TW311091B

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Publication number: TW311091B
Application number: TW082100545A
Authority: TW
Original assignee: Himagan Pfc Partnership Business
Priority date: 1991-12-12
Filing date: 1993-01-29
Publication date: 1997-07-21
Also published as: US5403575A; WO1993011868A1; EP0625068A4; DE69231503T2; CA2125401A1; EP0625068B1; US5785950A; ATE196857T1; JP3504264B2; JPH07509397A; CA2125401C; EP0625068A1; AU665224B2; AU3248493A; DE69231503D1

Description

311 〇Si2100545號專利申請案中文說明書修正頁（84年6¾ ) 1>7 五、發明説明（琎明之枝術範圈本發明有關含高度氟化，氯取代的，具7至9個碳原子之非環狀有機化合物之姐合物* Μ及有闞製造及使用之方法。更特別的，本發明有闞含此等高度氟化，氯取代的有機化合物之乳化液。本發明亦有闞具有7至10個碳原子（Κ 7至9個碳原子）之非環狀過氟氯醚之乳化液。此等新穎乳化液具有多種醫藥及输氧用途。其特別可作槩用照影劑供各種生物影像形式用，如核磁共振、1SF -磁共振照像、超音波、X-光、電腦斷層攝影及正子發射斷層攝影，作為输氧劑或”人造血液"、用Μ治療心臟發作、中風及其他種血管阻塞、作為冠動脈血管造形術之佐劑、及用於癌症放射治療及化學療法。發明之背長高度氟化有機化合物，特別是全氟碳化合物，已熟知為安定且化學鈍性。過去20年間已將許多注意力集中在此種化合物於生物糸統之用途，因其能溶解並運送大量氧。此等特性使其可作為照影劑、氧输送劑或”人造血液”、用於治療心臟發作、中風、及其他血管阻塞，作為冠動脈血管造形術之佐劑，及用於癌症放射治療及化學療法。高度氟化有機化合物中，稱可用於此種用途中者為全氟碳化合物，例如全氟萘烷、全氟茚滿、全氟三甲基贰環 [3, 3,1]壬烷、全氟甲基金鋼烷、全氟二甲基金網烷、及全氟-2, 2,4,4-四甲基戊烷；9-1 2C全氟胺*例如，全氟三丙胺、全氟三丁胺、全氟-1-氮雜三環胺；溴氟碳化合物本紙張又度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -------------裝---------訂---\---Γ!線 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 經濟部中央標準局Β工消費合作杜印製 83.3.10,000 311(¾¾2100545號專利申請案中文說明書修正頁（84年6饵） B7 五、發明説明（

X

經濟部t央標準局員工消費合作社印製 *例如，全氟辛基溴及全氟辛基二漠；F - 4 -甲基八氫喹嗪及全氟醚*包括氛化多氟環醚。此種化合物揭述於*例如，美國專利案 3962439 ， 3493581 ， 4110474 * 4186253 ， 4187252 ， 4252827 ， 4423077 ， 4443480 * 4534978 ， 4686024 ， 4865836 ， 4866096及 4868318 ，歐洲專利申請案 80716及158996，英國專利申請案1549038及German Of fen . 2650586 ° 靜脈内使用，高度氟化之有機化合物必須分散呈乳化液。見，例如*L.C. Clark,(克拉克）Jr等人， "Emulsions of Perfluorinated Solvents for Intravascular Gas Transport," Fed. P r o c . . 34(6), 1468-77頁（1975); K 優可山（Yokohama)等人，"A Perfluorochemical Emulsion As An Oxygen Carrier, "Artif. Organs (CI eve) . 8(1)，34-40頁（1984);及美國專利案第4, 1 10,47 4及4, 1 87,252號。純的，高度氟化有機化合物於血中不互混。此種乳化液必不僅含足夠高濃度之高度氟化有機化合物 K有效運送所霈氧量*其亦必須能受滅菌（K熱較佳），在流體或非'康結狀態有長安定性，能於血流中維持一段足夠長時間以输送有用量之氧，且能足夠迅速自身體排除Μ避免毒性及留滞於身體姐件及器官中。發明夕餿詮本發明有闞含高度氟化，經氛取代的，具有7至9個原子之非環狀有機化合物之新穎姐合物，及製造及使用之方法木紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4规格（21〇 X 297公釐） 83.3.10,000 ------------1裝---------訂！-——17’‘線 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 第S 2 1 Ο Ο 5 4 5號專利申請荼

中文說明書修正頁（84年6月）^ B7 修正五、發明説明（$) ~~ 補X 經濟部中央標準局負工消費合作社印裝。更特別的，本發明有瞄新穎含高度氟化的，經氛取代有機化合物之乳化液c 本發明之乳化液可用於各種運输氧之用途。其特別可用於》學用途，例如，各種生物照像措施之照影基質，包括核磁共振、超音波、19F -磁共振照相、X-光、霣腦斷層攝影、及正子發射斷層攝影，作為氧输送劑或”人造血液 ”，用於治療心輟發作、中風、及其他血管阻塞、作為冠動脈血管造形術之佐劑，及用於癌症放射及化學療法中。圖之篛汰圈1說明於输注後2,16, 30及60天存留於姐嫌中之全氟- 貳-氯丁基g(PFBCBE)之百分劑量；其中 _1A為10¾ 2 0毫升/公斤劑量來自齧齒類肝之F -貳-氯丁基醚乳化液之清除率。圖1B為〗0及20毫升/·公斤劑最'來自齧齒類肺之F-贰-氛丁基铤乳化液之清除率。 _1C為10及20毫升/公斤劑量來自齧齒類骨锤之F -贰-氛丁基醚乳化液之清.除率。 HMD為10及20毫升/公斤劑量來自齧齒類脾之F-贰-氛丁基醚乳化液之清除率。發职夕茳拥銳明為使更充份了解文中所述之本發明，敘述下列詳妞說明本紙乐尺度適用中國國家螵率（CNS ) A4規格（.210X29?公釐） I 种衣訂.iN (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) „ β 第 δ 2 1 c31im 82100545號專利申請赛 A7 明書修正頁（84年6月）B7 五、發明説明（β) 太發明有翮各種离度氟化，經氯取代的有機化合物（”氛氡化學物”）。此等化合物，特別是含彼等之乳化液，可用於各種《蓁及氧運蝓用途。此高度氟化，經氯取代之本發明化合物含7至9個碳原子，為非環狀，包括，例如，高度氟化籯化學物，特別是氯全氟化學物，包括全氟氯醚、及高度氟化的溴氯化學物，尤為溴氣全氟化學物。吾人較喜全氟氛化學物。本發明化合物一般共含三個氯或漠取代基，至少一個為氛。Μ僅存在氯诹代基較佳。本發明化合物Μ具兩届氯取 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁裝丁、-»

-L 經濟部中央標準局員工消費合作社印装本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )六4規格（210X 297公釐） 311091 Α6 Β6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（4 ) 代基更佳。雖然氛及溴取代基理論上可位於化合物中任何碳原子上，吾人較喜當有超過一個此種取代基，其於不同碳原子上時（即，非雙）。本發明最佳的氯氟化學物中- -1,8全氟二氯辛烷--氯取代基位於碳鏈之相反端。合成本化合物之一條途經述於A.Y.沙配代洛（Zapevalov)等人，"Synthesis And Reactions of Oxygen-Containing Organofluorine Compounds VI. Po1yf1uorinated Ketones With A Trifluoromethyl Group" , -lournal of Organic Chemistry nf t. h USSR. 14, 239-242頁（7, 1978) 〇本發明亦涵蓋含N-,0-及S高度氟化，烴氯取代的，具7 至9個碳原子之非環化有機化合物。例如，可用四级胺、醚或砸。應了解，任何本發明之高度氟化，經氯取代之有機化合物可一起混合，或與其他熟知的高度氟化有機化合物混合，用於本發明之乳化液中。本發明高度氯取代的有機化合物為具有7至9個碳原子之非環狀，直或支鏈化合物，Μ經取代之脂族化合物較佳。 Μ具有8個碳原子之化合物較佳。Κ具有8個碳原子經二氛取代的化合物，例如，全氟二氯辛烷及全氟甙-氯丁基醚更佳。依據本發明最佳的化合物是1,8 -全氟二氛辛烷 ("PFDC0")。此外，本發明亦涵蓋具有7至10個碳原子之全氟氛醚類 • Μ具有7至9個碳原子之全氟氯醚較佳。含於本發明範圍内之全氟氯醚包拮：[(Μ-(ερ2:)4-〇-]2π?2, 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公货） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) i裝- 訂. 在· 311¾0¾1 〇0545號專利申請察中文說明書修正頁（84年)

