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TW202436353A - 抗ｃｌｄｎ６與抗ｃｄ３多重特異性抗體以及使用方法 - Google Patents

抗ｃｌｄｎ６與抗ｃｄ３多重特異性抗體以及使用方法 Download PDF

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TW202436353A
TW202436353A TW113107888A TW113107888A TW202436353A TW 202436353 A TW202436353 A TW 202436353A TW 113107888 A TW113107888 A TW 113107888A TW 113107888 A TW113107888 A TW 113107888A TW 202436353 A TW202436353 A TW 202436353A
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萬志濤
李丹
唐曉燕
陳運
雷鳴
邵婷
薛柳
丁堯
吉如月
徐啟明
國慧
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瑞士商百濟神州瑞士有限責任公司
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Abstract

本揭示提供結合於人類CLDN6及CD3之多特異性抗體及其抗原結合片段、包含該抗體或其抗原結合片段之醫藥組合物、以及該多特異性抗體或其抗原結合片段或該組合物用於治療諸如癌症之疾病的用途。

Description

抗CLDN6與抗CD3多重特異性抗體以及使用方法
本文揭示結合於人類密連蛋白6 (CLDN6)及人類分化簇3 (CD3)之多特異性抗體或其抗原結合片段以及產生其之方法。特定言之，本揭示尤其提供包含抗體或其抗原結合片段之醫藥組合物以及治療癌症之方法。
本技術背景之以下描述僅作為理解本技術的幫助而提供，且不被承認描述或構成本技術之先前技術。
密連蛋白(CLDN)基因家族編碼整合膜蛋白，該等蛋白係緊密連接(TJ)之重要結構及功能組分。CLDN顯示四跨跨膜拓撲結構，具有兩個胞外環且N末端及C末端均位於細胞質中(Krause等人, Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. 2008)。有26種人類CLDN以組織特異性方式在上皮細胞及內皮細胞中表現(Günzel等人, Physiol Rev. 2013)。藉由以順式(細胞內)及反式(細胞間)相互作用彼此相互作用，CLDN在調控細胞旁通透性及維持細胞極性方面發揮重要作用(Tsukita等人, Trends in Biochemical Sciences. 2019)。另外，CLDN可作為在細胞連接處組裝複合物之蛋白質支架，且將信號傳遞至細胞內部以調節基因表現及細胞行為(Matter等人, Nat Rev Mol Cell Biol. 2003；Singh等人, Pflugers Arch. 2017)。
CLDN6於2001年首次被鑑定及表徵(Turksen等人, Developmental Dynamics. 2001)。CLDN6之表現受各種因素及機制動態調節(Du等人, Mol Med Rep. 2021)。CLDN6係胚胎幹細胞中最早表現的、決定上皮命運的蛋白質之一，且係人類多能幹細胞(hPSC)之細胞表面特異性標記(Ben-David等人, Nat Commun. 2013)。有趣的是，可在胎兒組織(包括胃、胰臟、肺及腎)中偵測到CLDN6表現，但在對應成人組織樣品中卻偵測不到(Reinhard等人, Science. 2020；Abuazza等人, Am J Physiol Renal Physiol. 2006；Hashizume等人, Dev Dyn. 2004)。值得注意的是，雖然在正常成人組織中轉錄靜默，但據報導，CLDN6在包括卵巢癌、子宮內膜癌、睾丸癌、肺癌、胃癌等的多種癌症類型中上調(Kohmoto等人, Gastric Cancer. 2020；Kojima等人, Cancers (Basel). 2020；Micke等人, Int J Cancer. 2014；Sullivan等人, Am J Surg Pathol. 2012；Ushiku等人, Histopathology. 2012)。癌組織與正常組織之間的CLDN6差異表現以及膜定位使其成為癌症免疫療法之有吸引力的標靶。
CD3雙特異性抗體(BsAb)係癌症免疫療法領域中一種新興的治療方式。CD3-BsAb藉由同時結合於腫瘤細胞上表現之腫瘤相關抗原及T細胞上之CD3發揮作用。藉由CD3-BsAb將此兩種細胞類型緊密連接，從而形成獨立於MHC限制之免疫突觸，且導致T細胞活化及隨後的抗腫瘤免疫反應(Kamakura等人, Pharmaceuticals (Basel). 2021)。目前，CD3-BsAb在治療血液惡性腫瘤方面顯示出巨大潛力，且已報導實體腫瘤之早期令人鼓舞的臨床資料。開發用於實體腫瘤之CD3-BsAb的一個關鍵障礙係鑑定具有高癌症特異性表現之細胞表面標靶，以實現有效根除腫瘤且降低靶向腫瘤外毒性之風險(Middelburg等人, Cancers (Basel). 2021；Singh等人, Br J Cancer. 2021；Baeuerle等人, Current Opinion in Oncology. 2022)。基於高度癌症特異性的表現模式，CLDN6可作為CD3-BsAb開發之有前景的標靶(Stadler等人, Oncoimmunology. 2016；Stadler等人, Nat Med. 2017)。
靶向CLDN6之一個重要考慮因素為CLDN家族之許多成員具有很高的序列一致性，其中密連蛋白9 (CLDN9)與CLDN6具有最高的相似性。CLDN6及CLDN9胞外環之76個殘基中僅3個不同。考慮到CLDN9在一些正常組織中高度表現，因此達成CLDN6相對於CLDN9之高選擇性對於任何基於CLDN6靶向抗體之治療劑至關重要。
本揭示提供多特異性抗CLDN6xCD3抗體及其抗原結合片段。本揭示包括以下實施例。
在一些態樣中，本揭示提供一種多特異性抗體或其抗原結合片段，其包含特異性結合於人類密連蛋白6 (CLDN6)之第一抗原結合域及特異性結合於人類分化簇3 (CD3)之第二抗原結合域。
在一些實施例中，其中第一抗原結合域不結合於其他密連蛋白(CLDN)蛋白家族成員。
在一些實施例中，其中第一抗原結合域不結合於人類密連蛋白9 (CLDN9)。
在一些實施例中，其中相比於人類CLDN9，第一抗原結合域對人類CLDN6具有高選擇性。
在一些實施例中，其中特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：(a)重鏈可變區，其包含：(i) SEQ ID NO: 1之重鏈互補決定區(HCDR) 1，(ii) SEQ ID NO: 2之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 4之輕鏈互補決定區(LCDR) 1，(v) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 6之LCDR3 ；(b)重鏈可變區，其包含：(i) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 23之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 3之HCDR3；及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(v)SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(vi)SEQ ID NO: 6之LCDR3；(c)重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 39之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 3之HCDR3；及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 6之LCDR3；或(d)重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 45之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 3之HCDR3；及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 6之LCDR3。
在一些實施例中，其中第一抗原結合域包含：(a)包含與SEQ ID NO: 7具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列的重鏈可變區，及包含與SEQ ID NO: 8具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列的輕鏈可變區；(b)包含與SEQ ID NO: 24具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列的重鏈可變區，及包含與SEQ ID NO: 12具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列的輕鏈可變區；(c)包含與SEQ ID NO: 41具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列的重鏈可變區，及包含與SEQ ID NO: 42具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列的輕鏈可變區；(d)包含與SEQ ID NO: 43具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列的重鏈可變區，及包含與SEQ ID NO: 44具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列的輕鏈可變區；(e)包含與SEQ ID NO: 46具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列的重鏈可變區，及包含與SEQ ID NO: 47具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列的輕鏈可變區；或(f)包含與SEQ ID NO: 46具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列的重鏈可變區，及包含與SEQ ID NO: 42具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，其中SEQ ID NO: 7、8、12、24、41、42、43、44、46或47之1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸已被插入、缺失或取代。
在一些實施例中，其中第一抗原結合域包含：(a)重鏈可變區具有包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列，且輕鏈可變區具有包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；(b)重鏈可變區域具有包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列，且輕鏈可變區具有包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；(c)重鏈可變區具有包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列，且輕鏈可變區具有包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；(d)重鏈可變區具有包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列，且輕鏈可變區具有包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列；(e)重鏈可變區具有包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列，且輕鏈可變區具有包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列；或(f)重鏈可變區具有包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列，且輕鏈可變區具有包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列。
在一些實施例中，其中特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：(a)重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 49之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 50之胺基酸序列的HCDR3，以及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3；(b)重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 71之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 50之胺基酸序列的HCDR3，以及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3；或(c)重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 71之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 75之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施例中，其中第二抗原結合域包含：(a)包含與SEQ ID NO: 54至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列的重鏈可變區，及包含與SEQ ID NO: 55至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列的輕鏈可變區；(b)包含與SEQ ID NO: 58至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列的重鏈可變區，及包含與SEQ ID NO: 59至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列的輕鏈可變區；(c)包含與SEQ ID NO: 62至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列的重鏈可變區，及包含與SEQ ID NO: 63至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列的輕鏈可變區；(d)包含與SEQ ID NO: 62至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列的重鏈可變區，及包含與SEQ ID NO: 68至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列的輕鏈可變區；(e)包含與SEQ ID NO: 72至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列的重鏈可變區，及包含與SEQ ID NO: 68至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列的輕鏈可變區；或(f)包含與SEQ ID NO: 76至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列的重鏈可變區，及包含與SEQ ID NO: 68至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，其中SEQ ID NO: 54、55、58、59、62、68、72或76內之1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸已被插入、缺失或取代。
在一些實施例中，其中第二抗原結合域包含：(a)包含SEQ ID NO: 54之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 55之輕鏈可變區；(b)包含SEQ ID NO: 58之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 59之輕鏈可變區；(c)包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 63之輕鏈可變區；(d)包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區；(e)包含SEQ ID NO: 72之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區；或(f)包含SEQ ID NO: 76之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區。
在一些實施例中，其中第二抗原結合域包含：(a)包含SEQ ID NO: 66之單鏈可變片段(scFv)；(b)包含SEQ ID NO: 69之單鏈可變片段(scFv)；(c)包含SEQ ID NO: 73之單鏈可變片段(scFv)；或(e)包含SEQ ID NO: 77之單鏈可變片段(scFv)。
在一些實施例中，其中：(a)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(ii)SEQ ID NO: 2之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(vii) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 49之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3；(b)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 2之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 53之LCDR3；或(c)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 2之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)SEQ ID NO: 4之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 75之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
在一些實施例中，其中：(a)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(ii)SEQ ID NO: 23之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 49之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 53之LCDR3；(b)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 23之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 53之LCDR3；或(c)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 23之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)SEQ ID NO: 4之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 75之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
在一些實施例中，其中：(a)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(ii)SEQ ID NO: 39之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 49之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 53之LCDR3；(b)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 39之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 53之LCDR3；或(c)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 39之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)SEQ ID NO: 40之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 75之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
在一些實施例中，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 39之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 75之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
在一些實施例中，其中：(a)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(ii)SEQ ID NO: 45之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(ivd) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(vii) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 49之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 53之LCDR3；(b)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 45之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(vii) SEQ ID NO: 53之LCDR3；或(c)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 45之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)SEQ ID NO: 40之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 75之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
在一些實施例中，其中：(a)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 45之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(ii) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(iii) SEQ ID NO: 75之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(v) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(vi) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
在一些實施例中，其中：(a)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：(i)重鏈可變區，其包含(1) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(2) SEQ ID NO: 2之HCDR2，(3) SEQ ID NO: 3之HCDR3；及輕鏈可變區，其包含：(4)SEQ ID NO: 4之LCDR1，(5) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(6)SEQ ID NO: 6之LCDR3；(ii)重鏈可變區，其包含(1) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(2) SEQ ID NO: 23之HCDR2，(3) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(4) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(5) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(6) SEQ ID NO: 6之LCDR3；(iii)重鏈可變區，其包含(1) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(2) SEQ ID NO: 39之HCDR2，(3)SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(4) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(5) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(6)SEQ ID NO: 6之LCDR3；或(iv)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(1) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(2) SEQ ID NO: 45之HCDR2，(3) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(4) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(5) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(6)SEQ ID NO: 6之LCDR3；及(b)特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：(i)包含SEQ ID NO: 54之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 55之輕鏈可變區(VL)；(ii)包含SEQ ID NO: 58之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 59之輕鏈可變區(VL)；(iii)包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 63之輕鏈可變區(VL)；(iv)包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)；(v)包含SEQ ID NO: 72之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)；或(vi)包含SEQ ID NO: 76之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)。
在一些實施例中，其中：(a)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：(i)重鏈可變區，其包含(1) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(2) SEQ ID NO: 39之HCDR2， (3) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(4) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(5) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(6) SEQ ID NO: 6之LCDR3；或及(b)特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：(i)包含SEQ ID NO: 54之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 55之輕鏈可變區(VL)；(ii)包含SEQ ID NO: 58之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 59之輕鏈可變區(VL)；(iii)包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 63之輕鏈可變區(VL)；(iv)包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)；(v)包含SEQ ID NO: 72之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)；或(vi)包含SEQ ID NO: 76之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)。
在一些實施例中，其中：(a)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：(i)重鏈可變區，其包含(1) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(2) SEQ ID NO: 23之HCDR2，(3) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(4) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(5) SEQ ID NO: 5之LCDR2，(6) SEQ ID NO: 6之LCDR3；或(ii)重鏈可變區，其包含(1) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(2) SEQ ID NO: 39之HCDR2，(3) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(4)SEQ ID NO: 40之LCDR1，(5) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(6) SEQ ID NO: 6之LCDR3；或(iii)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(1) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(2) SEQ ID NO: 45之HCDR2，(3)SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(4) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(5)SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(6) SEQ ID NO: 6之LCDR3；及(b)特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：(i)包含SEQ ID NO: 66之單鏈可變片段(scFv)；(ii)包含SEQ ID NO: 69之單鏈可變片段(scFv)；(iii)包含SEQ ID NO: 73之單鏈可變片段(scFv)；或(iv)包含SEQ ID NO: 77之單鏈可變片段(scFv)。
在一些實施例中，其中：(a)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：(i)包含SEQ ID NO: 24之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 12之輕鏈可變區(VL)；(ii)包含SEQ ID NO: 41之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區；(iii)包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；(iv)包含SEQ ID NO: 46之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 47之輕鏈可變區(VL)；或(v)包含SEQ ID NO: 46之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區(VL)，及(ii)特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：(i)包含SEQ ID NO: 54之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 55之輕鏈可變區(VL)；(ii)包含SEQ ID NO: 58之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 59之輕鏈可變區(VL)；(iii)包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 63之輕鏈可變區(VL)；(iv)包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)；(v)包含SEQ ID NO: 72之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)；或(vi)包含SEQ ID NO: 76之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)。
在一些實施例中，其中：(a)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：(i)包含SEQ ID NO: 24之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 12之輕鏈可變區(VL)；(ii)包含SEQ ID NO: 41之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區(VL)；(iii)包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；(iv)包含SEQ ID NO: 46之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 47之輕鏈可變區(VL)；或v)包含SEQ ID NO: 46之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區(VL)；及(a)特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 72之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)。
在一些實施例中，其中：(a)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：(i)包含SEQ ID NO: 24之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 12之輕鏈可變區(VL)；(ii)包含SEQ ID NO: 41之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區(VL)；(iii)包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；(iv)包含SEQ ID NO: 46之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 47之輕鏈可變區(VL)；或(v)包含SEQ ID NO: 46之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區(VL)；及(b)特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 76之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)。
在一些實施例中，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：(i)包含SEQ ID NO: 54之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 55之輕鏈可變區(VL)；(ii)包含SEQ ID NO: 58之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 59之輕鏈可變區(VL)；(iii)包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 63之輕鏈可變區(VL)；(iv)包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)；(v)包含SEQ ID NO: 72之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)；或(vi)包含SEQ ID NO: 76之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)。
在一些實施例中，其中特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 72之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)。
在一些實施例中，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 76之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)。
在一些實施例中，其中：(a)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：(i)包含SEQ ID NO: 24之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 12之輕鏈可變區(VL)；(ii)包含SEQ ID NO: 41之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區(VL)；(iii)包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；(iv)包含SEQ ID NO: 46之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 47之輕鏈可變區(VL)；或(v)包含SEQ ID NO: 46之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區(VL)；及(b)特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：(i)包含SEQ ID NO: 66之單鏈可變片段(scFv)；(ii)包含SEQ ID NO: 69之單鏈可變片段(scFv)；(iii)包含SEQ ID NO: 73之單鏈可變片段(scFv)；或(iv)包含SEQ ID NO: 77之單鏈可變片段(scFv)。
