TW202426456A

TW202426456A - 新穎的喜樹鹼類似物及其免疫綴合物

Info

Publication number: TW202426456A
Application number: TW112135379A
Authority: TW
Inventors: 理察Ｈ李; 東駿李; 茂君郭
Original assignee: 美商艾德森特克斯治療股份有限公司; 大陸商上海德烽藥業有限公司
Priority date: 2022-09-15
Filing date: 2023-09-15
Publication date: 2024-07-01
Also published as: WO2024059236A1

Abstract

本發明提供新穎的喜樹鹼類似物及其免疫綴合物，以及醫藥組成物及製備方法及用於治療各種疾病及病症(例如癌症)的用途。

Description

新穎的喜樹鹼類似物及其免疫綴合物

相關申請案 優先權主張及相關專利申請案

本申請案主張2022年9月15日所提申之PCT/CN2022/118983的優先權，該案的全部內容以引用的方式併入本文中。發明領域

本發明大體上係關於新穎化合物及其治療用途。更特定言之，本發明提供新穎的喜樹鹼類似物及其免疫綴合物，以及醫藥組成物及製備方法及用於治療各種疾病及病症(例如癌症)的用途。

發明背景

化學治療劑往往受困於快速的血漿清除及對癌細胞的低選擇性。單株抗體療法之特徵在於選擇性高及血漿半衰期長，但細胞毒性往往有限。抗體-藥物綴合物(Antibody-drug conjugates；ADC) (具有高細胞毒性及長血漿半衰期的一類療法)在癌症治療方面代表著一種有前景的治療模式。迄今為止，FDA已批准十三種ADC，包括FDA在2000年批准的第一種ADC：吉妥珠單抗奧佐米星(gemtuzumab ozogamicin) (Mylotarg™)。(參見例如Drago等人, 2021 Nature Reviews18, 327-344; Mckertish等人, 2021 Biomedicines9, 872; Khongorzui等人, 2020 Molecular Cancer Res. 18:3-19; Bross等人, 2001 Clin. Cancer Res. 7, 1490-1496; Hamann等人, 2002 Bioconjug. Chem. 13, 47-58; Lamb, 2017 Drugs77, 1603-1610)

喜樹鹼係靶向核酶拓樸異構酶I的一類化學治療劑。1966年，在系統性篩選用於抗癌藥物的天然產物期間，發現喜樹鹼(CPT)。CPT係分離自喜樹( Camptotheca acuminata) (一種原產於中國且用於傳統中藥的樹)的樹皮及莖幹。美國FDA已批准伊立替康(Irinotecan)與拓朴替康(topotecan)(二者均為CPT的水溶性衍生物)用於治療結腸直腸癌及卵巢癌。(Govindachari等人, 1972 Phytochem.11 (12): 3529-31; Efferth等人, 2007 Curr. Med. Chem. 14 (19): 2024-32; Masuda等人, 1992 J. Clin. Oncol. 10, 1225; Bleiberg 1999 Eur. J. Cancer35, 371; Clements等人, 1999 Cancer Chemother. Pharmacol. 44, 411; Romanelli等人, 1998 Cancer Chemother. Pharmacol. 41, 385) 喜樹鹼伊立替康拓朴替康

過去十年，對CPT衍生物的研究及開發已取得重大成果。不良的溶解性及在生理條件下低於預期的活性已限制了適合的CPT類似物的臨床開發。

儘管近年來對ADC的臨床開發獲得顯著進展，但以CPT為主之ADC的設計及開發面臨諸多挑戰，包括效力、穩定性、聚集性及生物可用率相關問題。

極其需要有效力且適於開發的新穎CPT類似物及基於此類化合物的免疫綴合物。

發明概要

本發明提供新穎的CPT類似物，其具有高細胞毒性及有利的穩定性及其他特徵，從而使得其適合單獨使用或以免疫綴合物使用。本文所揭露之CPT類似物的特徵為位置10存在待與連接子綴合的胺基。此設計騰出位置7用於進一步的變化，以微調有效負載，從而適合不同的ADC構築體及應用。高效力、高穩定性、低免疫原性以及令人滿意的溶解性使得此等化合物理想地適用作細胞毒性劑及用於開發免疫綴合物作為癌症的新穎治療劑。

在一個態樣中，本發明大體上係關於具有結構式(I)之化合物： (I) 或其醫藥學上可接受之形式，其中 R ¹為H或鹵素； R ²為R ^2a、OR ^2a或NR ^2bR ^2c； R ³為H或C ₁ _-6烷基； R ⁴為H、C ₁ _-6烷基或L ^Z-R ^Z，其中R ¹及R ³，或R ¹及R ⁴，連同分別與其結合的碳及氮原子一起，可任擇地形成未經取代或經取代的5員或6員雜芳基； L ²不存在或為CH ₂； L ^Z不存在或為連接子； R ^2a、R ^2b及R ^2c中之各者獨立地選自H、C ₁ _-6烷基、C ₄ _-6碳環或雜環，或C ₅ _-6芳基或雜芳基；或R ^2b及R ^2c連同其結合的N原子一起形成未經取代或經取代的4員至7員雜環，其中C ₁ _-6烷基、C ₅ _-6芳基或雜芳基或4員至7員雜環中之各者未經取代或經取代；並且 R ^Z不存在或為抗原結合部分。

在某些實施例中，本發明化合物具有結構式(I ^a)：。 (I ^a)

在某些實施例中，本發明化合物具有結構式(I ^b)：。 (I ^b)

在某些實施例中，本發明化合物具有結構式(II)：。 (II)

在某些實施例中，本發明化合物具有式(II ^a)：。 (II ^a)

在某些實施例中，本發明化合物具有式(II ^b)：。 (II ^b)

在另一態樣中，本發明大體上係關於一種免疫綴合物，其具有結構式(III)： (III) 或其醫藥學上可接受之形式，其中 Ab表示抗原結合部分； R ¹為H或鹵素； R ²為R ^2a、OR ^2a或NR ^2bR ^2c； R ³為H或C ₁ _-6烷基，其中R ¹及R ³連同分別與其結合的碳及氮原子一起，可任擇地形成未經取代或經取代的5員或6員雜芳基； L ^Ab為連接子； R ^2a、R ^2b及R ^2c中之各者獨立地選自H、C ₁ _-6烷基、C ₄ _-6碳環或雜環、或C ₅ _-6芳基或雜芳基；或R ^2b及R ^2c連同其結合的N原子一起形成未經取代或經取代的4員至7員雜環；並且 n為1至約20範圍內之整數。

在某些實施例中，本發明之免疫綴合物具有結構式(III ^a)：。 (III ^a)

在某些實施例中，本發明之免疫綴合物具有結構式(III ^b)：。 (III ^b)

在又另一態樣中，本發明大體上係關於一種組成物，其包含本文所揭露之化合物，諸如根據式(I)-(II ^b)中之任一者及本文所揭露之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，及任擇地醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑。

在又另一態樣中，本發明大體上係關於一種醫藥組成物，其包含本文所揭露之免疫綴合物，諸如根據式(III)-(III ^b)中之任一者的免疫綴合物，或其醫藥學上可接受之鹽，及醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑。

在又另一態樣中，本發明大體上係關於一種用於治療或減輕疾病或病狀的方法，其包含向有需要之個體投予治療有效量的本文所揭露之免疫綴合物。

在某些實施例中，該疾病或病狀為癌症。

在又另一態樣中，本發明大體上係關於本文所揭露之免疫綴合物用於製造藥劑的用途。

在又另一態樣中，本發明大體上係關於本文所揭露之免疫綴合物用於治療癌症的用途。

在又另一態樣中，本發明大體上係關於一種組合，其包含治療有效量的本文所揭露之免疫綴合物及一或多種治療活性輔劑及/或佐劑。

較佳實施例之詳細說明

本發明部分地基於作為免疫綴合物之有效負載之新穎CPT類似物的發現，該等新穎CPT類似物具有有利的效力、穩定性及其他概況。

對現有CPT的關鍵結構改良包括將胺基置於位置10用於鍵聯，從而允許微調位置10的特性，以適合廣泛範圍的ADC構築體及應用。具高效力且穩定的細胞毒性劑亦具有令人滿意的溶解性及低免疫原性，使得其適於作為免疫綴合物及新穎的癌症治療劑開發。定義

除非另外定義，否則本文所用之所有技術及科學術語具有與一般熟習本發明所屬技術者通常所瞭解相同的含義。有機化學通用原理以及特定官能部分及反應性描述於"Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 2006中。

除非術語所在之上下文另有說明，否則以下術語意欲具有以下含義。

本文所提供之範圍應理解為範圍內所有值之簡寫。舉例而言，1至16之範圍應理解為包括選自由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16組成之群的任何數字、數字組合或子範圍。

如本文所用，「至少」一特定值應理解為該值及大於該值之所有值。

如本文所用，「大於一」理解為2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、40、50、100等或其間的任何值。

除非上下文另外明確指示，否則在本說明書及隨附申請專利範圍中，單數形式「一(a)」、「一(an)」及「該(the)」包括多個提及物。

除非上下文具體陳述或顯而易見，否則如本文所用，術語「約」應理解為在此項技術中之正常容限範圍內，例如在平均值之2個標準差內。約可理解為在所述值之10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.1%、0.05%或0.01%內。除非上下文另有明確說明，否則本文所提供之所有數值均由術語約修飾。

除非上下文具體陳述或顯而易見，否則如本文所用，術語「或」應理解為包括性的。

本文所揭露之任何組成物或方法可與本文所提供之任何其他組成物及方法中的一或多者組合。

本文變數之任何定義中之化學基團清單的敍述包括該變數作為任何單一基團或所列基團組合的定義。本文變數或態樣的實施例敍述包括作為任何單一實施例的該實施例或該實施例與任何其他實施例或其一部分的組合。

術語「包含」當用於定義組成物及方法時，意指該等組成物及方法包括所敍述的要素，但不排除其他要素。術語「主要由……組成」當用於定義組成物及方法時，應意謂該等組成物及方法包括所敍述的要素且排除對該等組成物及方法具有任何重要意義之其他要素。舉例而言，「主要由……組成」係指投予明確敍述之藥理學活性劑且排除未明確敍述之藥理學活性劑。術語基本上由……組成不排除藥理學非活性劑或惰性劑，例如醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑。術語「由……組成」當用於定義組成物及方法時，應意謂排除其他成分之痕量元素及實質性方法步驟。由此等過渡術語中之各者定義的實施例均在本發明之範圍內。

本發明之某些化合物可以特定幾何或立體異構形式存在。本發明涵蓋落入本發明範圍內之所有此類化合物，包括順式及反式異構物、構型異構物、 R-及 S-鏡像異構物、非鏡像異構物、(D)-異構物、(L)-異構物、其外消旋混合物及其其他混合物。諸如烷基之取代基中可存在其他不對稱碳原子。本發明中意欲包括所有此類異構物以及其混合物。在某些實施例中，各不對稱原子具有至少50%鏡像異構物過量、至少60%鏡像異構物過量、至少70%鏡像異構物過量、至少80%鏡像異構物過量、至少90%鏡像異構物過量、至少95%鏡像異構物過量或至少99%鏡像異構物過量之 R-組態或 S-組態。對於光活性化合物而言，往往較佳的是使用一種鏡像異構物而實質性排除另一種鏡像異構物。

可根據本發明使用含有多種異構物比率中之任一者的異構物混合物。舉例而言，當僅二種異構物組合時，本發明涵蓋含有50:50、60:40、70:30、80:20、90:10、95:5、96:4、97:3、98:2、99:1或100:0異構物比率之混合物。一般熟習此項技術者將容易瞭解，更複雜的異構物混合物涵蓋類似比率。

舉例而言，若需要本發明化合物之特定鏡像異構物，則其可藉由不對稱合成或藉由用對掌性助劑衍生來製備，其中分離所得非鏡像異構物混合物且使輔助基團裂解以提供純的所需鏡像異構物。或者，在分子含有鹼性官能(諸如胺基)或酸性官能基(諸如羧基)的情況下，由適當的光學活性酸或鹼形成非鏡像異構鹽，隨後藉由此項技術中熟知之分步結晶或層析方法解析由此形成之非鏡像異構物，且隨後回收純鏡像異構物。

異構物混合物可基於成分之物理化學差異分離成純的或基本上純的幾何或光學異構物、非鏡像異構物、外消旋物，例如藉由層析及/或分步結晶分離。

下文更詳細地描述特定官能基及化學術語之定義。當列舉值範圍時，希望該範圍內涵蓋各值及子範圍。舉例而言，「C ₁ _-6烷基」意欲涵蓋C ₁、C ₂、C ₃、C ₄、C ₅、C ₆、C ₁ _-6、C ₁ _-5、C ₁ _-4、C ₁ _-3、C ₁ _-2、C ₂ _-6、C ₂ _-5、C ₂ _-4、C ₂ _-3、C ₃ _-6、C ₃ _-5、C ₃ _-4、C ₄ _-6、C ₄ _-5及C ₅ _-6烷基。

在取代基藉由自左向右書寫之其習知化學式指定的情況下，其同樣涵蓋由自右向左書寫結構產生的化學上相同之取代基，例如-C(=O)-O-等效於-O-C(=O)-。

本發明化合物之結構受到熟習此項技術者已知之化學鍵結原理的限制。因此，在基團可經多個取代基中之一或多者取代的情況下，選擇此類取代以便符合化學鍵結原理且得到內在地不會不穩定及/或一般熟習此項技術者已知在環境條件(諸如水性、中性及若干已知生理條件)下可能不穩定的化合物。

如本文所用，術語「烷基」係指僅由碳原子及氫原子組成、不含不飽和度、具有一至十個碳原子(例如C ₁ _-10烷基)之直鏈或分支鏈烴基。每當在本文中出現時，諸如「1至10」之數值範圍係指給定範圍內的各整數；例如「1至10個碳原子」意謂烷基可由1個碳原子、2個碳原子、3個碳原子等、直至且包括10個碳原子組成，但本發明定義亦涵蓋其中未指定數值範圍之術語「烷基」的存在。在一些實施例中，「烷基」可為C ₁ _-6基團。在一些實施例中，烷基具有1至10個、1至8個、1至6個或1至3個碳原子。代表性飽和直鏈烷基包括但不限於-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基及-正己基；而飽和分支鏈烷基包括但不限於-異丙基、-二級丁基、-異丁基、-三級丁基、-異戊基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基丁基及其類似基團。烷基藉由單鍵連接至母分子。除非說明書中另有說明，否則烷基任擇地經一或多個取代基取代，該等取代基獨立地包括：醯基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷基芳基、環烷基、芳烷基、芳基、芳氧基、胺基、醯胺基、甲脒基、亞胺基、疊氮基、碳酸酯、胺基甲酸酯、羰基、雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環烷基、羥基、氰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基、酯、醚、巰基、硫基、烷基硫基、芳基硫基、硫羰基、硝基、側氧基、磷酸酯、膦酸酯、亞膦酸酯、矽烷基、亞磺醯基、磺醯基、磺醯胺基、亞硫醯基、磺酸酯、脲、-Si(R ^a) ₃、-OR ^a、-SR ^a、-OC(O)-R ^a、-N(R ^a) ₂、-C(O)R _a、-C(O)OR ^a、-OC(O)N(R ^a) ₂、-C(O)N(R ^a) ₂、-N(R ^a)C(O)OR ^a、-N(R ^a)C(O)R ^a、-N(R ^a)C(O)N(R ^a) ₂、-N(R ^a)C(NR ^a)N(R ^a) ₂、-N(R ^a)S(O) _tN(R ^a) ₂(其中t為1或2)、-P(=O)(R ^a)(R ^a)或-O-P(=O)(OR ^a) ₂，其中各R ^a獨立地為氫、烷基、鹵烷基、碳環基、碳環基烷基、芳基、芳烷基、雜環烷基、雜環烷基烷基、雜芳基或雜芳基烷基，且此等部分中之各者可任擇地如本文所定義經取代。在非限制性實施例中，經取代之烷基可選自氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2-氟乙基、3-氟丙基、羥基甲基、2-羥基乙基、3-羥基丙基、苯甲基及苯乙基。

如本文所用，術語「烷氧基」係指經由氧連接至母分子結構之基團-O-烷基，包括1至10個碳原子(C ₁ _-10)的直鏈、分支鏈、飽和環狀組態及其組合。實例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、三級丁氧基、戊氧基、環丙氧基、環己氧基及其類似基團。「低碳數烷氧基」係指含有一至六個碳之烷氧基。在一些實施例中，C ₁ _-3烷氧基為涵蓋1至3個碳原子之直鏈與分支鏈烷基的烷氧基。除非說明書中另有說明，否則烷氧基可任擇地經一或多個取代基取代，該等取代基獨立地包括：醯基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷基芳基、環烷基、芳烷基、芳基、芳氧基、胺基、醯胺基、甲脒基、亞胺基、疊氮基、碳酸酯、胺基甲酸酯、羰基、雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環烷基、羥基、氰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基、酯、醚、巰基、硫基、烷基硫基、芳基硫基、硫羰基、硝基、側氧基、磷酸酯、膦酸酯、亞膦酸酯、矽烷基、亞磺醯基、磺醯基、磺醯胺基、亞硫醯基、磺酸酯、脲、-Si(R ^a) ₃、-OR ^a、-SR ^a、-OC(O)-R ^a、-N(R ^a) ₂、-C(O)R _a、-C(O)OR ^a、-OC(O)N(R ^a) ₂、-C(O)N(R ^a) ₂、-N(R ^a)C(O)OR ^a、-N(R ^a)C(O)R ^a、-N(R ^a)C(O)N(R ^a) ₂、-N(R ^a)C(NR ^a)N(R ^a) ₂、-N(R ^a)S(O) _tN(R ^a) ₂(其中t為1或2)、-P(=O)(R ^a)(R ^a)或-O-P(=O)(OR ^a) ₂，其中各R ^a獨立地為氫、烷基、鹵烷基、碳環基、碳環基烷基、芳基、芳烷基、雜環烷基、雜環烷基烷基、雜芳基或雜芳基烷基，且此等部分中之各者可任擇地如本文所定義經取代。

如本文所用，術語「芳族」或「芳基」係指具有6至14環原子之基團(例如C ₆ _-14芳族或C ₆ _-14芳基)，其中至少一個具有共軛π電子系統的環為碳環(例如苯基、茀基及萘基)。在一些實施例中，芳基為C ₆ _-10芳基。舉例而言，由經取代之苯衍生物形成且在環原子處具有自由價的二價基團命名為經取代之伸苯基。在其他實施例中，自單價多環烴基(其名稱因自具有自由價之碳原子移除一個氫原子而結尾為「-基」)衍生之二價基團的命名方式為將「-亞基」添加至對應單價基團的名稱中，例如具有二個連接點的萘基稱為亞萘基。每當在本文中出現時，諸如「6至14芳基」之數值範圍係指給定範圍內之各整數；例如，「6至14個環原子」意謂芳基可由6個環原子、7個環原子等、至多且包括14個環原子組成。該術語包括單環或稠環多環(亦即，共用相鄰環原子對之環)基團。多環芳基包括雙環、三環、四環及其類似物。在多環基團中，僅需一個環為芳族，因此芳基定義涵蓋諸如二氫茚基之基團。芳基之非限制性實例包括苯基、丙烯合萘基、萘基、四氫萘基、菲基、蒽基、茀基、吲哚基、二氫茚基及其類似基團。除非在說明書中另有說明，否則芳基部分可任擇地經一或多個取代基取代，該等取代基獨立地包括：醯基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷基芳基、環烷基、芳烷基、芳基、芳氧基、胺基、醯胺基、甲脒基、亞胺基、疊氮基、碳酸酯、胺基甲酸酯、羰基、雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環烷基、羥基、氰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基、酯、醚、巰基、硫基、烷基硫基、芳基硫基、硫羰基、硝基、側氧基、磷酸酯、膦酸酯、亞膦酸酯、矽烷基、亞磺醯基、磺醯基、磺醯胺基、亞硫醯基、磺酸酯、脲、-Si(R ^a) ₃、-OR ^a、-SR ^a、-OC(O)-R ^a、-N(R ^a) ₂、-C(O)R _a、-C(O)OR ^a、-OC(O)N(R ^a) ₂、-C(O)N(R ^a) ₂、-N(R ^a)C(O)OR ^a、-N(R ^a)C(O)R ^a、-N(R ^a)C(O)N(R ^a) ₂、-N(R ^a)C(NR ^a)N(R ^a) ₂、-N(R ^a)S(O) _tN(R ^a) ₂(其中t為1或2)、-P(=O)(R ^a)(R ^a)或-O-P(=O)(OR ^a) ₂，其中各R ^a獨立地為氫、烷基、鹵烷基、碳環基、碳環基烷基、芳基、芳烷基、雜環烷基、雜環烷基烷基、雜芳基或雜芳基烷基，且此等部分中之各者可任擇地如本文所定義經取代。

如本文所用，術語「環烷基」及「碳環」各自指僅含有碳及氫之單環或多環基團，且可為飽和或部分不飽和的。除非說明書中另有說明，否則該術語意欲包括經取代之環烷基與未經取代之環烷基。若碳環含有至少一個雙鍵，則部分不飽和環烷基可稱為「環烯基」，或若碳環含有至少一個參鍵，則部分不飽和環烷基可稱為「環炔基」。環烷基包括具有3至13個環原子之基團(亦即，C ₃ _-13環烷基)。每當在本文中出現時，諸如「3至10」之數值範圍係指給定範圍內之各整數；例如，「3至13個碳原子」意謂環烷基可由3個碳原子、4個碳原子、5碳原子等、直至且包括13個碳原子組成。術語「環烷基」亦包括不含雜原子之橋接及螺接稠環結構。該術語亦包括單環或稠環多環(亦即，共用相鄰環原子對之環)基團。多環芳基包括雙環、三環、四環及其類似物。在一些實施例中，「環烷基」可為C ₃ _-8環烷基。在一些實施例中，「環烷基」可為C ₃ _-5環烷基。環烷基之說明性實例包括但不限於以下部分：C ₃ _-6碳環基，包括但不限於環丙基(C ₃)、環丁基(C ₄)、環戊基(C ₅)、環戊烯基(C ₅)、環己基(C ₆)、環己烯基(C ₆)、環己二烯基(C ₆)及其類似物。C ₃ _-7碳環基之實例包括降莰基(C ₇)。C ₃ _-8碳環基之實例包括前述C ₃ _-7碳環基以及環庚基(C ₇)、環庚二烯基(C ₇)、環庚三烯基(C ₇)、環辛基(C ₈)、雙環[2.2.1]庚烷基、雙環[2.2.2]辛基及類似基團。C ₃ _-13碳環基之實例包括前述C ₃ _-8碳環基以及八氫-1H茚基、十氫萘基、螺[4.5]癸基及類似基團。除非說明書中另有說明，否則環烷基可任擇地經一或多個取代基取代，該等取代基獨立地包括：醯基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷基芳基、環烷基、芳烷基、芳基、芳氧基、胺基、醯胺基、甲脒基、亞胺基、疊氮基、碳酸酯、胺基甲酸酯、羰基、雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環烷基、羥基、氰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基、酯、醚、巰基、硫基、烷基硫基、芳基硫基、硫羰基、硝基、側氧基、磷酸酯、膦酸酯、亞膦酸酯、矽烷基、亞磺醯基、磺醯基、磺醯胺基、亞硫醯基、磺酸酯、脲、-Si(R ^a) ₃、-OR ^a、-SR ^a、-OC(O)-R ^a、-N(R ^a) ₂、-C(O)R _a、-C(O)OR ^a、-OC(O)N(R ^a) ₂、-C(O)N(R ^a) ₂、-N(R ^a)C(O)OR ^a、-N(R ^a)C(O)R ^a、-N(R ^a)C(O)N(R ^a) ₂、-N(R ^a)C(NR ^a)N(R ^a) ₂、-N(R ^a)S(O) _tN(R ^a) ₂(其中t為1或2)、-P(=O)(R ^a)(R ^a)或-O-P(=O)(OR ^a) ₂，其中各R ^a獨立地為氫、烷基、鹵烷基、碳環基、碳環基烷基、芳基、芳烷基、雜環烷基、雜環烷基烷基、雜芳基或雜芳基烷基，且此等部分中之各者可任擇地如本文所定義經取代。術語「環烯基」及「環炔基」反映「環烷基」之以上描述，其中字首「烷」分別經「烯」或「炔」置換，且親本「烯基」或「炔基」術語係如本文中所述。舉例而言，環烯基可具有3至13個環原子，諸如5至8個環原子。在一些實施例中，環炔基可具有5至13個環原子。

如本文所用，術語「雜環」、「雜環狀」或「雜環基」係指完全飽和或部分不飽和環狀基團，例如3員至7員單環、7員至12員雙環，或10員至15員螺環或三環環系統，其在至少一個環中具有至少一個雜原子(選自由N、O及S組成之群)，其中各環中之0、1、2或3個原子可經取代基取代。含有雜原子之雜環基之各環可具有1、2、3或4個選自氮原子、氧原子及/或硫原子之雜原子，其中氮及硫雜原子可任擇地經氧化且氮雜原子可任擇地經四級銨化。雜環基可在環或環系統之任何雜原子或碳原子處連接。雜環基任擇地經取代。雜環基之實例包括但不限於環氧基、氮雜環丁烷基、氮雜環丙烷基、四氫呋喃基、四氫哌喃基、吡咯啶基、吡咯啶酮基、哌啶基、哌𠯤基、咪唑啶基、咪唑并吡啶基、噻唑啶基、二噻烷基、三噻烷基、二氧雜環戊烷基、㗁唑啶基、㗁唑啶酮基、十氫喹啉基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、𪡓啶基、硫代𠰌啉基、硫代𠰌啉基1,1-二氧化物、𠰌啉基、氮雜環庚烷基、氧氮雜環庚烷基、氮雜雙環己烷基、氮雜雙環庚烷基、氮雜雙環辛烷基、氮雜雙環壬烷基(例如八氫吲哚𠯤基)、氮雜螺庚烷基、二氫-1H,3H,5H-㗁唑并[3,4-c]㗁唑基、四氫-1'H,3'H-螺[環丙烷-1,2'-吡]、六氫-1H-吡基、六氫-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]㗁𠯤基、八氫吲哚𠯤基、氧氮雜螺壬烷基、氧氮雜螺辛烷基、二氮雜螺壬烷基、氧氮雜雙環庚烷基、六氫吡基4(1H)-氧化物，以及四氫-2H-硫哌喃基1-氧化物及四氫-2H-硫哌喃基1,1-二氧化物。

如本文所用，術語「雜環烷基」係指環烷基，其具有一或多個選自除碳以外之原子的骨架鏈原子，例如O、N、S、P或其組合。除非說明書中另有說明，否則該術語意欲包括經取代之雜環烷基與未經取代之雜環烷基。雜環烷基之說明性實例包括2-羥基-氮雜環丙-1-基、3-側氧基-1-氧雜環丁-2-基、2,2-二甲基-四氫呋喃-3-基、3-羧基-𠰌啉-4-基、1-環丙基-4-甲基-哌𠯤-2-基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氫-2H-哌喃基、1,2,3,4-四氫吡啶、3,4-二氫-2H-[1,4]㗁𠯤等。

如本文所用，術語「鹵素」係指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。如本文所用，術語「鹵化物」或「鹵基」意謂氟、氯、溴或碘。術語「鹵烷基」、「鹵烯基」、「鹵炔基」及「鹵烷氧基」包括經一或多個鹵基或經其組合取代之烷基、烯基、炔基及烷氧基結構。舉例而言，術語「氟烷基」及「氟烷氧基」分別包括鹵烷基及鹵烷氧基，其中鹵基為氟，諸如但不限於三氟甲基、二氟甲基、2,2,2-三氟乙基、1-氟甲基-2-氟乙基及其類似基團。烷基、烯基、炔基及烷氧基中之各者如本文所定義且可如本文所定義任擇地進一步經取代。

如本文所用，術語「雜原子」係指氧(O)、氮(N)、硫(S)及磷(P)。

如本文所用，術語「雜烷基」係指一種烷基，其具有一或多個選自除碳之外的骨架鏈原子，例如氧、氮、硫、磷或其組合。可給定數值範圍，例如C ₁ _-4雜烷基，其係指總鏈長，在此實例中為4個原子長。舉例而言，-CH ₂OCH ₂CH ₃基團稱為「C ₄」雜烷基，其在原子鏈長描述中包括雜原子中心。可經由雜烷基鏈中之雜原子或碳連接至親本分子結構。舉例而言，含N雜烷基部分係指其中至少一個骨架原子為氮原子的基團。雜烷基中之一或多個雜原子可任擇地經氧化。一或多個氮原子存在時，亦可任擇地經四級銨化。舉例而言，雜烷基亦包括經一或多個氮氧化物(-O-)取代基取代之骨架鏈。例示性雜烷基包括但不限於醚，諸如甲氧基乙基(-CH ₂CH ₂OCH ₃)、乙氧基甲基(-CH ₂OCH ₂CH ₃)、(甲氧基甲氧基)乙基(-CH ₂CH ₂OCH ₂OCH ₃)、(甲氧基甲氧基)甲基(-CH ₂OCH ₂OCH ₃)及(甲氧基乙氧基)甲基(-CH ₂OCH ₂CH ₂OCH ₃)及類似基團；胺，諸如(-CH ₂CH ₂NHCH ₃、-CH ₂CH ₂N(CH ₃) ₂、-CH ₂NHCH ₂CH ₃、-CH ₂N(CH ₂CH ₃)(CH ₃))及類似基團。

如本文所用，術語「雜芳基」或替代地，「雜芳族」係指5員至18員單環或多環(例如雙環、三環、四環及其類似物)芳族環系統(例如具有6、10或14個以環狀陣列共有的π電子)之基團，該芳族環系統中具有環碳原子及1至6個環雜原子，其中各雜原子獨立地選自氮、氧、磷及硫(「5員至18員雜芳基」)。雜芳基多環環系統可在一個或二個環中包括一或多個雜原子。每當在本文中出現時，諸如「5至18」之數值範圍係指給定範圍內之各整數；例如，「5至18個環原子」意謂雜芳基可由5個環原子、6個環原子等、直至且包括18個環原子組成。在一些情況下，雜芳基可具有5至14個環原子。在一些實施例中，自單價雜芳基(其名稱因自具有自由價之原子移除一個氫原子而結尾為「-基」)衍生之二價基團的命名方式為將「-伸基」添加至對應單價基團中，例如具有二個連接點的吡啶基為伸吡啶基。

舉例而言，含N「雜芳族」或「雜芳基」部分係指環中之至少一個骨架原子為氮原子的芳族基團。雜芳基中之一或多個雜原子可任擇地經氧化。一或多個氮原子存在時，亦可任擇地經四級銨化。雜芳基亦包括經一或多個氮氧化物(-O-)取代基取代之環系統，諸如吡啶基N-氧化物。雜芳基經由環之任何原子連接至親本分子結構。

「雜芳基」亦包括其中如上文所定義之雜芳基環與一或多個芳基稠合的環系統，其中連至親本分子結構的連接點位於芳基或雜芳基環上，或其中如上文所定義之雜芳基環與一或多個環烷基或雜環基稠合的環系統，其中連至親本分子結構的連接點位於雜芳基環上。對於其中一個環不含雜原子之多環雜芳基(例如吲哚基、喹啉基、咔唑基及其類似基團)而言，連至親本分子結構的連接點可位於任一環上，亦即，具有雜原子之環(例如2-吲哚基)或不含雜原子之環(例如5-吲哚基)。在一些實施例中，雜芳基為5至10員芳族環系統，該芳族環系統中提供有環碳原子及1至4個環雜原子，其中各雜原子獨立地選自氮、氧、磷及硫(「5員至10員雜芳基」)。在一些實施例中，雜芳基為5員至8員芳族環系統，該芳族環系統中提供有環碳原子及1至4個環雜原子，其中各雜原子獨立地選自氮、氧、磷及硫(「5員至8員雜芳基」)。在一些實施例中，雜芳基為5員至6員芳族環系統，該芳族環系統中提供有環碳原子及1至4個環雜原子，其中各雜原子獨立地選自氮、氧、磷及硫(「5員至6員雜芳基」)。在一些實施例中，該5員至6員雜芳基具有1至3個選自氮、氧、磷及硫之環雜原子。在一些實施例中，該5員至6員雜芳基具有1至2個選自氮、氧、磷及硫之環雜原子。在一些實施例中，5員至6員雜芳基具有1個選自氮、氧、磷及硫之環雜原子。

雜芳基之實例包括但不限於氮呯基、吖啶基、苯并咪唑基、苯并吲哚基、1,3-苯并間二氧雜環戊烯基、苯并呋喃基、苯并㗁唑基、苯并[d]噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[b][1,4]二㗁呯基、苯并[b][1,4]㗁𠯤基、1,4-苯并二㗁烷基、苯并萘并呋喃基、苯并㗁唑基、苯并間二氧雜環戊烯基、苯并二氧雜環己烯基、苯并㗁唑基、苯并哌喃基、苯并哌喃酮基、苯并呋喃基、苯并哌喃酮基、苯并呋基、苯并噻唑基、苯并噻吩基(benzothienyl/benzothiophenyl)、苯并噻吩并[3,2-d]嘧啶基、苯并三唑基、苯并[4,6]咪唑并[1,2-a]吡啶基、咔唑基、㖕啉基、環戊并[d]嘧啶基、6,7-二氫-5H-環戊并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、5,6-二氫苯并[h]喹唑啉基、5,6-二氫苯并[h]㖕啉基、6,7-二氫-5H苯并[6,7]環庚并[1,2-c]嗒𠯤基、二苯并呋喃基、二苯并噻吩基、呋喃基、呋呫基、呋喃酮基、呋喃并[3,2-c]吡啶基、5,6,7,8,9,10-六氫環辛并[d]嘧啶基、5,6,7,8,9,10-六氫環辛并[d]嗒𠯤基、5,6,7,8,9,10-六氫環辛并[d]吡啶基、異噻唑基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、吲唑基、異吲哚基、吲哚啉基、異吲哚啉基、異喹啉基、吲哚𠯤基、異㗁唑基、5,8-甲橋-5,6,7,8-二氫喹唑啉基、㖠啶基、1,6-㖠啶酮基、㗁二唑基、2-側氧基氮呯基、㗁唑基、環氧乙烷基、5,6,6a,7,8,9,10,10a-八氫苯并[h]喹唑啉基、1-苯基-lH-吡咯基、啡𠯤基、啡噻𠯤基、啡㗁𠯤基、呔𠯤基、喋啶基、嘌呤基、哌喃基、吡咯基、吡唑基、吡唑并[3,4-d]嘧啶基、吡啶基、吡啶并[3,2-d]嘧啶基、吡啶并[3,4-d]嘧啶基、吡𠯤基、嘧啶基、嗒𠯤基、吡咯基、喹唑啉基、喹喏啉基、喹啉基、異喹啉基、四氫喹啉基、5,6,7,8-二氫喹唑啉基、5,6,7,8-四氫苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、6,7,8,9-四氫-5H-環庚并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、5,6,7,8-四氫吡啶并[4,5-c]嗒𠯤基、噻唑基、噻二唑基、噻哌喃基、三唑基、四唑基、三𠯤基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、噻吩[3,2-d]嘧啶基、噻吩并[2,3-c]吡啶基及苯硫基(亦即，噻吩基)。除非說明書中另有說明，否則雜芳基部分可任擇地經一或多個取代基取代，該等取代基獨立地包括：醯基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷基芳基、環烷基、芳烷基、芳基、芳氧基、胺基、醯胺基、甲脒基、亞胺基、疊氮基、碳酸酯、胺基甲酸酯、羰基、雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環烷基、羥基、氰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基、酯、醚、巰基、硫基、烷基硫基、芳基硫基、硫羰基、硝基、側氧基、磷酸酯、膦酸酯、亞膦酸酯、矽烷基、亞磺醯基、磺醯基、磺醯胺基、亞硫醯基、磺酸酯、脲、-Si(R ^a) ₃、-OR ^a、-SR ^a、-OC(O)-R ^a、-N(R ^a) ₂、-C(O)R _a、-C(O)OR ^a、-OC(O)N(R ^a) ₂、-C(O)N(R ^a) ₂、-N(R ^a)C(O)OR ^a、-N(R ^a)C(O)R ^a、-N(R ^a)C(O)N(R ^a) ₂、-N(R ^a)C(NR ^a)N(R ^a) ₂、-N(R ^a)S(O) _tN(R ^a) ₂(其中t為1或2)、-P(=O)(R ^a)(R ^a)或-O-P(=O)(OR ^a) ₂，其中各R ^a獨立地為氫、烷基、鹵烷基、碳環基、碳環基烷基、芳基、芳烷基、雜環烷基、雜環烷基烷基、雜芳基或雜芳基烷基，且此等部分中之各者可任擇地如本文所定義經取代。

如本文所用，術語「投予(administer)」及「投予(administering)」意謂經口投予、作為栓劑投予、局部接觸、靜脈內、非經腸、腹膜內、肌肉內、病灶內、鞘內、顱內、吸入、眼內、鼻內或皮下投予個體，或將緩慢釋放裝置(例如小型滲透泵)植入個體。適用於特定患者之投藥途徑將取決於所治療之疾病或病狀的性質及嚴重度或所用療法之性質以及活性化合物之性質。

投藥可藉由任何適合途徑達成，包括非經腸及經黏膜(例如口頰、舌下、齶、齒齦、鼻、陰道、直腸或經皮)。非經腸投藥包括例如靜脈內、肌肉內、小動脈內、皮內、皮下、腹膜內、心室內及顱內。其他遞送模式包括但不限於使用脂質體調配物、靜脈內輸注、經皮貼片等。

如本文所用，術語「共投藥」係指個體之身體中(例如血液中)同時存在二種藥理學藥劑。二種藥理學藥劑可同時或依序投予。

如本文所用，術語「親和力」係指抗原結合部分(例如抗體)與抗原在單一抗原位點處發生相互作用之力。

如本文所用，術語「胺基酸」係指通式NH ₂-CHR-COOH之分子，其中「R」為多種不同側鏈之一，或具有親本胺基酸之肽內的殘基。胺基酸包括天然存在之胺基酸，其中「R」為天然存在之胺基酸中發現的取代基。「R」亦可為天然存在之胺基酸中未發現的取代基。術語「胺基酸殘基」係指當與另一胺基酸接合時在失去水分子之後保留的胺基酸部分。術語「經修飾之胺基酸」係指具有「R」取代基之胺基酸，該取代基不對應於二十種經基因編碼之胺基酸之一。

如本文所用，術語「抗原」如本文所用意指促使免疫系統產生針對其之抗體或細胞介導之特異性免疫反應的任何物質。疾病相關抗原為與任何疾病相關、促使免疫系統產生針對其之抗體或細胞介導之特異性反應的任何物質。抗原能夠被免疫系統識別且/或能夠誘導體液免疫反應及/或細胞免疫反應，引起B淋巴球及/或T淋巴球活化。抗原可具有一或多個抗原決定基(B細胞及/或T細胞抗原決定基)。較佳地，抗原典型地以高選擇性方式與其相應抗體或TCR發生反應，而與可由其他抗原誘發的多種其他抗體或TCR不反應。如本文所用，抗原亦可為若干個別抗原之混合物。

如本文所用，術語「抗原結合部分」係指能夠特異性結合至抗原的部分，且包括但不限於抗體及抗體片段、肽及小分子配位體。

如本文所用，術語「抗體」係指能夠結合抗原決定基或抗原決定子之分子。該術語意欲包括完整抗體及其抗原結合片段。該術語涵蓋多株、單株、嵌合、Fabs、Fvs、單鏈抗體及單個或多個免疫球蛋白可變鏈或CDR區域設計以及雙特異性及多特異性抗體。抗體可來自任何動物來源。較佳地，抗體為哺乳動物，例如人類、鼠類、兔、山羊、天竺鼠、駱駝、馬及其類似物，或其他適合動物。抗體可識別多肽或聚核苷酸抗原。該術語包括活性片段，包括例如免疫球蛋白之抗原結合片段、重鏈之可變區及/或恆定區、輕鏈之可變區及/或恆定區、互補決定區(CDR)及構架區。該術語包括多株及單株抗體製劑，以及包括以下之製劑：雜交抗體、變異抗體、嵌合抗體、雜交抗體分子、F(ab) ₂及F(ab)片段；Fv分子(例如非共價異二聚體)、二聚體及三聚體抗體片段構築體；小型抗體、人源化抗體分子，及獲自此類分子的任何功能片段，其中此類片段保持特異性結合。

如本文所用，術語「抗原結合片段」係指抗體之一或多個部分，該等部分保持與抗原之抗原決定基特異性相互作用(例如結合、空間位阻、穩定/去穩定化、空間分佈)的能力。

結合片段之實例包括但不限於單鏈Fvs (scFv)、二硫鍵連接的Fvs (sdFv)、Fab片段、F(ab')片段，由V _L、V _H、C _L及C _H1域組成的單價片段；F(ab)2片段，包含二個Fab片段的二價片段，該二個Fab片段藉由位於鉸鏈區之二硫橋鍵連接；由V _H及C _H1區域組成的Fd片段；由抗體單臂之V _L及V _H域組成的Fv片段；dAb片段(Ward等人, 1989 Nature341:544- 546)，其由V _H區域組成；以及經分離之互補決定區(CDR)，或抗體之其他抗原決定基結合片段。

另外，Fv片段之二個區域(V _L及V _H)可使用重組方法、藉由合成連接子接合，該合成連接子能夠使其以單一蛋白質鏈(其中V _L與V _H區配對形成單價分子)形式製成。(稱為單鏈Fv (「scFv」)；參見例如Bird等人, 1988 Science242:423-426; 及Huston等人, 1988 Proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879-5883.) 亦希望此類單鏈抗體涵蓋於術語「抗原結合片段」內。此等抗原結合片段係使用熟習此項技術者已知之習知技術獲得，且以與完整抗體相同之方式來篩選片段供使用。

抗原結合片段亦可併入單域抗體、最大抗體、小型抗體、奈米抗體、胞內抗體、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、v-NAR及雙scFv中。(參見例如Hollinger及Hudson, 2005 Nature Biotechnology23:1 126-1136.) 抗原結合片段可移植於基於多肽(諸如III型纖維結合蛋白(Fn3))的支架中。(參見例如描述纖維結合蛋白多肽單功能抗體的美國專利第6,703,199號。) 抗原結合片段可併入包含一對串聯Fv區段(V _H-C _H1-V _H-C _H1)之單鏈分子中，該對串聯Fv區段連同互補輕鏈多肽一起形成一對抗原結合區。(Zapata等人, 1995 Protein Eng. 8:1057-1062；美國專利第5,641 ,870號。)

如本文所用，術語「雙特異性抗體」或「雙特異性」係指對至少二個不同抗原性抗原決定基具有結合特異性之抗體，典型地為單株抗體。抗原決定基可來自相同抗原或二種不同抗原。用於製造雙特異性抗體之方法為此項技術中已知。舉例而言，可利用二種免疫球蛋白重鏈/輕鏈對之共表現，以重組方式產生雙特異性抗體。替代地，可利用化學鍵聯製備雙特異性抗體。雙特異性抗體包括雙特異性抗體片段。(參見例如Milstein等人, 1983 Nature305:537-39; Brennan等人, 1985 Science229:81; Hollinger等人, 1994 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:6444-48; Gruber等人, 1994 J. Immunol. 152:5368-74。)

如本文所用，術語「嵌合抗體」或「嵌合」係指抗體，其中重鏈及/或輕鏈之一部分與來源於特定物種或屬於特定抗體類別或亞類之抗體中的對應序列一致或同源，而該或該等鏈之其餘部分與來源於另一物種或屬於另一抗體類別或亞類之抗體中的對應序列一致或同源；以及此類抗體的片段，只要其特異性結合目標抗原且/或展現所需生物活性即可。

如本文所用，術語「人類抗體」係指可變區中之構架區與CDR區均來源於人源序列的抗體。此外，若抗體含有恆定區，則該恆定區亦來源於此類人類序列，例如人類生殖系序列，或人類生殖系序列或抗體之突變型，其含有來源於人類構架序列分析之共同構架序列，例如Knappik等人, 2000 J . Mol . Biol .296:57-86中所述)。人類抗體可包括不由人類序列編碼之胺基酸殘基，例如藉由活體外隨機或定點突變誘發或藉由活體內體細胞突變引入的突變，或促進穩定性或製造的取代。

如本文所用，術語「人源化抗體」係指含有來自非人類(例如鼠類)抗體以及人類抗體之序列的抗體。此類抗體係含有來源於非人類免疫球蛋白之最小序列的嵌合抗體。一般而言，人源化抗體將包含至少一個且典型地二個可變區域的基本上全部，其中全部或基本上全部的高變環對應於非人類免疫球蛋白之高變環且全部或基本上全部的FR區為具有人類免疫球蛋白序列之FR區。人源化抗體任擇地亦包含免疫球蛋白恆定區(Fc)的至少一部分，典型地為人類免疫球蛋白之恆定區的至少一部分。(參見例如Cabilly的美國專利第4,816,567號；Queen等人, 1989 Proc. Nat'l Acad. Sci. USA86:10029-10033; ANTIBODY ENGINEERING: A PRACTICAL APPROACH, Oxford University Press 1996.)

如本文所用，術語「單株抗體」係指自基本上均質抗體群體獲得的抗體，亦即，除了可少量存在的可能天然存在之突變外，構成該群體之個別抗體為相同的。單株抗體具有針對單一抗原性抗原決定基的高度特異性。相比之下，習知(多株)抗體製劑典型地包括針對不同抗原決定基(或對其具有特異性)之多種抗體。「單株」表示獲自基本上均質抗體群之抗體特性，且不應理解為需要藉由任何特定方法產生抗體。舉例而言，根據本發明使用的單株抗體可藉由此項技術中已知之各種方法製得，包括首次由Kohler等人, 1975 Nature256: 495所述的融合瘤方法，或可藉由重組DNA方法(參見例如美國專利第4,816,567號)製得。「單株抗體」亦可使用例如以下文獻中所述之技術自噬菌體抗體庫分離：Clackson等人, 1991 Nature352: 624-628及Marks等人 1991 J. Mol. Biol. 222: 581-597。此等單株抗體通常將以至少約1 μM，更通常至少約300 nM，典型地至少約30 nM，較佳至少約10 nM之Kd結合。

如本文所用，術語「生物活性」實體或具有「生物活性」之實體為具有天然存在之分子之結構、調節或生物化學功能或與代謝或生理學過程相關之任何功能的實體。具有生物活性的多肽或其片段包括可參與生物過程或反應且/或可產生所需功效的多肽或其片段。生物活性可包括改善的所需活性或減少的非所需活性。舉例而言，一種實體當其參與與另一分子之分子相互作用時，當其在緩解疾病病狀方面具有治療價值時，當其在誘導免疫反應方面具有預防價值時，或當其在測定分子之存在方面具有診斷及/或預後價值時展現生物活性。生物活性蛋白或多肽可為天然存在的，或其可由已知組分合成，例如藉由重組或化學合成，且可包括異源組分。

如本文所用，術語「癌症」及「癌變」係指或描述哺乳動物的生理學病狀，該病狀的典型特徵為細胞生長的調控異常。癌症之實例包括但不限於癌瘤、淋巴瘤、肉瘤、母細胞瘤及白血病。此類癌症之更特定實例包括鱗狀細胞癌、肺癌、胰臟癌、子宮頸癌、膀胱癌、肝腫瘤、乳癌、結腸癌及頭頸癌。

如本文所用，術語「可裂解」連接子係指連接子或連接子組分，其藉由共價接頭將二個部分連接，但在生理學相關條件下分裂而將各部分之間的共價接頭切斷。典型地，可裂解連接子在活體內之胞內環境中的切斷比在細胞外時更快，使得有效負載之釋放優先發生於目標細胞內部。裂解可為酶促或非酶促的。典型地自抗體釋放有效負載而不會使抗體降解。裂解可保留與有效負載連接之連接子或連接子組分的一部分，或其可在不保留連接子或連接子組分之任何殘餘部分的情況下釋放有效負載(亦即，無痕跡釋放)。

如本文所用，術語「不可裂解」連接子係指尤其不容易在生理學條件下分裂的連接子或連接子組分，亦即，其至少與免疫綴合物之抗體或抗原結合片段部分一樣穩定。此類連接子有時稱為「穩定」，意謂其足以抵抗降解，從而保持有效負載與抗原結合部分的連接，直至抗原結合部分本身至少部分地降解。在此情況下，活體內Ab的降解先於連接子的裂解。具有穩定或不可裂解連接子之免疫綴合物中之抗體部分的降解可保留一些或全部連接子及抗體的一或多個胺基酸基團與活體內遞送之有效負載或藥物部分的連接。

如本文所用，術語「細胞」係指任何原核、真核、原代細胞或永生化細胞株，如組織或器官中的此類細胞之任何群組。較佳地，細胞具有哺乳動物(例如人類)來源且可被一或多種病原體感染。

術語「細胞毒性劑」與「有效負載」在本文中可互換使用且係指抑制或防止或阻止細胞之表現活性、細胞功能及/或引起細胞破壞的化合物或物質。該術語意欲包括放射性同位素、化學治療劑及毒素，諸如細菌、真菌、植物或動物來源之小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段及/或變異體。

如本文所用，術語「疾病」、「病狀」或「病症」在本文中可互換使用且係指病理性病狀，例如，可根據症狀或趨異於健康或正常狀態之其他鑑別因素鑑別的病理性病狀。術語「疾病」包括病症、症候群、病狀及損傷。疾病包括但不限於增殖性疾病、發炎疾病、免疫疾病、代謝疾病、感染性疾病及局部缺血性疾病。

如本文所用，術語「同源性」或「同源」係指二種多肽之間或二種聚核苷酸之間的序列相似性。相似性可藉由比較各序列中之位置來測定，各序列可出於比較之目的而比對。若二個多肽序列之指定位置不一致，則可藉由評估該位置之胺基酸的相似性來測定該位置之相似性或守恆性。序列之間的相似度隨該等序列所共有之匹配或同源位置的數目而變化。可使用此項技術中已知的軟體程式將二個序列對齊以測定其序列相似性百分比，諸如Ausubel等人, 1999 Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, MD中所述的軟體程式。所指定之胺基酸序列或核酸序列的術語「同源物」意指「同源物」之相應序列與所指定之胺基酸序列或核酸序列基本上一致或同源。

序列比較時，典型地，一個序列充當與測試序列比較的參考序列。使用序列對比算法時，將測試序列及參考序列輸入電腦中，必要時指示子序列座標，且指示序列算法程式參數。較佳地，可使用預設程式參數，或可指示替代參數。序列比較算法接著基於程式參數來計算測試序列相對於參考序列的序列一致性百分比。

適於測定序列一致性及序列相似性百分比的算法實例為BLAST算法，其分別描述於Altschul等人, 1977 Nuc . Acids Res .25:3389-3402及Altschul等人, 1990 J . Mol . Biol .215:403-410中。BLAST軟體可經由國家生物技術資訊中心(National Center for Biotechnology Information)在全球資訊網ncbi.nlm.nih.gov/上公開獲得。預設參數與其他非預設參數均可使用。BLASTN程式(用於核苷酸序列)係使用字長(W) 11、期望值(E) 10、M=5、N=-4及雙股比較作為預設參數。就胺基酸序列而言，BLASTP程式使用以下作為預設參數：字長為3及期望值(E)為10，以及BLOSUM62評分矩陣(參見Henikoff及Henikoff, Proc . Natl . Acad . Sci . USA89:10915 (1989))比對(B)為50，期望值(E)為10，M=5，N=-4，及雙股比較。

如本文所用，術語「一致」或「一致性」百分比在二個或更多個核酸或多肽序列之上下文中，係指二個或更多個序列或子序列相同，或具有指定百分比之相同胺基酸殘基或核苷酸(亦即，在比較窗或指定區域進行比較和比對以獲得最大對應關係時，在指定區域內約70%一致，較佳75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高一致)，如使用具有下述預設參數的BLAST或BLAST 2.0序列比較算法或藉由人工比對及目視檢查所量測。則稱此類序列「基本上一致」。此定義亦關於或可應用於測試序列之互補序列。該定義亦包括具有缺失及/或添加之序列以及具有取代之序列。如下所述，較佳算法可考慮空位及其類似者。較佳地，一致性存在於至少約25、50、75、100、150、200個胺基酸或核苷酸長度的區域上，且時常存在於225、250、300、350、400、450、500個胺基酸或核苷酸長度的區域上或存在於胺基酸或核酸序列之全長上。

本發明化合物可單獨投予或可共投予患者。共投予意欲包括化合物個別地或組合(超過一種化合物或藥劑)同時或依序投予。因此，當需要時，亦可將製劑與其他活性物質組合(例如，以減少代謝降解)。

本發明之組成物可經皮，藉由局部途徑遞送，或調配為敷藥棒、溶液、懸浮液、乳液、凝膠、乳膏、軟膏、糊劑、膠凍、塗料、散劑及氣溶膠。口服製劑包括適合於患者攝入的錠劑、丸劑、散劑、糖衣藥丸、膠囊、液體、口含錠、扁囊劑、凝膠、糖漿、漿液、懸浮液等。固體形式製劑包括散劑、錠劑、丸劑、膠囊、扁囊劑、栓劑及可分散顆粒劑。液體形式製劑包括溶液、懸浮液及乳液，例如水或水/丙二醇溶液。

本發明之組成物可另外包括用以提供持續釋放及/或舒適度之組分。此類組分包括高分子量陰離子型黏液模擬(mucomimetic)聚合物、膠凝化多醣及細粉狀藥物載劑基質。此等組分更詳細地論述於美國專利第4,911,920號；第5,403,841號；第5,212,162號；及第4,861,760號中。此等專利之全部內容以全文引用之方式併入本文中用於所有目的。本發明之組成物亦可以微球體形式遞送以在體內緩慢釋放。舉例而言，微球體可經由皮內注射在皮下緩慢釋放之含藥物微球體來投予(參見Rao, 1995 J . Biomater Sci . Polym .編 7:623-645)；以可生物降解及可注射凝膠調配物形式來投予(參見例如Gao 1995 Pharm . Res .12:857-863)；或以經口投予之微球體形式來投予(參見例如Eyles 1997 J . Pharm . Pharmacol .49:669-674)。

如本文所用，術語「需要」治療係指在生物學上、在醫學上或在生命品質上受益於此類治療的個體。

如本文所用，片語「特異性結合」或「選擇性結合」當在描述抗原(例如蛋白質或聚醣)與抗體、抗體片段或抗體源結合劑之間相互作用之上下文中使用時，係指一種結合反應，其測定異質蛋白質群及其他生物製劑(例如生物樣品，例如血液、血清、血漿或組織樣品)中之抗原的存在。因此，在某些指定的免疫分析條件下，具有特定結合特異性的抗體或結合劑對特定抗原的結合為背景的至少二(2)倍且不以顯著量實質性結合至存在於樣品中的其他抗原。在實施例中，在指定的免疫分析條件下，具有特定結合特異性的抗體或結合劑對特定抗原的結合為背景的至少十(10)倍且不以顯著量實質性結合至存在於樣品中的其他抗原。在此類條件下特異性結合至抗體或結合劑可能需要根據針對特定蛋白質之特異性來選擇抗體或藥劑。需要或適當時，可藉由減除與來自其他物種(例如小鼠或大鼠)或其他亞型之分子交叉反應的抗體來達成此選擇。或者，在一些實施例中，選擇與某些所需分子交叉反應的抗體或抗體片段。

多種免疫分析形式可用於選擇與特定蛋白質發生特異性免疫反應的抗體。舉例而言，固相ELISA免疫分析通常用於選擇與蛋白質具有特異性免疫反應性之抗體。(關於可用於測定特異性免疫反應性之免疫分析形式及條件的描述，參見例如Harlow及Lane, Using Antibodies, A Laboratory Manual (1998)。) 典型地，特異性或選擇性結合反應產生的信號為背景信號的至少二倍且更典型地，為背景信號的至少10至100倍。

如本文所用，術語「治療有效量」係指一或多種治療劑足以達成預定治療功效而副作用最小或無不良副作用的劑量。治療有效量可容易由熟練的醫師確定，例如首先投予低劑量的藥理學藥劑且接著逐漸地增加劑量直至達成所需治療功效且副作用最小或無不良副作用為止。

術語「免疫綴合物」與「抗體-藥物綴合物」在本文中可互換使用且係指其中抗原結合部分(例如抗體或其抗原結合片段、肽或小分子配位體)與細胞毒性劑或有效負載鍵聯的化合物。該鍵聯可為共價鍵或非共價相互作用且可包括螯合。因此，術語「免疫綴合物」及「抗體-藥物綴合物」包括肽-藥物綴合物及小分子-藥物綴合物。各種連接子及連接策略在此項技術中已知且可用於形成免疫綴合物。

如本文所用，在提及生物學目標抑制劑相互作用時，術語「抑制(inhibition)」、「抑制(inhibit)」及「抑制(inhibiting)」及其類似形式係指相對於抑制劑不存在下的蛋白質活性或功能，負面地影響(例如減少)蛋白質之活性或功能。在實施例中，抑制意謂相對於抑制劑不存在下的蛋白質濃度或位準，負面地影響(例如減少)蛋白質濃度或位準。在實施例中，抑制係指減少疾病或疾病症狀。在實施例中，抑制係指降低特定蛋白質目標之活性。抑制包括至少部分地、部分地或完全地阻斷刺激，減少、預防或延遲活化，或不活化、去敏或下調信號轉導或酶促活性或蛋白質之量。在實施例中，抑制係指直接相互作用(例如抑制劑結合至目標蛋白質)引起目標蛋白質的活性降低。在實施例中，抑制係指間接相互作用(例如抑制劑結合至活化目標蛋白質的蛋白質，藉此防止目標蛋白活化)引起目標蛋白質活性降低。

如本文所用，術語「分離」或「純化」係指一種材料實質上或基本上不含如在其原生狀態下通常伴隨其之組分。純度及均質性典型地使用諸如聚丙烯醯胺凝膠電泳或高效液相層析之分析化學技術來測定。術語「經分離之抗體」係指一種抗體，其實質上不含具有不同抗原特異性之其他抗體。然而，特異性結合至一種抗原的經分離抗體可與其他抗原具有交叉反應性。另外，經分離之抗體可實質上不含其他細胞材料及/或化學材料。

如本文所用，術語「調節」係指與適合對照相比，直接地或間接地引起所量測之活性增加或降低、刺激、抑制、干擾或阻斷。多肽或聚核苷酸的「調節劑」係指一種物質，與適合對照相比，該物質影響(例如增強、降低、刺激、抑制、干擾或阻斷)該多肽或聚核苷酸之所量測活性。舉例而言，「調節劑」可以可量測之親和力結合至及/或活化或抑制目標，或直接或間接地影響受體活性之正常調控。

如本文所用，所揭露之化合物的「醫藥學上可接受之形式」包括但不限於其醫藥學上可接受之鹽、酯、水合物、溶劑合物、異構物、前藥及經同位素標記之衍生物。在一個實施例中，「醫藥學上可接受之形式」包括但不限於其醫藥學上可接受之鹽、酯、前藥及經同位素標記之衍生物。在一些實施例中，「醫藥學上可接受之形式」包括但不限於其醫藥學上可接受之異構物及立體異構物、前藥及經同位素標記之衍生物。

在某些實施例中，醫藥學上可接受之形式為醫藥學上可接受之鹽。

如本文所用，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指在合理醫學判斷範圍內，適於與個體之組織接觸使用而無過度毒性、刺激、過敏反應及類似情形且與合理的效益/風險比相稱的彼等鹽。醫藥學上可接受之鹽在此項技術中已熟知。舉例而言，Berge等人在 J . Pharmaceutical Sciences(1977) 66:1-19中詳細描述醫藥學上可接受之鹽。本文所提供之化合物的醫藥學上可接受之鹽包括衍生自適合無機及有機酸及鹼之彼等鹽。醫藥學上可接受之無毒性酸加成鹽實例為胺基與無機酸(諸如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸及過氯酸)或與有機酸(諸如乙酸、順丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、丁二酸或丙二酸)形成的鹽，或藉由使用此項技術中已知之其他方法(諸如離子交換)形成的鹽。醫藥學上可接受之其他鹽包括己二酸鹽、褐藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯磺酸鹽(benzenesulfonate)、苯磺酸鹽(besylate)、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙烷磺酸鹽、甲酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、葡糖酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙烷磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、甲烷磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、對甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽及其類似鹽。在一些實施例中，可衍生鹽之有機酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、順丁烯二酸、丙二酸、丁二酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸及其類似物。

該等鹽可在所揭露之化合物的分離及純化期間原位製備，或單獨地製備，諸如藉由使親本化合物之游離鹼或游離酸分別與適合鹼或酸反應來製備。衍生自適當鹼的醫藥學上可接受之鹽包括鹼金屬、鹼土金屬、銨及N ⁺(C _1-4烷基) ₄鹽。代表性鹼金屬或鹼土金屬鹽包括鈉、鋰、鉀、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、錳、鋁及其類似物。在適當時，醫藥學上可接受之其他鹽包括使用諸如鹵化物、氫氧化物、羧酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、低碳數烷基磺酸鹽及芳基磺酸鹽之相對離子形成的無毒銨、四級銨及胺陽離子。可衍生鹽之有機鹼包括例如一級、二級及三級胺、經取代之胺(包括天然存在之經取代之胺)、環胺、鹼性離子交換樹脂及其類似物，諸如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺及乙醇胺。在一些實施例中，醫藥學上可接受之鹼加成鹽可選自銨、鉀、鈉、鈣及鎂鹽。

在某些實施例中，醫藥學上可接受之形式為「溶劑合物」(例如水合物)。如本文所用，術語「溶劑合物」係指進一步包括藉由非共價分子間力結合之化學計量或非化學計量之量之溶劑的化合物。溶劑合物可為所揭露之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在溶劑為水的情況下，溶劑合物為「水合物」。醫藥學上可接受之溶劑合物及水合物為複合物，其例如可包括1至約100、或1至約10、或1至約2、約3或約4個溶劑或水分子。應理解，如本文所用，術語「化合物」涵蓋化合物及化合物之溶劑合物以及其混合物。

在某些實施例中，醫藥學上可接受之形式為前藥。如本文所用，術語「前藥(prodrug)」(或「前藥(pro-drug)」)係指活體內轉化以產生所揭露之化合物或該化合物之醫藥學上可接受之形式的化合物。當投予個體時，前藥可無活性，但在活體內轉化為活性化合物，例如藉由水解(例如在血液中水解)。在某些情況下，相較於親本化合物，前藥具有改善的物理及/或遞送特性。前藥當投予個體時可增加化合物之生物可用率(例如，在經口投予後允許血液中之吸收增強)或相對於親本化合物，增強向感興趣之生物代謝區(例如腦或淋巴系統)的遞送。例示性前藥包括所揭露之化合物的衍生物，與親本化合物相比，其具有增強的水溶性或經由腸膜之主動輸送。

前藥化合物提供的優勢往往為哺乳動物生物體中之溶解性、組織相容性或延遲釋放。(參見例如Bundgard, H. 1985 Design of Prodrugs, 第7- 9頁, 21-24, Elsevier, Amsterdam; Higuchi等人, 1987"Pro-drugs as Novel Delivery Systems" A.C.S. Symposium Series,第14卷，及 Bioreversible Carriers in Drug Design,Edward B. Roche編, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987。

前藥形式提供的優勢往往為哺乳動物生物體中之溶解性、組織相容性或延遲釋放。(參見例如Bundgard, Design of Prodrugs, 第7-9頁, 第21-24頁, Elsevier, Amsterdam 1985及Silverman, The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action, 第352-401頁, Academic Press, San Diego, Calif., 1992.) 此項技術中通常已知的前藥包括熟知的酸衍生物，諸如藉由親本酸與適合醇反應製備之酯、藉由親本酸化合物與胺反應製備之醯胺、反應形成醯化鹼衍生物之鹼性基團等。其他前藥衍生物可與本文所揭露之其他特徵組合來增強生物可用率。因此，熟習此項技術者將瞭解，本發明所揭露之具有自由胺基、醯胺基、羥基或羧基的某些化合物可轉化成前藥。前藥亦包括其中碳酸酯、胺基甲酸酯、醯胺或烷基酯部分共價鍵結至本文所揭露之任一上述取代基的化合物。

前藥的例示性優勢可包括但不限於其物理特性，諸如在生理pH下非經腸投藥時增強的水溶性(相較於親本化合物)，或其增強消化道的吸收，或其可增強藥物在長期儲存時的穩定性。

如本文所用，術語「醫藥學上可接受」之賦形劑、載劑或稀釋劑係指參與將本發明醫藥劑自身體之一個器官或部分運載或輸送至身體之另一器官或部分的醫藥學上可接受之材料、組成物或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或囊封材料。各種載劑就與調配物之其他成分相容且對患者無害而言必須為「可接受的」。可充當醫藥學上可接受之載劑的一些材料實例包括：糖類，諸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；澱粉，諸如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及乙酸纖維素；粉末狀黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，諸如可可脂及栓劑蠟；油類，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；二醇類，諸如丙二醇；多元醇，諸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇及聚乙二醇；酯類，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；瓊脂；緩衝劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；褐藻酸；無熱原質水；等張生理鹽水；林格氏溶液(Ringer's solution)；乙醇；磷酸鹽緩衝溶液；以及醫藥調配物中使用的其他無毒相容物質。組成物中亦可存在濕潤劑、乳化劑及潤滑劑，諸如月桂基硫酸鈉、硬脂酸鎂及聚環氧乙烷-聚環氧丙烷共聚物，以及著色劑、脫模劑、包衣劑、甜味劑、調味劑及芳香劑、防腐劑及抗氧化劑。

如本文所用，術語「蛋白質」與「多肽」可互換使用且係指胺基酸殘基的聚合物且不限於最小長度。因此，定義內包括肽、寡肽、二聚體、多聚體及其類似物。定義涵蓋全長蛋白質與其片段。術語亦包括多肽之表現後修飾，例如糖基化、乙醯化、磷酸化及類似修飾。另外，多肽可以指一種蛋白質，其包括對原生序列的修飾，諸如缺失、添加及取代(通常具有守恆性質)，只要該蛋白質維持所需活性即可。此等修飾可為有意的或可為意外的。胺基酸在本文中可藉由其通常已知的三字母符號或藉由IUPAC-IUB生物化學命名法委員會推薦的單字母符號來提及。

如本文所用，術語「受體」係指能夠與另一種分子(稱為配位體)相互作用的蛋白質，包括醣蛋白或其片段。配位體通常為胞外分子，其在結合至受體後，通常起始細胞反應，諸如起始信號轉導路徑。受體無需一定為膜結合蛋白質。配位體可屬於任何類別之生物化學或化學化合物。

如本文所用，術語「樣品」係指來自人類、動物之樣品，或研究樣品，例如細胞、組織、器官、體液、氣體、氣溶膠、漿液、膠體或凝聚材料。「樣品」可在活體內測試，例如在不自人類或動物移除之情況下測試，或其可在活體外測試。樣品可在處理之後加以測試，例如藉由組織學方法進行測試。「樣品」亦指例如構成體液或組織樣品的細胞，或自體液或組織樣品分離的細胞。「樣品」亦可指剛自人類或動物獲取的細胞、組織、器官或體液，或經處理或儲存的細胞、組織、器官或體液。

如本文所用，術語「刺激(stimulate)」或「刺激(stimulating)」係指增加、擴增、加強、增強生理活性，例如免疫反應。刺激可為正面的變化。舉例而言，增幅可為5%、10%、25%、50%、75%或甚至90-100%。其他例示性增幅包括2倍、5倍、10倍、20倍、40倍或甚至100倍。

如本文所用，術語「個體」係指將成為特定療法之接受者的任何動物(例如哺乳動物)，包括但不限於人類、非人類靈長類動物、嚙齒動物及其類似物。涵蓋投予之個體包括但不限於人類(例如任何年齡群之男性或女性，例如兒科個體(例如嬰兒、兒童、青少年)或成年個體(例如年輕成人、中年成人或老年成人))及/或其他非人類動物，例如非人類哺乳動物(例如靈長類動物(例如食蟹獼猴、恆河猴)；商業上相關之哺乳動物，諸如牛、豬、馬、綿羊、山羊、貓及/或犬)、嚙齒動物(例如大鼠及/或小鼠)等。在某些實施例中，非人類動物為哺乳動物。非人類動物可為處於任何發育階段之雄性或雌性。非人類動物可為轉殖基因動物。典型地，提及人類個體時，術語「個體」與「患者」在本文中可互換使用。

