[go: up one dir, main page]

UA129129C2 - Сполуки та кон'югати на їх основі - Google Patents

Сполуки та кон'югати на їх основі Download PDF

Info

Publication number
UA129129C2
UA129129C2 UAA202105856A UAA202105856A UA129129C2 UA 129129 C2 UA129129 C2 UA 129129C2 UA A202105856 A UAA202105856 A UA A202105856A UA A202105856 A UAA202105856 A UA A202105856A UA 129129 C2 UA129129 C2 UA 129129C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
compound
antibody
group
conjugate
compound according
Prior art date
Application number
UAA202105856A
Other languages
English (en)
Inventor
Філіп Вілсон Говард
Филип Вилсон Говард
Нілл Дікінсон
Нилл Дикинсон
Таїс Келло
Таис Келло
Люк Мастерсон
Віл’ям Ґандрі
Вильям Гандри
Original Assignee
Медімм'Юн Лімітед
Медиммьюн Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=69960637&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA129129(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Медімм'Юн Лімітед, Медиммьюн Лимитед filed Critical Медімм'Юн Лімітед
Publication of UA129129C2 publication Critical patent/UA129129C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68037—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a camptothecin [CPT] or derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C07K5/06052—Val-amino acid
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Detail Structures Of Washing Machines And Dryers (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

Кон'югат, який містить похідну інгібітору топоізомерази (A*): А* з лінкером для приєднання ланки, яка являє собою ліганд, де лінкер приєднаний за допомогою відщеплюваного зв'язку до амінокислотного залишку. Ланка, яка являє собою ліганд, переважно являє собою антитіло. Також передбачені A* з приєднаною зв'язувальною ланкою та проміжні сполуки для їх синтезу, а також вражальний елемент, який вивільняється.