在一些實施例中，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；且與人類CD3特異性結合之第二抗原結合域包含：(a)包含SEQ ID NO: 66之單鏈可變片段(scFv)；(b)包含SEQ ID NO: 69之單鏈可變片段(scFv)；(c)包含SEQ ID NO: 73之單鏈可變片段(scFv)；或(d)包含SEQ ID NO: 77之單鏈可變片段(scFv)。
在一些實施例中，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 66之單鏈可變片段(scFv)。
在一些實施例中，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 69之單鏈可變片段(scFv)。
在一些實施例中，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 73之單鏈可變片段(scFv)。
在一些實施例中，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 77之單鏈可變片段(scFv)。
在一些實施例中，其為單株抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人類工程化抗體、單鏈抗體(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。
在一些實施例中，其中多特異性抗體為雙特異性抗體。
在一些實施例中，其中多特異性抗體為BG143P且具有包含SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 82或SEQ ID NO: 84之序列。
在一些實施例中，其中抗體或其抗原結合片段具有抗體依賴性細胞毒性(ADCC)或補體依賴性細胞毒性(CDC)。
在一些實施例中，其中抗體或其抗原結合片段具有減少的醣基化或無醣基化或為低岩藻醣基化的。
在一些實施例中，其中抗體或其抗原結合片段包含增加的平分GlcNac結構。
在一些實施例中，其中Fc域為具有降低的效應功能之IgG1。
在一些實施例中，其中Fc域為IgG4。
在一些態樣中，本揭示提供包含本文所揭示之多特異性抗體或抗原結合片段之醫藥組合物。
在一些實施例中，醫藥組合物也包含醫藥學上可接受之載劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含組胺酸/組胺酸HCl、海藻糖二水合物及/或聚山梨醇酯20。
在一些態樣中，本揭示提供治療癌症之方法，其包括向有需要之患者投與有效量之如本文所揭示之多特異性抗體或抗原結合片段。
在一些實施例中，其中癌症為實體腫瘤。
在一些實施例中，其中癌症係選自胃癌、大腸癌、胰臟癌、乳癌、頭頸癌、腎癌、肝癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、皮膚癌、間皮瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、肉瘤、腦癌、大腸直腸癌、前列腺癌、子宮頸癌、睾丸癌、子宮內膜癌、膀胱癌、橫紋肌樣瘤及/或神經膠質瘤。
在一些實施例中，其中多特異性抗體或抗原結合片段與一或多種額外治療劑組合投與。
在一些實施例中，其中一或多種治療劑係選自紫杉醇或紫杉醇劑、多西他賽、卡鉑、拓撲替康、順鉑、伊立替康、小紅莓、雷利竇邁或5-氮雜胞苷。
在一些實施例中，其中一或多種治療劑為紫杉醇劑、雷利竇邁或5-氮雜胞苷。
在一些實施例中，其中一或多種治療劑中之至少一者為抗PD1或抗PDL1抗體。
在一些實施例中，其中抗PD1抗體為替雷利珠單抗。
在一些態樣中，本揭示提供編碼本文所揭示之多特異性抗體或抗原結合片段之分離的核酸。
在一些態樣中，本揭示提供包含本文所揭示之核酸的載體。
在一些態樣中，本揭示提供包含本文所揭示之核酸或載體的宿主細胞。
在一些態樣中，本揭示提供用於產生本文所揭示之多特異性抗體或抗原結合片段之方法，其包括培養本文所揭示之宿主細胞且自培養物回收抗體或抗原結合片段。
在一些態樣中，本揭示提供本文所揭示之多特異性抗體或抗原結合片段，其用於治療癌症之方法。
在一些態樣中，本揭示提供本文所揭示之多特異性抗體或抗原結合片段之用途，其用於製造供治療癌症用之藥劑。
在一些態樣中，本揭示提供用於治療癌症之方法中之醫藥組合物。
多特異性抗體或其抗原結合片段，其包含特異性結合於人類CLDN6之第一抗原結合域及特異性結合於人類CD3之第二抗原結合域。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中第一抗原結合域不結合於其他CLDN家族成員。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中第一抗原結合域不結合於人類CLDN9。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中第一抗原結合域相對於人類CLDN9具有高選擇性。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含： (i). 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 2之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； (ii). 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 23之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； (iii). 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 39之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；或 (iv). 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 45之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中第一抗原結合域包含： (i). 重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 7至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 8至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列； (ii). 重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 24至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 12至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列； (iii). 重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 41至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 42至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列； (iv). 重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 43至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 44至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列； (v). 重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 46至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 47至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列；或 (vi). 重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 46至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 42至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中SEQ ID NO: 7、8、12、24、41、42、43、44、46或47內之1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸已被插入、缺失或取代。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中第一抗原結合域包含： (i). 包含SEQ ID NO: 7之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 8之輕鏈可變區(VL)； (ii). 包含SEQ ID NO: 24之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 12之輕鏈可變區(VL)； (iii). 包含SEQ ID NO: 41之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區(VL)； (iv). 包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)； (v). 包含SEQ ID NO: 46之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 47之輕鏈可變區(VL)；或 (vi). 包含SEQ ID NO: 46之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區(VL)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含： (i). 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 49之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3； (ii). 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3；或 (iii). 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 75之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中第二抗原結合域包含： 重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 54至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 55至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列； 重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 58至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 59至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列； 重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 62至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 63至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列； 重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 62至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 68至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列； 重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 72至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 68至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列；或 重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 76至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 68至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中SEQ ID NO: 58、59、62或63內之1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸已被插入、缺失或取代。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中第二抗原結合域包含： (i). 包含SEQ ID NO: 54之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 55之輕鏈可變區(VL)； (ii). 包含SEQ ID NO: 58之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 59之輕鏈可變區(VL)； (iii). 包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 63之輕鏈可變區(VL)； (iv). 包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)； (v). 包含SEQ ID NO: 72之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)；或 (vi). 包含SEQ ID NO: 76之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中第二抗原結合域包含： (a) 包含SEQ ID NO: 66之單鏈可變片段(scFv)； (b) 包含SEQ ID NO: 69之單鏈可變片段(scFv)； (c) 包含SEQ ID NO: 73之單鏈可變片段(scFv)；或 (d) 包含SEQ ID NO: 77之單鏈可變片段(scFv)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中：(i)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b)SEQ ID NO: 2之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 49之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3；(ii)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 2之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3；或(iii)特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 2之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d)SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 75之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中： (i). 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 23之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 49之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3； (ii). 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 23之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3；或 (iii). 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 23之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 75之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中： (i). 多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 39之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 49之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3； (ii). 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 39之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3；或 (iii). 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 39之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 75之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 39之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 75之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中： (i). 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 45之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 49之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3； (ii). 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 45之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3；或 (iii). 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 45之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 75之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 45之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 75之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中： (i). 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含： a) 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 2之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； b) 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 23之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； c) 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 39之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；或 d) 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 45之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； 且 (ii). 特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含： a) 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 49之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3； b) 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3；或 c) 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 75之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中： (i). 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含： a) 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 2之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； b) 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 23之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； c) 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 39之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；或 d) 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 45之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； 且 (ii). 特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含： a) 包含SEQ ID NO: 54之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 55之輕鏈可變區(VL)； b) 包含SEQ ID NO: 58之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 59之輕鏈可變區(VL)； c) 包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 63之輕鏈可變區(VL)； d) 包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)； e) 包含SEQ ID NO: 72之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)；或 f) 包含SEQ ID NO: 76之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中： (i). 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含： a) 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 39之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；或 且 (ii). 特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含： a) 包含SEQ ID NO: 54之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 55之輕鏈可變區(VL)； b) 包含SEQ ID NO: 58之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 59之輕鏈可變區(VL)； c) 包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 63之輕鏈可變區(VL)； d) 包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)； e) 包含SEQ ID NO: 72之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)；或 f) 包含SEQ ID NO: 76之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中： (i). 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含： a) 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 23之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；或 b) 重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 39之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3；或 c) 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 45之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； 且 (ii). 特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含： a) 包含SEQ ID NO: 66之單鏈可變片段(scFv)； b) 包含SEQ ID NO: 69之單鏈可變片段(scFv)； c) 包含SEQ ID NO: 73之單鏈可變片段(scFv)；或 d) 包含SEQ ID NO: 77之單鏈可變片段(scFv)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中： (i). 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含： a) 包含SEQ ID NO: 24之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 12之輕鏈可變區(VL)； b) 包含SEQ ID NO: 41之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區(VL)； c) 包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)； d) 包含SEQ ID NO: 46之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 47之輕鏈可變區(VL)；或 e) 包含SEQ ID NO: 46之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區(VL)； 且 (ii). 特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含： a) 包含SEQ ID NO: 54之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 55之輕鏈可變區(VL)； b) 包含SEQ ID NO: 58之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 59之輕鏈可變區(VL)； c) 包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 63之輕鏈可變區(VL)； d) 包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)； e) 包含SEQ ID NO: 72之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)；或 f) 包含SEQ ID NO: 76之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中： (i). 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含： a) 包含SEQ ID NO: 24之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 12之輕鏈可變區(VL)； b) 包含SEQ ID NO: 41之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區(VL)； c) 包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)； d) 包含SEQ ID NO: 46之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 47之輕鏈可變區(VL)；或 e) 包含SEQ ID NO: 46之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區(VL)； 且 (ii). 特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 72之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中： (i). 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含： a) 包含SEQ ID NO: 24之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 12之輕鏈可變區(VL)； b) 包含SEQ ID NO: 41之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區(VL)； c) 包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)； d) 包含SEQ ID NO: 46之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 47之輕鏈可變區(VL)；或 e) 包含SEQ ID NO: 46之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區(VL)； 且 (ii). 特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 76之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含： a) 包含SEQ ID NO: 54之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 55之輕鏈可變區(VL)； b) 包含SEQ ID NO: 58之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 59之輕鏈可變區(VL)； c) 包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 63之輕鏈可變區(VL)； d) 包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)； e) 包含SEQ ID NO: 72之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)；或 f) 包含SEQ ID NO: 76之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 72之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 76之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區(VL)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中： (i). 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含： a) 包含SEQ ID NO: 24之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 12之輕鏈可變區(VL)； b) 包含SEQ ID NO: 41之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區(VL)； c) 包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)； d) 包含SEQ ID NO: 46之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 47之輕鏈可變區(VL)；或 e) 包含SEQ ID NO: 46之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區(VL)。 且 (ii). 特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含： a) 包含SEQ ID NO: 66之單鏈可變片段(scFv)； b) 包含SEQ ID NO: 69之單鏈可變片段(scFv)； c) 包含SEQ ID NO: 73之單鏈可變片段(scFv)；或 d) 包含SEQ ID NO: 77之單鏈可變片段(scFv)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含： a) 包含SEQ ID NO: 66之單鏈可變片段(scFv)； b) 包含SEQ ID NO: 69之單鏈可變片段(scFv)； c) 包含SEQ ID NO: 73之單鏈可變片段(scFv)；或 d) 包含SEQ ID NO: 77之單鏈可變片段(scFv)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 66之單鏈可變片段(scFv)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 69之單鏈可變片段(scFv)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 73之單鏈可變片段(scFv)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：包含SEQ ID NO: 77之單鏈可變片段(scFv)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其為單株抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人類工程化抗體、單鏈抗體(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。
多特異性抗體，其中多特異性抗體為雙特異性抗體。
多特異性抗體，其中多特異性抗體為BG143P (SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 82及SEQ ID NO: 84)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段具有抗體依賴性細胞毒性(ADCC)或補體依賴性細胞毒性(CDC)。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段具有減少的醣基化或無醣基化或為低岩藻醣基化的。
多特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含增加的平分GlcNac結構。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中Fc域為效應功能降低的IgG1。
多特異性抗體或抗原結合片段，其中Fc域為IgG4。
包含多特異性抗體或其抗原結合片段之醫藥組合物，其進一步包含醫藥學上可接受之載劑。
醫藥組合物，其進一步包含組胺酸/組胺酸HCl、海藻糖二水合物及聚山梨醇酯20。
治療癌症之方法，其包括向有需要之患者投與有效量之多特異性抗體或抗原結合片段。
該方法，其中該癌症為胃癌、乳癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、睾丸癌、子宮內膜癌、膀胱癌、橫紋肌樣瘤及神經膠質瘤。
該方法，其中多特異性抗體或抗原結合片段與另一種治療劑組合投與。
該方法，其中該治療劑為紫杉醇或紫杉醇劑、多西他賽、卡鉑、拓撲替康、順鉑、伊立替康、小紅莓、雷利竇邁或5-氮雜胞苷。
該方法，其中治療劑為紫杉醇劑、雷利竇邁或5-氮雜胞苷。
該方法，其中治療劑為抗PD1或抗PDL1抗體。
該方法，其中抗PD1抗體為替雷利珠單抗。
編碼多特異性抗體或抗原結合片段之分離的核酸。
含有核酸之載體。
含有核酸或載體之宿主細胞。
一種產生多特異性抗體或其抗原結合片段之方法，該方法包括培養宿主細胞且自培養物回收抗體或抗原結合片段。
在一個實施例中，多特異性抗體或其抗原結合片段包含一或多個互補決定區(CDR)，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 71、SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53。
在另一實施例中，多特異性抗體或其抗原結合片段包含：(a)重鏈可變區，其包含一或多個互補決定區(HCDR)，該一或多個HCDR包含選自由SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 71、SEQ ID NO: 75組成之群的胺基酸序列，及/或(b)輕鏈可變區，其包含一或多個互補決定區(LCDR)，該一或多個LCDR具有選自由SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53組成之群的胺基酸序列。
在另一實施例中，多特異性抗體或其抗原結合片段包含：(a)重鏈可變區，其包含三個互補決定區(HCDR)，該一或多個HCDR為包含SEQ ID NO: 1、 SEQ ID NO:48之胺基酸序列的HCDR1；包含SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 71之胺基酸序列的HCDR2；及包含SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 75之胺基酸序列的HCDR3，及/或(b)輕鏈可變區，其包含三個互補決定區(LCDR)，該一或多個LCDR為包含SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 40或SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1；包含SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2；及包含SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3。
在另一實施例中，多特異性抗體或其抗原結合片段包含： (a) 重鏈可變區，其包含三個互補決定區(HCDR)，其為 包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的HCDR2及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3； 包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的HCDR2及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3； 包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列的HCDR2及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3；或 包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列的HCDR2及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3； 及/或(b) 輕鏈可變區，其包含三個互補決定區(LCDR)，其為 包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2及包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；或 包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2及包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3。
在另一實施例中，多特異性抗體或抗原結合片段包含：第一抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 2之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； 及第二抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 49之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
在另一實施例中，多特異性抗體或抗原結合片段包含：第一抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 23之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； 及第二抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 49之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
在另一實施例中，多特異性抗體或抗原結合片段包含：第一抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 39之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； 及第二抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 49之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
在另一實施例中，多特異性抗體或抗原結合片段包含：第一抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 45之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； 及第二抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 49之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
在另一實施例中，多特異性抗體或抗原結合片段包含：第一抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 2之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； 及第二抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
在另一實施例中，多特異性抗體或抗原結合片段包含：第一抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 23之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； 及第二抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
在另一實施例中，多特異性抗體或抗原結合片段包含：第一抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 39之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； 及第二抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
在另一實施例中，多特異性抗體或抗原結合片段包含：第一抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 45之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； 及第二抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 50之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
在另一實施例中，多特異性抗體或抗原結合片段包含：第一抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 2之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； 及第二抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 75之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
在另一實施例中，多特異性抗體或抗原結合片段包含：第一抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 23之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 4之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； 及第二抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 75之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
在另一實施例中，多特異性抗體或抗原結合片段包含：第一抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 39之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； 及第二抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 75之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
在另一實施例中，多特異性抗體或抗原結合片段包含：第一抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 1之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 45之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 3之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 40之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 5之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 6之LCDR3； 及第二抗原結合域，其包含：重鏈可變區，其包含(a) SEQ ID NO: 48之HCDR1，(b) SEQ ID NO: 71之HCDR2，(c) SEQ ID NO: 75之HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(d) SEQ ID NO: 51之LCDR1，(e) SEQ ID NO: 52之LCDR2，及(f) SEQ ID NO: 53之LCDR3。
在一個實施例中，本揭示之抗體或其抗原結合片段包含：(a)具有表1及表2中所列之HCDR或VH之胺基酸序列的重鏈可變區；及/或(b)包含表1及表2中所列之LCDR或VL之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在另一實施例中，本揭示之多特異性抗體或其抗原結合片段包含：(a)胺基酸序列，其包含表1及表2中所列之HCDR或VH之胺基酸序列中之一個、兩個或三個胺基酸取代；及/或(b)包含胺基酸序列之輕鏈可變區，該胺基酸序列包含表1及表2中所列之LCDR或V之胺基酸中之一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代。在另一實施例中，胺基酸取代為保守胺基酸取代。
在一個實施例中，本揭示之多特異性抗體為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同型。在更特定實施例中，本揭示之抗體包含野生型人類IgG1 (亦稱為人類IgG1wt或huIgG1)或IgG2之Fc域。
在一個實施例中，本揭示之多特異性抗體以1×10 -6M至1×10 -10M之結合親和力(K D)結合於CLDN6。在另一實施例中，本揭示之抗體以約1×10 -6M、約1×10 -7M、約1×10 -8M、約1×10 -9M或約1×10 -10M之結合親和力(K D)結合於CLDN6。
在另一實施例中，本揭示之抗人類CLDN6多特異性抗體顯示出對食蟹獼猴CLDN6之跨物種結合活性。
在一個實施例中，本揭示之抗體具有強Fc介導之效應功能。該等抗體介導針對表現CLDN6之靶細胞的抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。
在另一態樣中，本揭示係關於一種醫藥組合物，其包含CLDN6xCD3多特異性抗體或其抗原結合片段，及視情況選用之醫藥學上可接受之賦形劑。
在另一態樣中，本揭示係關於一種治療個體之疾病的方法，其包括以治療有效量向有需要之個體投與CLDN6xCD3多特異性抗體或其抗原結合片段，或CLDN6xCD3多特異性抗體醫藥組合物。在另一實施例中，待藉由抗體或抗原結合片段治療之疾病為癌症。
本揭示係關於CLDN6xCD3多特異性抗體或其抗原結合片段、或CLDN6xCD3多特異性抗體醫藥組合物用於治療諸如癌症之疾病的用途。
相關申請案之交叉引用
本申請案主張2023年3月6日申請之國際申請案PCT/CN2023/079805之優先權，其全部內容以引用之方式併入本文中。 定義
除非在此文件中別處具體定義，否則本文使用之所有其他技術及科學術語具有一般熟習此項技術者通常理解之含義。
除非上下文另有明確規定，否則如本文使用，包括在隨附申請專利範圍中，字語之單數形式諸如「一(a/an)」及「該(the)」包括其對應多個指示物。
如本文所用，除非上下文另有明確規定，否則術語「或」用於意謂術語「及/或」且可與其互換使用。如本文所用，術語「及/或」係指且涵蓋一或多個相關列出項之任何及所有可能的組合，以及當以替代方式解釋時缺乏組合(「或」)。
如本文所用，「約」當與數值一起使用時意謂所述數值以及該數值之加減10%。例如，「約10」應理解為「10」及「9-11」。
如本文所用，「A/B」形式或「A及/或B」形式之片語係指(A)、(B)或(A及B)；「A、B及C中之至少一者」形式之片語係指(A)、(B)、(C)、(A及B)、(A及C)、(B及C)或(A、B及C)。
本文使用之術語「抗癌劑」係指任何可用於治療細胞增殖性病症，諸如癌症之藥劑，包括但不限於細胞毒性劑、化學治療劑、放射療法及放射治療劑、靶向抗癌劑及免疫治療劑。
術語「密連蛋白6」或「CLDN6」係指CLDN家族之成員。CLDN6之分子量為23 kDa。CLDN6具有四個跨膜域及位於細胞質羧基端之PDZ結合區。人類CLDN6之胺基酸序列可在UniPort ID P56747中找到。例示性人類CLDN6序列為SEQ ID NO: 87。
術語「密連蛋白9」或「CLDN9」係指CLDN家族之另一成員。CLDN9之分子量為23 kDa，且其胺基酸序列可在UniPort ID O95484中找到。例示性人類CLDN9序列為SEQ ID NO: 88。
本文所用之術語「分化簇3」或「CD3」係指來自任何脊椎動物來源，包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類)及囓齒類動物(例如小鼠及大鼠)之任何天然CD3，除非另有說明，包括例如CD3ε、CD3γ、CD3α及CD3β鏈。該術語涵蓋「全長」、未加工之CD3 (例如，未加工或未修飾之CD3ε或CD3γ)以及由細胞中加工產生之任何形式的CD3。該術語亦涵蓋天然存在之CD3變異體，包括例如剪接變異體或等位基因變異體。CD3包括例如長度為207個胺基酸之人類CD3ε蛋白(NCBI RefSeq編號NP_000724)及長度為182個胺基酸之人類CD3γ蛋白(NCBI RefSeq編號NP_000064)。
如本文使用之術語「投與(administration)」、「投與(administring)」、「治療(treating)」及「治療(treatment)」在應用於動物、人類、實驗個體、細胞、組織、器官或生物流體時，意謂外源藥物、治療劑、診斷劑或組合物與動物、人類、個體、細胞、組織、器官或生物流體之接觸。細胞之治療涵蓋試劑與細胞之接觸，以及試劑與流體之接觸，其中流體與細胞接觸。術語「投與」及「治療」亦意謂例如藉由試劑、診斷劑、結合化合物或藉由另一細胞對細胞之活體外及離體治療。本文中之術語「個體」包括任何生物體。非限制性實例包括動物。在任何實施例中，動物為哺乳動物(例如靈長類動物、高等靈長類動物、人類、大鼠、小鼠、狗、貓、兔)。在任何實施例中，哺乳動物為人類。在任何實施例中，個體為患有本文所述之病症或有患本文所述之病症之風險的患者。在任何實施例中，治療任何疾病或病症係指改善疾病或病症(亦即，減緩或阻止或減少疾病或其至少一種臨床症狀的發展)。在另一態樣中，「治療(treat)」、「治療(treating)」或「治療(treatment)」係指減輕或改善至少一個物理參數，包括患者可能無法辨別之彼等參數。在另一態樣中，「治療(treat)」、「治療(treating)」或「治療(treatment)」係指在物理上(例如，可辨別症狀之穩定化)、生理上(例如，物理參數之穩定化)或兩者上調節疾病或病症。在另一態樣中，「治療(treat)」、「治療(treating)」或「治療(treatment)」係指預防或延遲疾病或病症之發作或發展或進展。在一個態樣中，本文所用之關於癌症的術語「預防(prevent)」、「預防(preventing)」、「預防(prevention)」係指排除或降低患癌症之風險。預防亦可指一旦初始癌症得到治療或治愈，便預防復發或繼發性癌症。
術語「個體(individual)」、「個體(subject)」及「患者」在本文中可互換使用，且係指任何個別哺乳動物個體， 例如牛、犬、貓、馬或人類。在特定實施例中，個體、個體或患者為人類。
如本文使用之術語「親和力」係指抗體與抗原之間的相互作用之強度。在抗原內，抗體之可變區經由非共價力在多個位點處與抗原相互作用。一般而言，相互作用愈多，親和力愈強。
如本文使用之術語「抗體」係指可非共價地、可逆地及以特異性方式來結合對應抗原之免疫球蛋白家族之多肽。例如，天然存在之IgG抗體為包含藉由二硫鍵互連之至少兩條重(H)鏈及兩條輕(L)鏈的四聚體。各重鏈由重鏈可變區(在本文中縮寫為VH)及重鏈恆定區構成。重鏈恆定區由三個域CH1、CH2及CH3構成。各輕鏈由輕鏈可變區(在本文中縮寫為VL或Vκ)及輕鏈恆定區構成。輕鏈恆定區由一個域CL構成。VH及VL區域可進一步細分為穿插有稱為構架區(FR)之更保守區域的被稱為互補決定區(CDR)之高變區。各VH及VL由從胺基末端至羧基末端按以下順序排列的三個CDR及四個構架區(FR)構成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。重及輕鏈之可變區含有與抗原相互作用之結合域。抗體之恆定區可介導免疫球蛋白與包括免疫系統之各種細胞(例如效應細胞)及經典補體系統之第一組分(Clq)的宿主組織或因子的結合。
術語「抗體」包括但不限於單株抗體、人類抗體、人源化抗體、嵌合抗體及抗獨特型(抗Id)抗體。抗體可為任何同型/類別(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)或亞類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)。
術語「嵌合」抗體係指其中重鏈及/或輕鏈之一部分衍生自特定來源或物種，而重鏈及/或輕鏈之其餘部分衍生自不同來源之抗體或物種。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互換使用，係指具有與天然抗體結構基本相似的結構或具有含有Fc區之重鏈的抗體。
在一些實施例中，抗CLDN6抗體包含至少一個抗原結合位點、至少一個可變區。在一些實施例中，抗CLDN6抗體包含本文所述之CLDN6抗體之抗原結合片段。在一些實施例中，抗CLDN6抗體係分離的或重組的。
在一些實施例中，抗CD3抗體包含至少一個抗原結合位點、至少一個可變區。在一些實施例中，抗CD3抗體包含來自本文所述之CD3抗體之抗原結合片段。在一些實施例中，抗CD3抗體係分離的或重組的。
本文中之術語「單株抗體」或「mAb」或「Mab」意謂實質上均質抗體之群體，亦即，除了可少量存在之可能天然存在之突變以外，群體中包含之抗體分子在胺基酸序列方面係一致的。相比之下，習知(多株)抗體製劑通常包括許多不同抗體，該等抗體在其通常對於不同表位具有特異性之可變域，特定而言其互補決定區(CDR)中具有不同胺基酸序列。修飾語「單株」指示獲自實質上均質抗體群體的抗體之特性，且不應理解為需要藉由任何特定方法來產生抗體。單株抗體(mAb)可藉由熟習此項技術者已知的方法獲得。參見，例如Kohler等人, Nature 1975 256:495-497；美國專利第4,376,110號；Ausubel等人, CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY 1992；Harlow等人, ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL, Cold spring Harbor Laboratory 1988；及Colligan等人, CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY 1993。本文揭示之抗體可為包括IgG、IgM、IgD、IgE、IgA之任何免疫球蛋白類別，及諸如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4之其任何亞類。產生單株抗體之融合瘤可在活體外或活體內培養。高效價單株抗體可在活體內產生中獲得，其中來自個別融合瘤之細胞腹膜內注射至小鼠，諸如初始預敏化Balb/c小鼠中以便產生含有高濃度之所需抗體的腹水。同型IgM或IgG之單株抗體可使用熟習此項技術者熟知之管柱層析方法自此等腹水或自培養物上清液純化。
一般而言，基本抗體結構單元包含四聚體。各四聚體包括兩對相同的多肽鏈，各對具有一條「輕鏈」(約25 kDa)及一條「重鏈」(約50-70 kDa)。各鏈之胺基末端部分包括主要負責抗原識別之約100至110個或更多個胺基酸之可變區。重鏈之羧基末端部分可限定主要負責效應功能之恆定區。典型地，人類輕鏈分為κ輕鏈及λ輕鏈。此外，人類重鏈典型地分為α、δ、ε、γ或μ，且將抗體之同型分別定義為IgA、IgD、IgE、IgG及IgM。在輕鏈及重鏈內，可變區及恆定區由約12個或更多個胺基酸之「J」區連接，重鏈亦包括約10個以上胺基酸的「D」區。
各輕鏈/重鏈(VL/VH)對之可變區形成抗體結合位點。因此，一般而言，完整抗體具有兩個結合位點。除了雙功能或雙特異性抗體外，兩個結合位點之一級序列通常相同。
典型地，重鏈及輕鏈之可變域均包含三個高變區，亦稱為「互補決定區」或「CDR」，其位於相對保守的框架區(FR)之間。CDR通常藉由框架區對準，從而能夠與特定表位結合。一般而言，自N末端至C末端，輕鏈及重鏈可變域均包含FR-1 (或FR1)、CDR-1 (或CDR1)、FR-2 (FR2)、CDR-2 (CDR2)、 FR-3 (或FR3)、CDR-3 (CDR3)及FR-4 (或FR4)。CDR及框架區之位置可使用此項技術中之各種熟知定義，例如Kabat、Chothia、AbM及IMGT來確定(參見例如Johnson等人, Nucleic Acids Res., 29:205-206 (2001)；Chothia及Lesk, J. Mol. Biol., 196:901-917 (1987)；Chothia等人, Nature, 342:877-883 (1989)；Chothia等人, J. Mol. Biol., 227:799-817 (1992)；Al-Lazikani等人, J. Mol. Biol., 273:927-748 (1997) ImMunoGenTics (IMGT) numbering (Lefranc, M.-P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999)；Lefranc, M.-P.等人, Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003) (「IMGT」編號方案))。抗原結合位點之定義亦描述於以下各者中：Ruiz等人, Nucleic Acids Res., 28:219-221 (2000)；及Lefranc, M. P., Nucleic Acids Res., 29:207-209 (2001)；MacCallum等人, J. Mol. Biol., 262:732-745 (1996)；及Martin等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:9268-9272 (1989)；Martin等人, Methods Enzymol., 203:121-153 (1991)；及Rees等人, Sternberg M. J. E. (編), Protein Structure Prediction, Oxford University Press, Oxford, 141-172 (1996)。例如，根據Kabat，重鏈可變域(VH)中之CDR胺基酸殘基係編號為31-35 (HCDR1)、50-65 (HCDR2)及95-102 (HCDR3)；且輕鏈可變域(VL)中之CDR胺基酸殘基係編號為24-34 (LCDR1)、50-56 (LCDR2)及89-97 (LCDR3)。根據Chothia，VH中之CDR胺基酸係編號為26-32 (HCDR1)、52-56 (HCDR2)及95-102 (HCDR3)；且VL中之胺基酸殘基係編號為26-32 (LCDR1)、50-52 (LCDR2)及91-96 (LCDR3)。藉由結合Kabat及Chothia之CDR定義，CDR由人類VH中之胺基酸殘基26-35 (HCDR1)、50-65 (HCDR2)及95-102 (HCDR3)以及人類VL中之胺基酸殘基24-34 (LCDR1)、50-56 (LCDR2)及89-97 (LCDR3)組成。根據IMGT，VH中之CDR胺基酸殘基編號為大約26-35 (HCDR1)、51-57 (HCDR2)及93-102 (HCDR3)，且VL中之CDR胺基酸殘基編號為大約27-32 (LCDR1)、50-52 (LCDR2)及89-97 (LCDR3) (根據Kabat編號)。根據IMGT，可使用程式IMGT/DomainGap Align來確定抗體之CDR區。
術語「高變區」係指抗體中負責抗原結合之胺基酸殘基。高變區包含來自「CDR」之胺基酸殘基(例如，輕鏈可變域中之LCDR1、LCDR2及LCDR3以及重鏈可變域中之HCDR1、HCDR2及HCDR3)。參見Kabat等人, (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (藉由序列定義抗體之CDR區)；亦參見Chothia及Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917 (藉由結構定義抗體之CDR區)。術語「框架」或「FR」殘基意謂除了在本文中定義為CDR殘基之高變區域殘基以外的彼等可變域殘基。
除非另外指示，否則「抗原結合片段」意謂抗體之抗原結合片段，亦即，保留特異性結合至由全長抗體結合之抗原之能力的抗體片段，例如，保留一或多個CDR區域之片段。抗原結合片段之實例包括但不限於Fab、Fab'、F(ab')2及Fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子，例如單鏈Fv(ScFv)；奈米抗體及由抗體片段形成之多特異性抗體。
如本文所用，抗體「特異性結合」於標靶蛋白意謂與其他蛋白相比，抗體表現出優先結合於該標靶，但此特異性不需要絕對的結合特異性。抗體「特異性結合」或「選擇性結合」在描述抗原(例如蛋白質)與抗體或抗原結合抗體片段之間的相互作用之上下文中使用，係指決定抗原在蛋白質及其他生物製品之異質群體中，例如在生物樣品、血液、血清、血漿或組織樣品中之存在的結合反應。因此，在某些指定免疫檢定條件下，當與背景水平相比時，抗體或其抗原結合片段特異性結合於特定抗原至少兩倍且不以顯著量特異性結合於樣品中存在之其他抗原。在一態樣中，在指定免疫檢定條件下，當與背景水平相比時，抗體或其抗原結合片段特異性結合於特定抗原至少十(10)倍且不以顯著量特異性結合於樣品中存在之其他抗原。
如本文所用，「抗原結合域」包含至少三個CDR且特異性結合於表位。多特異性抗體(例如雙特異性抗體)之「抗原結合域」包含特異性結合於第一標位表位之第一抗原結合域及特異性結合於第二表位的亦包含至少三個CDR之第二抗原結合域。多特異性抗體可為雙特異性、三特異性、四特異性等，其抗原結合域針對各特定表位。多特異性抗體可為多價的(例如雙特異性四價抗體)，其包含多個抗原結合域，例如特異性結合於第一表位之2、3、4個或更多個抗原結合域及特異性結合第二表位之2、3、4個或更多個抗原結合域。
本文中之術語「人類抗體」意謂僅包含人類免疫球蛋白蛋白質序列之抗體。若在小鼠、小鼠細胞或源自小鼠細胞之融合瘤中產生，則人類抗體可含有鼠類碳水化合物鏈。類似地，「小鼠抗體」或「大鼠抗體」分別意謂僅包含小鼠或大鼠免疫球蛋白序列之抗體。
術語「人源化」或「人源化抗體」意謂含有來自非人類(例如鼠類)抗體以及人類抗體之序列的抗體形式。此類抗體含有最少的源自非人類免疫球蛋白之序列。一般而言，人類化抗體將包含基本上所有的至少一個、且典型地兩個可變域，其中所有或基本上所有的高變環對應於非人類免疫球蛋白之彼等高變環，且所有或基本上所有的FR區係人類免疫球蛋白序列之彼等FR區。人源化抗體視情況亦包含免疫球蛋白恆定區(Fc)之至少一部分，典型地為人類免疫球蛋白之恆定區。必要時，在抗體純系名稱中添加前綴「hum」、「hu」、「Hu」或「h」，以區分人源化抗體與親代囓齒類動物抗體。囓齒類動物抗體之人源化形式通常包含與親代囓齒類動物抗體相同之CDR序列，儘管可包括某些胺基酸取代以增加親和力、增加人源化抗體之穩定性、移除轉譯後修飾或出於其他原因。
術語「表位」係指抗體結合之抗原上之特定位點。抗體結合之抗原上之特定位點可例如藉由晶體學來確定。亦可使用諸如羥基自由基蛋白質足跡及丙胺酸掃描突變誘發等方法，但解析度可能較低。
術語「單特異性抗體」係指僅特異性結合於一種抗原之抗體。單特異性抗體可僅結合於抗原之一個表位或可結合於抗原之兩個或更多個表位。結合於抗原之兩個或更多個表位之單特異性抗體為單特異性多表位抗體。
術語「多特異性抗體(multispecific antibody)」或「多特異性抗體(multi-specific antibody)」係指特異性結合於兩種或更多種抗原之抗體( 例如雙特異性抗體、三特異性抗體等)。多特異性抗體之非限制性實例包括但不限於包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)之抗體，其中VH/VL單元具有多表位特異性；具有兩個或更多個VL及VH域之抗體，其中各VH/VL單元結合於不同表位；具有兩個或更多個單一可變域之抗體，其中各單一可變域結合於不同表位；雙抗體；三抗體等，以及已共價或非共價連接之全長抗體及/或抗體片段。
術語「多表位抗體」及「具有多表位特異性之抗體」在本文中可互換使用，係指結合相同或不同抗原上之兩個或更多個表位之抗體。
術語「Fc區」在本文中用於定義免疫球蛋白重鏈的C末端區，包括天然序列Fc區及變異體Fc區。儘管免疫球蛋白重鏈Fc區之邊界可能會變化，但人類IgG重鏈Fc區通常定義為自Cys226位置處之胺基酸殘基或自Pro230延伸至其羧基末端。Fc區之C端離胺酸(根據Eu編號系統之殘基447)可例如在抗體之生產或純化過程中移除，或藉由重組工程化編碼抗體重鏈之核酸來移除。因此，完整抗體之組合物可包含所有Lys447殘基經移除之抗體群體、無Lys447殘基經移除之抗體群體、以及具有含及不含Lys447殘基之抗體混合物的抗體群體。
「功能性Fc區」具有天然序列Fc區之效應功能。例示性效應功能包括C1q結合；補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體；BCR)之下調等。此類效功能通常需要Fc區與結合域(例如抗體可變域)組合，且可使用本文所揭示或此項技術中另外已知之各種檢定來評估。功能性Fc區可具有與野生型IgG基本相似的效應功能、與野生型IgG相比降低的效應功能、或與野生型IgG相比增強的效應功能。對於包含人類Fc區之抗體，典型地與野生型人類IgG1進行比較。
「天然序列Fc區」包含與自然界中發現之Fc區之胺基酸序列相同的胺基酸序列。天然序列人類Fc區包括天然序列人類IgG1 Fc區(非A及A異型)；天然序列人類IgG2 Fc區；天然序列人類IgG3 Fc區；及天然序列人類IgG4 Fc區以及其天然存在之變異體。
「變異體Fc區」包含因至少一個胺基酸修飾(例如約一個至約十個胺基酸修飾，且在一些實施例中約一個至約五個胺基酸修飾)，較佳一或多個胺基酸取代而不同於天然序列Fc區之胺基酸序列。本文之變異體Fc區將較佳與天然序列Fc區及/或親代多肽之Fc區具有至少約80%同源性，較佳與其具有至少約90%同源性，或較佳與其具有至少約95%同源性。在一些實施例中，與野生型IgG相比，變異體Fc區可具有降低或增強的效應功能。對於包含人類Fc區之抗體，典型地與野生型人類IgG1進行比較。
本文所使用之術語「Fc組分」係指Fc區之鉸鏈區、CH2域或CH3域。
術語「鉸鏈區」一般定義為自IgG之約殘基216至230 (Eu編號)、自IgG之約殘基226至243 (Kabat編號)、或自IgG之約殘基1至15 (IMGT唯一編號)的延伸。
術語「抗體片段」係指除完整抗體之外的分子，其包含完整抗體之一部分，該部分與完整抗體所結合之抗原結合。抗原結合片段之實例包括但不限於雙抗體、Fab、Fab'、F(ab') 2、F(ab) c、Fv片段、二硫鍵穩定之Fv片段(dsFv)、(dsFv) 2、雙特異性dsFv (dsFv-dsFv')、二硫鍵穩定之雙抗體(ds雙抗體)、三抗體、四抗體、單鏈抗體、scFv、scFv二聚體、單域抗體、單-域抗體及多價域抗體。典型地，結合片段與其所衍生之完整抗體競爭特異性結合。結合片段可藉由重組DNA技術或藉由完整免疫球蛋白之酶分離或化學分離來產生。
術語「Fab」係指由藉由二硫鍵與單一重鏈之可變區及第一恆定區結合之單一輕鏈(可變區及恆定區兩者)組成的抗體部分。
術語「Fab'」係指包括鉸鏈區之一部分的Fab片段。
術語「F(ab') 2」係指Fab'之二聚體。F(ab')2抗體片段最初係作為其間具有鉸鏈半胱胺酸之成對Fab'片段產生。抗體片段之其他化學偶聯亦為已知的。
術語「Fv」係指具有完整抗原結合位點之抗體的最小片段。Fv片段由與單一重鏈可變區結合之單一輕鏈可變區組成。
術語「單鏈抗體」係指由連接子連接之重鏈可變區及輕鏈可變區組成的抗體。在大多數情況下，但並非全部情況下，連接子可為肽。連接子之長度取決於單鏈抗體之類型而變化。將兩個或更多個單鏈抗體共價或非共價連接在一起會產生更高階的形式。單鏈抗體及其高階形式可包括但不限於單域抗體、多價域抗體、單鏈變異體片段(scFv)、二價scFv (di-scFv)、三價scFv (tri-scFv)、四價scFv (tetra-scFv)、雙抗體、以及三抗體及四抗體。
術語「單鏈Fv抗體」及「scFv」在本文中可互換使用，係指由連接子連接之重鏈可變區及輕鏈可變區組成之單鏈抗體。在大多數情況下，但並非全部情況下，連接子可為肽。連接子肽之長度較佳為約5至30個胺基酸，或約10至25個胺基酸。典型地，連接子可使可變域穩定，而不干擾正確折疊及活性結合位點之產生。在較佳實施例中，連接子肽富含甘胺酸以及絲胺酸或蘇胺酸。將兩個或多個scFv共價或非共價連接在一起產生更高階形式di-scFv、tri-scFv、tetra-scFv等。高階形式之各scFv之抗原結合位點可靶向相同或不同的抗原或表位。
術語「單鏈Fv-Fc抗體」或「scFv-Fc」係指由與Fc區連接之scFv組成之全長抗體。
「雙抗體」係由兩個單鏈抗體組成之單鏈抗體的高階變異體。對於各單鏈抗體，使用之連接子過短而不允許在同一鏈上之兩個域之間配對，迫使該等域與另一條鏈之互補域配對，從而產生兩個抗原結合位點。在大多數情況下，但並非全部情況下，連接子可為肽。抗原結合位點可靶向相同或不同的抗原或表位。可類似地產生三抗體(組裝形成三個抗原結合位點之三個單鏈抗體)、四抗體(組裝形成四個抗原結合位點之四個單鏈抗體)及更高階變異體。參見例如Holliger P.等人, Proc Natl Acad Sci USA. 7月15日；90(14):6444-8 (1993)；EP404097；WO93/11161。
「單域抗體」係指僅含有重鏈可變區或輕鏈可變區之抗體片段。在某些情況下，兩個或更多個V H域與肽連接子共價接合以產生多價域抗體。多價域抗體之兩個或更多個V H域可針對相同或不同的抗原或表位。
術語「重鏈抗體」係指由兩條重鏈組成之抗體。重鏈抗體可為來自駱駝、美洲駝、羊駝、鯊魚等的IgG樣抗體，或為來自軟骨魚之IgNAR。參見例如Riechmann L.及Muyldermans S., J Immunol Methods.12月10日；231(1-2): 25-38 (1999)；Muyldermans S., J Biotechnol. 6月; 74(4):277-302 (2001)；WO94/04678；WO94/25591；或美國專利第6,005,079號。重鏈抗體最初源自駱駝科動物(駱駝、單峰駝及美洲駝)。儘管缺乏輕鏈，但駱駝化抗體具有真實的抗原結合庫(Hamers-Casterman C.等人, Nature.6月3日；363(6428):446-8 (1993)；Nguyen V. K.等人“Heavy-chain antibodies in Camelidae; a case of evolutionary innovation,” Immunogenetics. 4月; 54(1)：39-47(2002)；Nguyen V. K.等人 Immunology. 5月; 109(1):93-101 (2003))。重鏈抗體之可變域(VHH域)代表由適應性免疫反應產生之已知最小抗原結合單元(Koch-Nolte F.等人, FASEB J.11月; 21(13):3490-8. 電子版2007年6月15日(2007))。
術語「對應人類生殖系序列」係指編碼人類可變區胺基酸序列或子序列之核酸序列，其與由人類生殖系免疫球蛋白可變區序列編碼之所有其他已知可變區胺基酸序列相比與參考可變區胺基酸序列或子序列具有最高確定的胺基酸序列一致性。對應人類生殖系序列亦可指與所有其他評估之可變區胺基酸序列相比與參考可變區胺基酸序列或子序列具有最高胺基酸序列一致性之人類可變區胺基酸序列或子序列。對應人類生殖系序列可為僅框架區、僅互補決定區、框架及互補決定區、可變區段(如上文所定義)、或包含可變區之序列或子序列的其他組合。序列一致性可使用本文所述之方法，例如使用BLAST、ALIGN或在此項技術中已知之另一比對演算法將兩個序列比對來確定。對應人類生殖系核酸或胺基酸序列可與參考可變區核酸或胺基酸序列具有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性。另外，若抗體含有恆定區，則恆定區亦衍生自此類人類序列，例如人類生殖系序列、或人類生殖系序列之突變型式或包含衍生自人類框架序列分析之共同框架序列的抗體，例如在Knappik等人, J. Mol. Biol. 296:57-86, 2000中所述。
術語「平衡解離常數(KD，M)」係指解離速率常數(kd，時間-1)除以締合速率常數(ka，時間-1，Ml)。平衡解離常數可使用此項技術中任何已知的方法來量測。本揭示之抗體通常將具有小於約10-7或10-8 M之平衡解離常數，例如小於約10-9 M或10-10 M，在一些態樣中，小於約10-11 M、10-12 M或10-13 M。
本文中之術語「癌症」或「腫瘤」具有如在此項技術中理解之最廣泛含義且係指哺乳動物中典型地以不受調控細胞生長為特徵之生理病況。在本揭示之上下文中，癌症不限於特定類型或位置。
在本揭示之上下文中，當提及胺基酸序列時，術語「保守取代」係指用新胺基酸取代原始胺基酸，該新胺基酸基本上不改變抗體或片段之化學、物理及/或功能特性，例如其對CLDN6或CD3之結合親和力。特定言之，常見的胺基酸保守取代係此項技術中熟知的。
如本文所用之術語「杵入臼」技術係指在多肽相互作用之界面處，在活體外或活體內藉由將空間突起(杵)引入一個多肽中且將承窩或空腔(臼)引入另一多肽中，導引兩個多肽配對在一起的胺基酸。例如，已將杵入臼引入抗體之Fc:Fc結合界面、CL:CHI界面或VH/VL界面(參見例如US 2011/0287009、US2007/0178552、WO 96/027011、WO 98/050431及Zhu等人, 1997, Protein Science 6:781-788)。在一些實施例中，杵入臼確保在多特異性抗體之製造過程中兩條不同重鏈正確配對在一起。例如，在其Fc區中具有杵入臼胺基酸之多特異性抗體可進一步包含連接至各Fc區之單一可變域，或進一步包含與類似或不同輕鏈可變域配對之不同重鏈可變域。杵入臼技術亦可用於VH或VL區，以確保正確配對。
本文在「杵入臼」技術之上下文中使用之術語「杵」係指在多肽與另一多肽相互作用之界面處將突起(杵)引入多肽中之胺基酸變化。在一些實施例中，其他多肽具有臼突變。
本文在「杵入臼」之上下文中使用之術語「臼」係指在多肽與另一多肽相互作用之界面處將承窩或空腔(臼)引入多肽中之胺基酸變化。在一些實施例中，其他多肽具有杵突變。
適合於確定序列一致性及序列相似性百分比之演算法之實例為BLAST演算法，其分別描述於Altschul等人, Nuc. Acids Res. 25:3389-3402, 1977；及Altschul等人, J. Mol. Biol. 215:403-410, 1990中。用於執行BLAST分析之軟體可經由國家生物技術資訊中心(National Center for Biotechnology Information)公開獲得。此演算法涉及首先藉由鑑別查詢序列中之長度W之較短字語來鑑定高評分序列對(HSP)，該等字在與資料庫序列中之相同長度之字語進行比對時，匹配或滿足一些正性值臨限值分數T。T被稱為鄰域字域分數臨限值。此等初始鄰域字語命中充當啟動搜尋以查找含有其之更長HSP的值。字語命中在沿著各序列之兩個方向上延伸直至可增加累積比對評分之程度。對於核苷酸序列，累積評分使用參數M (一對匹配殘基之獎賞分數；總是＞0)及N (不匹配殘基之處罰分數；總是＜0)來計算。對於胺基酸序列，使用評分矩陣來計算累積分數。在以下情況下，各方向上之字語命中之延伸均停止：累積比對分數自其最大實現值下降了量X；由於一或多個負分殘基比對之累積，累積分數降至零或更低；或到達任一序列之末端。BLAST演算法參數W、T及X決定比對之靈敏度及速度。BLASTN程式(用於核苷酸序列)使用預設字長(W) 11，期望值(E) 10，M=5，N=-4，以及兩個股之比較。對於胺基酸序列，BLAST程式預設使用字長3及期望值(E) 10，以及BLOSUM62評分矩陣(參見Henikoff及Henikoff, (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 10915)比對(B) 50，期望值(E) 10，M=5，N=-4，以及兩個股之比較。
