TW425287B - A method for preparing spray dried rhEPO - Google Patents

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425287 A7 B7 五、發明説明（1 ) 本發明為1994年12月16日歸檔、申請序號08/357,947 案之部份接鱭由請案。 I 本發明係有關經唄霧乾燥處理的促紅血球生成素之製-法及由其製造之促紅血球生成素粉末。 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 促紅血球生成素（ΕΡ0)係主要在聚中合成之_蛋白激 素，其為身體内製造紅血球之首要調節劑。市售可得之人 體ΕΡ0係利用重組體DNA技術製造，即所諝重組體人體ΕΡ0 ( rhEPO) 〇利用303-?厶0£法測定的1->^0分子量為約36,000 道耳吞。蛋白質主鍵的分子量為18,398道耳呑，由此表示 整個分子被難苷化得很厲害。碳水化合物殘基對活體內生 物活性相當重要。 在水溶液或固相中，將蛋白質（例如rhEPO)維持於其 天然狀態，對豁藥調配物領域工作者而言，乃簠要的挑戰 。蛋白質能否圼其天然狀態存在，視蛋白質的濃度、溫度 和溶劑性質、鍰衝劑的離子強度等而定。疽些參數的任何 變化均會影響蛋白質在溶液成固相中之安定性。 rhEPO的商業製劑目前係Μ稀水溶液或用於形成稀水 溶液之冷凍乾燥型出售，二者均利用注射法對身體給藥。 rhEPO在這费製劑中的濃度很低，給藥後很快地就從體內 被清除。從目前製劑此等限制之觀點而言，對於可使用替 代殺藥輸送糸之rhEPO濃縮製劑（例如含有較高量rhEPO者 )實有所需求。本文作者使用噴霧乾燥技術來製備此等製 3 -"' I I I I I I 訂I (I "線 . (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX297公釐） 經濟部中夬榡準局員工消費合作社印製 425287 A7 B7 __ 五、發明説明（2 ) 劑。 藥學組成物之噴霧乾燥於技薛中為已知。舉例而言* 見Broadhead, J. et al., "The Spray Drying of Phar-maceut icaIs", Drug Dev. Ind. Pharm, 18 (11 & 12)， 1169-1206 (1992)。除了小分子藥學組成物外，有許多生 物物質被唄菝乾燥處理過，包括：酵素、血清、血漿、微 生物和酵母。嗔霧乾燥處理為有用的技術，因為它Μ單一 步驟法可將液體豁藥製劑轉化為微細、無塵或凝集的粉末 。其基本技術包含下列四階段： a) 將餵入溶液霧化成嗔霧物： b) 噴霧物-空氣接觸； c) 乾燥噴霧物； d) 將經乾燥產物與乾燥空氣分雛。 噴耪乾燥處理在藥學組成物領域中雖為已知》但在治 療用蛋白質（例如rhEPO)上之使用並不多見。其一明顯 原因為此等蛋白質可能被噴孩乾燥過程中使用的高溫熱分 解，尤Μ複雜釀蛋白（例如rhEPO,其除了多肽主鏈外， 尚具有為生物活性所需之複雜分支鏈碳水化合物部份）為 然。隨即可用的替代法-冷凍乾燥法-之有效性更使此領 域之業者避免使用噴霧乾燥法於治療用蛋白質上。然而， 噴霧乾燥法提供冷凍乾燥法未具有的一鹽優點，它較經濟 、快速且易於擴大。同時，經嗔霧乾燥處理的粉末常常比 冷凍乾燥處理的粉末更容易接受進一步的處理。 僅Μ龐大體積藥物之冷凍乾燥法為主來設計調配物， 4 尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） ' ' ----:---r----f.------訂------後， (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 _五、發明説明（3 ) 通常是不實際的，因為許多多肽類在以低濃度進行冷凍乾 燥處理時，相當不安定，且吸附於產品包裝上而失去活性 。為了克腋瑄些問題，許多經冷凍乾燥處理的路藥組成物 有賴於使用固體稀釋劑、極冷保護劑或增積劑，於冷凍乾 燥處理期間增加固體物質的含量，結果造成經冷凍乾煉的 最後產物含有很小百分比（w/w)之活性藥物，其中混合著 較大百分比之其他固體物質。 對照之下，本發明提供從膨鬆rhEPO製造rhEPO粉末的 方法，其中製得的粉末為純rhEPO或實質上很純之rhEPO或 比使用傅統冷谏乾燥技術所製具較高百分比（w/w)之rhEPO 〇 發明簡要 本發明提供安定、經嗔霧乾燥處理的rhEPO之製法及 由其製造之rhEFMD粉末。 本發明方法包括先提供機度在約20毫克/毫升至約100 奄克/毫升範圍内之rhEPO水溶液，然後將該溶液霧化成嗔 霧物，Μ熱空氣乾煉嗔霧物使水從嗔霧物中蒸發出。再將 由此製造之經乾燥rhEPO與乾燥空氣分離。 起始水溶液中除了 r>hEP〇外，可含有賦形劑例如甘露 糖酵、甘胺酸及/或界面活性劑。由本發明方法製得之乾 燥rhEPO組成物含有濃度在4.0%至100% (w/w)範圃內之 rhEPO，及具有在約3.0%至約5.0% (w/w)範圍内之賤留水 分含量。組成物的粒子大小在約2.0微米至約6.0微张之範 5 (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 線 本紙張尺廋適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 425287 A7 B7五、發明説明（左） 圍内。 發明詳述 使用至少20毫克/毫升之濃縮rhEPO溶液進行噴霧乾燥 處理。通過具加歷空氣的噴嘴泵卿湄縮水溶液，使其露化 成微细小滴。然後讓小滴進入乾燥室，利用乾燥熱空氣與 餵入溶液冏向流動使水分蒸發。水分蒸發時，囿態rhEPO 和賦形劑（如果存在）即與水滴分雛。利用乾燥空氣流將 經乾燥之rhEPO帶到旋風分離器進行澄清》亦即，將經乾 燥rhEPO與乾燥空氣分離，經乾燥產物收集在與旋風分離 器底部連接之收集容器中。乾燥空氣通過细屑洗氣器被驅 離，進入大氣中。 本文中所用”外日？〇”一詞意指具有11.3.4,703,008中 所述rhEPO的所有或部分多肽主鏈之任何蛋白質，其具有 使脅髓細胞增加網纖球與紅血球製造和增加血紅素合成或 纖攝取之生物活性。一般預期除了 rhEPO外，本文中可使 用ΕΡ0具生物活性之碎Μ、類似物或化學合成衍生物，只 要此等碎片或衍生物保留rhEPO之生物活性。U.S. 4,703, 008中敍述一些ΕΡ0類似物。因此，此等具生物活性之ΕΡ0 類似物、碎片、或衍生物之用途被認為隸屬於本發明之範 圍内。 由本發明所製之濃縮rhEPO粉末可使用替代之藥物輸 送糸輸送rhEPO。此等系統之一為經控制釋放輸送系，其 以預先決定之速率，於一定的期間內，在體内輸送rhEPO 6 (請先W讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺渡適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 425287 經濟部t央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（5 ) 。替代地，濃縮rhEPO粉末可W注射用水或一般鹽液再組 成而形成適用於人體治療用途的水溶液。上面提及的經控 制釋放糸設想所含之rhEPO置於聚合物質、囊或小栗、K 及rhEPO之大分子共輒體及其他聚合物質内。因此這些糸 統可作為濃縮rhEPO之皮下貯藏器植入物用。這些系統無 限制之實例包括包圍rhEPO的固態疏水聚合物之基質，例 如非降解性乙烯-醋酸乙烯酯共聚物或降解性乳酸-乙醇酸 共聚物。此等疏水聚合物可附加地採用中心體型式。 本發明提供安定的rhEPO粉末。本文中所用之”安定” 意指rhEPO隨時維持其生物活性，且其結構維持於其天然 狀態，亦即，不被氧化或者分解成另一化學糸列。其安定 性可利用RIA、韋斯頓墨點法（Western Blot)及活體內 或活體外生物試驗法予Μ證明。 ΗΚ下面實例說明本發明，本發明僅受隨附専利申請 範圍之限制，而不為這些實例所局限。宭例1「hFPH，_越乾條處:理 本實例敘述用於製造單獨呈固體型或與惰性、製藥上 可接受的賦形劑結合的非晶rhEPO之噴霧乾燥處理。如此 調製之非晶膨鬆rhEPO於5¾ (冷藏庫）貯存至少6個月很 安定。目前敘述治療用蛋白質噴霧乾燥處理的文獻有限， 且不討論較高濃度[例如255¾ (w/w)或更高濃度]、圼乾燥 塑的治療用蛋白質之安定性。舉例而言，見Mumenthaler 7 &乐尺度逍用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨OX 297公釐） (請先閲讀背面之注項再填寫本頁) 線 經濟部中央標隼局員工消費合作社印 425287 A7 _____B7 五、發明説明（6) et a 1., Pharm· Res. 11:12-20(1994)。此外，目前文獻 未提供圼固體型的這些蛋S質安定性之足夠證據。事實上 ,有些文獻示出令人不滿意之安定性，其可能歸因於赋形 劑或所用的處理條件。例如已知可安定溶液中的蛋白質之 一些無機鹽、胺基酸、界面活性劑等。然而，於膨鬆rhEPO 中，檸攛酸鹽的存在不會得到安定之經噴霧乾燥處理之rh-ΕΡ0。因此，於噴霧乾燥處理前，將膨鬆rhEPO透析入注射 用水中。為了使產物在噴霧乾燥處理時得到令人滿意的收 量，透析作用繼續進行到rhEPO的濃度在20-100毫克/毫升 範圍內為止。這座在注射用水中之膨黯rhEPO濃縮液，於5 °<0貯存至少6個月時，表現出令人滿意的安定性。製備乾 燥蛋白質之替代技術，即冷凍乾燥法，由於安定性不佳（ 不論檸櫬酸鹽存在與否），不適用於rhEPO (見實例2)。 固體rhEPO和帶有賦形劑的rhEPO粉末之製法包括下列 二步驟： A. rhEPO之透析和濃縮；及 B. 經透析膨黯rhEPO之嗔霧乾燥處理 A.诱析和j1農 將以20 mM檸懞酸鹽媛衝液供給之膨鬆rhEPO進行透析 ，Μ除去所有檸懞酸鹽，且Μ注射用水取代之。透析作用 如下進行： 將於檸懞酸鹽媛衝液（濃度大約2.0毫克/毫升）中之 膨鬆rhEPO (200毫升）混於裝有10,000分子量截止透析膜 8 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210X297公釐） (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁} *π 425287 A7 B7 經濟部中央標準局貝工消費合作社印絮 五、發明説明（7 ) 之Araicon®透析器中。此透析槽與裝有注射用水之不诱鋼 容器相連接，此容器則與氮氣槽相連接。於30-40Psi進行 透析作用，並繼續進行到至少收集2000毫升潑析液為止。 然後將所得不含任何檐樣酸鹽之rhEPO水溶液濃縮至最終 濃度為約20至約100毫克/毫升rhEPO。再將所得rhEPO濃縮 水溶液貯存於5°C,至噴霧乾燥處理前。此rhEPO^縮液也 偵測其於5 °C之安定性。 Βι哨露乾愤癍輝 嗔霧乾燥處理包含下列四步驟： 1. 賴入溶液之霧化； 2. 噴霧物-空氣接觸； 3. 蒸發溶劑； 4. 將經乾燥固體與乾燥空氣分離之澄清作用。 於此方法中使用實驗室用嗔霧乾燥器（Buchi®，190 型）。 1· mdh.- 於室溫，使用蟠動泵將rhEPO水溶液餓入霧化器的嗔 霧嘴（內徑0.5毫米）。利用高塵空氣將液體餓料霧化成 小水滴。也可使用旋轉盤完成此等霧化作用。 2· P裔露物-空葡.培隴和蒸發： 當小水滴進入蒸發室（內徑105毫米X長450毫米）時 9 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -----------f------IT------0 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 42^237 A7 B7 五、發明説明（8 ) ,利用乾燥熱空氣同向流動將水蒸發。乾燥空氣的溫度從 64-80°C有所不同。當水分蒸發時，固體圼球形或半球形 與水溶液分離。乾燥處理也可以逆流技術進行，其中乾燥 空氣與酿入溶液Μ相反方向流動。3. 利用乾燥空氣流將經乾燥粉末帶到旋風分離器進行澄 清作用。於旋風分離器中，經乾燥之固體物質與乾燥空氣 分離。經乾燥產物收集在與旋風分離器底部連接之收集容 器中。乾燥空氣（不含經乾燥產物）通過细屑洗氣器被驅 離，進入大氣中。 Π.化舉特件 將已知量之經噴霧乾燥rhEPO溶於注射用水中^然後 將此水溶液進行如下之分析： 1. 放:射免疫測定法（RIA1 : 戶万用方法為Egrie et al.，J Immunol Meth, ^2.:235 -241 (19δ7)之法。此方法包括M兔子多株抗體（針對rhEPO 飼育）將rhEPO複合-於冷藏溫度將rhEPO與兔子多株抗體 培育過夜即可達成。加入125Ι-ΕΡ0後，於相同條件下，繼 纊進行培育一天。利用山羊抗-兔抗體、正常兔血清和聚 乙二醇使抗原-抗體複合物沉澱。洗此沉澱複合物，利用 加馬計數器測定結合之1 25 I-EPO量。對各種已知濃度的標 10 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •r\

、1T 線 本紙張尺度通用中国國家標準（CNS>A4規格（210Χ297公釐） 425287 A7 B7 經濟部中央標準局負工消費合作祍印製 五、發明説明（9 ) 準rhEPO溶液和測試試樣溶液重覆進行此方法。比較標準 rhEPO溶液和測試試樣之加馬計數器謓數，計算出測試試 樣的rhEPO濃度。 2. 韋斯頓墨1·: 用ΐθ"?去^^Egr ie et a 1. Immunobiol» 172 ·213-224 (1986)所掲示。將0.5微克變性rhEPO裝填於檷準（12.5%) 十二燒基硫酸納-聚丙烯醯胺凝膠（SDS_PAGE)上。進行 電泳法，使用含有TRIS、甘胺酸和甲酵之轉移緩衝液，將 凝膠墨點於硝基纖維素膜上。硝基纖維素膜以5 %脫脂奶 之TR IS緩衝鹽液封阻。然後將經封阻含有rhEPO之硝基纖 維素墨點與老鼠-抗-人體單株抗體結合，随後與山羊-抗-老鼠多株抗體結合。再將此複合物使用鹼性磷酸酶結合基 質套組染色。每一墨點含有標準rhEPO、含已知量rhEPO凝 集體之標準rhEPO和測試樣。比較rhEPO標準、及凝集體檷 準與測試試樣的強度。 3. 老鼠半物試驗; 將已知董經嗔霧乾燥處理的rhEPO再組成於注射用水 中。利用偵測氣不足老鼠於注射rhEPO溶液後之鐵合併速 率，測定此溶液之生物活性。所用方法為Cotes et al·， Nature, 121:1065-1067 (1961)之法〇 11 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2!0X297公釐) . 炉". ~~訂 n 線 {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} A252 87 A7 B7 五、發明説明（10 ) 3配物實例： 編號 成分 I II III IV V 1. rhEPO 0.0813 0.162 1.5 25 25 2. 甘胺酸 1.00 2.00 0 37.5 37.495 3. 甘露糖醇 1.00 2.00 0 37.5 37.495 4. Tween® 80 0.01 0 0 0 0*01 5. WFI (補足） 100 100 100 2000 2000 備註：WFI =注射用水 多 C請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ί- II號調配物是M64和80 °C兩個不同入口溫度進行噴霧 乾燥處理的。 於緩和攪拌下，將賦形劑例如甘露糖酵、甘胺酸及/ 或TWeen® 80遂一溶解於rhEPO漶縮水溶液中Μ製備五個溶 液。調配物III不加賦形劑。這些溶液的配方示於表1。所 有這些溶液均根據下面所列之噴霧乾燥處理參數進行嗔霧 乾燥處理： 溶液餵入速率： 1毫升/分鐘 空氣霧化速率： 600-700標準升/小時 乾燥空氣速率： 32,000至45,000升/小時

入口溫度： 64-80°C

出口溫度： 46-65 °C 唄霧乾燥處理後，最終固體rhEPO含量調配物I和Π大 約為4%(w/w),調配物III為l〇〇%(w/w),調配物IV和V為 12 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Α4洗格（21 ΟΧ 297公釐） •V6 τ κ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 經濟部中央標準局貝工消費合作杜印製 五、發明説明（11) 25%(w/w) rhEPO。殘留水分含量從3.0%至5.0%(w/w)有 所不同，係以 Karl -Fisher 法測定（USP XXIII-NF XVII， pp. 1840-1843, method a (1995))白勺〇經嗅霧乾燥處理白勺 調配物III,其粒子大小為4.1微米土 1.89。 使用含撺櫧酸鹽鍰衝液的膨鬆rhEPO之初步實驗未得 到安定之經噴霧乾燥處理rhEPO (含甘露糖酵、甘胺酸及/ 或Tween© 80)。因此，將膨鬆rhEPO透析去除檸檬酸鹽對 嗔霧乾燥處理很必要。為了在嗔蕗乾燥處理時得到好的收 童，餵入溶液必須具有至少2%之固體含最。因此，將經 透析之rhEPO溶液濃縮至20-100毫克/毫升。 比較調配物I與II及調配物IV與V之资定性數據決定， Tween® 80對製造安定之經噴蓀乾燥處理rhEPO而言，並不 需要。同時，由純rhEPO之6個月安定性數據顯示，甘露糖 酵及/或甘胺酸對製造安定之經嗔霧乾燥處理rhEPO也不需 要。因此，如果使用甘露糖醇和甘胺酸，似僅在提供增積 劑之功能（·作為等張/等滲透壓調整劑），用來改變最終 噴霧乾燥處理rhEPO調配物之rhEPO潘度。 本發明經嗔霧乾燥處理rhEPO具有經冷凍乾燥處理rhEPO 所沒有的優點。欲比較之，將調配物 I、 II和 HI 也冷 凍乾燥（見實例2)。經冷凍乾燥處理試樣於貯存2個 月之RIA數據在聲稱值（LC)之73-78%範圍内。在如此短 的貯存期間之此等低ΕΡ0效能值（如RIA法所測定）顯示其 不安定性。同時，經冷凍乾燥處理6個月之試樣於再組成 後，其SDS-PAGE上之ΕΡ0凝集體在2%以上，由此顯示再組 13 <請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A7 B7

ίλ.! \ ί ΐ \1β、 4252B7 五、發明説明（12 ) 成rhEPO之不安定性。因此，相同組成下，經嗔霧乾燥處 理調配物比經冷凍乾燥處理調配物更安定。

Μ將上面提及經噴驟乾燥處理調配物III和IV之安定 性數據示於下。於各情形下，將試樣貯存於5 °C,由韋其斤 頓墨點分析法證實，二者均具有凝集體在2%以下之rhEPO ------,----r-- {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部中央標準局員工消#合作社印製 調SFi物ffTTI之安定性齡據 時間 預期濃度 (單位/毫升） (單位/毫升） RIA 、.; (96LC) 0 142,169 120339 84 1 123,614 96295 78 2 120,482 106523 88 3 125,542 109520 87 6 118,554 115441 97 當例2 Rpn>冷减乾燥處理 本實例赦述用於製造呈純塑或與製藥上可接受賦形劑 14 • J— IJI * 調配物tt IV之安定性齡楗 時間 預期濃度 (單位/毫升） RTA (單位/毫升） (90LC) 0 31,500 35049 111 1 30,843 34188 111 2 30,121 29646 98 6 29,250 28521 97.5 3¼ 3 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) Α4規格（210X297公慶） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（13 ) 組合之經乾燥r h E P 0之冷凍乾燥法。測定經冷凍乾燥「h E P Ο 之安定性，將结果圼示於下。本實例所用所有rhEPO製劑 均如上所述進行噴霧乾燥處理。經噴霧乾燥處理之「hEPO 試樣以基本上如上述之RIA和韋斯頓墨點法測定之。 不含賦形劑之rhEPO溶液冷凍乾燥之典型冷凍乾燥處 理循環，開始時將溶液冷凍至約-40DC，維持於該溫度约3 小時Μ確保溶液完全冷凍。嘗溶液冷凍時，將冷凝器的溫 度降低至約-50°C。第一步乾燥之進行係先將乾燥室中的 壓力降低至約200毫陶爾，令此系統安定約3小時。然後將 溫度Μ每分鐘約〇.l°C之速率上升至約-30°C。繼續乾燥（ 利用將冰昇華成水蒸氣）約60小時。第二步乾燥之進行係 將產物溫度以每分鐘約〇.5°C之速率上升至約15°C。進一 步地將乾燥室中的歷力從約200陶爾減少至約100陶爾。繼 續第二乾燥相約16小時Μ確保乾燥完全。於第二次乾燥後 ，將各瓶加蓋並密封之。密封瓶貯存於約5°C至進行下述 安定性試驗為止。安定性試驗係將瓶中内容物以水再組成 ,MRIA和韋斯頓墨點法予Μ分析。安定性試驗的結果Μ 殘留rhEPO百分比示之。殘留rhEPO百分比較低者較不安定 。韋斯頓墨點法结果測定rhEPO係圼天然型式或圼變性、 凝集體型。與標準2%凝集體rhEPO相較下，具有2%以上 减集體之rhEPO試樣較不安定。玆將對不同調配物中經冷 凍乾燥處理rhEPO進行之安定性结果示於表4。 15 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X297公嫠） I SI I m _ 二· n ...... I 1 n n n------I In T m m I . I HI Ψ 身 j 衫，、 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 B7 五、發明説明（u)

A 5°C時於經冷凍乾燥處理調配物中EPO之安定性（聲稱值百 分比） 調配物 RIA 韋斯頓墨點法 巧 __-____X 開始時 1個月 2涸月 開始時1個月2個月 6個月 I 93.2 71.5 75.0 證實ΕΡ0存在 凝集體在2%Μ下 凝集體在2%Κ上 II 82.0 76.5 72.9 III 79.6 69.7 78.1 表4中所示數據說明經冷凍乾燥處理r h E P 0不如經噴耢 乾燥處理rhEPO安定。因此，與冷凍乾燥處理相較下，rh-EPO噴霧乾燥處理產生較安定之產物。本發明因此提供安 定之經噴霧乾燥處理之rhEPO,其製備不需添加任何賦形 劑或安定劑，例如環糊精、甘胺酸、甘露糖酵或Tween 80 。不含賦形劑之rhEPO製劑符合某些藥物輸送糸之需求， 舉例而言，經肺途徑之輸送糸通常需要藥物儘可能不含賦 形劑。 經濟部中央標隼局員工消费合作杜印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 茲已對本發明及相關的一些較佳具體實例有所敘述。 對熟悉此項技藝者而言顯而易見的變化是可以覺察的，本 發明不受其所局限，惟僅受随後專利申請範圍之限制。 16 本紙張尺度通用中國國家標率（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐）

Claims (1)

1. 52B ί i'ia" A8 B8r C8 D8 、申請專利lisr 專利申請案第85106816號 ROC Patent Αρρίη. Ν〇·85106816 修正之申請專利範圍中$本-附件一 Amended Claims in Chinese - Encl.i ~(民國89年6月/9 曰送呈) (Submitted on June /3 , 2000) 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 1. 一種製備經喷霧乾燥的重組人類紅血球生成素（rhEPO) 之方法，其包括： a) 提供 rhEPO 毫克/毫升之範圍内T b) 將所述溶液霧化成喷霧物； c) 以乾燥熱空氣乾燥所述噴霧物以將水自喷霧物蒸 發；及 d) 將經乾燥之rhEPO與乾燥空氣分離。 2. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中rhEPO之水溶液 不含鹽類或其他添加物。 3. 根據申請專利範圍第1項之方法 之前先進行透析以去除鹽類。 4. 根據申請專利範圍第1項之方法 壓力下餵入至噴霧内予以霧化。 5. 根據申請專利範圍第1項之方法 氣係同向通過乾燥器中。 6. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中經乾燥之rhEPO 係於旋風分離器中進行分離。 7. 根據申請專利範圍第1項之方法 60°C至85°C之溫度範圍内進行。 其濃度在20毫克/毫升至100 "'ί 其中水溶液於步驟(b) 其中水溶液係利用在 其中噴霧物和乾燥空 其中乾燥處理係於從 I------------k--------訂---------線： (請先閱讀背面之a意事項再填寫本頁) -17- C84504-CLAIM-WC(9CILAG) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） ABC™ 425287 六、申請專利範圍 8. 根據申請專利範圍第i項之方法，藉此取得一種乾燥之 rhEP〇組成物，其含有濃度在4.0%至100% ( w/w)範圍 内之rhEPO，且具有在3,〇。/。至5.0% ( w/w )範圍内之殘 留水分含量。 9. 根據申請專利範圍第8項之方法，其中粒子大小在2 〇 微米至6.0微米之範圍内。 t------Μ---------I I---I 訂>-------I > (請先間讀背面之ji-意事砝禹填寫本 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 κ 297公釐） 申請曰期 J21 案 號 0 類 M it 專利申請案第851Ό6816號 ROC Patent Appln. No.85106816 中文說明書修正第丨及2-1頁-附件二 Amended Pages 1 and 2-1 of the Chinese Specification -— (民國87年9月21日修正並送呈） (Amended & Submitted on September 21 * [ — A4 C4 425287 (以上各欄由本局4註） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 業|專利説明書 - 發明 一、新型名％ 中 文 製備經喷霧乾燥的重組人類紅血球生成素（rhEPO) 之方法 英 文 A method for preparing spray dried rhEPO 姓 名 麥迷克 DEEPAK B· MEHTA 2. 寇丹尼 DIANE C. CORBO 3. 艾庫瑟 KHURSID IQBAL 國 籍 1印度2.-3.爲美國籍 .發明^ -、創作A 1美國新澤西州布瑞格市費理大道100-A號 住、居所 100-A FINDERNE AVENUE, BRIDGEWATER, NEW JERSEY 08807 ϋ. 2.美國新澤西州佛利頓市利頓路17號 17 LITTON ROAD, FLEMINGTON, NEW JERSEY 08822 U.S.A. 美國新澤西州威爾瑞市科格路2號 2 KING GEORGE ROAD, WARREN, NEW JERSEY 07059 U.S.A. 姓 名 (名稱） 美商奥素大藥康 Ortho Pharmaceutical Corporation 國 籍 美國籍 三、申請人 住、居所 (事務所） 美國新澤西州瑞坦公路202號 Route 202, Raritan, New Jersey 08869, U.S.A. 代表人 姓 名 伯喬門•拉邦 (Benjamin F. Lambert) % SJ 本紙張认適用中目國家棣隼（CNS > M絲（2丨0><297公董 -裝· 訂 線 52B ί i'ia" A8 B8r C8 D8 、申請專利lisr 專利申請案第85106816號 ROC Patent Αρρίη. Ν〇·85106816 修正之申請專利範圍中$本-附件一 Amended Claims in Chinese - Encl.i ~(民國89年6月/9 曰送呈) (Submitted on June /3 , 2000) 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 1. 一種製備經喷霧乾燥的重組人類紅血球生成素（rhEPO) 之方法，其包括： a) 提供 rhEPO 毫克/毫升之範圍内T b) 將所述溶液霧化成喷霧物； c) 以乾燥熱空氣乾燥所述噴霧物以將水自喷霧物蒸 發；及 d) 將經乾燥之rhEPO與乾燥空氣分離。 2. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中rhEPO之水溶液 不含鹽類或其他添加物。 3. 根據申請專利範圍第1項之方法 之前先進行透析以去除鹽類。 4. 根據申請專利範圍第1項之方法 壓力下餵入至噴霧内予以霧化。 5. 根據申請專利範圍第1項之方法 氣係同向通過乾燥器中。 6. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中經乾燥之rhEPO 係於旋風分離器中進行分離。 7. 根據申請專利範圍第1項之方法 60°C至85°C之溫度範圍内進行。 其濃度在20毫克/毫升至100 "'ί 其中水溶液於步驟(b) 其中水溶液係利用在 其中噴霧物和乾燥空 其中乾燥處理係於從 I------------k--------訂---------線： (請先閱讀背面之a意事項再填寫本頁) -17- C84504-CLAIM-WC(9CILAG) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐）