[go: up one dir, main page]

WO2013047509A1 - 新規ホスファチジルイノシトール３キナーゼ阻害剤及び医薬組成物 - Google Patents

新規ホスファチジルイノシトール３キナーゼ阻害剤及び医薬組成物 Download PDF

Info

Publication number
WO2013047509A1
WO2013047509A1 PCT/JP2012/074542 JP2012074542W WO2013047509A1 WO 2013047509 A1 WO2013047509 A1 WO 2013047509A1 JP 2012074542 W JP2012074542 W JP 2012074542W WO 2013047509 A1 WO2013047509 A1 WO 2013047509A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
pi3k
equation
formula
cancer
Prior art date
Application number
PCT/JP2012/074542
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
憲 西條
千加史 石岡
加藤　正
Original Assignee
国立大学法人東北大学
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 国立大学法人東北大学 filed Critical 国立大学法人東北大学
Priority to US14/348,799 priority Critical patent/US9963482B2/en
Priority to EP12835791.0A priority patent/EP2762148B1/en
Priority to JP2013536294A priority patent/JP6214397B2/ja
Publication of WO2013047509A1 publication Critical patent/WO2013047509A1/ja

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/12—Cyclic peptides with only normal peptide bonds in the ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/06—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/12—Cyclic peptides with only normal peptide bonds in the ring
    • C07K5/123—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to a novel phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor and a pharmaceutical composition containing the same.
  • Phosphatidylinositol 3-kinase (hereinafter referred to as “PI3K”) phosphorylates the 3-position phosphate group of the inositol ring of the phospholipid phosphatidylinositol 4,5-biphosphate (PIP2) present on the cell membrane.
  • PIP3 phosphatidylinositol 3,4,5-triphosphate
  • Non-patent Document 2 Cantley, L. C. Science 296, 1655-1657, doi: 10.1126 / science. 296.5573.1655 (2002)).
  • PI3K is known to be associated with cancer.
  • PI3K forms a heterodimer composed of a catalytic subunit and a regulatory subunit.
  • the PIK3CA gene encodes p110 ⁇ , a catalytic subunit of class IA PI3K.
  • high-frequency gene amplification and gain-of-function point mutations have been reported in various cancer types such as breast cancer and colorectal cancer (Non-Patent Document 3: Samuels et al. Science 304). , 554 (2004); Non-Patent Document 4: Ikenoue et al. Cancer Res 65, 4562 (2005); Non-Patent Document 5: Kang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102, 802 (2005)) .
  • PTEN Phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10
  • PIP3 Phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10
  • PIP3 Phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10
  • Non-patent Document 8 Han et al. Cancer Res 60, 3147 (2000). These mutations are thought to result in abnormal constitutive activation of the PI3K / AKT pathway and transmission of cancer cell survival signals.
  • Non-Patent Document 9 KongK & Yamori, Current Medicinal Chemistry 16, 2839-2854 (2009 )).
  • Histone acetylation is one of the important mechanisms of epigenetic regulation (Non-Patent Document 10: Carew et al., Giles, Cancer Let 269, 7-17 (2008)). It has been found that inhibition of acetylase (hereinafter referred to as “HDAC”) causes a change in gene expression, which is accompanied by cell differentiation and apoptosis. For this reason, HDAC inhibitors are attracting attention as new cancer molecule targeted drugs.
  • HDAC acetylase
  • Depsipeptide compounds are generic terms for peptides in which one or more amide bonds (—CONHR—) are substituted with ester bonds (—COOR).
  • FK228 FR901228, also called romidepsin
  • FR901228 is a compound isolated as a fermentation product from Chromobacterium violaceum
  • Non-patent Document 12 Furumai et al. Cancer Res 62, 4916 (2002).
  • FK228 is in clinical trials as an anti-cancer agent, and together with HDAC inhibitor suberoylanilide hydroxamic acid (SAHA), FK228 has been approved by the US FDA as a therapeutic agent for cutaneous T-cell lymphoma. is recieving.
  • SAHA HDAC inhibitor suberoylanilide hydroxamic acid
  • depsipeptide refers to FK228 in a narrow sense, but is used as a term having the above-mentioned meaning in this specification.
  • Non-patent Document 13 Wozniak et al. Haematologica 95, 613 (2010 )
  • HDAC inhibitors per se affect the PI3K / AKT pathway
  • Non-Patent Document 14 Hanker et al., J Molecular Signaling 4, 5 (2009)
  • Non-Patent Document 15 Graham et al. al. Clinical Cancer Res 12, 223 (2006)).
  • TSA trichostatin A
  • the present invention aims to provide a novel PI3K inhibitor. Furthermore, the development of drugs that inhibit both PI3K and HDAC is considered to make a great contribution to overcoming refractory cancer. Therefore, an object of the present invention is to provide a substance having both a PI3K inhibitory action and an HDAC inhibitory action. Finally, an object of the present invention is to provide a novel anticancer pharmaceutical composition containing these substances, particularly an anticancer pharmaceutical composition that is effective even for intractable cancer.
  • Non-patent Document 18 Tugendreich et al., Genome Research) 11, 1899 (2001);
  • Non-patent document 19 Rodriguez-Escudero et al. Biochemical Journal 390, 613 (2005);
  • Non-patent document 20 Cid et al.
  • Non-Patent Document 19 Non-Patent Document 21: The 15th Annual Meeting of the Japanese Molecular Target Society of Japan, Abstract, May 31, 2011, Title No. P10-5 “Search for new PI3K inhibitors using budding yeast as a screening tool” ) was used to screen a compound library.
  • depsipeptide compounds that are HDAC inhibitors, that is, FK228 and its analogs were selected as candidate substances.
  • the inventors of the present invention evaluated PI3K inhibitory activity in vitro and confirmed that these compounds have direct inhibitory activity of PI3K at a concentration of ⁇ M order. Further, in Western blot analysis using cultured human cells, these compounds were found to suppress phosphorylated AKT and downstream molecules of the AKT pathway. Furthermore, from the results of the MTT assay, it was found that these compounds exert a strong cell killing effect on cells resistant to HDAC inhibitors in a specific concentration range. Then, it was confirmed that the cell death was apoptosis, and that the apoptosis was induced by the HDAC / PI3K double inhibitory activity of the depsipeptide compounds, thereby completing the present invention.
  • a phosphatidylinositol 3 kinase (PI3K) inhibitor comprising a depsipeptide compound represented by the following formula 1 or a physiologically acceptable salt thereof:
  • Formula 1 (In the formula, A represents —CONH— or —CH (OH) —, and R 1 , R 2 and R 3 are the same or different and represent a hydrogen atom, a lower alkyl group, a lower alkylidene group, substituted or unsubstituted.
  • a pharmaceutical composition for treating refractory cancer comprising the PI3K inhibitor according to any one of [1] to [3] as an active ingredient; [5] The pharmaceutical composition for treating refractory cancer according to [4], wherein the PI3K inhibitor is administered at a dose of about 1 mg / day to 10,000 mg / day per kg of body weight.
  • a novel PI3K inhibitor is provided.
  • This novel PI3K inhibitor is a compound having a completely different structure from conventionally known PI3K inhibitors.
  • the PI3K inhibitor of the present invention also has an HDAC inhibitory activity and can also act as an HDAC inhibitor.
  • the PI3K inhibitor can also be used against cancer cells resistant to an HDAC inhibitor. It exerts cell-killing activity by inducing apoptosis. Therefore, the PI3K inhibitor of the present invention can provide a pharmaceutical composition that is effective against cancer cells that are resistant to conventional anticancer agents including HDAC inhibitors.
  • the PI3K inhibitor of the present invention has been found to have the possibility of inhibiting other kinases in addition to HDAC inhibitory activity, and is presumed to be advantageous in controlling cancer cells. It may be a multi-target drug.
  • the PI3K inhibitor of the present invention is used as a molecular target drug that acts specifically on cancer, it is considered to have relatively little effect on cells and tissues other than cancer cells.
  • FK228 is relatively light even in cases where no side effects are caused even by long-term administration or in the case of any side effects, and can be suppressed by using in combination with a drug that suppresses this.
  • the FK228 analog is considered to have lower side effects than FK228 as will be described later, and therefore the pharmaceutical composition of the present invention may cause serious side effects even when used at a high dose to the living body. Is low.
  • FIG. 1 is a diagram showing a synthetic route of a compound of the present invention.
  • Boc tert-butoxycarbonyl
  • TBS tert-butyldimethylsilyl
  • Tr trityl
  • PMB p-methoxybenzyl
  • FIG. 2A is a diagram showing the measurement of PI3K inhibitory activity of FK228 and its analogs.
  • FIG. 2B shows the PI3K inhibition curve of LY294002 measured in the same manner.
  • the vertical axis shows the inhibition rate for PI3K activity.
  • FIG. 2C shows a PI3K inhibition curve of FK228 measured in the same manner.
  • the vertical axis shows the inhibition rate for PI3K activity.
  • FIG. 2D shows the PI3K inhibition curve of FK-A5 measured in the same manner.
  • FIG. 3 is a diagram showing evaluation of suppression of AKT pathway by Western blotting. Panel A represents changes in phosphorylated AKT over time of compound treatment.
  • the figure shows the results of detecting phosphorylated (p-) AKT and AKT by Western blotting after 10 ⁇ M LY294002, FK228 or FK-A5 was allowed to act on PC3 cells for 5 minutes, 30 minutes or 180 minutes, respectively.
  • Panel B represents inhibition of the AKT pathway due to changes in FK228 and FK-A5 concentrations.
  • PC3 cells were treated with FK228 and FK-A5 at the concentrations ( ⁇ M) shown in the figure for 180 minutes, and using the collected samples, phosphorylated AKT (Ser-473, Thr-308) and AKT, phosphorylated GSK- 3 ⁇ (Ser-9), phosphorylated mTOR (Ser-2448), phosphorylated p70S6K (Thr-389), phosphorylated 4E-BP1 (Thr-37 / 46), phosphorylated MEK1 / 2 (Ser-217 / 221) 2 shows the results of Western blot analysis in which the expression level of phosphorylated ERK1 / 2 (Thr-202 / Tyr-204) was detected.
  • FIG. 4A is a diagram showing the results of confirming the expression of HDAC2 and HDAC1 in HCT116 cells, RKO cells, and CO115 cells by Western blotting.
  • FIG. 4B is a diagram showing the evaluation of the cytocidal effect of FK228 and FK-A5 in HCT116 cells.
  • LY294002 (50 ⁇ M), SAHA (2.5 ⁇ M), combined use of LY294002 (50 ⁇ M) and SAHA (2.5 ⁇ M) at the same concentration (SAHA + LY), and FK228, FK-A5, FK228 or FK-A5 at the concentrations shown in the figure.
  • SAHA + LY SAHA + LY
  • FK228, FK-A5, FK228 or FK-A5 at the concentrations shown in the figure
  • FIG. 4C is a diagram showing the evaluation of the cytocidal effect of FK228 and FK-A5 in RKO cells, measured in the same manner as in FIG. 4B.
  • FIG. 4D is a diagram showing the evaluation of the cell killing effect of FK228 and FK-A5 in CO115 cells, measured in the same manner as in FIG. 4A.
  • FIG. 5A is a diagram showing the results of FACS analysis of HCT116 cells cultured for 24 hours in the presence of FK228 or FK228 and LY294002 (50 ⁇ M) at the concentrations shown in the figure.
  • FIG. 5B is a diagram showing the results of analysis performed in the same manner as FIG. 5A using FK-A5 instead of FK228.
  • FIG. 5C is a diagram showing the results of analyzing the results of FIG. 5B for FK-A5 and calculating the percentages of the G2 / M, S, G1 / G0, and subG1 fractions.
  • FIG. 5B is a diagram showing the results of analysis performed in the same manner as FIG. 5A using FK-A5 instead of FK228.
  • FIG. 5C is a diagram showing the results of analyzing the results of FIG. 5B for FK-A5 and calculating the percentages of the G2 / M, S, G1 / G0, and subG1 fractions.
  • FIG. 5D shows the expression of PARP, cleared PARP, phosphorylated AKT (S473), AKT, acetylated histone H3, and acetylated histone H4 when HCT116 cells were treated with SAHA and FK-228 at the concentrations shown in the figure. It is a figure showing the result of having performed Western blot analysis.
  • FIG. 6 is a diagram showing evaluation of suppression of the AKT pathway by Western blotting performed in the same manner as the experiment shown in FIG. 3 panel B. From the left, it shows suppression of the AKT pathway due to changes in the concentrations of FK-A11, FK-A5, and FK228.
  • FIG. 7A is a diagram showing the evaluation of the cytocidal effect of FK-A11 in HCT116 cells.
  • LY294002 (“LY”; 50 ⁇ M), SAHA (2.5 ⁇ M), LY294002 (50 ⁇ M) and SAHA (2.5 ⁇ M) at the same concentration (SAHA + LY), and FK-A11 at the concentration shown in the figure.
  • FIG. 7B is a diagram showing the evaluation of the cell killing effect of FK-A11 in RKO cells, measured in the same manner as in FIG. 7A.
  • FIG. 7C is a diagram showing the evaluation of the cell killing effect of FK-A11 in CO115 cells, measured in the same manner as in FIG. 7A.
  • FIG. 7D is a diagram showing an evaluation of the cell killing effect of FK-A11 in normal cells KMST6 cells (non-tumor, fibroblasts), measured in the same manner as in FIG. 7A.
  • FIG. 7B is a diagram showing the evaluation of the cell killing effect of FK-A11 in RKO cells, measured in the same manner as in FIG. 7A.
  • FIG. 7C is a diagram showing the evaluation of the cell killing effect of FK-A11 in CO115 cells, measured in the same manner as in FIG. 7A.
  • FIG. 7D is a diagram showing an evaluation of the cell killing effect of FK-A11 in normal cells KMST6 cells (non
  • FIG. 8A is a view showing a comparison of cell killing effects of FK228, FK-5, and FK-A11 in HCT116 cells, measured in the same manner as FIG. 7A. Bars with horizontal lines indicate controls (DMSO, SAHA, LY, or SAHA + LY), bars with diagonal lines indicate FK228, black bars indicate FK-5, and white bars indicate FK-A11.
  • FIG. 8B is a diagram showing an evaluation of the cell killing effect of FK228, FK-5, and FK-A11 in RKO cells, measured in the same manner as in FIG. 7A. Bars with horizontal lines indicate controls (DMSO, SAHA, LY, or SAHA + LY), bars with diagonal lines indicate FK228, black bars indicate FK-5, and white bars indicate FK-A11.
  • FIG. 8C is a diagram showing the evaluation of the cell killing effect of FK228, FK-5, and FK-A11 in CO115 cells, measured in the same manner as in FIG. 7A. Bars with horizontal lines indicate controls (DMSO, SAHA, LY, or SAHA + LY), bars with diagonal lines indicate FK228, black bars indicate FK-5, and white bars indicate FK-A11.
  • the PI3K inhibitor of the present invention is characterized by comprising a depsipeptide compound represented by the following formula 1 or a physiologically acceptable salt thereof.
  • A represents —CONH— or —CH (OH) —
  • R 1 , R 2 and R 3 are the same or different and represent a hydrogen atom, a lower alkyl group, a lower alkylidene group, substituted or unsubstituted.
  • R 1 is a hydrogen atom, a lower alkyl group, a lower alkylidene group or a substituted or unsubstituted aralkyl group
  • R 2 is a lower alkyl group
  • R 3 is a hydrogen atom or a lower alkyl group.
  • the “lower alkyl group” includes methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl, cyclopropyl, n-butyl, s-butyl, t-butyl, cyclobutyl, n-pentyl, i-pentyl, 2 And straight-chain or branched alkyl groups having 1 to 6 carbon atoms such as -methylbutyl, cyclopentyl, n-hexyl and cyclohexyl.
  • Examples of the “lower alkylidene group” include linear or branched alkylidene groups having 1 to 6 carbon atoms such as methylene, ethylidene, propylidene, cyclopropylidene, butylidene, pentylidene and hexylidene.
  • Examples of the “aryl group” include phenyl, naphthyl, pyridinyl, furanyl and the like, and examples of the substituent include a hydroxyl group, a hydroxyl group protected with a protecting group, an amino group, and an amino group protected with a protecting group.
  • aralkyl group examples include benzyl, 1-phenylethyl, naphthylmethyl, pyridinylmethyl and the like, and the substituents include a hydroxyl group, a hydroxyl group protected with a protecting group, an amino group, and an amino group protected with a protecting group. Is mentioned.
  • Particularly preferable compounds include the following compounds.
  • R 3 is a hydrogen atom and / or R 1 is a substituted or unsubstituted aralkyl group.
