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WO2013015519A1 - 비타민나무 잎으로부터 분리한 이소람네틴-3-글루코시드-7-람노시드를 유효성분으로 함유하는 항산화용 조성물 - Google Patents

비타민나무 잎으로부터 분리한 이소람네틴-3-글루코시드-7-람노시드를 유효성분으로 함유하는 항산화용 조성물 Download PDF

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Publication number
WO2013015519A1
WO2013015519A1 PCT/KR2012/004319 KR2012004319W WO2013015519A1 WO 2013015519 A1 WO2013015519 A1 WO 2013015519A1 KR 2012004319 W KR2012004319 W KR 2012004319W WO 2013015519 A1 WO2013015519 A1 WO 2013015519A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
glucoside
active ingredient
rhamnoside
present
composition
Prior art date
Application number
PCT/KR2012/004319
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
김명조
박주희
김대성
김도훈
한상노
Original Assignee
삼성생약주식회사
강원대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 삼성생약주식회사, 강원대학교 산학협력단 filed Critical 삼성생약주식회사
Publication of WO2013015519A1 publication Critical patent/WO2013015519A1/ko

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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/351—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom not condensed with another ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • Antioxidant composition containing isoramnetine-3-glucoside-7-rhamnoside isolated from the leaves of vitamin tree as an active ingredient
  • the present invention relates to an antioxidant composition containing isoramnetine-3 ⁇ glucoside-7-rhamnoside isolated from the leaves of the vitamin tree as an active ingredient.
  • Living organisms have many metabolisms of decomposition and synthesis during life activities, and thus active oxygen that collectively refers to oxygen compounds such as super oxide anion radical and singlet oxygen is frequently generated. Done.
  • the main generation of free radicals is known that oxygen taken by the respiratory process is produced by electron transport system, fatty acid metabolism of peroxysomes, and phagocytic cells. Free radicals are reduced by metal catalysts such as iron and copper to form hydrogen peroxide, and also become highly reactive hydroxy radicals. It is known to produce.
  • antioxidant enzyme S0D Superoxide dismutase
  • S0D Superoxide dismutase
  • free radicals increase lipid peroxide, which causes various diseases such as myocardial infarction, arteriosclerosis, diabetes, cancer, stroke, high blood pressure and senile dementia. , Spots, freckles and wrinkles may occur.
  • antioxidants and active oxygen scavengers such as butyl ated hydroxy anisole (BHA), butyl ated hydroxy toluene (BHT), a-tocopherol, ascorbic acid, cysteine and glutathione , are known. have.
  • antioxidants are chemically synthesized products, there is a problem in that the safety of the human body remains when a large amount thereof is used.
  • these antioxidants are themselves oxidized through the process of reducing the counterpart to produce by-product oxides, in which case, by-products are concerned about the stability of the by-products to the human body.
  • natural antioxidants have no safety concerns, so researches on natural antioxidants are being actively conducted.
  • Flavonoids are polyphenol compounds with inherent properties that are involved in plant color and flavor and are known to act as a defense against attack by pathogens and stratum. Flavonoids are also known as anti-oxidants, anti-viruses, anti-inflammatory and anti-allergic agents.
  • Flavonoids can be divided into flavonols, flavones, flavonones, anthocyanins, catechins, and bioflavans, depending on their chemical structure, among which flavonols are characterized by their characteristic skeletal polyphenyl-propane (C 6 — C 3 -C). C 3 hydrogen in 6 ) is substituted with a hydroxyl group.
  • Flavonols exist in the non-binding state, ie, in the free state, in nature, but in most cases are in the form of 0 or glycosides (Chen et al., Food chemistry, 101, 1357-1634, 2007). . About 100 such flavonol glycoside-based compounds have been found and can be classified into glycosides such as quercetin, isoramnetine and camphor according to the type of aglycone. Vitamin tree (Hippophae rhamnoides L.) is a shrub belonging to the barley family, and is called 'mountain tree', 'buckthorn barley', 'bodhi tree', etc. Also, about 100 kinds of vitamins, flavonoids, amino acids, trace elements, etc.
  • 10-468073 discloses a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of diabetes mellitus containing isoramnetine -3-0- ⁇ -D- glucoside isolated from seaweed as an active ingredient
  • isoramnetine -3-0- ⁇ -D- glucoside isolated from seaweed as an active ingredient
  • no literature has been found regarding the antioxidant, antibacterial, anticancer and anti-inflammatory properties of isoramnetine derivatives.
  • the inventors of the present invention while studying a substance for the development of antioxidant, antibacterial, anti-cancer, anti-inflammatory disease treatment, isoramnetine-3-glucoside-7-rhamnoside obtained from the extract of the vitamin tree (hereinafter referred to as IGR)
  • IGR isoramnetine-3-glucoside-7-rhamnoside obtained from the extract of the vitamin tree
  • IGR isoramnetine-3-glucoside-7-rhamnoside
  • Another object of the present invention is to provide an antioxidant health food composition containing the isolamnetine-3-glucoside-7-rhamnoside as an active ingredient.
  • Still another object of the present invention is to provide an antimicrobial pharmaceutical composition containing the isolamnetine-3-glucoside-7-rhamnoside or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer containing the isolamnetine-3-glucoside- 7-rhamnoside or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • a further object of the present invention is to provide the person Aso netin 3-glucoside 7-eu ramno prevention or health food composition for the improvement of cancer containing seeds as the active ingredient.
  • Still another object of the present invention is to provide a health food composition for preventing or treating inflammation containing the isoramnetine-3-glucoside ⁇ 7-rhamnoside as an active ingredient.
  • the present invention provides a cosmetic composition for preventing or improving aging containing an isoram netin-3-glucoside-gramnoside (IGR) compound represented by the following formula (1) as an active ingredient:
  • IGR isoram netin-3-glucoside-gramnoside
  • the present invention also provides an antioxidant health food composition containing the isoramnetine-3-glucoside-gramnoside as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for antimicrobial containing the isolamnetine-3-glucoside-7-rhamnoside or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. All .
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer containing the isolamnetine-3-glucoside-7-rhamnoside or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a health food composition for preventing or improving cancer containing the isoramnetine-3-glucoside—7-rhamnoside as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating inflammation containing the isolamnetine-3-glucosidine 7-rhamnoside or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a health food composition for preventing or treating inflammation containing the isoramnetine-3-glucoside—7-rhamnoside as an active ingredient.
  • Isoramnetine-3-glucoside-7-rhamnoside (IGR) compound represented by Formula 1 isolated from the leaf extract of the vitamin tree according to the present invention has an antioxidant, antibacterial, anticancer and anti-inflammatory effect, thus preventing aging or Cosmetic composition for improvement, health food composition for antioxidant, pharmaceutical composition for water antibacterial, pharmaceutical composition for preventing or treating cancer, health food composition for preventing or improving cancer, pharmaceutical composition for preventing or treating cancer, inflammation preventing or improving It can be usefully used as a health food composition.
  • FIG. 1 is a flow chart showing a method for preparing a compound according to the present invention.
  • Figure 2 is a view showing the immune activity effect of the compound according to the present invention.
  • the present invention provides a cosmetic composition for preventing or improving aging containing an isoramnetine-3'glucoside-7-rhamnoside (IGR) compound represented by Formula 1 as an active ingredient:
  • IGR isoramnetine-3'glucoside-7-rhamnoside
  • the compound according to the present invention has an excellent antioxidant effect (see Examples 1 and 2 and Tables 1 and 2), aging, for example, skin atrophy, collagen loss, elastic fiber loss, connective tissue loss, sallite, wrinkles It can be usefully used as a cosmetic composition for preventing or improving aging such as formation.
  • the compound of Formula 1 is a step of extracting the vitamin tree leaf extract by adding water, d ⁇ C 4 alcohol or a mixture thereof to the vitamin tree leaves (step 1); Obtaining a fraction by sequentially fractionating the vitamin tree leaf extract obtained in step 1 using water, n-nucleic acid, ethyl acetate, chloroform and butanol (step 2); and
  • Butanol fraction obtained in step 2 may be prepared by a method comprising the step of performing column chromatography using an organic solvent as the effluent solvent to separate the compound, centrifugation and purification (step 3), but It is not limited.
  • Step 3 a step-by-step look at the method for preparing the isoramnetine-3-glucoside-7-rhamnoside compound according to the present invention (see Figure 1).
  • Step 1 is a step of obtaining a vitamin tree leaf extract by adding water, (; alcohol of ⁇ ⁇ or mixtures thereof) to the vitamin tree leaves.
  • the method of obtaining the vitamin tree leaf extract of the present invention is chopped dried vitamin tree leaves into an extraction container, water, ⁇ ( : 4 alcohol or a mixture of these, and extracted by room temperature or warm
  • the process may be repeated several times.Then, the extract may be left for a certain time and then filtered through a filter paper to prepare a vitamin tree leaf methanol extract.
  • Step 2 is to sequentially extract the vitamin tree leaf extract obtained in step 1 by using water, n-nucleic acid, ethyl acetate, chloroform and butanol. Obtaining fractions.
  • Step 1 the vitamin tree leaf extract obtained in step 1 was suspended in water, and then sequentially fractionated using n-nucleic acid, ethyl acetate, chloroform and butane as extraction solvents, and then n—nucleic acid fraction, ethyl acetate fraction, and chloroform fraction. Butanol fraction and water fraction can be obtained.
  • Step 3 is a step of purifying the vitamin C leaf butanol fraction obtained in step 2 by column chromatography using an organic solvent as an outflow solvent to separate the compound and centrifugation.
  • isoramnetine-3-glucoside represented by Chemical Formula 1 by performing silica gel column chromatography using butane obtained from step 2 as a fraction eluene, acetone and methanol as a phase elution solvent.
  • the 7-rhamnoside compound can be isolated and purified.
  • the resultant 15th fraction was not completely dissolved and the sunken portion was taken out separately, centrifuged at 3000 rpm for 10 minutes at room temperature, and then the supernatant was removed and completely dried in a desiccator to give isorametine-3-glucoside.
  • the -7-rhamnoside compound was isolated and purified.
  • produced by the process for preparing a compound can be confirmed by nuclear magnetic resonance spectra (NMR), mass analysis, "melting point, infrared spectroscopy, etc.
  • FIG. The present invention also provides an antioxidant health food composition containing isoramnetine-3-glucoside-gramnoside represented by Chemical Formula 1 as an active ingredient.
  • the electron donating ability and linolenic acid automatic oxidation inhibitory activity using the DPPH method were measured.
  • the IG compound according to the present invention showed an RC 50 value of 19 zg /, as a result of measuring the DPPH electron donating ability, and showed an antioxidant activity superior to that of the synthetic antioxidant BHT (91.33 ⁇ 4 « g /) (Example 1 and Table 1). 1), the lipid peroxidation inhibitory activity was found to exhibit oxidation inhibition rates of 65.96 and 76.29% at 0.5 and 1 mg /, respectively, indicating that the oxidation of linolenic acid was inhibited at an early stage to effectively delay the progress of oxidation.
  • the present invention is islamanthine-3-glucoside-7-rhamno represented by the formula (1)
  • an antimicrobial pharmaceutical composition containing a seed or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the growth inhibitory activity of Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus and Salmonella typhi murium was measured. Growth inhibitory activity was observed in both microorganisms, The decaying microorganism Bacillus subtilis was found to exhibit excellent activity at the minimum inhibitory concentration (MIC) of 250 / m. In addition, IGR was confirmed to show proliferation inhibition at the addition of 500; «g / ⁇ against Salmonella typhimurium, the most common cause of Salmonella food poisoning (see Example 3 and Table 3). Therefore, the compound according to the present invention can be usefully used as a pharmaceutical composition for antibacterial.
  • the present invention is not only isolamnetine-3-glucoside-7-rhamnoside compound represented by Formula 1, but also a pharmaceutically acceptable salt thereof, and possible solvates, hydrates, and racemates prepared therefrom. Or includes all stereoisomers.
  • the isoramnetine-3-glucoside-7-rhamnoside compound represented by Formula 1 of the present invention may be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt, and the salt may be a pharmaceutically acceptable free acid. Acid addition salts formed by are useful.
  • Acid salts include inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid or phosphorous acid, aliphatic mono and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, hydroxy alkanoates and alkanes. Obtained from non-toxic organic acids such as dioates, aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids.
  • These pharmaceutically toxic salts include sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, metaphosphate, pyrophosphate chloride, bromide, Iodide, fluoride, acetate, propionate, decanoate, caprylate, acrylate, formate, iso ⁇ Butyrate, caprate, heptanoate, propiolate, oxalate, malonate, succinate, suverate, sebacate, fumarate, maleate, butyne-1,4-dioate, nucleic acid ⁇ 1,6 Dioate, benzoate, chlorobenzoate, methyl benzoate, dinitro benzoate, hydroxybenzoate, mesuccinic benzoate, phthalate, terephthalate, benzenesulfonate, oluenesulfonate,
  • the acid addition salts according to the invention can be prepared by conventional methods, for example, by dissolving a compound of formula 1 in an excess of an aqueous solution of an acid and dissolving the salt with a miscible organic solvent such as methanol, ethanol, acetone or acetonitrile. Can be prepared by precipitation. In addition, the same amount of isoramnetine-3-glucoside + gramnoside compound represented by the formula (1) and an aqueous acid solution or alcohol are heated, and then the mixture is evaporated to dryness or produced by suction filtration of the precipitated salt. You may.
  • Bases can also be used to make pharmaceutically acceptable metal salts.
  • Alkali metal or alkaline earth metal salts can be obtained, for example, by dissolving an excess amount of a compound in an alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the insoluble compound salt, and evaporating and drying the filtrate.
  • the metal salt it is pharmaceutically suitable to prepare sodium, potassium, or chamomile.
  • silver salts can be obtained by reacting alkali or alkaline earth metal salts with a suitable negative salt (eg, silver nitrate).
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer containing isoramnetine-3-glucoside represented by Chemical Formula 1 as 7-rhamnoside as an active ingredient.
  • the composition of the present invention can be usefully used as a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of cancer.
  • the present invention provides a health food composition for the prevention or improvement of cancer containing isoramnetine-3-glucoside-7-rhamnoside represented by Formula 1 as an active ingredient.
  • the compound according to the present invention has an excellent anticancer effect on cancer cells (see Example 4 and Table 4), the compound may be added to health foods such as foods and beverages for the purpose of anticancer. Furthermore, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating inflammation containing isoramnetine-3-glucoside-7-rhamnoside represented by Chemical Formula 1 as an active ingredient. All.
  • the present invention provides a health food composition for preventing or improving inflammation containing isoramnetine-3-glucoside-7-rhamnoside represented by Chemical Formula 1 as an active ingredient.
  • the compound according to the present invention has an excellent immune enhancing effect (see Example 5 and FIG. 2), the compound may be added to health foods such as foods and beverages for the purpose of enhancing immunity. Furthermore, the present invention requires the treatment of fungal infection (antibacterial) in a therapeutically effective amount of isoramnetine-3-glucoside-7-rhamnoside or a pharmaceutically acceptable salt thereof represented by Chemical Formula 1.
  • a method of treating fungal infections (antibacterial) comprising administering to a patient.
  • the present invention comprises the step of administering to the patient in need of cancer treatment in a therapeutically effective amount of isoramnetine-3-glucoside-7-rhamnoside or a pharmaceutically acceptable salt thereof represented by the formula (1) It provides a method of treating cancer comprising a.
  • the present invention is administered to a patient in need of inflammatory treatment in a therapeutically effective amount of isoramnetine-3 ⁇ glucoside-7-rhamnoside represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • a method for the treatment of inflammation comprising the steps of: •
  • the term "prevention” refers to any action that inhibits or delays the onset of a composition by administration. In the present invention, it refers to all actions which the symptoms of the disease or improvement advantageously changed to "improve” or "" treatment "means the administration of the composition.
  • the route of administration of the composition of the present invention is oral or parenteral via all common routes as long as the target tissue can be reached.
  • the composition may be administered by any device that allows the active substance to migrate to the target cell, when formulating the composition, commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, It is prepared using diluents or excipients such as disintegrants and surfactants.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, patients, powders, granules, capsules, troches and the like, and such solid detergents contain at least one excipient such as starch, carbonated It is prepared by mixing scabies, sucrose or lactose or gelatin. Also, in addition to simple excipients Lubricants such as magnesium styrate talc are also used.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, solutions, emulsions, or syrups.In addition to the commonly used simple diluents, water and liquid paraffin, various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives are available. May be included.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories, and the like.
  • non-aqueous solvent and the suspending solvent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as eurib oil, injectable esters such as ethyl acrylate, etc. may be used.
  • a suppository base witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin, glycerol, gelatin, and the like can be used.
  • composition according to the invention is administered in a pharmaceutically effective amount.
  • pharmaceutically effective amount means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, the effective dose level is the type of disease, severity, drug Activity, sensitivity to drug, time of administration, route of administration and rate of administration, duration of treatment, factors including concurrent use of drugs, and other factors well known in the medical arts. It may be administered in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with conventional treatments, and may be single or multiple administrations. It is important to administer an amount that can be, which can be readily determined by one skilled in the art.
  • the effective amount of the compound according to the present invention may vary depending on the age, sex and weight of the patient, and generally 0.1 to 100 mg, preferably 0.5 to 10 mg daily or every other day or 1 It can be administered in 1 to 3 times a day.
  • the dose may be increased or decreased depending on the route of administration, the severity of obesity, sex, weight, age, etc., the above dosage does not limit the scope of the present invention in any way.
