target nucleic acid targeted by the modified oligonucleotide.
  • 5'target site refers to the nucleotide on the 5'side of the target segment.
  • 3'target site refers to the nucleotide on the 3'side of the target segment.
  • Active target region or “target region” means a region targeted by one or more active modified oligonucleotides.
  • Active modified oligonucleotide means a modified oligonucleotide that reduces the target nucleic acid level or protein level.
  • Antisense inhibition means that the target nucleic acid level or target protein level in the presence of a modified oligonucleotide complementary to the target nucleic acid is compared to the target nucleic acid level or target protein level in the absence of the modified oligonucleotide. Means to reduce.
  • RNA means a double-stranded RNA oligonucleotide having a nucleobase sequence that allows hybridization to the corresponding region or segment of the target nucleic acid.
  • RNA means a hairpin-type single-stranded RNA oligonucleotide having a nucleic acid base sequence that enables hybridization to a corresponding region or segment of a target nucleic acid.
  • a "snoRNA” is a non-coding RNA present in the nucleolar that has a nucleic acid base sequence that allows hybridization to the corresponding region or segment of the target RNA nucleic acid, for methylation or pseudouridine formation of the target RNA nucleic acid. Means a single-stranded oligonucleotide that leads to chemical modification.
  • RNA is a non-coding RNA that regulates the expression of other genes and is a single- or double-stranded RNA oligonucleotide having a nucleobase sequence that allows hybridization to the corresponding region or segment of the target nucleic acid. means.
  • Cap structure or "end cap portion” means a chemical modification incorporated at the end of any of the modified oligonucleotides.
  • “Chemically heterogeneous region” refers to a region within a modified oligonucleotide that is somehow chemically different from another region within the same modified oligonucleotide. For example, a region with 2'-O-methoxyethyl nucleotides is chemically different from a region with 2'-O-methoxyethyl unmodified nucleotides.
  • Chromatin modified oligonucleotide means a modified oligonucleotide having at least two chemically heterologous regions.
  • Microtif means a pattern of chemically heterogeneous regions in a modified oligonucleotide.
  • an internal region having a plurality of nucleosides supporting cleavage by RNase H is located between external regions having one or more nucleosides, and the nucleosides constituting the internal region constitute the external region.
  • the inner region can be referred to as the "gap segment” and the outer region can be referred to as the "wing segment”.
  • a wing segment existing 5'from the gap segment can be called a "5'wing segment”
  • a wing segment existing 3'from the gap segment can be called a "3'wing segment”.
  • Directly adjacent means that there is no intervening element between directly adjacent elements.
  • Nuclear ribonuclease means a ribonuclease found in the nucleus.
  • Nuclear ribonucleases include, but are not limited to, RNase H, including RNase H1 and RNase H2, double-stranded RNase drochers, and other double-stranded RNases.
  • the gapmer is of a nucleoside that is located between and directly adjacent to the 5'and 3'wing segments, each of which has 1 to 8 nucleosides, and both wing segments.
  • a gap segment having a number of 6 or more and containing only a nucleoside without a modified sugar, or a nucleoside containing one or two nucleosides containing a modified sugar and otherwise containing no modified sugar.
  • Drug means an active substance that can provide therapeutic benefits when administered to an animal.
  • First agent means the therapeutic compound of the present invention.
  • the first agent may be a modified oligonucleotide that targets DUX4.
  • Second agent means a second therapeutic compound of the invention (eg, a second modified oligonucleotide that targets DUX4) and / or a therapeutic compound that does not target DUX4.
  • a “pharmaceutically acceptable salt” is a physiologically and pharmaceutically acceptable salt of a modified oligonucleotide, i.e., a salt that retains the desired biological activity of the modified oligonucleotide and does not give it an undesired toxic effect. means.
  • “Diluent” means a component in a composition that lacks pharmacological activity but is pharmaceutically necessary or desirable.
  • the diluent in the composition to be injected may be a liquid, such as saline.
  • DUX4-related disease refers to a disease caused by abnormal expression of DUX4 mRNA or DUX4 protein, or mRNA or protein of a fusion gene due to translocation of the DUX4 gene. Facial scapulohumeral muscular dystrophy, B-cell acute lymphocytic leukemia, differentiated round cell sarcoma, fetal rhabdomyosarcoma, etc., but are not limited to these.
  • FSHD Frecioscapulohumeral muscular dystrophy
  • D4Z4 genome repeat sequence
  • SMCHD1 is one of the genomic structure regulators that suppress gene expression
  • FSHD is a type of muscular dystrophy associated with progressive muscle weakness and muscle fiber loss. Unlike Duchenne muscular dystrophy and Becker muscular dystrophy, which primarily affect the lower body, FSHD develops in the upper body, primarily the facioscapulohumus, subscapularis, and brachialis muscles. However, it can also occur in the pelvis, hips, and lower limbs. Symptoms of FSHD often appear between the ages of 10 and 26, but it is not uncommon for them to develop much later. In some cases, it may not occur at all. Symptoms are usually mild and the rate of deterioration is very slow.
  • Facial muscle weakness is common, with drooping eyelids, inability to whistle, reduced facial facial expression, depressed or angry facial expressions, difficulty pronouncing words, scapula weakness (scapular prominence (winged scapula) and stroking) It may cause deformation of the shoulders, etc.), weakness of the lower limbs, hearing loss, and risk of heart disease.
  • Active pharmaceutical agent means a substance (s) in a pharmaceutical composition that provides a therapeutic benefit when administered to an animal.
  • the modified oligonucleotide targeting DUX4 is an active pharmaceutical agent.
  • “Simultaneous administration” refers to the co-administration of two agents in any manner in which the pharmacological effects of both agents are simultaneously manifested in the patient. Co-administration does not require both agents to be administered in a single pharmaceutical composition, in the same dosage form, or by the same route of administration. The pharmacological effects resulting from both agents need not develop at the same time. The pharmacological effects need only overlap within a certain period of time and do not have to have the same spread.
  • administering means giving the drug to an animal, and includes, but is not limited to, administration by a medical expert and self-administration.
  • “Improvement” refers to reducing at least one indicator, sign or symptom of an associated disease, disorder or condition.
  • the severity of the indicator can be determined by subjective or objective measures known to those of skill in the art.
  • Animal refers to humans, or non-human animals including, but not limited to, mice, rats, rabbits, dogs, cats, pigs, and, but not limited to, non-human primates including monkeys and chimpanzees. Point to.
  • Co-administration means administration of two or more drugs to an individual.
  • the two or more agents may be present in a single pharmaceutical composition or in separate pharmaceutical compositions.
  • Each of the two or more agents can be administered via the same or different routes of administration.
  • Co-administration includes parallel or sequential administration.
  • Dose means a specific amount of a pharmaceutical agent given in a single dose or for a specific period of time.
  • the dose can be administered by one, two or more boluses, tablets, or injections.
  • two or more injections are used to achieve the desired dose, as the desired dose requires a volume that is not easily contained in a single injection. can do.
  • the pharmaceutical agent is administered by infusion over a long period of time or continuously. The dose may be described as the amount of pharmaceutical agent per hour, day, week or month.
  • Effective amount or “therapeutically effective amount” means the amount of active pharmaceutical agent sufficient to achieve the desired physiological outcome in an individual in need of the drug. Effective amounts vary from individual to individual depending on the health and physical condition of the individual being treated, the taxon of the individual being treated, the formulation of the composition, the assessment of the individual's medical condition and other relevant factors. obtain.
  • Identifying animals with facioscapulohumeral muscular dystrophy means identifying animals that have been diagnosed with a disorder or condition of FSHD, or identifying animals that are prone to disorders or conditions of FSHD. To do. For example, individuals with a family history may be prone to FSHD disorders or conditions. Such identification can be achieved by any method, including examining the individual's medical history and standard clinical tests or assessments. As for FSHD, FSHD1 and FSHD2 are known depending on the pathogenic mechanism, but both are included.
  • “Individual” means a human or non-human animal selected for treatment or therapy.
  • Myotonia means abnormally slow muscle relaxation after voluntary contraction or electrical stimulation.
  • Parenteral administration means administration via injection or infusion.
  • Parenteral administration includes subcutaneous administration, intravenous administration, intramuscular administration, intraarterial administration, intraperitoneal administration or intracranial administration, for example, intrathecal or intraventricular administration. Administration may be continuous or long-term, short-term or intermittent.
  • “Pharmaceutical composition” means a mixture of substances suitable for administration to an individual.
  • the pharmaceutical composition may include one or more active agents and a sterile aqueous solution.
  • Preventing delays the onset or onset of a disease, disorder or unfavorable health condition, or one or more symptoms associated with the disease, disorder or unfavorable health condition, over a period of minutes to an indefinite period of time. Or it means to prevent it. Prevention also means reducing the risk of developing a disease, disorder or unfavorable health condition.
  • Treatment reduces or eliminates or eliminates a disease, disorder or unfavorable health condition, or one or more symptoms associated with the disease, disorder or unfavorable health condition, or the disease, disorder. , Or means to partially eliminate or eradicate one or more causes of unfavorable health condition itself.
  • Treatment is intended to include the above prevention or treatment.
  • it also includes administering the pharmaceutical composition of the present invention to bring about a change or improvement in the disease, disorder or unfavorable health condition.
  • Prodrug means a therapeutic agent prepared in an inactive form that is converted to an active form in the body or its cells by the action of an endogenous enzyme or other chemical substance or condition.
  • Side effect means a physiological response that may result from treatment other than the desired effect.
  • side effects include injection site reactions, abnormal liver function tests, renal dysfunction, hepatotoxicity, nephrotoxicity, central nervous system abnormalities, myopathy and malaise.
  • elevated levels of alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST) or ⁇ -glutamyl transpeptidase ( ⁇ -GTP) in the blood can indicate hepatotoxicity or liver dysfunction.
  • elevated bilirubin can indicate hepatotoxicity or liver dysfunction.
  • elevated urinary protein, elevated creatinine in blood, and elevated urea nitrogen (UN) may indicate nephrotoxicity or renal dysfunction.
  • Subcutaneous administration means administration directly under the skin.
  • “Therapeutic effective amount” means the amount of drug that gives a therapeutic benefit to an individual.
  • Embodiments Certain specific embodiments shown below are not limited to these, but provide compounds for inhibiting the expression of DUX4, methods using the compounds, and pharmaceutical compositions containing the compounds. To do.
  • Certain embodiments provide a method of reducing DUX4 expression in an animal, comprising administering to the animal a compound containing a modified oligonucleotide that targets DUX4.
  • modified oligonucleotides are used to prevent the accumulation of pathogenic DUX4 transcription factors by inhibiting transcription of the DUX4 gene, or inhibiting translation of DUX4 mRNA, or by inducing cleavage of DUX4 mRNA.
  • a method of administration is provided.
  • Certain embodiments are methods of treating an animal having facial scapulohumeral muscular dystrophy, comprising: a) identifying the animal having facial scapulohumeral muscular dystrophy. And b) Administering a therapeutically effective amount of a compound containing a modified oligonucleotide targeting DUX4 to the animal.
  • Certain embodiments provide a method of reducing myotonia in subjects who require it.
  • the method comprises administering to the subject a modified oligonucleotide complementary to the DUX4 mRNA, which activates a ribonuclease or a nuclear ribonuclease when bound to the DUX4 mRNA, thereby causing myotonia.
  • the subject has or is suspected of having facial scapulohumeral muscular dystrophy, has high expression of DUX4 mRNA, or has a reduced number of D4Z4 repeats on human chromosome 4.
  • suspected of having an SMCHD1 (DNA methylase) mutation is suspected of having an SMCHD1 (DNA methylase) mutation.
  • the modified oligonucleotides used in the methods of the invention are chimeric. In certain embodiments, the modified oligonucleotide of the method used in the present invention is a gapmer.
  • administration is subcutaneous administration. In certain embodiments, the administration is intravenous or intramuscular.
  • the modified oligonucleotides used in the methods of the invention target the DUX4 protein coding region of DUX4 mRNA, introns, 5'UTRs or 3'UTRs. In certain embodiments, the modified oligonucleotides used in the methods of the invention target exons 1, exons 2, exons 3, introns 1, and introns 2 of DUX4 mRNA.
  • DUX4 mRNA is cleaved by the nuclear ribonuclease RNase H1.
  • DUX4 mRNA is reduced in muscle tissue.
  • the splicing variants DUX4-FL1 (SEQ ID NO: 1 of the Sequence Listing), DUX4-FL2 (SEQ ID NO: 5 of the Sequence Listing) are preferentially reduced.
  • the DUX4 mRNA has the sequence set forth in GenBank Accession No. NM_001293798.2 (incorporated herein as SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing).
  • the splicing variant of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing is also referred to as the mature mRNA of DUX4-FL1 or DUX4.
  • the DUX4 mRNA has the sequence set forth in GenBank Accession No. NM_0013060682 (incorporated herein as SEQ ID NO: 5 in the Sequence Listing).
  • the splicing variant of SEQ ID NO: 5 in the Sequence Listing is also referred to as DUX4-FL2.
  • the DUX4 has the sequence set forth in GenBank Accession No. NM_0013638200.1 (incorporated herein as SEQ ID NO: 6 in the Sequence Listing).
  • the splicing variant of SEQ ID NO: 6 in the Sequence Listing is also referred to as DUX4-s.
  • the DUX4 mRNA has the SNP of the splicing variant described above.
  • the modified oligonucleotide is a modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues and at positions 126-147 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. It has a nucleobase sequence containing a modified oligonucleotide, which is a nucleobase sequence containing at least eight contiguous nucleobase sequences that are complementary to the equilength moieties at positions 232 to 248, 1306 to 1325 or 1472-1495.
  • the modified oligonucleotide is a modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues and at positions 126-147 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing.
  • a modified oligonucleotide that is a nucleobase sequence containing at least 9, 10, 11 or 12 contiguous nucleobase sequences that are complementary to equilength moieties at positions 232 to 248, 1306-1325 or 1472-1495. It has a nucleobase sequence containing a nucleotide.
  • the modified oligonucleotide is complementary to the equilength portion of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing at positions 126-147, 232-248, 1306-1325 or 1472-1495 from the 5'end. It may consist of at least 8 consecutive nucleobase sequences, or may have additional sequences on the 5'end side and / or 3'end side in addition to the nucleobase sequence.
  • the modified oligonucleotides are at least 8 or 9 complementary to the equilength portion at positions 126-147 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. Nucleobase sequence containing 10, 11, 12, 13, 14, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, or 22 contiguous nucleobase sequences. It is a modified oligonucleotide having 30 residues or less.
  • the modified oligonucleotides are at least 8 or 9 complementary to the equilength portion of positions 232-248 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. It is a nucleobase sequence containing 10, 11, 12, 13, 14, 14, 15, 16 or 17 consecutive nucleobase sequences, and is a modified oligonucleotide having 30 residues or less.
  • the modified oligonucleotides are at least 8 or 9 complementary to the equilength portion of positions 1306-1325 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing.
  • the modified oligonucleotides are at least 8 or 9 complementary to the equilength portion of positions 1472 to 1495 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. 10, 11, 12, 13, 14, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 or 24 consecutive nucleobases It is a nucleobase sequence containing a sequence, and is a modified oligonucleotide having 30 residues or less.
  • the modified oligonucleotide is a modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues, such as at positions 126-147 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. Contains a nucleobase sequence that is complementary to the long portion, and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98 in SEQ ID NO: 1 of the sequence listing in the equal length portion. A modified oligonucleotide that is%, 99% or 100% complementary.
  • the modified oligonucleotide is a modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues, such as at positions 232-248 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. Contains a nucleobase sequence that is complementary to the long portion, and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98 in SEQ ID NO: 1 of the sequence listing in the equal length portion. A modified oligonucleotide that is%, 99% or 100% complementary.
  • the modified oligonucleotide is a modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues, such as at positions 1306-1325 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. Contains a nucleobase sequence that is complementary to the long portion, and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98 in SEQ ID NO: 1 of the sequence listing in the equal length portion. A modified oligonucleotide that is%, 99% or 100% complementary.
  • the modified oligonucleotide is a modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues, such as at positions 1472-1495 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. Contains a nucleobase sequence that is complementary to the long portion, and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98 in SEQ ID NO: 1 of the sequence listing in the equal length portion. A modified oligonucleotide that is%, 99% or 100% complementary.
  • the modified oligonucleotide is composed of ⁇ 21 residues, 14-20 residues, 14-19 residues,
  • the modified oligonucleotide is a modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues and at positions 128-143 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. It has a nucleobase sequence containing a modified oligonucleotide, which is a nucleobase sequence containing at least eight contiguous nucleobase sequences that are complementary to equilength moieties at positions 233 to 248, 1309 to 1323 or 1480 to 1495.
  • the modified oligonucleotide is a modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues and at positions 128-143 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing.
  • a modified oligonucleotide that is a nucleobase sequence containing at least 9, 10, 11, and 12 contiguous nucleobase sequences that are complementary to equilength moieties at positions 233 to 248, 1309 to 1323, or 1480 to 1495. It has a nucleobase sequence containing a nucleotide.
  • the modified oligonucleotides are at least 8 or 9 complementary to the equilength portion at positions 128-143 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. It is a nucleobase sequence containing 10, 11, 12, 13, 14, 15, or 16 consecutive nucleobase sequences, and is a modified oligonucleotide having 30 residues or less.
  • the modified oligonucleotides are at least 8 or 9 complementary to the equilength portion of positions 233-248 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. It is a nucleobase sequence containing 10, 11, 12, 13, 14, 14, 15 or 16 consecutive nucleobase sequences, and is a modified oligonucleotide within 30 residues.
  • the modified oligonucleotides are at least 8 or 9 complementary to the equilength portion of positions 1309 to 1323 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing.
  • the modified oligonucleotides are at least 8 or 9 complementary to the equilength portion of positions 1480 to 1495 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. 10, 11, 12, 13, 14, 14, 15 or 16 consecutive nucleobase sequences, the complementary base of the base at position 1480 from the 5'end of the nucleobase of SEQ ID NO: 1. It is a modified oligonucleotide within 30 residues consisting of a nucleobase sequence at the 3'end.
  • the modified oligonucleotide is a modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues, such as at positions 128-143 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. Contains a nucleobase sequence that is complementary to the long portion, and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98 in SEQ ID NO: 1 of the sequence listing in the equal length portion. A modified oligonucleotide that is%, 99% or 100% complementary.
  • the modified oligonucleotide is a modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues, such as at positions 233-248 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. Contains a nucleobase sequence that is complementary to the long portion, and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98 in SEQ ID NO: 1 of the sequence listing in the equal length portion. A modified oligonucleotide that is%, 99% or 100% complementary.
  • the modified oligonucleotide is a modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues, such as 1309-1323 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. Contains a nucleobase sequence that is complementary to the long portion, and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98 in SEQ ID NO: 1 of the sequence listing in the equal length portion. A modified oligonucleotide that is%, 99% or 100% complementary.
  • the modified oligonucleotide is a modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues, such as at positions 1480-1495 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing.
  • nucleobase sequence complementary to the long portion consists of a nucleobase sequence having a complementary base of the base at positions 5'to 1480 from the 5'end to the 3'end of the nucleic acid base of SEQ ID NO: 1, and is a sequence table in the equilong portion
  • a modified oligonucleotide that is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100% complementary to SEQ ID NO: 1.
  • the modified oligonucleotides provided herein target any one of the following regions of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing: 126-141, 126-143 from the 5'end. 127-142, 127-143, 127-144, 127-146, 128-143, 128-144, 128-147, 232-245, 232-247, 233-246, 233-247, 233-248, 234. 247 to 234 to 248, 1304 to 1323, 1306 to 1321, 1306 to 1324, 1307 to 1323, 1307 to 1324, 1307 to 1325, 1307 to 1326, 1308 to 1323, 1308 to 1324, 1308 to 1322, 1308 to 1325.
  • the modified oligonucleotides provided herein target any one of the following regions of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing: 128-143, 232-247 from the 5'end. , 233 to 248, 1309 to 1323 and 1480 to 1495.
  • the modified oligonucleotides provided herein have a nucleobase sequence containing a complementary region containing at least eight contiguous nucleobases complementary to the target region. In certain embodiments, the modified oligonucleotides provided herein have a nucleic acid base sequence comprising a complementary region containing at least eight contiguous nucleic acid bases complementary to the target region.
  • the target regions are 126-141, 126-143, 127-142, 127-143, 127-144, 127-146, 128-143, 128-144, 128-from the 5'end of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
  • the modified oligonucleotides provided herein have a nucleobase sequence containing a complementary region containing at least eight contiguous nucleobases complementary to the target region.
  • the target region targets positions 128 to 143, 232 to 247, 233 to 248, 1309 to 1323 or 1480 to 1495 from the 5'end of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
  • the modified oligonucleotides provided herein have a nucleobase sequence containing a complementary region containing at least 10 contiguous nucleobases complementary to the target region. In certain embodiments, the modified oligonucleotides provided herein have a nucleic acid base sequence comprising a complementary region containing at least 10 contiguous nucleic acid bases complementary to the target region.
  • the target regions are 126-141, 126-143, 127-142, 127-143, 127-144, 127-146, 128-143, 128-144, 128-from the 5'end of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
  • the modified oligonucleotides provided herein have a nucleobase sequence containing a complementary region containing at least 10 contiguous nucleobases complementary to the target region.
  • the target region targets positions 128 to 143, 232 to 247, 233 to 248, 1309 to 1323 or 1480 to 1495 from the 5'end of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
  • the modified oligonucleotides provided herein have a nucleobase sequence containing a complementary region containing at least 12 contiguous nucleobases complementary to the target region. In certain embodiments, the modified oligonucleotides provided herein have a nucleic acid base sequence comprising a complementary region containing at least 12 contiguous nucleic acid bases complementary to the target region.
  • the target regions are 126-141, 126-143, 127-142, 127-143, 127-144, 127-146, 128-143, 128-144, 128-from the 5'end of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
  • the modified oligonucleotides provided herein have a nucleobase sequence containing a complementary region containing at least 12 contiguous nucleobases complementary to the target region.
  • the target region targets positions 128 to 143, 232 to 247, 233 to 248, 1309 to 1323 or 1480 to 1495 from the 5'end of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
  • the modified oligonucleotides provided herein have a nucleobase sequence containing a complementary region containing at least 14 contiguous nucleobases complementary to the target region. In certain embodiments, the modified oligonucleotides provided herein have a nucleic acid base sequence comprising a complementary region containing at least 14 contiguous nucleic acid bases complementary to the target region.
  • the target regions are 126-141, 126-143, 127-142, 127-143, 127-144, 127-146, 128-143, 128-144, 128-from the 5'end of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
  • the modified oligonucleotides provided herein have a nucleobase sequence containing a complementary region containing at least 14 contiguous nucleobases complementary to the target region.
  • the target region targets positions 128 to 143, 232 to 247, 233 to 248, 1309 to 1323 or 1480 to 1495 from the 5'end of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
  • the modified oligonucleotides are 126-141, 126-143, 127-142, 127-143, 127-144 from the 5'end of the nucleic acid base of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. 127 to 146, 128 to 143, 128 to 144, 128 to 147, 232 to 245, 232 to 247, 233 to 246, 233 to 247, 233 to 248, 234 to 247, 234 to 248, 1304 to 1323, 1306.
  • the modified oligonucleotides are 128-143, 232-247, 233-248, 1309-1323, 1480 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. It is a modified oligonucleotide containing a nucleobase sequence that is complementary to the equilength portion at positions ⁇ 1495.
  • the modified oligonucleotide is a modified oligonucleotide comprising the nucleobase sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 2-4, 7-64, 69-97, 102-112 of the Sequence Listing. is there. Also, in certain embodiments, the modified oligonucleotide is a modified oligonucleotide comprising the nucleobase sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 2-4, 75, 78 of the Sequence Listing.
  • the modified oligonucleotide is a modified oligonucleotide consisting of the nucleobase sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 2-4, 7-64, 69-97, 102-112 of the Sequence Listing. is there. Also, in certain embodiments, the modified oligonucleotide is a modified oligonucleotide consisting of the nucleobase sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 2-4, 75, 78 of the Sequence Listing.
  • the modified oligonucleotide comprises at least eight contiguous nucleobases of the nucleobase sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 2, 3, 4, 75, or 78 of the Sequence Listing. It has a nucleobase sequence containing.
  • the modified oligonucleotide comprises at least 10 contiguous nucleobases of the nucleobase sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 2, 3, 4, 75, or 78 of the Sequence Listing. It has a nucleobase sequence containing.
  • the modified oligonucleotide comprises at least 12 contiguous nucleobases of the nucleobase sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 2, 3, 4, 75, or 78 of the Sequence Listing. It has a nucleobase sequence containing.
  • the modified oligonucleotide comprises at least 14 contiguous nucleobases of the nucleobase sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 2, 3, 4, 75, or 78 of the Sequence Listing. It has a nucleobase sequence containing.
  • the modified oligonucleotide has a nucleobase sequence comprising a nucleobase consisting of the nucleobase sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 2, 3, 4, 75, or 78 of the Sequence Listing. ..
  • the modified oligonucleotide has a nucleobase sequence consisting of the nucleobase sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 2, 3, 4, 75, or 78 of the Sequence Listing.
  • the animal is a human.
  • administration comprises parenteral administration.
  • the compound is a single-stranded modified oligonucleotide.
  • the nucleobase sequence of the modified oligonucleotide is at least 90 relative to the equilength portion of any one region of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing as measured over the modified oligonucleotide. %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100% complementary. In certain embodiments, the nucleobase sequence of the modified oligonucleotide is 100% relative to the equilength portion of any one region of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing as measured over the modified oligonucleotide. It is complementary.
  • the at least one internucleoside bond of the modified oligonucleotide is a modified nucleoside link.
  • each nucleoside bond is a phosphorothioate nucleoside bond.
  • At least one nucleoside of the modified oligonucleotide comprises a modified sugar.
  • the at least one modified sugar is a bicyclic sugar.
  • the at least one modified sugar is 2'-O-methoxyethyl, 2'-O-methyl and / or 4'-(CH 2 ) n- O-2'crosslinks (in the formula, n). Is 1 or 2).
  • the sugar moiety of the modified oligonucleotide comprises at least one modified sugar which is a bicyclic sugar.
  • the at least one modified sugar is LNA, GuNA, ALNA [Ms], ALNA [mU], ALNA [ipU], ALNA [Oxz], and / or ALNA [Trz].
  • At least one nucleoside of the modified oligonucleotide comprises a modified nucleobase.
  • the modified nucleobase is 5-methylcytosine.
  • the modified oligonucleotide is a gapmer, including: a) a gap segment consisting of linked deoxynucleosides; b) a 5'wing segment consisting of linked nucleosides; and c) from linked nucleosides. 3'wing segment consisting of.
  • the gap segment is located between the 5'wing segment and the 3'wing segment, and each nucleoside in each wing segment is such as a 2'-O-methyl modified sugar, a 2'-O-methoxyethyl modified sugar or a bicyclic sugar. Contains modified sugars.
  • the modified oligonucleotide is a gapmer, including: a) modified sugars such as one or two 2'-O-methyl modified sugars or 2'-O-methoxyethyl modified sugars. Gap segments that are nucleosides that contain nucleosides and are otherwise free of modified sugars; b) 5'wing segments that contain linked nucleosides; and c) 3'wing segments that contain linked nucleosides. The gap segment is located between the 5'wing segment and the 3'wing segment, and each nucleoside in each wing segment is modified with a 2'-O-methyl modified sugar, a 2'-O-methoxyethyl sugar, or a bicyclic sugar. Contains sugar.
  • the modified oligonucleotide is a gapmer, including: a) the number of nucleosides is 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 or 16.
  • the nucleoside is only a nucleoside containing no modified sugar, or 1 or 2 nucleoside containing a modified sugar such as a 2'-O-methyl modified sugar or a 2'-O-methoxyethyl modified sugar.
  • each nucleoside in each wing segment is a 2'-O-methyl modified sugar, a 2'-O-methoxyethyl sugar or a bicyclic sugar.
  • Each nucleoside bond of the modified oligonucleotide comprises a phosphorothioate bond, and some or all of the cytosine in the modified oligonucleotide may be 5'-methylcytosine.
  • the modified oligonucleotide is a gapmer and the number of nucleosides constituting the gapmer is 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 or 30 pieces.
  • the modified oligonucleotide is a gapmer, in the sugar moiety of the nucleoside, 2'-O-methyl, 2'-O-methoxyethyl and / or 4'-(CH 2 ) n-. Includes O-2'crosslinks (where n is 1 or 2).
  • the modified oligonucleotide is a gapmer, where in the sugar moiety of the nucleoside, LNA, GuNA, ALNA [Ms], ALNA [mU], ALNA [ipU], ALNA [Oxz], and / Alternatively, it includes ALNA [Trz].
  • the modified oligonucleotide is a gapmer, which is a modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues and 5'of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing.
  • a modified oligonucleotide that is a nucleobase sequence containing at least eight contiguous nucleobase sequences that are complementary to equal length moieties at positions 126-147, 232-248, 1306-1325, or 1472-1495 from the end. It has a nucleobase sequence containing it.
  • the modified oligonucleotide is a modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues and at positions 126-147 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing.
  • a modified oligonucleotide that is a nucleobase sequence containing at least 9, 10, 11 or 12 contiguous nucleobase sequences that are complementary to equilength moieties at positions 232 to 248, 1306-1325 or 1472-1495. It has a nucleobase sequence containing a nucleotide.
  • the modified oligonucleotide is a gapmer, at least 8 complementary to the equilength portion of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing at positions 126-147 from the 5'end. , 9, 10, 11, 12, 13, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 18, 19, 20, 21, or 22 consecutive nucleobase sequences It is a nucleobase sequence containing, and is a modified oligonucleotide within 30 residues.
  • the modified oligonucleotide is a gapmer, at least 8 complementary to the equilength portion of positions 232-248 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing.
  • the modified oligonucleotide is a gapmer, at least 8 complementary to the equilength portion at positions 1306-1325 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing.
  • a nucleobase sequence containing, 9, 10, 11, 12, 13, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 18, 19 or 20 consecutive nucleobase sequences.
  • the modified oligonucleotide is a gapmer, at least 8 complementary to the equilength portion of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing at positions 1472 to 1495 from the 5'end. 9 pieces, 10 pieces, 11 pieces, 12 pieces, 13 pieces, 14 pieces, 15 pieces, 16 pieces, 17 pieces, 18 pieces, 19 pieces, 20 pieces, 21 pieces, 22 pieces, 23 pieces or 24 pieces. It is a nucleobase sequence containing a continuous nucleobase sequence, and is a modified oligonucleotide having 30 residues or less.
  • the modified oligonucleotide is a gapmer of the modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues, 126-147 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. It contains a nucleobase sequence that is complementary to the equilength portion of the position, and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 in SEQ ID NO: 1 of the sequence listing in the equilength portion. A modified oligonucleotide that is%, 98%, 99% or 100% complementary.
  • the modified oligonucleotide is a gapmer of the modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues, 233-248 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. It contains a nucleobase sequence that is complementary to the equilength portion of the position, and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 in SEQ ID NO: 1 of the sequence listing in the equilength portion. A modified oligonucleotide that is%, 98%, 99% or 100% complementary.
  • the modified oligonucleotide is a gapmer of the modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues, from 1309 to 1323 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. It contains a nucleobase sequence that is complementary to the equilength portion of the position, and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 in SEQ ID NO: 1 of the sequence listing in the equilength portion. A modified oligonucleotide that is%, 98%, 99% or 100% complementary.
  • the modified oligonucleotide is a gapmer of the modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues, from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing 1472 to 1495. Contains a nucleobase sequence that is complementary to the equilength portion of the position, and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 in SEQ ID NO: 1 of the sequence listing A modified oligonucleotide that is%, 98%, 99% or 100% complementary.
  • the oligonucleotides contained in the 5'wing segment and / or the 3'wing segment are from at least one GuNA, ALNA [Ms], ALNA [mU], ALNA [ipU], ALNA [Oxz] and ALNA [Trz]. It comprises at least one nucleoside containing the modified sugar of choice, and may further include a sugar modified with 2'-O-methoxyethyl and / or a sugar modified with 2'-O-methyl.
  • the modified oligonucleotide is a gapmer of the modified oligonucleotide consisting of 12-30 residues, from 1480 to 1495 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. It is a nucleobase sequence that is complementary to the equilength portion of the position, and consists of a nucleobase sequence having a complementary base of the base at position 1480 from the 5'end of the nucleic acid base of SEQ ID NO: 1 at the 3'end.
  • a modified oligonucleotide that is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100% complementary to SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. .. Also, in certain embodiments, 12-29 residues, 12-28 residues, 12-27 residues, 12-26 residues, 12-25 residues, 12-24 residues, 12-23 residues.
  • the modified oligonucleotides provided herein are gapmers, targeting any one of the following regions of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing: 126-141 from the 5'end. , 126-143, 127-142, 127-143, 127-144, 127-146, 128-143, 128-144, 128-147, 232-245, 232-247, 233-246, 233-247, 233. 248 to 234 to 247, 234 to 248, 1304 to 1323, 1306 to 1321, 1306 to 1324, 1307 to 1323, 1307 to 1324, 1307 to 1325, 1307 to 1326, 1308 to 1323, 1308 to 1324, 1308 to 1322.
  • the modified oligonucleotide provided herein is a gapmer and targets any one of the following regions of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing: 128-143 from the 5'end. , 232 to 247, 233 to 248, 1309 to 1323 and 1480 to 1495.
  • the modified oligonucleotide provided herein is a gapmer, a nucleobase containing a complementary region containing at least eight contiguous nucleic acid bases complementary to the target region.
  • the modified oligonucleotides provided herein have a nucleic acid base sequence comprising a complementary region containing at least eight contiguous nucleic acid bases complementary to the target region.
  • the target regions are 126-141, 126-143, 127-142, 127-143, 127-144, 127-146, 128-143, 128-144, 128-from the 5'end of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
  • the modified oligonucleotide provided herein is a gapmer, a nucleobase containing a complementary region containing at least eight contiguous nucleic acid bases complementary to the target region. It has a sequence and the target region targets positions 128 to 143, 232 to 247, 233 to 248, 1309 to 1323 or 1480 to 1495 from the 5'end of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
  • the modified oligonucleotide provided herein is a gapmer, a nucleobase containing a complementary region containing at least 10 contiguous nucleic acid bases complementary to the target region.
  • the modified oligonucleotides provided herein have a nucleic acid base sequence comprising a complementary region containing at least 10 contiguous nucleic acid bases complementary to the target region.
  • the target regions are 126-141, 126-143, 127-142, 127-143, 127-144, 127-146, 128-143, 128-144, 128-from the 5'end of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
  • the modified oligonucleotide provided herein is a gapmer, a nucleobase containing a complementary region containing at least 10 contiguous nucleic acid bases complementary to the target region. It has a sequence and the target region targets positions 128 to 143, 232 to 247, 233 to 248, 1309 to 1323 or 1480 to 1495 from the 5'end of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
  • the modified oligonucleotide provided herein is a gapmer, a nucleobase containing a complementary region containing at least 12 contiguous nucleic acid bases complementary to the target region.
  • the modified oligonucleotides provided herein have a nucleic acid base sequence comprising a complementary region containing at least 12 contiguous nucleic acid bases complementary to the target region.
  • the target regions are 126-141, 126-143, 127-142, 127-143, 127-144, 127-146, 128-143, 128-144, 128-from the 5'end of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
  • the modified oligonucleotide provided herein is a gapmer, a nucleobase containing a complementary region containing at least 12 contiguous nucleic acid bases complementary to the target region. It has a sequence and the target region targets positions 128 to 143, 232 to 247, 233 to 248, 1309 to 1323 or 1480 to 1495 from the 5'end of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
  • the modified oligonucleotide provided herein is a gapmer, a nucleobase containing a complementary region containing at least 14 contiguous nucleic acid bases complementary to the target region.
  • the modified oligonucleotides provided herein have a nucleic acid base sequence comprising a complementary region containing at least 14 contiguous nucleic acid bases complementary to the target region.
  • the target regions are 126-141, 126-143, 127-142, 127-143, 127-144, 127-146, 128-143, 128-144, 128-from the 5'end of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
  • the modified oligonucleotide provided herein is a gapmer, a nucleobase containing a complementary region containing at least 14 contiguous nucleic acid bases complementary to the target region. It has a sequence and the target region targets positions 128 to 143, 232 to 247, 233 to 248, 1309 to 1323 or 1480 to 1495 from the 5'end of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
  • the modified oligonucleotide is a gapmer, 126-141, 126-143, 127-142, 127-143 from the 5'end of the nucleic acid base of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing.
  • a modified oligonucleotide consisting of a nucleic acid base sequence complementary to the equilength portion.
  • the modified oligonucleotide is a gapmer, 128-143, 232-247, 233-248, 1309 from the 5'end of the nucleobase of the mature mRNA of DUX4 of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing. It is a modified oligonucleotide consisting of a nucleobase sequence complementary to the equilength portions at positions ⁇ 1323 and 1480 to 1495.
  • the modified oligonucleotide is a gapmer and consists of the nucleobase sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 2-4, 7-64, 69-97, 102-112 of the Sequence Listing. It is a modified oligonucleotide. Also, in certain embodiments, the modified oligonucleotide is a gapmer, a modified oligonucleotide consisting of the nucleobase sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 2-4, 75, 78 of the Sequence Listing.
  • the modified oligonucleotide is a gapmer, the modified oligonucleotide described in any one of Compound Nos. 1-112, 114-132, 137-246. Also, in certain embodiments, the modified oligonucleotide is a gapmer, the modified oligonucleotide described in any one of Compound Nos. 1-3, 123, 157, 204, 221 and 231.
  • the abbreviation shown at the left side position means the nucleobase portion
  • the abbreviation shown at the center position means the sugar portion
  • the abbreviation shown at the right side position means the nucleoside. It means the mode of interconnection.
  • One embodiment is a method of reducing the level of DUX4 mRNA and / or DUX4 protein (eg, intramuscular level) in an animal with a DUX4-related disease, wherein an effective amount of a modified oligonucleotide against DUX4 is administered to the animal.
  • Provide methods that include doing.
  • One embodiment is a method of reducing the level of DUX4 mRNA and / or DUX4 protein (eg, intramuscular level) in an animal with FSHD, in which an effective amount of a modified oligonucleotide against DUX4 is administered to the animal.
  • certain embodiments are methods of reducing myopathy and / or improving motor function in animals with FSHD, comprising administering to the animals an effective amount of a modified oligonucleotide against DUX4. provide.
  • Certain embodiments provide treatment of FSHD, i.e., a method of treating, preventing, ameliorating, or mitigating, comprising administering to an animal an effective amount of a modified oligonucleotide against DUX4.
  • Certain embodiments include various symptoms of FSHD (eg, facial muscle weakness, ptosis, inability to whistle, reduced facial facial expression, depressed or angry facial expressions, difficulty pronouncing words, winged scapula (winged scapula).
  • FSHD eg, facial muscle weakness, ptosis, inability to whistle, reduced facial facial expression, depressed or angry facial expressions, difficulty pronouncing words, winged scapula (winged scapula).
  • a method for preventing, ameliorating, or alleviating deformation of the instep, stroking shoulder, etc.
  • lower limb weakness e.g., lower limb weakness, hearing loss, and heart disease
  • Certain embodiments reduce the levels of mRNA and / or protein (eg, intracellular B-cell levels in the blood) that result from the fusion of the DUX4 gene with the IGH gene in animals such as B-cell acute lymphocytic leukemia.
  • a method that comprises administering to an animal an effective amount of a modified oligonucleotide against DUX4.
  • treatments such as B-cell acute lymphoblastic leukemia, i.e., a method of treating, preventing, ameliorating, or alleviating, wherein an effective amount of a modified oligonucleotide against DUX4 is administered to the animal.
  • Certain embodiments are methods of reducing the levels of mRNA and / or protein (eg, intrasarcoma levels) resulting from the fusion of the DUX4 gene with the CIC gene in animals such as differentiated round cell sarcoma, the DUX4
  • Provided are methods comprising administering to an animal an effective amount of a modified oligonucleotide against.
  • certain embodiments include treatments such as differentiated round cell sarcoma, i.e., methods of treating, preventing, ameliorating, or alleviating, comprising administering to an animal an effective amount of a modified oligonucleotide against DUX4. provide.
  • Certain embodiments are methods of reducing mRNA and / or protein levels (eg, intrasarcoma levels) resulting from the fusion of the DUX4 gene with the EWSR1 gene in animals such as fetal rhabdomyosarcoma. , Provided a method comprising administering to an animal a modified oligonucleotide against DUX4. Also, certain embodiments include treatment of fetal rhabdomyosarcoma and the like, i.e., a method of treating, preventing, ameliorating, or alleviating, comprising administering to an animal an effective amount of a modified oligonucleotide against DUX4. Provide a method.
  • Certain embodiments provide a method of treating, preventing, ameliorating, or alleviating a DUX4-related disease with few side effects, comprising administering to an animal a modified oligonucleotide against DUX4.
  • side effects include injection site reactions, abnormal liver function tests, renal dysfunction, hepatotoxicity (histopathological abnormal findings: degenerative necrosis of hepatocytes, hypertrophy of hepatocytes, etc.), nephropathy ( Histopathological abnormal findings, etc.), central nervous system abnormalities, myopathy and malaise.
  • elevated levels of ALT, AST, ⁇ -GTP, GLDH, ALP (alkaline phosphatase) or TBA (total bile acids) in the blood may indicate hepatotoxicity or liver dysfunction.
  • elevated bilirubin can indicate hepatotoxicity or liver dysfunction.
  • elevated urinary protein, elevated creatinine in the blood, or elevated UN may indicate nephrotoxicity or renal dysfunction.
  • Certain embodiments include the use of any of the compounds described herein or pharmaceutical compositions containing such compounds in the manufacture of a medicament for use in any of the therapeutic methods described herein. provide.
  • certain embodiments of the compounds described herein or pharmaceutical compositions containing the compounds in the manufacture of a medicament for treating, ie treating, preventing, delaying or ameliorating FSHD. Provide use.
  • Certain embodiments are herein in the manufacture of a medicament for inhibiting the expression of DUX4 and treating (ie, treating, preventing, delaying or ameliorating) a DUX4-related disease and / or its symptoms.
  • the use of the compound described in 1 or a pharmaceutical composition containing the compound is provided.
  • Certain embodiments provide the use of a compound described herein or a pharmaceutical composition containing the compound in the manufacture of a medicament for reducing the expression of DUX4 in an animal. Certain embodiments are compounds described herein in the manufacture of a medicament for reducing myotonia, which preferentially reduces DUX4-FL mRNA levels (eg, intramuscular levels) in animals. Alternatively, the use of a pharmaceutical composition containing the compound is provided. Certain embodiments provide the use of a compound described herein or a pharmaceutical composition containing the compound in the manufacture of a medicament for treating an animal having FSHD.
  • Certain embodiments include myotonia, myotonia, facial weakness, ptosis, inability to whistle, reduced facial facial changes, depressed or angry facial expressions, difficulty pronouncing words, winged scapula (winged scapula). Deformations of the instep, ptosis, etc.), lower limb weakness, hearing loss, and heart disease, as described herein in the manufacture of a medicament for treating one or more symptoms and outcomes associated with the development of FSHD.
  • the use of the described compound or a pharmaceutical composition containing the compound is provided.
  • Certain embodiments include the compounds described herein or compounds thereof in the manufacture of a medicament for interfering with the expression of DUX4 protein by inducing transcription of the DUX4 gene, translation of DUX4 mRNA, cleavage of DUX4 mRNA. Provides the use of pharmaceutical compositions to be used.
  • kits that treat, i.e., treat, prevent, or ameliorate FSHD as described herein a) the compounds described herein, and optionally b).
  • Kits are provided that include the additional agents or therapies described herein.
  • the kit may further include instructions or labels for using the kit for the purpose of treating, i.e., treating, preventing, or ameliorating FSHD.
  • Certain embodiments include the use of any of the compounds described herein or pharmaceutical compositions containing such compounds in the manufacture of a medicament for use in any of the therapeutic methods described herein. provide.
  • certain embodiments use the compounds described herein or pharmaceutical compositions containing the compounds in the manufacture of a medicament for treating, ie treating, ameliorating, or preventing FSHD.
  • Certain embodiments are herein in the manufacture of a medicament for inhibiting the expression of DUX4 and treating (ie, treating, preventing, delaying or ameliorating) a DUX4-related disease and / or its symptoms.
  • the use of the described compound or a pharmaceutical composition containing the compound is provided.
  • Certain embodiments provide the use of a compound described herein or a pharmaceutical composition containing the compound in the manufacture of a medicament for reducing the expression of DUX4 in an animal. Certain embodiments are compounds described herein in the manufacture of a medicament for reducing myotonia, which preferentially reduces DUX4-FL mRNA levels (eg, intramuscular levels) in animals. Alternatively, the use of a pharmaceutical composition containing the compound is provided. Certain embodiments provide the use of a compound described herein or a pharmaceutical composition containing the compound in the manufacture of a medicament for treating an animal having FSHD.
  • Certain embodiments include muscle stiffness, myotonia, facial weakness, ptosis, inability to whistle, reduced facial facial expression, depressed or angry facial expressions, difficulty pronouncing words, winged scapula (winged scapula).
  • a pharmaceutical composition containing the compound is provided.
  • Certain embodiments are modified oligonucleotides having a nucleobase sequence consisting of the nucleobase sequences of SEQ ID NOs: 2-4, 7-64, 69-97 or 102-112 of the Sequence Listing, or Compound Nos. 1-112, 114.
  • the compounds of ⁇ 132 or 137 ⁇ 246 are provided.
  • the modified oligonucleotide when described in the 5'to 3'direction, has a nucleic acid sequence that includes the inverse complementary strand of the target segment of the target nucleic acid it targets. In certain such embodiments, the modified oligonucleotide, when described in the 5'to 3'direction, has a nucleic acid sequence that comprises the inverse complementary strand of the target segment of the target nucleic acid it targets.
  • the modified oligonucleotides described herein targeting DUX4 are 12-30 nucleotides in length.
  • the modified oligonucleotide is a 12-30 residue linked nucleobase.
  • the modified oligonucleotides are 12-29 residues, 12-28 residues, 12-27 residues, 12-26 residues, 12-25 residues, 12-24 residues, 12-23.
  • the modified oligonucleotides are 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29. Alternatively, it comprises a modified oligonucleotide consisting of the length of the linked nucleobase of 30 residues, or the range defined by any two of the above values. In certain embodiments, the modified oligonucleotide of any of these lengths is at least 8, at least 9, at least 10, at least 11 of the nucleobase sequences of any of the exemplary modified oligonucleotides described herein.
  • At least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18 or at least 19 residues of contiguous nucleobases eg, SEQ ID NOs: 2-4, 7-64, 69- It contains at least eight consecutive nucleobases of the nucleobase sequence described in any one of 97 or 102-112).
  • antisense compounds such as antisense oligonucleotides and / or introduce mismatched bases without losing activity.
  • a series of antisense oligonucleotides with a nucleobase length of 13-25 in an egg mother cell injection model, they cleave the target RNA.
  • 25 nucleobase length antisense oligonucleotides with 8 or 11 mismatched nucleotides near the ends of the antisense oligonucleotides are less than mismatch-free antisense oligonucleotides.
  • target-specific cleavage has been reported to be achieved using antisense oligonucleotides of 13 nucleobases, including those with one or three mismatches.
  • the nucleotide sequence encoding DUX4 includes, but is not limited to, the following sequences.
  • the sequence described in GenBank Accession No. NM_001293798.2. (Incorporated herein as SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing).
  • the splicing variant of SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing is also referred to as the mature mRNA of DUX4-FL1 or DUX4.
  • the sequences described in GenBank Accession No. NM_0013060682 (incorporated herein as SEQ ID NO: 5 in the Sequence Listing).
  • the splicing variant of SEQ ID NO: 5 in the Sequence Listing is also referred to as DUX4-FL2.
  • the sequence described in GenBank Accession No. NM_0013638201. (incorporated herein as SEQ ID NO: 6 in the Sequence Listing).
  • the splicing variant of SEQ ID NO: 6 in the Sequence Listing is also referred to as DUX4-s. -SNP of each of the above splicing variants.
  • the sequences listed in each SEQ ID NO: in the Sequence Listings of the Examples contained herein are independent of any modification to the sugar moiety, nucleoside linkage or nucleobase.
  • the modified oligonucleotides defined by SEQ ID NOs in the Sequence Listing can independently contain one or more modifications to sugar moieties, nucleoside linkages or nucleobases.
  • the modified oligonucleotide described by the compound number indicates a combination of a nucleobase sequence and a motif.
  • the target region is a structurally defined region of the target nucleic acid.
  • the target region may include one or more of the 3'UTR, 5'UTR, exon, intron, exon / intron junction, coding region, translation initiation region, translation termination region or other defined nucleic acid region. ..
  • a structurally defined region for DUX4 can be obtained by accession number from a sequence database such as NCBI, and such information is incorporated herein by reference.
  • the target region may include sequences from the 5'target site of one target segment within the target region to the 3'target site of another target segment within the target region.
  • Targeting involves the determination of at least one target segment in which the modified oligonucleotide hybridizes, resulting in the desired effect.
  • the desired effect is a reduction in mRNA target nucleic acid levels.
  • the desired effect is a reduction in the level of protein encoded by the target nucleic acid, or a phenotypic change associated with the target nucleic acid.
  • the target area can include one or more target segments. Multiple target segments within the target region may overlap. Alternatively, they do not have to overlap. In certain embodiments, the target segment within the target region is separated by no more than about 300 nucleotides. In certain embodiments, the target segment within the target region is 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 or 10 nucleotides of the target nucleic acid, or approximately. It is separated by a large number of nucleotides, which are these numbers of nucleotides, or less than these numbers of nucleotides, or in the range defined by any two of the above values.
  • the target segment within the target region is separated by 5 or less or about 5 or less nucleotides of the target nucleic acid. In certain embodiments, the target segment is continuous. A target region defined by a range having a starting nucleic acid that is either a 5'target site or a 3'target site listed herein is intended.
  • Suitable target segments can be found within the 5'UTR, coding region, 3'UTR, intron, exon or exon / intron junction.
  • a target segment containing a start codon or a stop codon is also a suitable target segment.
  • Suitable target segments can specifically exclude certain structurally defined regions, such as start codons or stop codons.
  • Determining the appropriate target segment can include comparing the sequence of the target nucleic acid with other sequences throughout the genome. For example, the BLAST algorithm can be used to identify similar regions between different nucleic acids. This comparison can prevent the selection of modified oligonucleotide sequences that can hybridize to sequences other than the selected target nucleic acid (ie, non-target or off-target sequences) in a non-specific manner.
  • modified oligonucleotides within the active target region eg, as defined by the percentage reduction in target nucleic acid levels.
  • reduced levels of DUX4 mRNA are indicators of inhibition of DUX4 protein expression.
  • Decreased levels of DUX4 protein are also indicators of inhibition of target mRNA expression.
  • phenotypic changes such as reducing myotonia and reducing myopathy, can be indicators of inhibition of DUX4 mRNA and / or protein expression.
  • hybridization occurs between the modified oligonucleotides disclosed herein and the DUX4 nucleic acid.
  • the most common mechanism of hybridization involves hydrogen bonds between complementary nucleobases of a nucleic acid molecule (eg, Watson-Crick, Hoogsteen or reverse Hoogsteen-type hydrogen bonds).
  • the strength of hybridization can be expressed by the melting temperature Tm.
  • Tm is the temperature at which 50% of hybridized double-stranded nucleic acids dissociate into single-stranded nucleic acids, and varies depending on the salt conditions of the solution, nucleic acid length, base sequence, etc., but the higher the Tm value, the stronger the hybridization. ..
  • Hybridization occurs under various conditions. Stringent conditions are sequence-dependent and are determined by the nature and composition of the nucleic acid molecule to hybridize.
  • the modified oligonucleotides provided herein are specifically hybridizable with the DUX4 nucleic acid.
  • Modified oligonucleotides and target nucleic acids are complementary to each other.
  • Modified oligonucleotides can hybridize over one or more segments of the DUX4 nucleic acid so that no intervening or adjacent segments are involved in the hybridization event (eg, loop structure, mismatch or hairpin structure).
  • the modified oligonucleotides provided herein or specific portions thereof are 90%, 91%, 92% relative to the DUX4 nucleic acid, target region, target segment or specific portion thereof. , 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100% complementary. In certain embodiments, the modified oligonucleotide is at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, relative to the DUX4 nucleic acid, target region, target segment or specific portion thereof.
  • 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18 or at least 19 consecutive nucleobases eg, SEQ ID NOs: 2, 3 in the Sequence Listing, Includes at least eight contiguous nucleobases of the nucleobase sequence set forth in any one of 4, 7-64, 69-97 or 102-112).
  • the percentage of complementarity of the modified oligonucleotide with the target nucleic acid can be determined using conventional methods and is measured throughout the modified oligonucleotide.
  • 18 of the 20 nucleobases of a modified oligonucleotide are complementary to the target region, and thus a modified oligonucleotide that appears to hybridize specifically corresponds to 90 percent complementarity. ..
  • the remaining non-complementary nucleobases may be clustered, interspersed with complementary nucleobases, and need not be contiguous with each other or with complementary nucleobases.
  • the percentage of complementarity of the modified oligonucleotide with the target nucleic acid region is determined by the BLAST program (basiclocal genomic search tools) and the PowerBLAST program (Altannet al., J. Mol.
  • the site of the non-complementary nucleobase may be the 5'end of the modified oligonucleotide or the 3'end.
  • the non-complementary nucleobase (s) may be a position within the modified oligonucleotide. If two or more non-complementary nucleobases are present, they may be continuous (ie, linked) or discontinuous.
  • the non-complementary nucleobase is located in the wing segment of the gapmer modified oligonucleotide.
  • modified oligonucleotides up to these nucleobase lengths include three or less, two or less, or one or less non-complementary nucleobases (s) for a target nucleic acid, such as a DUX4 nucleic acid or a particular portion thereof.
  • the modified oligonucleotides provided herein also include those that are complementary to a portion of the target nucleic acid.
  • “part” refers to a defined number of contiguous (ie, linked) nucleobases within a region or segment of a target nucleic acid. The “part” can also refer to a defined number of contiguous nucleobases of a modified oligonucleotide.
  • the modified oligonucleotide is complementary to at least 8 nucleobase moieties of the target segment.
  • the modified oligonucleotide is complementary to at least 10 nucleobase moieties of the target segment.
  • the modified oligonucleotide is complementary to at least 15 nucleobase moieties of the target segment. At least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, at least 19, at least 20 or more nucleobase moieties, or at least 20 or more nucleobase moieties of the target segment. Modified oligonucleotides that are complementary to the range defined by any two of these values are also intended.
  • modified oligonucleotides have a defined percent identity for a particular nucleotide sequence, a sequence number in a sequence listing, or a compound represented by a particular compound number, or a portion thereof. You can also do it.
  • a modified oligonucleotide is identical to the sequence disclosed herein if it has the same nucleobase pairing capability. For example, an RNA containing uracil instead of thymidine in the disclosed DNA sequence is considered to be identical to that DNA sequence because both uracil and thymidine are paired with adenine.
  • Short and extended versions of the modified oligonucleotides described herein and compounds having bases that are not identical to the modified oligonucleotides provided herein are also contemplated.
  • Non-identical bases may be adjacent to each other or dispersed throughout the modified oligonucleotide.
  • the percent identity of the modified oligonucleotide is calculated according to the number of bases having the same base pairing with respect to the sequence being compared.
  • the modified oligonucleotide or portion thereof is at least 90%, at least 91, with one or more of the exemplary modified oligonucleotides or SEQ ID NOs in the Sequence Listing or parts thereof disclosed herein. %, At least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% identical.
  • Modified nucleosides are base-sugar combinations.
  • the nucleobase (also known as base) portion of the nucleoside is usually the heterocyclic base portion.
  • Nucleotides are nucleosides that further contain a phosphate group covalently attached to the sugar moiety of the nucleoside.
  • the phosphate group can be linked to the 2', 3'or 5'hydroxyl moiety of the sugar.
  • Oligonucleotides are formed through covalent attachment of adjacent nucleosides to form linear polymer oligonucleotides. Within the oligonucleotide structure, the phosphate group is commonly referred to as forming the nucleoside-to-nucleoside bond of the oligonucleotide.
  • Modifications in modified oligonucleotides include internucleoside linkages, substitutions or changes to sugar moieties or nucleobases. Modified Modified oligonucleotides are preferred over the native form because of desirable properties such as enhanced cell uptake, enhanced affinity for nucleic acid targets, increased stability in the presence of nucleases or increased inhibitory activity. There are many.
  • Modified Inter-Nucleoside Bonds The naturally occurring inter-nucleoside bonds of RNA and DNA are 3'-5'phosphodiester bonds.
  • One or more modified, i.e., non-naturally occurring, modified oligonucleotides with internucleoside linkages for example, enhance cell uptake, enhance affinity for target nucleic acids and increase stability in the presence of nucleases. Often selected over modified oligonucleotides with naturally occurring internucleoside linkages because of desirable properties such as.
  • Oligonucleotides with modified nucleoside bonds include nucleoside bonds that retain a phosphorus atom and nucleoside bonds that do not have a phosphorus atom.
  • Representative phosphorus-containing nucleoside bonds include, but are not limited to, one or more of phosphodiesters, phosphotriesters, methylphosphonates, phosphoramidates and phosphorothioates. Methods for preparing phosphorus-containing and non-phosphorus-containing bonds are well known.
  • the modified oligonucleotide targeting the DUX4 nucleic acid comprises one or more modified nucleoside linkages.
  • the modified nucleoside bond is a phosphorothioate bond.
  • each nucleoside bond of the modified oligonucleotide is a phosphorothioate nucleoside bond.
  • the modified oligonucleotide of the present invention preferably contains at least one nucleoside constituting the modified sugar.
  • the modified sugar refers to a modified sugar moiety, and a modified oligonucleotide containing one or more of the modified sugars has advantageous features such as enhanced nuclease stability and increased binding affinity.
  • At least one of the modified sugars preferably has a bicyclic sugar or a substituted sugar moiety.
  • nucleosides with modified sugars are, but are not limited to, 5'-vinyl, 5'-methyl (R or S), 4'-S, 2'-F, 2'-OCH 3 , 2'- Examples include nucleosides containing OCH 2 CH 3 , 2'-OCH 2 CH 2 F and 2'-O (CH 2 ) 2 OCH 3 substituents. Substituents at the 2'position are allyl, amino, azide, thio, O-allyl, OC 1 to C 10 alkyl, OCF 3 , OCH 2 F, O (CH 2 ) 2 SCH 3 , O (CH 2 ).
  • each R l , R m and R n are independently H or substituted or unsubstituted C 1 to C 10 alkyl). You can also choose from.
  • nucleosides with bicyclic sugars include, but are not limited to, nucleosides containing crosslinks between the 4'and 2'ribosyl ring atoms.
  • the oligonucleotides provided herein comprise a nucleoside having one or more bicyclic sugars whose crosslinks include one of the following formulas: 4'-(CH 2). ) -O-2'(LNA);4'-(CH 2 ) -S-2';4'-(CH 2 ) 2- O-2'(ENA);4'-CH (CH 3 ) -O -2'and 4'-CH (CH 2 OCH 3 ) -O-2' (and their analogues, see US Pat. No.
  • Each of the aforementioned bicyclic nucleosides can be prepared with one or more stereochemical sugar configurations, including, for example, ⁇ -L-ribofuranose and ⁇ -D-ribofuranose.
  • GuNA a nucleoside with bicyclic sugars
  • ALNA [Ms] ALNA [mU]
  • ALNA [ipU] ALNA [Trz]
  • ALNA [Oxz] have been reported as crosslinked artificial nucleic acid amino LNA (ALNA) (Japanese patent application, Japanese Patent Application No. See 2018-212424).
  • a crosslink containing one linking group is included, in which X is 0, 1 or 2; n is 1, 2, 3 or 4; each Ra and R b is independently H, a protective group.
  • Hydroxyl C 1 to C 12 alkyl, substituted C 1 to C 12 alkyl, C 2 to C 12 alkenyl, substituted C 2 to C 12 alkenyl, C 2 to C 12 alkynyl, substituted C 2 to C 12 alkynyl, aromatic ring.
  • the cross-linking of the bicyclic sugar moiety is-[C (R a ) (R b )] n -,-[C (R a ) (R b )] n- O-, -C. (R a R b ) -N (R) -O- or -C (R a R b ) -ON (R)-.
  • cross-linking 4'-CH 2 -2 ', 4' - (CH 2) 2 -2 ', 4' - (CH 2) 3 -2 ', 4'-CH 2 -O -2'
  • the nucleoside having a bicyclic sugar in this case is also called LNA
  • the cross-linking of the bicyclic sugar moiety is 4'-CH 2- O-2'-(LNA) or -CH 2- N (R)-, where each R is independent.
  • -SO 2- CH 3 ALNA [Ms]
  • -CO-NH-CH 3 ALNA [mU]
  • 1,5-dimethyl-1,2,4-triazole-3-yl ALNA [Trz]
  • -CO-NH-CH CH 3
  • ANA [ipU] 5-Methyl-1,2,4-oxadiazole-3-yl
  • Japanese Patent Application No. Application 2018-212424 Japanese Patent Application No. Application 2018-212424.
  • nucleosides with bicyclic sugars are further defined by isomer configuration.
  • a nucleoside containing a 4'-(CH 2 ) -O-2'crosslink may be present in an ⁇ -L-configuration or a ⁇ -D-configuration.
  • nucleosides with bicyclic sugars include those with 4'-2'crosslinks, and such crosslinks include, but are not limited to, ⁇ -L-4'-(CH 2 ). -O-2', ⁇ -D-4'-CH 2- O-2', 4'-(CH 2 ) 2- O-2', 4'-CH 2 -ON (R) -2' 4, 4'-CH 2- N (R) -O-2', 4'-CH (CH 3 ) -O-2', 4'-CH 2- S-2', 4'-CH 2 -CH ( CH 3) -2 'and 4' - (CH 2) 3 -2 '( wherein, R, H, a protecting group, C 1 ⁇ C 12 alkyl or C 1 by ⁇ C 12 alkyl which may be substituted, (Urea or guanidine).
  • nucleosides with bicyclic sugars have the following formula: During the ceremony Bx is the heterocyclic base portion;
  • the T a and T b are each independently a hydrogen atom, a hydroxyl protecting group, optionally phosphate groups be substituted, a covalent bond etc. to phosphorus moiety or support;
  • Z a is C 1 to C 6 alkyl, C 2 to C 6 alkenyl, C 2 to C 6 alkynyl, substituted C 1 to C 6 alkyl, substituted C 2 to C 6 alkenyl, substituted C 2 to C 6 alkynyl, acyl. , Substituted acyl, substituted amide, thiol or substituted thiol.
  • NJ c J d in the formula, each J c , J d and Je are independently H, C 1 to C 6 alkyl or substituted C 1 to C 6 alkyl and X is O or NJ c ). It is mono- or poly-substituted with an independently selected substituent.
  • nucleosides with bicyclic sugars have the following formula: During the ceremony Bx is the heterocyclic base portion;
  • the T a and T b are each independently a hydrogen atom, a hydroxyl protecting group, optionally phosphate groups be substituted, a covalent bond etc. to phosphorus moiety or support;
  • nucleosides with bicyclic sugars have the following formula: During the ceremony Bx is the heterocyclic base portion;
  • the T a and T b are each independently a hydrogen atom, a hydroxyl protecting group, optionally phosphate groups be substituted, a covalent bond etc. to phosphorus moiety or support;
  • R d is C 1 to C 6 alkyl, substituted C 1 to C 6 alkyl, C 2 to C 6 alkenyl, substituted C 2 to C 6 alkynyl, C 2 to C 6 alkynyl or substituted C 2 to C 6 alkynyl.
  • Each q a , q b , q c and q d are independently H, halogen, C 1 to C 6 alkyl, substituted C 1 to C 6 alkyl, C 2 to C 6 alkyne, substituted C 2 to C 6 alkyne, respectively.
  • nucleosides with bicyclic sugars have the following formula: During the ceremony Bx is the heterocyclic base portion;
  • the T a and T b are each independently a hydrogen atom, a hydroxyl protecting group, optionally phosphate groups be substituted, a covalent bond etc. to phosphorus moiety or support;
  • q a , q b , q e and q f are independently hydrogen, halogen, C 1 to C 12 alkyl, substituted C 1 to C 12 alkyl, C 2 to C 12 alkenyl, substituted C 2 to C 12 alkyne, respectively.
  • adenine, cytosine, guanine, 5-methyl-cytosine, thymine and uracil bicyclic nucleosides are their oligomerizations and nucleic acids. It is described together with the recognition characteristics (Koshkine al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630).
  • the synthesis of nucleosides with bicyclic sugars is also described in WO98 / 39352 and WO99 / 14226.
  • 2'-amino-BNA bicyclic nucleosides in this case also referred to as ALNA
  • ALNA a three-dimensionally restricted high affinity oligonucleotide analog
  • nucleosides with bicyclic sugars have the following formula: During the ceremony Bx is the heterocyclic base portion;
  • the T a and T b are each independently a hydrogen atom, a hydroxyl protecting group, optionally phosphate groups be substituted, a covalent bond etc. to phosphorus moiety or support;
  • Each q i , q j , q k and q l are independently H, halogen, C 1 to C 12 alkyl, substituted C 1 to C 12 alkyl, C 2 to C 12 alkyne, substituted C 2 to C 12 alkyne, respectively.
  • the nucleosides having bicyclic sugars are, but are not limited to, as shown below.
  • A ⁇ -L-methyleneoxy (4'-CH 2- O-2') BNA
  • B ⁇ -D-methyleneoxy (4'-CH 2- O-2') BNA
  • C Ethyleneoxy (4'-(CH 2 ) 2- O-2') BNA
  • D Aminooxy (4'-CH 2 -ON (R) -2') BNA
  • E Oxyamino (4'-CH 2- N (R) -O-2') BNA
  • F Methyl (methyleneoxy) (4'-CH (CH 3 ) -O-2') BNA (also called constrained ethyl or cEt)
  • G Methylene-thio (4'-CH 2- S-2') BNA
  • H Methylene-amino (4'-CH 2- N (R) -2') BNA
  • I Methyl carbocyclic (4'-CH
  • Bx is the base moiety and R is independently a protecting group, C 1 to C 6 alkyl or C 1 to C 6 alkoxy.
  • nucleosides with bicyclic sugars have the following general formula: [During the ceremony, B is a nucleobase; X and Y can independently include hydrogen atoms, hydroxyl-protecting groups, optionally substituted phosphate groups, covalent bonds to phosphorus moieties or supports, etc.] nucleosides (WO98 /). See 39352). A typical specific example is the following formula: The nucleotides indicated by can be mentioned.
  • nucleosides including bicyclics, have the following general formula: [In the formula, B is a nucleic acid base, and R 3 , R 4 , R 5 and R 6 are each independently a hydrogen atom or a C 1-6 alkyl group which may be substituted with one or more substituents. Yes, R 7 and R 8 are independently hydrogen atoms, hydroxyl protecting groups, optionally substituted phosphate groups, covalent bonds to phosphorus moieties or supports, etc., and R 9 , R 10 , R Each of 11 is a C 1-6 alkyl group or an amino protecting group which may be independently substituted with a hydrogen atom or one or more substituents. ] It is a nucleoside represented by (see, for example, International Publication No. 2014/046212, International Publication No. 2017/047816).
  • nucleosides containing bicyclic sugars are represented by the following general formula (I):
  • B is a nucleobase
  • R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are C 1-6 alkyl groups, each independently substituted with a hydrogen atom or one or more substituents
  • R 5 and R 6 are independently hydrogen atoms, hydroxyl-protecting groups, optionally substituted phosphate groups, covalent bonds to phosphorus moieties or supports, etc .
  • m is 1 or 2
  • X is the following formula (II-1): Is the group indicated by; Symbols described in formula (II-1): Indicates the binding point with the 2'-amino group
  • One of R 7 and R 8 is a hydrogen atom and the other is a methyl group that may be substituted with one or more substituents.
  • a typical embodiment is a nucleoside in which one of R 7 and R 8 is a hydrogen atom and the other is an unsubstituted methyl group.
  • a nucleoside comprising a bicyclic sugar is a nucleoside having the general formula (I) as defined in ALNA [mU] above, wherein the nucleoside comprises, X is the following formula (II-1): It is a group indicated by; One of R 7 and R 8 is a hydrogen atom and the other is an isopropyl group which may be substituted with one or more substituents (see, eg, Japanese Patent Application No. 2018-212424).
  • a typical embodiment is a nucleoside in which one of R 7 and R 8 is a hydrogen atom and the other is an unsubstituted isopropyl group.
  • the nucleoside comprising the bicyclic formula is a nucleoside having the above general formula (I), wherein X is the following formula (II-2): Is the group indicated by; A is a triazolyl group that may be substituted with one or more substituents (see, eg, Japanese Patent Application No. 2018-212424).
  • a typical example of ALNA [Trz] is that A is a triazolyl group which may have one or more methyl groups, more specifically 1,5-dimethyl-1,2,4-. It is a nucleoside, which is a triazole-3-yl group.
  • a typical embodiment is an oxadiazolyl group in which A may have one or more methyl groups, more specifically a 5-methyl-1,2,4-oxadiazole-3-yl group. Is a nucleoside or nucleotide.
  • the nucleoside comprising the bicyclic formula is a nucleoside having the above general formula (I), wherein X is the following general formula (II-3): Is the group indicated by; M is a sulfonyl group substituted with a methyl group that may be substituted with one or more substituents (see, eg, Japanese Patent Application No. 2018-212424).
  • a typical embodiment of ALNA [Ms] is a nucleoside, where M is a sulfonyl group substituted with an unsubstituted methyl group.
  • the nucleoside is modified by replacing the ribosyl ring with a sugar substitute.
  • modifications include, but are not limited to, substitute ring systems (sometimes referred to as DNA analogues), such as morpholino rings, cyclohexenyl rings, cyclohexyl rings or tetrahydropyranyl rings, such as:
  • substitute ring systems sometimes referred to as DNA analogues
  • morpholino rings such as morpholino rings, cyclohexenyl rings, cyclohexyl rings or tetrahydropyranyl rings, such as:
  • sugar substitutes having the following formula are selected: During the ceremony Bx is the heterocyclic base portion; T 3 and T 4 independently link the tetrahydropyran nucleoside analog to the oligomer compound, or one of T 3 and T 4 links the tetrahydropyran nucleoside analog to the oligomer compound or oligonucleotide.
  • An internucleoside linking group the other of T 3 and T 4 being an H, a hydroxyl protecting group, a linking conjugate group or a 5'or 3'-terminal group;
  • q 1 , q 2 , q 3 , q 4 , q 5 , q 6 and q 7 are independently H, C 1 to C 6 alkyl, substituted C 1 to C 6 alkyl, C 2 to C 6 alkenyl, substituted, respectively.
  • X is O, S or NJ 1
  • each J 1 , J 2 and J 3 are H or C 1 to C 6 independently.
  • q 1 , q 2 , q 3 , q 4 , q 5 , q 6 and q 7 are H, respectively. In certain embodiments, at least one of q 1 , q 2 , q 3 , q 4 , q 5 , q 6 and q 7 is other than H. In certain embodiments, at least one of q 1 , q 2 , q 3 , q 4 , q 5 , q 6 and q 7 is methyl. In certain embodiments, a THP nucleoside in which one of R 1 and R 2 is F is provided. In certain embodiments, R 1 is fluoro and R 2 is H; R 1 is methoxy and R 2 is H, and R 1 is methoxy ethoxy and R 2 is. It is H.
  • Such sugar substitutes include, but are not limited to, those referred to in the art as hexitol nucleic acid (HNA), altritor nucleic acid (ANA) and mannitol nucleic acid (MNA) (Leumann, C.J. , Bioorg. & Med. Chem .. , 2002, 10, 841-854).
  • HNA hexitol nucleic acid
  • ANA altritor nucleic acid
  • MNA mannitol nucleic acid
  • the sugar substitute comprises a ring having more than 5 atoms and more than 1 heteroatom.
  • a morpholinosaccharide moiety has been reported (eg, Braachet al., Biochemistry, 2002, 41, 4503-4510; and US Pat. No. 5,698,685; 5,166. 315; 5,185,444; and 5,034,506).
  • morpholino means a sugar substitute having the following structure:
  • the morpholino can be modified, for example, by adding or changing various substituents from the morpholino structure described above. Such sugar substitutes are referred to herein as "modified morpholino".
  • the oligonucleotide comprises one or more modified cyclohexenyl nucleosides, which are nucleosides having a 6-membered cyclohexenyl in place of the pentoflanosyl residue of the naturally occurring nucleoside.
  • Modified cyclohexenyl nucleosides include, but are not limited to, those described in the art (eg, WO2010 / 0366696, Robeynset al., J., published on April 10, 2010, relating to sharing. Am. Chem.
  • Certain modified cyclohexenyl nucleosides have the following formula: During the ceremony Bx is the heterocyclic base portion; T 3 and T 4 are each independently linking nucleoside interlinking groups that link the cyclohexenyl nucleoside analog to the oligonucleotide compound, or one of T 3 and T 4 links the tetrahydropyran nucleoside analog to the oligonucleotide compound.
  • T 3 and T 4 is an H, hydroxyl protecting group, linking conjugate group or 5'-or 3'-terminal group; q 1 , q 2 , q 3 , q 4 , q 5 , q 6 , q 7 , q 8 and q 9 are independently H, C 1 to C 6 alkyl, substituted C 1 to C 6 alkyl, C 2 respectively. ⁇ C 6 alkenyl, substituted C 2 to C 6 alkenyl, C 2 to C 6 alkynyl, substituted C 2 to C 6 alkynyl or other sugar substituents.
  • nucleobase moiety (natural, modified or a combination thereof) is maintained during hybridization with a suitable nucleic acid target.
  • nucleobases Modifications or substitutions of nucleobases (or bases) are structurally distinguishable from naturally occurring or synthetic unmodified nucleobases and are more functionally compatible with these unmodified nucleobases. Both natural and modified nucleobases can be involved in hydrogen bonding. Such nucleobase modifications can impart nuclease stability, binding affinity or some other beneficial biological properties to the modified oligonucleotide. Modified nucleobases include synthetic and naturally occurring nucleobases such as 5-methylcytosine (5-me-C). Certain nucleobase substitutions, including 5-methylcytosine substitutions, are particularly useful for increasing the binding affinity of modified oligonucleotides for the target nucleic acid.
  • 5-methylcytosine substitutions have been shown to increase double-stranded stability of nucleic acids by 0.6-1.2 ° C (Sanghvi, YS, CRC, ST and Lebleu, B., eds., Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278).
  • nucleic acid bases include 5-hydroxymethylcytosine, xanthin, hypoxanthin, 2-aminoadenine, 6-methyl and other alkyl derivatives of adenine and guanine, 2-propyl and other alkyl derivatives of adenine and guanine, 2 -Thiouracil, 2-thiothymine and 2-thiocitosine, 5-halolasyl and cytosine, 5-propynyl (-C ⁇ C-CH 3 ) uracil and citocin and other alkynyl derivatives of pyrimidine base, 6-azouracil, citocin and timine, 5 -Urasyl (pseudouracil), 4-thiouracil, 8-halo, 8-amino, 8-thiol, 8-thioalkyl, 8-hydroxyl and other 8-substituted adenines and guanines, 5-halos, especially 5-bromo, 5 -
  • the heterocyclic base moiety can also include those in which the purine or pyrimidine base is replaced with another heterocycle, for example, 7-deaza-adenine, 7-deazaguanosine, 2-aminopyridine and 2-pyridone.
  • Nucleobases particularly useful for increasing the binding affinity of modified oligonucleotides include 5-substituted pyrimidines, 6-azapyrimidines and N-2, N-6 and O-6 substituted purines (2-aminopropyladenine, Includes 5-propynyl uracil and 5-propynylcytosine).
  • the modified oligonucleotide that targets the DUX4 nucleobase comprises one or more modified nucleobases. In certain embodiments, the modified oligonucleotide that targets the DUX4 nucleobase comprises one or more modified nucleobases. In certain embodiments, the modified nucleobase is 5-methylcytosine. In certain embodiments, each cytosine is 5-methylcytosine.
  • modified oligonucleotides that target the DUX4 nucleic acid give the modified oligonucleotide increased inhibitory activity, increased binding affinity for the target nucleic acid, or resistance to degradation by in vivo nucleases. It has chemically modified subunits that are placed in a pattern or motif to give properties such as sex.
  • Chimeric modified oligonucleotides typically have at least one modified region to provide increased resistance to degradation by nucleases, increased cell uptake, increased binding affinity to target nucleic acids and / or increased inhibitory activity. Including.
  • the second region of the chimeric modified oligonucleotide can optionally act as a substrate for the intracellular endonuclease RNase H, which cleaves the RNA: DNA double-stranded RNA strand.
  • Modified oligonucleotides with a gapmer motif are chimeric modified oligonucleotides.
  • the internal region with multiple nucleotides that aids in RNase H cleavage is located between the external region with multiple nucleotides that is chemically different from the nucleoside in the internal region.
  • the gap segment In the case of modified oligonucleotides with a gapmer motif, the gap segment generally serves as a substrate for cleavage by endonucleases, whereas the wing segment contains a modified nucleoside.
  • the gapmer regions are distinguished by the type of sugar moiety, each containing a different region.
  • the type of sugar moiety used to distinguish the gapmer region is ⁇ -D-ribonucleoside, ⁇ -D-deoxyribonucleoside, 2'-modified nucleoside (such 2'- Modified nucleosides can include, among others, 2'-MOE and 2'-O-CH 3 ) and bicyclic sugar-modified nucleosides (such bicyclic sugar-modified nucleosides include LNA, GuNA, ALNA [Ms]. ], ALNA [mU], ALNA [ipU], ALNA [Trz] and / or those having ALNA [Oxz]) can be included.
  • 2'- Modified nucleosides can include, among others, 2'-MOE and 2'-O-CH 3
  • bicyclic sugar-modified nucleosides include LNA, GuNA, ALNA [Ms]. ], ALNA [mU], ALNA [ipU], ALNA [Trz] and / or those having ALNA [Oxz
  • Wing-gap-wing motifs are often described as "XYZ", where "X” represents the length of the 5'wing region, "Y” represents the length of the gap region, and “Z” represents the length of the gap region. Represents the length of the 3'wing region.
  • the gapmer described as "XYZ” has a configuration such that the gap segment is located directly adjacent to each of the 5'wing segment and the 3'wing segment. Therefore, there are no intervening nucleotides between the 5'wing segment and the gap segment or between the gap segment and the 3'wing segment. Any of the modified oligonucleotides described herein may have a gapmer motif.
  • X and Z are the same, in other embodiments they are different.
  • Y is 8 to 16 nucleotides.
  • X, Y or Z are 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,25,30 It can be either one or more nucleotides. Therefore, the gapmer is not limited to these, for example, 2-10-3, 2-14-2, 2-15-2, 2-16-2, 3-6-7, 3-7-5.
  • the modified oligonucleotide that targets the DUX4 nucleic acid has a 3-10-3 gapmer motif. In certain embodiments, the modified oligonucleotide that targets the DUX4 nucleic acid has a 3-9-3 gapmer motif. In certain embodiments, the modified oligonucleotide that targets the DUX4 nucleic acid has a 3-9-4 gapmer motif. In certain embodiments, the modified oligonucleotide that targets the DUX4 nucleic acid has a 3-8-5 gapmer motif.
  • the modified oligonucleotides of these gapmers are at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16 of the nucleobase sequences of any of the exemplary modified oligonucleotides described herein. , At least 17, at least 18, at least 19, at least 20, at least 21, at least 22, at least 23, at least 24, at least 25, at least 26, at least 27, at least 28, at least 29, or at least 30 contiguous nucleobases. (For example, at least eight consecutive nucleobases of the nucleobase sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 2, 3, 4, 7-64, 69-97 or 102-112 in the sequence listing). ..
  • the present invention provides oligomeric compounds, including oligonucleotides.
  • such oligonucleotides include one or more chemical modifications.
  • the chemically modified oligonucleotide comprises one or more modified sugars.
  • the chemically modified oligonucleotide comprises one or more modified nucleobases.
  • the chemically modified oligonucleotide comprises one or more modified nucleoside linkages.
  • the chemical modification (sugar modification, nucleobase modification and / or binding modification) defines a pattern or motif.
  • the patterns of sugar moieties, nucleoside linkages and chemical modification of nucleobases are independent of each other.
  • oligonucleotides can be described by their sugar-modifying motifs, nucleoside-binding motifs and / or nucleobase-modifying motifs (as used herein, nucleobase-modifying motifs are independent of the sequence of nucleobases and are nucleic acids. Explain chemical modifications to bases).
  • the oligonucleotide is one or more types of modified sugar moieties and / or natural, arranged along the oligonucleotide or region thereof in a defined pattern or sugar-modified motif. Contains sugar moieties present in. Such motifs can include any of the sugar modifications and / or other known sugar modifications discussed herein.
  • the oligonucleotide comprises or consists of a region having a gapmer sugar modification motif, which comprises two outer regions, i.e. "wing segments", and one inner region, i.e. Includes "gap segment".
  • the three regions of the gapmer motif (5'wing segment, gap segment and 3'wing segment) form a continuous sequence of nucleosides, where at least some of the sugar moieties of the nucleoside in each wing segment are gaps. Different from at least some of the sugar moieties of the nucleosides of the segment.
  • the sugar moiety of the nucleoside of each wing segment closest to the gap segment is the nucleoside of the adjacent gap segment.
  • the sugar moieties within the gap segment are identical to each other.
  • the gap segment comprises one or more nucleosides having a sugar moiety that is different from the sugar moiety of one or more other nucleosides in the gap segment.
  • the sugar modification motifs of the two wing segments are identical to each other (symmetric gapmer).
  • the sugar-modified motif of the 5'wing segment differs from the sugar-modified motif of the 3'wing segment (asymmetric gapmer).
  • the Gapmer 5'wing segment consists of one to five linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment consists of 2 to 5 linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment consists of 3 to 5 linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer's 5'wing segment consists of four or five linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment consists of one to four linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment consists of one to three linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment consists of one or two linked nucleosides.
  • the Gapmer 5'wing segment consists of two to four linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment consists of two or three linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer's 5'wing segment consists of three or four linked nucleosides. In certain embodiments, the 5'wing segment of the gapmer consists of one nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment consists of two linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment consists of three linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment consists of four linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer's 5'wing segment consists of five linked nucleosides.
  • the Gapmer 5'wing segment comprises at least one bicyclic nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises at least two bicyclic nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises at least three bicyclic nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises at least four bicyclic nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises at least one constrained ethyl nucleoside.
  • the Gapmer 5'wing segment comprises at least one LNA-containing nucleoside, GuNA-containing nucleoside, ALNA [Ms] -containing nucleoside, ALNA [mU] -containing nucleoside, ALNA [ipU] -containing nucleoside, ALNA [ Includes Trz] -containing nucleosides and / or ALNA [Oxz] -containing nucleosides.
  • each nucleoside in the Gapmer 5'wing segment is a bicyclic nucleoside.
  • each nucleoside in the Gapmer 5'wing segment is a constrained ethyl nucleoside.
  • each nucleoside in the 5'wing segment of Gapmer is an LNA-containing nucleoside, a GuNA-containing nucleoside, an ALNA [Ms] -containing nucleoside, an ALNA [mU] -containing nucleoside, an ALNA [ipU] -containing nucleoside, an ALNA [Trz. ] Containing nucleosides and / or ALNA [Oxz] -containing nucleosides.
  • the Gapmer 5'wing segment comprises at least one non-bicyclic modified nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises at least one 2'-substituted nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises at least one, eg, three, four, or five 2'-MOE nucleosides. In certain embodiments, the 5'wing segment of the gapmer comprises at least one 2'-OMe nucleoside. In certain embodiments, each nucleoside in the 5'wing segment of Gapmer is a non-bicyclic modified nucleoside.
  • each nucleoside in the 5'wing segment of Gapmer is a 2'-substituted nucleoside. In certain embodiments, each nucleoside in the Gapmer 5'wing segment is a 2'-MOE nucleoside. In certain embodiments, each nucleoside in the Gapmer 5'wing segment is a 2'-OMe nucleoside.
  • the Gapmer 5'wing segment comprises at least one bicyclic nucleoside and at least one non-bicyclic modified nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises at least one bicyclic nucleoside and at least one 2'-substituted nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises at least one bicyclic nucleoside and at least one 2'-MOE nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises at least one bicyclic nucleoside and at least one 2'-OMe nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises at least one bicyclic nucleoside and at least one 2'-deoxynucleoside.
  • the Gapmer 5'wing segment comprises at least one constrained ethyl nucleoside and at least one non-bicyclic modified nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises at least one constrained ethyl nucleoside and at least one 2'-substituted nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises at least one constrained ethyl nucleoside and at least one 2'-MOE nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises at least one constrained ethyl nucleoside and at least one 2'-OMe nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises at least one constrained ethyl nucleoside and at least one 2'-deoxy nucleoside.
  • the 5'wing segment of the gapmer is a 2'-MOE nucleoside, a 2'-OMe nucleoside, an LNA-containing nucleoside, a GuNA-containing nucleoside, an ALNA [Ms] -containing nucleoside, an ALNA [mU-containing nucleoside], It contains at least one modified nucleoside selected from ALNA [ipU] -containing nucleosides, ALNA [Trz] -containing nucleosides and / or ALNA [Oxz] -containing nucleosides.
  • the 5'wing segment of the gapmer is a 2'-MOE nucleoside, a 2'-OMe nucleoside, an LNA-containing nucleoside, a GuNA-containing nucleoside, an ALNA [Ms] -containing nucleoside, an ALNA [mU] -containing nucleoside, Includes at least two modified nucleosides selected from ALNA [ipU] -containing nucleosides, ALNA [Trz] -containing nucleosides and / or ALNA [Oxz] -containing nucleosides.
  • the 5'wing segment of the gapmer is a 2'-MOE nucleoside, a 2'-OMe nucleoside, an LNA-containing nucleoside, a GuNA-containing nucleoside, an ALNA [Ms] -containing nucleoside, an ALNA [mU] -containing nucleoside, Includes at least three modified nucleosides selected from ALNA [ipU] -containing nucleosides, ALNA [Trz] -containing nucleosides and / or ALNA [Oxz] -containing nucleosides.
  • the 5'wing segment of the gapmer is a 2'-MOE nucleoside, a 2'-OMe nucleoside, an LNA-containing nucleoside, a GuNA-containing nucleoside, an ALNA [Ms] -containing nucleoside, an ALNA [mU] -containing nucleoside, Includes at least four modified nucleosides selected from ALNA [ipU] -containing nucleosides, ALNA [Trz] -containing nucleosides and / or ALNA [Oxz] -containing nucleosides.
  • the 5'wing segment of the gapmer is a 2'-MOE nucleoside, a 2'-OMe nucleoside, an LNA-containing nucleoside, a GuNA-containing nucleoside, an ALNA [Ms] -containing nucleoside, an ALNA [mU-containing nucleoside], Includes at least 5 modified nucleosides selected from ALNA [ipU] -containing nucleosides, ALNA [Trz] -containing nucleosides and / or ALNA [Oxz] -containing nucleosides.
  • the Gapmer 5'wing segment comprises two LNA-containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises three LNA-containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises four LNA-containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises three ALNA [Ms] -containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises two GuNA-containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises three GuNA-containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises three ALNA [mU] -containing nucleosides.
  • the Gapmer 5'wing segment comprises three ALNA [ipU] -containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises two LNA-containing nucleosides and one GuNA-containing nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises three ALNA [Trz] -containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises three ALNA [Ms] -containing nucleosides and one 2'-OMe nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises three ALNA [Ms] -containing nucleosides and two 2'-OMe nucleosides.
  • the Gapmer 5'wing segment comprises three constrained ethyl nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises two bicyclic nucleosides and two non-bicyclic modified nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises two constrained ethyl nucleosides and two 2'-OMe nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises two bicyclic nucleosides and two non-bicyclic modified nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises two constrained ethyl nucleosides and two 2'-OMe nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment comprises two constrained ethyl nucleosides and three 2'-OMe nucleosides.
  • the 5'wing segment of the gapmer consists of one ALNA [Ms] -containing nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment consists of two linked ALNA [Ms] -containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment consists of three linked ALNA [Ms] -containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment consists of four linked ALNA [Ms] -containing nucleosides. In certain embodiments, the 5'wing segment of the gapmer consists of five linked ALNA [Ms] -containing nucleosides.
  • the 5'wing segment of the gapmer consists of a linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides and one 2'-OMe nucleoside. In certain embodiments, the 5'wing segment of the gapmer consists of a linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides and two 2'-OMe nucleosides. In certain embodiments, the 5'wing segment of the gapmer consists of a linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides and 3 2'-OMe nucleosides.
  • the 5'wing segment of the gapmer consists of three linked ALNA [Ms] -containing nucleosides and one 2'-MOE nucleoside.
  • the Gapmer 5'wing segment consists of two linked ALNA [Ms] -containing nucleosides and two 2'-MOE nucleosides.
  • the Gapmer 5'wing segment consists of three linked LNA-containing nucleosides and two 2'-MOE nucleosides.
  • the Gapmer 5'wing segment consists of two linked LNA-containing nucleosides and two 2'-MOE nucleosides.
  • the Gapmer 5'wing segment consists of one, two or three linked ALNA [Ms] -containing nucleosides and comprises one 5-methylcytosine. In certain embodiments, the 5'wing segment of the gapmer consists of one, two or three linked ALNA [Ms] -containing nucleosides and comprises two 5-methylcytosines. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment consists of one, two or three linked ALNA [Ms] -containing nucleosides and comprises three 5-methylcytosines.
  • the Gapmer 3'wing segment consists of 1 to 8 linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of 2 to 5 linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of 3 to 5 linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of four or five linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of one to four linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of one to three linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of one or two linked nucleosides.
  • the Gapmer 3'wing segment consists of two to four linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of two or three linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of three or four linked nucleosides. In certain embodiments, the 3'wing segment of the gapmer consists of one nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of two linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of three linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of four linked nucleosides.
  • the Gapmer 3'wing segment consists of five linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of six linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of seven linked nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of eight linked nucleosides.
  • the Gapmer 3'wing segment comprises at least one bicyclic nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises at least two bicyclic nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises at least three bicyclic nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises at least four bicyclic nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises at least one constrained ethyl nucleoside.
  • the Gapmer 3'wing segment comprises at least one LNA-containing nucleoside, GuNA-containing nucleoside, ALNA [Ms] -containing nucleoside, ALNA [mU] -containing nucleoside, ALNA [ipU] -containing nucleoside, ALNA [ Includes Trz] -containing nucleosides and / or ALNA [Oxz] -containing nucleosides.
  • each nucleoside in the Gapmer 3'wing segment is a bicyclic nucleoside.
  • each nucleoside in the Gapmer 3'wing segment is a constrained ethyl nucleoside.
  • each nucleoside in the Gapmer 3'wing segment is an LNA-containing nucleoside, a GuNA-containing nucleoside, an ALNA [Ms] -containing nucleoside, an ALNA [mU] -containing nucleoside, an ALNA [ipU] -containing nucleoside, an ALNA [Trz. ] Containing nucleosides and / or ALNA [Oxz] -containing nucleosides.
  • the Gapmer 3'wing segment comprises at least one non-bicyclic modified nucleoside. In certain embodiments, the 3'wing segment of the gapmer comprises at least one 2'-substituted nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises at least one 2'-MOE nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises at least one 2'-OMe nucleoside. In certain embodiments, each nucleoside in the Gapmer 3'wing segment is a non-bicyclic modified nucleoside. In certain embodiments, each nucleoside in the Gapmer 3'wing segment is a 2'-substituted nucleoside.
  • each nucleoside in the Gapmer 3'wing segment is a 2'-MOE nucleoside. In certain embodiments, each nucleoside in the Gapmer 3'wing segment is a 2'-OMe nucleoside.
  • the Gapmer 3'wing segment comprises at least one bicyclic nucleoside and at least one non-bicyclic modified nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises at least one bicyclic nucleoside and at least one 2'-substituted nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises at least one bicyclic nucleoside and at least one 2'-MOE nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises at least one bicyclic nucleoside and at least one 2'-OMe nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises at least one bicyclic nucleoside and at least one 2'-deoxynucleoside.
  • the Gapmer 3'wing segment comprises at least one constrained ethyl nucleoside and at least one non-bicyclic modified nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises at least one constrained ethyl nucleoside and at least one 2'-substituted nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises at least one constrained ethyl nucleoside and at least one 2'-MOE nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises at least one constrained ethyl nucleoside and at least one 2'-OMe nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises at least one constrained ethyl nucleoside and at least one 2'-deoxy nucleoside.
  • the 3'wing segment of the gapmer is a 2'-MOE nucleoside, a 2'-OMe nucleoside, an LNA-containing nucleoside, a GuNA-containing nucleoside, an ALNA [Ms] -containing nucleoside, an ALNA [mU] -containing nucleoside, It contains at least one modified nucleoside selected from ALNA [ipU] -containing nucleosides, ALNA [Trz] -containing nucleosides and / or ALNA [Oxz] -containing nucleosides.
  • the 3'wing segment of the gapmer is a 2'-MOE nucleoside, a 2'-OMe nucleoside, an LNA-containing nucleoside, a GuNA-containing nucleoside, an ALNA [Ms] -containing nucleoside, an ALNA [mU] -containing nucleoside, Includes at least two modified nucleosides selected from ALNA [ipU] -containing nucleosides, ALNA [Trz] -containing nucleosides and / or ALNA [Oxz] -containing nucleosides.
  • the 3'wing segment of the gapmer is a 2'-MOE nucleoside, a 2'-OMe nucleoside, an LNA-containing nucleoside, a GuNA-containing nucleoside, an ALNA [Ms] -containing nucleoside, an ALNA [mU] -containing nucleoside, It contains at least three modified nucleosides selected from ALNA [ipU] -containing nucleosides, ALNA [Trz] -containing nucleosides and / or ALNA [Oxz] -containing nucleosides.
  • the 3'wing segment of the gapmer is a 2'-MOE nucleoside, a 2'-OMe nucleoside, an LNA-containing nucleoside, a GuNA-containing nucleoside, an ALNA [Ms] -containing nucleoside, an ALNA [mU] -containing nucleoside, Contains at least four modified nucleosides selected from ALNA [ipU] -containing nucleosides, ALNA [Trz] -containing nucleosides and / or ALNA [Oxz] -containing nucleosides.
  • the 3'wing segment of the gapmer is a 2'-MOE nucleoside, a 2'-OMe nucleoside, an LNA-containing nucleoside, a GuNA-containing nucleoside, an ALNA [Ms] -containing nucleoside, an ALNA [mU] -containing nucleoside, Includes at least 5 modified nucleosides selected from ALNA [ipU] -containing nucleosides, ALNA [Trz] -containing nucleosides and / or ALNA [Oxz] -containing nucleosides.
  • the 3'wing segment of the gapmer is a 2'-MOE nucleoside, a 2'-OMe nucleoside, an LNA-containing nucleoside, a GuNA-containing nucleoside, an ALNA [Ms] -containing nucleoside, an ALNA [mU] -containing nucleoside, Includes at least 6 modified nucleosides selected from ALNA [ipU] -containing nucleosides, ALNA [Trz] -containing nucleosides and / or ALNA [Oxz] -containing nucleosides.
  • the 3'wing segment of the gapmer is a 2'-MOE nucleoside, a 2'-OMe nucleoside, an LNA-containing nucleoside, a GuNA-containing nucleoside, an ALNA [Ms] -containing nucleoside, an ALNA [mU] -containing nucleoside, Includes at least 7 modified nucleosides selected from ALNA [ipU] -containing nucleosides, ALNA [Trz] -containing nucleosides and / or ALNA [Oxz] -containing nucleosides.
  • the 3'wing segment of the gapmer is a 2'-MOE nucleoside, a 2'-OMe nucleoside, an LNA-containing nucleoside, a GuNA-containing nucleoside, an ALNA [Ms] -containing nucleoside, an ALNA [mU] -containing nucleoside, Includes at least eight modified nucleosides selected from ALNA [ipU] -containing nucleosides, ALNA [Trz] -containing nucleosides and / or ALNA [Oxz] -containing nucleosides.
  • the Gapmer 3'wing segment comprises two LNA-containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises three LNA-containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises four LNA-containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises three ALNA [Ms] -containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises two GuNA-containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises three GuNA-containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises three ALNA [mU] -containing nucleosides.
  • the Gapmer 3'wing segment comprises three ALNA [ipU] -containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing comprises two LNA-containing nucleosides and one GuNA-containing nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises three ALNA [Trz] -containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises three ALNA [Ms] -containing nucleosides and one 2'-OMe nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises three ALNA [Ms] -containing nucleosides and two 2'-OMe-containing nucleosides.
  • the Gapmer 3'wing segment comprises three 2'-MOE nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises four 2'-MOE nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises five 2'-MOEs. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises three ALNA [Ms] -containing nucleosides and one 2'-MOE-containing nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises three ALNA [Ms] -containing nucleosides and two 2'-MOE nucleosides.
  • the Gapmer 3'wing segment comprises two ALNA [Ms] -containing nucleosides and two 2'-MOE nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises two ALNA [Ms] -containing nucleosides and three 2'-MOE nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises three ALNA [Ms] -containing nucleosides and five 2'-MOE nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises one ALNA [Ms] -containing nucleoside and three 2'-MOE nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises two LNA-containing nucleosides and two 2'-MOE nucleosides.
  • the Gapmer 3'wing segment comprises three constrained ethyl nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises two bicyclic nucleosides and two non-bicyclic modified nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises two constrained ethyl nucleosides and two 2'-OMe nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises two bicyclic nucleosides and two non-bicyclic modified nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises two constrained ethyl nucleosides and two 2'-OMe nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment comprises two constrained ethyl nucleosides and three 2'-OMe nucleosides.
  • the Gapmer 3'wing segment consists of one ALNA [Ms] -containing nucleoside. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of two linked ALNA [Ms] -containing nucleosides. In certain embodiments, the 3'wing segment of the gapmer consists of three linked ALNA [Ms] -containing nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of four linked ALNA [Ms] -containing nucleosides. In certain embodiments, the gapmer's 3'wing segment consists of five linked ALNA [Ms] -containing nucleosides.
  • the 3'wing segment of the gapmer consists of 3, 4 or 5 linked 2'-MOE nucleosides. In certain embodiments, the gapmer's 3'wing segment consists of one, two or three ALNA [Ms] -containing nucleosides and one 2'-OMe nucleoside linked together. In certain embodiments, the 3'wing segment of the gapmer consists of a linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides and two 2'-OMe nucleosides. In certain embodiments, the 3'wing segment of the gapmer consists of a linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides and 3 2'-OMe nucleosides.
  • the 3'wing segment of the gapmer consists of one, two or three ALNA [Ms] -containing nucleosides and one 2'-MOE nucleoside linked.
  • the Gapmer 3'wing segment consists of a linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides and two 2'-MOE nucleosides.
  • the 3'wing segment of the gapmer consists of a linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides and 3 2'-MOE nucleosides.
  • the Gapmer 3'wing segment consists of a linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides and 5 2'-MOE nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of two linked LNA-containing nucleosides and two 2'-MOE nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of one, two or three linked ALNA [Ms] -containing nucleosides and comprises one 5-methylcytosine. In certain embodiments, the Gapmer 3'wing segment consists of one, two or three linked ALNA [Ms] -containing nucleosides and comprises two 5-methylcytosines.
  • the Gapmer 3'wing segment consists of one, two or three linked ALNA [Ms] -containing nucleosides and comprises three 5-methylcytosines. In certain embodiments, the Gapmer's 3'wing segment consists of linked 1, 2, 3, 4 or 5 2'-MOE nucleosides and comprises one 5-methylcytosine.
  • the Gapmer 5'wing segment consists of one ALNA [Ms] -containing nucleoside and the 3'wing segment consists of one ALNA [Ms] -containing nucleoside.
  • the 5'wing segment of the gapmer consists of two linked ALNA [Ms] -containing nucleosides
  • the 3'wing segment consists of two linked ALNA [Ms] -containing nucleosides.
  • the segment consists of a gapmer 5'wing segment consisting of three linked ALNA [Ms] -containing nucleosides and a 3'wing segment consisting of three linked ALNA [Ms] -containing nucleosides.
  • the 5'wing segment of the gapmer consists of four linked ALNA [Ms] -containing nucleosides
  • the 3'wing segment consists of four linked ALNA [Ms] -containing nucleosides.
  • the gapmer's 5'wing segment consists of five linked ALNA [Ms] -containing nucleosides
  • the 3'wing segment consists of five linked ALNA [Ms] -containing nucleosides.
  • the Gapmer 5'wing segment consists of a linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides and one 2'-OMe nucleoside, and the 3'wing segment is linked.
  • the Gapmer 5'wing segment consists of a linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides and two 2'-OMe nucleosides, and the 3'wing segment is linked. Consists of 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides and two linked 2'-OMe nucleosides. In certain embodiments, the Gapmer 5'wing segment consists of a linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides and 3 2'-OMe nucleosides, and the 3'wing segment is linked.
  • the Gapmer 5'wing segment consists of a linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides and 1 or 2 2'-MOE nucleosides
  • the 3'wing segment is Consists of linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides and 1 or 2 2'MOE nucleosides.
  • the gapmer's 5'wing segment consists of linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides
  • the 3'wing segment is linked 1, 2 or 3 It consists of an ALNA [Ms] -containing nucleoside and one, two or three 2'-MOE nucleosides.
  • the Gapmer 5'wing segment consists of linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides
  • the 3'wing segment is linked 1, 2, 3, It consists of 4 or 5 2'-MOE nucleosides.
  • the Gapmer 5'wing segment consists of linked 1, 2, 3, 4 or 5 2'-MOE nucleosides, and the 3'wing segment is linked 1, 2 Or it consists of three ALNA [Ms].
  • the gapmer 5'wing segment consists of one, two or three ALNA [Ms] -containing nucleosides linked together and contains one 5-methylcytosine, plus the gapmer 3'.
  • the wing segment consists of one, two or three ALNA [Ms] -containing nucleosides linked together and contains one 5-methylcytosine.
  • the Gapmer 5'wing segment consists of linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides and contains 2 5-methylcytosine, plus Gapmer 3'.
  • the wing consists of linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides and contains one 5-methylcytosine.
  • the Gapmer 5'wing segment consists of linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides and contains 2 5-methylcytosine, plus Gapmer 3'.
  • Wing segments consist of 1, 2 or 3 linked ALNA [Ms] -containing nucleosides and contain 2 5-methylcytosines.
  • the Gapmer 5'wing segment consists of linked 1, 2 or 3 ALNA [Ms] -containing nucleosides and contains 3 5-methylcytosine, plus Gapmer 3'.
  • the wing segment consists of one, two or three linked ALNA [Ms] -containing nucleosides and contains three 5-methylcytosines.
  • the gapmer 5'wing segment consists of one, two or three ALNA [Ms] -containing nucleosides linked together and contains one 5-methylcytosine, plus the gapmer 3'.
  • the wing segment consists of linked 1, 2, 3, 4 or 5 2'-MOE nucleosides and contains one 5-methylcytosine.
  • the gapmer's 5'wing segment consists of one, two or three linked ALNA [Ms] -containing nucleosides
  • the gapmer's 3'wing segment consists of linked 1, 2 or 3 It consists of one ALNA [Ms] -containing nucleoside and one, two or three 2'-MOE nucleosides and contains one 5-methylcytosine.
  • the gap segment of the gapmer comprises 10 consecutive nucleosides, 2'in any of the 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10th nucleosides. -Contains OMe nucleosides, the remaining nucleosides are deoxy nucleosides.
  • modified oligonucleotides can be mixed with one or more pharmaceutically acceptable active or inert substances. .. Compositions and methods for the formulation of pharmaceutical compositions are determined by a number of criteria, including but not limited to the route of administration, the extent of the disease or the dose administered.
  • the modified oligonucleotide that targets the DUX4 nucleic acid can be utilized in the pharmaceutical composition.
  • Pharmaceutically acceptable diluents include phosphate buffered saline (PBS).
  • PBS is a diluent suitable for use in compositions delivered parenterally.
  • a pharmaceutical composition comprising a modified oligonucleotide targeting the DUX4 nucleic acid and a pharmaceutically acceptable diluent is used in the manner described herein.
  • the pharmaceutically acceptable diluent is PBS.
  • Any pharmaceutical composition comprising a modified oligonucleotide can provide (directly or indirectly) a biologically active metabolite or residue thereof when administered to animals, including humans.
  • the present disclosure also relates to pharmaceutically acceptable salts of modified oligonucleotides, prodrugs, pharmaceutically acceptable salts of such prodrugs and other bioequivalents.
  • Suitable pharmaceutically acceptable salts include, but are not limited to, sodium and potassium salts.
  • Prodrugs can include incorporating additional nucleosides at one or both ends of a modified oligonucleotide that is cleaved by an endogenous nuclease in the body to form an active modified oligonucleotide.
  • the modified oligonucleotide can be covalently attached to one or more moieties or conjugates that enhance the activity, cell distribution or uptake of the resulting modified oligonucleotide.
  • Typical conjugated groups include cholesterol and lipid moieties.
  • Further conjugate groups include carbohydrates, phospholipids, biotin, phenazine, folic acid, phenanthridine, anthraquinone, acridine, fluorescein, rhodamine, coumarin and pigments.
  • Modified oligonucleotides can also be modified to have one or more stabilizing groups that are generally attached to one or both ends of the modified oligonucleotide, for example to enhance properties such as nuclease stability. ..
  • the cap structure is included in the stabilizing group. These terminal modifications protect modified oligonucleotides with terminal nucleic acids from degradation by exonucleases and may aid in intracellular delivery and / or localization.
  • the cap may be present at the 5'end (5'cap) or the 3'end (3'cap) or at both ends. Cap structures are well known in the art and include, for example, an inverted deoxydebase cap. Additional 3'and 5'stabilizing groups that can be used to cap one or both ends of the modified oligonucleotide to provide nuclease stability include those disclosed in WO 03/004602.
  • modified oligonucleotides on the level, activity or expression of DUX4 nucleic acid can be tested in vitro in a variety of cell types.
  • Cell types used for such analysis are available from commercial suppliers (eg, American Culture Cell Conservation Agency, Manassus, VA; Zen-Bio, Inc., Research Triangle Park, NC; Clonetics Corporation, Walkersville, MD).
  • the cells are cultured using commercially available reagents (eg, InvitrogenLife Technologies, Carlsbad, CA) according to the supplier's instructions.
  • Exemplary cell types include, but are not limited to, C2C12 cells, HepG2 cells, Hep3B cells, primary hepatocytes, A549 cells, GM04281 fibroblasts and LLC-MK2 cells. These cells can be used by transfecting a vector expressing human DUX4 mRNA.
  • the vector is preferably expressed as a fusion protein with a reporter gene such as luciferase or GFP, and examples thereof include psiCHECK-2 vector (Promega).
  • Modified oligonucleotides are introduced into cells, for example, by the lipofection method.
  • One reagent commonly used to introduce modified oligonucleotides into cultured cells includes the cationic lipid transfection reagent LIPOFECTIN® (Invitrogen, Carlsbad, CA).
  • LIPOFECTIN® cationic lipid transfection reagent
  • the modified oligonucleotide is mixed with LIPOFECTIN® in OPTI-MEM® 1 (Invitrogen, Carlsbad, CA) to the desired final concentration of the modified oligonucleotide and typically per 100 nM modified oligonucleotide.
  • OPTI-MEM® 1 Invitrogen, Carlsbad, CA
  • LIPOFECTAMINE2000® (Invitrogen, Carlsbad, CA).
  • the modified oligonucleotide is mixed with LIPOFECTAMINE2000® in OPTI-MEM® 1 serum reduction medium (Invitrogen, Carlsbad, CA) to the desired concentration of modified oligonucleotide and typically a 100 nM modified oligonucleotide.
  • OPTI-MEM® 1 serum reduction medium Invitrogen, Carlsbad, CA
  • LIPOFECTAMINE® concentrations ranging from 2 to 12 ⁇ g / mL per nucleotide.
  • Another reagent used to introduce modified oligonucleotides into cultured cells includes Cytofectin® (Invitrogen, Carlsbad, CA).
  • the modified oligonucleotide is mixed with Cytofectin® in OPTI-MEM® 1 serum reduction medium (Invitrogen, Carlsbad, CA) to the desired concentration of modified oligonucleotide and typically 100 nM modified oligonucleotide.
  • OPTI-MEM® 1 serum reduction medium Invitrogen, Carlsbad, CA
  • Another technique used to introduce modified oligonucleotides into cultured cells is electroporation.
  • Modified oligonucleotides are introduced into cells without using LIFOFECTIN or the like.
  • the method for suppressing the expression of the target gene of the modified oligonucleotide in this case is called the Gymnosis method.
  • Treat cells with modified oligonucleotides by conventional methods. Typically, cells are harvested 16-48 hours after treatment with the modified oligonucleotide, at which time RNA or protein levels of the target nucleic acid are determined by methods known in the art and described herein. Measure. In general, when processing is performed with multiple iterations, the data is shown as the average of the iterations.
  • modified oligonucleotide concentration depends on the cell lineage. Methods for determining the optimal modified oligonucleotide concentration for a particular cell lineage are well known in the art.
  • modified oligonucleotides are typically used at concentrations ranging from 1 nM to 300 nM.
  • modified oligonucleotides are used at higher concentrations ranging from 625 to 20,000 nM. From the inhibition rate of gene expression at each concentration, the concentration IC 50 of the modified oligonucleotide that suppresses gene expression by 50% can be calculated.
  • RNA isolation RNA analysis can be performed on whole cell RNA or poly (A) + mRNA. Methods of RNA isolation are well known in the art. RNA is prepared using methods well known in the art, eg, using TRIZOL® reagents (Invitrogen, Carlsbad, CA) according to the manufacturer's recommended protocol.
  • target nucleic acid levels or expression can be assayed by a variety of methods known in the art.
  • target nucleic acid levels can be quantified, for example, by Northern blot analysis, competitive polymerase chain reaction (PCR) or quantitative real-time PCR.
  • RNA analysis can be performed on whole cell RNA or poly (A) + mRNA. Methods of RNA isolation are well known in the art.
  • Northern blot analysis is also customary in the art. Quantitative real-time PCR is performed using a commercially available ABI PRISM® 7600, 7700 or 7900 sequence detection system available from PE-Applied Biosystems, Foster City, CA and used according to the manufacturer's instructions. , Can be conveniently achieved.
  • Quantitative Real-Time PCR Analysis of Target RNA Levels use the ABI PRISM® 7600, 7700 or 7900 sequence detection system (PE-Applied Biosystems, Foster City, CA) according to the manufacturer's instructions. And can be achieved by quantitative real-time PCR. Quantitative real-time PCR methods are well known in the art.
  • RNA Prior to real-time PCR, the isolated RNA is subjected to a reverse transcriptase (RT) reaction, which in turn produces complementary DNA (cDNA) used as a substrate for real-time PCR amplification.
  • RT and real-time PCR reactions are performed sequentially in the same sample well.
  • Reagents for RT and real-time PCR are obtained from Invitrogen (Carlsbad, CA). The RT and real-time PCR reactions are carried out by a method well known to those skilled in the art.
  • the amount of gene (or RNA) target obtained by real-time PCR can be determined using expression levels of genes with constant expression, such as cyclophilin A, or using RIBOGREEN® (Invitrogen, Inc. Carlsbad, CA). Standardize by quantifying total RNA. Expression of cyclophilin A is quantified by real-time PCR at the same time as the target, multiple times or separately. Total RNA is quantified using RIBOGREEN® RNA quantifying reagents (Invitrogen, Inc. Eugene, OR). A method for quantifying RNA by RIBOGREEN® is described in Jones, L. et al. J. , Etal, (Analytical Biochemistry, 1998, 265, 368-374). RIBOGREEN® fluorescence is measured using a CYTOFLUOR® 4000 instrument (PEApplied Biosystems).
  • probe and primer to hybridize to the DUX4 nucleic acid.
  • Methods for designing probes and primers for real-time PCR are well known in the art and can include the use of software such as PRIMER EXPRESS® software (Applied Biosystems, Foster City, CA).
  • DUX4 protein levels can be determined by various methods well known in the art, such as immunoprecipitation, Western blotting (immunoblotting), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), quantitative protein assay, protein activity assay ( For example, it can be examined or quantified by caspase activity assay), immunohistochemistry, immunocytochemistry or fluorescence activated cell sorting (FACS).
  • Antibodies to the target can be identified and obtained from various sources, such as the MSRS catalog of antibodies (Aerie Corporation, Birmingham, MI), or prepared by conventional monoclonal or polyclonal antibody production methods well known in the art. be able to.
  • the level of DUX4 gene expression can also be measured using a reporter gene such as luciferase.
  • a reporter gene such as luciferase.
  • the expression of the DUX4 gene can be measured by the amount of luminescence of Renilla luciferase, which is a fusion protein with DUX4, and is corrected by the amount of luminescence of Firefly luciferase present on the vector. Therefore, effects such as non-specific cell death can be excluded.
  • Modified oligonucleotides are tested in animals to assess their ability to inhibit DUX4 expression and alter their phenotype. The study was conducted in normal animals or with experimental disease models such as DUX4 transgenic mouse models (Jones, T. et al. PLoS One. 2018; 13 (2), Article number e0192657) and genetically modified AAV viruses. It can be carried out in the DUX4 gene-expressing mice used (Wallace, LM et al. Mol Ther. 2012; 20 (7): 1417, Wallace, LM et al. Ann Neurol. 2011; 69 (3): 540).
  • experimental disease models such as DUX4 transgenic mouse models (Jones, T. et al. PLoS One. 2018; 13 (2), Article number e0192657) and genetically modified AAV viruses. It can be carried out in the DUX4 gene-expressing mice used (Wallace, LM et al. Mol Ther. 2012; 20 (7): 1417, Wallace,
  • the modified oligonucleotide is formulated in a pharmaceutically acceptable diluent, such as phosphate buffered saline, for administration to animals. Administration involves parenteral route of administration. Following a treatment period with the modified oligonucleotide, RNA is isolated from the tissue and changes in DUX4 nucleic acid expression are measured. Changes in DUX4 protein levels are also measured.
  • a pharmaceutically acceptable diluent such as phosphate buffered saline
  • Certain antisense mechanisms FSHD are caused by aberrant expression of the DUX4 gene, especially the splicing variant of DUX4-FL, in muscle.
  • DUX4 is also expressed in healthy subjects, for example, in the testis.
  • splicing variants of DUX4 expressed in the testis, etc. include exon 1, exon 2, exon 6, exon 7 splicing variants, exon 1, exon 2, exon 4, exon 5, exon 6, A splicing variant of exon 7 is expressed (Non-Patent Document 1 above).
  • Certain biomarkers At least in part, the level of DUX4 protein accumulation regulates gene expression, such as MBD3L2, ZSCAN4, TRIM43, DEFB103, ZNF217 (Non-Patent Document 2 above).
  • blood creatine kinase can be measured as a marker for myopathy.
  • kits for treating an individual, comprising administering one or more of the pharmaceutical compositions described herein, are provided herein. ..
  • the individual has FSHD.
  • a method for improving symptoms associated with FSHD is provided herein in a subject who requires it.
  • methods are provided that reduce the incidence of one or more symptoms associated with FSHD.
  • methods are provided to reduce the severity of symptoms associated with FSHD.
  • symptoms associated with FSHD include myotonia, myotonia, facial weakness, ptosis, inability to whistle, reduced facial facial expression, depressed or angry facial expressions, and speech. Difficulty, facioscapulohum weakness (deformation of the winged scapula, stroking shoulder, etc.), lower limb weakness, hearing loss, and heart disease.
  • the method of the invention comprises administering a therapeutically effective amount of a compound that targets the DUX4 nucleic acid to an individual in need thereof.
  • administration of the modified oligonucleotide targeting the DUX4 nucleic acid is at least about 15%, at least about 20%, at least about 25%, at least about 30%, at least about 35%, at least about 40%. At least about 45%, at least about 50%, at least about 55%, at least about 60%, at least about 65%, at least about 70%, at least about 75%, at least about 80%, at least about 85%, at least about 90%, It results in a reduction in DUX4 expression in the range defined by at least about 95% or at least about 99% or any two of these values.
  • a pharmaceutical composition comprising a modified oligonucleotide that targets DUX4 is used to prepare a medicament for treating a patient suffering from or susceptible to a DUX4-related disease such as FSHD.
  • a DUX4-related disease such as FSHD.
  • the methods described herein are described herein for the sequences set forth in SEQ ID NOs: 2, 3, 4, 7-64, 69-97 or 102-112 of the Sequence Listing. Includes administration of a compound containing a modified oligonucleotide having a continuous nucleobase moiety to be made.
  • the compounds and pharmaceutical compositions described herein are administered parenterally.
  • parenteral administration is by infusion.
  • the infusion may be long-term or continuous, short-term or intermittent.
  • the infused medicinal agent is pumped.
  • parenteral administration is by injection (eg, bolus injection). The injection can be delivered by syringe.
  • Parenteral administration includes, for example, subcutaneous administration, intravenous administration, intramuscular administration, intraarterial administration, intraperitoneal administration or intracranial administration, for example, intrathecal or intraventricular administration. Administration may be continuous or long-term, short-term or intermittent.
  • delivery of the compounds of the pharmaceutical compositions described herein results in a down-regulation of at least 70% of the level of the target mRNA and / or target protein. In certain embodiments, delivery of the compounds or compositions described herein is at least 1 day, at least 3 days, at least 5 days, at least 7 days, at least 10 days, at least 14 days, at least 20 days.
  • the modified oligonucleotide is administered once daily, once every three days, once a week, once every other week, once every three weeks, once a month, once every two months, for three months. Delivered by injection or infusion once every 6 months, twice a year or once a year.
  • the first agent comprising the modified oligonucleotide of the invention is co-administered with one or more second agents.
  • a second agent is designed to treat the same FSHD as the first agent described herein.
  • such a second agent is designed to treat a disease, disorder or condition different from that of the first agent described herein.
  • such a second agent is designed to treat the unwanted side effects of one or more of the pharmaceutical compositions described herein.
  • the second agent is co-administered with the first agent to treat the undesired effects of the first agent.
  • the second agent is co-administered with the first agent to provide a concomitant effect.
  • the second agent is co-administered with the first agent to provide a synergistic effect.
  • the first agent and one or more second agents are administered simultaneously. In certain embodiments, the first agent and the one or more second agents are administered at different times. In certain embodiments, the first agent and one or more second agents are prepared together in a single pharmaceutical formulation. In certain embodiments, the first agent and one or more second agents are prepared separately.
  • the compounds disclosed herein are composed of oligomers by the phosphoramidite method using commercially available DNA / RNA synthetic amidites (including LNAs). Can be done.
  • the artificial nucleic acid GuNA can synthesize oligomers by the methods described in WO2014 / 046212 and WO2017 / 047816.
  • the artificial nucleic acids ALNA [Ms], ALNA [mU], ALNA [ipU], ALNA [Trz] and ALNA [Oxz] can synthesize oligomers by the method described in Japanese Patent Application No. 2018-212424.
  • the compounds disclosed herein enjoy the benefits of one or more in vitro and / or in vivo properties that are improved compared to suitable comparative compounds.
  • the compound of compound number 2 having the sequence (5'to 3') gnagttctccgcggt (where n is 5-methylcytosine and is incorporated herein as SEQ ID NO: 3 in the Sequence Listing), ie A compound in which the 5'wing and the 3'wing are gapmers consisting of three ALNA [Ms] -containing nucleosides, and each nucleoside bond is a phosphorothioate bond.
  • the 5'wing and 3'wing are gapmers consisting of three ALNA [Ms] -containing nucleosides, and each nucleoside bond is a phosphorothioate bond.
  • RNA RNA having thymine (methylated uracil) relative to native uracil.
  • nucleic acid sequences provided herein are natural or modified RNAs, including, but not limited to, such nucleic acids having modified nucleobases. / Or it is intended to include nucleic acids containing any combination of DNA.
  • an oligomeric compound having the nucleobase sequence "ATCGATCG” includes any oligomeric compound having such a nucleobase sequence, whether modified or unmodified.
  • Such compounds including, but not limited to, those containing RNA bases, such as those having the sequence "AUCGAUCG”, and those having some DNA bases and some RNA bases, such as “AUCGATCG”, and " Included are oligomeric compounds with other modified or naturally occurring bases, such as "ATmeCGAUCG", where meC represents a cytosine base containing a methyl group at the 5-position.
  • each artificial nucleic acid used in the present specification is shown in the following structural formula with abbreviations. Structure and abbreviation of each artificial nucleic acid
  • Example 1 Synthesis and purification of modified oligonucleotide compounds for in vitro evaluation
  • Various amidites LNA amidite purchased from Chem Genes and Hongene Biotechnology Limited, 2'-OMe amidite purchased from Sigma-Aldrich, GuNA synthesized by the methods described in WO2014 / 046212, WO2017 / 047816, ALNA [Ms] , ALNA [mU], ALNA [ipU], ALNA [Trz] and ALNA [Oxz] are synthesized by the method described in Japanese Patent Application No. 2018-212424) to obtain a modified oligonucleotide compound as a DNA / RNA oligo.
  • nS-8II automatic nucleotide synthesizer
  • CPG CPG
  • polystyrene carrier All amidites were adjusted to a 0.1 M acetonitrile solution, the coupling time in the non-natural nucleoside was 10 minutes, and the other steps were performed under the standard conditions of nS-8II.
  • Activator 42 Sigma-Aldrich was used as the activator, and Sulfurizing Research II (Green Research Corporation) was used for thiolation.
  • the synthesized oligonucleotide was excised from the carrier and the base portion was deprotected by adding a 28% aqueous ammonia solution and reacting at 60-65 ° C. for 8 hours. Ammonia was concentrated and distilled off, and then reverse phase HPLC purification was performed.
  • modified oligonucleotide compounds for In vivo evaluation Using various amidites, modified oligonucleotide compounds are subjected to 20 to 50 ⁇ mol scale by DNA / RNA oligonucleotide automatic synthesizer AKTA oligopilot plus 10 (manufactured by GE Healthcare Japan Co., Ltd.). Was synthesized using a polystyrene carrier. The DNA amidite was adjusted to 0.1 M, the non-natural amidite was adjusted to 0.05 to 0.1 M acetonitrile solution, the coupling recycling time in the non-natural nucleoside was 20 minutes, and the first base was introduced into the universal carrier.
  • DNA amidite was adjusted to 0.1 M
  • the non-natural amidite was adjusted to 0.05 to 0.1 M acetonitrile solution
  • the coupling recycling time in the non-natural nucleoside was 20 minutes
  • the first base was introduced into the universal carrier.
  • the coupling, thiolation, and capping steps were carried out twice in succession.
  • the other steps were carried out under the standard conditions of AKTA oligopilot plus 10.
  • Activator 42 Sigma-Aldrich
  • Sulfurizing Research II Green Research Corporation
  • the synthesized oligonucleotide is decyanoethyl-treated on a solid phase with 20% diethylamine / acetonitrile or 50% triethylamine / acetonitrile, and a 28% aqueous ammonia solution is added and reacted at 60-65 ° C. for 8 to 24 hours.
  • Ammonia was concentrated and distilled off, and then purified by an anion exchange column. The excess salt contained after the anion exchange was removed by a desalting column.
  • Example 3 Purity Confirmation of Modified Oligonucleotide Compound
  • the purification and purity confirmation of the synthesized modified oligonucleotide compound were carried out by reverse phase HPLC under the following conditions. Each compound had a purity of 85% or more.
  • Example 4 Molecular Weight Measurement of Modified Oligonucleotide Compound
  • Mobile phase Solution A: 400 mM hexafluoroisopropanol, 15 mM triethylamine aqueous solution
  • Example 5 Molecular Weight of Synthesized Modified Oligonucleotide Compounds
  • the synthesized modified oligonucleotide compounds are shown in Table 1 below. In the notation of the compound, each nucleotide is represented by three letters. However, the nucleotide at the 3'end is represented by two letters because there is no nucleoside bond.
  • the 5'target site of the DUX4 mature mRNA of the modified oligonucleotide (the position of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing corresponding to the 3'end of the modified oligonucleotide) is shown.
  • Example 6 In vitro DUX4 knockdown activity test (Lipofection method) C2C12 cells were seeded at 1.25 ⁇ 10 4 cells / cm 2 on a transfection reagent containing a mixture of DUX4 modified oligonucleotide and Lipofectamine RNAi Reagent, and cultured overnight in a CO 2 incubator. The next day, using Lipofectamine 2000 Reagent, the reporter plasmid cloned into the multicloning site of psiCHECK-2 vector (Promega) was transfected into the cells and cultured in a CO 2 incubator for about 24 hours.
  • psiCHECK-2 vector Promega
  • Example 7 In vitro DUX4 knockdown activity test (Gymnosis method) C2C12 cells were seeded in a DUX4 modified oligonucleotide solution at 6 ⁇ 10 3 cells / cm 2 and cultured in a CO 2 incubator for 2 nights. After 2 days, the medium containing the DUX4 modified oligonucleotide solution was removed from the cells, and Wash was performed with a new medium. Then, using Lipofectamine 2000 Reagent, the reporter plasmid cloned into the multi-cloning site of psiCHECK-2 vector (Promega) was transfected into cells and cultured in a CO 2 incubator for about 24 hours.
  • psiCHECK-2 vector Promega
  • Example 8 Synthesis of modified oligonucleotide compounds and in vitro DUX4 knockdown activity test (Gymnosis method) Table 3 shows the results of the newly synthesized modified oligonucleotide compound and the in vitro DUX4 knockdown activity test performed on the compound in the same manner as in Example 7.
  • each nucleotide is represented by three letters. However, the nucleotide at the 3'end is represented by two letters because there is no nucleoside bond.
  • the 5'target site of the DUX4 mature mRNA of the modified oligonucleotide (the position of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing corresponding to the 3'end of the modified oligonucleotide) is shown.
  • Compound Nos. 137 to 247 Compared with a compound (Compound Nos. 137 to 247) containing a nucleobase sequence complementary to the equilength portion in the region of positions 126 to 147, 232 to 248, 1306 to 1325 or 1472 to 1495 of DUX4 mature mRNA.
  • Compound No. 248 (complementary to positions 112 to 127 of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing), 249 (complementary to positions 162 to 177 of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing), 250 (complementary to positions 162 to 177 of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing) It was found that the inhibition rates of 251 (complementary to positions 1273 to 1288 of SEQ ID NO: 1 in the sequence listing) were extremely weak.
  • Example 9 An adeno-associated virus vector AAV-DUX4 (SignaGen Laboratories, Cat. # SL100862) incorporating the DUX4 mature mRNA of SEQ ID NO: 1 in the In vivo DUX4 knockdown activity test sequence listing was prepared.
  • AAV-DUX4 was intramuscularly administered to the tibialis anterior muscle of an 8-week-old C57BL / 6J mouse (male, Charles River Japan) under isoflurane (Pfizer Japan Inc.) anesthesia.
  • modified oligonucleotides targeting DUX4 were prepared in saline to 1, 3, 10 and 50 mg / 5 mL / kg and 8 week old C57BL / 6J mice (male, Nippon Charles River). ) was administered intravenously. Seventy-two hours later, total blood was collected from the abdominal vena cava under cervical dislocation or isoflurane (Pfizer Japan Inc.) anesthesia, and the patient was killed. After lethality, the tibialis anterior muscle was collected and RNAlater Soln. After immersing in (invitrogen), it was frozen at ⁇ 80 ° C.
  • RNA Tissue Kit (Promega) homogenization buffer was added to the tissues, disrupted using a multi-bead shocker, and RNA was purified according to the protocol described in the kit. 400 ng of RNA was reverse transcribed, and quantitative PCR was performed using the obtained cDNA. The knockdown activity of the modified oligonucleotide showed the amount ratio of DUX4 to 18S rRNA as a relative value to the vehicle group. The results for 1, 3, 10 and 50 mg / 5 mL / kg are shown in FIGS. 1 to 4. Compound No. 1 (sequence complementary to positions 233 to 248 of DUX4 mature mRNA), Compound No.
  • Example 10 Safety of modified oligonucleotides Compound numbers 3, 42, and 123 were intravenously administered to 6-week-old ICR mice (male, Charles River Japan) at a maximum dose of 100 mg / kg, and hepatotoxicity (ALT in blood). , AST elevation, and histopathological abnormal findings), nephrotoxicity (UN in blood, creatinine elevation, and histopathological abnormal findings), general symptom changes, and death were not observed.
  • Example 11 In vivo Tg Mouse DUX4 Knockdown Activity Test Using FLEx DUX4-heteto / HSA-MCM-hetero: TG (DUX4-Tg) and FLEx DUX4-wild / HSA-MCM-hetero: TG (MCM, control) in 9-week-old males (Male, introduced from The Jackson Laboratory to Charles River Japan Co., Ltd.). Modified oligonucleotides targeting DUX4 were prepared with physiological saline at a dose of 5 mL / kg for each dose, and administered intravenously once a week.
  • Example 12 Mouse continuous throwing toxicity test In 6-week-old ICR mice (male, Charles River Japan), modified oligonucleotides targeting DUX4 were prepared in physiological saline so as to be 100 mg / 5 mL / kg, and tail veins were prepared daily for 4 days. It was administered internally. 72 hours after the final administration, blood was collected from the posterior vena cava under isoflurane anesthesia, and a clinical biochemical test was performed. After phlebotomy, autopsy was performed and histopathological examination of the liver and kidney was performed.
  • Bilirubin elevated bile acids, histopathological abnormalities: degenerative necrosis of hepatocytes, hypertrophy of hepatocytes) and renal toxicity (elevated creatinine in serum) were observed.
  • the liver and kidney concentrations of Compound No. 123 under the test conditions were 323 and 251 ⁇ g / g, respectively, and the liver and kidney concentrations of Compound No. 247 were 111 and 185 ⁇ g / g, respectively, and the liver and kidney concentrations of Compound No. 113 were reached. No hepatic or nephrotoxicity was observed in spite of the tissue concentrations equal to or higher than the concentrations of 39.3 and 235 ⁇ g / g.
  • the modified oligonucleotide of the present invention can be used as a compound useful for treating, preventing or delaying the progression of DUX4-related diseases.
  • SEQ ID NO: 1 in the sequence listing indicates the base sequence of DUX4 mature mRNA.
  • SEQ ID NOs: 2 to 4 and 7 to 112 in the sequence listing indicate the base sequences of the modified oligonucleotides.
  • SEQ ID NOs: 5 to 6 in the sequence listing indicate the respective base sequences of DUX4-FL2 and DUX4-s as splicing variants of SEQ ID NO: 1.

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Abstract

本発明は、Ｄｏｕｂｌｅ　ｈｏｍｅｏｂｏｘ　４（ＤＵＸ４）遺伝子が異常発現した個体の、ＤＵＸ４を正常化させるための化合物、方法および医薬組成物、を提供することを目的とし、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであって、少なくとも８個の連続する核酸塩基配列であって、配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５'末端から１２６～１４７位、２３２～２４８位、１３０６～１３２５位または１４７２～１４９５位におけるその等長部分に相補的である核酸塩基配列を含み、前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基配列におけるその等長部分に少なくとも９０％相補性を有する、を提供する。

Description

ＤＵＸ４の発現を調節するための化合物、方法及び医薬組成物
　本発明は、動物におけるＤＵＸ４　ｍＲＮＡおよび蛋白質の発現を低減するための化合物、該化合物を用いる方法、および該化合物を含有する医薬組成物に関する。本発明の方法は、ＤＵＸ４関連疾患、例えば、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー（ｆａｃｉｏｓｃａｐｕｌｏｈｕｍｅｒａｌ　ｍｕｓｃｕｌａｒ　ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ：　ＦＳＨＤ）を治療し、予防し、または軽減するために有用である。
　顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー（ＦＳＨＤ）は、全世界で２０，０００分の１、欧州では７，５００分の１の概算頻度で発症する筋ジストロフィーであり、筋ジストロフィーの中で、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、筋強直性ジストロフィーに次いで３番目に多い疾患である。初発症状は、顔面や上肢・肩甲部・上肢帯の筋力低下で、進行とともに下肢帯、下肢にも障害が及び、約２０％の症例で４０歳までに車椅子生活となる（壮年期になっても軽度の顔面筋罹患のみの場合もある）。疼痛や神経性難聴および網膜症の合併も多い。約９割の患者は、２０歳までに発症する。重症患者（約４％）では乳児期から筋力低下を示す。
　ＦＳＨＤは原因遺伝子により、ＦＳＨＤ１とＦＳＨＤ２という２つの型に分類される。ＦＳＨＤ１型は、ＦＳＨＤ患者全体の約９５％を占める。ＦＳＨＤ１型患者では、４ｑ３５のＤ４Ｚ４リピート領域が遺伝的に短縮しており（１～１０個のＤ４Ｚ４リピート）、これによりＤ４Ｚ４リピート領域にコードされているＤＵＸ４の異常発現が起こる（健常人ではＤＵＸ４は発現しない）。ＦＳＨＤ２型は、ＦＳＨＤ患者全体の約５％で、ＳＭＣＨＤ１（ＤＮＡメチル化酵素）変異によりＤＵＸ４の異常発現が起こる。ＤＵＸ４は転写因子様の機能を持ち、下流にコードされる筋細胞のアポトーシスや筋萎縮を引き起こす遺伝子群を発現させる。ＤＵＸ４の異常発現は４ｑＡと４ｑＢの２つの対立遺伝子のうち、４ｑＡといわれる対立遺伝子を保有することによる。４ｑＡに存在するポリアデニレーションサイトがＤＵＸ４　ｍＲＮＡの安定化に必要である（非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３）。
　アンチセンス技術は、ある種の遺伝子産物の発現を調節するための有効な手段として明らかになりつつあり、したがって、ＤＵＸ４を調節するための、いくつかの治療的、診断的、及び研究的適用に比類なく有用であることが判明する可能性がある。
　ＤＵＸ４　ｍｉＲＮＡ をコードするアデノ随伴ウイルスを用いて、ＤＵＸ４遺伝子の発現を抑制する方法が報告されている（特許文献１）が、該アデノ随伴ウイルスを調製するのは煩雑であり、また必要とされる全身の筋肉へ送達することは困難である。
　ＤＵＸ４　ｓｈＲＮＡをコードするレンチウイルスを用いて、ＤＵＸ４遺伝子の発現を抑制する方法が報告されている（非特許文献２）が、該レンチウイルスを調製するのは煩雑であり、また必要とされる全身の筋肉へ送達することは困難である。さらに、四頭筋や僧帽筋細胞でのｉｎｖｉｔｒｏでの遺伝子抑制作用は２１％、４４％の残存活性があり、十分な効果とはいえない。
　複数のＤＵＸ４に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを連結した化合物が報告されている（特許文献２）が、修飾オリゴヌクレオチドではなく、またその阻害効果は十分とはいえない。
　ＤＵＸ４　ｍＲＮＡのスプライシング部位に結合するアンチセンスオリゴヌクレオチド化合物が報告されている（特許文献３）が、これらの化合物はイントロンを含むプレｍＲＮＡ選択的であるため成熟ｍＲＮＡに対しては阻害効果が弱く、またＬｉｐｏｆｅｃｔｉｏｎ法によるノックダウンのため、生体へ投与することは困難である。
　現在行われているＦＳＨＤ治療法としては、対症療法としてのリハビリテーション（ストレッチや運動）、ＮＳＡＩＤｓの投与、呼吸ケアなどであるが、効果は不十分で患者の負担は大きい。したがって、ＦＳＨＤを処置するための化合物、組成物および方法を提供することが、本明細書における目的である。
国際公開第２０１３／０１６３５２号 国際公開第２０１７／００７８８６号 米国公開第２０１２／０２２５０３４号
Ｓｎｉｄｅｒ　ｅｔ　ａｌ．，ＰＬｏＳ　２０１０，Ｖｏｌ．６（１０）　ｐ１ Ｆｅｒｒｅｂｏｅｕｆ　ｅｔ　ａｌ．，ＨｕｍａｎＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　２０１３，Ｖｏｌ．２３（１），ｐ１７１ Ｓａｃｃｏｎｉ　ｅｔ　ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ.Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ　２０１５，ｐ６０７
　本発明の課題は、ＤＵＸ４の発現を阻害するための、並びにＤＵＸ４関連疾患および／またはその症状を処置する、つまり、治療する、予防する、遅延させる、または改善させるための、化合物、方法、及び医薬組成物を提供することにある。本明細書に開示される化合物及び医薬組成物は、ＳＮＰなどの変異型ＤＵＸ４やＤＵＸ４のスプライシングバリアントをも阻害する。
　ある種の実施態様は、動物（ヒトを含む）においてＤＵＸ４の発現を低減させる方法であって、本明細書に記載される、ＤＵＸ４を標的とする修飾オリゴヌクレオチドを含有する化合物、または当該化合物を含有する医薬組成物を動物に投与することを含む方法を提供する。
　ある種の実施態様は、ＤＵＸ４を標的とする修飾オリゴヌクレオチドを含有する化合物または医薬組成物を動物に投与して、核内リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ　Ｈなど）を介するノックダウンする方法を提供する。また、当該修飾オリゴヌクレオチドを含有する化合物を投与して、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡの転写やＤＵＸ４蛋白質の翻訳を阻害する方法を提供する。修飾オリゴヌクレオチドは筋肉に分布するのが好ましく、特に骨格筋に分布するのが好ましい。
　ある種の実施態様は、ＦＳＨＤを有する動物を処置する方法を提供する。ある種の実施態様では、本発明の方法は、さらに本明細書に記載される、ＤＵＸ４を標的とする修飾オリゴヌクレオチドを含む、治療有効量の化合物または医薬組成物を動物に投与することを含む。ある種の実施態様では、本発明の方法は、ＦＳＨＤ１および／またはＦＳＨＤ２を有する動物を特定することを含む。
　ある種の実施態様は、筋萎縮・筋力低下を処置する、つまり、治療する、予防する、遅延させる、または改善させる方法を提供する。顔面頬部、肩、上腕部の筋力低下による、表情が乏しい／目を開けたまま寝る／上肢の挙上困難／翼状肩甲を緩和または悪化を遅延させることである。また、腰帯，下肢の筋力低下を防止し、更に、神経性難聴および網膜症の合併を防ぐことが好ましい。
　ある種の実施態様では、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１２９３７９８．２に記載の配列（配列表の配列番号１として本明細書に組み込まれる）を有する。配列表の配列番号１のＤＵＸ４　ｍＲＮＡのスプライシングバリアントは、ＤＵＸ４－ＦＬ１またはＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡともいう。ある種の実施態様では、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１３０６０６８．２に記載の配列（配列表の配列番号５として本明細書に組み込まれる）を有する。配列表の配列番号５のＤＵＸ４　ｍＲＮＡのスプライシングバリアントは、ＤＵＸ４－ＦＬ２ともいう。ある種の実施態様では、ＤＵＸ４は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１３６３８２０．１に記載の配列（配列表の配列番号６として本明細書に組み込まれる）を有する。配列表の配列番号６のＤＵＸ４　ｍＲＮＡのスプライシングバリアントは、ＤＵＸ４－ｓともいう。ある種の実施態様では、ＤＵＸ４は、上記スプライシングバリアントのＳＮＰをいう。
　本開示は、以下の項［１］～［２７］に記載の非限定な番号付けされた実施態様に関するものであるが、これらに限定されない。
項［１］　１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであって、
　少なくとも８個の連続する核酸塩基配列であって、配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基配列の５’末端から１２６～１４７位、２３２～２４８位、１３０６～１３２５位または１４８０～１４９５位におけるその等長部分に相補的である核酸塩基配列を含み、
　前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基配列におけるその等長部分に少なくとも９０％相補性を有し、
　前記少なくとも８個の連続する核酸塩基配列が配列番号１の核酸塩基配列の５’末端から１４８０～１４９５位におけるその等長部分に相補的である核酸塩基配列を含む場合は、前記修飾オリゴヌクレオチドは配列番号１の核酸塩基の５’末端から１４８０位の塩基の相補塩基を３’末端に有する核酸塩基配列からなる、
　修飾オリゴヌクレオチド。
項［２］　前記修飾オリゴヌクレオチドのうち１つ以上の修飾ヌクレオチドが修飾糖を含む、項［１］に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
項［３］　前記修飾糖が、二環式糖、２’－Ｏ－メトキシエチルで修飾された糖、および２’－Ｏ－メチルで修飾された糖からなる群から選択される、項［２］に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
項［４］　前記二環式糖が、ＬＮＡ、ＧｕＮＡ、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ＡＬＮＡ［ｍＵ］、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］、ＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］、およびＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］からなる群から選択される、項［３］に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
項［５］　１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであって、
　少なくとも８個の連続する核酸塩基配列であって、配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基配列の５’末端から１４７２～１４９５位におけるその等長部分に相補的である核酸塩基配列を含み、
　前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基配列におけるその等長部分に少なくとも９０％相補性を有し、
　前記修飾オリゴヌクレオチドがＧｕＮＡ、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ＡＬＮＡ［ｍＵ］、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］、ＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］、およびＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］から選択される修飾糖を含むヌクレオシドを少なくとも１つ含む、
　修飾オリゴヌクレオチド。
項［６］　前記修飾オリゴヌクレオチドがさらに、２’－Ｏ－メトキシエチルで修飾された糖、および／または２’－Ｏ－メチルで修飾された糖を含む、項［５］に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
項［７］　前記修飾オリゴヌクレオチドのうち少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが修飾核酸塩基を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
項［８］　前記修飾核酸塩基が５－メチルシトシンである、項［７］に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
項［９］　少なくとも１つのヌクレオシド間結合が修飾ヌクレオシド間結合である、項［１］～［８］のいずれか１項に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
項［１０］　前記修飾ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、項［９］に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
項［１１］　前記修飾オリゴヌクレオチドが、
１）ギャップセグメントと、
２）５’ウイングセグメントと、
３）３’ウイングセグメント、を含み、
　前記ギャップセグメントが、前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントとの間に位置付けられ、
前記５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントのヌクレオシドのいずれもが、少なくとも１つの修飾糖を含み、
　前記ギャップセグメントのヌクレオシドは、修飾糖を含まないヌクレオシドのみであるか、または、修飾糖を含む１または２個のヌクレオシドを含み、それ以外は修飾糖を含まないヌクレオシドである、項［１］～［１０］のいずれか１項に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
項［１２］　前記修飾オリゴヌクレオチドが、
配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基配列の
５’末端から１２８～１４３位の核酸塩基配列、
５’末端から２３２～２４７位の核酸塩基配列、
５’末端から２３３～２４８位の核酸塩基配列、
５’末端から１３０９～１３２３位の核酸塩基配列、または
５’末端から１４８０～１４９５位の核酸塩基配列、
に相補的な核酸塩基配列からなる、項［１］～［１１］のいずれか一項に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
項［１３］　前記修飾オリゴヌクレオチドが、
gtggcgatgc ccgggt（配列番号７５）、
gagattcccg cnggtg（配列番号７８：nは５－メチルシトシンを示す）、
ngagattcccgccggt（配列番号２：nは５－メチルシトシンを示す）、
gnagttctccgcggt（配列番号３：nは５－メチルシトシンを示す）、または
gnntagacagcgtngg（配列番号４：nは５－メチルシトシンを示す）
の塩基配列からなる、項［１］～［１２］のいずれか一項に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
項［１４］　下式：
GlsMlsMlsTdsAdsGdsAdsCdsAdsGdsCdsGdsTdsMlsGlsGl；
で示される項［１３］に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
　式中、
　各核酸塩基が下記記号：
Ａ＝アデニン、Ｔ＝チミン、Ｇ＝グアニン、Ｃ＝シトシン、M＝５－メチルシトシン、
に従って示され；
　各糖部分が下記記号：
ｌ＝ＬＮＡ、ｄ＝２’－デオキシリボース、
に従って示され；
　各ヌクレオシド間結合が下記記号：
ｓ＝ホスホロチオエートに従って示される。
項［１５］　下式：
GmsMmsMmsTdsAdsGdsAdsCdsAdsGdsCdsGdsTdsMmsGmsGm；
で示される項［１３］に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
　式中、
　各核酸塩基が下記記号：
Ａ＝アデニン、Ｔ＝チミン、Ｇ＝グアニン、Ｃ＝シトシン、M＝５－メチルシトシン、
に従って示され；
　各糖部分が下記記号：
ｍ＝ＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ｄ＝２’－デオキシリボース、
に従って示され；
　各ヌクレオシド間結合が下記記号：
ｓ＝ホスホロチオエートに従って示される。
項［１６］　下式：
GmsMmsAmsGdsTdsTdsCdsTdsCdsCdsGdsCdsGmsGmsTm；
で示される項［１３］に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
　式中、
　各核酸塩基が下記記号：
Ａ＝アデニン、Ｔ＝チミン、Ｇ＝グアニン、Ｃ＝シトシン、M＝５－メチルシトシン、に従って示され；
　各糖部分が下記記号：
ｍ＝ＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ｄ＝２’－デオキシリボース、
に従って示され；
　各ヌクレオシド間結合が下記記号：
ｓ＝ホスホロチオエート
に従って示される。
項［１７］　下式：
MlsGlsAlsGdsAdsTdsTdsCdsCdsCdsGdsCdsCdsGlsGlsTl；
で示される項［１３］に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
　式中、
　各核酸塩基が下記記号：
Ａ＝アデニン、Ｔ＝チミン、Ｇ＝グアニン、Ｃ＝シトシン、M＝５－メチルシトシン、
に従って示され；
　各糖部分が下記記号：
ｌ＝ＬＮＡ、ｄ＝２’－デオキシリボース、
に従って示され；
　各ヌクレオシド間結合が下記記号：
ｓ＝ホスホロチオエート
に従って示される。
項［１８］　下式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
によって示される、項［１４］に記載の修飾オリゴヌクレオチドまたはその塩。
項［１９］　下式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
によって示される、項［１５］に記載の修飾オリゴヌクレオチドまたはその塩。
項［２０］　下式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
によって示される、項［１６］に記載の修飾オリゴヌクレオチドまたはその塩。
項［２１］　下式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
によって示される、項［１７］に記載の修飾オリゴヌクレオチドまたはその塩。
項［２２］　項［１］～項［２１］のいずれか１項に記載の修飾オリゴヌクレオチドまたはその医薬的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
項［２３］　ＤＵＸ４関連疾患の治療、予防、またはその進行の遅延化のための、項［２２］に記載の医薬組成物。
項［２４］　前記ＤＵＸ４関連疾患が顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーである、項［２３］に記載の医薬組成物。
項［２５］　項［１］～項［２１］のいずれか１項に記載の修飾オリゴヌクレオチドの有効量を、それを必要とする被験者に投与することを特徴とする、被験者におけるＤＵＸ４関連疾患の治療、予防またはその進行の遅延化のための方法。
項［２６］　ＤＵＸ４関連疾患の治療、予防またはその進行の遅延化のための医薬の製造における、項［１］～項［２１］のいずれか１項に記載の修飾オリゴヌクレオチドの使用。
項［２７］　ＤＵＸ４関連疾患の治療、予防またはその進行の遅延化のための、項［１］～項［２１］のいずれか１項に記載の修飾オリゴヌクレオチドの使用。
　本発明により、ＤＵＸ４遺伝子の異常発現に起因する顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーなどの疾患の処置に有効な修飾オリゴヌクレオチドを提供することができる。
各種ＤＵＸ４修飾オリゴヌクレオチド投与によるＤＵＸ４遺伝子発現の抑制効果を示す図面である。 各種ＤＵＸ４修飾オリゴヌクレオチド投与によるＤＵＸ４遺伝子発現の抑制効果を示す図面である。 ＤＵＸ４修飾オリゴヌクレオチド投与による、用量依存的なＤＵＸ４遺伝子発現の抑制効果を示す図面である。 各種ＤＵＸ４修飾オリゴヌクレオチド投与によるＤＵＸ４遺伝子発現の抑制効果を示す図面である。 ＤＵＸ４修飾オリゴヌクレオチド（化合物番号３）投与による、DUX4 TgマウスにおけるクレアチンキナーゼおよびＤＵＸ４　ｍＲＮＡの抑制効果を示す図面である。 ＤＵＸ４修飾オリゴヌクレオチド（化合物番号１２３、化合物番号２４７、および化合物番号１１３）投与による、ＤＵＸ４ ＴｇマウスにおけるクレアチンキナーゼおよびＤＵＸ４ ｍＲＮＡの抑制効果を示す図面である。
　前述の概要及び以下の詳細な説明の両方とも例示的且つ説明的なものに過ぎず、請求される本発明を制限するものではないことを理解されたい。本明細書では、別段の記載がない限り、単数形の使用は複数形を含む。本明細書では、別段の記載がない限り、「または」の使用は「及び／または」を意味する。さらに、用語「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」並びに他の形態、例えば「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」の使用は、限定的なものではない。さらに、別段の記載がない限り、「要素」などの用語は、１つのユニットを含む要素と１つを超えるサブユニットを含む要素を包含する。
　本明細書で使用されるセクションの見出しは、構成上の目的のためだけであり、記載される主題を制限するものとして解釈されるべきでない。これらに限定されないが、特許、特許出願、記事、書籍及び論文を含めた、本出願で引用されるすべての文書または文書の一部分は、本明細書で論じる文書の一部分に関して、及びその全体が、参照により本明細書に明確に組み込まれる。
（定義）
　具体的な定義が与えられない限り、本明細書に記載の分析化学、有機合成化学、並びに医化学及び薬化学に関連して利用される命名法、及びそれらの手順及び技法は、当技術分野で周知であり、一般に使用されるものである。標準的な技法を、本明細書中で使用する化学合成及び化学分析に使用することができる。許容される場合、本明細書の開示の全体を通して言及される、すべての特許、出願、公開出願及び他の刊行物、国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）などのデータベースを通して入手可能なＧｅｎＢａｎｋ受託番号及び関連する配列情報並びに他のデータは、本明細書に論じる文書の一部分に関して、及びその全体が、参照により組み込まれる。
　また、本明細書は、電子フォーマットの配列表と共に出願するが、当該電子フォーマット中に記載する配列表の情報は、参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる。
　別段の指示がない限り、以下の用語は以下の意味を有する。
　「核酸」は、モノマーのヌクレオチドから成る分子を指す。核酸の例としては、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、一本鎖核酸、二本鎖核酸、低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。核酸は、これらの要素の組み合わせを単一分子中に含むこともできる。
　「核酸塩基」は、別の核酸の塩基と対形成することができる複素環部分を意味する。核酸塩基には、「修飾核酸塩基」と「非修飾核酸塩基」がある。
　「核酸塩基配列」は、任意の糖結合または核酸塩基修飾と無関係の、連続的な核酸塩基の順序を意味する。
　「ヌクレオシド」は、糖に連結した核酸塩基を意味する。ある種の実施態様では、ヌクレオシドはリン酸基に連結している。
　「ヌクレオチド」は、ヌクレオシドの糖部分と共有結合したリン酸基などを有するヌクレオシドを意味する。天然に存在するヌクレオチドは糖部分がリボースまたはデオキシリボースであり、リン酸基を介してホスホジエステル結合により共有結合している。
　「オリゴマー化合物」または「オリゴマー」は、核酸分子の少なくとも一領域にハイブリダイズすることができる、連結モノマーサブユニットのポリマーを意味する。
　「オリゴヌクレオチド」は、各ヌクレオシド及び各ヌクレオシド間結合が、互いに独立して、修飾されていても修飾されていなくてもよい、連結したヌクレオシドのポリマーを意味する。
　「非修飾ヌクレオチド」は、天然に存在する核酸塩基、糖部分及びヌクレオシド間結合から成るヌクレオチドを意味する。ある種の実施態様では、非修飾ヌクレオチドはＲＮＡヌクレオチド（すなわちβ－Ｄ－リボヌクレオシド）またはＤＮＡヌクレオチド（すなわちβ－Ｄ－デオキシリボヌクレオシド）であるが、これらに限定されない。
　「修飾ヌクレオチド」は、独立に、修飾糖部分、修飾ヌクレオシド間結合または修飾核酸塩基を有するヌクレオチドを意味する。「修飾ヌクレオシド」は、独立に、修飾糖部分または修飾核酸塩基を有するヌクレオシドを意味する。
　「ヌクレオシド間結合」は、ヌクレオシド間の化学結合を指す。
　「連結したヌクレオシド」は、ヌクレオシド間結合によって結合または連結している、隣接ヌクレオシドを意味する。
　「天然に存在するヌクレオシド間結合」は、３’－５’ホスホジエステル結合を意味する。
　「修飾ヌクレオシド間結合」は、天然に存在するヌクレオシド間結合（すなわち、ホスホジエステルヌクレオシド間結合）からの置換または任意の変化を指す。例えば、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合があるが、これに限定されない。
　「ホスホロチオエートヌクレオシド間結合」は、非架橋酸素原子の１つを硫黄原子で置き換えることによってホスホジエステル結合が修飾される、ヌクレオシド間の結合を意味する。ホスホロチオエート結合は、当該修飾ヌクレオシド間結合の１例である。
　「修飾核酸塩基」は、アデニン、シトシン、グアニン、チミジンまたはウラシル以外の任意の核酸塩基を指す。例えば、５－メチルシトシンがあるが、これに限定されない。「非修飾核酸塩基」は、プリン塩基のアデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、並びにピリミジン塩基のチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）を意味する。
　「修飾オリゴヌクレオチド」は、少なくとも１つの当該修飾ヌクレオシド及び／または当該修飾ヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドを意味する。
　「塩」とは酸に含まれている１つ以上の解離しうる水素イオンを、金属イオンやアンモニウムイオンなどの陽イオンで置換した化合物の総称であり、修飾オリゴヌクレオチドの塩としては、ホスホロチオエート結合のチオ（Ｓ）基または修飾核酸塩基内の官能基（例えば、アミノ基）上で、無機物イオン（例えば、ナトリウムイオン、マグネシウムイオン）と形成される塩（例えば、ナトリウム塩、マグネシウム塩）を挙げられるが、これらに限定されない。
　「糖」または「糖部分」は、天然糖部分または修飾糖部分を意味する。
　「天然糖部分」は、ＤＮＡ（２’－Ｈ）またはＲＮＡ（２’－ＯＨ）中に見られる糖を意味する。
　「修飾糖」は、天然糖部分からの置換または変化を指す。修飾糖としては、例えば、置換糖部分及び代用糖部分が挙げられる。
　「置換糖部分」は、ＲＮＡまたはＤＮＡの天然糖以外のフラノシルを意味する。
　「２’－Ｏ－メトキシエチル」（２’－ＭＯＥ及び２’－Ｏ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３も同様）は、フラノシル環の２’位のＯ－メトキシ－エチル修飾を指す。２’－Ｏ－メトキシエチル修飾された糖は修飾糖である。
　「２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオチド」は、２’－Ｏ－メトキシエチル修飾された糖部分を含むヌクレオチドを意味する。
　「２’－Ｏ－メチル」（２’－ＯＭｅ及び２’－ＯＣＨ３も同様）は、フラノシル環の２’位のＯ－メチル修飾を指す。２’－Ｏ－メチル修飾された糖は修飾糖である。
　「２’－Ｏ－メチルヌクレオチド」は、２’－Ｏ－メチル修飾された糖部分を含むヌクレオチドを意味する。
　「代用糖部分」のための「糖代用物」は、糖ユニット（フラノース環）のみの置き換えを示すことが意図される。糖代用物は、ヌクレオシドの天然に存在する糖部分を置き換えることができ、その結果、得られたヌクレオシドサブユニットは、互いに連結して、及び／または他のヌクレオシドと連結して、相補的オリゴマー化合物とハイブリダイズすることができるオリゴマー化合物を形成することができる。そうした構造体は、フラノシルと異なる数の原子を含む環（例えば、４、６もしくは７員環）；非酸素原子（例えば、炭素、硫黄もしくは窒素）とのフラノシルの酸素の置き換え；または原子数の変化と酸素の置き換えの両方を含む。そうした構造体は、置換糖部分に関して記載されたものに対応する置換を含むこともできる（例えば、さらなる置換基を任意に含む６員の炭素環式二環式糖代用物）。糖代用物は、より複雑な糖の置き換えも含む（例えば、非環系のペプチド核酸）。糖代用物としては、これらに限定されないが、モルホリノ、シクロヘキセニル及びシクロヘキシトールが挙げられる。
　「二環式糖」は、同一環上に存在する２つの異なる炭素原子の架橋によって修飾されるフラノシル環を意味する。好ましくは、「二環式糖」は、フラノシル環の２’位と４’位が架橋によって修飾された修飾糖を意味する。「二環式核酸」は、ヌクレオシドまたはヌクレオチドのフラノース部分が、「二環式糖」を含む、ヌクレオシドまたはヌクレオチドを指す。
　「ＬＮＡ」は、一般的に２’，４’－ロックト核酸（locked nucleic acid）と呼称されるヌクレオシドまたはヌクレオチドを意味し、例えば、一般式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
［式中、
　Ｂは、核酸塩基であり；
　ＸおよびＹは、それぞれ独立に、水素原子、水酸基の保護基、置換されてもよいリン酸基、リン部分または支持体への共有結合等である］
で表されるヌクレオシドまたはヌクレオチドを挙げられる（ＷＯ９８／３９３５２を参照）。典型的な具体例は、下記式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
で示されるヌクレオチドまたはヌクレオチドを挙げられる。
　「ＧｕＮＡ」は、下記式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
［式中、Ｂは核酸塩基であり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は各々独立して水素原子、または１つ以上の置換基で置換されてもよいＣ１－６アルキル基であり、Ｒ７、Ｒ８はそれぞれ独立に、水素原子、水酸基の保護基、置換されてもよいリン酸基、リン部分または支持体への共有結合等であり、そしてＲ９、Ｒ１０、Ｒ１１は各々独立して水素原子、１つ以上の置換基で置換されてもよいＣ１－６アルキル基、またはアミノ基の保護基である。］
で表されるヌクレオシドまたはヌクレオチドである。（例えば、国際公開第２０１４／０４６２１２号、国際公開第２０１７／０４７８１６号を参照）。
　「ＡＬＮＡ［ｍＵ］」は、下記一般式（Ｉ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
［式中、
　Ｂは、核酸塩基であり；
　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は各々独立して、水素原子、または１つ以上の置換基で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基であり；
　Ｒ５およびＲ６は各々独立して、水素原子、水酸基の保護基、または置換されてもよいリン酸基、リン部分または支持体への共有結合等であり；
　ｍは、１または２であり；
　Ｘは、下記式（ＩＩ－１）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
で示される基であり；
　式（ＩＩ－１）中に記載の記号：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
は、２’－アミノ基との結合点を示し；
　Ｒ７およびＲ８の一方が水素原子であり、他方が1つ以上の置換基で置換されてもよいメチル基である。］
で表されるヌクレオシドまたはヌクレオチドである（例えば、特願２０１８－２１２４２４を参照）。典型的な具体例は、Ｒ７およびＲ８の一方が水素原子であり、他方が無置換のメチル基である、ヌクレオシドまたはヌクレオチドである。
　「ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］」は、上記の「ＡＬＮＡ［ｍＵ］」において定義する一般式（Ｉ）で表されるヌクレオシドまたはヌクレオチドであって、該式中、
　Ｘが、下記式（ＩＩ－１）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
で示される基であり；
　Ｒ７およびＲ８の一方が水素原子であり、他方が１つ以上の置換基で置換されてもよいイソプロピル基である（例えば、特願２０１８－２１２４２４を参照）。典型的な具体例は、Ｒ７およびＲ８の一方が水素原子であり、他方が無置換のイソプロピル基である、ヌクレオシドまたはヌクレオチドである。
　「ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］」は、上記の「ＡＬＮＡ［ｍＵ］」において定義する一般式（Ｉ）で表されるヌクレオシドまたはヌクレオチドであって、該式中、
　Ｘが、下記式（ＩＩ－２）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
 
で示される基であり；
　Ａが、１つ以上の置換基で置換されていてもよいトリアゾリル基である（例えば、特願２０１８－２１２４２４を参照）。典型的な具体例は、Aが、１または複数のメチル基を有してもよいトリアゾリル基、より具体的には１，５-ジメチル－１,２,４－トリアゾール－３－イル基である、ヌクレオシドまたはヌクレオチドである。
　「ＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］」は、上記の「ＡＬＮＡ［ｍＵ］」において定義する一般式（Ｉ）で表されるヌクレオシドまたはヌクレオチドであって、該式中、
　Ｘが、下記式（ＩＩ－２）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
 
で示される基であり；
　Ａが、１つ以上の置換基で置換されていてもよいオキサジアゾリル基である（例えば、特願２０１８－２１２４２４を参照）。典型的な具体例は、Aが、１または複数のメチル基を有してもよいオキサジアゾリル基、より具体的には、５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル基である、ヌクレオシドまたはヌクレオチドである。
　「ＡＬＮＡ［Ｍｓ］」は、上記の「ＡＬＮＡ［ｍＵ］」において定義する一般式（Ｉ）で表されるヌクレオシドまたはヌクレオチドであって、該式中、
　Ｘが、下記式（ＩＩ－３）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
 
で示される基であり；
　Ｍは、１つ以上の置換基で置換されていてもよいメチル基で置換された、スルホニル基である（例えば、特願２０１８－２１２４２４を参照）。典型的な具体例は、Ｍが無置換のメチル基で置換されたスルホニル基である、ヌクレオシドまたはヌクレオチドである。
　「５－メチルシトシン」は、５位に結合したメチル基で修飾されたシトシンを意味する。５－メチルシトシンは修飾核酸塩基である。
　「一本鎖オリゴヌクレオチド」は、相補鎖とハイブリダイズしていないオリゴヌクレオチドを意味する。
　「ＤＵＸ４」は、Double homeobox4ともいわれる転写因子の核酸または蛋白質を意味する。ＤＵＸ４には、例えば、ＤＵＸ４遺伝子から転写される各種スプライシングバリアント、またはその一塩基置換体（ＳＮＰ）が挙げられるが、当該バリアント及び／またはＳＮＰであってもよい。
　ＤＵＸ４　ｍＲＮＡには多くのスプライシングバリアントが報告されている。ヒトＤＵＸ４-ｓ（配列表の配列番号６）はエクソン１内の非典型的なスプライシングドナーサイトにより、短いエクソン１（エクソン１ｓ）、エクソン２、エクソン３からなり、毒性のない短いＤＵＸ４蛋白質をコードする。ヒトＤＵＸ４－ＦＬはエクソン１、エクソン２、エクソン３からなり、全長のＤＵＸ４蛋白質をコードする。ＤＵＸ４－ＦＬには、イントロン１を含まない成熟ｍＲＮＡであるＤＵＸ４－ＦＬ１（配列表の配列番号１）とイントロン１を含むＤＵＸ４－ＦＬ２（配列表の配列番号５）があるが、いずれも全長のＤＵＸ４蛋白質をコードし、筋肉に発現した場合、ＦＳＨＤの原因とされる（前記非特許文献２を参照）。
　ＤＵＸ４　ｍＲＮＡは正常な精巣にも発現しているが、ＤＵＸ４－ＦＬに加え、エクソン１、エクソン２、エクソン６、エクソン７のスプライシングバリアント、および／またはエクソン１、エクソン２、エクソン４、エクソン５、エクソン６、エクソン７のスプライシングバリアントが発現する（前記非特許文献１を参照）。
　ＤＵＸ４蛋白質は転写因子として機能するが、ＤＵＸ４によって転写が調節される遺伝子としては、例えばＭＢＤ３Ｌ２、ＺＳＣＡＮ４、ＴＲＩＭ４３、ＤＥＦＢ１０３、ＺＮＦ２１７などが挙げられる（前記非特許文献２を参照）。
　本発明の修飾オリゴヌクレオチドの標的とするＤＵＸ４　ｍＲＮＡは、例えばヒトＤＵＸ４が好ましく、ＤＵＸ４－ＦＬがより好ましく、配列表の配列番号１に記載するＤＵＸ４－ＦＬ１がより一層好ましい。また、本発明のＤＵＸ４に対する修飾オリゴヌクレオチドの標的部位としては、エクソン１、イントロン１、エクソン２、イントロン２、エクソン３が好ましい。
　ＤＵＸ４遺伝子は、転座などの染色体異常により他の遺伝子と融合して発現することが知られている。他の遺伝子としては、例えばＩＧＨ（Yasudaら、Nature Genetics 48(5), 569(2016)）、ＣＩＣ（Yoshimotoら、Cancer research 77, 2927(2017)）、ＥＷＳＲ１（Sirventら、Cancer Genetics and Cytogenetics 195, 12(2009)）が報告されており、それぞれＢ細胞性急性リンパ性白血病、分化円形細胞肉腫、胎児性横紋筋肉腫などの原因遺伝子と考えられている。本発明の修飾オリゴヌクレオチドには、これらの融合遺伝子を標的とする化合物も含まれる。
　「ＤＵＸ４の発現」は、ＤＵＸ４をコードする遺伝子から転写されたｍＲＮＡのレベル、またはそのｍＲＮＡから翻訳された蛋白質のレベルを意味する。ＤＵＸ４の発現は、ノーザンまたはウェスタンブロット、ＰＣＲなどの当技術分野で既知の方法によって決定することができる。
　「ＤＵＸ４核酸」は、ＤＵＸ４をコードする任意の核酸を意味する。例えば、ある種の実施態様では、ＤＵＸ４核酸は、ＤＵＸ４をコードするＤＮＡ配列、（イントロン及びエクソンを含むゲノムＤＮＡを含めた）ＤＵＸ４をコードするＤＮＡから転写されるＲＮＡ配列、並びにＤＵＸ４をコードするｍＲＮＡ前駆体またはスプライシングされた成熟ｍＲＮＡを含む。また、ある種の実施態様ではＤＵＸ４遺伝子と他の遺伝子の融合による生じる遺伝子のＤＮＡ配列、ＲＮＡ配列を含む。
　「ＤＵＸ４　ｍＲＮＡ」は、ＤＵＸ４蛋白質をコードするｍＲＮＡを意味する。
　「連続的な核酸塩基」、「連続する核酸塩基」は、互いに直接隣接する核酸塩基を意味する。
　「相補的」は、第一の核酸と第二の核酸の核酸塩基間の対形成に対する能力を意味する。
　「完全に相補的（相補性ともいう）」または「１００％相補的（相補性ともいう）」は、第一の核酸の核酸塩基配列の各核酸塩基のすべてが、第二の核酸の第二の核酸塩基配列中に相補的核酸塩基を有することを意味する。ある種の実施態様では、第一の核酸は修飾オリゴヌクレオチドであり、標的核酸が第二の核酸である。
　「ハイブリダイゼーション」は、相補的核酸分子のアニーリングを意味する。ある種の実施態様では、相補的核酸分子としては、修飾オリゴヌクレオチド及び標的核酸が挙げられる。
　「特異的にハイブリダイズ可能」は、所望の効果を誘導するのに十分な相補性度を修飾オリゴヌクレオチドと標的核酸の間に有し、一方で、特異的結合が所望される条件下、すなわち、インビボアッセイ及び治療的処置の場合の生理的条件下で、非標的核酸に対して最少の効果しか呈さない、または全く効果を示さない修飾オリゴヌクレオチドを指す。
　「ミスマッチ」または「非相補的核酸塩基」は、第一の核酸の核酸塩基が、第二の核酸または標的核酸の対応する核酸塩基と対形成できない場合を指す。
　「ターゲティングする」または「標的とする」は、標的核酸に特異的にハイブリダイズし、所望の効果を誘導する修飾オリゴヌクレオチドの設計及び選択の過程を意味する。
　「標的核酸」、「標的ＲＮＡ」及び「標的ＲＮＡ転写産物」はすべて、修飾オリゴヌクレオチドが標的とすることができる核酸を指す。ある種の実施態様では、標的核酸はＤＵＸ４核酸の領域を含む。
　「標的セグメント」は、修飾オリゴヌクレオチドが標的とする、標的核酸のヌクレオチド配列を意味する。「５’標的部位」は、標的セグメントの最も５’側のヌクレオチドを指す。「３’標的部位」は、標的セグメントの最も３’側のヌクレオチドを指す。
　「活性標的領域」または「標的領域」は、１種または複数の活性な修飾オリゴヌクレオチドが標的にする領域を意味する。「活性な修飾オリゴヌクレオチド」は、標的核酸レベルまたは蛋白質レベルを低減させる修飾オリゴヌクレオチドを意味する。
　「アンチセンス阻害」は、修飾オリゴヌクレオチドの非存在下での標的核酸レベルまたは標的蛋白質レベルと比較して、標的核酸に相補的な修飾オリゴヌクレオチドの存在下での標的核酸レベルまたは標的蛋白質レベルが低減することを意味する。
　「ｓｉＲＮＡ」は、標的核酸の対応する領域またはセグメントに対するハイブリダイゼーションを可能にする核酸塩基配列を有する二本鎖RNAオリゴヌクレオチドを意味する。
　「ｓｈＲＮＡ」は、標的核酸の対応する領域またはセグメントに対するハイブリダイゼーションを可能にする核酸塩基配列を有するヘアピン型の一本鎖ＲＮＡオリゴヌクレオチドを意味する。
　「ｓｎｏＲＮＡ」は、核小体に存在するノンコーディングＲＮＡで、標的ＲＮＡ核酸の対応する領域またはセグメントに対するハイブリダイゼーションを可能にする核酸塩基配列を有し、標的ＲＮＡ核酸のメチル化やシュードウリジン化の化学修飾を導く、一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。
　「ｍｉＲＮＡ」は、他の遺伝子の発現を調節するノンコーディングＲＮＡであり、標的核酸の対応する領域またはセグメントに対するハイブリダイゼーションを可能にする核酸塩基配列を有する一本鎖または二本鎖ＲＮＡオリゴヌクレオチドを意味する。
　「キャップ構造」または「末端キャップ部分」は、修飾オリゴヌクレオチドのいずれかの末端に組み込まれた化学修飾を意味する。
　「化学的に異質な領域」は、同じ修飾オリゴヌクレオチド内の別の領域と何らかの点で化学的に異なる修飾オリゴヌクレオチド内の領域を指す。例えば、２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオチドを有する領域は、２’－Ｏ－メトキシエチル修飾されていないヌクレオチドを有する領域と化学的に異なる。
　「キメラ修飾オリゴヌクレオチド」は、少なくとも２つの化学的に異質な領域を有する修飾オリゴヌクレオチドを意味する。
　「モチーフ」は、修飾オリゴヌクレオチド中の化学的に異質な領域のパターンを意味する。
　「ギャップマー」は、ＲＮａｓｅ　Ｈによる切断を支援する複数のヌクレオシドを有する内部領域が、１つまたは複数のヌクレオシドを有する外部領域間に位置し、内部領域を構成するヌクレオシドが、外部領域を構成するヌクレオシド（複数可）と化学的に異なる、修飾オリゴヌクレオチドを意味する。内部領域は、「ギャップセグメント」と言うことができ、外部領域は「ウイングセグメント」と言うことができる。ギャップセグメントより５’に存在するウイングセグメントを「５’ウイングセグメント」と言うことができ、ギャップセグメントより３’に存在するウイングセグメントを「３’ウイングセグメント」と言うことができる。
　「直接隣接する」は、直接隣接する要素間に介在性の要素がないことを意味する。
　「核内リボヌクレアーゼ」は、核内で見られるリボヌクレアーゼを意味する。核内リボヌクレアーゼとしては、これらに限定されないが、ＲＮａｓｅ　Ｈ１及びＲＮａｓｅ　Ｈ２を含めたＲＮａｓｅ　Ｈ、二本鎖ＲＮａｓｅドローシャ、並びに他の二本鎖ＲＮａｓｅが挙げられる。
　ある種の実施態様では、ギャップマーは、それぞれヌクレオシドの数が１つから８つである５’及び３’ウイングセグメント、および両ウイングセグメントの間に位置し、且つそれらに直接隣接する、ヌクレオシドの数が６個以上であるギャップセグメントであって、修飾糖を含まないヌクレオシドのみを含むか、または、修飾糖を含む１または２個のヌクレオシドを含み、それ以外は修飾糖を含まないヌクレオシドであるギャップセグメントを有する修飾オリゴヌクレオチドを意味する。
　「薬剤」は、動物に投与された場合に、治療的利益を与えることができる活性物質を意味する。「第一の薬剤」は、本発明の治療用化合物を意味する。例えば、第一の薬剤は、ＤＵＸ４をターゲティングする修飾オリゴヌクレオチドでもよい。「第二の薬剤」は、本発明の第二の治療用化合物（例えば、ＤＵＸ４をターゲティングする第二の修飾オリゴヌクレオチド）及び／またはＤＵＸ４をターゲティングしない治療用化合物を意味する。
　「医薬的に許容可能な塩」は、修飾オリゴヌクレオチドの生理学的及び医薬的に許容可能な塩、すなわち、修飾オリゴヌクレオチドの所望の生物活性を保持し、望ましくない毒性効果をそれに与えない塩を意味する。
　「希釈剤」は、薬理学的活性を欠くが、医薬的に必要なまたは望ましい、組成物中の成分を意味する。例えば、注射される組成物中の希釈剤は、液体、例えば生理食塩水でもよい。
　「ＤＵＸ４関連疾患」は、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡもしくはＤＵＸ４蛋白質、またはＤＵＸ４遺伝子の転座による融合遺伝子のｍＲＮＡもしくは蛋白質の異常発現に起因する疾患をいう。顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、B細胞性急性リンパ性白血病、分化円形細胞肉腫、胎児性横紋筋肉腫などが挙げられるが、これらに限定されない。
　「顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー」または「ＦＳＨＤ」は、顔面・肩甲・上腕筋の筋力低下から発症する筋ジストロフィーを意味する。ヒトでは、主として第４番染色体のテロメア（染色体の末端）近傍にあるゲノム反復配列（Ｄ４Ｚ４）の短縮を伴い、その結果ゲノム構造に変化を来し、本来筋（前駆）細胞では発現していないＤＵＸ４遺伝子が異所性に発現され細胞死を引き起こすと考えられている（ＦＳＨＤ１）。また、一部のＦＳＨＤ患者で、遺伝子発現を抑制するゲノム構造制御因子の一つのＳＭＣＨＤ１に遺伝子変異が見つかっている（ＦＳＨＤ２）。
　ＦＳＨＤは、進行性筋衰弱および筋線維消失に関連する筋ジストロフィーの一種である。主に下半身が冒されるデュシェンヌ型筋ジストロフィーおよびベッカー型筋ジストロフィーとは異なり、ＦＳＨＤは、上半身、主として顔面筋、肩甲筋、および上腕筋において発症する。しかしながら、骨盤、腰、下肢において発症する場合もある。ＦＳＨＤの症状は、１０歳～２６歳になってから現れることが多いが、それよりもずっと後になって発症することも稀ではない。場合によっては、全く発症しないこともある。症状は軽度であり、悪化速度も非常に遅いことが通例である。顔面筋衰弱が一般的であり、眼瞼下垂、口笛不能、顔の表情変化の減少、憂鬱または怒り顔表情、語を発音する困難、肩甲筋衰弱（肩甲骨の目立ち（翼状肩甲）および撫肩等の変形の原因となる）、下肢衰弱、聴力損失、および心臓病のおそれ等がありうる。
　「活性医薬剤」は、動物に投与された場合に治療的利益を提供する、医薬組成物中の物質（複数可）を意味する。例えば、ある種の実施態様では、ＤＵＸ４を標的とする修飾オリゴヌクレオチドは活性医薬剤である。
　「同時に投与される」は、両方の薬剤に起因する薬理学的効果が同時に患者に発現する任意の様式での、２つの薬剤の共投与を指す。同時投与は、両方の薬剤が、単一の医薬組成物中で、同じ剤形中で、または同じ投与経路によって投与されることを必要としない。両方の薬剤に起因する薬理学的効果は、同時に発現する必要はない。該薬理学的効果は、ある一定期間内に重複する必要があるだけで、同一の広がりを持つ必要はない。
　「投与すること」は、薬剤を動物に与えることを意味し、これらに限定されないが、医療専門家による投与及び自己投与が挙げられる。
　「改善」は、関連する疾患、障害または状態の少なくとも１つの指標、徴候または症状を減らすことを指す。指標の重度は、当業者に既知の主観的または客観的尺度によって決定することができる。
　「動物」は、ヒト、またはこれらに限定されないが、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタを含めた非ヒト動物、並びにこれらに限定されないが、サル及びチンパンジーを含めた非ヒト霊長類を指す。
　「共投与」は、個体への２つ以上の薬剤の投与を意味する。２つ以上の薬剤は、単一の医薬組成物中に存在してもよいし、別々の医薬組成物中に存在してもよい。２つ以上の薬剤のそれぞれは、同じまたは異なる投与経路を介して投与することができる。共投与は、並行的または逐次的投与を包含する。
　「用量」は、単回投与で、または特定の期間で与えられる、医薬剤の特定の量を意味する。ある種の実施態様では、用量は、１、２またそれ以上のボーラス、錠剤、または注射で投与することができる。例えば、皮下投与が所望されるある種の実施態様では、所望の用量は、単回の注射に容易に収容されない容量を必要とするので、所望の用量を達成するのに２以上の注射を使用することができる。ある種の実施態様では、医薬剤は、注入によって、長期間にわたってまたは持続的に投与される。用量は、時間、日、週または月あたりの医薬剤の量として記載され得る。
　「有効量」または「治療有効量」は、薬剤を必要としている個体において所望の生理的転帰を実現するのに十分である、活性医薬剤の量を意味する。有効量は、処置される個体の健康及び身体状態、処置される個体の分類群、組成物の製剤、個体の医学的状態の評価並びに他の関連する因子に応じて、個体の間で変動し得る。
　「顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー（ＦＳＨＤ）を有する動物を特定する」は、ＦＳＨＤの障害もしくは状態と診断された動物を特定すること、またはＦＳＨＤの障害または状態になりやすい動物を特定することを意味する。例えば、家族歴がある個体は、ＦＳＨＤの障害または状態になりやすい可能性がある。
　そうした特定は、個体の病歴及び標準的な臨床的な検査または評価を調べることを含めた、任意の方法によって達成することができる。なお、ＦＳＨＤは発症機序により、ＦＳＨＤ１とＦＳＨＤ２が知られているが、両者を含む。
　「個体」は、処置または療法について選択されたヒトまたは非ヒト動物を意味する。
　「筋強直症」は、随意収縮または電気刺激後の異常に遅い筋肉弛緩を意味する。
　「非経口投与」は、注射または注入を介する投与を意味する。非経口投与としては、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与または頭蓋内投与、例えば、髄腔内または脳室内投与が挙げられる。投与は、持続的または長期的でもよいし、短期的または断続的でもよい。
　「医薬組成物」は、個体への投与に適した物質の混合物を意味する。例えば、医薬組成物は１種または複数の活性薬剤及び滅菌水溶液を含み得る。
　「予防する」は、数分から無期限の期間にわたって、疾患、障害もしくは好ましくない健康状態、または当該疾患、障害もしくは好ましくない健康状態に関連する1つ以上の症状、の発症または発生を遅延させるかまたは未然に防ぐことを意味する。予防するは、疾患、障害または好ましくない健康状態を発生する危険性を低減させることも意味する。
　「治療する」は、疾患、障害もしくは好ましくない健康状態、または当該疾患、障害もしくは好ましくない健康状態に関連する１つ以上の症状、を軽減するか、もしくは排除するか、または、当該疾患、障害、もしくは好ましくない健康状態自体の１つもしくはそれ以上の原因を部分的に解消するかまたは根絶することを意味する。
　「処置する」は、上記予防または治療を含むと意図する。例えば、当該疾患、障害または好ましくない健康状態の変化または向上をもたらすために、本発明の医薬組成物を投与することをも包含する。
　「プロドラッグ」は、内在性酵素もしくは他の化学物質または条件の作用によって、体またはその細胞内で活性型に変換される不活性型で調製される治療剤を意味する。
　「副作用」は、所望の効果以外の、処置に起因し得る生理応答を意味する。ある種の実施態様では、副作用としては、注射部位反応、肝機能検査の異常、腎機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常、ミオパシー及び倦怠が挙げられる。例えば、血液中のアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）またはγ－グルタミルトランスペプチダーゼ（γ－ＧＴＰ）レベルの上昇は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。例えば、ビリルビンの上昇は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。また、尿たんぱくの上昇、血液中のクレアチニン、尿素窒素（ＵＮ）の上昇は、腎毒性または腎機能異常を示し得る。
　「皮下投与」は、皮膚の真下の投与を意味する。
　「治療有効量」は、個体に治療的利益を与える薬剤量を意味する。
（具体的実施態様）
実施態様
　下記に示すある種の具体的実施態様は、これらに限定するものではないが、ＤＵＸ４の発現を阻害するための化合物、該化合物を用いる方法、及び該化合物を含有する医薬組成物を提供する。
　ある種の実施態様は、ＤＵＸ４をターゲティングする修飾オリゴヌクレオチドを含有する化合物を動物に投与することを含む、動物においてＤＵＸ４の発現を低減させる方法を提供する。
　ある種の実施態様は、ＤＵＸ４遺伝子の転写を阻害、もしくはＤＵＸ４　ｍＲＮＡの翻訳を阻害、またはＤＵＸ４　ｍＲＮＡの切断を導くことによって、病原性のあるＤＵＸ４転写因子の蓄積を妨げるために、修飾オリゴヌクレオチドを投与する方法を提供する。
　ある種の実施態様は、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーを有する動物の処置方法であって、以下の工程を含む方法を提供する：ａ）顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーを有する前記動物を特定すること、及びｂ）治療有効量の、ＤＵＸ４を標的とする修飾オリゴヌクレオチドを含有する化合物を、前記動物に投与すること。
　ある種の実施態様は、それを必要とする対象において筋強直症を軽減させる方法を提供する。この方法は、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡに相補的な修飾オリゴヌクレオチドを対象に投与することを含み、修飾オリゴヌクレオチドは、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡに結合した場合に、リボヌクレアーゼまたは核内リボヌクレアーゼを活性化し、それによって、筋強直症を軽減させる。ある種の実施態様では、対象は、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーを有するか、有する疑いがあり、またはＤＵＸ４　ｍＲＮＡを高発現するか、ヒトの第４番染色体にある、Ｄ４Ｚ４リピートの数が減少しているか、もしくはＳＭＣＨＤ１（ＤＮＡメチル化酵素）変異を有するか、有する疑いがある。
　ある種の実施態様では、本発明の方法で使用する修飾オリゴヌクレオチドはキメラである。ある種の実施態様では、本発明で使用する方法の修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーである。
　本明細書に記載する本発明の方法のある種の実施態様では、投与は皮下投与である。ある種の実施態様では、投与は静脈内または筋肉内の投与である。
　ある種の実施態様では、本発明の方法で使用する修飾オリゴヌクレオチドは、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡのＤＵＸ４蛋白質コード領域、イントロン、５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲを標的とする。ある種の実施態様では、本発明の方法で使用する修飾オリゴヌクレオチドは、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡのエクソン１、エクソン２、エクソン３、イントロン１、イントロン２を標的とする。
　本明細書に記載する本発明の方法のある種の実施態様では、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡは核内リボヌクレアーゼのＲＮａｓｅ　Ｈ１により切断される。
　本発明の方法のある種の実施態様では、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡは筋組織で低減される。ある種の実施態様では、スプライシングバリアントであるＤＵＸ４－ＦＬ１（配列表の配列番号１）、ＤＵＸ４－ＦＬ２（配列表の配列番号５）が優先的に低減される。
　ある種の実施態様では、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１２９３７９８．２に記載の配列（配列表の配列番号１として本明細書に組み込まれる）を有する。配列表の配列番号１のスプライシングバリアントは、ＤＵＸ４－ＦＬ１またはＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡともいう。ある種の実施態様では、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１３０６０６８．２に記載の配列（配列表の配列番号５として本明細書に組み込まれる）を有する。配列表の配列番号５のスプライシングバリアントは、ＤＵＸ４－ＦＬ２ともいう。ある種の実施態様では、ＤＵＸ４は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１３６３８２０．１に記載の配列（配列表の配列番号６として本明細書に組み込まれる）を有する。配列表の配列番号６のスプライシングバリアントは、ＤＵＸ４－ｓともいう。ある種の実施態様では、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡは、上記スプライシングバリアントのＳＮＰを有するものである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１２６～１４７位、２３２～２４８位、１３０６～１３２５位または１４７２～１４９５位の等長部分に相補的である少なくとも８個の連続する核酸塩基配列を含む核酸塩基配列である修飾オリゴヌクレオチドを含む核酸塩基配列を有する。ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１２６～１４７位、２３２～２４８位、１３０６～１３２５位または１４７２～１４９５位の等長部分に相補的である少なくとも９個、１０個、１１個または１２個の連続する核酸塩基配列を含む核酸塩基配列である修飾オリゴヌクレオチドを含む核酸塩基配列を有する。
　修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１２６～１４７位、２３２～２４８位、１３０６～１３２５位または１４７２～１４９５位の等長部分に相補的である少なくとも８個の連続する核酸塩基配列からなってもよいし、当該核酸塩基配列に加え、５’末端側および／または３’末端側に付加配列を有してもよい。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１２６～１４７位の等長部分に相補的である少なくとも８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個または２２個の連続する核酸塩基配列を含む核酸塩基配列であり、３０残基以内の修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から２３２～２４８位の等長部分に相補的である少なくとも８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個または１７個の連続する核酸塩基配列を含む核酸塩基配列であり、３０残基以内の修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１３０６～１３２５位の等長部分に相補的である少なくとも８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個または２０個の連続する核酸塩基配列を含む核酸塩基配列であり、３０残基以内の修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１４７２～１４９５位の等長部分に相補的である少なくとも８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個または２４個の連続する核酸塩基配列を含む核酸塩基配列であり、３０残基以内の修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１２６～１４７位の等長部分に相補的である核酸塩基配列を含み、等長部分において配列表の配列番号１に少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％相補的である修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、１２～２９残基、１２～２８残基、１２～２７残基、１２～２６残基、１２～２５残基、１２～２４残基、１２～２３残基、１２～２２残基、１２～２１残基、１２～２０残基、１２～１９残基、１２～１８残基、１２～１７残基、１２～１６残基、１２～１５残基、１２～１４残基、１３～２９残基、１３～２８残基、１３～２７残基、１３～２６残基、１３～２５残基、１３～２４残基、１３～２３残基、１３～２２残基、１３～２１残基、１３～２０残基、１３～１９残基、１３～１８残基、１３～１７残基、１３～１６残基、１３～１５残基、１３～１４残基、１４～２９残基、１４～２８残基、１４～２７残基、１４～２６残基、１４～２５残基、１４～２４残基、１４～２３残基、１４～２２残基、１４～２１残基、１４～２０残基、１４～１９残基、１４～１８残基、１４～１７残基、１４～１６残基、１４～１５残基の前記修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から２３２～２４８位の等長部分に相補的である核酸塩基配列を含み、等長部分において配列表の配列番号１に少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％相補的である修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、１２～２９残基、１２～２８残基、１２～２７残基、１２～２６残基、１２～２５残基、１２～２４残基、１２～２３残基、１２～２２残基、１２～２１残基、１２～２０残基、１２～１９残基、１２～１８残基、１２～１７残基、１２～１６残基、１２～１５残基、１２～１４残基、１３～２９残基、１３～２８残基、１３～２７残基、１３～２６残基、１３～２５残基、１３～２４残基、１３～２３残基、１３～２２残基、１３～２１残基、１３～２０残基、１３～１９残基、１３～１８残基、１３～１７残基、１３～１６残基、１３～１５残基、１３～１４残基、１４～２９残基、１４～２８残基、１４～２７残基、１４～２６残基、１４～２５残基、１４～２４残基、１４～２３残基、１４～２２残基、１４～２１残基、１４～２０残基、１４～１９残基、１４～１８残基、１４～１７残基、１４～１６残基、１４～１５残基の前記修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１３０６～１３２５位の等長部分に相補的である核酸塩基配列を含み、等長部分において配列表の配列番号１に少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％相補的である修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、１２～２９残基、１２～２８残基、１２～２７残基、１２～２６残基、１２～２５残基、１２～２４残基、１２～２３残基、１２～２２残基、１２～２１残基、１２～２０残基、１２～１９残基、１２～１８残基、１２～１７残基、１２～１６残基、１２～１５残基、１２～１４残基、１３～２９残基、１３～２８残基、１３～２７残基、１３～２６残基、１３～２５残基、１３～２４残基、１３～２３残基、１３～２２残基、１３～２１残基、１３～２０残基、１３～１９残基、１３～１８残基、１３～１７残基、１３～１６残基、１３～15残基、１３～１４残基、１４～２９残基、１４～２８残基、１４～２７残基、１４～２６残基、１４～２５残基、１４～２４残基、１４～２３残基、１４～２２残基、１４～２１残基、１４～２０残基、１４～１９残基、１４～１８残基、１４～１７残基、１４～１６残基、１４～１５残基の前記修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１４７２～１４９５位の等長部分に相補的である核酸塩基配列を含み、等長部分において配列表の配列番号１に少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％相補的である修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、１２～２９残基、１２～２８残基、１２～２７残基、１２～２６残基、１２～２５残基、１２～２４残基、１２～２３残基、１２～２２残基、１２～２１残基、１２～２０残基、１２～１９残基、１２～１８残基、１２～１７残基、１２～１６残基、１２～１５残基、１２～１４残基、１３～２９残基、１３～２８残基、１３～２７残基、１３～２６残基、１３～２５残基、１３～２４残基、１３～２３残基、１３～２２残基、１３～２１残基、１３～２０残基、１３～１９残基、１３～１８残基、１３～１７残基、１３～１６残基、１３～１５残基、１３～１４残基、１４～２９残基、１４～２８残基、１４～２７残基、１４～２６残基、１４～２５残基、１４～２４残基、１４～２３残基、１４～２２残基、１４～２１残基、１４～２０残基、１４～１９残基、１４～１８残基、１４～１７残基、１４～１６残基、１４～１５残基からなる前記修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１２８～１４３位、２３３～２４８位、１３０９～１３２３位または１４８０～１４９５位の等長部分に相補的である少なくとも８個の連続する核酸塩基配列を含む核酸塩基配列である修飾オリゴヌクレオチドを含む核酸塩基配列を有する。ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１２８～１４３位、２３３～２４８位、１３０９～１３２３位または１４８０～１４９５位の等長部分に相補的である少なくとも９個、１０個、１１個、１２個の連続する核酸塩基配列を含む核酸塩基配列である修飾オリゴヌクレオチドを含む核酸塩基配列を有する。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１２８～１４３位の等長部分に相補的である少なくとも８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、または１６個の連続する核酸塩基配列を含む核酸塩基配列であり、３０残基以内の修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から２３３～２４８位の等長部分に相補的である少なくとも８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個または１６個の連続する核酸塩基配列を含む核酸塩基配列であり、３０残基以内の修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１３０９～１３２３位の等長部分に相補的である少なくとも８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個または１５個の連続する核酸塩基配列を含む核酸塩基配列であり、３０残基以内の修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１４８０～１４９５位の等長部分に相補的である少なくとも８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個または１６個の連続する核酸塩基配列であって、配列番号１の核酸塩基の５’末端から１４８０位の塩基の相補塩基を３’末端に有する核酸塩基配列からなる、３０残基以内の修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１２８～１４３位の等長部分に相補的である核酸塩基配列を含み、等長部分において配列表の配列番号１に少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％相補的である修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、１２～２９残基、１２～２８残基、１２～２７残基、１２～２６残基、１２～２５残基、１２～２４残基、１２～２３残基、１２～２２残基、１２～２１残基、１２～２０残基、１２～１９残基、１２～１８残基、１２～１７残基、１２～１６残基、１２～１５残基、１２～１４残基、１３～２９残基、１３～２８残基、１３～２７残基、１３～２６残基、１３～２５残基、１３～２４残基、１３～２３残基、１３～２２残基、１３～２１残基、１３～２０残基、１３～１９残基、１３～１８残基、１３～１７残基、１３～１６残基、１３～１５残基、１３～１４残基、１４～２９残基、１４～２８残基、１４～２７残基、１４～２６残基、１４～２５残基、１４～２４残基、１４～２３残基、１４～２２残基、１４～２１残基、１４～２０残基、１４～１９残基、１４～１８残基、１４～１７残基、１４～１６残基、１４～１５残基の前記修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から２３３～２４８位の等長部分に相補的である核酸塩基配列を含み、等長部分において配列表の配列番号１に少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％相補的である修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、１２～２９残基、１２～２８残基、１２～２７残基、１２～２６残基、１２～２５残基、１２～２４残基、１２～２３残基、１２～２２残基、１２～２１残基、１２～２０残基、１２～１９残基、１２～１８残基、１２～１７残基、１２～１６残基、１２～１５残基、１２～１４残基、１３～２９残基、１３～２８残基、１３～２７残基、１３～２６残基、１３～２５残基、１３～２４残基、１３～２３残基、１３～２２残基、１３～２１残基、１３～２０残基、１３～１９残基、１３～１８残基、１３～１７残基、１３～１６残基、１３～１５残基、１３～１４残基、１４～２９残基、１４～２８残基、１４～２７残基、１４～２６残基、１４～２５残基、１４～２４残基、１４～２３残基、１４～２２残基、１４～２１残基、１４～２０残基、１４～１９残基、１４～１８残基、１４～１７残基、１４～１６残基、１４～１５残基の前記修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１３０９～１３２３位の等長部分に相補的である核酸塩基配列を含み、等長部分において配列表の配列番号１に少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％相補的である修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、１２～２９残基、１２～２８残基、１２～２７残基、１２～２６残基、１２～２５残基、１２～２４残基、１２～２３残基、１２～２２残基、１２～２１残基、１２～２０残基、１２～１９残基、１２～１８残基、１２～１７残基、１２～１６残基、１２～１５残基、１２～１４残基、１３～２９残基、１３～２８残基、１３～２７残基、１３～２６残基、１３～２５残基、１３～２４残基、１３～２３残基、１３～２２残基、１３～２１残基、１３～２０残基、１３～１９残基、１３～１８残基、１３～１７残基、１３～１６残基、１３～１５残基、１３～１４残基、１４～２９残基、１４～２８残基、１４～２７残基、１４～２６残基、１４～２５残基、１４～２４残基、１４～２３残基、１４～２２残基、１４～２１残基、１４～２０残基、１４～１９残基、１４～１８残基、１４～１７残基、１４～１６残基、１４～１５残基の前記修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１４８０～１４９５位の等長部分に相補的である核酸塩基配列であって、配列番号１の核酸塩基の５’末端から１４８０位の塩基の相補塩基を３’末端に有する核酸塩基配列からなり、等長部分において配列表の配列番号１に少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％相補的である修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、１２～２９残基、１２～２８残基、１２～２７残基、１２～２６残基、１２～２５残基、１２～２４残基、１２～２３残基、１２～２２残基、１２～２１残基、１２～２０残基、１２～１９残基、１２～１８残基、１２～１７残基、１２～１６残基、１２～１５残基、１２～１４残基、１３～２９残基、１３～２８残基、１３～２７残基、１３～２６残基、１３～２５残基、１３～２４残基、１３～２３残基、１３～２２残基、１３～２１残基、１３～２０残基、１３～１９残基、１３～１８残基、１３～１７残基、１３～１６残基、１３～１５残基、１３～１４残基、１４～２９残基、１４～２８残基、１４～２７残基、１４～２６残基、１４～２５残基、１４～２４残基、１４～２３残基、１４～２２残基、１４～２１残基、１４～２０残基、１４～１９残基、１４～１８残基、１４～１７残基、１４～１６残基、１４～１５残基からなる前記修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号１の以下の領域のいずれか１つを標的とする：５’末端から１２６～１４１、１２６～１４３、１２７～１４２、１２７～１４３、１２７～１４４、１２７～１４６、１２８～１４３、１２８～１４４、１２８～１４７、２３２～２４５、２３２～２４７、２３３～２４６、２３３～２４７、２３３～２４８、２３４～２４７、２３４～２４８、１３０４～１３２３、１３０６～１３２１、１３０６～１３２４、１３０７～１３２３、１３０７～１３２４、１３０７～１３２５、１３０７～１３２６、１３０８～１３２３、１３０８～１３２４、１３０８～１３２２、１３０８～１３２５、１３０９～１３２３、１３０９～１３２４、１３０９～１３２５、１３０９～１３２２、１３１０～１３２３、１３１０～１３２４、１４７２～１４８５、１４７２～１４８６、１４７２～１４８７、１４７２～１４８８、１４７３～１４８７、１４７３～１４８８、１４７３～１４８９、１４７４～１４８８、１４７４～１４８９、１４７５～１４９０、１４７６～１４９０、１４７６～１４９１、１４７６～１４９５、１４７７～１４９５、１４７８～１４９６、１４７９～１４９５、１４７９～１４９６、１４７９～１４９８、１４８０～１４９４、１４８０～１４９５、１４８０～１４９６、１４８０～１４９７または１４８０～１４９９位。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号１の以下の領域のいずれか１つを標的とする：５’末端から１２８～１４３、２３２～２４７、２３３～２４８、１３０９～１３２３及び１４８０～１４９５位。
　ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、標的領域に対して相補的な少なくとも８個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有する。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、標的領域に対して相補的な少なくとも８個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有し、標的領域は、配列表の配列番号１の５’末端から１２６～１４１、１２６～１４３、１２７～１４２、１２７～１４３、１２７～１４４、１２７～１４６、１２８～１４３、１２８～１４４、１２８～１４７、２３２～２４５、２３２～２４７、２３３～２４６、２３３～２４７、２３３～２４８、２３４～２４７、２３４～２４８、１３０４～１３２３、１３０６～１３２１、１３０６～１３２４、１３０７～１３２３、１３０７～１３２４、１３０７～１３２５、１３０７～１３２６、１３０８～１３２３、１３０８～１３２４、１３０８～１３２２、１３０８～１３２５、１３０９～１３２３、１３０９～１３２４、１３０９～１３２５、１３０９～１３２２、１３１０～１３２３、１３１０～１３２４、１４７２～１４８５、１４７２～１４８６、１４７２～１４８７、１４７２～１４８８、１４７３～１４８７、１４７３～１４８８、１４７３～１４８９、１４７４～１４８８、１４７４～１４８９、１４７５～１４９０、１４７６～１４９０、１４７６～１４９１、１４７６～１４９５、１４７７～１４９５、１４７８～１４９６、１４７９～１４９５、１４７９～１４９６、１４７９～１４９８、１４８０～１４９４、１４８０～１４９５、１４８０～１４９６、１４８０～１４９７または１４８０～１４９９位を標的とする。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、標的領域に対して相補的な少なくとも８個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有し、標的領域は、配列表の配列番号１の５’末端から１２８～１４３、２３２～２４７、２３３～２４８、１３０９～１３２３または１４８０～１４９５位を標的とする。
　ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、標的領域に対して相補的な少なくとも１０個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有する。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、標的領域に対して相補的な少なくとも１０個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有し、標的領域は、配列表の配列番号１の５’末端から１２６～１４１、１２６～１４３、１２７～１４２、１２７～１４３、１２７～１４４、１２７～１４６、１２８～１４３、１２８～１４４、１２８～１４７、２３２～２４５、２３２～２４７、２３３～２４６、２３３～２４７、２３３～２４８、２３４～２４７、２３４～２４８、１３０４～１３２３、１３０６～１３２１、１３０６～１３２４、１３０７～１３２３、１３０７～１３２４、１３０７～１３２５、１３０７～１３２６、１３０８～１３２３、１３０８～１３２４、１３０８～１３２２、１３０８～１３２５、１３０９～１３２３、１３０９～１３２４、１３０９～１３２５、１３０９～１３２２、１３１０～１３２３、１３１０～１３２４、１４７２～１４８５、１４７２～１４８６、１４７２～１４８７、１４７２～１４８８、１４７３～１４８７、１４７３～１４８８、１４７３～１４８９、１４７４～１４８８、１４７４～１４８９、１４７５～１４９０、１４７６～１４９０、１４７６～１４９１、１４７６～１４９５、１４７７～１４９５、１４７８～１４９６、１４７９～１４９５、１４７９～１４９６、１４７９～１４９８、１４８０～１４９４、１４８０～１４９５、１４８０～１４９６、１４８０～１４９７または１４８０～１４９９位を標的とする。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、標的領域に対して相補的な少なくとも１０個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有し、標的領域は、配列表の配列番号１の５’末端から１２８～１４３、２３２～２４７、２３３～２４８、１３０９～１３２３または１４８０～１４９５位を標的とする。
　ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、標的領域に対して相補的な少なくとも１２個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有する。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、標的領域に対して相補的な少なくとも１２個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有し、標的領域は、配列表の配列番号１の５’末端から１２６～１４１、１２６～１４３、１２７～１４２、１２７～１４３、１２７～１４４、１２７～１４６、１２８～１４３、１２８～１４４、１２８～１４７、２３２～２４５、２３２～２４７、２３３～２４６、２３３～２４７、２３３～２４８、２３４～２４７、２３４～２４８、１３０４～１３２３、１３０６～１３２１、１３０６～１３２４、１３０７～１３２３、１３０７～１３２４、１３０７～１３２５、１３０７～１３２６、１３０８～１３２３、１３０８～１３２４、１３０８～１３２２、１３０８～１３２５、１３０９～１３２３、１３０９～１３２４、１３０９～１３２５、１３０９～１３２２、１３１０～１３２３、１３１０～１３２４、１４７２～１４８５、１４７２～１４８６、１４７２～１４８７、１４７２～１４８８、１４７３～１４８７、１４７３～１４８８、１４７３～１４８９、１４７４～１４８８、１４７４～１４８９、１４７５～１４９０、１４７６～１４９０、１４７６～１４９１、１４７６～１４９５、１４７７～１４９５、１４７８～１４９６、１４７９～１４９５、１４７９～１４９６、１４７９～１４９８、１４８０～１４９４、１４８０～１４９５、１４８０～１４９６、１４８０～１４９７または１４８０～１４９９位を標的とする。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、標的領域に対して相補的な少なくとも１２個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有し、標的領域は、配列表の配列番号１の５’末端から１２８～１４３、２３２～２４７、２３３～２４８、１３０９～１３２３または１４８０～１４９５位を標的とする。
　ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、標的領域に対して相補的な少なくとも１４個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有する。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、標的領域に対して相補的な少なくとも１４個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有し、標的領域は、配列表の配列番号１の５’末端から１２６～１４１、１２６～１４３、１２７～１４２、１２７～１４３、１２７～１４４、１２７～１４６、１２８～１４３、１２８～１４４、１２８～１４７、２３２～２４５、２３２～２４７、２３３～２４６、２３３～２４７、２３３～２４８、２３４～２４７、２３４～２４８、１３０４～１３２３、１３０６～１３２１、１３０６～１３２４、１３０７～１３２３、１３０７～１３２４、１３０７～１３２５、１３０７～１３２６、１３０８～１３２３、１３０８～１３２４、１３０８～１３２２、１３０８～１３２５、１３０９～１３２３、１３０９～１３２４、１３０９～１３２５、１３０９～１３２２、１３１０～１３２３、１３１０～１３２４、１４７２～１４８５、１４７２～１４８６、１４７２～１４８７、１４７２～１４８８、１４７３～１４８７、１４７３～１４８８、１４７３～１４８９、１４７４～１４８８、１４７４～１４８９、１４７５～１４９０、１４７６～１４９０、１４７６～１４９１、１４７６～１４９５、１４７７～１４９５、１４７８～１４９６、１４７９～１４９５、１４７９～１４９６、１４７９～１４９８、１４８０～１４９４、１４８０～１４９５、１４８０～１４９６、１４８０～１４９７または１４８０～１４９９位を標的とする。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、標的領域に対して相補的な少なくとも１４個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有し、標的領域は、配列表の配列番号１の５’末端から１２８～１４３、２３２～２４７、２３３～２４８、１３０９～１３２３または１４８０～１４９５位を標的とする。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１２６～１４１、１２６～１４３、１２７～１４２、１２７～１４３、１２７～１４４、１２７～１４６、１２８～１４３、１２８～１４４、１２８～１４７、２３２～２４５、２３２～２４７、２３３～２４６、２３３～２４７、２３３～２４８、２３４～２４７、２３４～２４８、１３０４～１３２３、１３０６～１３２１、１３０６～１３２４、１３０７～１３２３、１３０７～１３２４、１３０７～１３２５、１３０７～１３２６、１３０８～１３２３、１３０８～１３２４、１３０８～１３２２、１３０８～１３２５、１３０９～１３２３、１３０９～１３２４、１３０９～１３２５、１３０９～１３２２、１３１０～１３２３、１３１０～１３２４、１４７２～１４８５、１４７２～１４８６、１４７２～１４８７、１４７２～１４８８、１４７３～１４８７、１４７３～１４８８、１４７３～１４８９、１４７４～１４８８、１４７４～１４８９、１４７５～１４９０、１４７６～１４９０、１４７６～１４９１、１４７６～１４９５、１４７７～１４９５、１４７８～１４９６、１４７９～１４９５、１４７９～１４９６、１４７９～１４９８、１４８０～１４９４、１４８０～１４９５、１４８０～１４９６、１４８０～１４９７または１４８０～１４９９位の等長部分に相補的である核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１２８～１４３、２３２～２４７、２３３～２４８、１３０９～１３２３、１４８０～１４９５位の等長部分に相補的である核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号２～４、７～６４、６９～９７、１０２～１１２のいずれか１つに記載される核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号２～４、７５、７８のいずれか１つに記載される核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号２～４、７～６４、６９～９７、１０２～１１２のいずれか１つに記載される核酸塩基配列からなる修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは配列表の配列番号２～４、７５、７８のいずれか１つに記載される核酸塩基配列からなる修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号２、３、４、７５、または７８のいずれか１つに記載される核酸塩基配列の少なくとも８個の連続的な核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号２、３、４、７５、または７８のいずれか１つに記載される核酸塩基配列の少なくとも１０個の連続的な核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号２、３、４、７５、または７８のいずれか１つに記載される核酸塩基配列の少なくとも１２個の連続的な核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号２、３、４、７５、または７８のいずれか１つに記載される核酸塩基配列の少なくとも１４個の連続的な核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号２、３、４、７５、または７８のいずれか１つに記載される核酸塩基配列からなる核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、配列表の配列番号２、３、４、７５、または７８のいずれか１つに記載される核酸塩基配列からなる核酸塩基配列を有する。
　ある種の実施態様では、動物はヒトである。
　ある種の実施態様では、投与は非経口投与を含む。
　ある種の実施態様では、化合物は一本鎖の修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、前記修飾オリゴヌクレオチドの全体にわたって測定した場合に、配列表の配列番号１の前記いずれか１つの領域の等長部分に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％相補的である。ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、前記修飾オリゴヌクレオチドの全体にわたって測定した場合に、配列表の配列番号１の前記いずれか１つの領域の等長部分に対して１００％相補的である。
　ある種の実施態様では、前記修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合である。ある種の実施態様では、各ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
　ある種の実施態様では、前記修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシドは修飾糖を含む。ある種の実施態様では、少なくとも１つの修飾糖は二環式糖である。ある種の実施態様では、少なくとも１つの修飾糖は、２’－Ｏ－メトキシエチル、２’－Ｏ－メチルおよび／または４’－（ＣＨ２）ｎ－Ｏ－２’架橋（式中、ｎは１または２である）を含む。
　ある種の実施態様では、前記修飾オリゴヌクレオチドの糖部分は少なくとも１つの二環式糖である修飾糖を含む。ある種の実施態様では、少なくとも１つの修飾糖はＬＮＡ、ＧｕＮＡ、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ＡＬＮＡ［ｍＵ］、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］、ＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］、および／またはＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］である。
　ある種の実施態様では、前記修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシドは、修飾核酸塩基を含む。ある種の実施態様では、修飾核酸塩基は５－メチルシトシンである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、以下を含む：ａ）連結したデオキシヌクレオシドから成るギャップセグメント；ｂ）連結したヌクレオシドから成る５’ウイングセグメント；及びｃ）連結したヌクレオシドから成る３’ウイングセグメント。ギャップセグメントは５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントの間に位置し、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは２’－Ｏ－メチル修飾糖、２’－Ｏ－メトキシエチル修飾糖または２環式糖などの修飾糖を含む。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、以下を含む：ａ）１または２個の２’－Ｏ－メチル修飾糖や２’－Ｏ－メトキシエチル修飾糖などの修飾糖を含むヌクレオシドを含み、それ以外は修飾糖を含まないヌクレオシドであるギャップセグメント；ｂ）連結したヌクレオシドを含む５’ウイングセグメント；及びｃ）連結したヌクレオシドを含む３’ウイングセグメント。ギャップセグメントは５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントの間に位置し、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは２’－Ｏ－メチル修飾糖、２’－Ｏ－メトキシエチル糖または２環式糖などの修飾糖を含む。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、以下を含む：ａ）ヌクレオシドの数が６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５もしくは１６個であるギャップセグメントであって、前記ヌクレオシドは修飾糖を含まないヌクレオシドのみであるか、または２’－Ｏ－メチル修飾糖や２’－Ｏ－メトキシエチル修飾糖などの修飾糖を含むヌクレオシドを１または２個含み、それ以外は修飾糖を含まないヌクレオシドである、ギャップセグメント；ｂ）ヌクレオシドの数が２、３、４、５、６または７個である５’ウイングセグメント；及びｃ）ヌクレオシドの数が２、３、４、５、６、７または８個である３’ウイングセグメント。
　ここで、ギャップセグメントは５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントの間に位置し、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは２’－Ｏ－メチル修飾糖、２’－Ｏ－メトキシエチル糖または２環式糖を含み、前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合はホスホロチオエート結合を含み、前記修飾オリゴヌクレオチド中のシトシンの一部または全部は５’－メチルシトシンであってもよい。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、ギャップマーを構成するヌクレオシドの数は１２個、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０個である。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、ヌクレオシドの糖部分に於いて、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル及び／または４’－（ＣＨ２）ｎ－Ｏ－２’架橋（式中、ｎは１または２である）を含む。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、ヌクレオシドの糖部分に於いて、ＬＮＡ、ＧｕＮＡ、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ＡＬＮＡ［ｍＵ］、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］、ＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］、および／またはＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］を含む。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、これは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１２６～１４７位、２３２～２４８位、１３０６～１３２５位または１４７２～１４９５位の等長部分に相補的である少なくとも８個の連続する核酸塩基配列を含む核酸塩基配列である修飾オリゴヌクレオチドを含む核酸塩基配列を有する。ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１２６～１４７位、２３２～２４８位、１３０６～１３２５位または１４７２～１４９５位の等長部分に相補的である少なくとも９個、１０個、１１個または１２個の連続する核酸塩基配列を含む核酸塩基配列である修飾オリゴヌクレオチドを含む核酸塩基配列を有する。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１２６～１４７位の等長部分に相補的である少なくとも８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個または２２個の連続する核酸塩基配列を含む核酸塩基配列であり、３０残基以内の修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から２３２～２４８位の等長部分に相補的である少なくとも８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個または１７個の連続する核酸塩基配列を含む核酸塩基配列であり、３０残基以内の修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１３０６～１３２５位の等長部分に相補的である少なくとも８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個または２０個の連続する核酸塩基配列を含む核酸塩基配列であり、３０残基以内の修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１４７２～１４９５位の等長部分に相補的である少なくとも８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個または２４個の連続する核酸塩基配列を含む核酸塩基配列であり、３０残基以内の修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドのギャップマーであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１２６～１４７位の等長部分に相補的である核酸塩基配列を含み、等長部分において配列表の配列番号１に少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％相補的である修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、１２～２９残基、１２～２８残基、１２～２７残基、１２～２６残基、１２～２５残基、１２～２４残基、１２～２３残基、１２～２２残基、１２～２１残基、１２～２０残基、１２～１９残基、１２～１８残基、１２～１７残基、１２～１６残基、１２～１５残基、１２～１４残基、１３～２９残基、１３～２８残基、１３～２７残基、１３～２６残基、１３～２５残基、１３～２４残基、１３～２３残基、１３～２２残基、１３～２１残基、１３～２０残基、１３～１９残基、１３～１８残基、１３～１７残基、１３～１６残基、１３～１５残基、１３～１４残基、１４～２９残基、１４～２８残基、１４～２７残基、１４～２６残基、１４～２５残基、１４～２４残基、１４～２３残基、１４～２２残基、１４～２１残基、１４～２０残基、１４～１９残基、１４～１８残基、１４～１７残基、１４～１６残基、１４～１５残基の前記修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドのギャップマーであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から２３３～２４８位の等長部分に相補的である核酸塩基配列を含み、等長部分において配列表の配列番号１に少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％相補的である修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、１２～２９残基、１２～２８残基、１２～２７残基、１２～２６残基、１２～２５残基、１２～２４残基、１２～２３残基、１２～２２残基、１２～２１残基、１２～２０残基、１２～１９残基、１２～１８残基、１２～１７残基、１２～１６残基、１２～１５残基、１２～１４残基、１３～２９残基、１３～２８残基、１３～２７残基、１３～２６残基、１３～２５残基、１３～２４残基、１３～２３残基、１３～２２残基、１３～２１残基、１３～２０残基、１３～１９残基、１３～１８残基、１３～１７残基、１３～１６残基、１３～１５残基、１３～１４残基、１４～２９残基、１４～２８残基、１４～２７残基、１４～２６残基、１４～２５残基、１４～２４残基、１４～２３残基、１４～２２残基、１４～２１残基、１４～２０残基、１４～１９残基、１４～１８残基、１４～１７残基、１４～１６残基、１４～１５残基の前記修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドのギャップマーであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１３０９～１３２３位の等長部分に相補的である核酸塩基配列を含み、等長部分において配列表の配列番号１に少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％相補的である修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、１２～２９残基、１２～２８残基、１２～２７残基、１２～２６残基、１２～２５残基、１２～２４残基、１２～２３残基、１２～２２残基、１２～２１残基、１２～２０残基、１２～１９残基、１２～１８残基、１２～１７残基、１２～１６残基、１２～１５残基、１２～１４残基、１３～２９残基、１３～２８残基、１３～２７残基、１３～２６残基、１３～２５残基、１３～２４残基、１３～２３残基、１３～２２残基、１３～２１残基、１３～２０残基、１３～１９残基、１３～１８残基、１３～１７残基、１３～１６残基、１３～１５残基、１３～１４残基、１４～２９残基、１４～２８残基、１４～２７残基、１４～２６残基、１４～２５残基、１４～２４残基、１４～２３残基、１４～２２残基、１４～２１残基、１４～２０残基、１４～１９残基、１４～１８残基、１４～１７残基、１４～１６残基、１４～１５残基の前記修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドのギャップマーであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１４７２～１４９５位の等長部分に相補的である核酸塩基配列を含み、等長部分において配列表の配列番号１に少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％相補的である修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、１２～２９残基、１２～２８残基、１２～２７残基、１２～２６残基、１２～２５残基、１２～２４残基、１２～２３残基、１２～２２残基、１２～２１残基、１２～２０残基、１２～１９残基、１２～１８残基、１２～１７残基、１２～１６残基、１２～１５残基、１２～１４残基、１３～２９残基、１３～２８残基、１３～２７残基、１３～２６残基、１３～２５残基、１３～２４残基、１３～２３残基、１３～２２残基、１３～２１残基、１３～２０残基、１３～１９残基、１３～１８残基、１３～１７残基、１３～１６残基、１３～１５残基、１３～１４残基、１４～２９残基、１４～２８残基、１４～２７残基、１４～２６残基、１４～２５残基、１４～２４残基、１４～２３残基、１４～２２残基、１４～２１残基、１４～２０残基、１４～１９残基、１４～１８残基、１４～１７残基、１４～１６残基、１４～１５残基の前記修飾オリゴヌクレオチドである。この場合、５’ウイングセグメントおよび／または３’ウイングセグメントに含まれるオリゴヌクレオチドは少なくとも１つのＧｕＮＡ、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ＡＬＮＡ［ｍＵ］、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］、ＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］およびＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］から選択される修飾糖を含むヌクレオシドを少なくとも１つ含み、さらに、２’－Ｏ－メトキシエチルで修飾された糖、および／または２’－Ｏ－メチルで修飾された糖を含んでもよい。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドのギャップマーであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１４８０～１４９５位の等長部分に相補的である核酸塩基配列であって、配列番号１の核酸塩基の５’末端から１４８０位の塩基の相補塩基を３’末端に有する核酸塩基配列からなり、等長部分において配列表の配列番号１に少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％相補的である修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、１２～２９残基、１２～２８残基、１２～２７残基、１２～２６残基、１２～２５残基、１２～２４残基、１２～２３残基、１２～２２残基、１２～２１残基、１２～２０残基、１２～１９残基、１２～１８残基、１２～１７残基、１２～１６残基、１２～１５残基、１２～１４残基、１３～２９残基、１３～２８残基、１３～２７残基、１３～２６残基、１３～２５残基、１３～２４残基、１３～２３残基、１３～２２残基、１３～２１残基、１３～２０残基、１３～１９残基、１３～１８残基、１３～１７残基、１３～１６残基、１３～１５残基、１３～１４残基、１４～２９残基、１４～２８残基、１４～２７残基、１４～２６残基、１４～２５残基、１４～２４残基、１４～２３残基、１４～２２残基、１４～２１残基、１４～２０残基、１４～１９残基、１４～１８残基、１４～１７残基、１４～１６残基、１４～１５残基からなる前記修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、配列表の配列番号１の以下の領域のいずれか１つを標的とする：５’末端から１２６～１４１、１２６～１４３、１２７～１４２、１２７～１４３、１２７～１４４、１２７～１４６、１２８～１４３、１２８～１４４、１２８～１４７、２３２～２４５、２３２～２４７、２３３～２４６、２３３～２４７、２３３～２４８、２３４～２４７、２３４～２４８、１３０４～１３２３、１３０６～１３２１、１３０６～１３２４、１３０７～１３２３、１３０７～１３２４、１３０７～１３２５、１３０７～１３２６、１３０８～１３２３、１３０８～１３２４、１３０８～１３２２、１３０８～１３２５、１３０９～１３２３、１３０９～１３２４、１３０９～１３２５、１３０９～１３２２、１３１０～１３２３、１３１０～１３２４、１４７２～１４８５、１４７２～１４８６、１４７２～１４８７、１４７２～１４８８、１４７３～１４８７、１４７３～１４８８、１４７３～１４８９、１４７４～１４８８、１４７４～１４８９、１４７５～１４９０、１４７６～１４９０、１４７６～１４９１、１４７６～１４９５、１４７７～１４９５、１４７８～１４９６、１４７９～１４９５、１４７９～１４９６、１４７９～１４９８、１４８０～１４９４、１４８０～１４９５、１４８０～１４９６、１４８０～１４９７または１４８０～１４９９位。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、配列表の配列番号１の以下の領域のいずれか１つを標的とする：５’末端から１２８～１４３、２３２～２４７、２３３～２４８、１３０９～１３２３及び１４８０～１４９５位。
　ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、標的領域に対して相補的な少なくとも８個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有する。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、標的領域に対して相補的な少なくとも８個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有し、標的領域は、配列表の配列番号１の５’末端から１２６～１４１、１２６～１４３、１２７～１４２、１２７～１４３、１２７～１４４、１２７～１４６、１２８～１４３、１２８～１４４、１２８～１４７、２３２～２４５、２３２～２４７、２３３～２４６、２３３～２４７、２３３～２４８、２３４～２４７、２３４～２４８、１３０４～１３２３、１３０６～１３２１、１３０６～１３２４、１３０７～１３２３、１３０７～１３２４、１３０７～１３２５、１３０７～１３２６、１３０８～１３２３、１３０８～１３２４、１３０８～１３２２、１３０８～１３２５、１３０９～１３２３、１３０９～１３２４、１３０９～１３２５、１３０９～１３２２、１３１０～１３２３、１３１０～１３２４、１４７２～１４８５、１４７２～１４８６、１４７２～１４８７、１４７２～１４８８、１４７３～１４８７、１４７３～１４８８、１４７３～１４８９、１４７４～１４８８、１４７４～１４８９、１４７５～１４９０、１４７６～１４９０、１４７６～１４９１、１４７６～１４９５、１４７７～１４９５、１４７８～１４９６、１４７９～１４９５、１４７９～１４９６、１４７９～１４９８、１４８０～１４９４、１４８０～１４９５、１４８０～１４９６、１４８０～１４９７または１４８０～１４９９位を標的とする。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、標的領域に対して相補的な少なくとも８個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有し、標的領域は、配列表の配列番号１の５’末端から１２８～１４３、２３２～２４７、２３３～２４８、１３０９～１３２３または１４８０～１４９５位を標的とする。
　ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、標的領域に対して相補的な少なくとも１０個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有する。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、標的領域に対して相補的な少なくとも１０個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有し、標的領域は、配列表の配列番号１の５‘末端から１２６～１４１、１２６～１４３、１２７～１４２、１２７～１４３、１２７～１４４、１２７～１４６、１２８～１４３、１２８～１４４、１２８～１４７、２３２～２４５、２３２～２４７、２３３～２４６、２３３～２４７、２３３～２４８、２３４～２４７、２３４～２４８、１３０４～１３２３、１３０６～１３２１、１３０６～１３２４、１３０７～１３２３、１３０７～１３２４、１３０７～１３２５、１３０７～１３２６、１３０８～１３２３、１３０８～１３２４、１３０８～１３２２、１３０８～１３２５、１３０９～１３２３、１３０９～１３２４、１３０９～１３２５、１３０９～１３２２、１３１０～１３２３、１３１０～１３２４、１４７２～１４８５、１４７２～１４８６、１４７２～１４８７、１４７２～１４８８、１４７３～１４８７、１４７３～１４８８、１４７３～１４８９、１４７４～１４８８、１４７４～１４８９、１４７５～１４９０、１４７６～１４９０、１４７６～１４９１、１４７６～１４９５、１４７７～１４９５、１４７８～１４９６、１４７９～１４９５、１４７９～１４９６、１４７９～１４９８、１４８０～１４９４、１４８０～１４９５、１４８０～１４９６、１４８０～１４９７または１４８０～１４９９位を標的とする。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、標的領域に対して相補的な少なくとも１０個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有し、標的領域は、配列表の配列番号１の５’末端から１２８～１４３、２３２～２４７、２３３～２４８、１３０９～１３２３または１４８０～１４９５位を標的とする。
　ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、標的領域に対して相補的な少なくとも１２個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有する。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、標的領域に対して相補的な少なくとも１２個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有し、標的領域は、配列表の配列番号１の５’末端から１２６～１４１、１２６～１４３、１２７～１４２、１２７～１４３、１２７～１４４、１２７～１４６、１２８～１４３、１２８～１４４、１２８～１４７、２３２～２４５、２３２～２４７、２３３～２４６、２３３～２４７、２３３～２４８、２３４～２４７、２３４～２４８、１３０４～１３２３、１３０６～１３２１、１３０６～１３２４、１３０７～１３２３、１３０７～１３２４、１３０７～１３２５、１３０７～１３２６、１３０８～１３２３、１３０８～１３２４、１３０８～１３２２、１３０８～１３２５、１３０９～１３２３、１３０９～１３２４、１３０９～１３２５、１３０９～１３２２、１３１０～１３２３、１３１０～１３２４、１４７２～１４８５、１４７２～１４８６、１４７２～１４８７、１４７２～１４８８、１４７３～１４８７、１４７３～１４８８、１４７３～１４８９、１４７４～１４８８、１４７４～１４８９、１４７５～１４９０、１４７６～１４９０、１４７６～１４９１、１４７６～１４９５、１４７７～１４９５、１４７８～１４９６、１４７９～１４９５、１４７９～１４９６、１４７９～１４９８、１４８０～１４９４、１４８０～１４９５、１４８０～１４９６、１４８０～１４９７または１４８０～１４９９位を標的とする。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、標的領域に対して相補的な少なくとも１２個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有し、標的領域は、配列表の配列番号１の５’末端から１２８～１４３、２３２～２４７、２３３～２４８、１３０９～１３２３または１４８０～１４９５位を標的とする。
　ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、標的領域に対して相補的な少なくとも１４個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有する。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、標的領域に対して相補的な少なくとも１４個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有し、標的領域は、配列表の配列番号１の５’末端から１２６～１４１、１２６～１４３、１２７～１４２、１２７～１４３、１２７～１４４、１２７～１４６、１２８～１４３、１２８～１４４、１２８～１４７、２３２～２４５、２３２～２４７、２３３～２４６、２３３～２４７、２３３～２４８、２３４～２４７、２３４～２４８、１３０４～１３２３、１３０６～１３２１、１３０６～１３２４、１３０７～１３２３、１３０７～１３２４、１３０７～１３２５、１３０７～１３２６、１３０８～１３２３、１３０８～１３２４、１３０８～１３２２、１３０８～１３２５、１３０９～１３２３、１３０９～１３２４、１３０９～１３２５、１３０９～１３２２、１３１０～１３２３、１３１０～１３２４、１４７２～１４８５、１４７２～１４８６、１４７２～１４８７、１４７２～１４８８、１４７３～１４８７、１４７３～１４８８、１４７３～１４８９、１４７４～１４８８、１４７４～１４８９、１４７５～１４９０、１４７６～１４９０、１４７６～１４９１、１４７６～１４９５、１４７７～１４９５、１４７８～１４９６、１４７９～１４９５、１４７９～１４９６、１４７９～１４９８、１４８０～１４９４、１４８０～１４９５、１４８０～１４９６、１４８０～１４９７または１４８０～１４９９位を標的とする。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、標的領域に対して相補的な少なくとも１４個の連続的な核酸塩基を含有する相補的領域を含む核酸塩基配列を有し、標的領域は、配列表の配列番号１の５’末端から１２８～１４３、２３２～２４７、２３３～２４８、１３０９～１３２３または１４８０～１４９５位を標的とする。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１２６～１４１、１２６～１４３、１２７～１４２、１２７～１４３、１２７～１４４、１２７～１４６、１２８～１４３、１２８～１４４、１２８～１４７、２３２～２４５、２３２～２４７、２３３～２４６、２３３～２４７、２３３～２４８、２３４～２４７、２３４～２４８、１３０４～１３２３、１３０６～１３２１、１３０６～１３２４、１３０７～１３２３、１３０７～１３２４、１３０７～１３２５、１３０７～１３２６、１３０８～１３２３、１３０８～１３２４、１３０８～１３２２、１３０８～１３２５、１３０９～１３２３、１３０９～１３２４、１３０９～１３２５、１３０９～１３２２、１３１０～１３２３、１３１０～１３２４、１４７２～１４８５、１４７２～１４８６、１４７２～１４８７、１４７２～１４８８、１４７３～１４８７、１４７３～１４８８、１４７３～１４８９、１４７４～１４８８、１４７４～１４８９、１４７５～１４９０、１４７６～１４９０、１４７６～１４９１、１４７６～１４９５、１４７７～１４９５、１４７８～１４９６、１４７９～１４９５、１４７９～１４９６、１４７９～１４９８、１４８０～１４９４、１４８０～１４９５、１４８０～１４９６、１４８０～１４９７または１４８０～１４９９位の等長部分に相補的である核酸塩基配列からなる修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、配列表の配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基の５’末端から１２８～１４３、２３２～２４７、２３３～２４８、１３０９～１３２３、１４８０～１４９５位の等長部分に相補的である核酸塩基配列からなる修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、配列表の配列番号２～４、７～６４、６９～９７、１０２～１１２のいずれか１つに記載される核酸塩基配列からなる修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、配列表の配列番号２～４、７５、７８のいずれか１つに記載される核酸塩基配列からなる修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、化合物番号１～１１２、１１４～１３２、１３７～２４６のいずれか１つに記載される修飾オリゴヌクレオチドである。また、ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、化合物番号１～３、１２３、１５７、２０４、２２１、２３１のいずれか１つに記載される修飾オリゴヌクレオチドである。
　本明細書中、ヌクレオチドを表す「Ｇｌｓ」等の記号において、左側位置に示す略号は核酸塩基部分を意味し、中央位置に示す略号は糖部分を意味し、そして、右側位置に示す略号はヌクレオシド間結合の様式を意味する。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、下式：
GlsMlsMlsTdsAdsGdsAdsCdsAdsGdsCdsGdsTdsMlsGlsGl；
で示される修飾オリゴヌクレオチドであって、
　式中
　各核酸塩基が下記記号：
Ａ＝アデニン、Ｔ＝チミン、Ｇ＝グアニン、Ｃ＝シトシン、Ｍ＝５－メチルシトシン、
に従って示され；
　各糖部分が下記記号：
ｌ＝ＬＮＡ、ｄ＝２’－デオキシリボース、
に従って示され；
　各ヌクレオシド間結合が下記記号：
ｓ＝ホスホロチオエート
に従って示される、修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、
　下式：
GmsMmsMmsTdsAdsGdsAdsCdsAdsGdsCdsGdsTdsMmsGmsGm；
で示される修飾オリゴヌクレオチドであって、
　式中、
　各核酸塩基が下記記号：
Ａ＝アデニン、Ｔ＝チミン、Ｇ＝グアニン、Ｃ＝シトシン、M＝５－メチルシトシン、
に従って示され；
　各糖部分が下記記号：
ｍ＝ＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ｄ＝２’－デオキシリボース、
に従って示され；
　各ヌクレオシド間結合が下記記号：
ｓ＝ホスホロチオエートに従って示される、修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、下式：
GmsMmsAmsGdsTdsTdsCdsTdsCdsCdsGdsCdsGmsGmsTm；
で示される修飾オリゴヌクレオチドであって、
　式中、
　各核酸塩基下記記号：
Ａ＝アデニン、Ｔ＝チミン、Ｇ＝グアニン、Ｃ＝シトシン、Ｍ＝５－メチルシトシン、
に従って示され；
　各糖部分が下記記号：
ｍ＝ＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ｄ＝２’－デオキシリボース、
に従って示され；
　各ヌクレオシド間結合が下記記号：
ｓ＝ホスホロチオエート
に従って示される、修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドはギャップマーであり、下式：
MlsGlsAlsGdsAdsTdsTdsCdsCdsCdsGdsCdsCdsGlsGlsTl；
に従って示される修飾オリゴヌクレオチドであって、
　式中、
　各核酸塩基が下記記号：
Ａ＝アデニン、Ｔ＝チミン、Ｇ＝グアニン、Ｃ＝シトシン、Ｍ＝５－メチルシトシン、
に従って示され；
　各糖部分が下記記号：
ｌ＝ＬＮＡ、ｄ＝２’－デオキシリボース、
に従って示され；
　各ヌクレオシド間結合が下記記号：
ｓ＝ホスホロチオエート、
に従って示される、修飾オリゴヌクレオチドである。
　ある種の実施態様は、ＤＵＸ４関連疾患の動物において、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡ及び／またはＤＵＸ４蛋白質のレベル（例えば、筋肉内レベル）を低減させる方法であって、ＤＵＸ４に対する修飾オリゴヌクレオチドの有効量を動物に投与することを含む方法を提供する。
　ある種の実施態様は、ＦＳＨＤの動物において、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡ及び／またはＤＵＸ４蛋白質のレベル（例えば、筋肉内レベル）を低減させる方法であって、ＤＵＸ４に対する修飾オリゴヌクレオチドの有効量を動物に投与することを含む方法を提供する。また、ある種の実施態様は、ＦＳＨＤの動物において、筋障害を低減させる及び／または運動機能を改善する方法であって、ＤＵＸ４に対する修飾オリゴヌクレオチドの有効量を動物に投与することを含む方法を提供する。
　ある種の実施態様は、ＦＳＨＤの処置、つまり、治療、予防、改善、軽減する方法であって、ＤＵＸ４に対する修飾オリゴヌクレオチドの有効量を動物に投与することを含む方法を提供する。
　ある種の実施態様は、ＦＳＨＤの各種症状（例えば、顔面筋衰弱、眼瞼下垂、口笛不能、顔の表情変化の減少、憂鬱または怒り顔表情、語を発音する困難、肩甲筋衰弱（翼状肩甲、撫肩等の変形）、下肢衰弱、聴力損失、および心臓病）の予防、改善、軽減する方法であって、ＤＵＸ４に対する修飾オリゴヌクレオチドの有効量を動物に投与することを含む方法を提供する。
　ある種の実施態様は、Ｂ細胞性急性リンパ性白血病などの動物において、ＤＵＸ４遺伝子がＩＧＨ遺伝子と融合することにより生じるｍＲＮＡ及び／または蛋白質のレベル（例えば、血中のＢ細胞内レベル）を低減させる方法であって、ＤＵＸ４に対する修飾オリゴヌクレオチドの有効量を動物に投与することを含む方法を提供する。また、ある種の実施態様は、Ｂ細胞性急性リンパ性白血病などの処置、つまり、治療、予防、改善、軽減する方法であって、ＤＵＸ４に対する修飾オリゴヌクレオチドの有効量を動物に投与することを含む方法を提供する。
　ある種の実施態様は、分化円形細胞肉腫などの動物において、ＤＵＸ４遺伝子がＣＩＣ遺伝子と融合することにより生じるｍＲＮＡ及び／または蛋白質のレベル（例えば、肉腫内レベル）を低減させる方法であって、ＤＵＸ４に対する修飾オリゴヌクレオチドの有効量を動物に投与することを含む方法を提供する。また、ある種の実施態様は、分化円形細胞肉腫などの処置、つまり、治療、予防、改善、軽減する方法であって、ＤＵＸ４に対する修飾オリゴヌクレオチドの有効量を動物に投与することを含む方法を提供する。
　ある種の実施態様は、胎児性横紋筋肉腫などの動物において、ＤＵＸ４遺伝子がＥＷＳＲ１遺伝子と融合することにより生じるｍＲＮＡ及び／または蛋白質のレベル（例えば、肉腫内レベル）を低減させる方法であって、ＤＵＸ４に対する修飾オリゴヌクレオチドを動物に投与することを含む方法を提供する。また、ある種の実施態様は、胎児性横紋筋肉腫などの処置、つまり、治療、予防、改善、軽減する方法であって、ＤＵＸ４に対する修飾オリゴヌクレオチドの有効量を動物に投与することを含む方法を提供する。
　ある種の実施態様は、副作用の少ないＤＵＸ４関連疾患の治療、予防、改善、軽減する方法であって、ＤＵＸ４に対する修飾オリゴヌクレオチドを動物に投与することを含む方法を提供する。ある種の実施態様では、副作用としては、注射部位反応、肝機能検査の異常、腎機能異常、肝毒性（病理組織学的異常所見：肝細胞の変性壊死、肝細胞肥大等）、腎毒性（病理組織学的異常所見等）、中枢神経系異常、ミオパシー及び倦怠が挙げられる。例えば、血液中のＡＬＴ、ＡＳＴ、γ－ＧＴＰ、GLDH、ALP（アルカリフォスファターゼ）またはTBA（total bile acids）レベルの上昇は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。例えば、ビリルビンの上昇は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。また、尿たんぱくの上昇、血液中のクレアチニン、もしくはＵＮの上昇は、腎毒性または腎機能異常を示し得る。
　ある種の実施態様は、本明細書に記載の治療方法のいずれかで使用するための医薬の製造における、本明細書に記載される任意の化合物または該化合物を含有する医薬組成物の使用を提供する。例えば、ある種の実施態様はＦＳＨＤを処置する、つまり、治療する、予防する、遅延させるまたは改善させるための医薬の製造における、本明細書に記載の化合物または該化合物を含有する医薬組成物の使用を提供する。ある種の実施態様は、ＤＵＸ４の発現を阻害する、並びにＤＵＸ４関連疾患及び／またはその症状を処置する、つまり、治療する、予防する、遅延させるまたは改善させるための医薬の製造における、本明細書に記載の化合物または該化合物を含有する医薬組成物の使用を提供する。ある種の実施態様は、動物においてＤＵＸ４の発現を低減させるための医薬の製造における、本明細書に記載の化合物または該化合物を含有する医薬組成物の使用を提供する。ある種の実施態様は、動物において、優先的にＤＵＸ４－ＦＬ　ｍＲＮＡのレベル（例えば、筋肉内レベル）を低減させる、筋強直症を軽減させるための医薬の製造における、本明細書に記載の化合物または該化合物を含有する医薬組成物の使用を提供する。ある種の実施態様は、ＦＳＨＤを有する動物を処置するための医薬の製造における、本明細書に記載の化合物または該化合物を含有する医薬組成物の使用を提供する。ある種の実施態様は、筋硬直、筋強直症、顔面筋衰弱、眼瞼下垂、口笛不能、顔の表情変化の減少、憂鬱または怒り顔表情、語を発音する困難、肩甲筋衰弱（翼状肩甲、撫肩等の変形）、下肢衰弱、聴力損失、および心臓病を含めた、ＦＳＨＤの発生と関係がある１つ以上の症状及び転帰を処置するための医薬の製造における、本明細書に記載の化合物または該化合物を含有する医薬組成物の使用を提供する。ある種の実施態様は、ＤＵＸ４遺伝子の転写、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡの翻訳、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡの切断を導くことによってＤＵＸ４蛋白質の発現を妨げるための医薬の製造における、本明細書に記載の化合物または該化合物を含有する医薬組成物の使用を提供する。
　ある種の実施態様は、本明細書に記載のようにＦＳＨＤを処置する、つまり、治療する、予防するまたは改善させるキットであって、ａ）本明細書に記載の化合物、及び任意にｂ）本明細書に記載のさらなる薬剤または療法を含む、キットを提供する。キットは、ＦＳＨＤを処置する、つまり、治療する、予防する、または改善させる目的でキットを使用するための説明書またはラベルをさらに含むことができる。
　ある種の実施態様は、本明細書に記載の治療方法のいずれかで使用するための医薬の製造における、本明細書に記載される任意の化合物または該化合物を含有する医薬組成物の使用を提供する。例えば、ある種の実施態様はＦＳＨＤを処置する、つまり、治療する、改善させる、または予防するための医薬の製造における、本明細書に記載の化合物または該化合物を含有する医薬組成物の使用を提供する。ある種の実施態様は、ＤＵＸ４の発現を阻害する並びにＤＵＸ４関連疾患及び／またはその症状を処置する、つまり、治療する、予防する、遅延させるまたは改善させるための医薬の製造における、本明細書に記載の化合物または該化合物を含有する医薬組成物の使用を提供する。ある種の実施態様は、動物においてＤＵＸ４の発現を低減させるための医薬の製造における、本明細書に記載の化合物または該化合物を含有する医薬組成物の使用を提供する。ある種の実施態様は、動物において、優先的にＤＵＸ４－ＦＬ　ｍＲＮＡのレベル（例えば、筋肉内レベル）を低減させる、筋強直症を軽減させるための医薬の製造における、本明細書に記載の化合物または該化合物を含有する医薬組成物の使用を提供する。ある種の実施態様は、ＦＳＨＤを有する動物を処置するための医薬の製造における、本明細書に記載の化合物または該化合物を含有する医薬組成物の使用を提供する。ある種の実施態様は、筋硬直、筋強直症、顔面筋衰弱、眼瞼下垂、口笛不能、顔の表情変化の減少、憂鬱または怒り顔表情、語を発音する困難、肩甲筋衰弱（翼状肩甲、撫肩等の変形）、下肢衰弱、聴力損失、および心臓病を含めた、ＦＳＨＤの発生と関係がある１つ以上の症状及び転帰を処置するための、本明細書に記載の化合物または該化合物を含有する医薬組成物を提供する。ある種の実施態様は、配列表の配列番号２～４、７～６４、６９～９７もしくは１０２～１１２の核酸塩基配列からなる核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチド、または化合物番号１～１１２、１１４～１３２もしくは１３７～２４６の化合物を提供する。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、５’から３’の方向で記載される場合、それが標的とする標的核酸の標的セグメントの逆相補鎖を含む核酸塩基配列を有する。ある種のそのような実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、５’から３’の方向で記載される場合、それが標的とする標的核酸の標的セグメントの逆相補鎖を含む核酸塩基配列を有する。
　ある種の実施態様では、ＤＵＸ４を標的とする本明細書に記載の修飾オリゴヌクレオチドは、１２～３０ヌクレオチドの長さである。換言すれば、いくつかの実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは１２～３０残基の連結した核酸塩基である。他の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２～２９残基、１２～２８残基、１２～２７残基、１２～２６残基、１２～２５残基、１２～２４残基、１２～２３残基、１２～２２残基、１２～２１残基、１２～２０残基、１２～１９残基、１２～１８残基、１２～１７残基、１２～１６残基、１２～１５残基、１２～１４残基、１３～２９残基、１３～２８残基、１３～２７残基、１３～２６残基、１３～２５残基、１３～２４残基、１３～２３残基、１３～２２残基、１３～２１残基、１３～２０残基、１３～１９残基、１３～１８残基、１３～１７残基、１３～１６残基、１３～１５残基、１３～１４残基、１４～２９残基、１４～２８残基、１４～２７残基、１４～２６残基、１４～２５残基、１４～２４残基、１４～２３残基、１４～２２残基、１４～２１残基、１４～２０残基、１４～１９残基、１４～１８残基、１４～１７残基、１４～１６残基、１４～１５残基の連結した核酸塩基から成る修飾オリゴヌクレオチドを含む。ある種のそのような実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０残基の連結した核酸塩基の長さ、または上記の値の任意の２つによって定められた範囲から成る修飾オリゴヌクレオチドを含む。ある種の実施態様では、これらの長さのいずれかの修飾オリゴヌクレオチドは、本明細書に記載の例示的修飾オリゴヌクレオチドのいずれかの核酸塩基配列の少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８または少なくとも１９残基の連続的な核酸塩基（例えば、配列表の配列番号２～４、７～６４、６９～９７もしくは１０２～１１２）のいずれか１つに記載される核酸塩基配列の少なくとも８個の連続的な核酸塩基を含む。
　活性を無くすことなく、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのアンチセンス化合物の長さを増やすもしくは減らすこと及び／またはミスマッチ塩基を導入することができる。例えば、Ｗｏｏｌｆｅｔ ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：７３０５－７３０９，１９９２）によれば、１３～２５核酸塩基長の一連のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、卵母細胞インジェクションモデルにおいて、それらが標的ＲＮＡの切断を誘導する能力について試験し、アンチセンスオリゴヌクレオチドの末端付近に８または１１個のミスマッチ塩基を有する２５核酸塩基長のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ミスマッチを含まないアンチセンスオリゴヌクレオチドよりも程度が少ないとはいえ、標的ｍＲＮＡの特異的な切断を導くことができることが報告されている。同様に、標的特異的な切断は、１または３つのミスマッチを有するものを含めて、１３核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用して達成されたことが報告されている。
　Ｇａｕｔｓｃｈｉ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．９３：４６３－４７１，Ｍａｒｃｈ ２００１）によれば、ｂｃｌ－２　ｍＲＮＡに対して１００％の相補性を有し、ｂｃｌ－ｘＬ　ｍＲＮＡに対して３つのミスマッチを有するオリゴヌクレオチドが、インビトロ及びインビボにおいてｂｃｌ－２とｂｃｌ－ｘＬの両方の発現を低減させる能力を示たことが報告されている。さらに、このオリゴヌクレオチドは、インビボで、強力な抗腫瘍活性を示したことが報告されている。
標的核酸、標的領域及びヌクレオチド配列
　ＤＵＸ４をコードするヌクレオチド配列としては、限定されないが、以下の配列が挙げられる。
・ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１２９３７９８．２に記載の配列（配列表の配列番号１として本明細書に組み込まれる）。配列表の配列番号１のスプライシングバリアントは、ＤＵＸ４－ＦＬ１またはＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡともいう。
・ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１３０６０６８．２に記載の配列（配列表の配列番号５として本明細書に組み込まれる）。配列表の配列番号５のスプライシングバリアントは、ＤＵＸ４－ＦＬ２ともいう。
・ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１３６３８２０．１に記載の配列（配列表の配列番号６として本明細書に組み込まれる）。配列表の配列番号６のスプライシングバリアントは、ＤＵＸ４－ｓともいう。
・上記各スプライシングバリアントのＳＮＰ。
　本明細書に含まれる実施例の配列表の各配列番号に記載される配列は、糖部分、ヌクレオシド間結合または核酸塩基に対するいかなる修飾とも無関係である。したがって、配列表の配列番号で定められた修飾オリゴヌクレオチドは、独立に、糖部分、ヌクレオシド間結合または核酸塩基に対する１つまたは複数の修飾を含むことができる。化合物番号で記載される修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列とモチーフの組み合わせを示す。
　ある種の実施態様では、標的領域は標的核酸の構造的に定められた領域である。例えば、標的領域は、３’ＵＴＲ、５’ＵＴＲ、エクソン、イントロン、エクソン／イントロン接合部、コード領域、翻訳開始領域、翻訳終結領域または他の定められた核酸領域の１つ以上を包含し得る。ＤＵＸ４についての構造的に定められた領域は、ＮＣＢＩなどの配列データベースから受託番号によって得ることができ、そうした情報は、参照により本明細書に組み込まれる。ある種の実施態様では、標的領域は、標的領域内のある標的セグメントの５’標的部位から標的領域内の別の標的セグメントの３’標的部位までの配列を包含し得る。
　ターゲティングは、修飾オリゴヌクレオチドがハイブリダイズして、その結果所望の効果が生じる、少なくとも１つの標的セグメントの決定を含む。ある種の実施態様では、所望の効果は、ｍＲＮＡ標的核酸レベルの低減である。ある種の実施態様では、所望の効果は、標的核酸にコードされる蛋白質のレベルの低減、または標的核酸と関係がある表現型の変化である。
　標的領域は、１つまたは複数の標的セグメントを含むことができる。標的領域内の複数の標的セグメントは、重複していてもよい。あるいは、それらは、重複していなくてもよい。ある種の実施態様では、標的領域内の標的セグメントは、約３００個以下のヌクレオチドによって分離される。ある種の実施態様では、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸の２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０もしくは１０ヌクレオチドである、または、およそこれらの数のヌクレオチドである、または、これらの数以下のヌクレオチドである、または前述の値の任意の２つによって定められた範囲である、多数のヌクレオチドによって分離される。ある種の実施態様では、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸の５以下または約５以下のヌクレオチドによって分離される。ある種の実施態様では、標的セグメントは連続的である。本明細書に列挙される５’標的部位または３’標的部位のいずれかである出発核酸を有する範囲により定められる標的領域が意図される。
　適切な標的セグメントは、５’ＵＴＲ、コード領域、３’ＵＴＲ、イントロン、エクソンまたはエクソン／イントロン接合部内に見出すことができる。開始コドンまたは終止コドンを含む標的セグメントも適切な標的セグメントである。適切な標的セグメントは、開始コドンまたは終止コドンなどのある種の構造的に定められた領域を特異的に排除することができる。
　適切な標的セグメントの決定は、ゲノム全体にわたる、他の配列との標的核酸の配列の比較を含むことができる。例えば、ＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用して、異なる核酸間の類似領域を特定することができる。この比較は、選択された標的核酸以外の配列（すなわち、非標的配列またはオフターゲット配列）に非特異的様式でハイブリダイズし得る修飾オリゴヌクレオチド配列の選択を防ぐことができる。
　活性標的領域内の修飾オリゴヌクレオチドの（例えば、標的核酸レベルの低減パーセントで定められるような）活性の変動があり得る。ある種の実施態様では、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡのレベルの低減は、ＤＵＸ４蛋白質発現の阻害の指標となる。ＤＵＸ４蛋白質のレベルの低減も、標的ｍＲＮＡ発現の阻害の指標となる。さらに、表現型の変化、例えば、筋強直症を軽減させること、また筋障害を低減させることは、ＤＵＸ４　ｍＲＮＡ及び／または蛋白質の発現の阻害の指標となり得る。
ハイブリダイゼーション
　いくつかの実施態様では、ハイブリダイゼーションは、本明細書に開示される修飾オリゴヌクレオチドとＤＵＸ４核酸の間で生じる。ハイブリダイゼーションの最も一般的なメカニズムは、核酸分子の相補的核酸塩基間の水素結合（例えば、ワトソン‐クリック、フーグスティーンまたは逆フーグスティーン型水素結合）を伴う。ハイブリダイゼーションの強さは融解温度Ｔｍで表すことができる。Ｔｍとは、ハイブリダイゼーションした二重鎖核酸の５０％が単鎖核酸に解離する温度であり、溶液の塩条件、核酸の長さや塩基配列などにより異なるが、Tｍ値が高いほどハイブリダイゼーションは強い。
　ハイブリダイゼーションは様々な条件下で生じる。ストリンジェント条件は配列依存的であり、ハイブリダイズすることになる核酸分子の性質及び組成によって決定される。
　配列が標的核酸に特異的にハイブリダイズ可能かどうかを決定する方法は、当技術分野で周知である（Ｓａｍｂｒｏｏｋｅ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ Ｅｄ．，２００１）。ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドはＤＵＸ４核酸と特異的にハイブリダイズ可能である。
相補性
　所望の効果が生じる（例えば、ＤＵＸ４核酸などの標的核酸のアンチセンス阻害）ように、修飾オリゴヌクレオチドの十分な数の核酸塩基が標的核酸の対応する核酸塩基と水素結合することができる場合、修飾オリゴヌクレオチド及び標的核酸は互いに相補的である。
　修飾オリゴヌクレオチドは、介在または隣接するセグメントがハイブリダイゼーション事象に関与しないように（例えば、ループ構造、ミスマッチまたはヘアピン構造）、ＤＵＸ４核酸の１つまたは複数のセグメントにわたってハイブリダイズすることができる。
　ある種の実施態様では、本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドまたはその特定の部分は、ＤＵＸ４核酸、標的領域、標的セグメントまたはそれらの特定の部分に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％相補的である。ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、ＤＵＸ４核酸、標的領域、標的セグメントまたはそれらの特定の部分に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％相補的であり、本明細書に記載の例示的修飾オリゴヌクレオチドのいずれかの核酸塩基配列の少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８または少なくとも１９個の連続的な核酸塩基（例えば、配列表の配列番号２、３、４、７～６４、６９～９７または１０２～１１２のいずれか１つに記載される核酸塩基配列の少なくとも８個の連続的な核酸塩基）を含む。標的核酸との修飾オリゴヌクレオチドの相補性パーセントは、慣例的方法を使用して決定することができ、修飾オリゴヌクレオチド全体にわたって測定される。
　例えば、修飾オリゴヌクレオチドの２０個の核酸塩基のうちの１８個が、標的領域に対して相補的であり、したがって特異的にハイブリダイズすると思われる修飾オリゴヌクレオチドは、９０パーセントの相補性に相当する。この例では、残りの非相補的核酸塩基は、クラスター化されていてもよいし、相補的核酸塩基が挟まれていてもよく、互いにまたは相補的核酸塩基と連続的である必要はない。標的核酸領域との修飾オリゴヌクレオチドの相補性パーセントは、当技術分野で既知のＢＬＡＳＴプログラム（ｂａｓｉｃｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌｓ）及びＰｏｗｅｒＢＬＡＳＴプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９０，２１５，４０３４１０；Ｚｈａｎｇ ａｎｄ Ｍａｄｄｅｎ，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．，１９９７，７，６４９６５６）を使用して、慣例的に決定することができる。相同性パーセント、配列同一性または相補性は、例えば、ギャッププログラム（ＷｉｓｃｏｎｓｉｎＳｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ，Ｍａｄｉｓｏｎ Ｗｉｓ．）によって、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ（Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．，１９８１，２，４８２ ４８９）のアルゴリズムを使用するデフォルト設定を使用して決定することができる。
　非相補的核酸塩基の部位は、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端でもよいし、３’末端でもよい。あるいは、非相補的核酸塩基（複数可）は、修飾オリゴヌクレオチドの内部の位置でもよい。２つ以上の非相補的核酸塩基が存在する場合は、これらは、連続的（すなわち連結された）でもよいし、非連続的でもよい。一実施態様では、非相補的核酸塩基は、ギャップマー修飾オリゴヌクレオチドのウイングセグメント中に位置する。
　ある種の実施態様では、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０核酸塩基長である、またはこれらの核酸塩基長までの修飾オリゴヌクレオチドは、標的核酸、例えばＤＵＸ４核酸またはその特定の部分に対する、３つ以下、２つ以下または１つ以下の非相補的核酸塩基（複数可）を含む。
　本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、標的核酸の一部分に対して相補的なものも含む。本明細書で使用する場合、「部分」は、標的核酸の領域またはセグメント内の定められた数の連続的（すなわち連結された）核酸塩基を指す。「部分」は、修飾オリゴヌクレオチドの定められた数の連続的な核酸塩基を指すこともできる。ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、標的セグメントの少なくとも８核酸塩基部分に相補的である。ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、標的セグメントの少なくとも１０核酸塩基部分に相補的である。ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、標的セグメントの少なくとも１５核酸塩基部分に相補的である。標的セグメントの少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０もしくはそれ以上の核酸塩基部分、またはこれらの値の任意の２つによって定められた範囲に相補的な修飾オリゴヌクレオチドも意図される。
同一性
　本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、特定のヌクレオチド配列、配列表の配列番号もしくは特定の化合物番号によって表される化合物またはそれらの部分に対して、定められた同一性パーセントを有することもできる。本明細書で使用する場合、修飾オリゴヌクレオチドは、それが同じ核酸塩基対合能力を有する場合、本明細書に開示される配列と同一である。例えば、開示されるＤＮＡ配列のチミジンの代わりにウラシルを含むＲＮＡは、ウラシルとチミジンの両方ともアデニンと対になるので、そのＤＮＡ配列と同一であると考えられる。本明細書に記載の修飾オリゴヌクレオチドの短縮及び延長バージョン及び本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドに対して同一でない塩基を有する化合物も意図される。同一でない塩基は互いに隣接していてもよいし、修飾オリゴヌクレオチド全体にわたって分散していてもよい。修飾オリゴヌクレオチドの同一性パーセントは、比較される配列に対して同一の塩基対合を有する塩基の数に従って計算される。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドまたはその部分は、本明細書に開示される例示的修飾オリゴヌクレオチドもしくは配列表の配列番号またはそれらの部分の１つまたは複数と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である。
修飾
　ヌクレオシドは塩基－糖の組み合わせ物である。ヌクレオシドの核酸塩基（塩基としても知られる）部分は、通常は、複素環塩基部分である。ヌクレオチドは、ヌクレオシドの糖部分に共有結合したリン酸基をさらに含むヌクレオシドである。ペントフラノシル糖を含むヌクレオシドについては、リン酸基は、糖の２’、３’または５’ヒドロキシル部分に連結し得る。オリゴヌクレオチドは、隣接ヌクレオシドが互いに共有結合することを介して形成されて、直鎖状のポリマーオリゴヌクレオチドを形成する。オリゴヌクレオチド構造内で、リン酸基は、一般に、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合を形成すると言われる。
　修飾オリゴヌクレオチドにおける修飾は、ヌクレオシド間結合、糖部分または核酸塩基に対する置換または変化を包含する。修飾修飾オリゴヌクレオチドは、例えば、細胞取り込みの増強、核酸標的に対する親和性の増強、ヌクレアーゼの存在下での安定性の増大または阻害活性の増大などの望ましい特性が理由で、天然型よりも好ましいことが多い。
　修飾ヌクレオシド間結合
　ＲＮＡ及びＤＮＡの天然に存在するヌクレオシド間結合は、３’－５’ホスホジエステル結合である。１つまたは複数の修飾された、すなわち天然に存在しない、ヌクレオシド間結合を有する修飾オリゴヌクレオチドは、例えば、細胞取り込みの増強、標的核酸に対する親和性の増強及びヌクレアーゼの存在下での安定性の増大などの望ましい特性が理由で、天然に存在するヌクレオシド間結合を有する修飾オリゴヌクレオチドよりも選択されることが多い。
　修飾ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドは、リン原子を保持するヌクレオシド間結合及びリン原子を有さないヌクレオシド間結合を含む。代表的なリン含有ヌクレオシド間結合としては、これらに限定されないが、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホルアミデート及びホスホロチオエートの１つ以上が挙げられる。リン含有及び非リン含有結合の調製方法は周知である。
　ある種の実施態様では、ＤＵＸ４核酸を標的とする修飾オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド間結合を含む。ある種の実施態様では、修飾ヌクレオシド間結合はホスホロチオエート結合である。ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
修飾糖部分
　本発明修飾オリゴヌクレオチドは、それを構成する少なくとも１つのヌクレオシドが修飾糖を含むものが好ましく用いられる。本発明において修飾糖とは、糖部分が修飾されたものをいい、当該修飾糖を１つ以上含む修飾オリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ安定性の増強、結合親和性の増大等の有利な特徴を有する。修飾糖のうち少なくとも一つは、二環式糖または置換糖部分を有することが好ましい。
　修飾糖を有するヌクレオシドの例としては、これらに限定されないが、５’－ビニル、５’－メチル（ＲまたはＳ）、４’－Ｓ、２’－Ｆ、２’－ＯＣＨ３、２’－ＯＣＨ２ＣＨ３、２’－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｆ及び２’－Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３置換基を含むヌクレオシドが挙げられる。２’位の置換基は、アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ－アリル、Ｏ－Ｃ１～Ｃ１０アルキル、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２Ｆ、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２－Ｏ－Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）及びＯ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒｌ）－（ＣＨ２）２－Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）（式中、各Ｒｌ、Ｒｍ及びＲｎは独立に、Ｈまたは置換もしくは無置換のＣ１～Ｃ１０アルキルである）から選択することもできる。
　二環式糖を有するヌクレオシドの例としては、これらに限定されないが、４’と２’のリボシル環原子の間の架橋を含むヌクレオシドが挙げられる。ある種の実施態様では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、架橋が以下の式の１つを含む、１つまたは複数の二環式糖を有するヌクレオシドを含む：４’－（ＣＨ２）－Ｏ－２’（ＬＮＡ）；４’－（ＣＨ２）－Ｓ－２’；４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’（ＥＮＡ）；４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’及び４’－ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）－Ｏ－２’（及びそれらの類似物。米国特許７，３９９，８４５号を参照されたい）；４’－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）－Ｏ－２’（及びそれらの類似物。ＷＯ２００９／００６４７８号を参照されたい）；４’－ＣＨ２－Ｎ（ＯＣＨ３）－２’（及びそれらの類似物。ＷＯ２００８／１５０７２９号を参照されたい）；４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（ＣＨ３）－２’（及びそれらの類似物。ＵＳ２００４－０１７１５７０号を参照されたい）；４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’（式中、Ｒは、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１２アルキルまたは保護基である）（米国特許７，４２７，６７２号を参照されたい）；４’－ＣＨ２－Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）－２’（及びそれらの類似物。Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙａｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００９，７４，１１８－１３４を参照されたい）；並びに４’－ＣＨ２－Ｃ（＝ＣＨ２）－２’（及びそれらの類似物。ＷＯ２００８／１５４４０１号を参照されたい）。
　さらなる二環式糖を有するヌクレオシドが、発表文献に報告されている（例えば：Ｓｒｉｖａｓｔａｖａｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（２６）８３６２－８３７９；Ｆｒｉｅｄｅｎｅｔ ａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３，２１，６３６５－６３７２；Ｅｌａｙａｄｉｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．ＯｐｉｎｉｏｎＩｎｖｅｎｓ．Ｄｒｕｇｓ，２００１，２，５５８－５６１；Ｂｒａａｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００１，８，１－７；Ｏｒｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２００１，３，２３９－２４３；Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２０００，９７，５６３３－５６３８；Ｓｉｎｇｈｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９８，４，４５５－４５６；Ｋｏｓｈｋｉｎｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７－３６３０；Ｋｕｍａｒｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９－２２２２；Ｓｉｎｇｈｅｔ ａｌ．，；米国特許US７，３９９，８４５号；６，７７０，７４８号；６，５２５，１９１号；６，２６８，４９０号；米国ＵＳ２００８－００３９６１８号；ＵＳ２００７－０２８７８３１号；ＵＳ２００４－０１７１５７０号；ＵＳ２００９－００１２２８１号；ＷＯ２０１０/０３６６９８；WO ２００９／０６７６４７号；WO２００９/０６７６４７号；ＷＯ２００７／１３４１８１号；ＷＯ２００５／０２１５７０号；ＷＯ２００４／１０６３５６号；ＷＯ９４／１４２２６号；WO ２００９／００６４７８号；ＷＯ２００８／１５４４０１号；及びＷＯ２００８／１５０７２９号を参照されたい）。前述の二環式糖を有するヌクレオシドのそれぞれは、例えばα－Ｌ－リボフラノース及びβ－Ｄ－リボフラノースを含む１つまたは複数の立体化学的糖配置を有して、調製することができる。
　二環式糖を有するヌクレオシドのＧｕＮＡはグアニジン架橋を有する人工ヌクレオシドとして報告されている（WO２０１４／０４６２１２号、WO２０１７／０４７８１６号を参照されたい）。二環式ヌクレオシドのＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ＡＬＮＡ［ｍＵ］、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］及びＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］は架橋型人工核酸アミノＬＮＡ（ＡＬＮＡ）として報告されている（日本特許出願　特願２０１８－２１２４２４号を参照されたい）。
　ある種の実施態様では、二環式糖を有するヌクレオシドは、ペントフラノシル糖部分の４’と２’の炭素原子の間に架橋を含み、これらには限定されないが、－［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ－、－Ｃ（＝ＮＲａ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｓ）－、－Ｎ（Ｒａ）－、－Ｏ－、－Ｓｉ（Ｒａ）２－及び－Ｓ（＝Ｏ）ｘ－から独立に選択される１つまたは１つから４つの連結基を含む架橋が含まれ、式中、Ｘは０、１または２であり；ｎは１、２、３または４であり；各Ｒａ及びＲｂは、独立に、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１～Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１～Ｃ１２アルキル、Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、芳香環基、置換芳香環基、複素環基、置換複素環基、Ｃ５～Ｃ７脂環基、置換Ｃ５～Ｃ７脂環基、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）－Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２－Ｊ１）またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）－Ｊ１）であり、
　各Ｊ１及びＪ２は、独立に、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１～Ｃ１２アルキル、Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、芳香環基、置換芳香環基、アシル（Ｃ（＝Ｏ）－Ｈ）、置換アシル、複素環基、置換複素環基、Ｃ１～Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１～Ｃ１２アミノアルキルまたは保護基である。
　ある種の実施態様では、二環式糖部分の架橋は、－［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ－、－［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ－Ｏ－、－Ｃ（ＲａＲｂ）－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－または－Ｃ（ＲａＲｂ）－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－である。ある種の実施態様では、架橋は、４’－ＣＨ２－２’、４’－（ＣＨ２）２－２’、４’－（ＣＨ２）３－２’、４’－ＣＨ２－Ｏ－２’（この場合の二環式糖を有するヌクレオシドをＬＮＡともいう）、４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’、４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－２’及び４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’－であり、式中、各Ｒは独立に、Ｈ、保護基またはＣ１～Ｃ１２アルキルである。
　ある種の実施態様では、二環式糖部分の架橋は、４’－ＣＨ２－Ｏ－２’－(ＬＮＡ)または－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－であり、式中、各Ｒは独立に－ＳＯ２－ＣＨ３（ＡＬＮＡ［Ｍｓ］）、－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ３（ＡＬＮＡ［ｍＵ］）、１，５-ジメチル－１,２,４－トリアゾール－３－イル（ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］)、－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ（ＣＨ３）２（ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］)、５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル（ＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］)である（日本特許出願　特願２０１８－２１２４２４号）。
　ある種の実施態様では、二環式糖を有するヌクレオシドは、異性体立体配置によってさらに定義される。例えば、４’－（ＣＨ２）－Ｏ－２’架橋を含むヌクレオシドは、α－Ｌ－立体配置で存在してもよいし、β－Ｄ－立体配置で存在してもよい。
　ある種の実施態様では、二環式糖を有するヌクレオシドは、４’－２’架橋を有するものを含み、そうした架橋としては、これらに限定されないが、α－Ｌ－４’－（ＣＨ２）－Ｏ－２’、β－Ｄ－４’－ＣＨ２－Ｏ－２’、４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’、４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－２’、４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’、４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’、４’－ＣＨ２－Ｓ－２’、４’－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ３）－２’及び４’－（ＣＨ２）３－２’（式中、Ｒは、Ｈ、保護基、Ｃ１～Ｃ１２アルキル、またはＣ１～Ｃ１２アルキルで置換されてもよいウレアもしくはグアニジンである）が挙げられる。
　ある種の実施態様では、二環式糖を有するヌクレオシドは以下の式を有する：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
 
　式中、
　Ｂｘは複素環塩基部分であり；
　Ｔａ及びＴｂはそれぞれ独立に、水素原子、水酸基の保護基、置換されてもよいリン酸基、リン部分または支持体への共有結合等であり；
　Ｚａは、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルキニル、アシル、置換アシル、置換アミド、チオールまたは置換チオールである。
　ある種の実施態様では、置換基のそれぞれは独立に、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシル、ＯＪｃ、ＮＪｃＪｄ、ＳＪｃ、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊｃ及びＮＪｅＣ（＝Ｘ）ＮＪｃＪｄ（式中、各Ｊｃ、Ｊｄ及びＪｅは独立に、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ６アルキルであり、ＸはＯまたはＮＪｃである）から独立に選択される置換基で一置換または多置換される。
　ある種の実施態様では、二環式糖を有するヌクレオシドは以下の式を有する：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
　式中、
　Ｂｘは複素環塩基部分であり；
　Ｔａ及びＴｂはそれぞれ独立に、水素原子、水酸基の保護基、置換されてもよいリン酸基、リン部分または支持体への共有結合等であり；
　Ｚｂは、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルキニルまたは置換アシル（Ｃ（＝Ｏ）－）である。
　ある種の実施態様では、二環式糖を有するヌクレオシドは以下の式を有する：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
 
　式中、
　Ｂｘは複素環塩基部分であり；
　Ｔａ及びＴｂはそれぞれ独立に、水素原子、水酸基の保護基、置換されてもよいリン酸基、リン部分または支持体への共有結合等であり；
　Ｒｄは、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２～Ｃ６アルキニルであり；
　各ｑａ、ｑｂ、ｑｃ及びｑｄは独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシル、置換Ｃ１～Ｃ６アルコキシル、アシル、置換アシル、Ｃ１～Ｃ６アミノアルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ６アミノアルキルである。
　ある種の実施態様では、二環式糖を有するヌクレオシドは以下の式を有する：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
 
　式中、
　Ｂｘは複素環塩基部分であり；
　Ｔａ及びＴｂはそれぞれ独立に、水素原子、水酸基の保護基、置換されてもよいリン酸基、リン部分または支持体への共有結合等であり；
　ｑａ、ｑｂ、ｑｅ及びｑｆはそれぞれ独立に、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１～Ｃ１２アルキル、Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、Ｃ１～Ｃ１２アルコキシ、置換Ｃ１～Ｃ１２アルコキシ、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）-ＮＪｊＪｋもしくはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり；
　または、ｑｅ及びｑｆは共に＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり；
　ｑｇ及びｑｈはそれぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ１２アルキルもしくは置換Ｃ１～Ｃ１２アルキルである。
　４’－ＣＨ２－Ｏ－２’架橋を有する、アデニン、シトシン、グアニン、５－メチル－シトシン、チミン及びウラシル二環式ヌクレオシド（ＬＮＡともいう）の合成及び調製は、それらのオリゴマー化及び核酸認識特性と共に記載されている（Ｋｏｓｈｋｉｎｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７－３６３０）。二環式糖を有するヌクレオシドの合成は、ＷＯ９８／３９３５２及びＷＯ９９／１４２２６にも記載されている。
　４’－ＣＨ２－Ｏ－２’（この場合の二環式ヌクレオシドをＬＮＡともいう）及び４’－ＣＨ２－Ｓ－２’などの４’－２’架橋基を有する様々な二環式ヌクレオシドの類似物も、調製されている（Ｋｕｍａｒｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９－２２２２）。核酸ポリメラーゼの基質として使用するための、二環式ヌクレオシドを含むオリゴデオキシリボヌクレオチド二本鎖の調製も記載されている（Ｗｅｎｇｅｌｅｔ ａｌ．，ＷＯ９９／１４２２６）。さらに、２’－アミノ－ＢＮＡ（この場合の二環式ヌクレオシドをＡＬＮＡともいう）、すなわち立体構造的に制限された高親和性オリゴヌクレオチド類似物の合成が、当技術分野で記載されている（Ｓｉｎｇｈｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５－１００３９）。さらに、２’－アミノ－及び２’－メチルアミノ－ＢＮＡが調製されており、相補的なＲＮＡ鎖及びＤＮＡ鎖との二本鎖の熱安定性が以前に報告されている。
　ある種の実施態様では、二環式糖を有するヌクレオシドは以下の式を有する：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
　式中、
　Ｂｘは複素環塩基部分であり；
　Ｔａ及びＴｂはそれぞれ独立に、水素原子、水酸基の保護基、置換されてもよいリン酸基、リン部分または支持体への共有結合等であり；
　各ｑｉ、ｑｊ、ｑｋ及びｑｌは独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１～Ｃ１２アルキル、Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、Ｃ１～Ｃ１２アルコキシル、置換Ｃ１～Ｃ１２アルコキシル、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋまたはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり；
　ｑｉ及びｑｊまたはｑｌ及びｑｋは共に＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、式中、ｑｇ及びｑｈはそれぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ１２アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ１２アルキルである。
　４’－（ＣＨ２）３－２’架橋及びアルケニル類似物架橋４’－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ２－２’を有する１つの炭素環式二環式ヌクレオシドが記載されている（Ｆｒｉｅｒｅｔ ａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４２９－４４４３及びＡｌｂａｅｋｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６，７１，７７３１－７７４０）。炭素環式二環式ヌクレオシドの合成及び調製も、そのオリゴマー化及び生化学的な研究と共に記載されている（Ｓｒｉｖａｓｔａｖａｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００７，１２９（２６），８３６２－８３７９）。
　ある種の実施態様では、二環式糖を有するヌクレオシドとしては、これらに限定されないが、以下に示すような、
（Ａ）α－Ｌ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）ＢＮＡ、
（Ｂ）β－Ｄ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）ＢＮＡ、
（Ｃ）エチレンオキシ（４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’）ＢＮＡ、
（Ｄ）アミノオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－２’）ＢＮＡ、
（Ｅ）オキシアミノ（４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’）ＢＮＡ、
（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’）ＢＮＡ（拘束エチルまたはｃＥｔとも言われる）、
（Ｇ）メチレン－チオ（４’－ＣＨ２－Ｓ－２’）ＢＮＡ、
（Ｈ）メチレン－アミノ（４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－２’）ＢＮＡ、
（Ｉ）メチル炭素環式（４’－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ３）－２’）ＢＮＡ、
（Ｊ）プロピレン炭素環式（４’－（ＣＨ２）３－２’）ＢＮＡ、及び
（Ｋ）ビニルＢＮＡが挙げられる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
 
　式中、Ｂｘは塩基部分であり、Ｒは独立に、保護基、Ｃ１～Ｃ６アルキルまたはＣ１～Ｃ６アルコキシである。
　ある種の実施態様（ＬＮＡ）では、二環式糖を有するヌクレオシドは以下の一般式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
 
［式中、
　Ｂは、核酸塩基であり；
　ＸおよびＹは、それぞれ独立に、水素原子、水酸基の保護基、置換されてもよいリン酸基、リン部分または支持体への共有結合等］で表されるヌクレオシドを挙げることができる（ＷＯ９８／３９３５２を参照）。典型的な具体例は、下記式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
で示されるヌクレオチドを挙げることができる。
　ある種の実施態様（ＧｕＮＡ）では、二環式を含むヌクレオシドは下記一般式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
［式中、Ｂは核酸塩基であり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は各々独立して水素原子、または１つ以上の置換基で置換されてもよいＣ１－６アルキル基であり、Ｒ７、Ｒ８はそれぞれ独立に、水素原子、水酸基の保護基、置換されてもよいリン酸基、リン部分または支持体への共有結合等であり、そしてＲ９、Ｒ１０、Ｒ１１は各々独立して水素原子、１つ以上の置換基で置換されてもよいＣ１－６アルキル基、またはアミノ基の保護基である。］
で表されるヌクレオシドである（例えば、国際公開第２０１４／０４６２１２号、国際公開第２０１７／０４７８１６号を参照）。
　ある種の実施態様（ＡＬＮＡ［ｍＵ］）では、二環式糖を含むヌクレオシドは下記一般式（Ｉ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
［式中、
　Ｂは、核酸塩基であり；
　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は各々独立して、水素原子、または１つ以上の置換基で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基であり；
　Ｒ５およびＲ６は各々独立して、水素原子、水酸基の保護基、置換されてもよいリン酸基、リン部分または支持体への共有結合等であり；
　ｍは、１または２であり；
　Ｘは、下記式（ＩＩ－１）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
で示される基であり；
　式（ＩＩ－１）中に記載の記号：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
は、２’－アミノ基との結合点を示し；
　Ｒ７およびＲ８の一方が水素原子であり、他方が1つ以上の置換基で置換されてもよいメチル基である。］
で表されるヌクレオシドである（例えば、特願２０１８－２１２４２４を参照）。典型的な具体例は、Ｒ７およびＲ８の一方が水素原子であり、他方が無置換のメチル基である、ヌクレオシドである。
　ある種の実施態様（ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］）では、二環式糖を含むヌクレオシドは上記のＡＬＮＡ［ｍＵ］において定義する一般式（Ｉ）を有するヌクレオシドであって、該式中、
　Ｘが、下記式（ＩＩ－１）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
 
で示される基であり；
　Ｒ７およびＲ８の一方が水素原子であり、他方が１つ以上の置換基で置換されてもよいイソプロピル基である（例えば、特願２０１８－２１２４２４を参照）。典型的な具体例は、Ｒ７およびＲ８の一方が水素原子であり、他方が無置換のイソプロピル基である、ヌクレオシドである。
ある種の実施態様（ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］）では、二環式を含むヌクレオシドは上記一般式（Ｉ）を有するヌクレオシドであって、該式中、Ｘが、下記式（ＩＩ－２）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
 
で示される基であり；
　Ａが、１つ以上の置換基で置換されていてもよいトリアゾリル基である（例えば、特願２０１８－２１２４２４を参照）。ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］の典型的な具体例は、Ａが、１または複数のメチル基を有してもよいトリアゾリル基であり、より具体的には、１，５-ジメチル－１,２,４－トリアゾール－３－イル基である、ヌクレオシドである。
　ある種の実施態様（ＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］）では、上記のＡＬＮＡ［ｍＵ］において定義する一般式（Ｉ）を有するヌクレオシドであって、該式中、
　Ｘが、下記式（ＩＩ－２）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
 
で示される基であり；
　Ａが、１つ以上の置換基で置換されていてもよいオキサジアゾリル基である（例えば、特願２０１８－２１２４２４を参照）。典型的な具体例は、Ａが１または複数のメチル基を有してもよいオキサジアゾリル基であり、より具体的には、５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル基である、ヌクレオシドまたはヌクレオチドである。
　ある種の実施態様（ＡＬＮＡ［Ｍｓ］）では、二環式を含むヌクレオシドは上記一般式（Ｉ）を有するヌクレオシドであって、該式中、Ｘが、下記一般式（ＩＩ－３）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
 
で示される基であり；
　Ｍは、１つ以上の置換基で置換されていてもよいメチル基で置換された、スルホニル基である（例えば、特願２０１８－２１２４２４を参照）。ＡＬＮＡ［Ｍｓ］の典型的な具体例は、Ｍが無置換のメチル基で置換されたスルホニル基である、ヌクレオシドである。
　ある種の実施態様では、ヌクレオシドは、糖代用物とのリボシル環の置き換えによって修飾される。そうした修飾としては、これらに限定されないが、代用環系（ＤＮＡ類似物と言われることもある）、例えば、モルホリノ環、シクロヘキセニル環、シクロヘキシル環またはテトラヒドロピラニル環、例えば以下の式のうちの１つを有するものとのリボシル環の置き換えが挙げられる：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
 
　ある種の実施態様では、以下の式を有する糖代用物が選択される：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
 
　式中、
　Ｂｘは複素環塩基部分であり；
　Ｔ３及びＴ４はそれぞれ独立に、テトラヒドロピランヌクレオシド類似物をオリゴマー化合物に連結するヌクレオシド間連結基、またはＴ３及びＴ４の一方は、テトラヒドロピランヌクレオシド類似物をオリゴマー化合物もしくはオリゴヌクレオチドに連結するヌクレオシド間連結基であり、Ｔ３及びＴ４の他方は、Ｈ、ヒドロキシル保護基、連結共役基または５’もしくは３’－末端基であり；
　ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２～Ｃ６アルキニルであり；
　Ｒ１及びＲ２の一方は水素であり、他方はハロゲン、置換または無置換のアルコキシ、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２及びＣＮ（式中、ＸはＯ、ＳまたはＮＪ１であり、各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は独立に、ＨまたはＣ１～Ｃ６アルキルである）から選択される。
　ある種の実施態様では、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７はそれぞれＨである。ある種の実施態様では、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７の少なくとも１つはＨ以外である。ある種の実施態様では、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７の少なくとも１つはメチルである。ある種の実施態様では、Ｒ１及びＲ２の一方がＦであるＴＨＰヌクレオシドが提供される。ある種の実施態様では、Ｒ１がフルオロであり、且つＲ２がＨであり；Ｒ１がメトキシであり、且つＲ２がＨであり、及びＲ１がメトキシエトキシであり、且つＲ２がＨである。
　そうした糖代用物としては、これらに限定されないが、当技術分野で、ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、アルトリトール核酸（ＡＮＡ）及びマンニトール核酸（ＭＮＡ）と言われるものが挙げられる（Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｃ．Ｊ．，Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ
．，２００２，１０，８４１－８５４を参照されたい）。
　ある種の実施態様では、糖代用物は、５つを超える原子及び１つを超えるヘテロ原子を有する環を含む。例えば、モルホリノ糖部分を含むヌクレオシド及びオリゴマー化合物でのその使用が報告されている（例えば、Ｂｒａａｓｃｈｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，４１，４５０３－４５１０；並びに米国特許５，６９８，６８５；５，１６６，３１５；５，１８５，４４４；及び５，０３４，５０６を参照されたい）。
　本明細書で使用する場合、用語「モルホリノ」は以下の構造を有する糖代用物を意味する：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
 
　ある種の実施態様では、例えば、上記のモルホリノ構造から様々な置換基を付加するまたは変えることによって、モルホリノを修飾することができる。そうした糖代用物は、本明細書で「修飾モルホリノ」と言われる。
　ある種の実施態様では、オリゴヌクレオチドは、天然に存在するヌクレオシドのペントフラノシル残基の代わりに６員シクロヘキセニルを有するヌクレオシドである、１つまたは複数の修飾シクロヘキセニルヌクレオシドを含む。修飾シクロヘキセニルヌクレオシドとしては、これらに限定されないが、当技術分野で記載されたものが挙げられる（例えば、共有に係る、２０１０年４月１０日に公開されたＷＯ２０１０／０３６６９６、Ｒｏｂｅｙｎｓｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００８，１３０（６），１９７９－１９８４；Ｈｏｒｖａｔｈｅｔ ａｌ．，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ，２００７，４８，３６２１－３６２３；Ｎａｕｗｅｌａｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（３０），９３４０－９３４８；Ｇｕｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ＆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，２００５，２４（５－７），９９３－９９８；Ｎａｕｗｅｌａｅｒｔｓ ｅｔａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ ＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ，２００５，３３（８），２４５２－２４６３；Ｒｏｂｅｙｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ，Ｓｅｃｔｉｏｎ Ｆ：ＳｔｒｕｃｔｕｒａｌＢｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２００５，Ｆ６１（６），５８５－５８６；Ｇｕｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，２００４，６０（９），２１１１－２１２３；Ｇｕｅｔ ａｌ．，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，２００３，１３（６），４７９－４８９；Ｗａｎｇｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００３，６８，４４９９－４５０５；Ｖｅｒｂｅｕｒｅｅｔ ａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００１，２９（２４），４９４１－４９４７；Ｗａｎｇｅｔａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００１，６６，８４７８－８２；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，２００１，２０（４－７），７８５－７８８；Ｗａｎｇｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．，２０００，１２２，８５９５－８６０２；ＷＯ０６／０４７８４２号；及びＷＯ０１／０４９６８７号を参照されたい；それぞれのテキストは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
ある種の修飾シクロヘキセニルヌクレオシドは以下の式を有する：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
 
　式中、
　Ｂｘは複素環塩基部分であり；
　Ｔ３及びＴ４はそれぞれ独立に、シクロヘキセニルヌクレオシド類似物をオリゴヌクレオチド化合物に連結するヌクレオシド間連結基であり、またはＴ３及びＴ４の一方は、テトラヒドロピランヌクレオシド類似物をオリゴヌクレオチド化合物に連結するヌクレオシド間連結基であり、Ｔ３及びＴ４の他方は、Ｈ、ヒドロキシル保護基、連結共役基もしくは５’－もしくは３’－末端基であり；
　ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、ｑ７、ｑ８及びｑ９はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルキニルまたは他の糖置換基である。
　オリゴヌクレオチドに組み込むためのヌクレオシドを修飾するのに使用することができる、多くの他の二環式及び三環式の糖代用環系が当技術分野で既知である（例えば、総説：Ｌｅｕｍａｎｎ，ＣｈｒｉｓｔｉａｎＪ．，Ｂｉｏｏｒｇ．＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００２，１０，８４１－８５４を参照されたい）。そうした環系は、活性を増強するために様々なさらなる置換を受けることができる。
　修飾糖の調製方法は当業者に周知である。そうした修飾糖の調製を教示するいくつかの代表的なＵ．Ｓ．特許は、これらに限定されないが、Ｕ．Ｓ．：４，９８１，９５７；５，１１８，８００；５，３１９，０８０；５，３５９，０４４；５，３９３，８７８；５，４４６，１３７；５，４６６，７８６；５，５１４，７８５；５，５１９，１３４；５，５６７，８１１；５，５７６，４２７；５，５９１，７２２；５，５９７，９０９；５，６１０，３００；５，６２７，０５３；５，６３９，８７３；５，６４６，２６５；５，６７０，６３３；５，７００，９２０；５，７９２，８４７及び６，６００，０３２並びにＷＯ２００５／１２１３７１号が挙げられ、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
　修飾糖部分を有するヌクレオチドでは、核酸塩基部分（天然、修飾またはそれらの組み合わせ）は、適切な核酸標的とのハイブリダイゼーションの間維持される。
修飾核酸塩基
　核酸塩基（または塩基）の修飾または置換は、天然に存在するまたは合成の非修飾核酸塩基と構造的に識別可能であり、こうした非修飾核酸塩基とさらに機能的に互換性がある。天然及び修飾核酸塩基の両方とも、水素結合に関与することができる。そうした核酸塩基修飾は、ヌクレアーゼ安定性、結合親和性またはいくつかの他の有益な生物学的特性を修飾オリゴヌクレオチドに与えることができる。修飾核酸塩基は、例えば５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）などの合成及び天然の核酸塩基を含む。５－メチルシトシン置換を含めたある種の核酸塩基置換は、標的核酸に対する修飾オリゴヌクレオチドの結合親和性を増大させるのに特に有用である。例えば、５－メチルシトシン置換は、核酸の二本鎖安定性を０．６～１．２℃増大させることが示されている（Ｓａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ  Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，１９９３，ｐｐ．２７６－２７８）。
　さらなる修飾核酸塩基としては、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６－メチル及び他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの２－プロピル及び他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミン及び２－チオシトシン、５－ハロウラシル及びシトシン、５－プロピニル（－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ３）ウラシル及びシトシン並びにピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、６－アゾウラシル、シトシン及びチミン、５－ウラシル（シュードウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシル及び他の８－置換アデニン及びグアニン、５－ハロ、特に５－ブロモ、５－トリフルオロメチル及び他の５－置換ウラシル及びシトシン、７－メチルグアニン及び７－メチルアデニン、２－Ｆ－アデニン、２－アミノ－アデニン、８－アザグアニン及び８－アザアデニン、７－デアザグアニン及び７－デアザアデニン、３－デアザグアニン及び３－デアザアデニンが挙げられる。
　複素環塩基部分は、プリンまたはピリミジン塩基が他の複素環、例えば、７－デアザ－アデニン、７－デアザグアノシン、２－アミノピリジン及び２－ピリドンで置き換えられているものを含むこともできる。修飾オリゴヌクレオチドの結合親和性を増大させるのに特に有用な核酸塩基としては、５－置換ピリミジン、６－アザピリミジン及びＮ－２、Ｎ－６及びＯ－６置換プリン（２－アミノプロピルアデニン、５－プロピニルウラシル及び５－プロピニルシトシンを含める）が挙げられる。
　ある種の実施態様では、ＤＵＸ４核酸を標的とする修飾オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾核酸塩基を含む。ある種の実施態様では、ＤＵＸ４核酸を標的とする修飾オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾核酸塩基を含む。ある種の実施態様では、修飾核酸塩基は５－メチルシトシンである。ある種の実施態様では、各シトシンは５－メチルシトシンである。
ある種の修飾オリゴヌクレオチドモチーフ
　ある種の実施態様では、ＤＵＸ４核酸を標的とする修飾オリゴヌクレオチドは、修飾オリゴヌクレオチドに、阻害活性の増強、標的核酸に対する結合親和性の増大またはインビボヌクレアーゼによる分解に対する抵抗性などの特性を与えるために、パターンまたはモチーフに配置される化学修飾サブユニットを有する。
　キメラ修飾オリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼによる分解に対する抵抗性の増大、細胞取り込みの増大、標的核酸に対する結合親和性の増大及び／または阻害活性の増大を与えるために、典型的には少なくとも１つの修飾領域を含む。キメラ修飾オリゴヌクレオチドの第二領域は、ＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞内エンドヌクレアーゼＲＮａｓｅ  Ｈに対する基質として任意に働くことができる。
　ギャップマーモチーフを有する修飾オリゴヌクレオチドは、キメラ修飾オリゴヌクレオチドである。ギャップマーでは、ＲＮａｓｅＨ切断を支援する複数のヌクレオチドを有する内部領域は、内部領域のヌクレオシドと化学的に異なる複数のヌクレオチドを有する外部領域間に位置する。ギャップマーモチーフを有する修飾オリゴヌクレオチドの場合には、ギャップセグメントは、エンドヌクレアーゼによる切断の基質として一般に働くが、ウイングセグメントは修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマー領域は、それぞれ異なる領域を含む糖部分のタイプによって区別される。いくつかの実施態様では、ギャップマー領域を区別するのに使用される糖部分のタイプは、β－Ｄ－リボヌクレオシド、β－Ｄ－デオキシリボヌクレオシド、２’－修飾ヌクレオシド（このような２’－修飾ヌクレオシドは、中でも、２’－ＭＯＥ及び２’－Ｏ－ＣＨ３を含むことができる）並びに二環式糖修飾ヌクレオシド（このような二環式糖修飾ヌクレオシドは、ＬＮＡ、ＧｕＮＡ、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ＡＬＮＡ［ｍＵ］、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］及び／またはＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］を有するものを含むことができる）を含むことができる。ウイング－ギャップ－ウイングモチーフは、「Ｘ－Ｙ－Ｚ」としてしばしば記載され、「Ｘ」は５’ウイング領域の長さを表し、「Ｙ」はギャップ領域の長さを表し、「Ｚ」は３’ウイング領域の長さを表す。本明細書で使用する場合、「Ｘ－Ｙ－Ｚ」として記載されるギャップマーは、ギャップセグメントが５’ウイングセグメント及び３’ウイングセグメントのそれぞれに直接隣接する位置するような立体配置を有する。したがって、５’ウイングセグメントとギャップセグメントの間またはギャップセグメントと３’ウイングセグメントの間に、介在性ヌクレオチドは存在しない。本明細書に記載の修飾オリゴヌクレオチドのうちのいずれかは、ギャップマーモチーフを有し得る。いくつかの実施態様ではＸとＺは同じであり、他の実施態様ではこれらは異なる。好ましい実施態様では、Ｙは８から１６個のヌクレオチドである。Ｘ、ＹまたはＺは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０個またはそれ以上のヌクレオチドのいずれかであり得る。したがって、ギャップマーとしては、これらに限定されないが、例えば、２－１０－３、２－１４－２、２－１５－２、２－１６－２、３－６－７、３－７－５、３－８－３、３－８－４、３－８－５、３－９－２、３－９－３、３－９－４、３－９－５、３－９－８、３－１０－２、３－１０－３、３－１０－４、３－１１－３、３－１２－３、３－１４－３、４－７－４、４－７－５、４－８－３、４－８－４、４－９－３、４－１０－３、５－６－４、５－６－５、５－７－３、５－７－４、５－８－３、５－８－４、または７－６－３が挙げられる。
　ある種の実施態様では、ＤＵＸ４核酸を標的とする修飾オリゴヌクレオチドは３－１０－３ギャップマーモチーフを持つ。ある種の実施態様では、ＤＵＸ４核酸を標的とする修飾オリゴヌクレオチドは３－９－３ギャップマーモチーフを持つ。ある種の実施態様では、ＤＵＸ４核酸を標的とする修飾オリゴヌクレオチドは３－９－４ギャップマーモチーフを持つ。ある種の実施態様では、ＤＵＸ４核酸を標的とする修飾オリゴヌクレオチドは３－８－５ギャップマーモチーフを持つ。
　ある種の実施態様では、これらのギャップマーの修飾オリゴヌクレオチドは、本明細書に記載の例示的修飾オリゴヌクレオチドのいずれかの核酸塩基配列の少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９または、少なくとも３０個の連続的な核酸塩基（例えば、配列表の配列番号２，３，４、７～６４、６９～９７または１０２～１１２のいずれか１つに記載される核酸塩基配列の少なくとも８個の連続的な核酸塩基）を含む。
　ある種の実施態様では、本発明はオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物を提供する。ある種の実施態様では、そうしたオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の化学修飾を含む。ある種の実施態様では、化学修飾オリゴヌクレオチドは１つまたは複数の修飾糖を含む。ある種の実施態様では、化学修飾オリゴヌクレオチドは１つまたは複数の修飾核酸塩基を含む。ある種の実施態様では、化学修飾オリゴヌクレオチドは１つまたは複数の修飾ヌクレオシド間結合を含む。ある種の実施態様では、化学修飾（糖修飾、核酸塩基修飾及び／または結合修飾）は、パターンまたはモチーフを定める。ある種の実施態様では、糖部分、ヌクレオシド間結合及び核酸塩基の化学修飾のパターンは、それぞれ互いに無関係である。したがって、オリゴヌクレオチドは、その糖修飾モチーフ、ヌクレオシド間結合モチーフ及び／または核酸塩基修飾モチーフによって説明され得る（本明細書で使用する場合、核酸塩基修飾モチーフは、核酸塩基の配列と無関係で、核酸塩基に対する化学修飾を説明する）。
ある種の糖モチーフ
　ある種の実施態様では、オリゴヌクレオチドは、定められたパターンまたは糖修飾モチーフにおいてオリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って配置された、１または複数のタイプの修飾糖部分及び／または天然に存在する糖部分を含む。そうしたモチーフは、本明細書に論じる糖修飾及び／または他の既知の糖修飾のいずれかを含むことができる。
　ある種の実施態様では、オリゴヌクレオチドは、ギャップマー糖修飾モチーフを有する領域を含むか、その領域から成り、これは、２つの外部領域、すなわち「ウイングセグメント」、及び１つの内部領域、すなわち「ギャップセグメント」を含む。ギャップマーモチーフの３領域（５’ウイングセグメント、ギャップセグメント及び３’ウイングセグメント）は、ヌクレオシドの連続的な配列を形成し、ここでは、各ウイングセグメントのヌクレオシドの糖部分の少なくともいくつかは、ギャップセグメントのヌクレオシドの糖部分の少なくともいくつかと異なる。特に、少なくとも、ギャップセグメントに最も近い各ウイングセグメントのヌクレオシド（５’ウイングセグメントの最も３’側のヌクレオシド及び３’ウイングセグメントの最も５’側のヌクレオシド）の糖部分は、隣接したギャップセグメントのヌクレオシドの糖部分とは異なり、したがってウイングセグメントとギャップセグメントの間の境界部位を定める。ある種の実施態様では、ギャップセグメント内の糖部分は互いに同じである。ある種の実施態様では、ギャップセグメントは、ギャップセグメントの１つまたは複数の他のヌクレオシドの糖部分と異なる糖部分を有する１つまたは複数のヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、２つのウイングセグメントの糖修飾モチーフは互いに同じである（対称的ギャップマー）。ある種の実施態様では、５’ウイングセグメントの糖修飾モチーフは、３’ウイングセグメントの糖修飾モチーフと異なる（非対称的ギャップマー）。
ある種の５’ウイングセグメント
　ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、１つから５つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、２つから５つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、３つから５つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、４つまたは５つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、１つから４つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、１つから３つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、１つまたは２つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、２つから４つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、２つまたは３つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、３つまたは４つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、１つのヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、２つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、３つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、４つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、５つの連結したヌクレオシドから成る。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも１つの二環式ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも２つの二環式ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも３つの二環式ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも４つの二環式ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも１つの拘束エチルヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも１つのＬＮＡ含有ヌクレオシド、ＧｕＮＡ含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｍＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシド及び／またはＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントの各ヌクレオシドは二環式ヌクレオシドである。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントの各ヌクレオシドは拘束エチルヌクレオシドである。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントの各ヌクレオシドはＬＮＡ含有ヌクレオシド、ＧｕＮＡ含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｍＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシド及び／またはＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］含有ヌクレオシドである。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも１つの非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも１つの２’－置換ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも１つ、例えば、３つ、４つ、または５つの２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも１つの２’－ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントの各ヌクレオシドは非二環式修飾ヌクレオシドである。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントの各ヌクレオシドは２’－置換ヌクレオシドである。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントの各ヌクレオシドは２’－ＭＯＥヌクレオシドである。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントの各ヌクレオシドは２’－ＯＭｅヌクレオシドである。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも１つの二環式ヌクレオシド及び少なくとも１つの非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも１つの二環式ヌクレオシド及び少なくとも１つの２’－置換ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも１つの二環式ヌクレオシド及び少なくとも１つの２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも１つの二環式ヌクレオシド及び少なくとも１つの２’－ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも１つの二環式ヌクレオシド及び少なくとも１つの２’－デオキシヌクレオシドを含む。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも１つの拘束エチルヌクレオシド及び少なくとも１つの非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも１つの拘束エチルヌクレオシド及び少なくとも１つの２’－置換ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも１つの拘束エチルヌクレオシド及び少なくとも１つの２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも１つの拘束エチルヌクレオシド及び少なくとも１つの２’－ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、少なくとも１つの拘束エチルヌクレオシド及び少なくとも１つの２’－デオキシヌクレオシドを含む。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、２’－ＭＯＥヌクレオシド、２’－ＯＭｅヌクレオシド、ＬＮＡ含有ヌクレオシド、ＧｕＮＡ含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｍＵ含有ヌクレオシド］、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシド及び／またはＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］含有ヌクレオシドから選択される少なくとも１つの修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、２’－ＭＯＥヌクレオシド、２’－ＯＭｅヌクレオシド、ＬＮＡ含有ヌクレオシド、ＧｕＮＡ含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｍＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシド及び／またはＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］含有ヌクレオシドから選択される少なくとも２つの修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、２’－ＭＯＥヌクレオシド、２’－ＯＭｅヌクレオシド、ＬＮＡ含有ヌクレオシド、ＧｕＮＡ含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｍＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシド及び／またはＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］含有ヌクレオシドから選択される少なくとも３つの修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、２’－ＭＯＥヌクレオシド、２’－ＯＭｅヌクレオシド、ＬＮＡ含有ヌクレオシド、ＧｕＮＡ含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｍＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシド及び／またはＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］含有ヌクレオシドから選択される少なくとも４つの修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、２’－ＭＯＥヌクレオシド、２’－ＯＭｅヌクレオシド、ＬＮＡ含有ヌクレオシド、ＧｕＮＡ含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｍＵ含有ヌクレオシド］、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシド及び／またはＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］含有ヌクレオシドから選択される少なくとも５つの修飾ヌクレオシドを含む。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、２つのＬＮＡ含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、３つのＬＮＡ含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、４つのＬＮＡ含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、２つのＧｕＮＡ含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、３つのＧｕＮＡ含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、３つのＡＬＮＡ［ｍＵ］含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、３つのＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、２つのＬＮＡ含有ヌクレオシドと１つのＧｕＮＡ含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、３つのＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドと１つの２’－ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドと２つの２’－ＯＭｅヌクレオシドを含む。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、３つの拘束エチルヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、２つの二環式ヌクレオシド及び２つの非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、２つの拘束エチルヌクレオシド及び２つの２’－ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、２つの二環式ヌクレオシド及び２つの非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、２つの拘束エチルヌクレオシド及び２つの２’－ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、２つの拘束エチルヌクレオシド及び３つの２’－ＯＭｅヌクレオシドを含む。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは１つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは２つの連結したＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは３つの連結したＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは４つの連結したＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは５つの連結したＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び1つの２’－ＯＭｅヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び２つの２’－ＯＭｅヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び３つの２’－ＯＭｅヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、連結した、３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドと１つの２’－ＭＯＥヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、連結した、２つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドと２つの２’－ＭＯＥヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、連結した、３つのＬＮＡ含有ヌクレオシドと２つの２’－ＭＯＥヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、連結した、２つのＬＮＡ含有ヌクレオシドと２つの２’－ＭＯＥヌクレオシドからなる。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは連結した１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ１個の５－メチルシトシンを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは連結した１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ２個の５－メチルシトシンを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは連結した１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ３個の５－メチルシトシンを含む。
ある種の３’ウイングセグメント
　ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、１つから８つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２つから５つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、３つから５つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、４つまたは５つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、１つから４つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、１つから３つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、１つまたは２つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２つから４つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２つまたは３つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、３つまたは４つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、１つのヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、３つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、４つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、５つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、６つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、７つの連結したヌクレオシドから成る。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、８つの連結したヌクレオシドから成る。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも１つの二環式ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも２つの二環式ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも３つの二環式ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも４つの二環式ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも１つの拘束エチルヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも１つのＬＮＡ含有ヌクレオシド、ＧｕＮＡ含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｍＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシド及び／またはＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントの各ヌクレオシドは二環式ヌクレオシドである。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントの各ヌクレオシドは拘束エチルヌクレオシドである。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントの各ヌクレオシドはＬＮＡ含有ヌクレオシド、ＧｕＮＡ含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｍＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシド及び／またはＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］含有ヌクレオシドである。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも１つの非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも１つの２’－置換ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも１つの２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも１つの２’－ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントの各ヌクレオシドは非二環式修飾ヌクレオシドである。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントの各ヌクレオシドは２’－置換ヌクレオシドである。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントの各ヌクレオシドは２’－ＭＯＥヌクレオシドである。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントの各ヌクレオシドは２’－ＯＭｅヌクレオシドである。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも１つの二環式ヌクレオシド及び少なくとも１つの非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも１つの二環式ヌクレオシド及び少なくとも１つの２’－置換ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも１つの二環式ヌクレオシド及び少なくとも１つの２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも１つの二環式ヌクレオシド及び少なくとも１つの２’－ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも１つの二環式ヌクレオシド及び少なくとも１つの２’－デオキシヌクレオシドを含む。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも１つの拘束エチルヌクレオシド及び少なくとも１つの非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも１つの拘束エチルヌクレオシド及び少なくとも１つの２’－置換ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも１つの拘束エチルヌクレオシド及び少なくとも１つの２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも１つの拘束エチルヌクレオシド及び少なくとも１つの２’－ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、少なくとも１つの拘束エチルヌクレオシド及び少なくとも１つの２’－デオキシヌクレオシドを含む。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２’－ＭＯＥヌクレオシド、２’－ＯＭｅヌクレオシド、ＬＮＡ含有ヌクレオシド、ＧｕＮＡ含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｍＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシド及び／またはＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］含有ヌクレオシドから選択される少なくとも１つの修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２’－ＭＯＥヌクレオシド、２’－ＯＭｅヌクレオシド、ＬＮＡ含有ヌクレオシド、ＧｕＮＡ含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｍＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシド及び／またはＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］含有ヌクレオシドから選択される少なくとも２つの修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２’－ＭＯＥヌクレオシド、２’－ＯＭｅヌクレオシド、ＬＮＡ含有ヌクレオシド、ＧｕＮＡ含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｍＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシド及び／またはＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］含有ヌクレオシドから選択される少なくとも３つの修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２’－ＭＯＥヌクレオシド、２’－ＯＭｅヌクレオシド、ＬＮＡ含有ヌクレオシド、ＧｕＮＡ含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｍＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシド及び／またはＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］含有ヌクレオシドから選択される少なくとも４つの修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２’－ＭＯＥヌクレオシド、２’－ＯＭｅヌクレオシド、ＬＮＡ含有ヌクレオシド、ＧｕＮＡ含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｍＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシド及び／またはＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］含有ヌクレオシドから選択される少なくとも５つの修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２’－ＭＯＥヌクレオシド、２’－ＯＭｅヌクレオシド、ＬＮＡ含有ヌクレオシド、ＧｕＮＡ含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｍＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシド及び／またはＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］含有ヌクレオシドから選択される少なくとも６つの修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２’－ＭＯＥヌクレオシド、２’－ＯＭｅヌクレオシド、ＬＮＡ含有ヌクレオシド、ＧｕＮＡ含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｍＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシド及び／またはＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］含有ヌクレオシドから選択される少なくとも７つの修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２’－ＭＯＥヌクレオシド、２’－ＯＭｅヌクレオシド、ＬＮＡ含有ヌクレオシド、ＧｕＮＡ含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｍＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシド、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシド及び／またはＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］含有ヌクレオシドから選択される少なくとも８つの修飾ヌクレオシドを含む。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２つのＬＮＡ含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、３つのＬＮＡ含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、４つのＬＮＡ含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２つのＧｕＮＡ含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、３つのＧｕＮＡ含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、３つのＡＬＮＡ［ｍＵ］含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、３つのＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングは、２つのＬＮＡ含有ヌクレオシドと１つのＧｕＮＡ含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、３つのＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドと１つの２’－ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドと２つの２’－ＯＭｅ含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、３つの２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、４つの２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、５つの２’－ＭＯＥを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドと１つの２’－ＭＯＥ含有ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドと２つの２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドと２つの２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドと３つの２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドと５つの２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、１つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドと３つの２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２つのＬＮＡ含有ヌクレオシドと２つの２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、３つの拘束エチルヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２つの二環式ヌクレオシド及び２つの非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２つの拘束エチルヌクレオシド及び２つの２’－ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２つの二環式ヌクレオシド及び２つの非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２つの拘束エチルヌクレオシド及び２つの２’－ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、２つの拘束エチルヌクレオシド及び３つの２’－ＯＭｅヌクレオシドを含む。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは１つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは連結した２つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは連結した３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは連結した４つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは連結した５つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは連結した３、４または５つの２’－ＭＯＥヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、連結した、1、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び１つの２’－ＯＭｅヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び２つの２’－ＯＭｅヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び３つの２’－ＯＭｅヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び１つの２’－ＭＯＥヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び２つの２’－ＭＯＥヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び３つの２’－ＭＯＥヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び５つの２’－ＭＯＥヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは、連結した、２つのＬＮＡ含有ヌクレオシド及び２つの２’－ＭＯＥヌクレオシドからなる。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは連結した１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ１個の５－メチルシトシンを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは連結した１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ２個の５－メチルシトシンを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは連結した１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ３個の５－メチルシトシンを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの３’ウイングセグメントは連結した１、２、３、４または５つの２’－ＭＯＥヌクレオシドからなり、かつ１個の５－メチルシトシンを含む。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは１つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ３’ウイングセグメントは1つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは連結した２つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ３’ウイングセグメントは連結した２つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなる。ある種の実施態様でセグメントは、ギャップマーの５’ウイングセグメントは連結した３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ３’ウイングセグメントは連結した３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは連結した４つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ３’ウイングセグメントは連結した４つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは連結した５つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ３’ウイングセグメントは連結した５つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなる。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び１つの２’－ＯＭｅヌクレオシドからなり、かつ３’ウイングセグメントは、連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び１つの２’－ＯＭｅヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び２つの２’－ＯＭｅヌクレオシドからなり、かつ３’ウイングセグメントは、連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び連結した２つの２’－ＯＭｅヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び３つの２’－ＯＭｅヌクレオシドからなり、かつ３’ウイングセグメントは、連結した、1、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び３つの２’－ＯＭｅヌクレオシドからなる。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び１または２つの２’－ＭＯＥヌクレオシドからなり、かつ３’ウイングセグメントは、連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び１または２つの２’ＭＯＥヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ３’ウイングセグメントは、連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び１、２または３つの２’－ＭＯＥヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ３’ウイングセグメントは、連結した、１、２、３、４または５つの２’－ＭＯＥヌクレオシドからなる。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、連結した、１、２、３、４または５つの２’－ＭＯＥヌクレオシドからなり、かつ３’ウイングセグメントは、連結した、１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］からなる。
　ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、連結した１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ１個の５－メチルシトシンを含み、さらにギャップマーの３’ウイングセグメントは、連結した１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ１個の５－メチルシトシンを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、連結した１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ２個の５－メチルシトシンを含み、さらにギャップマーの３’ウイングは、連結した１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ１個の５－メチルシトシンを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、連結した１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ２個の５－メチルシトシンを含み、さらにギャップマーの３’ウイングセグメントは、連結した１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ２個の５－メチルシトシンを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、連結した１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ３個の５－メチルシトシンを含み、さらにギャップマーの３’ウイングセグメントは、連結した１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ３個の５－メチルシトシンを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、連結した１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、かつ１個の５－メチルシトシンを含み、さらにギャップマーの３’ウイングセグメントは、連結した１、２、３、４または５つの２’－ＭＯＥヌクレオシドからなり、かつ１個の５－メチルシトシンを含む。ある種の実施態様では、ギャップマーの５’ウイングセグメントは、連結した１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなり、さらにギャップマーの３’ウイングセグメントは、連結した１、２または３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシド及び１、２または３つの２’－ＭＯＥヌクレオシドからなり、かつ１個の５－メチルシトシンを含む。
　ある種の実施態様では、ギャップマーのギャップセグメントは１０個の連続したヌクレオシドを含み、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０番目のいずれかのヌクレオシドにおいて２’－ＯＭｅヌクレオシドを含み、残りのヌクレオシドはデオキシヌクレオシドである。
医薬組成物を製剤化するための組成物及び方法
　医薬組成物または製剤の調製のために、修飾オリゴヌクレオチドを１つ以上の医薬的に許容可能な活性または不活性な物質と混合することができる。医薬組成物の製剤化のための組成物及び方法は、これらに限定されないが、投与経路、疾患の程度または投与される用量を含めたいくつかの判断基準によって決まる。
　適切な医薬的に許容可能な希釈剤または担体と修飾オリゴヌクレオチドを組み合わせることにより、ＤＵＸ４核酸を標的とする修飾オリゴヌクレオチドを医薬組成物中で利用することができる。医薬的に許容可能な希釈剤としては、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。ＰＢＳは、非経口的に送達される組成物中で使用するのに適した希釈剤である。したがって、一実施態様では、ＤＵＸ４核酸を標的とする修飾オリゴヌクレオチド及び医薬的に許容可能な希釈剤を含む医薬組成物が、本明細書に記載の方法で用いられる。ある種の実施態様では、医薬的に許容可能な希釈剤はＰＢＳである。
　修飾オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、ヒトを含めた動物に投与する際に、生物学的に活性な代謝物またはその残存物を（直接的または間接的に）提供することができる、任意の医薬的に許容可能な塩、エステルもしくはそうしたエステルの塩または任意の他のオリゴヌクレオチドを包含する。したがって、例えば、本開示は、修飾オリゴヌクレオチドの医薬的に許容可能な塩、プロドラッグ、そうしたプロドラッグの医薬的に許容可能な塩及び他の生物学的同等物にも関する。適切な医薬的に許容可能な塩としては、これらに限定されないが、ナトリウム塩及びカリウム塩が挙げられる。
　プロドラッグは、活性な修飾オリゴヌクレオチドを形成するために、体内で内在性ヌクレアーゼにより切断される修飾オリゴヌクレオチドの一端または両端に付加的なヌクレオシドを組み込むことを含むことができる。
共役修飾オリゴヌクレオチド
　修飾オリゴヌクレオチドを、得られた修飾オリゴヌクレオチドの活性、細胞分布または細胞取り込みを増強する１つまたは複数の部分または共役物に共有結合することができる。典型的な共役基としては、コレステロール部分及び脂質部分が挙げられる。さらなる共役基としては、炭水化物、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン及び色素が挙げられる。
　例えばヌクレアーゼ安定性などの特性を増強するために、修飾オリゴヌクレオチドの一末端または両末端に一般に結合している１つまたは複数の安定化基を有するように、修飾オリゴヌクレオチドを修飾することもできる。キャップ構造は安定化基に含まれる。これらの末端修飾は、末端核酸を有する修飾オリゴヌクレオチドをエキソヌクレアーゼによる分解から保護し、細胞内の送達及び／または局在化に役立ち得る。キャップは、５’末端（５’キャップ）または３’末端（３’キャップ）に存在してもよいし、両末端に存在してもよい。キャップ構造は当技術分野で周知であり、例えば、逆位デオキシ脱塩基キャップが挙げられる。ヌクレアーゼ安定性を与えるために修飾オリゴヌクレオチドの一端または両端をキャップするのに使用することができるさらなる３’及び５’安定化基としては、ＷＯ０３／００４６０２に開示されたものが挙げられる。
細胞培養及び修飾オリゴヌクレオチド処理
　ＤＵＸ４核酸のレベル、活性または発現に対する修飾オリゴヌクレオチドの効果は、様々な細胞型においてインビトロで試験することができる。そうした解析に使用する細胞型は、商業的供給業者（例えば、アメリカ培養細胞系統保存機関、Ｍａｎａｓｓｕｓ、ＶＡ；Ｚｅｎ－Ｂｉｏ，Ｉｎｃ．、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ、ＮＣ；Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、ＭＤ）から入手可能であり、細胞は、市販の試薬（例えば、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を使用して、供給業者の説明書に従って培養される。例示的な細胞型としては、これらに限定されないが、Ｃ２Ｃ１２細胞、ＨｅｐＧ２細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、初代肝細胞、Ａ５４９細胞、ＧＭ０４２８１線維芽細胞及びＬＬＣ－ＭＫ２細胞が挙げられる。これらの細胞は、ヒトＤＵＸ４　ｍＲＮＡを発現するベクターをトランスフェクションして使用することができる。ベクターとしては、ルシフェラーゼやＧＦＰなどのレポーター遺伝子と融合蛋白質として発現することが好ましく、例えば、ｐｓｉＣＨＥＣＫ－２　ｖｅｃｔｏｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ）が挙げられる。
修飾オリゴヌクレオチドのインビトロ試験
　修飾オリゴヌクレオチドで細胞を処理する方法が本明細書に記載され、これは、修飾オリゴヌクレオチドの種類に応じて適切に改変することができる。
　一般に、培養中に細胞が約６０～８０％コンフルエンスに到達時に、細胞を修飾オリゴヌクレオチドで処理する。
　修飾オリゴヌクレオチドは例えばリポフェクション法で細胞に導入される。
　修飾オリゴヌクレオチドを培養細胞に導入するのに一般に使用される一試薬としては、カチオン性脂質トランスフェクション試薬のＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）が挙げられる。修飾オリゴヌクレオチドを、ＯＰＴＩ－ＭＥＭ（登録商標）１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）中でＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）と混合して、修飾オリゴヌクレオチドの所望の終濃度及び典型的には１００ｎＭ修飾オリゴヌクレオチドあたり２～１２μｇ／ｍＬに及ぶＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）濃度を得る。
　修飾オリゴヌクレオチドを培養細胞に導入するのに使用される別の試薬としては、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ２０００（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）が挙げられる。修飾オリゴヌクレオチドを、ＯＰＴＩ－ＭＥＭ（登録商標）１血清低減培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）中でＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ２０００（登録商標）と混合して、修飾オリゴヌクレオチドの所望の濃度及び典型的には１００ｎＭ修飾オリゴヌクレオチドあたり２～１２μｇ／ｍＬに及ぶＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）濃度を得る。
　修飾オリゴヌクレオチドを培養細胞に導入するのに使用される別の試薬としては、Ｃｙｔｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）が挙げられる。修飾オリゴヌクレオチドを、ＯＰＴＩ－ＭＥＭ（登録商標）１血清低減培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）中でＣｙｔｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）と混合して、修飾オリゴヌクレオチドの所望の濃度及び典型的には１００ｎＭ修飾オリゴヌクレオチドあたり２～１２μｇ／ｍＬに及ぶＣｙｔｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）濃度を得る。
　修飾オリゴヌクレオチドを培養細胞に導入するのに使用される別の技法としては、エレクトロポレーションが挙げられる。
　修飾オリゴヌクレオチドはＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮなどを使用しなくても、細胞に導入される。この場合の修飾オリゴヌクレオチドの標的遺伝子の発現抑制方法をＧｙｍｎｏｓｉｓ法という。
　慣例的方法によって細胞を修飾オリゴヌクレオチドで処理する。典型的には、修飾オリゴヌクレオチド処理してから１６～４８時間後に細胞を収集し、その時点で、当技術分野で既知の及び本明細書に記載の方法によって、標的核酸のＲＮＡまたは蛋白質レベルを測定する。一般に、複数の反復で処理を実施する場合、反復処理の平均としてデータを示す。
　使用する修飾オリゴヌクレオチドの濃度は、細胞系統によって異なる。特定の細胞系統に対する至適な修飾オリゴヌクレオチド濃度を決定する方法は当技術分野で周知である。ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ２０００（登録商標）、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮまたはＣｙｔｏｆｅｃｔｉｎを用いてトランスフェクトする場合に、典型的には１ｎＭ～３００ｎＭに及ぶ濃度で修飾オリゴヌクレオチドを使用する。エレクトロポレーションを使用してトランスフェクトする場合は、６２５～２０，０００ｎＭに及ぶより高濃度で修飾オリゴヌクレオチドを使用する。各濃度での遺伝子発現の阻害率から、５０％の遺伝子発現を抑制する修飾オリゴヌクレオチドの濃度ＩＣ５０を算出することができる。
ＲＮＡ単離
　ＲＮＡ解析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡについて実施することができる。ＲＮＡ単離の方法は当技術分野で周知である。ＲＮＡは、当技術分野で周知の方法を使用して、例えば、製造業者の推奨プロトコールに従ってＴＲＩＺＯＬ（登録商標）試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を使用して調製する。
標的のレベルまたは発現の阻害に関する解析
　ＤＵＸ４核酸のレベルまたは発現の阻害は、当技術分野で既知の様々な方法でアッセイすることができる。例えば、標的核酸レベルは、例えば、ノーザンブロット解析、競合的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）または定量的リアルタイムＰＣＲによって定量化することができる。ＲＮＡ解析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡについて実施することができる。ＲＮＡ単離の方法は当技術分野で周知である。ノーザンブロット解析も当技術分野で慣例的である。定量的リアルタイムＰＣＲは、ＰＥ－Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡから入手可能な、製造者の説明書に従って使用される、市販のＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）７６００、７７００または７９００配列検出システムを使用して、便利に達成することができる。
標的ＲＮＡレベルの定量的リアルタイムＰＣＲ解析
　標的ＲＮＡレベルの定量化は、製造者の説明書に従ってＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）７６００、７７００または７９００配列検出システム（ＰＥ－Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）を使用して、定量的リアルタイムＰＣＲによって達成することができる。定量的リアルタイムＰＣＲの方法は当技術分野で周知である。
　リアルタイムＰＣＲの前に、単離したＲＮＡを逆転写酵素（ＲＴ）反応にかけ、これによって、次いでリアルタイムＰＣＲ増幅の基質として使用される相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）が生成される。ＲＴ及びリアルタイムＰＣＲの反応を同じ試料ウェル中で逐次実施する。ＲＴ及びリアルタイムＰＣＲの試薬は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）から得られる。ＲＴ、リアルタイムＰＣＲ反応は、当業者に周知の方法により行う。
　リアルタイムＰＣＲによって得られる遺伝子（またはＲＮＡ）標的の量は、シクロフィリンＡなどの発現が一定な遺伝子の発現レベルを使用して、またはＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｉｎｃ．Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を使用して全ＲＮＡを定量化することによって、標準化する。シクロフィリンＡの発現は、リアルタイムＰＣＲによって、標的と同時に、多重的にまたは別々に実施することにより、定量化する。全ＲＮＡは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）を使用して定量化する。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によるＲＮＡの定量化方法は、Ｊｏｎｅｓ，Ｌ．Ｊ．，ｅｔａｌ，（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８，２６５，３６８－３７４）において教示される。ＣＹＴＯＦＬＵＯＲ（登録商標）４０００機器（ＰＥＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）蛍光を測定する。
　プローブ及びプライマーをDUX4核酸にハイブリダイズするように設計する。リアルタイムＰＣＲのプローブ及びプライマーの設計方法は当技術分野で周知であり、ＰＲＩＭＥＲ  ＥＸＰＲＥＳＳ（登録商標）ソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＦｏｓｔｅｒＣｉｔｙ、ＣＡ）などのソフトウェアの使用を含むことができる。
蛋白質レベルの解析
　ＤＵＸ４蛋白質のレベルを測定することによって、ＤＵＸ４核酸のアンチセンス阻害を評価することができる。ＤＵＸ４蛋白質のレベルは、当技術分野で周知な様々な方法、例えば、免疫沈降法、ウェスタンブロット解析（免疫ブロット法）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、定量的蛋白質アッセイ、蛋白質活性アッセイ（例えば、カスパーゼ活性アッセイ）、免疫組織化学法、免疫細胞化学法または蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）で調べるまたは定量化することができる。標的に対する抗体は、様々な供給源、例えば抗体のＭＳＲＳカタログ（ＡｅｒｉｅＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＭＩ）から特定すること及び得ることができ、または当技術分野で周知の従来のモノクローナルまたはポリクローナル抗体産生方法により調製することができる。
遺伝子発現の解析
　ＤＵＸ４遺伝子発現のレベルをルシフェラーゼなどのレポーター遺伝子を利用して測定することもできる。例えば、ｐｓｉＣＨＥＣＫ－２　ｖｅｃｔｏｒ　（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用すると、ＤＵＸ４遺伝子の発現が、ＤＵＸ４との融合蛋白であるＲｅｎｉｌｌａルシフェラーゼの発光量で測定でき、同ベクター上に存在するＦｉｒｅｆｌｙ　ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの発光量で補正することにより、非特異的な細胞死などの影響を除外することができる。
修飾オリゴヌクレオチドのインビボ試験
　修飾オリゴヌクレオチドは、ＤＵＸ４の発現を阻害する及び表現型を変化させるその能力を評価するために、動物で試験する。試験は、正常な動物で、または実験用の疾患モデル、例えばＤＵＸ４のトランスジェニックマウスモデル（Ｊｏｎｅｓ，Ｔ．ｅｔ　ａｌ.　ＰＬｏＳ Ｏｎｅ. ２０１８；１３（２）、Ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ ｅ０１９２６５７）や遺伝子組み換えＡＡＶウイルスを用いたＤＵＸ４遺伝子発現マウス（Ｗａｌｌａｃｅ, ＬＭ ｅｔ　ａｌ.　Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ. ２０１２；２０（７）：１４１７、Ｗａｌｌａｃｅ, ＬＭ ｅｔ　ａｌ.　Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ. ２０１１； ６９（３）：５４０）で実施することができる。
　動物へ投与するために、修飾オリゴヌクレオチドを、医薬的に許容可能な希釈剤、例えばリン酸緩衝食塩水中に製剤化する。投与は非経口投与経路を含む。修飾オリゴヌクレオチドによる処置期間に続いて、ＲＮＡを組織から単離し、ＤＵＸ４核酸発現の変化を測定する。ＤＵＸ４蛋白質のレベルの変化も測定する。
ある種のアンチセンスメカニズム
　ＦＳＨＤは、筋肉におけるＤＵＸ４遺伝子（特にＤＵＸ４－ＦＬのスプライシングバリアント）の異常発現、によって引き起こされる。一方、ＤＵＸ４は健常人においても例えば、精巣などで発現している。精巣などで発現しているあるＤＵＸ４のスプライシングバリアントにはＤＵＸ４－ＦＬに加え、エクソン１、エクソン２、エクソン６、エクソン７のスプライシングバリアント、エクソン１、エクソン２、エクソン４、エクソン５、エクソン６、エクソン７のスプライシングバリアントが発現する（上記非特許文献１）。
ある種のバイオマーカー
　少なくとも部分的には、ＤＵＸ４蛋白質の蓄積レベルによって、例えばＭＢＤ３Ｌ２、ＺＳＣＡＮ４、ＴＲＩＭ４３、ＤＥＦＢ１０３、ＺＮＦ２１７などの遺伝子発現が調節される（上記非特許文献２）。また、筋障害のマーカーとしては血中クレアチンキナーゼを測定することができる。
ある種の適応症
　ある種の実施態様では、個体を処置する方法であって、本明細書に記載の１つまたは複数の医薬組成物を投与することを含む方法が本明細書で提供される。ある種の実施態様では、個体はＦＳＨＤを有する。
　したがって、それを必要とする対象において、ＦＳＨＤと関係がある症状を改善させる方法が本明細書で提供される。ある種の実施態様では、ＦＳＨＤと関係がある１つ以上の症状の発症率を低減させる方法が提供される。ある種の実施態様では、ＦＳＨＤと関係がある症状の重症度を低減させる方法が提供される。ある種の実施態様では、ＦＳＨＤと関係がある症状としては、筋硬直、筋強直症、顔面筋衰弱、眼瞼下垂、口笛不能、顔の表情変化の減少、憂鬱または怒り顔表情、語を発音する困難、肩甲筋衰弱（翼状肩甲、撫肩等の変形）、下肢衰弱、聴力損失、および心臓病が挙げられる。
　ある種の実施態様では、本発明の方法は、治療有効量の、ＤＵＸ４核酸を標的とする化合物を、それを必要とする個体に投与することを含む。
　ある種の実施態様では、ＤＵＸ４核酸を標的とする修飾オリゴヌクレオチドの投与は、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％もしくは少なくとも約９９％またはこれらの値の任意の２つによって定められた範囲のＤＵＸ４の発現の低減をもたらす。
　ある種の実施態様では、ＤＵＸ４を標的とする修飾オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、ＦＳＨＤなどのＤＵＸ４関連疾患を患っているまたはそれに罹りやすい患者を処置するための医薬を調製するのに使用される。
　ある種の実施態様では、本明細書に記載の方法は、配列表の配列番号２、３、４、７～６４、６９～９７または１０２～１１２に記載される配列の、本明細書に記載される連続的な核酸塩基部分を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を投与することを含む。
投与
　ある種の実施態様では、本明細書に記載の化合物及び医薬組成物は非経口的に投与される。
　ある種の実施態様では、非経口投与は注入による。注入は、長期的または持続的でもよく、短期的または断続的でもよい。ある種の実施態様では、注入された医薬剤はポンプで送達される。ある種の実施態様では、非経口投与は注射（例えばボーラス注射）による。注射剤は注射器で送達され得る。
　非経口投与としては、例えば、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与または頭蓋内投与、例えば、髄腔内または脳室内投与が挙げられる。投与は、持続的または長期的でもよいし、短期的または断続的でもよい。
　ある種の実施態様では、本明細書に記載される医薬組成物の化合物の送達は、標的ｍＲＮＡ及び／または標的蛋白質のレベルの少なくとも７０％のダウンレギュレーションをもたらす。ある種の実施態様では、本明細書に記載される化合物または組成物の送達は、少なくとも１日、少なくとも３日、少なくとも５日、少なくとも７日、少なくとも１０日、少なくとも１４日、少なくとも２０日、少なくとも２１日、少なくとも２８日、少なくとも３０日、少なくとも３５日、少なくとも４０日、少なくとも４５日、少なくとも５０日、少なくとも５５日、少なくとも６０日、少なくとも６５日、少なくとも７０日、少なくとも７５日、少なくとも７６日、少なくとも７７日、少なくとも７８日、少なくとも７９日、少なくとも８０日、少なくとも８５日、少なくとも９０日、少なくとも９５日、少なくとも１００日、少なくとも１０５日、少なくとも１１０日、少なくとも１１５日、少なくとも１２０日、少なくとも１年にわたって、標的ｍＲＮＡ及び／または標的蛋白質のレベルの１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％のダウンレギュレーションをもたらす。
　ある種の実施態様では、修飾オリゴヌクレオチドは、毎日１回、３日に１回、毎週１回、隔週１回、３週間に１回、毎月１回、２か月に１回、３か月に１回、６か月に１回、年に２回または年に１回、注射または注入によって送達される。
ある種の併用療法
　ある種の実施態様では、本発明の修飾オリゴヌクレオチドを含む第一の薬剤は、１種または複数の第二の薬剤と共投与される。ある種の実施態様では、そうした第二の薬剤は、本明細書に記載の第一の薬剤と同じＦＳＨＤを処置するように設計される。ある種の実施態様では、そうした第二の薬剤は、本明細書に記載の第一の薬剤と異なる疾患、障害または状態を処置するように設計される。ある種の実施態様では、そうした第二の薬剤は、本明細書に記載の１つまたは複数の医薬組成物の望ましくない副作用を処置するように設計される。ある種の実施態様では、第二の薬剤は、第一の薬剤の望ましくない作用を処置するために、第一の薬剤と共投与される。ある種の実施態様では、第二の薬剤は、併用効果をもたらすために、第一の薬剤と共投与される。ある種の実施態様では、第二の薬剤は、相乗効果をもたらすために、第一の薬剤と共投与される。
　ある種の実施態様では、第一の薬剤及び１種または複数の第二の薬剤は、同時に投与される。ある種の実施態様では、第一の薬剤及び１種または複数の第二の薬剤は、異なる時間に投与される。ある種の実施態様では、第一の薬剤及び１種または複数の第二の薬剤は、単一の医薬製剤中に一緒に調製される。ある種の実施態様では、第一の薬剤及び１種または複数の第二の薬剤は、別々に調製される。
ある種の化合物
　ある種の実施態様では、本明細書に開示される化合物は、市販されているＤＮＡ・ＲＮＡ合成用アミダイト（ＬＮＡも含む）を使用してホスホロアミダイト法によりオリゴマーを合成することができる。人工核酸ＧｕＮＡはＷＯ２０１４／０４６２１２号、ＷＯ２０１７／０４７８１６号に記載された方法によりオリゴマーを合成することができる。人工核酸ＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ＡＬＮＡ［ｍＵ］、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］及びＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］は、特願２０１８－２１２４２４号に記載された方法によりオリゴマーを合成することができる。
　ある種の実施態様では、本明細書に開示される化合物は、適切な比較化合物と比較して向上した１つまたは複数のインビトロ及び／またはインビボ特性の利益を享受する。
　ある種の実施態様では、（５’から３’）ngagattcccgccggt（nは５－メチルシトシンであり、配列番号２として本明細書に組み込まれる）の配列を有する化合物番号1の化合物、すなわち５’ウイング、３’ウイングが各３つのＬＮＡ含有ヌクレオシドからなるギャップマーであって、各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である化合物である。
　ある種の実施態様では、（５’から３’）gnagttctccgcggt（nは５－メチルシトシンであり、配列表の配列番号３として本明細書に組み込まれる）の配列を有する化合物番号２の化合物、すなわち５’ウイング、３’ウイングが各３つのＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオシドからなるギャップマーであって、各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である化合物である。
　ある種の実施態様では、（５’から３’）gnntagacagcgtngg（nは５－メチルシトシンであり、配列表の配列番号４として本明細書に組み込まれる）の配列を有する化合物番号３の化合物、すなわち５’ウイング、３’ウイングが各３つのLNA含有ヌクレオシドからなるギャップマーであって、各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である化合物である。
　ある種の実施態様では、（５’から３’）gnntagacagcgtngg（nは５－メチルシトシンであり、配列表の配列番号４として本明細書に組み込まれる）の配列を有する化合物番号１２３の化合物、すなわち５’ウイング、３’ウイングが各３つのALNA［Ms］含有ヌクレオシドからなるギャップマーであって、各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である化合物である。
非限定的開示及び参照による組み込み
　本明細書に記載のある種の化合物、組成物及び方法は、ある種の実施態様に従って特異的に記載されているが、以下の実施例は、本明細書に記載の化合物を例示する役割を果たすにすぎず、これを限定することを意図しない。本出願に記載される参考文献、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号などのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
　本出願に添付の配列表は、必要に応じて「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」のいずれかとして各配列を特定するが、実際には、それらの配列は化学修飾の任意の組み合わせで修飾され得る。修飾オリゴヌクレオチドを説明するための「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」のような指定は、場合によっては恣意的であることを、当業者なら容易に理解するであろう。例えば、２’－ＯＨ糖部分及びチミン塩基を含有するヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドは、修飾糖（ＤＮＡの天然２’－Ｈに対して２’－ＯＨ）を有するＤＮＡとして、または修飾塩基（ＲＮＡの天然ウラシルに対してチミン（メチル化ウラシル））を有するＲＮＡとして説明され得る。
　したがって、これらに限定されないが、配列表にあるものを含めた、本明細書で提供される核酸配列は、これらに限定されないが、修飾核酸塩基を有するそうした核酸を含めた、天然もしくは修飾ＲＮＡ及び／またはＤＮＡの任意の組み合わせを含む核酸を包含することが意図される。限定されるものではないが、さらなる例として、核酸塩基配列「ＡＴＣＧＡＴＣＧ」を有するオリゴマー化合物は、修飾されていても、修飾されていなくても、そうした核酸塩基配列を有する任意のオリゴマー化合物を包含し、これには、これらに限定されないが、ＲＮＡ塩基を含むそうした化合物、例えば配列「ＡＵＣＧＡＵＣＧ」を有するもの、並びに「ＡＵＣＧＡＴＣＧ」などのいくつかのＤＮＡ塩基及びいくつかのＲＮＡ塩基を有するもの、並びに「ＡＴｍｅＣＧＡＵＣＧ」（ここでは、ｍｅＣは５位にメチル基を含むシトシン塩基を示す）などの他の修飾されたまたは天然に存在する塩基を有するオリゴマー化合物が含まれる。
非限定開示及び参照による組み込み
　本明細書に記載のある種の化合物、組成物及び方法は、ある種の実施態様に従って特異的に記載されているが、以下の実施例は、本明細書に記載の化合物を例示する役割を果たすにすぎず、これを限定することを意図しない。本出願に記載される参考文献のそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
　本明細書中で使用する各人工核酸の構造を、下記構造式にそれぞれの略称と共に示した。
各人工核酸の構造と略称
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
 
実施例１
Ｉｎ ｖｉｔｒｏ評価用修飾オリゴヌクレオチド化合物の合成および精製 
　各種アミダイト（ＬＮＡアミダイトはChem Genes及びHongene Biotechnology Limitedより購入、２’-ＯＭｅアミダイトはSigma-Aldrichより購入、ＧｕＮＡはWO２０１４／０４６２１２号、WO２０１７／０４７８１６号に記載された方法により合成、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ＡＬＮＡ［ｍＵ］、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］及びＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］は、特願２０１８－２１２４２４号に記載された方法により合成）を用いて、修飾オリゴヌクレオチド化合物を、ＤＮＡ／ＲＮＡオリゴヌクレオチド自動合成機ｎＳ－８ＩＩ(株式会社ジーンデザイン製)により０．２または１．０μｍｏｌスケールにてＣＰＧまたはポリスチレン担体を用いて合成した。アミダイトは全て０．１Ｍのアセトニトリル溶液に調整し、非天然型ヌクレオシドにおけるカップリング時間は１０分間で行い、それ以外の工程はｎＳ－８ＩＩの標準条件にて行った。活性化剤はＡｃｔｉｖａｔｏｒ４２（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、チオ化にはＳｕｌｆｕｒｉｚｉｎｇ　ＲｅａｇｅｎｔＩＩ（Ｇｒｅｎ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用した。合成したオリゴヌクレオチドは２８％アンモニア水溶液を加えて６０－６５℃にて８時間反応させることで担体からの切り出しと塩基部の脱保護を行った。アンモニアを濃縮留去したのち、逆相ＨＰＬＣ精製を行った。
実施例２
Ｉｎ ｖｉｖｏ評価用修飾オリゴヌクレオチド化合物の合成および精製
　各種アミダイトを用いて、修飾オリゴヌクレオチド化合物を、ＤＮＡ／ＲＮＡオリゴヌクレオチド自動合成機ＡＫＴＡ　ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ　ｐｌｕｓ　１０ (ＧＥヘルスケアジャパン株式会社製)により２０～５０μｍｏｌスケールにてポリスチレン担体を用いて合成した。ＤＮＡアミダイトは０．１Ｍ、非天然型アミダイトは０．０５～０．１Ｍのアセトニトリル溶液に調整し、非天然型ヌクレオシドにおけるカップリングリサイクル時間は２０分間で行い、ユニバーサル担体への１塩基目の導入の際は、カップリング、チオ化、キャッピング工程をそれぞれ２回連続で実施した。それ以外の工程はＡＫＴＡ　ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ　ｐｌｕｓ１０の標準条件にて行った。活性化剤はＡｃｔｉｖａｔｏｒ４２（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、チオ化にはＳｕｌｆｕｒｉｚｉｎｇ　ＲｅａｇｅｎｔＩＩ（Ｇｒｅｎ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用した。合成したオリゴヌクレオチドは、２０％ジエチルアミン／アセトニトリルもしくは５０％トリエチルアミン／アセトニトリルを用いて固相上で脱シアノエチル処理を行い、２８％アンモニア水溶液を加えて６０－６５℃にて８～２４時間反応させることで担体からの切り出しと塩基部の脱保護を行った。アンモニアを濃縮留去したのち、陰イオン交換カラムで精製を行った。陰イオン交換後に含まれる余剰塩を脱塩カラムにより除去した。
実施例３
修飾オリゴヌクレオチド化合物の純度確認
　合成した修飾オリゴヌクレオチド化合物の精製および純度確認は、逆相ＨＰＬＣにより以下の条件で行った。いずれの化合物も純度８５％以上であった。
逆相ＨＰＬＣ（精製）
移動相：
　Ａ液：４００ｍＭ　ヘキサフルオロイソプロパノール、１５ｍＭ　トリエチルアミン
　Ｂ液：メタノール
　グラジエント：　Ａ：Ｂ　＝８５：１５→７０：３０（１０ｍｉｎ）
使用カラム：
　　分取　Ｗａｔｅｒｓ　ＸＢｒｉｄｇｅ＠　Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ＢＥＨ　Ｃ１８　ＯＢＤＴＭ　Ｐｒｅｐ　Ｃｏｌｕｍｎ，１３０Å，２．５μｍ，１０ｍｍ＊５０ｍｍ
 
流速：
　分取　５ｍＬ/ｍｉｎ
カラム温度：６０℃
検出： ＵＶ（２６０ｎｍ）
 
逆相ＨＰＬＣ（純度確認）
移動相：
　Ａ液：４００ｍＭ　ヘキサフルオロイソプロパノール、１５ｍＭ　トリエチルアミン水溶液
　Ｂ液：メタノール
グラジエント：Ａ：Ｂ　＝８０：２０→７０：３０（６．５ｍｉｎ）
使用カラム：
　分析　Ｗａｔｅｒｓ　ＡＣＱＵＩＴＹ　ＵＰＬＣ＠　Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ＢＥＨ　Ｃ１８　Ｃｏｌｕｍｎ，　１３０Åｍ　１．７μｍ，　２．１ｍｍ＊５０ｍｍ
流速：０．２ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：６０℃
検出：ＵＶ（２６０ｎｍ）
 
陰イオン交換精製
移動相：
　Ａ液：１ｍＭ　ＮａＯＨ　２０％アセトニトリル水溶液
　Ｂ液：１ｍＭ　ＮａＯＨ，　１．５Ｍ　ＮａＣｌ／２０％アセトニトリル水溶液
使用カラム：ＴＳＫｇｅｌ　ＳｕｐｅｒＱ－５ＰＷ（１３）　φ２１．１＊１５ｍｍ
流速：７ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：室温
検出：ＵＶ（２６０ｎｍ）
 
脱塩カラム
移動相：
　Ａ液：２０％アセトニトリル水溶液
　Ｂ液：２０％アセトニトリル水溶液
使用カラム：
ＧＥ　ＨｉＰｒｅｐ　２６／１０　Ｄｅｓａｌｔｉｎｇ＊４本直列
流速：１２ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：室温
実施例４
修飾オリゴヌクレオチド化合物分子量測定
　合成した修飾オリゴヌクレオチド化合物の分子量は、Ｗａｔｅｒｓ　ＺＱを用いて以下の条件で行った。
移動相：
　Ａ液：４００ｍＭ ヘキサフルオロイソプロパノール、１５ｍＭ トリエチルアミン水溶液
　Ｂ液：メタノール
グラジエント：Ａ：Ｂ　＝８０：２０→７０：３０（６．５ｍｉｎ）
使用カラム：
　Ｗａｔｅｒｓ　ＡＣＱＵＩＴＹ　ＵＰＬＣ＠　Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ＢＥＨ　Ｃ１８　Ｃｏｌｕｍｎ，　１３０Åｍ　１．７μｍ，　２．１ｍｍ＊５０ｍｍ
流速：０．２ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：６０℃
検出：ＵＶ（２６０ｎｍ）
実施例５
合成した修飾オリゴヌクレオチド化合物の分子量
　合成した修飾オリゴヌクレオチド化合物を以下の表１に示す。化合物の表記は、各ヌクレオチドが３文字で表される。但し３’末端のヌクレオチドはヌクレオシド間結合がないため２文字で表される。
１）第１文字は大文字で表され、下記核酸塩基を示す：
　Ａ＝アデニン、Ｔ＝チミン、Ｇ＝グアニン、Ｃ＝シトシン、Ｕ＝ウラシル、Ｍ＝５－メチルシトシン、
２）第２文字は下記各糖部分を示す：
　ｌ＝ＬＮＡ、ｇ＝ＧｕＮＡ、ｍ＝ＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ｕ＝ＡＬＮＡ［ｍＵ］、ｐ＝ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］、ｔ＝ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］、ｅ＝２’－ＭＯＥ、ｏ＝２’－ＯＭｅ、ｄ＝２’－デオキシリボース、
３）第３文字は下記ヌクレオシド間結合を示す：
ｓ＝ホスホロチオエート、ｐ＝ホスホジエステル。
　標的位置として、修飾オリゴヌクレオチドのＤＵＸ４成熟ｍＲＮＡの５’標的部位（修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に対応する配列表の配列番号１の位置）を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000040
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000041
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000042
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000043
  　 
 
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000044
  　 
 
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000045
  　 
実施例６
Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ＤＵＸ４　ノックダウン活性試験（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｏｎ法）
　ＤＵＸ４修飾オリゴヌクレオチドとＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ　ＲＮＡｉ　Ｒｅａｇｅｎｔを混合したトランスフェクション試薬上に、Ｃ２Ｃ１２細胞を１．２５×１０４　ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２となるように播種し、ＣＯ２インキュベーターで一晩培養した。翌日、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ　２０００　Ｒｅａｇｅｎｔを用いて、ＤＵＸ４配列をｐｓｉＣＨＥＣＫ－２　ｖｅｃｔｏｒ　（Ｐｒｏｍｅｇａ）のマルチクローニングサイトにクローニングしたレポータープラスミドを細胞にトランスフェクションし、ＣＯ２インキュベーターで２４時間程度培養した。その後、Ｄｕａｌ－Ｇｌｏ　Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　Ａｓｓａｙ　Ｓｙｓｔｅｍを用いて、細胞内のＦｉｒｅｆｌｙ　ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅとＲｅｎｉｌｌａ　ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ発光値をプレートリーダーで検出した。Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ活性による発光値からトランスフェクション効率や細胞数の影響を補正するために、Ｆｉｒｅｆｌｙルシフェラーゼ活性による発光値との比を算出した。修飾オリゴヌクレオチドを添加した際のＲｅｎｉｌｌａ／Ｆｉｒｅｆｌｙの減少率から阻害率を１００分率で算出し、５０％を挟む２点の濃度とその時の阻害率からＩＣ５０値を算出した（表２）。ＤＵＸ４成熟ｍＲＮＡの２３２～２４８位、１３０６～１３２５位または１４７２～１４９５位に相補的である化合物（化合物番号１～１３２）と比較して、化合物番号１３３（配列表の配列番号１の２１４～２２７位に相補的）、１３４（配列表の配列番号１の１３２３～１３３６位に相補的）、１３５（配列表の配列番号１の１４５８～１４７１位に相補的）、１３６（配列表の配列番号１の１４９５～１５０８位に相補的）は阻害率が著しく弱いことが分かった。
実施例７
Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ＤＵＸ４　ノックダウン活性試験（Ｇｙｍｎｏｓｉｓ法）
　ＤＵＸ４修飾オリゴヌクレオチド溶液に、Ｃ２Ｃ１２細胞を６×１０３　ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２となるように播種し、ＣＯ２インキュベーターで２晩培養した。２日後、細胞からＤＵＸ４修飾オリゴヌクレオチド溶液含有培地を除去し、新しい培地でＷａｓｈを行った。その後、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ　２０００　Ｒｅａｇｅｎｔを用いて、ＤＵＸ４配列をｐｓｉＣＨＥＣＫ－２　ｖｅｃｔｏｒ　（Ｐｒｏｍｅｇａ）のマルチクローニングサイトにクローニングしたレポータープラスミドを細胞にトランスフェクションし、ＣＯ２インキュベーターで２４時間程度培養した。その後、Ｄｕａｌ－Ｇｌｏ　Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　Ａｓｓａｙ　Ｓｙｓｔｅｍを用いて、細胞内のＦｉｒｅｆｌｙ　ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅとＲｅｎｉｌｌａ　ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ発光値をプレートリーダーで検出した。Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ活性による発光値からトランスフェクション効率や細胞数の影響を補正するために、Ｆｉｒｅｆｌｙルシフェラーゼ活性による発光値との比を算出した。修飾オリゴヌクレオチドを添加した際のＲｅｎｉｌｌａ／Ｆｉｒｅｆｌｙの減少率から阻害率を１００分率で算出し、５０％を挟む２点の濃度とその時の阻害率からＩＣ５０値を算出した。結果を下記表２に示す。ＤＵＸ４成熟ｍＲＮＡの２３２～２４８位、１３０６～１３２５位または１４７２～１４９５位の領域内の等長部分に相補的な核酸塩基配列を含む化合物（化合物番号１～１３２）と比較して、化合物番号１３３（配列表の配列番号１の２１４～２２７位に相補的）、１３４（配列表の配列番号１の１３２３～１３３６位に相補的）、１３５（配列表の配列番号１の１４５８～１４７１位に相補的）、１３６（配列表の配列番号１の１４９５～１５０８位に相補的）は阻害率が著しく弱いことが分かった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000046
  　 
 
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000047
  　 
 
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000048
  　 
 
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000049
  　 
 
実施例８
修飾オリゴヌクレオチド化合物の合成とＩｎ　ｖｉｔｒｏ　ＤＵＸ４　ノックダウン活性試験（Ｇｙｍｎｏｓｉｓ法）
　表３に、新たに合成した修飾オリゴヌクレオチド化合物と、当該化合物についての、実施例７と同様にして行ったＩｎ　ｖｉｔｒｏ　ＤＵＸ４　ノックダウン活性試験の結果を示す。
　なお、表３における化合物の表記は、各ヌクレオチドが３文字で表される。但し３’末端のヌクレオチドはヌクレオシド間結合がないため２文字で表される。
１）第１文字は大文字で表され、下記核酸塩基を示す：
　Ａ＝アデニン、Ｔ＝チミン、Ｇ＝グアニン、Ｃ＝シトシン、Ｕ＝ウラシル、Ｍ＝５－メチルシトシン、
２）第２文字は下記各糖部分を示す：
　ｌ＝ＬＮＡ、ｍ＝ＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ｅ＝２’－ＭＯＥ、ｏ＝２’－ＯＭｅ、ｄ＝２’－デオキシリボース、
３）第３文字は下記ヌクレオシド間結合を示す：
ｓ＝ホスホロチオエート、ｐ＝ホスホジエステル。
　標的位置として、修飾オリゴヌクレオチドのＤＵＸ４成熟ｍＲＮＡの５’標的部位（修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に対応する配列表の配列番号１の位置）を示す。
　ＤＵＸ４成熟ｍＲＮＡの１２６～１４７位、２３２～２４８位、１３０６～１３２５位または１４７２～１４９５位の領域内の等長部分に相補的な核酸塩基配列を含む化合物（化合物番号１３７～２４７）と比較して、化合物番号２４８（配列表の配列番号１の１１２～１２７位に相補的）、２４９（配列表の配列番号１の１６２～１７７位に相補的）、２５０（配列表の配列番号１の２６４～２７９位に相補的）、２５１（配列表の配列番号１の１２７３～１２８８位に相補的）は阻害率が著しく弱いことが分かった。　
表３ 
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000050
 
表３．続き
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000051
 
実施例９
Ｉｎ　ｖｉｖｏ　ＤＵＸ４　ノックダウン活性試験
　配列表の配列番号１のＤＵＸ４成熟ｍＲＮＡを組み込んだアデノ随伴ウイルスベクターＡＡＶ－ＤＵＸ４（ＳｉｇｎａＧｅｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，　Ｃａｔ．＃ＳＬ１００８６２）を作製した。８週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（雄性、日本チャールスリバー）の前脛骨筋に、イソフルラン（ファイザー株式会社）麻酔下にて、ＡＡＶ－ＤＵＸ４を１Ｅ＋１０ＶＧ／５０　μＬ筋肉内投与した。３日後に、ＤＵＸ４を標的とした修飾オリゴヌクレオチドを、１、３、１０および５０ｍｇ／５ｍＬ／ｋｇとなるように生理食塩水で調製し、８週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（雄性、日本チャールスリバー）に尾静脈内投与した。７２時間後に頸椎脱臼あるいはイソフルラン（ファイザー株式会社）麻酔下にて腹部大静脈より全採血を行い、致死させた。致死後、前脛骨筋を採取し、ＲＮＡｌａｔｅｒ　Ｓｏｌｎ．（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に浸漬させた後、－８０℃にて凍結した。組織にＭａｘｗｅｌｌ　ＲＳＣ　ｓｉｍｐｌｙＲＮＡ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）のホモジネーションバッファーを加え、マルチビーズショッカーを用いて破砕し、キット記載のプロトコールに従ってＲＮＡを精製した。ＲＮＡ　４００　ｎｇを逆転写し、得られたｃＤＮＡを用いて定量ＰＣＲを行った。修飾オリゴヌクレオチドのノックダウン活性は、ＤＵＸ４の１８Ｓ　ｒＲＮＡに対する量比を、ｖｅｈｉｃｌｅ群に対する相対値で示した。１、３、１０および５０ｍｇ／５ｍＬ／ｋｇの場合の結果を図１～４に示す。化合物番号１（ＤＵＸ４成熟ｍＲＮＡの２３３位～２４８位に相補的配列）、化合物番号２（ＤＵＸ４成熟ｍＲＮＡの１３０９位～１３２３位に相補的配列）、化合物番号３（ＤＵＸ４成熟ｍＲＮＡの１４８０位～１４９５位に相補的配列）、化合物番号１３（ＤＵＸ４成熟ｍＲＮＡの２３４位～２４７位に相補的配列）、化合物番号４１（ＤＵＸ４成熟ｍＲＮＡの１３０８位～１３２３位に相補的配列）、化合物番号５４（ＤＵＸ４成熟ｍＲＮＡの１３０９位～１３２３位に相補的配列）、化合物番号５７（ＤＵＸ４成熟ｍＲＮＡの１３０９位～１３２３位に相補的配列）、化合物番号６８（ＤＵＸ４成熟ｍＲＮＡの１３０９位～１３２３位に相補的配列）、化合物番号７８（ＤＵＸ４成熟ｍＲＮＡの１３０９位～１３２４位に相補的配列）、化合物番号８８（ＤＵＸ４成熟ｍＲＮＡの１３１０位～１３２３位に相補的配列）、化合物番号１０４（ＤＵＸ４成熟ｍＲＮＡの１４７３位～１４８８位に相補的配列）、化合物番号１２２（ＤＵＸ４成熟ｍＲＮＡの１４８０位～１４９５位に相補的配列）は生体に投与しても、筋肉内でのＤＵＸ４遺伝子の発現を抑制することができた。
実施例１０
修飾オリゴヌクレオチドの安全性
　化合物番号３、４２、１２３を、６週齢のＩＣＲマウス（雄性、日本チャールスリバー）に最大１００ｍｇ／ｋｇの投与量で静脈内投与したところ、肝毒性（血液中のＡＬＴ、ＡＳＴの上昇、及び病理組織学的異常所見）、腎毒性（血液中のＵＮ、クレアチニンの上昇、及び病理組織学的異常所見）、一般症状変化、死亡などの所見は観察されなかった。
実施例１１
In vivo Tgマウス　DUX4 ノックダウン活性試験
　9週齢の雄のFLExDUX4-heteto/HSA-MCM-hetero:TG (DUX4-Tg)およびFLExDUX4-wild/HSA-MCM-hetero:TG (MCM, control)を用いた（雄性，The Jackson Laboratoryより日本チャールス・リバー株式会社へ導入）。DUX4を標的とした修飾オリゴヌクレオチドを、各用量の投与液を５ｍL／ｋｇとなるように生理食塩水で調製し、週1回，尾静脈内投与した．4週投与終了1週後，イソフルラン深麻酔下で腹部大静脈より全採血を行い，安楽死させた．EDTA血漿を分離し，クレアチンキナーゼ（CK）測定に供した。下肢の筋肉を採取し，湿重量を測定し，遺伝子発現解析に供した。
図５および図６に示すように、化合物番号３および化合物番号１２３はDUX4のmRNA発現を抑制した。また，筋障害マーカーであるCKの血中レベルを低下させた。一方、化合物番号１１３および化合物番号２４７は明確なDUX4 mRNA発現および血中CKレベルに対する作用は認められなかった。
実施例１２
マウス連投毒性試験
６週齢のＩＣＲマウス（雄性、日本チャールスリバー）に、DUX4を標的とした修飾オリゴヌクレオチドを、１００ｍｇ／５ｍL／ｋｇとなるように生理食塩水で調製し、４日間連日尾静脈内投与した。最終投与７２時間後にイソフルラン麻酔下にて後大静脈より採血を行い、臨床生化学検査を実施した。また放血致死後、剖検を行い、肝臓及び腎臓の病理組織学的検査を実施した。化合物番号１２３には投与後に死亡及び一般状態、摂餌量及び体重には変化は認められず、肝毒性（血清中のＡＬＴ、ＡＳＴの上昇、及び病理組織学的異常所見）、腎毒性（血清中のＵＮ、クレアチニンの上昇、及び病理組織学的異常所見）は観察されなかった。一方、化合物番号１１３及び化合物番号２４７については投与後に死亡及び一般状態、摂餌量及び体重には変化は認められなかったものの、いずれも明確な肝毒性（血清中のＡＬＴ、ＡＳＴ、ＧＬＤＨ、ＡＬＰ、ビリルビン、胆汁酸の上昇、病理組織学的異常所見：肝細胞の変性壊死、肝細胞肥大）及び腎毒性（血清中のクレアチニンの上昇）が認められた。また、当該試験条件下における化合物番号１２３の肝臓及び腎臓中濃度は、それぞれ３２３及び２５１μｇ／ｇであり、化合物番号２４７の肝臓及び腎臓中濃度１１１及び１８５μｇ／ｇ、化合物番号１１３の肝臓及び腎臓中濃度３９．３及び２３５μｇ／ｇと比較して同等以上の組織中濃度であるにも関わらず肝及び腎毒性は認められなかった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000052
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000053
 
参考例
　ＡＬＮＡ［Ｍｓ］含有ヌクレオチド、ＡＬＮＡ［ｍＵ］含有ヌクレオチド、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］含有ヌクレオチド、ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］含有ヌクレオチド、ＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］含有ヌクレオチドの合成法のスキームを以下に示す。なお、出発化合物１ａ，１ｄ，１ｇは国際公開第２０１７／０４７８１６号に記載された方法で合成することができる。
ＡＬＮＡ［Ｍｓ］－Ｔの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000054
 
ＡＬＮＡ［Ｍｓ］－ｍＣの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000055
 
ＡＬＮＡ［Ｍｓ］－Ｇの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000056
 
ＡＬＮＡ［Ｍｓ］－Ａの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000057
 
ＡＬＮＡ［ｍＵ］－Ｔの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000058
 
ＡＬＮＡ［ｍＵ］－ｍＣの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000059
 
ＡＬＮＡ［ｍＵ］－Ｇの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000060
ＡＬＮＡ［ｍＵ］－Ａの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000061
 
ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］－Ｔの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000062
 
ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］－ｍＣの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000063
 
ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］－Ｇの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000064
 
ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］－Ａの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000065
 
ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］－Ｔの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000066
 
ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］－ｍＣの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000067
 
ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］－Ｇの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000068
 
ＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］－Ａの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000069
 
ＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］－Ｔの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000070
 
ＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］－ｍＣの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000071
 
　本発明の修飾オリゴヌクレオチドは、ＤＵＸ４関連疾患の治療、予防またはその進行の遅延化に有用な化合物として利用可能である。
［配列表フリーテキスト］
　配列表の配列番号１は、ＤＵＸ４　成熟ｍＲＮＡの塩基配列を示す。
　配列表の配列番号２～４、および７～１１２は、修飾オリゴヌクレオチドの塩基配列を示す。
　配列表の配列番号５～６は、配列番号１のスプライシングバリアントとしてのＤＵＸ４－ＦＬ２およびＤＵＸ４－ｓのそれぞれの塩基配列を示す。

Claims (27)

  1. 　１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであって、
    　少なくとも８個の連続する核酸塩基配列であって、配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基配列の５’末端から１２６～１４７位、２３２～２４８位、１３０６～１３２５位または１４８０～１４９５位におけるその等長部分に相補的である核酸塩基配列を含み、
    　前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基配列におけるその等長部分に少なくとも９０％相補性を有し、
    　前記少なくとも８個の連続する核酸塩基配列が配列番号１の核酸塩基配列の５’末端から１４８０～１４９５位におけるその等長部分に相補的である核酸塩基配列を含む場合は、前記修飾オリゴヌクレオチドは配列番号１の核酸塩基の５’末端から１４８０位の塩基の相補塩基を３’末端に有する核酸塩基配列からなる、
    　修飾オリゴヌクレオチド。
  2. 　前記修飾オリゴヌクレオチドのうち１つ以上の修飾ヌクレオチドが修飾糖を含む、請求項１に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
  3. 　前記修飾糖が、二環式糖、２’－Ｏ－メトキシエチルで修飾された糖、および２’－Ｏ－メチルで修飾された糖からなる群から選択される、請求項２に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
  4. 　前記二環式糖が、ＬＮＡ、ＧｕＮＡ、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ＡＬＮＡ［ｍＵ］、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］、ＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］、およびＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］からなる群から選択される、請求項３に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
  5. 　１２～３０残基からなる修飾オリゴヌクレオチドであって、
    　少なくとも８個の連続する核酸塩基配列であって、配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基配列の５’末端から１４７２～１４９５位におけるその等長部分に相補的である核酸塩基配列を含み、
    　前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基配列におけるその等長部分に少なくとも９０％相補性を有し、
    　前記修飾オリゴヌクレオチドがＧｕＮＡ、ＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ＡＬＮＡ［ｍＵ］、ＡＬＮＡ［ｉｐＵ］、ＡＬＮＡ［Ｏｘｚ］、およびＡＬＮＡ［Ｔｒｚ］から選択される修飾糖を含むヌクレオシドを少なくとも１つ含む、
    　修飾オリゴヌクレオチド。
  6. 　前記修飾オリゴヌクレオチドがさらに、２’－Ｏ－メトキシエチルで修飾された糖、および／または２’－Ｏ－メチルで修飾された糖を含む、請求項５に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
  7. 　前記修飾オリゴヌクレオチドのうち少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが修飾核酸塩基を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
  8. 　前記修飾核酸塩基が５－メチルシトシンである、請求項７に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
  9. 　少なくとも１つのヌクレオシド間結合が修飾ヌクレオシド間結合である、請求項１～８のいずれか１項に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
  10. 　前記修飾ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項９に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
  11. 　前記修飾オリゴヌクレオチドが、
    １）ギャップセグメントと、
    ２）５’ウイングセグメントと、
    ３）３’ウイングセグメント、を含み、
    　前記ギャップセグメントが、前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントとの間に位置付けられ、
    　前記５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントのヌクレオシドのいずれもが、少なくとも１つの修飾糖を含み、
    　前記ギャップセグメントのヌクレオシドは、修飾糖を含まないヌクレオシドのみであるか、または、修飾糖を含む１または２個のヌクレオシドを含み、それ以外は修飾糖を含まないヌクレオシドである、
    　請求項１～１０のいずれか１項に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
  12. 　前記修飾オリゴヌクレオチドが、
    配列番号１のＤＵＸ４の成熟ｍＲＮＡの核酸塩基配列の
    ５’末端から１２８～１４３位の核酸塩基配列、
    ５’末端から２３２～２４７位の核酸塩基配列、
    ５’末端から２３３～２４８位の核酸塩基配列、
    ５’末端から１３０９～１３２３位の核酸塩基配列、または
    ５’末端から１４８０～１４９５位の核酸塩基配列、
    に相補的な核酸塩基配列からなる、請求項１～１１のいずれか１項に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
  13. 　前記修飾オリゴヌクレオチドが、
    gtggcgatgc ccgggt（配列番号７５）、
    gagattcccg cnggtg（配列番号７８：nは５－メチルシトシンを示す）、
    ngagattcccgccggt（配列番号２：nは５－メチルシトシンを示す）、
    gnagttctccgcggt（配列番号３：nは５－メチルシトシンを示す）、または
    gnntagacagcgtngg（配列番号４：nは５－メチルシトシンを示す）
    の塩基配列からなる、請求項１～１２のいずれか１項に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
  14. 　下式：
    GlsMlsMlsTdsAdsGdsAdsCdsAdsGdsCdsGdsTdsMlsGlsGl；
    で示される請求項１３に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
    　式中、
    　各核酸塩基が下記記号：
    Ａ＝アデニン、Ｔ＝チミン、Ｇ＝グアニン、Ｃ＝シトシン、M＝５－メチルシトシン、
    に従って示され；
    　各糖部分が下記記号：
    ｌ＝ＬＮＡ、ｄ＝２’－デオキシリボース、
    に従って示され；
    　各ヌクレオシド間結合が下記記号：
    ｓ＝ホスホロチオエートに従って示される。
  15. 　下式：
    GmsMmsMmsTdsAdsGdsAdsCdsAdsGdsCdsGdsTdsMmsGmsGm；
    で示される請求項１３に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
    　式中、
    　各核酸塩基が下記記号：
    Ａ＝アデニン、Ｔ＝チミン、Ｇ＝グアニン、Ｃ＝シトシン、M＝５－メチルシトシン、
    に従って示され；
    　各糖部分が下記記号：
    ｍ＝ＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ｄ＝２’－デオキシリボース、
    に従って示され；
    　各ヌクレオシド間結合が下記記号：
    ｓ＝ホスホロチオエートに従って示される。
  16. 　下式：
    GmsMmsAmsGdsTdsTdsCdsTdsCdsCdsGdsCdsGmsGmsTm；
    で示される請求項１３に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
    　式中、
    　各核酸塩基が下記記号：
    Ａ＝アデニン、Ｔ＝チミン、Ｇ＝グアニン、Ｃ＝シトシン、M＝５－メチルシトシン、に従って示され；
    　各糖部分が下記記号：
    ｍ＝ＡＬＮＡ［Ｍｓ］、ｄ＝２’－デオキシリボース、
    に従って示され；
    　各ヌクレオシド間結合が下記記号：
    ｓ＝ホスホロチオエート
    に従って示される。
  17. 　下式：
    MlsGlsAlsGdsAdsTdsTdsCdsCdsCdsGdsCdsCdsGlsGlsTl；
    で示される請求項１３に記載の修飾オリゴヌクレオチド。
    　式中、
    　各核酸塩基が下記記号：
    Ａ＝アデニン、Ｔ＝チミン、Ｇ＝グアニン、Ｃ＝シトシン、M＝５－メチルシトシン、
    に従って示され；
    　各糖部分が下記記号：
    ｌ＝ＬＮＡ、ｄ＝２’－デオキシリボース、
    に従って示され；
    　各ヌクレオシド間結合が下記記号：
    ｓ＝ホスホロチオエート
    に従って示される。
  18. 　下式：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     によって示される、請求項１４に記載の修飾オリゴヌクレオチドまたはその塩。
  19. 　下式：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     によって示される、請求項１５に記載の修飾オリゴヌクレオチドまたはその塩。
  20. 　下式：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     によって示される、請求項１６に記載の修飾オリゴヌクレオチドまたはその塩。
  21. 　下式：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
     によって示される、請求項１７に記載の修飾オリゴヌクレオチドまたはその塩。
  22. 　請求項１～２１のいずれか１項に記載の修飾オリゴヌクレオチドまたはその医薬的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
  23. 　ＤＵＸ４関連疾患の治療、予防、またはその進行の遅延化のための、請求項２２に記載の医薬組成物。
  24. 　前記ＤＵＸ４関連疾患が顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーである、請求項２３に記載の医薬組成物。
  25. 　請求項１～２１のいずれか１項に記載の修飾オリゴヌクレオチドの有効量を、それを必要とする被験者に投与することを特徴とする、被験者におけるＤＵＸ４関連疾患の治療、予防またはその進行の遅延化のための方法。
  26. 　ＤＵＸ４関連疾患の治療、予防またはその進行の遅延化のための医薬の製造における、請求項１～２１のいずれか１項に記載の修飾オリゴヌクレオチドの使用。
  27. 　ＤＵＸ４関連疾患の治療、予防またはその進行の遅延化のための、請求項１～２１のいずれか１項に記載の修飾オリゴヌクレオチドの使用。
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