如本文所用，術語「抑制(suppress)」或「抑制(suppressing)」係指降低、減弱、削弱、阻滯或穩定化生理活性，例如免疫反應。抑制可為負面變化。舉例而言，降幅可為5%、10%、25%、50%、75%或甚至90-100%。例示性降幅包括2倍、5倍、10倍、20倍、40倍或甚至100倍。

如本文所用，術語「治療(treatment)」或「治療(treating)」疾病或病症係指在其發生之前或之後，減少、延遲或緩解此類病狀的方法。可針對疾病及/或潛在病變之一或多種影響或症狀進行治療。治療可為疾病或疾病症狀之任何減少且可為但不限於其完全消除。治療(Treating)或治療(treatment)係指損傷、疾病、病變或病狀在治療或改善方面的任何成功標誌，包括任何客觀或主觀參數，諸如症狀之減輕、緩和、減少，或使得損傷、病變或病狀對患者更可耐受；減緩退化或衰退的速率；使得退化的終點不太導致衰弱；改善患者之身體或心智健康。症狀之治療或改善可基於客觀或主觀參數；例如身體檢查、神經精神檢查及/或精神評估之結果。與等效的未治療對照組相比，此類降幅或改善程度可為至少5%、10%、20%、40%、50%、60%、80%、90%、95%或100%，如藉由任何標準技術所量測。

治療方法包括向個體投予治療有效量的本文所述化合物。投予步驟可為單次投予或可包括一系列投予。治療期之時長視多種因素而定，諸如病狀之嚴重度、患者年齡、活性劑濃度、用於治療之組成物的活性或其組合。亦應瞭解，可在特定治療方案過程中增加或減少用於治療之藥劑的有效劑量。顯而易見，可根據此項技術中已知的標準診斷分析來改變劑量。在一些情況下，可能需要長期投藥。舉例而言，組成物以足以治療患者之量及持續時間投予個體。 CPT 類似物及細胞毒素

本文揭露各種新穎的喜樹鹼類似物及細胞毒性劑。

在一個態樣中，本發明大體上係關於具有結構式(I)之化合物： (I) 或其醫藥學上可接受之形式，其中 R ¹為H或鹵素； R ²為R ^2a、OR ^2a或NR ^2bR ^2c； R ³為H或C ₁ _-6烷基； R ⁴為H、C ₁ _-6烷基或L ^Z-R ^Z，其中R ¹及R ³，或R ¹及R ⁴，連同分別與其結合的碳及氮原子一起，可任擇地形成未經取代或經取代的5員或6員雜芳基； L ²不存在或為CH ₂； L ^Z不存在或為連接子； R ^2a、R ^2b及R ^2c中之各者獨立地選自H、C ₁ _-6烷基、C ₄ _-6碳環或雜環，或C ₅ _-6芳基或雜芳基；或R ^2b及R ^2c連同其結合的N原子一起形成未經取代或經取代的4員至7員(例如4員、5員、6員或7員)雜環，其中C ₁ _-6烷基、C ₅ _-6芳基或雜芳基或4員至7員雜環中之各者未經取代或經取代；並且 R ^Z不存在或為抗原結合部分。

在某些實施例中，L ²不存在，且該化合物具有結構式(I ^a)：。 (I ^a)

在某些實施例中，L ²為CH ₂，且該化合物具有結構式(I ^b)：。 (I ^b)

在某些實施例中，R ⁴為H。

在某些實施例中，R ⁴為C _1-4烷基。

在(I)之某些實施例中，R ⁴為L ^Z-R ^Z，且該化合物具有結構式(II)：。 (II)

在(II)之某些實施例中，L ²不存在，且該化合物具有式(II ^a)：。 (II ^a)

在(II)之某些實施例中，L ²為CH ₂，且該化合物具有式(II ^b)：。 (II ^b)

在(II ^a)及(II ^b)之某些實施例中，L ^Z不存在。

在(II ^a)及(II ^b)之某些實施例中，L ^Z為連接子。

在(II ^a)及(II ^b)之某些實施例中，R ^Z不存在。

在(II ^a)及(II ^b)之某些實施例中，R ^Z為抗原結合部分。

在(I)-(II ^b)之某些實施例中，R ¹為H。

在(I)-(II ^b)之某些實施例中，R ¹為鹵素。

在某些實施例中，R ¹為F。

在某些實施例中，R ¹為Cl。

在(I)-(II ^b)之某些實施例中，R ³為H。

在(I)-(IIb)之某些實施例中，R ³為C _1-6烷基。

在(I)-(IIb)之某些實施例中，R ²為NR ^2bR ^2c。

在某些實施例中，R ^2b及R ^2c中之各者獨立地選自H、C _1-6烷基或C _4-5芳基或雜芳基。

在某些實施例中，R ^2b及R ^2c中之各者為C _1-6烷基。

在某些實施例中，R ^2b及R ^2c之一為H且另一者為C _1-6烷基。

在某些實施例中，R ^2b及R ^2c之一為C _5-6環烷基。

在某些實施例中，R ^2b及R ^2c中之至少一者經C _1-6烷基或C _5-6環烷基取代。

在某些實施例中，R ^2b及R ^2c連同其結合的N原子一起形成未經取代或經取代的4員至7員(例如4員、5員、6員或7員)雜環。

在某些實施例中，R ^2b及R ^2c連同其結合的N原子一起形成未經取代或經取代的5員或6員雜芳基。

在某些實施例中，雜環與未經取代或經取代之4員至6員碳環或雜環螺接稠合。

在(I)-(II ^b)之某些實施例中，R ²為R ^2a。

在某些實施例中，R ^2a為C _4-6碳環或雜環。

在(I)-(II ^b)之某些實施例中，R ²為OR ^2a。

在某些實施例中，R ²係選自：。

在某些實施例中，R ²為經取代或未經取代之5員或6員雜環。

在某些實施例中，R ¹及R ³連同分別與其結合的碳及氮原子一起，可任擇地形成未經取代或經取代的5員或6員雜芳基。

在某些實施例中，R ¹及R ⁴連同分別與其結合的碳及氮原子一起，可任擇地形成未經取代或經取代的5員或6員雜芳基。

在(I)-(IIb)之某些實施例中，L ^Z為不可裂解的連接子。

在(I)-(IIb)之某些實施例中，L ^Z為可裂解的連接子。

在某些實施例中，L ^Z為酸不穩定或酸敏感性連接子。

在某些實施例中，L ^Z為蛋白酶敏感性連接子。

在某些實施例中，L ^Z為溶酶體蛋白酶敏感性連接子。

在某些實施例中，L ^Z為β-葡萄糖苷酸敏感性連接子。

在某些實施例中，L ^Z為麩胱甘肽敏感性二硫鍵連接子。

在(I)-(II ^b)之某些實施例中，R ^Z包含選自以下的官能性或反應性基團： -N ₃、-NR ^uC(=O)CH=CH ₂、-SH、-SSR ^t、-S(=O) ₂(CH=CH ₂)、-(CH ₂) ₂S(=O) ₂(CH=CH ₂)、-NR ^uS(=O ₂)(CH=CH ₂)、-NR ^uC(=O)CH ₂R ^w、-NR ^uC(=O)CH ₂Br、-NR ^uC(=O)CH ₂I、-NHC(=O)CH ₂Br、NHC(=O)CH ₂I、-ONH ₂、-C(=O)NHNH ₂、-CO ₂H、-NH ₂、-NCO、-NCS、、、、、、、、、、、、、、、、、、或其中 R ^u為H或C ₁-C ₆烷基， R ^t為2-吡啶基或4-吡啶基，且 R ^w為、、、或。

關於R ^Z及/或L ^Z組分中之可使用之連接子及反應性或官能性基團的其他揭露內容提供於章節「連接子及連接技術」及「連接子-抗體及連接子-有效負載連接」及其中所引用之參考文獻中，其各自以引用的方式併入本文中。

本發明亦包括用於合成CPT類似物(包括其中間物或前驅物)之方法。

本發明之CPT類似物之非限制性實例包括表 1中所列的彼等物。表1. 示例化合物

在某些實施例中，表1中的R ¹為H。

在某些實施例中，表1中的R ¹為F或Cl。

用於測定化合物對微管蛋白之結合親和力的方法在此項技術中已知。(參見例如Muller等人, 2006 Anal. Chem. 78, 4390-4397; Hamel等人, 1995 Molecular Pharmacology47: 965-976; Hamel等人, 1990 J. Biological Chemistry265:28, 17141-17149.)

在一些實施例中，本文所揭露之CPT類似物結合微管蛋白之親和力的範圍為比單甲基CPT E (MMAE)對微管蛋白之結合親和力低(弱) 10倍至比MMAE對微管蛋白之結合親和力高(強) 5倍、10倍、20倍、30倍、50倍或100倍。 免疫綴合物

典型的ADC包含抗原結合部分(Ab)(例如單株抗體)、連接子(L)及細胞毒性劑或有效負載(D)，如下文所示： (D _m-L) _n-Ab 其中各m及n為整數。有效負載D (例如本文所揭露之CPT類似物)可與Ab之不同部分綴合且通常經由半胱胺酸或離胺酸殘基連接。一般而言，超過一種有效負載D分子可連接至各Ab。當使用分支連接子時，超過一種有效負載D部分可連接至各連接子L。在一些實施例中， n在1至16、1至12、1至10、1至8、1至6、1至5、1至4、1至3或1至2範圍內。在一些實施例中， n在2至10、2至8、2至7、2至6、2至5、2至4或2至3範圍內。在其他實施例中， n為1、2、3、4、5或6。在一些實施例中， n為2、3或4。在一些實施例中，L為未分支連接子且 m為1。在一些實施例中，L為分支連接子且 m可在2至10、2至8、2至6或2至4範圍內。在一些實施例中， m為2、3或4。

藥物與抗體比率(DAR)或藥物負載可藉由習知方式表徵，諸如UV、質譜、ELISA分析、HIC、HPLC或電泳。在例示性實施例中，DAR在1至16、2至8、1至12、1至10、1至8、1至6、1至5、1至4、1至3、1至2或約1範圍內。

免疫綴合物的DAR可藉由各種方法控制，包括限制有效負載-連接子中間物或連接子試劑相對於抗原結合部分的莫耳濃度過量；限制綴合反應時間或溫度；改變半胱胺酸硫醇修飾之還原條件；以及調節半胱胺酸殘基之數目及位置及連接子-有效負載連接位置。(參見例如WO 2006/034488 A2.)

在一個態樣中，本發明大體上係關於具有結構式(III)的免疫綴合物： (III) 或其醫藥學上可接受之形式，其中 Ab表示抗原結合部分； R ¹為H或鹵素； R ²為R ^2a、OR ^2a或NR ^2bR ^2c； R ³為H或C ₁ _-6烷基，其中R ¹及R ³連同分別與其結合的碳及氮原子一起，可任擇地形成未經取代或經取代的5員或6員雜芳基； L ^Ab為連接子； R ^2a、R ^2b及R ^2c中之各者獨立地選自H、C ₁ _-6烷基、C ₄ _-6碳環或雜環，或C ₅ _-6芳基或雜芳基；或R ^2b及R ^2c連同其結合的N原子一起形成未經取代或經取代的4員至7員(例如4員、5員、6員或7員)雜環，其中C ₁ _-6烷基、C ₅ _-6芳基或雜芳基或4員至7員雜環中之各者未經取代或經取代；並且 n為1至約20範圍內之整數。

在某些實施例中，若L ²不存在，則具有結構式(III ^a)：。 (III ^a)

在某些實施例中，若L ²為CH ₂，則具有結構式(IIIb)：。 (III ^b)

在式(III)-(III ^b)之某些實施例中， n為1至20範圍內之整數。在某些實施例中， n為1至16範圍內之整數。在某些實施例中， n為1至12範圍內之整數。在某些實施例中， n為1至10範圍內之整數。在某些實施例中， n為1至8範圍內之整數。在某些實施例中， n為1至6範圍內之整數。在某些實施例中， n為1至5範圍內之整數。在某些實施例中， n為1至約4範圍內之整數。在某些實施例中， n為1至3範圍內之整數。在某些實施例中， n為1或2。在某些實施例中， n為1。

可如章節標題「CPT類似物及細胞毒素」中關於式(I)-(II ^b)所論述來選擇式(III)-(III ^b)中所發現的所有取代基，例如R ¹、R ²、R ³及R ⁴，且其全部(包括R ¹、R ²、R ³及R ⁴之每一者及所有組合及所得化合物)併入本文中。本發明因此包括與Ab連接之式(I)-(II ^b)對應的免疫綴合物。

除其中抗原結合部分為抗體或抗體片段的免疫綴合物之外，本發明另外包括其中抗原結合部分為肽且其中抗原結合部分為小分子配位體的免疫綴合物。(參見例如Zhuang等人, 2019 Eur. J. Med. Chem.163, 883-895; Patel等人, 2021 New J. Chem.45, 5291-5321.)

本發明亦包括用於合成免疫綴合物(包括其中間物或前驅物)之方法。本發明另外包括一種組成物，其包含免疫綴合物、中間物或其前驅物。抗原結合部分

迄今為止，已鑑別出多種獨特抗原且該等抗原可潛在地在以抗體為主之療法中用作目標。當選擇抗原時，通常考慮若干因素。首先，目標抗原應高度表現於腫瘤中且不表現或低度表現於健康細胞中。實例為HER2受體，其在腫瘤細胞中的表現比健康細胞高幾乎100倍。其次，目標抗原應呈現於腫瘤細胞表面上，以可供循環的單株抗體使用。另外，目標抗原應具有內化特性，原因在於其有助於ADC轉運至細胞中，繼而增強細胞毒性劑之功效。儘管一些研究已證明，針對腫瘤微環境組分的非內化ADC產物可有效地在胞外空間中脫離其藥物且在一些情況下賦予強治療活性，並且ADC往往誘導強「旁觀者效應」。(Strohl WR 2018 Protein & Cell. 9(1):86-120; Damelin等人, 2015 Pharma. Res.32(11):3494-507; Diamantis等人, 2016 British J. Cancer114(4):362-7; Tipton等人, 2015 Blood125(12):1901-9; Donaghy等人, 2016 mAbs. 8(4):659-71; Casi等人, 2015 Molecular Pharmaceutics12(6):1880-4.)

抗原結合部分可為選擇性地結合至靶向細胞類型上所發現之細胞表面標記物的任何部分。一般而言，抗體較佳應具有目標特異性且將細胞毒性藥物遞送至腫瘤細胞且具有目標結合親和力，亦即，針對腫瘤細胞表面抗原的高結合親和力。另外，抗體較佳應具有良好保持力、低免疫原性、低交叉反應性及適當的鍵聯結合特性。(Peters等人, 2015 Bioscience Reports35(4); Hughes B 2010 Nature Reviews Drug Discovery9(9):665-7.)

在某些實施例中，Ab為抗體。

在某些實施例中，Ab為單株抗體。

在某些實施例中，Ab為嵌合抗體。

在某些實施例中，Ab為人源化抗體。

在某些實施例中，Ab為雙特異性抗體。

在某些實施例中，Ab為抗體片段。

在某些實施例中，Ab為Fab片段。

在某些實施例中，Ab為肽。

在某些實施例中，Ab為小分子配位體。

在一些態樣中，Ab為抗體或抗體片段(例如抗體之抗原結合片段)，其特異性結合至主要或優先發現於癌細胞表面上的抗原，例如腫瘤相關抗原。

在一些態樣中，Ab為抗體或抗體片段(例如抗原結合片段)，其特異性結合至細胞表面受體蛋白質或其他細胞表面分子、細胞存活調控因子、細胞增殖調控因子、與組織發育或分化相關的分子、已知或懷疑在功能上促進組織發育或分化的分子、淋巴激素、細胞介素、參與細胞週期調控之分子、參與血小管生成之分子或與血管生成相關的分子、已知或懷疑在功能上促進血管生成的分子。

因此，適用於本發明之免疫綴合物中的抗原結合部分包括但不限於針對細胞表面受體及腫瘤相關或腫瘤特異性抗原的抗體，該等受體及抗原在此項技術中已熟知且可使用此項技術中已知的方法及資訊製備以用於產生抗體。

為了努力發現用於癌症診斷及療法的有效細胞目標，研究人員設法鑑別出跨膜多肽或其他腫瘤相關或腫瘤特異性多肽，相較於一或多種正常非癌細胞，該等多肽特異性地表現於一或多種特定類型之癌細胞的表面上。腫瘤相關多肽在癌細胞表面上的表現比在非癌變細胞的表面上更豐裕，而腫瘤特異性多肽特異性地表現於一或多種特定類型的癌細胞表面上，而非表現於非癌變細胞上。鑑別出此類細胞表面抗原多肽使得以抗體為主之療法能夠特異性地靶向癌細胞以將其摧毀。(參見例如Liu等人, 2017 Eur. J. Cancer Care (Engl).2017 Sep; 26(5), doi: 10.1111/ecc.12446; WO 2016/192527 A1.)

腫瘤相關抗原可為分化簇因子(例如CD蛋白)。在本發明之一些態樣中，本發明之抗原結合部分特異性結合至一種抗原。在本發明之一些態樣中，本發明之抗原結合部分特異性結合至本文所述的二種或更多種抗原，例如，本發明之抗原結合部分為雙特異性或多特異性抗體或其抗原結合片段。

抗體或抗原結合片段之非限制性實例包括抗雌激素受體抗體、抗孕酮受體抗體、抗p53抗體、抗HER-2抗體、抗EGFR抗體、抗組織蛋白酶D抗體、抗Bcl-2抗體、抗上皮鈣黏蛋白抗體、抗CA125抗體、抗CA15-3抗體、抗CA19-9抗體、抗c-erbB-2抗體、抗P-醣蛋白抗體、抗CEA抗體、抗視網膜母細胞瘤蛋白質抗體、抗ras癌蛋白抗體、抗路易斯X抗體、抗Ki-67抗體、抗PCNA抗體、抗CD3抗體、抗CD4抗體、抗CD5抗體、抗CD7抗體、抗CD8抗體、抗CD9/p24抗體、抗CD1抗體、抗CD1 1 c抗體、抗CD13抗體、抗CD14抗體、抗CD15抗體、抗CD19抗體、抗CD20抗體、抗CD22抗體、抗CD23抗體、抗CD30抗體、抗CD31抗體、抗CD33抗體、抗CD34抗體、抗CD35抗體、抗CD38抗體、抗CD39抗體、抗CD41抗體、抗LCA/CD45抗體、抗CD45RO抗體、抗CD45RA抗體、抗CD71抗體、抗CD95/Fas抗體、抗CD99抗體、抗CD100抗體、抗S-100抗體、抗CD106抗體、抗泛素抗體、抗c-myc抗體、抗細胞角蛋白抗體、抗λ輕鏈抗體、抗黑素體抗體、抗前列腺特異性抗原抗體、抗τ抗原抗體、抗纖維蛋白抗體、抗角蛋白抗體及抗Tn-抗原抗體。

適用於本發明之免疫綴合物的抗體及抗體片段包括經修飾之抗體或經工程改造之抗體，諸如經修飾以引入半胱胺酸殘基或其他反應性胺基酸(包括Pel、吡咯離胺酸、肽標籤及非天然胺基酸)而替換原生序列之至少一個胺基酸的抗體，從而在抗體或抗原結合片段上提供待與細胞毒性劑綴合的反應位點。

藥物部分之位置可經設計、控制及已知。舉例而言，可對抗體中之反應性位點的半胱胺酸胺基酸進行工程改造，且該等半胱胺酸胺基酸不形成鏈內或分子間二硫鍵。(Junutula等人, 2008 Nature Biotech. 26(8):925-932; Dornan等人, 2009 Blood114(13):2721-2729; 美國專利第7,521,541 B2號；美國專利第7,723,485 B2號；WO 2009/052249 A2.) 經工程改造之半胱胺酸硫醇可與具有硫醇反應性親電子基團(諸如順丁烯二醯亞胺或α-鹵基醯胺)的本發明之連接子試劑或藥物-連接子試劑反應，以與半胱胺酸工程化抗體及藥物部分形成ADC。

另外，抗體或抗體片段可經修飾以將Pel或吡咯離胺酸或非天然胺基酸合併為待與藥物綴合的位點。可將用於酶促綴合方法之肽標籤引入抗體中。(Junutula等人, 2008 Nat. Biotechnol.26:925-932; Ou等人, 2011 PNAS108 (26), 10437-10442; Axup等人, 2012 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 109, 16101-16106; Liu等人, 2010 Annu. Rev. Biochem. 79, 413-444; Kim等人, 2013 Curr. Opin. Chem. Biol. 17, 412-419; Strop等人, 2013 Chem. Biol.20(2):161-7; Rabuka 2010 Curr. Opin. Chem. Biol. 14(6):790-6; Rabuka等人, 2012 Nat. Protoc. 7(6): 1052-67; WO 2015/095301 A2; WO 2013/184514 A2.)

抗體及抗體片段可容易藉由此項技術中已知之任何方式產生，包括但不限於重組表現、化學合成及抗體四聚體之酶促消化，而全長單株抗體可藉由例如融合瘤或重組產生來獲得。重組表現可來自此項技術中已知的任何適當宿主細胞，例如哺乳動物宿主細胞、細菌宿主細胞、酵母宿主細胞、昆蟲宿主細胞等。(參見例如Carvalho等人, 2016"Production Processes for Monoclonal Antibodies", DOI: 10.5772/64263 (https://www.intechopen.com/chapters/51512); Monoclonal Antibody Production, Committee on Methods of Producing Monoclonal Antibodies, Institute for Laboratory Animal Research, National Research Council, NATIONAL ACADEMY PRESS Washington, DC 1999; Jakobovits 1998 Adv. Drug Del. Rev. 31:33-42; Marks等人, 1991 J. Mol. Biol. 222:581; Cole等人, 1985 Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy77-96; Teng等人, 1983 Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 80:7308-7312; Kozbor等人, 1983 Immunology Today4:72-79; Olsson等人, 1982 Meth. Enzymol. 92:3-16; 美國專利第6,657,103 B2號.) 連接子及連接技術

本文所揭露之細胞毒性劑適用於在免疫綴合物中用作有效負載。本發明之CPT類似物可連接至連接子或直接連接至抗原結合部分。ADC中之連接子典型地經設計以在循環中達成高穩定性，且在可裂解連接子之情況下，使有效負載特異性地釋放於目標組織中。

適用於構建免疫綴合之綴合物的連接子及連接技術在此項技術中已熟知且可用於製造本發明之免疫綴合物。一般而言，連接子可在抗原結合部分之任何適合可用位置連接至抗原結合部分，例如連接至可用的胺基氮原子(例如一級或二級胺)或羥基氧原子，或連接至可用的硫氫基，諸如半胱胺酸上之硫氫基。連接子與本文所揭露之細胞毒性CPT類似物可在細胞毒性劑之N端或C端連接。

各種連接子及連接策略已為人所知且可用於製造本發明之免疫綴合物。(參見例如Kang等人, 2021"Recent developments in chemical conjugation strategies targeting native amino acids in proteins and their applications in antibody-drug conjugates" Chemical Science Royal Soc. of Chem., DOI: 10.1039/d1sc02973h; Su等人, 2021"Antibody-drug conjugates: Recent advances in linker chemistry" Acta Pharmaceutica Sinica B, https://doi.org/10.1016/j.apsb.2021.03.042; Drago等人, 2021 Nature Reviews18, 327-344; Mckertish等人, 2021 Biomedicines9, 872; Bargh等人, 2019"Cleavable linkers in antibody-drug conjugates" Chem. Soc. Rev. 48, 4361, DOI: 10.1039/c8cs00676h; Lash 2011"Antibody-Drug Conjugates: the Next Generation of Moving Parts" Start-Up, Dec. 2011, 1-6；WO 2021/055865 A1；WO 2016/192527 A1；WO 2015/095301 A2、WO 2011/097627 A1、WO 2004/010957 A1；美國公開案第20060074008 A2號、美國公開案第20050238649 A2號及美國公開案第20060024317 A2號.)

連接子可分類為可裂解的或不可裂解的。在ADC使用不可裂解之連接子的情況下，典型地如下達成釋放：ADC發生內化，隨後抗體在溶酶體中降解，引起仍與抗體胺基酸殘基經由連接子連接之有效負載釋放。不可裂解連接子之實例包括順丁烯二醯亞胺基己醯基(MC)及4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(MCC)連接子。可裂解連接子之實例包括Val-Cit、N-丁二醯亞胺基-4-(2-吡啶基二硫基)丁酸酯(SPDB)、N-丁二醯亞胺基-4-(2-吡啶基二硫基)戊酸酯(SPP)及醯肼。

對於包含可裂解連接子之免疫綴合物而言，連接子在活體內基本上穩定直至免疫綴合物結合至或進入細胞為止，此時，胞內酶或胞內化學條件(pH、還原能力)使連接子裂解以釋放細胞毒性肽。

可裂解連接子可基於裂解機制進一步分類成化學可裂解連接子(諸如酸可裂解連接子、可還原的二硫鍵連接子及外源刺激觸發的連接子)及酶可裂解連接子(諸如含有二肽Val-Cit的連接子、糖苷酶可裂解連接子、磷酸酯酶可裂解連接子)。酸可裂解連接子(亦稱為pH敏感性連接子)經設計以利用胞內體(pH 5.5-6.2)及溶酶體(pH 4.5-5.0)之酸性，同時在pH 7.4下在循環中維持穩定性。酸可裂解連接子之實例為酸敏感性N-醯基肼鍵聯，其在酸催化後水解成酮及醯肼有效負載。亦已報導含有其他官能基的酸可裂解連接子，諸如碳酸酯連接子。糖苷酶可裂解連接子包括β-葡萄糖醛酸苷酶可裂解連接子、β-半乳糖苷酶可裂解連接子、磷酸酯酶可裂解連接子。(參見例如Bargh等人, 2019"Cleavable linkers in antibody-drug conjugates" Chem. Soc. Rev. 48, 4361, DOI: 10.1039/c8cs00676h; Ducry等人, 2010 Bioconiuqate Chem., vol. 21, 5-13; Jeffrey等人, 2006 Bioconjugate Chem. 17, 831-840; Burke等人, 2009 Bioconjugate Chem. 20, 1242-1250; Kolodych等人, 2017 J. Med. Chem.142, 376-382; Kern等人, 2016 Bioconjugate Chem. 27, 2081-2088; Stenton等人, 2018 Chem. Sci. 9, 4185-4189; Pillow等人, 2017 Mol. Cancer Ther. 16, 871-878; Dubowchik等人, 1998 Bioorg. Med. Chem. Lett.8, 3341-3346; Dubowchik等人, 1998 Bioorg. Med. Chem. Lett. 8, 3347-3352; WO 2021/055865 A1; WO 2016/192527 A1; WO 2015/095301 A2; US 2021/0138077 A1; WO 2013/173393 A1; WO 2011/097627 A1.) 連接子-抗體及連接子-有效負載連接

多年來已開發出多種連接策略，包括定點綴合技術、抗體工程改造及化學修飾。

主要連接方法包括順丁烯二醯亞胺連接(例如N-烷基順丁烯二醯亞胺、N-苯基順丁烯二醯亞胺)、雙(乙烯磺醯基)哌𠯤連接、N-甲基-N-苯基乙烯基磺醯胺連接及以Pt(II)為主之連接。(參見例如Su等人, 2021"Antibody-drug conjugates: Recent advances in linker chemistry" Acta Pharmaceutica Sinica B, https://doi.org/10.1016/j.apsb.2021.03.042; Mckertish等人, 2021 Biomedicines9, 872; Patterson等人, 2015 Bioconjug. Chem.26:2243e8; Lyu等人, 2018 ACS Chem. Biol.13:958e64; Zhou 2017 Biomedicines5:64; Christie等人, 2017 Antibodies (Basel)6:20; Sun等人, 2019 Org. Biomol. Chem.17: 2005e12; Huang等人, 2018 Org. Lett.20: 6526e9; Sijbrandi等人, 2017 Cancer Res.77: 257e67; Merkul等人, 2020 Angew Chem. Int. Ed. Engl.60:3008e15; Merkul等人, 2019 Expert Opin. Drug Deliv.16:783e93; WO 2015/095301 A2; US 2021/0138077 A1; WO 2013/173393 A1; WO 2016/192527 A1; WO 2021/055865 A1.)

已報導多種連接子-有效負載連接策略，諸如胺基甲酸酯連接及碳酸酯連接。(參見例如Wahby等人, 2020 Clin. Cancer Res. Available from: https://doi.10.1158/1078-0432.CCR-20-3119; Perini等人, 2013 Biol. Ther.3:15e23; Burke等人, 2016 Mol. Cancer Ther.15:938e45; WO 2015/095301 A2; US 2021/0138077 A1; WO 2013/173393 A1; WO 2016/192527 A1; WO 2021/055865 A1.)

連接策略及反應性基團之非限制性實例提供於表 2中。(參見例如WO 2015/095301 A2；美國專利第9,988,420 B2號.) 表 2 .例示性反應性基團及部分

反應性基團 1	反應性基團 2	化學部分
硫醇	硫醇
硫醇	順丁烯二醯亞胺
硫醇	鹵基乙醯胺
疊氮基	炔	或
疊氮基	三芳基膦
疊氮基	環辛烯	或或
疊氮基	氧雜降莰二烯
三芳基膦	疊氮基
氧雜降莰二烯	疊氮基
炔	疊氮基	或
環辛烯	疊氮基	或或
環辛烯	二芳基四𠯤	或
二芳基四𠯤	環辛烯	或
單芳基四𠯤	降莰烯
降莰烯	單芳基四𠯤
醛	羥胺
醛	肼
醛	NH ₂-NH-C(=O)-
酮	羥胺
酮	肼
酮	NH ₂-NH-C(=O)-
羥胺	醛
羥胺	酮
肼	醛
肼	酮
NH ₂-NH-C(=O)-	醛
NH ₂-NH-C(=O)-	酮
鹵基乙醯胺	硫醇
順丁烯二醯亞胺	硫醇
乙烯基碸	硫醇
硫醇	乙烯基碸
氮雜環丙烷	硫醇	或
硫醇	氮雜環丙烷	或
	羥胺
	羥胺

醫藥組成物及使用方法 醫藥組成物

在另一態樣中，本發明大體上係關於一種組成物，其包含本文所揭露之化合物，諸如根據式(I)-(II ^b)中之任一者及表 1中之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，及任擇地醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑。

本發明因此提供一種醫藥製劑，其包含治療有效量的根據本發明之化合物或免疫綴合物。

可適用的賦形劑實例包括但不限於水、生理鹽水、右旋糖、甘露糖醇、乳糖、卵磷脂、白蛋白、麩胺酸鈉、半胱胺酸鹽酸鹽、澱粉、纖維素及樹膠。在一較佳實施例中，本發明之醫藥組成物被調配成醫藥形式以便作為固體投予(例如錠劑、膠囊、口含錠、顆粒、栓劑、可經復原以提供液體形式的結晶或非晶型無菌固體等)、作為液體投予(例如溶液、懸浮液、乳液、酏劑、洗劑、藥膏等)或作為半固體投予(凝膠、軟膏、乳膏及類似物)。本發明之醫藥組成物可藉由任何途徑投予，包括但不限於經口、靜脈內、肌肉內、動脈內、髓內、鞘內、心室內、經皮、皮下、腹膜內、鼻內、經腸、局部、舌下或直腸途徑。活性成分之不同投予形式、待使用之賦形劑及其製造程序的修訂版可見於Remington's Pharmaceutical Sciences (A. R. Gennaro編), 第20版, Williams & Wilkins PA, USA ( 2000)。醫藥學上可接受之媒劑的實例已知於現有技術中且包括磷酸鹽緩衝生理鹽水溶液、水、乳液(諸如油/水乳液)、不同類型的增濕劑、無菌溶液等。包含該等媒劑之組成物可藉由現有技術中已知之習知程序調配。可將防腐劑、穩定劑、染料及甚至調味劑、抗氧化劑及/或懸浮劑提供於醫藥組成物中。舉例而言，可添加苯甲酸鈉、抗壞血酸及對羥基苯甲酸酯作為防腐劑。

本發明亦涵蓋一種套組，其包含本文所揭露之至少一種免疫綴合物及其中安置有免疫綴合物及/或醫藥組成物之注射器及/或小瓶或安瓿。使用方法

在某些實施例中，該疾病或病狀為癌症。

在某些實施例中，該方法進一步包含向個體投予化學療法及放射療法中之一或多者。

在某些實施例中，本文所揭露之免疫綴合物用於治療疾病或病狀，其中該疾病或病狀為癌症。

例示性癌症包括：癌瘤、肉瘤、白血病及淋巴瘤。癌症類型及依據身體位置之癌症的詳盡清單可見於國家癌症研究所網站，例如https://www.cancer.gov/types and https://www.cancer.gov/types/by-body-location，其各自以全文引用之方式併入本文中。

在某些實施例中，該疾病或病症為一或多種癌症，其選自胃癌、骨髓癌、結腸癌、鼻咽癌、食道癌及前列腺癌、神經膠質瘤、神經母細胞瘤、乳癌、肺癌、卵巢癌、結腸直腸癌、甲狀腺癌、白血病(例如骨髓性白血病、淋巴球性白血病、急性骨髓白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴母細胞白血病、T譜系急性淋巴母細胞白血病或T-ALL慢性淋巴球性白血病、骨髓發育不良症候群、毛細胞白血病)、淋巴瘤(霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤)、多發性骨髓瘤、膀胱癌、腎癌、胃癌(例如胃腸道基質瘤)、肝癌、黑色素瘤及胰臟癌，及肉瘤。

免疫綴合物通常可藉由全身性途徑投予，尤其藉由靜脈內途徑、藉由肌肉內、皮內、腹膜內或皮下途徑或藉由經口途徑投予。免疫綴合物典型地靜脈內投予個體之血流中以便避免抗體被胃酸或蛋白水解酶降解。在一些實施例中，包含本文所揭露之免疫綴合物的組成物將以依序方式投予若干次。組合療法

輔劑包括但不限於化學治療劑、生長因子抑制劑、生物反應調節劑、抗激素療法、選擇性雌激素受體調節劑(SERM)、血管生成抑制劑及抗雄激素。

佐劑包括但不限於此項技術中已知的彼等物。(參見例如Temizoz等人, 2016 Int. Immunol. 28(7): 329-338.)

如本文所用，術語「化學治療劑」係指適用於治療癌症之化合物。化學治療劑之實例包括厄洛替尼(Erlotinib)(TARCEVA ^®, Genentech/OSI Pharm.)、硼替佐米(Bortezomib)(VELCADE ^®, Millennium Pharm.)、氟維司群(Fulvestrant)(FASLODEX ^®, AstraZeneca)、舒癌特(Sutent)(SU11248, Pfizer)、來曲唑(Letrozole)(FEMARA ^®, Novartis)、甲磺酸伊馬替尼(Imatinib mesylate)(GLEEVEC ^®, Novartis)、PTK787/ZK 222584 (Novartis)、奧沙利鉑(Oxaliplatin)(Eloxatin ^®, Sanofi)、5-FU (5-氟尿嘧啶)、甲醯四氫葉酸(Leucovorin)、雷帕黴素(Rapamycin)(西羅莫司(Sirolimus)，RAPAMUNE ^®, Wyeth)、拉帕替尼(Lapatinib)(TYKERB ^®, GSK572016, Glaxo Smith Kline)、洛那法尼(Lonafarnib)(Lonafarnib)(SCH 66336)、索拉非尼(Sorafenib)(BAY43-9006, Bayer Labs)及吉非替尼(Gefitinib)(IRESSA ^®, AstraZeneca)、AG1478、AG1571 (SU 5271；Sugen)；烷基化劑，諸如噻替派(thiotepa)及CYTOXAN ^®環磷醯胺；磺酸烷基酯，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶類，諸如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedopa)及烏瑞替派(uredopa)；乙烯亞胺及甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基蜜胺(triethylenemelamine)、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺及三羥甲基三聚氰胺；乙醯精寧(acetogenins)(尤其是布拉他辛(bullatacin)及布拉他辛酮(bullatacinone))；喜樹鹼(包括合成類似物拓朴替康(topotecan))；苔蘚蟲素(bryostatin)；海洋抑素(callystatin)；CC-1065 (包括其合成類似物阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin))；念珠藻素(cryptophycins)(特別是念珠藻素1及念珠藻素8)；海兔毒素(dolastatin)；倍癌黴素(duocarmycin)(包括合成類似物KW-2189及CB1-TM1)；艾榴素(eleutherobin)；水鬼蕉鹼(pancratistatin)；沙考地汀(sarcodictyin)；海綿抑素(spongistatin)；氮芥類，諸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(chlorophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、甲氮芥(mechlorethamine)、甲氮芥氧化物鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新恩比興(novembichin)、芬司特瑞(phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、曲洛磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亞硝基脲，諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)及雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，諸如烯二炔抗生素(例如卡奇黴素(calicheamicin)，尤其是卡奇黴素γll及卡奇黴素ωll (1994 Angew Chem . Intl . Ed . Engl .33: 183-186)；達內黴素(dynemicin)，包括達內黴素A；雙膦酸鹽，諸如氯屈膦酸鹽(clodronate)；埃斯培拉黴素(esperamicin)；以及新抑癌菌素發色團及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團)、阿克拉黴素(aclacinomysins)、放線菌素(actinomycin)、安麴黴素(authramycin)、偶氮絲胺酸(azaserine)、博來黴素(bleomycins)、放線菌素C (cactinomycin)、卡拉比辛(carabicin)、洋紅黴素(caminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色黴素(chromomycinis)、更生黴素(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、ADRIAMYCIN ^®(阿黴素(doxorubicin))、N-𠰌啉基-阿黴素、氰基-N-嗎啉基-阿黴素、2-吡咯啉基-阿黴素及去氧阿黴素)、表柔比星(epirubicin)、艾生比星(esonibicin)、艾達黴素(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(mitomycins)(諸如絲裂黴素C)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycins)、培洛黴素(peplomycin)、泊非黴素(porfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、奎那黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲菌素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如甲胺喋呤(methotrexate)及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如迪諾特寧(denopterin)、甲胺喋呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、硝咪硫鳥嘌呤(thiamniprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如安西他濱(ancitabine)、氮胞苷(azacitidine)、6-氮雜尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二去氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷；雄激素，諸如卡普睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯(testolactone)；抗腎上腺藥劑，諸如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，諸如亞葉酸；乙醯葡醛酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；貝斯布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；艾達曲克(edatraxate)；得弗伐胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；艾福米辛(elformithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；埃坡黴素(epothilone)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥脲；蘑菇多醣(lentinan)；氯尼達明(lonidainine)；類美登素(maytansinoids)，諸如美登素(maytansine)及胺沙托辛(ansamitocins)；丙脒腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達醇(mopidanmol)；硝拉維林(nitraerine)；噴司他汀(pentostatin)；凡那明(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK ^®多醣複合物(JHS Natural Products, Eugene, Oreg.)；丙亞胺(razoxane)；根瘤菌素(rhizoxin)；西索菲蘭(sizofuran)；螺旋鍺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺；單端孢黴烯(trichothecenes)(尤其是T-2毒素、黏液黴素A、桿孢菌素A及胺癸叮(anguidine))；烏拉坦(urethan)；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；甲托辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷(arabinoside)(「Ara-C」)；環磷醯胺(cyclophosphamide)；噻替派(thiotepa)；類紫杉醇(taxoids)，例如TAXOL ^®(紫杉醇；Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.)、ABRAXANE ^®(不含十六醇聚氧乙烯醚)、白蛋白工程化紫杉醇奈米粒子調配物(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, 111.)及TAXOTERE ^®(多西他賽(doxetaxel)；Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France)；苯丁酸氮芥(chloranmbucil)；GEMZAR ^®(吉西他濱(gemcitabine))；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲胺喋呤；鉑類似物，諸如順鉑(cisplatin)及卡鉑(carboplatin)；長春鹼(vinblastine)；依託泊苷(etoposide)(VP-16)；異環磷醯胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；長春新鹼(vincristine)；NAVELBINE ^®(長春瑞濱(vinorelbine))；諾凡特龍(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依達曲沙(edatrexate)；柔紅黴素(daunomycin)；胺基喋呤(aminopterin)；卡培他濱(capecitabine)(XELODA ^®)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；CPT-11；拓樸異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；類視黃素，諸如視黃酸；以及上述任一者的醫藥學上可接受之鹽、酸及衍生物。

在某些實施例中，本文所揭露之治療方法能夠降低化學療法(或其他療法)的使用劑量及/或降低投予頻率，對於所有患者而言，特別是不能良好耐受化學治療劑之毒性的患者，此為優點。

另外，可使用生長因子抑制劑、生物反應調節劑、抗激素療法、選擇性雌激素受體調節劑(SERM)、血管生成抑制劑及抗雄激素。舉例而言，可使用抗激素，例如抗雌激素，例如諾瓦得士(Nolvadex) (他莫昔芬(tamoxifen))，或抗雄激素，諸如康士得(Casodex) (4'-氰基-3-(4-氟苯基磺醯基)-2-羥基-2-甲基-3-'-(三氟甲基)丙醯苯胺)。

第二種、第三種或其他藥劑或療法之其他實例可包括但不限於免疫療法(例如PD-1抑制劑(帕博利珠單抗(pembrolizumab)、尼沃單抗(nivolumab)、賽咪單抗(cemiplimab))、PD-L1抑制劑阿特珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)、度伐魯單抗(durvalumab))、CTLA4拮抗劑、細胞信號轉導抑制劑(例如伊馬替尼(imatinib)、吉非替尼(gefitinib)、硼替佐米(bortezomib)、厄洛替尼(erlotinib)、索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)、達沙替尼(dasatinib)、伏立諾他(vorinostat)、拉帕替尼(lapatinib)、坦西莫司(temsirolimus)、尼羅替尼(nilotinib)、依維莫司(everolimus)、帕唑帕尼(pazopanib)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、貝伐單抗(bevacizumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、蘭尼單抗(ranibizumab)、派加替尼(pegaptanib)、帕尼單抗(panitumumab)及其類似物)、有絲分裂抑制劑(例如紫杉醇、長春新鹼、長春鹼及類似物)、烷化劑(例如順鉑、環磷醯胺、苯丁酸氮芥、卡莫司汀及其類似物)、抗代謝物(例如甲胺喋呤、5-FU及類似物)、嵌入抗癌劑(例如放線菌素、蒽環黴素(anthracycline)、博萊黴素(bleomycin)、絲裂黴素C及類似物)、拓樸異構酶抑制劑(例如伊立替康、拓樸替康、替尼泊苷及類似物)、免疫治療劑(例如介白素、干擾素及類似物)以及抗激素藥劑(例如他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)及其類似物)。

經同位素標記之化合物亦在本揭露內容之範圍內。如本文所用，「經同位素標記之化合物」係指本發明所揭露之化合物，包括各自如本文所述之醫藥鹽及其前藥，其中一或多個原子被原子質量或質量數不同於自然界中通常存在之原子質量或質量數的原子置換。可併入本發明所揭露之化合物中的同位素實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟及氯之同位素，諸如分別為 ²H、 ³H、 ¹³C、 ¹⁴C、 ¹⁵N、 ¹⁸O、 ¹⁷O、 ³¹P、 ³²P、 ³⁵S、 ¹⁸F及 ³⁶Cl。

藉由對本發明所揭露之化合物進行同位素標記，該等化合物可適用於藥物及/或受質組織分佈分析。氚化( ³H)及碳-14 ( ¹⁴C)標記之化合物因其容易製備及可偵測性而特別較佳。另外，較重同位素(諸如氘( ²H))的取代可提供由較大代謝穩定性引起的某些治療優勢，例如延長之活體內半衰期或降低之劑量需求，且因此在某些情況下可為較佳。本發明所揭露之經同位素標記之化合物(包括其醫藥鹽、酯及前藥)可藉由此項技術中已知的任何方式製備。

另外，通常豐度高的氫( ¹H)被較重同位素(諸如氘)取代可提供某些治療優勢，例如歸因於改良的吸收、分佈、代謝及/或排出(ADME)特性，從而產生功效、安全性及/或耐受性改良的藥物。好處亦可獲自通常豐度高之 ¹²C被 ¹³C置換。(參見WO 2007/005643、WO 2007/005644、WO 2007/016361及WO 2007/016431.)

因此，本發明涵蓋其中一或多個氫原子(例如1、2、4、5、6、7、8、9、10個氫原子等)被氘原子置換的同位素衍生化合物。在某些實施例中，本發明之同位素衍生化合物中的一個氫原子被氘原子置換。

本發明所揭露之化合物的立體異構體(例如順式及反式異構體)及所有光學異構體(例如R及S鏡像異構物)以及此類異構物之外消旋、非鏡像異構體及其他混合物在本揭露內容之範圍內。

本發明之化合物在其製備之後，較佳經分離及純化，以獲得含量等於或大於95重量%(「基本上純的」)的組成物，其接著如本文所述加以使用或調配。在某些實施例中，本發明化合物的純度大於99%。

本文亦涵蓋本發明化合物之溶劑合物及多晶型物。本發明化合物之溶劑合物包括例如水合物。

以下實例意欲說明本發明之實施且不以任何方式具限制性。實例縮寫

ACN	乙腈
DCM	二氯甲烷
DMA	N,N-二甲基乙醯胺
DMSO	二甲亞碸
EA	乙酸乙酯
EDTA	乙二胺四乙酸
EtOAc	乙酸乙酯
HIC	疏水性相互作用層析
HOPO	2-羥基吡啶N-氧化物
HPLC	高壓液相層析
LCMS	液相層析-質譜法
NMR	核磁共振
PE	石油醚
RT	室溫
TCEP	參(2-羧乙基)膦
TFA	三氟乙酸
THF	四氫呋喃

合成

將H ₂SO ₄(98%，12 mL)逐滴添加至 CAS 86639-65-8(1000 mg，2.34 mmol)於MeOH (60 mL)與H ₂O (60 mL)之混合物中的懸浮液中，接著添加FeSO ₄·7H ₂O (356 mg，2.34 mmol)。在攪拌的同時，緩慢地將H ₂O ₂(30%，10 mL)逐滴添加至溶液中，接著在60℃下攪拌溶液10小時。反應完成後，添加H ₂O，且所得沉澱物在真空下過濾且乾燥，得到呈灰白色固體狀的 INT-1(950 mg，粗物質)。MS: m/z= 457.2 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

將H ₂SO ₄(濃，0.5 mL)添加至在25℃下攪拌之 INT-1(800 mg，1.75 mmol)於HBr (40%於水中，20 mL)中之溶液中。在100℃下攪拌反應混合物2小時。用水(100 mL)稀釋，過濾。蒸發濾餅，得到呈黃色固體狀之 INT-2(500 mg，粗物質)。MS: m/z = 521.0 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

將𠰌啉(2 mL)添加至在25℃下攪拌之7-(溴甲基)-10-溴喜樹鹼 INT-2(500 mg，0.38 mmol，40%)於ACN (10 mL)中之溶液中。在25℃下攪拌反應混合物3小時。蒸發且藉由急驟層析(DCM/EA=3/1)純化，得到呈棕色固體狀之 INT-3(60 mg，產率29.3%)。MS: m/z = 525.7 (M+, ESI ⁺)。

將Xantphos Pd G3 (9 mg，0.01 mmol)添加至在25℃下、在氮氣下攪拌之7-(4-𠰌啉基甲基)-10-溴喜樹鹼 INT-3(50 mg，0.1 mmol)、胺基甲酸三級丁酯(33 mg，0.3 mmol)及Cs ₂CO ₃(62 mg，0.2 mmol)於二㗁烷(10 mL)中之溶液中。在80℃下攪拌反應混合物12小時。過濾且蒸發濾液且藉由急驟層析(DCM/EA=2/1)純化，得到呈黃色固體狀之 INT-4(10 mg，產率18.5%)。MS: m/z = 563.3 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

將TFA (0.5 mL)逐滴添加至在25℃下攪拌之N-(7-(4-𠰌啉基甲基)喜樹鹼-10-基)胺基甲酸1,1-二甲基乙酯 INT-4(9 mg，0.016 mmol)於DCM (2 mL)中之溶液中。在25℃下攪拌反應混合物2小時。蒸發且藉由製備型HPLC純化(Gemini-C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% NH ₃)，得到呈黃色固體狀的化合物 1(3.4 mg，產率：44.2%)。MS: m/z = 462.8 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.95 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.37 (dd, J = 9.1, 2.2 Hz, 1H), 7.26 (s, 1H), 5.57 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 5.38 (d, J = 18.8 Hz, 3H), 4.92 (s, 1H), 4.85 (s, 1H), 4.62 (s, 1H), 3.84 (s, 4H), 3.26 (s, 4H), 1.95 (dt, J = 11.1, 7.0 Hz, 2H), 0.99 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。

將1-甲基哌𠯤(1.5 mL)添加至在25℃下攪拌之7-(溴甲基)-10-溴喜樹鹼 INT-2(100 mg，0.15 mmol，80%)於ACN (10 mL)中之溶液中。在25℃下攪拌反應混合物3小時。蒸發且藉由急驟層析(DCM:EtOAc 3:1)純化，得到呈黃色固體狀的 INT-5(56 mg，產率66.8%)。MS: m/z = 539.1 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

將Cs ₂CO ₃(12 mg，0.037 mmol)添加至在氮氣下、在25℃下攪拌之7-((4-甲基-1-哌𠯤基)甲基)-10-溴喜樹鹼 INT-5(10 mg，0.02 mmol)、胺基甲酸三級丁酯(11 mg，0.09 mmol)及Xantphos Pd G3 (1.8 mg，0.002 mmol)於1,4-二㗁烷(5 mL)中之溶液中。在80℃下攪拌反應混合物12小時。過濾，且蒸發濾液且藉由急驟層析(DCM:EtOAc 3:1)純化，得到呈黃色固體狀的 INT-6(10 mg，產率89.2%)。MS: m/z = 576.3 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

將TFA (1 mL)添加至在25℃下攪拌之N-(7-((4-甲基-1-哌𠯤基)甲基)喜樹鹼-10-基)胺基甲酸1,1-二甲基乙酯 INT-6(10 mg，0.02 mmol)於DCM (3 mL)中之溶液中。在25℃下攪拌反應混合物1小時。蒸發且藉由製備型HPLC純化(C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% NH ₃)，得到呈黃色固體狀的化合物2 (3.4 mg，產率：44.2%)。MS: m/z = 476.2 (M+, ESI ⁺)。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.91 (t, J = 11.7 Hz, 1H), 7.62 - 7.47 (m, 1H), 7.39 - 7.19 (m, 2H), 5.59 (dd, J = 23.6, 16.3 Hz, 1H), 5.38 (dd, J = 23.6, 19.3 Hz, 2H), 4.15 (s, 1H), 3.78 - 3.44 (m, 3H), 3.31 - 3.11 (m, 4H), 2.98 - 2.76 (m, 5H), 2.59 (dd, J = 39.6, 27.7 Hz, 2H), 2.03 - 1.92 (m, 2H), 1.06 - 1.01 (m, 3H)。

在0℃下，將4-溴苯胺(5000 mg，29.07 mmol)於無水甲苯(50 mL)中之溶液緩慢地添加至BCl ₃溶液(40.1 mL，1 M，於DCM中)。在0℃下攪拌混合物3小時。在0℃下，向所得混合物中添加2-氯乙腈(3028 mg，40.11 mmol)及AlCl ₃(4881.8 mg，36.6 mmol)，接著攪拌3小時。將混合物回流(90℃) 17個小時。冷卻後，添加HCl (2N，水溶液)且在80℃下加熱1小時。用DCM (100*3 mL)萃取溶液。有機層用水洗滌，乾燥(Na ₂SO ₄)且濃縮。所得粗產物在矽膠管柱(PE/EtOAc=1/8)上純化，得到呈白色固體狀的 INT-7(3100 mg，產率：41%)。 ¹H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.73 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 8.9, 2.3 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.65 (s, 2H)。

(S)-4-乙基-4-羥基-7,8-二氫-1H-哌喃并(3,4-f)吲哚𠯤-3,6,10(4H)-三酮(600 mg，2.27 mmol)、1-(2-胺基-5-溴苯基)-2-氯乙-1-酮 INT-7(736 mg，2.96 mmol)及TsOH (78.4 mg，0.45 mmol)於甲苯(20 mL)中之混合物在100℃下攪拌17小時。在減壓下移除溶劑，添加DCM (30 mL)。過濾混合物，收集呈黃色固體狀的濾餅 INT-8(600 mg)。不經進一步純化即用於下一步驟。LCMS (ESI): m/z 474.9 [M+H] ⁺。

向(S)-9-溴-11-(氯甲基)-4-乙基-4-羥基-1,12-二氫-14H-哌喃并(3',4':6,7)吲哚𠯤并(1,2-b)喹啉-3,14(4H)-二酮 INT-8(150 mg，0.32 mmol)於ACN (20 mL)中之混合物中添加硫代𠰌啉1,1-二氧化物(426.2 mg，3.15 mmol)。將混合物加熱至80℃維持17小時，接著濃縮。藉由急驟層析(用CH ₂Cl ₂/MeOH = 10:1溶離)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀的 INT-9(100 mg，產率：54%)。LCMS (ESI): m/z 574.1 [M+H] ⁺。

將CS ₂CO ₃(20 mg，0.06 mmol)添加至在氮氣下、在25℃下攪拌之(S)-9-溴-11-((1,1-二氧代硫𠰌啉基)甲基)-4-乙基-4-羥基-1,12-二氫-14H-哌喃并(3',4':6,7)吲哚𠯤并(1,2-b)喹啉-3,14(4H)-二酮 INT-9(10 mg，0.02 mmol)、胺基甲酸三級丁酯(24 mg，0.2 mmol)及Xantphos Pd G3 (2 mg，0.002 mmol)於二㗁烷(10 mL)中之溶液中。在80℃下攪拌反應混合物12小時，濃縮。將TFA (3 mL)至含有粗物質的DCM (6 mL)中，攪拌2小時。經由製備型HPLC純化殘餘物，得到化合物 3(3.5 mg，產率：30%)。LCMS (ESI): m/z 511.0 [M+H] ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, CD ₃CN) δ 7.82 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.21 - 7.17 (m, 1H), 7.15 (s, 1H), 5.46 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 5.37 (s, 1H), 5.22 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.02 (s, 2H), 2.95 (s, 8H), 1.80 (s, 2H), 0.87 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。

將MeONa (239 mg，4.42 mmol)添加至在25℃下攪拌之1-(2-胺基-5-溴苯基)-2-氯乙烷 INT-7(1000 mg，4.02 mmol)於MeOH (20 mL)中之溶液中。在25℃下攪拌反應混合物6小時。在減壓下移除溶劑且藉由FCC (DCM/EA=3/1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀的 INT-10(400 mg，38.7%)。LCMS (ESI): m/z 245 [M+H] ⁺。

將單水合對甲苯磺酸(31 mg，0.16 mmol)添加至在氮氣下、在25℃下攪拌之1-(2-胺基-5-溴苯基)-2-甲氧基乙酮 INT-10(400 mg，11.6 mmol)及(4S)-4-乙基-4-羥基-1H,7H,8H-哌喃并[3,4-f]吲哚𠯤-3,6,10-三酮(431 mg，1.60 mmol)於甲苯(30 mL)中之溶液中。所得混合物在90℃下攪拌12小時。蒸發且用乙酸乙酯稀釋，過濾，收集濾餅且乾燥，得到呈灰白色固體狀的 INT-11(450 mg，55.4%)。LCMS (ESI): m/z 472 [M+H] ⁺。

在氮氣下將Cs ₂CO ₃(622 mg，1.91 mmol)添加至在25℃下攪拌之 INT -11(450 mg，0.95 mmol)、胺基甲酸苯甲酯(577 mg，3.82 mmol)及Xantphos Pd G3 (91 mg，0.095 mmol)於二㗁烷(20 ml)中之溶液中。在90℃下攪拌反應混合物1小時。將其過濾且濃縮。藉由FCC (DCM/EA=2/1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀的 INT -12(400 mg，73.5%)。LCMS (ESI): m/z 541 [M+H] ⁺。

在H ₂氛圍下，將Pd(OH) ₂/C (50 mg)添加至(S)-(4-羥基-11-(甲氧基甲基)-4-甲基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-9-基)胺基甲酸苯甲酯 INT-12(140 mg，8.44 mmol)於10 mL MeOH/THF=1/3中之溶液中。所得混合物在室溫下攪拌2小時。過濾固體且在減壓下濃縮，得到呈黃色固體狀的化合物 4(100 mg，92%)。LCMS (ESI): m/z 408.0 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.86 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 7.19 (s, 1H), 7.00 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 5.40 (s, 2H), 5.26 (s, 2H), 4.93 (s, 2H), 3.44 (s, 3H), 1.85 (dt, J = 13.8, 6.8 Hz, 2H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。

將Et ₃N (555 mg，5.49 mmol)添加在25℃下攪拌之10-羥基喜樹鹼(1000 mg，2.74 mmol)、苯基三氟甲磺醯亞胺(1177 mg，3.29 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液中。在25℃下攪拌反應混合物2小時。用HCl (1 M，50 mL)稀釋且過濾。在減壓下乾燥濾餅，得到呈灰白色固體狀的 INT-13(1.3 g，粗物質)。MS: m/z = 496.9(M+H ⁺, ESI ⁺)。

將Cs ₂CO ₃(1.6 g，7.2 mmol)添加至在25℃下、在氮氣下攪拌之10-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)喜樹鹼 INT-13(1.2 g，2.4 mmol)、胺基甲酸苯甲酯(1.1 g，7.2 mmol)及Xantphos Pd G3 (230 mg，0.2 mmol)於1,4-二㗁烷(100 ml)中之溶液中。在90℃下攪拌反應混合物30分鐘。過濾，且蒸發濾液且藉由急驟層析(DCM:MeOH=20:1)純化，得到呈黃色固體狀的 INT-14(800 mg，產率：66.6%)。MS: m/z = 498.0 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

將4-DMAP (10 mg，0.08 mmol)添加至在25℃下攪拌之10-(((苯基甲氧基)羰基)胺基)喜樹鹼 INT-14(800 mg，1.6 mmol)、Ac ₂O (1 mL)於吡啶(10 mL)中之溶液中。在25℃下攪拌反應混合物2小時。用氯化銨溶液(100 mL)稀釋且過濾，在減壓下乾燥濾餅，得到呈黃色固體狀的 INT-15(900 mg，粗物質)。MS: m/z = 540.0 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

將H ₂O ₂(3 mL)添加至在25℃下、在氮氣下攪拌之10-(((苯基甲氧基)羰基)胺基)-20 -O-乙醯基喜樹鹼 INT-15(900 mg，1.67 mmol)於AcOH (10 mL)中之溶液中。在70℃下攪拌反應混合物2小時。蒸發，得到呈黃色固體狀的 INT-16(1000 mg，粗物質)。MS: m/z = 556.1(M+H ⁺, ESI ⁺)。

將10-(((苯基甲氧基)羰基)胺基)-20 -O-乙醯基喜樹鹼1-氧化物 INT-16(1000 mg，1.8 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液添加至在25℃下、在氮氣下攪拌之POBr ₃(1032 mg，3.6 mmol)於DMF (20 mL)中之溶液中。在25℃下攪拌反應混合物1小時。用水(120 mL)稀釋且過濾。在減壓下乾燥濾餅且藉由急驟層析(DCM:MeOH=20:1)純化，得到呈黃色固體狀的 INT-17(400 mg，產率：34.1%)。MS: m/z = 618.6 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

將𠰌啉(2 mL)添加至在25℃下攪拌之7-溴-10-(((苯基甲氧基)羰基)胺基)-20 -O-乙醯基喜樹鹼 INT-17(55 mg，0.09 mmol)於1,4-二㗁烷(20 mL)中之溶液中。在60℃下攪拌反應混合物16小時。用TFA (0.5 mL)淬滅，藉由製備型HPLC (C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% TFA)直接純化，得到呈黃色固體狀的 INT-18(18 mg，產率：92.1%)。MS: m/z = 625.3 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

向7-(4-𠰌啉基)-10-(((苯基甲氧基)羰基)胺基)-20 -O-乙醯基喜樹鹼 INT-18(18 mg，0.03 mmol)於THF/MeOH (2/3，5 mL)中之溶液中添加Pd(OH) ₂/C (8 mg，0.06 mmol)。在25℃下、在H ₂下攪拌反應混合物2小時。過濾且濾液在減壓下乾燥且藉由製備型HPLC (C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% TFA)純化，得到呈黃色固體狀的 INT-19(18 mg，產率：55.9%)。MS: m/z = 491.2(M+H ⁺, ESI ⁺)。

將NaOH (1 M，0.05 mL)添加至在25℃下攪拌之7-(4-𠰌啉基)-10-胺基-20 -O-乙醯基喜樹鹼 INT-19(8 mg，0.016 mmol)於MeOH (3 mL)中之溶液中。在25℃下攪拌反應混合物1小時。用TFA (0.5 mL)淬滅，藉由製備型HPLC (C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% TFA)直接純化，得到呈黃色固體狀的化合物 5(3.4 mg，產率：44.2%)。MS: m/z = 449.1 (M+H ⁺, ESI ⁺)。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.84 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.34 (dd, J = 9.0, 2.3 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.58 (d, J = 16.3 Hz, 1H), 5.46 (s, 2H), 5.38 (d, J = 16.3 Hz, 1H), 4.03 - 4.00 (m, 4H), 3.61 - 3.54 (m, 4H), 2.00 - 1.93 (m, 2H), 1.01 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。

將吡咯啶(1 mL)添加至在25℃下、在氮氣下攪拌之7-溴-10-(((苯基甲氧基)羰基)胺基)-20 -O-乙醯基喜樹鹼 INT-17(60 mg，0.08 mmol)於二㗁烷(10 mL)中之溶液中。在40℃下攪拌反應混合物16小時。將其在減壓下濃縮。藉由製備型HPLC (Gemini-C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% TFA)純化殘餘物，得到呈棕色固體狀的 INT-20(30 mg，60.4%)。MS: m/z = 609.2 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

將Pd(OH) ₂/C (14 mg，0.1 mmol)添加至在25℃下攪拌之7-(1-吡咯啶基)-10-(((苯基甲氧基)羰基)胺基)-20-O-乙醯基喜樹鹼 INT-20(30 mg，0.05 mmol)於THF/MeOH (5/1，6 mL)中之溶液中。在25℃下、在H ₂下攪拌反應混合物2小時。過濾。在減壓下濃縮濾液且藉由製備型HPLC (Gemini-C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% TFA)純化，得到呈黃色固體狀的 INT-21(23 mg，產率：93.3%)。MS: m/z = 474 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

將NaOH (1 M，0.25 mL)添加至在25℃下攪拌之7-(1-吡咯啶基)-10-胺基-20 -O-乙醯基喜樹鹼 INT -21(23 mg，0.05 mmol)於MeOH (5 mL)中之溶液中。在25℃下攪拌反應混合物1小時。用TFA中和，藉由製備型HPLC (Gemini-C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% TFA)直接純化，得到呈黃色固體狀的化合物 6(4.7 mg，產率：21.2%)。MS: m/z = 433.0 (M+H ⁺, ESI ⁺)。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.67 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.56 (s, 1H), 5.84 (d, J = 23.4 Hz, 1H), 5.60 (s, 2H), 5.39 (s, 2H), 4.06 (s, 2H), 3.50 (d, J = 31.0 Hz, 4H), 1.98 (s, 4H), 1.82 (dd, J = 14.7, 7.2 Hz, 2H), 0.83 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。

將2-氧雜-6-氮雜螺(3.3)庚烷(115 mg，1.2 mmol)添加至在25℃下、在氮氣下攪拌之7-溴-10-(((苯基甲氧基)羰基)胺基)-20 -O-乙醯基喜樹鹼 INT-17(120 mg，0.1 mmol)於二㗁烷(8 mL)中之溶液中。在60℃下攪拌反應混合物12小時。用TFA (0.5 mL)淬滅，藉由製備型HPLC (C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% TFA)純化，得到呈黃色固體狀的 INT-22(25 mg，產率：34.28%)。MS: m/z= 595.1 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

將Pd(OH) ₂/C (9 mg，0.06 mmol)添加至在25℃下攪拌之7-(2-氧雜-6-氮雜螺(3.3)庚-6-基)-10-(((苯基甲氧基)羰基)胺基)喜樹鹼 INT-22(25 mg，0.04 mmol)於MeOH/THF (2:1，5 mL)中之溶液中。在25℃下、在H ₂下攪拌反應混合物2小時。過濾，且濾液在減壓下乾燥且藉由製備型HPLC (C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% TFA)純化，得到呈磚紅色固體狀的化合物 7(5.5 mg，產率：26.9%)。MS: m/z= 461.1(M+H ⁺, ESI ⁺)。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.68 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.30 (s, 2H), 6.63 (s, 1H), 5.49 - 5.37 (m, 4H), 5.23 (s, 4H), 4.81 (s, 4H), 1.94 - 1.77 (m, 2H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。

將氮雜環丁烷(55 mg，1 mmol)添加至在25℃下、在氮氣下攪拌之7-溴-10-(((苯基甲氧基)羰基)胺基)-20 -O-乙醯基喜樹鹼 INT-17(60 mg，0.1 mmol)於1,4-二㗁烷(10 mL)中之溶液中。在60℃下攪拌反應混合物12小時。用TFA (0.5 mL)淬滅，藉由製備型HPLC (C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% TFA)純化，得到呈黃色固體狀的 INT-23(25 mg，產率：36.91%)。MS: m/z= 553.0 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

將Pd(OH) ₂/C (10 mg，0.07 mmol)添加至在25℃下攪拌之7-(1-氮雜環丁烷基)-10-(((苯基甲氧基)羰基)胺基)喜樹鹼 INT-23(25 mg，0.05 mmol)於MeOH/THF (2:1，5 mL)中之溶液中。在25℃下、在H ₂下攪拌反應混合物2小時。過濾，且濾液在減壓下乾燥且藉由製備型HPLC (C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% TFA)純化，得到呈磚紅色固體狀的化合物 8(5 mg，產率：25.2%)。MS: m/z= 419.2 (M+H ⁺, ESI ⁺)。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.64 - 7.51 (m, 2H), 7.33 (s, 1H), 7.26 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.51 - 5.35 (m, 3H), 5.29 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 5.08 (t, J = 7.7 Hz, 4H), 2.57 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 1.85 (dt, J = 14.1, 7.1 Hz, 2H), 0.90 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。

將7-氧雜-2-氮雜螺(3.5)壬烷(82 mg，0.6 mmol)添加至在25℃下、在氮氣下攪拌之7-溴-10-(((苯基甲氧基)羰基)胺基)-20 -O-乙醯基喜樹鹼 INT-17(100 mg，0.2 mmol)於1,4-二㗁烷(10 mL)中之溶液中。在60℃下攪拌反應混合物12小時。用TFA (0.5 mL)淬滅，藉由製備型HPLC (C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% TFA)純化，得到呈黃色固體狀的 INT-24(35 mg，產率：34.4%)。MS: m/z= 622 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

將Pd(OH) ₂/C (10 mg，0.07 mmol)添加至在25℃下攪拌之7-(7-氧雜-2-氮雜螺(3.5)壬-2-基)-10-(((苯基甲氧基)羰基)胺基)喜樹鹼 INT-24(30 mg，0.05 mmol)於MeOH/THF (2:1，5 mL)中之溶液中。在H ₂下、在25℃下攪拌反應混合物2小時。過濾，且濾液在減壓下乾燥且藉由製備型HPLC (C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% TFA)純化，得到呈磚紅色固體狀的化合物 9(5.7 mg，產率：23.0%)。MS: m/z= 489.0 (M+H ⁺, ESI ⁺)。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.65 (dd, J = 14.5, 6.8 Hz, 2H), 7.47 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 9.0, 2.2 Hz, 1H), 5.62 - 5.52 (m, 3H), 5.38 (d, J = 16.6 Hz, 1H), 4.92 - 4.88 (m, 4H), 3.76 - 3.68 (m, 4H), 1.97 - 1.87 (m, 6H), 0.97 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。