及五、發明説明（f) [C 卜（CF2)3-〇-]2CFCF3, [n-C2P4-0-C2F4-0-]2CF2 (C4Fe-〇-)2〇FCF2-Cl, c5Fii-〇_CF(CF2'C1)2* [(ci-cf2)2cf-o-]2cf2, c4f9-〇-c(cf2-cd3, C1-CF2C(CF3)2CF2-0-(CF2)4-c1> C1-C2Fa-〇-CF(CF3)CF(CF3)-〇-C2F4'CK C8Fiv-0-CF2-C1, CbFh-0-(CF2)b-C1, CF3-〇-(CF2)a-Cl, C]-C2Fa-〇-<CF2)4"0'CzF4~C1, Cl-(CF2CF2-0-)3C2F4-Cl, (CF3)3C-0-(CF2)5-Cl, C4Fa-0-CF2CF(CF2-Cl)-0-CF3， C4F〇-0-C2F4-0-C2F4-C1, CeFi3-0-CzF4-0-C2F4-Cl 全氟貳氯丁基醚。較喜 c4pe-0_c2p4_0_c2p4_c：l’ CeF13-0-C2F<i-0-C2F4-Cl 及全氣-¾-氯丁基酸’以全氣-贰-氯丁基醚較佳。氟化氯醚或氟氯醚先質Μ產生可用於本發明之全氟氛鍵之方法有數種。此種先質，例如，贰氛丁基酸，丁氧基乙氧基乙基氯及己氧基乙氧基乙基氯，可購得或可由本技藝中之原有技術之一立即合成。吾人較喜固相或液相直接氟化作用，如美國專利申請案 4,755,567、 4,859,747、 5,093,432，及公告的 PCT申請案 W0 90/06296中。氛醚或氟氯醚先質之直接氟化作用在適中或接近四周溫度，例如，-20〇C至+50CC下，用化學計量過量之氟氣進行。氟氣用鈍性氣體如氮稀釋較佳，κ使純氟氣之傷害減至最少或避免，並K控制先質與氟初接觸時產生熱之量。氟化作用可於無氧-及水-環境中進行，且可，裝訂 I . I線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部_央標準局員工消費合作杜印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公梦） 83.3.10,000 A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（6 ) 於固體粒子清除劑，例如，氟化納，之存在下進行，清除所產生的氟化氫副產物。吾人較喜於不存在氟化氫清除劑下使用液相直接氟化作用。氟氛醚先質分散在鈍性液體中，如氟碳或氟氯碳液體。反應於足K揮發氯化氫副產物並當產生時能使其自氟化帶去除。見，例如，公告的PCT申請案W0 90/06296。供靜脈内使用，本發明高度氟化，經氯取代的有機化合物分散呈乳化液。此種乳化液可含高至約60X(K體積計）之含氣化合物。本發明乳化液Μ含約10Χ至約50Χ (Μ體積計）高度氟化，經氛取代之有機化合物較佳。乳化液含約 25¾至約40ΜΚ重量計）本發明之氯氟化學物最佳。本發明之乳化液使用習用方式及方法製造，並包括熟知的高度氟化有桷化合物之乳化液常用之姐份。用於本發明乳液中之界面活性劑為任何已知的陰離子性、陽離子性、非離子性及兩性游子性界面活性劑。較佳者為非離子性表面活性劑如烷基或芳基化合物，其親水部份由聚氧乙烯鍵，糖分子，多酵衍生物或其他親水基因姐成，例如，商名 "普洛尼克（Pluronic)”之聚氧乙烯及聚氧丙烯氧化物之 BASF楊多特（Wyandotte)調配物，例如普洛尼克F-6 8或 F-108，或兩性游子性界面活性劑。氟化界面活性劑，例如，ATSURF*® F-31 CICI, Wilmington, DE)，亦可用於本發明乳化液中。見，例如，利斯（Riess)等人， "Design, Synthesis and Evaluation of Fluorocarbons and Surfactants for In Vivo (請先閲讀背面之注意事項再場窝本頁) 丨裝_ 訂Ί 7.4· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐）經濟部中央標準局員工消费合作社印刺衣 A6 ____B6_ 五、發明説明（？）

Applications, New Perf 1 uoroa 1 ky 1 ated P〇 lyhydroxy lated Surfactants", A r t. i f . Cells

Ajt i f ._Qr-Kans.. 16,421-30 頁（1988)。再次，此等界面活性劑之姐合當然可用於本發明之乳化液中。此外，化合物之混合物，其中之一或多棰不是界面活性劑，但化合物合併時作為界面活性劑，亦可用作本發明乳液之界面活性劑姐份。用於本發明乳化液中之界面活性劑為合生理性者較佳，例如，下列之一或多種：蛋或大豆磷脂、蛋黃素、及油酸之烷基鹽，如油酸納。Μ蛋黃素較佳。雖然用於本發明乳化液中特定界面活性劑依據乳化液其他成份之數量及特性而定，一般施用約0.5至105Κ(Κ全乳化液之重量計）界面活性劑。使用約1至約4¾ (Μ重量計）更佳。本發明之乳化液亦含有大致無表面活性且不具有意義水溶性之油。此種油為•例如，述於EP 231,091, W0 89/10118及U.S. Pat. 4,866,096中者。包括液體脂肪油、烴、石媸、如脂肪酸與單氫氧化醇之單酯、長鍵醚、二酸甘油醅、三酸甘油酯、矽嗣油及腈類。此類中可用的油為油酸棕櫊醯基酯、辛基睛、十二基睛、大豆油、紅花油、礦油、十六烷、及具有（：12-18碳鐽之二酸甘油酯及三酸甘油酯。當然可使三酸甘油酯混合物用脂肪酸姐成類似三酸甘油酯之油。此等油可單獨使用或Μ多種姐成用於乳化液及本發明之方法中。當乳化液欲作®用時，油或油姐合物當然為合生理用者。就此方:面，吾人較喜合生理用之液 -9 - 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） L---------------^--------^----Ί— ----Tlft (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 311091 A6 B6 五、發明説明（8 ) 體脂肪油，如大豆及紅花油。若存在，本發明乳化液中之油量，可於廣範園漘度下改變*依據乳化液之其他姐份的濃度及特性而定，主要依據乳液中高度氟化，經氯取代之有機化合物姐份之特點而定。供任何設定姐份產生合用乳化液之實際油濃度可如本發明所教用製備各種油漘度乳液之簡單技術容易地測定。此技術中，一般施用約0.5至2 0X W/VS；油或油混合物。Μ施用約1至5 W/VS：較佳。經濟部中央標準局W工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝· .:-.4. 除了高度氟化，經氯取代的有機化合物、油、界面活性劑及水外，本發明之乳化液亦含習用於”人造血”或血液代用品，氧输送劑或照影劑。例如，依據本發明之乳化液通常亦含等張劑，一般為糖，如葡萄糖、甘霣糖及果糖、甘油，或其他多氫酵以調整乳化液之滲透壓至約血液之滲透壓。亦可於滅菌後由緩衡液如氯化納、重碳酸納、氯化鎂等等調整滲透性，Μ減少紅血球细胞傷害之可能性。例如，吾人一般用約1至2.5Χ(Μ乳化液之重量計）此類劑。但是，同樣可使用其他量及其他滲透壓控制劑，例如•泰洛得（Ty rode)溶液。此外，此等乳化液可與0.9«食鹽水、乳酸化林格爾氏溶液，血淸及血清製品混合而對乳化液粒子大小及安定性無不良作用。本發明之乳化液亦包括其他姐份，如腫脹劑，例如，葡聚糖或羥基乙基-鸦粉（HE S)，及抗氧化劑。本發明之最佳乳化液中，氯氟化學物是PFDC0 |界面活化劑是卵黃蛋黃素，若存在油，是紅花油。一般加甘油至本纸張尺度迺用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） 100545號專利申請案中文說明書修正頁（84年6另) B7 五、發明説明（ - 年月曰、 84· 6· -9 補无經濟部令央標準局0工消費合作社印焚乳化液以調整等張性。本發明之最佳乳化液中，存在 PFDCO約40SIM體積計，蛋黃素約2.0 W/VS；,若存在*約乳化液之2.0 W/VS；。如上所述，本發明之含高度氟化，經氯取代的化合物之乳化液可作為照影劑。缺少氫，其於選擇的身體部份產生信號空處，可由各種照相措施與相鄰身體部位區分，例如、核磁共振、超音波、X-光、電腦斷層攝影及正子發射斷層攝影。此外，本發明之化合物及其乳化液可作為照影劑及於ieP-MRI中直接照相。當作為照影基，本發明之乳化液可由例如，大量靜注、口服、皮下、腹腔内、熥鞘内、及其他獲許可之投藥方法投藥，例如，插管，至轧化液能夠產生所需部位或解剖片的清析簡明之影像。本發明之乳化液亦可作為人造血使用，靜脈輸注至罹患失血或失氧血之動物或人類。因此，本發明之乳化液亦可用K維持活物種或其細胞成份例如，细胞糸之氧需求。除了供動物及人類之人造血用途外，此等乳化液可作為保存體之灌流液，如器官移植物，供長時間存於艘外。證明含高度氟化有機化合物之乳液保存器官於人類或動物體外之用途之公開文件包括卡瓦木拉（Kawamura)等人， "A Hew Simple Two layer (Euro-Collins'

So1utίοn/Perf 1 uorochemica 1) Cold Storage Method For Pancreas Preservation", Transplantation Proc. . 21,第 1376-77 頁（1989);西吉爾（Segel)與英菩 -11 - ------------j裝----------訂丨————丨-Ί.-線 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 本紙張又度適用中國國家標準（CNS)A4規格C210 X 297公釐） 83.3.10,000 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 _B6_ 五、發明説明（10 ) 沙（Ensunsa), "Albumin Improves Stability And Longevity of Perfluorocheaica1-Perf used Hearts", . J Physiol · ,254, H1105-12頁（1988);西吉爾等人 » "Prolonged Support of Working Rabbit Hearts Using Flusol-43 Or Erythrocyte Media" » Am, J_, PhvsiQL, 252, H349-59頁（1987);西吉爾輿瑞丁 (Rendig), "Isolated Working Heart Perfusion Vith Perf luorocheeica1 Emulsion Fluosol-43”， Am. J. Physiol·, 242, H485-89頁（1982)。氯氟化合物與本發明乳化液同樣有用。高度氟化有機化合物钃帶氧的能力使得其當分散作為乳化液時可用以增進癌放射治療及化學療法，用於冠氣球血管造形術，及治療心臓發作，中風及其他血管阻塞。證明此種乳化液增進癌放射治療及化學療法之公告文件包括泰査（Teicher)及羅斯（Rose)，” Oxygen-Carring Perfluorochemical Enu 1 s i on As An Adjuvant To Radiation Therapy In Mice”，Cancer Res»_, 44，第 4285-88頁（1984);泰査及羅斯，"Effects Of Dose And Scheduling On Growth Delay Of The Lewis Lung Carcinoma Produced B y The Perfluorochemical Emulsion, Fluosol-DAf, , I n t . J . Radiation Oncol q kx. Biol · Phn 12,第 1311-13 頁（1986);洛克威爾 (Rockwell)等人，** Reactions of Tumors And Norma 1 Tissues In Mice To Irradiation In The Presence -12 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） .----------------1:--------^------.玎-------線 (請先閲讀背面之注意事項再場寫本頁) 經濟部中央標準局8工消費合作杜印製 311091 A6 _B6_ 五、發明説明（11 )

And Absence of A Perfluorochemical Enulsion", I n t . J. Radiation Oncology Biol, Phvs.. 1 2,第 1315-18頁（1986);泰査及羅斯· "Perfluorochemical Emulsions Can Increase Tumor Radiosensitivity", Science, 223,第 934-36頁（1984);泰査等人，"Effect of Various Oxygenation Conditions And F1 uoso 1 -DA On Cytotoxicity And Ant i tumor Activity of Bleomycin In Mice”，J. Ha 11 > Cancer Inst.· 8 0,第 599-603頁（1988)。氯氟化學物及本發明之乳化液同樣有用。證明含高度氟化有機化合物之乳化液以使冠氣球血管造形術之不良作用減至最小之公告文件包括菲馬尼 (Virmani)等人，"Myocardial Protection By Perfluorochenical Infusion During Transient Ischemia Produced B y Balloon Coronary Occlusion·’， Am. Heart J. . 116,第 42 1 -3 1 頁（1 988);傑夫（Jaffe)等 A · "Preservation Of Left Ventricular Ejection Fraction During Percutaneous Transluminal Coronary Angioplasty By Distal Transcatheter Coronary Perfusion of Oxygenated Fluosol DA 20^* Am. Heart J.. 115,第 1156-64頁（1988);克萊門

(Cleman)等人；"Prevention of Ischemia During Percutaneous Transluminal Coronary Angioplasty By Transcatheter Infusion Of Oxygenated Fluosol DA -13 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） ------------------------裝----— -訂------線 - . -泰 (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) A6 B6 五、發明説明（12 ) 20X"，Circulation. 74,第 555 - 62頁（1 986 );安德森 (Anderson)等人•”Distal Coronary Artery Perfusion During Percutaneous Transluminal Coronary Angioplasty”* An . Heart J. ,110,第 720-26頁（1984)。本發明之氛氟化學物及乳化液同樣有效。證明含高度氟化有機化合物之乳化液治療心臓發作、中風及血管阻塞用途之公告文包括皮爾雷斯（Peerless)等人，’'Modification of Cerebral Ischemia With Fluosol", Stroke. 16,第 38 - 43頁（1 985);歐斯特風 (Osterholm)等人，”Severe Cerebral Ischemia Treatment By Ventriculosubarachnoid Perfusion With An Oxygenated Fluorocarbon Emulsion’、 Neurosurg . · 13.第 381-87 頁（1983);皮爾斯等人； "Protective Effect of Fluosol-DA In Acute Cerebral Ischemia", Stroke. 12,第 558-63頁（1981); 弗曼（F o r b a η )等人；"R e d u c t i ο η 0 f I n f a r c t S i z e W i t h Intracoronary Perfluorochemical In A Canine Preparation of Reperfusion"， Circulation· 71，第 1060-68頁（1985)。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 丨裝· ,4._ 本發明之乳化液可習由混合高度氟化姐份（不連績相）與水（迪績）相及界面活性劑混合製備。另外.本發明之乳化液可用水相與任何適當界面活性劑.及視需要而定’滲透劑，鍰衝劑，若需要電解質，其他乳化劑，另外的抗-氧化劑，等等加至水性分敗液中混合製備。然後此高度氟化 -14 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（21〇 X 297公釐）

31ί$9ϊ 00545號專利申請栗中文說明書修正頁（84年6笮） Β7 五、發明説明（6) 姐份混合至水性分散液内Κ提供本發明之乳化液。本發明之乳化液亦可預先將水性分散液與任何適當界面活性劑及，視需要定，其他習用人造血成份，例如，滲透劑等等。若存在油，然後以預定速率混合入上述水性分散液。然後高度氟化組份Κ預定速度混合以提供本發明之乳化液。將所得之乳化液滅菌，以溫度超過115°C較佳，於約 121 更佳，包装，否則經處理供貯存K及使用。混合，若需要預混，组份之乳化作用可利用任何習用混合器，均化器及乳化器進行。例如，可施用漁人牌觸摸混合器及微液化器或高林（Gaulin)均化器。製備本發明乳化液時，吾人較喜使用鈍性大氣（例如，預防界面活性劑及脂肪油（若存在時）退變*並使用溫度約45 °C至55°C。為更充份了解本發明*下文利用實例提供依據本發明說明製備及使用之較佳乳化液。 g例乳化液之郸備（方法A ) 自Kabi Vitrum取得粉化，精煉的蛋黃之蛋黃素分散在滅菌H2〇[米尼波® (Millipore)]，於氮氣（N2)使用瓦林 TM(WaringTM)摻和器以高速分散2-3分鐘。在鈍氣下收集如此分散的蛋黃素，貯存於4QC。所有如此製得之蛋黃素在其製備之一週内使用。蛋黃素分散液（18.00XK重量計）由剌烈手搖懸散*然後 -15 - -------------装---------訂--.I---線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央準局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 83.3.10,000

經濟部令央標準局員工消費合作社印製 17.01公克部份轉送至250毫升内入貯池中*再次於氮氣，此貯池供應一種微液化器TW均化器。然後，蛋黃素進一步用81.85公克水及2.94公克甘油於起動均化器前稀釋。然後起動均化器，壓力保持在約8000 psi，流速約350毫升 /分鐘，約2分鏟。於一《相鄰的入口 *低於入内貯池之高度，儘可能接近均化器入口，慢慢將油（3.5 0J：)引入（1-2 分鐘）。通過相同的相鄰入口慢慢（6-10分鐘）將氛氟化學物（117.6公克，70.0毫升）緩緩添加（6-10分鐘）。均化物通過均化器門瓣再循環15分鐘。控制添加0.47M Ma2C〇3或其他鹼將PH保持在約8.5或更高。所得乳化液，含1.75 W/VSK蛋黃素、2.0 V/V!t^，及40.0 V/V5K氛氟化學物，於旋轉蒸汽壓熱器中，於約121QC滅菌約15分鐘。

頌，化液之製備（方法FM 一夸脫瓦林（War ing)摻和器首先載装適當滅菌水 (137.0公克）、甘油（4.09公克）、蛋黃素（5.07公克）、界面活性劑（5.02公克）、及氛氟化學物質（177· 05公克， 98. 910a充）刈Μ姐寒速混合2-3分鐘。然後將整個内容物加至微液化器ΤΜ0: : 6器中之250毫升入内貯池内。起動均化器，壓力保持在約8000 psi，流速約350毫升/分鐘。控制添加0.47 M Ha2C〇3或其他鹼將PH保持在約8.0玆1郡高。物質通過均化器循環約15分鐘。較大批之狀況（7500毫升），乳化液可另於兩個不同之瓶中循環缌共6次。所得之轧化液，含1.24 W/VX甘油，2.01 W/VS；蛋黃素，1.99 W/VX界面活性劑及38.23 V/VSK氛氟化學物，然後於旋轉的 -16- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（210 X 2刃公釐） 83.3.10,000 ------------^裝---------訂i——；「線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 第82100 5 45號專利申請荼中文說明書修正頁（84年6饵） H 6· - 9 你、 B7 车El π fe*丄五、發明説明（丨《）補充經濟部4-央標準局員工消費合作社印製蒸氣懕熱器中，於約121°C，滅菌約15分鐘。乳化菠之製備（方法Π ) 水（約3000.0公克）置於装有一個高速攪拌棒，氮人口，及固體添加入口的5公升瓶内。起動攪拌器*加約2 7 0.70 公克蛋黃素及約257 . 7公克油至瓶内，保持在氮氣氛下。於約1800 rpn繼續混合約15分鐘。此時*成份形成一種粗乳化液。此粗乳化液送至一個装有低速攪拌器，氮入口，水冷卻夾層及進料線之14公升瓶。輕度振搖，加約 4139.80公克水，接著加5»；碳酸納水溶液（約56.6公克）。設定高林（Gaulin)M15R均化器門瓣至搡作壓約7500-9000 psi，粗糙乳化液通過此門瓣再循環，同時在均化器門瓣前Μ速度約15公克/分鐘加91 04.90公克氛氟化學物至混合物内。氯氟化學物添加完全後，全部乳化液循環至另一個 14公升瓶（裝備與第一個相同）内，在前述門瓣至約 7500-9000 Psi下繼績均化。均化物通過均化瓣約10次，各次通至另一個瓶中。此時，施用冷卻水至瓶夾層使均化物之溫度保持在約30QC (門瓣之入口側）及53°C (門瓣之出口側）。收集乳化液*裝瓶至350毫升容器内，於1210C，於裝有旋轉籃之壓熱器中滅菌15分鐘。上述方法中，用於製備下列舉例乳化液之特定方法示於刮强内。實例1-9及11中，Μ小量於微液化器中*壓力約 7000及9000 psig，10至15分鐘，製備氯氟化學物乳化液。賁例10大量於高林均化器中製備。水相之姐份，一般約佔此等乳化液體積之60¾，未顯示出。 -17 - ------------f 裝---------訂丨丨：----J 線 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 83.3.10,000 A6 B6 五、發明説明（16 ) 乳化液窗例 1 DBF02-7R ίΡΡΓΝ)βΓΑΐ 成份 v / vX 滅Μ後 V / V% ν/ν% 蛋黃素 1.35 1.77 1.77 紅花油 1.61 1.99 2.16 甘油 1.23 1.61 1.28 PCFN 53.73 70.54 39.41 pH 0 s m b V i s c c PSD 滅菌前 9.02 308 5.66 260 滅菌後 8.24 311 7.41 267 a全氟氯壬烷 b滲透性（毫滲透壓） c於37°C之黏度（厘托） d由雷射光敢射器測得之粒子大小分佈平均值（毫微米） '--------------J--------裝------訂』-----^ (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 經濟部中央標準局S工消費合作社印制农 -18 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） 311091 A6 B6 五、發明説明（17) 窖例 2 乳化液 DRF2-7R (PFCn)B [A] 滅菌後成份 M / Μ% W / V劣 v/vS! 蛋黃素 1.36 1 . 79 1.79 紅花油 1.54 2 . 02 2.20 甘油 1.23 1.62 1.28 PFC0 53.87 70.79 39.55 pH 0 s m V i s c PSD 滅菌前 8.86 314 7 .78 251 滅菌後 8.25 314 6 .85 309 a全氟氯壬烷 -----------------V--------裝----.1—訂·---— η 線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局S工消費合作社印製 -19 - 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） A6 B6 五、發明説明（18 ) 乳化液 R A S 6 -5 4 (PFnnn)a [B] 滅菌後成份 Μ / M% M / W% ν/ν% 蛋黃素 1.53 2.02 2.02 紅花油 1.51 1.99 2.16 甘油 1.30 1.71 1.35 PFDC0 53.82 70.72 39.51 pH 0 S D Vise PSD 滅菌前 8.85 3.34 9.22 187 滅菌後 8.58 3.27 7 . 98 199 a全氟二氯辛烷（1，8-全氟二氯辛烷） --------------1--------裝------.玎----1:線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局R工消費合作社印製 -20 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS)甲4规格（210 X 297公釐） A6 B6 五、發明説明（19 ) g例 4 a. 4h m R A S B - 5 R ( P F I) Π Π )「R 1 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) _裝· 滅菌後成份 Μ / V% W / V尨 v/vS! 蛋黃素 1.53 2.01 2.01 紅花油 1.47 1.93 2.10 甘油 1.23 1 . 62 1.28 PFDC0# 53.98 70.79 39.65 =!=包括異構物 pH 0 s m Vise PSD 滅菌前 8.80 2.83 6.05 187 滅菌後 8.35 2.78 5.93 196 經濟部中央標準局員工消費合作社印製管例 5 乳仆液 r ASfl-i 2 f PFnnm [b] M菌後成份 w/w$ v/v% w / v % 蛋黃素 3.04 3.98 4. 33 紅花油 0.00 0.00 0.00 甘油 1.23 1.61 1 . 28 -21 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） 31:1¾¾ϊ00545號專利申請案中文說明書修正頁（84年6g 五、發明説明（W) a 補充 PFDC0 53.64 70.26 39 . 25 pH 0 s m V i s c PSD 滅菌前 8.69 330 7 .33 174 滅菌後 8.20 336 7 .46 213 啻例 fi % m RAS9-14 (PFnr.n) fRT m.m m 成份 w / w S! w/vis v/ V % 蛋黃素 0.38 .50 55 紅花油 0.00 0.00 0 . 00 甘油 1 . 25 1.65 1 . 31 PFDC0 53.86 70.87 39 . 59 | 裝訂 « ^ I ^ 線 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫衣頁) 經濟部令央標準局員工消費合作社印製 pH 0 s m Vise PSD 滅菌前 8 . 30 307 21 · 70 187 滅菌後 7 . 76 325 8.95 311 -22 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 29?公釐） 83.3.10,000 五、發明説明（21 ) A6 B6 筑，化液當俐 7 RAS9-18 ηPFnnm 「ri 成份 V / V% 滅菌後 v/ V% v/v% 蛋黃素 1.51 1.97 1.97 紅花油 1.50 1.97 2.14 甘油 1.26 1.65 1.31 PFDC0 53.36 69.91 39.06 * 1,2全氟二氯辛烷 1包括異構物 pH 0 s m Vise PSD 滅菌前 7.96 336 6.96 172 滅菌後 6.99 337 5 . 63 192 ---------------「，--------裝----；——·ΤΓ----- (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -23 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） A6 B6 五、發明説明（22) 啻例 8 乳化液 R AS 10-2 8 (PFnrn) [B] 滅蘭後成份 V / V% V / V% V / V % 蛋黃素 0.38 0.05 0.50 普洛尼克F-68 (Pluronic F-68) 2.67 3.50 3.50 紅花油 0.00 0.00 0.00 甘油 1.24 1.64 1.30 PFDC0 54.19 71.32 39.84 pH 0 s m Vise PSD 滅菌前 8.59 314 17.70 201 滅菌後 8.23 322 9.35 345 官例 9 乳化液 ras 1 〇-.^〇 (PFnnn) [b] ---------------；---------裝------1#-----1 線一 * ί (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製滅®甾成份 w / w % W / V % v/v% 蛋黃累 2.56 3.50 3.50 -2 4 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） 311091 A6 B6 五、發明説明（23) 紅花油 0.00 0 . 00 0 . 00 甘油 1.29 1.69 1.34 PFDC0 53.59 70.36 39.31 pH 0 s m Vise PSD 滅菌前 8 . 95 327 6.81 202 滅菌後 8.42 333 8.45 227 管例 10 乳化液 R AS1 0-1 8 ( P F Π Γ. Π ^ [Β] -------------------------裝-------ΤΓ------線 - · * 一~ (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 經濟部中央標準局3工消費合作社印製 pH 0 s m Vise PSD 滅菌前 8.65 % •V 260 滅菌後 7.86 $ •V 257 -25 - 滅菌後成份 Μ / V% Μ / S% v/vS：蛋黃素 1.61 2.09 2.09 紅花油 1.53 1 . 99 2.16 PFDC0 54.10 70.31 40.18 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公g·) 經濟部中央標準局W工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（24 ) *於未含甘油之乳化液不計算當例 11 令瘰氡擗各乳化液（A-G)中蛋黃素•紅花油及全氟氯醚（PFCE)之量相當於2.00士0.05»/乂!1!蛋黄素、2.〇〇±〇.〇5»?/¥»：紅花油，及40 士 2 v/vS!PFCE。乳化液（A-G)中之全氟氯醚自氟氯醚先質中用液相直接氟化作用。於12l〇C滅菌25分鐘之前姐合物之pH值用5Si碳酸納單水合物之水溶液調整至7.5 r 至9.0。乳化物可再生且對熱滅菌安定。 /- 令m m m丨仆物 iB] 厂- .乳ibi"… 蛋黃素油 ν&2°°3·η20 Η2〇 PFCE * . .· .(g) -.(g) .(g) 一 -· . - --- (g) (g) A {RAS7-62)3 5.02 4· 94 4.08 - 0·Ό48 ::- .137.· 1 . 172.64 B (RAS9-4)3 ... 22.00 21.7 18.07 0.20 601.9 776.80 C (KAS9-6)3 7,01 6.97 5.85 0.097 - 191-1 242.55 D (RAS9-30)3 7.00 -6.94 5-*83 0.074 192.0 242.07 E (RAS9-44)3 16.98 16.81 14.26 0.19 463.4 589.94 F (RWF12-96)b 5-05 4.95 4.22 0.028 136.6 166.17 G -· — 4. (RWF12-98)C 5.46 5.36 4,47 0.033 147.80 186.03 pH 0 s η V i s c PSD 乳化液 A 滅菌前 8.69 313 8 .65 220 滅菌後 8.09 316 7 .98 236 -26- 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公货） _·---------------1--------裝----^-I.玎.^——β (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 311091 A6 B6 五、發明説明（25 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製乳化液 B 滅菌前 8.45 348 10.65 213 滅菌後 7.65 346 9.87 215 乳化液 C 滅菌前 8.85 339 9.02 201 滅菌後 8.33 334 8.13 216 乳化液 D 滅菌前 8.82 329 8.90 216 滅菌後 8.36 330 8.45 232 乳化液 E 滅菌前 8.71 342 11.3 245 滅菌後 8 . 03 343 10.9 266 乳化液 F 滅菌前 8.10 324 5.81 264 滅菌後 7.59 319 5.90 264 乳化液 G 滅菌前 8.28 327 7 . 50 266 滅菌後 7.77 320 7.31 273 -27 一 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） 311091 A6 B6 經濟部中央標準局8工消費合作社印製五、發明説明（26 ) a 全氟-贰-氯丁基醚（PFBCBE)