  • physiologically acceptable salts include inorganic salts (sodium salt, potassium salt, lithium salt; calcium salt, magnesium salt; aluminum salt, iron salt). , Zinc salts, copper salts, nickel salts, cobalt salts; ammonium salts, etc.), and various organic salts, hydrohalide salts, inorganic acid salts, organic acid salts, amino acid salts, and the like.
  • one or more of these depsipeptide compounds or salts can be appropriately selected and used.
  • FK228 may be obtained by isolating and purifying a natural product produced by a microorganism, and may be produced by semi-synthesis or total synthesis by a conventionally known method.
  • a conventionally known method for the synthesis of the compound of the present invention, for example, Narita et al. Chemistry-A European Journal 15, 11174-11186 (2009) (Non-patent Document 22); Takizawa et al. Chemical Communication, 1677-1679 (2008) (Non-patent Document 23); Takizawa et al. Et Heterocycles 76, 275-290 (2008) (Non-Patent Document 24).
  • the cancers to be treated by the pharmaceutical composition of the present invention are various cancers that are known to be effective for FK228, and are particularly refractory cancers. Specifically, skin cancer, mesothelioma, lung cancer, stomach cancer, liver cancer, colon cancer, breast cancer, esophageal cancer, pancreatic cancer, uterine cancer (cervical cancer, intimal cancer), ovary Cancer such as cancer, skin cancer, urological cancer, head and neck cancer, cancer of unknown primary origin, hematopoietic tumor (leukemia, lymphoma), bone and soft tissue sarcoma, etc. Low one is mentioned.
  • Non-patent Document 3 the effectiveness of this drug is expected.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be appropriately produced by a method known in the art using the PI3K inhibitor of the present invention and various additives known in the pharmaceutical industry.
  • the administration route of the pharmaceutical composition of the present invention can be selected from known routes such as oral, nasal, sublingual, instillation, transdermal, injection, enteral, intrarectal and the like. Preferably, it is oral or injection.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be used for oral preparations (tablets, granules, capsules, powders, etc.), injections, suppositories, patches, drops, gargles, eye drops, lozenges, etc. Can be used in Methods for producing such various preparations are well known to those skilled in the art.
  • various excipients, disintegrants, lubricants, binders, surfactants, fluidity promoters, colorants, fragrances and the like used in the pharmaceutical industry can be used as additives. As appropriate, it can be used in the production of the pharmaceutical composition of the present invention.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can contain other known pharmaceutically active ingredients.
  • an antiemetic, a digestive agent, other anticancer agents, etc. are mentioned.
  • composition of the present invention can be combined with a known drug delivery system.
  • examples thereof include liposomes, inorganic nanoparticles, inorganic-organic hybrid nanoparticles, and implants.
  • the dosage and dosage form of the pharmaceutical composition of the present invention can be individually determined according to the cancer to be treated, the method of administration, the age, weight, disease state, etc. of the patient to be administered.
  • the active ingredient is about 1 mg / day to 10,000 mg / day, more preferably about 10 mg / day to about 5,000 mg / day, more preferably about 20 mg / day to about 5,000 mg / kg of active ingredient.
  • Daily, most preferably about 50 mg / day to about 5,000 mg / day divided into once a day or 2-3 times a day for administration to a patient in need of treatment with the pharmaceutical composition of the invention can do.
  • the screening system used in the present invention is based on the cell proliferation disorder caused by expressing human p110 ⁇ in budding yeast. Basically, the method of Rodriguez-Escudero et al. 19: Biochemical Journal 390, 613 (2005)). However, in this screening, seven ABC transporter genes and two transcription factor genes involved in activation of ABC transporter were knocked out instead of wild-type strain YPH499, which is commonly used as a budding yeast.
  • the drug-sensitive strain AD1-9 (MAT alpha, yor1, snq2, pdr5, pdr10, pdr11, ycf1, pdr3, pdr15, pdr1, his1, ura3) was used (Non-patent Document 25: Rogers et al. J. of Mol. Microbiol. Biotechnol. 3, 207-214 (2001)).
  • the AD1-9 strain is available from Nader Nourizad (Stanford Genome Technology Center Stanford University, CA, USA).
  • Non-patent Document 26 Alani et al., Genetics 116, 541 (1987)
  • the LEU2 gene disruption AD1-9 strain was prepared and used.
  • the transformed strain AD1-9 was cultured at 30 ° C. in the minimal complete medium SC-UL without uracil and leucine or SGal-UL in which 2% glucose was replaced with 2% galactose.
  • AD1-9 used for screening it was observed at 5 ⁇ M. That is, it was confirmed that AD1-9 used for screening was about 10 times more sensitive to LY294002 than YPH499.
  • the above system was used to screen a library of compounds provided by the Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology's Cancer Specific Area Research / Integrated Cancer Chemotherapy Information Support Team. Each compound was added to SGal-UL liquid medium at a concentration of 0.5 ⁇ M and 5 ⁇ M, and the AD1-9 transformant was shake-cultured for 24 hours, and A 600 was measured. DMSO and LY294002 were subjected to the same screening as controls. It performs three independent repeated experiments, the average value of the A 600, and enumerated in order of decreasing its value, the compound becomes higher were selected as compounds to restore a cell proliferation disorder by pi 10a.
  • Table 2 Structural formula of FK228 and its analogs and 50% inhibitory concentration (IC 50 ) against HDAC1 and HDAC6
  • the ratio of IC 50 for HDAC1 and HDAC6 is believed to be associated with risk of developing an effect on the heart. Any analog is expected to have such a low risk compared to FK228.
  • step (A) an aldehyde derivative having a side chain R 1 was reacted with ethyl acetate to obtain an adduct.
  • step (B) protection of the hydroxyl group of the adduct, deprotection of the amino group and transesterification were sequentially performed to give an amino ester derivative.
  • step (C) the amino ester derivative and a carboxylic acid derivative prepared from cysteine were condensed to give peptide derivative (I).
  • step (D) a carboxylic acid derivative known in the literature and an amino acid ester derivative having a side chain R 2 were condensed to obtain a peptide derivative (II).
  • step (E) the two peptide derivatives (I) and (II) obtained above were condensed to obtain a tripeptide derivative.
  • step (F) intramolecular lactonization, disulfide bond formation, and hydroxyl group deprotection were sequentially performed to synthesize depsipeptide compounds.
  • step (G) a tripeptide derivative having side chains R 1 and R 3 that can be prepared using a conventional route was condensed with a carboxylic acid derivative (II) to give a tetrapeptide derivative.
  • step (H) intramolecular lactonization, disulfide bond formation, and hydroxyl group deprotection were sequentially performed to complete the synthesis of depsipeptide compounds.
  • Each compound was mixed with 21 nM PI3K, 1000 nM phosphatidylinositol, 50 ⁇ M ATP, 5 mM MgCl 2 in assay buffer (20 mM HEPES, 2 mM DTT, 25 ⁇ M sodium cholate, 75 mM NaCl, 20 ⁇ M cantharidin) at room temperature. After 5 hours of reaction, a mobility shift assay was performed. The test was repeated twice. The inhibition rate was calculated as follows: As a control, the kinase reaction was evaluated by the product / substrate + product value calculated by MSA (mobility shift assay), and this was defined as 0% inhibition rate. The value of product / substrate + product when a drug was added thereto was calculated in the same manner, and the inhibition rate was calculated from the difference from the control value.
  • FIG. 2A The result is shown in FIG. 2A. All compounds showed direct inhibitory activity against PI3K. Among them, SP-5, FK-A1, FK-A2, FK-A3, FK-A5 and FK-A6 showed a higher inhibition rate than FK228, and the strongest inhibitory activity was observed in FK- In A5, the PI3K activity inhibition rate was 66.8%.
  • FK228 and FK-A5 inhibited PI3K activity in a concentration-dependent manner.
  • the IC 50 of LY294002, FK228, and FK-A5 were 0.7 ⁇ M, 57.1 ⁇ M, and 26.2 ⁇ M, respectively. Inhibitory activity was observed in the range of 5 to 500 ⁇ M for FK228 and 1 to 300 ⁇ M for FK-A5. It was also found that FK-A5 inhibits PI3K more strongly than FK228. In addition, in the inhibition curve of PI3K of FK228, the inhibition rate at 10 ⁇ M was 6.5% (FIG. 2C).
  • FK-A5 and FK-A6 had the strongest PI3K inhibitory activity among FK228 and its analogs (FIG. 2B).
  • FK-A5 and FK-A6 are stereoisomers and have a characteristic structure with a benzyl (phenylmethyl) group at the 7-position (Table 2). This feature may contribute to the higher inhibitory activity of FK-A5 and FK-A6 than FK228.
  • the docking simulation uses the trade name “eHiTS” (Simulated Biomolecular Systems) as simulation software, and the crystal structure data of a complex of PI3K (p110 ⁇ H1047R / p85 ⁇ ) -wortmannin as a three-dimensional structure of PI3K as a template (Protein Data Bank Identification Code: 3HHM).
  • eHiTS Simulated Biomolecular Systems
  • 3HHM Protein Data Bank Identification Code
  • PC3 cells were obtained from the Medical Cell Resource Center, Institute of Aging Medicine, Tohoku University. The cells were cultured at 37 ° C. in the presence of 5% CO 2 using RPMI 1640 medium containing 10% of inactivated fetal bovine serum.
  • Western blotting was performed as follows. After collecting various cells treated with each compound, Lysis buffer: 500 mM Tris-HCl pH 7.5, 100 mM NaCl, 2 mM EDTA, 1 mM sodium orthovanadate, 1% NP-40, It was dissolved in 1% protease inhibitor cocktail (Protease Inhibitor cocktail, manufactured by SIGMA-ALDRICH), and the supernatant was collected after centrifugation. The sample was electrophoresed on a 12.5% polyacrylamide gel, and PVDF membrane (Immobilon-FL , Millipore).
  • Lysis buffer 500 mM Tris-HCl pH 7.5, 100 mM NaCl, 2 mM EDTA, 1 mM sodium orthovanadate, 1% NP-40, It was dissolved in 1% protease inhibitor cocktail (Protease Inhibitor cocktail, manufactured by SIGMA-ALDRICH), and the supernatant was collected after centrifugation. The sample was electrophoresed
  • Anti-AKT antibody (“total AKT” or “AKT”), anti-phosphorylated AKT (Ser-473) antibody (“p-AKT (S473)”), anti-phosphorylated AKT (Thr-308) antibody (“p-AKT”) (T308) "), anti-phosphorylated GSK-3 ⁇ (Ser-9) antibody (" p-GSK-3 ⁇ "), anti-phosphorylated mTOR (Ser-2448) antibody (" p-mTOR "), anti-phosphorylated p70S6K (Thr-389) antibody (“p-p70S6K”), anti-phosphorylated 4E-BP1 (Thr-37 / 46) antibody (“p-4EBP1”), anti-phosphorylated MEK1 / 2 (Ser-217 / 221) antibody (“P-MEK1 / 2"), anti-phosphorylated ERK1 / 2 (Thr-202 / Tyr-204) antibody (“p-ERK1 / 2”) (all polyclonal antibodies, Cell Signal ing Technology), anti
  • Both FK228 and FK-A5 are phosphorylated AKT (Ser-473, Thr-308) in a concentration-dependent manner, and phosphorylated GSK-3 ⁇ (Ser-9), phosphorylated mTOR (Ser-308) downstream of the signal transduction pathway. 2448), the expression levels of phosphorylated p70S6K (Thr-389) and phosphorylated 4E-BP1 (Thr-37 / 46) were suppressed. In addition, phosphorylated MEK1 / 2 in the RAS-MAP pathway was not suppressed, but phosphorylated ERK1 / 2 was slightly suppressed.
  • FK228 and FK-A5 suppress the AKT pathway through inhibition of PI3K.
  • these compounds since it inhibits phosphorylated ERK1 / 2, these compounds may have an inhibitory activity against other kinases besides PI3K, or may inhibit ERK1 / 2 through the action of other proteins.
  • HCT116 colon cancer
  • CO115 RKO
  • ATCC American Type Culture Collection
  • CO115 was obtained from John M. Mariadason (Ludwig Institute for Cancer Research, Melbourne, Australia).
  • the cells were cultured at 37 ° C. in the presence of 5% CO 2 using RPMI 1640 medium containing 10% of inactivated fetal bovine serum.
  • HCT116, RKO, and CO115 are all microsatellite instability (MSI) positive cells, and HCT116 is sensitive to HDAC inhibitors, while RKO and CO115 are resistant to HDAC inhibitors.
  • RKO and CO115 the HDAC2 protein was deleted as a result of the frameshift mutation in the A 9 (9 repeats of adenine) sequence in exon 1 of both HDAC2 alleles.
  • Reported to be resistant to HDAC inhibitors TSA and SAHA due to increased apoptotic protease-activating factor 1 (APAF1) expression level, resulting in abnormal regulation of apoptosis (Non-patent document 29: Ropero et al. Nature 200, 6; Non-patent document 30: Hanigan et al. Gastroenterology 135, 1654-1664. E1652 (2008)). Therefore, first, the expression level of HDAC in these cells was confirmed by Western blot.
  • APAF1 apoptotic protease-activating factor 1
  • HDAC2 Human Cell Signaling Technology
  • HDAC1 anti-HDAC1 polyclonal antibody
  • FIG. 4A The result is shown in FIG. 4A. Unlike conventional reports, weak expression of HDAC2 was also observed in RKO and CO115. Regarding RKO, it has been reported that there are variations in the expression of HDAC2 (Non-patent Document 31: Ree et al., Nature et al. Genetics 40, 812-813 (2008)). Although HDAC1 was expressed in all cells, the expression level in CO115 was slightly low.
  • LY294002 50 ⁇ M
  • SAHA purchased from Cayman Chemical Company; 2.5 ⁇ M
  • LY294002 50 ⁇ M
  • Medium containing + SAHA 2.5 ⁇ M
  • FK228 or FK-A5 5 nM, 50 nM, 500 nM, 5 ⁇ M or 50 ⁇ M, respectively
  • FK228 or FK-A5 5 nM, 50 nM or 500 nM, respectively
  • LY294002 50 ⁇ M
  • Cell Counting Kit-8 Cell Counting Kit-8
  • WST-8 water-soluble tetrazolium salt WST-8 as a coloring reagent
  • WST-8 generates formazan by intracellular dehydrogenase.
  • the amount of formazan dye and the number of living cells are in a proportional relationship, and the absorbance of formazan at 450 nm was measured with a microplate reader (trade name “SpectraMax M2e”, MolecularMdevices) to count the number of living cells.
  • FACS analysis fluorescence-activated cell sorting analysis
  • the cells were collected, fixed with ethanol, stained with propidium iodide / PBS solution, and analyzed using a trade name “Cytomics FC500 Flow Cytometry System” (Beckman Coulter). The cell cycle fraction was calculated using the trade name “Multicycle software” (Phenomix Flow Systems).
  • Non-patent Document 32 Xu et al. Oncogene 26, 5541-5552 (2007).
  • Non-patent Document 33 Richon et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 97, 10014 ( 2000);
  • Non-Patent Document 34 Nakajima et al. Exp. Cell Res. 241, 126-133 (1998);
  • Non-Patent Document 35 Kumagai et al. Int. J. of Cancer 121, 656-665 (2007)) .
  • LY294002 caused G0 / G1 phase arrest and apoptosis induction was shown to be weak, but LY294002 also induced G0 / G1 phase arrest for HCT116 cells in this experiment (FIG. 5A-C).
  • SAHA + LY294002 the combined use of SAHA + LY294002 and the combined use of low concentrations of FK228 and FK-A5 + LY294002
  • the subG1 fraction was markedly increased to 20-40%, and strong apoptosis was induced (FIGS. 5A to C).
  • HCT116 cells were treated with predetermined concentrations of SAHA and FK-228 for 24 hours, and analyzed for expression of PARP, cleared PARP, phosphorylated AKT (S473), AKT, acetylated histone H3, and acetylated histone H4.
  • FIG. 5D Induction of apoptosis by FK228 was supported by an increase in Cleared PARP in HCT116 cells. Similar to the results of FCAS analysis, Cleaved PARP increased most at high concentrations of FK228 (5 ⁇ M), indicating strong apoptosis induction. At the same time, it was also found that a high concentration of FK228 (5 ⁇ M) suppressed phosphorylated AKT and increased the expression of acetylated histones.
  • FK-A11 was shown to suppress AKT phosphorylation at a lower concentration than FK228 and FK-A5.
  • FK-A11 10 nM, 50 nM, 500 nM, 5 ⁇ M. Or used at 50 ⁇ M.
  • FIGS. 8A-C A comparison of the results of FK228, FK-A5, and FK-A11 is shown in FIGS. 8A-C. From these results, it became clear that FK-A11 having a very strong inhibitory activity against p110 ⁇ exhibits a stronger cell growth inhibitory effect than any of FK228 and FK-A5 against any cancer cell line. .