  • Examples of foods to which the substance may be added include dairy products, including drinks, meats, sausages, breads, biscuits, rice cakes, chocolates, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, 3 ⁇ 4, ice cream, There are various soups, beverages, alcoholic beverages and vitamin complexes, dairy products and dairy products, and include all dietary supplements in the usual sense.
  • the isoramnetine-3-glucoside-7-rhamnoside compound of the present invention may be added to a food product as it is or used with other foods or food ingredients, and may be suitably used according to a conventional method.
  • the combined amount of the active ingredient can be suitably determined depending on the purpose of use (prevention or improvement).
  • the amount of the compound in the dietary supplement may be added at 0.1 to 90 parts by weight of the total food weight.
  • the amount may be below the above range, and the active ingredient may be used in an amount above the above range because there is no problem in terms of safety. .
  • the health food composition according to the present invention is a beverage composition
  • additional ingredients such as various flavors or natural carbohydrates, such as ordinary drinks It may contain as.
  • natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose and the like; And sugars such as polysaccharides, for example, conventional sugars such as textine, cyclotextine, and the like, and xylyl, sorby, and erythritol.
  • natural flavoring agents tau martin, stevia extract (e.g., Rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring crabs (saccharin, aspartame, etc.) can be advantageously used.
  • the proportion of said natural carbohydrates is generally about 1 to 20 g, preferably about 5 to 10 g per 100 compositions of the present invention.
  • the health food composition according to the present invention is a flavor, such as various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), synthetic flavors and natural flavors, coloring and neutralizing agents (such as cheese, chocolate), pectic acid and salts thereof And alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH regulators, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated drinks and the like. Others may contain pulp for the production of natural fruit juices and fruit juice beverages and vegetable beverages.
  • Antioxidant cosmetic composition according to the present invention includes, but is not limited to, lotions, ointments, gels, creams, patches or sprays. In the preparation of the antioxidant cosmetic composition according to the present invention, 1 to 15 parts by weight, preferably 2, of the isoramnetine-3-glucoside-7-rhamnoside compound of the present invention is contained in a composition for external application for skin. Or 10 parts by weight.
  • the external preparation for skin may include fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickeners and gelling agents, emollients, antioxidants, suspending agents and stabilizers. , Foaming agents, fragrances, surfactants, water, ionic or nonionic emulsifiers, fillers, metal ion sequestrants and chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic Or adjuvants commonly used in the field of dermatology, such as lipophilic actives, lipid vesicles, or any other ingredients conventionally used in external preparations for skin. The ingredients can also be introduced in amounts generally used in the field of dermatology.
  • Step 3 Isolation of Isolamnetine-3—Glucoside-7—Rhamnoside (IGR) from Vitamin Leaf
  • the DPPH electron donating ability showed a RCso value of 19 g / i, indicating that the antioxidant activity was superior to that of the synthetic antioxidant BHT (91.3 g / ffl «).
  • the compound may be usefully used as a pharmaceutical composition for antioxidant.
  • linolenic acid autooxidation inhibitory activity was measured by modifying Haraguchi (1992) method. Samples of 0.1, 0.5, 1, / 11! £ Concentration was prepared and a-tocophere, BHA, BHT was used as a control. Take a sample of 30 ⁇ , add 2.51% linolenic acid 400 and 0.04M phosphate buffer solution 800 ⁇ in ethanol, distilled water in turn and repeat the reaction for 24 hours at 55 ° C dark conditions. The absorbance was measured at 500 nm by mixing 75% ethane, 100% of ammonium thiocyanate and 100% of 0.02M ferrous chloride in a reaction mixture. Inhibitory effect was calculated by the following equation 1, the results are shown in Table 2 below.
  • the compound according to the present invention was found to exhibit oxidation inhibition rates of 65.96 and 76.29% at 0.5 and 1 mg / i, respectively, and inhibited oxidation of linolenic acid at an early stage. Since it appears to effectively delay the progress of oxidation, it can be usefully used as a pharmaceutical composition for antioxidant. '
  • Example 3 Antimicrobial Activity Measurement In order to measure the antimicrobial activity of the compounds of the present invention, antimicrobial activity was investigated according to the serial 2-fold dilution method of Kobayasi et al. (1996). Antibacterial tests for bacteria include Gram-positive Bacillus subt i 1 is (KTCT 1021), Staphylococus aureus (KTCT 1916) and Gram-negative bacteria (KTCT 2208), Salmonella typhimu Salmonella typhi murium (KTCT 1925), Yeast strain Candida albicans (KTCT 7965) and Pidiia jadinii (KTCT 7293) were used.
  • KTCT 1021 Gram-positive Bacillus subt i 1 is (KTCT 1021), Staphylococus aureus (KTCT 1916) and Gram-negative bacteria (KTCT 2208), Salmonella typhimu Salmonella typhi murium (KTCT 1925), Yeast strain Candida albicans (KTCT 7965) and Pidiia jadin
  • test bacteria were passaged at monthly intervals, and the bacteria were cultured in micrococcus and nutrient and YM medium, and the cell suspensions were inoculated in a 25 ⁇ diameter test tube by 25 ⁇ 26, 30 and After incubation at 37 ° C for 24 hours, the OD value was measured and diluted 100-fold and used for antibacterial test.
  • the extract and the fraction compound were placed in the first sphere of a 96 well micro assay plate, and the prepared cell suspension was aliquoted twice. The growth of the bacteria was visually observed by culturing in a dark condition for 24 hours at moderate temperature (25, 26, 30 ' and 37 ° C). Antimicrobial activity was determined by the minimum inhibitory concent rat ion (MIC). The results are shown in Table 3 below.
  • the compound of the present invention showed growth inhibitory activity in both microorganisms of bacteria and yeast, in particular, in the case of decayed microorganism Bacillus subtilis ( ⁇ subtilis) ⁇ ⁇ , the lowest inhibitory concentration of 250 / ig / i It was found to show excellent activity in (MIC).
  • IGR was found to show proliferation inhibition in the addition of 500 zg / i to Salmonella typhimurium, the most common cause of Salmonella food poisoning. Therefore, the compound according to the present invention can be usefully used as an antimicrobial composition.
  • the cancer cell lines used in this experiment were HCT-116, a human colorectal cancer cell line, AGS and lung cancer cell line, NCI-H1299, which were distributed from Korea Cell Line Bank and added 1OT fetal bovine serum (FBS). RPMI 1640 medium , 37 ° C , 5% C02 times Subsequent passages were used in the experiment. Cancer cell lines grown to monomolecular membranes were treated with 0.253 ⁇ 4 trypsin-EDTA solution to make single cells, diluted to a final cell concentration of 3> 04 cells /, and then dispensed at 100 ⁇ for each well in a 96-well plate, followed by 37 ° C. After culturing for 24 hours in a 5% C0 2 incubator, the sample was added and cultured again for 24 hours, and then the degree of cell growth was measured by WST-1 activity screening.
  • the compound of the present invention showed no growth inhibitory ability against human normal kidney cells 293 at a concentration of 50 yg / ml, and cell viability of 69.39 and 50.75> for colon cancer cells and gastric cancer cells, respectively. Indicated. In particular, the survival rate of lung cancer cell line NCI-H1299 was 13.2%, indicating that the growth inhibitory effect on lung cancer cell line was very high. Therefore, the composition of the present invention can be usefully used as a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of cancer. ⁇
  • lymphocytes one of leukocytosis in blood
  • ATK AutoIogous Tumor-killing Activity
  • Activation of lymphocytes in K562 cell line The reactions were also measured simultaneously for the positive control (picibani 1X0K-432) and interleukin 2 (IL-2). The results are shown in Figure 2.
  • the IGR compound according to the present invention was confirmed to exhibit a higher immune activity than the untreated group. Therefore, it can be usefully used as a pharmaceutical composition for preventing or treating inflammation.
  • the isoramnetine-3-glucoside-7-rhamnoside (IGR) compound represented by Chemical Formula 1 according to the present invention may be formulated in various forms according to the purpose. The following are some examples of formulation methods containing the compound represented by Formula 1 according to the present invention as an active ingredient, but the present invention is not limited thereto.
  • tablets were prepared by tableting according to a conventional method for preparing tablets.
  • the capsules were prepared by layering on gelatin according to a conventional method for preparing capsules.
  • an injectable was prepared by combining the above components with the indicated contents.
  • Production Example 2 Preparation of Health Food
  • composition ratio of the above-mentioned vitamin and mineral mixtures is mixed with a component suitable for a health food in a preferred embodiment, but the compounding ratio may be arbitrarily modified, and the above ingredients may be mixed according to a conventional health food manufacturing method.
  • the above ingredients were mixed according to the general method for preparing a health beverage, and then stirred and heated at 85 for about 1 hour, and then the resulting solution was filtered and obtained in 21 sterilized containers and sealed and sterilized. Refrigerated and used to prepare a healthy beverage composition.
  • composition ratio is a relatively suitable composition for the preferred beverage in a preferred embodiment, but according to the regional and ethnic preferences such as the demand hierarchy, the demand country, the intended use, etc.
  • the compounding ratio may be modified arbitrarily.
  • Cetostearyl alcohol 1.6 parts by weight stearic acid 1.4 parts by weight lipophilic monostearate glycerine 1.8 parts by weight page -100 stearate 2.6 parts by weight sesquierlane sorbate 0.6 parts by weight squalene 4.8 parts by weight macadamia oil 2 parts by weight jojoba oil 2 0.4 parts by weight of methyl polysiloxane 0.2 parts by weight of chilparaben 0.1 part by weight of propylparaben 0.1 part by weight 1,3-butylene glycol 4 parts by weight 0.1 parts by weight of methyl paraben
  • the present inventors prepared a feed additive with the following composition using the IGR compound as an active ingredient.
  • IGR Compound 0.1 to 20% by weight Lipose 0.001 to 0.01% by weight Tribasic calcium phosphate . 1 to 20% by weight
  • Isoramnetine-3-glucoside-7-rhamnoside (IGR) compound represented by Formula 1 isolated from the leaf extract of the vitamin tree according to the present invention has an antioxidant, antibacterial, anticancer, anti-inflammatory effect, thus preventing aging Cosmetic composition for improvement, health food composition for antioxidant, pharmaceutical composition for antibacterial, pharmaceutical composition for prevention or treatment of cancer Health food composition for prevention or improvement of cancer, pharmaceutical composition for prevention or treatment of inflammation, prevention or improvement of inflammation It can be usefully used as a health food composition for.

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Abstract

본 발명은 비타민나무 잎으로부터 분리한 이소람네틴-3-글루코시드-7-람노시드를 유효성분으로 함유하는 항산화용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 비타민나무의 잎 추출물로부터 분리된 이소람네틴-3-글루코시드-7-람노시드(IGR) 화합물은 항산화, 항균, 항암, 항염증 효과가 있으므로, 노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물, 항산화용 건강식품 조성물, 항균용 약학적 조성물, 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 암의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물, 염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 염증 예방 또는 개선용 건강식품 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

【명세서】
【발명의 명칭】
비타민나무 잎으로부터 분리한 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드를 유효 성분으로 함유하는 항산화용 조성물
【기술분야】
본 발명은 비타민나무 잎으로부터 분리한 이소람네틴 -3ᅳ글루코시드 -7—람노시 드를 유효성분으로 함유하는 항산화용 조성물에 관한 것이다.
【배경기술】
생명체는 생명활동을 하면서 분해 및 합성의 많은 대사작용을 하게 되고， 이 에 따라 수퍼옥사이드 음이온 라디칼 (super oxide anion radical) 및 일중항 산소 (singlet oxygen)와 같은 산소화합물을 총칭하는 활성산소가 자주 발생하게 된다. 활성산소의 주요 발생은 호흡과정에 의해 취한 산소가 전자전달계， 퍼옥시좀 (peroxys에] e)의 지방산 대사과정, 포식세포 등의 활동으로 생성되는 것으로 알려져 있다. 활성산소는 철이나 구리 등의 금속 촉매에 의해 환원되어 과산화수소가 되 고, 또한 반웅성이 높은 히드록시라디칼이 되어， 단백질의 변성， DNA 사슬의 절단 또는 지질을 산화시킴으로써 노화 촉진인자인 과산화 지질을 생성하는 것으로 알려 져 있다. 스트레스나 음주, 심한 운동， 고령화 등의 다양한 요인에 의해서 생체의 밸런스가 무너지면， 항산화 효소인 S0D(Superoxide dismutase)가 감소하고 활성산 소에 의해서 과산화 지질이 증가하므로， 심근경색， 동맥경화， 당뇨병 , 암， 뇌졸중， 고혈압 및 노인성 치매 등의 각종 질병을 초래하거나， 기미， 주근깨 및 주름 등이 생길 수 있다. 이러한 활성산소 유래의 각종 질병 등을 개선하는 물질로서， BHA (부틸 ated Hydroxy Anisole), BHT (부틸 ated Hydroxy Toluene), a-토코페롤， 아스코르브산, 시스테인， 글루타티온'등의 항산화제나 활성산소 소거제가 알려져 있다. 그러나 이러한 항산화제 등은 화학합성품이므로 이들을 다량으로 상용할 경 우에는 인체에 대한 안전성에 의문이 남는다는 문제가 있다. 또한, 이들 항산화제 는 상대방을 환원시키는 과정을 통하여 자신이 산화되어 부생성 산화물을 생성하 고， 이때, 부생성 산화물의 인체에 대한 안정성이 우려되는 실정이다. 반면， 천연 항산화제는 안전성에 대한 우려가 없으므로 천연 항산화제에 대한 연구가 활발하게 일어나고 있다. 플라보노이드는 고유의 특성을 가진 폴리페놀 화합물로서 식물의 색과 풍미 에 관여하며 병원체와 곤층들의 공격에 대한 방어 기능을 하는 것으로 알려져 있 다ᅳ 또한 플라보노이드는 대표적인 항산화제로 항암， 항바이러스， 항염， 항알러지 등의 활성을 나타내며 사람과 동물의 건강에 유익한 영향을 미치는 물질로 주목받 고 있다 (Deshner et al . , Carciogenisi s, 7, 1193-1196, 1991； Hwang , Journal of veterinary clinics, 26(5), 413—418， 2009； Lee C. H. et al., Food Chemistry, 99(3), 591-599, 2006). 플라보노이드는 화학구조에 따라서 플라보놀， 플라본, 플라보논， 안토시아 닌， 카테킨， 바이오플라반 등으로 나눌 수 있는데 이 중 플라보놀은 이들의 특징적 인 골격 다페닐-프로판 (C6— C3-C6)의 C3 수소가 하이드록실기로 치환되어 있는 형태이 다. 플라보놀은 자연계에서 비결합 상태， 즉 유리상태 (free state)로 존재하기도 하나 대개의 경우 0一 나 글리코사이드의 형태로 존재한다 (Chen et al. , Food chemistry, 101， 1357-1634, 2007). 이러한 플라보놀 글리코사이드계 화합물은 현 재 100여 종이 밝혀졌으며 아글리콘의 종류에 따라 쿼세틴， 이소람네틴 및 캄페를 등의 글리코사이드로 분류할 수 있다. 비타민나무 (Hippophae rhamnoides L.)는 보리수과에 속하는 관목으로서 '산 자나무' ， '갈매보리수나무' ， '보리수아재비' 등으로 불리고， 또한, 비타민, 플라 보노이드， 아미노산, 미량원소 등 100여 종 이상의 풍부한 유효성분을 포함하고 있 다. 최근 열매, 잎， 수피 등의 뛰어난 영양학적 가치와 생리활성을 활용한 기능성 제품개발에 많은 관심이 집중되면서 전 세계적으로 재배 면적이 점차 확대되어 가 고 있다. 이중， 많은 연구가 이루어진 부위는 열매로 폴리페놀, 토코페놀， 카로테노이 드 등 항산화 물질이 풍부하고 (Kim K. M. et al. , Journal of Applied Biological chemistry, 52(2), 58-64, 2009) , 항산화 효소인 SOD 동질효소 (superoxide dismutase isoenzyme)의 작용으로 뛰어난 항산화 효과를 나타내는 것으로 보고되었 다ᅳ 또한， 열매에서 추출한 오일은 인체 면역 기능을 높이고， 피부질환， 호흡질환， 소화기계통 질환에 사용되며, 칼에 베이거나， 화상, 염증치료에 효과가 뛰어난 것 으로 알려져 있다 (Ge X. Y. et al. , Shanxi Med Res, 2， 9-14, 1985； Xing JF et al. , Fitoterapia, 73, 644-650, 2002； Xu MY, et al. , Hippopha e , 7(3)， 32—40， .1994； Yang B. et al . , The Journal of Nutritional Biochemistry, 11， 338-340, 2000). 나아가， 비타민나무 잎은 항산화， 항미생물， 항바이러스, 항종양 활성 등이 보고되어 있으며 (Geetha et al. , J. Ethnopharmacol , 79， 373-378, 2002； Tsybikava et al., biology, Chemistry and Pharmacology of Seabuckthorn. Novosibirsk. , 107—109， 1983) , 관절염 유도 처리된 래트 모델에서 우수한 항염증 활성올 나타내 관절염 치료제로의 개발 가능성이 제시되었다 (Ganjua et al .，. International Imwunopharmaco logy, 5, 1675-1684, 2005) . 한편， 대한민국 공개특허 제 2009-010283호에서는 피부노화를 개선하기 위한 플라바논 화합물 함유 조성물을 개시하고 있고， 대한민국 공개특허 게 2010-134973 호에서는 7-0-글루코스 -나린제닌의 항암제로서의 용도를 개시하고 있고， 대한민국 등록특허 제 10-468073호에서는 함초로부터 분리된 이소람네틴 -3-0- β-D-글루코시드 를 유효성분으로 함유하는 당뇨병의 예방 및 치료를 위한 약학조성물을 개시하고 있으나, 아직까지 이소람네틴 유도체의 항산화， 항균， 항암 및 항염증과 관련된 문 헌은 발견되지 않았다. 이에， 본 발명자들은 항산화， 항균， 항암， 항염증 질환 치료제를 개발을 위 한 물질을 연구하던 중， 비타민나무의 잎 추출물로부터 얻은 이소람네틴 -3-글루코 시드 -7-람노시드 (이하 IGR로 칭함) 화합물이 항산화， 항균， 항암， 항염증 효과가 있음을 확인하고， 항산화용 조성물뿐만 아니라 항균용 조성물, 항암용 조성물 및 항염증 조성물로 유용하게 사용될 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
【발명의 상세한 설명】
[기술적 과제] 본 발명의 목적은 이소람네틴 -3-글루코시드— 7—람노시드 (IGR) 화합물을 유효 성분으로 함유하는 노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드를 유효성 분으로 함유하는 항산화용 건강식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항균용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 이소람네틴 -3—글루코시드— 7-람노시드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은 상기 아소람네틴 -3-글루코시드ᅳ 7-람노시드를 유효 성분으로 함유하는 암의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을'제공하는 것이다. 본 발명의 다른 목적은 상기 이소람네틴 -3-글루코시드ᅳ그람노시드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 이소람네틴 -3-글루코시드ᅳ 7-람노시드를 유효 성분으로 함유하는 염증 예방 또는 치료용 건강식품 조성물을 제공하는 것이다.
【기술적 해결방법】
상기 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 이소람 네틴 -3-글루코시드 -그람노시드 (IGR) 화합물을 유효성분으로 함유하는 노화 예방 또 는 개선용 화장료 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure imgf000008_0001
또한， 본 발명은 상기 이소람네틴 -3-글루코시드-그람노시드를 유효성분으로 함유하는 항산화용 건강식품 조성물을 제공한다.
나아가， 본 발명은 상기 이소람네틴 -3—글루코시드 -7—람노시드 또는 이의 약 학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항균용 약학적 조성물을 제공한 다 .
또한， 본 발명은 상기 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드 또는 이의 약학 적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조 성물을 제공한다 .
나아가， 본 발명은 상기 이소람네틴 -3-글루코시드— 7-람노시드를 유효성분으 로 함유하는 암의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.
또한， 본 발명은 상기 이소람네틴 -3-글루코시 드ᅳ 7—람노시드 또는 이의 약학 적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 염증 예방 또는 치료용 약학적 조 성물을 제공한다 .
나아가， 본 발명은 상기 이소람네틴 -3-글루코시드— 7-람노시드를 유효성분으 로 함유하는 염증 예방 또는 치료용 건강식품 조성물을 제공한다.
【유리 한 효과】
본 발명 에 따른 비타민나무의 잎 추출물로부터 분리된 화학식 1로 표시 되는 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드 ( IGR) 화합물은 항산화， 항균， 항암， 항염증 효과가 있으므로 , 노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물， 항산화용 건강식품 조성 물 항균용 약학적 조성물， 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물， 암의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물， 염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물 , 염증 예방 또는 개선용 건강식품 조성물로 유용하게 사용될 수 있다 .
【도면의 간단한 설명】 도 1은 본 발명에 따른 화합물의 제조방법을 나타내는 흐름도이다.
도 2는 본 발명에 따른 화합물의 면역활성 효과를 나타내는 도면이다.
【발명의 실시를 위한 최선의 형태】
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
'본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3ᅳ글루코시드 -7-람노시드 (IGR) 화합물을 유효성분으로 함유하는 노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제 공한다:
【화학식 1】
Figure imgf000010_0001
본 발명에 따른 화합물은 항산화 효과가 우수하므로 (실시예 1， 2 및 표 1， 2 참조), 노화， 예를 들면， 피부 위축, 콜라겐 손실， 탄성 섬유손실， 결합 조직 손 실， 샐를라이트, 주름 형성 등의 노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다. 상기 화학식 1의 화합물은 비타민나무 잎에 물, d~C4의 알코올 또는 이들의 흔합물을 가하여 비타민나무 잎 추출물을 추출하는 단계 (단계 1); 상기 단계 1에서 얻은 비타민나무 잎 추출물을 물, n-핵산, 에틸아세테이트, 클로로포름 및 부탄올를 이용하여 순차적으로 분획하여 분획물을 얻는 단계 (단계 2)； 및
상기 단계 2에서 수득한 부탄올 분획물을 유기용매를 유출용매로 사용하는 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화합물을 분리하고， 원심분리하여 정제하는 단계 (단계 3)를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있으나， 이에 한정하지 않는다. 이하， 본 발명에 따른 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드 화합물의 제조하 는 방법을 단계별로 살펴본다 (도 1 참조). 상기 단계 1은 비타민나무 잎에 물, (；广^의 알코을 또는 이들의 흔합물을 가 하여 비타민나무 잎 추출물을 수득하는 단계이다.
상기 단계에 있어서， 본 발명의 비타민나무 잎 추출물을 얻는 방법은 건조된 비타민나무 잎을 세절하여 추출용기에 넣고, 물， ~(：4의 알코올 또는 이들의 흔합 물을 넣어 상온 또는 가온하여 추출하여 추출액을 얻는다. 비타민나무 잎의 추출 효율을 높이기 위하여 상기 과정올 수회 반복 수행할 수 있다. 이후， 상기 추출액 을 일정 시간 동안 방치 한 다음 거름종이 등으로 여과하여 비타민나무 잎 메탄올 추출물을 제조할 수 있다. 상기 단계 2는 단계 1에서 얻은 비타민나무 잎 추출물을 물, n-핵산， 에틸아 세테이트, 클로로포름 및 부탄올를 이용하여 순차적으로 분획하여 비타민나무 잎 분획물을 얻는 단계이다.
구체적으로 상기 단계 1에서 얻은 비타민나무 잎 추출물을 물에 현탁시킨 후， 추출용매로서 n-핵산, 에틸아세테이트, 클로로포름 및 부탄을를 사용하여 순차 적으로 분획하여 n—핵산 분획물， 에틸아세테이트 분획물， 클로로포름 분획물， 부탄 올 분획물 및 물 분획물을 얻을 수 있다. 상기 단계 3은 상기 단계 2에서 수득한 비타민나무 잎 부탄올 분획물을 유기 용매를 유출용매로 하는 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화합물을 분리하고, 원심 분리하여 정제하는 단계이다.
구체적으로， 상기 단계 2로부터 얻은 부탄을 분획물을 를루엔， 아세톤 및 메 탄올을 단계별로 기을기 용출용매로 이용하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피를 수행 하여 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드 화합물을 분리， 정 제할 수 있다. 실리카젤을 유리 컬럼에 층전시키고 를루엔， 아세톤， 메탄올을 이동 상으로 하는 10 단계의 스텝와이즈법 (stepwise) (를루엔 100%， 를루엔 /아세톤 =9/1, 를루엔 /아세톤 =8/2， 를루엔 /아세톤 =6/4， 를루엔 /아세톤 =2/8, 아세톤 100%, 아세 톤 /메탄올 =9/1， 아세톤 /메탄을 =8/2， 아세톤 /메탄올 =5/5， 메탄올 100%)으로 20개의 소획분을 얻었다. 그 결과 얻어진 15번째 소획분에 완전히 용해되지 않고 가라앉은 부분을 따로 취하여 실온조건에서 3000 rpm으로 10분 간 원심분리 한 후 상등액을 제거하고 데시케이터에서 완전히 건조시켜 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드 화 합물을 분리， 정제하였다. 또한, 상기 제조방법으로 제조된 화합물은 핵자기공명스펙트럼 (NMR), 질량분 석，'녹는점， 적외선 분광도 등으로 확인할 수 있다. 또한， 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3-글루코시드-그람노 시드를 유효성분으로 함유하는 항산화용 건강식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 화학식 1의 화합물의 항산화 활성을 측정하기 위하여 DPPH법을 이 용한 전자 공여능 및 리놀렌산 자동 산화 저해활성을 측정하였다. 본 발명에 따른 IG 화합물은 DPPH 전자 공여능의 측정결과， 19 zg/ 의 RC50 값을 나타내어 합성 항산화제인 BHT(91.3¾«g/ )보다 우수한 항산화 활성을 나타내는 것으로 확인되었 고 (실시예 1 및 표 1 참조)， 지질과산화 저해활성 측정결과， 0.5 및 1 mg/ 에서 각각 65.96과 76.29%의 산화 억제율을 나타내는 것으로 확인되어 리놀렌산의 산화 를 초기단계에서 억제하여 산화의 진행을 효과적으로 지연시키는 것으로 나타나므 로 (실시예 2 및 표 2 참조)， 삭품 음료 등의 항산화용 건강식품 조성물로 유용하 게 이용될 수 있다, 또한， 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노 시드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항균용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 화합물의 항균 활성을 측정하기 위하여 고초균 ( . subtil is) , 황 색포도상구균 (5. aureus), 살모넬라 타이피뮤리움 (5. typhi murium)^} 대하여 생육 억제 활성을 측정한 결과， 상기 두 미생물에서 생육억제 활성이 나타났으며, 특히， 부패 미생물인 고초균의 경우， 250 /m의 최저억제 농도 (MIC)에서 뛰어난 활성을 나타내는 것으로 확인되었다. 또한, IGR은 살모넬라 식중독의 가장 흔한 원인균인 살모넬라 타이피뮤리움에 대하여 500 ； «g/ηώ의 첨가구에서 증식억제를 나타내는 것 으로 확인되었다 (실시예 3 및 표 3 참조). 따라서， 본 발명에 따른 화합물은 항균 용 약학적 조성물로 유용하게 사용할 수 있다. 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드 화합물뿐만 아니라， 이의 약학적으로 허용되는 염， 이로부터 제조될 수 있는 가능 한 용매화물， 수화물， 라세미체， 또는 입체이성질체를 모두 포함한다. 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며， 염으로는 약학적 으로 허용 가능한 유리산 (free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부 가염은 염산， 질산， 인산， 황산, 브롬화수소산， 요드화수소산, 아질산 또는 아인산 과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐ᅳ치환된 알카노에이트， 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트， 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰 산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트， 피로설페이트， 바이설페이트， 설파이트， 바이설파이트, 니트레이트， 포 스페이트， 모노하이드로겐 포스페이트， 디하이드로겐 포스페이트， 메타포스페이트， 피로포스페이트 클로라이드， 브로마이드, 아이오다이드， 플루오라이드， 아세테이 트， 프로피오네이트， 데카노에이트， 카프릴레이트， 아크릴레이트， 포메이트, 이소 丄 부티레이트, 카프레이트， 헵타노에이트， 프로피올레이트， 옥살레이트， 말로네이트， 석시네이트, 수베레이트， 세바케이트, 푸마레이트， 말리에이트， 부틴 -1,4-디오에이 트， 핵산ᅳ1，6-디오에이트， 벤조에이트， 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트 로 벤조에이트， 하이드록시벤조에이트， 메특시벤조에이트， 프탈레이트， 테레프탈레 이트， 벤젠설포네이트， 를루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트， 크실렌설포네이 트, 페닐아세테이트， 페닐프로피오네이트， 페닐부티레이트， 시트레이트, 락테이트， 하이드록시부티레이트， 글리콜레이트， 말레이트， 타트레이트， 메탄설포네이트， 프 로판설포네이트， 나프탈렌 -1-설포네이트， 나프탈렌 -2-설포네이트 또는 만델레이트 를 포함한다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면， 화학식 1의 화합물을 과량의 산 수용액 중에 용해시키고， 이 염을 수흔화성 유기 용매， 예를 들면 메탄 올, 에탄올， 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 또한， 동량의 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3-글루코시드ᅳ그람노시드 화 합물 및 산 수용액 또는 알코을올 가열하고, 이어서 이 흔합물을 증발시켜서 건조 하거나 또는 석출된 염을 흡입 여과시켜 제조할 수도 있다.
또한， 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알 칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은， 예를 들면 화합물올 과량의 알칼리 금속 수산 화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과 하고, 여액을 증발， 건조시켜 얻을 수 있다. 이때， 금속염으로는 나트륨， 칼륨 또 는 칼슴염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한， 이에 대웅하는 은 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염 (예, 질산은)과 반응시켜 얻을 수 있다. 나아가， 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3-글루코시드— 7-람 노시드를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한 다.
본 발명의 화합물의 항암 활성을 측정하기 위하여 결장암 세포인 HCT-116과 위암세꿎 AGS, 폐암세포인 NCI-H1299에 본 발명의 IGR 화합물을 처리한 결과, 50 g/ml의 농도에서 인간의 정상 신장 세포인 293에 대한 성장억제력은 나타나지 않 았으며， 결장암 세포와 위암세포에 대하여 각각 69.39 및 50.75 %의 세포생존율을 나타냈다. 특히， 폐암세포주인 NCI-H1299에 대하여 13.2 ¾의 생존율을 보여 폐암 세포주에 대한 생육억제 효과가 매우 높게 나타나는 것으로 확인되었다 (실시예 4 및 표 4 참조). 따라서 , 본 발명의 조성물은 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 로 유용하게 사용될 수 있다. 또한， 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노 시드를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한 다.
본 발명에 따른 화합물은 암세포에 대하여 항암 효과가 우수하므로 (실시예 4 및 표 4 참조)， 항암을 목적으로 상기 화합물을 식품， 음료 등의 건강식품에 첨가 할 수 있다. 나아가， 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3—글루코시드 -7-람 노시드를 유효성분으로 함유하는 염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한 다.
본 발명의 화합물의 면역력 상승 활성을 측정하기 위하여 K562 세포주를 대 상으로 림프구의 활성화 정도를 측정한 결과, 본 발명에 따른 IGR 화합물은 무처리 구에 비해 높은 면역활성을 나타내는 것으로 확인되었다 (실시예 5 및 도 2 참조). 따라서， 염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다. 또한， 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3—글루코시드 -7-람노 시드를 유효성분으로 함유하는 염증 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한 다.
본 발명에 따른 화합물은 면역증강 효과가 우수하므로 (실시예 5 및 도 2 참 조), 면역의 증진을 목적으로 상기 화합물을 식품， 음료 등의 건강식품에 첨가할 수 있다. 나아가， 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람 노시드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 치료적으로 유효한 양으로 균 감염 (항균) 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 균 감염 (항균)의 치료방법을 제공한다. 또한， 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노 시드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 치료적으로 유효한 양으로 암 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 암의 치료방법을 제공한다. 나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3ᅳ글루코시드 -7-람 노시드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 치료적으로 유효한 양으로 염증 치 료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 염증의 치료방법을 제공한 다 · 본 명세서에서 사용되는 용어 "예방 "은 조성물의 투여로 발병을 억제시키거 나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 본 발명에 있어서， "개선" 또는 "'치 료"란 조성물의 투여로 상기 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위 를 의미한다.
본 발명에 있어서 "투여' '는 임의의 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 제공하는 것을 의미하며， 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 일반적인 모든 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한， 조 성물은 활성물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있 다. 상기 조성물을 제제화할 경우, 보통 사용하는 충진제， 증량제， 결합제, 습윤 제， 붕해제， 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.
경구투여를 위한 고형 제제에는 정제， 환자， 산제， 과립제， 캡슐제， 트로키 제 등이 포함되며， 이러한 고형 쎄제는 하나 이상의 본 발명로 표시되는 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면， 전분, 탄산칼슴， 수크로스 (sucrose) 또는 락토오스 (lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한， 단순한 부형제 외에 마 그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로 는 현탁제, 내용액제， 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데， 흔히 사용되는 단순 희 석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제， 예를 들면 습윤제， 감미제， 방향제， 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액， 비수성용제, 현탁용제， 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다.
비수성용제， 현탁용제로는 프로필렌글리콜， 폴리에틸렌 글리콜， 을리브 오일 과 같은 식물성 기름, 에틸을레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골， 트원 (tween) 61， 카카오지, 라우린지， 글리세를, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서， "약제학적으로 유효한 양''은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜 /위 험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며， 유효용량 수준은 환자의 질환 의 종류， 중증도， 약물의 활성， 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배 출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알 려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투 여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하 며， 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 구체적으로， 본 발명에 따른 화합물의 유효량은 환자의 나이, 성별， 체중에 따라 달라질 수 있으며， 일반적으로는 체증 1 kg당 0.1 내지 100 mg, 바람직하게는 0.5 내지 10 mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로， 비만의 중증도， 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니 다. 또한， 본 발명의 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드 화합물이 첨가되는 식 품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드 링크제， 육류， 소시지， 빵， 비스킷， 떡， 초콜릿， 캔디류， 스낵류， 과자류， 피자, 라면， 기타 면류, ¾류， 아이스크림류를 포함한 낙농제품， 각종 스프, 음료수， 알 코올 음료 및 비타민 복합제， 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며， 통상적인 의미 에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명의 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드 화합물은 식품에 그대로 첨 가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고， 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 흔합량은 그의 사용 목적 (예방 또는 개선 용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로， 건강기능식품 중의 상기 화합물 의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위 생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며， 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다. ^ 본 발명에 따른 건강식품 조성물이 음료 조성물인 경우， 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드， 예를 들어， 포도 당， 과당 등; 디사카라이드， 예를 들어 말토스， 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드， 예를 들어 텍스트린， 시클로텍스트린 등과 같은 통상적인 당， 및 자일리를， 소르비 를， 에리트리를 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (타우 마틴， 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향 미게 (사카린， 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 10 g이다.
또한， 본 발명에 따른 건강식품 조성물은 여러 가지 영양제， 비타민， 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜 릿 등)， 펙트산 및 그의 염， 알긴산 및 그의 염, 유기산， 보호성 콜로이드 증점제， pH 조절제， 안정화제， 방부제, 글리세린, 알코올， 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 제한되지 않으나 본 발명의 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드 화합물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다. 본 발명에 따른 항산화용 화장료 조성물은 로션， 연고， 겔， 크림， 패치 또는 분무제 등을 포함하나 여기에 국한되는 것은 아니다. 본 발명에 따른 항산화용 화 장료 조성물을 제조함에 있어서， 통상적으로 함유되는 피부 외용제 조성물에 본 발 명의 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드 화합물을 1 내지 15 중량부， 바람직하게 는 2 또는 10 중량부로 첨가할 수 있다. 상기 피부 외용제 조성물에는 본 발명의 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드 화합물에 추가로 지방 물질， 유기 용매 , 용해 제， 농축제 및 겔화제， 연화제， 항산화제， 현탁화제, 안정화제， 발포제 (foaming agent), 방향제， 계면활성제， 물, 이온형 또는 비이온형 유화제， 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제， 보존제， 비타민， 차단제, 습윤화제， 필수 오일， 염료， 안 료, 친수성 또는 친유성 활성제， 지질 소낭 또는 피부 외용제 조성물에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조 제를 함유할 수 있다. 또한 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되 는 양으로 도입될 수 있다.
【발명의 실시를 위한 형태]
이하， 본 발명을 실시예에 의해 상세하게 설명한다.
단， 하기 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 범위가 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
<제조예 > 비타민나무 잎으로부터 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드 (IGR) 의 분리 단계 1: 비타민나무 잎 추출물의 제조
비타민나무 잎은 삼성생약 (주)에서 재배하는 잎 1 kg을 채취하여 실온 음지 에서 7일 동안 건조한 후 세절하였다. 이를 100% 메탄올 10 £에 침지하여 실온에 서 3일간 추출한 후 (3회 반복) 감압 농축하여 조추출물 209 g을 수득하였다. 단계 2: 비타민나무 잎 분획물의 제조
상기 단계 1의 메탄올 조추출물 166 g을 증류수에 현탁시키고， n-핵산， 에틸 아세테이트 및 부탄올을 이용하고， 순차적으로 분획하여 n-핵산 분획물 29.3 g, 클 로로포름 분획물 6.1 g, 에틸아세테이트 분획물 11.2 g, n-부탄을 분획물 39.1 g 및 물 분획물 80 g을 얻었다. 단계 3: 비타민나무 잎으로부터 이소람네틴 -3—글루코시드 -7—람노시드 (IGR)의 분리
상기 단계 1에서 제조된 부탄올 분획물을 실리카겔을 유리 컬럼에 층전시키 고 를루엔， 아세톤， 메탄올을 이동상으로 하는 10 단계의 스텝와이즈법 (를루엔 100%, 를루엔 /아세톤 =9/1， 를루엔 /아세톤 =8/2， 를루엔 /아세톤 =6/4， 를루엔 /아세 톤 =2/8， 아세톤 100%, 아세톤 /메탄을 =9/1， 아세톤 /메탄올 =8/2， 아세톤 /메탄올 =5/5ᅳ 메탄올 100%)으로 20개의 소획분을 얻었다. 그 결과 얻어진 15번째 소획분에 완전 히 용해되지 않고 가라앉은 부분을 따로 취하여 실온조건에서 3000rpm으로 10분 간 원심분리 한 후 상등액을 제거하고 데시케이터에서 완전히 건조시켜 노란색의 가루 를 얻었다. <실시예 1>항산화 활성측정
본 발명의 화합물의 항산화 활성을 측정하기 위하여 Xiong 등 (1996)의 방법 을 변형하여 측정하였다. 시험관에 4ι 의 메탄을을 넣고 시료 화합물을 농도 별로 첨가한 다음 0.15 DPPH용액을 1 첨가하여 실은에서 30분간 반웅 시킨 후， 517ran 에서 UV/VIS 분광광도계 (V-530, Jasco Co. , Japan)를 이용하여 측정 하였다. 이 때 RC50(;«g/in«)은 시료를 첨가하지 않은 대조군의 값을 50% 감소시키는 화합물의 농도 를 나타냈으며, 기존 항산화제인 α-토코페롤， tert-부틸 하이드록시아니솔 (BHA)ᅳ tert-부틸 하이드록시를루엔 (BHT)과 비교하였다. 그 결과를 하기 표 1에 나타내었 다.
【표 1】
Figure imgf000024_0001
상기 표 1에 나타낸 바와 같이， DPPH 전자 공여능의 측정결과， 19 g/i 의 RCso 값을 나타내어 합성 항산화제인 BHT(91.3 g/ffl«보다 우수한 항산화 활성을 나 타내는 것으로 확인되었다. 따라서， 본 발명의 화합물은 항산화용 약학적 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.
<실시예 2>지질산화 저해활성 측정
본 발명의 화합물의 항산화 활성을 측정하기 위하여 리놀렌산 자동산화 저해 활성은 Haraguchi(1992) 방법을 변형하여 측정하였다. 시료를 0.1, 0.5, 1呢/11!£의 농도로 조제하였으며 대조군으로 a-토코페를， BHA, BHT를 사용하였다. 시료 30 ^ 를 취하여 에탄올에 회석한 2.51% 리놀렌산 400 와 0.04M 인산칼슴 완충용액 800 ≠, 증류수 를 차례대로 넣고 55 °C 암조건에서 24시간 반웅 시킨다. 반웅액 에 75% 에탄을 2.71 ， 30% 티오시안산 암모늄 (ammonium thiocyanate) 100≠, 0.02Μ 염화 제 1철 (ferrous chloride) 100 를 차례로 흔합하여 500nm에서 흡광도를 측정하였다. 저해효과는 하기 수학식 1로 계산하였고， 그 결과를 하기 표 2에 나타 내었다.
【수학식 1】 리놀렌산저해(%)=( ^^ggg )X1Q0
【표 2]
Figure imgf000025_0001
상기 표 2에 나타낸 바와 같이ᅳ 본 발명에 따른 화합물은 지질과산화 저해활 성 측정결과， 0.5 및 1 mg/i 에서 각각 65.96과 76.29%의 산화 억제율을 나타내는 것으로 확인되어 리놀렌산의 산화를 초기단계에서 억제하여 산화의 진행을 효과적 으로 지연시키는 것으로 나타나므로， 항산화용 약학적 조성물로 유용하게 이용될 수 있다. '
<실시예 3> 항미생물활성 측정 본 발명의 화합물의 항균 활성을 측정하기 위하여 Kobayasi 등 (1996)의 serial 2-fold dilution법에 따라 항미생물 활성을 조사하였다. 세균에 대한 항균 시험은 그람 양성균인 고초균 (Bacillus subt i 1 is)(KTCT 1021), 스타피로코커스 아 우레우스 (Staphylococus aureus) (KTCT 1916)와 그람 음성균인 (KTCT 2208), 살모넬 라 티피뮤리움 (Salmonella typhi murium) (KTCT 1925)， 효모 스트레인 (Yeast strain) 인 칸디다 알비칸스 (Candida albicans) (KTCT 7965) 및 피치아 야디니 (Pidiia jadinii)(KTCT 7293)를 이용하였다. 피검균을 1개월 간격으로 계대하여 사용하였으 며 세균은 미구균 (micrococcus)과 양분 (nutrient) , YM 배지에 배양하여 균체 현탁 액을 직경 25隱 시험관에 ΙΟι 씩 접종하여 각각 25， 26, 30와 37 °C에서 24시간 전 배양 후 O.D.값을 측정하여 100배 희석하여 항균시험에 사용하였다. 추출물과 분획 물 화합물을 96 웰 마이크로 활성 플레이트 (micro assay plate)의 제 1번 구에 넣고 조제된 균체 현탁액을 분주하여 2배씩 회석하였다. 이것을 적당한 온도 (25， 26, 30 '와 37 °C)에서 24시간 동안 암 조건에서 배양하면서 세균의 증식을 육안으로 관찰 하였다. 항균 활성은 세균의 생육을 억제하는 최저농도 (MIC ： minimum inhibitory concent rat ion)를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
【표 3】
Figure imgf000027_0001
상기 표 3에 나타낸 바와 같이 , 본 발명 화합물은 박테리아와 효모 두 미생 물에서 생육억제 활성이 나타났으며， 특히, 부패 미생물인 고초균 ( . subtilis)^\ 경우, 250 /ig/i 의 최저억제 농도 (MIC)에서 뛰어난 활성을 나타내는 것으로 확인되 었다. 또한， IGR은 살모넬라 식중독의 가장 흔한 원인균인 살모넬라 티피뮤리움 (5, typhimurium)^ 대하여 500 zg/i 의 첨가구에서 증식억제를 나타내는 것으로 확인 되었다. 따라서, 본 발명에 따른 화합물은 항균용 조성물로 유용하게 사용할 수 있 다.
<실시예 4> 암세포 성장억제효과 측정
본 발명의 화합물의 항암 활성을 측정하기 위하여 하기 실험을 수행하였다. 본 실험에 사용한 암세포주는 인체 대장암 세포주인 HCT-116와 위암세포주 AGS, 폐암 세포주인 NCI-H1299로 한국세포주은행으로부터 분양받아 1OT 소태아 혈 청 (fetal bovine serum)(FBS)을 첨가한 DMEM과 RPMI 1640 배지， 37 °C， 5% C02 배 양기에서 계대배양하면서 실험에 사용하였다. 단분자막으로 자란 암세포주를 0.25¾ 트립신 -EDTA용액으로 처리하여 단일 세포로 만든 후 최종 세포농도가 3> 04 cells/ 가 되도록 희석하여 96-웰 플레이트에 각 웰당 100 ^씩 분주한 다음 37 °C, 5% C02 배양기에서 24시간 동안 배양한 후, 시료를 첨가하고 다시 24시간 배양한 후 세 포증식 정도를 WST-1 활성검색에 의하여 측정하였다.
【표 4】
Figure imgf000028_0001
표 4에 나타낸 바와 같이， 본 발명의 화합물은 50 yg/ml의 농도에서 인간의 정상 신장 세포인 293에 대한 성장억제력은 나타나지 않았으며， 결장암 세포와 위 암세포에 대하여 각각 69.39 및 50.75 >의 세포생존율을 나타냈다. 특히， 폐암세포 주인 NCI-H1299에 대하여 13.2 %의 생존율을 보여 폐암 세포주에 대한 생육억제 효 과가 매우 높게 나타나는 것으로 확인되었다. 따라서， 본 발명의 조성물은 암의 예 방또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다. 、
<실시예 5> 림프구의 ATK유도활성 (체외계) 측정
본 발명의 화합물의 면역력 상승 활성올 측정하기 위하여 혈액의 백혈구 증 하나인 림프구를 이용하여 면역력을 측정하고， in vitro에서 IGR에 의해 어떻게 영향을 받는지 분석하기 위해 ATK(AutoIogous Tumor-killing Activity)요법을 실 시하였다. 골수성 혈액암 세포인 K562 세포주를 대상으로 림프구의 활성화 정도를 측정하였으며 양성대조군 (positive control)인 피시바닐( picibani 1X0K-432) 및 인터루킨 2(IL-2)에 대한 반웅도 동시에 측정하였다. 그 결과를 도 2에 나.타내었 다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 IGR화합물은 무처리군에 비해 높 은 면역활성을 나타내는 것으로 확인되었다. 따라서, 염증 예방 또는 치료용 약학 적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다. 한편， 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드 (IGR) 화합물은 목적에 따라 여러 형태로 제제화가 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 제제화 방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
<제조예 1> 약제의 제조
1. 산제의 제조
IGR화합물 500 ng
유당 1 g
상기의 성분을 흔합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
2. 정제의 제조
IGR화합물 500 ng
옥수수전분 100 mg 유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기 의 성분을 흔합한 후， 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제 를 제조하였다 .
3. 캡슬제의 제조
IGR 화합물 500 ng
옥수수전분 100 nig
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 rag
상기의 성분을 흔합한 후， 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 에 층전하여 캡슐제를 제조하였다 .
4. 주사제의 제조
Figure imgf000030_0001
통상적 인 주사제의 제조방법에 따라， 상기 성분들을 제시된 함량으로 함 켜 주사제를 제조하였다. ᅳ <제조예 2〉 건강식품의 제조
1. 건강식품의 제조
IGR 화합물 500 ng 비타민 흔합물 적 량 비타민 A 아세테이트 70 ng 비타민 E 1.0 mg 비타민 0. 13 mg 비타민 B2 0. 15 rag 비타민 B6 0.5 mg 비타민 B12 0.2 i返 비타민 C 10 mg 비오틴 10 β 니코틴산아미드 1.7 mg 엽산 50 nig 판토텐산 칼슘 0.5 rag 무기 질 흔합물 적 량 황산제 1철 1.75 mg 산화아연 0.82 mg 탄산마그네슘 25.3 mg 제 1인산칼륨 15 nig 제 2인산칼슘 55 mg 구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 mg
염화마그네슴 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 흔합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분 을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만， 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무 방하며， 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 흔합한 다음， 과립을 제 조하고， 통상의 '방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
2. 건강 음료의 제조
IGR화합물 500 ng
구연산 1000 rag
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900 ml 통상의 건강 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 흔합한 다음， 약 1시간 동 안 85에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 21 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강 음료 조성물 제조에 사용하였다.
상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 흔합 조성하였지만 수요계층이나， 수요국가， 사용용도 등 지역적， 민족적 기호 도에 따 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다 .
<제조예 3>화장료 조성물의 제조
1. 크림의 제조
세토스테아릴알코을 2.8 중량부
Ξᄇ 2.6 중량부 스테아린산 1.4 중량부 친유형모노스테아린산글리세린 2 중량부 피이지—100 스테아레이트 1 중량부 세스퀴올레인산소르비탈 1.4 중량부 호호바오일 4 중량부 스쿠알란 3.8 중량부 폴리소르베이트 60 1.1 중량부 마카다이아오일 2 중량부 초산토코페를 0.2 중량부 메칠폴리실록산 0.4 중량부 에칠파라벤 0.1 중량부 프로필파라벤 0.1 중량부 Euxyl K-400 0.1 중량부 1，3-부칠렌글리콜 7 중량부 메칠파라벤 0.05 중량부 글리세린 6 중량부 d-판데놀 0.2 중량부 IGR 화합물 4.6 중량부 트리에 탄올아민 0.2 중량부 pt 41891 0.2 중량부 P-H20 46.05 중량부
2. 로션의 제조
세토스테아릴알코을 1.6 중량부 스테아린산 1.4 중량부 친유형모노스테아린산글리세린 1.8 중량부 피 이지 -100 스테아레이트 2.6 증량부 세스퀴을레인산소르비 탈 0.6 중량부 스쿠알렌 4.8 중량부 마카다이아오일 2 중량부 호호바오일 2 중량부 초산토코페를 0.4 증량부 메칠폴리실록산 0.2 중량부 에 칠파라벤 0. 1 중량부 프로필파라벤 0. 1 중량부 1，3-부칠렌글리콜 4 중량부 메칠파라벤 0.1 중량부
산탄검 0.1 중량부
글리세린 4 중량부
d-판데놀 0.15 중량부
알란토인 0.1 중량부
IGR화합물 3.5 중량부
카르보머( aq. Sol) 4 중량부
트리에탄을아민 0.15 중량부
에탄올 3 중량부
pt 41891 0.1 중량부
P-H20 48.3 중량부
<제조예 4>사료첨가제와 제조
본 발명자들을 IGR 화합물을 유효성분으로 하여 하기와 같은 조성으로 사료 첨가제를 제조하였다.
IGR화합물 0.1 ~ 20% 중량부 지방분해효소 (Lipase) 0.001 ~ 0.01% 중량부 제 3 인산칼슘 . 1 ~ 20% 중량부
비타민 E 0.01 ~ 0.1% 중량부 효소 분말 1 ~ 10% 중량부
유산균 0.1 ~ 10% 중량부 바실러스 (Bacilhis) 배양액 0.01 - 10%중량부 포도당 20 ~ 90%중량부
【산업상 이용가능성】
본 발명에 따른 비타민나무의 잎 추출물로부터 분리된 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드 (IGR) 화합물은 항산화, 항균， 항암， 항염증 효과가 있으므로， 노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물, 항산화용 건강식품 조성 물, 항균용 약학적 조성물， 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 암의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물， 염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물， 염증 예방 또는 개선용 건강식품 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Claims

【청구의 범위】 【청구항 1】 화학식 1로 표시되는 이소람네틴ᅳ 3-글루코시드 -그람노시드 ( IGR) 화합물을 유 효성분으로 함유하는 노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물 :
[화학식 1]
Figure imgf000037_0001
【청구항 2]
제 1항의 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3-글루코시드-그람노시드를 유효성 분으로 함유하는 항산화용 건강식품 조성물 .
【청구항 3】
거 U항의 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3—글루코시드 -그람노시드 또는 이 의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항균용 약학적 조성물 .
【청구항 4】
제 1항의 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드 또는 이 의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약 학적 조성물 .
【청구항 5】
제 1항의 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드를 유효성 분으로 함유하는 암의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물 .
【청구항 6】
제 1항의 화학식 1로 표시되는 이소람네틴— 3-글투코시드 -7-람노시드 또는 이 의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 염증 예방 또는 치료용 약 학적 조성물 . '
【청구항 7】
제 1항의 화학식 1로 표시되는 이소람네틴 -3-글루코시드 -7-람노시드를 유효성 분으로 함유하는 염 증 예방 또는 개선용 건강식품 조성 물 .
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