BLAST演算法亦對兩個序列之間的相似性進行統計分析(參見例如Karlin及Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5787, 1993)。藉由BLAST演算法提供之相似性之一個量度為最小和概率(P(N))，其提供偶然發生兩個核苷酸或胺基酸序列之間之匹配的概率之指示。例如，若測試核酸與參考核酸之比較中之最小和概率小於約0.2，更佳小於約0.01，且最佳小於約0.001，則核酸被視為與參考序列類似。
兩個胺基酸序列之間之一致性百分比亦可使用E. Meyers及W. Miller, Comput. Appl. Biosci. 4: 11-17, (1988)之演算法來確定，該演算法已併入ALIGN程式(版本2.0)中，使用PAM120權重殘基表、空位長度罰分12及空位罰分4。此外，可使用Needleman及Wunsch, J. Mol. Biol. 48:444-453, (1970)之演算法確定兩個胺基酸序列之間的一致性百分比，該演算法已併入GCG套裝軟體中之GAP程式中，使用BLOSUM62矩陣或PAM250矩陣，且空位權重為16、14、12、10、8、6或4，且長度權重為1、2、3、4、5或6。
術語「核酸」在本文中可與術語「多核苷酸」互換使用，且係指單股或雙股形式之去氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物。該術語涵蓋含有已知核苷酸類似物或經修飾主鏈殘基或鍵聯之核酸，其為合成的、天然存在的及非天然存在的，其具有與參考核酸相似的結合特性，且其以與參考核苷酸類似之方式代謝。此類類似物之實例包括但不限於硫代磷酸酯、胺基磷酸酯、膦酸甲酯、對掌性膦酸甲酯、2-O-甲基核糖核苷酸、肽-核酸(PNA)。
在核酸之上下文中，術語「可操作地連接」係指兩個或更多個多核苷酸(例如DNA)區段之間的功能性關係。典型地，其係指轉錄調控序列與經轉錄序列之功能性關係。例如，若啟動子或增強子序列刺激或調節合適宿主細胞或其他表現系統中之編碼序列之轉錄，則其可操作地連接至編碼序列。一般而言，可操作地連接至經轉錄序列之啟動子轉錄調控序列與經轉錄序列係物理上連續的，亦即，其係順式作用的。然而，一些轉錄調控序列，諸如增強子，不一定與其增強其轉錄之編碼序列係物理上連續的或緊鄰定位。
在一些態樣中，本揭示提供組合物，例如醫藥學上可接受之組合物，其包括與至少一種醫藥學上可接受之賦形劑一起調配的如本文所描述之抗CLDN6xCD3多特異性抗體。如本文所用，術語「醫藥學上可接受之賦形劑」包括生理上相容之任何及所有溶劑、分散介質、等滲劑及吸收延遲劑及其類似試劑。賦形劑可適合於靜脈內、肌肉內、皮下、非經腸、直腸、脊柱或表皮投與(例如藉由注射或輸注)。
本文揭示之組合物可呈各種形式。此等包括例如液體、半固體及固體劑型，諸如液體溶液(例如可注射及輸注溶液)、分散液或懸浮液、脂質體及栓劑。適合之形式取決於預期投與模式及治療應用。典型的適合之組合物呈可注射溶液或輸注溶液之形式。一種適合之投與模式為非經腸(例如靜脈內、皮下、腹膜內、肌肉內)。在一些實施例中，藉由靜脈內輸注或注射投與抗體。在某些實施例中，藉由肌內或皮下注射投與抗體。
如本文使用之術語「治療有效量」係指當向個體投與以治療疾病或疾病或病症之臨床症狀中之至少一者時，足以實現疾病、病症或症狀之此治療的抗體之量。「治療有效量」可隨著抗體、疾病、病症，及/或疾病或病症之症狀，疾病、病症之嚴重程度，及/或疾病或病症之症狀、待治療之個體之年齡，及/或待治療之個體之體重而變化。在任何給定情況下，適當量對熟習此項技術者係顯而易見的或可藉由常規實驗來確定。在組合療法之情況下，「治療有效量」係指用於有效治療疾病、病症或病況之組合物體之總量。
術語「組合療法」係指投與兩種或更多種治療劑以治療本揭示中所描述之治療病症或病症。此類投與涵蓋此等治療劑以基本上同時方式共同投與。此類投與亦涵蓋在多個容器或在單獨容器(例如膠囊、粉末及液體)中針對各活性成分共投與。粉末及/或液體可在投與前復原或稀釋至所需劑量。另外，此類投與亦涵蓋在大約相同時間或不同時間，以順序方式使用各類型之治療劑。在任一情況中，治療方案提供藥物組合在治療本文所述之病況或病症中之有益作用。
如本文使用，片語「與……組合」意謂抗CLDN6xCD3多特異性抗體與投與額外治療劑同時、恰好在其之前或恰好在其之後向個體投與。在某些實施例中，抗CLDN6xCD3多特異性抗體作為與額外治療劑之共調配物投與。 詳細描述
本揭示提供抗體、抗原結合片段及抗CLDN6xCD3多特異性抗體。此外，本揭示提供具有所需藥物動力學特徵及其他所需屬性，且因此可用於降低癌症之可能性或用於治療癌症的抗體。本揭示亦提供包含抗體之醫藥組合物以及製備及使用此類醫藥組合物用於預防及治療癌症及相關病症之方法。 抗 CLDN6 抗體
本揭示提供特異性結合CLDN6之抗體或其抗原結合片段。本揭示之抗體或抗原結合片段包括但不限於如下所述產生之抗體或其抗原結合片段。
本揭示提供特異性結合CLDN6之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗體片段(例如抗原結合片段)包含具有表1中所列之胺基酸序列的VH域。本揭示亦提供特異性結合CLDN6之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段包含具有表1中所列之任一HCDR之胺基酸序列的HCDR。在一個態樣中，本揭示提供特異性結合CLDN6之抗體或抗原結合片段，其中該抗體包含一個、兩個、三個或更多個具有表1中所列之任何HCDR之胺基酸序列的HCDR (或者由其組成)。
本揭示提供特異性結合CLDN6之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段包含具有表1中所列之胺基酸序列的VL域。本揭示亦提供特異性結合CLDN6之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段包含具有表1中所列之任一LCDR之胺基酸序列的LCDR。在特定態樣中，本揭示提供特異性結合CLDN6之抗體或抗原結合片段，該抗體或抗原結合片段包含一個、兩個、三個或更多個具有表1中所列之任何LCDR之胺基酸序列的LCDR (或者由其組成)。
本揭示之其他抗體或其抗原結合片段包括已被改變，但在CDR區中與表1中揭示之CDR區具有至少60%、70%、80%、90%、95%或99%一致性的胺基酸。在一些實施例中，胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性。在一些態樣中，其包括胺基酸改變，其中與表1中所述之序列中描繪之CDR區相比，CDR區中不超過1、2、3、4或5個胺基酸發生變化。
本揭示之其他抗體包括其中胺基酸或編碼胺基酸之核酸已被改變，但與表1中所述之序列具有至少60%、70%、80%、90%、95%或99%一致性之彼等抗體。在一些實施例中，胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性。在一些態樣中，其包括胺基酸序列之改變，其中與表1中所述之序列中描繪之可變區相比，可變區中不超過1、2、3、4或5個胺基酸發生改變，同時保留基本上相同的治療活性。
本揭示亦提供編碼特異性結合CLDN6之抗體之VH、VL、全長重鏈及全長輕鏈的核酸序列。可優化此類核酸序列以用於在哺乳動物細胞中表現。
本揭示提供結合人類CLDN6之表位的抗體及其抗原結合片段。在某些態樣中，抗體及抗原結合片段可結合CLDN6之相同表位。
本揭示亦提供與表1中所述之抗CLDN6抗體結合相同表位之抗體及其抗原結合片段。因此，額外抗體及其抗原結合片段可基於其在結合分析中與其他抗體交叉競爭(例如，以統計顯著方式競爭性抑制其他抗體之結合)之能力來鑑定。測試抗體抑制本揭示之抗體及其抗原結合片段結合於CLDN6之能力證明測試抗體可與該抗體或其抗原結合片段競爭結合於CLDN6。不受任一理論束縛，此類抗體可結合於CLDN6上與其所競爭之抗體或其抗原結合片段相同或相關(例如，結構上相似或空間上鄰近)的表位。在某一態樣中，與本揭示之抗體或其抗原結合片段結合CLDN6上相同表位之抗體為人類或人源化單株抗體。此類人類或人源化單株抗體可如本文所述地製備及分離。 抗 CD3 抗體
本揭示提供特異性結合CD3之抗體或其抗原結合片段。本揭示之抗體或抗原結合片段包括但不限於如下所述產生之抗體或其抗原結合片段。
本揭示提供特異性結合CD3之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗體片段(例如抗原結合片段)包含具有表2中所列之胺基酸序列的VH域。本揭示亦提供特異性結合CD3之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段包含具有表2中所列之任一HCDR之胺基酸序列的HCDR。在一個態樣中，本揭示提供特異性結合CD3之抗體或抗原結合片段，其中該抗體包含一個、兩個、三個或更多個具有表2中所列之任何HCDR之胺基酸序列的HCDR (或者由其組成)。
本揭示之其他抗體或其抗原結合片段包括已被改變，但在CDR區中與表2中揭示之CDR區具有至少60%、70%、80%、90%、95%或99%一致性的胺基酸。在一些實施例中，胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性。在一些態樣中，其包括胺基酸改變，其中與表2中所述之序列中描繪之CDR區相比，CDR區中不超過1、2、3、4或5個胺基酸發生變化。
本揭示之其他抗體包括其中胺基酸或編碼胺基酸之核酸已被改變，但與表2中所述之序列具有至少60%、70%、80%、90%、95%或99%一致性之彼等抗體。在一些實施例中，胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性。在一些態樣中，其包括胺基酸序列之改變，其中與表2中所述之序列中描繪之可變區相比，可變區中不超過1、2、3、4或5個胺基酸發生改變，同時保留基本上相同的治療活性。
本揭示亦提供編碼特異性結合CD3之抗體之VH、VL、全長重鏈及全長輕鏈的核酸序列。可優化此類核酸序列以用於在哺乳動物細胞中表現。
本揭示提供結合人類CD3之表位的抗體及其抗原結合片段。在某些態樣中，抗體及抗原結合片段可結合CD3之相同表位。
本揭示亦提供與表2中所述之抗CD3抗體結合相同表位之抗體及其抗原結合片段。因此，額外抗體及其抗原結合片段可基於其在結合分析中與其他抗體交叉競爭(例如，以統計顯著方式競爭性抑制其他抗體之結合)之能力來鑑定。測試抗體抑制本揭示之抗體及其抗原結合片段結合於CD3之能力證明測試抗體可與該抗體或其抗原結合片段競爭結合於CD3。不受任一理論束縛，此類抗體可結合於CD3上與其所競爭之抗體或其抗原結合片段相同或相關(例如，結構上相似或空間上鄰近)的表位。在某一態樣中，與本揭示之抗體或其抗原結合片段結合CD3上相同表位之抗體為人類或人源化單株抗體。此類人類或人源化單株抗體可如本文所述地製備及分離。 抗 CLDN6xCD3 多特異性抗體
在一個實施例中，本文所揭示之抗CLDN6及抗CD3抗體可併入抗CLDN6xCD3多特異性抗體中。抗體分子為多特異性抗體分子，例如，其包含多個抗原結合域，其中至少一個抗原結合域序列特異性結合CLDN6作為第一表位，且第二抗原結合域序列特異性結合CD3作為第二表位。在一個實施例中，多特異性抗體包含第三、第四或第五抗原結合域。在一個實施例中，多特異性抗體為雙特異性抗體、三特異性抗體或四特異性抗體。在各實例中，多特異性抗體包含至少一個抗CLDN6抗原結合域及至少一個抗CD3抗原結合域。
在一個實施例中，多特異性抗體為雙特異性抗體。如本文所用，雙特異性抗體僅特異性結合兩種抗原。雙特異性抗體包含特異性結合CLDN6之第一抗原結合域及特異性結合CD3之第二抗原結合域。此包括雙特異性抗體，其包含特異性結合CLDN6作為第一表位之重鏈可變域及輕鏈可變域以及特異性結合CD3作為第二表位之重鏈可變域。在另一實施例中，雙特異性抗體包含特異性結合CLDN6之抗體之抗原結合片段及特異性結合CD3之抗原結合片段。雙特異性抗體包含抗原結合片段，該抗原結合片段可為Fab、F(ab’)2、Fv或單鏈Fv (ScFv)或scFv。
先前實驗(Coloma及Morrison, Nature Biotech. 15: 159-163 (1997))描述藉由將編碼單鏈抗丹醯抗體Fv (scFv)之DNA融合在IgG3抗丹醯抗體之C端之後(CH3-scFv)或鉸鏈之後(鉸鏈-scFv)來工程化之四價雙特異性抗體。本揭示提供具有至少兩個抗原結合域之多價抗體(例如四價抗體)，其可藉由編碼抗體之多肽鏈之核酸的重組表現來容易地產生。本文中之多價抗體包含特異性結合至少兩個抗原之三至八個、但較佳四個抗原結合域。 連接子
亦應理解，雙特異性四價抗體之多肽鏈之域及/或區可被各種長度之連接子區分開。在一些實施例中，抗原結合域藉由連接子區彼此分開、與CL、CH1、鉸鏈、CH2、CH3或整個Fc區分開。例如，VL1-CL-(連接子) VH2-CH1、VH-連接子-VL。此類連接子區可包含隨機分類之胺基酸或一組受限之胺基酸。此類連接子區可為可撓性的或剛性的(參見US2009/0155275)。
多特異性抗體藉由以下來構築：在使用或不使用可撓性連接子之情況下，遺傳融合兩個單鏈Fv (scFv)或Fab片段(Mallender等人, J. Biol. Chem. 1994 269:199-206；Mack等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995 92:7021-5；Zapata等人, Protein Eng. 1995 8.1057-62)；經由二聚化裝置諸如白胺酸拉鏈(Kostelny等人, J. Immunol. 1992148:1547-53；de Kruifetal J. Biol. Chem. 1996 271:7630-4)及Ig C/CH1域(Muller等人, FEBS Lett. 422:259-64)；藉由雙功能抗體(Holliger等人, (1993) Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1998 90:6444-8；Zhu等人, Bio/Technology (NY) 1996 14:192-6)；Fab-scFv融合(Schoonjans等人, J. Immunol. 2000 165:7050-7)；及微型抗體格式(Pack等人, Biochemistry 1992.31:1579-84；Pack等人, Bio/Technology 1993 11:1271-7)。
本文所揭示之雙特異性四價抗體在其抗原結合域、CL域、CH1域、鉸鏈區、CH2域、CH3域或Fc區中之一或多者之間包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75個或更多個胺基酸殘基。在一些實施例中，胺基酸甘胺酸及絲胺酸包含連接子區內之胺基酸。在另一實施例中，連接子可為GS、GGS、GSG、SGG、GGG、GGGS、SGGG、GGGGS、GGGGSGS、GGGGSGS、GGGGSGGS、GGGGSGGGGS、GGGGSGGGGSGGGGS、AKTTPKLEEGEFSEAR、AKTTPKLEEGEFSEARV、AKTTPKLGG、SAKTTPKLGG、AKTTPKLEEGEFSEARV、SAKTTP、SAKTTPKLGG、RADAAP、RADAAPTVS、RADAAAAGGPGS、RADAAAA(G4S)4、SAKTTP、SAKTTPKLGG、SAKTTPKLEEGEFSEARV、ADAAP、ADAAPTVSIFPP、TVAAP、TVAAPSVFIFPP、QPKAAP、QPKAAPSVTLFPP、AKTTPP、AKTTPPSVTPLAP、AKTTAP、AKTTAPSVYPLAP、ASTKGP、ASTKGPSVFPLAP、GENKVEYAPALMALS、GPAKELTPLKEAKVS及GHEAAAVMQVQYPAS或其任何組合(參見WO2007/024715)。 二聚化特異性胺基酸
在一個實施例中，多價抗體包含至少一種二聚化特異性胺基酸變化。二聚化特異性胺基酸變化導致「杵入臼(knobs into holes)」相互作用，且增加正確多價抗體之組裝。二聚化特異性胺基酸可位於CH1域或CL域或其組合內。用於將CH1域與其他CH1域配對(CH1-CH1)以及將CL域與其他CL域配對(CL-CL)之二聚化特異性胺基酸可至少在WO2014082179、WO2015181805家族及WO2017059551之揭示內容中找到。二聚化特異性胺基酸亦可位於Fc域內且可與CH1或CL域內之二聚化特異性胺基酸組合。在一個實施例中，本揭示提供一種包含至少一個二聚化特異性胺基酸對之雙特異性抗體。 Fc 區框架之進一步改變
在其他態樣中，藉由用不同的胺基酸殘基取代至少一個胺基酸殘基來改變Fc區以改變抗體之效應功能。例如，一或多個胺基酸可被不同的胺基酸殘基取代，使得抗體對效應配位體具有改變的親和力，但保留親代抗體之抗原結合能力。親和力改變之效應配位體可為例如Fc受體或補體之C1組分。此方法描述於例如均由Winter等人提申之美國專利第5,624,821號及第5,648,260號中。
在另一態樣中，一或多個胺基酸殘基可被一或多個不同的胺基酸殘基取代，使得抗體具有改變的C1q結合及/或減少或消除的補體依賴性細胞毒性(CDC)。此方法描述於例如美國專利Idusogie等人之美國專利第6,194,551號中。
在另一態樣中，改變一或多個胺基酸殘基，從而改變抗體固定補體之能力。此方法描述於例如Bodmer等人之公開案WO 94/29351中。在一特定態樣中，本揭示之抗體或其抗原結合片段之一或多個胺基酸藉由IgG1亞類及κ同型之一或多個異型胺基酸殘基置換。異型胺基酸殘基亦包括但不限於IgG1、IgG2及IgG3亞類之重鏈之恆定區以及κ同型之輕鏈之恆定區，如Jefferis等人, MAbs. 1:332-338 (2009)所描述。
在另一態樣中，藉由修飾一或多個胺基酸，Fc區經修飾以便增加抗體介導抗體依賴性細胞毒性(ADCC)及/或增加抗體對於Fcγ受體之親和力的能力。此方法描述於例如Presta之公開案WO00/42072中。此外，已繪製人類IgG1上FcγRI、FcγRII、FcγRIII及FcRn之結合位點，且已描述具有經改善結合之變異體(參見Shields等人, J. Biol. Chem. 276:6591-6604, 2001)。
在另一態樣中，多特異性抗體之醣基化經修飾。例如，可製備非醣基化抗體(亦即，該抗體缺乏醣基化或具有減少的醣基化)。例如，可改變醣基化以增加抗體對「抗原」之親和力。此類碳水化合物修飾可藉由例如改變抗體序列內之一或多個醣基化位點來完成。例如，可進行一或多個胺基酸取代，其導致消除一或多個可變區框架醣基化位點，從而消除該位點處之醣基化。此類非醣基化可增加抗體對抗原之親和力。此類方法描述於例如Co等人之美國專利第5,714,350號及第6,350,861號中。
另外或替代地，可製備具有改變類型之醣基化的抗體，例如具有減少量之岩藻醣基殘基之低岩藻醣基化抗體或具有增加的平分GlcNac結構之抗體。此類改變的醣基化模式已被證明可提高抗體之ADCC能力。此類碳水化合物修飾可藉由例如在具有改變的醣基化途徑之宿主細胞中表現抗體來完成。具有經改變醣基化途徑之細胞已在此項技術中描述且可用作在其中表現重組抗體之宿主細胞，由此產生具有經改變醣基化之抗體。例如，Hang等人之EP 1,176,195描述具有功能破壞FUT8基因之細胞株，該基因編碼岩藻醣基轉移酶，以使得此細胞株中表現之抗體呈現低岩藻醣基化。Presta之公開案WO 03/035835描述變異體CHO細胞株Lecl3細胞，其將岩藻醣附接至Asn (297)連接碳水化合物之能力降低，亦導致在彼宿主細胞中表現之抗體之低岩藻醣基化(亦參見Shields等人, (2002) J. Biol. Chem. 277:26733-26740)。Umana等人之WO99/54342描述工程化以便表現糖蛋白修飾糖基轉移酶(例如β(1,4)-N乙醯葡糖胺基轉移酶III(GnTIII))之細胞株以使得工程化細胞株中表現之抗體表現出增加的平分GlcNac結構，導致抗體之ADCC活性增加(亦參見Umana等人, Nat. Biotech. 17:176-180, 1999)。
在另一態樣中，若需要減少ADCC，則在許多先前報告中顯示人類抗體亞類IgG4具有僅適度ADCC且幾乎無CDC效應功能(Moore G L等人, 2010 MAbs, 2:181-189)。然而，發現天然IgG4在應力條件下，諸如在酸性緩衝液中或在升高的溫度下不太穩定(Angal, S. 1993 Mol Immunol, 30:105-108; Dall'Acqua, W.等人, 1998 Biochemistry, 37:9266-9273; Aalberse等人, 2002 Immunol, 105:9-19)。減少ADCC可藉由將抗體可操作地連接至用變化之組合進行工程化之IgG4 Fc來達成，該等變化減少FcγR結合或C1q結合活性，由此減少或消除ADCC及CDC效應功能。考慮到抗體作為生物藥物之物理化學特性，IgG4之不太理想的固有特性之一為其兩條重鏈在溶液中動態分離而形成半抗體，其導致經由稱為「Fab臂交換」之過程在活體內產生雙特異性抗體(Van der Neut Kolfschoten M等人, 2007 Science, 317:1554-157)。位置228 (EU編號系統)處之絲胺酸至脯胺酸之突變似乎對IgG4重鏈分離有抑制作用(Angal, S. 1993 Mol Immunol, 30:105-108；Aalberse等人, 2002 Immunol, 105:9-19)。據報導，鉸鏈及γFc區域中之一些胺基酸殘基對於抗體與Fcγ受體之相互作用有影響(Chappel S M等人, 1991 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:9036-9040；Mukherjee, J.等人, 1995 FASEB J, 9:115-119；Armour, K. L.等人, 1999 Eur J Immunol, 29:2613-2624；Clynes, R. A.等人, 2000 Nature Medicine, 6:443-446；Arnold J. N., 2007 Annu Rev immunol, 25:21-50)。此外，一些在人類群體中很少出現之IgG4同功型亦可引起不同物理化學特性(Brusco, A.等人, 1998 Eur J Immunogenet, 25:349-55；Aalberse等人, 2002 Immunol, 105:9-19)。為產生具有低ADCC及CDC但具有良好穩定性之多特異性抗體，有可能修飾人類IgG4之鉸鏈及Fc區域且引入許多變化。此等經修飾IgG4 Fc分子可在Li等人之美國專利第8,735,553號中找到，該專利以引用之方式併入本文中。 抗體產生
抗體及其抗原結合片段可藉由此項技術中已知之任何方法產生，包括但不限於抗體四聚體之重組表現、化學合成及酶消化，而全長單株抗體可藉由例如融合瘤或重組產生獲得。重組表現可來自此項技術中已知之任何適當宿主細胞，例如哺乳動物宿主細胞、細菌宿主細胞、酵母宿主細胞、昆蟲宿主細胞等。
本揭示進一步提供編碼本文所述之抗體的多核苷酸，例如編碼包含如本文所述之互補決定區之重鏈或輕鏈可變區或區段的多核苷酸。在一些態樣中，編碼重鏈可變區之多核苷酸與選自由SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 60及SEQ ID NO: 64組成之群的多核苷酸具有至少85%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%核酸序列一致性。在一些態樣中，編碼輕鏈可變區之多核苷酸與選自由SEQ ID NO: 10、57、61或65組成之群的多核苷酸具有至少85%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%核酸序列一致性。
本揭示之多核苷酸可編碼抗CLDN6xCD3抗體之可變區序列。其亦可編碼抗體之可變區及恆定區。一些多核苷酸序列編碼包含例示性抗CLDN6xCD3抗體之重鏈及輕鏈可變區之多肽。
本揭示亦提供用於產生抗CLDN6xCD3抗體之表現載體及宿主細胞。表現載體之選擇取決於有待在其中表現載體之預期宿主細胞。典型地，表現載體含有可操作地連接至編碼抗CLDN6xCD3抗體鏈或抗原結合片段之多核苷酸的啟動子及其他調控序列(例如增強子)。在一些態樣中，採用誘導型啟動子來防止插入序列之表現，除非在誘導條件之控制下。誘導型啟動子包括例如阿拉伯糖、lacZ、金屬硫蛋白啟動子或熱休克啟動子。轉型生物體之培養物可在非誘導條件下擴增，而不會使群體偏向表現產物更容易被宿主細胞耐受之編碼序列。除了啟動子之外，對於抗CLDN6xCD3抗體或抗原結合片段之有效表現亦可能需要或期望其他調控元件。此等元件典型地包括ATG起始密碼子及相鄰核糖體結合位點或其他序列。另外，表現效率可藉由包含適合於使用中之細胞系統之增強子來增強(參見例如Scharf等人, Results Probl. Cell Differ. 20:125, 1994；及Bittner等人, Meth. Enzymol., 153:516, 1987)。例如，SV40增強子或CMV增強子可用於增加哺乳動物宿主細胞中之表現。
用於攜帶及表現抗CLDN6xCD3抗體鏈之宿主細胞可為原核的或真核的。大腸桿菌係一種適用於選殖及表現本揭示之多核苷酸的原核宿主。其他適合使用之微生物宿主包括桿菌，諸如枯草桿菌(Bacillus subtilis)，及其他腸桿菌科(enterobacteriaceae)，諸如沙門氏菌(Salmonella)、沙雷氏菌(Serratia)及各種假單胞菌屬物種。在此等原核宿主中，亦可製得表現載體，其典型地含有與宿主細胞相容之表現控制序列(例如複製起點)。另外，將存在任何數目之各種熟知啟動子，諸如乳糖啟動子系統、色胺酸(trp)啟動子系統、β-內醯胺酶啟動子系統或來自噬菌體λ之啟動子系統。啟動子典型地視情況與操縱子序列一起控制表現，且具有用於啟動及完成轉錄及轉譯之核糖體結合位點序列及其類似序列。其他微生物，諸如酵母亦可於表現抗CLDN6xCD3抗體。亦可使用昆蟲細胞與桿狀病毒載體之組合。在其他態樣中，哺乳動物宿主細胞用於表現及產生本揭示之抗CLDN6xCD3抗體。例如，其可為表現內源免疫球蛋白基因之融合瘤細胞株或攜有外源表現載體之哺乳動物細胞株。此等包括任何正常的必死細胞或正常或異常的永生動物或人類細胞。例如，已開發能夠分泌完整免疫球蛋白之多種合適宿主細胞株，包括CHO細胞株、各種COS細胞株、HEK293細胞、骨髓瘤細胞株、轉型B細胞及融合瘤。使用哺乳動物組織細胞培養物來表現多肽通常論述於例如Winnacker, From Genes to Clones, VCH Publishers, NY, N.Y., 1987中。哺乳動物宿主細胞之表現載體可包括表現控制序列，諸如複製起點、啟動子及增強子(參見例如Queen等人, Immunol. Rev. 89:49-68, 1986)，及必要的加工資訊位點，諸如核糖體結合位點、RNA剪接位點、聚腺苷酸化位點及轉錄終止子序列。此等表現載體通常含有衍生自哺乳動物基因或哺乳動物病毒之啟動子。適合之啟動子可為組成性、細胞類型特異性、階段特異性及/或可調節或可調控的。有用之啟動子包括但不限於金屬硫蛋白啟動子、組成型腺病毒主要晚期啟動子、地塞米松誘導型MMTV啟動子、SV40啟動子、MRP polIII啟動子、組成型MPSV啟動子、四環素誘導型CMV啟動子(諸如人類即刻早期CMV啟動子)、組成型CMV啟動子及此項技術中已知之啟動子-強化子組合。 雙特異性抗體之產生
工程化異二聚抗體Fc域之當前標準為杵入臼(KiH)設計，該設計在核心CH3域界面處引入突變。所得異二聚體具有降低的CH3解鏈溫度(69℃或更低)。相反，ZW異二聚Fc設計具有81.5℃之熱穩定性，與野生型CH3域相當。 偵測及診斷方法
本揭示之抗體或抗原結合片段可用於多種應用，包括但不限於用於偵測CLDN6之方法。在一個態樣中，抗體或抗原結合片段可用於偵測生物樣品中之CLDN6之存在。如本文使用之術語「偵測」包括定量或定性偵測。在某些態樣中，生物樣品包含細胞或組織。在其他態樣中，此類組織包括相對於其他組織以更高水平表現CLDN6之正常及/或癌性組織。
在一個態樣中，本揭示提供偵測生物樣品中CLDN6之存在的方法。在某些態樣中，方法包括在容許抗體結合於抗原及偵測是否在抗體與抗原之間形成複合物的條件下使生物樣品與抗CLDN6xCD3抗體接觸。生物樣品可包括但不限於尿液、組織、唾液或血液樣品。
亦包括診斷與CLDN6表現相關之病症的方法。在某些態樣中，該方法包括使測試細胞與抗CLDN6xCD3抗體接觸；藉由偵測抗CLDN6xCD3抗體與CLDN6多肽之結合來確定測試細胞表現之CLDN6之表現水平(定量或定性)；以及將測試細胞之表現水平與對照細胞(例如，與測試細胞具有相同組織來源之正常細胞或非CLDN6表現細胞)中之CLDN6表現水平進行比較，其中與對照細胞相比測試細胞中更高水平之CLDN6表現表明存在與CLDN6表現相關之病症。 治療方法
本揭示之抗體或抗原結合片段可用於多種應用，包括但不限於用於治療CLDN6相關病症或疾病之方法。在一個態樣中，CLDN6相關疾病或疾病為癌症。
在一個態樣中，本揭示提供一種治療癌症之方法。在某些態樣中，該方法包括向有需要之患者投與有效量之抗CLDN6xCD3抗體或抗原結合片段。在一些實施例中，癌症為實體腫瘤。癌症可包括但不限於胃癌、大腸癌、胰臟癌、乳癌、頭頸癌、腎癌、肝癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、皮膚癌、間皮瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、肉瘤、腦癌、大腸直腸癌、前列腺癌、子宮頸癌、睾丸癌、子宮內膜癌、膀胱癌、橫紋肌樣瘤及/或神經膠質瘤。
本文所揭示之抗體或抗原結合片段可藉由任何適合之方式投與，包括腸胃外、肺內及鼻內投與，若需要局部治療，則可藉由病灶內投與。腸胃外輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投與。給藥可藉由任何適合之途徑，例如藉由注射，諸如靜脈內或皮下注射，其部分取決於投與係短暫的抑或長期的。本文考慮了各種給藥方案，包括但不限於在不同時間點單次或多次投與、推注投與及脈衝輸注。
本揭示之抗體或抗原結合片段可以符合良好醫療實務之方式調配、給藥及投與。在本上下文中考慮之因素包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床狀況、病症之原因、藥劑之遞送部位、投與方法、投與時間安排，以及開業醫師已知的其他因素。抗體不需要但視情況與目前用於預防或治療所討論之病症的一或多種藥劑一起調配。此類其他藥劑之有效量取決於調配物中存在之抗體的量、病症或治療之類型以及上述其他因素。此等通常以與本文所述相同之劑量及投與途徑，或本文所述劑量之約1至99%使用，或以根據經驗/臨床確定為合適的任何劑量及任何途徑使用。
對於疾病之預防或治療，本揭示之抗體或抗原結合片段之適當劑量將取決於待治療之疾病之類型、抗體之類型、疾病之嚴重程度及病程、抗體係出於預防或治療目的而投與、既往療法、患者之臨床病史及對抗體之反應以及主治醫師之判斷。抗體適合一次或在一系列治療中向患者投與。取決於疾病之類型及嚴重程度，約1 μg/kg至100 mg/kg之抗體可為向患者投與之初始候選劑量，無論藉由例如一或多次單獨投與，抑或藉由連續輸注。一個典型的日劑量範圍可為約1 µg/kg至100 mg/kg或更多，具體取決於上述因素。對於幾天或更長時間之重複投與，根據病情，治療通常會持續至出現所需的疾病症狀遏制為止。此類劑量可間歇地投與，例如每週或每三週(例如使得患者接受約二至約二十、或例如約六劑抗體)。可投與初始較高的負荷劑量，隨後投與一或多個較低劑量。然而，其他劑量方案亦可能有用。此類療法之進展易於藉由習知技術及檢定來監測。 組合療法
在一個態樣中，本揭示之抗CLDN6xCD3抗體可與其他治療劑組合使用。其他可與本揭示之抗CLDN6xCD3抗體一起使用之治療劑包括但不限於：化學治療劑(例如紫杉醇或紫杉醇劑；(例如Abraxane®)、多西他賽(docetaxel)；卡鉑；拓撲替康(topotecan)；順鉑；伊立替康(irinotecan)、小紅莓(doxorubicin)、雷利竇邁(lenalidomide)、5-氮雜胞苷、異環磷醯胺、奧沙利鉑(oxaliplatin)、培美曲塞二鈉(pemetrexed disodium)、環磷醯胺、依托泊苷(etoposide)、地西他濱(decitabine)、氟達拉濱(fludarabine)、長春新鹼、苯達莫司汀(bendamustine)、苯丁酸氮芥、白消安(busulfan)、吉西他濱、美法崙(melphalan)、噴司他丁(pentostatin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、培美曲塞二鈉)、酪胺酸激酶抑制劑(例如EGFR抑制劑(例如厄洛替尼(erlotinib))、多激酶抑制劑(例如MGCD265、RGB-286638)、CD-20靶向劑(例如利妥昔單抗(rituximab)、奧法木單抗(ofatumumab)、RO5072759、LFB-R603)、CD52靶向劑(例如阿崙單抗(alemtuzumab))、普賴蘇濃(prednisolone)、阿法達貝泊汀(darbepoetin alfa)、雷利竇邁、Bcl-2抑制劑(例如奧利默森鈉(oblimersen sodium))、極光激酶抑制劑(例如MLN8237、TAK-901)、蛋白酶體抑制劑(例如硼替佐米(bortezomib))、CD-19靶向劑(例如MEDI-551、MOR208)、MEK抑制劑(例如，ABT-348)、JAK-2抑制劑(例如INCB018424)、mTOR抑制劑(例如替西羅莫司(temsirolimus)、依維莫司(everolimus))、BCR/ABL抑制劑(例如伊馬替尼(imatinib))、ET-A受體拮抗劑(例如ZD4054)、TRAIL受體2 (TR-2)促效劑(例如CS-1008)、EGEN-001、Polo樣激酶1抑制劑(例如BI 672)。
本揭示之抗CLDN6xCD3抗體可與其他治療劑，例如免疫檢查點抗體組合使用。此類免疫檢查點抗體可包括抗PD1抗體。抗PD1抗體可包括但不限於替雷利珠單抗、帕博利珠單抗或納武單抗。替雷利珠單抗揭示於US 8,735,553中。帕博利珠單抗(以前稱為MK-3475)揭示於US 8,354,509及US 8,900,587中，係一種人源化IgG4-K免疫球蛋白，其靶向PD1受體且抑制PD1受體配體PD-L1及PD- L2之結合。帕博利珠單抗已被批准用於轉移性黑色素瘤及轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)之適應症，且正在進行用於治療頭頸鱗狀細胞癌(HNSCC)及難治性霍奇金氏淋巴瘤(cHL)之臨床研究。納武單抗(如Bristol-Meyers Squibb所揭示)係一種全人類IgG4-K單株抗體。納武單抗(純系5C4)揭示於美國專利第US 8,008,449號及WO 2006/121168中。納武單抗被核准用於治療黑色素瘤、肺癌、腎癌及霍奇金氏淋巴瘤。
與抗CLDN6xCD3抗體組合之其他免疫檢查點抗體可包括抗TIGIT抗體。此類抗TIGIT抗體可包括但不限於如WO2019/129261中所揭示之抗TIGIT抗體。
與抗CLDN6xCD3抗體組合之其他免疫檢查點抗體可包括抗OX40抗體。此類抗OX40抗體可包括但不限於如WO2019/223733中所揭示之抗OX40抗體。
與抗CLDN6xCD3抗體組合之其他免疫檢查點抗體可包括抗TIM3抗體。此類抗TIM3抗體可包括但不限於如WO2018/036561中所揭示之抗TIM3抗體。 醫藥組合物及調配物
亦提供組合物，包括醫藥調配物，其包含抗CLDN6xCD3抗體或其抗原結合片段，或包含編碼抗CLDN6xCD3抗體或其抗原結合片段之序列之多核苷酸。在某些實施例中，組合物包含一或多種抗CLDN6xCD3抗體或抗原結合片段，或一或多種包含編碼一或多種抗CLDN6xCD3抗體或抗原結合片段之序列的多核苷酸。此等組合物亦可包含適合之載劑，諸如此項技術中熟知之醫藥學上可接受之賦形劑，包括緩衝劑。
如本文所描述之抗CLDN6xCD3抗體或抗原結合片段之醫藥調配物藉由將具有所需純度之此類抗體或抗原結合片段與一或多種視情況選用之醫藥學上可接受之載劑混合來製備(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版, Osol, A.編輯(1980))，呈凍乾調配物或水溶液之形式。醫藥學上可接受之載劑在所採用之劑量及濃度下通常對接受者無毒，且包括但不限於緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如氯化十八烷基二甲基芐基銨；氯化六甲銨；苯扎氯銨；芐索氯銨；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬胺酸、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖類，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如鋅-蛋白質錯合物)；及/或非離子界面活性劑，諸如聚乙二醇(PEG)。本文中之例示性醫藥學上可接受之載劑進一步包括間質藥物分散劑，諸如可溶性中性-活性玻尿酸酶醣蛋白(sHASEGP)，例如人類可溶性PH-20玻尿酸酶醣蛋白，諸如rHuPH20 (HYLENEX®，Baxter International, Inc.)。某些例示性sHASEGP及使用方法，包括rHuPH20，描述於美國專利第US 7,871,607號及2006/0104968中。在一個態樣中，sHASEGP與一或多種額外糖胺聚醣酶，諸如軟骨素酶組合。
在一個實施例中，調配物由L-組胺酸/L-組胺酸鹽酸鹽一水合物、海藻糖及聚山梨醇酯20構成。在另一實施例中，以無菌注射用水配製後，抗CLDN6xCD3抗體藥物產品之濃度係由10 mg/mL抗CLDN6xCD3抗體、20 mM組胺酸/組胺酸HCl、240 mM海藻糖二水合物及0.02%聚山梨醇酯20 (pH約5.5)組成之等滲溶液。
例示性凍乾抗體調配物描述於美國專利第6,267,958號中。水性抗體調配物包括美國專利第6,171,586號及WO2006/044908中所描述之彼等，後述調配物包括組胺酸-乙酸鹽緩衝液。
可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑之適合實例包括含有抗體之固體疏水性聚合物之半滲透性基質，該等基質呈成形物件例如膜或微囊形式。
用於活體內投與之調配物通常係無菌的。無菌可輕鬆實現，例如藉由經無菌過濾膜過濾。 序列表
本揭示之序列表提供於下表1至3中。 表 1. 序列表 (Kabat 編號 )
抗體 SEQ ID NO 注釋 序列
BG87P SEQ ID NO: 1 VH CDR1 DYHIN
SEQ ID NO: 2 VH CDR2 WIYPGSGYTKYNEKFKV
SEQ ID NO: 3 VH CDR3 SGIYHYVSSYYFDH
SEQ ID NO: 4 VL CDR1 KASQDVGTAVA
SEQ ID NO: 5 VL CDR2 WASTRHT
SEQ ID NO: 6 VL CDR3 QQYSSYT
SEQ ID NO: 7 VH AA QIQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFTDYHINWVKQRPGQGLEWIGWIYPGSGYTKYNEKFKVKATLTVDTSSSTAYMHLTSLTSEDSAVYFCARSGIYHYVSSYYFDHWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO: 8 VL AA DIVMTQSHTFMSTSVGDRVSITCKASQDVGTAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADYFCQQYSSYTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO: 9 VH DNA CAGATTCAGCTGCAGCAGAGCGGCCCCGAGCTGGTGAAGCCCGGCGCCTCCGTGAAGATCAGCTGCAAGGCCTCCGGCTACAGCTTCACCGACTACCACATCAACTGGGTGAAGCAGAGACCCGGCCAAGGCCTGGAGTGGATCGGCTGGATCTACCCCGGCAGCGGCTACACCAAGTACAACGAGAAGTTCAAGGTGAAGGCCACCCTGACCGTCGACACAAGCAGCAGCACCGCCTACATGCACCTGACAAGCCTGACAAGCGAGGACAGCGCCGTGTACTTCTGCGCTAGAAGCGGCATCTACCACTACGTGAGCAGCTACTACTTCGACCACTGGGGCCAAGGCACCACCCTCACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO: 10 VL DNA GACATCGTGATGACACAGAGCCACACCTTCATGAGCACAAGCGTGGGCGACAGAGTGAGCATCACCTGCAAGGCCTCCCAAGACGTGGGCACCGCCGTCGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGGCAGAGCCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCCTCCACAAGACACACCGGCGTGCCCGACAGATTCACCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAACGTGCAGAGCGAGGACCTGGCCGACTACTTCTGTCAGCAGTACAGCAGCTACACCTTCGGCGGGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
ChBG87P SEQ ID NO: 1 VH CDR1 DYHIN
SEQ ID NO: 2 VH CDR2 WIYPGSGYTKYNEKFKV
SEQ ID NO: 3 VH CDR3 SGIYHYVSSYYFDH
SEQ ID NO: 4 VL CDR1 KASQDVGTAVA
SEQ ID NO: 5 VL CDR2 WASTRHT
SEQ ID NO: 6 VL CDR3 QQYSSYT
BG87P-z0 SEQ ID NO: 11 VH AA QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKVRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 12 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-Bz0 SEQ ID NO: 13 VH AA QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKVRVTLTVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 14 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKSPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSVQPDDFATYFCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-Bz1 SEQ ID NO: 15 VH AA QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKVRVTLTVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 14 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKSPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSVQPDDFATYFCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-Bz2 SEQ ID NO: 16 VH AA QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKVRVTLTVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 14 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKSPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSVQPDDFATYFCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-Bz3 SEQ ID NO: 17 VH AA QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKVRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 14 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKSPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSVQPDDFATYFCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-Bz4 SEQ ID NO: 18 VH AA QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKVRVTLTRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 14 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKSPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSVQPDDFATYFCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-Bz5 SEQ ID NO: 19 VH AA QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKVRVTLTVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 14 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKSPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSVQPDDFATYFCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-Bz6 SEQ ID NO: 13 VH AA QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKVRVTLTVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 20 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSVQPDDFATYFCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-Bz7 SEQ ID NO: 13 VH AA QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKVRVTLTVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 21 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKSPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYFCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-Bz8 SEQ ID NO: 13 VH AA QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKVRVTLTVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 22 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKSPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSVQPDDFATYYCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-21 SEQ ID NO: 1 VH CDR1 DYHIN
SEQ ID NO: 23 VH CDR2 WIYPGSGYTKYNEKFKG
SEQ ID NO: 3 VH CDR3 SGIYHYVSSYYFDH
SEQ ID NO: 4 VL CDR1 KASQDVGTAVA
SEQ ID NO: 5 VL CDR2 WASTRHT
SEQ ID NO: 6 VL CDR3 QQYSSYT
SEQ ID NO: 24 VH AA QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 12 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-22 SEQ ID NO: 1 VH CDR1 DYHIN
SEQ ID NO: 23 VH CDR2 WIYPGSGYTKYNEKFKG
SEQ ID NO: 3 VH CDR3 SGIYHYVSSYYFDH
SEQ ID NO: 4 VL CDR1 KASQDVGTAVA
SEQ ID NO: 5 VL CDR2 WASTRHT
SEQ ID NO: 6 VL CDR3 QQYSSYT
SEQ ID NO: 25 VH AA QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 12 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-23 SEQ ID NO: 1 VH CDR1 DYHIN
SEQ ID NO: 23 VH CDR2 WIYPGSGYTKYNEKFKG
SEQ ID NO: 3 VH CDR3 SGIYHYVSSYYFDH
SEQ ID NO: 4 VL CDR1 KASQDVGTAVA
SEQ ID NO: 5 VL CDR2 WASTRHT
SEQ ID NO: 6 VL CDR3 QQYSSYT
SEQ ID NO: 26 VH AA QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 12 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-24 SEQ ID NO: 1 VH CDR1 DYHIN
SEQ ID NO: 23 VH CDR2 WIYPGSGYTKYNEKFKG
SEQ ID NO: 3 VH CDR3 SGIYHYVSSYYFDH
SEQ ID NO: 4 VL CDR1 KASQDVGTAVA
SEQ ID NO: 5 VL CDR2 WASTRHT
SEQ ID NO: 6 VL CDR3 QQYSSYT
SEQ ID NO: 27 VH AA QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKGRVTLTRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 12 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-25 SEQ ID NO: 1 VH CDR1 DYHIN
SEQ ID NO: 23 VH CDR2 WIYPGSGYTKYNEKFKG
SEQ ID NO: 3 VH CDR3 SGIYHYVSSYYFDH
SEQ ID NO: 4 VL CDR1 KASQDVGTAVA
SEQ ID NO: 5 VL CDR2 WASTRHT
SEQ ID NO: 6 VL CDR3 QQYSSYT
SEQ ID NO: 28 VH AA QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKGRVTLTRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 12 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-26 SEQ ID NO: 1 VH CDR1 DYHIN
SEQ ID NO: 23 VH CDR2 WIYPGSGYTKYNEKFKG
SEQ ID NO: 3 VH CDR3 SGIYHYVSSYYFDH
SEQ ID NO: 4 VL CDR1 KASQDVGTAVA
SEQ ID NO: 5 VL CDR2 WASTRHT
SEQ ID NO: 6 VL CDR3 QQYSSYT
SEQ ID NO: 29 VH AA QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 12 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-27 SEQ ID NO: 1 VH CDR1 DYHIN
SEQ ID NO: 23 VH CDR2 WIYPGSGYTKYNEKFKG
SEQ ID NO: 3 VH CDR3 SGIYHYVSSYYFDH
SEQ ID NO: 4 VL CDR1 KASQDVGTAVA
SEQ ID NO: 5 VL CDR2 WASTRHT
SEQ ID NO: 6 VL CDR3 QQYSSYT
SEQ ID NO: 30 VH AA QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKGRVTLTRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 12 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-m1 SEQ ID NO: 31 VH AA QIQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFTDYHINWVKQRPGQGLEWIGWIYPGSGYTKYNEKFKVKATLTVDTSSSTAYMHLTSLTSEDSAVYFCARSGIYHYVSSYYFEHWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO: 8 VL AA DIVMTQSHTFMSTSVGDRVSITCKASQDVGTAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADYFCQQYSSYTFGGGTKLEIK
BG87P-m2 SEQ ID NO: 32 VH AA QIQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFTDYHINWVKQRPGQGLEWIGWIYPGSGYTKYNEKFKVKATLTVDTSSSTAYMHLTSLTSEDSAVYFCARSGIYHYVSSYYFQHWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO: 8 VL AA DIVMTQSHTFMSTSVGDRVSITCKASQDVGTAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADYFCQQYSSYTFGGGTKLEIK
BG87P-m3 SEQ ID NO: 33 VH AA QIQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFTDYHINWVKQRPGQGLEWIGWIYPGSGYTKYNEKFKGKATLTVDTSSSTAYMHLTSLTSEDSAVYFCARSGIYHYVSSYYFDHWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO: 8 VL AA DIVMTQSHTFMSTSVGDRVSITCKASQDVGTAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADYFCQQYSSYTFGGGTKLEIK
BG87P-m4 SEQ ID NO: 34 VH AA QIQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFTDYAINWVKQRPGQGLEWIGWIYPGSGYTKYNEKFKVKATLTVDTSSSTAYMHLTSLTSEDSAVYFCARSGIYHYVSSYYFDHWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO: 8 VL AA DIVMTQSHTFMSTSVGDRVSITCKASQDVGTAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADYFCQQYSSYTFGGGTKLEIK
BG87P-m5 SEQ ID NO: 35 VH AA QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKVRVTLTVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARSGIYHYVSSYYFEHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 14 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKSPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSVQPDDFATYFCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-m6 SEQ ID NO: 36 VH AA QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKVRVTLTVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARSGIYHYVSSYYFQHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 14 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKSPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSVQPDDFATYFCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-m7 SEQ ID NO: 37 VH AA QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKGRVTLTVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 14 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKSPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSVQPDDFATYFCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-m8 SEQ ID NO: 38 VH AA QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYAINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGYTKYNEKFKVRVTLTVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 14 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKSPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSVQPDDFATYFCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-33 SEQ ID NO: 1 VH CDR1 DYHIN
SEQ ID NO: 39 VH CDR2 YIYPGSGHTKYNEKFKG
SEQ ID NO: 3 VH CDR3 SGIYHYVSSYYFDH
SEQ ID NO: 40 VL CDR1 KASQDAGSAVA
SEQ ID NO: 5 VL CDR2 WASTRHT
SEQ ID NO: 6 VL CDR3 QQYSSYT
SEQ ID NO: 41 VH AA EVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSFTDYHINWVRQAPGKGLEWVSYIYPGSGHTKYNEKFKGRFTISRDTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSGIYHYVSSYYFDHWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 42 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDAGSAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-34 SEQ ID NO: 1 VH CDR1 DYHIN
SEQ ID NO: 39 VH CDR2 YIYPGSGHTKYNEKFKG
SEQ ID NO: 3 VH CDR3 SGIYHYVSSYYFDH
SEQ ID NO: 40 VL CDR1 KASQDAGSAVA
SEQ ID NO: 5 VL CDR2 WASTRHT
SEQ ID NO: 6 VL CDR3 QQYSSYT
SEQ ID NO: 43 VH AA EVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSFSDYHINWVRQAPGKGLEWVGYIYPGSGHTKYNEKFKGRFTISRDTSSNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSGIYHYVSSYYFDHWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 44 VL AA DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDAGSAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSYTFGGGTKLEIK
BG87P-31 SEQ ID NO: 1 VH CDR1 DYHIN
SEQ ID NO: 45 VH CDR2 YIYPGSGHTKKNEKFKG
SEQ ID NO: 3 VH CDR3 SGIYHYVSSYYFDH
SEQ ID NO: 40 VL CDR1 KASQDAGSAVA
SEQ ID NO: 5 VL CDR2 WASTRHT
SEQ ID NO: 6 VL CDR3 QQYSSYT
SEQ ID NO: 46 VH AA QVQLQQSGAETKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQASGQRLEWMGYIYPGSGHTKKNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 47 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDAGSAVAWYQQKPGKAPKLLIKWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYSSYTFGGGTKVEIK
BG87P-32 SEQ ID NO: 1 VH CDR1 DYHIN
SEQ ID NO: 45 VH CDR2 YIYPGSGHTKKNEKFKG
SEQ ID NO: 3 VH CDR3 SGIYHYVSSYYFDH
SEQ ID NO: 40 VL CDR1 KASQDAGSAVA
SEQ ID NO: 5 VL CDR2 WASTRHT
SEQ ID NO: 6 VL CDR3 QQYSSYT
SEQ ID NO: 46 VH AA QVQLQQSGAETKKPGASVKVSCKASGYSFTDYHINWVRQASGQRLEWMGYIYPGSGHTKKNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGIYHYVSSYYFDHWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO: 42 VL AA DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDAGSAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYSSYTFGGGTKVEIK
表 2. 序列表 (Kabat 編號 )
Sp34 SEQ ID NO: 48 HCDR1 (Kabat) TYAMN
SEQ ID NO: 49 HCDR2 (Kabat) RIRSKYNNYATYYADSVKD
SEQ ID NO: 50 HCDR3 (Kabat) HGNFGNSYVSWFAY
SEQ ID NO: 51 LCDR1 (Kabat) RSSTGAVTTSNYAN
SEQ ID NO: 52 LCDR2 (Kabat) GTNKRAP
SEQ ID NO: 53 LCDR3 (Kabat) ALWYSNLWV
SEQ ID NO: 54 VH AA EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 55 VL AA QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL
SEQ ID NO: 56 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGCGGTGGCCTTGTGCAGCCCAAGGGCAGCCTGAAGCTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAACACCTACGCCATGAACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCTAGAATCAGAAGCAAGTACAACAACTACGCCACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGACAGATTCACCATCAGCAGAGACGACTCTCAGAGCATCCTGTACCTGCAGATGAACAACCTGAAGACCGAGGACACCGCCATGTACTACTGCGTGAGACACGGCAACTTCGGCAACAGCTACGTGAGCTGGTTCGCCTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTAACAGTAAGCAGC
SEQ ID NO: 57 VL DNA CAAGCCGTGGTGACCCAAGAGAGCGCCCTGACCACAAGCCCCGGCGAGACCGTGACCCTGACCTGCAGAAGCAGCACCGGCGCCGTGACCACAAGCAACTACGCCAACTGGGTGCAAGAGAAGCCCGACCACCTGTTCACCGGTCTGATCGGCGGTACCAACAAGAGAGCCCCCGGCGTGCCCGCTAGATTCAGCGGCTCACTGATCGGCGACAAGGCCGCCCTGACCATCACCGGCGCTCAGACCGAGGACGAGGCCATCTACTTCTGCGCCCTGTGGTACAGCAACCTGTGGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGCTG
BG53P SEQ ID NO: 48 HCDR1 (Kabat) TYAMN
SEQ ID NO: 49 HCDR2 (Kabat) RIRSKYNNYATYYADSVKD
SEQ ID NO: 50 HCDR3 (Kabat) HGNFGNSYVSWFAY
SEQ ID NO: 51 LCDR1 (Kabat) RSSTGAVTTSNYAN
SEQ ID NO: 52 LCDR2 (Kabat) GTNKRAP
SEQ ID NO: 53 LCDR3 (Kabat) ALWYSNLWV
SEQ ID NO: 58 VH AA EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDAKSSLYLQMNSLRAEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 59 VL AA QAVVTQSPATLSVSPGERATLSCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPGQLFTGLIGGTNKRAPGIPARFSGSLSGDEATLTISSLQSEDFAIYFCALWYSNLWVFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 60 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGCGGTGGCCTTGTGCAGCCCGGCGGCAGTCTGAGACTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAACACCTACGCCATGAACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCTAGAATCAGAAGCAAGTACAACAACTACGCCACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGACAGATTCACCATCAGCAGAGACGACGCCAAGAGCAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCATGTACTACTGCGTGAGACACGGCAACTTCGGCAACAGCTACGTGAGCTGGTTCGCCTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTAACGGTGAGCAGC
SEQ ID NO: 61 VL DNA CAAGCCGTGGTGACCCAAAGTCCCGCGACCCTTAGCGTAAGCCCCGGCGAGAGAGCTACCCTGAGCTGCAGAAGCAGCACCGGCGCCGTGACCACAAGCAACTACGCCAACTGGGTGCAAGAGAAGCCCGGGCAGCTGTTCACCGGCCTGATCGGCGGTACCAACAAGAGAGCCCCCGGCATCCCCGCTAGATTCAGCGGCAGCCTGAGCGGCGACGAGGCCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGAGCGAGGACTTCGCCATCTACTTCTGCGCCCTGTGGTACAGCAACCTGTGGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
BG56P SEQ ID NO: 48 HCDR1 (Kabat) TYAMN
SEQ ID NO: 49 HCDR2 (Kabat) RIRSKYNNYATYYADSVKD
SEQ ID NO: 50 HCDR3 (Kabat) HGNFGNSYVSWFAY
SEQ ID NO: 51 LCDR1 (Kabat) RSSTGAVTTSNYAN
SEQ ID NO: 52 LCDR2 (Kabat) GTNKRAP
SEQ ID NO: 53 LCDR3 (Kabat) ALWYSNLWV
SEQ ID NO: 62 VH AA EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 63 VL AA EIVLTQSPATLSVSPGERATLSCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPGIPARFSGSLSGDEATLTISSLQSEDFAVYYCALWYSNLWVFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 64 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGCGGTGGCCTTGTGCAGCCCGGCGGCAGTCTGAGACTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAACACCTACGCCATGAACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCTAGAATCAGAAGCAAGTACAACAACTACGCCACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGACAGATTCACCATCAGCAGAGACGACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGTTAGACACGGCAACTTCGGCAACAGCTACGTGAGCTGGTTCGCCTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTAACGGTGAGCAGC
SEQ ID NO: 65 VL DNA GAAATCGTGCTGACCCAAAGTCCCGCGACCCTTAGCGTAAGCCCCGGCGAGAGAGCTACCCTGAGCTGCAGAAGCAGCACCGGCGCCGTGACCACAAGCAACTACGCCAACTGGGTGCAACAGAAGCCCGGGCAGGCGCCCCGCGGCCTGATCGGCGGTACCAACAAGAGAGCCCCCGGCATCCCCGCTAGATTCAGCGGCAGCCTGAGCGGCGACGAGGCCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGAGCGAGGACTTCGCCGTCTACTACTGCGCCCTGTGGTACAGCAACCTGTGGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
BG561P SEQ ID NO: 48 HCDR1 (Kabat) TYAMN
SEQ ID NO: 49 HCDR2 (Kabat) RIRSKYNNYATYYADSVKD
SEQ ID NO: 50 HCDR3 (Kabat) HGNFGNSYVSWFAY
SEQ ID NO: 51 LCDR1 (Kabat) RSSTGAVTTSNYAN
SEQ ID NO: 52 LCDR2 (Kabat) GTNKRAP
SEQ ID NO: 53 LCDR3 (Kabat) ALWYSNLWV
SEQ ID NO: 62 VH AA EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 63 VL AA EIVLTQSPATLSVSPGERATLSCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPGIPARFSGSLSGDEATLTISSLQSEDFAVYYCALWYSNLWVFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 66 scFv AA EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPATLSVSPGERATLSCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPGIPARFSGSLSGDEATLTISSLQSEDFAVYYCALWYSNLWVFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 67 scFv DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGCGGTGGCCTTGTGCAGCCCGGCGGCAGTCTGAGACTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAACACCTACGCCATGAACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCTAGAATCAGAAGCAAGTACAACAACTACGCCACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGACAGATTCACCATCAGCAGAGACGACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGTTAGACACGGCAACTTCGGCAACAGCTACGTGAGCTGGTTCGCCTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTAACGGTGAGCAGCGGCGGCGGTGGCAGCGGCGGAGGCGGCTCTGGCGGCGGAGGATCCGAAATCGTGCTGACCCAAAGTCCCGCGACCCTTAGCGTAAGCCCCGGCGAGAGAGCTACCCTGAGCTGCAGAAGCAGCACCGGCGCCGTGACCACAAGCAACTACGCCAACTGGGTGCAACAGAAGCCCGGGCAGGCGCCCCGCGGCCTGATCGGCGGTACCAACAAGAGAGCCCCCGGCATCCCCGCTAGATTCAGCGGCAGCCTGAGCGGCGACGAGGCCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGAGCGAGGACTTCGCCGTCTACTACTGCGCCCTGTGGTACAGCAACCTGTGGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
BG562P SEQ ID NO: 48 HCDR1 (Kabat) TYAMN
SEQ ID NO: 49 HCDR2 (Kabat) RIRSKYNNYATYYADSVKD
SEQ ID NO: 50 HCDR3 (Kabat) HGNFGNSYVSWFAY
SEQ ID NO: 51 LCDR1 (Kabat) RSSTGAVTTSNYAN
SEQ ID NO: 52 LCDR2 (Kabat) GTNKRAP
SEQ ID NO: 53 LCDR3 (Kabat) ALWYSNLWV
SEQ ID NO: 62 VH AA EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 68 VL AA EIVVTQSPATLSVSPGERATLSCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPGIPARFSGSLSGDEATLTISSLQSEDFAVYYCALWYSNLWVFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 69 ScFv AA EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVVTQSPATLSVSPGERATLSCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPGIPARFSGSLSGDEATLTISSLQSEDFAVYYCALWYSNLWVFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 70 ScFv DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGCGGTGGCCTTGTGCAGCCCGGCGGCAGTCTGAGACTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAACACCTACGCCATGAACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCTAGAATCAGAAGCAAGTACAACAACTACGCCACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGACAGATTCACCATCAGCAGAGACGACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGTTAGACACGGCAACTTCGGCAACAGCTACGTGAGCTGGTTCGCCTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTAACGGTGAGCAGCGGCGGCGGTGGCAGCGGCGGAGGCGGCTCTGGCGGCGGAGGATCCGAAATCGTGGTGACCCAAAGTCCCGCGACCCTTAGCGTAAGCCCCGGCGAGAGAGCTACCCTGAGCTGCAGAAGCAGCACCGGCGCCGTGACCACAAGCAACTACGCCAACTGGGTGCAACAGAAGCCCGGGCAGGCGCCCCGCGGCCTGATCGGCGGTACCAACAAGAGAGCCCCCGGCATCCCCGCTAGATTCAGCGGCAGCCTGAGCGGCGACGAGGCCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGAGCGAGGACTTCGCCGTCTACTACTGCGCCCTGTGGTACAGCAACCTGTGGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
BG563P SEQ ID NO: 48 HCDR1 (Kabat) TYAMN
SEQ ID NO: 71 HCDR2 (Kabat) RIRSKYNNYATYYADSVKG
SEQ ID NO: 50 HCDR3 (Kabat) HGNFGNSYVSWFAY
SEQ ID NO: 51 LCDR1 (Kabat) RSSTGAVTTSNYAN
SEQ ID NO: 52 LCDR2 (Kabat) GTNKRAP
SEQ ID NO: 53 LCDR3 (Kabat) ALWYSNLWV
SEQ ID NO: 72 VH AA EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVGRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 68 VL AA EIVVTQSPATLSVSPGERATLSCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPGIPARFSGSLSGDEATLTISSLQSEDFAVYYCALWYSNLWVFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 73 scFv AA EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVGRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVVTQSPATLSVSPGERATLSCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPGIPARFSGSLSGDEATLTISSLQSEDFAVYYCALWYSNLWVFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 74 scFv DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGCGGTGGCCTTGTGCAGCCCGGCGGCAGTCTGAGACTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAACACCTACGCCATGAACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGGTAGAATCAGAAGCAAGTACAACAACTACGCCACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCAGAGACGACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGTTAGACACGGCAACTTCGGCAACAGCTACGTGAGCTGGTTCGCCTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTAACGGTGAGCAGCGGCGGCGGTGGCAGCGGCGGAGGCGGCTCTGGCGGCGGAGGATCCGAAATCGTGGTGACCCAAAGTCCCGCGACCCTTAGCGTAAGCCCCGGCGAGAGAGCTACCCTGAGCTGCAGAAGCAGCACCGGCGCCGTGACCACAAGCAACTACGCCAACTGGGTGCAACAGAAGCCCGGGCAGGCGCCCCGCGGCCTGATCGGCGGTACCAACAAGAGAGCCCCCGGCATCCCCGCTAGATTCAGCGGCAGCCTGAGCGGCGACGAGGCCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGAGCGAGGACTTCGCCGTCTACTACTGCGCCCTGTGGTACAGCAACCTGTGGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
BG564P SEQ ID NO: 48 HCDR1 (Kabat) TYAMN
SEQ ID NO: 71 HCDR2 (Kabat) RIRSKYNNYATYYADSVKG
SEQ ID NO: 75 HCDR3 (Kabat) HGNFGSSYVSWFAY
SEQ ID NO: 51 LCDR1 (Kabat) RSSTGAVTTSNYAN
SEQ ID NO: 52 LCDR2 (Kabat) GTNKRAP
SEQ ID NO: 53 LCDR3 (Kabat) ALWYSNLWV
SEQ ID NO: 76 VH AA EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRQAPGKGLEWVGRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGSSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 68 VL AA EIVVTQSPATLSVSPGERATLSCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPGIPARFSGSLSGDEATLTISSLQSEDFAVYYCALWYSNLWVFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 77 scFv AA EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRQAPGKGLEWVGRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGSSYVSWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVVTQSPATLSVSPGERATLSCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPGIPARFSGSLSGDEATLTISSLQSEDFAVYYCALWYSNLWVFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 78 scFv DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGCGGTGGCCTTGTGCAGCCCGGCGGCAGTCTGAGACTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGCACCTACGCCATGAACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGGTAGAATCAGAAGCAAGTACAACAACTACGCCACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCAGAGACGACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGTTAGACACGGCAACTTCGGCAGCAGCTACGTGAGCTGGTTCGCCTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTAACGGTGAGCAGCGGCGGCGGTGGCAGCGGCGGAGGCGGCTCTGGCGGCGGAGGATCCGAAATCGTGGTGACCCAAAGTCCCGCGACCCTTAGCGTAAGCCCCGGCGAGAGAGCTACCCTGAGCTGCAGAAGCAGCACCGGCGCCGTGACCACAAGCAACTACGCCAACTGGGTGCAACAGAAGCCCGGGCAGGCGCCCCGCGGCCTGATCGGCGGTACCAACAAGAGAGCCCCCGGCATCCCCGCTAGATTCAGCGGCAGCCTGAGCGGCGACGAGGCCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGAGCGAGGACTTCGCCGTCTACTACTGCGCCCTGTGGTACAGCAACCTGTGGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
表 3. 序列表 (Kabat 編號 )
BG143P SEQ ID NO: 79 重杵鏈AA EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRQAPGKGLEWVGRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGSSYVSWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVVTQSPATLSVSPGERATLSCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPGIPARFSGSLSGDEATLTISSLQSEDFAVYYCALWYSNLWVFGGGTKVEIKEPKSSDKTHTCPPCPAPPAAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALAAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
BG143P SEQ ID NO: 80 重杵鏈DNA GAGGTGCAACTCGTCGAGAGCGGCGGGGGCCTCGTGCAGCCTGGGGGCAGCCTGAGACTCAGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGCACCTACGCCATGAACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGGCAGAATCAGAAGCAAGTACAACAACTACGCCACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCAGAGACGACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTCTACTACTGCGTGAGACACGGCAACTTCGGCAGCAGCTACGTGAGCTGGTTCGCTTATTGGGGGCAAGGCACACTGGTGACCGTCAGCAGCGGTGGAGGCGGTTCAGGCGGAGGTGGCTCTGGCGGTGGCGGATCGGAGATTGTGGTGACACAGAGCCCCGCCACCCTGAGCGTGAGCCCCGGCGAGAGAGCTACACTGAGCTGCAGAAGCAGCACCGGCGCCGTGACCACAAGCAACTACGCCAACTGGGTGCAGCAGAAGCCCGGCCAAGCCCCTAGAGGCCTGATCGGGGGCACCAACAAGAGAGCCCCCGGCATCCCCGCTAGATTCTCCGGCAGCCTGAGCGGCGACGAGGCCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGAGCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCGCCCTGTGGTACAGCAACCTGTGGGTGTTCGGCGGGGGCACCAAGGTCGAGATCAAGGAGCCCAAAAGCAGCGATAAGACCCACACCTGTCCTCCCTGCCCCGCCCCTCCTGCCGCCGGCCCTAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTCGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTAGAGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACAGAGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGGCCGCCCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGGCAGCCTAGAGAGCCCCAAGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGACGAGCTCACCAAGAACCAAGTGAGCCTGTGGTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCTAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGGCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCCGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAAGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCCGGCAAGTGA
BG143P SEQ ID NO: 81 重臼鏈AA EVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSFSDYHINWVRQAPGKGLEWVGYIYPGSGHTKYNEKFKGRFTISRDTSSNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSGIYHYVSSYYFDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPPAAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALAAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
BG143P SEQ ID NO: 82 重臼鏈DNA GAAGTGCAGCTGCAAGAGTCCGGGGGGGGGCTCGTGCAACCCGGGGGCTCCCTGAGACTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTACAGCTTCAGCGACTACCACATCAACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGGCTACATCTACCCCGGCAGCGGCCACACCAAGTACAACGAGAAGTTCAAGGGCAGATTCACCATCAGCAGAGACACAAGCAGCAACACCGCCTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCTAGAAGCGGCATCTACCACTACGTGAGCAGCTACTACTTCGACCACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACAGTGTCCTCCGCCTCCACAAAGGGGCCTAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCTAGCAGCAAGAGCACAAGCGGCGGCACCGCCGCCCTCGGCTGCCTGGTGAAGGACTATTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGAGCTGGAACAGCGGCGCCCTCACAAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCTAGCAGCAGCCTGGGCACACAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCTAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCTAAGAGCTGCGATAAGACCCACACCTGCCCCCCTTGTCCCGCTCCCCCTGCTGCCGGGCCTAGCGTGTTCCTGTTTCCTCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTCGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTAGAGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACAGAGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGGCCGCCCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGGCAGCCTAGAGAGCCCCAAGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTGAGCCTGTCCTGCGCCGTCAAGGGCTTCTACCCTAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGGCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCCGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGGTGAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAAGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCCGGCAAGTGA
BG143P SEQ ID NO: 83 κ鏈AA DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDAGSAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
BG143P SEQ ID NO: 84 κ鏈DNA GACATTCAGATGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGTCCGCTAGCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGCAAGGCTAGCCAAGACGCCGGGAGCGCCGTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCTAGCACAAGACACACCGGCGTGCCTAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGTCAGCAGTACAGCAGCTACACCTTCGGCGGGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTGA
連接子 SEQ ID NO: 85 AA GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
連接子 SEQ ID NO: 86 AA GGGGSGGGGSGGGGS
CLDN6 SEQ ID NO: 87 AA MASAGMQILGVVLTLLGWVNGLVSCALPMWKVTAFIGNSIVVAQVVWEGLWMSCVVQSTGQMQCKVYDSLLALPQDLQAARALCVIALLVALFGLLVYLAGAKCTTCVEEKDSKARLVLTSGIVFVISGVLTLIPVCWTAHAIIRDFYNPLVAEAQKRELGASLYLGWAASGLLLLGGGLLCCTCPSGGSQGPSHYMARYSTSAPAISRGPSEYPTKNYV
CLDN9 SEQ ID NO: 88 AA MASTGLELLGMTLAVLGWLGTLVSCALPLWKVTAFIGNSIVVAQVVWEGLWMSCVVQSTGQMQCKVYDSLLALPQDLQAARALCVIALLLALLGLLVAITGAQCTTCVEDEGAKARIVLTAGVILLLAGILVLIPVCWTAHAIIQDFYNPLVAEALKRELGASLYLGWAAAALLMLGGGLLCCTCPPPQVERPRGPRLGYSIPSRSGASGLDKRDYV
實例 實例 1. 小鼠抗 CLDN6 抗體之產生
為產生針對CLDN6之抗體，用人類CLDN6過度表現細胞(L929/人類CLDN6，內部製備)對20-25隻BALB/C、SJL品系之近親交配小鼠群組進行免疫，各群組均接受包含CLDN6抗原、劑量、注射途徑、佐劑及免疫時機之獨特組合的免疫策略。對4-5個群組中之總計5只動物進行免疫接種。在0與56天之間的不同時段內，動物接受免疫接種。為監測免疫反應，典型地在21-56天之2-4次免疫接種之後，滴定血清藉由FACS來篩選。篩選血清中與CLDN6過度表現細胞CHOK1/人類CLDN6結合之抗體。量測各動物之CLDN6特異性抗體反應，且選擇具有足夠效價之抗CLDN6 Ig的動物進行4天的最終加強。
自如上所述免疫接種之小鼠中分離包括脾及淋巴結之淋巴器官。藉由基於PEG之融合，藉由與衍生自SP2/0之永生化小鼠骨髓瘤細胞融合來產生融合瘤。使用補充有用於選擇融合瘤之HAT之常規1640培養基，將所得細胞塗鋪於96孔細胞培養盤中。 實例 2. 抗 CLDN6 抗體之篩選及選擇
如實例1中所述地產生融合瘤。在培養及生長培養基更換10-13天后，自個別孔收集融合瘤培養物上清液且篩選以鑑定具有分泌之CLDN6特異性抗體的孔。所有上清液最初均針對至少兩種過度表現細胞株進行篩選，包括CHOK1/人類CLDN6及CHOK1/人類CLDN9 (內部製備)。藉由FACS量測過度表現細胞株上之抗體結合。對來自4個融合瘤融合物中超過大約20000個培養孔之上清液進行CLDN6抗體篩選。簡言之，將100 μL融合瘤培養物上清液與表現CLDN6之癌細胞株(例如PA-1或CHOK1/人類CLDN6穩定細胞株)或對照細胞(例如親代CHOK1)共培育30-60 min，洗滌，且與綴合至APC之抗小鼠IgG Fc二次抗體一起培育。培育及洗滌之後，螢光係藉由流式細胞分析技術來量測。
將來自陽性孔之融合瘤轉移至含有新鮮培養基之24孔盤中生長2-3天，隨後再次藉由流式細胞分析技術進行篩選以確認抗體與食蟹獼猴CLDN6過度表現細胞株及人類CLDN6陽性癌細胞株(PA-1)結合。藉由流式細胞分析技術量測抗體與食蟹獼猴CLDN6過度表現細胞株及人類CLDN6陽性癌細胞株(PA-1)之結合。簡言之，將100 μL融合瘤培養物上清液與表現CLDN之癌細胞株(例如PA-1或CHOK1/人類CLDN6及CHOK1/人類CLDN9穩定細胞株)或對照細胞(例如親代CHOK1)共培育30-60 min，洗滌，且與綴合至APC之抗小鼠IgG Fc二次抗體一起培育。培育及洗滌之後，螢光係藉由流式細胞分析技術來量測。 實例 3. 選定 CLDN6 Ab 分泌融合瘤之次選殖
將選定CLDN6抗體分泌融合瘤次選殖一次或兩次以便確保單選殖性。簡言之，將約80-100個活的融合瘤細胞塗鋪於6孔盤中之3 mL半固體甲基纖維素培養基(Stem Cell Technologies)中。7-10天后，將作為可見純系之單細胞產生的融合瘤集落挑至96孔盤，且在新鮮培養基中進一步培養2-4天。培養物上清液藉由如前所述之ELISA及流式細胞分析技術來篩選以便確認人類及食蟹獼猴CLDN6結合。在 活體外培養穩定融合瘤次純系以便進行細胞冷凍保存及抗體VH及VL基因選殖及定序。 實例 4. 測定小鼠抗 CLDN6 抗體之 CLDN6 結合 EC50 值
將次選殖後選定之分泌抗CLND6抗體之融合瘤接種於含40 ml補充有2% FBS之新鮮1640培養基的T75燒瓶中用於抗體產生。培養7-10天后，收穫融合瘤上清液，用於使用蛋白A柱純化抗體。接著使用流式細胞分析技術表徵小鼠抗CLDN6抗體與CLDN6陽性細胞之結合活性。純系BG87P之EC50值呈現於表4-6中。資料顯示純系BG87P與人類CLDN6結合，但不與人類CLDN9結合。另外，BG87P與小鼠CLDN6及食蟹獼猴CLDN6結合。 表 4. BG87P 與表現人類 CLDN6 及人類 CLDN9 之 CHOK1 穩定細胞的結合活性
純系 CHOK1/人類CLDN6-GFP結合EC50 (nM) CHOK1/人類CLDN6-GFP結合E最大(MFI) CHOK1/人類CLDN9-GFP結合EC50 (nM) CHOK1/人類CLDN9-GFP結合E最大(MFI)
BG87P 3.41 26576 - 30.7
人類IgG1同型對照 - 31.1 - 26.9
表 5. BG87P 與小鼠 CLDN6 及食蟹獼猴 CLDN6 之跨物種結合活性
純系 CHOK1/小鼠CLDN6-GFP結合EC50 (nM) CHOK1/小鼠CLDN6-GFP結合E最大(MFI) CHOK1/食蟹獼猴CLDN6-GFP結合EC50 (nM) CHOK1/食蟹獼猴CLDN6-GFP結合E最大(MFI)
BG87P 94.69 27700 6.08 43400
人類IgG1同型對照 - 41.8 - 225
表 6. BG87P 與內源性 CLDN6 表現之癌細胞株 PA-1 的結合活性
純系 PA-1結合EC50 (nM) PA-1結合E最大(MFI)
BG87P 3.38 74200
人類IgG1同型對照 - 34
實例 5. 抗體 VH 及 VL 基因選殖及定序
移除上清液後，藉由在96孔圓底盤中添加100 mL RLT緩衝液來裂解次選殖後選定之分泌CLDN6抗體之融合瘤。隨後將含有mRNA之裂解物轉移至96孔深孔盤中以進行mRNA分離、cDNA合成及藉由標準定序技術(Sanger定序及次世代定序)之DNA定序。一般而言，細胞裂解物之總RNA係根據製造商說明書使用總RNA分離套組製備的。根據製造商說明書，使用Super Script III第一股合成SuperMix (Invitrogen®)藉由mRNA逆轉錄來產生cDNA。BG87P之核酸及胺基酸序列示於圖1中(SEQ ID NO: 1-10)。 嵌合 BG87P 抗體 (chBG87P) 之生成
ChBG87P抗體係藉由將小鼠BG87P之可變區(SEQ ID NO: 7及8)次選殖至內部開發之表現載體中而產生的，該表現載體含有人類野生型IgG1及κ鏈的恆定區。藉由將上述兩種構築體共轉染至HEK293T細胞中來表現抗體，且使用蛋白A管柱(目錄號：17-5438-02，GE Life Sciences®)進行純化。將純化之嵌合抗體在PBS中濃縮至0.5-10 mg/ml且以等分試樣儲存於-80℃冷凍器中。 實例 6. 抗 CLDN6 嵌合 BG87P 抗體 (chBG87P) 之人源化 人源化方法
對於chBG87P之人源化，藉由相對於IMGT中之人類免疫球蛋白基因資料庫進行序列比較，針對與chBG87P可變區之蛋白序列共有高度同源性之序列來搜尋人類生殖系IgG基因。以高頻率存在於人類抗體譜系中且與chBG87P高度同源之人類IGHV及IGKV基因被選擇為用於人源化之模板。 人源化變異體之設計
人源化係藉由CDR移植隨後併入關鍵回復突變來執行。藉由使用內部開發之表現載體，將人源化抗體工程化為人類IgG1野生型格式。在最初的第一輪人源化中，藉由3D結構分析指導自鼠類可變區至人類框架區胺基酸殘基之突變，且在第一輪人源化設計中保留了對維持CDR規範結構具有結構重要性之鼠類框架殘基。選擇重鏈上之五個回復突變及輕鏈上之三個突變且進行單點突變以探索關鍵回復突變：BG87P-Bz1 (VH SEQ ID NO: 15及VL：SEQ ID NO: 14)、BG87P-Bz2 (VH SEQ ID NO: 16及VL：SEQ ID NO: 14)、BG87P-Bz3 (VH SEQ ID NO: 17及VL：SEQ ID NO: 14)、BG87P-Bz4 (VH SEQ ID NO: 18及VL：SEQ ID NO: 14)、BG87P-Bz5 (VH SEQ ID NO: 19及VL：SEQ ID NO: 14)、BG87P-Bz6 (VH SEQ ID NO: 13及VL：SEQ ID NO: 20)、BG87P-Bz7 (VH SEQ ID NO: 13及VL：SEQ ID NO: 20)及BG87P-Bz8 (VH SEQ ID NO: 13及VL SEQ ID NO: 22)。BG87P-Bz0 (VH：SEQ ID NO:13及VL：SEQ ID NO:14)係併有所有理論回復突變之變異體，且BG87P-Bz0之結合能力應與親本chBG87P相當。結合資料之比較揭示了何等回復突變顯著影響結合。特定言之，將chBG87P (SEQ ID NO:4至6)之LCDR移植至具有A43S、L78V及Y87F鼠類框架殘基之人類生殖系可變基因IGKV1-5及01-IGKJ4*01之框架中(結果為SEQ ID NO: 14)。將chBG87P (SEQ ID NO: 1至3)之HCDR移植至人類生殖系可變基因IGHV1-3及01-JH6c之框架中，保留V2I、T28S、I69L、R71V及Y91F鼠類框架殘基(結果為SEQ ID NO: 13)；BG87P-z0 (VH:SEQ ID NO: 11及VL:SEQ ID NO: 12)係具有上述HCDR及LCDR移植，但不具有來自鼠類VH及VL框架之 任何回復突變的所得人源化變異體。 chBG87P 及人源化抗體之表現及純化
所有第一輪BG87P人源化變異體(BG87P-z0、BG87P-Bz0、BG87P-Bz1、BG87P-Bz2、BG87P-Bz3、BG87P-Bz4、BG87P-Bz5、BG87P-Bz6、BG87P-Bz7及BG87P-Bz8)均使用內部開發之表現載體構築為人源化全長抗體，該等表現載體分別含有人類野生型IgG1及κ鏈之恆定區，具有易於適應之次選殖位點。藉由將上述兩種構築體共轉染至HEK293T細胞中來表現所有人源化變異體，且使用蛋白A管柱(目錄號：17-5438-02，GE Life Sciences)進行純化。將純化之抗體在PBS中濃縮至0.5-10mg/ml且以等分試樣儲存於-80℃冷凍器中。 第 1 輪人源化 BG87P 變異體 (hBG87P) 及 PTM 移除變異體之細胞結合活性測定
為進行親和力測定，使用CLDN6過度表現HEK293T細胞及表現高水平人類CLDN6之癌細胞株PA-1來評估BG87P相關工程化變異體之結合活性。將活細胞接種於96孔盤中，且與chBG87P及其工程化變異體之一系列稀釋液一起培育。使用山羊抗人類IgG作為二級抗體來偵測抗體與細胞表面之結合。藉由使用GraphPad Prism將劑量反應資料擬合至四參數邏輯模型，確定與表現CLDN6之細胞株劑量依賴性結合之EC50值。將第1輪BG87P人源化變異體針對HEK293T/人類CLDN6之細胞結合活性與chBG87P進行比較且顯示於圖1A中。將第1輪人源化變異體之細胞結合親和力(EC50)及E最大(MFI)歸一化為chBG87P以用於直接比較及排名(表7)。
自chBG87P抗體及BG87P-Bz0開始，VH及VL之CDR區域進行了一些額外胺基酸變化，以進一步改良用於人類之治療劑的生物物理特性。考慮因素包括移除轉譯後修飾(PTM)、改良熱穩定性(Tm)，同時保持結合活性，所得變異體為BG87P-m1 (VH SEQ ID NO: 31及VL SEQ ID NO: 8)、BG87P-m2 (VH SEQ ID NO: 32及VL SEQ ID NO: 8)、BG87P-m3 (VH SEQ ID NO: 33及VL SEQ ID NO: 8)、及BG87P-m4 (VH SEQ ID NO: 34及VL SEQ ID NO: 8)及BG87P-m5 (VH SEQ ID NO: 35及VL SEQ ID NO: 14)、BG87P-m6 (VH SEQ ID NO: 36及VL SEQ ID NO 14)、BG87P-m7 (VH SEQ ID NO: 37及VL SEQ ID NO: 14)、及BG87P-m8 (VH SEQ ID NO: 38及VL SEQ ID NO: 14)。將chBG87P及BG87P-Bz0相關PTM移除變異體針對HEK293T/人類CLDN6之細胞結合活性分別與chBG87P及BG87-Bz0進行比較(圖1F)。將細胞結合親和力(EC50)及E最大(MFI)歸一化為chBG87P以用於直接比較及排名(表7)。結果表明，除H33A突變導致BG87P-m4及BG87P-m8之外，潛在有害殘基之其他替換保持了各別親本殘基之結合能力。 表 7. 人源化及 PTM 移除變異體針對 CLDN6 過度表現 HEK293T 之細胞結合活性的概述
HEK293T-人類CLDN6
Ec50排名 E最大排名
抗體名稱 最高MFI平均值 Ec50 (nM) 抗體名稱 最高MFI平均值 Ec50 (nM) E最大與BG87P之比率
BG87P-Bz8 130650.51 1.71 BG87P-m3 227257.19 2.32 1.18
BG87P-Bz4 109529.57 1.88 BG87P-m1 206987.02 3.56 1.08
BG87P-27 131381.01 2 BG87P-m2 202202.02 2.51 1.05
BG87P-Bz0 106974.58 2.1 chBG87P 192332.83 2.72 1.00
BG87P-22 136523.4 2.12 BG87P-Bz7 154833.51 2.54 0.81
BG87P-24 141013.73 2.16 BG87P-21 149494.66 3.07 0.78
BG87P-Bz1 99692.6 2.19 BG87P-26 147913.6 2.3 0.77
BG87P-26 147913.6 2.3 BG87P-23 147866.77 2.43 0.77
BG87P-m3 227257.19 2.32 BG87P-Bz6 143672.43 2.79 0.75
BG87P-25 142863.99 2.33 BG87P-m4 143182.68 11.76 0.74
BG87P-m6 118322.89 2.34 BG87P-25 142863.99 2.33 0.74
BG87P-m7 134492.69 2.43 BG87P-24 141013.73 2.16 0.73
BG87P-23 147866.77 2.43 BG87P-Bz5 140664.98 2.55 0.73
BG87P-z0 95645.46 2.45 BG87P-22 136523.4 2.12 0.71
BG87P-m2 202202.02 2.51 BG87P-m7 134492.69 2.43 0.70
BG87P-Bz7 154833.51 2.54 BG87P-27 131381.01 2 0.68
BG87P-Bz5 140664.98 2.55 BG87P-Bz8 130650.51 1.71 0.68
BG87P-Bz3 107318.29 2.63 BG87P-m5 126460 4.19 0.66
BG87P-Bz2 84347.71 2.65 BG87P-m6 118322.89 2.34 0.62
chBG87P 192332.83 2.72 BG87P-Bz4 109529.57 1.88 0.57
BG87P-Bz6 143672.43 2.79 BG87P-Bz3 107318.29 2.63 0.56
BG87P-21 149494.66 3.07 BG87P-Bz0 106974.58 2.1 0.56
BG87P-m1 206987.02 3.56 BG87P-Bz1 99692.6 2.19 0.52
BG87P-m5 126460 4.19 BG87P-z0 95645.46 2.45 0.50
BG87P-m4 143182.68 11.76 BG87P-Bz2 84347.71 2.65 0.44
BG87P-m8 54013.49 48.74 BG87P-m8 54013.49 48.74 0.28
表 8. 移除 PTM 之第 2 輪人源化變異體真滴癌細胞株 PA-1 之細胞結合活性
癌細胞株：PA-1
Ec50排名 E最大排名
抗體名稱 最高MFI平均值 EC50 (nM) 抗體名稱 最高MFI平均值 Ec50 (nM) E最大與BG87P之比率
BG87P-27 66672.07 1.68 BG87P 124836.78 8.33 1.00
BG87P-24 62436.19 2.27 BG87P-21 76460.34 2.8. 0.61
BG87P-26 7BG143P0.80 2.30 BG87P-25 73677.44 2.34 0.59
BG87P-25 73677.44 2.34 BG87P-23 72521.43 2.49 0.58
BG87P-23 72521.43 2.49 BG87P-26 68012.43 2.52 0.54
BG87P-21 74335.52 2.62 BG87P-22 67778.95 3.01 0.54
BG87P-22 76120.75 3.00 BG87P-27 66672.07 1.68 0.53
BG87P-z0 53183.52 3.25 BG87P-24 62436.19 2.27 0.50
chBG87P 124836.78 8.33 BG87P-z0 53183.52 3.25 0.43
與 PTM 移除位點組合測定第 2 輪關鍵回復突變之細胞結合活性
綜合分析第1輪人源化細胞結合資料之EC50及E最大(表7)之後，四個關鍵回復突變位點VH: V2I、VH: T28S、VH: I69L、VH: Y91F被鑑定且與PTM移除位點組合進行第2輪驗證及最終人源化候選物的確定。PTM移除突變VH: V65G (該位點在人類生殖系中G之流行度更高(G62%；V＜1%)，表明對抗體框架穩定性具有潛在益處)涉及變異體BG87P-m3，顯示與圖1F及表7中被納入第2輪組合以進一步驗證之chBG87P相比，E最大及EC50有所改善。所得第2輪人源化變異體BG87P-21、BG87P-22、BG87P-23、BG87P-24、BG87P-25、BG87P-26及BG87P-27之VH及VL序列在表1中給出。
在鑑定人源化組合變異體之細胞結合活性之後，如在圖1B及圖1C中以HEK293T/人類CLDN6細胞及在圖1D及圖1E中以PA-1細胞所示，選擇BG87P-21作為進一步考慮的最佳人源化候選物(VH及VL胺基酸序列分別為SEQ ID NO: 24及12)。BG87P-21包括關鍵回復突變位點VH: T28S及PTM位點VH: V65G，其揭示與chBG87P相比相當的細胞結合親和力。HEK293T/人類CLDN6中之E最大降低了22%，且PA-1中之E最大降低了40% (表7及表8)。 人源化抗 CLDN6 抗體之可開發性評估
對生物物理特性進行了分析，以鑑定最佳人源化抗CLDN6抗體。資料表明，BG87P-21顯示出中度至高度的疏水性風險，隨後為AC-SINS、B22KD及CIC讀數所顯示之PBS緩衝液中自相互作用的風險。(表9-表11)。 表 9. BG87P-21 及 chBG87P 之生物物理特性分析