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

　本発明は、新規のＰＩ３Ｋ阻害剤を提供することを目的とする。さらに、本発明は、ＰＩ３Ｋ阻害作用とＨＤＡＣ阻害作用とを併せ持つ物質を提供することを目的とする。最終的に、本発明は、これらの物質を含有する新規抗がん用医薬組成物、特に難治性がんに対しても有効な抗がん用医薬組成物を提供する。　本発明の一つの態様は、式１で示されるデプシペプチド類化合物又は生理学的に許容可能なその塩からなるホスファチジルイノシトール３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤である。

Description

新規ホスファチジルイノシトール３キナーゼ阻害剤及び医薬組成物
　本発明は、新規のホスファチジルイノシトール３キナーゼ阻害剤及びこれを含有する医薬組成物に関する。
　がんの薬物療法は、分子標的薬の登場により目覚ましい進歩を遂げているが、未だ克服できない難治性がんは数多く存在する。そのため、より治療効果の高い、新しいがん分子標的薬の開発が望まれている。
　ホスファチジルイノシトール３キナーゼ（Phosphatidyl inositol 3-kinase；以下「ＰＩ３Ｋ」という）は、細胞膜上に存在するリン脂質ホスファチジルイノシトール４，５－ビホスフェート（ＰＩＰ２）のイノシトール環の３位リン酸基をリン酸化してホスファチジルイノシトール３，４，５－トリホスフェート（ＰＩＰ３）を生成する酵素であり（非特許文献１：Fruman et al., Annual Rev Biochem 67, 481-507, doi:10.1146/annurev. biochem. 67.1.481 (1998)）、様々な増殖因子受容体チロシンキナーゼにより活性化され、下流のＡＫＴの活性化を介して、細胞の生存及び増殖を促進するように作用する（非特許文献２：Cantley, L. C. Science 296, 1655-1657, doi:10.1126/science. 296.5573.1655 (2002)）。ＰＩ３Ｋは、がんに関連していることがわかっている。
　ＰＩ３Ｋは、触媒サブユニット（catalytic subunit）と調節サブユニット（regulatory subunit）とからなるヘテロダイマーを形成している。ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子は、クラスＩＡ　ＰＩ３Ｋの触媒サブユニットであるｐ１１０αをコードする。このＰＩＫ３ＣＡ遺伝子については、乳がんや大腸がん等の様々ながん種において、高頻度の遺伝子増幅や機能獲得型の点突然変異が報告されている（非特許文献３：Samuels et al. Science 304, 554 (2004)；非特許文献４：Ikenoue et al. Cancer Res 65, 4562 (2005)；非特許文献５：Kang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102, 802 (2005)）。
　また、ＰＩ３Ｋとは逆反応を触媒する脱リン酸化酵素であるＰＴＥＮ（Phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10）は、シグナルメッセンジャーであるＰＩＰ３を減少させることによって細胞の増殖を抑制する（非特許文献６：Maehama et al., J. Biol. Chem. 273, 13375-13378 (1998)）。ＰＴＥＮ遺伝子については、子宮内膜がんや悪性黒色腫など多くのがん種で欠失や点突然変異が見られ（非特許文献７：Salmena et al., Cell 133, 403-414 (2008)）、その点突然変異のほとんどで脱リン酸化酵素活性が低下していることが報告されている（非特許文献８：Han et al. Cancer Res 60, 3147 (2000)）。
　これらの変異の結果、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路の異常な恒常的活性化が生じ、がん細胞の生存シグナルが伝達されると考えられている。
　そのため、ＰＩ３Ｋは、がん治療における有力な標的分子として注目されており、近年、ＰＩ３Ｋ阻害剤の開発が盛んに行われている。いくつかの低分子ＰＩ３Ｋ阻害剤は臨床試験の段階に入っているが、未だ医薬品化されるに至ったものはない（非特許文献９：Kong & Yamori, Current Medicinal Chemistry 16, 2839-2854 (2009)）。
　一方、がんの発生にはエピジェネティックスの異常が深く関わっていることが明らかにされている。ヒストンアセチル化はエピジェネティックス制御の重要なメカニズムの一つであり（非特許文献１０：Carew et al., Giles, Cancer Let 269, 7-17 (2008)）、そのアセチル化を解除するヒストンデアセチラーゼ（以下「ＨＤＡＣ」という）の阻害により、遺伝子発現変化が生じ、それに伴って細胞分化やアポトーシスが引き起こされることがわかっている。このため、ＨＤＡＣ阻害剤は、新しいがん分子標的薬として注目を集めている。
　デプシペプチド類化合物（特許文献１～４）は、１つ以上のアミド結合（－ＣＯＮＨＲ－）がエステル結合（－ＣＯＯＲ）に置換されたペプチドの総称である。デプシペプチド類化合物の中でも、ＦＫ２２８（ＦＲ９０１２２８、ロミデプシンとも呼ばれている）は、クロモバクテリウム・ビオラセウムから発酵産物として単離された化合物であり（非特許文献１１：Ueda et al. J. Antibiotics 47, 301 (1994)）、クラスＩ　ＨＤＡＣを選択的に阻害する強力なＨＤＡＣ阻害剤である（非特許文献１２：Furumai et al. Cancer Res 62, 4916 (2002)）。ＦＫ２２８は、このＨＤＡＣ阻害活性に基づいて抗がん剤として臨床試験が進められ、同じくＨＤＡＣ阻害剤であるスベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）とともに、皮膚Ｔ細胞リンパ腫に対する治療薬として米国ＦＤＡの認可を受けている。
　なお、用語「デプシペプチド」は、狭義ではＦＫ２２８を指すが、本明細書においては上記の意義を有する用語として使用する。
　ヒトがん細胞株において、ＰＩ３Ｋ阻害剤とＨＤＡＣ阻害剤の併用は、殺細胞効果の増強や相乗作用をもたらすことが報告されている(非特許文献１３：Wozniak et al. Haematologica 95, 613 (2010))。
　ＨＤＡＣ阻害剤がそれ自体でＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路に影響するか否かに関しては議論がある（非特許文献１４：Hanker et al., J Molecular Signaling 4, 5 (2009);非特許文献１５：Graham et al. Clinical Cancer Res 12, 223 (2006)）。古典的なＨＤＡＣ阻害剤であるトリコスタチンＡ（trichostatin A；ＴＳＡ）は、プロテインホスファターゼ１（protein phosphatase 1）を介してリン酸化ＡＫＴを抑えることが報告されている（非特許文献１６：Chen et al., J Biol Chem 280, 38879 (2005)）。
　ＦＫ２２８に関しても、細胞選択的にリン酸化ＡＫＴの発現を抑制するとした報告がある（非特許文献１７：Kodani et al., Oncology Reports 13, 477-483 (2005)）。しかし、その機序については明らかにされておらず、ＦＫ２２８のキナーゼ阻害活性を検討した文献もない。さらに、デプシペプチド類化合物がＰＩ３Ｋ阻害活性を有することについては報告されていない。
特開平２－８５２９６号公報 特開平４－７９８９２号公報 特表２００８－５４２３４７号公報 特表２００９－５１９２２４号公報
Fruman, D. A., Meyers, R. E. & Cantley, L. C. Annual Review of Biochemistry 67, 481-507, doi:10.1146/annurev.biochem.67.1.481 (1998) Cantley, L. C. Science 296, 1655-1657, doi:10.1126/science.296.5573.1655 (2002) Samuels, Y. et al. Science 304, 554 (2004) Ikenoue, T. et al. Cancer Research 65, 4562 (2005) Kang, S., Bader, A. G. & Vogt, P. K. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102, 802 (2005) Maehama, T. & Dixon, J. E. The Journal of Biological Chemistry 273, 13375-13378 (1998) Salmena, L., Carracedo, A. & Pandolfi, P. P. Cell 133, 403-414 (2008) Han, S. Y. et al. Cancer Research 60, 3147 (2000) Kong, D. & Yamori, T. Current Medicinal Chemistry 16, 2839-2854 (2009) Carew, J. S., Giles, F. J. & Nawrocki, S. T. Cancer Letters 269, 7-17 (2008) Ueda, H. et al. The Journal of Antibiotics 47, 301 (1994) Furumai, R. et al. Cancer Research 62, 4916 (2002) Wozniak, M. B. et al. Haematologica 95, 613 (2010) Hanker, A. B., Healy, K. D., Nichols, J. & Der, C. J.. Journal of Molecular Signaling 4, 5 (2009) Graham, C. et al. Clinical Cancer Research 12, 223 (2006). Chen, C. S., Weng, S. C., Tseng, P. H. & Lin, H. P. Journal of Biological Chemistry 280, 38879 (2005) Kodani, M. et al. Oncology reports 13, 477-483 (2005) Tugendreich, S. et al. Genome Research 11, 1899 (2001) Rodriguez-Escudero, I. et al. Biochemical Journal 390, 613 (2005) Cid, V. et al. Oncogene 27, 5431-5442 (2008) 日本がん分子標的学会　第１５回学術集会　抄録　２０１１年５月３１発行　演題番号Ｐ１０－５「出芽酵母をスクリーニングツールとした新規ＰＩ３Ｋ阻害剤の探索」 Narita, K. et al. Chemistry-A European Journal 15, 11174-11186 (2009) Takizawa et al. Chemical Communication, 1677-1679 (2008) Takizawa et al. Heterocycles 76, 275-290 (2008) Rogers, B. et al. Journal of Molecular Microbiology and Biotechnology 3, 207-214 (2001) Alani, E., Cao, L. & Kleckner, N. Genetics 116, 541 (1987) Walker, E. H. et al. Molecular Cell 6, 909-919 (2000) Grunwald, V. et al. Cancer Research 62, 6141 (2002) Ropero, S. et al. Nature 200, 6 Hanigan, C. L. et al. Gastroenterology 135, 1654-1664. e1652 (2008) Ree, A. H., Folkvord, S. & Flatmark, K. Nature Genetics 40, 812-813 (2008) Xu, W., Parmigiani, R. & Marks, P. Oncogene 26, 5541-5552 (2007) Richon, V. M., Sandhoff, T. W., Rifkind, R. A. & Marks, P. A. Proc. Natl. Acad. Sci. 97, 10014 (2000) Nakajima, H., Kim, Y. B., Terano, H., Yoshida, M. & Horinouchi, S. Experimental Cell Research 241, 126-133 (1998) Kumagai, T. et al. International Journal of Cancer 121, 656-665 (2007)
　本発明は、新規のＰＩ３Ｋ阻害剤を提供することを目的とする。さらに、ＰＩ３ＫとＨＤＡＣとをともに阻害する薬剤の開発は、難治性がんの克服に多大な貢献をするものと考えられる。したがって、本発明は、ＰＩ３Ｋ阻害作用とＨＤＡＣ阻害作用とを併せ持つ物質を提供することを目的とする。最終的に、本発明は、これらの物質を含有する新規抗がん用医薬組成物、特に難治性がんに対しても有効な抗がん用医薬組成物を提供することを目的とする。
　本発明者は、上記の課題を解決するために、まず、新規のＰＩ３Ｋ阻害剤を見出すべく、スクリーニングを行った。具体的には、出芽酵母にヒトのｐ１１０αを発現させると細胞増殖障害を生じるが、ＰＩ３Ｋ阻害剤を作用させると細胞増殖障害が回避される事象（非特許文献１８：Tugendreich et al., Genome Research 11, 1899 (2001)；非特許文献１９：Rodriguez-Escudero et al. Biochemical Journal 390, 613 (2005)；非特許文献２０：Cid et al. Oncogene 27, 5431-5442 (2008)）を利用したスクリーニング系（非特許文献１９；非特許文献２１：日本がん分子標的学会　第１５回学術集会　抄録　２０１１年５月３１発行　演題番号Ｐ１０－５「出芽酵母をスクリーニングツールとした新規ＰＩ３Ｋ阻害剤の探索」）を用いて、化合物ライブラリーのスクリーニングを行った。その結果、ＨＤＡＣ阻害剤であるデプシペプチド類化合物、すなわちＦＫ２２８及びその類縁体を候補物質として選択した。
　本発明者らは、インビトロでＰＩ３Ｋ阻害活性の評価を行い、これらの化合物がμＭオーダーの濃度でＰＩ３Ｋの直接阻害活性をもつことを確認した。また、ヒト培養細胞を用いたウェスタンブロット解析において、これらの化合物がリン酸化ＡＫＴとＡＫＴ経路の下流分子を抑制することを見出した。さらに、ＭＴＴアッセイの結果から、これらの化合物が特定の濃度範囲でＨＤＡＣ阻害剤に抵抗性の細胞に対しても強い殺細胞効果を発揮することを見出した。そして、その細胞死がアポトーシスであること、さらに、そのアポトーシスが、デプシペプチド類化合物のＨＤＡＣ／ＰＩ３Ｋ二重阻害活性により誘導されることを確認し、本発明を完成した。
　したがって、本発明によれば、
〔１〕　以下の式１で示されるデプシペプチド類化合物又は生理学的に許容可能なその塩からなるホスファチジルイノシトール３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
 式１

（式中、Ａは、－ＣＯＮＨ－又は－ＣＨ（ＯＨ）－を表し、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は、同一又は異なって、水素原子、低級アルキル基、低級アルキリデン基、置換もしくは無置換のアリール基又は置換もしくは無置換のアラルキル基を表す。）；
〔２〕　式１において、Ｒ3が水素原子である、前記〔１〕記載のＰＩ３Ｋ阻害剤；
〔３〕　式１において、Ｒ1が置換もしくは無置換のアラルキル基である、前記〔１〕又は〔２〕記載のＰＩ３Ｋ阻害剤；
〔４〕　前記〔１〕～〔３〕のいずれか１項記載のＰＩ３Ｋ阻害剤を有効成分として含有することを特徴とする、難治性がんの治療用医薬組成物；
〔５〕　前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が体重１kgあたり約１mg/日～１０，０００mg/日の投与用量で投与されることを特徴とする、前記〔４〕記載の難治性がんの治療用医薬組成物；
〔６〕　前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、以下の式２～２０のいずれかで示されるデプシペプチド類化合物又は生理学的に許容可能なその塩である、前記〔４〕又は〔５〕記載の難治性がんの治療用医薬組成物
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
 式２

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
 式３

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
 式４

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
 式５

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
 式６

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
 式７

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
 式８

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
 式９

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
 式１０

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
 式１１

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
 式１２

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
 式１３

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
 式１４

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
 式１５

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
 式１６

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
 式１７

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
 式１８

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
 式１９

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
 式２０

〔７〕　以下の式１で示されるデプシペプチド類化合物又は生理学的に許容可能なその塩
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000042
 式１

（式中、Ａは、－ＣＯＮＨ－又は－ＣＨ（ＯＨ）－を表し、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は、同一又は異なって、水素原子、低級アルキル基、低級アルキリデン基、置換もしくは無置換のアリール基又は置換もしくは無置換のアラルキル基を表す；但し、Ａ、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3の組合せが、Ａ＝－ＣＯＮＨ－かつＲ1＝エチリデン基かつＲ2＝Ｒ3＝イソプロピル基、Ａ＝－ＣＨ（ＯＨ）－ かつＲ1＝イソプロピル基かつＲ2＝メチル基かつＲ3＝水素原子、Ａ＝－ＣＨ（ＯＨ）－ かつＲ1＝sec-ブチル基かつＲ2＝メチル基かつＲ3＝水素原子、Ａ＝－ＣＨ（ＯＨ）－ かつＲ1＝Ｒ2＝イソプロピル基かつＲ3＝水素原子、Ａ＝－ＣＯＮＨ－ かつＲ1＝エチリデン基かつＲ2＝イソプロピル基かつＲ3＝水素原子、Ａ＝－ＣＯＮＨ－ かつＲ1＝Ｒ3＝水素原子かつＲ2＝イソプロピル基、Ａ＝－ＣＯＮＨ－ かつＲ1＝メチル基かつＲ2＝イソプロピル基かつＲ3＝水素原子、及び、Ａ＝－ＣＯＮＨ－ かつＲ1＝ベンジル基かつＲ2＝イソプロピル基かつＲ3＝水素原子、のいずれかである化合物を除く）；
が提供される。
　本発明によれば、新規なＰＩ３Ｋ阻害剤が提供される。この新規なＰＩ３Ｋ阻害剤は、従来公知のＰＩ３Ｋ阻害剤とは全く異なる構造を有する化合物である。本発明のＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＨＤＡＣ阻害活性をも有し、ＨＤＡＣ阻害剤としても作用しうるが、特定の濃度で用いた場合には、ＨＤＡＣ阻害剤抵抗性のがん細胞に対しても、アポトーシスを誘導することにより殺細胞活性を発揮する。したがって、本発明のＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＨＤＡＣ阻害剤を含む従来の抗がん剤には耐性のがん細胞に対して有効な医薬組成物を提供することができる。
　本発明のＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＨＤＡＣ阻害活性のほか、他のキナーゼをも阻害する可能性を有していることが見出され、がん細胞を制御する上で有利に働くことが推測される多分子標的の薬剤である可能性がある。
　また、本発明のＰＩ３Ｋ阻害剤は、がん特異的に作用する分子標的薬として使用されるものであるから、がん細胞以外の細胞や組織に与える影響は比較的少ないと考えられ、実際、ＦＫ２２８については、長期投与によっても何ら副作用を生じない例や、何らかの副作用を生じた場合であっても比較的軽く、これを抑える薬剤との併用によって抑えることが可能であることがわかっている。ＦＫ２２８の類縁体については、後述するようにＦＫ２２８よりも副作用が低いと考えられ、したがって、本発明の医薬組成物は、生体に対して高用量で使用しても重篤な副作用が起こる可能性が低い。
図１は、本発明の化合物の合成経路を表す図である。「Ｂｏｃ」＝tert－ブトキシカルボニル（tert-butoxycarbonyl）、「ＴＢＳ」＝tert－ブチルジメチルシリル（tert-butyldimethylsilyl）、「Ｔｒ」＝トリチル（trityl）、「ＰＭＢ」＝ｐ－メトキシベンジル（p-methoxybenzyl）をそれぞれ表す。 図２Ａは、ＦＫ２２８及びその類縁体のＰＩ３Ｋ阻害活性の測定を表す図である。２０μMでのＦＫ２２８及びその類縁体（ＳＰ－１、ＳＰ－２、ＳＰ－３、ＳＰ－５、ＦＫ２２８、ＦＫ－Ａ１、ＦＫ－Ａ２、ＦＫ－Ａ３、ＦＫ－Ａ４、ＦＫ－Ａ５、ＦＫ－Ａ６）のＰＩ３Ｋ阻害活性を、ＰＩ３Ｋ活性の阻害率として示す。 図２Ｂは、同様に測定したＬＹ２９４００２のＰＩ３Ｋ阻害曲線を示す。縦軸は、ＰＩ３Ｋ活性に対する阻害率を示す。 図２Ｃは、同様に測定したＦＫ２２８のＰＩ３Ｋ阻害曲線を示す。縦軸は、ＰＩ３Ｋ活性に対する阻害率を示す。 図２Ｄは、同様に測定したＦＫ－Ａ５のＰＩ３Ｋ阻害曲線を示す。縦軸は、ＰＩ３Ｋ活性に対する阻害率を示す。 図２Ｅは、異なるＡＴＰ濃度条件下で同様に測定したＦＫ２２８のＰＩ３Ｋ阻害曲線を示す。縦軸は、ＰＩ３Ｋ活性に対する阻害率を示す。実線はＡＴＰ濃度５０μM、点線はＡＴＰ濃度５００μMでの結果を示す。 図３は、ウェスタンブロッティングによるＡＫＴ経路の抑制の評価を表す図である。　パネルＡは、化合物処理の時間経過によるリン酸化ＡＫＴの変化を表す。ＰＣ３細胞にそれぞれ１０μMのＬＹ２９４００２、ＦＫ２２８又はＦＫ－Ａ５を、５分、３０分又は１８０分作用させ、細胞を回収してウェスタンブロッティングによりリン酸化（ｐ－）ＡＫＴ及びＡＫＴを検出した結果を表す。　パネルＢは、ＦＫ２２８、ＦＫ－Ａ５の濃度変化によるＡＫＴ経路の抑制を表す。ＰＣ３細胞を、図に示した濃度（μM）のＦＫ２２８、ＦＫ－Ａ５で１８０分処理し、回収したサンプルを用いて、リン酸化ＡＫＴ（Ｓｅｒ－４７３、Ｔｈｒ－３０８）及びＡＫＴ、リン酸化ＧＳＫ－３β（Ｓｅｒ－９）、リン酸化ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ－２４４８）、リン酸化ｐ７０Ｓ６Ｋ（Ｔｈｒ－３８９）、リン酸化４Ｅ－ＢＰ１（Ｔｈｒ－３７／４６）、リン酸化ＭＥＫ１／２（Ｓｅｒ－２１７／２２１）、リン酸化ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ－２０２／Ｔｙｒ－２０４）の発現レベルを検出したウェスタンブロット解析の結果である。 図４Ａは、ＨＣＴ１１６細胞、ＲＫＯ細胞、ＣＯ１１５細胞におけるＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ１の発現をウェスタンブロットにて確認した結果を表す図である。 図４Ｂは、ＨＣＴ１１６細胞におけるＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５の殺細胞効果の評価を表す図である。ＬＹ２９４００２（５０μM）、ＳＡＨＡ（２．５μM）、同濃度のＬＹ２９４００２（５０μM）及びＳＡＨＡ（２．５μM）の併用（ＳＡＨＡ＋ＬＹ）、及び図に示した濃度のＦＫ２２８、ＦＫ－Ａ５、ＦＫ２２８又はＦＫ－Ａ５とＬＹ２９４００２との併用の存在下で２４時間培養した後、ＭＴＴアッセイを行い、生細胞数を測定することにより殺細胞効果を検討した結果である。グラフの縦軸はＤＭＳＯ添加時の吸光度に対する比を示す。 図４Ｃは、図４Ｂと同様に測定した、ＲＫＯ細胞におけるＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５の殺細胞効果の評価を表す図である。 図４Ｄは、図４Ａと同様に測定した、ＣＯ１１５細胞におけるＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５の殺細胞効果の評価を表す図である。 図５Ａは、図に示した濃度のＦＫ２２８又ＦＫ２２８及びＬＹ２９４００２（５０μM）の存在下で２４時間培養したＨＣＴ１１６細胞についてのＦＡＣＳ解析の結果を示す図である。上段は、比較のための５０μM ＬＹ２９４００２、２．５μM ＳＡＨＡ、同濃度のＬＹ２９４００２（５０μM）及びＳＡＨＡ（２．５μM）で同様に処理した結果である。 図５Ｂは、ＦＫ２２８の代わりにＦＫ－Ａ５を用いて図５Ａと同様に行った解析の結果を示す図である。 図５Ｃは、ＦＫ－Ａ５についての図５Ｂの結果を解析し、Ｇ２／Ｍ、Ｓ、Ｇ１／Ｇ０、ｓｕｂＧ１分画のパーセンテージを算出した結果を示す図である。 図５Ｄは、ＨＣＴ１１６細胞を図に示した濃度のＳＡＨＡ、ＦＫ－２２８で２４時間処理し、ＰＡＲＰ、ｃｌｅａｖｅｄ　ＰＡＲＰ、リン酸化ＡＫＴ（Ｓ４７３）、ＡＫＴ、アセチル化ヒストンＨ３、アセチル化ヒストンＨ４の発現についてウェスタンブロット解析を行った結果を表す図である。 図６は、図３パネルＢに示した実験と同様にして行ったウェスタンブロッティングによるＡＫＴ経路の抑制の評価を表す図である。　左から、ＦＫ－Ａ１１、ＦＫ－Ａ５、ＦＫ２２８の濃度変化によるＡＫＴ経路の抑制を表す。ＰＣ３細胞を、図に示した濃度（μM）の各化合物で１８０分処理し、回収したサンプルを用いて、リン酸化ＡＫＴ（Ｓｅｒ－４７３、Ｔｈｒ－３０８）及びＡＫＴの発現レベルを検出したウェスタンブロット解析の結果である。 図７Ａは、ＨＣＴ１１６細胞におけるＦＫ－Ａ１１の殺細胞効果の評価を表す図である。ＬＹ２９４００２（「ＬＹ」；５０μM）、ＳＡＨＡ（２．５μM）、同濃度のＬＹ２９４００２（５０μM）及びＳＡＨＡ（２．５μM）の併用（ＳＡＨＡ＋ＬＹ）、及び図に示した濃度のＦＫ－Ａ１１の存在下で２４時間培養した後、ＭＴＴアッセイを行い、生細胞数を測定することにより殺細胞効果を検討した結果である。グラフの縦軸はＤＭＳＯ添加時の吸光度に対する比を示す。 図７Ｂは、図７Ａと同様に測定した、ＲＫＯ細胞におけるＦＫ－Ａ１１の殺細胞効果の評価を表す図である。 図７Ｃは、図７Ａと同様に測定した、ＣＯ１１５細胞におけるＦＫ－Ａ１１の殺細胞効果の評価を表す図である。 図７Ｄは、図７Ａと同様に測定した、正常細胞ＫＭＳＴ６細胞（非腫瘍性、線維芽細胞）におけるＦＫ－Ａ１１の殺細胞効果の評価を表す図である。 図８Ａは、図７Ａと同様に測定した、ＨＣＴ１１６細胞におけるＦＫ２２８、ＦＫ－５、ＦＫ－Ａ１１の殺細胞効果の比較を表す図である。横線を付したバーはコントロール（ＤＭＳＯ、ＳＡＨＡ、ＬＹ、又はＳＡＨＡ+ＬＹ）、斜線を付したバーはＦＫ２２８、黒塗りのバーはＦＫ－５、白塗りのバーはＦＫ－Ａ１１をそれぞれ示す。 図８Ｂは、図７Ａと同様に測定した、ＲＫＯ細胞におけるＦＫ２２８、ＦＫ－５、ＦＫ－Ａ１１の殺細胞効果の評価を表す図である。横線を付したバーはコントロール（ＤＭＳＯ、ＳＡＨＡ、ＬＹ、又はＳＡＨＡ+ＬＹ）、斜線を付したバーはＦＫ２２８、黒塗りのバーはＦＫ－５、白塗りのバーはＦＫ－Ａ１１をそれぞれ示す。 図８Ｃは、図７Ａと同様に測定した、ＣＯ１１５細胞におけるＦＫ２２８、ＦＫ－５、ＦＫ－Ａ１１の殺細胞効果の評価を表す図である。横線を付したバーはコントロール（ＤＭＳＯ、ＳＡＨＡ、ＬＹ、又はＳＡＨＡ+ＬＹ）、斜線を付したバーはＦＫ２２８、黒塗りのバーはＦＫ－５、白塗りのバーはＦＫ－Ａ１１をそれぞれ示す。
　本発明のＰＩ３Ｋ阻害剤は、以下の式１で表されるデプシペプチド類化合物又は生理学的に許容可能なその塩からなることを特徴とする。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000043
 式１
（式中、Ａは、－ＣＯＮＨ－又は－ＣＨ（ＯＨ）－を表し、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は、同一又は異なって、水素原子、低級アルキル基、低級アルキリデン基、置換もしくは無置換のアリール基又は置換もしくは無置換のアラルキル基を表す。）
　好ましくは、Ｒ1は水素原子、低級アルキル基、低級アルキリデン基又は置換もしくは無置換のアラルキル基であり、Ｒ2は低級アルキル基であり、Ｒ3は水素原子又は低級アルキル基である。本発明において、「低級アルキル基」としては、メチル、エチル、ｎ‐プロピル、ｉ‐プロピル、シクロプロピル、ｎ‐ブチル、ｓ‐ブチル、ｔ‐ブチル、シクロブチル、ｎ‐ペンチル、ｉ‐ペンチル、２‐メチルブチル、シクロペンチル、ｎ‐ヘキシル、シクロヘキシル等の直鎖もしくは分枝した炭素数１～６のアルキル基が挙げられる。「低級アルキリデン基」としては、メチレン、エチリデン、プロピリデン、シクロプロピリデン、ブチリデン、ペンチリデン、ヘキシリデン等の直鎖もしくは分枝した炭素数１～Ｃ６のアルキリデン基が挙げられる。「アリール基」としては、フェニル、ナフチル、ピリジニル、フラニル等が挙げられ、その置換基としては水酸基、保護基で保護された水酸基、アミノ基及び保護基で保護されたアミノ基等が挙げられる。「アラルキル基」としては、ベンジル、１‐フェニルエチル、ナフチルメチル、ピリジニルメチル等が挙げられ、その置換基としては水酸基、保護基で保護された水酸基、アミノ基及び保護基で保護されたアミノ基等が挙げられる。
　特に好ましい化合物としては、以下の化合物が挙げられる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000044
 ＦＫ２２８