Cl-C^Fe-O-C^Fe-Cl b C4 F β - 〇 _ C 2 F·» - 0 - C 2 F4 - C 1 c CeF13-〇-C2F4-〇-C2F4-Cl 為塑造於人類血液循環中之安定性，乳化液A, B及EM 1:1與5¾人類血清白蛋白溶液混合於乳酸化的林格爾氐 (Ringer's)溶液內。於本基質中，37°C培養4天後*平均粒子大小分佈•實例A為289奄微米，實例B為265毫微米，實例E為263奄微米。在此等條件下乳化液同樣清楚地安定。啻例 12 乳化液C(實例11)M速度1奄升/分鐘靜脈输注入兩姐 200-250公克白色斯布格道威（albino Sprague Dawley)雄鼠内，總劑量為10毫升/公斤（40隻動物）或20毫升/公斤 (20隻動物）。於输注後第2、16、30及60天殺死各姐1/4。分析各動物之肝、肺、脾、及骨路測量全氟-甙-氯丁基醚 (PFBCBE)之清除率。在一個组嫌磨器（Tissuemizer)中磨碎姐嫌，用有機溶劑萃取，例如，氛仿、四氛化碳或三氟 -三氯乙烷萃取，由氣體層析分析。圖I說明於输注後各時間點四個器官中各存留的 PFBCBE之平均百分比劑量。於服用缌劑量1〇毫升/公斤 PPBCBE之老鼠，主要姐嫌清除:幾乎所有的全氟碳，於接受 -28 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公货） --------------- --------裝--------17---^--~ ^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) A6 B6 五、發明說明（27 ) 20牽升/公斤PFBCBE之老鼠中顯見排除之過程。因此， PPBCBE乳化液Μ可接受之速度清除。雖然前文揭述許多本發明之具體實例，其他具體實例亦存在本發明之範圍内。因此，應了解，本發明之範圍欲由申請専利範圍界定，而非由前文Β由實例展現的特定具體實例界定。 ..--------------7--------裝------訂.--- (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 經濟部中央標準局員工消费合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 2耵公货）

311091 第八二一〇〇五四五號專利申請案中文補充説明書（八十四年六月）下列數據證實吾等以含7至9個碳原子及至少2個氣原子之非環狀全氟氣化合物製成之乳液特別適用爲氧輸送劑。吾等所測試申請專利之全氟化合物乳液可有效自體内清除，且相較於先前技藝之乳液具有降低~ 之毒性效果。反之：，以已知全氟化合物製成之乳液經測試結果，無法有效自體内— 清除或具有毒性(例如：肺氣腫）’因此較不適用。例如已知全氟(三/ 甲基環己燒)謗發嚴重肺過度氣腫，爲灌流吾等之乳液或生理食鹽水之 5倍量。此外，灌流30天之期間，累積在老鼠肝中之已知全氟全氫菲量實際上會增加。乳液之製法基本上依下文所述，採用傳統之混合過程，分別使用此等全氟化合物製備乳液： ⑻由蛋黃卵嶙脂、蔡花油及.全氟化合物於水中、惰性大氣(N2)下，以華菱(Waring)授拌器高速擾拌約2分鐘，製成粗乳液。粗乳液移至仍於惰性大氣下，且裝設MICROFLUIDIZER™ #100型均質器之容器中。此粗溶液經均質ϋ以350毫升/分鐘之流速，使用60 psig空氣壓力驅動幫浦活塞，共循環約15分鐘。此全程均保持50°C以下之溫度，pH則控制在約7.5至8.5之間。

SJY/82G.DOCVWA ⑹依⑻項製祕紐，錢氣下私職細_瓶+，以鐵弗龍襯歡J基橡膠隔片及錢密封瓶子。裝瓶後之乳液加熱殺菌，細於旋轉殺菌器巾’以水賦加熱簡12m$15分鐘。特定乳液之組成示於下表J 〇 PFC* (40體積％、二氣化PFCs 表1.乳液油 iw/v % ) 卵磷脂 (w/v % ) 螫 ·*· 1，9-全氟二氣壬烷(pfdCN) 2 2 . -.τκτ*· 1，8-全氟二氣辛烷(PFDCO) 2 2 1，2-全氟二氪辛烷(PFDCO) 2 2 —全氟(三甲基環己烷)(PFTMCH) 2 2 全氟全氫菲(35體積％ PFC) 2 2 分析法 .i*- 爲了比較所製成乳液之特妹，在灌流30天後，分析氟化合物自老鼠肝中清除之結果。吾等亦分析老鼠肺氣腫之程度，來決定乳液之毒性。 I.自肝中清除之效果 ' 適用於生理上之氟化合物乳液必須可在血流中維持一段充份長時間，以傳送有用之氧量。然而，氟化合物長期累積在肝組織中，會造成肝臟脂肪壞死。因此氟化合物亦必須迅速自體内排出，以避免滞留在體内及中毒。分析吾等所製成各押同乳麟含之氟化合物自奸中清除之效果，方法如下： (a)爲史普勞-道利(sprague_Dawley)老鼠灌流包含4〇體積％ pFDcN、认 PFDCO、1，2-PFDC0及PFTMCH之乳液(每隻1〇毫升/公斤），或包含35體積％全氟全氫菲之乳液(每隻11.7毫升/公斤）。在灌流2天、 16天及30天後殺死老鼠。取出肝臟，於均質機中研磨，以含0.M% ' 正庚烷或正辛烷作爲内標準之四氣化碳萃取肝臟，以氣相層析法分析肝'萃液，以分析肝中氟化合物含量。灌流16天或30天後之肝含量以劑量％料示於圖P及表2中。亦由此數據計算半衰期㈣之天i，>' 示於表2。 ' 圖1中每長條均代表各老鼠之肝内殘留之全氟化合物劑量。劑量％平均値示於長條圖上方。 **劑量％等於佔灌流至老鼠體内總pFC量之％。

SJY/82G.DOC/WA 311091 奉2 全氟化合物自老鼠肝中清除之效果全氟化合物肝中劑量％ (灌流後天數） 2 1,8-PFDCO 51.23 1,2-PFDCO 49.91 1,9-PFDCN 58.61 全氟全氫菲 (35體積％ PFC) 30.52 16 30 t%天數 12.17 6.8 6.43 4.7 38.65 46.6 53.63 〇〇

SJY/82G.DOC/WA 50.00 τ 劑 60.00 30.00 量 4400 >ΐοο % ^.00 10.00 0.00 全氟全氫菲 55ό3

-ririirtB %天

〇0.00 劑 50-00.- 40.00.. 量 30.00-· % 20.CO .. 10.00-· 〇.〇〇- — 60.00 y 劑 50.00 40.00 -- 量 3 争 00- % 香》- 10.00 * 0.00 -U 70.00 丁劑 00.00 - 30.00 ” 量 40.00 -- 30.00 “ % 20.00 " 10.00 -· 0.00 ί 49.91

1,2-全氟二氯辛燒 16天 5:^3 1，8-全氟二氣辛燒》

1,9-全氟二氣壬烷 33.01 38.65

30天天

SJY/S2G.DOC/WA

31109J π.肺氣麗肺亂腫爲氟化合物之毒性現象之。這種氟化合物？丨起之肺氣腫嚴重限制其於血液替代物及其他醫學上適用之組合物中之用途。不會引走^員著肺氣腫之氟化合物乳液之毒性較低，因此較適合靜脈内使用。吾等分析吾等以l,8_PFDC〇、12_PFDC〇及pFDCNK製成各種乳液所誘發之肺氣腫量，方法如下： ⑻以礼液(10隻老鼠，各20毫升/公斤)或等體積之等張性生理食鹽水灌流.史普勞-道利老鼠。4天後殺死老鼠。於量筒中測量肺部排水量-來決定肺體積。數據示於表3。 C.克拉克(Clark)等人’ ”以F-茶烷爲主之氟碳化物乳液之生理評估及兔子之肺氣腫（Physi〇l〇gjeai evajua^jQn # with notes on F-decaline and pulmonary inflation in the rabbit) j Mater. Rgs. Soc. Symp. Proc., Volume Date 1987, 110 (Biomed, Mater,

Devices ) , pp. 129 -134，134,（1988)。表3.全氟碳.化物對老鼠肺體積之影響試驗化合物體積(毫升/100克) 生理食鹽水 0.87 1,8-PFDCO 0.91 1,2-PFDCO 0.95 1,9-PFDCN 0.85 PFTMCH 4.87 SJY/82G.DOC/WA -6- 311091 結果 ι.自老鼠肝中清除全氟全氫菲無法自財有效雜。灌流30天後，經觀之老鼠肝中

檢測到此全氟化合物5〇%劑量以上。反之，以1SL氯辛燒及U 全氟二氯核製蚊乳财有效自肝情除，1δ天後於肝巾之殘留量已低於1W (圖1):以以全氟二氣壬垸製成之乳液亦比全氟全氯菲更. 有效地自肝中清除。灌流2天後，肝中發現58⑽劑量之1,9_卿CN。 PFDCN持續随時間自肝中清除，因此灌流％天後，肝中pFDc敗殘留量僅爲38.65%劑量。 II.肺氣腫以經至少2個氣原子取代之全氟化合物(如：18_pFDC〇，！，2棚及PFDCN)製備之乳液所謗發之肺氣腫量(分別爲〇91毫升/⑽克， 0.95¾升/100克及〇.85毫升/则克)與生理食鹽水灌流後所謗發之氣腫娜別讀/觸克)沒有骑上之差異。反之，PFTMCH誘發顯著工肺風腫’即4.87毫升/卿克，爲生理食寧水灌流後所誘發肺氣腫之至少5倍量。 · ♦ ，‘ 結論重點本文所數據及吾等先前之説明中所示之數據證實吾等以含有7-9 個碳原子及至少2個氣之非環狀全氟化合物製備之乳液優於先前技藝之乳液。吾等工乳液可自肝中有效清除，不會使老鼠謗發顯著肺氣腫。參見下列，纟示合圖1之黃色部份。反之，以非氣化PFCs(如：全氟辛烷（，，pF〇”）、全氟壬烷 (PFN )、全氟(二甲基環己燒)、全氟氫菲及全氟勤充(PFD))製成之乳液謗發顯著之肺氣腫或無法有效自肝中清除，或二者。參見综合圖】中粉紅色部份。此外，吾等證實含2個氣而不含7_9個碳原之Ci〇pFC不適合製造吾等之乳液，其在室溫下呈固體。參見综合圖j之紫色部份。 σ等亦從貫僅含1個氣但分別含8及9個c原子之二種砰c〇， PFCN)未具有吾等乳液之優越特性。參見综合圖j之藍色部份。非環狀 8C單氣化PFC會謗發顯著之肺氣腫。雖然非環狀％單氣化pFC不會謗發肺氣腫，但會在肝中累積。最後，吾等顯示以溴取代之PFC(含α以外之鹵素）：全氟辛基溴 (PFOB) ’製備之乳液在老鼠及稀彿中均出現吾等乳液所沒有之顯著毒性效果。凊比較综合圖1及2之黃色(吾等申請專利之乳液)及綠色(pF〇B) 部份。在老鼠中，PFOB謗發顯著量肺氣腫。溴化全氟化合物乳液在狒狒中甚至出現更顯著之毒性效果> 經PF0B灌流之狒狒在灌流6〇天期間，展現大幅增加之呼吸速率及大幅減少之血小板數。4隻狒狒中僅3隻存活超過60天。反之，經PFDCO乳液灌流之狒狒之呼吸速率則與灌流生理食鹽水之狒狒沒有統計上之差異，僅呼吸速率在一個時間點短暫地升高，随後即回復對照組之速率。PFDCO乳液所引起之血小板數降低程度亦較低。且所有接受PFDCO灌流之拂狒在灌流後均存活超過6〇天。 SJY/B20.D0CAVA -8 - 综合圖1 毒性效果肺氣腫自肝中清除程序 (毫升/100毫升） S/2 (天）二氯化物

CaF1RCI? (1,8 PFDCO) 非環狀，（^ 0.91 是 6.8 CrF16CI2(1,2 PFDCO) 非環狀，c8 0.95 是 4.7 CgF18CI2(1,9 PFDCN) 非環狀，Cg 0.85 是 46.6 is" * ϋ非環狀二；職麵、' 室溫下呈固體，麵猶鱗參雜鐵嫁黎^^竣多繼泰恐·资务 i歡'灸叛灸髮為资S終衫衫

%_毒。減於MPFDO)切輯錢高，血小减少及死亡率提高

sJV/82G.D〇cyWA 311091 ’生理食鹽水 c8f16ci2 (1,8-PFDCO) • · · ' ' ..... C8(^7Br (PFOB). : ^ .... ......... ·.. ； . . . .... . ..... ... -.' . ' , ' ' ： ' ·：· 全氟化合物 19-32 議議_______ 19-32 (暫時至 ~50) 呼吸速率對狒狒之毒性效果 260-380K .....丨 116K 76K 血小板數 · .... 之. .. ϊΐ：；囊 CO 存活率 ¾命涵2 SJY/82G.DOC7WA -10- Μ. η 年f月 Γ修正曰補充第八二一〇〇五四五號專利申請案1 _ *· ' .— 中文補充説明書11(八十四年七月）吾等以本申請專利之乳液之特性’其中含有具7_9個碳原子與至少2 個氯原子之非環狀之氣全氟化合物，與含有不在本申請專利範圍内之其他氟化合物之乳液作一比較，特定言之，吾等比較組成如下之乳液之生理作用： / 1' (1)全氣_二氯辛烷，C8Fi6C12，係二氣化C8氟化合物；二 ⑵二氣化Ci〇氟化合物，C10F2〇Cl2' ' , ⑶非鹵化氟化合物，全氟辛烷，C8F!8全氟壬烷，C9F20，及全氟萘烷，Cl〇F20 ; ' 飞4)备7_9個碳之單鹵化全氟化合物，特定言之C9F19CI及C8F17CI ;及 ⑸全氟辛基溴化物，係經溴而非經氣修飾之8碳氟％物。 *此化合物於室溫下呈固體，熔點高於45°C。結論概要本文所示之數據證實吾等> 含有7-9個碳原子及至少2個氣原子之非 — 環狀全氟氯化合物製成之乳液特別適合靜脈内使用。吾等所測試之二氣全氟化合物容易製成乳液，可有效地自體内清除，且毒性效果較低。反之，Ci〇二氣化全氟碳化物則未形成合適之乳液，其在室溫下呈固態，且熔點高於45°C。同樣地，單氣化化合物亦未形成合適之乳液。全氟氣壬烷無法有效地自肝中清除，且全氟氣辛烷會造成肺過度

SJY/81G.D0C/WA 氣腫。此外、’經非鹵化全氟化合物系經氣以外之卣素，即溴，修飾之全氟化合物亦比吾等申請專利之乳液具有更高毒性副作用，即呼吸速率提高’血小板數下降及存活率低，，或自組織中清除效果差。此等效果使之較吾等之乳液更不適合靜脈内使用。乳液之製法基本上依下文所述，採用傳統之混合過程，分別使用此等氟化合教^ 製備乳液。+ , Γ； ⑻由蛋黃印嶙脂、葵花油及全氟化合物於水中、惰性大氣^2)下> .1/1 華菱(Waring)攪拌器高速攪拌約2分鐘，製成粗乳液―。粗乳液移於惰性大氣下，且裝設microfLuidizer™ #100型均質器之容器中。此粗溶袭經均質器以350毫升/分鐘之流速，使用60 psig空氣壓力輕動幫浦活塞，共循環約15分鏟ό此全程均保持5〇°C以下之溫度，pH則控制在約7.5至8.5之間。 ⑸依⑻項製成乳液後，在氮氣下裝入100毫升〗型玻璃瓶中，以鐵弗龍襯裡之J基橡膠隔片及鋁蓋密封瓶子。裝瓶後之乳液加熱殺菌，其後於旋轉殺菌器中，以水蒸汽加熱至約12Γ(：約15分鐘。特定乳液之組成示於下表1。 \ 表1.乳液 PFC* 油卵磷脂體積％ (w/v % ) (w/v % ) 二氣化PFCs 全氟二氯癸烷(PFDCD)** - _

SJY/81G.DOC/WA 全氟二氣辛痪(PFDCO) 2,. .2 . -— ~ 單氣化PFCs 全氟氣壬烷(PFCN) 2 2 全氟氣辛烷(PFCO) 2 2 未取代之PFCs— 全氟萘煉(PFD) 2 2 " —-· - 全氟壬烷(PFN) 2 . 2 - 全氟辛烷(PFO) 〆 2 2 ^^ibPFC - 全氟辛基溴(PFOB) 2 2 S. 分析法爲了比較所製成乳液之特枉，在灌流30天後，分析氟化合物自老鼠 —T-·、· 肝中清除之結果。吾等亦分析老鼠肺氣腫之程度及狒狒接受乳液灌流後之呼吸速率、血小板數及存活率，來決定乳液之毒性。 *PFC-全氟化合物 **無法製備。此化合物於室溫下呈固態，熔點超過45Ό。

SJY/8IG.DOC/WA sU〇9l 之效果 — -'— 適用於生理上之氟化合物乳液必須可在血流中維持一段充份長時門以傳送有用之氧量。然而，氟化合物亦必須儘快自體内排除，以避免在體内留滞及產生毒性。吾等分析吾等所製成各種不同乳液所含之氟化合物自肝中清除之效果，方法如下： ⑻以每種乳液灌流史普勞_道利(Sprague_Dawley)老鼠(每種乳液24隻，每隻1〇毫升/公斤）。在灌流後數個間隔時間點各殺死8隻老鼠。取’ 出肝-臟，於均質機中研磨，以含0.1-1%正庚烷或正辛烷作爲内標I準之四氯化解取賴，以氣減躲鱗料液，以轉財合物含量。30天後肝中所含劑量;^數據示於圖1及表2。 *劑量％ *等於括灌流至老氣體内之總PFC量之％

SJY/81G.DOC/WA -4- 表2-全氟化合物自老鼠肝中之清除程度

全氟化合物 PFN PFOB PFDCO c9f19ci 肝中劑量1 2 38,3% ** < 5%3 47,6% 圖1 :全氟壬烷及全氟二氣辛烷自-老鼠肝中消除程度

灌流後天數

SJY/81G.DOC/WA 1 灌流30天後 2 清除速率大致與PFDCO相同 3 60天後，肝中殘留量低於0.1%劑量 311091 II.肺氣腫、肺氣腫爲氟化合物之毒性現象之這種氣化合物引起之肺氣腫嚴重限制其於血液替代物及其他醫學上適用之組合财之驗。不會弓丨起顯著肺祕d化合物乳社雜贿，目雜適合靜脈内使用。吾等命吾等所製成各雛液㈣發之職齡度，方法如下： ⑻以扎液(10隻老鼠’各20毫升/公斤)或等體積之等張性生理食鹽水灌流史普勞-道利老鼠。4天後殺死老鼠。於量筒中測量肺部排水量i 來決定肺體積。數據示於表3。 κ ς% *L. C.克拉克(Clark)寺人’ ”以F-茶垸r爲主之氟碳化物乳液之生理評伯；一及兔子之肺氣腫（Physiological evaluaticm of fluoiOcarbon emulsicms with notes on F-decaline and pulmonary inflation in the rabbit ) » Mater. Res. Soc. Symp. Proc., Volume Date 1987, 110 (Biomed, Mater,

Devices ) , pp. 129-134,134, (1988)。表3.全氟竣化物對老鼠肺體積之影響試驗化合物體精f毫井/100克) PFD 2.5 ‘ PFCO 2.28 PFOB 1.05 PFDCO 0.91 生理食鹽水 0.87 SJY/81GX)OCVWA -6- 311091 III·動物毒性、：狒狒模式氧化合物雜之其他縣躺如：啊轉、刻、絲及動物死亡率等之改變。因此亦分析這三種特性，來評估所製成各種氣化合物乳液之毒性。以吾等之氟化合物乳液或生理食鹽水灌流狒狒(每種乳液或生理食鹽水灌流4隻_)。測定_之呼吸速率、血小板數及⑼天時之存活率’分析乳液之雜。灌流4-7天後，使用人工計算法測定血小板數。丨圖2顯示在灌流60天期間之各不同時間點之狒狒呼吸速率。經生^^ 鹽水灌流之狒狒之呼吸速率爲19-32次/分鐘。 _ 圖2 :經PF0B、PFD及PFDC0處理之彿稀之呼·吸速率之比較 2 0 8 6 4 1 1 呼吸次數\分鐘

0 0 0.17 1 2

PFD 卞FOB PRD CO 21 30 60 灌流後天數

SJY/81G.DO〇yWA 311091 表4顯示⑴4-7天時之平均血小板數，及(2)灌流60天後之存活率。表4,狒狒之PFD、PFOB及PFDCO之比較試驗'化合物存活率血小板數 PFD 1/4 30K PFOB 3/4 76K PFDCO 4/4 116K 生理食鹽水* ... 4/4** 260-380K 結果 I.二氣化<38對二氯化c10全氟化合物<

C8Fi6Cl2(PFt)CO)對 Ci〇F2〇Cl2(Caporiccio ) 二氣化全氟化合物，C10F20CI2，係.由明尼蘇達州礦業製造公司 (Minnesota，Ming and Manufacturing Co_)合成及提供。此全氟氣化合物於室溫下呈固態，且熔點超過45°C。由於正常人體溫爲約37。〇，因此不能使用Ci〇F2〇Cl2來製備靜脈用之乳液。反之，I，8-全氟二氣辛燒，.‘C^MdyiipFDGO，，)爲容易製成乳液之液體。以PFDCO製備之乳液可有效自肝中清除_3〇天後之肝中殘留量低一〜於5% (圖1)，於60天時，偵測到約〇以（表2)*。 Π_二氣化對單氯化全氟1合物

CgFi 6Cl2(PFDCO)#C9Fi 8Cl(Wesseler )#C8F! 7C1 表2及3所示輯亦顯示以含有至少2個氣之全氟氣化合物(如： PFDCO)製成之乳液相較於以單取代之全驗化合物如·全氟氣壬燒

SJY/81G.DOC/WA (”PFCN”）C9F19C1及全氟氣辛燒ς ”PFCO”）C8f17C1製成之乳氣具有更優越之肝清除特性或降低之肺 A. 自肝中清除 PFDCO可有效自肝中清除-在灌流3〇天後，肝中殘留之pFDC0劑量低於5%，60天後，肝中檢測到之pFDc〇劑量爲約0.1% (表2)。單氣化全氟氣壬烷無法有效自肝中清除。30天後，C9F19CI在肝中之殘留量~ 仍達劑量之47.6% (表2)。，. *吾等亦分析使用PFDCO之類似物，1、2-全氟二氣辛烷製成之乳液自肝—一" 中清除之效果。16天後，肝中ι，2-‘氟二氣辛燒劑量仍殘留6.43%。 B. 肺氣腫比較PFDCO及PFCO乳液所誘發之肺氣腫量。表3之數棣顯示， PFCO乳液誘發相當高量肺氣腫，2.58毫升/100克，相較於PFDCO乳液，爲0.91毫升/100克。PFCO乳液謗發相當高量肺氣腫之現象使之不適用於靜脈内用途。反之，PFDCO乳液赞謗發之肺氣腫量則與生理食鹽水所誘發之程度(0.87毫弁/100克)在統計上沒有顯著差異。 III.二氣化對無氣化全氟化合物〜 C^l 6Cl2(PFDCO)對 C9F2〇(PFN)及Ci 〇F2〇(PFD) 以經至少2個氯取代之全氟化合物製成之乳液比以無氣化之全氟化合物(如：全氟辛燒’ CgFisC’PFO’’），全氟壬烷，C9F2〇(，，PFN”)及全氟莕烷’ Ci〇F2〇("PFD")製成之乳液更適合靜脈内使用。 A.自肝中清除

SIY/E1G.DOC/WA 311091 圖1所示數據顯示，PFN未迅速自.體内清除。灌流30天後，肝中PEN 劑量殘留38.3%。反之，30天後肝中檢測到之PFDCO劑量低於5%，60 天後，肝中殘留之PFDCO劑量約0.1% (表2)。吾等無法測量鼠類肝中PFO之清除程度，因爲所有接受pf〇乳液灌流之老鼠均在灌流約2天後死亡。檢視經PFO灌流之老鼠肺部時顯示有嚴重肺過度氣腫。 B. 肺氣腫 ( ί 分析.以PFD或PFDCO製備之乳液所謗發肺氣腫量。表3之數據顯示全_ 氟秦規乳液顯著誘發更多肺氣腫量(2:5毫升/1〇〇克），高於pFDCO季[/ 液(0.91毫升/100克)及生理食鹽‘灌流液(0 87毫升/1〇〇克))之謗發程度。這種肺就腫量增加之現象使得含全氟萘烷之乳液比吾等之溶液較不適合供靜脈内使用。 C. 動物毒性

V 以全氟茶燒製成之乳液對狒狒有毒性。 ⑻全氟萘烷乳液使呼吸速率提高至100次<分鐘，相較於pFDC〇乳液則僅55次/分鐘，灌流生运食鹽水之彿狒則爲丨^次/分鐘(圖2)。此外，PFD組在60天實驗期中均出現呼吸次數增加之現象，而\ PFDCO組則僅在灌流7天；^暫時增加至55次/分鐘，其他時間點則均與生理食鹽水對照組沒有差異。 (b)全氟審燒乳液嚴重抑_狒之到'板數，由生理食鹽水灌流之彿狒 U60-380K/微升下降至全敦茶燒灌流之拂狒之胤^微升⑽。這種血小板數嚴重受㈣之㈣會造錢血及㈣血性休克而死

SJY/81GDOC/WA •10- 311091 亡。PFD。。灌流之狒狒之血小板數爲116K/微升，顯著高於全象茗烷灌流之狒狒之30K/微升(表4)。 (c)最重要者，4隻接受全氟苯燒乳液灌流之狒狒中，只有丨隻存活6〇天 (表4)。反之，接受PFDCO乳液灌流之狒狒則均存活60天以上。 IV氣化對溴化全氟化合物 C8Fl6Cl2(PFDCO)對 C8F17Br(PFOB) : ~ 全氟辛基溴與PFDCO自體内清除之速度實質上相同。然而，氣取代( 之全氟.化合物乳液所謗發之肺氣腫程度低(犯7)毒性效應低(犯8)，使^^ 驚人地優於溴取代全氟化合物乳液，更適合靜脈内使用” A.肺氣腫 ’ 以經至少2個氣原子取代之全氟化合物如：pFDC〇製成之乳液所謗養之肺氣腫量低於由經其他_素，即溴取代之全氟化合物所製成乳液讀發量H含全氟辛錢之乳麟老鼠，發巾度之肺氣腫， 1.05毫升/100克，相較於生理食鹽水謗發量則爲〇 87毫升克。此肺就腫上（差異表示對狒狒肺功能之毒隹。pFDC〇所謗發肺氣腫量爲0.91毫升/100克，與生理食鹽水誘發量〇 87毫升刀〇〇克沒有統計上之差異(表3)。〜 B.動物毒性全氟辛基溴（PF0B )乳液對狒狒之毒性高於pFDC〇乳液。毒性係由呼吸速率、血小板數及存活率來決定。 _嗎發呼吸鱗增加至119以錄，她於生理食财伽_32 次/分鐘’且前者在6〇天實驗_均未喊正常（κ2及表4)。經

SJY/81GDOC/WA 11 311091 PFDCO乳、液灌流之狒彿之呼吸速李從未超過分次/分鐘。僅在暮流 7天後’出現此溫和升高之數値。其他時間點，pFDc〇所謗發之呼吸速率則均與生理食鹽水對照組沒有差異。 (b)PFOB乳液亦抑制狒狒之血小板數至76K/微升。此血小板數顯著低於PFDCO乳液灌流之狒狒(I·/微升)(表$，且遠低於生理食鹽水灌流之狒狒(260-380K/微升）。 — (c)PFOB與PFDCO乳液之毒性差異亦展現在狒狒之存活率上。所有經丨: PFDQO乳液灌流之狒狒均存活6〇天以上。然而4隻經PFOB乳液灌流 . 之狒狒中，僅有3隻存活6〇天以上(表4) SJY/81G.DOCVWA -12·

Claims

第82100545¾專利申請案中文申請專利範圍修正本（86年5月） A8 B8 C8 D8 --- β6. 5. 2 7 修正“ 8誠克申請專利範圍 2 . 3 . 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 5 . 6 . 一種作為氧输送劑之乳化液姐合物，其包含：從1 3ί到60¾體積比之量的具有8或9個碳原子及2個氯原子之非環狀氟氯烷或氟氯醚，從0.1 S!到10¾重量比之量的生理可接受界面活性劑，其係選自蛋黃素、蛋及大豆磷脂、以及油酸之烷鹽姐成之群，以及非實質表面活性且非明顯溶於水之油，其係選自紅花油及大豆油姐成之群。 —種作為氧输送劑之乳化液組洽物，其包含：從1 S!到60¾體積比之量的具有8或9個碳原子及2個氯原子之非環狀氟氯烷或氟氯醚，從0.1 S：到10¾重量比之量的蛋黃素， K及非實質表面活性且非明顯溶於水之油*其係選自紅花油及大豆油姐成之群。根據申請專利範圍第1或2項之乳化液姐合物·其中氟氛烷或氟氛醚以103!至50»!體積比之量存在。根據申請專利範圍第1或2項之乳化液组合物，其中氟氯烷或氟氯醚25¾至40Χ體積比之量存在。根據申請專利範圍第1或2項之乳化液姐合物，其中非環狀氟氛烷或氟氯醚具有8個碳原子。根據申請專利範圍第1或2項之乳化液组合物，其中氟氛烷是1 , 8-全氟二氛辛烷。根據申請專利範圍第1或2項之乳化液组合物，其中氟氯_是全氟氯醚。本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) Hl〇9i 六、申請專利範圍 3 第醚圍一—-範氯利專請氟申全據為根醚雙物合姐液化乳之項氯氟全中其装— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製 2 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐）