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TWI532486B - 增加造血幹細胞之化合物 - Google Patents

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TWI532486B
TWI532486B TW098136716A TW98136716A TWI532486B TW I532486 B TWI532486 B TW I532486B TW 098136716 A TW098136716 A TW 098136716A TW 98136716 A TW98136716 A TW 98136716A TW I532486 B TWI532486 B TW I532486B
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麥可 庫凱
潘席風
約翰 泰洛
萬詠勤
王興
安東尼Ｅ 包泰諾
彼得Ｇ 舒茲
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諾華公司
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Description

增加造血幹細胞之化合物
本發明係關於適用於增加CD34+細胞之數目以供移植的化合物及組合物。本發明進一步係關於一種包含經增加之造血幹細胞(HSC)的細胞群體及其在自體移植或同種異體移植中之用途，其係用於治療患有遺傳性免疫缺乏性與自體免疫性疾病及各種造血功能障礙之患者以恢復造血細胞譜系及免疫系統防禦能力。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2008年10月30日申請之美國臨時專利申請案第61/109,821號及2009年9月15日申請之美國臨時專利申請案第61/242,765號的優先權權益。此等申請案之所有揭示內容係以全文引用之方式且出於所有目的併入本文中。
造血幹細胞(HSC)在個人的一生中能夠再生出所有血液產物，從而平衡其自我更新與子代分化。造血幹細胞具有治療潛力係由於其能夠恢復移植受者體內之血液細胞及免疫細胞。此外，HSC具有為其他組織(諸如腦、肌肉及肝)生成細胞的潛力。人類自體及同種異體骨髓移植法普遍被用作白血病、淋巴瘤及其他危及生命之疾病的療法。對於此等程序，許多幹細胞必須經分離以確保植入充足的HSC。可用於治療之HSC數目在臨床上具有侷限性。
本發明係關於適用於擴增造血幹細胞群體之化合物與組合物及其用途。
在一態樣中，本發明提供一種式I之化合物，
其中：G1係選自N及CR3；G2、G3及G4係獨立地選自CH及N；其限制條件為G3及G4中至少一者為N；其限制條件為G1及G2不均為N；L係選自-NR5a(CH2)0-3-(0-3在本文中意謂0、1、2或3)、-NR5aCH(C(O)OCH3)CH2-、-NR5a(CH2)2NR5b-、-NR5a(CH2)2S-、-NR5aCH2CH(CH3)CH2-、-NR5aCH2CH(OH)-及-NR5aCH(CH3)CH2-；其中R5a及R5b係獨立地選自氫及C1-4烷基；R1係選自氫、苯基、噻吩基、呋喃基、1H-苯并咪唑基、異喹啉基、1H-咪唑并吡啶基、苯并噻吩基、嘧啶基、1H-吡唑基、吡啶基、1H-咪唑基、吡咯啶基、吡嗪基、噠嗪基、1H-吡咯基及噻唑基；其中R1中之該苯基、噻吩基、呋喃基、1H-苯并咪唑基、異喹啉基、1H-咪唑并吡啶基、苯并噻吩基、嘧啶基、1H-吡唑基、吡啶基、1H-咪唑基、吡咯啶基、吡嗪基、噠嗪基、1H-吡咯基或噻唑基可視情況經1至3個獨立地選自以下之基團取代：氰基、羥基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵基、經鹵基取代之C1-4烷基、經鹵基取代之C1-4烷氧基、羥基、胺基、-C(O)R8a、-S(O)0-2R8a、-C(O)OR8a及-C(O)NR8aR8b；其中R8a及R8b係獨立地選自氫及C1-4烷基；其限制條件為R1及R3不均為氫；R2係選自-S(O)2NR6aR6b、-NR6aC(O)NR6bR6c、苯基、1H-吡咯并吡啶-3-基、1H-吲哚基、噻吩基、吡啶基、1H-1,2,4-三唑基、2-側氧基咪唑啶基、1H-吡唑基、2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并咪唑基及1H-吲唑基；其中R6a、R6b及R6c係獨立地選自氫及C1-4烷基；其中R2中之該苯基、1H-吡咯并吡啶-3-基、1H-吲哚基、噻吩基、吡啶基、1H-1,2,4-三唑基、2-側氧基咪唑啶基、1H-吡唑基、2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并咪唑基或1H-吲唑基視情況經1至3個獨立地選自以下之基團取代：羥基、鹵基、甲基、甲氧基、胺基、-O(CH2)nNR7aR7b、-S(O)2NR7aR7b、-OS(O)2NR7aR7b及-NR7aS(O)2R7b；其中R7a及R7b係獨立地選自氫及C1-4烷基；R3係選自氫、C1-4烷基及聯苯基；且R4係選自C1-10烷基、丙-1-烯-2-基、環己基、環丙基、2-(2-側氧基吡咯啶-1-基)乙基、氧雜環丁-3-基、二苯甲基、四氫-2H-哌喃-3-基、四氫-2H-哌喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基、苯甲基、(4-戊基苯基)(苯基)甲基及1-(1-(2-側氧基-6,9,12-三氧雜-3-氮雜十四-14-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基；其中該烷基、環丙基、環己基、2-(2-側氧基吡咯啶-1-基)乙基、氧雜環丁-3-基、氧雜環丁-2-基、二苯甲基、四氫-2H-哌喃-2-基、四氫-2H-哌喃-3-基、四氫-2H-哌喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基、四氫呋喃-2-基、苯甲基、(4-戊基苯基)(苯基)甲基或1-(1-(2-側氧基-6,9,12-三氧雜-3-氮雜十四-14-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基可視情況經1至3個獨立地選自以下之基團取代：羥基、C1-4烷基及經鹵基取代之C1-4烷基；或其N-氧化物衍生物、前藥衍生物、經保護之衍生物、個別異構體及異構體混合物；或該等化合物之鹽(較佳為醫藥學上可接受之鹽)及溶劑合物(例如，水合物)。
 定義
「烷基」作為一種基團及作為其他基團(例如經鹵基取代之烷基及烷氧基)之一個結構單元可為直鏈或分支鏈。例如，烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基等。C1-4烷氧基包括甲氧基、乙氧基及其類似基團。經鹵基取代之烷基包括三氟甲基、五氟乙基及其類似基團。
「芳基」意謂單環或稠合雙環芳族環組合，其含有6至10個環碳原子。例如，芳基可為苯基或萘基，較佳為苯基。「伸芳基」意謂衍生自芳基之二價基團。
「雜芳基」係定義為一或多個環成員為選自以下之雜原子或部分的芳基：-O-、-N=、-NR-、-C(O)-、-S-、-S(O)-或-S(O)2-，其中R為氫、C1-4烷基或氮保護基。例如雜芳基包括吡啶基、吲哚基、吲唑基、喹喏啉基、喹啉基、苯并呋喃基、苯并哌喃基、苯并硫哌喃基、苯并[1,3]二氧雜環戊烯基、咪唑基、苯并咪唑基、嘧啶基、呋喃基、噁唑基、異噁唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、噻吩基等。
「環烷基」意謂含有指定環原子數目之飽和或部分不飽和、單環、稠合雙環或橋接多環狀環組合。例如，C3-10環烷基包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基等。「雜環烷基」意謂如本申請案中所定義之如下環烷基，其限制條件為所指示之環碳中一或多個經選自-O-、-N=、-NR-、-C(O)-、-S-、-S(O)-或-S(O)2-之部分置換，其中R為氫、C1-4烷基或氮保護基。例如，如本申請案中用於描述本發明化合物之C3-8雜環烷基包括N-嗎啉基、吡咯啶基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、2-側氧基-吡咯啶-1-基、1,4-二氧雜-8-氮雜-螺[4.5]癸-8-基等。
「鹵素」(或鹵基)較佳表示氯基或氟基，但亦可為溴基或碘基。
如本文中所使用，「造血幹細胞」(HSC)係指能夠自我更新且分化成更成熟之血細胞的不成熟血細胞，該等更成熟之血細胞包含粒細胞(例如早幼粒細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜鹼性粒細胞)、紅血球(例如網狀紅血球、紅血球)、血小板(例如巨核母細胞、產生血小板之巨核細胞、血小板)及單核細胞(例如單核細胞、巨噬細胞)。在本說明書中HSC可交替描述為幹細胞。在此項技術中已知，該等細胞可能包括CD34+細胞，或可能不包括CD34+細胞。CD34+細胞為表現CD34細胞表面標記之不成熟細胞。據信，CD34+細胞包括具有上文所定義之幹細胞性質之細胞亞群。在此項技術中，眾所周知，HSC包括多能性幹細胞、多潛能性幹細胞(例如淋巴樣幹細胞)及/或特定造血譜系定型之幹細胞。特定造血譜系定型之幹細胞可能屬於T細胞譜系、B細胞譜系、樹突狀細胞譜系、蘭格罕氏細胞譜系(Langerhans cell lineage)及/或淋巴樣組織特異性巨噬細胞譜系。此外，HSC亦指長期HSC(LT-HSC)及短期HSC(ST-HSC)。與LT-HSC相比，ST-HSC更具活性且更具增殖性。然而，LT-HSC具有無限的自我更新能力(亦即，其存活於整個成年期)，而ST-HSC具有有限的自我更新能力(亦即，其僅存活有限之時段)。任何此等HSC均可用於本文所述之任何方法中。可視情況使用ST-HSC係由於其具高增殖性，且因而可快速地增加HSC及其子代之數目。造血幹細胞視情況係獲自血液產物。血液產物包括獲自含有造血來源之細胞之身體或身體器官的產物。該等來源包括未分級之骨髓、臍帶、周邊血液、肝、胸腺、淋巴及脾。所有前述粗製或未分級血液產物可以熟習此項技術者已知之方式富含具有造血幹細胞特徵之細胞。
「治療」係指一種減輕或緩解疾病及/或其伴隨症狀之方法。
「增加(Expansion)」就細胞而言係指來自可能相同或可能不相同之細胞之初始細胞群體的特徵性細胞類型之數目有增加。用於增加之初始細胞可能與由增加所產生之細胞不相同。
「細胞群體」係指自生物學來源(例如血液產物或組織)分離且源自於一種以上細胞之真核哺乳動物(較佳為人類)細胞。
「富含」當在細胞群體之情況下使用時，係指基於一或多個標記(例如CD34+)之存在而選擇之細胞群體。
術語「CD34+細胞」係指在細胞表面表現CD34標記之細胞。CD34+細胞可使用例如流式細胞測量術及經螢光標記之抗CD34抗體來偵測及計數。
「富含CD34+細胞」意謂已基於CD34標記之存在而選擇細胞群體。因此，在選擇方法之後細胞群體中CD34+細胞之百分比高於選擇步驟(基於CD34標記)之前初始細胞群體中CD34+細胞之百分比。例如，CD34+細胞可能佔富含CD34+細胞之細胞群體中之細胞的至少50%、60%、70%、80%或至少90%。
「臍帶血單位」係指自單胎臍帶收集之血液。
較佳實施例之描述
本發明係關於使用能夠下調芳基烴受體及/或芳基烴受體路徑之下游效應子(effector)之活性及/或表現的藥劑來擴增HSC群體的方法及組合物。
在一個實施例中，該能夠下調芳基烴受體之活性及/或表現的藥劑為式I之化合物。
在一個實施例中，所提及之式I化合物為選自式Ia、式Ib、式Ic、式Id及式Ie之化合物，
其中：L係選自-NR5a(CH2)0-3-、-NR5aCH(C(O)OCH3)CH2-、-NR5a(CH2)2NR5b-、-NR5a(CH2)2S-、-NR5aCH2CH(CH3)CH2-、-NR5aCH2CH(OH)-及-NR5aCH(CH3)CH2-；其中R5a及R5b係獨立地選自氫及C1-4烷基；其中所示L部分之右側與R2連接，例如：-NR5a(CH2)0-3-R2、-NR5aCH(C(O)OCH3)CH2-R2、-NR5a(CH2)2NR5b-R2、-NR5a(CH2)2S-R2、-NR5aCH2CH(CH3)CH2-R2、-NR5aCH2CH(OH)-R2及-NR5aCH(CH3)CH1-R2；R1係選自氫、苯基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-3-基、1H-苯并[d]咪唑-1-基、異喹啉-4-基、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、1H-吡唑-4-基、吡啶-2-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡咯啶-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡咯-2-基及噻唑-5-基；其中R1中之該苯基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-3-基、1H-苯并[d]咪唑-1-基、異喹啉-4-基、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、吡啶-2-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡咯啶-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡咯-2-基或噻唑-5-基可視情況經1至3個獨立地選自以下之基團取代：氰基、羥基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵基、經鹵基取代之C1-4烷基、-S(O)0-2R8a及-C(O)OR8a，其中R8a及R8b係獨立地選自氫及C1-4烷基；其限制條件為R1及R3不均為氫；R2係選自-NR6aC(O)NR6bR6c、苯基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基、1H-吲哚-3-基、噻吩-3-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-側氧基咪唑啶-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基及1H-吲唑-3-基；其中R6a、R6b及R6c係獨立地選自氫及C1-4烷基；其中R2中之該苯基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基、1H-吲哚-3-基、噻吩-3-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-側氧基咪唑啶-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基或1H-吲唑-3-基視情況經1至3個獨立地選自以下之基團取代：羥基、鹵基、甲氧基、胺基、-OS(O)2NR7aR7b及-NR7aS(O)2R7b；其中R7a及R7b係獨立地選自氫及C1-4烷基；R3係選自氫、C1-4烷基及聯苯基；且R4係選自異丙基、甲基、乙基、丙-1-烯-2-基、異丁基、環己基、第二丁基、(S)-第二丁基、(R)-第二丁基、1-羥基丙-2-基、(S)-1-羥基丙-2-基、(R)-1-羥基丙-2-基、壬-2-基、2-(2-側氧基吡咯啶-1-基)乙基、氧雜環丁-3-基、氧雜環丁-2-基、二苯甲基、四氫-2H-哌喃-2-基、苯基、四氫呋喃-3-基及苯甲基；其中該環己基、2-(2-側氧基吡咯啶-1-基)乙基、氧雜環丁-3-基、氧雜環丁-2-基、二苯甲基、四氫-2H-哌喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基或苯甲基可視情況經1至3個獨立地選自C1-4烷基及經鹵基取代之C1-4烷基之基團取代。
在另一個實施例中，L係選自-NR5a(CH2)0-3-、-NR5aCH(C(O)OCH3)CH2-、-NR5a(CH2)2NR5b-、-NR5a(CH2)2S-、-NR5aCH2CH(CH3)CH2-、-NR5aCH(CH3)CH2-及-NR5aCH2CH(OH)-；其中R5a及R5b係獨立地選自氫及甲基；且R1係選自氫、苯基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-3-基、1H-苯并[d]咪唑-1-基、異喹啉-4-基、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、1H-吡唑-4-基、吡啶-2-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡咯啶-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡咯-2-基及噻唑-5-基；其中R1中之該苯基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-3-基、1H-苯并[d]咪唑-1-基、異喹啉-4-基、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、吡啶-2-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡咯啶-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡咯-2-基或噻唑-5-基可視情況經1至3個獨立地選自以下之基團取代：氰基、羥基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵基、經鹵基取代之C1-4烷基、-S(O)0-2R8a及-C(O)OR8a；其中R8a及R8b係獨立地選自氫及C1-4烷基；其限制條件為R1及R3不均為氫。
在另一個實施例中，當L為-NR5a(CH2)0-3-時，其較佳為-NR5a(CH2)1-3-(其中1-3在本文中為1、2或3)。
在另一個實施例中，R2係選自脲基、苯基、1H-吲哚-2-基、1H-吲哚-3-基、噻吩-3-基、哌啶-1-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-3-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-側氧基咪唑啶-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基、1H-苯并[d]咪唑-5-基及1H-咪唑-4-基；其中R2中之該苯基、1H-吲哚-2-基、1H-吲哚-3-基、噻吩-3-基、哌啶-1-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-3-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-側氧基咪唑啶-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基或1H-苯并[d]咪唑-5-基視情況經羥基、甲氧基、甲基、鹵基、胺基及胺基-磺醯基取代。
在另一個實施例中，R3係選自氫、甲基及聯苯基；且R4係選自異丙基、甲基、乙基、丙-1-烯-2-基、異丁基、環己基、第二丁基、(S)-第二丁基、(R)-第二丁基、1-羥基丙-2-基、(S)-1-羥基丙-2-基、(R)-1-羥基丙-2-基、壬-2-基、2-(2-側氧基吡咯啶-1-基)乙基、氧雜環丁-3-基、氧雜環丁-2-基、二苯甲基、四氫-2H-哌喃-2-基、苯基、四氫呋喃-3-基及苯甲基；其中該環己基、2-(2-側氧基吡咯啶-1-基)乙基、氧雜環丁-3-基、氧雜環丁-2-基、二苯甲基、四氫-2H-哌喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基或苯甲基可視情況經1至3個獨立地選自甲基及三氟甲基之基團取代。
另一個實施例為選自以下之化合物：4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-第二丁基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-二苯甲基-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫-2H-哌喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(噻吩-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(4-(三氟甲基)苯甲基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丁基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(4-甲基苯甲基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-N-(2-(噻吩-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；2-(苯并[b]噻吩-3-基)-N-(4-氟苯乙基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；N-(4-胺基苯乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(9-異丙基-2-(嘧啶-5-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-苯基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(呋喃-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；2-(苯并[b]噻吩-3-基)-N-(4-氟苯乙基)-9-苯基-9H-嘌呤-6-胺；N-苯甲基-8-(聯苯-4-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(壬-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-第二丁基-9H-嘌呤-6-胺；5-((3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊酸3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-1H-吲哚-5-基酯；N-(2-(2-(2-(2-(4-(1-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-6-(4-羥基苯乙基胺基)-9H-嘌呤-9-基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)乙醯胺；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-4-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；5-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)菸鹼酸乙酯；5-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)菸鹼酸乙酯；4-(2-(2-(6-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(4-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；5-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)菸鹼甲腈；4-(2-(9-異丙基-2-(吡咯啶-1-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(1H-咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(噠嗪-4-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡嗪-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(5-(甲基磺醯基)吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(4-氯吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-2-甲氧基苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-2-甲氧基苯酚；N-[2-(6-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-[2-(5-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；1-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)咪唑啶-2-酮；N-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)吡啶-2-胺；9-(丙-2-基)-N-[3-(1H-吡唑-4-基)丙基]-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-{2-[(3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)硫基]乙基}-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；1-(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)咪唑啶-2-酮；N-[2-(5-胺基-1H-1,2,4-三唑-3-基)乙基]-2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)吡啶-2-胺；2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-N-[3-(1H-吡唑-4-基)丙基]-9H-嘌呤-6-胺；2-(1-苯并噻吩-3-基)-N-[3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)丙基]-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-胺；(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)脲；5-({[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}甲基)-2,3-二氫-1H-1,3-苯并二唑-2-酮；N-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯基)甲烷-磺醯胺；4-(2-(2-(吡啶-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)丙基)苯酚；4-(2-(9-(氧雜環丁-3-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；5-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)-N-甲基菸鹼醯胺；4-(2-(9-(1-羥基丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；胺磺酸4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯基酯；4-(2-(2-(2-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(1-甲基-1H-吡咯-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(噻唑-5-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(1H-苯并[d]咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；5-(9-第二丁基-6-(4-羥基-3-甲基苯乙基胺基)-9H-嘌呤-2-基)菸鹼甲腈；N-(2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；9-異丙基-N-(2-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)乙基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(氧雜環丁-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(5-氯吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；5-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-9-第二丁基-9H-嘌呤-2-基)菸鹼甲腈；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；(S)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；(S)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；5-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-(氧雜環丁-3-基)-9H-嘌呤-2-基)菸鹼甲腈；4-(2-(6-(5-氟吡啶-3-基)-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(6-(苯并[b]噻吩-3-基)-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺基)乙基)苯酚；(R)-4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-3-甲基苯酚；5-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)-2-氰基吡啶(picolinonitrile)；3-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)異菸鹼甲腈；4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺基)乙基)苯酚；3-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)-2-氰基吡啶；4-(2-(9-異丙基-2-(6-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(異喹啉-4-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；2-氯-4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；3-氟-4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；N-(2-(5-氯-1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(5-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-2-甲基苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(氧雜環丁-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；(S)-4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；(R)-4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇；(R)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇；(S)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇；(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(2-(3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(6-(5-氟吡啶-3-基)-1-異丙基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(吡啶-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)-1-羥基乙基)苯酚；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(6-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)--(丙-1-烯-2-基)-9H-嘌呤-6-胺；5-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)吡啶-2-醇；N-(2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(6-(2-(二乙基胺基)乙氧基)-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(5-(5-氟吡啶-3-基)-3-異丙基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基胺基)乙基)苯酚；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(2-(2-乙基-1H-咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(2-丙基-1H-咪唑-1-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；3-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌嘌-6-基胺基)乙基)-1H-吲哚-6-醇；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-9H-嘌呤-6-胺；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(氧雜環丁-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9-(氧雜環丁-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(6-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(6-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(4-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(7-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(4-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺基)乙基)苯酚；9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-N-(2-(吡啶-4-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(1-羥基丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-2-甲基苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-環己基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；及1-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-6-(4-羥基苯乙基胺基)-9H-嘌呤-9-基)乙基)吡咯啶-2-酮。在下文之實例及表1中詳細描述式I化合物。
另一個實施例為式Ia之化合物，
其中：L係選自-NR5a(CH2)0-3-、-NR5aCH(C(O)OCH3)CH2-、-NR5a(CH2)2NR5b-、-NR5a(CH2)2S-、-NR5aCH2CH(CH3)CH2-、-NR5aCH(CH3)CH2-、-(CH2)3-、-CH2OCH2-、-CH2NR5aCH2-、-NR5aC(O)CH2-及-NR5aY-；其中R5a及R5b係獨立地選自氫及C1-4烷基；且Y為含有至多3個選自O、N及S之雜原子的5員雜芳基環；R1係選自氫、苯基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、苯并[b]噻吩-2-基、苯并[b]噻吩-3-基、苯并呋喃-2-基、苯并呋喃-3-基、嘧啶-4-基、嘧啶-5-基、1H-吡唑-4-基、1H-吡唑-3-基、吡啶-2-基、噠嗪-3-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡咯啶-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、1H-吡唑-1-基、噠嗪-4-基、1H-吲哚-2-基、噻唑-4-基、1H-吲哚-3-基、1H-吡咯-2-基或噻唑-5-基可視情況經1至3個獨立地選自以下之基團取代：氰基、羥基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵基、經鹵基取代之C1-4烷基、經鹵基取代之C1-4烷氧基、羥基、胺基、-C(O)R8a、-S(O)0-2R8a、-C(O)OR8a及-C(O)NR8aR8b；其中R8a及R8b係獨立地選自氫及C1-4烷基；其限制條件為R1及R3不均為氫；R2係選自-S(O)2NR6aR6b、-NR6aC(O)NR6bR6c、苯基、1H-吲哚-2-基、1H-吲哚-3-基、苯并[b]噻吩-2-基、苯并[b]噻吩-3-基、苯并呋喃-2-基、苯并呋喃-3-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、哌啶-4-基、哌啶-3-基、哌啶-2-基、哌啶-1-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-3-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-側氧基咪唑啶-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、3-側氧基哌嗪-1-基、2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基、1,2,3,4-四氫萘-2-基、吲哚啉-5-基、2-側氧基吲咪啉-5-基、1H-苯并[d]咪唑-5-基、1H-吲唑-5-基及1H-咪唑-4-基；其中R6a、R6b及R6c係獨立地選自氫及C1-4烷基；其中R2中之該苯基、1H-吲哚-2-基、1H-吲哚-3-基、苯并[b]噻吩-2-基、苯并[b]噻吩-3-基、苯并呋喃-2-基、苯并呋喃-3-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基或呋喃-2-基、呋喃-3-基、哌啶-4-基、哌啶-3-基、哌啶-2-基、哌啶-1-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-3-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-側氧基咪唑啶-1-基、1H-吡唑-3-基、3-側氧基哌嗪-1-基、2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基、1,2,3,4-四氫萘-2-基、吲哚啉-5-基、2-側氧基吲哚啉-5-基、1H-苯并[d]咪唑-5-基、1H-吲唑-5-基或1H-咪唑-4-基視情況經1至3個獨立地選自以下之基團取代：羥基、鹵基、甲基、甲氧基、胺基、-S(O)2NR7aR7b、-OS(O)2NR7aR7b及-NR7aS(O)2R7b，其中R7a及R7b係獨立地選自氫及C1-4烷基；或經選自以下之單一基團取代：5-((3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊醯基氧基、2-(2-(5-((3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊醯胺基)乙氧基)乙氧基及2-(4-(4-己-5-炔醯胺基苯甲醯基)苯基胺基)-2-側氧基乙氧基；R3係選自氫、C1-4烷基及聯苯基；且R4係選自異丙基、異丁基、第二丁基、1-羥基丙-2-基、環丙基、氧雜環丁-3-基、氧雜環丁-2-基、二苯甲基、哌啶-4-基、哌啶-3-基、哌啶-2-基、四氫-2H-哌喃-2-基、四氫-2H-哌喃-3-基、四氫-2H-哌喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基、四氫呋喃-2-基、苯甲基、(4-戊基苯基)(苯基)甲基及1-(1-(2-側氧基-6,9,12-三氧雜-3-氮雜十四-14-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基；其中該環丙基、氧雜環丁-3-基、氧雜環丁-2-基、二苯甲基、哌啶-4-基、哌啶-3-基、哌啶-2-基、四氫-2H-哌喃-2-基、四氫-2H-哌喃-3-基、四氫-2H-哌喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基、四氫呋喃-2-基、苯甲基、(4-戊基苯基)(苯基)甲基或1-(1-(2-側氧基-6,9,12-三氧雜-3-氮雜十四-14-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基可視情況經1至3個獨立地選自C1-4烷基及經鹵基取代之C1-4烷基之基團取代；或其N氧化物衍生物、前藥衍生物、經保護之衍生物、個別異構體及異構體混合物；或該等化合物之醫藥學上可接受之鹽及溶劑合物(例如水合物)。
在另一個實施例中，關於式Ia化合物，L係選自-NR5a(CH2)0-3-、-NR5aCH(C(O)OCH3)CH2-、-NR5a(CH2)2NR5b-、-NR5a(CH2)2S-、-NR5aCH2CH(CH3)CH2-、-NR5aCH(CH3)CH2-、-(CH2)3-、-CH2OCH2-、-CH2NR5aCH2-、-NR5aC(O)CH2-及-NR5aY-；其中R5a及R5b係獨立地選自氫及甲基；Y係選自異噁唑及1,3,4-噁二唑。
在另一個實施例中，當L為-NR5a(CH2)0-3-時，其較佳為-NR5a(CH2)1-3-(其中1-3在本文中意謂1、2或3)。
在另一個實施例中，R1係選自氫、苯基、噻吩-3-基、噻吩-2-基、呋喃-3-基、呋喃-2-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、吡啶-4-基、吡啶-2-基、吡咯啶-1-基、1H-吡唑-4-基、吡嗪-2-基、噠嗪-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡唑-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-咪唑-1-基、噻唑-4-基、1H-吡咯-2-基、噻唑-5-基及吡啶-3-基；其中R1中之該苯基、噻吩-3-基、噻吩-2-基、呋喃-3-基、呋喃-2-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、吡啶-4-基、吡啶-2-基、吡咯啶-1-基、1H-吡唑-4-基、吡嗪-2-基、噠嗪-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡唑-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-咪唑-1-基、噻唑-4-基、1H-吡咯-2-基、噻唑-5-基或吡啶-3-基視情況經1至3個獨立地選自以下之基團取代：氰基、甲基、甲基-磺醯基、甲氧基、鹵基、羥基、羧基、乙氧基-羰基、甲基-胺基-羰基及胺基；其限制條件為R1及R3不均為氫。
在另一個實施例中，R2係選自胺基-磺醯基、甲基-羰基-胺基、甲基-磺醯基-胺基、胺基-磺醯基-氧基、脲基、苯基、1H-吲哚-2-基、1H-吲哚-3-基、苯并[b]噻吩-2-基、苯并[b]噻吩-3-基、苯并呋喃-2-基、苯并呋喃-3-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、哌啶-4-基、哌啶-3-基、哌啶-2-基、哌啶-1-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-3-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-側氧基咪唑啶-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、3-側氧基哌嗪-1-基、2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基、1,2,3,4-四氫萘-2-基、吲哚啉-5-基、2-側氧基吲哚啉-5-基、1H-苯并[d]咪唑-5-基、1H-吲唑-5-基及1H-咪唑-4-基；其中R2中之該苯基、1H-吲哚-2-基、1H-吲哚-3-基、苯并[b]噻吩-2-基、苯并[b]噻吩-3-基、苯并呋喃-2-基、苯并呋喃-3-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、哌啶-4-基、哌啶-3-基、哌啶-2-基、哌啶-1-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-3-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-側氧基咪唑啶-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、3-側氧基哌嗪-1-基、2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基、1,2,3,4-四氫萘-2-基、吲哚啉-5-基、2-側氧基吲哚啉-5-基、1H-苯并[d]咪唑-5-基、1H-吲唑-5-基及1H-咪唑-4-基視情況經以下取代：羥基、甲氧基、甲基、鹵基、胺基、胺基-磺醯基、5-((3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊醯基氧基、2-(2-(5-((3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊醯胺基)乙氧基)乙氧基及2-(4-(4-己-5-炔醯胺基苯甲醯基)苯基胺基)-2-側氧基乙氧基。
在另一個實施例中，R3係選自氫、甲基及聯苯基；且R4係選自異丙基、異丁基、第二丁基、1-羥基丙-2-基、環丙基、氧雜環丁-3-基、氧雜環丁-2-基、二苯甲基、哌啶-4-基、哌啶-3-基、哌啶-2-基、四氫-2H-哌喃-2-基、四氫-2H-哌喃-3-基、四氫-2H-哌喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基、四氫呋喃-2-基、苯甲基、(4-戊基苯基)(苯基)甲基及1-(1-(2-側氧基-6,9,12-三氧雜-3-氮雜十四-14-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基；其中該環丙基、氧雜環丁-3-基、氧雜環丁-2-基、二苯甲基、哌啶-4-基、哌啶-3-基、哌啶-2-基、四氫-2H-哌喃-2-基、四氫-2H-哌喃-3-基、四氫-2H-哌喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基、四氫呋喃-2-基、苯甲基、(4-戊基苯基)(苯基)甲基或1-(1-(2-側氧基-6,9,12-三氧雜-3-氮雜十四-14-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基可視情況經1至3個獨立地選自甲基及三氟甲基之基團取代。
另一個實施例為選自以下之化合物：4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-第二丁基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-二苯甲基-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫-2H-哌喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(4-(三氟甲基)苯甲基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丁基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(4-甲基苯甲基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-N-(2-(噻吩-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；2-(苯并[b]噻吩-3-基)-N-(4-氟苯乙基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；N-(4-胺基苯乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(9-異丙基-2-(嘧啶-5-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-苯基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(呋喃-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；2-(苯并[b]噻吩-3-基)-N-(4-氟苯乙基)-9-苯基-9H-嘌呤-6-胺；N-苯甲基-8-(聯苯-4-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(壬-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-((4-戊基苯基)(苯基)甲基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-第二丁基-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-第二丁基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-1H-吲哚-5-醇；5-((3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊酸3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-1H-吲哚-5-基酯；N-(2-(2-(3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-1H-吲哚-5-基氧基)乙氧基)乙基)-5-((3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊醯胺；N-(4-(4-(2-(3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-1H-吲哚-5-基氧基)乙醯胺基)苯甲醯基)苯基)己-5-炔醯胺；N-(2-(2-(2-(2-(4-(1-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-6-(4-羥基苯乙基胺基)-9H-嘌呤-9-基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)乙醯胺；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-4-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；5-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)菸鹼酸乙酯；5-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)菸鹼酸乙酯；4-(2-(2-(6-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(4-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(2-甲氧基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；5-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)菸鹼甲腈；4-(2-(9-異丙基-2-(吡咯啶-1-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(1H-吡唑-1-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(1H-咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(噠嗪-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(噠嗪-4-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡嗪-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(5-(甲基磺醯基)吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(2-氯吡啶-3-基)-6-異丙基-2,6-二氫咪唑并[4,5-c]吡唑-3-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(4-氯吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(4-甲氧基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(噻唑-4-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(1H-吡唑-4-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(噻吩-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)噻吩-2-甲酸；4-(2-(2-(呋喃-2-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(4-甲基噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-2-甲氧基苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-2-甲氧基苯酚；N-[2-(6-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-[2-(5-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-[2-(哌啶-4-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；1-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)哌啶-4-醇；(2S)-3-(4-羥基苯基)-2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}丙酸甲酯；4-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)苯-1-磺醯胺；2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙烷-1-磺醯胺；4-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)苯-1,2-二醇；N-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；1-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)咪唑啶-2-酮；N-[2-(5-胺基-1H-1,2,4-三唑-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)吡啶-2-胺；9-(丙-2-基)-N-[3-(1H-吡唑-4-基)丙基]-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-[2-({[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}甲基)丙基]乙醯胺；4-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)哌嗪-2-酮；N-{2-[(3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)硫基]乙基}-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-[3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)丙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)脲；5-({[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}甲基)-2,3-二氫-1H-1,3-苯并二唑-2-酮；2-(1-苯并噻吩-3-基)-N-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-胺；1-(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)咪唑啶-2-酮；N-[2-(5-胺基-1H-1,2,4-三唑-3-基)乙基]-2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)吡啶-2-胺；2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-N-[3-(1H-吡唑-4-基)丙基]-9H-嘌呤-6-胺；N-[2-({[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}甲基)丙基]乙醯胺；4-(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)哌嗪-2-酮；2-(1-苯并噻吩-3-基)-N-{2-[(3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)硫基]乙基}-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-胺；2-(1-苯并噻吩-3-基)-N-[3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)丙基]-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-胺；(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)脲；5-({[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}甲基)-2,3-二氫-1H-1,3-苯并二唑-2-酮；N-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯基)甲烷磺醯胺；4-(2-(2-(吡啶-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)丙基)苯酚；4-(2-(9-(氧雜環丁-3-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；5-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)-N-甲基菸鹼醯胺；6-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)-5,6,7,8-四氫萘-2-醇；N-(2-(1H-吲唑-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-((9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基)(甲基)胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-8-甲基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；1-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮；4-(3-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基)丙基)苯酚；4-((((9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基)甲基)(甲基)胺基)甲基)苯酚；4-(((9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基)甲基胺基)甲基)苯酚；4-(((9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基)甲氧基)甲基)苯酚；N-(2-(吲哚啉-5-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(9-(1-甲基哌啶-4-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-(哌啶-4-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；N-(2-(1H-吲唑-5-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；5-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)吲哚啉-2-酮；4-(2-(9-環丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-(1-羥基丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；胺磺酸4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯基酯；2-(4-羥基苯基)-N-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基)乙醯胺；4-(5-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)異噁唑-3-基)苯酚；4-(5-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)-1,3,4-噁二唑-2-基)苯酚；4-(2-(2-(2-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(1-甲基-1H-吡咯-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；及4-(2-(9-異丙基-2-(噻唑-5-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚。
另一個實施例為式If之化合物，
其中：R2係選自視情況經羥基取代之1H-吲哚-3-基及苯基；且R4係選自異丙基、第二丁基、二苯甲基、壬-2-基、氧雜環丁-3-基及四氫呋喃-3-基。
另一個實施例為選自以下之化合物：4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-第二丁基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-二苯甲基-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(壬-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-第二丁基-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(氧雜環丁-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；(S)-4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；及(R)-4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚。
另一個實施例為式Ig之化合物，
其中：R2係選自：1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基；視情況經1至2個獨立地選自鹵基、甲基及甲氧基之基團取代的1H-吲哚-3-基；及視情況經1至2個獨立地選自甲基、鹵基及羥基之基團取代的苯基；R4係選自異丙基、第二丁基、1-羥基丙-2-基、丙-1-烯-2-基、二苯甲基、壬-2-基、氧雜環丁-3-基及四氫呋喃-3-基；且Ra、Rb及Rc係獨立地選自氫、氰基、甲基、鹵基、-SO2CH3及三氟甲基。
另一個實施例為選自以下之化合物：4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(6-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(4-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；5-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)菸鹼甲腈；4-(2-(9-異丙基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(5-(甲基磺醯基)吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(4-氯吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；9-異丙基-N-(2-(6-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；9-異丙基-N-(2-(5-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(9-(氧雜環丁-3-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-(1-羥基丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(2-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；5-(9-第二丁基-6-(4-羥基-3-甲基苯乙基胺基)-9H-嘌呤-2-基)菸鹼甲腈；4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(氧雜環丁-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(5-氯吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；5-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-9-第二丁基-9H-嘌呤-2-基)菸鹼甲腈；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；(S)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；(S)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；5-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-(氧雜環丁-3-基)-9H-嘌呤-2-基)菸鹼甲腈；4-(2-(6-(5-氟吡啶-3-基)-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺基)乙基)苯酚；3-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)異菸鹼甲腈；4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(6-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；2-氯-4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；3-氟-4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；N-(2-(5-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(5-氯-1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-2-甲基苯酚；2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇；(R)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇；(S)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇；(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(6-(5-氟吡啶-3-基)-1-異丙基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基胺基)乙基)苯酚；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(6-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(丙-1-烯-2-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(5-(5-氟吡啶-3-基)-3-異丙基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基胺基)乙基)苯酚；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(氧雜環丁-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9-(氧雜環丁-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(6-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(6-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(4-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(4-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(7-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；及4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(1-羥基丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-2-甲基苯酚。
另一個實施例為一種使用式I化合物來刺激幹細胞經由增加分裂次數而增加之方法；該方法包含使該等幹細胞與式I化合物接觸。
另一個實施例為一種如下方法，其中在活體內、活體外或離體增加幹細胞。
另一個實施例為一種如下方法，其中該等幹細胞為人類造血幹細胞。
另一個實施例為一種具有經增加之造血幹細胞的細胞群體，其係藉由本發明之方法獲得，或可藉由本發明之方法獲得。
另一個實施例為一種組合物，其包含具有經增加之HSC且源自於一或兩個臍帶血單位、較佳為一個臍帶血單位的細胞群體，其中該組合物含有總量為至少105個細胞、107個細胞、108個細胞或109個細胞之細胞，且其中細胞總數之20%至100%係CD34+細胞，例如細胞總數之40%至80%係CD34+細胞。
另一個實施例為一種治療疾病或病症之方法，對此幹細胞療法可預防、治療或根除該病症。
可預期隨著幹細胞使用之進步，能用幹細胞移植治療之疾病將增加。實例之非限制性列舉見下文。
另一個實施例為一種如[發明內容]中所定義之式I化合物或其鹽的用途，其係用於製備用以治療遺傳性免疫缺乏性疾病、自體免疫性疾病及/或造血功能障礙之組合物。
在另一個實施例中，投藥方式為自體移植，且造血功能障礙係選自多發性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin lymphoma)、霍奇金氏病、急性骨髓性白血病、神經母細胞瘤、生殖細胞腫瘤、自體免疫性病症及澱粉樣變性。
在另一個實施例中，該等自體免疫性病症係選自全身性紅斑性狼瘡症(SLE)及全身性硬化症。
在另一個實施例中，投藥方式為同種異體移植，且造血功能障礙係選自急性骨髓性白血病、急性淋巴母細胞白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、骨髓增生性病症、骨髓發育不良症候群、多發性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏病、再生不全性貧血、單純紅血球再生不良、陣發性夜間血尿症、範可尼貧血(Fanconi anemi)、重型地中海貧血、鐮狀細胞貧血症、嚴重複合型免疫缺乏症(SCID)、威-奧二氏症候群(Wiskott-Aldrich syndrome)、噬血細胞性淋巴組織細胞增生症(Hemophagocytic lymphohistiocytosis，HLH)及先天性代謝異常。
在另一個實施例中，先天性代謝異常係選自黏多醣症、高雪氏症(Gaucher disease)、異染性腦白質營養不良及腎上腺腦白質營養不良。
另一個實施例為一種治療遺傳性免疫缺乏性疾病、自體免疫性疾病及/或造血功能障礙之方法，該方法包含向需要該治療之患者投與利用如[發明內容]中所述之化合物增加之造血幹細胞。
在另一個實施例中，投藥方式為自體移植，且造血功能障礙係選自多發性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏病、急性骨髓性白血病、神經母細胞瘤、生殖細胞腫瘤、自體免疫性病症及澱粉樣變性。
在另一個實施例中，該等自體免疫性病症係選自全身性紅斑性狼瘡症(SLE)及全身性硬化症。
在另一個實施例中，投藥方式為同種異體移植，且造血功能障礙係選自急性骨髓性白血病、急性淋巴母細胞白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、骨髓增生性病症、骨髓發育不良症候群、多發性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏病、再生不全性貧血、單純紅血球再生不良、陣發性夜間血尿症、範可尼貧血、重型地中海貧血、鐮狀細胞貧血症、嚴重複合型免疫缺乏症(SCID)、威-奧二氏症候群、噬血細胞性淋巴組織細胞增生症(HLH)及先天性代謝異常。
在另一個實施例中，先天性代謝異常係選自黏多醣症、高雪氏症、異染性腦白質營養不良及腎上腺腦白質營養不良。
效用
HSC為能夠再生所有血細胞之原始細胞。在發育過程中，造血自胎兒之肝移位至骨髓，該骨髓接著在整個成年期保留為造血位點。一旦已在骨髓中建立造血作用後，HSC即不再任意地分布於骨腔各處。相反的是發現其緊鄰著骨內膜表面。隨著與骨表面之距離增加，更成熟之幹細胞數目增加。最後，當接近骨骼之中心縱軸時，發生成熟細胞之末期分化。
增加幹細胞(無論是來自成人、臍帶血、胎兒，還是來自胚胎來源)之數目將會對移植及其他適於血液學與腫瘤學疾病及病症之療法具有巨大影響，至少將增加安全性且降低成本。如本文之方法中所描述，HSC數目係以離體方式增加。增加幹細胞數目之方法之所以重要，係由於當前大約25%自體供體移植因缺乏足夠的幹細胞而無法進行。此外，不到25%之需要同種異體移植之患者可獲得組織相容性供體。當前存在有臍帶血庫且其涵蓋一般群體之廣泛種族構成，但此等庫當前侷限於用於兒童，此係因為標本中之幹細胞數目不足以用於成人受者。增加幹細胞數目之方法允許臍帶血可用於成人患者，從而增加同種異體移植之使用。本發明之化合物亦可用於增加祖細胞數目，其在臨床上可例如用於加速植入及減少嗜中性白血球減少症之持續時間。
因此，提供一種增加HSC數目之方法。如本文中所使用，HSC增加意謂個體之至少一種以上HSC增加10%、增加20%、增加30%或增加30%以上。HSC可能由CD34+細胞之子集組成，HSC之增加可藉由計數細胞群體中之CD34+細胞數目且視情況藉由如以下實驗部分中所述分析群落形成單位(CFU)來評估CD34+細胞之分化性質而間接量測：與無增加之對照組相比，CD34+細胞培養物之數目增加至少10%、較佳增加20%或增加30%或增加30%以上表明HSC增加。例如，自個體之骨髓樣本或自培養物採集經擴增之HSC群體。採集HSC係定義為取出或分離出細胞。此舉係使用許多方法(諸如酶促法、非酶促法、離心法、電法或基於大小之方法)，或較佳藉由使用培養基(例如，培育有細胞之培養基)或緩衝溶液沖洗細胞來實現。視情況收集、分離細胞，且進一步增加，從而產生HSC及分化子代之更大群體。
一種製造經擴增之HSC群體的方法包含使能夠下調AHR及/或AHR之下游效應子之活性及/或表現的藥劑(例如本發明化合物)與包含HSC與視情況存在之HSC支持細胞之混合物的起始細胞群體(亦即，未經擴增之細胞群體)接觸。投藥步驟以離體、活體內及/或活體外方式發生。如本文所述，視情況向個體投與經擴增之HSC群體。對於離體增加，該用於HSC增加之藥劑(例如本發明化合物)可在DMSO或一些其他適合載劑中加以調配，自細胞中「洗滌」除去，且該等細胞可例如轉移至輸注緩衝液中。因而，提供向個體提供經擴增之HSC群體的方法，該等方法包含向該個體投與本文所述或藉由本文所述之方法製得的經擴增之HSC群體。經擴增之HSC群體視情況被用於製造血細胞。血細胞視情況被投與有需要之個體。該個體視情況與未經擴增之HSC群體或HSC與HSC支持細胞之混合物所源自的個體相同。
如本文中所使用，術語HSC支持細胞係指天然存在於一或多個HSC附近之細胞，以便由HSC支持細胞所釋放之因子可例如經由擴散達到HSC。HSC支持細胞包括但不限於淋巴網狀基質細胞。如本文中所使用之淋巴網狀基質細胞包括但不限於淋巴組織中所存在之不為淋巴細胞或淋巴細胞前驅細胞或祖細胞的所有細胞類型。因而，淋巴網狀基質細胞包括骨母細胞、上皮細胞、內皮細胞、間皮細胞、樹突狀細胞、脾細胞及巨噬細胞。淋巴網狀基質細胞亦包括通常不會起淋巴網狀基質細胞作用的細胞，諸如纖維母細胞，其已經遺傳改變而在其細胞表面上分泌或表現為HSC(包括其子代)之維持、生長或分化所必需的因子。淋巴網狀基質細胞視情況源自於一塊淋巴組織之解集作用。該等細胞能夠在活體外或活體內支持HSC(包括其子代)之維持、生長或分化。淋巴組織意欲包括骨髓、周邊血液(包括活動(mobilized)之周邊血液)、臍帶血、胎盤血、胎兒之肝、胚胎細胞(包括胚胎幹細胞)、大動脈-性腺-中腎源性細胞，及淋巴軟組織。如本文中所使用之淋巴軟組織包括但不限於諸如胸腺、脾、肝、淋巴結、皮膚、扁桃體、腺樣體及皮氏斑(Peyer's patch)以及其組合之組織。
淋巴網狀基質細胞在完整淋巴組織中為HSC(包括其子代)之維持、生長或分化提供支持性微環境。該微環境包括由包含淋巴網狀基質之各種細胞類型表現的可溶性及細胞表面因子。通常，淋巴網狀基質細胞提供之支持的特徵在於具接觸依賴性及非接觸依賴性。
例如，淋巴網狀基質細胞相對於HSC為自體(自身)或非自體(非自身，例如異源、同種異體、同種或異種)的。如本文中所使用，自體係指來自同一個體之細胞。如本文中所使用，同種異體係指遺傳上不同之相同物種的細胞。如本文中所使用，同種係指屬於不同個體且與所比較之細胞在遺傳上相同的細胞。如本文中所使用，異種係指不同物種之細胞。淋巴網狀基質細胞係在器官/組織已發育到可支持HSC之維持、生長或分化的階段(亦即，成熟階段)之後的任何時間獲自例如人類或非人類個體之淋巴組織。淋巴網狀基質細胞所源自之淋巴組織通常決定HSC所進行之譜系定型，從而引起分化子代之譜系特異性。
HSC(及其子代)與淋巴網狀基質細胞之共培養通常在此項技術中已知之條件(例如溫度、CO2及O2含量、營養培養基、持續時間等)下發生。足以增加細胞數目之時間為可容易地由熟習此項技術者確定之時間，且視所接種細胞之原始數目而變化。最初引入(及隨後接種)之HSC及淋巴網狀基質細胞的量根據實驗需要而變化。理想量係由熟習此項技術者根據需要容易地確定。
如通篇所使用，個體(subject)意謂個體者(individual)。因而，個體包括例如馴養動物，諸如貓及狗；家畜(例如牛、馬、豬、綿羊及山羊)；實驗室動物(例如小鼠、兔、大鼠及天竺鼠)；哺乳動物；非人類哺乳動物；靈長類動物；非人類靈長類動物；齧齒動物；鳥類；爬行動物；兩棲動物；魚類；及任何其他動物。個體視情況為哺乳動物，諸如靈長類動物或人類。
增加造血幹細胞之方法
因此，本發明係關於一種增加造血幹細胞之方法，該方法包含(a)提供包含造血幹細胞之起始細胞群體；及(b)在能夠下調芳基烴受體及/或芳基烴受體路徑之下游效應子之活性及/或表現的藥劑存在下，在適合於增加造血幹細胞之條件下，離體培養該起始細胞群體。
芳基烴(1,4-二氧雜環己二烯)受體(AHR)為胞內配位體活化轉錄因子，已知其在動物中且可能在人類中介導許多毒性效應及致癌效應(Safe S 2001 Toxicol Lett 120: 1-7)。由於AHR被其配位體活化，因此以轉錄方式誘導許多解毒基因，包括編碼以下之彼等基因：I相異物代謝酶，諸如細胞色素P450 CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1及CYP2S1；及II相酶UDP葡萄糖醛酸轉移酶UGT1A6、NAD(P)H依賴性醌氧化還原酶-1(NQO1)、醛脫氫酶ALDH3A1及若干麩胱甘肽-S-轉移酶。
在一個實施例中，能夠下調芳基烴受體及/或芳基烴受體路徑之下游效應子之活性及/或表現的藥劑係選自由以下組成之群：(i)有機化合物；(ii)能夠下調AHR之表現的小干擾RNA(siRNA)分子；及(iii)能夠下調AHR之表現的反義寡核苷酸。
在一個特定實施例中，該用於增加造血幹細胞之方法包含：(a)提供包含造血幹細胞之起始細胞群體；及(b)在能夠下調芳基烴受體及/或芳基烴受體路徑之下游效應子之活性及/或表現的藥劑存在下，在適合於增加造血幹細胞之條件下，離體培養該起始細胞群體，其中該能夠下調芳基烴受體及/或芳基烴受體路徑之下游效應子之活性及/或表現的藥劑不為α-萘黃酮或3'-甲氧基-4'-硝基黃酮。
在此項技術中已描述抑制AHR活性之有機化合物(在本文中亦稱為AHR拮抗劑)，例如2-甲基-2H-吡唑-3-甲酸(2-甲基-4-鄰-甲苯基偶氮基苯基)醯胺(CH223191)、α萘黃酮、白藜蘆醇(Nutr. Metab. Cardiovasc. Dis.,2003年4月；13(2):104-13)、3'-甲氧基-4'-硝基黃酮(Biochem. Pharmacol.,2007年5月15日；73(10):1622-34,Epub 2007年1月30日)及6-甲基-1,3,8-三氯二苯并呋喃(Cancer Res.,2004年4月15日；64(8):2889-97)。AHR活性抑制劑係指一種可使AHR活性降低至如在活化條件下所觀測到之AHR轉錄活性之至少10%、20%、30%、50%、60%、70%、80%或至少90%的化合物。一種量測AHR抑制活性之檢定例如為如實例中所描述的1,4-二氧雜環己二烯誘導之AHR依賴性螢光素酶報導基因檢定。在一個實施例中，AHR活性抑制劑為一種EC50小於10M、較佳小於5M(如以1,4-二氧雜環己二烯誘導之AHR依賴性螢光素酶報導基因檢定所量測)之化合物。
AHR為調節人類中各種基因之轉錄的轉錄因子。在一個實施例中，AHR路徑之下游效應子為轉錄含量直接由AHR調節之基因。該等基因之實例係選自Cyp1B1、Cyp1A1及AHRR。AHR亦在異物酶誘導中在其經充分表徵之作用範圍以外的路徑中發揮作用。AHR之異物配位體已顯示出調節β索烴素、STAT5、STAT1、HES-1、c-Myc、C/EBP、PU.l、β-索烴素、p21、P27、pRb、脫氧核苷酸轉移酶、CXCR4及其趨化因子配位體CXCL12(SDF-1)。
在一個特定實施例中，能夠下調芳基烴受體之活性及/或表現的藥劑為如[發明內容]中所定義之化合物。
在另一個實施例中，能夠下調芳基烴受體之活性及/或表現的藥劑為反義寡核苷酸或小干擾RNA分子(siRNA)，其能夠下調AHR蛋白表現或一個以上AHR下游效應子之蛋白表現。
可用於有效地抑制AHR蛋白表現之反義寡核苷酸之設計必須以如下方式實現：該等寡核苷酸以抑制細胞內之指定mRNA轉譯之方式與其特異地結合。適用於設計及合成反義寡核苷酸(其與AHR mRNA、基因組DNA及/或其啟動子或其他控制序列特異地結合)之序列可得自AHR(詳言之，人類AHR)之公開序列。此外，亦可利用基於可說明標靶mRNA與寡核苷酸之結構變化之能量學的熱力循環來識別對標靶mRNA具有最高預期結合親和性之序列的演算法。
適用於本發明之RNAi分子的合成可如下實現：首先，掃描AA-二核苷酸序列之AUG起始密碼子下游的AHR mRNA序列(或者一或多個其下游效應子)。各AA及19個3'-鄰位核苷酸之出現處記錄為潛在siRNA標靶位點。其次，使用任何序列比對軟體將潛在標靶位點與適當基因組資料庫(例如人類、小鼠、大鼠等)相比較。濾出展現與其他編碼序列明顯同源的推定標靶位點。較佳序列因而為包括低G/C含量之彼等序列，尤其G/C含量低於55%之序列。接著，沿標靶基因之長度選擇若干標靶位點。識別siRNA之推定標靶位點的方法或演算法係例如描述於(Tilesi,等人，Curr. Opin. Mol. Ther. 11:156,2009)中。能夠下調AHR之表現的siRNA分子之實例為：AHR 111S，5' GCGGCA TAG AGA CCG ACT TAA TTT CAA GAG AAT TAA GTC GGT CTC TAT GCC GCT TTT TTG G 3'；AHR 111AS，5'CGC GCC AAA AAA GCG GCA TAG AGA CCG ACT TAA TTC TCT TGA AAT TAA GTC GGT CTC TAT GCC GC 3'；AHR 242S，5'GGC TTC TTT GAT GTT GCA TTA ATT CAA GAG ATT AAT GCA ACA TCA AAG AAG CCT TTT TTG G 3'；AHR 242AS，5'CGC GCC AAA AAA GGC TTC TTT GAT GTT GCA TTA ATC TCT TGA ATT AAT GCA ACA TCA AAG AAG CC 3'。
包含造血幹細胞之起始細胞群體將由熟習此項技術者視所設想之用途而定來選擇。在此項技術中已描述包含造血幹細胞之各種細胞來源，包括骨髓、周邊血液、新生兒臍帶血、胎盤或其他來源，諸如肝，尤其胎兒之肝。
細胞群體可首先經受富集或純化步驟，包括基於特異性細胞標記對細胞作陰性選擇及/或陽性選擇，以便提供起始細胞群體。基於特異性細胞標記分離該起始細胞群體的方法可能使用螢光激活細胞分選(FACS)技術(其亦稱為流式細胞測量術)或者固體或不溶性基底，可與特異性細胞表面標記相互作用之抗體或配位體與該基底結合。例如，可使細胞與含有抗體之固體基底(例如，珠粒管柱、燒瓶、磁粒子)接觸，且除去任何未結合之細胞。當使用包含磁珠粒或順磁珠粒之固體基底時，與珠粒結合之細胞可容易地用磁力分離器來分離。
在一個實施例中，該起始細胞群體富含理想之細胞標記表型(例如CD34+、CD133+、CD90+)，或以諸如若丹明(rhodamine；Hoechst)之染料流出或醛脫氫酶活性為基礎。在一個特定實施例中，該起始細胞群體富含CD34+細胞。使血細胞群體富含CD34+細胞之方法包括由Miltenyi Biotec出售之套組(CD34+直接分離套組，Miltenyi Biotec，Bergisch，Gladbach，Germany)或Baxter出售之套組(Isolex 3000)。
單胎臍帶血之量通常不足以治療成年人或年齡稍大之兒童。使用本發明化合物或能夠下調芳基烴受體及/或芳基烴受體路徑之下游效應子之活性及/或表現的藥劑之增加方法的一個優勢在於其使得僅自一個臍帶血單位產生足量造血幹細胞成為可能。
因此，在一個實施例中，起始細胞群體源自於已富含CD34+細胞之新生兒臍帶血細胞。在一個相關實施例中，該起始細胞群體源自於一或兩個臍帶血單位。
在另一個實施例中，起始細胞群體源自於已富含CD34+細胞之人類活動之周邊血液細胞。在一個相關實施例中，該起始細胞群體源自於僅自一個患者分離之人類活動之周邊血液細胞。
該起始細胞群體較佳可含有至少50% CD34+細胞，在一些實施例中，可含有超過90%之CD34+細胞，且可包含介於105個與109個之間的有核細胞。
起始細胞群體可直接用於增加，或經冷凍及儲存供日後使用。
用於培養起始細胞群體以增加造血幹細胞之條件將尤其視起始細胞群體、所要最終細胞數目及所要最終HSC比例而變化。
在一個特定實施例中，詳言之，其中使用來自富含CD34+細胞之臍帶血細胞之起始細胞群體，培養條件包含使用此項技術眾所周知的用於增加造血幹細胞之其他細胞激素及生長因子。該等細胞激素及生長因子包括而不限於IL-1、IL-3，IL-6、IL-11、G-CSF、GM-CSF、SCF、FlT3-L、血小板生成素(TPO)、紅血球生成素、及其類似物。如本文中所使用，「類似物」包括具有生物活性且作為天然存在形式的細胞激素及生長因子之任何結構變異體，其包括而不限於與天然存在形式相比生物活性增加或降低之變異體，或細胞激素受體促效劑，諸如針對TPO受體之促效劑抗體(例如，如專利公開案WO 2007/145227中詳細描述之VB22B sc(Fv)2，及類似物)。選擇細胞激素及生長因子組合以增加HSC及祖細胞，同時限制末端分化細胞之產生。在一個特定實施例中，一或多種細胞激素及生長因子係選自由SCF、Flt3-L及TPO組成之群。在一個特定實施例中，至少TPO係在適合HSC增加之條件下用於不含血清之培養基中。在一個相關實施例中，IL6、SCF、Flt3-L及TPO之混合物係與本發明化合物或能夠下調芳基烴受體及/或芳基烴受體路徑之下游效應子之活性及/或表現的藥劑組合而用於增加HSC之方法中。
已描述人類IL6或介白素-6(亦稱為B細胞刺激因子)(Kishimoto,Ann. review of Imm. 23:1 2005)，且其可得自市面。已描述人類SCF或幹細胞因子(亦稱為c-Kit配位體、肥大細胞生長因子或Steel因子)(Smith,MA等人，ACTA Haematologica,105,3:143,2001)，且其可得自市面。Flt3-L或FLT-3配位體(亦稱為FL)為與flt3受體結合之因子。已描述該配位體(Hannum C,Nature 368(6472): 643-8)，且其可得自市面。已描述TPO或血小板生成素(亦稱為巨核細胞生長因子(MGDF)或c-Mpl配位體)(Kaushansky K(2006). N. Engl. J. Med. 354(19): 2034-45)，且其可得自市面。
HSC之增加可能在基本培養基中進行，該培養基補充有上述細胞激素及生長因子之混合物。基本培養基通常包含胺基酸、碳源、維他命、血清蛋白(例如白蛋白)、無機鹽、二價陽離子、緩衝液及適用於增加HSC之任何其他元素。該適合於增加HSC之方法的基本培養基之實例包括而不限於 SFEM-無血清增加培養基(StemCell Technologies，vancouver，Canada)、 H3000-確定成分培養基(StemCell Technologies，vancouver，Canada)、 SCGM(CellGenix，Freiburg Germany)、StemPro-34 SFM(Invitrogen)。
在一個實施例中，在該起始細胞群體之擴增方法期間，在適合於HSC增加之濃度下投與本發明化合物或能夠下調芳基烴受體及/或芳基烴受體路徑之下游效應子之活性及/或表現的藥劑。在一個特定實施例中，以包含介於1pM與100M之間，例如介於10pM與10M之間或介於100pM與1M之間的濃度投與該化合物或AhR調節劑。
在起始細胞群體基本上由來自一或兩個臍帶血單位之富含CD34+之細胞組成的一個特定實施例中，細胞係在適於HSC增加之條件下生長約3天至約90天，例如介於7天與2天之間；及/或直至獲得所指示倍數之增加及特徵細胞群體。在一個特定實施例中，細胞在適於HSC增加之條件下生長不超過21天、14天或7天。
在一個實施例中，培養起始細胞群體經足以使CD34+細胞之絕對數目達到至少105、106、107、108或109個細胞之時間。在另一個實施例中，培養該起始細胞群體經足以使CD34+細胞增加10至50000倍(例如，介於100倍與10000倍增加之間)之時間。
在增加方法之後所獲之細胞群體可不經進一步純化即使用，或可經受進一步純化或選擇步驟。
接著，可洗滌細胞群體以除去發明化合物，或能夠下調芳基烴受體及/或芳基烴受體路徑之下游效應子之活性及/或表現的任何其他藥劑，及/或細胞培養物之任何其他組分，且再懸浮於適當細胞懸浮培養基中供短期使用，或再懸浮於長期儲存培養基中，例如適合極冷保藏之培養基。
具有由增加方法獲得的經增加之HSC的細胞群體及治療組合物
本發明進一步提供一種具有經增加之HSC的細胞群體，其可藉由上述增加方法獲得，或係藉由上述增加方法獲得。在一個特定實施例中，該細胞群體係再懸浮於適合於投與哺乳動物宿主的醫藥學上可接受之介質中，從而提供治療組合物。
如[發明內容]中所定義之化合物或能夠下調芳基烴受體及/或芳基烴受體路徑之下游效應子之活性及/或表現的藥劑可實現HSC之增加(例如，僅自一或兩個臍帶血單位發生增加)，以定量且定性地提供適合於有效地短期及長期植入有需要之人類患者體內的細胞群體。詳言之，本發明係關於一種組合物，其包含具有經增加之HSC且源自於不超過一或兩個臍帶血單位的細胞群體，其中該治療組合物含有總量為至少105、106、107、108或109個細胞之細胞，其中細胞總數之20%至100%(例如，40%至80%)係CD34+細胞。在一個相關實施例中，該組合物所含之細胞總數的0.1%至40%(例如0.1%至10%)係CD34+ Thy1+，且20%至80%細胞為CD34+ CD45RA+。在一些特定實施例中，該組合物所含之10%至95%細胞係CD38+，且所含之5%至70%細胞係CD133+。
治療組合物之用途
本發明進一步提供具有經增加之HSC的細胞群體或其組合物，其係用於哺乳動物個體之同種異體或自體幹細胞移植。
本文中所提及之個體為例如骨髓供體，或者血細胞含量耗竭或有限之個人或處於血細胞含量耗竭或有限之風險下的個人。個體視情況為骨髓採集之前的骨髓供體或骨髓採集之後的骨髓供體。個體視情況為骨髓移植之受體。本文所述之方法尤其適用於具有有限骨髓儲備之個體，諸如年長個體，或者例如為治療白血病或淋巴瘤而先前暴露至免疫耗竭治療或摧毀性治療(諸如化學療法)的個體。個體視情況具有較低血細胞含量，或處於發展血細胞含量降低(與對照血細胞含量相比)之風險下。如本文中所使用，術語對照血細胞含量係指在改變個體之血細胞含量的事件之前或在實質上不存在改變個體之血細胞含量的事件的情況下，個體之平均血細胞含量。改變個體之血細胞含量的事件包括例如貧血、外傷、化學療法、骨髓移植及放射療法。例如，個體患有貧血，或因為(例如)外傷而失血。
經擴增之HSC群體或包含該具有經增加之HSC之細胞群體的組合物係在例如化學療法、放射療法或骨髓移植之前、同時或之後投與個體。個體視情況患有例如與特徵為骨髓損失或骨髓耗竭之先天性、遺傳性或獲得性症候群相關的骨髓耗竭。因而，個體視情況為需要造血之個體。個體視情況為骨髓供體，或患有骨髓耗竭之個體或處於骨髓耗竭之風險下的個體。
造血幹細胞操作方法可用作化學療法或放射療法之補充治療。例如，使HSC集中於周邊血液處，且接著自將進行化學療法之個體分離，且在治療之後使該等細胞返回。因而，個體為正進行或預期將進行免疫細胞耗竭治療(諸如化學療法、放射療法)的個體，或充當骨髓移植之供體的個體。骨髓為體內最具增殖性之組織之一，且因此往往為最先受化學療法藥物及輻射損傷之器官。結果為血細胞製造在化學療法或輻射治療期間被快速損傷，且必須中止化學療法或輻射以允許造血系統在患者再經受化學療法治療之前補給血細胞供應。因此，如本文所述，藉由本文所述之方法製造的HSC或血細胞視情況投與該等需要附加血細胞之個體。
提供藉由本發明化合物或能夠下調芳基烴受體及/或芳基烴受體路徑之下游效應子之活性及/或表現的藥劑所增加之HSC，或具有如上文所述之經增加HSC合併能夠增加活體內、活體外或離體之HSC增殖的治療劑(例如，小分子、抗體，或類似物)及視情況選用之至少一種醫藥學上可接受之賦形劑或載劑的組合物。能夠增加HSC增殖之治療劑意謂：針對TPO受體之促效劑抗體(例如，如專利公開案WO 2007/145227中詳細描述之VB22B sc(Fv)2及類似物)；細胞激素，諸如SCF、IL-6、Flt-3配位體、TPO或TPO擬似物(例如於WO/2007/022269；WO/2007/009120；WO/2004/054515；WO/2003/103686；WO/2002/085343；WO/2002/049413；WO/2001/089457；WO/2001/039773；WO/2001/034585；WO/2001/021180；WO/2001/021180；WO/2001/017349；WO/2000/066112；WO/2000/035446；WO/2000/028987；WO/2008/028645中所描述；及類似物)；粒細胞群落刺激因子(G-CSF)；顆粒球巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)；前列腺素或前列腺素受體促效劑(例如前列腺素E2受體-1(EP-1)促效劑、前列腺素E2受體-2(EP-2)促效劑、前列腺素E2受體-3(EP-3)促效劑及前列腺素E2受體-4(EP-4)促效劑，如專利公開案WO/2008/073748中所詳細描述)；四乙烯五胺(TEPA)；Notch配位體(Δ-1)；及/或WNT促效劑。此外，培養幹細胞與間葉幹細胞(MSC)可預防移植物對抗宿主疾病(GVHD)，且可能有助於幹細胞增加。MSC及幹細胞可作為整體培養物進行移植。
醫藥學上可接受意謂在生物學上或其他方面並非不理想的物質，亦即，該物質可投與個體或細胞而不會造成不理想的生物學效應或以有害方式與含有該物質之醫藥組合物中的其他組分相互作用。選擇載劑或賦形劑以將活性成分之降解減至最低，且將個體或細胞中之不良副作用減至最少。
組合物係以任何習知方式調配以用於本文所述之方法中。投藥係經由一般熟習此項技術者已知的任何有效途徑。例如，組合物係經口、非經腸(例如靜脈內)、藉由肌肉內注射、藉由腹膜內注射、經皮、經體外、經鼻或局部投與。
較佳投藥方法為靜脈內輸注。所輸注之細胞數目應考慮諸如性別、年齡、體重、疾病或病症類型、病症階段、所要細胞在細胞群體中之百分比、及產生治療效益所需之細胞量等因素。在一個特定實施例中，組合物係藉由靜脈內輸注投與，且包含至少104個細胞/公斤，必要時105至5.107個細胞/公斤或以上。在一個特定實施例中，所輸注之細胞均源自於增加之單胎臍帶血細胞。
用於輸注包含細胞之組合物於患者的醫藥學上可接受之載劑通常包含具有5% HSA之緩衝鹽水或無補充之基本培養基或此項技術已知之培養基。
對於經口投藥，組合物呈例如錠劑或膠囊形式，藉由習知方法與醫藥學上可接受之賦形劑製得，該等賦形劑諸如黏合劑(例如預膠化玉米澱粉、聚乙烯吡咯啶酮或羥基丙基甲基纖維素)；填充劑(例如乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)；潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石粉或二氧化矽)；崩解劑(例如馬鈴薯澱粉或羥基乙酸澱粉鈉)；或潤濕劑(例如硫酸月桂酯鈉)。錠劑係藉由此項技術眾所周知的方法包衣。經口投藥之液體製劑呈例如溶液、糖漿或懸浮液形式，或者可以乾產物存在，在使用之前以水或其他適合媒劑復原。該等液體製劑係藉由習知方法以醫藥學上可接受之添加劑製備，該等添加劑諸如懸浮劑(例如，山梨糖醇糖漿、纖維素衍生物或氫化食用脂肪)；乳化劑(例如，卵磷脂或阿拉伯膠)；無水媒劑(例如，杏仁油、油狀酯、酒精或分餾植物油)；及防腐劑(例如，甲基-對-羥基苯甲酸酯或丙基-對-羥基苯甲酸酯，或山梨酸)。該等製劑適當時視情況含有緩衝鹽、調味劑、著色劑及甜味劑。
組合物經調配以供藉由注射進行非經腸投藥，例如藉由快速注射或連續輸注。供注射之調配物係以單位劑型存在，例如含添加防腐劑或不含添加防腐劑之安瓿或多劑量容器。該等組合物可呈諸如於油性或水性媒劑中之懸浮液、溶液或乳液之形式，且可能含有調配劑，諸如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑。或者，活性成分呈在使用前以適合媒劑(例如，無菌無熱原水)復原之粉末形式。通常，水、適合之油、鹽水、右旋糖(葡萄糖)水溶液，及相關糖溶液以及二醇(諸如丙二醇或聚乙二醇)為非經腸溶液之適合載劑。供非經腸投藥之溶液含有例如活性成分之水溶性鹽、適合之穩定劑及必要時選用之緩衝物質。單獨使用或經組合之抗氧化劑(諸如硫酸氫鈉、亞硫酸鈉或抗壞血酸)為適合之穩定劑。又，視情況使用檸檬酸及其鹽及乙二胺四乙酸(EDTA)鈉。此外，非經腸溶液視情況含有防腐劑，諸如氯化苯甲烴銨、甲基-對羥基苯甲酸酯或丙基-對羥基苯甲酸酯及氯丁醇。適合之醫藥載劑描述於Remington:The Science and Practice of Pharmacy，第21版，David B. Troy,編,Lippicott Williams & Wilkins(2005)中，其中至少與醫藥載劑及組合物相關之物質係以全文引用之方式併入本文中。
組合物視情況調配成儲存製劑。該等長效調配物視情況藉由植入進行投藥。因而，例如該等組合物係用適合之聚合物質或疏水性物質調配(例如調配成於可接受之油中的乳液)或用離子交換樹脂調配，或調配成微溶性衍生物，例如調配成微溶性鹽。該等組合物係與外科植入同時或在外科植入之後塗覆至植入物或包埋於植入物中。
此外，採用標準醫藥學方法控制作用持續時間。此等包括緩釋製劑及適合巨分子，例如聚合物、聚酯、聚胺基酸、聚乙烯、吡咯烷酮、乙烯-乙酸乙烯、甲基纖維素、羧甲基纖維素或硫酸魚精蛋白。可調節巨分子之濃度以及併入方法以控制釋放。藥劑視情況併入聚合物質(諸如聚酯、聚胺基酸、水凝膠、聚(乳酸)或乙烯-醋酸乙烯共聚物)之顆粒中。除了併入之外，此等藥劑視情況亦用於將化合物封閉在微膠囊中。
用於本文所述之方法中的組合物視情況調配成持續釋放調配物或定時釋放調配物。該等持續釋放調配物及/或定時釋放調配物係藉由一般熟習此項技術者眾所周知的持續釋放構件或遞送器件製造。該等組合物係用於緩慢釋放或持續釋放一或多種活性成分，其係藉由使用例如羥丙基甲基纖維素、其他聚合物基質、凝膠、可滲透膜、滲透系統、多層包衣、微粒、脂質體、微球體或其組合來以不同比例提供所要釋放概況。選擇適合之持續釋放調配物供與本文所述之組合物一起使用。因而，使用適合經口投藥之單一單位劑型，諸如但不限於錠劑、膠囊、凝膠膠囊、扁膠囊、經改適供持續釋放之粉末。
該等組合物視情況藉由緩釋系統遞送。例如，組合物係藉由使用靜脈內輸注、可植入滲透泵、脂質體，或其他投藥模式進行投藥。緩釋系統係置於標靶附近。
視情況需要局部投與組合物，亦即，向需要治療之區域投與組合物。例如，組合物係藉由注射至例如長骨之骨髓中來進行投藥。局部投藥係藉由例如手術過程中之局部輸注、局部施用(例如在手術之後連同繃帶一起)、注射、導管、栓劑或植入物而達成。植入物係由有孔、無孔或凝膠狀物質製成，包括膜(諸如矽橡膠膜)或纖維。
本文所述之醫藥組合物係藉由任何適用之習知方法投與，從而與藥物一起用作個別治療活性成分或用於治療活性成分之組合中。其視情況單獨投與，但通常與根據所選投藥途徑及標準醫藥實務而選擇之醫藥載劑一起投與。
本文所述之化合物係以醫藥學上可接受之形式提供，包括醫藥學上可接受之鹽及其衍生物。術語醫藥學上可接受之形式係指包括本文所述之化合物的組合物，其通常為安全、相對無毒，且在生物學上或其他方面並非不理想的。此等組合物視情況包括醫藥學上可接受之載劑或安定劑，在所採用之劑量及濃度下，該等載劑或安定劑對暴露於其下的細胞或個體不具毒性。生理學上可接受之載劑的實例包括緩衝液，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯足酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天門冬醯胺酸、精胺酸或離胺酸；單糖、二糖及其他糖，包括葡萄糖、甘露糖，或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖醇，諸如甘露糖醇或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；及/或非離子型界面活性劑，諸如TWEENTM(Uniqema，United Kingdom)、聚乙二醇(PEG)，及PLURONICSTM(BASF，Germany)。
術語醫藥學上可接受之酸性鹽及衍生物係指保持所描述之生物學效應及性質且在生物學上或其他方面並非不理想的本文所述之式I化合物之鹽及衍生物。醫藥學上可接受之鹽係與例如無機酸(諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及類似酸)及有機酸(諸如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、順丁烯二酸、丙二酸、丁二酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸及類似酸)形成。
包含式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽或酯之組合物的化學穩定性係藉由熟習此項技術者已知的方法增強。例如，以有效增強化合物化學穩定性之量向含有式I化合物之組合物中添加聚甲氧基化山梨糖醇之烷酸酯(聚山梨酸酯)。
獲自細胞培養檢定及動物研究之資料視情況用於調配供用於人類之劑量範圍。該等化合物之劑量較佳處於幾乎不包括毒性或不包括毒性之循環濃度範圍內。劑量根據所採用之劑型及所利用之投藥途徑在此範圍內變化。對於所提供方法中使用之任何化合物，均可根據細胞培養檢定初步估計治療有效劑量。
本文亦提供包含裝有一或多種本文所述之成分之一或多個容器的包裝或套組。該等套組在有需要或要求時視情況包含溶液及緩衝液。套組視情況包括藉由上述方法製造的經增加之幹細胞群體，或可含有用於製造經擴增之HSC群體的容器或組合物。詳言之，本發明提供用於在離體增加造血幹細胞的套組，其包含如[發明內容]中所定義之化合物及在HSC增加方法中使用該組合物之說明書，及視情況存在之一或多種細胞激素或生長因子，或供細胞生長之培養基，詳言之，供造血幹細胞生長之培養基，如上文所述。該套組可進一步包含用於監控細胞產生之抗體，諸如抗CD34抗體、抗CD133抗體、抗CD38抗體、抗CD45RA抗體及/或抗Thy1抗體。在一個特定實施例中，該套組進一步包括一或多種選自由IL6、FLT3-L、SCF及TPO組成之群的細胞激素或生長因子。該(等)包裝或套組視情況聯合使用說明書。
亦提供用於提供有效量之本發明化合物以增加個體之HSC的套組，其包含一或多個劑量化合物供使用一段時間，其中該套組中本發明化合物之總劑量數與足以增加個體之HSC的有效量相等。該時間段為約1天至數天、數週或數月。因而，該時間段為至少約5、6、7、8、10、12、14、20、21、30或60天或60天以上，或介於1天與99天之間的任何天數。
製備本發明化合物之方法
本發明亦包括製備本發明化合物之方法。在所描述之反應中，可能需要保護反應性官能基以避免其不必要地參與反應，該等反應性官能基例如，羥基、胺基、亞胺基、硫基或羧基，其中在最終產物中需要該等基團。可根據標準作法使用習知保護基，例如，參見T.W. Greene及P. G. M. Wuts之「Protective Groups in Organic Chemistry」,John Wiley and Sons,1991。
以下反應流程1-5詳細描述本發明化合物之製備。熟習此項技術者應瞭解，基團R1、R2、R3、R4及L1中之任一者在用以下詳述之方法引入後可視情況利用已知轉化反應而進一步精製以獲得所要之最終式I化合物。
可根據以下反應流程1製備式I化合物：
其中G1、G2、G3、G4、R1、R2及R4如[發明內容]中對於式I所定義，且式I之L在該反應流程中係定義為-NH-L1-，其相當於例如-NR5a(CH2)0-3-，其中R5a為氫，且-(CH2)0-3-為L1。
可藉由在適合催化劑(例如Pd2(dba)3或類似物)存在下，在適當配位體(例如氯化1,3-雙(2,4,6-三甲基苯基)咪唑鎓)、適合之鹼(例如CS2CO3或類似物)及適當溶劑(例如，1,4-二噁烷)存在下，在約80℃至100℃之溫度下，使式2化合物與式3化合物反應2至約48小時來製備式I化合物。而式2化合物可藉由在約室溫至約80℃之溫度下，使式4化合物與稍過量之式5胺化合物在適當溶劑(例如異丙醇)中反應來製備。可藉由在適合之鹼(例如氫化鈉或碳酸鉀)存在下，在約0℃至約80℃之溫度下，在適合溶劑(例如DMF)中用適合烷化劑7(其中X1為氯基、溴基、碘基，或磺酸酯基)烷化式6化合物來製備式4化合物。或者，可在光延條件(Mitsunobu condition)下，使用適合之醇R4-OH，在適合之膦(例如三苯基膦)及偶氮二羧酸酯(例如偶氮二甲酸二乙酯)存在下，在惰性溶劑(諸如THF或甲苯)中，在約0℃至約室溫之溫度下進行該反應。
亦可按照以下反應流程2製備式1a之化合物，其中G1為CR3，且其中所有其他G基均為N：
其中R1、R2、R3及R4如[發明內容]中對於式I所定義，且式I之L在該反應流程中係定義為-NH-L1-，其相當於例如-NR5a(CH2)0-3-，其中R5a為氫，且-(CH2)0-3-為L1。
可藉由在約室溫至約100℃之溫度下，使式8化合物與式5胺化合物在適當溶劑(例如，異丙醇)中反應來製備式I化合物。而式8化合物可藉由在適合催化劑(例如，Pd(Ph3P)4、Pd2(dba)3或類似物)存在下，視情況在適當配位體(例如氯化1,3-雙(2,4,6-三甲基苯基)咪唑鎓)、適合之鹼(例如CS2CO3或類似物)及適當溶劑(例如1,4-二噁烷)存在下，在約80℃至100℃之溫度下，使式9化合物與式3化合物反應2小時至約48小時來製備。而式9化合物可藉由在約50℃至100℃之溫度下，視情況在惰性溶劑存在下，使式10化合物與二碘甲烷、碘化銅(I)及亞硝酸烷酯(例如亞硝酸異戊酯)之混合物反應來製備。可藉由在適合之鹼(例如氫化鈉或碳酸鉀)存在下，在約0℃至約80℃之溫度下，在適合溶劑(例如DMF)中用適合烷化劑7(其中X1為氯基、溴基、碘基或磺酸酯基)烷化式11化合物來製備式10化合物。或者，可在光延條件下，使用適合之醇R4-OH，在適合之瞵(例如三苯瞵)及偶氮二羧酸酯(例如偶氮二甲酸二乙酯)存在下，在惰性溶劑(諸如THF或甲苯)中，在約0℃至約室溫之溫度下進行該反應。
可如以下反應流程3中所詳示製備式II化合物，其為式I化合物之子集，其中R1為N連接之雜環基或N連接之雜芳基：
G1、G2、G3、G4、R1、R2及R4如[發明內容]中對於式I所定義，且式I之L在該反應流程中係定義為-NH-L1-，其相當於例如-NR5a(CH2)0-3-，其中R5a為氫，且-(CH2)0-3-為L1。可藉由在過量環胺或帶有NH之雜環(例如經取代之吡唑、經取代之咪唑及類似物)存在下，在約50℃至約250℃之溫度下，視情況在鹼(諸如氫化鈉或DBU)存在下，使式2化合物與式20化合物反應約1小時至約24小時來製備式II化合物。
亦可按照以下反應流程4製備式10之化合物，其中G1為CR3，且其中所有其他G基均為N：
其中R3及R4如[發明內容]之式I所定義。可根據J. Med. Chem,1972,456及J. Med. Chem.,1992,4180中所描述之程序來製備式10化合物。視情況在酸(諸如乙酸)存在下，在約室溫至約150℃之溫度下，使式21之原酸酯化合物與式22之化合物反應約1小時至約24小時。而式22之化合物可藉由視情況在酸(諸如pTSA)或鹼(諸如三乙胺或DBU)存在下，在約50℃至約200℃之溫度下，使式23之化合物與式24之一級胺化合物反應來製備。
可如以下反應流程5中所詳示來製備式IV化合物：
其中G1、G2、G3、G4、R1及R2如[發明內容]中對於式I所定義，且式I之L在該反應流程中係定義為-NH-L1-，其相當於例如-NR5a(CH2)0-3-，其中R5a為氫，且-(CH2)0-3-為L1。R20及R21係獨立地選自氫及C1-4烷基。可藉由在適合溶劑(諸如THF或甲苯)中，在約-78℃至約50℃之溫度下用適合還原劑(諸如氫化鋰鋁或氫化二異丁基鋁)處理式III化合物來製備式IV化合物，其中R1為氫。完成反應需要約0.5小時至約16小時。可藉由在適合溶劑(諸如乙醚或四氫呋喃)中，在約-78℃至約50℃之溫度下用烷基鋰或格林納試劑(Grignard reagent)處理式III化合物來製備式IV化合物，其中R1為低碳烷基。完成反應需要約0.5小時至約16小時。
合成式I化合物之詳細實例可見於下文之實例中。
製造本發明化合物之其他方法
本發明化合物可藉由使該化合物之游離鹼形式與醫藥學上可接受之無機酸或有機酸反應而製備成醫藥學上可接受之酸加成鹽。或者，可藉由使該化合物之游離酸形式與醫藥學上可接受之無機鹼或有機鹼反應來製備本發明化合物之醫藥學上可接受之鹼加成鹽。或者，可使用初始物質或中間物之鹽來製備本發明化合物之鹽形式。
例如，4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基-乙基)苯酚(下文之實例1)之鹽形式係合成如下：甲磺酸鹽：在50℃下，使4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚游離鹼(0.60g；1.40mmol)溶解於12ml丙酮中。逐滴添加甲磺酸(0.137g；1.40mmol)。快速發生結晶。經約30分鐘使白色懸浮液冷卻至室溫。在室溫下攪拌漿液18小時並過濾。以三份丙酮(各6ml)洗滌固體，且首先在50℃/約10毫巴下乾燥約3小時，且接著在80℃/約10毫巴下乾燥約16小時。該物質之熔點為約233℃，且熔融焓為98g/J。所製得之物質在乾燥後損失0.2%。藉由熱重量分析術評估在暴露至相對濕度(80% rh)之後24小時期間的水吸收。觀測到0.4%之水吸收。
在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之甲磺酸鹽。在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之甲磺酸鹽，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：6.4、6.7、18.3、18.6、26.9；且在另一個實施例中，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：6.4、6.7、10.3、12.9、16.4、18.3、25.8、26.5、26.9。
在又一個實施例中，本發明提供實例1化合物之甲磺酸鹽，其具有本文圖3中所示之粉末X射線繞射圖案。
甲苯磺酸鹽：使4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚游離鹼(0.60g；1.40mmol)在50℃下溶解於12ml丙酮中。逐滴添加單水合對甲苯磺酸(0.271g；1.40mmol)於丙酮(1.2ml)中之溶液。在50℃下對該溶液接晶種，且快速發生結晶。經約30分鐘使懸浮液冷卻至室溫，並攪拌約18小時。過濾之後，以三份丙酮(各6ml)洗滌固體，且首先在50℃/約10毫巴下乾燥約3小時，且接著在80℃/約10毫巴下乾燥約16小時。該物質之熔點為約233℃，且熔融焓為88g/J。所製得之物質在乾燥後損失0.2%。藉由熱重量分析術評估在暴露至相對濕度(80% rh)之後24小時期間的水吸收。觀測到0.4%之水吸收。
在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之甲苯磺酸鹽。在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之甲磺酸鹽，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：6.2、13.3、16.7、19.5、25.4；且在另一個實施例中，其包含以下粉末X射線繞射峰：6.2、7.6、12.4、13.3、15.1、16.7、17.7、19.5、20.2、24.6、24.9、25.4、25.6。
在又一個實施例中，本發明提供實例1化合物之甲苯磺酸鹽，其具有本文圖4中所示之粉末X射線繞射圖案。
硫酸鹽：使4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚游離鹼(0.60g；1.40mmol)在約55℃下溶解於10ml丙酮及1ml水中。逐滴添加硫酸(0.280g；2.79mmol)於1ml水中之溶液。快速發生結晶。經約30分鐘使懸浮液冷卻至室溫，攪拌約18小時並過濾。以三份各6ml之丙酮洗滌濾餅，且首先在50℃/約10毫巴下乾燥約3小時，且接著在80℃/約10毫巴下乾燥約16小時。該物質之熔點為約224℃，且熔融焓為91g/J。所製得之物質在乾燥後損失低於0.05%。藉由熱重量分析術評估在暴露至相對濕度(80% rh)之後24小時期間的水吸收。觀測到0.2%之水吸收。
在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之硫酸鹽。在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之硫酸鹽，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：6.5、6.8、10.7、13.5、26.4、27.6；且在另一個實施例中，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：6.5、6.8、10.7、13.1、13.5、18.6、18.8、20.8、26.4、27.1、27.6。
在又一個實施例中，本發明提供實例1化合物之硫酸鹽，其具有本文圖6中所示之粉末X射線繞射圖案。
乙磺酸鹽：使4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚游離鹼(0.60g；1.40mmol)在50℃下溶解於12ml丙酮中。逐滴添加乙磺酸(0.155g；1.40mmol)。快速發生結晶。經約30分鐘使所得白色懸浮液冷卻至室溫。在室溫下攪拌懸浮液約18小時並過濾。以三份各6ml之丙酮洗滌固體，且首先在50℃/約10毫巴下乾燥約3小時，且接著在80℃/約10毫巴下乾燥約16小時。該物質之熔點為約231℃，且熔融焓為76g/J。所製得之物質在乾燥後損失0.6%。藉由熱重量分析術評估在暴露至相對濕度(80% rh)之後24小時期間的水吸收。觀測到0.05%之水吸收。
在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之乙磺酸鹽。在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之乙磺酸鹽，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：6.3、9.9、18.4、25.3、26.1；且在另一個實施例中，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：6.3、9.9、17.1、17.9、18.4、19.0、22.0、25.3、26.1、27.1。
在又一個實施例中，本發明提供實例1化合物之乙磺酸鹽，其具有本文圖8中所示之粉末X射線繞射圖案。
氫溴酸鹽：使4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚游離鹼(0.60g；1.40mmol)在65℃下溶解於6ml DMF中。逐滴添加48%氫溴酸(0.235g；1.40mmol)。經約30分鐘使該溶液冷卻至室溫。在55℃下添加晶種(seed)且緩慢發生結晶。在室溫下攪拌懸浮液約18小時並過濾。用4ml DMF/水1:1及6ml水洗滌固體。首先在50℃/約10毫巴下乾燥該鹽約3小時，且接著在80℃/約10毫巴下乾燥約16小時。該物質之熔點為約285℃，且熔融焓為119g/J。所製得之物質在乾燥後損失1.0%。藉由熱重量分析術評估在暴露至相對濕度(80% rh)之後24小時期間的水吸收。未觀測到水吸收。
在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之氫溴酸鹽。在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之氫溴酸鹽，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：7.0、25.9、26.8、27.9；且在另一個實施例中，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：7.0、11.4、13.3、21.4、23.4、25.9、26.4、26.8、27.9。
在又一個實施例中，本發明提供實例1化合物之氫溴酸鹽，其具有本文圖9中所示之粉末X射線繞射圖案。
乳清酸鹽：使4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚游離鹼(0.60g；1.40mmol)及乳清酸(0.222g；1.40mmol)在85℃下溶解於7.8ml NMP(1-甲基-2-吡咯啶酮)中。溶液冷卻至60℃，且逐滴添加6ml水經約5分鐘。經約30分鐘使所得白色懸浮液冷卻至室溫，並攪拌18小時。過濾之後，用兩份4ml NMP/水1:1及三份6ml水洗滌濾餅。首先在50℃/約10毫巴下乾燥該固體約3小時，且接著在80℃/約10毫巴下乾燥約16小時。該物質之熔點為約240℃，且熔融焓為130g/J。所製得之物質在乾燥後損失低於0.05%。藉由熱重量分析術評估在暴露至相對濕度(80% rh)之後24小時期間的水吸收。觀測到1.7%之水吸收。
在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之乳清酸鹽。在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之乳清酸鹽，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：7.1、16.3、19.2、23.5、25.6、26.9；且在另一個實施例中，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：7.1、14.4、16.3、18.6、19.2、21.7、23.0、23.5、25.6、26.9、28.7。
在又一個實施例中，本發明提供實例1化合物之乳清酸鹽，其具有本文圖10中所示之粉末X射線繞射圖案。
半反丁烯二酸鹽：使4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚游離鹼(0.60g；1.40mmol)在65℃下溶解於18ml甲醇中。添加反丁烯二酸(0.164g；1.40mmol)及6ml甲醇。經約30分鐘使該溶液冷卻至室溫。在60℃下添加一些晶種且緩慢發生結晶。在室溫下攪拌懸浮液18小時並過濾。以三份各6ml之甲醇洗滌固體，且首先在50℃/約10毫巴下乾燥約3小時，且接著在80℃/約10毫巴下乾燥約16小時。該物質之熔點為約232℃，且熔融焓為83g/J。所製得之物質在乾燥後損失低於0.05%。藉由熱重量分析術評估在暴露至相對濕度(80% rh)之後24小時期間的水吸收。觀測到0.3%之水吸收。
在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之半反丁烯二酸鹽。在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之半反丁烯二酸鹽，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：7.2、8.7、14.4、15.8、17.4、19.0、23.7；且在另一個實施例中，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：7.2、8.7、10.8、14.4、15.8、17.4、17.8、19.0、20.1、23.7、27.5。
在又一個實施例中，本發明提供實例1化合物之半反丁烯二酸鹽，其具有本文圖11中所示之粉末X射線繞射圖案。
苯磺酸鹽：使4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚游離鹼(0.60g；1.40mmol)在50℃下溶解於12ml丙酮中。逐滴添加苯磺酸(0.225g；2.79mmol)於1.2ml丙酮中之溶液。在48℃下添加晶種且緩慢發生結晶。經約30分鐘使懸浮液冷卻至室溫。在室溫下攪拌漿液約18小時並過濾。以三份各6ml之丙酮洗滌鹽，且首先在50℃/約10毫巴下乾燥約3小時，且接著在80℃/約10毫巴下乾燥約16小時。該物質之熔點為約219℃，且熔融焓為92g/J。所製得之物質在乾燥後損失0.3%。藉由熱重量分析術評估在暴露至相對濕度(80% rh)之後24小時期間的水吸收。觀測到約0.05%之水吸收。
在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之苯磺酸鹽。在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之苯磺酸鹽，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：6.2、7.7、17.7、25.5；且在另一個實施例中，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：6.2、7.7、15.2、16.7、17.1、17.7、19.8、20.2、24.9、25.2、25.5。
在又一個實施例中，本發明提供實例1化合物之苯磺酸鹽，其具有本文圖7中所示之粉末X射線繞射圖案。
萘二磺酸鹽：使4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚游離鹼(0.60g；1.40mmol)及0.259g 1,5-萘二磺酸(0.70mmol)在87℃下溶解於9ml DMF中。經約30分鐘使澄清溶液冷卻至室溫。在65℃下添加晶種且緩慢發生結晶。在室溫下攪拌懸浮液約18小時並過濾。用兩份4ml DMF/水1:1及三份6ml水洗滌固體。該鹽首先在50℃/約10毫巴下乾燥約3小時，且接著在80℃/約10毫巴下乾燥約16小時。該物質之熔點為約304℃，且熔融焓為83g/J。在107℃下觀察到顯著吸熱現象，此可能歸因於水之損失。所製得之物質在乾燥後損失6.1%。藉由熱重量分析術評估在暴露至相對濕度(80% rh)之後24小時期間的水吸收。觀測到小於0.05%之水吸收。
在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之萘二磺酸鹽。在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之萘二磺酸鹽，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：6.4、9.6、13.1、15.7、16.1、26.0；且在另一個實施例中，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：9.6、13.1、15.7、16.1、16.4、20.4、20.9、23.7、26.0、26.9。
在又一個實施例中，本發明提供實例1化合物之萘二磺酸鹽，其具有本文圖12中所示之粉末X射線繞射圖案。
鹽酸鹽：使4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚游離鹼(0.60g；1.40mmol)在55℃下溶解於12ml丙酮中。逐滴添加37%鹽酸(0.138g；1.40mmol)。快速發生結晶。經約30分鐘使白色懸浮液冷卻至室溫，並攪拌18小時。過濾之後，以三份各6ml之丙酮洗滌固體，且首先在50℃/約10毫巴下乾燥約3小時，且接著在80℃/約10毫巴下乾燥約16小時。該物質在約162℃下展現放熱現象，且焓為-13.8J/g。此現象可能歸因於固體轉化成更穩定之變型。接著，在約259℃下可見吸熱現象，且焓為99.7J/g。所製得之物質在乾燥後損失0.6%。藉由熱重量分析術評估在暴露至相對濕度(80% rh)之後24小時期間的水吸收。觀測到0.3%之水吸收。
在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之鹽酸鹽。在另一個實施例中，本發明提供實例1化合物之鹽酸鹽，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：6.1、7.0、19.8、26.1；且在另一個實施例中，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：6.1、7.0、18.1、19.8、24.7、26.1、27.0、27.7。
在又一個實施例中，本發明提供實例1化合物之鹽酸鹽，其具有本文圖5中所示之粉末X射線繞射圖案。
可分別自相應之鹼加成鹽或酸加成鹽形式製備本發明化合物之游離酸或游離鹼形式。例如，可藉由用適合之鹼(例如，氫氧化銨溶液、氫氧化鈉及類似物)處理而將呈酸加成鹽形式之本發明化合物轉化成相應游離鹼。可藉由用適合之酸(例如，鹽酸等)處理而將呈鹼加成鹽形式之本發明化合物轉化成相應游離酸。實例1化合物之硝酸鹽可使用熟習此項技術者已知之方法來製得。粉末X射線繞射圖案揭示於本文之圖2中。
可藉由在0至80℃下，在適合之惰性有機溶劑(例如乙腈、乙醇、二噁烷水溶液或類似物)中用還原劑(例如硫、二氧化硫、三苯瞵、硼氫化鋰、硼氫化鈉、三氯化磷、三溴化物或類似物)處理本發明化合物之N氧化物來製備呈未氧化形式之本發明化合物。
可藉由一般熟習此項技術者已知之方法(例如，更多細節請參見Saulnier等人，(1994),Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters，第4卷，第1985頁)製備本發明化合物之前藥衍生物。例如，可藉由使未經衍生之本發明化合物與適合之胺甲醯基化試劑(例如，1,1-醯氧基烷基氯甲酸酯，對硝基苯基碳酸酯或其類似物)反應來製備適當前藥。
可藉由一般熟習此項技術者已知之方法製備本發明化合物之受保護衍生物。可在T. W. Greene,「Protecting Groups in Organic Chemistry」，第3版，John Wiley and Sons,Inc.,1999中獲得可用以產生及除去保護基之技術的詳細描述。
在本發明方法中可便利地將本發明化合物製備為或形成為溶劑合物(例如，水合物)。本發明化合物之水合物可藉由使用有機溶劑(諸如1,4-二氧雜環己二烯、四氫呋喃或甲醇)，自水/有機溶劑混合物中再結晶而便利地製備。
可藉由使本發明化合物之外消旋混合物與光學活性拆分劑反應以形成一對非對映異構化合物、分離非對映異構體及回收光學純對映異構體來製備呈個別立體異構體形式之本發明化合物。雖然可使用本發明化合物之共價非對映異構衍生物來拆分對映異構體，但可分離之錯合物較佳(例如，結晶非對映異構鹽)。非對映異構體具有獨特之物理特性(例如，熔點、沸點、溶解性、反應性等)，且可藉由利用此等差異容易地分離。可藉由層析法，或較佳藉由基於溶解性之差異的分離/拆分技術來分離非對映異構體。接著，藉由不會引起外消旋之任何實用方法回收光學純對映異構體以及拆分劑。可用以自外消旋混合物拆分化合物之立體異構體之技術的更詳細之描述可見於Jean Jacques,Andre Collet,Samuel H. Wilen,「Enantiomers,Racemates and Resolutions」,John Wiley And Sons,Inc.,1981中。亦可藉由使用對掌性層析技術，詳言之，藉由使用HPLC或SFC層析使用對掌性固定相來製備呈個別立體異構體形式的本發明化合物。
如本文所包括之粉末X射線繞射譜係使用下列獲得：儀器穿透式(transmission geometry)Bruker D8 Vario；照射CuKα(30kV，40mA)；掃描範圍2°-40°(2θ值)；階躍時間90.3s。藉由使用儀器Perkin Elmer DSC7在40℃/分鐘之加熱速率下進行實例1非晶物質之差示掃描量熱測定(DSC)。
總之，式I化合物可藉由包括下列之方法製備：
(a)反應流程1至5之彼等方法；及
(b)視情況將本發明化合物轉化成醫藥學上可接受之鹽；
(c)視情況將本發明化合物之鹽形式轉化成非鹽形式；
(d)視情況將本發明化合物之未氧化形式轉化成醫藥學上可接受之N氧化物；
(e)視情況將本發明化合物之N氧化物形式轉化成至其未氧化形式；
(f)視情況自異構體混合物溶解本發明化合物之個別異構體；
(g)視情況將本發明化合物之非衍生化合物轉化成醫藥學上可接受之前藥衍生物；及
(h)視情況將本發明化合物之前藥衍生物轉化成其非衍生形式。
在未具體描述起始物質之製備的情況下，該等化合物為已知的，或可類似於此項技術中已知之方法或如下文之實例中所揭示來製備。
熟悉此項技術者應認識到，以上轉化反應僅代表製備本發明化合物之方法，且可類似地使用其他眾所周知的方法。
實例
本發明進一步以以下實例為例，但不受其限制，該等實例說明本發明之式I(實例)化合物之製備。
實例1 4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚
合成2,6-二氯-9-異丙基-9 H -嘌呤(b)：在室溫下，在攪拌下經2小時向溶解於無水DMF(5.0mL)中之2,6-二氯-9H-嘌呤(a)(6.0mmol)中緩慢添加氫化鈉(7.8mmol)。添加2-碘丙烷，且攪拌混合物16小時。濃縮混合物。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物，用己烷/EtOAc(20:1至3:1)溶離以獲得白色固體狀標題化合物。1H NMR(500MHz,CDCl’):δ8.15(s,1H),4.91(m,1H),1.63(d,6H)。
合成4-(2-(2-氯-9-異丙基-9 H -嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(c)：2,6-二氯-9-異丙基-9H-嘌呤(1.1mmol)與溶解於異PrOH(6ml)中之酪胺(1.16mmol)混合，且攪拌該混合物隔夜。濃縮反應混合物，且藉由矽膠管柱層析純化殘餘物，用己烷/EtOAc(5:1至1:2)溶離以獲得白色固體狀標題化合物。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ9.21(br,1H),8.49(s,1H),7.80(s,1H),7.10(d,2H),6.73(d,2H),4.87(m,1H),4.03(t,2H),3.01(t,2H),1.68(d,6H)；HRMS(EI)：C16H18ClN5O(M+H+)之計算值為332.1273，實驗值為332.1278。
合成4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9 H -嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(d)：經火焰乾燥之schlenk瓶裝有4-(2-(2-氯-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(0.62mmol)、硫茚-3-酸(0.94mmol)、pd2(dba)3(0.062mmol)、CS2CO3(1.25mmol)及氯化1,3-雙(2,4,6-三甲基苯基)咪唑鎓(0.125mmol)。該瓶以N2排空並回填，且添加無水1,4-二噁烷(2mL)。密封燒瓶，且在80℃下攪拌反應混合物24小時。濃縮反應混合物，且直接藉由矽膠管柱層析純化，用己烷/EtOAc(20:1至1:4)溶離以獲得淡黃色固體狀標題化合物。
或者，可按照以下進行實例1之合成：
合成2-(苯并[b]噻吩-3-基)-6-氯-9-異丙基-9H-嘌呤(b)：圓底燒瓶裝有6-氯-2-碘-9-異丙基-9H-嘌呤(在實例15c中製備，3.31g，0.0103mol)、苯并[b]噻吩-3-基酸(2.74g，0.0154mol)、及肆(三苯膦)鈀(0)(1.19g，0.0103mol)。向此混合物中添加甲苯(80ml)、乙醇(25ml)及碳酸鈉水溶液(2M，21ml)。密封燒瓶，且在90℃下攪拌反應混合物1小時。向經冷卻之混合物中添加水，該混合物用乙酸乙酯萃取。合併有機部分，經硫酸鈉乾燥，並濃縮。殘餘物係藉由矽膠管柱層析純化，用20%至50% EtOAc於己烷中溶離，以獲得固體狀標題化合物，該化合物自1:1甲醇/水中再結晶。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ=9.15(d,1H),8.85(s,2H),8.17(d,1H),7.62(t,1H),7.53(t,1H),5.06(m,1H),1.71(d,6H)；MS m/z 329.0(M+1)。
合成4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(c)：在壓力管中，將2-(苯并[b]噻吩-3-基)-6-氯-9-異丙基-9H-嘌呤(2.2g，0.0067mol)懸浮於無水2-丙醇(70mL)中。添加酪胺(1.01g，0.0074mol)。密封該管，且在85℃下加熱16小時。再添加酪胺(0.50g，0.0037mol)，且混合物在85℃下加熱48小時。濃縮反應。向殘餘物中添加碳酸氫鈉水溶液，該混合物用EtOAc萃取。合併之有機萃取物經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮。殘餘物係藉由矽膠管柱層析純化，用50%至85% EtOAc於己烷中溶離以獲得固體。該固體用甲醇研磨以提供灰白色固體狀標題化合物。
或者，可按照以下進行實例1之合成：
合成2,6-二氯-9-異丙基-9 H -嘌呤(b)：在10℃下，在攪拌下經1小時向溶解於無水DMF(5.0L)中之2,6-二氯-9H-嘌呤(a)(998g，5.28mol)添加氫化鈉(60%分散液，254g，6.35mol)。添加2-碘丙烷(1595g)，且在室溫下攪拌混合物24小時。添加水(5.0L)，且收集所得固體沈澱物並用水(500ml)及庚烷(2×2.5L)洗滌。粗製固體自乙酸異丙酯(2.1L)中結晶以獲得固體狀標題化合物。
合成4-(2-(2-氯-9-異丙基-9 H -嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(c)：在50℃下，向酪胺(593g)、三乙胺(262g)及異PrOH(5.0L)之攪拌混合物中逐份添加2,6-二氯-9-異丙基-9H-嘌呤(500g)。在該溫度下攪拌混合物4小時，接著濃縮反應混合物。殘餘物溶解於乙酸異丙酯(6.0L)中，且用20%棕檬酸溶液(2.0L)及水(2.0L)洗滌。濃縮有機層至乾燥，接著溶解於乙醇(2.0L)中，且再濃縮至乾燥。粗製固體自乙醇(3.2L)中結晶以獲得固體狀標題化合物。
合成4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(d)：4-(2-(2-氯-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(950g)、硫茚-3-酸(561g)、二氯雙(三苯膦)鈀(II)(10.1g)、碳酸鉀(791g)、水(3.25L)及DMA(3.25L)之混合物在氮氣氛圍下攪拌10分鐘。接著，在70℃下加熱攪拌之混合物14小時。添加乙酸乙酯(6.5L)及水(3.25L)，在50℃下通過矽藻土(125g)過濾混合物，用乙酸乙酯(1.0L)漂洗。分離各層，且水層在50℃下用額外之乙酸乙酯(7.5L)萃取。合併之有機層用水(3×2.5L)洗滌，接著蒸餾以除去約2.5L溶劑。添加四氫呋喃(2.5L)及二氧化矽結合硫矽膠(200g)。在70℃下攪拌混合物16小時，接著過濾，用乙酸乙酯(1.0L)洗滌襯墊。在大氣壓力下濃縮合併之濾液至約5L之體積，接著使混合物冷卻。收集所得固體，且用乙酸乙酯(2×1.0L)洗滌，以獲得標題化合物。
實例1化合物可使用甲苯/乙醇混合物而再結晶，且在室溫下用NaHCO3水溶液洗滌。
在另一個實施例中，本發明提供呈晶體形式變型A之實例1化合物，其中變型A包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：12.1、16.9、18.9、21.3；且在另一個實施例中，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：12.1、15.9、16.9、17.3、18.9、21.3、22.1、23.6、24.4、27.3。
在又一個實施例中，本發明提供呈固體形式變型A之實例1化合物，其包含以下粉末X射線繞射峰(角2θ以°計)：9.0、12.1、13.0、13.1、13.6、14.4、14.7、15.1、15.9、16.9、17.3、17.7、18.0、18.9、19.0、20.1、21.3、22.1、22.3、22.6、22.8、23.4、23.6、24.4、25.3、26.3、26.5、27.3、27.8、28.2、29.5、29.7、30.4、30.7、31.0、31.4、32.2、32.8、33.3、34.3、35.5、36.4、37.5、38.4、39.0、39.4。
在本文圖1中展示實例1化合物變型A之粉末X射線繞射圖案。實例1化合物之非晶物質係藉由加熱化合物直至熔化且退火/冷卻而在DSC(差示掃描量熱測定)坩堝中原位產生。冷卻循環之後，可觀察到玻璃態化，但在再加熱循環之後，在約70℃至75℃下此特徵更加明顯。DSC圖案展示於本文圖13中。
實例15 4-(2-(吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚
合成2-胺基-6-氯-9-異丙基-9 H -嘌呤(b)：在室溫下，經10分鐘向2-胺基-6-氯-9H-嘌呤(5.34g，31.5mmol)於無水DMF(50mL)中之攪拌懸浮液中逐份添加氫化鈉(1.5g於礦物油中之60%分散液，38mmol)。45分鐘之後，在冰浴中冷卻混合物，接著添加2-碘丙烷。除去冷卻浴，且經16小時使經攪拌混合物升溫至室溫。在冰中冷卻混合物，接著添加水。濃縮混合物，且用熱乙酸乙酯處理殘餘物。過濾經冷卻之混合物，且濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物，用0至50% EtOAc於己烷中溶離以獲得固體狀標題化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.83(s,1H),5.17(s,2H),4.71-4.66(m,1H),1.57(d,6H)。MS m/z 212.1(M+1)。
合成6-氯-2-碘-9-異丙基-9 H -嘌呤(c)：6-氯-9-異丙基-9H-嘌呤-2-胺(2.68g，12.7mmol)在室溫下溶解於THF(64mL)中。添加碘(1.61g，6.25mmol)、CH2I2(10.6mL)及CuI(1.27g，6.66mmol)。在室溫下攪拌混合物5分鐘。添加亞硝酸異戊酯(5.33mL)。反應混合物回流45分鐘，且接著冷卻至室溫。添加飽和碳酸氫鈉水溶液，且用EtOAc萃取混合物三次。用鹽水洗滌合併之有機相，用MgSO4乾燥，並濃縮。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物，用0至30%乙酸乙酯於己烷中溶離以獲得固體狀標題化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.09(s,1H),4.95-4.88(m,1H),1.65(d,6H)。MS m/z 323.0(M+1)。
合成6-氯-2-(吡啶-3-基)-9-異丙基-9 H -嘌呤(d)：圓底燒瓶裝有6-氯-2-碘-9-異丙基-9H-嘌呤(1.2g，3.7mmol)、吡啶-3-酸1,3-丙二醇環酯(0.91g，5.6mmol)及肆(三苯膦)鈀(0)(430mg，0.37mmol)。向此混合物中添加甲苯(60ml)、乙醇(6ml)及碳酸。鈉水溶液(2M，15ml)。密封燒瓶，且在80℃下攪拌反應混合物4小時。向經冷卻之混合物中添加水，該混合物用乙酸乙酯(50ml×3)萃取。合併有機部分，經硫酸鈉乾燥，並濃縮。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物，用30%至70% EtOAc於己烷中溶離以獲得固體狀標題化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.60(d,1H),8.90-8.87(m,1H),8.68(s,1H),8.67(d,1H),7.63-7.60(m,1H),5.12-5.05(m,1H),1.74(d,6H)。MS m/z 274.1(M+1)。
合成4-(2-(吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(e)：在壓力管中，將6-氯-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤(300mg，1.1mmol)懸浮於無水2-丙醇(40mL)中。添加酪胺(300mg，2.2mmol)。密封該管，且加熱至85℃歷時16小時。濃縮反應，且藉由矽膠管柱層析純化殘餘物，用0至70% EtOAc於己烷中溶離以獲得固體狀標題化合物。
實例123 4-(2-(9-異丙基-2-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚
微波反應管裝有4-(2-(2-氯-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(30mg，0.091mmol)、2-甲基-1H-咪唑(59mg，0.73mmol)及0.5ml NMP。經密封之管在微波照射下在240℃下加熱2小時。藉由逆相HPLC(C18管柱，用ACN-H2O 0、05% TFA溶離)純化反應混合物以獲得灰白色固體狀標題化合物。
實例128 4-(2-(2-(5-氯吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚
合成4-(2-(2-碘-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(b)：6-氯-2-碘-9-異丙基-9H-嘌呤(a)(1.0g，3.1mmol)、酪胺(0.64g，4.65mmol)、三乙胺(0.63g，6.2mmol)及2-丙醇(30mL)之混合物在85℃下加熱2小時。濃縮反應混合物且添加飽和碳酸氫鈉水溶液。用乙酸乙酯(50ml×3)萃取混合物。合併之有機層經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮。藉由矽膠管柱層析(25%至75%乙酸乙酯於己烷中之溶離液)純化殘餘物以獲得固體狀標題化合物。MS m/z 424.1(M+1)。
合成4-(2-(2-(5-氯吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(c)：按照實例15d之程序，使4-(2-(2-碘-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(b)與5-氯吡啶-3-基酸反應。藉由逆相HPLC(C18管柱，用ACN-H2O 0.05% TFA溶離)純化粗產物以獲得灰白色固體狀標題化合物。
實例134 4-(2-(6-(5-氟吡啶-3-基)-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺基)乙基)苯酚
合成4-(2-(6-氯-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺基)乙基)苯酚(b)：按照實例128b之程序，使4,6-二氯-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(US3399196)(a)(0.184g，0.795mmol)與酪胺反應。藉由矽膠層析(25%至75%乙酸乙酯於己烷中之溶離液)純化粗製殘餘物以獲得固體狀標題化合物。MS m/z 332.1(M+1)。
合成4-(2-(6-(5-氟吡啶-3-基)-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺基)乙基)苯酚(c)：按照實例15d之程序，使4-(2-(6-氯-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺基)乙基)苯酚(b)與5-氟吡啶-3-基酸反應。藉由逆相HPLC(C18管柱，用ACN-H2O 0.05% TFA溶離)純化粗製殘餘物以獲得灰白色固體狀標題化合物。
實例141 4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺基)乙基)苯酚
合成2,4-二氯-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(b)：按照實例15b之程序，使2,4-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.5g，2.67mmol)與2-碘丙烷反應。藉由矽膠層析(15%至25%乙酸乙酯於己烷中之溶離液)純化粗製殘餘物以獲得固體狀標題化合物。MS m/z 230.2(M+1)。
合成4-(2-(2-氯-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺基)乙基)苯酚(c)：按照實例128b之程序，使2,4-二氯-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(b)(0.278g，1.21mmol)與酪胺反應。藉由矽膠層析(25%至75%乙酸乙酯於己烷中之溶離液)純化粗製殘餘物以獲得固體狀標題化合物。MS m/z 331.1(M+1)。
合成4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺基)乙基)苯酚(d)：按照實例15d之程序，使4-(2-(2-氯-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺基)乙基)苯酚(20mg，0.06mmol)與5-氟吡啶-3-基酸反應。藉由逆相HPLC(C18管柱，用ACN-H2O 0.05% TFA溶離)純化粗製殘餘物以獲得灰白色固體狀標題化合物。
實例153 (R)-4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚
合成(R)-2,6-二氯-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤(b)：在-78℃下，用偶氮二甲酸二異丙酯(856mg，4.23mmol)處理5,7-2,6-二氯-9H-嘌呤(400mg，2.12mmol)、(S)-四氫呋喃-3-醇(88mg，2.5mmol)及三苯膦(1.0g，3.8mmol)於無水THF(30mL)中之溶液。使反應升溫至室溫，且攪拌16小時。添加飽和碳酸氫鈉水溶液，且用乙酸乙酯萃取混合物。合併有機層，經硫酸鈉乾燥，並濃縮。藉由矽膠層析(10%至80%乙酸乙酯於己烷中之溶離液)純化殘餘物以獲得由受氧化三苯膦(triphenylphosphoxide)污染之標題化合物組成的白色固體。MS m/z 258.0(M+1)。
合成(R)-4-(2-(2-氯-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(c)：按照實例128b之程序，使(R)-2,6-二氯-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤(b)與酪胺反應。藉由逆相製備型HPLC純化粗製反應混合物。MS m/z 360.1(M+1)。
合成(R)-4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚：按照實例15d之程序，使(R)-4-(2-(2-氯-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(c)與苯并[b]噻吩-3-基酸(22.3mg，0.125mmol)反應。藉由逆相製備型HPLC純化粗製殘餘物以獲得灰白色固體狀標題化合物。
實例157 2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇
合成2-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)丙酸甲酯(b)：於無水DMF(100mL)中之2,6-二氯-9H-嘌呤(5.0g，26.5mmol)、2-溴丙酸甲酯(5.3g，31.7mmol)及碳酸鉀(11.0g，79.4mmol)之混合物在100℃下加熱15小時。添加飽和碳酸氫鈉水溶液，且用乙酸乙酯(150ml×3)萃取反應。合併有機層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，並濃縮。藉由矽膠層析(10%至80%乙酸乙酯於己烷中之溶離液)純化殘餘物以獲得白色固體狀標題化合物。MS m/z 275.0(M+1)。
合成2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)丙酸甲酯(c)：2-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)丙酸甲酯(b)(600mg，2.2mmol)、色胺(420mg，2.6mmol)及2-丙醇(30mL)之混合物在密封管中於85℃下加熱16小時。反應混合物冷卻至室溫並濃縮。藉由矽膠層析(10%至80%乙酸乙酯於己烷中之溶離液)純化殘餘物以獲得白色固體狀標題化合物。MS m/z 360.1(M+1)。
合成2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙酸甲酯(d)：150ml壓力管裝有2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)丙酸甲酯(c)(300mg，0.75mmol)、5-氟吡啶-3-基酸(159mg，1.1mmol)、肆(三苯膦)鈀(0)(87mg，0.075mmol)、K3PO4(638mg，3.0mmol)，及無水二噁烷(15mL)。壓力管用氮氣充氣並密封，接著在130℃下在攪拌下加熱反應混合物6小時。向經冷卻之混合物中添加水，且混合物用乙酸乙酯(50ml×3)萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，並濃縮。藉由矽膠層析(10%至80%乙酸乙酯於己烷中之溶離液)純化殘餘物以獲得受少量氧化三苯膦污染之標題化合物。MS m/z 460.1(M+1)。
合成2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇：向2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙酸甲酯(282mg，0.61mmol)於無水THF(15mL)中之0℃溶液中逐份添加氫化鋰鋁(230mg，6.1mmol)。使攪拌之反應混合物經2小時升溫至室溫，接著小心添加水。用EtOAc(50ml×3)萃取混合物。合併有機部分，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，並濃縮。藉由矽膠管柱層析(0至5%溶劑B於二氯甲烷中；溶劑B=2M氨於甲醇中)純化殘餘物以獲得經部分純化之標題產物。此進一步經製備型TLC(5%溶劑B於二氯甲烷中)純化以獲得白色固體狀標題化合物。
實例157R及157S
(R)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇及
(S)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇
(R/S)-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇係藉由使用製備型對掌性HPLC在21×250mm Lux-Cellulose-2(Phenomenex)對掌性管柱上分成個別對映異構體。製備外消旋物於甲醇中之3mg/ml溶液，且以每次注射0.5ml溶液裝入管柱中。管柱用85/7.5/7.5己烷/乙醇/甲醇以20mL/min之流速溶離25分鐘。峰1及峰2分別在20分鐘及22.5分鐘溶離。分析型層析係在4.6×100mm Lux_Cellulose-2(Phenomenex)對掌性管柱上進行，用90/5/5己烷/乙醇/甲醇以1mL/min溶離20分鐘。峰1及峰2分別在17.45分鐘及18.14分鐘溶離。
實例157R
(R)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇
合成(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基-9-(1-(苯甲基氧基)丙-2-基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺(b)：在依次進行實例153b(使用2,6-二氯-9H-嘌呤及(S)-1-(苯甲基氧基)丙-2-醇作為反應物)、實例153c(使用色胺作為反應物)及實例153d(使用5-氟吡啶-3-基酸作為反應物)之程序之後，獲得標題化合物。
合成(R)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇(c)：在-78℃下，用BCl3(1M，2.9ml，2.9mmol)於DCM(10ml)中處理(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-(1-(苯甲基氧基)丙-2-基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺(b)(0.15g，0.29mmol)於DCM(10ml)中之溶液，歷時2小時。添加1N氫氧化鈉水溶液，且用DCM萃取混合物。合併之有機萃取物經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮，且藉由矽膠管柱層析(5% MeOH於DCM中之溶離液)純化殘餘物以獲得標題化合物。MS m/z 432.2(M+1)。
實例157S
(S)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇
按照實例157R之程序，但採用(R)-1-(苯甲基氧基)丙-2-醇替代(S)-1-(苯甲基氧基)丙-2-醇來製備標題化合物。MS m/z 432.2(M+1)。
實例161
4-(2-(6-(5-氟吡啶-3-基)-1-異丙基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基胺基)乙基)苯酚
合成4,6-二氯-1-異丙基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶(b)：按照實例15b之程序，使4,6-二氯-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶(J. Het. Chem. 1965,196-201)(0.19g，1.0mmol)與2-碘丙烷反應。藉由矽膠層析(25%至35%乙酸乙酯於己烷中之溶離液)純化殘餘物以獲得固體狀標題化合物。MS m/z 230.2(M+1)。
合成4-(2-(6-氯-1-異丙基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基胺基)乙基)苯酚(c)：4,6-二氯-1-異丙基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶(b)(40mg，0.17mmol)、酪胺(120mg，0.86mmol)及2-丁醇(2mL)之混合物在微波照射下在140℃下加熱8小時。濃縮混合物，且藉由逆相HPLC(C18管柱，用ACN-H2O 0.05% TFA溶離)純化殘餘物以獲得灰白色固體狀標題化合物。MS m/z 331.1(M+1)。
合成4-(2-(6-(5-氟吡啶-3-基)-1-異丙基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基胺基)乙基)苯酚(d)：5ml微波反應瓶裝有4-(2-(6-氯-1-異丙基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基胺基)乙基)苯酚(c)(17mg，0.051mmol)、5-氟吡啶-3-基酸(72mg，0.51mmol)及肆(三苯膦)鈀(0)(36mg，0.031mmol)。向此混合物中添加甲苯(1ml)、乙醇(0.5ml)及碳酸鈉水溶液(2M，0.5ml)。密封該瓶，且在微波照射下於140℃下攪拌反應混合物2小時。向經冷卻之混合物中添加水，該混合物用乙酸乙酯(5ml×3)萃取。合併有機部分，經硫酸鈉乾燥，並濃縮。藉由逆相HPLC(C18管柱，用ACN-H2O 0.05% TFA溶離)純化殘餘物以獲得灰白色固體狀標題化合物。
實例177
4-(2-(5-(5-氟吡啶-3-基)-3-異丙基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基胺基)乙基)苯酚
合成5,7-二氯-3-異丙基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(b)：按照實例15b之程序，使5,7-二氯-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(J. Med. Chem.,2007,50,828-834)(0.118g，0.624mmol)與2-碘丙烷反應。藉由矽膠層析(25%至35%乙酸乙酯於己烷中之溶離液)純化粗產物混合物以獲得標題化合物(主要)及異構產物之固體狀混合物。MS m/z 230.2(M+1)。
合成4-(2-(5-氯-3-異丙基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基胺基)乙基酚(c)：含有5,7-二氯-3-異丙基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(b)(40mg，0.17mmol)、酪胺(120mg，0.87mmol)及2-丙醇(2mL)之產物混合物在密封瓶中在140℃下加熱72小時。濃縮混合物，且藉由製備型TLC(1:2己烷/乙酸乙酯溶離液)純化殘餘物以獲得灰白色固體狀標題化合物。MS m/z 331.1(M+1)。
合成4-(2-(5-(5-氟吡啶-3-基)-3-異丙基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基胺基)乙基)苯酚(d)：按照實例161d之程序，使4-(2-(5-氯-3-異丙基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基胺基)乙基)苯酚(c)(15mg，0.047mmol)與5-氟吡啶-3-基酸反應。藉由製備型TLC(1:1己烷/乙酸乙酯溶離液)純化粗製殘餘物以獲得灰白色固體狀標題化合物。
藉由重複以上實例中所述之程序，使用適當起始物質，獲得如表1中經識別之以下式I化合物。
亦可如以下實例中所描述製備與本發明化合物相關之親和性探針化合物。
實例210
6-(5-((3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊醯胺基)己酸3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-1H-吲哚-5-基酯
合成6-胺基己酸3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-1H-吲哚-5-基酯(e)：向6-(第三丁氧基羰基胺基)己酸3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-1H-吲哚-5-基酯(a)(80mg，0.117mmol)於DCM(20ml)中之溶液中添加TFA(5ml)。在室溫下攪拌該反應物3小時。濃縮該反應物。添加碳酸鈉水溶液，且用DCM萃取混合物。合併有機部分，經硫酸鈉乾燥，且濃縮以獲得油狀產物。MS m/z 582.2(M+1)。
合成6-(5-((3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊醯胺基)己酸3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-1H-吲哚-5-基酯：向(+)-生物素(35mg，0.14mmol)及Et3N(36mg，0.35mmol)於DMF(1ml)中之溶液中添加HATU(90mg，0.24mmol)。攪拌該混合物10分鐘，且接著添加6-胺基己酸3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-1H-吲哚-5-基酯(b)(68mg，0.12mmol)於DMF(1ml)中之溶液。在室溫下攪拌反應混合物16小時，且接著濃縮。藉由逆相HPLC(C18管柱，用MeOH-H2O 0.05% TFA溶離)純化殘餘物以獲得灰白色固體狀標題化合物。實例210在%CD34+檢定中顯示EC50值為2.1μM。
實例211
6-(第三丁氧基羰基胺基)己酸3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-1H-吲哚-5-基酯
合成2-(苯并[b]噻吩-3-基)-6-氯-9-異丙基-9H-嘌呤(b)：按照實例15d之程序，使6-氯-2-碘-9-異丙基-9H-嘌呤(3.31g，0.0103mol)與苯并[b]噻吩-3-基酸反應。藉由矽膠層析(20%至50%乙酸乙酯於己烷中)純化粗產物以獲得固體狀標題化合物。MS m/z 329.0(M+1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ=9.15(d,1H),8.85(s,2H),8.17(d,1H),7.62(t,1H),7.53(t,1H),5.06(m,1H),1.71(d,6H)。
合成3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-1H-吲哚-5-醇(c)：按照實例15e之程序，使2-(苯并[b]噻吩-3-基)-6-氯-9-異丙基-9H-嘌呤(b)(80mg，0.243mmol)與血清素反應。濃縮反應混合物，接著添加碳酸氫鈉水溶液。用乙酸乙酯萃取混合物。合併有機部分，經硫酸鈉乾燥，並濃縮。藉由矽膠層析(0%至5% MeOH於DCM中之溶離液)純化殘餘物以獲得灰白色固體狀標題化合物。MS m/z 469.2(M+1)。
合成6-(第三丁氧基羰基胺基)己酸3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-1H-吲哚-5-基酯(d)：向3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-1H-吲哚-5-醇(55.5mg，0.119mmol)及6-(第三丁氧基羰基胺基)己酸(30mg，0.113mmol)於DCM(3ml)中之溶液中添加Et3N(24mg，0.237mmol)及HATU(90mg，0.237mmol)。在室溫下攪拌混合物16小時，且接著濃縮。添加水，且用乙酸乙酯萃取反應混合物。合併有機部分，經硫酸鈉乾燥，並濃縮。藉由矽膠層析(0%至5% MeOH於DCM中之溶離液)純化殘餘物以獲得灰白色固體狀標題化合物。
藉由重複以上實例中所描述之程序，使用適當起始物質，獲得如表2中經識別之以下親和性探針：
檢定
使用以下檢定來評估本發明化合物促進造血幹細胞(HSC)增加之活性。
對原代成人CD34+人類造血幹細胞(HSC)進行培養且加以篩選以識別可促進HSC增加之本發明化合物。針對所要表型(CD34表現)之存在分析該等細胞。本發明化合物以劑量依賴性方式促進HSC增加。
培養基：StemSpan SFEM培養基為不含血清之培養基(StemCell Technologies，Vancouver，BC)，其補充有以下人類重組細胞激素：血小板生成素、介白素-6、Flt-3配位體及幹細胞因子(均來自R&D Systems，Minneapolis，MN)，各自之最終濃度均為50ng/mL；以及媒劑(DMSO)或本發明化合物。
人類細胞培養：來自正常供體之新鮮人類白血球保有(leukophoresed)G-CSF動員周邊血液、來自成人骨髓之CD34+細胞及經極冷保藏之人類臍帶血CD34+細胞係購自AllCells(Berkeley，CA)。使用磁性細胞分選法(MACS，直接CD34祖細胞分離套組，Miltenyi Biotec，Bergisch Gladbach，Germany)自白血球保有G-CSF動員周邊血液富集人類CD34+細胞並極冷保藏。藉由流式細胞測量術檢測得知，CD34+細胞純度高於90%。解凍之後，藉由錐蟲藍排除法測出之細胞活力高於70%。離心經解凍之細胞，且再懸浮於StemSpan培養基中，然後加以等分以供即時培養。將細胞以104個細胞/毫升塗在每孔具有50μL培養基之384孔培養盤(Greiner Bio-One，Monroe，North Carolina)中，歷時7天。每7天將細胞轉移至更大之孔培養盤，且添加新鮮培養基以保持細胞密度介於104與5×105個細胞/毫升之間。在37℃下於5% CO2中培養細胞。為進行移植，在將細胞移植至小鼠中之前，於75cm2燒瓶中培養細胞。在21天之後，與媒劑相比，1微莫耳濃度的4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(化合物1，表1；實例1)、4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-第二丁基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(化合物2，表1)及N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺(化合物9，表1)各使得源自於1000mPB CD34+ HSC之CD34+CD45RA-細胞的數目增加10倍以上。以劑量反應格式(1nM至10μM)檢定本發明化合物，以便測定在50%細胞中產生所要效應的有效濃度(EC50)。本發明化合物可增加CD34+細胞之總數目及/或百分比，其EC50小於10M。結果示於上文之表1及實例中。
培養中之群落形成單位(CFU-C)檢定：臍帶血五週培養物及mPB三週培養物以1000個單核細胞/毫升，及CB三週培養物及mPB一週培養物以100個細胞/毫升添加至MethoCult SF H4436，無血清之甲基纖維素培養基，含有甲基纖維素於Iscove's MDM中、牛血清白蛋白、2-巰基乙醇、L-麩醯胺酸、人類轉運蛋白(鐵飽和)、重組人類胰島素及重組人類細胞激素(幹細胞因子、GM-CSF、IL-3、IL-6、G-CSF及紅血球生成素)(StemCell Technologies)。MethoCult補充以下人類重組細胞激素：血小板生成素及Flt-3配位體(R&D Systems)，最終濃度各為50ng/mL。攪拌之後，將混合物分入3個35mm培養皿中。該等培養皿在37℃於5% CO2空氣之濕潤氛圍中培育14天。在培育時段結束時，在倒置顯微鏡下以40倍放大率計數骨髓及紅血球群落。增加培養之CFU-C含量計算如下：每3個培養皿所得群落之數目×總單核細胞數目/輸入細胞數目。至1週，藉由每毫升細胞數目乘培養物體積來確定總單核細胞。自第1週起，亦考慮傳代數目。在mPB CD34+細胞培養21天之後，與媒劑相比，以1微莫耳濃度4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(化合物1，表1；實例1)處理的培養物之群落形成細胞數目增加10倍以上。使用以1微莫耳濃度之4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(化合物1，表1；實例1)處理之1×103CB CD34+細胞(取自5週培養物)，與對照相比，顯示群落形成單位增加10倍以上。用4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(化合物1，表1；實例1)處理之細胞產生更多有關混合群落：紅血球群落增加10倍以上，粒細胞/巨噬細胞群落增加10倍以上，巨噬細胞群落增加10倍以上。以4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(化合物1，表1；實例1)處理之細胞亦產生混合之粒細胞/紅血球/單核細胞/巨噬細胞群落，在源自於未處理培養物之群落中未觀察到此。
卵石樣區域形成細胞(CAFC)檢定：FBMD-1基質細胞維持在25cm2燒瓶中，且在1/3匯合之後進行胰蛋白酶化。由於此非轉型系變成熟，且因此在晚期逐漸失去支持CAFC生長的潛力，因此，所有加料均用於路徑20以下。為了在96孔培養盤中支持CAFC生長，每孔接種1×103個基質細胞。在37℃下，在具5% CO2之濕潤空氣氛圍中，在補充有10%胎牛血清(FCS)、2.5%馬血清(HS)、1% L-麩醯胺酸、1%青黴素-鏈黴素及1×10-5M氫皮質酮之Iscove's培養基中維持培養物。在基質層匯合之後，以已經用媒劑或本發明化合物培養5天之CD34+ HSC對其進行接種。以8次連續1:3稀釋(起始於25,000細胞/孔)添加MNC，各種細胞用量添加10個孔。在第4週時，對稀釋物與在基質層下具有至少五種細胞之至少一種暗相造血純系(卵石樣區域)的孔進行測定。在培養5天之後，與單獨用DMSO處理之對照培養物相比，在1微莫耳之測試濃度下，4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(化合物1，表1；實例1)刺激源自於mPB CD34+ HSC之卵石樣區域區域形成細胞之數目增加2倍以上。
表面抗原分析：用污染介質(含有FBS(2%)及EDTA(2mM)的Hanks平衡鹽溶液)洗滌細胞，且用所指示之一級共軛抗體污染(在4℃下，歷時30分鐘)。在先前描述之緩衝液中洗滌該等細胞，並使用BD LSR II流式血細胞計數儀(Becton Dickinson，San Jose，CA)分析。藉由使用488nm氬氣及633-nm HeNe雷射束作為激發光源，使細胞以高達1000細胞/秒之速率通過。使用對數擴增量測104個細胞之發射，且使用FlowJo軟體(TreeStar Inc.，Ashland，OR)分析。以一級共軛同型對照抗體污染之細胞係用於測定背景螢光。
測定CD34+細胞子集：由細胞培養物之等分試樣測定CD34+細胞子集之百分比。以APC抗Thy1.1、PerCP抗CD34、PECy7抗CD45RA、FITC抗CD38，及PE抗CD133污染細胞以便測定CD34+Thy1.1+、CD34+CD45RA-、CD34+CD38-、CD133+CD38-及CD34+CD133+細胞。CD34、CD38、Thy1.1及CD45RA之抗體係購自Becton Dickinson，且CD133之抗體係購自Miltenyi Biotec。此等子集之FACS分析結果以總群體之百分比形式給出。培養物中之各細胞群體的絕對數目係由細胞總數目乘以各群體之百分比來計算。以CB CD34+細胞作為起始物，五週之後在以1微莫耳4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(化合物1，表1；實例1)處理之細胞中，與對照培養物相比，培養物中之總細胞數目平均增加2倍以上。更重要的是，50%以上經4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(化合物1，表1；實例1)培養之細胞為CD34+，相比之下，10%以下經媒劑培養之細胞為CD34+，從而導致與對照相比CD34+細胞增加10倍以上，與輸入細胞相比增加10,000倍以上。此外，1微莫耳4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(化合物1，表1；實例1)之存在使CD34+子群(CD34+CD45RA-、CD34+CD38-、CD133+CD38-及CD34+CD133+)之百分比及總數目增加，導致各子集淨增加30倍以上。
向NOD.CB17-Prkdcscid小鼠(NOD/SCID)中移植人類CD34+細胞：為了評估CD34+細胞及其培養子代在活體內之重建能力，未經培養之CD34+或以媒劑或測試化合物培養CD34+細胞4天(mPB)或21天(CB)之後的子代經由眼球後途徑經靜脈內注入經次致死照射(3.0 Gy)之8至10週齡NOD/SCID(用於mPB HSC實驗)小鼠中或NOD/SCIDgc-/-(用於CB HSC實驗)小鼠中。為了監控植入，每週經由眼球後抽血，且用紅血球溶解溶液(Qiagen，Valencia，CA)處理以除去紅血球，用污染介質洗滌，且藉由流式細胞測量術分析。藉由偵測血液中之抗人類CD45+細胞來量測植入。在移植後10週處死小鼠；自股骨及脛骨收集BM。在污染介質中洗滌BM細胞，且用抗人類抗體污染。培育之後，用紅血球溶解溶液(Qiagen，Valencia，CA)處理懸浮液以除去紅血球，用污染介質洗滌，且藉由流式細胞測量術分析，如先前所描述。以1微莫耳濃度之4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚(化合物1，表1；實例1)培養的源自於mPB及CB之HSC在植入之後10週在人類細胞百分比方面產生統計上顯著之增加。
標靶識別
為了識別本發明化合物增加呈未分化狀態之HSC的機制，分析經實例1(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-N-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)丙基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺)及實例1之較低活性類似物(約20倍)處理24小時之源自於mPB之CD34+細胞在基因組範圍內之轉錄概況。在所分析之5000個以上探針集中，在以實例1處理之後僅5個遺傳上調3倍以上，且大部分在某種程度上亦由非活性類似物誘導。此外，在用1μM實例1處理之後，5個基因下調10%以上。所有均以劑量依賴方式下調，且均不顯著受非活性類似物影響。受實例1(細胞色素P450 1B1[CYP1B1]及芳基烴受體阻遏劑[AHRR])處理阻遏最嚴重之兩個基因在轉錄時係由芳基烴受體(AHR)調節。因此，本發明化合物可充當AHR信號傳導拮抗劑。
此外，測定實例1藉由源自於mPB之CD34+細胞中的qPCR阻斷2,3,7,8-四氯二苯并-對-1,4-二氧雜環己二烯(TCDD，1,4-二氧雜環己二烯)介導之CYP1B1 mRNA表現的能力。與媒劑對照(0.01%甲苯)相比，以TCDD(3nM)處理導致CYP1B1 mRNA含量增加4.5倍。此增加以劑量依賴方式受實例1抑制，表明本發明化合物可拮抗AHR信號傳導。為了測定實例1在AHR轉錄中之作用，測試實例1抑制1,4-二氧雜環己二烯誘導AHR依賴型螢光素酶報導因子基因檢定的能力。當用於表現人類AHR之細胞時，實例1之包含物(1μM)完全中止1,4-二氧雜環己二烯誘導之AHR依賴性轉錄。實例1之滴定顯示EC50為127nM，表明實例1為有效AHR拮抗劑。令人感興趣的是，實例1在小鼠細胞中僅輕微抑制1,4-二氧雜環己二烯誘導之轉錄，且對大鼠細胞不具活性，表明實例1優先抑制人類AHR。此現象與實例1對小鼠HSC缺乏活性相關，且可說明實例1之物種選擇性。最後，實例1對小鼠或大鼠細胞僅具較弱促效活性，且在人類細胞中不能誘導AHR依賴性轉錄。
為了進一步研究AHR信號傳導在HSC中之作用，測試兩種其他AHR拮抗劑(α-萘黃酮及CH-223191)。當培養源自於mPB之CD34+細胞7天時，兩種化合物均導致CD34+細胞之數目劑量依賴性增加：包含物1μM CH223191獲得2.2倍CD34+細胞增加；0.75μM萘黃酮獲得1.9倍CD34+細胞增加；而0.75μM實例1獲得3.4倍總CD34+細胞增加。為了顯示AHR在實例1中誘導HSC增加的直接作用，以含有shRNA靶向AHR(其共同表現GFP或對照病毒)之慢病毒顆粒處理源自於人類CB之CD34+ HSC。轉導之後48小時，藉由細胞分選法純化CD34+GFP+細胞，且藉由qPCR測定AHR含量。兩種AHR靶向shRNA均導致AHR表現在轉導後降低(sh111為81%，且sh242為51%)。在缺乏GFP之細胞中或以對照病毒轉導之細胞中未見此等降低。具有較低AHR表現的源自於CB之CD34+細胞顯示類似於經實例實例1處理且持續表現CD34+之細胞的表型。此等資料顯示，藉由本發明化合物抑制AHR活性足以促進HSC之離體增加。
增加人類新生兒臍帶血之HSC的方法
所使用之培養基為補充有以下重組人類細胞激素的StemSpan SFEM(StemCell Technologies，目錄號09650)：TPO、IL6、Flt3配位體，及SCF，各細胞激素之最終濃度為50ng/mL。該培養基係在使用當天新製。
化合物稀釋至培養基中：將本發明化合物之10,000×濃縮物用於稀釋。以兩個步驟向培養基中添加化合物。第一個步驟為1:100稀釋(10μL 10,000×濃縮物在1.5mL effendorf試管(USA Scientific，目錄號1615-5500)中稀釋至990μL完全培養基(含有細胞激素)中)以得到化合物在培養基中之100×溶液。第二個步驟為在將用於開始細胞培養之培養基中的1:100稀釋。培養物之體積視臍帶血(CB)CD34+細胞之輸入數目而變化。例如，1×106CB CD34+細胞接種至20mL培養基中(5×104細胞/毫升)。在此情況下，200μL 100×實例1溶液添加至於50mL錐形管(Becton Dickinson，目錄號352098)中之20mL培養基中以達到最終濃度(參看表3)。
細胞培養之開始：經純化之人類CB CD34+細胞用於離體增加實驗。解凍之後，藉由錐蟲藍排除法測得之細胞活力高於50%。解凍之細胞以培養基(無細胞激素或諸如實例1之本發明化合物)稀釋5倍，且在300g下在25℃下離心8分鐘。吸出上清液之後，使細胞小球再懸浮於適當體積之培養基中(5×104細胞/毫升，表3)，然後注射(22號針，Air-Tite產品；20mL注射器，BD目錄號309661)至AFC袋(表5)中以供即時培養。在37℃下於5% CO2中培養細胞。
向細胞培養物中添加培養基：對於至多80mL之培養基體積，使用上述程序(化合物稀釋至培養基中)。對於大於80mL之培養基體積，在10mL錐形管(Corning，目錄號430052，表4)中進行第一步1:100稀釋。第二個步驟為1:100稀釋至在無菌容器(BD Falcon，目錄號354015)中且添加至AFC袋(22號針，Air-Tite產品；60mL注射器，BD 309653)中的培養基中。
可自自體移植患者之活動周邊血液細胞開始使用相同方案。
亦可製備包含具有經增加之HSC之細胞群體的組合物，該組合物適合於作為輸注液進行靜脈內投藥。為了製備供輸注之細胞，藉由在300g下離心10分鐘將所培養之細胞球化，且以介於106至108細胞/毫升之間的濃度再懸浮於由5% HSA(Baxter)組成之輸注緩衝液中。
應瞭解，本文所述之實例及實施例僅用於說明之目的，並且該等實例及實施例之各種修改或變化可為熟習此項技術者所想到，且應包括在本申請案之精神及範圍以及隨附申請專利範圍之範疇內。為達成所有目的，本文所引用之所有公開案、專利及專利申請案均以引用之方式併入本文中。
圖1揭示4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚之固體形式變型A的PXRD圖，其係游離分子(非鹽)PXRD；圖2至圖12揭示4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚鹽(分別為硝酸鹽(圖2)、甲磺酸鹽(圖3)、甲苯磺酸鹽(圖4)、鹽酸鹽(圖5)、硫酸鹽(圖6)、苯磺酸鹽(圖7)、乙磺酸鹽(圖8)、氫溴酸鹽(圖9)、乳清酸鹽(圖10)、反丁烯二酸鹽(圖11)及萘二磺酸鹽(圖12))之固體形式的PXRD圖；圖13揭示4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚之非晶形形式的DSC圖案。
(無元件符號說明)

Claims (54)

  1. 一種式I之化合物， 其中：L係選自-NR5a(CH2)2-3-、-NR5aCH(C(O)OCH3)CH2-、-NR5a(CH2)2NR5b-、-NR5a(CH2)2S-、-NR5aCH2CH(CH3)CH2-、-NR5aCH2CH(OH)-及-NR5aCH(CH3)CH2-；其中R5a及R5b係獨立地選自氫及C1-4烷基；R1係選自噻吩基、呋喃基、1H-苯并咪唑基、異喹啉基、1H-咪唑并吡啶基、苯并噻吩基、嘧啶基、吡啶基、1H-咪唑基、吡嗪基、噠嗪基、1H-吡咯基及噻唑基；其中R1中之該噻吩基、呋喃基、1H-苯并咪唑基、異喹啉基、1H-咪唑并吡啶基、苯并噻吩基、嘧啶基、吡啶基、1H-咪唑基、吡嗪基、噠嗪基、1H-吡咯基或噻唑基可視情況經1至3個獨立地選自以下之基團取代：氰基、羥基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵基、經鹵基取代之C1-4烷基、經鹵基取代之C1-4烷氧基、胺基、-C(O)R8a、-S(O)0-2R8a、-C(O)OR8a及-C(O)NR8aR8b；其中R8a及R8b係獨立地選自氫及C1-4烷基；R2係選自-S(O)2NR6aR6b、-NR6aC(O)NR6bR6c、苯基、1H-吡咯并吡啶-3-基、1H-吲哚基、噻吩基、吡啶基、1H-1,2,4-三唑基、2-側氧基(oxo)咪唑啶基、1H-吡唑 基、1H-咪唑-4-基、1H-苯并[d]咪唑-5-基、哌啶-1-基、2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并咪唑基及1H-吲唑基；其中R6a、R6b及R6c係獨立地選自氫及C1-4烷基；及該苯基、1H-吡咯并吡啶-3-基、1H-吲哚基、噻吩基、吡啶基、1H-1,2,4-三唑基、2-側氧基咪唑啶基、1H-吡唑基、1H-咪唑-4-基、1H-苯并[d]咪唑-5-基、哌啶-1-基、2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并咪唑基或1H-吲唑基視情況經1至3個獨立地選自以下之基團取代：羥基、鹵基、甲基、甲氧基、胺基、-O(CH2)nNR7aR7b、-S(O)2NR7aR7b、-OS(O)2NR7aR7b及-NR7aS(O)2R7b；其中R7a及R7b係獨立地選自氫及C1-4烷基；R3係選自氫、C1-4烷基及聯苯基；及R4係選自C1-10烷基、丙-1-烯-2-基、環己基、環丙基、2-(2-側氧基吡咯啶-1-基)乙基、氧雜環丁(oxetan)-3-基、二苯甲基、四氫-2H-哌喃-3-基、四氫-2H-哌喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基、苯甲基、(4-戊基苯基)(苯基)甲基及1-(1-(2-側氧基-6,9,12-三氧雜-3-氮雜十四-14-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基；其中該烷基、環丙基、環己基、2-(2-側氧基吡咯啶-1-基)乙基、氧雜環丁-3-基、二苯甲基、四氫-2H-哌喃-3-基、四氫-2H-哌喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基、苯甲基、(4-戊基苯基)(苯基)甲基或1-(1-(2-側氧基-6,9,12-三氧雜-3-氮雜十四-14-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基可視情況經1至3個獨立地選自以下之基團取代：羥基、C1-4烷基及經鹵基取代之C1-4 烷基；或其鹽。
  2. 如請求項1之化合物，其中：R1係選自噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-3-基、1H-苯并[d]咪唑-1-基、異喹啉-4-基、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、吡啶-2-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡咯-2-基及噻唑-5-基；其中R1之該噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-3-基、1H-苯并[d]咪唑-1-基、異喹啉-4-基、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、吡啶-2-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡咯-2-基或噻唑-5-基可視情況經1至3個獨立地選自以下之基團取代：氰基、羥基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵基、經鹵基取代之C1-4烷基、-S(O)0-2R8a及-C(O)OR8a，其中R8a係選自氫及C1-4烷基；R2係選自-NR6aC(O)NR6bR6c、苯基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基、1H-吲哚-3-基、噻吩-3-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-側氧基咪唑啶-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基、1H-苯并[d]咪唑-5-基、及1H-吲唑-3-基；其中R6a、R6b及R6c係獨立地選自氫及C1-4烷基；R2之該苯基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基、1H-吲哚-3-基、噻吩-3-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑- 5-基、2-側氧基咪唑啶-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基或1H-吲唑-3-基視情況經1至3個獨立地選自以下之基團取代：羥基、鹵基、甲氧基、胺基、-OS(O)2NR7aR7b及-NR7aS(O)2R7b；其中R7a及R7b係獨立地選自氫及C1-4烷基；R3係選自氫；及R4係選自異丙基、甲基、乙基、丙-1-烯-2-基、異丁基、環己基、第二丁基、(S)-第二丁基、(R)-第二丁基、1-羥基丙-2-基、(S)-1-羥基丙-2-基、(R)-1-羥基丙-2-基、壬-2-基、2-(2-側氧基吡咯啶-1-基)乙基、氧雜環丁-3-基、二苯甲基、苯基、四氫呋喃-3-基及苯甲基；其中該環己基、2-(2-側氧基吡咯啶-1-基)乙基、氧雜環丁-3-基、氧雜環丁-2-基、二苯甲基、苯基、四氫呋喃-3-基或苯甲基可視情況經1至3個獨立地選自C1-4烷基及經鹵基取代之C1-4烷基之基團取代。
  3. 如請求項1或2之化合物，其中L係選自-NH(CH2)2-3、-NH(CH2)2NH-、-NH(CH2)2S-、-NHCH(CH3)CH2-及-NHCH2CH(OH)-。
  4. 如請求項1或2之化合物，其中L係-NH(CH2)2。
  5. 如請求項3之化合物，其中R2係選自苯基、1H-吲哚-3-基、噻吩-3-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-側氧基咪唑啶-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基及1H-苯并[d]咪唑-5-基；其中R2之該苯基、1H-吲哚 -2-基、1H-吲哚-3-基、噻吩-3-基、哌啶-1-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-側氧基咪唑啶-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基或1H-苯并[d]咪唑-5-基視情況經羥基、甲氧基、甲基、鹵基、胺基及胺基-磺醯基取代。
  6. 如請求項5之化合物，其中R4係選自異丙基、甲基、乙基、丙-1-烯-2-基、異丁基、環己基、第二丁基、(S)-第二丁基、(R)-第二丁基、1-羥基丙-2-基、(S)-1-羥基丙-2-基、(R)-1-羥基丙-2-基、壬-2-基、2-(2-側氧基吡咯啶-1-基)乙基、氧雜環丁-3-基、氧雜環丁-2-基、二苯甲基、苯基、四氫呋喃-3-基及苯甲基；其中該環己基、2-(2-側氧基吡咯啶-1-基)乙基、氧雜環丁-3-基、二苯甲基、苯基、四氫呋喃-3-基或苯甲基可視情況經1至3個獨立地選自甲基及三氟甲基之基團取代。
  7. 如請求項1之化合物，其具有下式Ia： 其中L係-NH(CH2)2-；R1係選自噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-3-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、吡啶-2-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡咯- 2-基及噻唑-5-基；其中R1之該噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-3-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、吡啶-2-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡咯-2-基或噻唑-5-基可視情況經1至3個獨立地選自以下之基團取代：氰基、羥基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵基、經鹵基取代之C1-4烷基、-S(O)0-2R8a及-C(O)OR8a，其中R8a係選自氫及C1-4烷基；R2係選自苯基、1H-吲哚-3-基、噻吩-3-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-側氧基咪唑啶-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基；其中R2之該苯基、1H-吲哚-3-基、噻吩-3-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-側氧基咪唑啶-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基或2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基視情況經1至3個獨立地選自以下之基團取代：羥基、鹵基、甲氧基、胺基、-OS(O)2NR7aR7b及-NR7aS(O)2R7b；其中R7a及R7b係獨立地選自氫及C1-4烷基；R3係選自氫；及R4係選自異丙基、異丁基、第二丁基、1-羥基丙-2-基、氧雜環丁-3-基、二苯甲基、苯基、四氫呋喃-3-基或苯甲基；其中該氧雜環丁-3-基、二苯甲基、苯基、四氫呋喃-3-基 或苯甲基可視情況經1至3個獨立地選自C1-4烷基及經鹵基取代之C1-4烷基之基團取代。
  8. 如請求項1之化合物，其係選自：4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-第二丁基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-二苯甲基-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫-2H-哌喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(噻吩-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(4-(三氟甲基)苯甲基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丁基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(4-甲基苯甲基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-N-(2-(噻吩-3-基)乙 基)-9H-嘌呤-6-胺；3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；2-(苯并[b]噻吩-3-基)-N-(4-氟苯乙基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；N-(4-胺基苯乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(9-異丙基-2-(嘧啶-5-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(呋喃-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；2-(苯并[b]噻吩-3-基)-N-(4-氟苯乙基)-9-苯基-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(壬-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-第二丁基-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-4-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；5-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)菸 鹼酸乙酯；4-(2-(9-異丙基-2-(5-甲氧基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(6-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(4-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；5-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)菸鹼甲腈；4-(2-(2-(1H-咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(噠嗪-4-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡嗪-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(5-(甲基磺醯基)吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(4-氯吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基) 乙基)苯酚；4-(2-((9-異丙基-2-(4-甲基噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-2-甲氧基苯酚；N-[2-(6-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-[2-(5-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；1-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)咪唑啶-2-酮；N-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)吡啶-2-胺；N-{2-[(3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)硫基]乙基}-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；1-(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)咪唑啶-2-酮；N-[2-(5-胺基-1H-1,2,4-三唑-3-基)乙基]-2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)吡啶-2-胺；2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-N-[3-(1H-吡唑-4-基)丙基]-9H-嘌呤-6-胺；2-(1-苯并噻吩-3-基)-N-[3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基) 丙基]-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-胺；(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]胺基}乙基)脲；N-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯基)甲烷-磺醯胺；4-(2-(2-(吡啶-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)丙基)苯酚；4-(2-(9-(氧雜環丁-3-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-(1-羥基丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；胺磺酸4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯基酯；4-(2-(2-(2-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(1-甲基-1H-吡咯-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(噻唑-5-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(1H-苯并[d]咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6- 基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；5-(9-第二丁基-6-(4-羥基-3-甲基苯乙基胺基)-9H-嘌呤-2-基)菸鹼甲腈；N-(2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；9-異丙基-N-(2-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)乙基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(氧雜環丁-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(5-氯吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；5-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-9-第二丁基-9H-嘌呤-2-基)菸鹼甲腈；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；(S)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(5-氟吡 啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；(S)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；5-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-(氧雜環丁-3-基)-9H-嘌呤-2-基)菸鹼甲腈；(R)-4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-3-甲基苯酚；5-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)-2-氰基吡啶(picolinonitrile)；3-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)異菸鹼甲腈；3-(6-(4-羥基苯乙基胺基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)-2-氰基吡啶；4-(2-(9-異丙基-2-(6-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(異喹啉-4-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；2-氯-4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基) 乙基)苯酚；3-氟-4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；N-(2-(5-氯-1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(5-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-2-甲基苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(氧雜環丁-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；(S)-4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；(R)-4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇；(R)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇；(S)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基胺基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇；(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(2-(3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌 呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(吡啶-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)-1-羥基乙基)苯酚；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(6-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(丙-1-烯-2-基)-9H-嘌呤-6-胺；5-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)吡啶-2-醇；N-(2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(6-(2-(二乙基胺基)乙氧基)-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-第二丁基-2-(2-甲基-1H- 咪唑-1-基)-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(2-(2-乙基-1H-咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(2-丙基-1H-咪唑-1-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；3-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-1H-吲哚-6-醇；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-9H-嘌呤-6-胺；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(氧雜環丁-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9-(氧雜環丁-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(6-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(6-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(4-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9- 異丙基-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(7-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺；2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(4-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺；N-(2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺；4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(1-羥基丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)-2-甲基苯酚；4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-環己基-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；4-(2-(9-異丙基-2-(噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基胺基)乙基)苯酚；及1-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-6-(4-羥基苯乙基胺基)-9H-嘌呤-9-基)乙基)吡咯啶-2-酮；或其鹽。
  9. 如請求項1之化合物，其中該化合物具有下式： ；或其鹽。
  10. 如請求項1之化合物，其中該化合物具有下式： ；或其鹽。
  11. 如請求項1之化合物，其中該化合物具有下式： ；或其鹽。
  12. 如請求項1之化合物，其中該化合物具有下式： ；或其鹽。
  13. 如請求項1之化合物，其中該化合物具有下式： ；或其鹽。
  14. 如請求項1之化合物，其中該化合物具有下式： ；或其鹽。
  15. 一種增加幹細胞及祖細胞數目之活體外或離體(ex vivo)方法，該方法包含使該等幹細胞與能夠拮抗芳基烴受體及/或芳基烴受體路徑下游效應子之活性及/或表現的藥劑接觸，其中該藥劑係如請求項1至14中任一項之化合物。
  16. 如請求項15之方法，其中該等幹細胞係源自於人類。
  17. 如請求項16之方法，其中該等幹細胞源自於骨髓。
  18. 如請求項16之方法，其中該等幹細胞源自於臍帶血。
  19. 如請求項16至18中任一項之方法，其中該等幹細胞為造血幹細胞。
  20. 一種增加造血幹細胞之方法，該方法包含(a)提供包含造血幹細胞之起始細胞群體；及(b)該起始細胞群體在能夠拮抗芳基烴受體及/或芳基烴受體路徑下游效應子之活性及/或表現的藥劑存在下，在適於增加造血幹細胞之條件下，離體培養，其中該藥劑係如請求項1至14中任一項之化合物。
  21. 如請求項20之方法，其中芳基烴受體路徑之下游效應子係選自Cyp1B1、Cyp1A1、β-索烴素(catenin)、AHRR、 STAT5及STAT1。
  22. 如請求項20之方法，其中該起始細胞群體富含CD34+細胞。
  23. 如請求項20之方法，其中該起始細胞群體源自於臍帶血細胞。
  24. 如請求項23之方法，其中該起始細胞群體源自於一或兩個臍帶血單位。
  25. 如請求項20之方法，其中該起始細胞群體源自於活動(mobilized)之周邊血液細胞。
  26. 如請求項25之方法，其中該等活動之周邊血液細胞係獲自單一哺乳動物個體。
  27. 如請求項20之方法，其中該起始細胞群體基本上由一或兩個臍帶血單位純化之CD34+細胞組成。
  28. 如請求項20之方法，其中該起始細胞群體基本上由CD34+細胞組成，該等CD34+細胞係由一或兩個臍帶血單位使用包含CD34抗原結合抗體片段之親和性層析管柱或磁珠純化而來。
  29. 如請求項20之方法，其中該等適於造血幹細胞增加之條件包括該起始細胞群體在足量IL6、Flt3-L、TPO及SCF以及該化合物存在下培養。
  30. 如請求項20之方法，其中該化合物係以介於1pM與100μM之間的濃度投與細胞培養基中。
  31. 如請求項20之方法，其中該化合物係以介於100pM與1μM之間的濃度投與細胞培養基中。
  32. 如請求項20之方法，其中該起始細胞群體基本上由一或兩個臍帶血單位純化之CD34+細胞組成，且該起始細胞群體在該化合物存在下培養3天至90天。
  33. 如請求項20之方法，其中該起始細胞群體基本上由一或兩個臍帶血單位純化之CD34+細胞組成，且該起始細胞群體在該化合物存在下培養自7天至35天之間。
  34. 如請求項20之方法，其中該起始細胞群體在該化合物存在下培養足以使CD34+細胞增加10至50000倍之時間。
  35. 一種增加造血幹細胞之套組，其包含如請求項1之化合物及如請求項20之方法的使用說明書，及視情況一或多種下列：細胞激素(cytokines)、生長因子及細胞生長培養基。
  36. 如請求項35之套組，其中該一或多種細胞激素或生長因子係選自由IL6、Flt3-L、SCF及TPO組成之群。
  37. 一種組合物，其包含具有增加造血幹細胞的細胞群體及如請求項1之化合物，其中該增加造血幹細胞係源自於一或兩個臍帶血單位，其中該組合物含有總量至少105個細胞、107個細胞、108個細胞或109個細胞，且其中細胞總數之20%至100%係CD34+細胞。
  38. 如請求項37之組合物，其中該組合物含有0.1%至40%之總數細胞表現CD34及Thy1標記；20%至80%之總數細胞表現CD34及CD45RA標記；10%至95%細胞為CD38+；5%至70%細胞為CD133+。
  39. 如請求項37或38之組合物，其係用於哺乳動物個體之同 種異體造血幹細胞移植。
  40. 如請求項37或38之組合物，其係用於治療罹患造血異常之患者。
  41. 如請求項40之組合物，其中該患者罹患遺傳性免疫缺乏疾病、自體免疫病症或造血障礙。
  42. 如請求項41之組合物，其中該造血障礙係選自急性骨髓性白血病、急性淋巴母細胞白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、骨髓增生性病症、骨髓發育不良症候群、多發性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin lymphoma)、霍奇金氏病、再生不全性貧血(Aplastic anemia)、單純紅血球再生不良、陣發性夜間血尿症、範可尼貧血(Fanconi anemi)、重型地中海貧血(Thalassemia major)、鐮狀細胞貧血症、嚴重複合型免疫缺乏症、威-奧二氏症候群(Wiskott-Aldrich syndrome)、噬血細胞性淋巴組織細胞增生症(Hemophagocytic lymphohistiocytosis)及先天性代謝異常。
  43. 如請求項37或38之組合物，其中該組合物適於靜脈內輸注，且該組合物包含輸注於患者至少104個細胞/公斤。
  44. 如請求項37或38之組合物，其中該組合物適於靜脈內輸注，且該組合物包含輸注於患者介於105個細胞/公斤與109個細胞/公斤之間。
  45. 一種組合物，其包含藉由能夠下調芳基烴受體及/或芳基烴受體路徑下游效應子之活性及/或表現的藥劑而增加之造血幹細胞，該組合物係用於治療遺傳性免疫缺乏疾 病、自體免疫疾病及/或造血障礙，其中該藥劑為如請求項1之化合物。
  46. 如請求項45之組合物，其中該等增加之造血幹細胞係用於自體移植，且該造血障礙係選自多發性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏病、急性骨髓性白血病、神經母細胞瘤、生殖細胞腫瘤、自體免疫病症及澱粉樣變性。
  47. 如請求項46之組合物，其中該等自體免疫病症係選自全身性紅斑性狼瘡症及全身性硬化症。
  48. 如請求項45之組合物，其中該等增加之造血幹細胞係用於同種異體移植，且該造血障礙係選自急性骨髓性白血病、急性淋巴母細胞白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、骨髓增生性病症、骨髓發育不良症候群、多發性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏病、再生不全性貧血、單純紅血球再生不良、陣發性夜間血尿症、範可尼貧血、重型地中海貧血、鐮狀細胞貧血症、嚴重複合型免疫缺乏症、威-奧二氏症候群、噬血細胞性淋巴組織細胞增生症及先天性代謝異常。
  49. 如請求項48之組合物，其中該等先天性代謝異常係選自黏多醣症、高雪氏症(Gaucher disease)、異染性腦白質營養不良及腎上腺腦白質營養不良。
  50. 一種組合物，其包含幹細胞及祖細胞及能夠拮抗芳基烴受體及/或芳基烴受體路徑下游效應子之活性及/或表現的藥劑，該組合物係用於增加幹細胞及祖細胞之數目， 其中該藥劑為如請求項1之化合物。
  51. 如請求項50之組合物，其中該等幹細胞源自於人類。
  52. 如請求項51之組合物，其中該等幹細胞源自於骨髓。
  53. 如請求項51之組合物，其中該等幹細胞源自於臍帶血。
  54. 如請求項52或53之組合物，其中該等幹細胞為造血幹細胞。
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