將H ₂SO ₄(98%，5 mL)逐滴添加至10-(((苯基甲氧基)羰基)胺基)-20 -O-乙醯基喜樹鹼 INT-15(600 mg，1.1 mmol)於MeOH (5 mL)與H ₂O (5 mL)之混合物中的懸浮液中，接著添加FeSO ₄·7H ₂O (169 mg，1.1 mmol)。在攪拌的同時，將H ₂O ₂(30%，1 mL)逐滴添加至溶液中，接著在60℃下攪拌溶液10小時。反應完成後，將其用水稀釋。所得沉澱物藉由過濾收集且乾燥。得到呈灰白色固體狀的 INT-25(450 mg，粗物質)。MS: m/z= 570.0 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

將Pd(OH) ₂/C (15 mg)添加至7-(4-𠰌啉基)-10-(((苯基甲氧基)羰基)胺基)-20 -O-乙醯基喜樹鹼 INT-25(100 mg，粗物質)於THF/MeOH (2/3，10 mL)中之溶液中。在25℃下、在H ₂氛圍下攪拌反應混合物2小時。過濾，且在減壓下蒸發濾液。將殘餘物溶解於MeOH (10 mL)中，逐滴添加NaOH (1 M，0.25 mL)。反應混合物在25℃下攪拌1小時且用TFA中和，藉由製備型HPLC (Gemini-C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% TFA)直接純化，得到呈黃色固體狀的化合物 10(7.6 mg，產率：7.7%)。MS: m/z= 394.1 (M+H ⁺, ESI ⁺). ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.80 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 14.6, 13.0 Hz, 2H), 6.89 (s, 1H), 6.42 (s, 1H), 5.95 (s, 2H), 5.63 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 5.33 (d, J = 27.4 Hz, 4H), 5.00 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 1.81 (dt, J = 13.4, 6.7 Hz, 2H), 0.83 (t, J = 7.2 Hz, 3H)。

將6-氧雜-2-氮雜螺(3.4)辛烷;草酸(246 mg，1.2 mmol，經3 mL含NaHCO ₃之二㗁烷預處理)添加至在氮氣下、在25℃下攪拌之7-溴-10-(((苯基甲氧基)羰基)胺基)-20 -O-乙醯基喜樹鹼 INT-17(50 mg，0.08 mmol)於1,4-二㗁烷(5 mL)中之溶液中。在70℃下攪拌反應混合物12小時。用TFA (0.5 mL)淬滅，藉由製備型HPLC (:-Gemini-C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% TFA)直接純化，得到呈棕色固體狀之 INT-26(30 mg，產率：60.4%)。MS: m/z= 609 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

將Pd(OH)2/C (8 mg，0.06 mmol)添加至在25℃下攪拌之7-(6-氧雜-2-氮雜螺(3.4)辛烷-2-基)-10-(((苯基甲氧基)羰基)胺基)喜樹鹼 INT-26(35 mg，0.06 mmol)於MeOH (20 mL)中之溶液中。在25℃下、在H ₂下攪拌反應混合物2小時。過濾，且濾液在減壓下乾燥且藉由製備型HPLC (:-Gemini-C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% TFA)純化，得到呈磚紅色固體狀的化合物 11(5.7 mg，產率：23.0%)。MS: m/z= 475 (M+H ⁺, ESI ⁺)。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.69 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.66 (s, 1H), 5.55 - 5.36 (m, 4H), 5.09 (s, 4H), 3.94 (s, 2H), 3.80 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 2.29 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 1.95 - 1.76 (m, 2H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。

將哌啶(1 mL)添加至含有乙酸(S)-9-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-11-溴-4-乙基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-17(50 mg，0.08 mmol)的1,4-二㗁烷(4 mL)中，在80℃下攪拌72小時。用水(3 mL)淬滅，過濾，得到呈棕色固體狀的 INT-27(50 mg，90%)。MS: m/z= 623.3 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

將NaOH (1 N) (0.5 mL)添加至乙酸(S)-9-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-4-乙基-3,14-二側氧基-11-(哌啶-1-基)-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-27(50 mg，0.08 mmol)於MeOH (3 mL)中之攪拌溶液中。在25℃下攪拌混合物1小時。向混合物中添加1 mL HCL (2 N)且濃縮。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化殘餘物，得到呈白色固體狀的 INT-28(10 mg，產率：52%)。LCMS (ESI): m/z 581.2 [M+H] ⁺。

將0.2 mL含HBr之CH ₃COOH (0.2 mL)添加至(S)-(4-乙基-4-羥基-3,14-二側氧基-11-(哌啶-1-基)-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-9-基)胺基甲酸苯甲酯 INT-28(3 mg，0.005 mmol)之溶液中。在25℃下攪拌混合物30分鐘。用NaHCO ₃將混合物調節至pH。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化殘餘物，得到呈紅色固體狀之 12(1.5 mg，產率：62%) LCMS (ESI): m/z 447.1 [M+H] ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.82 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.41 (dd, J = 9.0, 2.3 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 5.57 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 4.1 Hz, 2H), 5.39 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 3.73 (s, 4H), 1.98 - 1.90 (m, 6H), 1.88 - 1.80 (m, 2H), 0.98 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。

將1-甲基哌𠯤(309 mg，1.6 mmol)添加至含有乙酸(S)-9-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-11-溴-4-乙基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-17(200 mg，0.32 mmol)的DMF (0.5 mL)中，在25℃下攪拌17小時。用水(3 mL)淬滅，過濾，藉由製備型HPLC (:-Gemini-C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% TFA)純化，得到呈棕色固體狀之 INT-29(50 mg，產率：23%)。MS: m/z= 638.3 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

將NaOH (1 N) (0.5 mL)添加至乙酸(S)-9-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-4-乙基-11-(4-甲基哌𠯤-1-基)-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-29(50 mg，0.13 mmol)於MeOH (3 mL)中的攪拌溶液中。在25℃下攪拌混合物1小時。向混合物中添加1 mL HCL (2 N)且濃縮。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化殘餘物，得到呈白色固體狀的 INT-30(10 mg，產率：52%)。LCMS (ESI): m/z 496.3 [M+H] ⁺。

將0.2 mL含HBr之CH ₃COOH (0.2 mL)添加至(S)-(4-乙基-4-羥基-11-(4-甲基哌𠯤-1-基)-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-9-基)胺基甲酸苯甲酯 INT-30(14 mg，0.024 mmol)之溶液中。在25℃下攪拌混合物30分鐘。用NaHCO ₃將混合物調節至pH。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化殘餘物，得到呈紅色固體狀之 13(5 mg，產率：43%) LCMS (ESI): m/z 462.2 [M+H] ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.84 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.26 (dd, J = 9.2, 2.5 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 5.56 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 5.42 (s, 2H), 5.36 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 3.88 - 3.80 (m, J = 10.5 Hz, 2H), 3.78 - 3.69 (m, J = 8.6 Hz, 2H), 3.58 - 3.48 (m, J = 17.2 Hz, 4H), 3.08 (s, J = 5.7 Hz, 3H), 2.95 (s, 3H), 1.98 - 1.90 (m, 2H), 0.99 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。

將含4 M二甲胺之THF (2 mL)添加至含乙酸(S)-9-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-11-溴-4-乙基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-17(50 mg，0.08 mmol)及DIEA (21 mg，0.16 mmol)之DMF (0.5 mL)中，在60℃下攪拌1小時。用水(3 mL)淬滅，過濾，藉由製備型HPLC (Gemini-C18 250 x 30 mm，10 μm，ACN-H ₂O (0.1% TFA)純化，得到呈棕色固體狀之 INT-31(50 mg，產率：23%)。MS: m/z= 583.3 (M+H ⁺, ESI ⁺)。

將NaOH (1 N) (0.5 mL)添加至乙酸(S)-9-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-11-(二甲胺基)-4-乙基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-31(20 mg，0.03 mmol)於MeOH (3 mL)中的攪拌溶液中。在25℃下攪拌混合物1小時。向混合物中添加1 mL HCl (2 N)且濃縮。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化殘餘物，得到呈紅色固體狀之 INT-32(10 mg，產率：53%)。LCMS (ESI): m/z 541.3 [M+H] ⁺。

將0.3 mL含HBr之CH ₃COOH (33%)添加至(S)-(11-(二甲胺基)-4-乙基-4-羥基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-9-基)胺基甲酸苯甲酯 INT-32(50 mg，0.086 mmol)之溶液中。在25℃下攪拌混合物30分鐘。用NaHCO ₃將混合物調節至pH。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化殘餘物，得到呈紅色固體狀之 14(5 mg，產率：33%) LCMS (ESI): m/z 407.2 [M+H] ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.76 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.38 - 7.30 (m, 2H), 5.62 - 5.48 (m, J = 15.8 Hz, 3H), 5.38 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 3.46 (s, 6H), 1.93 (dd, J = 7.2, 5.5 Hz, 2H), 0.98 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。

乙酸(S)-11-氯-4-乙基-9-硝基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-33(50 mg，0.11 mmol)及1-甲烷磺醯基哌𠯤(349 mg，2.13 mmol)於無水THF (2 mL)中之溶液在60℃下攪拌8小時且濃縮，得到呈黃色固體狀的 INT-34(50 mg，63.9%)。LCMS (ESI): m/ z597.9 (M+H) ⁺。

乙酸(S)-4-乙基-11-(4-(甲基磺醯基)哌𠯤-1-基)-9-硝基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-34(50 mg，0.08 mmol)、4,4'-聯吡啶(0.7 mg，0.004 mmol)及四羥基二硼(23 mg，0.25 mmol)於無水DMF (2 mL)中之溶液在25℃下攪拌30分鐘。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化混合物，得到呈黃色固體狀的 INT-35(15 mg，31.3%)。LCMS (ESI): m/ z567.8 (M+H) ⁺。

將NaOH (0.5 mL，1 N)添加至乙酸(S)-9-胺基-4-乙基-11-(4-(甲基磺醯基)哌𠯤-1-基)-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-35(15 mg，0.0264 mmol)於無水MeOH (5 mL)中之溶液中。在25℃下攪拌混合物1小時。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化混合物，得到呈黃色固體狀的 15(6 mg，42.1%)。LCMS (ESI): m/ z526.2 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.81 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 7.26-7.18 (m, 2H), 7.09 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 5.44 (s, 2H), 3.46 (s, 8H), 3.03 (s, 3H), 1.92-1.77 (m, 2H), 0.86 (t, J= 7.2 Hz, 3H)。

乙酸(S)-11-氯-4-乙基-9-硝基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-33(50 mg，0.11 mmol)及2-甲氧基-N-甲基乙-1-胺(19 mg，0.21 mmol)於無水THF (2 mL)中之溶液在25℃下攪拌4小時。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化殘餘物，得到呈白色固體狀的 INT-36(20 mg，產率：35%)。LCMS (ESI): m/z 523.2 [M+H] ⁺。

將20 mL DMF添加至乙酸(S)-4-乙基-11-(乙基(2-甲氧基乙基)胺基)-9-硝基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-36(10 mg，1.9 mmol)、4,4'-聯吡啶(0.2 mg，0.0008 mmol)及四羥基二硼(5 mg，0.05 mmol)之混合物中且在25℃下攪拌0.5小時。藉由HPLC (用ACN-H ₂O (0.1%TFA)溶離)純化混合物，得到呈黃色固體狀的 INT-37(5 mg，55%)。LCMS (ESI): m/z 492.9 (M+H) ⁺。

將1 N NaOH (0.2 mL)添加至乙酸(S)-9-胺基-4-乙基-11-((2-甲氧基乙基)(甲基)胺基)-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-37(10 mg，0.02 mmol)於2 mL MeOH中之溶液中。在25℃下攪拌混合物1小時，接著在25℃下添加0.08 mL HCl維持5分鐘。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化混合物，得到呈黃色固體狀的 16(3 mg，33%)。LCMS (ESI): m/z 450.9 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.91 - 7.84 (m, J = 9.9 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.50 - 7.28 (m, J = 15.0, 6.0 Hz, 2H), 5.62 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.49 - 5.38 (m, J = 19.3, 10.2 Hz, 3H), 3.95 - 3.80 (m, J = 5.1 Hz, 2H), 3.77 - 3.68 (m, J = 5.0 Hz, 2H), 3.42 (s, 3H), 2.05 - 1.90 (m, 2H), 1.03 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。

乙酸(S)-11-氯-4-乙基-9-硝基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-33(50 mg，0.11 mmol)及N1,N1,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺(54 mg，0.53 mmol)於無水THF (5 mL)中之溶液在25℃下攪拌8小時。添加水。殘餘物用DCM (3x10 mL)萃取且濃縮，得到呈紅色固體狀之 INT-38(12 mg，19%)。LCMS (ESI): m/z 535.8 (M+H) ⁺。

將20 mL DMF添加至乙酸(S)-11-(1,1-二氧代硫𠰌啉基)-4-乙基-9-硝基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-38(20 mg，0.04 mmol)、4,4'-聯吡啶(0.3 mg，0.0008 mmol)及四羥基二硼(10 mg，0.12 mmol)之混合物中且在25℃下攪拌0.5小時。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化混合物，得到呈黃色固體狀的 INT-39(5 mg，55%)。LCMS (ESI): m/z 506.3 (M+H) ⁺。

將1 N NaOH (0.2 mL)添加至乙酸(S)-9-胺基-11-((2-(二甲胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-乙基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-39(10 mg，0.02 mmol)於3 mL MeOH中之溶液中。攪拌混合物2小時。在25℃下攪拌混合物1小時，接著添加0.1 ml HCl且攪拌5分鐘。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化混合物，得到呈黃色固體狀的 17(3 mg，53%)。LCMS (ESI): m/z 464.2 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.92 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.37 - 7.34 (m, 2H), 5.61 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 5.41 (d, J = 17.2 Hz, 3H), 3.83 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.60 - 3.50 (m, 2H), 3.16 (s, J = 7.4 Hz, 3H), 2.98 (s, J = 4.3 Hz, 6H), 1.98 (tt, J = 14.3, 7.0 Hz, 2H), 1.03 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。

乙酸(S)-11-氯-4-乙基-9-硝基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-33(50 mg，0.11 mmol)及8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷鹽酸鹽(96 mg，0.64 mmol)於無水二㗁烷(2 mL)中之溶液在25℃下攪拌48小時，接著濃縮。藉由FCC (DCM/EtOAc=2:3)純化混合物，得到呈黃色固體狀的 INT-40(17 mg，23.4%)。LCMS (ESI): m/ z546.8 (M+H) ⁺。

乙酸(S)-9-胺基-11-((1R,5S)-8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基)-4-乙基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-40(17 mg，0.03 mmol)、4,4'-聯吡啶(0.2 mg，0.002 mmol)及四羥基二硼(8 mg，0.09 mmol)於無水DMF (1 mL)中之溶液在25℃下攪拌30分鐘。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化混合物，得到呈黃色固體狀的 INT-41(8 mg，49.2%)。LCMS (ESI): m/ z517.0 (M+H) ⁺。

將NaOH (0.2 mL，1 N)添加至乙酸(S)-9-胺基-11-((1R,5S)-8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基)-4-乙基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-41(8 mg，0.02 mmol)於無水MeOH (2 mL)中之溶液中。在25℃下攪拌混合物2小時。藉由HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化混合物，得到呈黃色固體狀的 18(4 mg，53.6%)。LCMS (ESI): m/ z475.1 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.81 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 7.23 (dd, J= 8.9, J= 2.3 Hz, 1H), 7.19-7.18 (m, 2H),5.41 (d, J= 6.5 Hz, 4H), 4.46 (s, 2H), 3.37 (s, 2H), 3.23 (d, J= 11.2 Hz, 2H), 2.37-2.30 (m, 2H),2.02-1.93 (m, 2H), 1.89-1.76 (m, 2H), 0.86 (t, J= 7.3 Hz, 3H)。

將含2 M甲胺之THF (33 mg，1.064 mmol)添加至乙酸(S)-11-氯-4-乙基-9-硝基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-33(50 mg，0.1064 mmol)於無水THF (2 mL)中之溶液中。在氮氣下、在25℃下攪拌反應混合物0.2小時。在減壓下移除溶劑。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化粗物質，得到呈白色固體狀的 INT-42(30 mg，48.6%)。LCMS (ESI): m/z 465.1 [M+H] ⁺。

將B ₂H ₄O ₄(12 mg，0.13 mmol)添加至乙酸(S)-4-乙基-11-(甲胺基)-9-硝基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-42(20 mg，0.043 mmol)及4,4'-聯吡啶(3 mg，0.013 mmol)於無水DMF (2 mL)中之溶液中。在氮氣下，在25℃下攪拌反應混合物0.5小時。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化粗物質，得到呈黃色固體狀的 INT-43(10 mg，48.0%)。LCMS (ESI): m/z 435.2 [M+H] ⁺。

將NaOH (14 mg，0.345 mmol)添加至乙酸(S)-9-胺基-4-乙基-11-(甲胺基)-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-43(10 mg，0.023 mmol)於THF (2 mL)及H ₂O (2 mL)中之溶液中。在氮氣下、在25℃下攪拌反應混合物1小時。在減壓下移除溶劑。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化粗物質，得到呈白色固體狀的 18(2 mg，20.0%)。LCMS (ESI): m/z 393.1 [M+H] ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.76 - 7.66 (m, 2H), 7.49 - 7.28 (m, 1H), 7.18 (s, 1H), 5.70 (d, J= 6.5 Hz, 2H), 5.57 (d, J= 16.5 Hz, 1H), 5.39 (d, J= 16.5 Hz, 1H), 3.55 (d, J= 8.7 Hz, 3H), 1.99 - 1.88 (m, 2H), 0.98 (t, J= 7.3 Hz, 3H)。

將2-(甲胺基)乙醇(61 mg，0.85 mmol)添加至乙酸(S)-11-氯-4-乙基-9-硝基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-33(100 mg，0.21 mmol)之溶液中，在25℃下攪拌18小時。添加水。殘餘物用DCM (3×10 mL)萃取且濃縮，得到呈紅色固體狀之 INT-44(12 mg，19%)。LCMS(ESI): m/z 508.8 (M+H) ⁺。

將乙酸(S)-11-(1,1-二氧代硫𠰌啉基)-4-乙基-9-硝基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-44(20 mg，0.04 mmol)、4,4'-聯吡啶(0.3 mg，0.0008 mmol)及四羥基二硼(10 mg，0.12 mmol)添加至20 mL DMF中且在25℃下攪拌0.5小時。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化混合物，得到呈黃色固體狀的 INT-45(5 mg，55%)。LCMS (ESI): m/z 478.8 (M+H) ⁺。

將1 N NaOH (0.1 mL)添加至乙酸(S)-9-胺基-11-((2-(二甲胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-乙基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-45(10 mg，0.02 mmol)於3 mL MeOH中之溶液中。攪拌混合物2小時。在25℃下攪拌混合物1小時，接著添加0.1 ml HCl且攪拌5分鐘。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化混合物，得到呈紅色固體狀的 20(4 mg，43%)。LCMS (ESI): m/z 436.9 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.83 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 7.69 (s, J= 9.8 Hz, 1H), 7.46 - 7.36 (m, 2H), 5.70 - 5.57 (m, 1H), 5.56 - 5.36 (m, 1H), 3.91 (s, 4H), 3.49 (s, 3H), 2.04 - 1.89 (m, 2H), 1.03 (t, J= 7.4 Hz, 3H)。

將2-甲氧基-5-甲基苯胺(204 mg，1.49 mmol)添加至乙酸(S)-11-氯-4-乙基-9-硝基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-33(70 mg，0.15 mmol)於THF (2 mL)中之溶液中。在25℃下攪拌混合物16小時且濃縮，得到呈黃色固體狀的 INT-46(70 mg，41.1%)。LCMS (ESI): m/ z570.9 (M+H) ⁺。

乙酸(S)-4-乙基-11-((4-甲氧基苯甲基)胺基)-9-硝基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-46(70 mg，0.12 mmol)、4,4'-聯吡啶(1 mg，0.01 mmol)及四羥基二硼(33 mg，0.37 mmol)於無水DMF (2 mL)中之溶液在25℃下攪拌30分鐘。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化混合物，得到呈黃色固體狀的 INT-47(25 mg，37.3%)。LCMS (ESI): m/ z540.8 (M+H) ⁺。

將NaOH (0.5 mL，1 N)添加至乙酸(S)-9-胺基-4-乙基-11-((4-甲氧基苯甲基)胺基)-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-47(20 mg，0.0370 mmol)於MeOH (4 mL)中之溶液中。在25℃下攪拌混合物4小時且濃縮，得到呈黃色固體狀的 INT-48(15 mg，80.5%)。LCMS (ESI): m/ z499.1 (M+H) ⁺。

(S)-9-胺基-4-乙基-4-羥基-11-((4-甲氧基苯甲基)胺基)-1,12-二氫-14H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮 INT-48(40 mg，0.08 mmol)於TFA (4 mL)中之溶液。在60℃下攪拌混合物3小時且濃縮。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化混合物，得到呈黃色固體狀的 21(1.4 mg，4.6%)。LCMS (ESI): m/ z379.0 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.75 (s, 2H), 7.75 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.37 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.01 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 5.07 (s, 2H), 1.92-1.78 (m, 2H),0.87 (t, J= 7.3 Hz, 3H)。

乙酸(S)-11-氯-4-乙基-9-硝基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-33(50 mg，0.11 mmol)及硫𠰌啉1,1-二氧化物(431.5 mg，3.2 mmol)於無水MeOH (2 mL)中之溶液在45℃下攪拌72小時。添加水。殘餘物用DCM (3 x 10 mL)萃取且濃縮，得到呈紅色固體狀的 INT-49(12 mg，19%)。LCMS (ESI):m/z 568.8 (M+H) ⁺。

將20 mL DMF添加至乙酸(S)-11-(1,1-二氧代硫𠰌啉基)-4-乙基-9-硝基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-49(10 mg，1.9 mmol)、4,4'-聯吡啶(0.2 mg，0.0008 mmol)及四羥基二硼(5 mg，0.05 mmol)之混合物中且在25℃下攪拌0.5小時。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化混合物，得到呈黃色固體狀的 INT-50(5 mg，55%)。LCMS (ESI): m/z 539.0 (M+H) ⁺。

將1 N NaOH (0.2 mL)添加至乙酸(S)-9-胺基-11-(1,1-二氧代硫𠰌啉基)-4-乙基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-50(10 mg，0.02 mmol)於MeOH中之溶液中。攪拌混合物2小時。在25℃下攪拌混合物1小時。藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化混合物，得到呈黃色固體狀的 22(3 mg，33%)。LCMS (ESI): m/z 496.9 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.81 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.22 (dd, J = 9.0, 2.3 Hz, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.12 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.47 (s, 1H), 5.97 (s, 2H), 5.43 (d, J = 17.1 Hz, 4H), 3.72 (s, 4H), 3.51 (s, 4H), 1.93 - 1.72 (m, J = 14.5, 7.0 Hz, 2H), 1.23 (s, 3H), 0.86 (d, J = 7.3 Hz, 3H)。

將硫𠰌啉(234 mg，2.26 mmol)添加至在25℃下、在氮氣下攪拌之乙酸(S)-9-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-11-溴-4-乙基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-17(70 mg，0.11 mmol)於二㗁烷(10 mL)中之溶液中。在60℃下攪拌反應混合物12小時。粗物質藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化，得到呈棕色固體狀的 INT-51(40 mg，52.4%)。LCMS (ESI): m/ z641.3 (M+H) ⁺。

將NaOH (1 M，0.5 mL)添加至在25℃下攪拌之乙酸(S)-9-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-4-乙基-3,14-二側氧基-11-N-硫𠰌啉基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-4-基酯 INT-51(70 mg，0.11 mmol)於MeOH (8 mL)中之溶液中。在25℃下攪拌反應混合物1小時。藉由FCC (CH ₂Cl ₂/MeOH=50:1)純化混合物，得到呈黃色固體狀的INT-52 (50 mg，68.8%)。LCMS (ESI): m/ z599.1 (M+H) ⁺。

(S)-(4-乙基-4-羥基-3,14-二側氧基-11-N-硫𠰌啉基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-9-基)胺基甲酸苯甲酯 INT-52(30 mg，0.05 mmol)於HBr/AcOH (2 mL)中之溶液在0℃下攪拌20分鐘。用Na ₂CO ₃將混合物pH調節至pH 5。粗物質藉由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化，得到呈黃色固體狀的 23(3 mg，12.6%)。LCMS (ESI): m/ z465.1 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.79 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 7.23-7.17 (m, 2H), 7.09 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 6.47 (s, 1H), 5.41 (d, J= 4.3 Hz, 4H), 3.51 (s, 4H), 2.93 (s, 4H), 1.89-1.80 (m, 2H), 0.86 (t, J= 7.3 Hz, 3H)。

向Boc-Ala-Ala-OH (11.71 mg, 0.045 mmol)於DCM (1.5 mL)中之溶液中添加HOPO (7.49 mg，0.067 mmol)，隨後添加EDCI (8.18 mg，0.045 mmol)，所得混合物在室溫下攪拌30分鐘，接著添加至 6(9.72 mg，0.022 mmol)及2,6-二甲基吡啶(14.44 mg，0.14 mmol)於DCM (0.5 mL)中之溶液中。所得混合物在室溫下攪拌2小時，藉由LCMS偵測， 6耗盡而得到 INT-53且直接用於下一步驟。LCMS (ESI): m/z 675.7 (M+H) ⁺。

向 INT-53於DCM (2 mL)中之溶液中添加TFA (0.2 mL)，所得混合物在室溫下攪拌4小時，根據LCMS，此時所有 INT-53耗盡。蒸發反應混合物，且經由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀的 INT-54(11.15 mg)。LCMS (ESI): m/z 575.7 (M+H) ⁺。

向 INT-54於DCM (2 mL)中之懸浮溶液中添加DIEA (9.08 mg，0.070 mmol)，隨後添加6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(6.50 mg，0.021 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物2小時，根據LCMS，此時所有 INT-54耗盡。蒸發反應混合物，且經由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀的 24(3.91 mg)。LCMS (ESI): m/z 768.7 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (600 MHz, DMSO- d ₆) δ10.21 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.16 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.91 (d, 1H), 7.86 (dd, 1H), 7.21 (s, 1H), 6.98 (s, 2H), 6.46 (s, 1H), 5.58 (s, 2H), 5.41 (s, 2H), 4.44-4.47 (m, 1H), 4.25-4.28 (m, 1H), 3.89-3.92 (m, 4H), 3.33-3.36 (m, 2H), 2.10-2.13 (m, 2H), 1.83-1.87 (m, 4H), 1.44-1.51 (m, 4H), 1.36 (d, 3H), 1.18-1.25 (m, 5H), 0.87 (t, 3H)。

將DIEA (10.06 mg，0.078 mmol)添加至 INT-55(10.98 mg，0.016 mmol)於DCM (2 mL)中之懸浮溶液中，隨後添加6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(12.01 mg，0.039 mmol)。所得混合物在室溫下攪拌2小時，且藉由LCMS偵測， INT-55耗盡。蒸發反應混合物，且經由製備型HPLC (用ACN-H ₂O (0.1% TFA)溶離)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀的 25(1.44 mg)。LCMS (ESI): m/z 784.6 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (600 MHz, DMSO- d ₆) δ10.31 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.18 (d, 1H), 8.03 (d, 2H), 7.92 (dd, 1H), 7.27 (s, 1H), 6.97 (s, 2H), 6.50 (s, 1H), 5.54 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.45-4.48 (m, 1H), 4.27-4.30 (m, 1H), 3.93 (s, 4H), 3.46 (s, 4H), 2.10-2.13 (m, 2H), 1.84-1.88 (m, 4H), 1.44-1.52 (m, 4H), 1.37 (d, 3H), 1.18-1.24 (m, 5H), 0.87 (t, 3H)。

將K ₂CO ₃(35 mg，0.25 mmol)於H ₂O (1 mL)中之溶液添加至在25℃下、在氮氣下攪拌之INT-17 (52 mg，0.08 mmol)、2-(3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(27 mg，0.13 mmol)及Pd(dppf)Cl ₂(6 mg，0.008 mmol)於二㗁烷(5 mL)中之溶液中。在90℃下攪拌反應混合物3小時。用5 mL水稀釋，用EA (5 mL*3)萃取，經硫酸鈉乾燥，藉由急驟層析(DCM/EA 3/1)純化，得到呈黃色固體狀的INT-56 (40 mg，61.24%)。MS: m/z = 622 (M+, ESI+)。

將H2鼓入在25℃下攪拌之INT-56 (40 mg，0.05 mmol)及Pd/C (4 mL)於MeOH (5 mL)中之溶液。在25℃下攪拌反應混合物1小時。過濾且移除溶劑，得到呈黃色固體狀的INT-57 (8 mg，31.46%)。MS: m/z = 488 (M+, ESI+)。

將1 mL NaOH (2 M)緩慢添加至在25℃下攪拌之INT-57 (8 mg，0.02 mmol)於MeOH (2 mL)中之溶液中。在25℃下攪拌反應混合物1小時。用0.5 mL TFA淬滅。藉由製備型HPLC (ACN--H ₂O (0.1%TFA))純化，得到呈棕色固體狀之化合物26 (4.2 mg，產率：56.10%)。MS: m/z = 446.2 (M+, ESI+)。 ¹H NMR (400 MHz, CD3CN) d 7.91 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 7.26 (dd, J= 8.9, 2.5 Hz, 2H), 7.04 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 5.98 (s, 1H), 5.53 (d, J= 16.2 Hz, 1H), 5.29 (d, J= 16.1 Hz, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.36 (d, J= 2.7 Hz, 2H), 4.01 (t, J= 5.3 Hz, 2H), 2.45 (s, 2H), 1.91 - 1.82 (m, 2H), 0.95 (t, J= 7.4 Hz, 3H)。

在0℃下，將POCl3 (0.615 g，4.0 mol)添加至化合物3 (1.2 g，2.7 mmol)及(2E)-3-乙氧基丙-2-烯酸(0.622 g，5.4 mmol)於無水DCM (10 mL)及吡啶(1 mL)中之溶液中。在氮氣下、在25小時下攪拌反應混合物2小時。蒸發溶劑，藉由FCC (PE/EA 10/1-5/1)純化，得到呈黃色固體狀的INT-58 (0.25 g，16.7%)。LCMS (ESI): m/z 547.2 [M + H]+。

INT-58 (0.25 g，0.45 mmol)於H ₂SO ₄(0.2 ml)中之溶液在0℃下攪拌4小時。溶劑用冰水(5 mL)淬滅，接著移除溶劑且用Na ₂CO ₃溶液將pH調節至鹼性。過濾且收集濾餅，得到呈黃色固體狀的化合物2 7(284.4 mg，37%)。LCMS (ESI): m/z 501.20 [M + H]+。表3.

化合物編號	結構	ESI m/z 觀測值
1		[M+H] ⁺: 462.8
2		[M+H] ⁺: 476.2
3		[M+H] ⁺: 511.0
4		[M+H] ⁺: 408.0
5		[M+H] ⁺: 449.1
6		[M+H] ⁺: 433.0
7		[M+H] ⁺: 461.1
8		[M+H] ⁺: 419.2
9		[M+H] ⁺: 489.0
10		[M+H] ⁺: 394.1
11		[M+H] ⁺: 475.0
12		[M+H] ⁺: 447.1
13		[M+H] ⁺: 462.2
14		[M+H] ⁺: 407.2
15		[M+H] ⁺: 526.2
16		[M+H] ⁺: 450.9
17		[M+H] ⁺: 464.2
18		[M+H] ⁺: 475.1
19		[M+H] ⁺: 393.1
20		[M+H] ⁺: 436.9
21		[M+H] ⁺: 379.0
22		[M+H] ⁺: 496.9
23		[M+H] ⁺: 465.1
24		[M+H] ⁺: 768.7
25		[M+H] ⁺: 784.6
26		[M+H] ⁺: 446.2
27		[M+H] ⁺: 501.2

通用綴合方案：

通用綴合方案如下： o 在20 mM組胺酸pH 6.0中製備約15 mg/mL之抗體 o 將pH調節至7.2且用0.5 M磷酸鈉緩衝液 + 50 mM EDTA將抗體濃度調節至約12 mg/mL，得到100 mM磷酸鈉 + 10 mM EDTA的最終磷酸鹽緩衝液濃度 o 藉由在37℃下添加2.15莫耳當量之TCEP (儲備液：10 mM於水中)持續1小時來還原抗體 o 歷時10分鐘達到室溫(20-25℃)，隨後添加藥物連接子 o 製備藥物-連接子於DMA中之10 mM儲備液 o 添加10-12莫耳當量之藥物-連接子 o 在室溫下綴合且藉由HIC監測 o 在完成後(在3-16小時內)，藉由添加12當量之N-乙醯基-半胱胺酸來淬滅且靜置1小時 o 藉由用Nap-5管柱去鹽來移除過量藥物連接子(DL)且使用30 kD amicon過濾器，將緩衝液交換成20 mM組胺酸pH 6.0 例示性ADC 之表徵 ：

例示性ADC之表徵資料提供於表 4中。表4.

ADC	化合物	輕鏈 m / z 觀測值	重鏈 m / z 觀測值	藥物抗體比率 ( DAR )	SEC 單體 %
1	24	24209.01	52898.67	8	98.9%
2	25	24223.74	52946.62	8	98.9%

生物活性分析方案

將SU-DHL-1及SK-BR-3細胞(ATCC, Manassas, VA, USA)接種於384孔白色壁培養盤中且允許黏附2至4小時。接著藉由添加以2X最終濃度製備之5倍連續稀釋測試物來處理細胞(至少一式兩份)且在37℃下溫育120小時。處理後之細胞生存力係藉由細胞效價Glo 2.0分析(Promega, Madison, WI, USA)來測定且相對於未處理之對照物正規化。使用GraphPad Prism (La Jolla, CA, USA)分析劑量反應關係，且使用4參數邏輯方程式自非線性回歸分析推導IC50值。表5.

化合物編號	SU-DHL-1 IC ₅₀(nM)	SK-BR-3 IC ₅₀ (nM)
1	+++	++
2	++	+
3	+	+
4	+++	+++
5	+++	+++
6	++	++
7	++	++
8	++	++
9	+++	++
10	++	++
11	+++	+++
12	+++	+++
14	++	++
15	++	+
16	+++	++
17	+	+
18	+++	+++
19	+	++
20	+	+
21	+	++
23	+++	+++
ADC 1	NT	+++
ADC 2	NT	+++

+++: ＜5 nM; ++: 5-20 nM; +: ＞20 nM

申請人之揭露內容在本文中參照圖式描述於較佳實施例中，其中類似編號表示相同或相似元件。通篇本說明書中提及「一個實施例」、「一實施例」或類似語言意謂結合該實施例所述之具體特點、結構或特徵包括於本發明之至少一個實施例中。因此，在通篇本說明書中，片語「在一個實施例中」、「在一實施例中」及類似語言之出現可(但未必)皆指相同實施例。

申請人之揭露內容的所述特點、結構或特徵可在一或多個實施例中以任何適合方式組合。在本文之說明中，敍述眾多特定細節以提供對本發明之實施例的透徹理解。然而，熟習相關技術者將認識到，申請人之組成物及/或方法可在不提供一或多個特定細節的情況下或藉由其他方法、組分、材料等來實施。在其他情況下，未詳細顯示或描述熟知結構、材料或操作，以避免混淆本揭露內容之各態樣。

除非另有定義，否則本文所用的所有技術及科學術語均具有與一般技術者通常所理解相同的意義。雖然與本文中所述相似或等效的任何方法及材料亦可用於實施或測試本揭露內容，但現描述較佳方法及材料。除所揭露之特定次序以外，本文中所敍述之方法可以邏輯上可能之任何次序進行。 以引用之方式併入

本揭露內容中已提及且引述其他文獻，諸如專利、專利申請案、專利公開案、雜誌、書籍、論文、原稿、網路內容。所有此類文獻特此以其全文引用之方式併入本文中用於所有目的。據稱以引用之方式併入本文中但與現有定義、語句或本文中明確闡述之其他揭露材料矛盾的任何材料或其部分僅在所併入材料與本揭露內容的材料之間不出現矛盾的程度上併入。在出現矛盾的情況下，應以有利於本揭露內容作為較佳揭露內容的方式解決矛盾。 等效物

代表性實例希望有助於說明本發明，且不希望、亦不應理解為限制本發明之範疇。實際上，除本文所示及所述的修改及實施例以外，熟習此項技術者依據本文之完整內容(包括實例及本文所包括之科學及專利文獻的參考文件)將顯而易知對本發明的各種修改及其許多其他實施例。實例含有重要的其他資訊、範例及指導，該等資訊、範例及指導可適於本發明之各種實施例及其等效物的實施。

(無)

Claims

一種化合物，其具有結構式(I)： (I) 或一其醫藥學上可接受之形式，其中 R ¹為H或鹵素； R ²為R ^2a、OR ^2a或NR ^2bR ^2c； R ³為H或C ₁ _-6烷基； R ⁴為H、C ₁ _-6烷基或L ^Z-R ^Z，其中R ¹及R ³，或R ¹及R ⁴，連同分別與其結合的碳及氮原子一起，可任擇地形成一未經取代或經取代的5員或6員雜芳基； L ²不存在或為CH ₂； L ^Z不存在或為一連接子； R ^2a、R ^2b及R ^2c中之各者獨立地選自H、C ₁ _-6烷基、C ₄ _-6碳環或雜環，或C ₅ _-6芳基或雜芳基；或R ^2b及R ^2c連同其結合的N原子一起形成一4員至7員雜環，其中該C ₁ _-6烷基、C ₅ _-6芳基或雜芳基或4員至7員雜環中之各者未經取代或經取代；並且 R ^Z不存在或為一抗原結合部分。
如請求項1之化合物，其中L ²不存在，該化合物具有結構式(I ^a)：。 (I ^a)
如請求項1之化合物，其中L ²為CH ₂，該化合物具有結構式(I ^b)：。 (I ^b)
如請求項1至3中任一項之化合物，其中R ⁴為H。
如請求項1至3中任一項之化合物，其中R ⁴為C ₁ _-4烷基。
如請求項1之化合物，其中R ⁴為L ^Z-R ^Z，該化合物具有結構式(II)：。 (II)
如請求項6之化合物，其中L ²不存在，該化合物具有式(II ^a)：。 (II ^a)
如請求項6之化合物，其中L ²為CH ₂，該化合物具有式(II ^b)：。 (II ^b)
如請求項6至8中任一項之化合物，其中L ^Z不存在。
如請求項6至8中任一項之化合物，其中L ^Z為一連接子。
如請求項10之化合物，其中R ^Z不存在。
如請求項10之化合物，其中R ^Z為一抗原結合部分。
如請求項1至12中任一項之化合物，其中R ¹為H。
如請求項1至12中任一項之化合物，其中R ¹為鹵素。
如請求項14之化合物，其中R ¹為F。
如請求項14之化合物，其中R ¹為Cl。
如請求項1至16中任一項之化合物，其中R ³為H。
如請求項1至16中任一項之化合物，其中R ³為C ₁ _-6烷基。
如請求項1至12中任一項之化合物，其中R ¹及R ³連同分別與其結合的碳及氮原子一起可任擇地形成一未經取代或經取代的5員或6員雜芳基。
如請求項1至12中任一項之化合物，其中R ¹及R ⁴連同分別與其結合的碳及氮原子一起可任擇地形成一未經取代或經取代的5員或6員雜芳基。
如請求項1至20中任一項之化合物，其中R ²為NR ^2bR ^2c。
如請求項21之化合物，其中R ^2b及R ^2c中之各者獨立地選自H、C ₁ _-6烷基或C ₄ _-5芳基或雜芳基。
如請求項22之化合物，其中R ^2b及R ^2c中之各者為C ₁ _-6烷基。
如請求項22之化合物，其中R ^2b及R ^2c中之一者為H且另一者為C ₁ _-6烷基。
如請求項22之化合物，其中R ^2b及R ^2c中之一者為C ₅ _-6環烷基。
如請求項22至25中任一項之化合物，其中R ^2b及R ^2c中之至少一者經取代。
如請求項21之化合物，其中R ^2b及R ^2c連同其結合的N原子一起形成一未經取代或經取代的4員至7員雜環。
如請求項27之化合物，其中該雜環與一未經取代或經取代的4員至6員碳環或雜環螺接稠合。
如請求項21之化合物，其中R ^2b及R ^2c連同其結合的N原子一起形成一未經取代或經取代的5員至6員雜芳基。
如請求項1至20中任一項之化合物，其中R ²為R ^2a。
如請求項30之化合物，其中R ^2a為一C ₄ _-6碳環或雜環。
如請求項1至20中任一項之化合物，其中R ²為OR ^2a。
如請求項32之化合物，其中R ²為一經取代或未經取代的5員或6員雜環。
如請求項21、30或32之化合物，其中R ²係選自：。
如請求項1至8及10至34中任一項之化合物，其中L ^Z為一不可裂解連接子。
如請求項1至8及10至34中任一項之化合物，其中L ^Z為一可裂解連接子。
如請求項36之化合物，其中L ^Z為一酸不穩定連接子或酸敏感性連接子。
如請求項36之化合物，其中L ^Z為蛋白酶敏感性連接子。
如請求項38之化合物，其中L ^Z為溶酶體蛋白酶敏感性連接子。
如請求項38之化合物，其中L ^Z為β-葡萄糖苷酸敏感性連接子。
如請求項36之化合物，其中L ^Z為麩胱甘肽敏感性二硫鍵連接子。
如請求項1至41中任一項之化合物，其中R ^Z包含一選自以下的官能性或反應性基團： -N ₃、-NR ^uC(=O)CH=CH ₂、-SH、-SSR ^t、-S(=O) ₂(CH=CH ₂)、-(CH ₂) ₂S(=O) ₂(CH=CH ₂)、-NR ^uS(=O ₂)(CH=CH ₂)、-NR ^uC(=O)CH ₂R ^w、-NR ^uC(=O)CH ₂Br、-NR ^uC(=O)CH ₂I、-NHC(=O)CH ₂Br、NHC(=O)CH ₂I、-ONH ₂、-C(=O)NHNH ₂、-CO ₂H、-NH ₂、-NCO、-NCS、、、、、、、、、、、、、、、、、、或其中 R ^u為H或一C ₁-C ₆烷基， R ^t為2-吡啶基或4-吡啶基，且 R ^w為、、、或。
一種化合物，其係選自：

或一其醫藥學上可接受之形式。
如請求項43之化合物，其中R ¹為H。
如請求項43之化合物，其中R ¹為F或Cl。
一種免疫綴合物，其具有結構式(III)： (III) 或一其醫藥學上可接受之形式，其中 Ab表示一抗原結合部分； R ¹為H或鹵素； R ²為R ^2a、OR ^2a或NR ^2bR ^2c； R ³為H或C ₁ _-6烷基，其中R ¹及R ³連同分別與其結合的碳及氮原子一起，可任擇地形成一未經取代或經取代的5員或6員雜芳基； L ^Ab為一連接子； R ^2a、R ^2b及R ^2c中之各者獨立地選自H、C ₁ _-6烷基、C ₄ _-6碳環或雜環，或C ₅ _-6芳基或雜芳基；或R ^2b及R ^2c連同其結合的N原子一起形成一未經取代或經取代的4員至7員雜環，其中該C ₁ _-6烷基、C ₅ _-6芳基或雜芳基或4員至7員雜環中之各者未經取代或經取代；並且 n為1至約20範圍內之一整數。
如請求項46之免疫綴合物，其中L ²不存在，該免疫綴合物具有結構式(III ^a)：。 (III ^a)
如請求項47之免疫綴合物，其中L ²為CH ₂，該免疫綴合物具有結構式(III ^b)：。 (III ^b)
如請求項46至48中任一項之免疫綴合物，其中 n在1至約16範圍內。
如請求項46至49中任一項之免疫綴合物，其中Ab為一抗體。
如請求項50之免疫綴合物，其中該抗體為一單株抗體。
如請求項50之免疫綴合物，其中該抗體為一嵌合抗體。
如請求項50之免疫綴合物，其中該抗體為一人源化抗體。
如請求項50之免疫綴合物，其中該抗體為一雙特異性抗體。
如請求項46至49中任一項之免疫綴合物，其中Ab為一抗體片段。
如請求項55之免疫綴合物，其中Ab為一Fab片段。
如請求項46至49中任一項之免疫綴合物，其中Ab為一肽。
如請求項46至49中任一項之免疫綴合物，其中Ab為一小分子配位體。
一種醫藥組成物，其包含如請求項1至45中任一項之化合物及一醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑。
一種醫藥組成物，其包含如請求項46至58中任一項之免疫綴合物及一醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑。
一種組合，其包含一治療有效量的如請求項1至45中任一項之化合物，及一或多種治療活性輔劑或佐劑。
一種組合，其包含一治療有效量的如請求項46至58中任一項之免疫綴合物，及一或多種治療活性輔劑或佐劑。
一種用於治療或減輕一疾病或病狀的方法，其包含向一有需要之個體投予一治療有效量的如請求項1至45中任一項之化合物。
一種用於治療或減輕一疾病或病狀的方法，其包含向一有需要之個體投予一治療有效量的如請求項46至58中任一項之免疫綴合物。
如請求項63或64之方法，其中該疾病或病狀為癌症。
如請求項63至65中任一項之方法，其進一步包含向該個體投予化學療法及放射療法中之一或多者。
一種如請求項1至45中任一項之化合物用於製造一藥劑的用途。
一種如請求項46至58中任一項之免疫綴合物用於製造一藥劑的用途。
一種如請求項1至45中任一項之化合物用於治療癌症的用途。
一種如請求項46至58中任一項之免疫綴合物用於治療癌症的用途。
如請求項1至45中任一項之化合物，其用於治療癌症。
如請求項46至58中任一項之免疫綴合物，其用於治療癌症。
一種組成物，其包含如請求項1至45中任一項之化合物。
一種組成物，其包含如請求項46至58中任一項之免疫綴合物。