Description

Н
М п сх о
М т
М х Я о ман он о де з лінкером для приєднання ланки, яка являє собою ліганд, де лінкер приєднаний за допомогою відщеплюваного зв'язку до амінокислотного залишку. Ланка, яка являє собою ліганд, переважно являє собою антитіло. Також передбачені А" з приєднаною зв'язувальною ланкою та проміжні сполуки для їх синтезу, а також вражальний елемент, який вивільняється.
Даний винахід стосується кон'югатів, що націлюються, які містять специфічний інгібітор топоізомерази, і сполук, застосовних в їх синтезі, а також вражального елемента, який вивільняється.
Передумови винаходу
Інгібітори топоізомерази
Інгібітори топоїзомерази являють собою хімічні сполуки, які блокують дію топоізомерази (топоізомерази І та Ії), яка являє собою тип ферменту, що контролює зміни у структурі ДНК за допомогою каталізу розриву та відновлення фосфодіестерового кістяка ланцюгів ДНК під час нормального клітинного циклу.
Наступна сполука:
НАМ хх о
М
М
ХМ / о он |) дА у рацемічній формі була розкрита в ЕР 0296597 (приклад 63). Вона також розкрита (як сполука 34 у рацемічній формі) у Зидітогі, М., еї аЇ., У Мей Спет, 1998, 41, 2308-2318 (ОЇ: 10.1021/т9707654), де її біологічна активність розглядається разом з біологічною активністю ряду споріднених сполук.
Різні інгібітори топоізомерази, такі як похідні іринотекану та ексатекану і доксорубіцин, були включені у склад кон'югатів антитіло-лікарський засіб. Наприклад, на стадії клінічних випробувань знаходиться Ю5-8201а компанії Оаїїсні ЗапКуо, а Є -4 С й я 5 нов і 7 Видати ун, КА чоти? у о в Мо М ло ан о ; у кое. а тк оно де антитіло являє собою Нег2 (ТаКедаула, М., еї аї., Іпї У Сапсег, 2017, 141, 1682-1689 (БОЇ: 10.10027/)с.30870). Даний АОС вивільняє похідну ексатекану: о й
МН де о
М
Е м Х
Й
(в бно.
В Вигке, Р.., еї аіІ.,, Віосопіидаїе Спет., 2009, 20, 1242-1250, розкриті кон'югати:
Зо
МН, о ху о « М - о
М М й о он о які з'єднані за допомогою аміногрупи з наступними структурами: ва
МН о
Н Н тА М М о ра ? ? Мо діка ський
З засіб о г
Нм о нос о о о. но" тан зо "лікарський засіб он о які містять групу РАВС (пара-амінобензилоксикарбоніл).
На стадії клінічних випробувань знаходиться сацитузумаб говітекан (ММИ-132) компанії
Іттипотеайіся (Сагайо, Т.М., еї аї., Віосопішдаїє Снет, 2015, 26(5), 919-931, БОЇ: 10.1021/ас5.рБіосоп|іспет.5Б00223)
но ц 10 ху о
М
-
М
ХМ и о 20 о ет о о
Н Н о М Гу-йх сн. о о
М її.
М о о
М
Н МА
М о .
Стислий опис винаходу
У загальному аспекті у даному винаході передбачений кон'югат, який містить наступну похідну інгібітору топоізомерази (А": ланка, яка являє собою лікарський засіб):
Н
М п а Я
М й
М
ХМ / о бу он о де з лінкером для приєднання ланки, яка являє собою ліганд, де лінкер приєднаний за допомогою відщеплюваного зв'язку до амінокислотного залишку. Ланка, яка являє собою ліганд, переважно являє собою антитіло. У даному винаході також передбачені А" з приєднаною зв'язувальною ланкою та проміжні сполуки для їх синтезу, а також вражальний елемент, який вивільняється.
У першому аспекті даного винаходу передбачається сполука формули І:
Н
М ви У о
М т
М їй о он о І і її солі та сольвати, де К- являє собою лінкер для приєднання до ланки, яка являє собою ліганд, яка вибрана з (іа): о сі
Ж. ХХ рай а х Іа, де
О являє собою:
М МН
Н о , де ОХ є таким, що О являє собою амінокислотний залишок, дипептидний залишок, трипептидний залишок або тетрапептидний залишок;
Х являє собою: о о о щ-аи в осо) о М шт тем а Н Н Н а рі р2 с1 с2 де а дорівнює 0-5, 01 дорівнює 0-16, 62 дорівнює 0-16, с1 дорівнює 0 або 1, с2 дорівнює 0 або 1, а дорівнює 0-5, де щонайменше Б1 або р2 дорівнює 0 (тобто лише один із Б1 та р2 може не дорівнювати 0), і щонайменше с1 або с2 дорівнює 0 (тобто лише один із сі та с2 може не дорівнювати 0);
СІ являє собою лінкер для приєднання до ланки, яка являє собою ліганд; (ів): в ве пк о З М в7чи мо о с е
ІБ, де Е" та В? незалежно вибрані із Н та метилу або разом із атомом вуглецю, з яким вони зв'язані, утворюють циклопропіленову або циклобутиленову групу; і е дорівнює 0 або 1.
У другому аспекті даного винаходу передбачений спосіб одержання сполуки за першим аспектом даного винаходу, який передбачає щонайменше одну зі стадій способу, викладених нижче.
У третьому аспекті у даному винаході передбачені кон'югати формули ІМ:
І -(0Ур (ІМ), або їх фармацевтично прийнятна сіль або сольват, де | являє собою ланку, яка являє собою ліганд (тобто засіб, що націлюється), О- являє собою ланку, яка являє собою лікарський засіб-лінкер, представлену формулою ЇЇ:
Н
М в- Сх о
М
М
ХМ о он о ШІ,
ВЧ. являє собою лінкер, приєднаний до ланки, яка являє собою ліганд, вибраної із (іа): о си
ЕВ ЖД ХО о Х Іа", де О та Х визначені у першому аспекті, і С. являє собою лінкер, приєднаний до ланки, яка являє собою ліганд; і (ів): ви во
МН ит з в о Ір, де ВІ та В!2 визначені у першому аспекті; і р являє собою ціле число від 1 до 20.
Відповідно, кон'югати містять ланку, яка являє собою ліганд, ковалентно зв'язану зі щонайменше однією ланкою, яка являє собою лікарський засіб (А"), за допомогою ланки, яка являє собою лінкер (тобто ланку, яка являє собою ліганд, з однією або декількома приєднаними ланками, які являють собою лікарський засіб-лінкер). Ланка, яка являє собою ліганд, більш повно описана нижче, являє собою засіб, що націлюється, який зв'язується з цільовим фрагментом. Ланка, яка являє собою ліганд, може, наприклад, специфічно зв'язуватися з клітинним компонентом (засобом, який зв'язується з клітиною) або з іншими цільовими молекулами, що становлять інтерес. Відповідно, у даному винаході також передбачені способи лікування, наприклад, різних видів раку та автоїмунного захворювання. Дані способи охоплюють застосування кон'югатів, де ланка, яка являє собою ліганд, являє собою засіб, що націлюється, який специфічно зв'язується з цільовою молекулою. Ланка, яка являє собою ліганд, може являти собою, наприклад, білок, поліпептид або пептид, такий як антитіло, антигензв'язувальний фрагмент антитіла, або інший зв'язувальний засіб, такий як білок, злитий з Ес.
Навантаження лікарським засобом представлене р - кількістю ланок, які являють собою лікарський засіб, що припадають на ланку, яка являє собою ліганд (наприклад, антитіло).
Навантаження лікарським засобом може знаходитись у діапазоні від 1 до 20 ланок, які являють собою лікарський засіб (0), на ланку, яка являє собою ліганд (наприклад АБ або тАБбБ). У випадку композицій р являє собою середнє значення навантаження лікарським засобом для кон'югатів у композиції, і р знаходиться у діапазоні від 1 до 20.
У четвертому аспекті даного винаходу передбачене застосування кон'югату відповідно до третього аспекту даного винаходу у виготовленні лікарського препарату для лікування проліферативного захворювання. У четвертому аспекті також передбачений кон'югат відповідно до третього аспекту даного винаходу для застосування у лікуванні проліферативного захворювання.
Фахівець середньої кваліфікації у даній галузі техніки зможе легко визначити, чи здатна кандидатна сполука лікувати проліферативний стан у разі будь-якого певного типу клітин.
Наприклад, аналізи, які можуть успішно застосовуватися для оцінювання активності, що забезпечується певною сполукою, описані у прикладах нижче.
У Макаада, еї аї., Віосоога Мед Спет І ей, 26 (2016), 1542-1545 (001: 10.1016/.рітпсіІ.2016.02.020) розглядається ряд АОС: хо і З що й ре а : . а КМ ї КУ : АСК евідсттВІ жом,
НК М с Ян те т Ж Ух ї АПО й жо. ТТ де м. та
ТЕ ЕК й ях З сля щі І ТАКИМ ЖЖ Йо М КЗ КУ УКХ, ОКУ Юу
ЗЕ в Ї ї ! ВЕ ЗХ МН НН Ки СВУ : сім БЕ ВХ е МН; ВІН В КН ї А щі ІМЦ ВУ кВ ОВО ЛЬ : ен ВО ТЕХ «МНН У х ВООРМНЧЮВ СНО : ши з кОАК я Шо і зроблений висновок про те, що зниження цитотоксичності АОС (1) та (2) може бути обумовлене стеричним утрудненням вивільнюваного фрагмента, який являє собою лікарський засіб, у сайті, який піддається дії ферментів, що здійснюють деградацію, у пухлинних клітинах. У даному документі пояснюється важливість розташування пептидної групи на відстані від великого вивільнюваного фрагмента, який являє собою лікарський засіб. Для порівняння, у даному винаході пептидна група приєднана безпосередньо до великого вивільнюваного фрагмента, який являє собою лікарський засіб,.
П'ятий аспект даного винаходу являє собою сполуку А: нм 2 У о
М ло
М Х Й о чик он о А у вигляді окремого енантіомера або в енантіомерно збагаченій формі.
Шостий аспект даного винаходу являє собою сполуку формули МІ: но зах ху о
М й
М М й о ан он о МІ, де О визначений у першому аспекті.
Визначення
Свварилен: використовуваний у даному документі термін "Сзоварилен" означає двовалентний фрагмент, одержаний шляхом видалення двох атомів водню від атому ароматичного кільця ароматичної сполуки.
У даному контексті префікси (наприклад С»56є) позначають кількість атомів кільця або діапазон значень кількості атомів кільця, які являють собою або атоми вуглецю, або гетероатоми.
Атоми кільця можуть всі являти собою атоми вуглецю, як у "карбоариленових групах", у такому випадку група являє собою фенілен (Св).
Як альтернатива, атоми кільця можуть включати один або декілька гетероатомів, як у "гетероариленових групах". Приклади гетероариленових груп включають без обмеження групи, одержані з:
Ми: піролу (азолу) (Сх), піридину (азину) (Сб);
О:: фурану (оксолу) (Св); 1: тіофену (тіолу) (Св);
МО: оксазолу (Св), ізоксазолу (Св), ізоксазину (Св);
МгО!: оксадіазолу (фуразану) (Св);
МзО!: оксатриазолу (Св);
Мі: тіазолу (Св), ізотіазолу (Св);
Мг: імідазолу (1,3-діазолу) (С5), піразолу (1,2-діазолу) (Св), піридазину (1,2-діазину) (Св), піримідину (1,3-діазину) (Св) (наприклад, цитозину, тиміну, урацилу), піразину (1,4-діазину) (Св); і
Мз: триазолу (Св), триазину (Св).
С:-лалкіл: використовуваний у даному документі термін "С:і-4алкіл" означає одновалентний фрагмент, одержаний шляхом видалення атома водню від атома вуглецю вуглеводневої сполуки, який містить від 1 до 4 атомів вуглецю, який може бути аліфатічним або аліциклічним, і який може бути насиченим або ненасиченим (наприклад, частково ненасиченим, повністю ненасиченим). Використовуваний у даному документі термін "С:і-галкіл" означає одновалентний фрагмент, одержаний шляхом видалення атома водню від атома вуглецю вуглеводневої сполуки, який містить від 1 до п атомів вуглецю, який може бути аліфатичним або аліциклічним, і який може бути насиченим або ненасиченим (наприклад, частково ненасиченим, повністю ненасиченим). Отже, термін "алкіл" включає підкласи алкеніл, алкініл, циклоалкіл тощо, розглянуті нижче.
Приклади насичених алкільних груп включають без обмеження метил (Сі), етил (Сг), пропіл (Сз) та бутил (Са).
Приклади насичених лінійних алкільних груп включають без обмеження метил (Сі), етил (Сг), н-пропіл (Сз) та н-бутил (Са).
Приклади насичених розгалужених алкільних груп включають ізопропіл (Сз), ізобутил (Са), втор-бутил (Са) та трет-бутил (Са).
Сг-лалкеніл: використовуваний у даному документі термін "Сг--алкеніл" означає алкільну групу, яка містить один або декілька вуглець-вуглецевих подвійних зв'язків.
Приклади ненасичених алкенільньїх груп включають без обмеження етеніл (вініл, -СН-СНеєг), 1-пропеніл. (-СН-СН-СНз), 2-пропеніл (аліл, -СН-СН-СНг), ізопропеніл (1-метилвініл, -
С(СНз)-СнНае) та бутеніл (Са).
Сг-лалкініл: використовуваний у даному документі термін "Сг2-алкініл" означає алкільну групу, яка містить один або декілька вуглець-вуглецевих потрійних зв'язків.
Приклади ненасичених алкінільних груп включають без обмеження етиніл (-СЕСН) та 2- пропініл (пропаргіл, -СН2-СЕСН).
Сзициклоалкіл: використовуваний у даному документі термін "Сз.ациклоалкіл" означає алкільну групу, яка також є циклільною групою, тобто одновалентний фрагмент, одержаний шляхом видалення атома водню від атома аліциклічного кільця циклічної вуглеводневої (карбоциклічної) сполуки, де фрагмент містить від З до 7 атомів вуглецю, в тому числі від З до 7 атомів кільця.
Приклади циклоалкільних груп включають без обмеження групи, одержані з насичених моноциклічних вуглеводневих сполук: циклопропану (Сз) та циклобутану (Са); і ненасичених моноциклічних вуглеводневих сполук: циклопропену (Сз) та циклобутену (Са).
Ф(-о)
Ки
М чо МН
Н
Позначення зв'язків: у формулі о позначення за допомогою верхніх індексів 9-0) та МН означає групу, з якою зв'язані атоми. Наприклад, група МН показана зв'язаною з карбонілом (який не є частиною проілюстрованого фрагмента), і карбоніл показаний зв'язаним із групою МН (яка не є частиною проілюстрованого фрагмента).
Солі
Зручними або бажаними можуть бути одержання, очищення та/або обробка відповідної солі активної сполуки, наприклад, фармацевтично прийнятної солі. Приклади фармацевтично прийнятних солей розглянуті у Вегоде, еї аї., У. Рпагт. зсі., 66, 1-19 (1977).
Наприклад, якщо сполука є аніонною або містить функціональну групу, яка може бути аніонною (наприклад, -«СООН може являти собою -СО00), то може бути утворена сіль з придатним катіоном. Приклади придатних неорганічних катіонів включають без обмеження іони лужних металів, такі як Ма" та К", катіони лужноземельних металів, такі як Са?" та Мд2», та інші катіони, такі як АЗ. Приклади придатних органічних катіонів включають без обмеження іон амонію (тобто МН) та заміщені іони амонію (наприклад, МНзА", МН»Аг", МНМА», МА).
Прикладами деяких придатних заміщених іонів амонію є іони, одержані з етиламіну, діетиламіну, дициклогексиламіну, триєтиламіну, бутиламіну, етилендіаміну, етаноламіну, діеєтаноламіну, піперазину, бензиламіну, фенілбензиламіну, холіну, меглюміну та трометаміну, а також амінокислот, таких як лізин та аргінін. Прикладом поширеного іону четвертинного амонію є М(СНз)г.
Якщо сполука є катіонною або містить функціональну групу, яка може бути катіонною (наприклад, -МНг може являти собою -МНз"), то може бути утворена сіль з придатним аніоном.
Приклади придатних неорганічних аніонів включають без обмеження аніони, одержані з наступних неорганічних кислот: хлористоводневої, бромистоводневої, йодистоводневої, сірчаної, сірчистої, азотної, азотистої, фосфорної та фосфітної.
Приклади придатних органічних аніонів включають без обмеження аніони, одержані з наступних органічних кислот: 2-ацетоксибензойної, оцтової, аскорбінової, аспарагінової, бензойної, камфорсульфонової, коричної, лимонної, едетової, етандисульфонової, етансульфонової, фумарової, глюкогептонової, глюконової, глутамінової, гліколевої, гідроксималеїнової, гідроксинафталінкарбонової, ізетіонової, молочної, лактобіонової, лауринової, малеїнової, яблучної, метансульфонової, муцинової, олеїнової, щавлевої, пальмітинової, памоєвої, пантотенової, фенілоцтової, фенілсульфонової, пропіонової, піровиноградної, саліцилової, стеаринової, янтарної, сульфанілової, винної, толуолсульфонової, трифтороцтової та валеріанової кислоти. Приклади придатних полімерних органічних аніонів включають без обмеження аніони, одержані з наступних полімерних кислот: дубильної кислоти, карбоксиметилцелюлози.
Сольвати
Зручними або бажаними можуть бути одержання, очищення та/або обробка відповідного сольвату активної сполуки. Термін "сольват" використовується у даному документі у загальноприйнятому значенні і означає комплекс розчиненої речовини (наприклад, активної сполуки, солі активної сполуки) та розчинника. Якщо розчинник являє собою воду, то сольват може для зручності називатися гідратом, наприклад, моногідратом, дигідратом, тригідратом тощо.
Ізомери
Певні сполуки за даним винаходом можуть існувати в одній або декількох конкретних геометричних, оптичних, енантіомерних, діастереомерних, епімерних, атропомерних, стереоізомерних, таутомерних, конформаційних або аномерних формах, включаючи без обмеження цис- і транс-форми; Е- і 2-форми; с-, Ї- і г- форми; ендо- і екзо-форми; К-, 5- і мезо- форми; О- і Г-форми; а- і І-форми; (тк) ї (-)У-форми; кето-, енольні і енолятні форми; син- і анти- форми; синклінальні й антиклінальні форми; а- і В-форми; аксіальні й екваторіальні форми; форми "ванна", "крісло", "твіст", "конверт" і "напівкрісло", та їх комбінації, які далі у даному документі узагальнено називаються "ізомери" (або "ізомерні форми").
Термін "хіральний" відноситься до молекул, які мають властивість не збігатися зі своїм дзеркальним відображенням при накладенні, в той час як термін "ахіральний" відноситься до молекул, які збігаються зі своїм дзеркальним відображенням при накладенні.
Термін "стереоіїзомери" відноситься до сполук, які мають ідентичний хімічний склад, але відрізняються розташуванням атомів або груп у просторі.
Термін "діастереомер" відноситься до стереоізомерів з двома або більше хіральними центрами, і молекули якого не уявляють собою дзеркальні відображення одна одної.
Діастереомери мають різні фізичні властивості, наприклад, точки плавлення, точки кипіння, спектральні властивості і реакційну здатність. Суміші діастереомерів можна розділяти із застосуванням високочутливих аналітичних процедур, таких як електрофорез і хроматографія.
Термін "енантіомери" відноситься до двох стереоізомерів сполуки, які є дзеркальними відображеннями один одного, що не збігаються.
Стереохімічні визначення та умовні позначення, що застосовуються в даному документі, в цілому відповідають інформації, вказаній у Р. РагКкег, Ед., МсОгам'--НІЇЇ Оістопагу ої Спетісаї!
Тептз (1984) МесСтам/--НІіЇ ВоокК Сотрапу, Нью-Йорк; і Еїеї, Е. ії УМіеп, 5., "«Тегеоспетівігу ої 60 Огдапіс Сотроцйпав", дойп УмМіеу 5 5опв, Іпс., Нью-Йорк, 1994. Сполуки за даним винаходом можуть містити асиметричні або хіральні центри і, отже, існують в різних стереоізомерних формах. Передбачається, що всі стереоїзомерні форми сполук за даним винаходом, включаючи без обмеження діастереомери, енантіомери і атропоізомери, а також їх суміші, такі як рацемічні суміші, утворюють частину даного винаходу. Множина органічних сполук існують в оптично активних формах, тобто вони мають здатність обертати площину плоскополяризованого світла.
При описі оптично активної сполуки префікси О і Ї. або К і 5 використовуються для позначення абсолютної конфігурації молекули відносно її хірального центру (центрів). Префікси а і І або (тк) і (у використовуються для позначення знака обертання сполукою плоскополяризованого світла, де (-) або | означають, що сполука є лівообертальною. Сполука з префіксом (5) або а є правообертальною. Для заданої хімічної структури дані стереоїзомери є ідентичними, за винятком того, що вони є дзеркальними відображеннями один одного. Певний стереоизомер може також називатися енантіомером, і суміш таких ізомерів часто називається сумішшю енантіомерів. Суміш енантіомерів зі співвідношенням 50:50 називається рацемічною сумішшю або рацематом, вона може виникати за відсутності стереоселекції або стереоспеціфічності під час хімічної реакції або процесу. Терміни "рацемічна суміш" і "рацемат" відносяться до еквімолярної суміші двох різновидів енантіомерів, позбавлених оптичної активності.
Термін "енантіомерно збагачена форма" відноситься до зразка хіральної речовини, де співвідношення енантіомерів становить більше ніж 50:50, але менше ніж 100: 0.
Слід зазначити, що за винятком розглянутих нижче таутомерних форм, з використовуваного у даному документі терміна "ізомери" спеціально виключені структурні (або конституційні) ізомери (тобто ізомери, які відрізняються за зв'язками між атомами, а не тільки за положенням атомів у просторі). Наприклад, посилання на метоксигрупу, -ОСНз, не слід тлумачити як посилання на її структурний ізомер, гідроксиметильну групу, -СНг2ОН. Аналогічним чином, посилання на орто-хлорфеніл не слід тлумачити як посилання на його структурний ізомер, мета-хлорфеніл. Однак посилання на клас структур цілком може включати структурні ізомерні форми, що знаходяться в межах даного класу (наприклад, С:і-алкіл включає н-пропіл і ізопропіл; бутил включає н-, ізо-, втор- і трет-бутил; метоксифеніл включає орто-, мета- і пара- метоксифеніл).
Вищевказаний виняток не відноситься до таутомерних форм, наприклад, кето-, енольних і енолятних форм, як, наприклад, в разі наступних таутомерних пар: кето/енол (проілюстровані нижче), імін/енаміни, амід/міноспірт, амідин/ендіамін, нітрозо/оксим, тіокетон/ентіол, М- нітрозо/гідроксіазо і нітро/аци-нітро. н о й
НИ М о ; вн НУ М ;8
М ---ї КО - - с-щСс вх кето енол енолят
Термін «таутомер" або "таутомерна форма" відноситься до структурних ізомерів, що мають різну енергію, які є здатними до взаємного перетворення завдяки низькому енергетичному бар'єру. Наприклад, протонні таутомери (також відомі як прототропні таутомери) включають види взаємоперетворення завдяки міграції протона, такі як кето-енольна та імін-енамінова ізомеризація. Валентні таутомери включають види взаємоперетворення за допомогою реорганізації деяких зі зв'язувальних електронів.
Слід зазначити, що в термін "ізомер" спеціально включені сполуки з одним або декількома ізотопними заміщеннями. Наприклад, Н може знаходитись у будь-якій ізотопній формі, у тому числі "Н, 2Н (0) і ЗН (Т); С може знаходитись у будь-якій ізотопній формі, у тому числі 120, 13С і 176; О може знаходитись у будь-якій ізотопній формі, у тому числі 190 і 780, тощо.
Приклади ізотопів, які можуть бути включені в сполуки за даним винаходом, включають ізотопи водню, вуглецю, азоту, кисню, фосфору, фтору, хлору і йоду, такі як без обмеження гН (дейтерій, 0), ЗН (тритій), "С, 190, 140, 15М, 8Б, зір, зр, 355, 360 і 125І, Різні ізотопно мічені сполуки за даним винаходом, наприклад сполуки, в які включені радіоактивні ізотопи, такі як ЗН, 13С ї 14С. Такі изотопно мічені сполуки можуть бути застосовні в метаболічних дослідженнях, дослідженнях кінетики реакції, методиках виявлення або візуалізації, таких як позитронно- емісійна томографія (РЕТ) або однофотонна емісійна комп'ютерна томографія (5РЕСТ), включаючи аналізи розподілу лікарського засобу або субстрату в тканини, або в лікуванні пацієнтів із застосуванням радіоактивних речовин. Мічені або заміщені дейтерієм терапевтичні сполуки за даним винаходом можуть мати поліпшені властивості ОМРК (метаболізм і фармакокінетика лікарського засобу) відносно розподілу, метаболізму та виведення (АОМЕ).
Заміщення більш важкими ізотопами, такими як дейтерій, може забезпечити певні терапевтичні переваги, що з'являються внаслідок більшої метаболічної стабільності, наприклад збільшення періоду напівжиття іп мімо або зниження необхідних дозувань. Мечена 18Е сполука може бути застосовною для досліджень із застосуванням РЕТ або 5РЕСТ. Ізотопно мічені сполуки за даним винаходу і їх проліки, можуть, як правило, бути одержані за допомогою здійснення процедур, розкритих на схемах або в прикладах і способах одержання, описаних нижче, за допомогою заміщення реагенту, який не є ізотопно міченим, легко доступним ізотопно міченим реагентом. Крім того, заміщення більш важкими ізотопами, зокрема дейтерієм (тобто 2Н або 0), може забезпечити певні терапевтичні переваги, що з'являються внаслідок більшої метаболічної стабільності, наприклад, збільшення періоду напівжиття іп мімо, або зниження необхідних дозувань, або збільшення терапевтичного індексу. Зрозуміло, що дейтерій в даному контексті вважається замісником Концентрація такого більш важкого ізотопу, зокрема дейтерію, може бути визначена за допомогою коефіцієнта ізотопного збагачення. Вважається, що в сполуках за даним винаходом будь-який атом, конкретно не позначений як певний ізотоп, являє собою будь- який стабільний ізотоп даного атома.
Якщо не вказано інше, посилання на певну сполуку включає всі такі ізомерні форми, в тому числі їх (повністю або частково) рацемічні і інші суміші. Способи одержання (наприклад асиметричний синтез) і розділення (наприклад фракційна кристалізація та хроматографічні способи) таких ізомерних форм або відомі з рівня техніки, або їх легко розробляти за допомогою адаптації способів, викладених в даному документі, або відомих способів відомим чином.
Ланка, яка являє собою ліганд
Ланка, яка являє собою ліганд, може бути будь-чим і включає білок, поліпептид, пептид і непептидний засіб, які специфічно зв'язуються з цільовою молекулою. У деяких варіантах здійснення ланка, яка являє собою ліганд, може являти собою білок, поліпептид або пептид. У деяких варіантах здійснення ланка, яка являє собою ліганд, може являти собою циклічний поліпептид. Такі ланки, які являють собою ліганд, можуть включати антитіла або фрагмент антитіла, які містять щонайменше один сайт зв'язування з цільовою молекулою, лімфокіни, гормони, фактори росту або будь-яку іншу молекулу або речовину, що зв'язуються з клітиною, які здатні специфічно зв'язуватися з мішенню.
Терміни "специфічно зв'язується" і "специфічне зв'язування" відносяться до зв'язування антитіла або іншого белка, поліпептида або пептида із заданою молекулою (наприклад антигеном). Як правило, антитіло або інша молекула зв'язуються з афінністю, яка становить щонайменше приблизно 1х107 М", і зв'язуються із заданою молекулою з афінністю, яка щонайменше в два рази більше, ніж їх афінність при зв'язуванні з неспецифічною молекулою (наприклад, В5А, казеїном), відмінною від заданої молекули, або близькоспорідненою молекулою.
Приклади ланок, що являють собою ліганд, включають засоби, описані для застосування в
МО 2007/085930, кяка включена в даний документ.
У деяких варіантах здійснення ланка, яка являє собою ліганд, являє собою засіб, який зв'язується з клітиною, який зв'язується з позаклітинною мішенню на клітині. Такий засіб, який зв'язується з клітиною, може являти собою білок, поліпептид, пептид або непептидний засіб. У деяких варіантах здійснення засіб, який зв'язується з клітиною, може являти собою білок, поліпептид або пептид. У деяких варіантах здійснення засіб, який зв'язується з клітиною, може являти собою циклічний поліпептид. Засіб, який зв'язується з клітиною, також може являти собою антитіло або антигензв'язувальний фрагмент антитіла. Таким чином, в одному варіанті здійснення даний винахід надає кон'югат антитіло-лікарський засіб (АОС).
Засіб, що зв'язується з клітиною
Засіб, що зв'язується з клітиною, може бути будь-яким і включає пептиди і засоби, відмінні від пептидів. Вони можуть включати антитіла або фрагмент антитіла, які містять щонайменше один сайт зв'язування, лімфокіни, гормони, міметики гормонів, вітаміни, фактори росту, молекули, що здійснюють транспорт живильних речовин, або будь-яку іншу молекулу або речовину, що зв'язуються з клітиною.
Пептиди
В одному варіанті здійснення засіб, який зв'язується з клітиною, являє собою лінійний або циклічний пептид, який містить 4-30, переважно 6-20 суміжних амінокислотних залишків.
В одному варіанті здійснення засіб, який зв'язується з клітиною, включає пептид, який зв'язує інтегрин суВв. Пептид може бути селективним відносно суВє порівняно з ХУ5.
В одному варіанті здійснення засіб, який зв'язується з клітиною, включає поліпептид 60 0 А2гОЕМОМ-Суз. АгОРМОМ-Суз характеризується послідовністю МАМРМІ КООГОМІ АОКМАКТО.
Як альтернатива, можна застосовувати варіант послідовності А2ОЕМОМ-Сувз, де один, два, три, чотири, п'ять, шість, сім, вісім, дев'ять або десять амінокислотних залишків заміщені іншим амінокислотним залишком. Окрім того, поліпептид може характеризуватися послідовністю
МАУХХХХХХХХХХХХХХХАТО.
Антитіла
Термін "антитіло" у даному документі використовується у найбільш широкому сенсі і спеціально охоплює моноклональні антитіла, поліклональні антитіла, димери, мультимери, поліспецифічні антитіла (наприклад біспецифічні антитіла), полівалентні антитіла и фрагменти антитіл за умови, що вони демонструють необхідну біолоічну активність (МіПег еї а! (2003) доипг. ої ІттипоЇоду 170:4854-4861). Антитіла можуть бути мишачими, людськими, гуманізованими, хімерними або одержаними від інших видів. Антитіло являє собою білок, що виробляється імунною системою, який має здатність до розпізнавання певного антигену і зв'язування з ним. (Чапемжау, С., Тгамег5, Р., ММаїропї, М., ЗпіотесНік (2001) Іттипо Віоіоду, Бій Еа., Сапапа
Рибіївпіпд, Нью-Йорк). Цільовий антиген, як правило, має множину сайтів зв'язування які також називаються епітопами, що розпізнаються СОК на багаточисленних антитілах. Кожне антитіло, яке специфічно зв'язується з іншим епітопом, має відмінну структуру. Таким чином, один антиген може мати більш ніж одне відповідне антитіло. Антитіло включає повнорозмірну молекулу імуноглобуліну або імунологічно активну частину повнорозмірної молекули імуноглобуліну, тобто молекулу, яка містить антигензв'язувальний сайт, який імуноспеціфічно зв'язує антиген мішені, що представляє інтерес, або її частину, при цьому такі мішені включають без обмеження ракову клітину або клітини, які продукують автоїмунні антитіла, асоційовані з автоїмунним захворюванням. Імуноглобулін може являти собою молекулу імуноглобуліну будь- якого типу (наприклад, до, ІЧЕ, ОМ, дО і ІдА), класу (наприклад, Ідс1, Ідса2, доз, Ідс4, ІДА1 і
ІдЧАг) або підкласу. Імуноглобуліни можуть бути одержані від будь-яких видів, в том числі вони можуть походити від людини, миші або кролика. "Фрагменти антитіла" містять частину повнорозмірного антитіла, як правило, його антигензв'язувальну або варіабельну ділянку. Приклади фрагментів антитіл включають фрагменти Еаб, Раб, Е(аб)2 і в5сЕм; діатіла; лінійні антитіла; фрагменти, одержувані в експресійній бібліотеці Раб, антиїідіотипічні (анти-І4) антитіла, СОК (ділянку, яка визначає комплементарність) і епітопзв'язувальні фрагменти будь--ого 3з вищевказаних, які імуноспецифічно зв'язуються з антигенами ракових клітин, вірусними антигенами або мікробними антигенами, молекули одноланцюгових антитіл і поліспецифічні антитіла, утворені з фрагментів антитіл.
Використовуваний в даному документі термін "моноклональне антитіло" відноситься до антитіла, одержаного з популяції практично однорідних антитіл, тобто окремі антитіла, що складають популяцію, є ідентичними, за винятком можливих мутацій, що зустрічаються в природі, які можуть бути присутніми в незначних кількостях. Моноклональні антитіла є високоспецифічними, будучи спрямованими на один антигенний сайт. Більше того, на відміну від препаратів поліклональних антитіл, які містять різні антитіла, спрямовані на різні детермінанти (епітопи), кожне моноклональне антитіло спрямоване на одну детермінанту на антигені. На додаток до їх специфічності, моноклональні антитіла мають перевагу в тому, що вони можуть бути синтезовані як незабруднені іншими антитілами. Модифікатор "моноклональний" характеризує антитіло як одержане з практично однорідної популяції антитіл, і його не слід тлумачити як вимогу одержання антитіла за допомогою будь-якого певного способу. Наприклад, моноклональні антитіла, що підлягають застосуванню за даним винаходом, можуть бути одержані за допомогою гібридного способу, вперше описаного в Копіег еї а! (1975) Маге 256:495, або можуть бути одержані за допомогою способів із застосуванням рекомбінантної ДНК (см. 05 4816567). Моноклональні антитіла також можуть бути виділені з фагових бібліотек антитіл із застосуванням методик, описаних в СіасКкзоп еї а! (1991) Майге, 352:624-628; Маїкз вї а! (1991) У. Мої. Віої!., 222:581-597, або від трансгенних мишей, що несуть повністю людську систему імуноглобулінів (І опрегд (2008) Сигт. Оріпіоп 20(4):450-459).
Моноклональні антитіла, описані у даному документі, зокрема, включають хімерні антитіла, гуманізовані антитіла і людські антитіла.
Приклади засобів, що зв'язуються з клітиною, включають засоби, описані для застосування у УМО 2007/085930, яка включена у даний документ.
Пухлино-асоційовані антигени і когнатні антитіла для застосування у варіантах здійснення даного винаходу перелічені нижче і описані більш докладно на сторінках 14-86 у
МО 2017/186894, яка включена в даний документ. (1) ВМРАТВ (рецептор кісткового морфогенетичного білка типу ІВ) бо (2) Е16 (ГАТІ, 5І С7АБ)
(3) ЗТЕАРІ1 (епвтелвальний антиген передміхурової залози з шістьма трансмембранними сегментами) (4) 0772Р (СА125, МОС16) (5) МРЕ (МРЕ, М5ІМ, ЗМЕ, мегакаріоцит-потенціювальний фактор, мезотелін) (6) Марізр (МАРІ-ЗВ, МРТ, 5І С34А2, родина переносників розчинених речовин 34 (фосфат натрію), представник 2, натрій-зележний транспортер фосфату ЗЬ типу ІЇ) (7) Зета 55 (ЕГО10372, КІАДАТ1445, Міт.42015, БЗЕМА5В, ЗЕМАС, семафорин 55 Ніод, домен зета, сім тромбоспондинових повторів (1 типу і подібні 1 типу), трансмембранний домен (ТМ) і короткий цитоплазматичний домен, (семафорин) 58) (8) РЗСА під (2700050С12РїіКк, С530008016РіК, СсОМА КІКЕМ 2700050С12, сОМА гена КІКЕМ 2700050с12) (9) ЕТВК (рецептор ендотеліну типу В) (10) М50783 (КМЕ124, гіпотетичний білок РІ )20315) (11) 5ТЕАР2 (НОМС 8639, ІРСА-1, РСАМАР'1, 5ТАМРІ, 5ТЕАР2, 5ТМР, ген 1, асоційований із раком передміхурової залози, білок 1, асоційований з раком передміхурової залози, епітеліаальний антиген передміхурової залози 2 з шістьма трансмембранними сегментами, білок передміхурової залози з шістьма трансмембранними сегментами) (12) Ттрм4 (ВК22450, Е 920041, ТКРМА, ТКЕРМАВ, катіонний канал 5, що діє за механізмом транзиторного рецепторного потенціалу, підродина М, представник 4) (13) СКІРТО (СК, СК, СКОБ, СКІРТО, ТОСЕЇ, фактор росту, одержаний з тератокарциноми) (14) СО21 (СК2 (рецептор комплементу 2), або СЗОК (СзЗа/рецептор вірусу Епштейна-Барр), або
Нз.73792) (153 С0796 (С0798, СО79р, ІСЬ (асоційований з імуноглобуліном бета), В29) (16) ЕсКкНа (ІБОРА4, ІКТАЯ4, 5РАРТА (якірний білок-фосфатаза Та, який містить домен 5Н2),
Зо ЗРАРІВ, 5РАРІ1С) (17) НЕН2 (ЕВ) (18) МСА (СЕАСАМБб) (19) МОР (ОРЕР'І1) (20) І. 20А-альфа (ІІ 20Ка, 2СУТОК) (21) Бревікан (ВСАМ, ВЕНАВ) (22) Ерив2й (ОВТ, ЕВК, Некб, ЕРНТЗ, ТГуго5) (23) АБІ а659 (В7П) (24) РОСА (попередник антигену стовбурових клітин передміхурової залози) (25) аЕВА (26) ВАРЕ-К (рецептор фактора, що активує В-клітини, рецептор Ві уз 3, ВКЗ) (27) 2022 (ізоформа В-клітинного рецептора СО22-В, ВІ-САМ, Гур-8, ГуБв, 51 ЕС-2,
Е22814) (27а) СО22 (молекула СО22) (286) СОр7у7За (С0О79А, СО7З9альфа), асоційований з імуноглобуліном альфа, білок, специфічний відносно В-клітин, який ковалентно взаємодіє з Ід бета (СО79В) і утворює комплекс з молекулами Ід М на поверхні, передає сигнал, що бере участь у диференціюванні В-клітин), рі: 4,84, ММУ: 25028, ТМ: 2 |РІ, ген, хромосома: 19413.2). (293 СХСМК5 (рецептор 1 лімфоми Беркітта, рецептор, пов'язаний з С-білком, який активується хемокіном СХСІ 13, функціонує при міграції лімфоцитів і гуморальному захисті, грає роль при інфекції НІМ-2 і, можливо, в розвитку СНІД, лімфоми, мієломи і лейкозу); 372 аа, рі: 8,54,
МУУ: 41959, ТМ: 7 |РІ, ген, хромосома: 11423.3, (30) НГ А-БОВ (бета-субодиниця молекули МНС класу ІІ (антиген Іа), яка зв'язує пептиди і представляє їх СО4-- Т-лімфоцитам); 273 аа, рі: 6,56, ММУ: 30820. ТМ. 1 |РІ, ген, хромосома: бра21.3) (31) Р2Х5 (ліганд-залежний іонний канал 5 пуринергічного рецептора РАОаХ, іонний канал, що керується позаклітинним АТФ, може брати участь у передачі імпульсу по синапсам і нейрогенезі, дефіцит може вносити вклад в патофізіологію ідіопатичної нестабільности детрузора); 422 аа), рі: 60 7,63,
МУУ: 47206, ТМ: 1 |ІРІ, ген, хромосома: 17р13.3). (32) СО72 (антиген СО72 диференціювання В-клітин, ГГ ур-г2); 359 аа, рі: 8,66, ММУ: 40225, ТМ: 4
ІРІ, ген, хромосома: 9р13.3). 5 (33) І 64 (лімфоцитарний антиген 64 (КР105), мембранний білок родини білків з багатими лейцином повторами (І КК) І типу, регулює активацію і апоптоз В-клітин, втрата функції асоційована з підвищенням активності захворювання у пацієнтів з системним червоним вовчаком); 661 аа, рі: 6,20, ММУ: 74147, ТМ: 1 |РІ, ген, хромосома: 5412). (34) РсКНІ (подібній Ес-рецептору білок 1, передбачуваний рецептор РЕс-домену імуноглобуліну, який містить Ід-подібні і ІТАМ-домени типу С2, може грати роль у диференціюванні В-лімфоцитів); 429 аа, рі: 5,28, МУУ: 46925, ТМ: 1 |ІРІ, ген, хромосома: 14д21-
Таг2) (35У ІКТА?2 (асоційований з транслокацією рецептор 2 суперродини імуноглобулінів, передбачуваний імунорецептор з можливою роллю у розвитку В-клітин і лімфомагенезі; порушення регуляції гена за допомогою транслокації вудбувається у деяких В-клітинних злоякісних новоутвореннях); 977 аа, рі: 6,688, МУУ: 106468, ТМ: 1 |РІ, ген, хромосома: 1421) (36) ТЕМВ2 (ТМЕРР2, томорегулін, ТРЕЕ, НРРІ, ТЕ, передбачуваний трансмембранний протеоглікан, споріднений родині факторів росту ЕСЕ/херегулін і фолістатину); 374 аа) (37) РОМА - ЕОІНІ (фолатгідролаза (специфічний мембранний антиген передміхурової залози) 1) (38) 551 (рецептор соматостатину; примітка: існує 5 підтипів) (38.1) 55ТК2 (рецептор соматостатину 2) (38.2) 5Б5ТК5 (рецептор соматостатину 5) (38.3) 551 1 (38.4) 551 З (38.5) 557184
АУВб - обидві субодиниці (39-40) (39) ІТОАМ (інтегрин, альфа М) (40) ІТОВб (інтегрин, бета 6) (41) СЕАСАМ5 (молекула клітинної адгезії 5, споріднена карциноембріональному антигену) (42) МЕТ (протоонкоген теї; рецептор фактора росту гепатоцитів) (43) МОСІ (муцин 1, асоційований з клітинною поверхнею) (44) САУ (карбоангідраза ІХ) (45) ЕСЕРМІ (рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕК), варіант транскрипту 3, (46) СОЗ3З3 (молекула СОЗ3) (47) СО19 (молекула СО19) (48) ІГ2КА (рецептор інтерлейкіну 2, альфа); еталонна послідовність МСВІ: ММ 000417.2); (49) АХГІ. (рецепторна тирозинкіназа АХ) (50) СО30 - ТМЕКЗЕ8 (суперродина рецепторів фактора некрозу пухлини, представник 8) (51) ВСМА (антиген дозрівання В-клітин) - ТМЕК5Е17 (суперродина рецепторів фактора некрозу пухлини, представник 17) (52) СТ Ад - СТА (раково-тестикулярні антигени) (53) СО174 (у за Льюїсом) - РИОТЗ (фукозилтрансфераза 3 (галактозид-3(4)-Ї - фукозилтрансфераза, група крові Льюїса) (54) СІ ЕС14А (родина 14 з лектиновим доменом типу С, представник А; номер доступу в
СбСіепрапк ММ175060) (55) авР78 - НЗРАБ (білок теплового шоку 5 з молекулярною масою 70 кДа (білок, що регулюється глюкозою, 78 кДа) (56) СО70 (молекула СО70) І 08096 (57) специфічні антигени стовбурових клітин. Наприклад: 514 (див. елемент списку (63) нижче)
С025 (див. елемент списку (48) вище) соз2
ГавБ/сРНА49 промінін/СО133 60 (58) АБИ-5
(59) ЕМРРЗ (ектонуклеотидпірофосфатаза/фосфодіестераза 3) (60) РЕКА (багатий проліном білок 4 (слізна залоза)) (61) СО - БСУ2С (гуанілатциклаза 2С (рецептор термостабільного ентеротоксину) (62) Іім-1 - 5 СЗ9Аб (родина переносниківрозчинених речовин 39 (транспортер цинку), представник б) (63) 5714, глікопротеїн трофобластів, ТРВО - ТРВО (глікопротеїн трофобластів) (64) СО56 - МСМАТ (молекула адгезії нервових клітин 1) (65) СапАдАд (пухлино-асоційований антиген СА242) (66) РОГ А1 (рецептор фолату 1) (67) ОРММВ (глікопротеїн (трансмембранний) пітр) (68) ТІМ-1 - НАМСК/ (клітинний рецептор 1 вірусу гепатиту А) (69) ВО-1/міндин, мішень при пухлині передміхурової залози - міндин/ко- 1 (70) В7-Н4 - МТСМІ (який містить М-подібний домен інгібітор активації Т-клітин 1 (71) РТК7 (РТК?7 протеїнтирозинкіназа 7) (72) СО37 (молекула СОЗ37) (73) СО138 - 5ОСІ1 (синдекан 1) (74) СО74 (молекула СО74, головний комплекс гістосумісності, інваріантний ланцюг класу ІЇ) (75) клаудини - СІ. (клаудини) (76) Е2ЕК (рецептор епідермального фактора росту) (77) Нег3 (ЕТЬВЗ) - ЕКВВЗ (гомолог З вірусного онкогену при еритробластному лейкозі м-егр- р2 (пташиний)) (78) ВОМ - М5ТІК (стимулювальний макрофаги рецептор 1 (тирозинкіназа, споріднена с- теї)) (79) ЕРНА?2 (рецептор ЕРН А2) (80) СО20 - М54А1 (трансмембранні домени 4, підродина А, представник 1) (81) тенасцин С - ТМС (тенасцин С) (82) ЕАР (білок активації фібробластів, альфа) (83) ОКК-1 (гомолог ОісККорі 1 (Хепоризх Іаемів) (84) СО52 (молекула СО52) (85) С51 - БІ АМЕ7 (представник 7 родини 5І АМ) (86) ендоглін - ЕМО (ендоглін) (87) анексин А1 - АМХАЇТ (анексин А1) (88) М-САМ (СО106) - МСАМІ (молекула адгезії судинного ендотелію 1)
Додатковими пухлино-асоційованим антигеном і когнатними антитілами, що представляють інтерес, є: (89) А5СТ2 (транспортер АБО 2, також відомий як 5І СТА).
Антитіла АБСТ2 описані в МО 2018/089393, яка включена в даний документ за допомогою посилання
Засіб, що зв'язується з кліткою, може бути міченим, наприклад, для полегшення виявлення або очищення засобу або до вбудовування в вигляді кон'югату, або у вигляді частини кон'югату.
Метка може являти собою біотинову мітку. В другом варіанті здійснення засіб, який зв'язується з клітиною, може бути міченим радіоактивним ізотопом.
Способи лікування
Кон'югати за даним винаходом можна використовувати у способі терапії. Також наданий спосіб лікування, який включає введення суб'єкту, який потребує лікування, терапевтично ефективної кількості кон'югату формули ІМ. Термін "терапевтично ефективна кількість" позначає кількість, достатню для того, щоб продемонструвати користь для пацієнта. Така користь може являти собою щонайменше зниження інтенсивності щонайменше одного симптому. Кількість, що реально вводиться, а також швидкість і динаміка введення будуть залежати від природи та важкості стану, що підлягає лікуванню. Призначення лікування, наприклад прийняття рішень про дози, знаходиться в межах компетенції лікарів загальної практики та інших лікарів.
Кон'югат можна вводити окремо або в комбінації з іншими засобами для лікування або одночасно, або послідовно залежно від стану, що підлягає лікуванню. Приклади видів лікування і терапії включають без обмеження хіміотерапію (введення активних засобів, включаючи, наприклад, лікарські засоби), хірургічне лікування і променеву терапію.
Фармацевтичні композиції за даним винаходом і для застосування за даним винаходом можуть містити, на додаток до активного інгредієнта, тобто кон'югату формули ІМ, фармацевтично прийнятну допоміжну речовину, носій, буфер, стабілізатор або інші матеріали, широко відомі спеціалістам у даній галузі техніки. Такі матеріали повинні бути нетоксичними і не 60 повинні протидіяти ефективності активного інгредієнта. Конкретна природа носія або іншого матеріалу буде залежати від шляху введення, який може бути пероральним або може здійснюватися за допомогою ін'єкції наприклад, внутрішньошкірної, підшкірної або внутрішньовенної.
Фармацевтичні композиції для перорального введення можуть бути в формі таблетки, капсули, порошку або рідини. Таблетка може містити твердий носій або ад'ювант. Рідкі фармацевтичні композиції зазвичай містять рідкий носій, такий як вода, петролеум, тваринні або рослинні масла, мінеральне масло або синтетичне масло. Можуть бути включені фізіологічний сольовий розчин, розчин глюкози або іншого сахариду або гліколі, такі як етиленгліколь, пропіленгліколь або полієтиленгліколь. Капсула може містити твердий носій, такий як желатин.
Для внутрішньовенної, внутрішньошкірної або підшкірної ін'єкції або ін'єкції в осередок ураження активний інгредієнт буде знаходитися у формі водного розчину, прийнятного для парентерального введення, який не містить пірогенів і характеризується придатним значенням рН, ізотонічністю і стабільністю. Спеціалісти у даній галузі техніки можуть одержати придатні розчини із застосуванням, наприклад, ізотонічних середовищ, таких як розчин хлориду натрію для ін'єкцій, розчин Рінгера для ін'єкцій, розчин лактату Рінгера для ін'єкцій. Консерванти, стабілізатори, буфери, антиоксиданти та/або інші добавки можуть бути включені за необхідності
Кон'югати можна використовувати для лікування проліферативного захворювання і автоїмунного захворювання. Термін "проліферативне захворювання" відноситься до небажаної або неконтрольованої клітинної проліферації надлишкових або аномальних клітин, яка є небажаною, як, наприклад, неопластичний або гіперпластичний ріст, будь то іп міїго або іп мімо.
Приклад проліферативних станів включаються без обмеження клітинну проліферацію доброякісного, передракового та злоякісного характеру, в тому числі без обмеження новоутворення і пухлини (наприклад, гістіоцитому, гліому, астроцитому, остеому), види раку (наприклад, рак легенів, дрібноклітинний рак легенів, рак шлунково-кишкового тракту, рак кишечника, рак товстої кишки, карциному молочної залози, карциному яєчника, рак передміхурової залози, рак яєчка, рак печінки, рак нирки, рак сечового міхура, рак підшлункової залози, рак головного мозку, саркому, остеосаркому, саркому Капоші, меланому), види лейкозу, псоріаз, захворювання кісток, фібропроліфератівні порушення (наприклад сполучних тканин) і атеросклероз. Інші види раку, що представляють інтерес, включають без обмеження злоякісні стани системи крові, такі як види лейкозу і лімфоми, наприклад, неходжкінська лімфома та її підтипи, такі як ОВС, лімфома з клітин маргінальної зони, лімфома з клітин мантійної зони і фолікулярна лімфома, лімфому Ходжкіна, АМІ. і інші види раку В- або Т-клітинного походження.
Будь-який тип клітин може піддаватися лікуванню, в тому числі без обмеження клітини легені, шлунково-кишкового тракту (у тому числі, наприклад, кишечника, товстої кишки), молочної залози (маммарні), яєчника, передміхурової залози, печінки (печінкові), нирки (ниркові), сечового міхура, підшлункової залози, головного мозку і шкіри.
Приклади автоїмунного захворювання включають наступне: ревматоїдний артрит, автоїмунні демієлінізувальні захворювання (наприклад, розсіяний склероз, алергічний енцефаломієліт), псоріатичний артрит, ендокринну офтальмопатію, увеоретиніт, системний червоний вовчак, міастенію гравіс, хворобу Грейвса, гломерулонефрит, автоїмунне порушення печінки, запальне захворювання кишечника (наприклад хвороба Крона), анафілаксію , алергічну реакцію, синдром Шегрена, цукровий діабет І типу, первинний біліарний цироз, гранулематоз
Вегенера, фіброміалгію, поліміозит, дерматоміозит, множинну ендокринну недостатність, синдром Шмідта, автоїмунний увеїт, хворобу Аддісона, адреналіт, тиреоїдит, тиреоїдит
Хашимото, автоїмунне захворювання щитоподібної залози, перніціозну анемію, атрофію шлунка, хронічний гепатит, вовчаковий гепатит, атеросклероз, підгострий шкірний червоний вовчак, гіпопаратиреоз, синдром Дресслера, автоїммунну тромбоцитопенію, ідіопатичну тромбоцитопенічну пурпуру, гемолітичну анемію, вульгарну пухирницю, пухирницю, герпетиформний дерматит, гніздову алопецію, пемфігоїд, склеродермії, прогресуючий системний склероз, СКЕЗТ-синдром (кальциноз, феномен Рейно, порушення моторики стравоходу, склеродактилія і телеангієктазія), чоловіче і жіноче автоїмунне безпліддя, анкілозувальний спондиліт, виразковий коліт, змішане захворювання сполучної тканини , вузликовий поліартеріїт, системний некротизуючий васкуліт, атопічний дерматит, атопічний риніт, синдром Гудпасчера, хвороба Шагаса, саркоїдоз, ревматичну лихоманку, астму, звичний викидень, антифосфоліпідний синдром, "легеню фермера", багатоформну еритему, посткардіотомний синдром, синдром Кушинга, автоїмунний хронічний активний гепатит, "легеню птахівника", токсичний епідермальний некроліз, синдром Альпорта, альвеоліт, алергічний альвеоліт, фіброзуючий альвеоліт, інтерстиціальне захворювання легенів, вузлувату еритему, 60 гангренозну піодермію, трансфузійну реакцію, артеріїт Такаясу, ревматоїдну поліміалгію,
темпоральний артеріїт, шистосомоз, гігантоклітинний артеріїт, аскаридоз, аспергільоз, синдром
Самптера, екзему, лімфоматоїдний гранулематоз, хворобу Бехчета, синдром Каплана, хворобу
Кавасакі, лихоманку денге, енцефаломієліт, ендокардит, ендоміокардіальний фіброз, ендофтальміт, стійку підвищену еритему, псоріаз, еритробластоз плода, еозинофільний фасціїт, синдром Шульмана, синдром Фелті, філяріоз, цикліт, хронічний цикліт, гетерохромний цикліт, цикліт Фукса, ІдА-нефропатію, пурпуру Шенлейна-Геноха, хворобу "трансплантат проти господаря", відторгнення трансплантата, кардіоміопатію, синдром Ітгона-Ламберта, рецидивуючий поліхондріт, кріоглобулінемію, макроглобулінемію Вальденстрема, синдром
Еванса і автоїмунну гонадну недостатність.
У деяких варіантах здійснення автоїмунне захворювання являє собою порушення, пов'язане з В-лімфоцитами (наприклад, системний червоний вовчак, синдром Гудпасчера, ревматоїдний артрит і діабет І типу), ТП1-лімфоцитами (наприклад, ревматоїдний артрит, розсіяний склероз, псоріаз, синдром Шегрена, тиреоїдит Хашимото, хвороба Грейвса, первинний біліарний цироз, гранулематоз Вегенера, туберкульоз або захворювання "трансплантат проти господаря") або
Тп2-лімфоцитами (наприклад, атопічний дерматит, системний червоний вовчак, атопічний астму, рінокон'юнктивіт, алергічний риніт, синдром Оменна, системний склероз або хронічне захворювання "трансплантат проти господаря"). В цілому порушення, пов'язані з дендритними клітинами, включають порушення, пов'язані з Тп1-лімфоцитами і Тп2-лімфоцитами. У деяких варіантах здійснення аутоїмунне порушення являє собою імунологічне порушення, опосередковане Т-клітинами. "Хіміотерапевтичне засіб" являє собою хімічну сполуку, яка застосовується в лікуванні раку, незалежно від механізму дії. Класи хіміотерапевтичних засобів включають без обмеження алкілювальні засоби, антиметаболіти, рослинні алкалоїди на основі отрути, яка впливає на веретено ділення, цитотоксичні/протипухлинні антибіотики, інгібітори топоіїзомерази, антитіла, фотосенсибілізувальні засоби і інгібітори кіназ. Хіміотерапевтичні засоби включають сполуки, що застосовуються в "спрямованій терапії" і традиційній хіміотерапії.
Приклади хіміотерапевтичних засобів включають ерлотиніб (ТАЕСЕМАЄ, Сепепіесп/о51І
Рпагт.), доцетаксел (ТАХОТЕРЕСХ, Бапоїї-Амепіїз), 5-РЮ (фторурацил, 5-фторурацил, СА Мо 51-21-8), гемцитабін (СЕМ2АК-, І Шу), РО-0325901 (СА5 Ме 391210-10-9, Рії7ег), цисплатин (цис- діамін, дихлорплатину (І), САБ Мо 15663-27-1), карбоплатин (САБ Мо 41575-94-4), паклітаксел (ТАХОЇІ У, ВіізіоІ-Муєїз ЗдцірЬ ОпсоІоду, Принстон, Нью-Джерсі), трастузумаб (НЕКСЕРТІМЕ,
Сепепіесі), темозоломід (4-метил-5-оксо-2,3,4,6,8-пентазабіцикло|4.3.Ф|нону-2,7,9-триєн-9- карбоксамід, СА Мо 85622-93-1, ТЕМОВАН?, ТЕМОБАЇГІ, 5спегіпд Ріоцді), тамоксифен ((7)-2-
І4-(1,2-дифенілбут-1-енілуфенокси|-М,М-диметилетанамін, МОЇ МАОЕХ?, ІЗТОВАЇІ?, МА ООЕХУ), і доксорубіцин (АОКІАМУ СІМ), АКІЇ-1/2, НРРО, і рапаміцин.
Додаткові приклади хіміотерапевтичних засобів включають оксаліплатин (ЕГОХАТІМЄ, запої), бортезоміб (МЕГСАОЕ?Є, МіПеппішт РпНагт.), сутент (ЗИМІТІМІВ?, 5011248, Р'Ії2ег), летрозол (РЕМАКА-, Момагіїз), мезилат іматинібу (СІГЕЕМЕС-, Момапів), ХІ -518 (інгібітор Мек,
Ехеїїхіз, УМО 2007/044515), АВР -886 (інгібітор Мек, А2О6244, Аітау ВіоРпапта, Авіга 7/епеса),
ЗЕ-1126 (інгібітор РІЗК, Зетатюге РНаптасеціїсаіє), ВЕ7-235 (інгібітор РІЗК, Момапгіів), ХІ-147 (інгібітор РІЗК, Ехеїїхіз), РТК787/2К 222584 (Момапів), фулвестрант (ГРАБ ООЕХ-, Авіга/епеса), лейковорин (фолінова кислота), рапаміцин (сиролімус, КАРАМИМЕ?, Умуеїй), лапатиніб (ТУКЕВВО, 55К572016, Сіахо тії Кіїпе), лонафарніб (ЗАКАБАК"М, 5СН 66336, 5спегіпд
Ріоцоп), сорафеніб (МЕХАМАНК?У, ВАУ43-9006, Вауег І арх), гефітиніб (ІКЕЗЗА?Є, Авіга/епеса), іринотекан (САМРТОБАНК?, СРТ-11, Ріїйгег), типірарніб (ЛАЕМЕБТКА "М, Ооппзоп 4 доппзоп),
АВКАХАМЕ " (без кремофору), склади на основі паклітакселу, зв'язаного зі сконструйованими з альбуміном наночастинками (Атегісап РПаптасешцшіса! Рагіпегє, 5спаштрбегод, Ії), вандетаніб (ММ, 206474, 7АСТІМА?Є, Авігалепеса), хлорамбуцил, АС1478, АС1571 (5 5271; Зидеп), темсиролімус (ТОВІЗЕЇ 2, Умуеїй), пазопаніб (сіахоЗтіїнКіїпе), канфосфамід (ТЕ! СУТАЄ, Теїїк), тіотепу і циклофосфамід (СУТОХАМУ, МЕОБАНЄ); алкілсульфонати, такі як бусульфан, імпросульфан і піпосульфан; азиридини, такі як бензодопа, карбоквон, метуредопа і уредопа; етиленіміни і метиламеламіни, в тому числі алтретамін, триетиленмеламін, триетиленфосфорамід, триетилентіофосфорамід і триметиломеламін; ацетогеніни (особливо булатацин і булатацинон); камптотецин (у тому числі синтетичний аналог топотекан); бріостатин; калістатин; СС-1065 (в тому числі його синтетичні аналоги адозелезин, карзелезин і бізелезин); криптофіцини (зокрема криптофіцин 1 і криптофіцин 8); доластатин; дуокарміцин (в тому числі синтетичні аналоги КМУ-2189 і СВ1-ТМІ1); еєлеутеробін; панкратистатин; саркодиктіїн; спонгістатин; азотисті іприти, такі як хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорфосфамід, естрамустин, іфосфамід, мехлоретамін, гідрохлорид мехлоретаміноксиду, мелфалан, новембіхін, 60 фенестерин, преднімустин, трофосфамід, урациловий іприт; нітрозосечовини, такі як кармустин,
хлорзотоцин, фотемустин, ломустин, німустин і ранімнустин; антибіотики, такі як енедіїнові антибіотики (наприклад, каліхеаміцин, каліхеаміцин гама 1, каліхеаміцин омега Ії (Апдем/
Сет. Іпі. Еа. Еподі. (1994) 33:183-186); динеміцин, динеміцин А; бісфосфонати, такі як клодронат; еспераміцин; а також неокарциностатиновий хромофор і споріднені хромопротеїнові хромофори енедіїнових антибіотиків, аклациномізини, актиноміцин, аутраміцин, азасерин, блеоміцини, кактиноміцин, карабіцин, карміноміцин, карцинофілін, хромоміцини, дактиноміцин, даунорубіцин, деторубіцин, б-діазо-5-оксо-І -норлейцин, морфолінодоксорубіцин, ціаноморфолінодоксорубіцин, 2-піролинодоксорубіцин і дезоксидоксорубіцин, епірубіцин, езорубіцин, ідарубіцин, неморубіцин, марцелломіцин, митоміцини, такі як мітоміцин с, мікофенолова кислота, ногаламіцин, олівоміцини, пепломіцин, порфіроміцин, пуроміцин, квеламіцин, родорубіцин, стрептонігрин, стрептозоцин, туберцидин, убенімекс, зиностатин, зорубіцин; антиметаболити, такі як метотрексат і 5-фторурацил (5-ЕМ); аналоги фолієвої кислоти, такі як деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пурину, такі як флударабін, б-меркаптопурин, тіаміприн, тіогуанін; аналоги піримідину, такі як анцитабін, азацитидин, б-азауридин, кармофур, цитарабін, дидезоксиуридин, доксифлуридин, еноцитабін, флоксуридин; андрогени, такі як калустерон, пропіонат дромостанолону, епітіостанол, мепітіостан, тестолактон; речовини, що пригнічують функції надниркових залоз, такі як аміноглутетимід, мітотан, трилостан; засіб для поповнення фолієвої кислоти, такий як фролінова кислота; ацеглатон; альдофосфамідглікозид; амінолевулінова кислота; енілурацил; амсакрин; бестрабуцил; бісантрен; едатраксат; дефофамін; демеколцин; діазиквон; елфорнітин; ацетат еліптинію; епотилон; етоглюцид; нітрат галію; гідроксисечовину; лентинан; лонідаїнін; майтанзиноїдьі, такі як майтанзин і ансамітоцини; мітогуазон; мітокстантрон; мопіданмол; нітраерин; пентостатин; фенамет; пірарубіцин; лозоксантрон; подофілінову кислоту; 2- етилгідразид; прокарбазин; полісахаридний комплекс РОК? (НО Маїшга! Ргодисів, Еидепе, ОВ); разоксан; ризоксин; сизофіран; спірогерманій; тенуазонову кислоту; триазиквон; 2,227- трихлортриєетиламін; трихотецени (особливо токсин 1-2, веракурин А, роридин А і ангуїдин); уретан; віндезин; дакарбазин; маномустин; мітобронітол; мітолактол; піпоброман; гацитозин; арабінозид ("Ага-С"); циклофосфамід; тіотепу; б-тіогуанін; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платини, такі як цисплатин і карбоплатин; вінбластин; етопозид (МР-16); іфосфамід; мітоксантрон; вінкристин; вінорелбін (МАМЕЇ ВІМЕЄ); новантрон; теніпозид; едатрексат; дауноміцин; аміноптерин; капецитабін (ХЕГОМБА?, Воспе); ібандронат; СРТ-11; інгібітор топоїзомерази КЕЗ 2000; дифторметилорнітин (ОМЕО); ретиноїди, такі як ретиноєва кислота; і фармацевтично прийнятні солі, кислоти і похідні будь-чого з вищевказаних.
Також у визначення "хіміотерапевтичний засіб" включені (І) антигормональні засоби, які діють за допомогою регуляції або пригнічення дії гормонів на пухлини, такі як антиестрогени і селективні модулятори рецепторів естрогенів (ЗЕКМ), в тому числі, наприклад, тамоксифен (в тому числі МОЇ МАБЕХ?У: цитрат тамоксифену), ралоксифен, дролоксифен, «4- гідрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, І У117018, онапристон і ЕАРЕ5ТОМ? (цитрат тореміфіну); (ії) інгібітори ароматази, які інгібують фермент ароматазу, яка регулює вироблення естрогену в надниркових залозах, такі як, наприклад, 4(5)-імідазоли, аміноглутетимід, МЕСАБЕ? (ацетат мегестролу), АКОМАЗВБІМУ (ексеместан; Ріїгеї), форместан, фадрозол, РБІМІЗОКУ (ворозол), РЕМАКА? (летрозол; Момапіз) і АВІМІОЕХ? (анастрозол; Авіга/епеса); (ії) антиандрогени, такі як флутамід, нілутамід, бікалутамід, лейпролід і гозерелін; а також троксацитабін (1,3-діоксолановий нуклеозидний аналог цитозину); (ім) інгібітори протеїнкіназ, такі як інгібітори МЕК (УМО 2007/044515); (м) інгібітори ліпідкіназ; (уї) антисенсові олігонуклеотиди, зокрема олігонуклеотиди, які пригнічують експресію генів у сигнальних шляхах, задіяних у порушенні проліферації клітин, наприклад, РКС-альфа, Каї і Н-Кав, такі як облімерсен (СЕМАБЕМ5БЕ?, (Сепіа Іпс.); (мії) рібозими, такі як інгібітори експресії МЕСЕ (наприклад АМСІО2УМЕГЗ) і інгібітори експресії НЕК; (міїї) вакцини, такі як вакцини для генної терапії, наприклад, АГГ'ОМЕСТІМУ, І ЕОМЕСТІМУ ї МАХІОЄ: РЕОГЕШКІМФ пі-2; інгібітори топоіїзомерази 1, такі як ПШЕТОТЕСАМУ; АВАНЕТІХУ птн; (їх) антиангіогенні засоби, такі як бевацизумаб (АМА5ТІМУ, Сепепіесі); і фармацевтично прийнятні солі, кислоти і похідні будь- чого з вищевказаних.
Також у визначення "хіміотерапевтичний засіб" включені терапевтичні антитіла, такі як алемтузумаб (Сатраїйй), бевацизумаб (АМА5ТІМе, Сепепіесі); цетуксимаб (ЕЕВІТОХУ, Ітсіопе); панітумумаб (МЕСТІВІХУ, Атдеп), ритуксимаб (ЕІТОХАМУ, Сепепіесп/Віодеп Ідес), пертузумаб (ОММІТАВО "М, 204, Сепепіесі), трастузумаб (НЕЕСЕРТІМУ, Сепепіесі)), тозитумомаб (Веххаг,
Согіхіа) і кон'югат антитіло-лікарський засіб гемтузумаб озогаміцин (МУ ОТАВС, Уууєїй).
Гуманізовані моноклональні антитіла з терапевтичним потенціалом як хіміотерапевтичні 60 засоби у комбінації з кон'юЮгатами за даним винаходом включають алемтузумаб, аполізумаб,
азелізумаб, атлізумаб, бапінеузумаб, бевацизумаб, біватузумаб мертансин, кантузумаб мертансин, цеделізумаб, цертолізумаб пегол, цидфузитузумаб, цидтузумаб, даклізумаб, екулізумаб, ефалізумаб, епратузумаб, ерлізумаб, фелвізумаб, фонтолізумаб, гемтузумаб озогаміцин, інотузумаб озогаміцин, іпілімумаб, лабетузумаб, лінтузумаб, матузумаб, меполізумаб, мотавізумаб, мотовізумаб, наталізумаб, німотузумаб, ноловізумаб, нумавізумаб, окрелізумаб, омалізумаб, палівізумаб, пасколізумаб, пекфузитузумаб, пектузумаб, пертузумаб, пекселізумаб, ралівізумаб, ранібізумаб, реслівізумаб, реслізумаб, ресивізумаб, ровелізумаб, руплізумаб, сибротузумаб, сиплізумаб, сонтузумаб, такатузумаб тетраксетан, тадоцизумаб, талізумаб, тефибазумаб, тоцилізумаб, торалізумаб, трастузумаб, тукотузумаб целмолейкін, тукузитузумаб, умавізумаб, уртоксазумаб і візилізумаб.
Склади
У той час як є можливим окреме застосування (наприклад введення) кон'югату, часто кращим є представлення його у вигляді композиції або складу.
В одному варіанті здійснення композиція являє собою фармацевтичну композицію (наприклад, склад, препарат, лікарський препарат), що містить кон'югат, описаний в даному документі, і фармацевтично прийнятний носій, розчинник або допоміжну речовину.
В одному варіанті здійснення композиція являє собою фармацевтичну композицію, що містить щонайменше один кон'югат, описаний у даному документі, разом з одним або декількома іншими фармацевтично прийнятними інгредієнтами, широко відомими спеціалістам у даній галузі техніки, в тому числі без обмеження фармацевтично прийнятними носіями, розчинниками, допоміжними речовинами, ад'ювантами, наповнювачами, буферами, консервантами, антиоксидантами, змащувальні засобами, стабілізувальними засобами, солюбілізувальними засобами, поверхнево-активними речовинами (наприклад змочувальними засобами), маскувальними засобами, барвниками, ароматизаторами і підсолоджувачами.
В одному варіанті здійснення композиція додатково містить інші активні засоби, наприклад інші терапевтичні або профілактичні засоби.
Інформацію про придатні носії, розріджувачі, допоміжні речовини, тощо можна знайти в стандартних фармацевтичних джерелах літератури. Див., наприклад, Напароок ої
Рпаптасешііса! Адайїймев5, 2-е видання (під ред. М. Ав і Ї. Ав), 2001 (Зупарзе Іпіоппайоп
Везоигсезв, Іпс., Епаїсонй, Нью-Йорк, США), Кетіпдіоп'є Рпагтасеціїса! 5сіепсе5, 20-е видання, рив. Іірріпсой, УмМіШатве 5 УМіКіп5, 2000; ії Напабоок ої Ріпаптасеціїйса! Ехсіріеєпіб5, 2-е видання, 1994.
Інший аспект даного винаходу відноситься до способів одержання фармацевтичної композиції, що включає змішування щонайменше одного міченого радіоактивним ізотопом | С кон'югату або подібної кон'югату сполуки, визначених в даному документі, з одним або декількома іншими фармацевтично прийнятними інгредієнтами, широко відомими спеціалістам в даній галузі техніки, наприклад, носіями, розчинниками, допоміжними речовинами, тощо. У випадку складання у вигляді дискретних одиниць (наприклад таблеток, тощо), кожна одиниця містить задану кількість (дозу) активної сполуки.
Використовуваний у даному документі термін "фармацевтично прийнятний" відноситься до сполук, інгредієнтів, матеріалів, композицій, дозованих лікарських форм, тощо, які за результатами ретельного медичного оцінювання є придатними для застосування в контакті з тканинами вказаного суб'єкта (наприклад людини), при цьому не викликаючи надмірну токсичність, подразнення, алергічну реакцію або іншу проблему або ускладнення, порівнянні з обгрунтованим співвідношенням користь/ризик. Кожен носій, розчинник, допоміжна речовина, тощо також повинні бути "прийнятними" з точки зору сумісності з іншими інгредієнтами складу.
Склади можуть бути одержані за допомогою будь-яких способів, широко відомих у галузі фармацевтики. Такі способи включають стадію приведення активної сполуки в контакт з носієм, який складається з одного або декількох допоміжних інгредієнтів. В цілому склади одержують за допомогою однорідного і безпосереднього приведення активної сполуки в контакт з носіями (наприклад, рідкими носіями, тонкоподрібненим твердим носієм, тощо) | подальшого надання форми продукту за необхідності.
Може бути одержаний склад, який передбачає швидке або повільне вивільнення; негайне, уповільнене, відстрочене або пролонговане вивільнення або їх комбінацію.
Склади, які є придатними для парентерального введення (наприклад за допомогою ін'єкції), включають водні або неводні ізотонічні апірогенні стерильні рідини (наприклад, розчини, суспензії), в яких розчинений, суспендований або іншим чином представлений активний інгредієнт (наприклад в ліпосомі або інший мікрочастинці). Такі рідини можуть додатково містити інші фармацевтично прийнятні інгредієнти, такі як антиоксиданти, буфери, консерванти, 60 стабілізувальні засоби, бактеріостатичні засоби, суспендувальні засоби, загусники і розчинені речовини, які роблять склад ізотонічним по відношенню до крові (або іншої відповідної біологічної рідини) передбачуваного реципієнта. Приклади допоміжних речовин включають, наприклад, воду, спирти, багатоатомні спирти, гліцерин, рослинні масла, тощо. Приклади придатних ізотонічних носіїв для застосування в таких складах включають хлорид натрію для ін'єкцій, розчин Рінгера або розчин лактату Рінгера для ін'єкцій. Як правило, концентрація активного інгредієнта в рідині становит від приблизно 1 нг/мл до приблизно 10 мкг/мл, наприклад від приблизно 10 нг/мл до приблизно 1 мкг/мл. Склади можуть бути представлені в однодозових або багатодозових герметично закритих контейнерах, наприклад ампулах і флаконах, і можуть зберігатися у висушеному за допомогою сублімації (ліофілізованому) стані, який вимагає тільки додавання стерильного рідкого носія, наприклад води для ін'єкцій, безпосередньо перед застосуванням. Екстемпоральні розчини і суспензії для ін'єкцій можуть бути одержані зі стерильних порошків, гранул і таблеток.
Доза
Спеціалісту у даній галузі техніки буде зрозуміло, що відповідні дози кон'югатів і композицій, що містять кон'югати, можуть варіюватися від пацієнта до пацієнта. Визначення оптимальної дози, як правило, включає урівноваження терапевтичної користі відносно будь-якого ризику або згубних побічних ефектів. Обраний рівень дози буде залежати від різноманітних факторів, в тому числі без обмеження активності певної сполуки, шляху введення, часу введення, швидкості виведення сполуки, тривалості лікування, інших лікарських засобів, сполук та/або матеріалів, що застосовуються в комбінації, ступеня важкості стану і виду, статі, віку, ваги, стану, загального стану здоров'я і анамнезу пацієнта. Кількість сполуки і шлях введення в кінцевому рахунку будуть залишені на розсуд лікаря, ветеринара або клініциста, однак, як правило, доза буде підбиратися з метою досягнення значень локальної концентрації в місці дії, які забезпечують досягнення необхідного ефекту, не викликаючи істотних шкідливих або згубних побічних ефектів .
Введення може здійснюватися у вигляді однієї дози, безперервно або з перервами (наприклад у вигляді розділених доз через придатні інтервали часу) протягом курсу лікування.
Способи визначення найбільш ефективних способів і дози введення добре відомі спеціалістам у даній галузі техніки і будуть варіюватися залежно від складу, що застосовується для терапії, цілі терапії, клітини-мішені (клітин-мішеней), що підлягає лікуванню, і суб'єкта, який підлягає лікуванню. Однократне або багатократне введення може здійснюватися із застосуванням рівня дози та схеми, обраних лікарем, ветеринаром або клініцистом.
Загалом придатна доза активної сполуки знаходиться в діапазоні від приблизно 100 нг до приблизно 25 мг (більш типово від приблизно 1 мкг до приблизно 10 мг) на день в розрахунку на кілограм ваги тіла суб'єкта. У випадку, якщо активна сполука являє собою сіль, естер, амід, проліки або т. п., кількість, що вводиться, розраховується за початковою сполукою і, таким чином, фактична застосовувана вага збільшується пропорційно.
Величини доз, описані вище, можуть застосовуватися відносно кон'югату або ефективної кількості сполуки, яка вивільняється після розщеплення лінкеру.
Для попередження або лікування захворювання придатна доза АОС за даним винаходом буде залежати від типу захворювання, що підлягає лікуванню, як визначено вище, ступеня важкості та перебігу захворювання, від того, чи вводять молекулу в превентивних або терапевтичних цілях, попередньої терапії, анамнезу пацієнта і реакції на антитіло, а також від розсуду лікаря. Молекула придатним чином вводиться пацієнту однократно або під час ряду курсів лікування. Залежно від типу і ступеня важкості захворювання, кількість молекул, що становить від приблизно 1 мкг/кг до 100 мг/кг або більше, являє собою початкову кандидатну дозу для введення пацієнту, або, наприклад, за допомогою одного або декількох окремих введень або за допомогою безперервної інфузії. При повторних введеннях протягом декількох днів або довше, залежно від стану, лікування продовжується до тих пір, поки не відбудеться необхідне пригнічення симптомів захворювання. Інші схеми дозування можуть бути застосовними. Хід данної терапії легко піддається моніторингу за допомогою традиційних методик і аналізів.
Навантаження лікарським засобом
Навантаження лікарським засобом (р) являє собою середню кількість лікарського засобу, яка припадає на ланку, яка являє собою ліганд, яка може являти собою засіб, який зв'язується з клітиною, наприклад антитіло.
Середня кількість лікарського засобу, що припадає на антитіло, у препаратах АОС, отриманих за допомогою реакцій кон'югації може бути охарактеризована за допомогою традиційних способів, таких як ОМ, НРІ С з оберненою фазою, НІС, мас-спектрометрія, аналіз 60 ЕНПЗА і електрофорез. Кількісний розподіл АОС з точки зору р також може бути визначений. За допомогою ЕІЗА може бути визначене усереднене значення р в певному препараті АОС (Натрбіей еї а! (2004) Сіїп. Сапсег Рез. 10:7063-7070; Запаегзоп еї а! (2005) Сііп. Сапсег Везв. 11:843-852). Однак розподіл значень р (лікарського засобу) не є помітним за допомогою зв'язування антитіла з антигеном і межі виявлення ЕГІЗА. Крім того, застосування аналізу
ЕЙПІЗА для виявлення кон'югатів антитіло-лікарський засіб не забезпечує визначення місця приєднання фрагментів лікарського засобу до антитіла, наприклад фрагментів легкого ланцюга або важкого ланцюга або певних амінокислотних залишків. У деяких випадках розділення, очищення та визначення характеристик однорідного АОС, де р являє собою певне значення, одержане для АЮС з навантаженнями іншим лікарським засобом, можуть здійснюватися за допомогою таких способів, як НРС з оберненою фазою або електрофорез. Такі методики також є застосовними відносно інших типів кон'югатів.
У випадку деяких кон'югатів антитіло-лікарський засіб значення р може обмежуватися кількістю сайтів приєднання на антитілі. Наприклад, антитіло може містити тільки одну або декілька тіольних груп цистеїну або може містити тільки одну або декілька достатньо реакційноздатних тіольних груп, за допомогою яких лінкер може бути приєднаний. Більш високе навантаження лікарським засобом може викликати агрегацію, нерозчинність, токсичність або втрату здатності до проникнення в клітину для певних кон'югатів антитіло-лікарський засіб.
Як правило, під час реакції кон'югації з антитілом кон'югується менше ніж теоретично максимальна кількість фрагментів, що являють собою лікарський засіб. Антитіло може містити, наприклад, множину залишків лізину, які не реагують з лінкером лікарського засобу. Тільки найбільш реакційноздатні групи лізину здатні реагувати з реакційноздатним відносно аміну лінкерним реагентом. Крім того, тільки найбільш реакційноздатні тіольні групи цистеїну здатні реагувати з реакційноздатним відносно тіолу лінкерним реагентом. В цілому антитіла не містять множину або взагалі не містять вільних і реакційноздатних тіольних груп цистеїну, які можуть бути приєднані до фрагмента, який являє собою лікарський засіб. Більшість тіольних залишків цистеїну в антитілах сполук існують у вигляді дисульфідних містків і їх кількість має бути скорочена за допомогою відновника, такого як дітіотреїтол (ОТ) або ТСЕР, в частково або повністю відновлювальних умовах. Навантаження (співвідношення лікарський засіб/антитіло)
АС можна регулювати декількома різними способами, що включають (ї) обмеження молярного надлишку лінкера лікарського засобу відносно антитіла, (ії) обмеження часу або температури протікання реакції кон'югації і (її) часткові або обмежувальні відновлювальні умови для модифікації тіольної групи цистеїну.
Деякі антитіла містять відновлювані міжланцюгові дисульфідні зв'язки, тобто цистеїнові містки. Антитіла можна зробити реакційноздатними відносно кон'югації з лінкерними реагентами за допомогою обробки відновником, таким як ОТТ (дітіотреїтол). Кожний цістеїновий місток, таким чином, буде теоретично утворювати два реакційноздатних тіольних нуклеофіли.
Додаткові нуклеофільні групи можна вводити в антитіла за допомогою здійснення реакції залишків лізину з 2-імінотіоланом (реагентом Трота), що приводить до перетворення аміну на тіол. Реакційноздатні тіольні групи можна вводити в антитіло (або його фрагмент) за допомогою конструювання одного, двох, трьох, чотирьох або більше залишків цистеїну (наприклад за допомогою одержання мутантних антитіл, що містять один або декілька ненативних амінокислотних залишків цистеїну). У О5 7521541 описане конструювання антитіл за допомогою введення реакційноздатних амінокислот, що являють собою цистеїн.
Амінокислоти, що являють собою цистеїн, можуть бути сконструйовані в реакційноздатних сайтах антитіла, а також таким чином, щоб вони не утворювали внутрішньоланцюгових або міжмолекулярних дисульфідних зв'язків (ипишїціа, еї аїЇ.,, 200856 Маїциге Віоїесн., 26(8):925-932;
Богтан еї а! (2009) Віоса 114(13):2721-2729; 005 7521541; 005 7723485; МО 2009/052249). Тіольні групи сконструйованих залишків цистеїну здатні реагувати з лінкерами лікарського засобу за даним винаходом (тобто формули І), які містять реакційноздатні відносно тіолу електрофільні групи, такі як малеїмід або альфа-галогенаміди, з утворенням АОС з антитілами зі сконструйованими залишками цистеїну. Місцезнаходження ланки, яка являє собою лікарський засіб, таким чином, може бути розробленим, контрольованим і відомим. Навантаження лікарським засобом можна контролювати, оскільки тіольні групи сконструйованого цистеїну, як правило, реагують з реагентами лікарський засіб-лінкер з високим виходом. Конструювання антитіла дО з введенням амінокислоти, що являє собою цистеїн, за допомогою заміни в одному сайті на важкому або легкому ланцюгу забезпечує одержання двох нових залишків цистеїну на симетричному антитілі. Навантаження лікарським засобом, близьке до 2, може бути досягнуте з майже однорідністю продукту кон'югації АОС.
У випадку, якщо більше ніж одна нуклеофільна або електрофільна група антитіла реагує з 60 лінкерами лікарського засобу, одержаний продукт може являти собою суміш сполук АОС з розподілом ланок, що являють собою лікарський засіб, приєднаних до антитіла, наприклад, 1, 2, 3, тощо за допомогою способів рідинної хроматографії, таких як хроматографія з полімерною оберненою фазою (РІКР) і хроматографія гідрофобних взаємодій (НІС), можна розділяти сполуку в суміші за значенням навантаження лікарським засобом. Препарати АОС з одним значенням (р) навантаження лікарським засобом можуть бути виділені, однак такі АОС з одним значенням навантаження все ще можуть являти собою неоднорідні суміші, оскільки ланки, що являють собою лікарський засіб, можуть бути приєднані за допомогою лінкера до різних сайтах антитіла.
Таким чином, композиції на основі кон'югату антитіло-лікарський засіб за даним винаходом можуть містити суміші кон'югатів антитіло-лікарський засіб, де антитіло містить один або декілька фрагментів, що являють собою лікарський засіб, і де фрагменти, що являють собою лікарський засіб, можуть бути приєднані до антитіла за різними амінокислотними залишками.
В одному варіанті здійснення середня кількість лікарських засобів, яка припадає на засіб, який зв'язується з клітиною, знаходиться в діапазоні від 1 до 20. У деяких варіантах здійснення діапазон вибраний з діапазону від 1 до 10, від2 до 10, від2 дов, від2 до б і від 4 до 10.
У деяких варіантах здійснення на засіб, який зв'язується з клітиною, припадає один лікарський засіб.
Загальні шляхи синтезу
Сполуки формули І, де Е- представлений формулою Іа, можуть бути синтезовані зі сполуки формули 2:
Н й о в ох
М
--
М
ХМ 7 о оно формула 2, де В" являє собою -ОН завдяки приєднанню до сполуки формули 3: о сі р но х формула 3, або її активовану версію.
Таку реакцію можна здійснювати в умовах, що сприяють утворенню амідного зв'язку.
Сполуки формули 2 можна синтезувати за допомогою видалення захисної групи зі сполуки формули 4:
М
-щ-- вро Ух о
М кс хх / о
ОН о формула, де ВР! являє собою -О-Ргої", де Ргої" являє собою захисну групу для аміногрупи.
Сполуки формули 4 можуть бути синтезовані за допомогою реакції сполучення сполуки формули 5:
М вової о
Мн, формула 5, зі сполукою АЗ із застосуванням реакції Фридлендера.
Сполуки формули 5 можна синтезувати зі сполук формули 6:
М рісрой о
СОсСЕ м
Н формула 6, за допомогою видалення трифторацетамідної захисної групи.
Сполуки формули б можна синтезувати за допомогою реакції сполучення КАРО-ОН зі сполукою 17.
Сполуки формули І, де Е" представлений формулою Іа або ІБ, можна синтезувати зі сполуки
І11 за допомогою реакції сполучення зі сполукою КОН або її актгивованою формою.
Захисні групи для аміногрупи
Захисні групи для аміногрупи широко відомі спеціалістам у даній галузі техніки. Особлива увага звертається на розкриття прідатніх захисних груп у Сгеепе"5 Ргоїесііпд СгоиМрзв іп Огдапіс зупіпевзіз, четверте видання, Чдопп УмМіеу 5 5оп5, 2007 (І5ВМ 978-0-471-69754-1), сторінки 696- 871.
Додаткові переваги
Наступні переваги можна застосовувати до всіх аспектів цього винаходу, як описано вище, або вони можуть відноситися до окремого аспекту. Переваги можуть бути об'єднані разом у будь-якій комбінації. ох
В одному варіанті здійснення О являє собою амінокислотний залишок. Амінокислота може являти собою природну амінокислоту або неприродну амінокислоту.
В одному варіанті здійснення О вибраний з Ре, Гуз, Маї, Аа, Сії, І еи, Пе, Аго і Тгр, де Сії являє собою цитрулін.
В одному варіанті здійснення О включає дипептидний залишок. Амінокислоти в дипептиді можуть являти собою любую комбінацію природних амінокислот і неприродних амінокислот. У деяких варіантах здійснення дипептид містить природні амінокислоти. Якщо лінкер являє собою лінкер, лабільний відносно розщеплення катепсином, то дипептид є сайтом дії катепсин- опосередкованого розщеплення. Таким чином, дипептид являє собою сайт розпізнавання для катепсину.
В одному варіанті здійснення О вибраний з мн-РАе-ІГ ув-5-0, мн-УаїІ-АГа-4-о, мн-УаІ-Гув-8-90, мн.діІа-Ї ув-2-9о, мн-МаІ-Сп-е-о, мнАРпе-СІій-8-50,
МН-| ец-Сії-е5о, мн-Це-Сії-е-о, мн.АРре-Аго-с-о, мН-Тур-Сй-е-о мн-сПу-Маї-6-о; де Сії являє собою цитрулін.
Переважно О вибраний з мн-РАе-ІГ ув-5-0,
мн-Уа!-АІа-с-о, мн-УаІ-Гув-2-о0, мн.-Діа-І ув-5-0 і мн-уаїі-Сйі-е-о,
Найбільш переважно, О вибраний з "Н-Рріе-ІЇ увз-2-0, Мн-Уа|-Сії-9-О або чн-Ма/І-АІа-с-о,
Інші комбінації дипептидів, що представляють інтерес, включають мн. (у-Сспу-е-о, мн.дпу-Ма!-5-о мн-Рго-Рго-9-09 і мн-УаІ-Сти-2-о,
Можуть застосовуватися інші комбінації дипептидів, в тому числі комбінації, описані в
Биромснік еї аї!., Віосопійдаїє Спетівзігу, 2002, 13,855-869, яка включена в даний документ за допомогою посилання.
У деяких варіантах здійснення ОО являє собою трипептидний залишок. Амінокислоти у трипептиді можуть являти собою любую комбінацію природних амінокислот і неприродних амінокислот. У деяких варіантах здійснення трипептид містить природні амінокислоти. Якщо лінкер являє собою лінкер, лабільний відносно розщеплення катепсином, то трипептид є сайтом дії катепсин-опосередкованого розщеплення. Таким чином, трипептид являє собою сайт розпізнавання для катепсину. Трипептидні лінкери, що представляють особливий інтерес, являють собою: мн-сци-Ма!-АГІа-2-о мн-сци-Ма!-Сії-6-о мн-сои-Ма!-АГІа-2-о мн-сои-Ма!І-Сії-о-о
У деяких варіантах здійснення О являє собою тетрапептидний залишок. Амінокислоти у тетрапептиді можуть являти собою любую комбінацію природних амінокислот і неприродних амінокислот. У деяких варіантах здійснення тетрапептид містить природні амінокислоти. Якщо лінкер являє собою лінкер, лабільний відносно розщеплення катепсином, то тетрапептид є сайтом дії катепсин-опосередкованого розщеплення. Таким чином, тетрапептид являє собою сайт розпізнавання для катепсину. Тетрапептидні лінкери, що представляють особливий інтерес, являють собою: мн.сіу-сіу-Рпе-Спус-о і мн.сіу-Рпе-Сту-стусчо,
У деяких варіантах здійснення тетрапептид являє собою мн-сту-сСту-РНе-Спус-о,
На представлених вище зображеннях пептидних залишків МН- являє собою М-кінець, і -2-0 являє собою С-кінець залишку. С-кінець зв'язаний з МН з А".
Сім являє собою залишок глутамінової кислоти, тобто о ще з ве обі являє собою залишок глутаміної кислоти при зв'язуванні за допомогою а-ланцюга, тобто: оту ОН
Кут
Н о
В одному варіанті здійснення за необхідності боковий ланцюг амінокислоти є хімічно захищеним. Захисна група для бокового ланцюга може являти собою групу, розглянуту вище.
Захищені амінокислотні послідовності є здатними до розщеплення за допомогою ферментів.
Наприклад, дипептидна послідовність, яка містить залишок | уз із захистом бокового ланцюга за допомогою Вос, є здатною до розщеплення за допомогою катепсину.
Захисні групи для бокових ланцюгів амінокислот широко відомі з рівня техніки, описані в каталозі Момаріоспет і є такими, як описано вище. ці
С може бути вибраний із о о ря о Й (47) М (СІ) М
Се о о о лу Вг (анг) Ї (в5) У о о 7 Ж (сг) (с118)
Х о в о
З-3
Ма (ан) / х (св) г (МО) де група МО» є необов'язковою 5-58
І щі 3-2 їло (со) / М (а9)
Н
(МО) де група МО» є необов'язковою
З-95 ((а5-3) Х (ан) /Ї
М
/Х -і
Ук С де група МО» є необов'язковою 8-8 (3-3 г (анг) ом де група МО» є необов'язковою о ме
І4 / ; їз і (а) на! - (877) ще де Наї являє собою і, Вг, Сі о сь на-4 ди нм л (05) 9- (8-7) бат де Аг являє собою Сз5вариленову групу, наприклад, фенілен, і Х являє собою Сз-залкіл.
У деяких варіантах здійснення С- вибраний із (57 та (512, У деяких із даних варіантів здійснення С- являє собою 71, сви
С. може бути вибраний із:
СВА о л Же (ан) СВА М (Св) М ; о о СВА
Ку 3, (аш) СВА М (авг) о о о К к о лох (сн) СВА "7 и (Сн) Щі о ШІ о СВА рі 2-3, 3-1 СВА щ119-2 -- (внам) і в (вче) о,
СВА
СВА
М сиг СВА до 7 Н
Що ри Ту
М н
СВА с ше
СВА Й нм Ї па Н ши (ан) М (ант) у
Н М о У 7 Шк
СВА о 7 - я (ан5) (анг) ї о-ї НМ 2 х
Н м-м х Х о Х
СВА
(16) (Сни)
СВА
СВА Н
(ан) ще (аша) своих де Аг являє собою Сз5вариленову групу, наприклад, фенілен, і Х являє собою Сз-залкіл.
У деяких варіантах здійснення С. вибраний із (54-71 та (31-12, У деяких із даних варіантів здійснення СЧ- являє собою СНИ, х
Х являє собою: о о о щи сі осо) о М Мем а Н Н Н а р1 2 с1 с2 де а дорівнює 0-5, 01 дорівнює 0-16, 62 дорівнює 0-16, с дорівнює 0 або 1, а дорівнює 0-5, де щонайменше Б1 або р2 дорівнює 0, і щонайменше с! або с2 дорівнює 0. а може дорівнювати 0, 1, 2, 3, 4 або 5. У деяких варіантах здійснення а дорівнює 0-3. У деяких із даних варіантів здійснення а дорівнює 0 або 1. У додаткових варіантах здійснення а дорівнює 0.
01 може дорівнювати 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16. У деяких варіантах здійснення Б1 дорівнює 0-12. У деяких із даних варіантів здійснення Б1 дорівнює 0-8 і може дорівнювати 0, 2, 3, 4, 5 або 8. р2 може дорівнювати 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16. У деяких варіантах здійснення 02 дорівнює 0-12. У деяких із даних варіантів здійснення Б2 дорівнює 0-8 і може дорівнювати 0, 2, 3, 4, 5 або 8.
Лише один із Б1 та 62 може не дорівнювати 0. с1 може дорівнювати 0 або 1. с2 може дорівнювати 0 або 1.
Лише один із с1 та с2 може не дорівнювати 0. а може дорівнювати 0, 1, 2, 3, 4 або 5. У деяких варіантах здійснення й дорівнює 0-3. У деяких із даних варіантів здійснення а дорівнює 1 або 2. У додаткових варіантах здійснення а дорівнює 2. У додаткових варіантах здійснення а дорівнює 5.
У деяких варіантах здійснення Х а дорівнює 0, Б1 дорівнює 0, с1 дорівнює 1, с2 дорівнює 0, і а дорівнює 2, і 62 може дорівнювати 0-8. У деяких із даних варіантів здійснення 62 дорівнює 0, 2,3,4,5абов.
У деяких варіантах здійснення Х а дорівнює 1, 62 дорівнює 0, с1 дорівнює 0, с2 дорівнює 0, і а дорівнює 0, і 61 може дорівнювати 0-8. У деяких із даних варіантів здійснення Б1 дорівнює 0, 2,3,4,5абов.
У деяких варіантах здійснення Х а дорівнює 0, Б1 дорівнює 0, с1 дорівнює 0, с2 дорівнює 0, і а дорівнює 1, і 62 може дорівнювати 0-8. У деяких із даних варіантів здійснення 62 дорівнює 0, 2,3,4,5абов.
У деяких варіантах здійснення Х Б1 дорівнює 0, 62 дорівнює 0, с1 дорівнює 0, с2 дорівнює 0, і один із а та а дорівнює 0. Інший із а та а дорівнює 1-5. У деяких із даних варіантів здійснення інший із а та а дорівнює 1. В інших із даних варіантів здійснення інший із а та а дорівнює 5.
У деяких варіантах здійснення Х а дорівнює 1, 62 дорівнює 0, с1 дорівнює 0, с2 дорівнює 1, а дорівнює 2, і Б1 може дорівнювати 0-8. У деяких із даних варіантів здійснення р2 дорівнює 0, 2, 3,4, 5 або 8.
У деяких варіантах здійснення РЕ" представлений формулою ІБ.
У деяких варіантах здійснення КЕ"- представлений формулою ІБ'.
А" та В2 незалежно вибрані із Н та метилу або разом із атомом вуглецю, з яким вони зв'язані, утворюють циклопропіленову або циклобутиленову групу.
У деяких варіантах здійснення В" та КІ? одночасно являють собою Н.
У деяких варіантах здійснення БА являє собою Н, і В'2 являє собою метил.
У деяких варіантах здійснення В" та КІ? одночасно являють собою метил.
У деяких варіантах здійснення БА та КІ? разом із атомом вуглецю, з яким вони зв'язані, утворюють циклопропіленову групу.
У деяких варіантах здійснення КА та Ве разом із атомом вуглецю, з яким вони зв'язані, утворюють циклобутиленову групу.
У групі ІБ у деяких варіантах здійснення е дорівнює 0. В інших варіантах здійснення е дорівнює 1, і нітрогрупа може знаходитись у будь-якому доступному положенні кільця. У деяких із даних варіантів здійснення вона знаходиться в орто-положенні. В інших із даних варіантів здійснення вона знаходиться у пара-положенні.
У деяких варіантах здійснення п'ятого аспекту даного винаходу енантіомерно збагачена форма характеризується співвідношенням енантіомерів, яке становить більше ніж 60:40, 70:30; 80:20 або 90:10. У додаткових варіантах здійснення співвідношення енантіомерів становить більше ніж 95:5, 97:3 або 99:1.
У деяких варіантах здійснення Р вибраний із:
но о М ї «и ї
Оу 8 : Н о т о
Ж жо о М о с) сл КИ т М о
Н
ТАЙ
АК о о ко Їо ще (М) г вн
ААУ о о
МД
(х) М о АТ о х о (м) с мет с о
МО,
о
Іо, о о о о
М) «Ж «Ж г й : М н І н о "с о о й НМ об о о (Мі) АХ КАХ гр й : М 8 н І н о о "й о о (їх) нм об о о
С буть у ль М
М 7 8 Н І о сон о т
У деяких варіантах здійснення К- являє собою групу, одержану із груп КУ, указаних вище.
В одному варіанті здійснення першого аспекту даного винаходу сполука формули І! являє собою: о о о о о ж Н Нн
Кох ут и ху о
Х о ИА о Ж о м Х /Й о би он о .
Додаткові переваги
У деяких варіантах здійснення сполука формули І представлена формулою ІР:
Н
М ві Сх о
М й
М
М, о бу
ОН о в і її солями та сольватами, де БІ? являє собою лінкер для приєднання до засобу, який зв'язується з клітиною, яка вибрана з (іа): о сі.
АЖ и
У, Іає, де
ОР являє собою:
Ф-о)
К ОХР
М МН
Н о де ОХР є таким, що ОР являє собою амінокислотний залишок, дипептидний залишок або трипептидний залишок;
ХР являє собою: с(о) о в о
Н ар
Р а ВР
СР де аР дорівнює 0-5, БР дорівнює 0-16, сР дорівнює 0 або 1, аР дорівнює 0-5;
С являє собою лінкер для приєднання до ланки, яка являє собою ліганд; (ів): и во
АК о З М в7 чи мо о ХО е
ІБ, де ЕВ" та В? незалежно вибрані із Н та метилу або разом із атомом вуглецю, з яким вони зв'язані, утворюють циклопропіленову або циклобутиленову групу; і е дорівнює 0 або 1. аР може дорівнювати 0, 1, 2, 3, 4 або 5. У деяких варіантах здійснення аР дорівнює 0-3. У деяких із даних варіантів здійснення аР дорівнює 0 або 1. У додаткових варіантах здійснення аг
Зо дорівнює 0.
БР може дорівнювати 0, 1, 2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16. У деяких варіантах здійснення Б дорівнює 0-12. У деяких із даних варіантів здійснення БР дорівнює 0-8 і може дорівнювати 0, 2, 4 або 8.
СР може дорівнювати 0 або 1. аР може дорівнювати 0, 1, 2, 3, 4 або 5. У деяких варіантах здійснення аР дорівнює 0-3. У деяких із даних варіантів здійснення аР дорівнює 1 або 2. У додаткових варіантах здійснення аР дорівнює 2.
У деяких варіантах здійснення ХР аР дорівнює 0, сР дорівнює 1, і аР дорівнює 2, і БР може дорівнювати 0-8. У деяких із даних варіантів здійснення БР дорівнює 0, 4 або 8.
Переваги для ОХ, указаного вище для сполук формули !, за необхідності можуть застосовуватися щодо ОХР,
Переваги для (С, ВМ, Ві? та е, указаних вище для сполук формули І!/, можуть застосовуватися щодо сполук формули ІГР.
У деяких варіантах здійснення кон'югат формули ІМ представлений формулою ІМ":
І -(0'К)р (МУ) або відповідною фармацевтично прийнятною сіллю або сольватом, де І являє собою ланку, яка являє собою ліганд (тобто засіб, що націлюється), ОР? являє собою ланку, яка являє собою лікарський засіб-лінкер, представлену формулою ПР:
М вив хх о
М й
М
М, о бан
ОН в
ВІР являє собою лінкер, приєднаний до ланки, яка являє собою ліганд, вибраної із (іа): о
Ж. Д ун.
ОР ХР Іа", де ОР та ХР визначені вище, і ії являє собою лінкер, приєднаний до ланки, яка являє собою ліганд; і
Зо (ів): в в?
МН а: лу
З 5 о ІБ", де В" та ВЕ? визначені вище; і р являє собою ціле число від 1 до 20.
У деяких варіантах здійснення сполука формули І представлена формулою ІР2:
М вії хх о
М й
М
М, у ? он о ІР2 і відповідними солями та сольватами, де Б'Р2 являє собою лінкер для приєднання до засобу, який зв'язується з клітиною, який вибраний із (іа): о г
Ж Ж УУИЗ а ХР ІаРг де
О являє собою: с(-О) с:
М МН
Н о де ОХ є таким, що О являє собою амінокислотний залишок, дипептидний залишок, трипептидний залишок або тетрапептидний залишок;
ХР2 являє собою: о -Ж- сі сего) о М ар? ар
Б1Р2 Б2Р2 ср2 де аР2 дорівнює 0-5, Б1Р2 дорівнює 0-16, р2Р2 дорівнює 0-16, сР2 дорівнює 0 або 1, аР2 дорівнює 0-5, де щонайменше Б1Р2 або р2Р2 дорівнює 0 (тобто лише один з Б1 і 52 може не дорівнювати 0);
Сі являє собою лінкер для приєднання до ланки, яка являє собою ліганд; (ів): в ве
АК о З М в'7Чи мо о ЩО е
ІБ, де Е" та В? незалежно вибрані із Н та метилу або разом із атомом вуглецю, з яким вони зв'язані, утворюють циклопропіленову або циклобутиленову групу; і
Зо е дорівнює 0 або 1.
ар2 може дорівнювати 0, 1, 2, 3, 4 або 5. У деяких варіантах здійснення аРа2 дорівнює 0-3. У деяких із даних варіантів здійснення аР2 дорівнює 0 або 1. У додаткових варіантах здійснення агР2 дорівнює 0.
Б1Р2 може дорівнювати 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16. У деяких варіантах здійснення Б1Р2 дорівнює 0-12. У деяких із даних варіантів здійснення Б1Р2 дорівнює 0-8 і може дорівнювати 0, 2, 3, 4, 5 або 8. р2Р2 може дорівнювати 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16. У деяких варіантах здійснення Б2Р2 дорівнює 0-12. У деяких із даних варіантів здійснення Б2Р2 дорівнює 0-8 і може дорівнювати 0, 2, 3, 4, 5 або 8.
Лише один із Б1Р2 та р2Р2 може не дорівнювати 0. сР2 може дорівнювати 0 або 1. ар2 може дорівнювати 0, 1, 2, 3, 4 або 5. У деяких варіантах здійснення аР2 дорівнює 0-3. У деяких із даних варіантів здійснення аРа2 дорівнює 1 або 2. У додаткових варіантах здійснення аР2 дорівнює 2. У додаткових варіантах здійснення аРа2 дорівнює 5.
У деяких варіантах здійснення ХР: ар2 дорівнює 0, Б1Р2 дорівнює 0, сР2 дорівнює 1, і ар2 дорівнює 2, і Б2Р2 може дорівнювати 0-8. У деяких із даних варіантів здійснення Б2Р2 дорівнює 0,2, 3, 4, 5 або 8.
У деяких варіантах здійснення ХР? ар2 дорівнює 1, Б2Р2 дорівнює 0, сР2 дорівнює 0, і ар2 дорівнює 0, і Б1Р2 може дорівнювати 0-8. У деяких із даних варіантів здійснення Б1Р2 дорівнює 0,2, 3, 4, 5 або 8.
У деяких варіантах здійснення ХРе ар2 дорівнює 0, Б1Р2 дорівнює 0, сР2 дорівнює 0, і аР2 дорівнює 1, і Б2Р2 може дорівнювати 0-8. У деяких із даних варіантів здійснення Б2Р2 дорівнює 0,2, 3, 4, 5 або 8.
У деяких варіантах здійснення ХР2 Б1Р2 дорівнює 0, Б2Р2 дорівнює 0, сР2 дорівнює 0, і один з аР2 і арР2 дорівнює 0. Інший з арРз2 і а дорівнює 1-5. У деяких із даних варіантів здійснення інший з аРа2 і а дорівнює 1. В інших із даних варіантів здійснення інший з аРа2 і аР2 дорівнює 5.
Переваги для ОХ, указаного вище для сполук формули !/, за необхідності можуть застосовуватися щодо ОХ у формулі Іа.
Переваги для (С, В", Ві? та е, указаних вище для сполук формули І, можуть
Зо застосовуватися щодо сполук формули 1",
У деяких варіантах здійснення кон'югат формули ІМ представлений формулою ІМ Рг:
І -(О2)р (ІМ), або відповідною фармацевтично прийнятною сіллю або сольватом, де І являє собою ланку, яка являє собою ліганд (тобто засіб, що націлюється), БіР2 являє собою ланку, яка являє собою лікарський засіб-лінкер, представлену формулою ПІР;
М вир. хх о
М й
М Х Й
: о
ОН ва
ВАР2 являє собою лінкер, приєднаний до ланки, яка являє собою ліганд, вибраної з (іа): о «Ко» о р Іагг», де О і ХРе є такими, як визначено вище, і 1- являє собою лінкер, приєднаний до ланки, яка являє собою ліганд; і (ів):
ви во
МН и
З в о Ір, де В" і В! є такими, як визначено вище; і р являє собою ціле число від 1 до 20.
Приклади
Загальна інформація
Флеш-хроматографію проводили із застосуванням Віоїаде? Ізоієга" і фракцій, перевірених на чистоту за допомогою тонкошарової хроматографії (ТІ С). ТІ С проводили із застосуванням силікагелю МегскК КіезеїЇде! 60 Е254 з флуоресцентним індикатором на алюмінієвих пластинах.
Візуалізацію ТІ С здійснювали за допомогою УФ-випромінювання.
Розчинники для екстрагування й хроматографії були придбані в ММ/К Ц.К. і застосовували без додаткового очищення.
Усі чисті хімічні речовини були придбані в Зідта-А|Пагіси, якщо не вказане інше.
Пегильовані реагенти одержували від Оцапіа Біодезвідп (США) через 5ігаїеснп (Великобританія).
Умови ГС/М5
Спосіб А
Мас-спектрометрію з електророзпиленням у режимі виявлення позитивно заряджених іонів проводили із застосуванням УмМаїег5 Адийу Н-сіазз 5002.
Застосовуваними рухомими фазами були розчинник А (вода з 0,1 95 мурашиної кислоти) і розчинник В (ацетонітрил з 0,1 95 мурашиної кислоти). Початковий склад з 5 95 В утримували протягом 25 секунд, потім збільшували концентрацію з 5 95 В до 100 95 В протягом періоду часу, що становить 1 хвилину 35 секунд. Склад утримували протягом 50 секунд при 100 95 В, потім повертали до 5 95 В за 5 секунд й утримували за даного значення протягом 5 секунд. Загальна тривалість прогону градієнта становила 3,0 хвилини. Швидкість потоку становила 0,8 мл/хвилина. Виявлення здійснювали при 254 нм. Колонки: Умаїег5 Асдийу ОРІ-С? ВЕН 5пієїа
АР'18, 1,7 мкм, 2,1 х 50 мм при 50 "С, обладнана передколонкою УМаїег5 Асдийу ОРІ С? ВЕН
Зпівій ВРІ8 Мапсиага, 1З04А, 1,7 мкм, 2,1 мм х 5 мм.
Зо Спосіб В
НРІ С (Умаїеге АйШапсе 2695) проводили із застосуванням рухомої фази із води (А) (0,1 90 мурашиної кислоти) й ацетонітрилу (В) (0,1 956 мурашиної кислоти).
Початковий склад з 5 95 В утримували протягом 25 секунд, потім збільшували концентрацію з 595 В до 100 95 В протягом періоду часу, що становить 1 хвилину 35 секунд. Склад утримували протягом 50 секунд при 100 95 В, потім повертали до 5 95 В за 5 секунд й утримували за даного значення протягом 5 секунд. Загальна тривалість прогону градієнта становила 3,0 хвилини. Швидкість потоку становила 0,8 мл/хвилина. Діапазон значень довжини хвилі під час виявлення: 190-800 нм. Колонки: УМаїег5 Асдийу ОРІ СУ ВЕН 5нНієЇїа РРІ18, 1,7 мкм, 2,1 хБ5бмм при 50 "С, обладнана передколонкою УМаїет5 Асдийу ОРІ СУ ВЕН 5півій АРІ18
Мапаоишага, 1З0А, 1,7 мкм, 2,1 мм х 5 мм.
Спосіб С
НРІ С (Умаїеге АйШапсе 2695) проводили із застосуванням рухомої фази із води (А) (0,1 90 мурашиної кислоти) й ацетонітрилу (В) (0,1 956 мурашиної кислоти).
Початковий склад з 5 95 В утримували протягом 1 хв., потім збільшували концентрацію з 5 95
В до 100 95 В протягом періоду часу, що становить 9 хв. Склад утримували протягом 2 хв. при 100 95 В, потім повертали до 5 95 В за 0,10 хвилини й утримували за даного значення протягом
З хв. Загальна тривалість прогону градієнта дорівнювала 15 хв. Швидкість потоку становила 0,6 мл/хв. Діапазон значень довжини хвилі під час виявлення: 190-800 нм. Температурний режим термостата: 50 "С. Колонка: АСЕ Ехсе! 2 С18-АВ, 2 мкм, 3,0 х 100 мм.
Умови НРІ С
Надшвидку високоефективну рідинну хроматографію зі зверненою фазою (РІ С) проводили на апараті Зпітад2и Рготіпепсе"М із застосуванням колонки Рпепотепех"М (Зетіпі МХ, 5 мкм
С18 (при 50 "С) з розмірами: 150 х 21,2 мм. Застосовуваними елюентами були розчинник А (НгО з 0,1 95 мурашиної кислоти) і розчинник В (СНзСМ з 0,1 95 мурашиної кислоти). Усі експерименти із застосуванням ОРЇС проводили за наступних умов градієнтного елюювання. Концентрацію початкового складу з 13 956 В збільшували до 30 95 В протягом періоду часу, що становить З хвилини, потім збільшували до 45 95 В протягом 8 хвилин і знову збільшували до 100 95 протягом б хвилин, а потім повертали до 13 95 протягом 2 хв. й утримували протягом 1 хв.
Загальна тривалість прогону градієнта становила 20,0 хвилини. Швидкість потоку становила 20,0 мл/хвилина, а виявлення здійснювали при 254 нм і 223 нм.
Спосіб ЯМР
Значення хімічного зсуву під час проведення протонного ЯМР вимірювали за дельта- шкалою при 400 МГц із застосуванням ВгиКег АМ400. Були застосовані наступні скорочення: 5, синглет; 4, дублет; ї, триплет; 4, квартет; диціп, квінтет; т, мультиплет; бг, широкий. Константи взаємодії наведені в Гц.
Синтез ключових проміжних сполук
Х що щи що шо що
МН. МНАс МНАс и 2 ІЗ о о о
Мн, Мн, м
Н
І4 ІБ ІЄ
Ор» -- - -бр» 0555252 о
СОсЕ ан "7 з мно
Н Н
І? ІВ Ів а) М-(5,6,7,8-Тетрагідронафталін-1-іл)ацетамід (І2) 5,6,7,8-Тетрагідронафталін-1-амін 11 (8,54 г, 58,0 ммоль) розчиняли в дихлорметані (80 мл).
Додавали триєтиламін (18 мл, 129 ммоль) і суміш охолоджували до 0 "С. Додавали по краплях оцтовий ангідрид (11,5 мл, 122 ммоль), після завершення додавання реакційну суміш нагрівали до к. т. і перемішували протягом 45 хв., відразу після чого Ї|СМ5 вказувала на завершення реакції. Суміш розводили за допомогою СНеСіг, промивали за допомогою Нео, насич. розчину
МмМансо», 10 95 лимонної кислоти, органічну фазу сушили над Мд5Ох і концентрували іп масцо.
Брудно-білу тверду речовину розтирали із 1:3 сумішшю ЕБбО/ізо-гексану з одержанням 12 (10,8 г, 57,1 ммоль, вихід 98 95) у вигляді білої твердої речовини, яку застосовували без додаткового очищення. І С/М5 (спосіб А): час утримання 1,44 хвилини (Е5-) маса/заряд 190 |М «я НІ"
Б) М-(4-Нітро-5,6,7,в-тетрагідронафталін-1-іл)ацетамід (ІЗ)
ІМ-(5,6,7,8-Тетрагідронафталін-1-іл)ацетамід 12 (1,00 г, 5,2840 ммоль) порціями додавали до сірчаної кислоти (15 мл, 281 ммоль) при -5 "С. До реакційної суміші порціями додавали нітрат натрію (450 мг, 5,2945 ммоль) і перемішували протягом 30 хв. при -5 "С, відразу після чого
ІЇСМ5 вказувала на відсутність подальшого ходу реакції. Реакційну суміш виливали на лід із зовнішнім охолодженням, водну суміш екстрагували за допомогою СНесСі», органічну фазу сушили над Мд5О5х і очищали за допомогою ІзоЇега (10-80 96 Ес в ізо-гексані) з одержанням суміші М-(4-нітро-5,6,7,8-тетрагідронафталін-1-іл)ацетаміду ІЗ і М-(2-нітро-5,6,7,8- тетрагідронафталін-1-іл)яацетаміду (956 мг, 4,0811 ммоль, вихід 77 95) у вигляді білої/жовтої твердої речовини. І С/М5 (спосіб А): час утримання 1,53 хвилини (Еб-) маса/заряд 235 |М « НІ». с) М-(4-Нітро-8-оксо-5,6,7,8-тетрагідронафталін-1-іл)ацетамід (14)
М-(4-Нітро-5,6,7,8-тетрагідронафталін-1-іллуацетамід ІЗ (1,01 г, 4,31 ммоль) розчиняли в ацетоні (30 мл). Додавали сульфат магнію в воді (3,9 мл, 5,9 ммоль, 1,5 моль/л) і суміш охолоджували до 0 "С. До реакційної суміші порціями додавали перманганат калію (2,07 г, 13,0 ммоль) і суміш нагрівали до к. т. і перемішували протягом 50 хв., відразу після чого ТІ! С вказувала на завершення реакції. Реакційну суміш фільтрували через целіт, тверді речовини промивали за допомогою СНСіІз й одержану органічну суміш промивали за допомогою НгО, сольового розчину, сушили над Мд5О»4 й очищали за допомогою ІзоЇега (20-50 956 ЕЮАс в ізо- гексані) з одержанням суміші М-(4-нітро-8-оксо-5,6,7 ,8-тетрагідронафталін-1-іл)ацетаміду 14 і М- (2-нітро-8-оксо-5,6,7,8-тетрагідронафталін-1-іл)яацетаміду (709 мг, 2,86 ммоль, 6б 90) у вигляді білої/жовтої твердої речовини. І С/М5 (спосіб А): час утримання 1,44 хвилини (Еб--) маса/заряд 190 |М - НІ" а) 8-Аміно-5-нітро-3,4-дигідронафталін-1 (2Н)-он (І5)
Суміш М-(4-нітро-8-оксо-5,6,7,8-тетрагідронафталін-1-іллуацетаміду 14 і М-(2-нітро-8-оксо- 5,6,7,8-тетрагідронафталін-1-іл)ацетаміду (709 мг, 2,8561 ммоль) і 6 н. хлористоводневу кислоту (7 мл) перемішували при 80 "С протягом 2,5 год., відразу після чого ЇСМ5 вказувала на завершення реакції. Реакційну суміш охолоджували на льодяній бані і б н. розчин Маон додавали доти, поки значення рН не стало основним. Водну суміш екстрагували за допомогою
СНесіг2, органічну фазу сушили над Ма50О» і концентрували іп масо. Очищення за допомогою
ІбоЇега (0-50 906 ЕОАс в ізо-гексані) привело до одержання 8-аміно-5-нітро-3,4-дигідронафталін- 1(2Н)-ону І5 (320 мг, 1,552 ммоль, вихід 54 95) у вигляді жовтої/оранжевої твердої речовини.
І С/М5 (спосіб А): час утримання 1,54 хвилини (Еб-) маса/заряд 207 ІМ « НІ" е) 2,2,2-Трифтор-М-(4-нітро-8-оксо-5,6,7,8-тетрагідронафталін-1-іл)ацетамід (Іб) 8-Аміно-5-нітро-3,4-дигідронафталін-1(2Н)-он І5 (430 мг, 2,0854 ммоль) розчиняли в дихлорметані (20 мл). Додавали піридин (340 мкл, 4,20 ммоль) і суміш охолоджували до 0 "с.
Додавали ангідрид трифтороцтової кислоти (590 мкл, 4,197 ммоль) і перемішували протягом 30 хв., відразу після чого | СМ5 вказувала на завершення реакції. Суміш розводили за допомогою
СНесСі2, промивали за допомогою НгО, органічну фазу сушили над Мо5Ох і концентрували іп масчцо з одержанням 2,2,2-трифтор-М-(4-нітро-8-оксо-5,6,7,8-тетрагідронафталін-1-іл)ацетаміду
ІЄ (630 мг, 2,0846 ммоль, вихід »99 95) у вигляді жовтої твердої речовини, яку застосовували без додаткового очищення. І С/М5 (спосіб А): час утримання 1,86 хв. (Еб-к) маса/заряд ЗО1Х |М - НІ 1) М-(4-Аміно-8-оксо-5,6,7,8-тетрагідронафталін-1-іл)-2,2,2-трифторацетамід (17)
Цинк (2,73 г, 41,7 ммоль) суспендували в метанолі (80 мл), мурашиній кислоті (4 мл) і воді (4 мл) та суміш охолоджували до 0 "С. Порціями додавали 2,2,2-трифтор-М-(4-нітро-8-оксо-5,6,7,8- тетрагідронафталін-1-іл)яуацетамід ІЄ (568 мг, 2,0865 ммоль) і суміш перемішували при 0 "С протягом 30 хв., відразу після чого | СМ5 вказувала на завершення реакції. Реакційну суміш фільтрували, фільтрат розводили за допомогою ЕМОАс і промивали за допомогою насич. розчину МаНсСоО»з. Органічну фазу сушили над Мод50Ох і концентрували іп масио з одержанням М- (4-аміно-8-оксо-5,6,7,8-тетрагідронафталін-1-іл)-2,2,2--рифторацетаміду 17 (568 мг, 2,0865 ммоль, вихід 299 95) у вигляді жовтої твердої речовини, яку застосовували без додаткового очищення. І С/М5 (спосіб А): час утримання 1,65 хв. (Еб-») маса/заряд 273 |М я НІ" 9) М-(4-Ацетамідо-8-оксо-5,6,7,8-тетрагідронафталін-1-іл)-2,2,2-трифторацетамід (І8)
М-(8-Аміно-4-оксотетралін-5-іл)-2,2,2-трифторацетамід 17 (568 мг, 2,0865 ммоль) розчиняли в дихлорметані (20 мл). Додавали триетиламін (580 мкл, 4,16 ммоль), а потім ацетилхлорид (297 мл, 4,173 ммоль), і суміш перемішували протягом 30 хв., відразу після чого Ї! СМ5 вказувала на завершення реакції. Реакційну суміш розводили за допомогою СНоСі», промивали за допомогою НгО, органічну фазу сушили над Мд5Ох і концентрували іп масо з одержанням
М-(8-ацетамідо-4-оксотетралін-5-іл)-2,2,2-трифторацетаміду І8 (655 мг, 2,084 ммоль, вихід 299
Чо) у вигляді жовтої твердої речовини, яку застосовували без додаткового очищення. ІС/М5 (спосіб А): час утримання 1,55 хв. (Еб-) маса/заряд 315 ІМ « НІ: п) М-(4-Аміно-5-оксо-5,6,7 ,8-тетрагідронафталін-1-іл)ацетамід (19)
М-(8-Ацетамідо-4-оксотетралін-5-іл)-2,2,2-трифторацетамід І8 (2,77 г, 8,81 ммоль) розчиняли в метанолі (240 мл) і воді (17 мл). Додавали карбонат калію (4,88 г, 35,3 ммоль) і суміш перемішували протягом 1,5 год. при 50 "С, відразу після чого ЇСМ5 вказувала на завершення реакції. Реакційну суміш охолоджували, концентрували іп масо, розчиняли в 10 95 МебОН в
СНеСіг і промивали за допомогою НгО. Органічну фазу сушили над М95О4 й очищали за допомогою хроматографії із застосуванням Ізоїега (2-15 95 МеОнН в СНосіг) з одержанням М-(8- аміно-1-оксотетралін-5-іл)ацетаміду 19 (1,20 г, 5,50 ммоль, вихід 62,3 95) у вигляді жовтої твердої речовини. І С/М5 (спосіб А): час утримання 0,98 хв. (Е5-») маса/заряд 219 |М я НІ:
о
М
АснМ о я о М й - ж» о
МН. и
ІЗ АЗ оно
АСНМ ху о ни ху о
М
ХМ м ХМ о о б вх оно мо п оно і) (5)-М-(9-Етил-9-гідрокси-10,1 З-діоксо-2,3,9,10,13,15-гексагідро-1 Н12 Н- бензо|де|пірано/34"6,7|індолізино|1,2-бі|хінолін-4-іл)ацетамід (110)
М-(8-Аміно-1-оксотетралін-5-іллацетамід ІЗ (641 мг, 2,94 ммоль, 1,0 екв.), (5)-4-етил-4- гідрокси-7,8-дигідро-1Н-піраноїЇ3,4-Ціндолізин-3,6,10(4Н)-трион АЗ (840 мг, 3,19 ммоль, 1,1 екв.) і
РРТ5 (740 мг, 2,95 ммоль, 1,0 екв.) розчиняли в толуолі (60 мл) і перемішували зі зворотним холодильником протягом З год., відразу після чого | СМ5 вказувала на те, що ІЗ витратився.
Реакційну суміш охолоджували і концентрували іп масио. Одержані тверді речовини розтирали з ацетонітрилом, а потім з ацетоном з одержанням 110 у вигляді коричневої твердої речовини з незначною домішкою Т5ОН (1,26 г, 96 95). | С/М5 (спосіб А): час утримання 1,32 хв. (Еб) маса/заряд 447 |М я НІ: ) (5)-4-Аміно-9-етил-9-гідрокси-1,2,3,9,12,15-гексагідро-Т!ОН,1ЗН- бензо|де|пірано/34"6,7|індолізино|1,2-Бі|хінолін-10,13-діон (111) (5)-М-(9-Етил-9-гідрокси-10,13-діоксо-2,3,9,10,13,15-гексагідро-!/Н.12Н- бензо|де|піраної/3',4":6,7|індолізиної1,2-Бі)хінолін-4-іл)ацетамід (110) (1,26 г, 2,83 ммоль, 1,0 екв.) розчиняли в хлористоводневій кислоті (6 моль/л) в НгО (12 мл) і суміш перемішували протягом 5 год. при 80 "С, відразу після чого | СМ5 вказувала на те, що 110 витратився. Реакційну суміш розводили за допомогою НгО і концентрували іп масо з одержанням (5)-4-аміно-9-етил-9- гідрокси-1,2,3,9,12,15-гексагідро- ТОН, 1ЗН-бензої|де|пірано/34"6,7індолізино|1,2-Б)хінолін-10,13- діону 111 (1,51 г, 2,85 ммоль, 90 мас. 95, вихід 101 95) у вигляді червоної кристалічної твердої речовини. І С/М5 (спосіб А): час утримання 1,36 хв. (Еб-») маса/заряд 405 |М «з НІ".
Альтернативний спосіб синтезу 111 о. ж о --- г о о мо, Мо, 2 из 4 о
Н М
М нм - 7 бос- оз 7 о о
Мн, Мн, чи 5 6 АЗ оно
НАМ ху о
М ж ру
М х / х о оно 11
Спосіб ІРС, контролю чистоти й аналізу для даного синтезу 1171700. 111117190 Її ло 11111200. 77111717071717711111119071 11111230. 77717111717о01717111111119071 11240 Ї777711117901 11111170 11179300. ЇЇ ..юЮюЮюрЮюИД90 2 юЮюЮюЮЮЙЇ1 ло а) 5-Бром-8-нітротетралін-1-он (113)
Розчин нітрату калію (1,15 екв., 13,83 г), розчиненого в сірчаній кислоті (конц., 5,0 відн. об., 160 мл), додавали (час додавання 4-12 год., підтримання температури нижче 10 "С) до розчину
Б-бромтетралін-1-ону (112) (1,0 екв., 26,77 г) у сірчаній кислоті (конц., 5,0 відн. об., 160 мл) в атмосфері азоту. Після завершення реакції реакційну суміш переносили в колбу, що містить воду (36 відн. об., 1,15 л), регулюючи швидкість переносу таким чином, щоб підтримувати температуру нижче 10 "С. Одержану тверду речовину фільтрували, тричі промивали водою (4,0 відн. об., 128 мл) і потім сушили при «40 "С протягом 24 год. Сухий осад розчиняли у суміші ацетону (2,5 відн. о0б., 80 мл) і води (0,38 відн. об., 12,2 мл), нагрітій до 75 "С, і потім охолоджували до 5-20 "С. Одержану тверду речовину видаляли за допомогою фільтрації.
Розчинник замінювали на етанол за допомогою переганяння й об'єм розчину зменшували до 2,0 відн. об. (64 мл). Розчин охолоджували до 725 "С й одержану тверду речовину збирали за допомогою фільтрації. Тверду речовину промивали етанолом (1,0 відн. об., 32 мл), потім сушили під вакуумом при 40 "С з одержанням 5-бром-8-нітротетралін-1-ону І13 (15,36 г, 40 95) у вигляді коричневої твердої речовини; КТ 14,0 хв.
Спосіб 1 Спосіб ІРС, контролю чистоти і аналізу для бром-8-нітротетралін-1-ону.
11111111 001117111111111901 11111101 11111111200111111111ло11 11119071 11111111 23017171111111ло11 11111901 11111111124017111111119011111111ло 11111111118001ї1111111190 11111101 11111111 |Часповторноговрівноваження:бхв../-:/ // (
Б) М-(8-Нітро-1-оксотетралін-5-іл)ацетамід (114)
Розчин бром-8-нітротетралін-1-ону (113) (1,0 екв., 18,0 г, 90,6 95 вага/вага), ацетаміду (1,2 екв., 4,72 г), трисі(ідибензиліденацетон)дипаладію(0) (0,01 екв., 0,61 г) і фосфату калію (1,4 екв., 19,8 г) в діоксані (15 відн. об., 270 мл) в атмосфері азоту нагрівали до «70 "С. Після завершення реакції розчин охолоджували до «20 "С, а також розводили діоксаном (5 відн. об., 90,0 мл) і фільтрували. Розчинник замінювали на етанол й об'єм зменшували до загального реакційного об'єму, що становить З відн. об. (54,0 мл). Розчин охолоджували до «20 "С й одержану тверду речовину збирали за допомогою фільтрації та промивали за допомогою МТВЕ (метил-трет- бутиловий етер) (1,0 відн. об., 18,0 мл). Тверду речовину сушили під вакуумом при 40 "С з одержанням М-(8-нітро-1-оксотетралін-5-іл)ацетаміду 114 (10,0 г, 60,6 95) у вигляді темно-жовтої твердої речовини; КТ 8,86 хв. с) М-(8-Аміно-1-оксотетралін-5-іл)ацетамід (115)
Гідроксид паладію на вугіллі (20 95 вага/вага, 0,15 екв., 5,25 г) додавали до розчину М-(8- нітро-1-оксотетралін-5-іл)ацетаміду (114) (1,0 екв., 32,6 г) в метанолі (40 відн. об., 1250 мл).
Реакційну суміш поміщали в атмосферу водню за тиску 740 фунт/кв. дюйм і температури 40 с на 8 год. Водень видаляли і замінювали азотом, і каталізатор видаляли за допомогою фільтрації через целюлозу, промиваючи целюлозу метанолом (4,0 відн. об., 130 мл). Об'єм розчину зменшували до 4,0 відн. об. за допомогою переганяння й потім розводили за допомогою МТВЕ (4 відн. об. 130 мл). Одержану тверду речовину збирали за допомогою фільтрації, промивали за допомогою МТВЕ (2 відн. об., 65 мл) і сушили під вакуумом при 40 "С з одержанням М-(8-аміно-1-оксотетралін-5-іл)ацетаміду 115 (21,1 г, 77,8 95) у вигляді сіро-зеленої твердої речовини; КТ 5,44 хв. а) 5,8-Діамінотетралін-1-он (116)
Розчин М-(8-аміно-1-оксотетралін-5-іл)яацетаміду (115) (1,0 екв., 10,0 г) в хлористоводневій кислоті (5 М, 6,0 відн. об., 60 мл) витримували при 790 "С протягом 3 год. Температуру понижували до 25 "С і додавали гідроксид натрію (2 М, 4,0 відн. об., 40 мл) доти, поки не досягалося значення рН, що становить 10,0, при цьому підтримуючи температуру 25 "6.
Одержану тверду речовину збирали за допомогою фільтрації й промивали водою (2,0 відн. об., 20 мл). Вологий осад розчиняли в тетрагідрофурані (60 відн. об., 600 мл) і фільтрували. Розчин концентрували до 5,0 відн. об. і додавали гептан (20 відн. об., 200 мл). Розчин концентрували до 10,0 відн. об. і додатково додавали гептан (20 відн. об., 200 мл), а потім об'єм знову зменшували до 10,0 відн. об. Одержану тверду речовину збирали за допомогою фільтрації й промивали гептаном (5,0 відн. об., 50 мл). Тверду речовину сушили під вакуумом при 40 "С протягом 17 год. з одержанням 5,8-діамінотетралін-1-ону (116) (6,90 г, 82,7 95) у вигляді жовтої твердої речовини; ІН ЯМР (400 МГц ОМ50-ав) 6 ррт 1,82 (т, 2Н), 2,38 (ї, 9У-2,0 Гц, 2Н), 2,47 (ї, 922,0 Гц, 2Н), 6,34 (а, 9-2,0 Гц, 1Н), 6,68 (а, 9У-2,0 Гц, 1Н); КТ 3,90 е) (5)-4-Аміно-9-етил-9-гідрокси-1,2,3,9,12,15-гексагідро-Т!ОН,1ЗН- бензо|де|пірано/34"6,7|індолізиної|1,2-Ббі|хінолін-10,13-діон (111)
Розчин 5,8-діамінотетралін-1-ону (116) (1,0 екв., 5,0 г), (45)-4-етил-4-гідрокси-7,8-дигідро-1 Н- пірано|З3,4-Ціндолізин-3,6,10-триону (АЗ) (1,06 екв., 7,9 г) і пара-толуолсульфонату піридинію (1,0 екв., 7,2 г) в толуолі (50,0 відн. об., 250 мл) витримували при 120 "С протягом 15 год. Об'єм розчину зменшували до 2,0 відн. об. і потім розводили ацетонітрилом (20 відн. об., 100 мл) і водою (20 відн. об., 100 мл). Одержану завись фільтрували і тверду речовину промивали водним ацетонітрилом (1:1, 20 відн. 0б., 100 мл). Тверду речовину суспендували в водному метанолі (вода:Меон 3:1, 40 відн. об., 200 мл), фільтрували і промивали водним метанолом (171, 20 відн. об., 100 мл). Тверду речовину суспендували в воді (60 відн. об., 300 мл) при 50 "С, фільтрували і промивали водою (10 відн. об., 50 мл). Тверду речовину суспендували в водному розчині ацетонітрилу (вода: ацетонітрил, 1:3, 40 відн. об., 200 мл) при 30 "С, фільтрували і промивали водним розчином ацетонітрилу (вода: ацетонітрил, 1:3, 5 відн. об., 50 мл) і потім сушили під вакуумом при 40 "С з одержанням (5)-4-аміно-9У-етил-9-гідрокси-1,2,3,9,12,15- гексагідро- ТОН, 1ЗН-бензо|де|піраної/34"6,7|індолізино|1,2-Б|хінолін-10,13-діону (111) у вигляді білої твердої речовини (5,0 г, 43,7 95); ВТ 5,13.
Синтез І18 бе о - ---
МН. 16 о о о М
Н Н Н о М М М о о с о о мн, и не АЗ оно 17 о о
Н «Ж МД М 2 й ; тр ху о
Н : Н | М ) т |) р
М
М о оно мив а) Трет-бутил-(5)-(2-(2-((1-(2-(4-аміно-5-оксо-5,6,7,8-тетрагідронафталін-1-іл)аміно)-2- оксоетил)аміно)-1-оксо-3-фенілпропан-2-іл)аміно)-2-оксоетил)аміно)-2-оксоетил)карбамат (117)
Вос-аага-он (227 мг, 0,52 ммоль) і ЕЕБО (157 мг, 0,634 ммоль) солюбілізували в СНоСіг2 (25 мл) і суміш перемішували протягом 15 хв., доки пептид не перетворювався в розчин. Потім додавали сполуку 116 (100 мг, 0,56747 ммоль) і суміш залишали перемішуватися до завершення реакції. За результатами ММС через 1 год. реакція виглядала завершеною на 90 95. Суміш ставала більш густою по мірі осадження продукту. Суміш залишали на ще одну годину перед проведенням вакуумного сушіння. Неочищену речовину поглинали в ЕБО (50 мл). Тверду речовину фільтрували і потім поглинали в СНеСіг (50 мл) для додаткового очищення. Тверду речовину фільтрували і сушили з одержанням продукту 117 (273 мг, 0,459 ммоль, вихід 80,9 95) у вигляді сірої твердої речовини. Дані аналізу: !/СМ5 Зхв.: Еб: - 1,46 хв., маса/заряд 595,7 |М їх
НЕ.
Б) (5)-2-(2-(2-Аміноацетамідо)ацетамідо)-М-(2-(((5)-9-етил-9-гідрокси-10,13-діоксо- 2,3,9,10,13,15-гексагідро-ІН,12Н-бензої|де|піраноїЇ3",4":6,7|індолізино|1,2-Б)хінолін-4-іл)аміно)-2- оксоетил)-3-фенілпропанамід (118)
Анілін І17 (450 мг, 1,045 ммоль), лактон А5 (280 мг, 1,064 ммоль) і п-толуолсульфонат піридинію (273 мг, 1,086 ммоль) солюбілізували в толуолі (20 мл) і суміш нагрівали до 150 "С (за високого коефіцієнта дефлегмації). Для сприяння солюбілізації суміші додавали Меон (4 мл).
Через 7 год. неочищену реакційну суміш доводили до сухості в вакуумі. Неочищений продукт очищали за допомогою хроматографії на силікагелі (СНСІЗ/МеОН, від 100 95 до 65:35) з одержанням продукту 118 (259 мг, 0,359 ммоль, вихід 78,1). Дані аналізу І СМ5 Зхв.: Е5: - 1,17 хв., маса/заряд 722,8 |М «- НІ".
Альтернативний спосіб синтезу 116 у фо
Мо, МО, МН, пе І20 І21 16 а) 5-Фтор-8-нітротетралін-1-он (120)
Б-Фтортетралін-1-он 119 (4,7 г, 29 ммоль) солюбілізували в 1/2 кількості сірчаної кислоти (120 мл) у З-горлій круглодонній колбі. Суміш перемішували до повного розчинення твердої речовини і потім охолоджували до 0-5 "С. У крапельній воронці розчиняли нітрат калію (3 г, 29,6730 ммоль) у половині решти сірчаної кислоти (120 мл) при 0-5 "С. Повільно додавали до суміші 5М, спостерігаючи, щоб розчин залишався прохолодним (45 хв.). Перемішували при 0-5 "С до завершення реакції. Потім реакційну суміш гасили за допомогою води (250 мл) і залишали перемішуватися при 0-5 "С. Тверду речовину фільтрували і промивали водою (50 мл). Тверду речовину сушили у вакуумній печі протягом 2 год. при 50 "С. Неочищену тверду речовину суспендували в ЕСО протягом ночі, а потім охолоджували до 0 "С і фільтрували. Вологий осад промивали за допомогою додаткової кількості холодного ЕБО (50 мл) та забезпечували його висушування у вакуумній печі при 50 "С з одержанням чистого продукту 120 (5,5 г, 26 ммоль, вихід 92 95) у вигляді світло-рожевого тонкодисперсного порошку. Ї/СМ5 (Спосіб В): Е5" - 1,55 хв., маса/заряд 210,1 |М «- НІ". р) 5-Аміно-8-нітротетралін-1-он (121)
Сполуку 120 (2,7 г, 13 ммоль) солюбілізували в СНзСМ (2,5 мл) і МНАОН (21 мас. 95) в НгО (8 мл, 40 ммоль) вносили в стійку до тиску пробірку, що герметично закривається, і нагрівали до 185 9. Після завершення суміш переносили в круглодонную колбу й обробляли вакуумом.
Неочищену речовину очищали за допомогою колонкової хроматографії на силікагелі (СНСІз/МеОнН; від 100 до 99:1) з одержанням чистого продукту 121 (1,1 г, 5,3 ммоль, вихід 41 95) у вигляді чорної твердої речовини. І СМ5 (Спосіб В): Е5" - 1,34 хв., маса/заряд 207,1 |М «з НІ". с) 5,8-Діамінотетралін-1-он (116)
Сполуку І21 (1,35 г, 6,55 ммоль) розчиняли у суміші метанолу (20 мл), НгО (1 мл) і мурашиної кислоти (1 мл) при 0 "С. Повільно додавали цинк (8,5 г, 130 ммоль), спостерігаючи за підтриманням температури нижче 40 "С. Для прискорення завершення реакції додавали додаткову невелику кількість мурашиної кислоти/НгО (0,5 мл). Реакційну суміш фільтрували і фільтрат розводили за допомогою ЕОАс і СНесСі2 з наступною обробкою вакуумом. Неочищену речовину вводили сухим способом у систему для проведення колонкової хроматографії на силікагелі (СНСІЗ/ЕЮАс; від 100 до 7:3, потім СНСІз/Меон; від 99:1 до 98:22) з одержанням чистого продукту І16 (1,015 г, 5,760 ммоль, вихід 88,0 95). Ї/СМ5 (Спосіб В): Еб: - 0,2 хв., маса/заряд не спостерігали.
Приклад 1 нм п 2 Н Н бос, І н
Й и о М бос,
І? А1 й о о
Н Н М ут я -
Ен хи нрав 9 Мн, моих о
А? АЗ оно о диня З : м Ху я о х о - т й М М о
АА оно о «Ж М нм к М с о ще Ох о - й М М о
АБ оно
Ж хо о М с о : М й: й 8 : й М о Ту о 4 х
Й о 1 оно а) Аліл-((5)-3-метил-1-оксо-1-(((5)-1-оксо-1-((5-оксо-4-(2,2,2-трифторацетамідо)-5,6,7,8- тетрагідронафталін-1-іл)аміно)пропан-2-іл)аміно)бутан-2-іл)укарбамат (А1) рос (6,54 г, 31,7 ммоль) і НОРО (3,36 г, 30,2 ммоль) додавали до розчину айос-МаІ-Аїа-ОН (9,09 г, 31,7 ммоль) і 17 (7,85 г, 28,8 ммоль) в СНоСі» (300 мл) при 25 "С. Одержану суміш залишали перемішуватися протягом ночі. Білу тверду речовину, яка утворювалася під час ходу реакції, відфільтровували й промивали за допомогою холодного СНеСі». Фільтрат промивали водою (150 мл) і сольовим розчином (150 мл). Органічний шар сушили над Мд5О54, фільтрували і випарювали. Неочищений продукт очищали за допомогою хроматографії на силікагелі (Нех/ь(оОдАс, 60:40). Виділений продукт АТ містив домішку у вигляді спільно елюйованого ОС (21,1 г, вихід 140 95). | С/М5 (Спосіб В): Е5" - 1,81 хв., маса/заряд 527,6 |М я НГ.
Б). Аліл-((5)-1-(((5)-1-((4-аміно-5-оксо-5,6,7,8-тетрагідронафталін-1-іл)аміно)-1-оксопропан-2- іл)аміно)-3-метил-1-оксобутан-2-іл)/укарбамат (А2)
Захищений анілін А1 (18 г, 34,19 ммоль) солюбілізували у суміші Меон і НгО 10:1 (165 мл) і додавали К»СОз (10 г, 72,36 ммоль). Суміш перемішували при 50 "С до завершення реакції.
Суміш обробляли вакуумом до майже повної сухості, і залишок поглинали за допомогою СНоСіг і промивали за допомогою НгО і сольового розчину, потім сушили над Мдод5О», фільтрували і випарювали. Неочищений продукт очищали за допомогою хроматографії на силікагелі (СНСІз/Меон, від 100 95 до 7:3). Виділений продукт А2 містив спільно елюйовану домішку (10,71 г, вихід 73 95). Ї С/М5 (Спосіб В): Е5" - 1,46 хв., маса/заряд 431,7 (М «я НГ. с) Аліл-((5)-1-((5)-1-(((5)-9-етил-9-гідрокси-10,1 З-діоксо-2,3,9,10,13,15-гексагідро-1ї Н.12 Н- бензо|де|пірано/34"6,7|індолізино|1,2-бі|хінолін-4-іл)аміно)-1-оксопропан-2-іл)аміно)-3- метилбутан-2-іл)укарбамат (А4)
Анілін А2 (450 мг, 1,045 ммоль), лактон АЗ (280 мг, 1,064 ммоль) і п-толуолсульфонат піридинію (273 мг, 1,086 ммоль) солюбілізували в толуолі (20 мл) і суміш нагрівали до 130 "С (за високого коефіцієнта дефлегмації). Для сприяння солюбілізації суміші періодично додавали декілька крапель Меон. Через 7 год. неочищену реакційну суміш доводили до сухості в вакуумі.
Неочищений продукт очищали за допомогою хроматографії на силікагелі (СНСІз/Меон, від 100 о до 95:5) з одержанням продукту А4 (360 мг, вихід 52,3 95). | С/М5 (Спосіб В) Е5 - 1,51 хв., маса/заряд 658,8 ІМ -- НІ". а) Аліл-(5)-2-аміно-М-((5)-1-(((5)-9-етил-9-гідрокси-10,1 З-діоксо-2,3,9,10,13,15-гексагідро- 1Н/12Н-бензо|де|піраної/3'4"6,7|індолізино|1,2-бі|хінолін-4-іл)аміно)-1-оксопропан-2-іл)-3- метилбутанамід (АБ)
Надлишок піперидину (642 мкл) додавали до розчину А4 (543 мг, 0,82 ммоль) і РарР(Риз)»« (89 мг, 0,08 ммоль) в СНеСіг (15 мл). Суміш залишали перемішуватися за кімнатної температури протягом 20 хв., по закінченню яких реакція була завершена (у разі контролю за допомогою
І С/М5). Реакційну суміш розводили за допомогою СНесСі» (25 мл) і органічну фазу промивали за допомогою НгО (25 мл) і сольового розчину (25 мл). Органічну фазу сушили над Мо5ох, фільтрували і надлишок розчинника видаляли за допомогою ротаційного випарювання за зниженого тиску з одержанням неочищеного продукту А5, який застосовували без додаткового очищення на наступній стадії. І! С/М5 (Спосіб В): Еб" - 1,15 хв., маса/заряд 574,6 |М -- НІ". е) 1-(3-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)упропанамідо)-М-((5)-1-(((5)-1-((5)-9-етил-9- гідрокси-10,13-діоксо-2,3,9,10,13,15-гексагідро-1Н,12Н-бензої|де|піраної3",4"6,7|індолізиної/1,2-
Біхінолін-4-іл)аміно)-1-оксопропан-2-іл)аміно)-3-метил-1-оксобутан-2-іл)-3,6,9,12,15,18,21,24- октаоксагептакозан-27-амід (1)
Піридин (83 мкл, 1,03 ммоль) і МаІ-АРЕСв8-ОТЕР (767 мг, 1,03 ммоль) додавали до розчину неочищеного А5 (розрахункова кількість 1,03 ммоль) у сухому СНоСі» (50 мл) в атмосфері аргону. Реакційну суміш перемішували протягом ночі і, оскільки реакція не завершилася, додавали 0,5 екв. МаІ-4РЕС»8-ОТЕР як спробу прискорити реакцію. Реакційну суміш розводили за допомогою СНоСі» (25 мл) і органічну фазу промивали за допомогою НгО (2 х 50 мл) і сольового розчину, потім сушили над Мд5О5, фільтрували і надлишок розчинника видаляли за допомогою ротаційного випарювання за зниженого тиску за допомогою ротаційного випарювання за зниженого тиску. Неочищену речовину очищали за допомогою НРІС зі зверненою фазою (градієнт НгО/СНзЗСМ 0,05 95 ЕА) і піддавали сублімаційному сушінню з одержанням 1 (1,189 г, вихід 31 95 після 2 стадій). І С/М5 (Спосіб В): Еб" -1,43 хв., маса/заряд 11493 (М я НІ». І С/М5 (Спосіб С): Еб: 25,37 хв., маса/заряд 1149,4 |М -«- НГ.
Приклад 2 о «Ж х нм м М с о : Н | М
ХМ / х о
А5 оно в: о М о - М --6х о : і о - " о и М Х л о 2 оно 6-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-М-((5)-1-(((5)-1-(((5)-9-етил-9-гідрокси-10,13-діоксо- 2,3,9,10,13,15-гексагідро-1Н,12Н-бензої|де|піраної!3",4"6,7|індолізино|1,2-Бі|хінолін-4-іл)аміно)-1-
оксопропан-2-іл)аміно)-3-метил-1-оксобутан-2-іл)гексанамід (2)
Маї!І-капронову кислоту (56 мг, 0,26 ммоль) і ЕОСІ.НСІ (51 мг, 0,26 ммоль) додавали до розчину неочищеного АБ (розрахункова кількість 0,26 ммоль) у сухому СНоСі» (20 мл) в атмосфері аргону. Реакційну суміш перемішували протягом ночі і, оскільки реакція не завершилася, додавали додаткові 0,5 екв. МаІ-капронової кислоти і ЕОСІ.НСІ. Реакційну суміш розводили за допомогою СНесСі» (25 мл) і органічну фазу промивали за допомогою НгО (2 х 50 мл) і сольового розчину, потім сушили над М950О».5, фільтрували і надлишок розчинника видаляли за допомогою ротаційного випарювання за зниженого тиску за допомогою ротаційного випарювання за зниженого тиску. Неочищену речовину очищали за допомогою колонкової хроматографії на силікагелі (СНСІз/Меон 95:5) з одержанням 2 (31,6 мг, вихід 20 90 після 2 стадій). І! С/М5 (Спосіб В): Е5: -1,56 хв., маса/заряд 767,8 |М -- НГ. І С/М5 (Спосіб С) 15хв.: Е5- -6,05 хв., маса/заряд 767,8 |М -- НІ".
Приклад З о «ЖД ; нм м сх о : Н | М ра о - с ж
М
М че о
А5 оно о ? о - М хх о : Н | М зо о -
М М й вч о
З оно (5)-2-(2-(2-(2-(2-Азидоетокси)етокси)етокси)ацетамідо)-М-((5)-1-(((5)-9-етил-9-гідрокси-10,13- діоксо-2,3,9,10,13,15-гексагідро-1Н,12Н-бензої|де|піраноїЇ3"4"6,7|ндолізиної/1,2-Бб|хінолін-4- іл)аміно)-1-оксопропан-2-іл)-3-метилбутанамід (3)
Азидо-йРЕСз-кислоту (77,5 мг, 0,31 ммоль) і ЕОСІ.НСІ (60 мг, 0,31 ммоль) додавали до розчину неочищеного А5 (розрахункова кількість 0,31 ммоль) у сухому СНоСі» (20 мл) в атмосфері аргону. Реакційну суміш перемішували протягом ночі і, оскільки реакція не завершилася, додавали додаткові 0,5 екв. азидо-4А4РЕСз-ОН і ЕОСІ.НСІ. Реакційну суміш розводили за допомогою СНесСі» (25 мл) і органічну фазу промивали за допомогою НгО (2 х 50 мл) і сольового розчину, потім сушили над М950О».5, фільтрували і надлишок розчинника видаляли за допомогою ротаційного випарювання за зниженого тиску за допомогою ротаційного випарювання за зниженого тиску. Неочищену речовину очищали за допомогою препаративної
НРІС ії фракції піддавали сублімаційному сушінню з одержанням чистого З (92,2 мг, вихід 24,7 оо після 2 стадій). І С/М5 (Спосіб В): Е5" -1,69 хв., маса/заряд 789,9 |М -- НІ. І С/М5 (Спосіб С):
Е5: -6,68 хв., маса/заряд 790,0 (М «- НІ".
Приклад 4 о «ЖД М нм к с о : Н | М
Ту о М - - хи о ан
АБ оно о жк ДЖ М о М к М сх о : Н | М би о -
М Х й о бан 4 оно 5 М-((5)-1-(((5)-1-((5)-9-Етил-9-гідрокси-10,13-діоксо-2,3,9,10,13,15-гексагідро-1Н,12Н- бензо|де|пірано/34"6,7|індолізино|1,2-бі|хінолін-4-іл)аміно)-1-оксопропан-2-іл)аміно)-3-метил-1- оксобутан-2-іл)-4,7,10,13,16-пентаоксанонадек-18-інамід (4)
Пропаргіл-аРЕСв-кислоту (56 мг, 0,19 ммоль) і ЕОСІ.НСІ (37 мг, 0,19 ммоль) додавали до розчину неочищеного АБ (розрахункова кількість 0,19 ммоль) у сухому СНоСі» (10 мл) в атмосфері аргону. Реакційну суміш перемішували протягом ночі і, оскільки реакція не завершилася, додавали додаткові 0,5 екв. пропаргіл-аРЕС5-ОН і ЕОСІ.НСІ. Реакційну суміш розводили за допомогою СНесСі» (25 мл) і органічну фазу промивали за допомогою НгО (2 х 50 мл) і сольового розчину, потім сушили над М950О».5, фільтрували і надлишок розчинника видаляли за допомогою ротаційного випарювання за зниженого тиску за допомогою ротаційного випарювання за зниженого тиску. Неочищену речовину очищували за допомогою препаративної
НРІС ї фракції піддавали сублімаційному висушуванню з одержанням чистої сполуки 4 (22 мг, вихід 16,7 95 після 2 стадій). І С/М5 (Спосіб В): Е5" -1,54 хв., маса/заряд 860,9 М 4 НГ. І СМ5 (Спосіб С): Е5: 5,57 хв., маса/заряд 860,9 ІМ -- НІ".
Приклад 5 о «ЖД ; нм м кх о : Н | М у о М х -- ч о
А5 оно о - ху о о А о
М ра М х /
Х о о Же 5 оно
(5)-2-(2-(4-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)уфеніл)ацетамід 0)-М-((5)-1-(((5)-9-етил-9- гідрокси-10,13-діоксо-2,3,9,10,13,15-гексагідро-1Н,12Н-бензої|де|піраної3",4"6,7|індолізиної/1,2-
Біхінолін-4-іл)аміно)-1-оксопропан-2-іл)-3-метилбутанамід (5)
РМ-оцтову кислота-О5Би (64 мг, 0,19 ммоль) додавали до розчину неочищеного А5 (розрахункова кількість 0,19 ммоль) у сухому СНеСі» (10 мл) в атмосфері аргону. Реакція не відбувалася, тому додавали ОІРЕА (51 мкл, 0,28 ммоль). Реакційну суміш перемішували аж до завершення реакції. Суміш розводили за допомогою СНесСі» (25 мл) і органічну фазу промивали за допомогою НгО (2 х 50 мл) і сольового розчину, потім сушили над Мд5Ох4, фільтрували і надлишок розчинника видаляли за допомогою ротаційного випарювання за зниженого тиску за допомогою ротаційного випарювання за зниженого тиску. Неочищену речовину очищали за допомогою препаративної НРІС і фракції піддавали сублімаційному сушінню з одержанням чистого 5 (2,5 мг, вихід 1,6 95 після 2 стадій). | С/М5 (Спосіб В): Е5: -1,54 хв., маса/заряд 787,7
ЇМ я НЕ. І С/М5 (Спосіб С): Е5: - 5,61 хв., маса/заряд 787,8 |М -- НІ.
Приклад 6 пам т о т " М 5 : он
М Х у; я С в о хх чи мо, оно 11 Ав : Н дл ит с о
ОС
2
Й
(в оно в (8)-2-(З3-Нітропіридин-2-іл)удисульфаніл)пропіл-((5)-9-етил-9-гідрокси-10,13-діоксо- 2,3,9,10,13,15-гексагідро-1Н,12Н-бензо|де|піраної3",4":6,7|індолізино/!1,2-Б)хінолін-4-іл)укарбамат (6) () (28)-2-(З-Нітро-2-піридил)дисульфаніл|пропан-1-ол Аб (25 мг, 0,1015 ммоль, 1,0 екв.) розчиняли в дихлорметані (1 мл). Додавали піридин (8,5 мкл, 0,11 ммоль, 1,0 екв.), потім додавали трифосген (11 мг, 0,0370685 ммоль, 0,33 екв.) і суміш перемішували в атмосфері Аг протягом 45 хв., відразу після чого ЇСМ5 (гашення за допомогою ЕТМН) вказувала на утворення відповідного карбамату. (ії) (5)-4-Аміно-9-етил-9-гідрокси-1,2,3,9,12,15-гексагідро-Т!ОН,1ЗН- бензо|де|пірано/34"6,7|індолізино|1,2-Бі|хінолін-10,13-діон (111) (43 мг, 0,09026 ммоль, 1,0 екв.) розчиняли в дихлорметані (2 мл), М,М-дізопропілетиламіні (42 мкл, 0,241 ммоль, 2,7 екв.) і піридині (25 мкл, 0,309 ммоль, 3,4 екв.). Додавали реакційну суміш зі стадії (І) і суміш перемішували протягом ЗО хв., відразу після чого ЇСМ5 вказувала на завершення реакції.
Реакційну суміш концентрували іп масо і очищали за допомогою хроматографії із застосуванням Ізоїега (0-4 95 МеОнН в СНесСіг) з одержанням 6 (22 мг, 0,03256 ммоль, вихід 36 95,
ОС - 96,8 95) у вигляді жовтої твердої речовини. І С/М5 (Спосіб В): КТ - 1,86 хв., 676,6 (МАНІ.
Приклад 7 о о
Н «Ж АД М 2 р : й ху о
Н : Н | М о х о й-
М
М о оно мив о
М о о о о -- - -; н н уче и ху о н І н М о х о -
М Х Й о ей оно 7 6-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-М-(2-((2-(((5)-1-((2-((5)-9-етил-9-гідрокси-10,13- діоксо-2,3,9,10,13,15-гексагідро-1Н,12Н-бензої|де|піраноїЇ3"4"6,7|ндолізиної/1,2-Бб|хінолін-4- іл)аміно)-2-оксоетил)аміно)-1-оксо-3-фенілпропан-2-іл)аміно)-2-оксоетил)аміно)-2- оксоетил)гексанамід (7)
Сполуку 118 (259 мг, 0,3588 ммоль) солюбілізували в СНоСі» (25 мл). Вихідний матеріал був повністю нерозчинним, тому додавали ОМА (1 мл). Оскільки покращення не спостерігали, додавали ОІРЕА (68 мкл, 0,390 ммоль) і вся тверда речовина перейшла в розчин. Додавали малеіїмідкапронову кислоту (69 мг, 0,358 ммоль) і суміш залишали перемішуватися за к. т. протягом ночі, і після цього аналіз | СМ5 показав завершення реакції. Реакційну суміш гасили за допомогою Меон (2 мл) і обробляли вакуумом до сухості. Неочищений продукт очищали за допомогою препаративної НРІС і потім піддавали сублімаційному сушінню з одержанням сполуки 7 у вигляді коричневато-жовтої твердої речовини (38,2 мг, вихід 11 95). Дані аналізу:
ЇСМ5 Зхв.: Е5: - 1,47 хв., маса/заряд 916,2 М - НІ І СМ5 15хв.: Е5: - 5,46 хв., маса/заряд 916,1 (М - НЕ.
Приклад 8 о о срср оссоі
Н : Н | М о х о р --
М йо що о а оно 8 о
М си
НМ оо о о
Н н Н чити ху о 8 н І н М в о (в) -
М ХМ о ун оно 8 1-(3-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)упропанамідо)-М-(2-((2-(((5)-1-(2-((5)-9-етил-9- гідрокси-10,13-діоксо-2,3,9,10,13,15-гексагідро-1Н,12Н-бензої|де|піраної3",4"6,7|індолізиної/1,2- ріхінолін-4-іл)аміно)-2-оксоетил)аміно)-1-оксо-3-фенілпропан-2-іл)аміно)-2-оксоетил)аміно)-2- оксоетил)-3,6,9,12,15,18,21,24-октаоксагептакозан-27-амід (8)
Сполуку 118 (70 мг, 0,096 ммоль) солюбілізували в СНоСі» (5 мл). Вихідний матеріал був повністю нерозчинним, тому додавали ОМА (0,5 мл). Оскільки покращення не спостерігали, додавали ОІРЕА (19 мкл, 0,106 ммоль) і вся тверда речовина перейшла в розчин. Додавали
МаІ-аРЕСв-ОН (63 мг, 0,106 ммоль) і ЕОСІ.НСІ (19 мг, 0,099 ммоль) і суміш залишали перемішуватися за к. т. протягом ночі, після чого аналіз | СМ5 показав завершення реакції.
Реакційну суміш гасили за допомогою МеонН (2 мл) і обробляли вакуумом до сухості.
Неочищений продукт очищали за допомогою препаративної НРІС і потім піддавали сублімаційному сушінню з одержанням 8 у вигляді коричневато-жовтої твердої речовини (30 мг, вихід 24 95). | СМ5 Зхв.: Е5: - 1,44 хв., маса/заряд 1297,6 |М «- НІ".
Приклад 9 - Альтернативний спосіб синтезу 1 нам хх о
М
М ХМ - - ке ? оно 11
Ж о о М с о . М х о 8 І Н | М за в -
М Х у, о ва 1 оно (5)-4-Аміно-9-етил-9-гідрокси-1,2,3,9,12,15-гексагідро-ї!0Н1ЗН-
бензо|де|піраної/3",4":6,7|індолізиної1,2-БІхінолін-10,13-діон І11 (371 мг, 0,779 ммоль, 1,0 екв.) розчиняли в дихлорметані (30 мл). Додавали М,М-діїізопропілетиламін (69 мкл, 0,396 ммоль, 0,51 екв.) і (25)-2-І(25)-2-І3-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-І3-(2,5-діоксопірол- 1- іл)упропаноїламіно|етокси|етокси|етокси|етокси|Іетокси|етокси|етокси|етокси|пропаноїламіно |-3- метил-бутаноїл|іаміно|пропанову кислоту (664 мг, 0,871 ммоль, 1,1 екв.) в М,М-диметилацетаміді (10 мл), потім додавали ЕОСІ.НСЇ (226 мг, 1,18 ммоль, 1,5 екв.) і суміш перемішували протягом 2 год., відразу після чого ЇСМ5 вказувала на достатній рівень перетворення, однак було відзначено, що реакція перервалася. Реакційну суміш нагрівали до 30 "С і перемішували протягом 30 хв., при цьому Ї!СМ5 вказувала на відсутність змін, тому СНоСіг2 видаляли іп масио і до одержаного розчину в ОМА додавали Еї2О. Збирали осаджене масло, ЕТО видаляли іп масцо і процес осадження повторювали. Об'єднані осади очищали за допомогою НРІ С (10--60 до В в А протягом 13 хв.) з одержанням 1 (200 мг, 0,174 ммоль, чистота 98 95, вихід 22 95) у вигляді жовтого залишку після сублімаційного сушіння. Ї С/М5 (спосіб А): час утримання 1,44 хвилини (Еб-) маса/заряд 1149 |М я НІ:
ІН ЯМР (600 МГц, Хлороформ-а) 5 8,81 (5, 1Н), 7,83 (5, 2Н), 7,48 (5, 1Н), 7,18 (ай, У - 18,7, 7,5 Гц, 2Н), 6,69 (5, 2Н), 6,43 (5, 1Н), 5,68 (0,9 - 16,1 Гц, 1Н), 527 (а, У - 16,1 Гц, 1Н), 5,03 (4, у - 18,4 Гц, 1Н), 4,90 (9, У - 18,4 Гц, 1Н), 4,75(р, у - 7,2 Гц, 1Н), 4,32 (ад, У - 7,4, 5,8 Гц, 1Н), 4,05 (5, 1Н), 3,83 (1, У - 7,2 Гу, ЗН), 3,78 - 3,68 (т, ЗН), 3,68 - 3,57 (т, З1Н), 3,53 (Ї, У - 5,1 Гц, ЗН), 3,40 (а, - 5,3 Гц, 2Н), 3,06 - 2,91 (т, ЗН), 2,84 (аї, У - 16,3, 6,2 Гц, 1Н), 2,63 (ада, 9 - 14,8, 8,5, 4,2
Гц, 1Н), 2,57 - 2,44 (т, 4Н), 2,30 (дд, У - 13,4,607 Гц, 1), 2.10 (р, 7 - 6,4 Гц, ЗН), 1,91 (аа, у - 16,8, 14,3, 7,2 Гц, ЗН), 1,54 (а, - 71 Гц, ЗН), 1,02 (аа, У - 15,5, 6,9 Гц, ТОН).
Приклад 10 - Альтернативний спосіб синтезу А2 7» а я шк АЛІ кі
Ши Же нт МЕ тю й - в зв си т рай ста пу темн, я» и тн,
Не аз
Аліл-((5)-1-(((5)-1-(4-аміно-5-оксо-5,6,7,8-тетрагідронафталін-1-іл)аміно)-1-оксопропан-2- іл)аміно)-3-метил-1-оксобутан-2-іл)/укарбамат (А2)
ЕОСІ.НСІ (7,71 г, 31,2 ммоль) додавали до розчину аїЇІос-МаІ-АІа-ОН (8,49 г, 31,2 ммоль) в
СНеСіг (200 мл) і перемішували протягом 15 хв. або до досягнення солюбілізації. Потім додавали 116 (5 г, 28,3 ммоль) й одержану суміш залишали перемішуватися аж до завершення реакції. Леткі речовини видаляли за зниженого тиску. Неочищений продукт поглинали в ЕСО (50 мл) і суміш піддавали впливу ультразвуку протягом З хв. Тверду речовину фільтрували і знову поглинали в СН2СІ2 (50 мл), піддавали впливу ультразвуку протягом З хв. і знову фільтрували з одержанням чистого продукту А2 у вигляді сірої твердої речовини (12,21 г, вихід 79 95). |! С/М5 (Спосіб В): Е5: - 1,47 хв., маса/заряд 431,5 |М -- НІ".
Приклад 11 о
Н ку | хХ о : М д о - - фюжж
У М ХМ о ні
А5 оно
-х с, о М у М хх о ж
Ї р ; те м Ї з .
М М Й о
АТ бе оно / о о Оу он о
А фер У хх . о о о д о - рай М М о 9 купе оно а) (9Н-Флуорен-9-іл)метил-М2-(1-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-оксо- 7,10,13,16,19,22,25,28-октаокса-4-азагентриаконтан-31-оїл)-М5-((5)-1-(((5)-1-(((5)-9-етил-9- гідрокси-10,13-діоксо-2,3,9,10,13,15-гексагідро-1Н,12Н-бензої|де|піраної3",4"6,7|індолізиної/1,2-
Біхінолін-4-іл)аміно)-1-оксопропан-2-іл)аміно)-3-метил-1-оксобутан-2-іл)-І -глутамінат (А7)
ЕОСІ.НСІ (0,10 ммоль, 1,2 екв.) додавали до розчину А5 (0,087 ммоль, 1,0 екв.) і МаІ-РЕСв-
СІШ-ОН (0,10 ммоль, 1,2 екв.» в ОСМ (5 мл) й одержану суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш випарювали до сухості й очищали за допомогою колонки (8-12 95 МеОнН/СсмМ) з одержанням продукту у вигляді білої твердої речовини. Вихід - 80 мг (63 95). І С/М5 (Спосіб В) гі 1,66 хв. маса/заряд (1456,2) МАН.
Б) М2-(1-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-оксо-7,10,13,16,19,22,25,28-октаокса-4- азагентриаконтан-31-оїл)-М5-((5)-1-(((5)-1-((5)-9-етил-9-гідрокси-10,13-діоксо-2,3,9,10,13,15- гексагідро-1Н,12Н-бензоїЇде|пірано/3,4":6,7індолізиної|1,2-Бі|хінолін-4-іл)аміно)-1-оксопропан-2- іл)аміно)-3-метил-1-оксобутан-2-іл)-І -глутамін (9) 1-Метилпіролідин (200 мкл) додавали до розчину А7 (0,06 ммоль) в ЮОМЕ (0,8 мл) і перемішували за кімнатної температури протягом 10 хв. Розчинник видаляли під вакуумом і залишок очищали за допомогою препаративної НРІ С (30 96 МесСМ/вода ї- 0,05 95 мурашиної кислоти протягом 8,5 хв.). Фракції, що містять продукт, піддавали сублімаційному сушінню з одержанням продукту у вигляді брудно-білої твердої речовини. Вихід - 23 мг (30 95). ! С/М5 (Спосіб В) п 1,43 хв. маса/заряд (1278,4) МАН.
Приклад 12 - Кон'югація
Антитіло, що являє собою герцептин-С239і
Антитіла, що являють собою герцептин, сконструйовані таким чином, щоб вони містили цистеїн, вставлений між положеннями 239 і 240, одержували згідно зі способами, описаними у
Оітавзі, М., еї а), Моіесшаг РІаппасешіс5, 2017, 14, 1501-1516 (00! 5 10.1021/ас5.тоЇрпапптасеші.6р00995).
СопіА 50 мМ розчин Оі -дитіотреїтолу (ОТТ) в фосфатно-сольовому буферному розчині з рН 7,4 (РВ5) додавали (150 молярних еквівалентів/антитіло, 40 мікромоль, 800 мкл) до 10 мл розчину антитіла, що являє собою герцептин-С2391і (40 мг, 267 наномоль), у буфері для відновлення, що містить РВЗ і 1 мМ етилендіамінтетраоцтової кислоти (ЕОТА), за кінцевої концентрації антитіла, що становить 4,0 мг/мл. Суміш для відновлення залишали для здійснення реакції за кімнатної температури на 4 години 45 хвилин (або до повного відновлення, що визначається за допомогою ШОНРІ С) в орбітальному струшувачі за слабкого (60 об./хв.) струшування. Для видалення всього надлишку відновлюваного засобу за допомогою центрифугування із застосуванням спінового фільтра у відновленого антитіла проводили заміну буфера на буфер для повторного окислення, який містить РВ5 і 1 мМ ЕОТА. Додавали 50 мМ розчин дегідроаскорбінової кислоти (ОНАА, 20 молярних еквівалентів/антитіло, 5,33 мікромоль, 106,7 мкл) в ОМ5О, і суміш для повторного окислення залишали для здійснення реакції протягом 16 годин за кімнатної температури за слабкого (60 об./хв.) струшування за концентрації антитіла, що становить 4 мг/мл (або додавали додаткову кількість ОНАА і реакційну суміш залишали на 5О0 більш тривалий час до повного повторного окислення цистеїнових тіольних груп з повторним утворенням міжланцюгових цистеїнових дисульфідних зв'язків, що визначали за допомогою
ОНРІ С). Потім суміш для повторного окислення піддавали стерилізувальній фільтрації і розводили у буфері для кон'югації, що містить РВ5 і 1 мМ ЕОТА, з одержанням кінцевої концентрації антитіла, що становить 3,6 мг/мл. Сполуку 1 додавали у вигляді розчину в ОМ5О (10 молярних еквівалентів/антитіло, 1,33 мікромоль, в 0,55 мл ОМ5О) до 5,0 мл даного розчину повторно окисненого антитіла (20 мг, 133 наномоль) з одержанням кінцевої концентрації ОМ5О, що становить 10 95 (0об./06.). Розчин перемішували протягом 2 годин. за кімнатної температури, потім реакцію кон'югації гасили за допомогою додавання М-ацетилцистеїну (6,67 мікромоль, 67 мкл при 100 мМ), потім очищали за допомогою спінової фільтрації в РВ5 із застосуванням спінового фільтра Атісоп ОПйгасеїї ЗО кКДа МУМУСО об'ємом 15 мл, піддавали стерилізувальній фільтрації й аналізували.
Аналіз ОНРІ С відновленого зразка СопіА із застосуванням системи 5пПітаа?и Рготіпепсе, обладнаної колонкою Тпепто 5сіепійс МАБРас 50 мм х 2,1 мм, під час елюювання в градієнті води й ацетонітрилу, з виявленням при 214 нм і 330 нм (специфічних для сполуки 1), продемонстрував наявність некон'югованих легких ланцюгів і суміші некон'югованих важких ланцюгів і важких ланцюгів, приєднаних до однієї молекули сполуки 1, що відповідало співвідношенню лікарський засіб/антитіло (САК), що становить 1,89 молекули сполуки 1 на антитіло.
Аналіз ОНРІ С зразка СопіА із застосуванням системи Зпітад7и Рготіпепсе, обладнаної колонкою Тозой Віозсіепсе Т5Каде! БирегеуУу тАБ НТР, 4 мкм, 4,6 х 150 мм (з передколонкою 4 мкм, 3,0 х 20 мм), під час елюювання зі швидкістю потоку 0,3 мл/хвилина за допомогою простерилізованого фільтрацією буфера для 5ЕС, що містить 200 мМ фосфату калію з рН 6,95, 250 ММ хлориду калію і 10 95 ізопропанолу (0об./06.) з виявленням при 280 нм, продемонстрував мономерну чистоту, яка становить 98 95. Аналіз ОНРІ С 5ЕС показав, що концентрація кінцевого
СопіА становить 2,14 мг/мл в 6,5 мл, а маса одержаного Сопі|А становила 13,9 мг (вихід 70 905).
Сопід" 10 мМ розчин трис(2-карбоксиетил)/фосфіну (ТСЕР) у фосфатно-сольовому буферному розчині з рН 7,4 (РВ5) додавали (10 молярних еквівалентів/антитіло, 400 наномоль, 40 мкл) до 2,4 мл розчину антитіла, що являє собою трастузумаб (б мг, 40 наномоль), у буфері для відновлення, що містить РВ5 і 1 мМ етилендіамінтетраоцтової кислоти (ЕЮОТА), за кінцевої концентрації антитіла, що становить 2,5 мг/мл. Суміш для відновлення залишали для здійснення реакції за кімнатної температури на 16 години (або до повного відновлення, що визначається за допомогою ШНРІС) в орбітальному струшувачі за слабкого (60 об./хв.) струшування. За допомогою центрифугування із застосуванням спінового фільтра у розчину відновленого антитіла проводили заміну буфера (для видалення всього надлишку відновлювального засобу) на буфер для кон'югації, який містить РВ5 і 1 мМ ЕОТА, з одержанням кінцевої концентрації антитіла, що становить 2,0 мг/мл. Сполуку 1 додавали у вигляді розчину в ОМ5О (20 молярних еквівалентів/антитіло, 400 наномоль, в 0,15 мл ОМ50О) до 1,35 мл даного розчину відновленого антитіла (3 мг, 20 наномоль) з одержанням кінцевої концентрації ОМ5О, яка становить 10 95 (060./06.). Розчин змішували протягом 2 годин за кімнатної температури, потім реакцію кон'югації гасили за допомогою додавання М- ацетилцистеїну (2 мікромоль, 20 мкл при 100 мМ), потім очищали за допомогою.центрифугування із застосуванням спінового фільтра Атісоп Огасеї! 30 кКДа МУСО об'ємом 15 мл, піддавали стерилізувальній фільтрації й аналізували.
Аналіз ОНРІ С відновленого зразка Сопі|А" із застосуванням системи Зпітад2и Рготіпепсе, обладнаної колонкою ТПегто Зсіепіййс МАБбРас 50 мм х 2,1 мм, під час елюювання з градієнтом води й ацетонітрилу, з виявленням при 214 нм і 330 нм (специфічних для сполуки 1), продемонстрував наявність суміші некон'югованих легких ланцюгів, легких ланцюгів, приєднаних до однієї молекули сполуки 1, некон'югованих важких ланцюгів і важких ланцюгів, приєднаних до не більше трьох молекул сполуки 1, що відповідало співвідношенню лікарський засіб/антитіло (БАК), що становить 7,89 молекули сполуки 1 на антитіло.
Аналіз ОНРІ С зразка СопіА" із застосуванням системи 5пітайд72и Рготіпепсе, обладнаної колонкою Тозой Віозсіепсе Т5Каеє! ЗирегеуУу тАБ НТР, 4 мкм, 4,6 х 150 мм (з передколонкою 4 мкм, 3,0 х 20 мм), під час елюювання зі швидкістю потоку 0,3 мл/хвилина за допомогою простерилізованого фільтрацією буфера для 5ЕС, що містить 200 мМ фосфату калію з рН 6,95, 250 ММ хлориду калію і 10 95 ізопропанолу (об./06.), з виявленням при 280 нм, продемонстрував мономерну чистоту, яка становить 98,5 95. Аналіз ОНРІС 5ЕС показав, що концентрація кінцевого Соп|А" становить 2,02 мг/мл в 1,25 мл, а маса одержаного Сопід" становила 2,5 мг 60 (вихід 84 95).
Сопів 10 мМ розчин трис(2-карбоксиетил)/фосфіну (ТСЕР) у фосфатно-сольовому буферному розчині з рН 7,4 (РВ5) додавали (10 молярних еквівалентів/антитіло, 3,56 мікромоль, 356 мкл) до 11,1 мл розчину антитіла, що являє собою трастузумаб (53,4 мг, 356 наномоль), у буфері для відновлення, що містить РВ5 з рН 7,4 і 1 мм етилендіамінтетраоцтової кислоти (ЕОТА), за кінцевої концентрації антитіла, що становить 4,84 мг/мл. Суміш для відновлення залишали для здійснення реакції при 37 "С на 1 години 30 хвилин (або до повного відновлення, що визначається за допомогою ШНРІС) в орбітальному струшувачі за слабкого (60 об./хв.) струшування. Сполуку 2 додавали у вигляді розчину в ОМ5О (15 молярних еквівалентів/антитіло, 5,1 мікромоль, в 1,2 мл ЮОМ50О) до 10,5 мл даного розчину відновленого антитіла (50,8 мг, 339 наномоль) з одержанням кінцевої концентрації ОМ5О, яка становить 10 95 (об./06.). Розчин перемішували протягом 1 години 30 хвилин за кімнатної температури, потім реакцію кон'югації гасили за допомогою додавання М-ацетилцистеїну (25,4 мікромоль, 254 мкл при 100 мМ), потім очищали за допомогою АКТАМ егап ЕРІ С із застосуванням колонки СЕ
Неайнсаге Ні ода"М 26/600, заповненої Зирегдех 200 РО, під час елюювання зі швидкістю потоку 2,6 мл/хв. за допомогою РВ5. Фракції, які відповідають піку мономера СопіВ, об'єднували, концентрували і проводили заміну буфера на буфер з рН 6,0, який містить 25 ММ гістидину і 205 мМ сахарози, із застосуванням спінового фільтра Атісоп ШГгасеїІ 50 КДа МУСО об'ємом 15 мл, піддавали стерилізувальній фільтрації й аналізували.
Аналіз ОНРІ С відновленого зразка СопіВ із застосуванням системи 5Пітад7и Рготіпепсе, обладнаної колонкою ТПегто Зсіепіййс МАрРас 50 мм х 2,1 мм, під час елюювання з градієнтом води й ацетонітрилу, з виявленням при 214 нм і 330 нм (специфічних для сполуки 2), продемонстрував наявність суміші некон'югованих легких ланцюгів, легких ланцюгів, приєднаних до однієї молекули сполуки 2, некон'югованих важких ланцюгів і важких ланцюгів, приєднаних до не більше трьох молекул сполуки 2, що відповідало співвідношенню лікарський засіб/антитіло (БАК), що становить 7,93 молекули сполуки 2 на антитіло.
Аналіз ОНРІ С зразка СопіВ із застосуванням системи 5Пітад7и Рготіпепсе, обладнаної колонкою Тозой Віозсіепсе Т5Каде! БирегеуУу тАБ НТР, 4 мкм, 4,6 х 150 мм (з передколонкою 4 мкм, 3,0 х 20 мм), під час елюювання зі швидкістю потоку 0,3 мл/хвилина за допомогою простерилізованого фільтрацією буфера для 5ЕС, що містить 200 мМ фосфату калію з рН 6,95, 250 ММ хлориду калію і 10 95 ізопропанолу (об./06.), з виявленням при 280 нм, продемонстрував мономерну чистоту, яка становить 98,9 95. Аналіз ОНРІС 5ЕС показав, що концентрація кінцевого СопіВ становить 2,4 мг/мл в 16 мл, а маса одержаного СопіВ становила 38,4 мг (вихід 84 965).
Соп|с 10 мМ розчин трис(2-карбоксиетил)/фосфіну (ТСЕР) у фосфатно-сольовому буферному розчині з рН 7,4 (РВ5) додавали (40 молярних еквівалентів/антитіло, 11,2 мікромоль, 1,12 мл) до 20 мл розчину антитіла, що являє собою герцептин-С2391і (42 мг, 280 наномоль), у буфері для відновлення, що містить РВ5 і 1 мМ етилендіамінтетраоцтової кислоти (ЕОТА), за кінцевої концентрації антитіла, що становить 2,1 мг/мл. Суміш для відновлення залишали для здійснення реакції за кімнатної температури на 16 години (або до повного відновлення, що визначається за допомогою ШНРІС) в орбітальному струшувачі за слабкого (60 об./хв.) струшування. Для видалення всього надлишку відновлюваного засобу за допомогою центрифугування із застосуванням спінового фільтра у відновленого антитіла проводили заміну буфера на буфер для повторного окислення, який містить РВ5 і 1 мм ЕОТА. 50 мМ розчин дегідроаскорбінової кислоти (ОНАА, 30 молярних еквівалентів/антитіло, 7,0 мікромоль, 141 мкл) в ОМ5О додавали до 22 мл даного відновленого антитіла, підданого заміні буфера (35,2 мг, 235 наномоль), і суміш для повторного окислення залишали для здійснення реакції протягом 2 годин і 30 хвилин за кімнатної температури і слабкого (60 об./хв.) струшування за концентрації антитіла, що становить 1,6 мг/мл (або додавали додаткову кількість ОНАА і реакційну суміш залишали на більш тривалий час до повного повторного окислення цистеїнових тіольних груп з повторним утворенням міжланцюгових цистеїнових дисульфідних зв'язків, що визначається за допомогою ШНРІ С). Потім суміш для повторного окислення піддавали стерилізувальній фільтрації. Сполуку 6 додавали у вигляді розчину в ОМ5О (20 молярних еквівалентів/антитіло, 2,3 мікромоль, в 1,36 мл ЮОМ50О) до 11,0 мл даного розчину повторно окисненого антитіла (17,6 мг, 117 наномоль), рН регулювали за допомогою 1,22 мл 1 М бікарбонату натрію з одержанням кінцевої концентрації ОМ5О, яка становить 10 95 (об./06.), і 10 95 (0б./06.) 1 М бікарбонату натрію. Розчин залишали для здійснення реакції за кімнатної температури протягом 2 годин за слабкого струшування. Потім реакцію кон'югації гасили за допомогою додавання М- 60 ацетилцистеїну (12 мікромоль, 117 мкл при 100 мм), потім очищали і проводили заміну буфера
Б2 на буфер з рН 6,0, який містить 25 мМ гістидину і 205 мМ сахарози, із застосуванням спінового фільтра Атісоп ОКгасеїЇ 50 кКДа МУУСО об'ємом 15 мл, піддавали стерилізувальній фільтрації й аналізували.
Аналіз ОНРІ С інтактного зразка Соп|іС із застосуванням системи 5пітад7и Рготіпепсе, обладнаної колонкою берах Ргоїеотіх НІС бутил-МР5Б 4,6 х 35 мм, 5 мкм, під час елюювання градієнтом буфера з рН 7,4, що містить 25 ММ фосфату натрію, 1,5 М сульфату амонію, і 20 905 ацетонітрилу (об./06.) в 25 мМ натрій-фосфатному буфері з рН 7,4, з виявленням при 214 нм і 330 нм (специфічних для сполуки б), продемонстрував наявність некон'югованого і кон'югованого антитіла, приєднаного до однієї або двох молекул сполуки 6, що відповідало співвідношенню лікарський засіб/антитіло (АК), що становить 1,42 молекули сполуки б на антитіло.
Аналіз ОНРІ С зразка СопісС із застосуванням системи 5пПітад7и Рготіпепсе, обладнаної колонкою Тозой Віозсіепсе Т5Каде! БирегеуУу тАБ НТР, 4 мкм, 4,6 х 150 мм (з передколонкою 4 мкм, 3,0 х 20 мм), під час елюювання зі швидкістю потоку 0,3 мл/хвилина за допомогою простерилізованого фільтрацією буфера для 5ЕС, що містить 200 мМ фосфату калію з рН 6,95, 250 ММ хлориду калію і 10 95 ізопропанолу (об./06.), з виявленням при 280 нм, продемонстрував мономерну чистоту, яка становить 98 95. Аналіз ОНРІ С 5ЕС показав, що концентрація кінцевого
СопісС становить 1,06 мг/мл в 10,1 мл, а маса одержаного Соп/|С становила 10,7 мг (вихід 61 95).
Приклад 13 - Аналіз іп міго
Твердий тестовий матеріал розчиняли в ОМ5О з одержанням вихідного розчину з концентрацією 2 мМ, на основі якого одержували вісім серійних розведень в ЮОМ5О за співвідношення 1:10 і зберігали при -202С до застосування.
Адгезивні клітини МСІ-М87 промивали за допомогою О-РВ5 і відділяли за допомогою трипсин-ЕОТА, потім у двох повторностях визначали щільність і життєздатність клітин за допомогою аналізу, основаного на виключенні трипанового синього, із застосуванням автоматичного лічильника клітин (ГОМА-ЇЇ мМ), Суспензію клітин розводили до 1 х 109 клітин/мл у середовищі для росту (КРМІ 1640 з Сішатах ж 10 95 (0б./06.) фетальної бичачої сироватки
НуСіІопе"м) і перемішували на вортексі перед розподілом із розрахунку 2 мл на лунку в стерильні поліпропіленові планшети з об'ємом лунки З мл. Потім розведення вражаючого елемента вносили у відповідні лунки з розрахунку 10 мкл/лунка і змішували шляхом повторного піпетування. У випадку контрольних лунок до суспензії клітин об'ємом 2 мл вносили 10 мкл
ОМ5О і ретельно перемішували. Потім по 100 мкл кожного зразка вносили аліквотами в 2 повторні лунки стерильного 96-лункового мікропланшета з плоским дном й інкубували при 37 "С в інкубаторі насичуваному СО» (5 95). У кінці періоду інкубації (7/7 днів) вимірювали життєздатність клітин із застосуванням аналізу СеїІТіег 96 "М адоеоиз Опе (МТ5), який вносили з розрахунку 20 мкл/лунка й інкубували протягом 4 годин при 37 "С, 5 95 СО». Потім планшети зчитували із застосуванням багатоканального планшет-рідера Епмізіоп'М (Регкіп ЕІтег) з використанням показника поглинання при 490 нм.
Відсоткову частку клітин, що вижили, розраховували на основі середнього поглинання у 2 повторних лунок для кожного зразка порівняно з середнім поглинанням у двох контрольних лунок, оброблених тільки ОМ5О (100 95). ІСвоо визначали шляхом апроксимації кожного набору даних до сигмоїдальних кривих доза-відповідь з перемінним нахилом за допомогою нелінійного алгоритму апроксимації в програмному забезпеченні сгарпРавй Ргізт (Сан-Дієго, Каліфорнія).
Всі експерименти, описані в даному звіті, проводили і тестували під час трьох незалежних експериментів. Дані наведені як середнє для трьох незалежних повторностей. 10711111111бво(нМуСС
Приклад 14 - Аналіз АОС іп мійго
Концентрацію й життєздатність клітин із субконфлюентної культури (конфлюентність 80-90 95) в матраці Т75 вимірювали за допомогою фарбування трипановим синім, а підрахунок здійснювали із застосуванням автоматичного лічильника клітин ГОМА-ЇЇ М, Клітини розводили до 2х105/мл, розподіляли (50 мкл на лунку) в 96-лункові планшети з плоским дном.
Вихідний розчин (1 мл) кон'югату антитіло-лікарський засіб (АОС) (20 мкг/мл) одержували шляхом розведення простерилізованого фільтрацією АВС у середовищі для культивування клітин. Набір із вх 10-кратних розведень вихідного розчину АОС одержували в 24-лунковому планшеті шляхом послідовного перенесення 100 мкл в 900 мкл середовища для культивування клітин. Розведення АЮС вносили (з розрахунку 50 мкл на лунку) у 4 повторні лунки в 96- лунковому планшеті, що містять 50 мкл суспензії клітин, висіяних туди раніше. У контрольні лунки вносили по 50 мкл середовища для культивування клітин. 96-лунковий планшет, який містить клітини і АС, інкубували при 37 "С в інкубаторі, насичуваному СО», протягом періоду впливу.
У кінці інкубаційного періоду життєздатність клітин вимірювали за допомогою аналізу з МТ5.
МТ5 (Рготеда) вносили (з розрахунку 20 мкл на лунку) в кожну лунку й інкубували протягом 4 годин при 37 "С в інкубаторі, насичуваному СОг. Поглинання в лунках вимірювали при 490 нм.
Відсоткову частку клітин, що вижили, розраховували на основі середнього поглинання у 4 лунок, оброблених АОС, порівняно із середнім поглинанням у 4 контрольних лунок без обробки (100
Фо). ІС5о визначали на основі даних доза-відповідь із застосуванням СгарпРай Р'гізт за допомогою нелінійного алгоритму апроксимації: сигмоїдальні криві доза-відповідь з перемінним нахилом.
Періоди інкубації з АОС становили 4 дні у випадку МОА-МВ-468 і 7 днів у випадку МСІ-М87.
МОА-МВ-468 і МСІ-М87 культивували в ЕРМІ 1640 з Сішатах -«- 10 95 (06б./06.) фетальної бичачої сироватки НуСіопе "М. МСІ-М87 являє собою лінію клітин, що експресують Неїі2, а МОА-МВ-468 являє собою Нег2-негативну лінію клітин.
Приклад 15 - Аналіз АБС іп мімо
Способи і матеріали
Миші
У день 1 дослідження вік самок мишей з тяжким комбінованим імунодефіцитом (Бох Спазе
ЗСІОТМ, СВ17/сті- РгкасзсіаЛсоїстСті, Спапез Вімег) становив вісім тижнів, а маса тіла (ВУ) знаходилась в діапазоні 14,5-20,0 грамів. Тваринам надавали ай Ірйшт доступ до води (оброблена за допомогою зворотного осмосу, 1 ррт СІ) і модифікованого і підданого випромінюванню лабораторного раціону МІН 317М, що містить 18,0 95 загального білка, 5,0 90 загального жиру і 5,0 95 загальної клітковини. Мишей розміщували на підданій випромінюванню підстилці для лабораторних тварин Епгісп-о'єоб5ТМ у фіксованих мікроізоляторах в умовах 12- годинного світлового циклу при 20-22 "С і 40-60 95 вологості. Служба досліджень СК чітко виконує рекомендації Посібника з догляду за лабораторними тваринами та їх використання щодо утримання, розведення, проведення хірургічних процедур, контролю годування та випаювання, а також надання ветеринарної допомоги. Програма з догляду і використання тварин у службі досліджень СК акредитована Міжнародною асоціацією з оцінки й акредитації лабораторних досліджень на тваринах (ААДАГАС), що забезпечує дотримання прийнятих стандартів з догляду й використання лабораторних тварин.
Культура пухлинних клітин
Клітини МСІ-М87 карциноми шлунка людини культивували в середовищі КРМІ-1640, доповненому 10 95 фетальної бичачої сироватки, 2 мМ глутаміну, 100 одиниць/мл пеніциліну, 100 мкг/мл сульфату стрептоміцину і 25 мкг/мл гентаміцину. Клітини вирощували в матрацах для культур тканин в інкубаторі зі зволоженням при 37 "С в атмосфері 5 95 СОз5 і 95 95 повітря.
Імплантація іп мімо і ріст пухлини
Клітини МСІ-М87, використовувані для імплантації, збирали в фазі логарифмічного росту й ресуспендували у фосфатно-сольовому буферному розчині (РВ5), що містить 50 95 Майідеї "М (ВО Віозсіепсез). У день імплантації пухлини кожній піддослідній миші вводили за допомогою підшкірної ін'єкції в правий бік 1 х 107 клітин (0,1 мл суспензії клітин), і ріст пухлини відстежували, коли середній розмір наближався до цільового діапазону 100-150 мм3. Через дванадцять днів, у день, позначений як день 1 дослідження, мишей розділяли на чотирнадцять груп залежно від розрахованого розміру пухлини, причому сім груп були призначені для оцінки ефективності (п-10) і сім груп були призначені для збирання зразків (п-3), при цьому кожна група складалася з тварин з індивідуальними значеннями об'єму пухлини, що знаходяться в діапазоні 108-172 мм", і груповими середніми значеннями об'єму пухлини, що становлять 120-- 124 мм3. Пухлини вимірювали у двох напрямках із застосуванням штангенциркуля, і об'єм розраховували за формулою:
Об'єм пухлини (мм) - (ме х Ї/2 де м/ х ширина і | хх довжина пухлини в мм. Масу пухлини можна розрахувати на основі припущення, що 1 мг еквівалентний 1 мм? об'єму пухлини.
Терапевтичні засоби
СопіА" зберігали в захищеному від світла місці при 4 "С. Стерильний РВ5 застосовували для введення дози групі контролю із середовищем-носієм.
Обробка
У день 1 дослідження самок мишей 5СІО, що несуть сформовані ксенотрансплантати МСЇІ-
М87, розділяли на групи. Аліквоту вихідного розчину розводили за допомогою РВЗ5 до придатної концентрації. Засіб вводили внутрішньовенно за допомогою ін'єкції в хвостову вену однократно у день 1. Об'єм дози становив 0,2 мл на 20 грамів маси тіла (10 мл/кг) і його перераховували відносно маси тіла для кожної окремої тварини.
Миші з групи 1 одержували середовище-носій, що являє собою РВ5, і служили як контрольна група. Група 2 одержувала СопіА" у дозі 4 мг/кг.
Пухлини вимірювали із застосуванням штангенциркуля два рази на тиждень, і кожну тварину піддавали евтаназії, коли її пухлина досягала об'єму кінцевої точки, що становить 800 мм, або в кінці дослідження (день 68), залежно від того, що наступало раніше. Тварин, які покидали дослідження через досягнення кінцевої точки об'єму пухлини, реєстрували як піддані евтаназії через прогресування пухлини (ТР) із зазначенням дати проведення евтаназії.
Критерії відповідей у вигляді регресії
Ефективність обробки можна визначати на основі частоти виникнення й величини відповідей у вигляді регресії, спостережуваних під час дослідження. Обробка може призводити до часткової регресії (РК) або повної регресії (СК) пухлини у тварини. У разі відповіді у вигляді
РК об'єм пухлини становив 50 95 або менше від її об'єму в день 1 під час трьох послідовних вимірювань протягом дослідження, і дорівнював або перевищував 13,5 мм? під час одного або декількох з цих трьох вимірювань. У разі відповіді у вигляді СК об'єм пухлини становив менше 13,5 мм3 під час трьох послідовних вимірювань протягом дослідження. Тварин оцінювали відносно події РК або СК лише один раз під час дослідження, й оцінювали тільки як СК, якщо задовольнялися критерії як РК, так і СК. Тварину з відповіддю у вигляді СК на момент завершення дослідження додатково класифікували як таку, що вижила без пухлини (ТЕ5).
Тварин контролювали відносно виникнення відповіді у вигляді регресії.
Токсичність
Тварин зважували щодня в дні 1-5, потім два рази на тиждень аж до завершення дослідження. Мишей часто оглядали для виявлення виражених ознак будь-яких небажаних побічних ефектів, пов'язаних з лікуванням (ТК), і клінічні симптоми реєстрували у разі їх виявлення. Масу тіла кожної окремої тварини відстежували згідно з протоколом, і будь-яку тварину з втратою маси тіла, що перевищувала 30 95 під час одного вимірювання або перевищувала 25 95 під час трьох послідовних вимірювань, піддавали евтаназії і реєстрували як загибель унаслідок ТК. Групові середні втрати маси тіла також відстежували згідно з протоколом служби досліджень СК. Допустимий рівень токсичності визначали як групове середнє втрати маси тіла (ВМ), що становить менше 20 95 під час дослідження, і наявність не більше 10 95 випадків загибелі унаслідок ТЕ.
Результати
На фіг. 1 представлені графіки середнього росту пухлини, де: / Середовище-носій.д//-/-:/ | є
І обопійї 777777 / |11»
Миші з групи 1 одержували середовище-носій, що являє собою РВ5, внутрішньовенно да х 1 і служили як контрольна група. Медіанне значення ТТЕ для групи 1 становило 24,8 дня. У всіх контрольних тварин пухлини досягали кінцевої точки, що становить 800 мм3.
Група 2 одержувала СопіА" у дозі 4 мг/кг внутрішньовенно да х 1. СК спостерігали у всіх 10 мишей, яких додатково класифікували як ТЕ5 на момент завершення дослідження.
У групі обробки максимальне зниження маси тіла становило -9,5 95 у день 50 дослідження.
Не спостерігали випадків гибелі унаслідок ТК.
Викладення суті винаходу 1. Сполука формули І:
Н
М в вк о
М ря
М
М,
М ? он о І і її солі та сольвати, де К- являє собою лінкер для приєднання до ланки, яка являє собою ліганд, яка вибрана з (іа): о (І
ЖК. ХХ р о Х Іа, де
О являє собою: 7 чо МН
Н о де ОХ є таким, що О являє собою амінокислотний залишок, дипептидний залишок, трипептидний залишок або тетрапептидний залишок;
Х являє собою: о о о ще в осо) о М м тем а н нн нн а рі в2 и дя де а дорівнює 0-5, 01 дорівнює 0-16, 62 дорівнює 0-16, с1 дорівнює 0 або 1, с2 дорівнює 0 або 1, а дорівнює 0-5, де щонайменше бБ1 або 62 дорівнює 0, і щонайменше с1 або с2 дорівнює 0;
С являє собою лінкер для приєднання до ланки, яка являє собою ліганд; (ів): в ве
А и о З М вчи мо о с е
ІБ, де Е" та В? незалежно вибрані із Н та метилу або разом із атомом вуглецю, з яким вони зв'язані, утворюють циклопропіленову або циклобутиленову групу; і
Зо е дорівнює 0 або 1. 2. Сполука відповідно до пункту 1, де В" представлений формулою Іа. 3. Сполука відповідно до пункту 2, де О являє собою амінокислотний залишок. 4. Сполука відповідно до пункту 3, де О вибраний із: Ріє, Гуз, Маї, Аа, Сії, І ем, Пе, Агд та
Тр. 5. Сполука відповідно до пункту 2, де О являє собою дипептидний залишок. 6. Сполука відповідно до пункту 5, де О вибраний із: мн.Рпе-Ї ув-2-о, мн-Уа!-АІа-с-9, мн-Ууаї!-Гув-ечо, мн. діа-ї ув-95о0, мНн-УаІ!-С-е-о, мн-Рпе-Сі-е-о,
МН-| еи-Сії-6-о, мн-Це-Сії-е-о, мн-Рпе-Агуд-е-о, мн-Ттр-Сі-с-о та мн.сіу-Ма!-с-о, 7. Сполука відповідно до пункту 6, де О вибраний із "Н-Рне-ї ув-2-О, мн-Уа|-СИ-5-О та Ммн-Уаї-
Аїа-9-9, 8. Сполука відповідно до пункту 2, де О являє собою трипептидний залишок. 9. Сполука відповідно до пункту 8, де О вибраний із: мн. и-МаїІ-АЇІа-2-о, мн. и-Ма!І-Сії-6-о,
МН.с(и-Ма!-АїІа--9 та
МН.с(и-МаїІ-Сії-е-о, 10. Сполука відповідно до пункту 2, де О являє собою тетрапептидний залишок. 11. Сполука відповідно до пункту 10, де О вибраний із: мн.сіу-сСіу-Рпе-Стус-о та мн.пу-Рпе-Сту-стує-о, 12. Сполука відповідно до пункту 11, де О являє собою: мн.спу-сіу-Рпе-сСпує-о, 13. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів 2-12, де а дорівнює 0-3. 14. Сполука відповідно до пункту 13, де а дорівнює 0 або 1. 15. Сполука відповідно до пункту 13, де а дорівнює 0. 16. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів 2-15, де Б1 дорівнює 0-8. 17. Сполука відповідно до пункту 16, де Б1 дорівнює 0. 18. Сполука відповідно до пункту 16, де Б1 дорівнює 2. 19. Сполука відповідно до пункту 16, де Б1 дорівнює 3. 20. Сполука відповідно до пункту 16, де Б1 дорівнює 4. 21. Сполука відповідно до пункту 16, де Б1 дорівнює 5. 22. Сполука відповідно до пункту 16, де Б1 дорівнює 8. 23. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів 2-15 та 17, де 52 дорівнює 0-8. 24. Сполука відповідно до пункту 23, де 62 дорівнює 0. 25. Сполука відповідно до пункту 23, де 62 дорівнює 2. 26. Сполука відповідно до пункту 23, де 62 дорівнює 3. 27. Сполука відповідно до пункту 23, де 62 дорівнює 4. 28. Сполука відповідно до пункту 23, де 62 дорівнює 5. 29. Сполука відповідно до пункту 23, де 62 дорівнює 8. 30. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів 2-29, де с1 дорівнює 0. 31. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів 2-29, де с1 дорівнює 1. 32. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів 2-31, де с2 дорівнює 0. 33. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів 2-30, де с2 дорівнює 1. 34. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів 2-33, де а дорівнює 0-3. 35. Сполука відповідно до пункту 34, де а дорівнює 1 або 2. 36. Сполука відповідно до пункту 34, де а дорівнює 2. 37. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів 2-33, де а дорівнює 5. 38. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів 2-12, де а дорівнює 0, 61 дорівнює 0, с1 дорівнює 1, с2 дорівнює 0, і а дорівнює 2, і 62 дорівнює 0-8. 39. Сполука відповідно до пункту 38, де 62 дорівнює 0, 2, 3, 4, 5 або 8. 40. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів 2-12, де а дорівнює 1, 62 дорівнює 0, с1 дорівнює 0, с2 дорівнює 0, і а дорівнює 0, і 01 дорівнює 0-8. 41. Сполука відповідно до пункту 40, де Б1 дорівнює 0, 2, 3, 4, 5 або 8. 60 42. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів 2-12, де а дорівнює 0, Б1 дорівнює 0, с1 дорівнює 0, с2 дорівнює 0, і а дорівнює 1, і 62 дорівнює 0-8. 43. Сполука відповідно до пункту 42, де 62 дорівнює 0, 2, 3, 4, 5 або 8. 44. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів 2-12, де Б1 дорівнює 0, 2 дорівнює 0, с1 дорівнює 0, с2 дорівнює 0, один із а та 4 дорівнює 0, і інший із а та а дорівнює 1-5. 45. Сполука відповідно до пункту 44, де інший із а та 4 дорівнює 1 або 5. 46. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів 2-12, де а дорівнює 1, 62 дорівнює 0, с1 дорівнює 0, с2 дорівнює 1, а дорівнює 2, і Б1 дорівнює 0-8. 47. Сполука відповідно до пункту 46, де Б1 дорівнює 0, 2, 3, 4, 5 або 8. 48. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів 2-47, де С" вибраний із о о ру о й (47) М (СІ) М о о о 5 лу Вг (вн) х (в9) У хх о о /9 ХХ (а) М (8)
М о я о 8-58
Ма 3-1 9 (ач) У (ав) У (МО;) де група МО» є необов'язковою 5-59
І Н
(с) / М т (4-9)
Н
(МО,) де група МО» є необов'язковою
((а5-3) (ан) /Ї
М
/ М -і
Ук о де група МО» є необов'язковою
В
(13) (Сн) ом - де група МО» є необов'язковою о М ( то М
І із (87) на - (57 і у
М де Наї являє собою І, Вг, СІ о (С5) на-4 (9-3 НА. р о- о де Аг являє собою Сз5вариленову групу, і Х являє собою Сі-залкіл. 49. Сполука відповідно до пункту 48, де С- вибраний із 5 та б, 50. Сполука відповідно до пункту 48, де С- являє собою 171, 51. Сполука відповідно до пункту 1, де КЕ" представлений формулою ІБ. 52. Сполука відповідно до пункту 51, де К" та КІ? одночасно являють собою Н. 53. Сполука відповідно до пункту 51, де К" являє собою Н, і К!2 являє собою метил. 54. Сполука відповідно до пункту 51, де К" та КІ? одночасно являють собою метил. 55. Сполука відповідно до пункту 51, де К" та ЕК! разом із атомом вуглецю, з яким вони зв'язані, утворюють циклопропіленову групу. 56. Сполука відповідно до пункту 51, де Б" та Ве разом із атомом вуглецю, з яким вони зв'язані, утворюють циклобутиленову групу. 57. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів 51-56, де е дорівнює 0. 58. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів 51-56, де е дорівнює 1. 59. Кон'югат формули ІМ:
І -(0Ур (ІМ), або його фармацевтично прийнятна сіль або сольват, де Ї являє собою ланку, яка являє собою ліганд (тобто засіб, що націлюється), О- являє собою ланку, яка являє собою лікарський засіб-лінкер, представлену формулою ПІ:
Н
М в Сх о
М
М
М 7 х, 7 он о ШІ,
ВАМ. являє собою лінкер, приєднаний до ланки, яка являє собою ліганд, вибраної із (іа): о
Я Ж о де О та Х визначені у будь-якому із пунктів 1-47, і зн. являє собою лінкер, приєднаний до ланки, яка являє собою ліганд; і (ів): в в?
МН йон ль
З 5 о ІБ", де В" та КЕ? визначені у будь-якому із пунктів 1 та 52-56; і р являє собою ціле число від 1 до 20. 60. Кон'югат відповідно до пункту 59, де С вибраний із:
СВА
9 М
М зм цл1-1 8-1 (47) СВА (ач) о о о СВА ьо -, (Дш-) СВА М (нг) о, о о х
М р 7 и (сн) СВА (ач) о, о о СВА рі -х (Сн) СВА 5 (смог) о,
СВА
СВА
М
(дз) СВА (ашо) М Н ї-з х.
М
Н
СВА ще
СВА М
/
Н НИ Ї
(ан-я) М (ау У
М о У Н (7 -
СВА о
СВА
(ан5) (ваш) ї т о- НМ й х нН
М--м х Х о х
СВА
(6) (Сни)
СВА
2) Н 17 14 СвВА М лк (ант) ще (ач) пато де Аг являє собою Сз5вариленову групу, і Х являє собою Сі-залкіл. 61. Кон'югат відповідно до пункту 60, де С. вибраний із (ЗМ та (з, 62. Кон'югат відповідно до пункту 61, де С. являє собою СН, 63. Кон'югат відповідно до будь-якого із пунктів 59-62, де ланка, яка являє собою ліганд, являє собою засіб, який зв'язується з клітиною. 64. Кон'югат відповідно до будь-якого із пунктів 59-62, де ланка, яка являє собою ліганд, являє собою антитіло або його активний фрагмент. 65. Кон'югат відповідно до пункту 64, де антитіло або фрагмент антитіла являє собою антитіло або фрагмент антитіла до пухлино-асоційованого антигену. 66. Кон'югат відповідно до пункту 65, де антитіло або фрагмент антитіла являє собою антитіло, яке зв'язується з одним або декількома пухлино-асоційованими антигенами або рецепторами клітинної поверхні, вибраними із (1) - (89): (1) ВМРАТВ;
(2) Е16; (3) БТЕАРІ; (4) 0772Р; (5) МРЕ; (6) Марізб; (7) Бета 5Б; (8) РОСА Під; (9) ЕТВВА; (10) М5С783; (11) 5ТЕАР2; (12) Трма; (13) СВІРТО; (14) СО21; (153 С0796; (16) ЕесВНег; (17) НЕН2; (18) МСА; (19) МОР; (20) І 20В-альфа; (21) бревікан; (22) ЕрнВ2В; (23) АБІ 659; (24) РБСА; (25) ОЕБА; (26) ВАЕР-В; (27) СО22; (28) СО79а; (29) СХОНБ; (30) НГ А-РОВ;
Зо (31) Р2Х5; (32) СО72; (33) 1.64; (34) ЕсВНІ; (35) ІВТА2; (36) ТЕМВ2; (37) РОМА - ГО НІ; (38) 5517; (38.1) 5512; (38.2) 555; (38.3) 551Т 1; (38.4) 55783; (38.5) 551Т На; (39) ІТОАМ; (40) 1Тавб; (41) СЕАСАМ5; (42) МЕТ; (43) МОСІ1; (44) САУ; (45) ЕСЕВМІІ; 5О0 (46) СОЗ3; (47) СО19; (48) П2ВА; (49) АХІ; (50) СО30 - ТМЕВАЗЕ8; (51) ВСМА - ТМЕВ5Е 17; (52) СТ Ад - СТА; (53) СО174 (У за Льюїсом) - ЕОТЗ; (54) СІ ЕС14А; (55) аАР7В - НОРАБ; 60 (56) СО70;
(57) специфічні антигени стовбурових клітин; (58) АБО-5; (59) ЕМРРЗ; (60) РАНА; (61) ас - пОСмМ2; (62) Пім-1 -- 5І СЗ9Аб; (63) 514; (64) СО56 - МСМАТ; (65) СапАд; (66) РОГ А1; (67) аОРММВ; (68) ТІМ-1 - НАУСНАІ1; (69) ВО-1/міндин, мішень у випадку пухлини передміхурової залози - міндин/ко- 1; (70) В7-Н4 - МТОМІ1; (71) РТКУ; (72) СО37; (73) 20138 - 5021; (74) 2074; (75) клаудини - Сі; (76) ЕСЕВ; (77) Негз; (78) ВОМ - М5ТІВ; (79) ЕРНА?2; (80) СО20 - М54А1; (81) тенасцин С - ТМО; (82) БАР; (83) ОКК-1; (84) СО52; (85) С51 - БІ АМЕ7;
Зо (86) ендоглін - ЕМО; (87) анексин А1 - АМХА1; (88) У-САМ (СО106) - МСАМІ1; (89) АБСТ2 (5І С1 АБ). 67. Кон'югат відповідно до будь-якого із пунктів 64-66, де антитіло або фрагмент антитіла являє собою антитіло, сконструйоване з цистеїном. 684. Кон'югат відповідно до будь-якого із пунктів 64-67, де навантаження лікарським засобом (р) для лікарських засобів (0) відносно антитіла (АБ) являє собою ціле число від 1 до приблизно 10. 69. Кон'югат відповідно до пункту 68, де р дорівнює 1, 2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9 або 10. 70. Суміш кон'югатів відповідно до будь-якого із пунктів 64-69, де середнє значення навантаження лікарським засобом, яке припадає на антитіло у суміші кон'югатів антитіло- лікарський засіб, становить від приблизно 1 до приблизно 10. 71. Кон'югат або суміш відповідно до будь-якого із пунктів 59-70 для застосування у терапії. 72. Фармацевтична композиція, яка містить кон'югат або суміш відповідно до будь-якого із пунктів 59-70 та фармацевтично прийнятний розріджувач, носій або допоміжну речовину. 73. Кон'югат або суміш відповідно до будь-якого із пунктів 59-70 або фармацевтична композиція відповідно до пункту 72 для застосування в лікуванні проліферативного захворювання у суб'єкта. 74. Кон'югат, суміш або фармацевтична композиція відповідно до пункту 73, де захворювання являє собою рак. 75. Застосування кон'югату або суміші відповідно до будь-якого із пунктів 59-70 або фармацевтичної композиції відповідно до пункту 72 у способі консервативного лікування. 76. Спосіб консервативного лікування, який передбачає введення пацієнту фармацевтичної композиції відповідно до пункту 72. 77. Спосіб відповідно до пункту 76, де спосіб консервативного лікування призначений для лікування раку. 78. Спосіб відповідно до пункту 77, де пацієнту вводять хіміотерапевтичний засіб у комбінації з кон'югатом. 79. Застосування кон'югату або суміші відповідно до будь-якого із пунктів 59-70 у способі бо виготовлення лікарського препарату для лікування проліферативного захворювання.
80. Спосіб лікування ссавця, який страждає на проліферативне захворювання, який передбачає введення ефективної кількості кон'югату або суміші відповідно до будь-якого із пунктів 59-70 або фармацевтичної композиції відповідно до пункту 72. 81. Сполука А:
НАМ хх о
М ря
М
ХМ /
М й он о А у вигляді окремого енантіомера або в енантіомерно збагаченій формі. 82. Сполука формули МІ: но зат У о
М
--
М
М,
М 7 он о М де О описаний у будь-якому із пунктів 1, З та 12.
Викладення суті винаходу з 1-ї заявки, на основі якої заявлений пріоритет (Р1)
Р1-1. Сполука формули І:
Н
М в хх о
М
--
М
ХМ /
М о он о І і її солі та сольвати, де КЕ" являє собою лінкер для приєднання до засобу, який зв'язується з клітиною, яка вибрана з: (іа): о
ЯКА о 7 Іа де
О являє собою:
М чо МН
Н о де ОХ є таким, що ОО являє собою амінокислотний залишок, дипептидний залишок або трипептидний залишок;
Х являє собою:
Ф(-о) 9 - о у,
Н а а р с ; де а дорівнює 0-5, Б дорівнює 0-16, с дорівнює 0 або 1, а дорівнює 0-5;
С являє собою лінкер для приєднання до ланки, яка являє собою ліганд; (ів): в ве
МН ОК мо о о е
ІБ, де В" та В незалежно вибрані із Н та метилу або разом із атомом вуглецю, з яким вони зв'язані, утворюють циклопропіленову або циклобутиленову групу; і е дорівнює 0 або 1.
Р1-2. Сполука відповідно до пункту Р1-1, де Е- представлений формулою Іа.
Р1-3. Сполука відповідно до пункту Р1-2, де О являє собою амінокислотний залишок.
Р1-4. Сполука відповідно до пункту Р1-3, де О вибраний із: РНеє, Гуз, Маї, Аа, СІії, І еи, Пе, Агд та Тгр.
Р1-5. Сполука відповідно до пункту Р1-2, де О являє собою дипептидний залишок.
Р1-6. Сполука відповідно до пункту Р1-5, де О вибраний із: мн-Рре-Ї ув-6-о0, мн-Уа!-АІа-с-9, чн-УаїІ-Гув-5-0, мид|а-їЇ ув-2-оО, мНн-УаІ!-С-е-о, чн-Рре-Сі-е-о, мн. еш-Сії-8-о, мн-Це-Сії-е-о, мн-Рпе-Агд-е-о, мн-Тур-Сі-5-о та мн.сіу-Ма!-с-о,
Р1м1-7. Кон'югат відповідно до пункту Р1-6, де О вибраний із "Н-Рне-їЇ ув-2-0, Мн-УаІ-СИ-9-О та мн-Уа!-АІа-2-9,
Р1-8. Сполука відповідно до пункту Р1-2, де ОО являє собою трипептидний залишок.
Р1-9. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р1-2 - Р1-8, де а дорівнює 0-3.
Р1-10. Сполука відповідно до пункту Р1-9, де а дорівнює 0 або 1.
Р1-11. Сполука відповідно до пункту Р1-9, де а дорівнює 0.
Р1-12. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р1-2 - Р1-11, де б дорівнює 0-8.
Р1-13. Сполука відповідно до пункту Р1-12, де Б дорівнює 0.
Р1-14. Сполука відповідно до пункту Р1-12, де Б дорівнює 4.
Р1-15. Сполука відповідно до пункту Р1-12, де Б дорівнює 8.
Р1-16. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р1-2 - Р1-15, де с дорівнює 0.
Р1-17. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р1-2 - Р1-15, де с дорівнює 1.
Р1-18. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р1-2 - Р1-17, де а дорівнює 0-3.
Р1-19. Сполука відповідно до пункту Р1-18, де а дорівнює 1 або 2.
Р1-20. Сполука відповідно до пункту Р1-19, де а дорівнює 2.
Р1-21. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р1-2 - Р1-8, де а дорівнює 0, с дорівнює 1,і а дорівнює 2, і 5 дорівнює 0, 4 або 8.
Р1І-22. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р1-2 - Р1-21, де С" вибраний із о 9 о о / (47) М (СІ) М хх о о 5 Є Вг (вн) у (в5) У
ХХ о о /о ХХ (а) М (С8)
М о я о 8-8
Ма (ан) хх (се) Ми (МО) де група МО» є необов'язковою 8-58
І Н
(с) / М (4-9) (МО;) А де група МО» є необов'язковою
(с) (Б) /Ї / х - сж о де група МОг є необов'язковою (13) (Сн) / Хх
ОМ - де група МОг є необов'язковою о М ( це М
Ід її (а7) на - (577 Сич де Наї являє собою І, Вг, Сі о (вв) е-ї (вн) НА дит о- за де Аг являє собою Сз5вариленову групу, і Х являє собою Сі-залкіл.
Р1І-23. Сполука відповідно до пункту Р1-22, де С" вибраний із 5-7 та І,
Р1І-24. Сполука відповідно до пункту Р1-22, де Сі являє собою 171,
Р1І-25. Сполука відповідно до пункту Р1-1, де КЕ" представлений формулою ІБ.
Р1-26. Сполука відповідно до пункту Р1-25, де В" та Ве одночасно являють собою Н.
Р1-27. Сполука відповідно до пункту Р1-25, де В" являє собою Н, і БК? являє собою метил.
Р1-28. Сполука відповідно до пункту Р1-25, де В" та В? одночасно являють собою метил.
Р1-29. Сполука відповідно до пункту Р1-25, де В" та В? разом із атомом вуглецю, з яким вони зв'язані, утворюють циклопропіленову групу.
Р1-30. Сполука відповідно до пункту Р1-25, де В" та В? разом із атомом вуглецю, з яким вони зв'язані, утворюють циклобутиленову групу.
Р1-31. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р1-25 - Р1-30, де е дорівнює 0.
Р1-32. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р1-25 - Р1-30, де е дорівнює 1.
Р1-33. Кон'югат формули ІМ:
І -(0Ур (ІМ), або їх фармацевтично прийнятна сіль або сольват, де Ї являє собою ланку, яка являє собою ліганд (тобто засіб, що націлюється), О- являє собою ланку, яка являє собою лікарський засіб-лінкер, представлену формулою ПІ:
Н
М в -З6х о
М
4
М о он о ШІ
ВАМ. являє собою лінкер, приєднаний до ланки, яка являє собою ліганд, вибраної із (іа): о си
Ж. ЖД р а х Іа, де О та Х визначені у будь-якому із пунктів Р1І-1 - Р1і-21, і М. являє собою лінкер, приєднаний до ланки, яка являє собою ліганд; і (ів): ви во
МН
Ян Я й в о ІБ", де К" та К визначені у будь-якому із пунктів Р1-1 та Р1-25 - Р1-30; і р являє собою ціле число від 1 до 20.
Р1-34. Кон'югат відповідно до пункту Р1-33, де 1: вибраний із:
СВА о М ря жи іх (Дш-) СВА М (св) М н- о
СВА о і 2-3 (дн) СВА М (Сн82) - о о я м -о 7 с
СВА М и (аз) (19 1) - о о
СВА
- (внз) СВА р (сне) о,
СВА
СВА р вдизг СВА дишло Н ( ) і в ( ) ху Ї Б
М
Н
СВА с в 3 В нм (ви) Оз- (вет) с
М
Н М о У (З -і
СВА о
СВА ее з що СО, о НМ й х нн
М--М х у о х
СВА
(16) (Сни)
СВА
СВА Н
(сит) х (дше) сви ох де Аг являє собою Сз5вариленову групу, і Х являє собою Сі-залкіл.
Р1-35. Кон'югат відповідно до пункту Р1-34, де С. вибраний із (МИ! та (з,
Р1-36. Кон'югат відповідно до пункту Р1-35, де СЧ- являє собою (НИ,
Р1-37. Кон'югат відповідно до будь-якого із пунктів Р1-33 - Р1-36, де засіб, який зв'язується з клітиною, являє собою антитіло або його активний фрагмент.
Р1-38. Кон'югат відповідно до пункту Р1-37, де антитіло або фрагмент антитіла являє собою антитіло або фрагмент антитіла до пухлино-асоційованого антигену.
Р1-39. Кон'югат відповідно до пункту Р1-38, де антитіло або фрагмент антитіла являє собою антитіло, яке зв'язується з одним або декількома пухлино-асоційованими антигенами або рецепторами клітинної поверхні, вибраними із (1) - (88): (1) ВМРАТВ; (2) Е16; (3) БТЕАРІ; (4) 0772Р; (5) МРЕ; (6) Марізб; (7) Бета 5Б; (8) РОСА Ід; (9) ЕТВА; (10) М5С783; (11) 5ТЕАР2; (12) Трма;
(13) СВІРТО; (14) СО21; (153 С0796; (16) ЕспнНае; (17) НЕН2; (18) МСА; (19) МОР; (20) І 20В-альфа; (21) бревікан; (22) ЕрнВ2В; (23) АБІ 659; (24) РБСА; (25) ВА; (26) ВАЕР-В; (27) СО22; (28) СО79а; (29) СХОНБ; (30) НІГ А-БОВ; (31) Р2Х5; (32) СО72; (33) 1 64; (34) ЕсВНІ; (35) ІВТА?2; (36) ТЕМВ2; (37) РОМА - ГОІ НІ; (38) 5517; (38.1) 55782; (38.2) 555; (38.3) 551Т 1;
Зо (38.4) 55783; (38.5) 551Т На; (39) ІТОАМ; (40) ІТаВвб; (41) СЕАСАМ5; (42) МЕТ; (43) МОСІ1; (44) СА9; (45) ЕСЕВМІІ; (46) СОЗ3; (47) СО19; (48) І 2ВА; (49) АХІ; (50) СО30 - ТМЕВАЗЕ8; (51) ВСМА - ТМЕВ5Е 17; (52) СТ Ад - СТА; (53) СО174 (У за Льюїсом) - ЕОТЗ; (54) СІ ЕСТ4ЯА; (55) аАР7В - НОРАБ; (56) СО70; (57) специфічні антигени стовбурових клітин; (58) АБОа-5; (59) ЕМРРЗ; (60) РАНА; (61) СС - вОсСм2; (62) Гім-1 - 5І СЗ9Аб; (63) ТА; (64) СО56 - МСМА1; (65) СапАд; (66) РОГ ВІ; 60 (67) аОРММВ;
(68) ТІМ-1 - НАУСНАІ1; (69) ВО-1/міндин, мішень у випадку пухлини передміхурової залози - міндин/ко- 1; (70) В7-Н4 - МТОМІ1; (71) РТК?7; (72) СО37; (73) 20138 - 5021; (74) 2074; (75) клаудини - Сі; (76) ЕСЕВ; (77) Негз; (78) ВОМ - М5ТІВ; (79) ЕРНА?2; (80) СО20 - М54А1; (81) тенасцин С - ТМО; (82) БАР; (83) ОКК-1; (84) СО52; (85) С51 - БІ АМЕ7; (86) ендоглін - ЕМО; (87) анексин А1 - АМХАТ; (88) У-САМ (СО106) - МСАМІ1; (89) АБСТ2 (5І С1 АБ).
Р1-40. Кон'югат відповідно до будь-якого із пунктів Р1-37 - Р1-39, де антитіло або фрагмент антитіла являє собою антитіло, сконструйоване з цистеїном.
РІ1-41. Кон'югат відповідно до будь-якого із пунктів РІ1І-37 - Р1і-40, де навантаження лікарським засобом (р) для лікарських засобів (0) відносно антитіла (АБ) являє собою ціле число від 1 до приблизно 10.
Р1-42. Кон'югат відповідно до пункту Р1-41, де р дорівнює 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10.
Р1-43. Суміш кон'югатів відповідно до будь-якого із пунктів Р1І-33 - Р1-42, де середнє
Зо значення навантаження лікарським засобом, яке припадає на антитіло, у суміші сполук, які являють собою кон'югати антитіло-лікарський засіб, становить від приблизно 1 до приблизно 10.
РІ1-44. Кон'югат або суміш відповідно до будь-якого із пунктів Р1І-33 - Р1і-43 для застосування у терапії.
Р1-45. Фармацевтична композиція, яка містить кон'югат або суміш відповідно до будь-якого із пунктів РІ-33 - РІ1І-43 та фармацевтично прийнятний розріджувач, носій або допоміжну речовину.
РІ1-46. Кон'югат або суміш відповідно до будь-якого із пунктів РІ1І-33 - Р1і-43 або фармацевтична композиція відповідно до пункту Р1і-45 для застосування у лікуванні проліферативного захворювання у суб'єкта.
Р1-47. Кон'югат або суміш відповідно до пункту Р1-46, де захворювання являє собою рак.
Р1І1-48. Застосування кон'югату або суміші відповідно до будь-якого із пунктів Р1-33 - Р1-43 або фармацевтичної композиції відповідно до пункту Р1-45 у способі консервативного лікування.
РІ1-49. Спосіб консервативного лікування, який передбачає введення пацієнту фармацевтичної композиції відповідно до пункту Р1-45.
Р1-50. Спосіб відповідно до пункту Р1-49, де спосіб консервативного лікування призначений для лікування раку.
Р1-51. Спосіб відповідно до пункту Р1-50, де пацієнту вводять хіміотерапевтичний засіб у комбінації з кон'югатом.
Р1-52. Застосування кон'югату або суміші відповідно до будь-якого із пунктів Р1-33 - Р1-43 у способі виготовлення лікарського препарату для лікування проліферативного захворювання.
Р1-53. Спосіб лікування ссавця, який страждає на проліферативне захворювання, який передбачає введення ефективної кількості кон'югату або суміші відповідно до будь-якого із пунктів Р1І-33 - Р1-43 або фармацевтичної композиції відповідно до пункту Р1-45.
Р1-54. Сполука А:
НОМ ху о
М й
М
М,
М, о? он о А у вигляді окремого енантіомера або в енантіомерно збагаченій формі.
Викладення суті винаходу з 2-ї заявки, на основі якої заявлений пріоритет (Р2)
Рг-1. Сполука формули І:
Н
М в вк о
М ря
М
М, х о он о І і її солі та сольвати, де В" являє собою лінкер для приєднання до засобу, який зв'язується з клітиною, яка вибрана з: (іа): о
Ж. ХХ в. о ча Іа де
О являє собою:
М чо МН
Н о де ОХ є таким, що О являє собою амінокислотний залишок, дипептидний залишок, трипептидний залишок або тетрапептидний залишок;
Х являє собою: о сі со) о рі ьо З с де а дорівнює 0-5, 01 дорівнює 0-16, 62 дорівнює 0-16, с дорівнює 0 або 1, а дорівнює 0-5, де щонайменше Б1 або р2 дорівнює 0;
Сі являє собою лінкер для приєднання до ланки, яка являє собою ліганд; (ів): ви во
Ж СК м мо о що е
ІБ, де В" та В незалежно вибрані із Н та метилу або разом із атомом вуглецю, з яким вони зв'язані, утворюють циклопропіленову або циклобутиленову групу; і е дорівнює 0 або 1.
Р2-2. Сполука відповідно до пункту Р2-1, де Е- представлений формулою а.
Р2-3. Сполука відповідно до пункту Р2-2, де О являє собою амінокислотний залишок.
Р2-4. Сполука відповідно до пункту Р2-3, де О вибраний із: РНеє, Гуз, Маї, Аа, СІії, І еи, Пе, Агд та Тгр.
Р2-5. Сполука відповідно до пункту Р2-2, де О являє собою дипептидний залишок.
Р2-6. Сполука відповідно до пункту Р2-5, де О вибраний із: мн-РАе-ІГ ув-5-0, мн-УаїІ-АГа-4-о, мн-Ууаї!-Гув-ечо, мн. діа-ї ув-95о0, мн-уаї-С-е-о, мн-Рне-Сії-е-о,
МН. ецй-Сії-5-оО, мн-Це-Сії-е-о, мн-Рпе-Агуд-е-о, мн-Ттр-Сі-с-о та мн.сіу-Ма!-с-о,
Ра2-7. Сполука відповідно до пункту Р2-6, де О вибраний із "Н-Рне-І убз-2-0, МНн-Уа!І-СіЇ-2-9 та мн. ма!І-АІа-4-о,
Р2-8. Сполука відповідно до пункту Р2-2, де О являє собою трипептидний залишок.
Р2-9. Сполука відповідно до пункту Р2-8, де О вибраний із: мн. и-МаїІ-АЇІа-2-о, мн. и-Ма!І-Сії-6-о, мНоаси-Ма1І-АЇІа-2-9 та мНоаси-МаІ-Сії-е-о,
Р2-10. Сполука відповідно до пункту Р2-2, де О являє собою тетрапептидний залишок.
Р2-11. Сполука відповідно до пункту Р2-10, де О вибраний із: мн.сіу-сСіу-Рпе-Стус-о та мн.сіу-Рпе-Сту-стусчо,
Р2-12. Сполука відповідно до пункту Р2-11, де О являє собою: мн.сіу-сіу-Рпе-Стус-о,
Р2-13. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р2-2 - Р2-12, де а дорівнює 0-3.
Р2-14. Сполука відповідно до пункту Р2-13, де а дорівнює 0 або 1.
Р2г-15. Сполука відповідно до пункту Р2-13, де а дорівнює 0.
Р2-16. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р2-2 - Р2-15, де Б1 дорівнює 0-8.
Р2-17. Сполука відповідно до пункту Р2-16, де Б1 дорівнює 0.
Р2-18. Сполука відповідно до пункту Р2-16, де Б1 дорівнює 2.
Р2-19. Сполука відповідно до пункту Р2-16, де Б1 дорівнює 3.
Р2-20. Сполука відповідно до пункту Р2-16, де Б1 дорівнює 4.
Р2-21. Сполука відповідно до пункту Р2-16, де Б1 дорівнює 5.
Р2-22. Сполука відповідно до пункту Р2-16, де Б1 дорівнює 8.
Р2г-23. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів з Р2-2 по Р2-15 та Р2-17, де 62 дорівнює 0-8.
Р2-24. Сполука відповідно до пункту Р2-23, де 02 дорівнює 0.
Р2-25. Сполука відповідно до пункту Р2-23, де 02 дорівнює 2.
Р2-26. Сполука відповідно до пункту Р2-23, де 02 дорівнює 3.
Р2-27. Сполука відповідно до пункту Р2-23, де 02 дорівнює 4.
Р2-28. Сполука відповідно до пункту Р2-23, де 02 дорівнює 5.
Р2-29. Сполука відповідно до пункту Р2-23, де 02 дорівнює 8.
Р2-30. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р2-2 - Р2-29, де с дорівнює 0.
Р2-31. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р2-2 - Р2-29, де с дорівнює 1.
Р2-32. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р2-2 - Р2-31, де а дорівнює 0-3.
Р2-33. Сполука відповідно до пункту Р2-32, де а дорівнює 1 або 2.
Р2-34. Сполука відповідно до пункту Р2-32, де а дорівнює 2.
Р2-35. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р2-2 - Р2-12, де а дорівнює 0, Б1 дорівнює 0, с дорівнює 1, і 4 дорівнює 2, і 62 дорівнює 0-8.
Ра2-36. Сполука відповідно до пункту Р2-35, де 62 дорівнює 0, 2, 3, 4, 5 або 8.
Р2-37. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р2-2 - Рг2-12, де а дорівнює 1, 62 дорівнює 0, с дорівнює 0, і а дорівнює 0, і 61 дорівнює 0-8.
Р2г-38. Сполука відповідно до пункту Р2-37, де Б1 дорівнює 0, 2, 3, 4, 5 або 8.
Р2-39. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р2-2 - Р2-12, де а дорівнює 0, Б1 дорівнює 0, с дорівнює 0, і а дорівнює 1, і 62 дорівнює 0-8.
Р2-40. Сполука відповідно до пункту Р2-39, де 2 дорівнює 0, 2, 3, 4, 5 або 8.
Р2-41. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р2-2 - Рг2-12, де Б1 дорівнює 0, 62 дорівнює 0, с дорівнює 0, один із а та 4 дорівнює 0, і інший із а та 4 дорівнює 1-5.
Р2-42. Сполука відповідно до пункту Р2-41, де інший з а та а дорівнює 1 або 5.
Р2-43. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р2-2 - Р2-42, де С вибраний із о о (ану М (Сі) ГУ
Хо о о Аг в ,/ Г (02) - й (а) У
Ж о о ох М (сг) М (сів)
М о Ви о
ШИ"
Ма (в) / х (св) Ме (МО) де група МО» є необов'язковою
8-8
І Н
(с) / М (4-9) (МО;) А де група МО» є необов'язковою 8-8 (с) (Б) /Ї / - од хе де група МО» є необов'язковою 8-5 (са) г (аг) ом де група МО» є необов'язковою о М ( це М ся виз (ат) На! - (877) Сич де Наї являє собою І, Вг, СІ о на-4 (СІ) 5-4 (ач) НМ. оч де Аг являє собою Сз5вариленову групу, і Х являє собою Сі-залкіл.
Р2-44. Сполука відповідно до пункту Р2-43, де С: вибраний із 5/7 та І,
Р2-45. Сполука відповідно до пункту Р2-43, де Сі являє собою 171,
Р2-46. Сполука відповідно до пункту Р2-1, де КЕ" представлений формулою ІБ.
Р2-47. Сполука відповідно до пункту Р2-46, де В" та В? одночасно являють собою Н.
Р2-48. Сполука відповідно до пункту Р2-46, де В" являє собою Н, і БК? являє собою метил.
Р2-49. Сполука відповідно до пункту Р2-46, де В" та В? одночасно являють собою метил.
Р2-50. Сполука відповідно до пункту Р2-46, де В" та В? разом із атомом вуглецю, з яким вони зв'язані, утворюють циклопропіленову групу.
Р2-51. Сполука відповідно до пункту Р2-46, де В" та В? разом із атомом вуглецю, з яким вони зв'язані, утворюють циклобутиленову групу.
Р2-52. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р2-46 - Р2-51, де е дорівнює 0.
Р2-53. Сполука відповідно до будь-якого із пунктів Р2-46 - Р2-51, де е дорівнює 1.
Р2-54. Кон'югат формули ІМ:
І -(0Ур (ІМ), або їх фармацевтично прийнятна сіль або сольват, де Ї являє собою ланку, яка являє собою ліганд (тобто засіб, що націлюється), О- являє собою ланку, яка являє собою лікарський засіб-лінкер, представлену формулою ПІ:
Н
М в ее о
М
-
М
М, о ? он о ШІ,
ВЧ. являє собою лінкер, приєднаний до ланки, яка являє собою ліганд, вибраної із (іа): о
Я Ж де О та Х визначені у будь-якому із пунктів Р2-1 - Р2-42, і М. являє собою лінкер, приєднаний до ланки, яка являє собою ліганд; і (ів): ви во
МН
Ян Я й в о ІБ", де ВІ та В!2 визначені у будь-якому із пунктів Р2-1 та Р2-47 - Р2-51; і р являє собою ціле число від 1 до 20.
Р2-55. Кон'югат відповідно до пункту Р2-54, де С: вибраний із:
СВА о лу бу (дш-) СВА М (ан8-) й ше о
СВА о й 2-3 (аш-2) СВА М (Сн-8-2) - о о я о а (сн) СВА "7 и (сне) тм о ше о СВА
- (дн) СВА р (сне) о,
СВА
СВА цднзе СВА дрло ИЙ н
М
Н
СВА у в 7 М нм (ах) О- (ан) хм Й
М
Н М
СВА о
СВА
(С) ; у (а) ' хх о- НМ 2 х
Н
Мм--М х х о Х
СВА
(св) (ам)
СВА
СВА Н
(сит) ще (дн) сви о де Аг являє собою Сз5вариленову групу, і Х являє собою Сі-залкіл.
Р2-56. Кон'югат відповідно до пункту Р2-55, де 1: вибраний із (НИ! та (30712,
Р2-57. Кон'югат відповідно до пункту Р2-56, де СІ. являє собою ОН,
Р2-58. Кон'югат відповідно до будь-якого із пунктів Р2-54 - Р2-57, де ланка, яка являє собою ліганд, являє собою антитіло або його активний фрагмент.
Р2-59. Кон'югат відповідно до пункту Р2-58, де антитіло або фрагмент антитіла являє собою антитіло або фрагмент антитіла до пухлино-асоційованого антигену.
Р2-60. Кон'югат відповідно до пункту Р2-59, де антитіло або фрагмент антитіла являє собою антитіло, яке зв'язується з одним або декількома пухлино-асоційованими антигенами або рецепторами клітинної поверхні, вибраними із (1) - (89): (1) ВМРАТВ; (2) Е16; (3) БТЕАРІ; (4) 0772; (5) МРЕ; (6) Марізб;
(7) Бета 5Б; (8) РОСА Під; (9) ЕТВВА; (10) М5С783; (11) 5ТЕАР2; (12) Трма; (13) СВІРТО; (14) СО21; (153 С0796; (16) ЕсВНег; (17) НЕН2; (18) МСА; (19) МОР; (20) І 20В-альфа; (21) бревікан; (22) ЕрнВ2В; (23) АБІ 659; (24) РБСА; (25) ОЕБА; (26) ВАЕР-В; (27) СО22; (28) СО79а; (29) СХОНБ; (30) НГ А-РОВ; (31) Р2Х5; (32) СО72; (33) 1 64; (34) ЕсВНІ; (35) ІНТА?2;
Зо (36) ТЕМВ2; (37) РОМА - ГО НІ; (38) 5517; (38.1) 5512; (38.2) 5515; (38.3) 551Т 1; (38.4) 55783; (38.5) 55Т На; (39) ІТОАМ; (40) 1Тавб; (41) СЕАСАМ5; (42) МЕТ; (43) МОСІ1; (44) САУ; (45) ЕСЕВМІІ; (46) СОЗ3; (47) СО19; (48) П2ВА; (49) АХІ; (50) СО30 - ТМЕВАЗЕ8; 5О0 (51) ВСМА - ТМЕВ5Е 17; (52) СТ Ад - СТА; (53) СО174 (У за Льюїсом) - РОТЗ; (54) СІ ЕС14А; (55) аАР7В - НОРАБ; (56) СО70; (57) специфічні антигени стовбурових клітин; (58) АБОа-5; (59) ЕМРРЗ; (60) РАНА; 60 (61) СС - вуСм2с;
(62) Пім-1 -- 5І СЗ9Аб; (63) 514; (64) СО56 - МСМАТ; (65) СапАд; (66) РОГ А1; (67) аРММВ; (68) ТІМ-1 - НАУСНАІ1; (69) ВО-1/міндин, мішень у випадку пухлини передміхурової залози - міндин/ко- 1; (70) В7-Н4 - МТОМІ1; (71) РТКУ; (72) СО37; (73) 20138 - 5021; (74) 2074; (75) клаудини - Сі; (76) ЕСЕВ; (77) Негз; (78) ВОМ - М5ТІВ; (79) ЕРНА2; (80) СО20 - М54А1; (81) тенасцин С - ТМО; (82) БАР; (83) ОКК-1; (84) СО52; (85) С51 - БІ АМЕ7; (86) ендоглін - ЕМО; (87) анексин А1 - АМХА1; (88) У-САМ (СО106) - МСАМІ1; (89) АБСТ2 (5І С1 АБ).
Р2-61. Кон'югат відповідно до будь-якого із пунктів Р2-58 - Р2-60, де антитіло або фрагмент антитіла являє собою антитіло, сконструйоване з цистеїном.
Р2-62. Кон'югат відповідно до будь-якого із пунктів Р2-58 - Р2-61ї, де навантаження лікарським засобом (р) для лікарських засобів (0) відносно антитіла (АБ) являє собою ціле число від 1 до приблизно 10.
Р2-63. Кон'югат відповідно до пункту Р2-62, де р дорівнює 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10.
Р2-64. Суміш кон'югатів відповідно до будь-якого із пунктів Р2-58 - Р2-63, де середнє значення навантаження лікарським засобом, яке припадає на антитіло, у суміші кон'югатів антитіло-лікарський засіб, становить від приблизно 1 до приблизно 10.
Р2-65. Кон'югат або суміш відповідно до будь-якого із пунктів Р2-54 - Р2-64 для застосування у терапії.
Р2-66. Фармацевтична композиція, яка містить кон'югат або суміш відповідно до будь-якого із пунктів Р2-54 - Р2-64 та фармацевтично прийнятний розріджувач, носій або допоміжну речовину.
Р2-67. Кон'югат або суміш відповідно до будь-якого із пунктів Р2-54 - Р2-64 або фармацевтична композиція відповідно до пункту Р2-6б для застосування у лікуванні проліферативного захворювання у суб'єкта.
Р2-68. Кон'югат, суміш або фармацевтична композиція відповідно до пункту Р2-67, де захворювання являє собою рак.
Р2-69. Застосування кон'югату або суміші відповідно до будь-якого із пунктів Р2-54 - Р2-64 або фармацевтичної композиції відповідно до пункту Р2-6б у способі консервативного лікування.
Р2г-70. Спосіб консервативного лікування, який передбачає введення пацієнту фармацевтичної композиції відповідно до пункту Р2-66.
Ра2-71. Спосіб відповідно до пункту Р2-70, де спосіб консервативного лікування призначений для лікування раку.
Р2-72. Спосіб відповідно до пункту Р2-71, де пацієнту вводять хіміотерапевтичний засіб у комбінації з кон'югатом.
Р2-73. Застосування кон'югату або суміші відповідно до будь-якого із пунктів Р2-54 - Р2-64 у способі виготовлення лікарського препарату для лікування проліферативного захворювання.
Ра2-74. Спосіб лікування ссавця, який страждає на проліферативне захворювання, який 60 передбачає введення ефективної кількості кон'югату або суміші відповідно до будь-якого із пунктів Р2-54 - Р2-64 або фармацевтичної композиції відповідно до пункту Р2-66.
Р2-75. Сполука А:
НАМ хх о
М
-
М
ХМ /
М й он о А у вигляді окремого енантіомера або в енантіомерно збагаченій формі.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«1105 МЕДІММ'ЮН ЛІМІТЕД «1205 СПОЛУКИ ТА КОН'ЮГАТИ НА ЇХ ОСНОВІ «130» ТОР-100-ЖО-РСТ 1405» -1415 -150» б2/964,177 -1515» 2020-01-22 -150» б2/826,393 -1515» 2019-03-29 -160» 4 «170» Раїепіп версії 3.5 «2105 1
Зо «2115 21 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 1
Азп Аїа Маї Рго Авп Геи Агу Сіу Азр І єи Сіп Маї І еи Аа Сп Г ув 1 5 10 15 ма! Аа Аго Тиг Су 20 «-21052 «2115 21 «212» Білок
«213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «220» «221» МОДИФІКОВАНІ ЗАЛИШКИ «222» (4)..(18) «223» Будь-яка амінокислота «4005» 2
Азп Аа Маї Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 1 5 10 15
Хаа Хаа Ага Тнг Суз 20 «2105» З «21154 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
Зо «400» З
Сіу Спу Рпе Стпу 4 «2105» 4 «21154 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка- "Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «400» 4
Сіу Рпе Сіу Слу

Claims (25)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Сполука формули
Н М в0й7 ху о М й М М о Ше чу он о І і її солі, де В- являє собою лінкер для приєднання до антитіла або антигензв'язувального фрагмента антитіла, який вибраний з Іа: о
Ж в. Ко ча Іа де О являє собою: ща ої М Мн Н о де ОХ є таким, що ОО являє собою амінокислотний залишок, дипептидний залишок, трипептидний залишок або тетрапептидний залишок, і де позначення за допомогою верхніх індексів 2-92) та МН означає групу, з якою зв'язані атоми; Х являє собою: о о о о жи в с(-0) во АТ " М мк 1 Е а 1 Б2 Н а ІН Н с2 де а дорівнює 0-5, 01 дорівнює 0-16, 62 дорівнює 0-16, с1 дорівнює 0 або 1, с2 дорівнює 0 або 1, а дорівнює 0-5, де щонайменше бБ1 або р2 дорівнює 0 і щонайменше с1 або с2 дорівнює 0; Сйї- являє собою лінкер для приєднання до антитіла або антигензв'язувального фрагмента антитіла, де С вибраний із: о 9 о о / (47) М (С) М ХХ о о о б Вг (вн) у (в5) У о о /9 Х (С) М (18) Х о вшй о и" Х з ее) ЦИ (св) Ми (МО») де група МОг є необов'язковою и" І Н (с) / Х с (49) Н (МО;5) де група МОг є необов'язковою З-95 (с) (С) /Ї / ХХ - с о де група МО» є необов'язковою З-9 (Сі3-4) г (с-г) о де група МО» є необов'язковою о Ше (Са На - (С) Сину де Наї являє собою І, Вг, СІ о І5 на-4 ї14 НМ (5) о-3 (бно, чо де Аг являє собою Сз5вариленову групу, і Х' являє собою Сз-залкіл; Ір: Мн и ве Кук ДА мо, о Ще е ІБ де В" та ВК? незалежно вибрані із Н та метилу або разом із атомом вуглецю, з яким вони зв'язані, утворюють циклопропіленову або циклобутиленову групу; і е дорівнює 0 або 1.
2. Сполука за п. 1, де Е- представлений формулою Іа.
3. Сполука за п. 2, де О являє собою: (а) амінокислотний залишок, вибраний із Ре, І уз, Маї, Аа, Сії, І еи, Пе, Агоу та Тгр, або (Б) дипептидний залишок, вибраний із: мн-РАе-ІГ ув-5-0, мн-УаїІ-АГа-4-о, мн-УаІ-Гув-8-90, мнД|а-ї ув-5-0, мНн-УаІ!-С-е-о, мнАРпе-СІій-8-50, МН-Ї еу-Сії-О-о, мн-Це-Сії-е-о,
мн.АРре-Аго-с-о, мн-Ттр-Сі-с-о та мн-сТу-Ма1-8-о: або (с) трипептидний залишок, вибраний із:
мн.сци-МаїІ-АїІа-2-о,
мн.-сци-Ма!І-Сії-6-о, мн-с(ои-Ма!-АїІа-2-9 та мН-аси-МаІ-Сії-с-о: або (4) тетрапептидний залишок, вибраний із:
мн.спу-Сіу-Рпе-Спує-о та мн.спу-Рпе-Сту-сптує-о, де МН. являє собою М-кінець, і ---9 являє собою С-кінець залишку.
4. Сполука за будь-яким із пп. 2 або 3, де а дорівнює: (а) 0-3; або (р) 0 або 1; або (с) 0.
5. Сполука за будь-яким із пп. 2-4, де Б1 дорівнює: (а) 0-8; або (Б) 0; або (с) 2; або (а) 3; або (є) 4; або (І 5; або (9) 8.
6. Сполука за будь-яким із пп. 2-4, де 62 дорівнює: (а) 0-8; або (Б) 0; або (с) 2; або (а) 3; або (є) 4; або (І 5; або (9) 8.
7. Сполука за будь-яким із пп. 2-6, де: () с1 дорівнює:
(а) О або (Б) 1; (її) с2 дорівнює: (а) О або (5) 1; де щонайменше один із с1 та с2 дорівнює 0.
8. Сполука за будь-яким із пп. 2-7, де а дорівнює: (а) 0-3; або (Б) 1 або 2; або (с) 2; або (а) 5.
9. Сполука за будь-яким із пп. 2-8, де: (а) а дорівнює 0, 01 дорівнює 0, с1 дорівнює 1, с2 дорівнює 0 і а дорівнює 2, і 62 дорівнює 0, 2, 3, 4, 5 або 8; або (р) а дорівнює 1, 62 дорівнює 0, с1 дорівнює 0, с2 дорівнює 0 і а дорівнює 0, і 61 дорівнює 0, 2, З, 4, 5 або 8; або (с) а дорівнює 0, Б1 дорівнює 0, с1 дорівнює 0, с2 дорівнює 0 і а дорівнює 1, і 62 дорівнює 0, 2, 3, 4, 5 або 8; або (4) 01 дорівнює 0, 62 дорівнює 0, с1 дорівнює 0, с2 дорівнює 0, один із а та а дорівнює 0 і інший із а та й дорівнює 1 або 5; або (е) а дорівнює 1, 62 дорівнює 0, с1 дорівнює 0, с2 дорівнює 1, а дорівнює 2 і Б1 дорівнює 0, 2, 3, 4, 5 або 8.
10. Сполука за будь-яким із пп. 1-9, де СІ вибраний із БИ та (312,
11. Сполука за п. 1, де КЕ" представлений формулою ІБ, і: (а) В" та К2 одночасно являють собою Н; або (р) А" являє собою Н, і Б! являє собою метил; або (с) В" та ЕЕ? одночасно являють собою метил; або (4) де В" та В" разом із атомом вуглецю, з яким вони зв'язані, утворюють циклопропіленову групу; або (є) де В" та В разом із атомом вуглецю, з яким вони зв'язані, утворюють циклобутиленову групу.
12. Сполука за п. 1, яка є 1-(3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)упропанамідо)-М-((5)-1-(((5)-1- ((5)-9-етил-9-гідрокси-10,13-діоксо-2,3,9,10,13,15-гексагідро-ІН.12Н- бензо|де|пірано/34"6,7|індолізино|1,2-бі|хінолін-4-іл)аміно)-1-оксопропан-2-іл)аміно)-3-метил-1- оксобутан-2-іл)-3,6,9,12,15,18,21,24-октаоксагептакозан-27-амідом.
13. Сполука за п. 1, яка є (5)-2-(2-(2-(2-(2-азидоетоксі)етоксі)етоксі)ацетамідо)-М-((5)-1-(((5)-9- етил-9-гідрокси-10,13-діоксо-2,3,9,10,13,15-гексагідро- ІН12Н- бензо|де|пірано/34"6,7|індолізино|1,2-бі|хінолін-4-іл)аміно)-1-оксопропан-2-іл)-3- метилбутанамідом.
14. Сполука за п. 1, яка є М-((5)-1-(((5)-1-((5)-9-етил-9-гідрокси-10,13-діоксо-2,3,9,10,13,15- гексагідро-1Н,12Н-бензоїЇде|пірано/3,4":6,7індолізиної|1,2-Бі|хінолін-4-іл)аміно)-1-оксопропан-2- іл)аміно)-З-метил-1-оксобутан-2-іл)-4,7,10,13,16-пентаоксанонадек-18-інамідом.
15. Кон'югат формули ІМ: Г-(БУр, ІМ або його фармацевтично прийнятна сіль, де Ї являє собою ланку, яка являє собою ліганд, О являє собою ланку, яка являє собою лікарський засіб-лінкер і представлена формулою ПІ: Н М ри ч о М й М Х Й о чи он о Х
ВМ. являє собою лінкер, приєднаний до ланки, яка являє собою ліганд і вибрана із Іа": о ве
А. р й о Хх а де О та Х визначені у будь-якому із пп. 1-9, і С. являє собою лінкер, приєднаний до ланки, яка являє собою ліганд, де С вибраний із:
і. ко К-т (бн2-) пд (СВ) -Л о 9 Асі А І (ад) п (св) во о 9 о К. ММ 2 М ш9-1 що Ох о ШО х о І. -М М х х ще (ан) і і в (Сн) во
І.
Г. Хі т Н вдишзаг вило ; М Н жа, І т Н М (сн) уд нет) нм ДО т 5 "
І. о (ан5) (сг) ї о- НМ. 2 х нМ-М ' х ху о (си6) і що (С)
Г.
І. н 17 як пла М. ех ТПУ ев А де Аг являє собою Сз5вариленову групу, і Х' являє собою Сз-алкіл; і Ір": МН КОво б З Б о я де В" та КЕ визначеніабоуп.1, або уп. 11; і р являє собою ціле число від 1 до 20, де ланка, яка являє собою ліганд, являє собою антитіло або його активний фрагмент.
16. Кон'югат за п. 15, де 1. вибраний із (НИ та (307122,
17. Кон'югат за п. 15, де О є дипептидним залишком, який є "Н-МаІ-АІа---О, а дорівнює 0, Б1 дорівнює 0, с1 дорівнює 1, с2 дорівнює 0 і а дорівнює 2, 52 дорівнює 8 і С. являє собою МИ, де "Н- являє собою М-кінець, а ---О являє собою С-кінець залишку.
18. Кон'югат за будь-яким із пп. 15-17, де навантаження лікарським засобом (р) для лікарських засобів (С) відносно антитіла (АБ) являє собою ціле число від 1 до приблизно 10.
19. Суміш кон'югатів за будь-яким із пп. 15-18, де середнє значення навантаження лікарським засобом, яке припадає на антитіло у суміші кон'югатів антитіло-лікарський засіб, становить від приблизно 1 до приблизно 10.
20. Фармацевтична композиція, яка містить кон'югат або суміш за будь-яким із пп. 15-19 та фармацевтично прийнятний розріджувач, носій або допоміжну речовину.
21. Кон'югат або суміш за будь-яким із пп. 15-19 для застосування у лікуванні проліреративного захворювання у суб'єкта.
22. Кон'югат або суміш за п. 21, де захворювання являє собою рак.
23. Застосування кон'югату або суміші за будь-яким із пп. 15-19 у способі консервативного лікування.
24. Спосіб консервативного лікування, який передбачає введення пацієнту фармацевтичної композиції за п. 20.
25. Сполука формули МІ: но зах ху о М -- М ХМ / о ди 80 оно м де О визначений або у п. 1, або у п. 3.
екв у схкувчух її злу хлюни пишна АН НН АН НН Кінмена вже З ІРО 30133 КЕН є КК ї Х КК КК ко пек пи ТЕТІВІ1І1іТЇІ21 51 Ж: 155 22 1120211 25121111 12322171 11311 т ТЕТІШТІІШІЕІ ІЕЕ ІІТ: І11 12 ІІІ Е піт г піт КЕ ЕНН г ІтІ2ТІ121х::121:21:1:17 ті 11п121:1121121 11211121 111211120 22132701 ш ква я КЕ ж я І т ВН ше садоня ВІЗ БЕБІ ІІІ Я І ІТ ж хЕТіБІІ піт ай т: ІІІ 11112111 ІІТ ІІТ ІВ є трі тг т 1 БІБ іБ ІЗ РІО - панна вн лм т І 11110211 81113513: 122111 212123 1511211512021 21111213 1112112 ех дир КІ 1 1 І пл шт ІІІ: шІІ1111: лІ1ІтТІтІ дл АННИ ІВІТІ2І122 12211231 11111531 11111102 1 11151111 ЗЕБІВІ МІ: 13111211 212221 2:1 22112311 1 ТА Р21 22112121: ИН вн шо в пп ВІ ІТ І ЕФЕ ТУКРТТРРЕТУТТ се ев ее ее З В Б ЕІ о У ОО ЗБ ОХ о ОВ Я М Б КЕ В Які
Фіг. 1 ж КА ве осв ; Е кит у ши ше і-ї і ї ; Ми шик, уж ; їх СЕ Дсчнннн З , я я у я, ще: яке як дно де
UAA202105856A 2019-03-29 2020-03-23 Сполуки та кон'югати на їх основі UA129129C2 (uk)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962826393P 2019-03-29 2019-03-29
US202062964177P 2020-01-22 2020-01-22
PCT/EP2020/057984 WO2020200880A1 (en) 2019-03-29 2020-03-23 Compounds and conjugates thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA129129C2 true UA129129C2 (uk) 2025-01-22

Family

ID=69960637

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA202105856A UA129129C2 (uk) 2019-03-29 2020-03-23 Сполуки та кон'югати на їх основі

Country Status (29)

Country Link
US (3) US20200306243A1 (uk)
EP (2) EP4176904A1 (uk)
JP (2) JP7210770B2 (uk)
KR (3) KR102679892B1 (uk)
CN (4) CN113631196B (uk)
AU (1) AU2020252034B2 (uk)
BR (1) BR112021018986A2 (uk)
CA (1) CA3133757A1 (uk)
CL (1) CL2021002498A1 (uk)
CO (1) CO2021014566A2 (uk)
CR (1) CR20210541A (uk)
DK (1) DK3946464T3 (uk)
EC (1) ECSP21078204A (uk)
ES (1) ES2930295T3 (uk)
HR (1) HRP20221280T1 (uk)
HU (1) HUE060364T2 (uk)
IL (1) IL286291B1 (uk)
LT (1) LT3946464T (uk)
MX (1) MX2021011812A (uk)
PH (1) PH12021552363A1 (uk)
PL (1) PL3946464T3 (uk)
PT (1) PT3946464T (uk)
RS (1) RS63715B1 (uk)
SG (1) SG11202110524VA (uk)
SM (1) SMT202200439T1 (uk)
TW (2) TW202423947A (uk)
UA (1) UA129129C2 (uk)
WO (1) WO2020200880A1 (uk)
ZA (1) ZA202106612B (uk)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11493668B2 (en) 2018-09-26 2022-11-08 Johnson & Johnson Vision Care, Inc. Polymerizable absorbers of UV and high energy visible light
US20200306243A1 (en) * 2019-03-29 2020-10-01 Medimmune Limited Compounds and conjugates thereof
WO2021007435A1 (en) 2019-07-10 2021-01-14 Cybrexa 2, Inc. Peptide conjugates of cytotoxins as therapeutics
TW202116356A (zh) 2019-07-10 2021-05-01 美商斯布雷克薩三號公司 作為治療劑之微管靶向藥劑之肽結合物
TW202140076A (zh) * 2020-01-22 2021-11-01 英商梅迪繆思有限公司 化合物及其軛合物
MX2022009052A (es) * 2020-01-22 2022-08-15 Medimmune Ltd Compuestos y conjugados de estos.
US20240343678A1 (en) 2021-08-17 2024-10-17 Jiangsu Mabwell Health Pharmaceutical R&D Co., Ltd. Method for synthesizing 5,8-diamino-3,4-dihydro-2h-1-naphthalenone and intermediate compound used therein
KR20240120744A (ko) 2021-12-16 2024-08-07 맵웰 (상하이) 바이오사이언스 컴퍼니, 리미티드 캄프토테신 화합물 및 이의 접합체
TW202348252A (zh) 2022-02-16 2023-12-16 英商梅迪繆思有限公司 用治療性結合分子治療癌症的組合療法
KR20240159839A (ko) 2022-03-09 2024-11-06 아스트라제네카 아베 FRα에 대한 결합 분자
IL314452A (en) 2022-03-11 2024-09-01 Astrazeneca Ab A scoring method for an anti-frα antibody-drug conjugate therapy
EP4496595A1 (en) 2022-03-23 2025-01-29 Synaffix B.V. Antibody-conjugates for targeting of tumours expressing carcinoembyronic antigen
EP4496594A1 (en) 2022-03-23 2025-01-29 Synaffix B.V. Antibody-conjugates for targeting of tumours expressing trop-2
EP4496593A1 (en) 2022-03-23 2025-01-29 Synaffix B.V. Antibody-conjugates for targeting of tumours expressing nectin-4
IL315366A (en) 2022-03-23 2024-11-01 Synaffix Bv Antibody pairs for targeting PTK7-expressing tumors
CN115160403A (zh) * 2022-07-05 2022-10-11 上海彩迩文生化科技有限公司 特异性拓扑异构酶抑制剂和可用于抗体药物偶联物及其制备方法
WO2024170660A1 (en) 2023-02-16 2024-08-22 Astrazeneca Ab Combination therapies for treatment of cancer with therapeutic binding molecules
WO2024223899A1 (en) 2023-04-28 2024-10-31 Medimmune Limited B7-h4 therapeutic binding molecules for the treatment of cancer
WO2024235105A1 (en) * 2023-05-12 2024-11-21 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. Linker compounds and ligand-drug conjugates, preparation methods and uses thereof
WO2025027472A2 (en) 2023-07-31 2025-02-06 Astrazeneca Ab Cd123 antibody-drug conjugates and methods of using the same

Family Cites Families (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4939255A (en) 1987-06-24 1990-07-03 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Hexa-cyclic camptothecin derivatives
JP2754022B2 (ja) * 1988-11-18 1998-05-20 第一製薬株式会社 カンプトテシン類縁体
JP3024013B2 (ja) * 1990-08-14 2000-03-21 杏林製薬株式会社 フルオロエチルカンプトテシン誘導体
US5658920A (en) 1991-01-16 1997-08-19 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Substituted 1H,12H-benz-[DE]pyrano[3',4':6,7] indolizino[1,2-B]quinoline-10,13(9H,15H)-dione compound
JP3008226B2 (ja) 1991-01-16 2000-02-14 第一製薬株式会社 六環性化合物
US6407115B1 (en) 1991-01-16 2002-06-18 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Hexa-cyclic compound
JP3359955B2 (ja) * 1992-07-16 2002-12-24 第一製薬株式会社 抗腫瘍剤
ATE227703T1 (de) 1995-02-22 2002-11-15 Daiichi Seiyaku Co Aminotetralon-derivate und verfahren zu deren herstellung
US6504029B1 (en) 1995-04-10 2003-01-07 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Condensed-hexacyclic compounds and a process therefor
US5663177A (en) 1995-05-31 1997-09-02 Smithkline Beecham Corporation Water soluble camptothecin analogs
JPH1095802A (ja) * 1995-12-28 1998-04-14 Tanabe Seiyaku Co Ltd カンプトテシン誘導体
IN189180B (uk) 1997-07-09 2003-01-04 Chong Kun Dang Corp
AR030207A1 (es) 2000-04-07 2003-08-13 Daiichi Seiyaku Co Composicion farmaceutica que contiene un derivado de camptotecina y procedimiento de preparacion de la misma
US6403604B1 (en) * 2001-03-01 2002-06-11 California Pacific Medical Center Nitrogen-based camptothecin derivatives
CN1464874A (zh) 2001-05-08 2003-12-31 三井化学株式会社 1,5－二氨基萘的制备方法
BR0214615A (pt) 2001-11-30 2004-09-14 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Composto hexacìclico
WO2004073601A2 (en) 2003-02-21 2004-09-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for the preparation of hexacyclic camptothecin derivatives
BRPI0509732A (pt) 2004-04-09 2007-09-25 Chugai Pharmaceutical Co Ltd pró-fármaco solúvel em água, composição farmacêutica, agente terapêutico, agente antifungo e uso do referido pró-fármaco
ES2669510T3 (es) 2004-09-23 2018-05-28 Genentech, Inc. Anticuerpos y conjugados modificados por ingeniería genética con cisteína
TW200744603A (en) 2005-08-22 2007-12-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Novel anticancer concomitant drug
PT1934174E (pt) 2005-10-07 2011-07-14 Exelixis Inc Azetidinas como inibidores de mek para o tratamento de doenças proliferativas
PL1813614T3 (pl) 2006-01-25 2012-03-30 Sanofi Sa Środki cytotoksyczne zawierające nowe pochodne tomaymycyny
WO2008141044A2 (en) 2007-05-08 2008-11-20 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-muc16 antibodies and antibody drug conjugates
CN101835803B (zh) 2007-10-19 2016-05-25 健泰科生物技术公司 半胱氨酸改造的抗tenb2抗体和抗体药物偶联物
MX347442B (es) 2008-04-30 2017-04-25 Immunogen Inc Entrelazadores y sus usos.
CN103313992B (zh) * 2011-01-12 2016-04-27 天堃医药科技（杭州）有限公司 具有hdac抑制作用的喜树碱衍生物
CN102850400A (zh) * 2011-06-30 2013-01-02 周文强 喜树碱衍生物及其制备方法、药物组合物与用途
BR122021014396B1 (pt) * 2012-10-11 2022-07-05 Daiichi Sankyo Company, Limited Compostos intermediários ligantes de fármacos, e ligante
US9872924B2 (en) 2012-10-19 2018-01-23 Daiichi Sankyo Company, Limited Antibody-drug conjugate produced by binding through linker having hydrophilic structure
WO2014121033A1 (en) * 2013-02-04 2014-08-07 Fl Therapeutics Llc Soluble complexes of drug analogs and albumin
EP3074010A4 (en) * 2013-11-27 2017-10-25 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-pyrrolo compounds and methods for producing a conjugate
KR102535900B1 (ko) 2013-12-25 2023-05-26 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항 trop2 항체-약물 컨쥬게이트
BR112016013482B1 (pt) 2014-01-31 2022-04-19 Daiichi Sankyo Company, Limited Conjugado de anticorpo anti-her2-fármaco, fármacos antitumor e/ou anticâncer e composição farmacêutica
JP2017114763A (ja) 2014-03-26 2017-06-29 第一三共株式会社 抗ｃｄ９８抗体−薬物コンジュゲート
KR102445502B1 (ko) 2014-04-10 2022-09-21 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항her3 항체-약물 콘주게이트
ES2754348T3 (es) 2014-04-10 2020-04-17 Daiichi Sankyo Co Ltd Conjugado de (anticuerpo anti-HER2)-fármaco
CN112494657B (zh) 2014-10-03 2025-02-11 西纳福克斯股份有限公司 磺酰胺接头、其缀合物及制备方法
CA2971766A1 (en) 2015-01-30 2016-08-04 Sutro Biopharma, Inc. Hemiasterlin derivatives for conjugation and therapy
GB201506393D0 (en) * 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
IL290959B2 (en) 2015-06-29 2023-04-01 Daiichi Sankyo Co Ltd Preparations containing antibody-drug conjugates and methods for their production
MA43354A (fr) * 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
GB201607478D0 (en) 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
BR112019005247A2 (pt) 2016-10-07 2019-06-04 Daiichi Sankyo Co Ltd terapia para o câncer resistente a fármacos por meio de administração de conjugado de anticorpo anti-her2/fármaco
KR20190083654A (ko) 2016-11-10 2019-07-12 메디뮨 엘엘씨 Asct2에 특이적인 결합 분자 및 이의 용도
US11273155B2 (en) 2016-12-12 2022-03-15 Daiichi Sankyo Company, Limited Combination of antibody-drug conjugate and immune checkpoint inhibitor
BR112019012847A2 (pt) 2017-01-17 2019-12-10 Daiichi Sankyo Co Ltd anticorpo ou fragmento funcional do anticorpo, polinucleotídeo, vetor de expressão, células hospedeiras, método para produção de um anticorpo de interesse ou de um fragmento funcional do anticorpo e para produção de um conjugado de anticorpo-fármaco, conjugado de anticorpo-fármaco, composição farmacêutica, fármaco antitumoral, e, método de tratamento de um tumor.
BR112019015915A2 (pt) 2017-02-28 2020-04-07 Daiichi Sankyo Co Ltd método para o tratamento de câncer de pulmão de células não pequenas resistentes a egfr-tki através da administração do conjugado de anticorpo anti-her3-fármaco
TWI794230B (zh) 2017-05-15 2023-03-01 日商第一三共股份有限公司 抗ｃｄｈ６抗體及抗ｃｄｈ６抗體-藥物結合物、以及其製造方法
WO2019034176A1 (zh) 2017-08-18 2019-02-21 四川百利药业有限责任公司 一种喜树碱-抗体偶联物
CN108853514B (zh) 2017-08-18 2022-07-22 四川百利药业有限责任公司 具有两种不同药物的抗体药物偶联物
US20200306243A1 (en) * 2019-03-29 2020-10-01 Medimmune Limited Compounds and conjugates thereof

Also Published As

Publication number Publication date
CO2021014566A2 (es) 2021-11-19
RS63715B1 (sr) 2022-11-30
CN117263948B (zh) 2024-11-22
EP3946464A1 (en) 2022-02-09
JP2022528851A (ja) 2022-06-16
CN118240003A (zh) 2024-06-25
CN113631196A (zh) 2021-11-09
CA3133757A1 (en) 2020-10-08
IL286291B1 (en) 2024-12-01
PL3946464T3 (pl) 2022-12-19
SG11202110524VA (en) 2021-10-28
ECSP21078204A (es) 2021-11-30
CN117263948A (zh) 2023-12-22
AU2020252034A1 (en) 2021-11-11
CN118221763A (zh) 2024-06-21
KR102679892B1 (ko) 2024-07-02
US20200306243A1 (en) 2020-10-01
PH12021552363A1 (en) 2022-09-05
MX2021011812A (es) 2021-10-22
TW202423947A (zh) 2024-06-16
HRP20221280T1 (hr) 2022-12-23
PT3946464T (pt) 2022-11-16
CN113631196B (zh) 2024-03-15
US20210322401A1 (en) 2021-10-21
IL286291A (en) 2021-10-31
AU2020252034B2 (en) 2024-02-01
ES2930295T3 (es) 2022-12-09
US20220211863A1 (en) 2022-07-07
KR20230023814A (ko) 2023-02-17
EP4176904A1 (en) 2023-05-10
SMT202200439T1 (it) 2023-01-13
CL2021002498A1 (es) 2022-06-03
TW202104235A (zh) 2021-02-01
DK3946464T3 (da) 2022-10-31
ZA202106612B (en) 2022-08-31
JP7210770B2 (ja) 2023-01-23
KR20240104214A (ko) 2024-07-04
CR20210541A (es) 2021-12-20
EP3946464B1 (en) 2022-08-31
WO2020200880A1 (en) 2020-10-08
TWI826676B (zh) 2023-12-21
BR112021018986A2 (pt) 2022-01-18
LT3946464T (lt) 2022-11-10
KR20210144845A (ko) 2021-11-30
HUE060364T2 (hu) 2023-02-28
US11446292B2 (en) 2022-09-20
KR102498681B1 (ko) 2023-02-09
JP2023065346A (ja) 2023-05-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA129129C2 (uk) Сполуки та кон'югати на їх основі
ES2890934T3 (es) Conjugados de pirrolobenzodiazepinas y anticuerpos
ES2871001T3 (es) Conjugados de pirrolobenzodiazepinas y anticuerpos
DK2906252T3 (en) Pyrrolobenzodiazepine Anti-Her2 antibody conjugates
ES2977788T3 (es) Terapia combinada con un conjugado de anticuerpo anti-AXL y fármaco
EA024730B1 (ru) Пирролбензодиазепиновые соединения, их конъюгаты, фармацевтические композиции, содержащие указанные конъюгаты, и применение указанных конъюгатов
KR20220130191A (ko) 화합물 및 이의 접합체
KR20200143389A (ko) 항종양제로서 피롤로벤조디아제핀 및 그것의 콘주게이트
KR20220130749A (ko) 화합물 및 이의 접합체
EA046016B1 (ru) Соединения и конъюгаты на их основе
EA047476B1 (ru) Соединения и конъюгаты на их основе
EA040749B1 (ru) Конъюгаты пирролобензодиазепин-антитело
EA039826B1 (ru) Конъюгаты пирролобензодиазепин-антитело