樣品名稱 BG87P-21 chBG87P 臨限值
檢定 HIC (min) 21.9 25 21.1
CIC (min) 15.5 14.7 14
PBS中之KD (mL/g) -20.1 -15.6 ＞-10
PBS中之B22 -3.10E-05 -2.20E-05 ＞0
PBS中之AC-SINS Δλ=14.5nm Δλ=6.0nm ＜10nm
Tm1 (℃) 69.26 70.17 65
Tagg (℃) 69.35 72.33 65
SEC-HPLC (%) 98.42 92.52 0.95
為進行疏水性評估，用流動相A溶液(1.5 M硫酸銨、50 mM磷酸鈉，pH 7.0)稀釋50 μg 1 mg/ml樣品，以在分析前獲得約1M之最終硫酸銨濃度。MABPac HIC-10管柱以流動相A及流動相B溶液(50 mM磷酸鈉，pH 7.0)之線性梯度使用，歷時29分鐘，流速為0.5 ml/min。在A280吸光度下監測峰滯留時間。如表9中所指示，chBG87P及BG87P-21均顯示出更高的疏水性效能，且以IgG格式超過內部標準21.1 min。
對於熱穩定性評估，BG87P相關工程化變異體之熱穩定性係藉由熱去折疊轉變中點Tm(℃)來描述，該Tm係藉由外在螢光量測。Tm係使用Applied Biosystems之QuantStudioTM 6 Flex系統測定。將20 μL 1 mg/ml樣品與20 μL 40XSYPRO橙混合。將盤以0.9℃/min之速率自25℃掃描至95℃。使用QuantStudioTM 6 Flex系統分析軟體之原始資料的一階導數來指定Tm。結果概述於表9中，其顯示chBG87P及人源化變異體BG87P-21均顯示出良好的熱穩定性。
為確定BG87P相關工程化變異體之聚集傾向，使用Uncle系統(Unchained Labs)量測靜態光散射強度。量測過程中，將約8.8 μL 1 mg/ml之蛋白質樣品裝入比色皿中；樣品在25℃下保溫120 s，且接著以0.3℃/min之速率升溫至95℃。使用266 nm雷射波長以90°角收集散射資料。Tagg (聚集溫度)係藉由Uncle分析軟體進行分析及計算。結果概述於表9中。chBG87P及人源化變異體均顯示出可接受的Tagg。
CIC係一種鑑定溶解度不佳或有非特異性結合傾向之候選抗體的技術。來自人類血清之IgG或其他配位體與NHS活化之層析樹脂進行化學偶聯。使用HPLC測試此樹脂上蛋白質之滯留時間，以評估蛋白質溶解度。與人類血清中之IgG進行管柱偶聯後，用流動相(PBS)將抗體樣品及樣品緩衝液稀釋至0.1 mg/mL。將稀釋之樣品及緩衝液轉移至HPLC小瓶中進行LC-MS分析。表9中概述之結果顯示chBG87P及BG87P-21均顯示出與人類IgG可接受的非特異性相互作用。
B22及KD測試方法之一般描述及預期用途。該方法用於研究弱蛋白質-蛋白質相互作用，以預測聚集趨勢、揭示調配物成分對分子間相互作用之影響及支持調配物緩衝液選擇。將抗體與緩衝液交換樣品稀釋至1 mg/mL，且以14000 rpm離心30 min，接著檢查Tm、Tagg及DLS。將樣品負載至Uni上。9 μL/孔。各樣品設定一個重複的孔。遵循Uncle之指導設定設備參數且運行實驗。在此實驗中，吾人使用B22 & Kd模式。運行資訊：溫度(℃)：25。培育時間(秒)：120。採集次數：4。採集時間(秒)：5。衰減器控制：自動。雷射。控制：自動運行。對於kd：擴散相互作用參數，若蛋白質之相互作用隨著濃度的增加而增加(相互吸引)，則蛋白質之行為好像其變大且擴散係數(KD)減小(負斜率)。對於B22：第二維裡係數(virial coefficient)，若蛋白質相互作用隨著濃度的增加而增加(相互吸引)，則蛋白質之行為好像其更大且1/R90減小(負斜率)。資料表明，在PBS中，chBG87P及人源化變異體均相互吸引，在此條件下傾向於聚集(表10)。
AC-SINS係獲得樣品自相互作用以預測聚集可能性之檢定。其係基於將稀釋溶液中之抗體濃縮在預塗有多株捕獲物之金奈米粒子周圍。固定化抗體之間的相互作用導致粒子間距離減小及電漿子波長(最大吸光度波長)增加，其可易於藉由光學手段量測。用提供之緩衝液將抗體分別稀釋至0.05 mg/mL。金奈米粒子製備後，使用9:1體積比將金奈米粒子溶液與塗佈溶液混合。室溫培育1小時後，使用硫醇化PEG (最終濃度0.1 uM)封閉AuNP中之空位點。接著在室溫下再培育1小時。接著將顆粒溶液以15000 rpm離心6分鐘。丟棄上層溶液。使用起始體積之1/10的儲存緩衝液重新溶解粒子。將10 μL濃縮塗佈粒子與100 μL測試抗體溶液一起在室溫下在聚丙烯盤中培育2小時，接著將90 μL所得溶液轉移至聚苯乙烯UV透明盤中。資料表明chBG87P及BG87P-21均顯示出次優的自相互作用傾向(表9)。 表 10. 第 2 輪人源化變異體及 chBG87P 之自相互作用風險測定
樣品 kD (mL/g) B₂₂ (mol*mL/g²) k D擬合品質 B₂₂擬合品質
BG87P-21 -17.2 -1.1E-05 0.97 0.96
BG87P-22 -22.7 -2.5E-05 0.96 0.97
BG87P-24 -21.1 -1.7E-05 0.95 0.94
BG87P-26 -17.5 -2.0E-05 0.95 0.96
chBG87P -18.5 2.1E-05 0.98 0.97
表 11. 四種人源化抗體均顯示低於嵌合抗體之疏水性，但疏水性風險亦相對較高
樣品名稱 滯留時間 (min)
BG87P-21 21.48
BG87P-22 21.51
BG87P-24 21.75
BG87P-26 21.83
chBG87P 24.80
疏水性貼片使得chBG87P之HIC滯留時間超過25分鐘，且人源化BG87P-21之HIC滯留時間為21.9分鐘，兩者均高於可接受臨限值，亦即IgG格式之21.1分鐘。根本原因係HCDR3中之疏水性貼片，特定而言輕鏈之FR2 (框架區2)及LCDR2邊緣處之I97-Y98-Y100-V100a部分以及Y49-W50 (主要係W50) (圖2A)。Schrodinger對BG87P聚集之自動抗體管線分析亦顯示較高聚集風險(表12)。 表 12. 聚集之自動抗體管線分析
chBG87P
全局聚集分數 164.53
CDR聚集分數 104.38
CDRH1聚集分數 0
CDRH2聚集分數 1.11
CDRH3聚集分數 89.7
CDRL1聚集分數 0
CDRL2聚集分數 13.53
CDRL3聚集分數 0
實例 7. 人源化抗 CLDN6 抗體之溶解度工程化 BG87P-21 之溶解度工程化的整體策略
在前述描述中，chBG87P已經工程化為人源化抗體，且吾人已將BG87P-21鑑定為最終的最佳純系。然而，由chBG87P之HCDR3驅動之疏水性貼片的潛在可開發性風險尚未解決(圖2)。考慮到chBG87P顯示出有前景的結合活性及優異的CLDN6選擇性(圖1A、圖1B、圖1C、圖1D、圖1E、圖1F、圖1G及圖1H)，已完成BG87P-21之額外工程化以移除疏水性貼片，從而實現最佳可製造性且減輕潛在的ADA風險。
使用兩種主要策略來解決BG87P-21之溶解度問題：單點突變及框架交換。 表 13. BG87P-21 之溶解度工程化的整體概述
設計原理 檢定 篩選標準 最佳變異體 評論
第1 輪： 基於結構之突變誘發為1：降低暴露之親水性 2：突變為人類生殖系殘基 3：突變為人類抗體庫中較常見的殘基 4：改良疏水性核心填充 5：關鍵疏水位點處之飽和突變 FACS HIC-RT ( 無AC-SINS) 改良之HIC-RT 或者 改良之產量 或者 改良之FACS Ec50 或者 改良之FACS E最大 或者 改良之AC-SINS (僅在最後一輪中，因為該檢定不在先前之討論中) VK：Y49K/R VH：Y56H VH：W50Y/N VH：V5Q-V11T-P41S VK-Y49K 後來被遺棄 因為其使AC-SINS劣化
第2 輪： 擴展基於結構之設計1：疏水性貼片附近的突變殘基 (因為第1輪之結果低於預期) VK：V29A/G VK：T31S/H VH：Y59K/E/Q/H/D/N VH：Y59K降低產量
第1 輪及第2 輪之最佳點突變的組合1：改良之HIC-RT 2：或改良之FACS E最大 3：或改良之FACS Ec50 4：或改良之產量或純度 BG87P-31 BG87P-32 兩者均降低BG87P-21之產量； BG87P-31比BG87P-32降低更多的 HIC-RT，但AC-SINS值較差。
第3 輪： 框架交換以提高產量及自相互作用1：當前人類框架為IGHV1-3及IGKV1-5 2：測試IGHV3-23及IGKV1-39之額外框架 3：BG87P-21上之最佳點突變被納入 4：罕見胺基酸亦突變為常見胺基酸 5：驗證電荷分佈對自相互作用之影響。 FACS HIC-RT AC-SINS BG87P-33 BG87P-34 新框架將 攜有更多回復 突變，因為其 與原始 嵌合序列之同源性較低
大量單點突變之設計係基於兩個基本原理：一個基本原理係用更親水的胺基酸取代疏水性胺基酸；且另一基本原理係將人類抗體庫中相同Kabat位置之罕見胺基酸突變為更常見的胺基酸。進行了第1輪篩選中之57個變異體及第2輪篩選中之104個變異體，發現七個位置可被其他更親水的胺基酸取代，其結合親和力與親代BG87P-21相當，且親水性略有改善(表14)。將第1輪及第2輪篩選中之選定最佳突變組合起來以產生56個變異體用於進一步驗證。選擇組合變異體BG87P-31及BG87P-32 (VH及VL胺基酸序列分別為SEQ ID NO: 46及42)作為最佳候選物，其與BG87P-21具有相當的結合親和力，且HIC滯留有所改善，BG87P-31為17.4分鐘且BG87P-32為18.49分鐘，均優於親代BG87P-21 22.3分鐘(表14及圖3)。 表 14. chBG87P 溶解度工程化變異體之表徵
抗體名稱 chBG87P BG87P-21 BG87P-32 BG87P-31 BG87P-33 BG87P-34
細胞結合活性 與BG87P 之FACS-Ec50 比率 (HEK293-hCLDN6) 1 0.91 1.31 1.6 2.45 1.17
與BG87P (HEK293T-hCLDN6) 之FACS E 最大比率 1 0.66 0.63 0.76 0.91 1.03
與HEK293T_cyno-CLDN6 之E c50 (nM) 7.2 8.9 無資料 無資料 25.8 8.8
與BG87P (HEK293T-cyno-CLDN6) 之FACS E 最大比率 1 0.8 無資料 無資料 0.75 1
生物物理特性 Tm1 (℃) 69.8 69.3 69.4 70.5 68.8 69.9
Tagg (℃) 65.6 65.4 69.86 69.16 62.3 65.2
AC-SINS DI (nm) 12.85 21.95 10.09 22.2 7.7/11.4 8.05
HIC-RT (min) 23.54 20.33 18.49 17.41 16.87 17.85
純度(%) 95.44 97.99 99.18 99.46 94.96 93.14
產量(mg/L) 242.87 119.57 30.06 34.02 111.65 221.07
淨電荷(pH7.4 下) 2.9 8.8 9.3 9.59 5.8. 4.8
框架 嵌合抗體 IGHV1-3-01及IGKV1-5 IGHV1-3-01及IGKV1-5 IGHV1-3-01及IGKV1-5 IGHV-3-23及IGKV1-5 IGHV3-23 及IGKV1-39
然而，儘管在溶解度工程化之單點突變方法中減輕了疏水性，但藉由AC-SICNS測定之自締合風險仍顯示為中等至高。此問題未解決之原因為疏水性風險主要反映在抗體表面上實際表現出的疏水性貼片之量，而引發自相互作用之原因亦涉及等電點問題、均勻電荷分佈以及甚至一些未知的特異性相互作用。(Doi.org/10.1021/mp200566k)。因此，僅藉由將疏水性殘基替換為親水性殘基並不能減輕上述原因引發之自相互作用風險。此外，吾人發現親代chBG87P具有較高的HIC滯留時間25分鐘，同時表現出較低的自相互作用傾向，在PBS緩衝液中AC-SINS值約為12.85 nm (表14)。另一個發現的現象係，chBG87P之計算淨電荷比BG87P-21少得多，為2.9 VS 8.8。因此，吾人假定框架或淨電荷可能對自締合效應有影響。
吾人測試了IGHV3-23及IGKV1-39之額外框架，基於新配對框架之回復突變及BG87P-21之溶解度工程化上之選定最佳點突變均被納入(表13)。最終的最佳候選物BG87P-34在所有常規生物物理特性中均未顯示危險信號(表14；VH及VL胺基酸序列分別為SEQ ID NO: 43及44)。
此外，在框架交換為IGHV3-23及IGKV1-39後，原始人源化程序中丟失的BG87P-21之Emax已恢復(圖1G)。此兩種人源化程序中使用之關鍵回復突變鑑定原理係相同的，因此排除了在E最大責任之上一輪人源化中遺漏任何回復突變之可能性。對於藉由框架交換來恢復細胞結合中之E最大的一種解釋為，不同配對框架之VH-VL角度可能不同，而特定VH-VL角度可能有助於維持細胞結合之E最大。最終的先導純系BG87P-34在不同物種中顯示出良好的交叉反應性(圖1I及圖1J)。使用HEK293T/人類CLDN9進行與人類CLDN9之非特異性結合，資料表明相對於CLDN9，BG87P-34對人類CLDN6具有良好的選擇性(圖1H)。 實例 8. 抗人類 CD3 抗體 sp34 之人源化及 scFv 工程化
廣泛報導之小鼠純系sp34 (Blumberg 1990 PNAS 87 (18):7220–24)由於其食蟹獼猴CD3交叉反應性而為開發基於抗CD3之治療劑的最佳純系。對於sp34之人源化，藉由對IMGT(http://www(dot)imgt(dot)org/IMGT_vquest/share/textes/ index(dot)html)及NCBI (http://www(dot)ncbi(dot)nlm(dot)nih(dot)gov/igblast/)網站中之人類免疫球蛋白基因資料庫進行blast分析來搜尋人類生殖系IgG基因，以尋找與sp34可變區之蛋白質序列(SEQ ID NO: 48 - 57)具有高度同源性之序列。選擇在人類抗體庫中以高頻率存在(Glanville 2009 PNAS 106:20216-20221)且與sp34同源之人類IGVH及IGVK基因作為人源化之模板。
藉由CDR移植進行人源化(Methods in Molecular Biology, 第248卷: Antibody Engineering, Methods and Protocols, Humana Press)，且使用內部開發之表現載體將人源化抗體(hu-sp34)工程化為人類IgG1格式。在最初一輪人源化中，框架區中自鼠類至人類胺基酸殘基之突變係由模擬之3D結構引導，且對於維持CDR規範結構具有結構重要性之鼠類框架殘基被保留在第1版人源化抗體sp34中。特定言之，將sp34 VL (SEQ ID NO: 51~53)之CDR移植至人類生殖系可變基因IGVκ3-15之框架中，且保留若干鼠類框架殘基(Q1、A2、V4、V36、E38、L43、F44、T45、G46、G49、L66、D69、A71、I85及F87)。將sp34 VH (SEQ ID NO: 48 - 50)之CDR移植至人類生殖係可變基因IGVH3-7之框架中，且保留若干鼠類框架殘基(D73、S76、M89、V93)。
使用內部開發之表現載體將人源化sp34 (hu-sp34)及嵌合sp34 (ch-sp34)構築成人類全長抗體格式，該等表現載體分別含有人類IgG1及κ鏈之恆定區，具有易於適應之次選殖位點。人源化sp34及嵌合sp34抗體之表現及製備係藉由將重鏈及對應輕鏈構築體共轉染至293G細胞(內部開發)中且使用蛋白A管柱進行純化來達成。將純化之抗體在PBS中濃縮至0.5-5 mg/mL，且以等分試樣儲存於-80℃冷凍器中，以用於下列檢定。
對於親和力測定，抗體藉由抗人類Fc表面來捕獲，且用於基於表面電漿子共振(SPR)技術之親和力檢定中。在基於FACS之檢定中使用HuT78細胞評估人源化sp34與活細胞上之天然CD3結合的結合活性。將活HuT78細胞接種於96孔盤中，且與嵌合或人源化sp34之一系列稀釋液一起培育。使用小鼠抗人類IgG作為二次抗體來偵測抗體與細胞表面之結合。與人類天然CD3之劑量依賴性結合之EC50值係藉由將劑量反應資料擬合至GraphPad Prism之四參數邏輯式模型來確定。人源化sp34 BG53P (SEQ ID NO: 48 - 53及58 - 61)在SPR檢定及FACS檢定中均顯示出與ch-sp34相當的結合親和力(表15及圖4A)。 表 15. 藉由 SPR 及 FACS 比較 hu-sp34 及 ch-sp34 與 CD3 之結合親和力
抗體 與CD3ε 之SPR 結合親和力 與CD3ε/δ 之SPR 結合親和力 HuT78 結合FACS
k 合 (M -1s -1) k 離 (s -1) K D(nM) k 合 (M -1s -1) k 離 (s -1) K D(nM) EC50 (nM)
Ch-sp34 2.16E+05 4.96E-04 2.30E-09 1.09E+05 2.96E-03 2.71E-08 1.9
BG53P 1.98E+05 5.25E-04 2.65E-09 9.93E+04 2.52E-03 2.54E-08 1.8
基於人源化sp34 BG53P模板，吾人進行了若干單一突變，將框架區中保留之鼠類殘基轉化為對應的人類生殖系殘基，其中包括VH中之四個保留之鼠類殘基(D73、S76、M89、V93)及VL中之十五個保留之鼠類殘基(Q1、A2、V4、V36、E38、L43、F44、T45、G46、G49、L66、D69、A71、I85及F87)。所有人源化突變均使用含有特定位置處之突變的引子及定點突變誘發套組(目錄號FM111-02，TransGen, Beijing, China)進行。藉由定序分析驗證所需突變。此等hu-sp34變異體抗體在如前所述之結合檢定中進行了測試。與hu-sp34-1A-1f相比，VK上之V36Y、G46L及G49Y (Kabat編號)突變顯著損害人源化變異體之結合親和力，而hu-sp34人源化變異體之其餘型式與hu-sp34-1A-1f具有相當的結合活性。VH中之D73N顯著降低表現水平(資料未顯示)。
總而言之，人源化單株抗體BG56P (SEQ ID NO: 70-77及72-86)之精良工程化型式衍生自如上所述之突變過程，且進行了詳細表徵(表16及圖4B)。 表 16. 人源化 sp34 與 CD3 之結合親和力的比較
抗體 與CD3ε 之SPR 結合親和力 與CD3ε/δ 之SPR 結合親和力 HuT78 結合FACS
k 合 (M -1s -1) k 離 (s -1) K D(M) k 合 (M -1s -1) k 離 (s -1) K D(M) E c50 (nM)
Ch-sp34 2.16E+05 4.96E-04 2.30E-09 1.09E+05 2.96E-03 2.71E-08 2.49
BG53P 1.06E+05 4.84E-04 4.58E-09 1.09E+05 1.05E-03 9.62E-09 1.72
BG56P 4.60E+04 3.25E-04 7.06E-09 6.16E+04 1.12E-03 1.82E-08 4.69
實例 9. 人源化 sp34 之 ScFv 工程化
為產生即插即用的雙特異性格式且避免輕鏈-重鏈錯配，吾人將BG56P抗體重新格式化為在VH與VƘ之間具有3xG4S連接子之單鏈片段可變(scFv)格式。使用內部開發的具有易於適應次選殖位點之表現載體，將重新格式化的scFv與人類IgG1 Fc區之N末端融合成scFv-Fc格式。藉由將scFv-Fc構築體轉染至293G細胞(內部開發)且使用蛋白A管柱進行純化來達成親代及重新工程化的hu-sp34 scFv-Fc之表現及製備。將純化之scFv-Fc格式抗體在PBS中濃縮至0.5-5 mg/mL，且以等分試樣儲存於-80℃冷凍器中，以用於下列檢定。scFv化的BG56P (稱為BG561P，SEQ ID NO:48 - 53及62 - 65)在SPR及FACS中顯示出與BG56P之抗體型式相當的結合親和力(表17及圖5)。 表 17. 藉由 SPR 及 FACS 比較人源化 sp34 及 scFv 人源化 sp34 結合對 CD3 之親和力
抗體 與CD3ε 之SPR 結合親和力 與CD3ε/δ 之SPR 結合親和力 HuT78 結合FACS
k 合 (M -1s -1) k 離 (s -1) K D(nM) k 合 (M -1s -1) k 離 (s -1) K D(nM) EC50 (nM)
BG56P 4.60E+04 3.25E-04 7.06E-09 6.16E+04 1.12E-03 1.82E-08 4.69
BG561P 4.42E+04 4.01E-04 9.08E-09 7.25E+04 1.88E-03 2.59E-08 4.35
基於BG561P，吾人在框架及CDR中進行了若干突變，以移除潛在的PTM位點且提高熱穩定性及膠體穩定性，以用於人類治療用途。VL中L4V之突變(所得人源化scFv指定為BG562P，SEQ ID NO: 48 - 53及69 - 70)顯示聚集溫度(Tagg)提高5度。VL中之L4V與VH中之A49G及D65G的組合(所得人源化scFv指定為BG563P) (SEQ ID NO: 48、71、50、51 - 53、73及74)與BG561P相比顯示出改善的熱穩定性及膠體穩定性，而在FACS檢定中顯示與人類CD3之結合親和力略有改善。潛在PTM位點包括FR1及HCDR1之連接區中之潛在脫醯胺位點N30 (NT) (Kabat CDR定義)及HCDR3中之N100 (NS)。各N突變為S，以移除潛在脫酰胺位點。所有突變均使用含有特定位置處之突變的引子及定點突變誘發套組(目錄號FM111-02，TransGen, Beijing, China)進行。總而言之，人源化scFv BG564P (SEQ ID NO: 48、71、75、51 - 53、77及78)之精良工程化型式衍生自上述突變過程，且進行了詳細表徵。結果顯示，與人源化scFv BG561P相比，人源化scFv BG564P保留對CD3之結合親和力(表18–表20及圖6)且改善生物物理穩定性(表20)。 表 18. 藉由 SPR 比較不同型式之人源化 sp34 scFv-Fc 對 CD3 之結合親和力
抗體 與CD3ε 之SPR 結合親和力
k 合 (M -1s -1) k 離 (s -1) K D(nM)
BG561P 7.22E+04 3.60E-04 4.98E-09
BG562P 1.16E+05 3.67E-04 3.16E-09
BG563P 4.93E+05 7.72E-04 1.57E-09
BG564P 4.14E+05 5.76E-04 1.39E-09
表 19. 藉由 FACS 比較人源化 sp34 scFv-Fc 與 CD3 之結合親和力
抗體 HuT78 結合FACS
測試1 Ec50 (nM) 測試2 Ec50 (nM) 測試3 Ec50 (nM)
BG561P 2.46
BG562P 2.85 2.85
BG563P 0.94 0.94
BG564P 1.23
表 20. 人源化 sp34 scFv-Fc 之熱穩定性及膠體穩定性比較
scFv-Fc Tm (℃) Tagg (℃)
BG561P 58.1 45.5
BG562P 59.0 50.8
BG563P 59.9 50.9
BG564P 61.6 51.2
熔融溫度(Tm)係使用高通量MicroCal™ VP-Capillary DSC (Malvern Instruments, Northampton, MA)來確定。使用90℃/h之掃描速率，獲得各蛋白(在0.5 mg/mL下，350 μL)自20℃至100℃之熱分析圖。自各蛋白質樣品中減去單獨緩衝液之熱分析圖。所獲得之結果顯示樣品之轉變溫度(Tm)及量熱焓(ΔH)的中點值，其表明BG564P之Tm與BG561P相比有所改善(表20)。
聚集溫度Tagg (℃)代表樣品之膠體穩定性且藉由使用UNCLE™ (Unchained lab, Pleasanton, CA)，藉由SLS266來監測聚集之起始而獲得。將樣品負載至Uni中，且使溫度自15℃勻升至95℃。背反射光學器件不能偵測藉由蛋白聚集物之近UV光散射，且因此僅非散射光到達偵測器。因此，背反射光的減少係樣品中聚集之直接量度，其表明BG564P之Tagg與BG561P相比有所改善(表20)。 實例 10. CLDN6×CD3 BsAb BG143P 之生成
促效性抗CD3抗體已在臨床環境中表現出毒性，其可能表明全身Fc R交聯對於CD3活化並不理想。目的為在腫瘤部位達成有效的CD3刺激，而無需對多種癌症進行全身性CD3活化。為克服Fc R交聯之依賴性，吾人產生具有以下特徵之CLDN6 ×CD3 BsAb BG143P，如圖7中所示。此特異性構築體BG143P包括模組比為1:1之IgG融合樣多特異性抗體格式、與CLDN6結合之精良工程化Fab片段BG87P-34及在CH2之N末端與CD3融合物結合之BG564P的scFv，以及不具有FcγR結合，但保留FcRn結合之huIgG1之Fc空型式。Fc中亦引入杵入臼(KIH)以增加異二聚化。BG143P之序列資訊列於SEQ ID NO: 79 - 84中。 實例 11. CLDN6×CD3 BsAb BG143P 之標靶結合活性
使用SPR量測CLDN6×CD3 BsAb BG143P之結合動力學。SPR用於量測CDεγ重組蛋白抗體之締合速率常數(k a)及解離速率常數 (k d)，且接著確定親和常數(K D)。結果表明，CLDN6 ×CD3 BsAb與人類CDεγ具有很強的結合親和力，如表21中所示。 表 21. CLDN6×CD3 BsAb BG143P 之胺基酸及 DNA 序列
抗體 抗原 ka (1/Ms) kd (1/s) K D(M)
BG143P 人類CDεγ 2.17E+06 1.81E-02 8.31E-09
食蟹獼猴CDεγ 1.32E+06 5.99E-03 4.55E-09
FACS結果進一步證實BG143P與CD3及CLDN6之結合活性。BsAb以劑量反應方式顯示與表現CD3之Jurkat的強結合活性，EC 50為6.98 nM (圖8A)。類似地，BG143P以劑量反應方式顯示與表現CLDN6之PA-1的強結合活性，EC50為81.26 nM (圖8B)。 實例 12. CLDN6×CD3 抗體之活體外功能活性 靶向 T 細胞重定向細胞毒性及細胞介素釋放
BG143P針對PA-1 (具有高CLDN6表現之癌細胞株)、Hutu80 (具有中等CLDN6 表現之癌細胞株)、AGS (具有低且異質性CLDN6表現之癌細胞株)及NCI-H1299 (CLDN6表現陰性之癌細胞株)之T細胞重定向細胞毒性係使用人類PBMC作為效應細胞來評估。為量測細胞毒性，標靶癌細胞株經工程化以表現Nano-luciferase。將約10000個標靶細胞及25000個人類PBMC (E/T=2.5)接種至96孔U形底盤之各孔中，且與各種濃度之抗體在37℃及5% CO 2下培育48小時。收集上清液用於細胞介素偵測。藉由Nano-Glo偵測套組(Promega)量測標靶細胞殺傷。使用下式計算抗體之細胞毒性活性(%)。細胞毒性活性(%)=(A-B)/(A-C)*100%。「A」代表僅具有未經處理之標靶細胞之孔的平均發光信號，「B」代表具有抗體及PBMC之孔的平均發光信號，且「C」代表具有用Triton-X100完全裂解之標靶細胞之孔的平均發光信號。藉由HTRF套組(Cisbio)偵測上清液中之IFN-γ及IL-2。
如圖9中所示，BG143P以pM EC50水平以劑量依賴性方式顯示出有效的T細胞重定向殺傷及細胞介素釋放誘導效力。 針對人類 CLDN6 及 CLDN9 之功能特異性
人類CLDN6及CLDN9之胺基酸序列高度保守，胞外域僅存在3個胺基酸差異。CLDN9在人類正常組織中廣泛表現，因此CLDN6與CLDN9之間的結合特異性很重要，且藉由FACS分析進行檢查。
人類CLDN6及CLDN9之表現載體係藉由將合成的編碼cDNA之對應序列插入哺乳動物表現載體中而建立。藉由轉染對應質體產生表現人類CLDN6及CLDN9之NCI-H1299穩定細胞。將細胞以1×10 6個細胞之濃度懸浮於FACS緩衝液(2%FBS，1×PBS)中，且將細胞懸浮液分配至U形底96孔盤(100μL/孔)中。以100 nM之最終最高濃度向其中添加抗體且2×稀釋11個稀釋度，接著與細胞混合且在4℃下培育1小時。離心後，移除反應溶液，且用200 μL/孔之FACS緩衝液洗滌細胞兩次。接著，將APC-抗人類Fcγ用FACS緩衝液稀釋500倍，且作為二次抗體添加至細胞中。將細胞在4℃下培育30分鐘，接著如上所述地洗滌兩次，且懸浮於100 μL FACS緩衝液中。對細胞懸浮液進行流式細胞分析技術。
使用人類PBMC藉由Nano-Glo檢定評估NCI-H1299-CLDN6/CLDN9上BG143P之殺傷，將約10000個標靶細胞及25000個人類PBMC (E/T=2.5)接種至96孔U形底盤之各孔中，且與各種濃度之抗體在37℃及5% CO 2下培育48小時。收集上清液用於細胞介素偵測。藉由Nano-Glo偵測套組(Promega)量測標靶細胞殺傷。使用下式計算抗體之細胞毒性活性(%)。細胞毒性活性(%)=(A-B)/(A-C)*100%。「A」代表僅具有未經處理之標靶細胞之孔的平均發光信號，「B」代表具有抗體及PBMC之孔的平均發光信號，且「C」代表具有用Triton-X100完全裂解之標靶細胞之孔的平均發光信號。藉由HTRF套組(Cisbio)偵測IFN-γ。
如圖10中所示，BG143P係針對人類CLDN6而非人類CLDN9具有特異性結合(圖10A)、細胞殺傷(例如裂解) (圖10B)及IFN-γ誘導活性(圖10B)之抗體。 實例 13. CLDN6×CD3 BsAb BG143P 在 OV90 異種移植模型中之活體內功效
在PBMC人源化小鼠之異種移植模型中評估了CLDN6 ×CD3 BsAb BG143P之活體內抗腫瘤功效。向NCG (NOD/ShiLtJGpt-Prkdc em26Cd52Il2rg em26Cd22/Gpt)小鼠皮下接種表現人類CLDN6之人類卵巢癌細胞株OV-90 (ATCC)，且於第二天向小鼠靜脈內注射人類PBMC。當腫瘤體積達到約200 mm 3時，將荷瘤小鼠隨機分至治療組，以接受抗體或作為對照之媒劑(PBS)的投與。抗體/載體每週投與一次。每週量測三次各小鼠之腫瘤塊長度(L)及寬度(W)以及體重。且腫瘤體積(TV)計算如下：TV＝(L × W 2) / 2。圖11A顯示BG143P之活體內抗腫瘤功效，其在0.03 mg/kg及0.1 mg/kg時顯示出較強功效，TGI% (腫瘤生長抑制比，%)為115.43%及125.92%。
在注射PBMC後第2週、第3週及第4週檢查小鼠hPBMC之重建。週邊血液中活細胞中之hCD45+細胞在第2週為20%，且在第4週增加至60%。圖11B展示了hPBMC重建。 實例 14. CLDN6×CD3 BsAb BG143P 在 B16F10-/hCLDN6 同基因模型中之活體內功效
採用另一功效模型來評估CLDN6×CD3 BsAb BG143P之活體內功效。構築人類CLDN6表現質體且在B16F10細胞株中穩定轉染，且所得B16F10/人類CLDN6細胞係被證實能夠在人類CD3EDG轉殖基因小鼠中生長，且在腫瘤形成後保留hCLDN6表現。為建立此模型，將B16F10/人類CLDN6細胞皮下接種至hCD3EDG轉殖基因小鼠中，其中小鼠CD3基因被人類對應基因取代。在腫瘤體積達到約100 mm 3後將小鼠隨機分組。每週向小鼠腹膜內注射測試品或PBS。每週量測三次各小鼠之腫瘤塊長度(L)及寬度(W)以及體重。腫瘤體積(TV)計算如下：TV＝(L × W2) / 2。BG143P在0.1 mg/kg時表現出較強功效，TGI%為93.54%，如圖12A中所示。如圖12B中所說明，在研究中未觀測到明顯的體重減輕。 文獻
無
圖1A、1B、1C、1D、1E、1F、1G、1H、1I及1J顯示chBG87P工程化變異體之細胞結合活性。圖1A顯示與抗CLDN6嵌合BG87P (chBG87P)相比，第1輪BG87P人源化回復突變變異體(BG87P-z0、BG87P-Bz0、BG87P-Bz1、BG87P-Bz2、BG87P-Bz3、BG87P-Bz4、BG87P-Bz5、BG87P-Bz6、BG87P-Bz7及BG87P-Bz8)針對HEK293T/人類CLDN6之結合活性。圖1B顯示與抗CLDN6嵌合BG87P (chBG87P)相比，組合人源化變異體(BG87P-21、BG87P-22、BG87P-23及BG87P-24)針對HEK293T/人類CLDN6之細胞結合活性。圖1C顯示與抗CLDN6嵌合BG87P (chBG87P)相比，組合人源化變異體(BG87P-25、BG87P-26及BG87P-27)針對HEK293T/人類CLDN6之細胞結合活性。圖1D顯示與抗CLDN6嵌合BG87P (chBG87P)相比，組合人源化變異體(BG87P-21、BG87P-22、BG87P-23及BG87P-24)針對癌細胞株PA-1之細胞結合活性。圖1E顯示與抗CLDN6嵌合BG87P (chBG87P)相比，組合人源化變異體(BG87P-25、BG87P-26及BG87P-27)針對癌細胞株PA-1之細胞結合活性。圖1F顯示與抗CLDN6嵌合BG87P (chBG87P)及BG87P-Bz0相比，轉譯後修飾(PTM)移除工程化變異體(BG87P-m1、BG87P-m2、BG87P-m3、BG87P-m4、BG87P-m5、BG87P-m6、BG87P-m7及BG87P-m8)針對HEK293T/人類CLDN6之細胞結合活性。圖1G顯示與抗CLDN6嵌合BG87P (chBG87P)相比，BG87P溶解度工程化變異體(BG87P-21、BG87P-34及BG87P-33)針對HEK293T/人類CLDN6之細胞結合活性。圖1H顯示與抗CLDN6嵌合BG87P (chBG87P)相比，溶解度工程化變異體(BG87P-21、BG87P-34及BG87P-33)針對HEK293T-人類CLDN9之非特異性結合活性。圖1I顯示與抗CLDN6嵌合BG87P (chBG87P)相比，人源化變異體(BG87P-21、BG87P-34及BG87P-33)針對CHOK1-食蟹獼猴CLDN6之交叉反應性。圖1J顯示與抗CLDN6嵌合BG87P (chBG87P)相比，人源化變異體(BG87P-21、BG87P-34及BG87P-33)針對CHOK1-小鼠CLDN6之交叉反應性。 圖2描繪Schroedinger之嵌合BG87P同源模型中所預測之疏水性貼片。預計HCDR3之I97-Y98-Y100-V100a與HCDR2之Y49-W50一起形成暴露的疏水性貼片(Y49係輕鏈可變區FR2之最後一個殘基，而W50係LCDR2之第一個殘基)。 圖3顯示工程化後選定人源化BG87P變異體(BG87-33、BG87-34、BG87P-21)之疏水性，如由HIC-HPLC所測定。 圖4A及4B顯示Hut78細胞中嵌合與人源化sp34s之間結合活性的比較。圖4A顯示在Hut78細胞中藉由熔體流動指數(MFI)量測之嵌合sp34 (ch-sp34)與人源化sp34 BG53P (BG53P)之間結合親和力的比較。圖4B顯示嵌合sp34 (ch-sp34)、人源化sp34 BG53P (BG53P)與BG56P之間結合親和力的比較。 圖5顯示人源化sp34 BG56P (BG56P)與人源化sp34 scFv BG561p (BG561P)之間結合活性的比較。 圖6A、6B及6C顯示Hut78細胞中人源化sp34 scFv之間結合親和力的比較。圖6A顯示Hut78細胞中人源化sp34 scFv BG561p (BG561P)與人源化scFv BG562P (BG562P)之間結合親和力的比較。圖6B顯示Hut78細胞中人源化scFv BG562P (BG562P)與人源化scFv BG563P (BG563P)之間結合親和力的比較。圖6C顯示Hut78細胞中人源化scFv BG563P (BG563P)與人源化scFv BG564P (BG564P)之間結合親和力的比較。 圖7顯示CLDN6×CD3 BsAb BG143P之示意圖。 圖8A及8B顯示CLDN6×CD3 BsAb BG143P之標靶結合活性。圖8A顯示表現CD3之Jurkat細胞中BG143P之CD3結合活性。圖8B顯示表現CLDN6之PA-1細胞中BG143P之CLDN6結合活性。 圖9A、9B及9C顯示具有不同CLDN6表現之腫瘤細胞株中CLDN6×CD3 BsAb BG143P之靶向功能活性。圖9A顯示根據細胞裂解檢定之BG143P在表現CLDN6之PA-1細胞、Hutu80細胞、AGS細胞及NCI-H1299細胞中之重定向T細胞細胞毒性。圖9B顯示BG143P在表現CLDN6之PA-1細胞、Hutu80細胞、AGS細胞及NCI-H1299細胞中之IFN-γ誘導活性。圖9C顯示BG143P在表現CLDN6之PA-1細胞、Hutu80細胞、AGS細胞及NCI-H1299細胞中之IL-2誘導活性。 圖10A、10B及10C顯示CLDN6 ×CD3 BsAb BG143P針對人類CLDN6及CLDN9之功能特異性。圖10A顯示NCI-H1299細胞中BG143P針對人類CLDN6 (左圖)及CLDN9 (右圖)之結合特異性。圖10B顯示NCI-H1299細胞中BG143P針對人類CLDN6 (左圖)及CLDN9 (右圖)之殺傷特異性(細胞裂解活性)。圖10C顯示NCI-H1299細胞中BG143P針對人類CLDN6 (左圖)及CLDN9 (右圖)之細胞介素(IFN-γ)誘導。 圖11A及11B顯示CLDN6×CD3 BsAb BG143P在PBMC人源化小鼠之OV-90異種移植模型中之活體內功效。圖11A顯示腫瘤體積隨時間之變化。小鼠未經治療(無PBMC)、用PBS治療(PBS i.p QW)、用0.01 mg/kg之BG143P治療(BG143P -0.01 mg/kg，i.p)、用0.03 mg/kg之BG143P治療(BG143P -0.01 mg/kg，i.p)或用0.1 mg/kg之BG143P治療(BG143P -0.1 mg/kg，i.p)。治療係每週一次，且在X軸上以三角形表示。圖11B顯示在PBMC注射後第13天、第21天及第27天未經治療(無PBMC)、用PBS治療(PBS i.p QW)、用0.01 mg/kg之BG143P治療(BG143P -0.01 mg/kg，i.p)、用0.03 mg/kg之BG143P治療(BG143P -0.01 mg/kg，i.p)或用0.1 mg/kg之BG143P治療(BG143P -0.1 mg/kg，i.p)之小鼠之周邊血液中hCD45+細胞的百分比，指示人類PBMC重建。 圖12A及12B顯示CLDN6 ×CD3 BsAb BG143P在hCD3EDG轉殖基因小鼠之B16F10/人類CLDN6同基因模型中之活體內功效。圖12A顯示腫瘤體積隨時間之變化。小鼠用PBS治療(PBS i.p QW)、用0.01 mg/kg之BG143P治療(BG143P -0.01 mg/kg，i.p)、用0.03 mg/kg之BG143P治療(BG143P -0.01 mg/kg，i.p)或用0.1 mg/kg之BG143P治療(BG143P -0.1 mg/kg，i.p)。治療係每週一次，且在X軸上以三角形表示。圖12B顯示在接種後第11至27天期間用用PBS治療(PBS i.p QW)、用0.01 mg/kg之BG143P治療(BG143P -0.01 mg/kg，i.p)、用0.03 mg/kg之BG143P治療(BG143P -0.01 mg/kg，i.p)或用0.1 mg/kg之BG143P治療(BG143P -0.1 mg/kg，i.p)之小鼠的體重，作為小鼠對抗體之耐受性的指標。
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Claims (59)

  1. 一種多特異性抗體或其抗原結合片段，其包含特異性結合於人類密連蛋白6 (CLDN6)之第一抗原結合域及特異性結合於人類分化簇3 (CD3)之第二抗原結合域。
  2. 如請求項1之多特異性抗體或抗原結合片段，其中該第一抗原結合域不結合於其他密連蛋白(CLDN)蛋白質家族成員。
  3. 如請求項2之多特異性抗體或抗原結合片段，其中該第一抗原結合域不結合於人類密連蛋白9 (CLDN9)。
  4. 如請求項3之多特異性抗體或抗原結合片段，其中該第一抗原結合域對於人類CLDN6比對於人類CLDN9具有高選擇性。
  5. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含： (a) 重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈互補決定區(HCDR)1，(ii)具有SEQ ID NO: 39之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3；及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的輕鏈互補決定區(LCDR)1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3； (b) 重鏈可變區，其包含：(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3；及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3； (c) 重鏈可變區，其包含：(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3；及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；或 (d) 重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3；及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3。
  6. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中該第一抗原結合域包含： (a) 重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 43至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 44至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列； (b) 重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 7至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 8至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列； (c) 重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 24至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 12至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列； (d) 重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 41至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 42至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列； (e) 重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 46至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 47至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列；或 (f) 重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 46至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 42至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列。
  7. 如請求項6之多特異性抗體或抗原結合片段，其中SEQ ID NO: 7、8、12、24、41、42、43、44、46或47之1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸已被插入、缺失或取代。
  8. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中該第一抗原結合域包含： (a) 具有包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的重鏈可變區，及具有包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的輕鏈可變區； (b) 具有包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的重鏈可變區，及具有包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列的輕鏈可變區； (c) 具有包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的重鏈可變區，及具有包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區； (d) 具有包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的重鏈可變區，及具有包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的輕鏈可變區； (e) 具有包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列的重鏈可變區，及具有包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列的輕鏈可變區；或 (f) 具有包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列的重鏈可變區，及具有包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的輕鏈可變區。
  9. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含： (a) 重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 71之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 75之胺基酸序列的HCDR3；及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3； (b) 重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 49之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 50之胺基酸序列的HCDR3；及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3；或 (c) 重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 71之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 50之胺基酸序列的HCDR3；及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3。
  10. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中該第二抗原結合域包含： (a) 重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 76至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 68至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列； (b) 重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 54至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 55至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列； (v) 重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 58至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 59至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列； (d) 重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 62至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 63至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列； (e) 重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 62至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 68至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列；或 (f) 重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 72至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO: 68至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列。
  11. 如請求項10之多特異性抗體或抗原結合片段，其中SEQ ID NO: 54、55、58、59、62、68、72或76之1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸已被插入、缺失或取代。
  12. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中該第二抗原結合域包含： (a) 具有包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列的重鏈可變區，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區； (b) 具有包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列的重鏈可變區，及具有包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列的輕鏈可變區； (c) 具有包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列的重鏈可變區，及具有包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列的輕鏈可變區； (d) 具有包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列的重鏈可變區，及具有包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列的輕鏈可變區； (e) 具有包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列的重鏈可變區，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區；或 (f) 具有包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列的重鏈可變區，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區。
  13. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中該第二抗原結合域包含： (a) 具有包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)； (b) 具有包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)； (c) 具有包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)；或 (d) 具有包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)。
  14. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中： (a) 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vii)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 49之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 50之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3； (b) 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID N6O: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 71之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 50之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3；或 (c) 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 71之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 75之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3。
  15. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中： (a) 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 49之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 50之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3； (b) 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 71之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 50之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3；或 (c) 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 71之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 75之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3。
  16. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中： (a) 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 39之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 49之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 50之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3； (b) 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 39之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 71之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 50之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(f)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3；或 (c) 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 39之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 71之胺基酸序列的HCDR2，及(iii)具有SEQ ID NO: 75之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3。
  17. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 39之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(f)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 71之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 75之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3。
  18. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中： (a) 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(ivd)具有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 49之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 50之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3； (b) 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 71之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 50之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3；或 (c) 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 71之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 75之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3。
  19. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中： 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 71之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 75之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 51之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列的LCDR3。
  20. 如請求項1之多特異性抗體或抗原結合片段，其中： 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含： a) 重鏈可變區，其包含：(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3； b) 重鏈可變區，其包含：(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3； c) 重鏈可變區，其包含：(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 39之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；或 d) 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含：(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3； 且 特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含： a) 具有包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； b) 具有包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； c) 具有包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； d) 具有包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； e) 具有包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)；或 f) 具有包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)。
  21. 如請求項1之多特異性抗體或抗原結合片段，其中： 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含： a) 重鏈可變區，其包含：(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 39之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；或 且 特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含： b) 具有包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； c) 具有包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； d) 具有包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； e) 具有包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； f) 具有包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)；或 g) 具有包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)。
  22. 如請求項1之多特異性抗體或抗原結合片段，其中： 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含： (a) 重鏈可變區，其包含：(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(ivd)具有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；或 (b) 重鏈可變區，其包含：(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 39之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3；或 (c) 重鏈可變區，其包含(i)具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的HCDR1，(ii)具有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列的HCDR2，(iii)具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的HCDR3，及輕鏈可變區，其包含：(iv)具有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的LCDR1，(v)具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的LCDR2，及(vi)具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的LCDR3； 且 特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含： (i) 具有包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)； (ii) 具有包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)； (iii) 具有包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)；或 (iv) 具有包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)。
  23. 如請求項1之多特異性抗體或抗原結合片段，其中： 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含： (i) 具有包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (ii) 具有包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (iii) 具有包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (iv) 具有包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)；或 (v) 具有包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； 且 特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含： (i) 具有包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (ii) 具有包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (iii) 具有包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (iv) 具有包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (v) 具有包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)；或 (vi) 具有包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)。
  24. 如請求項1之多特異性抗體或抗原結合片段，其中： 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含： (i) 具有包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (ii) 具有包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (iii) 具有包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (iv) 具有包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)；或 (v) 具有包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； 且 特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：具有包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)。
  25. 如請求項1之多特異性抗體或抗原結合片段，其中： 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含： (i) 具有包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (ii) 具有包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (iii) 具有包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (iv) 具有包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)；或 (v) 具有包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； 且 特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：具有包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)。
  26. 如請求項1之多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：具有包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含： (i) 具有包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (ii) 具有包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及包含SEQ ID NO: 59之輕鏈可變區(VL)； (iii) 包含SEQ ID NO: 62之重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (iv) 具有包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (v) 具有包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)；或 (vi) 具有包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)。
  27. 如請求項1之多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：具有包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：具有包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)。
  28. 如請求項1之多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：具有包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：具有包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)。
  29. 如請求項1之多特異性抗體或抗原結合片段，其中： 特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含： (i) 具有包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (ii) 具有包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (iii) 具有包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； (iv) 具有包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)；或 (v) 具有包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)； 且 特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含： (i) 具有包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)； (ii) 具有包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)； (iii) 具有包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)；或 (iv) 具有包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)。
  30. 如請求項1之多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：具有包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含： (a) 具有包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)； (b) 具有包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)； (c) 具有包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)；或 (d) 具有包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)。
  31. 如請求項1之多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：具有包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：具有包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)。
  32. 如請求項1之多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：具有包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：具有包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)。
  33. 如請求項1之多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：具有包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：具有包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)。
  34. 如請求項1之多特異性抗體或抗原結合片段，其中：特異性結合於人類CLDN6之該第一抗原結合域包含：具有包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，及具有包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)；且特異性結合於人類CD3之該第二抗原結合域包含：具有包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列的單鏈可變片段(scFv)。
  35. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其為單株抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人類工程化抗體、單鏈抗體(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。
  36. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中該多特異性抗體為雙特異性抗體。
  37. 如請求項36之多特異性抗體或抗原結合片段，其中該多特異性抗體為BG143P。
  38. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段具有抗體依賴性細胞毒性(ADCC)或補體依賴性細胞毒性(CDC)。
  39. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段具有減少的醣基化或無醣基化或為低岩藻醣基化的。
  40. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含增加的平分GlcNac結構。
  41. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中Fc域為效應功能降低的IgG1。
  42. 如前述請求項中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，其中該Fc域為IgG4。
  43. 一種醫藥組合物，該醫藥組合物包含如請求項1至42中任一項之多特異性抗體或其抗原結合片段，進一步包含醫藥學上可接受之載劑。
  44. 如請求項43之醫藥組合物，該醫藥組合物進一步包含組胺酸/組胺酸HCl、海藻糖二水合物及/或聚山梨醇酯20。
  45. 一種治療癌症之方法，該方法包括向有需要之患者投與有效量之如請求項1至42之多特異性抗體或抗原結合片段。
  46. 如請求項45之方法，其中該癌症為實體腫瘤。
  47. 如請求項45之方法，其中該癌症係選自胃癌、大腸癌、胰臟癌、乳癌、頭頸癌、腎癌、肝癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、皮膚癌、間皮瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、肉瘤、腦癌、大腸直腸癌、前列腺癌、子宮頸癌、睾丸癌、子宮內膜癌、膀胱癌、橫紋肌樣瘤及/或神經膠質瘤。
  48. 如請求項45之方法，其中該多特異性抗體或抗原結合片段與一或多種額外治療劑組合投與。
  49. 如請求項48之方法，其中該一或多種治療劑係選自紫杉醇或紫杉醇劑、多西他賽(docetaxel)、卡鉑、拓撲替康(topotecan)、順鉑、伊立替康(irinotecan)、小紅莓(doxorubicin)、雷利竇邁(lenalidomide)或5-氮雜胞苷。
  50. 如請求項49之方法，其中該一或多種治療劑為紫杉醇劑、雷利竇邁或5-氮雜胞苷。
  51. 如請求項48之方法，其中該一或多種治療劑中之至少一者為抗PD1或抗PDL1抗體。
  52. 如請求項51之方法，其中該抗PD1抗體為替雷利珠單抗(Tislelizumab)。
  53. 一種分離的核酸，該核酸編碼如請求項1至42中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段。
  54. 一種載體，該載體包含如請求項53之核酸。
  55. 一種宿主細胞，該宿主細胞包含如請求項53之核酸或如請求項54之載體。
  56. 一種產生多特異性抗體或其抗原結合片段之方法，該方法包括培養如請求項55之宿主細胞且自培養物回收該抗體或抗原結合片段。
  57. 如請求項1至42中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，或如請求項43或44之醫藥組合物，其用於藥物或療法。
  58. 如請求項1至42中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段，或如請求項43或44之醫藥組合物，其用於治療癌症之方法。
  59. 一種如請求項1至42中任一項之多特異性抗體或抗原結合片段之用途，其用於製造用於治療癌症之藥劑。
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