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000045
 ＳＰ－１

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000046
 ＳＰ－２

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000047
 ＳＰ－３

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000048
 ＳＰ－５

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000049
 ＦＫ－Ａ１

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000050
 ＦＫ－Ａ２

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000051
 ＦＫ－Ａ３

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000052
 ＦＫ－Ａ４

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000053
 ＦＫ－Ａ５

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000054
 ＦＫ－Ａ６

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000055
 ＦＫ－Ａ７

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000056
 ＦＫ－Ａ８

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000057
 ＦＫ－Ａ９

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000058
 ＦＫ－Ａ１０

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000059
 ＦＫ－Ａ１１

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000060
 ＦＫ－Ａ１２

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000061
 ＦＫ－Ａ１３

Figure JPOXMLDOC01-appb-C000062
 ＦＫ－Ａ１７

　Ｒ3が水素原子のもの、及び／又はＲ1が置換もしくは無置換のアラルキル基のものがさらに好ましい。
　また、本発明のＰＩ３Ｋ阻害剤において、生理学的に許容可能な塩としては、具体的には、例えば、無機塩（ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩；カルシウム塩、マグネシウム塩；アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩；アンモニウム塩等）をはじめとして、各種の有機塩、ハロゲン化水素酸塩、無機酸塩、有機酸塩及びアミノ酸塩等が挙げられる。
　本発明においては、これらのデプシペプチド類化合物又は塩の１種又は２種以上を適宜選択して用いることができる。
　本発明に係るデプシペプチド類化合物、すなわちＦＫ２２８及び類縁体の製造方法は、公知である。ＦＫ２２８は、微生物によって産生された天然物を単離精製して得てもよく、従来公知の方法で半合成又は全合成により製造してもよい。具体的には、本発明の化合物の合成については、例えば、Narita et al. Chemistry-A European Journal 15, 11174-11186 (2009)（非特許文献２２）；Takizawa et al. Chemical Communication, 1677-1679 (2008) （非特許文献２３）; Takizawa et al. Heterocycles 76, 275-290 (2008) （非特許文献２４）に記載された方法にしたがって行うことができる。
　本発明の医薬組成物が治療する対象のがんは、ＦＫ２２８について有効性が知られている各種のがんであり、中でも特に難治性のがんである。具体的には、皮膚がん、中皮腫、肺がん、胃がん、肝がん、大腸がん、乳がん、食道がん、膵臓がん、子宮がん（頚がん、内膜がん）、卵巣がん、皮膚がん、泌尿器がん、頭頚部がん、原発不明がん、造血器腫瘍(白血病、リンパ腫）、骨軟部肉腫等のがんであって、他の治療による効果が認められない又は低いものが挙げられる。さらに、ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子に高頻度で変異が報告されている、乳がん、子宮内膜がん、泌尿器がん、大腸がん、卵巣がん、頭頚部がん、肺がん等（非特許文献３）には、特に本薬剤の有効性が期待される。
　本発明の医薬組成物は、本発明のＰＩ３Ｋ阻害剤と製薬業界で公知の種々の添加剤等とを用いて、当該技術分野で公知の方法により適宜製造することができる。
　本発明の医薬組成物の投与経路は、公知の経路、例えば経口、経鼻、舌下、点眼、経皮、注射、経腸、直腸内等から任意の経路を選択することができる。好ましくは経口又は注射である。
　したがって、本発明の医薬組成物は、経口剤（錠剤、顆粒剤、カプセル剤、散剤等）、注射剤のほか、座剤、貼付剤、点滴剤、含嗽剤、点眼剤、トローチ等の剤型で使用に供することができる。このような各種製剤の製造方法は、当業者には充分公知である。
　所望の剤型に応じて、添加剤として、製薬業界において使用されている各種の賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、界面活性剤、流動性促進剤、着色剤、香料等を、適宜本発明の医薬組成物の製造において用いることができる。
　さらに、本発明の医薬組成物には、公知の他の薬学的有効成分をも含有させることができる。例えば、制吐剤、消化剤、及び他の抗がん剤等が挙げられる。
　さらに、本発明の医薬組成物は、公知のドラッグデリバリーシステムと組み合わせることができる。例えば、リポソーム、無機ナノ粒子、無機－有機ハイブリッドナノ粒子、インプラント等が挙げられる。
　これらの他の有効成分をさらに含有させることによって、あるいは本発明の医薬組成物を他の薬剤と組み合わせて使用することによって、一層の治療効果を期待できる。
　本発明の医薬組成物の投与量及び投与剤型は、個別に、治療対象のがん、投与方法、投与される患者の年齢、体重、病態等に応じて定めることができる。
　一般的には、有効成分として体重１kgあたり約１mg/日～１０，０００mg/日、より好ましくは約１０mg/日～約５，０００mg/日、さらに好ましくは約２０mg/日～約５，０００mg/日、最も好ましくは約５０mg/日～約５，０００mg/日を１日１回あるいは１日２～３回に分割して、本発明の医薬組成物による治療が必要とされている患者に投与することができる。
　１．出芽酵母によるＰＩ３Ｋ阻害剤スクリーニング
　本発明において用いたスクリーニング系は、出芽酵母にヒトのｐ１１０αを発現させることにより生じる細胞増殖障害に基づいており、基本的に、Rodriguez-Escuderoらの方法（非特許文献１９：Biochemical Journal 390, 613 (2005)）に記載された方法にしたがってスクリーニングを行った。ただし、このスクリーニングにおいては、出芽酵母として、一般的に使用されている野生型株ＹＰＨ４９９の代わりに、７つのＡＢＣトランスポーター遺伝子及びＡＢＣトランスポーターの活性化に関与する２つの転写因子の遺伝子をノックアウトした薬剤感受性株ＡＤ１－９（MAT alpha, yor1, snq2, pdr5, pdr10, pdr11, ycf1, pdr3, pdr15, pdr1, his1, ura3）を用いた（非特許文献２５：Rogers et al. J. of Mol. Microbiol. Biotechnol. 3, 207-214 (2001)）。ＡＤ１－９株は、Nader Nourizad（Stanford Genome Technology Center Stanford University, CA, USA）より入手可能である。
　本発明者らは、ＡＤ１－９に栄養要求性のマーカーを追加するため、ｈｉｓＧ－Ｕｒａ３－ｈｉｓＧカセットを使った手法（非特許文献２６：Alani et al., Genetics 116, 541 (1987)）で、ＬＥＵ２遺伝子破壊ＡＤ１－９株を作製して用いた。
　形質転換したＡＤ１－９株は、ウラシル及びロイシン不含最少完全培地ＳＣ－Ｕ－Ｌ又は２％グルコースを２％ガラクトースで置き換えたＳＧａｌ－Ｕ－Ｌにて３０℃で培養した。
　これらの酵母株について、公知のＰＩ３Ｋ阻害剤であるＬＹ２９４００２（Cayman Chemical Companyより購入）に対する感受性の違いを評価したところ、細胞増殖障害の回復が、ＹＰＨ４９９においてはＬＹ２９４００２濃度５０μMでみられるのに対して、スクリーニングに使用したＡＤ１－９では５μMでみられた。すなわち、スクリーニングに使用したＡＤ１－９は、ＹＰＨ４９９に比べ、ＬＹ２９４００２に対して約１０倍感受性が高いことが確認された。
　上記の系を用いて、文部科学省がん特定領域研究・統合がん化学療法基盤情報支援班より供与を受けた化合物ライブラリーのスクリーニングを行った。各化合物を、濃度が０．５μM、５μMになるようにＳＧａｌ－Ｕ－Ｌ液体培地に添加し、ＡＤ１－９の形質転換体を２４時間振盪培養し、Ａ600を測定した。コントロールとしてＤＭＳＯ、ＬＹ２９４００２を同様のスクリーニングに供した。独立した３回の繰り返し実験を行い、Ａ600の平均値を算出し、その値の降順に羅列し、上位となった化合物を、ｐ１１０αによる細胞増殖障害を回復させる化合物として選択した。
　０．５μMの化合物濃度では、ＤＭＳＯよりもＡ600が高値になる化合物は認められなかった。５μMの濃度では、いくつかの化合物でＬＹ２９４００２と同程度の細胞増殖障害の回復が認められた。表１に、各化合物のライブラリー内でのＩＤ、化合物名、Ａ600値を表す。
　表１：　化合物ライブラリーのスクリーニング結果
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000063
　ｐ１１０αを発現させた形質転換体においてＡ600が高値となった上位の化合物は、いずれも、ＦＫ２２８及びその類縁体であった。
　本スクリーニングにおいてＰＩ３Ｋ阻害活性をもつ可能性が示唆されたＦＫ２２８及びその類縁体の構造式、及び文部科学省がん特定領域研究・統合がん化学療法基盤情報支援班により評価されたＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ６に対する５０％阻害濃度（ＩＣ50）を表２に示す。
　表２：　ＦＫ２２８及びその類縁体の構造式及びＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ６に対する５０％阻害濃度（ＩＣ50）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000064
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000065
　ＨＤＡＣ１及びＨＤＡＣ６に対するＩＣ50の比は、心臓に対する影響を起こすリスクと関連があると考えられている。いずれの類縁体も、ＦＫ２２８と比較して、そのようなリスクが低いことが期待される。
　２．デプシペプチド類化合物の合成
　その後の実験に使用したＦＫ２２８及びＦＫ２２８類縁体は、全て、本発明者の東北薬科大学医薬合成教室の加藤正教授のグループによって公知の技術にしたがって合成されたものをＤＭＳＯに溶解して用いた。
　各化合物の合成経路及び詳しい合成方法は、図１及びNarita et al. Chemistry-A European Journal 15, 11174-11186 (2009)（非特許文献２２）；Takizawa et al. Chemical Communication, 1677-1679 (2008) （非特許文献２３）; Takizawa et al. Heterocycles 76, 275-290 (2008) （非特許文献２４）に記載のとおりである。
　図１を参照して説明すると、まず、段階（Ａ）において、側鎖Ｒ1を有するアルデヒド誘導体に酢酸エチルを反応させて、付加体を得た。段階（Ｂ）において、その付加体の水酸基の保護、アミノ基の脱保護及びエステル交換を順次行い、アミノエステル誘導体を生じさせた。段階（Ｃ）において、そのアミノエステル誘導体とシステインから調製したカルボン酸誘導体を縮合させて、ペプチド誘導体（I）を得た。
　段階（Ｄ）において、文献既知のカルボン酸誘導体と側鎖Ｒ2を有するアミノ酸エステル誘導体を縮合させて、ペプチド誘導体（II）を得た。
　段階（Ｅ）において、上記で得られた２種類のペプチド誘導体（I）及び（II）を縮合させて、トリペプチド誘導体を得た。段階（Ｆ）において、分子内ラクトン化、ジスルフィド結合形成、水酸基の脱保護を順次行い、デプシペプチド類化合物の合成を行った。
　一方、段階（Ｇ）において、従来の経路を用いて調製可能な側鎖Ｒ1及びＲ3を有するトリペプチド誘導体とカルボン酸誘導体（II）を縮合させて、テトラペプチド誘導体を生じさせた。段階（Ｈ）において、分子内ラクトン化、ジスルフィド結合形成、水酸基の脱保護を順次行い、デプシペプチド類化合物の合成を完了した。
　３．ＦＫ２２８及び類縁体のインビトロでのＰＩ３Ｋ阻害活性の評価
　ＦＫ２２８、ＳＰ－１、ＳＰ－２、ＳＰ－３、ＦＫ－Ａ１、ＦＫ－Ａ２、ＦＫ－Ａ３、ＦＫ－Ａ４、ＦＫ－Ａ５、ＦＫ－Ａ６及びＳＰ－５の計１１種類の化合物について、２０μMの濃度におけるＰＩ３Ｋ阻害活性の評価を行った。
　ＰＩ３Ｋ（ｐ１１０α／ｐ８５α）阻害活性は、カルナバイオサイエンス社（神戸）に委託し、基質とリン酸化基質をキャピラリー中の移動度で分離・定量するモビリティ シフト アッセイ法で評価した（https://www.carnabio.com/japanese/product/search.cgi?mode=profiling）。各化合物を、２１nM　ＰＩ３Ｋ、１０００nM　ホスファチジルイノシトール、５０μM  ＡＴＰ、５mM　ＭｇＣｌ2とともにアッセイバッファー（２０mM　ＨＥＰＥＳ,２mM　ＤＴＴ,２５μMコール酸ナトリウム（sodium cholate）、７５mM　ＮａＣｌ、２０μM  カンタリジン（cantharidine））に混和し、室温で５時間反応させた後、モビリティ シフト アッセイを行った。試験は２回繰り返して行った。
　阻害率は、以下のようにして計算した：
　コントロールとして、キナーゼ反応をＭＳＡ（モビリティ シフト アッセイ）で算出された産生物／基質＋産生物の値で評価し、それを０％阻害率とした。そこに薬剤が添加された場合の産生物／基質＋産生物の値を同様に算出し、コントロール値との差から阻害率を算出した。
　その結果を図２Ａに表す。いずれの化合物についてもＰＩ３Ｋに対する直接阻害活性が認められた。その中で、ＳＰ－５、ＦＫ－Ａ１、ＦＫ－Ａ２、ＦＫ－Ａ３、ＦＫ－Ａ５、ＦＫ－Ａ６については、ＦＫ２２８よりも高い阻害率が示され、最も強い阻害活性が認められたＦＫ－Ａ５では、６６．８％のＰＩ３Ｋ活性阻害率であった。
　次に、最も阻害活性の強かったＦＫ－Ａ５及び元の化合物であるＦＫ２２８について、ＰＩ３Ｋに対する５０％阻害濃度(ＩＣ50)を測定し、ＬＹ２９４００２と比較した。結果を図２Ｂ、Ｃ及びＤに示す。
　ＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５は、濃度依存性にＰＩ３Ｋ活性を阻害した。ＬＹ２９４００２、ＦＫ２２８、ＦＫ－Ａ５のＩＣ50は、それぞれ０．７μM、５７．１μM、２６．２μMであった。ＦＫ２２８は５～５００μM、ＦＫ－Ａ５は１～３００μMの範囲で阻害活性が観察された。また、ＦＫ－Ａ５の方がＦＫ２２８よりも強くＰＩ３Ｋを阻害することがわかった。
　なお、ＦＫ２２８のＰＩ３Ｋの阻害曲線において１０μMでの阻害率は６．５％であった（図２Ｃ）。
　これらの結果から、類縁体の間でその阻害活性に差があるものの、ＦＫ２２８及びそのすべての類縁体について、ＰＩ３Ｋ阻害活性が示された。
　上記のとおり、ＦＫ２２８及びその類縁体において、最もＰＩ３Ｋ阻害活性が強かったのがＦＫ－Ａ５、次がＦＫ－Ａ６であった（図２Ｂ）。ＦＫ－Ａ５とＦＫ－Ａ６とは立体異性体であり、７位にベンジル（フェニルメチル）基が付いている特徴的な構造をもつ（表２）。この特徴が、ＦＫ２２８と比べ、ＦＫ－Ａ５とＦＫ－Ａ６とが高い阻害活性をもたらすことに寄与している可能性がある。
　４．ＰＩ３Ｋ－ＦＫ２２８ドッキングシュミレーション
　従来のＰＩ３Ｋ阻害剤は、すべてｐ１１０触媒サブユニットのＡＴＰ結合部位に結合するとされている（非特許文献２７：Walker et al. Molecular Cell 6, 909-919 (2000)）。ＦＫ２２８も同じようにＡＴＰ結合部位に結合するかを検証した。
　ドッキングシュミレーションは、シュミレーションソフトウェアとして商品名「ｅＨｉＴＳ」（Simulated Biomolecular Systems）を用い、鋳型となるＰＩ３Ｋの立体構造としてＰＩ３Ｋ（ｐ１１０αＨ１０４７Ｒ／ｐ８５α）－ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎの複合体の結晶構造データ（Protein Data Bank Identification Code: 3HHM）を利用して行われた。ＦＫ２２８は、細胞内に取り込まれた後、細胞内の還元作用によりジスルフィド結合が切断され、その結果生成したチオール基がＨＤＡＣの活性中心の亜鉛と配位してＨＤＡＣ阻害作用を発揮することが明らかにされている（非特許文献１２：Furumai et al. Cancer Res 62, 4916 (2002)）。したがって、細胞内でＰＩ３Ｋを阻害する場合においてもＦＫ２２８は還元型であると予測し、ＰＩ３Ｋとのドッキングモデルにおいても還元型のＦＫ２２８の構造を用いた。ドッキングモデルは候補モデルのうち、ソフトウエア上で構造の妥当性を評価するスコアが最も高いものを採用した。
　その結果、還元型のＦＫ２２８は、ｐ１１０αのＡＴＰ結合部位に深く入りこみ、チオールやイソプロピルをポケットの奥に差し込む形で結合するものと予測された。
　このことは、上記３．に記載した実験において、異なるＡＴＰ濃度条件下（５０μM及び５００μM）でＦＫ２２８のＰＩ３Ｋ阻害活性を測定することにより確認された。結果を図２Ｅに示す。ＦＫ２２８のＰＩ３Ｋ阻害活性は、高濃度のＡＴＰ存在下で低減した。標準的ＡＴＰ濃度（５０μM）及び高ＡＴＰ濃度（５００μM）でのＩＣ５０値は、それぞれ５７．２μM及び１２５．０μMであった。これらの結果は、ＦＫ２２８がＡＴＰ競合的なＰＩ３Ｋ阻害剤であること、すなわちＡＴＰ結合部位に結合することを示唆する。
　５．ウェスタンブロッティングによるＡＫＴ経路の抑制の評価
　ＰＴＥＮが欠失しており、ＰＩ３Ｋの下流のＡＫＴが恒常的に活性化しているＰＣ３（前立腺がん）細胞を用いて（非特許文献２８：Grunwald et al. Cancer Res 62, 6141 (2002)）、ＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５によるＡＫＴのリン酸化の抑制を評価した。
　ＰＣ３細胞は東北大学加齢医学研究所医用細胞資源センターより入手した。細胞は、非働化したウシ胎児血清を１０％の濃度で含んだＲＰＭＩ１６４０培地を用いて、５％ＣＯ2存在下、３７℃で培養した。
　ウェスタンブロッティングは、以下のようにして行った。各化合物で処理を行った各種の細胞を回収後、リシスバッファー（Lysis buffer：　５００mM Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ pH７．５、１００mM　ＮａＣｌ、２mM　ＥＤＴＡ、１mM　オルトバナジン酸ナトリウム（sodium orthovanadate）、１％　ＮＰ－４０、　１％プロテアーゼインヒビターカクテル（Protease Inhibitor cocktail、SIGMA-ALDRICH社製)で溶解し、遠心後上清を回収した。サンプルを１２．５％のポリアクリルアミドゲルにて電気泳動し、ＰＶＤＦ膜（Immobilon-FL, millipore）に転写した。
　一次抗体として以下のものを用いた。抗ＡＫＴ抗体（「ｔｏｔａｌ　ＡＫＴ」又は「ＡＫＴ」）、抗リン酸化ＡＫＴ（Ｓｅｒ－４７３）抗体（「ｐ－ＡＫＴ（Ｓ４７３）」）、抗リン酸化ＡＫＴ（Ｔｈｒ－３０８）抗体（「ｐ－ＡＫＴ（Ｔ３０８）」）、抗リン酸化ＧＳＫ－３β（Ｓｅｒ－９）抗体（「ｐ－ＧＳＫ－３β」）、抗リン酸化ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ－２４４８）抗体（「ｐ－ｍＴＯＲ」）、抗リン酸化ｐ７０Ｓ６Ｋ（Ｔｈｒ－３８９）抗体（「ｐ－ｐ７０Ｓ６Ｋ」）、抗リン酸化４Ｅ－ＢＰ１（Ｔｈｒ－３７／４６）抗体（「ｐ－４ＥＢＰ１」）、抗リン酸化ＭＥＫ１／２（Ｓｅｒ－２１７／２２１）抗体（「ｐ－ＭＥＫ１／２」）、抗リン酸化ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ－２０２／Ｔｙｒ－２０４）抗体（「ｐ－ＥＲＫ１／２」）（以上、すべてポリクローナル抗体、Cell Signaling Technology）、抗β－アクチンモノクローナル抗体（Sigma Aldrich）。
　二次抗体としては、商品名「Alexa Fluor680IgG」（Invitrogen）を用いた。商品名「Odyssey Infrared Imaging system」（LI-COR）を用いて目的とするタンパク質の発現を検出した。
　まず、化合物を作用させてからの時間経過によるリン酸化ＡＫＴの変化を検討した。結果を図３、パネルＡに示す。
　ＬＹ２９４００２と同様に、ＦＫ２２８、ＦＫ－Ａ５ともに５分から１８０分という短時間で、全ＡＫＴの発現レベルは変化させずに、リン酸化ＡＫＴ（Ｓｅｒ－４７３、Ｔｈｒ－３０８）の発現レベルを減少させた。
　次に、ＦＫ２２８、ＦＫ－Ａ５の濃度の変化によるＡＫＴ及びＡＫＴ経路の下流分子のリン酸化の変化を検討した。化合物の作用時間は１８０分とした。結果を図３、パネルＢに示す。
　ＦＫ２２８、ＦＫ－Ａ５ともに、濃度依存的にリン酸化ＡＫＴ（Ｓｅｒ－４７３、Ｔｈｒ－３０８）、さらにそのシグナル伝達経路の下流の、リン酸化ＧＳＫ－３β（Ｓｅｒ－９）、リン酸化ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ－２４４８）、リン酸化ｐ７０Ｓ６Ｋ（Ｔｈｒ－３８９）、リン酸化４Ｅ－ＢＰ１（Ｔｈｒ－３７／４６）の発現レベルを抑制した。また、ＲＡＳ－ＭＡＰ経路のリン酸化ＭＥＫ１／２は抑制されなかったが、リン酸化ＥＲＫ１／２はやや抑制された。
　また、この結果においては、１０μMの濃度で、リン酸化ＡＫＴ（Ｓ４７３）、（Ｔ３０８）の発現レベルは、コントロールと比べてそれぞれ６６％又は８６％減少している。これは、図２Ａのデータが過小評価されている可能性があることを示すものである。すなわち、インビトロのＰＩ３Ｋ阻害活性の評価系においては、還元剤を含んでいたものの、細胞内での還元力には及ばず、活性をもつ還元型ＦＫ２２８の割合が少なかった可能性が考えられる。
　以上から、ＦＫ２２８、ＦＫ－Ａ５がＰＩ３Ｋの阻害を介してＡＫＴ経路を抑制することが示された。また、リン酸化ＥＲＫ１／２を阻害することから、これらの化合物が、ＰＩ３Ｋ以外に、他のキナーゼに対する阻害活性をも有するか、又は他のタンパク質の作用を介してＥＲＫ１／２を阻害する可能性が示唆された。
　６．ＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５の殺細胞効果の評価
　ＦＫ２２８は、ＨＤＡＣ１に対して１．６～３．６nMのＩＣ50をもつ強力なＨＤＡＣ阻害剤であり（非特許文献１２：Furumai et al. Cancer Res 62, 4916 (2002)；非特許文献２２：Narita et al. Chemistry-A European Journal 15, 11174-11186 (2009)）、多くのヒトがん細胞株に対してnMの範囲で５０％成長阻害を発揮することが示されている。ここまでの実験結果より、ＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５がＰＩ３Ｋ阻害活性を示すのはμMの範囲であるため、ＨＤＡＣ阻害剤に抵抗性の細胞を用いてＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５の殺細胞効果を検討した。
　用いたヒト培養細胞は、大腸がん（ＨＣＴ１１６、ＣＯ１１５、ＲＫＯ）の細胞株であった。ＨＣＴ１１６及びＲＫＯは、American Type Culture Collection（ＡＴＣＣ）より、それぞれ入手した。ＣＯ１１５は、John M. Mariadason（Ludwig Institute for Cancer Research, Melbourne, Australia）より入手した。細胞は、非働化したウシ胎児血清を１０％の濃度で含んだＲＰＭＩ１６４０培地を用いて、５％ＣＯ2存在下、３７℃で培養した。
　ＨＣＴ１１６、ＲＫＯ、ＣＯ１１５はいずれもマイクロサテライト不安定性（microsatellite instability；ＭＳＩ）陽性の細胞であり、ＨＣＴ１１６はＨＤＡＣ阻害剤感受性であるが、ＲＫＯ及びＣＯ１１５はＨＤＡＣ阻害剤に抵抗性である。ＲＫＯ及びＣＯ１１５については、ＨＤＡＣ２両対立遺伝子のエクソン１にあるＡ9（アデニンの９回繰り返し）配列にフレームシフト変異が生じた結果、ＨＤＡＣ２タンパクが欠失しており、ＨＤＡＣ２の機能喪失によってアポトーシスプロテアーゼ活性化因子１（apoptotic protease-activating factor 1；ＡＰＡＦ１）発現レベルの上昇がもたらされ、それによりアポトーシス制御異常が生じるため、ＨＤＡＣ阻害剤であるＴＳＡ、ＳＡＨＡに抵抗性になっていることが報告されている（非特許文献２９：Ropero et al. Nature 200, 6；非特許文献３０：Hanigan et al. Gastroenterology 135, 1654-1664. e1652 (2008)）。そこで、まず、ウェスタンブロットによってこれらの細胞におけるＨＤＡＣの発現レベルを確認した。
　一次抗体として抗ＨＤＡＣ２モノクローナル抗体（Cell Signaling Technology）（「ＨＤＡＣ２」）又は抗ＨＤＡＣ１ポリクローナル抗体（Santa Cruz）（「ＨＤＡＣ１」）を使用したこと以外は、基本的に上記と同様にしてウェスタンブロッティングを行った。
　その結果を図４Ａに示す。従来の報告と異なり、ＲＫＯ、ＣＯ１１５においてもＨＤＡＣ２の弱い発現が認められた。ＲＫＯについては、ＨＤＡＣ２の発現にバリエーションがあることが報告されている（非特許文献３１：Ree et al., Nature Genetics 40, 812-813 (2008)）。ＨＤＡＣ１はいずれの細胞においても発現が認められたが、ＣＯ１１５での発現レベルはやや低かった。
　次に、ＨＣＴ１１６、ＲＫＯ、ＣＯ１１５細胞を用いて、ＭＴＴアッセイにより殺細胞効果を検討した。
　各種の細胞を８×１０3 cells/wellの密度で９６穴プレートに播き、２４時間の前培養の後、ＬＹ２９４００２（５０μM）、ＳＡＨＡ（Cayman Chemical Companyより購入；２．５μM）、ＬＹ２９４００２（５０μM）＋ＳＡＨＡ（２．５μM）の併用、ＦＫ２２８又はＦＫ－Ａ５（それぞれ５nM、５０nM、５００nM、５μM又は５０μM）、ＦＫ２２８又はＦＫ－Ａ５（それぞれ５nM、５０nM又は５００nM）＋ＬＹ２９４００２（５０μM）の併用を含んだ培地に置き換えてさらに培養した。
　２４時間後に商品名「Cell counting kit-8」（同仁化学研究所）を用いて生細胞数を評価した。このキットは、水溶性テトラゾリウム塩ＷＳＴ－８を発色試薬として用いており、ＷＳＴ－８は細胞内脱水素酵素によりホルマザンを生じる。ホルマザン色素量と生細胞数は比例関係にあり、ホルマザンの４５０nmの吸光度をマイクロプレートリーダー（商品名「SpectraMax M2e」、Molecular devices）で測定し、生細胞数を計測した。
　結果を図４Ｂ，Ｃ及びＤに示す。
　ＨＤＡＣ阻害剤に感受性であるＨＣＴ１１６細胞では、ＳＡＨＡ、低濃度（５nM～５００nM程度のレベル）のＦＫ２２８、ＦＫ－Ａ５により約５０％（４３～７０％）の細胞死を生じた。これに対し、ＲＫＯ、ＣＯ１１５細胞においては、ＨＤＡＣ２の弱発現が認められたものの、ＳＡＨＡ、５０nM程度までのＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５に対して抵抗性（６～１５％の細胞死）であった。ＬＹ２９４００２に対してはいずれの細胞も感受性（５０～６０％の細胞死）であったが、ＳＡＨＡとＬＹ２９４００２との併用に対しては、ＨＣＴ１１６、ＲＫＯでは殺細胞効果の増強（相加効果）が認められた一方、ＣＯ１１５の場合は増強が認められなかった。
　ＰＩ３Ｋ阻害活性が発揮される高濃度（μMレベル）のＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５は、いずれの細胞においても極めて強く細胞数を減少させた。
　また、低濃度のＦＫ２２８又はＦＫ－Ａ５とＬＹ２９４００２との併用については、ＲＫＯ及びＣＯ１１５細胞では相乗効果が認められたが、高濃度（５μM）の単独のＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５よりは低い殺細胞効果であった（図４Ｂ）。
　これらの結果から、ＨＤＡＣ阻害剤に抵抗性の細胞に対しても、高濃度（μMレベル）のＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５は極めて強い殺細胞効果を示し、高濃度において発揮されるＰＩ３Ｋ阻害活性が殺細胞効果を増強している可能性が示唆された。
　７．ＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５による細胞死の解析及びアポトーシス誘導に関する評価
　ＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５の投与による細胞死の特徴を解析するため、まず、細胞周期解析としてＦＡＣＳ解析(fluorescence-activated cell sorting analysis)を行った。
　ＨＣＴ１１６細胞を６穴プレートに２×１０5個ずつ播き、２４時間の前培養後、各薬剤存在下でさらに２４時間培養し、ＳＡＨＡ、ＬＹ２９４００２、ＦＫ２２８、ＦＫ－Ａ５を上記６．に記載した実験と同条件で作用させた。細胞を回収し、エタノールで固定後、ヨウ化プロピジウム／ＰＢＳ溶液で染色し、商品名「Cytomics FC500 Flow Cytometry System」（Beckman Coulter）を用いて解析した。細胞周期分画は商品名「Multicycle software」（Phenomix Flow Systems）を用いて算出した。
　結果を図５Ａ、Ｂ及びＣに示す。ＨＤＡＣ阻害剤は、ｐ２１WAF1の発現の上昇を介して細胞周期停止を誘導するが（非特許文献３２：Xu et al. Oncogene 26, 5541-5552 (2007)）、ＨＤＡＣ阻害剤の濃度や細胞の種類の違いによりＧ１／Ｓ期とＧ２／Ｍ期のどちらを優位に停止させるかについてはさまざまな報告がある（非特許文献３３：Richon et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 97, 10014 (2000)；非特許文献３４：Nakajima et al. Exp. Cell Res. 241, 126-133 (1998); 非特許文献３５:Kumagai et al. Int. J. of Cancer 121, 656-665 (2007)）。
　本実験においては、ＳＡＨＡはＨＣＴ１１６細胞に対して著明なＧ２／Ｍ期の停止を誘導した。低濃度のＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５も、ＳＡＨＡと同様にＧ２／Ｍ期優位の細胞周期の停止を誘導した（図５Ａ～Ｃ）。
　一方、ＬＹ２９４００２については、Ｇ０／Ｇ１期の停止を引き起こし、アポトーシス誘導は弱いことが示されているが、本実験においてもＬＹ２９４００２はＨＣＴ１１６細胞に対してＧ０／Ｇ１期での停止を誘導した（図５Ａ～Ｃ）。ＳＡＨＡ＋ＬＹ２９４００２の併用、低濃度のＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５＋ＬＹ２９４００２の併用については、ｓｕｂＧ１分画が２０～４０％と著明に増加し、強いアポトーシスが誘導された（図５Ａ～Ｃ）。
　これに対し、高濃度（５μM）のＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５は、単独で強いアポトーシス（ｓｕｂＧ１分画３６～３７％）を誘導し、ＤＮＡヒストグラムは、ＳＡＨＡ＋ＬＹ２９４００２の併用、低濃度のＦＫ２２８、ＦＫ－Ａ５＋ＬＹ２９４００２の併用の場合と類似の結果を示した（図５Ａ及びＢ）。細胞周期分画の解析においても、高濃度のＦＫ－Ａ５の場合は、ＳＡＨＡや低濃度のＦＫ－Ａ５＋ＬＹ２９４００２の併用の場合の分画と類似していた（図５Ｃ）。
　以上から、高濃度（μMレベル）のＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５が細胞周期に与える影響及び誘導されるアポトーシスは、ＨＤＡＣ阻害剤とＰＩ３Ｋ阻害剤とを併用した場合に類似することが示された。
　また、ＦＫ２２８による細胞死がアポトーシス誘導によるものであることをさらに確認するために、ＳＡＨＡ（２．５μM）、図に示した濃度のＦＫ２２８で処理したサンプルを用い、一次抗体として抗ＰＡＲＰ－１／２ポリクローナル抗体（Santa Cruz）（「ＰＡＲＰ」）、抗リン酸化（ｐ）ＡＫＴ抗体（Ｓ４７３）（Cell signaling）（「ｐＡＫＴＳ４７３」）、抗ＡＫＴ抗体（「ｔｏｔａｌ　ＡＫＴ」）、抗アセチル化ヒストンＨ３抗体（Upstate）（「Ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ　Ｈ３」）、抗アセチル化ヒストンＨ４抗体（Upstate）（「Ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ　Ｈ４」）を使用したこと以外は、基本的に上記と同様にしてウェスタンブロッティングを行った。ウェスタンブロットでは、ＨＣＴ１１６細胞を所定濃度のＳＡＨＡ、ＦＫ－２２８で２４時間処理し、ＰＡＲＰ、ｃｌｅａｖｅｄ　ＰＡＲＰ、リン酸化ＡＫＴ（Ｓ４７３）、ＡＫＴ、アセチル化ヒストンＨ３、アセチル化ヒストンＨ４の発現について解析した。
　結果を図５Ｄに示す。ＦＫ２２８によるアポトーシス誘導は、ＨＣＴ１１６細胞におけるＣｌｅａｖｅｄ　ＰＡＲＰの増加によって裏付けられた。ＦＣＡＳ解析の結果と同様、Ｃｌｅａｖｅｄ　ＰＡＲＰは高濃度のＦＫ２２８（５μM）で最も増加し、強いアポトーシス誘導が示された。また、このとき同時に、高濃度のＦＫ２２８（５μM）はリン酸化ＡＫＴを抑制し、アセチル化ヒストンの発現を増加させていたことも判明した。
　以上より、高濃度（μMレベル）のＦＫ２２８及びＦＫ－Ａ５は、強力にアポトーシスを誘導し、その際にはＨＤＡＣとＰＩ３Ｋの二重阻害剤としての活性を発揮していることが示された。
　８．デプシペプチド類化合物の合成（２）
　上記２．と同様にして、さらにデプシペプチド類化合物ＦＫ－Ａ７～Ａ１３及びＦＫ－Ａ１７を合成し、特性を調べた。表３に、それらの化合物の構造式、及び上記３．と同様にして測定したＰＩ３Ｋ（ｐ１１０α／ｐ８５α）に対する５０％阻害濃度（ＩＣ50）を、比較のためＦＫ２２８、ＳＡＨＡ、ＬＹ２９４００２とともに示す。表３中、ＦＫ２２８、ＳＡＨＡのＨＤＡＣ１に対する５０％阻害濃度（ＩＣ50）は、文部科学省がん特定領域研究・統合がん化学療法基盤情報支援班により評価された。
　表３：　ＦＫ－Ａ７～Ａ１３、Ａ１７の構造式及びＰＩ３Ｋ、ＨＤＡＣ１に対する５０％阻害濃度（ＩＣ50）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000066
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000067
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000068
　９．ＦＫ－Ａ１１についての、ウェスタンブロッティングによるＡＫＴ経路の抑制の評価
　上記５．と同様にして、ＦＫ－Ａ１１によるＡＫＴのリン酸化の抑制を評価し、ＦＫ－Ａ５、ＦＫ２２８と比較した。ただし、作用時間は１８０分とし、一次抗体としては、抗リン酸化ＡＫＴ（Ｓｅｒ－４７３）抗体（「ｐ－ＡＫＴ（Ｓ４７３）」）、抗リン酸化ＡＫＴ（Ｔｈｒ－３０８）抗体（「ｐ－ＡＫＴ（Ｔ３０８）」）、抗ＡＫＴ抗体（「ＡＫＴ」）、抗β－アクチンモノクローナル抗体（「Ｂ－ａｃｔｉｎ」）を使用した。
　結果を、図６に示す。ＦＫ－Ａ１１については、ＦＫ２２８、ＦＫ－Ａ５よりも低濃度で、ＡＫＴのリン酸化を抑制することが示された。
　１０．ＦＫ－Ａ１１の殺細胞効果の評価
　上記６．と同様にして、ＭＴＴアッセイによりＦＫ－Ａ１１の殺細胞効果を検討した。ただし、ヒト培養細胞としては、大腸がん（ＨＣＴ１１６、ＣＯ１１５、ＲＫＯ）の細胞株、及び正常細胞として非腫瘍性線維芽細胞株ＫＭＳＴ６を使用し、ＦＫ－Ａ１１は、５nM、５０nM、５００nM、５μM又は５０μMで使用した。
　結果を図７Ａ～Ｄに示す。
　ＨＣＴ１１６、ＲＫＯ細胞では、低濃度（５nM～５００nM程度のレベル）のＦＫ－Ａ１１により顕著な細胞死を生じた。これに対し、ＨＤＡＣ阻害剤に対して抵抗性であるＣＯ１１５細胞においては、５０nM程度までのＦＫ－Ａ１１に対して抵抗性であったが、ＰＩ３Ｋ阻害活性が発揮されると推測される５００nMからは強い細胞死を生じた。一方、その濃度においては、非がん細胞であるＫＭＳＴ６は顕著な細胞死を生じなかった。
　ＦＫ２２８、ＦＫ－Ａ５、ＦＫ－Ａ１１の結果の比較を図８Ａ～Ｃに示す。
　これらの結果から、ｐ１１０αに対する阻害活性が非常に強いＦＫ－Ａ１１は、いずれのがん細胞株に対しても、ＦＫ２２８、ＦＫ－Ａ５よりも強力な細胞増殖抑制効果を示すことが明らかになった。
　この出願は、平成２３年９月３０日出願の日本特許出願、特願２０１１－２１７３７８に基づくものであり、特願２０１１－２１７３７８の明細書及び特許請求の範囲に記載された内容は、すべてこの出願明細書に包含される。

Claims (7)

  1. 　以下の式１で示されるデプシペプチド類化合物又は生理学的に許容可能なその塩からなるホスファチジルイノシトール３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     式１

    （式中、Ａは、－ＣＯＮＨ－又は－ＣＨ（ＯＨ）－を表し、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は、同一又は異なって、水素原子、低級アルキル基、低級アルキリデン基、置換もしくは無置換のアリール基又は置換もしくは無置換のアラルキル基を表す。）
  2. 　式１において、Ｒ3が水素原子である、請求項１記載のＰＩ３Ｋ阻害剤。
  3. 　式１において、Ｒ1が置換もしくは無置換のアラルキル基である、請求項１又は２記載のＰＩ３Ｋ阻害剤。
  4. 　請求項１～３のいずれか１項記載のＰＩ３Ｋ阻害剤を有効成分として含有することを特徴とする、難治性がんの治療用医薬組成物。
  5. 　前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が体重１kgあたり約１mg/日～１０，０００mg/日の投与用量で投与されることを特徴とする、請求項４記載の難治性がんの治療用医薬組成物。
  6. 　前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、以下の式２～２０のいずれかで示されるデプシペプチド類化合物又は生理学的に許容可能なその塩である、請求項４又は５記載の難治性がんの治療用医薬組成物。

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     式２

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     式３

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
     式４

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
     式５

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
     式６

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
     式７

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
     式８

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
     式９

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
     式１０

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
     式１１

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
     式１２

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
     式１３

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
     式１４

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
     式１５

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
     式１６

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
     式１７

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
     式１８

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
     式１９

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
     式２０
  7. 以下の式１で示されるデプシペプチド類化合物又は生理学的に許容可能なその塩。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
     式１

    （式中、Ａは、－ＣＯＮＨ－又は－ＣＨ（ＯＨ）－を表し、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は、同一又は異なって、水素原子、低級アルキル基、低級アルキリデン基、置換もしくは無置換のアリール基又は置換もしくは無置換のアラルキル基を表す；但し、Ａ、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3の組合せが、Ａ＝－ＣＯＮＨ－かつＲ1＝エチリデン基かつＲ2＝Ｒ3＝イソプロピル基、Ａ＝－ＣＨ（ＯＨ）－ かつＲ1＝イソプロピル基かつＲ2＝メチル基かつＲ3＝水素原子、Ａ＝－ＣＨ（ＯＨ）－ かつＲ1＝sec-ブチル基かつＲ2＝メチル基かつＲ3＝水素原子、Ａ＝－ＣＨ（ＯＨ）－ かつＲ1＝Ｒ2＝イソプロピル基かつＲ3＝水素原子、Ａ＝－ＣＯＮＨ－ かつＲ1＝エチリデン基かつＲ2＝イソプロピル基かつＲ3＝水素原子、Ａ＝－ＣＯＮＨ－ かつＲ1＝Ｒ3＝水素原子かつＲ2＝イソプロピル基、Ａ＝－ＣＯＮＨ－ かつＲ1＝メチル基かつＲ2＝イソプロピル基かつＲ3＝水素原子、及び、Ａ＝－ＣＯＮＨ－ かつＲ1＝ベンジル基かつＲ2＝イソプロピル基かつＲ3＝水素原子、のいずれかである化合物を除く）
PCT/JP2012/074542 2011-09-30 2012-09-25 新規ホスファチジルイノシトール３キナーゼ阻害剤及び医薬組成物 WO2013047509A1 (ja)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US14/348,799 US9963482B2 (en) 2011-09-30 2012-09-25 Phosphatidylinositol-3-kinase inhibitor and pharmaceutical composition
EP12835791.0A EP2762148B1 (en) 2011-09-30 2012-09-25 Depsipeptide as phosphatidylinositol-3-kinase inhibitor and use thereof for treating cancer
JP2013536294A JP6214397B2 (ja) 2011-09-30 2012-09-25 新規ホスファチジルイノシトール３キナーゼ阻害剤及び医薬組成物

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2011-217378 2011-09-30
JP2011217378 2011-09-30

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2013047509A1 true WO2013047509A1 (ja) 2013-04-04

Family

ID=47995541

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2012/074542 WO2013047509A1 (ja) 2011-09-30 2012-09-25 新規ホスファチジルイノシトール３キナーゼ阻害剤及び医薬組成物

Country Status (4)

Country Link
US (1) US9963482B2 (ja)
EP (1) EP2762148B1 (ja)
JP (1) JP6214397B2 (ja)
WO (1) WO2013047509A1 (ja)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014115859A3 (ja) * 2013-01-25 2014-10-16 オンコリスバイオファーマ株式会社 分子標的併用腫瘍治療・予防薬
WO2017122822A1 (ja) * 2016-01-13 2017-07-20 国立大学法人東北大学 デプシペプチド類化合物の製造中間体及びその製造方法

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113861267B (zh) * 2021-10-25 2023-06-27 深圳湾实验室坪山生物医药研发转化中心 一种缩酯环肽类化合物lzg-pku-h及其合成方法和应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0285296A (ja) 1988-07-26 1990-03-26 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd Ｆｒ９０１２２８物質およびその製造法
JPH0479892A (ja) 1990-07-24 1992-03-13 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd Ｆｒ９０１２２８物質の製造方法
JP2003516418A (ja) * 1999-12-08 2003-05-13 エクサイト セラピーズ， インコーポレイテッド 免疫抑制剤として使用するためのデプシペプチドおよびその同族体
JP2008542347A (ja) 2005-06-02 2008-11-27 ユニバーシティ、オブ、サウサンプトン Ｈｄａｃ阻害剤としてのｆｋ２２８誘導体
JP2009519224A (ja) 2005-11-18 2009-05-14 グロスター ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｈｄａｃインヒビターｆｋ２２８の代謝産物誘導体
JP2010510300A (ja) * 2006-11-22 2010-04-02 カルス セラピューティクス リミテッド デプシペプチドおよびその治療的使用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0285296U (ja) 1988-12-14 1990-07-04
WO2009141657A1 (en) * 2008-05-22 2009-11-26 Karus Therapeutics Limited Depsipeptides and their therapeutic use
GB0905970D0 (en) * 2009-04-06 2009-05-20 Karus Therapeutics Ltd Depsipeptides and their therapeutic use

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0285296A (ja) 1988-07-26 1990-03-26 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd Ｆｒ９０１２２８物質およびその製造法
JPH0479892A (ja) 1990-07-24 1992-03-13 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd Ｆｒ９０１２２８物質の製造方法
JP2003516418A (ja) * 1999-12-08 2003-05-13 エクサイト セラピーズ， インコーポレイテッド 免疫抑制剤として使用するためのデプシペプチドおよびその同族体
JP2008542347A (ja) 2005-06-02 2008-11-27 ユニバーシティ、オブ、サウサンプトン Ｈｄａｃ阻害剤としてのｆｋ２２８誘導体
JP2009519224A (ja) 2005-11-18 2009-05-14 グロスター ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｈｄａｃインヒビターｆｋ２２８の代謝産物誘導体
JP2010510300A (ja) * 2006-11-22 2010-04-02 カルス セラピューティクス リミテッド デプシペプチドおよびその治療的使用

Non-Patent Citations (73)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Search for novel PI3K inhibitor by using budding yeast as screening tool", SERIES NO. P10-5, ABSTRACT OF THE 15TH MEETING OF THE JAPANESE ASSOCIATION FOR MOLECULAR TARGET THERAPY OF CANCER, 31 May 2011 (2011-05-31)
"Search for novel PI3K inhibitor by using budding yeast as screening tool", SERIES NO. PI 0-5, ABSTRACT OF THE 15TH MEETING OF THE JAPANESE ASSOCIATION FOR MOLECULAR TARGET THERAPY OF CANCER, 31 May 2011 (2011-05-31)
ALANI ET AL., GENETICS, vol. 116, 1987, pages 541
ALANI, E.; CAO, L.; KLECKNER, N., GENETICS, vol. 116, 1987, pages 541
CANTLEY, L. C., SCIENCE, vol. 296, 2002, pages 1655 - 1657
CAREW ET AL., GILES, CANCER LET, vol. 269, 2008, pages 7 - 17
CAREW, J. S.; GILES, F. J.; NAWROCKI, S. T., CANCER LETTERS, vol. 269, 2008, pages 7 - 17
CHEN ET AL., J BIOL CHEM, vol. 280, 2005, pages 38879
CHEN, C. S.; WENG, S. C.; TSENG, P. H.; LIN, H. P., JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, vol. 280, 2005, pages 38879
CID ET AL., ONCOGENE, vol. 27, 2008, pages 5431 - 5442
CID, V. ET AL., ONCOGENE, vol. 27, 2008, pages 5431 - 5442
FRUMAN ET AL., ANNUAL REV BIOCHEM, vol. 67, 1998, pages 481 - 507
FRUMAN, D. A.; MEYERS, R. E.; CANTLEY, L. C., ANNUAL REVIEW OF BIOCHEMISTRY, vol. 67, 1998, pages 481 - 507
FURUMAI ET AL., CANCER RES, vol. 62, 2002, pages 4916
FURUMAI, R. ET AL., CANCER RESEARCH, vol. 62, 2002, pages 4916
GRAHAM ET AL., CLINICAL CANCER RES, vol. 12, 2006, pages 223
GRAHAM, C. ET AL., CLINICAL CANCER RESEARCH, vol. 12, 2006, pages 223
GRUNWALD ET AL., CANCER RES, vol. 62, 2002, pages 6141
GRUNWALD, V. ET AL., CANCER RESEARCH, vol. 62, 2002, pages 6141
HAN ET AL., CANCER RES, vol. 60, 2000, pages 3147
HAN, S. Y. ET AL., CANCER RESEARCH, vol. 60, 2000, pages 3147
HANIGAN ET AL., GASTROENTEROLOGY, vol. 135, 2008, pages 1654 - 1664
HANIGAN, C. L. ET AL., GASTROENTEROLOGY, vol. 135, 2008, pages 1654 - 1664
HANKER ET AL., J MOLECULAR SIGNALING, vol. 4, 2009, pages 5
HANKER, A. B.; HEALY, K. D.; NICHOLS, J.; DER, C. J., JOURNAL OF MOLECULAR SIGNALING, vol. 4, 2009, pages 5
HIROKAWA Y. ET AL.: "Signal therapy of NF1- deficient tumor xenograft in mice by the anti- PAK1 drug FK228.", CANCER BIOLOGY & THERAPY, vol. 4, no. 4, 2005, pages 379 - 381, XP055149017 *
HIROSHI MARUTA ET AL.: "Kazokusei Shuyo to Genome Shinkei Sen'ishusho (NF) no Signal Ryoho", GENOME MEDICINE, vol. 4, no. 2, 2004, pages 185 - 192, XP008173986 *
IKENOUE ET AL., CANCER RES, vol. 65, 2005, pages 4562
IKENOUE, T. ET AL., CANCER RESEARCH, vol. 65, 2005, pages 4562
KANG ET AL., PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 102, 2005, pages 802
KANG, S.; BADER, A. G.; VOGT, P. K., PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 102, 2005, pages 802
KODANI ET AL., ONCOLOGY REPORTS, vol. 13, 2005, pages 477 - 483
KODANI, M. ET AL., ONCOLOGY REPORTS, vol. 13, 2005, pages 477 - 483
KONG, D.; YAMORI, T., CURRENT MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 16, 2009, pages 2839 - 2854
KONG; YAMORI, CURRENT MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 16, 2009, pages 2839 - 2854
KUMAGAI ET AL., INT. J. OF CANCER, vol. 121, 2007, pages 656 - 665
KUMAGAI, T. ET AL., INTERNATIONAL JOURNAL OF CANCER, vol. 121, 2007, pages 656 - 665
MAEHAMA ET AL., J. BIOL. CHEM., vol. 273, 1998, pages 13375 - 13378
MAEHAMA, T.; DIXON, J. E., THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, vol. 273, 1998, pages 13375 - 13378
MASAHIRO KOTANI ET AL.: "Haisengan Baiyo Saibokabu ni Okeru FK228(FR901228) no Akt Yokusei Sayo to amrubicin tono Sojo Koka", JAPANESE JOURNAL OF LUNG CANCER, vol. 43, no. 5, 2003, pages 581, XP055158644 *
NAKAJIMA ET AL., EXP. CELL RES., vol. 241, 1998, pages 126 - 133
NAKAJIMA, H.; KIM, Y. B.; TERANO, H.; YOSHIDA, M.; HORINOUCHI, S., EXPERIMENTAL CELL RESEARCH, vol. 241, 1998, pages 126 - 133
NARITA ET AL., CHEMISTRY-A EUROPEAN JOURNAL, vol. 15, 2009, pages 11174 - 11186
NARITA, K. ET AL., CHEMISTRY-A EUROPEAN JOURNAL, vol. 15, 2009, pages 11174 - 11186
REE ET AL., NATURE GENETICS, vol. 40, 2008, pages 812 - 813
REE, A. H.; FOLKVORD, S.; FLATMARK, K., NATURE GENETICS, vol. 40, 2008, pages 812 - 813
RICHON ET AL., PROC. NATL. ACAD. SCI., vol. 97, 2000, pages 10014
RICHON, V. M.; SANDHOFF, T. W.; RIFKIND, R. A.; MARKS, P. A., PROC. NATL. ACAD. SCI., vol. 97, 2000, pages 10014
RODRIGUEZ-ESCUDERO ET AL., BIOCHEMICAL JOURNAL, vol. 390, 2005, pages 613
RODRIGUEZ-ESCUDERO, BIOCHEMICAL JOURNAL, vol. 390, 2005, pages 613
RODRIGUEZ-ESCUDERO, I. ET AL., BIOCHEMICAL JOURNAL, vol. 390, 2005, pages 613
ROGERS ET AL., J. OF MOL. MICROBIOL. BIOTECHNOL., 2001, pages 207 - 214
ROGERS, B. ET AL., JOURNAL OF MOLECULAR MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY, vol. 3, 2001, pages 207 - 214
ROPERO ET AL., NATURE, vol. 200, pages 6
ROPERO, S. ET AL., NATURE, vol. 200, pages 6
SALMENA ET AL., CELL, vol. 133, 2008, pages 403 - 414
SALMENA, L.; CARRACEDO, A.; PANDOLFI, P. P., CELL, vol. 133, 2008, pages 403 - 414
SAMUELS ET AL., SCIENCE, vol. 304, 2004, pages 554
SAMUELS, Y. ET AL., SCIENCE, vol. 304, 2004, pages 554
See also references of EP2762148A4
TAKIZAWA ET AL., CHEMICAL COMMUNICATION, 2008, pages 1677 - 1679
TAKIZAWA ET AL., HETEROCYCLES, vol. 76, 2008, pages 275 - 290
TUGENDREICH ET AL., GENOME RESEARCH, vol. 11, 2001, pages 1899
TUGENDREICH, S. ET AL., GENOME RESEARCH, vol. 11, 2001, pages 1899
UEDA ET AL., J. ANTIBIOTICS, vol. 47, 1994, pages 301
UEDA, H. ET AL., THE JOURNAL OF ANTIBIOTICS, vol. 47, 1994, pages 301
WALKER ET AL., MOLECULAR CELL, vol. 6, 2000, pages 909 - 919
WALKER, E. H. ET AL., MOLECULAR CELL, vol. 6, 2000, pages 909 - 919
WANG C. ET AL.: "Thailandepsins: bacterial products with potent histone deacetylase inhibitory activities and broad-spectrum antiproliferative activities", JOURNAL OF NATURAL PRODUCTS, vol. 74, no. 10, 27 July 2011 (2011-07-27), pages 2031 - 2038, XP055149021, Retrieved from the Internet <URL:http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/np200324x> *
WOZNIAK ET AL., HAEMATOLOGICA, vol. 95, 2010, pages 613
WOZNIAK, M. B. ET AL., HAEMATOLOGICA, vol. 95, 2010, pages 613
XU ET AL., ONCOGENE, vol. 26, 2007, pages 5541 - 5552
XU, W.; PARMIGIANI, R.; MARKS, P., ONCOGENE, vol. 26, 2007, pages 5541 - 5552

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014115859A3 (ja) * 2013-01-25 2014-10-16 オンコリスバイオファーマ株式会社 分子標的併用腫瘍治療・予防薬
WO2017122822A1 (ja) * 2016-01-13 2017-07-20 国立大学法人東北大学 デプシペプチド類化合物の製造中間体及びその製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
JPWO2013047509A1 (ja) 2015-03-26
EP2762148B1 (en) 2017-12-27
EP2762148A4 (en) 2015-10-28
US20140235821A1 (en) 2014-08-21
US9963482B2 (en) 2018-05-08
JP6214397B2 (ja) 2017-10-18
EP2762148A1 (en) 2014-08-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Guo et al. Arctigenin, a novel TMEM16A inhibitor for lung adenocarcinoma therapy
US11723947B2 (en) Anti-senescence compounds and uses thereof
US20100092479A1 (en) Compositions and methods for treatment of viral diseases
JP2021176819A (ja) キナゾリン化合物を有効成分とする医薬組成物
TWI697329B (zh) 血液癌症治療用之醫藥及其用途
Ding et al. Alantolactone selectively ablates acute myeloid leukemia stem and progenitor cells
US11260062B2 (en) Pharmaceutical composition for treatment of lung cancer comprising glucocorticoid-based compound
JP6214397B2 (ja) 新規ホスファチジルイノシトール３キナーゼ阻害剤及び医薬組成物
CN115429805A (zh) 一种抗flt3-itd耐药突变型急性髓系白血病药物
Toyota et al. Novel protein kinase cAMP-Activated Catalytic Subunit Alpha (PRKACA) inhibitor shows anti-tumor activity in a fibrolamellar hepatocellular carcinoma model
WO2021178663A1 (en) Compositions and methods for treatment of platinum-based chemotherapeutic resistant tumors
Sun et al. The mechanism of UNC-51-like kinase 1 and the applications of small molecule modulators in cancer treatment
US20200253891A1 (en) Method of Liver Cancer Treatment with Safranal-Based Formulations
CN102198139B (zh) 具有抗肿瘤作用的药物组合物及其应用
She et al. Discovery of novel organoarsenicals as robust thioredoxin reductase inhibitors for oxidative stress mediated cancer therapy
EP3969027B1 (en) Polypeptides for treatment of cancer
JP2024514958A (ja) ユビキチン特異的ペプチダーゼ２２（ｕｓｐ２２）の阻害剤、並びに疾患及び障害の治療のためのその使用
US11091517B2 (en) Peptide derivative and pharmaceutical composition containing same
CN109862903A (zh) 治疗性sall4肽
KR101921676B1 (ko) Tesk1 억제제를 포함하는 항암제 내성 억제용 조성물 및 tesk1 억제제의 스크리닝 방법
Li et al. TAS-102 has a tumoricidal activity in multiple myeloma
Isgor et al. In vitro and in silico cytotoxicity evaluation of some isatin Mannich bases on human melanoma cells
KR102152977B1 (ko) 암 예방 또는 치료용 펩타이드 및 이를 포함하는 약학적 조성물
EP3459551A1 (en) Use of arsenic trioxide in the prevention or treatment of diseases associated with type i interferon system activation
US20220220153A1 (en) B-catenin/b-cell lymphoma 9 protein-protein interaction inhibiting peptidomimetics

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 12835791

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2013536294

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 14348799

Country of ref document: US

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2012835791

Country of ref document: EP