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TW202342517A - 使用抗組織因子抗體之炎性疾病治療 - Google Patents

使用抗組織因子抗體之炎性疾病治療 Download PDF

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TW202342517A
TW202342517A TW112101442A TW112101442A TW202342517A TW 202342517 A TW202342517 A TW 202342517A TW 112101442 A TW112101442 A TW 112101442A TW 112101442 A TW112101442 A TW 112101442A TW 202342517 A TW202342517 A TW 202342517A
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inflammatory
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奇 索 米格尼
威廉 格林
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美商艾康尼醫療有限責任公司
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Abstract

本文提供了特異性結合至人類組織因子(TF)之抗體、抗TF抗體-藥物綴合物(ADC)及包含該等抗體或ADC之組合物，其用於治療炎性疾病。本文亦提供了治療患有炎性疾病之個體的方法，該等方法藉由投與該等抗TF抗體或ADC來進行。

Description

使用抗組織因子抗體之炎性疾病治療
血液凝固涉及導致血液凝結的一系列複雜的過程。組織因子(TF)在此等凝固過程中起重要作用。TF係細胞表面受體。TF/FVIIa複合物催化非活性蛋白酶因子X (FX)轉化為活性蛋白酶因子Xa (FXa)。FXa及其輔因子FVa形成凝血酶原酶複合物，其從凝血酶原生成凝血酶。凝血酶將可溶性纖維蛋白原轉化為不溶性纖維蛋白鏈，且催化許多其他凝固相關過程。
炎性疾病包括一系列特徵為炎症(局部或全身)之病症及疾患。在炎症期間，損傷或疾病部位之先天性及適應性免疫細胞之血管動力學及募集存在變化。炎症為保護身體抵禦異物所必需的且為傷口恢復所必需的；然而，在自體免疫及/或炎性疾病中，免疫系統在無外來物質抵抗下觸發炎性反應，且身體正常保護性免疫系統錯誤地自我攻擊，從而影響自身組織。由於令人虛弱之疾病長期存在、死亡率增加且治療及護理成本高，炎性疾病繼續成為患者之負擔。
TF被認為在特徵在於局部及全身炎症之疾病中起作用，但迄今為止尚無經批准之抗TF抗體適用於治療炎性疾病。抗TF抗體、抗TF抗體-藥物綴合物(ADC)及包含使用本揭示案之抗TF抗體及ADC之方法的態樣描述於國際PCT申請案PCT/US2019/012427及PCT/US2021/41192、美國實用申請案第16/959,652號及美國臨時申請案第62/713,797號；第62/713,804號；第62/646,788號；第62/613,545號；及第62/613,564號，其出於所有目的以引用方式整體併入本文。
本文提供了特異性結合人類組織因子(TF)之抗體、抗TF抗體-藥物綴合物及相關方法。本文提供了用於治療炎性疾病之方法，其藉由投與本揭示案之抗體或ADC來進行。
在一個態樣中，本文提供了一種治療有需要之個體之炎性疾病的方法，其包含向該個體投與經分離之抗體，其中該抗體結合至人類組織因子(TF)之細胞外域，其中抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF。
在一個態樣中，本文提供了一種治療有需要之個體之炎性疾病的方法，其包含向該個體投與經分離之抗體，其中該抗體結合至人類組織因子(TF)之細胞外域，其中抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF。
在一個態樣中，本文提供了一種預防個體之炎性疾病的方法，其包含向該個體投與經分離之抗體，其中該抗體結合至人類組織因子(TF)之細胞外域，其中抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF，其中炎性疾病為結腸炎。
在一個態樣中，本文提供了一種預防性治療個體之炎性疾病的方法，其包含向該個體投與經分離之抗體，其中該抗體結合至人類組織因子(TF)之細胞外域，其中抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF，其中炎性疾病為結腸炎。
在一些實施例中，炎性疾病為嚴重急性呼吸症候群冠狀病毒2 (SARS-CoV-2)。在一些實施例中，炎性疾病選自：關節炎、炎性腸病(IBD)、狼瘡、急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)、散播性血管內凝血病變(DIC)、血管炎病、病毒感染及敗血症。在一些實施例中，炎性疾病為狼瘡。在一些實施例中，炎性疾病為抗磷脂質症候群。在一些實施例中，炎性疾病為炎性腸病(IBD)。在一些實施例中，IBD為克隆氏病(Crohn's disease)。在一些實施例中，IBD為結腸炎。在一些實施例中，炎性疾病為血管炎病。在一些實施例中，炎性疾病為急性肺損傷。在一些實施例中，炎性疾病為急性呼吸窘迫症候群(ARDS)。在一些實施例中，炎性疾病為散播性血管內凝血病變(DIC)。在一些實施例中，炎性疾病為病毒感染。在一些實施例中，炎性疾病為關節炎。在一些實施例中，炎性疾病為類風濕性關節炎或幼年型類風濕性關節炎。在一些實施例中，炎性疾病為敗血症。在一些實施例中，炎性疾病為肺炎。在一些實施例中，炎性疾病為1型糖尿病。在一些實施例中，炎性疾病為免疫介導皮膚病。在一些實施例中，炎性疾病為免疫介導結締組織病。在一些實施例中，炎性疾病為多發性硬化症(MS)。在一些實施例中，炎性疾病為自體免疫性肝炎。在一些實施例中，炎性疾病為原發性膽汁性膽管炎。在一些實施例中，炎性疾病為休格倫氏症候群(Sjogren's syndrome)。在一些實施例中，炎性疾病為自體免疫性甲狀腺病。在一些實施例中，炎性疾病為進行性全身性硬化症。在一些實施例中，炎性疾病為肺纖維化。在一些實施例中，炎性疾病為白斑病。在一些實施例中，炎性疾病為重症肌無力。
在一些實施例中，炎性疾病為心血管疾病或損傷。在一些實施例中，心血管疾病或損傷為心肌梗塞。在一些實施例中，炎性疾病為與蛋白酶活化受體2 (PAR-2)之上調相關之心血管疾病。在一些實施例中，炎性疾病為鬱血性心臟衰竭。在一些實施例中，炎性疾病為腦血管疾病。在一些實施例中，炎性疾病為缺血性心臟疾病。
在一些實施例中，個體具有血栓形成。在一個態樣中，本文提供了一種治療有需要之個體之血栓形成的方法，其包含向該個體投與經分離之抗體，其中該抗體結合至人類組織因子(TF)之細胞外域，其中抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF。
在一些實施例中，抗體不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成。在一些實施例中，與包含V H序列SEQ ID NO:821及V L序列SEQ ID NO:822之參考抗體相比，如由凝血酶生成檢定(TGA)確定，經分離之人類抗體不抑制人類凝血酶生成或抑制人類凝血酶生成之程度較小。在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中經分離抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，經分離抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基149處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於經分離抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。在一些實施例中，抗體包含來自表35之抗體組之所有三個重鏈互補決定區(CDR)及所有三個輕鏈CDR，其中所有三個重鏈CDR及所有三個輕鏈CDR均來自相同抗體組。在一些實施例中，抗體包含來自表15-34中任一者之抗體之所有三個重鏈互補決定區(CDR)及所有三個輕鏈CDR，其中所有三個重鏈CDR及所有三個輕鏈CDR均來自相同抗體。
在一些實施例中，抗體包含來自以下之所有三個重鏈CDR及所有三個輕鏈CDR：命名為25A之抗體、命名為25A5之抗體、命名為25A5-T之抗體、命名為25G之抗體、命名為25G1之抗體、命名為25G9之抗體、命名為43B之抗體、命名為43B1之抗體、命名為43B7之抗體、命名為43D之抗體、命名為43D7之抗體、命名為43D8之抗體、命名為43E之抗體或命名為43Ea之抗體。在一些實施例中，抗體包含來自以下之所有三個重鏈CDR及所有三個輕鏈CDR：命名為43B之抗體、命名為43B1之抗體、命名為43B7之抗體、命名為43D之抗體、命名為43D7之抗體、命名為43D8之抗體、命名為43E之抗體或命名為43Ea之抗體。在一些實施例中，抗體包含來自以下之所有三個重鏈CDR及所有三個輕鏈CDR：命名為25A之抗體、命名為25A5之抗體、命名為25A5-T之抗體、命名為25G之抗體、命名為25G1之抗體或命名為25G9之抗體。
在一些實施例中，抗體包含來自表14之VH域序列及VL域序列，其中VH域序列及VL域序列來自表14之相同組。在一些實施例中，抗體包含來自表13之VH域序列及VL域序列，其中VH域序列及VL域序列來自表13之相同純系。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:797中列出之序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:798中列出之序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:799中列出之序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:800中列出之序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:801中列出之序列的VL-CDR2；及包含SEQ ID NO:802中列出之序列的VL-CDR3。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:571中列出之序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:572中列出之序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:573中列出之序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:574中列出之序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:575中列出之序列的VL-CDR2；及包含SEQ ID NO:576中列出之序列的VL-CDR3。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:609中列出之序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:610中列出之序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:611中列出之序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:612中列出之序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:613中列出之序列的VL-CDR2；及包含SEQ ID NO:614中列出之序列的VL-CDR3。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:769中列出之序列的VH序列及包含SEQ ID NO:770中列出之序列的VL序列。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:569中列出之序列的VH序列及包含SEQ ID NO:570中列出之序列的VL序列。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:607中列出之序列的VH序列及包含SEQ ID NO:608中列出之序列的VL序列。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:924中列出之序列的重鏈及包含SEQ ID NO:925中列出之序列的輕鏈。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:645中列出之序列的VH序列及包含SEQ ID NO:646中列出之序列的VL序列。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:926中列出之序列的重鏈及包含SEQ ID NO:927中列出之序列的輕鏈。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:779中列出之序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:780中列出之序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:781中列出之序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:782中列出之序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:783中列出之序列的VL-CDR2；及包含SEQ ID NO:784中列出之序列的VL-CDR3。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:872中列出之序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:873中列出之序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:874中列出之序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:875中列出之序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:876中列出之序列的VL-CDR2；及包含SEQ ID NO:877中列出之序列的VL-CDR3。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:884中列出之序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:885中列出之序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:886中列出之序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:887中列出之序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:888中列出之序列的VL-CDR2；及包含SEQ ID NO:889中列出之序列的VL-CDR3。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:868中列出之序列的VH序列及包含SEQ ID NO:869中列出之序列的VL序列。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:189中列出之序列的VH序列及包含SEQ ID NO:190中列出之序列的VL序列。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:836中列出之序列的VH序列及包含SEQ ID NO:837中列出之序列的VL序列。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:920中列出之序列的重鏈及包含SEQ ID NO:921中列出之序列的輕鏈。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:878中列出之序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:879中列出之序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:880中列出之序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:881中列出之序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:882中列出之序列的VL-CDR2；及包含SEQ ID NO:883中列出之序列的VL-CDR3。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:267中列出之序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:268中列出之序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:269中列出之序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:270中列出之序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:271中列出之序列的VL-CDR2；及包含SEQ ID NO:272中列出之序列的VL-CDR3。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:870中列出之序列的VH序列及包含SEQ ID NO:871中列出之序列的VL序列。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:303中列出之序列的VH序列及包含SEQ ID NO:304中列出之序列的VL序列。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO:922中列出之序列的重鏈及包含SEQ ID NO:923中列出之序列的輕鏈。
在一些實施例中，抗體與命名為25A之抗體、命名為25A5之抗體、命名為25A5-T之抗體、命名為25G之抗體、命名為25G1之抗體、命名為25G9之抗體、命名為43B之抗體、命名為43B1之抗體、命名為43B7之抗體、命名為43D之抗體、命名為43D7之抗體、命名為43D8之抗體、命名為43E之抗體或命名為43Ea之抗體競爭結合人類TF。在一些實施例中，抗體與命名為43B之抗體、命名為43B1之抗體、命名為43B7之抗體、命名為43D之抗體、命名為43D7之抗體、命名為43D8之抗體、命名為43E之抗體或命名為43Ea之抗體競爭結合人類TF。在一些實施例中，抗體與命名為25A之抗體、命名為25A5之抗體、命名為25A5-T之抗體、命名為25G之抗體、命名為25G1之抗體或命名為25G9之抗體競爭結合人類TF。在一些實施例中，抗體結合之人類TF表位與由命名為25A之抗體、命名為25A5之抗體、命名為25A5-T之抗體、命名為25G之抗體、命名為25G1之抗體、命名為25G9之抗體、命名為43B之抗體、命名為43B1之抗體、命名為43B7之抗體、命名為43D之抗體、命名為43D7之抗體、命名為43D8之抗體、命名為43E之抗體或命名為43Ea之抗體結合之人類TF表位相同。在一些實施例中，抗體結合之人類TF表位與由命名為43B之抗體、命名為43B1之抗體、命名為43B7之抗體、命名為43D之抗體、命名為43D7之抗體、命名為43D8之抗體、命名為43E之抗體或命名為43Ea之抗體結合之人類TF表位相同。在一些實施例中，抗體結合之人類TF表位與由命名為25A之抗體、命名為25A5之抗體、命名為25A5-T之抗體、命名為25G之抗體、命名為25G1之抗體或命名為25G9之抗體結合之人類TF表位相同。
在一些實施例中，抗體不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；與同型對照相比，不降低凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值(峰值IIa)；與同型對照相比，不增加自檢定開始到凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值之時間(tt峰值)；與同型對照相比，不降低由凝血酶生成曲線下面積確定之內源性凝血酶潛能(ETP)；允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；與同型對照相比，保持凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值(峰值IIa)；與同型對照相比，保持自檢定開始到凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值之時間(tt峰值)；與同型對照相比，保留由凝血酶生成曲線下面積確定之內源性凝血酶潛能(ETP)；在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa之能力；且不與FVIIa競爭結合到人類TF。
在一些實施例中，三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR使用示範性、Kabat、Chothia、AbM、Contact或IMGT編號確定。在一些實施例中，抗體特異性結合到食蟹猴TF。在一些實施例中，抗體特異性結合到小鼠TF。在一些實施例中，抗體特異性結合到兔TF。在一些實施例中，抗體特異性結合到豬TF。
在一些實施例中，疾病涉及血管炎症。在一些實施例中，疾病涉及局部炎症。在一些實施例中，疾病涉及全身炎症。在一些實施例中，疾病涉及單核細胞及/或顆粒球之浸潤。在一些實施例中，單核細胞包含巨噬細胞及/或淋巴球。在一些實施例中，顆粒球包含嗜中性球及/或嗜酸性球。
在一些實施例中，該方法進一步包含獲得與來自個體之樣品相關聯的資料集並針對一或多種生物標記評估該資料集，視情況地其中該資料集係藉由自該個體收集樣品並處理該樣品以獲得該資料集而獲得的，或者視情況地其中該資料集係自處理該樣品之第3方獲得的。在一些實施例中，該一或多種生物標記包含TF，視情況地其中TF表現水準大於基線處之TF表現水準。
在一些實施例中，炎性疾病選自由以下組成之群：炎性腸病(IBD)、結腸炎、克隆氏病、狼瘡、血管炎病、關節炎、抗磷脂質症候群、急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)、散播性血管內凝血病變(DIC)、病毒感染、敗血症、心肌梗塞及嚴重急性呼吸症候群冠狀病毒2 (SARS-CoV-2)。
在一些實施例中，在向個體投與後，抗體減少總白血球計數。在一些實施例中，總白血球計數藉由光學顯微鏡法確定。在一些實施例中，在向個體投與後，抗體減少顆粒球之總數。在一些實施例中，顆粒球包含嗜中性球。在一些實施例中，顆粒球包含嗜酸性球。在一些實施例中，顆粒球之總數藉由免疫組織化學(IHC)分析或支氣管肺泡灌洗術(BAL)流體差示細胞計數來確定。在一些實施例中，顆粒球係在肺泡中。在一些實施例中，顆粒球係在間質液中。在一些實施例中，在向個體投與後，抗體減少單核細胞之總數。在一些實施例中，單核細胞包含巨噬細胞。在一些實施例中，巨噬細胞包含M1巨噬細胞。在一些實施例中，單核細胞包含淋巴球。在一些實施例中，單核細胞包含單核球。在一些實施例中，單核細胞之總數藉由免疫組織化學(IHC)分析或支氣管肺泡灌洗術(BAL)流體差示細胞計數來確定。在一些實施例中，單核細胞係在肺泡中。在一些實施例中，單核細胞係在間質液中。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於基線水準，個體保持或增加體重。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，抗體保持或增加體重。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於基線水準，抗體減小脾大小或逆轉脾腫大。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，抗體減小脾大小或逆轉脾腫大。在一些實施例中，脾大小或脾腫大使用觸診、叩診、超音波、電腦斷層(CT)掃描或磁共振成像(MRI)來確定。
在一些實施例中，炎性疾病為急性肺損傷。在一些實施例中，炎性疾病為急性呼吸窘迫症候群(ARDS)。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於基線水準，抗體增加淨肺泡液清除率。在一些實施例中，其中在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，抗體增加淨肺泡液清除率。在一些實施例中，淨肺泡液清除率藉由量測連續水腫液蛋白濃度來確定。在一些實施例中，連續水腫液蛋白濃度使用ELISA量測。
在一些實施例中，炎性疾病為SARS-Cov-2。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於基線水準，個體保持或增加體重。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，抗體保持或增加體重。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於基線水準，抗體減小炎性細胞介素及趨化介素之濃度。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，抗體減小炎性細胞介素及趨化介素之濃度。在一些實施例中，炎性細胞介素及趨化介素係在支氣管肺泡灌洗術(BAL)樣品中。在一些實施例中，炎性細胞介素及趨化介素係在肺均質物樣品中。在一些實施例中，炎性細胞介素及趨化介素包含以下中之一或多者：IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IFNγ、GM-CSF、TNFα、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL19、CCL20、CCL25、CXCL1、CXCL2及CXCL10。在一些實施例中，炎性細胞介素及趨化介素包含以下中之一或多者：IFNγ、IL-1β、IL-6、IL27p28/IL30、IL-10、KC/GRO、IP-10、MP-1a、MCP-1及MP-2。在一些實施例中，炎性細胞介素及趨化介素包含IL-1β。在一些實施例中，炎性細胞介素及趨化介素包含IL-6β。在一些實施例中，炎性細胞介素及趨化介素包含IFNγ。在一些實施例中，炎性細胞介素及趨化介素包含MP-2。在一些實施例中，炎性細胞介素及趨化介素包含KC/GRO。在一些實施例中，炎性細胞介素及趨化介素包含以下中之一或多者：GMCSF、VEGF、IL17F、IL-1β、IL-6、IFNγ、IL-8及KC。在一些實施例中，炎性細胞介素及趨化介素使用ELISA量測。在一些實施例中，炎性細胞介素及趨化介素使用Luminex Multiplex檢定量測。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於基線水準，抗體減小D-二聚體濃度。
在一些實施例中，炎性疾病為結腸炎。在一些實施例中，炎性疾病為炎性腸病。在一些實施例中，相對於基線水準，抗體導致糞便稠度正常或使個體之糞便稠度硬化。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，抗體導致糞便稠度正常或使個體之糞便稠度硬化。在一些實施例中，糞便稠度使用布里斯托糞便量表(Bristol Stool Scale)確定。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於基線水準，抗體減少個體之糞便中之血液或導致不存在血液。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，抗體減少個體之糞便中之血液或導致不存在血液。在一些實施例中，個體糞便中之血液使用潛血試劑測試(hemoccult test)量測。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於基線水準，抗體減小炎性細胞介素及趨化介素之濃度。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，抗體減小炎性細胞介素及趨化介素之濃度。在一些實施例中，炎性細胞介素及趨化介素包含以下中之一或多者：IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IFNγ、GM-CSF、TNFα、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL19、CCL20、CCL25、CXCL1、CXCL2及CXCL10。
在一些實施例中，炎性疾病為病毒感染。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於基線水準，抗體增加抗炎性細胞介素及趨化介素。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，抗體增加抗炎性細胞介素及趨化介素。在一些實施例中，抗炎性細胞介素及趨化介素包含IL-10及IL27p28中之一或多者。在一些實施例中，抗炎性細胞介素及趨化介素係在支氣管肺泡灌洗術(BAL)樣品中。在一些實施例中，炎性細胞介素及趨化介素使用多重電化學發光MSD檢定量測。在一些實施例中，炎性細胞介素及趨化介素使用Luminex Multiplex檢定量測。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於基線水準，抗體降低巨噬細胞趨化性。
在一些實施例中，炎性疾病為關節炎。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於基線水準，抗體減小炎性細胞介素及趨化介素之濃度。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，抗體減小炎性細胞介素及趨化介素之濃度。在一些實施例中，炎性細胞介素及趨化介素包含以下中之一或多者：IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IFNγ、GM-CSF、TNFα、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL19、CCL20、CCL25、CXCL1、CXCL2及CXCL10。
在一些實施例中，個體具有血栓形成。在一些實施例中，在向個體投與後，抗體減小血栓大小至基線水準。在一些實施例中，血栓大小使用超音波成像來量測。在一些實施例中，血栓大小使用高速螢光視訊顯微鏡法來量測。
在一些實施例中，炎性疾病為心肌梗塞。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於基線水準，抗體減小梗塞大小。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，抗體減小梗塞大小。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於基線水準，抗體增加左心室射出分率。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，抗體增加左心室射出分率。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於基線水準，抗體降低左心室舒張末期容積。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，抗體降低左心室舒張末期容積。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於基線水準，抗體降低梗塞心肌中之炎性細胞募集。在一些實施例中，在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，抗體降低梗塞心肌中之炎性細胞募集。在一些實施例中，炎性細胞選自CD45+、CD11b +、Ly6C hi、CD45 +/CD90.2 -/NK1.1 -/CD11b +、CD45 +/CD90.2 -/NK1.1 -/CD11b +/Ly6C hi及CD45 +/CD90.2 -/NK1.1 -/CD11b +/Ly6C lo。在一些實施例中，炎性細胞募集使用流動式細胞測量術量測。
在一些實施例中，在向個體投與後，抗體導致對全身性類固醇之需要減少。在一些實施例中，不同抗炎治療劑包含以下中之一或多者：非類固醇抗炎藥(NSAID)、類固醇抗炎藥、β促效劑、抗膽鹼能藥、抗組胺藥及甲基黃嘌呤。在一些實施例中，不同抗炎治療劑包含以下中之任一者：IL-6抑制劑、抗GM-CSF、抗TNFa、抗IL-1a、地塞米松(dexamethasone)、趨化介素及趨化介素受體拮抗劑、及JAK抑制劑。
在一些實施例中，抗體每兩週投與。在一些實施例中，抗體每週投與。
在一個態樣中，本文提供了一種治療有需要之個體之CRS (細胞介素釋放症候群)的方法，其包含向該個體投與經分離之抗體，其中該抗體結合至人類組織因子(TF)之細胞外域，其中抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF。
在一些實施例中，炎性疾病為血管炎病中之一者，例如血管炎、大血管血管炎、類風濕性多發性肌痛及巨大細胞動脈炎(高安動脈炎(Takayasu arteritis))、中等血管血管炎、川崎病(Kawasaki disease)、結節性多動脈炎/結節性動脈周圍炎、顯微多血管炎、免疫性血管炎、CNS血管炎、皮膚血管炎、過敏性血管炎、壞死性血管炎、全身壞死性血管炎、ANCA相關性血管炎、Churg-Strauss血管炎或症候群(CSS)及ANCA相關性小血管血管炎。在一些實施例中，炎性疾病為血管炎。
相關申請案之交叉引用
本申請案主張2022年1月12日提出申請之美國臨時專利申請案第63/298,991號之優先權及權益，該臨時專利申請案之完整內容出於所有目的以引用方式併入本文。 序列表
本申請案含有已以ASCII格式以電子方式提交且據此以引用方式整體併入本文之序列表。該ASCII拷貝於2023年1月11日創建，名為ITI-010WO_SL.txt，且大小為349,070位元組。 1. 定義
除非另有定義，否則本文所用之所有技術術語、符號及其他科學術語旨在具有熟悉此項技藝者通常所理解之含義。在一些情況下，為了清楚及/或便於參考起見，本文定義了具有通常理解之含義之術語，且在本文中包括此類定義不必解釋為與此項技術通常所理解者相比表示出不同。本文所描述或引用之技術及程序通常得到很好地理解，且通常由熟悉此項技藝者藉由使用常規方法來採用，諸如例如，廣泛使用之分子選殖技術描述於Sambrook等人， Molecular Cloning: A Laboratory Manual第4版(2012) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY。適當時，通常根據製造商規定之方案及條件來實施包括使用市售套組及試劑之工序，除非另外說明。
除非上下文中另外明確指示，否則如本文所用，單數形式「一種/個(a/an)」及「該(the)」包括複數個指示物。除非另外明確指出，否則術語「包括」、「諸如」等旨在傳達包括而不受限制。
如本文所用，在一些實施例中，在本揭示案規定組合物或方法「包含」一或多種要素的情況下，本揭示案亦考慮「由所列舉之一或多種要素組成」或「基本上由所列舉之一或多種要素組成」的組合物或方法。舉例而言，在一些實施例中，本揭示案提供了一種治療有需要之個體之炎性疾病的方法，其包含向該個體投與經分離之抗體，其中該抗體結合至人類組織因子(TF)之細胞外域，其中抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF。因此，本揭示案亦提供了一種治療有需要之個體之炎性疾病的方法，其由向該個體投與經分離之抗體組成，其中該抗體結合至人類組織因子(TF)之細胞外域，其中抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF。此外，本揭示案亦提供了一種治療有需要之個體之炎性疾病的方法，其基本上由向該個體投與經分離之抗體組成，其中該抗體結合至人類組織因子(TF)之細胞外域，其中抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF。
術語「約」指示並涵蓋指示值以及高於及低於該值之範圍。在某些實施例中，術語「約」指示指定值± 10%、± 5%或± 1%。在某些實施例中，在適用情況下，術語「約」指示一或多個指定值±該一或多個值之一個標準偏差。
術語「組織因子」、「TF」、「血小板組織因子」、「因子III」、「凝血激酶」及「CD142」在本文中可互換用於指代TF或由細胞自然表現或由經TF基因轉染之細胞表現之TF的任何變異體(例如，剪接變異體及對偶基因變異體)、同工型及物種同系物。在一些態樣中，TF蛋白為由靈長類動物(例如，猴子或人類)、囓齒動物(例如，小鼠或大鼠)、狗、駱駝、貓、牛、山羊、馬、豬或綿羊自然表現之TF蛋白。在一些態樣中，TF蛋白為人類TF (hTF；SEQ ID NO:809)。在一些態樣中，TF蛋白為食蟹猴TF (cTF；SEQ ID NO:813)。在一些態樣中，TF蛋白為小鼠TF (mTF；SEQ ID NO:817)。在一些態樣中，TF蛋白為豬TF (pTF；SEQ ID NO:824)。TF為絲胺酸蛋白酶因子VIIa之細胞表面受體。它通常由血管周圍及一些疾病環境中之某些細胞組成性表現。
術語「抗體-藥物綴合物」或「ADC」係指包含視情況透過一或多個連接子與一或多種細胞毒性劑綴合之抗體之綴合物。術語「抗TF抗體-藥物綴合物」或「抗TF ADC」係指包含視情況透過一或多個連接子與一或多種細胞毒性劑綴合之抗TF抗體之綴合物。
如本文所用，術語「細胞毒性劑」係指抑制或阻止細胞功能及/或引起細胞死亡或破壞之物質。細胞毒性劑可為抗血管生成劑、促凋亡劑、抗有絲分裂劑、抗激酶劑、烷化劑、激素、激素促效劑、激素拮抗劑、趨化介素、藥物、前驅藥、毒素、酶、抗代謝藥、抗生素、生物鹼或放射性同位素。示範性細胞毒性劑包括：刺孢黴素(calicheamycin)、喜樹鹼、卡鉑、伊立替康(irinotecan)、SN-38、卡鉑、喜樹鹼、環磷醯胺、阿糖胞苷、達卡巴嗪(dacarbazine)、多西他賽(docetaxel)、更生黴素(dactinomycin)、柔紅黴素(daunorubicin)、多柔比星(doxorubicin)、多柔比星、依託泊苷(etoposide)、伊達比星(idarubicin)、拓撲替康(topotecan)、長春花生物鹼、美登木素生物鹼、美登木素生物鹼類似物、吡咯并苯并二氮呯、紫杉烷類、多卡米星(duocarmycin)、多拉司他汀(dolastatin)、澳瑞他汀(auristatin)及其衍生物。
「連接子」係指將一種組成連接到另一種組成(例如，將抗體連接到劑)之分子。本文所述之連接子可將抗體綴合至細胞毒性劑。示範性連接子包括不穩定性連接子、酸不穩定性連接子、光不穩定性連接子、帶電荷連接子、含二硫鍵之連接子、肽酶敏感性連接子、β-葡萄糖醛酸苷連接子、二甲基連接子、硫醚連接子及親水連接子。連接子可為可裂解或不可裂解的。
術語「免疫球蛋白」係指一類結構上相關之蛋白質，其通常包含兩對多肽鏈：一對輕(L)鏈及一對重(H)鏈。在「完整免疫球蛋白」中，所有該四條鏈由二硫鍵相互連接。免疫球蛋白之結構已得到很好地表徵。參見例如Paul, Fundamental Immunology第7版,第5章(2013) Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA。簡言之，每條重鏈通常包含重鏈可變區(V H)及重鏈恆定區(C H)。重鏈恆定區通常包含三個域，縮寫為C H1、C H2及C H3。每條輕鏈通常包含輕鏈可變區(V L)及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區通常包含一個域，縮寫為C L。
術語「抗體」在本文中以其最廣泛意義使用，且包括包含一或多個特異性結合抗原或表位之抗原結合域的某些類型之免疫球蛋白分子。抗體具體包括完整抗體(例如完整免疫球蛋白)、抗體片段及多特異性抗體。
術語「替代支架」係指一種分子，其中一或多個區域可多樣化以產生一或多個特異性結合抗原或表位之抗原結合域。在一些實施例中，抗原結合域以類似於抗體之特異性及親和力結合抗原或表位。示範性替代支架包括來源於以下之彼等：纖網蛋白(例如，AdnectinsTM)、β夾層(例如，iMab)、脂質運載蛋白(例如，Anticalins ®)、EETI-II/AGRP、BPTI/LACI-D1/ITI-D2 (例如，Kunitz域)、硫氧還蛋白肽適體、蛋白質A (例如，Affibody ®)、錨蛋白重複序列(例如，DARPins)、γ-B-晶體蛋白/泛素(例如，人類泛素(Affilins))、CTLD3 (例如，四連接素(Tetranectins))、Fynomers及(LDLR-A模塊)(例如，高親和性多聚體(Avimers))。關於替代支架之附加資訊提供於Binz等人， Nat. Biotechnol., 2005 23:1257-1268；Skerra, Current Opin. in Biotech., 2007 18:295-304；及Silacci等人， J. Biol. Chem., 2014, 289:14392-14398中；其各自以引用方式整體併入。
術語「抗原結合域」意指能夠與抗原或表位特異性結合之抗體之部分。抗原結合域之一個實例為由抗體之V H-V L二聚體形成之抗原結合域。抗原結合域之另一個實例為藉由Adnectin之第十纖網蛋白III型域之某些環多樣化而形成的抗原結合域。可在各種情況下發現抗原結合域，包括抗體及嵌合抗原受體(CAR)，例如來源於抗體或抗體片段(諸如scFv)之CAR。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「完全抗體」在本文中可互換用於指代具有與天然存在之抗體結構基本上類似之結構，以及具有包含Fc區之重鏈之抗體。例如，當用於指代IgG分子時，「全長抗體」為包含兩條重鏈及兩條輕鏈之抗體。
術語「Fc區」意指免疫球蛋白重鏈之C端區域，其在天然存在之抗體中與Fc受體及補體系統之某些蛋白質相互作用。各種免疫球蛋白之Fc區之結構以及其中包含之糖基化位點在此項技術中已知。參見Schroeder及Cavacini, J. Allergy Clin. Immunol., 2010, 125:S41-52，其以引用方式整體併入。Fc區可為天然存在之Fc區，或如此項技術或本揭示案別處所述經修飾之Fc區。
可將V H及V L區進一步細分為散佈在更保守區域中之高變性區域(「高變區(HVR)」；亦稱為「互補決定區」(CDR))。更保守區域稱為架構區(FR)。各V H及V L通常包含三個CDR及四個FR，其以以下順序(自N端到C端)排列：FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4。CDR參與抗原結合，且影響抗原特異性及抗體之結合親和力。參見Kabat等人， Sequences of Proteins of Immunological Interest第5版(1991) Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD，其以引用方式整體併入。
「互補決定區(CDR)」係指免疫球蛋白(Ig或抗體) VH β-片層架構之非架構區內之三個高變區(H1、H2或H3)中之一個，或抗體VL β-片層架構之非架構區內之三個高變區(L1、L2或L3)中之一個。CDR為散佈在架構區序列內之可變區序列。CDR為在此項技術中熟知的，且已經例如由Kabat定義為抗體可變(V)域內最具高變性之區域。參見Kabat等人， J Biol Chem, 1977, 252:6609-6616及Kabat, Adv Protein Chem, 1978, 32:1-75，其各自以引用方式整體併入。CDR在結構上亦經Chothia定義為不為保守性β-片層架構之部分的彼等殘基，且因此能夠適應不同之構形。參見Chothia及Lesk, J Mol Biol, 1987, 196:901-917，其以引用方式整體併入。Kabat及Chothia命名法在此項技術中為熟知的。AbM、Contact及IMGT亦定義了CDR。藉由比較許多結構已確定了標準抗體可變域內之CDR位置。參見Morea等人， Methods, 2000, 20:267-279及Al-Lazikani等人， J Mol Biol, 1997, 273:927-48，其各自以引用方式整體併入。由於高變區內之殘基數在不同抗體中不同，因此相對於標準位置之其他殘基通常在標準可變域編號方案中在殘基編號旁邊用a、b、c等編號(Al-Lazikani等人，同上)。此種術語為熟悉此項技藝者熟知的。
許多高變區描述正在使用，且包括在本文中。Kabat CDR係基於序列變異性，且為最常用的。參見Kabat等人(1992) Sequences of Proteins of Immunological Interest, DIANE Publishing: 2719，其以引用方式整體併入。相反，Chothia係指結構環之位置(Chothia及Lesk,同上)。AbM高變區表示Kabat CDR及Chothia結構環之間的折衷，且經Oxford Molecular之AbM抗體建模軟體使用。Contact高變區係基於對可用複雜晶體結構之分析。來自此等高變區中每一者之殘基在表1中指出。
最近，通用編號系統ImMunoGeneTics (IMGT) Information SystemTM已經開發且廣泛採用。參見Lefranc等人， Dev Comp Immunol, 2003, 27:55-77，其以引用方式整體併入。IMGT為整合之資訊系統，該資訊系統專門研究人類及其他脊椎動物之免疫球蛋白(IG)、T細胞受體(TR)及主要組織相容性複合體(MHC)。IMGT CDR係指胺基酸序列及在輕鏈或重鏈內之位置。由於免疫球蛋白可變域之結構內CDR之「位置」在物種之間為保守的，且存在於稱為環之結構中，故藉由使用根據結構特徵比對可變域序列之編號系統，CDR及架構殘基易於識別。Kabat、Chothia及IMGT編號之間的對應關係亦為此項技術中熟知的(Lefranc等人，同上)。本文所示之示範性系統組合了Kabat及Chothia CDR定義。 表 1
   示範性(Kabat + Chothia) Kabat Chothia AbM Contact IMGT
VH CDR1 26-35 31-35 26-32 26-35 30-35 27-38
VH CDR2 50-65 50-65 52a-55 50-58 47-58 56-65
VH CDR3 95-102 95-102 96-101 95-102 93-101 105-117
VL CDR1 24-34 24-34 26-32 24-34 30-36 27-38
VL CDR2 50-56 50-56 50-52 50-56 46-55 56-65
VL CDR3 89-97 89-97 91-96 89-97 89-96 105-117
來自任何脊椎動物物種之輕鏈可基於其恆定域之序列經分配為兩種類型(稱為κ (kappa)及λ (lambda))中之一種。
來自任何脊椎動物物種之重鏈可經分配為五種不同類別(或同型)中之一種：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM。此等類別亦分別定名為α、δ、ε、γ及µ。根據序列及功能之差異，IgG及IgA類別進一步分為亞類。人類表現以下亞類：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。
術語「恆定區」或「恆定域」係指輕鏈及重鏈之羧基端部分，其不直接參與抗體與抗原之結合，但表現出各種效應子功能，諸如與Fc受體之相互作用。該等術語係指免疫球蛋白分子之一部分，相對於免疫球蛋白之另一部分(含有抗原結合位點之可變域)，其具有更保守之胺基酸序列。恆定域含有重鏈之C H1、C H2及C H3域以及輕鏈之C L域。
當提及抗體重鏈恆定區中之殘基時，通常使用「EU編號方案」(例如，如Kabat等人，同上中所報告)。除非另外說明，否則EU編號方案用於提及本文所述之抗體重鏈恆定區中之殘基。
「抗體片段」包含完整抗體之一部分，諸如完整抗體之抗原結合區或可變區。抗體片段包括例如Fv片段、Fab片段、F(ab') 2片段、Fab'片段、scFv (sFv)片段及scFv-Fc片段。
「Fv」片段包含一個重鏈可變域及一個輕鏈可變域之非共價連接二聚體。
除了重鏈及輕鏈可變域，「Fab」片段亦包含輕鏈之恆定域及重鏈之第一恆定域(C H1)。Fab片段可例如藉由重組方法或藉由木瓜蛋白酶消化全長抗體來產生。
「F(ab’) 2」片段含有兩個在鉸鏈區附近由二硫鍵接合之Fab’片段。F(ab’) 2片段可例如藉由重組方法或藉由胃蛋白酶消化完整抗體來產生。F(ab’)片段可例如藉由用ß-巰基乙醇處理來解離。
「單鏈Fv」或「sFv」或「scFv」抗體片段包含單個多肽鏈中之V H域及V L域。V H及V L通常藉由肽連接子連接。參見Plückthun A. (1994)。可使用任何適合連接子。在一些實施例中，連接子為(GGGGS) n(SEQ ID NO:823)。在一些實施例中，n = 1、2、3、4、5或6。參見Antibodies from Escherichia coli.Rosenberg M. & Moore G.P. (編), The Pharmacology of Monoclonal Antibodies第113卷(第269-315頁). Springer-Verlag, New York，其以引用方式整體併入。
「scFv-Fc」片段包含連接於Fc域之scFv。例如，Fc域可連接於scFv之C端。視scFv中可變域之定向(亦即V H-V L或V L-V H)而定，Fc域可在V H或V L之後。可使用此項技術中已知或本文所述之任何適合Fc域。
術語「單域抗體」係指其中抗體之一個可變域在不存在另一可變域下特異性結合抗原之分子。單域抗體及其片段描述於Arabi Ghahroudi等人， FEBS Letters,1998, 414:521-526以及Muyldermans等人， Trends in Biochem.Sci., 2001, 26:230-245中，其各自以引用方式整體併入。單域抗體亦稱為sdAb或奈米抗體。
「多特異性抗體」為包含兩個或更多個共同地特異性結合兩個或更多個不同表位之不同抗原結合域之抗體。兩個或更多個不同表位可為同一抗原(例如由細胞表現之單一TF分子)上或不同抗原(例如TF分子及非TF分子)上之表位。在一些態樣中，多特異性抗體結合兩個不同表位(亦即「雙特異性抗體」)。在一些態樣中，多特異性抗體結合三個不同表位(亦即「三特異性抗體」)。在一些態樣中，多特異性抗體結合四個不同表位(亦即「四特異性抗體」)。在一些態樣中，多特異性抗體結合五個不同表位(亦即「五特異性抗體」)。在一些態樣中，多特異性抗體結合6個、7個、8個或更多個不同表位。每種結合特異性可以任何適合效價存在。在本揭示案別處提供了多特異性抗體之實例。
「單特異性抗體」為包含一或多個特異性結合單一表位之結合位點之抗體。單特異性抗體之實例為天然存在之IgG分子，該IgG分子雖然為二價的(亦即具有兩個抗原結合域)，但在兩個抗原結合域中之各處識別相同表位。結合特異性可以任何適合效價存在。
術語「單株抗體」係指來自基本上同質抗體之群體之抗體。基本上同質抗體之群體包含基本上類似且結合一或多種相同表位之抗體，例外之處為可通常在單株抗體產生期間產生之變異體。此類變異體通常僅少量存在。單株抗體通常藉由包括自複數種抗體選擇單一抗體之方法獲得。例如，選擇方法可為自複數種純系諸如融合瘤純系、噬菌體純系、酵母純系、細菌純系或其他重組DNA純系之匯合物選擇獨特純系。所選抗體可加以進一步改變，例如以使對靶標之親和力得到改良(「親和力成熟」)，以使抗體人類化，以使它在細胞培養中之產生改良，及/或以使它在個體中之免疫原性降低。
術語「嵌合抗體」係指其中重鏈及/或輕鏈之一部分源於特定來源或物種，而重鏈及/或輕鏈之其餘部分源於不同來源或物種之抗體。
非人類抗體之「人類化」形式為含有源於非人類抗體之最小序列之嵌合抗體。人類化抗體大體上為人類抗體(受體抗體)，其中來自一或多個CDR之殘基經來自非人類抗體(供體抗體)之一或多個CDR之殘基替換。供體抗體可為具有所需特異性、親和力或生物效應之任何適合非人類抗體，諸如小鼠、大鼠、兔、雞或非人類靈長類動物抗體。在一些情況下，受體抗體之所選架構區殘基由來自供體抗體之相應架構區殘基替換。人類化抗體亦可包含不見於受體抗體或供體抗體中之殘基。可進行此類修飾以進一步改良抗體功能。對於其他細節，參見Jones等人， Nature, 1986, 321:522-525；Riechmann等人，Nature, 1988, 332:323-329；以及Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 1992, 2:593-596，其各自以引用方式整體併入。
「人類抗體」為具有與由人類或人類細胞產生或源於非人類來源之抗體之胺基酸序列對應的胺基酸序列之抗體，該非人類來源利用人類抗體譜系或人類抗體編碼序列(例如自人類來源獲得或重新設計)。人類抗體明確排除人類化抗體。
「經分離抗體」或「經分離核酸」為已經自其天然環境之組分中分離及/或回收之抗體或核酸。天然環境之組分可包括酶、激素及其他蛋白質或非蛋白質物質。在一些實施例中，將經分離抗體純化至足以例如藉由使用旋轉杯定序儀獲得至少15個N端或內部胺基酸序列殘基之程度。在一些實施例中，在還原或非還原條件下藉由凝膠電泳(例如，SDS-PAGE)將經分離抗體純化至同質，其中藉由考馬斯藍染色或銀染色進行偵測。在一些實施例中，經分離抗體可包括在重組細胞內之原位抗體，因為抗體天然環境之至少一種組分不存在。在一些態樣中，藉由至少一個純化步驟製備經分離抗體或經分離核酸。在一些實施例中，將經分離抗體或經分離核酸純化至按重量計至少80%、85%、90%、95%或99%。在一些實施例中，將經分離抗體或經分離核酸純化至按體積計至少80%、85%、90%、95%或99%。在一些實施例中，將經分離抗體或經分離核酸提供為包含按重量計至少85%、90%、95%、98%、99%至100%抗體或核酸之溶液。在一些實施例中，將經分離抗體或經分離核酸提供為包含按體積計至少85%、90%、95%、98%、99%至100%抗體或核酸之溶液。
「親和力」係指分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合配偶體(例如抗原或表位)之間的非共價相互作用總和之強度。除非另外指示，否則如本文所用，「親和力」係指反映結合對之成員(例如抗體及抗原或表位)之間的1:1相互作用之固有結合親和力。分子X對其配偶體Y之親和力可由解離平衡常數(K D)表示。以下更詳細描述促成解離平衡常數之動力學分量。親和力可藉由此項技術中已知之常用方法量測，包括本文所述之彼等者，諸如表面電漿子共振(SPR)技術(例如BIACORE ®)或生物層干涉術(例如FORTEBIO ®)。
關於抗體與靶標分子之結合，術語「結合」、「特異性結合」、「特異性結合到」、「特異性於」、「選擇性結合」特定抗原(例如多肽靶標)或特定抗原上之表位或「對其有選擇性」意指結合在可量測程度上不同於非特異性或非選擇性相互作用(例如與非靶標分子之相互作用)。特異性結合可例如藉由量測與靶標分子之結合以及將該結合與同非靶標分子之結合進行比較來量測。特異性結合亦可藉由與模擬在靶標分子上識別之表位的對照分子競爭來測定。在該情況下，若抗體與靶標分子之結合由對照分子競爭性抑制，則指示特異性結合。在一些態樣中，TF抗體對非靶標分子之親和力小於對TF之親和力之約50%。在一些態樣中，TF抗體對非靶標分子之親和力小於對TF之親和力之約40%。在一些態樣中，TF抗體對非靶標分子之親和力小於對TF之親和力之約30%。在一些態樣中，TF抗體對非靶標分子之親和力小於對TF之親和力之約20%。在一些態樣中，TF抗體對非靶標分子之親和力小於對TF之親和力之約10%。在一些態樣中，TF抗體對非靶標分子之親和力小於對TF之親和力之約1%。在一些態樣中，TF抗體對非靶標分子之親和力小於對TF之親和力之約0.1%。
在一些實施例中，特異性結合係指抗體以小於1 nM之親和力結合。在一些實施例中，特異性結合係指抗體以小於10 nM之親和力結合。在一些實施例中，特異性結合係指抗體以小於50 nM之親和力結合。在一些實施例中，特異性結合係指抗體以小於100 nM之親和力結合。在一些實施例中，特異性結合係指抗體以小於200 nM之親和力結合。在一些實施例中，特異性結合係指抗體以小於300 nM之親和力結合。在一些實施例中，特異性結合係指抗體以小於200 nM、300 nM、400 nM或500 nM之親和力結合。在一些實施例中，特異性結合係指抗體以小於0 nM、10 nM、20 nM、30 nM、40 nM、50 nM、60 nM、70 nM、80 nM、90 nM或100 nM之親和力結合。
如本文所用，術語「k d」(s -1)係指特定抗體-抗原相互作用之解離速率常數。此值亦稱為k 解離值。
如本文所用，術語「k a」(M -1×s -1)係指特定抗體-抗原相互作用之締合速率常數。此值亦稱為k 締合值。
如本文所用，術語「K D」(M)係指特定抗體-抗原相互作用之解離平衡常數。K D= k d/k a。在一些實施例中，抗體之親和力以關於此種抗體與其抗原之間的相互作用之K D描述。為明晰起見，如此項技術中所知，較小K D值指示較高親和力相互作用，而較大K D值指示較低親和力相互作用。
如本文所用，術語「K A」(M -1)係指特定抗體-抗原相互作用之締合平衡常數。K A= k a/k d。
「親和力成熟之」抗體為相對於親本抗體(亦即衍生或設計經改變抗體之抗體)具有一或多種改變(例如，在一或多個CDR或FR中)之抗體，與不具有一或多種改變之親本抗體相比，該一或多種改變導致抗體對其抗原之親和力提高。在一些實施例中，親和力成熟之抗體對靶抗原具有奈莫耳或皮莫耳之親和力。親和力成熟之抗體可使用此項技術已知之多種方法來產生。例如，Marks等人( Bio/Technology, 1992, 10:779-783，其以引用方式整體併入)描述了藉由V H及V L域改組之親和力成熟。CDR及/或架構殘基之隨機突變描述於例如Barbas等人， Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 1994, 91:3809-3813；Schier等人， Gene, 1995, 169:147-155；Yelton等人， J. Immunol., 1995, 155:1994-2004；Jackson等人， J. Immunol., 1995, 154:3310-33199；及Hawkins等人， J. Mol. Biol., 1992, 226:889-896；其各自以引用方式整體併入。
「Fc效應子功能」係指由抗體之Fc區介導之彼等生物活性，該等活性可視抗體同型而變化。抗體效應子功能之實例包括用以使補體依賴性細胞毒性(CDC)活化之C1q結合、用以使抗體依賴性細胞毒性(ADCC)及抗體依賴性細胞吞噬(ADCP)活化之Fc受體結合。
當在本文中在兩種或更多種抗體之情形下使用時，術語「與……競爭」或「與……交叉競爭」指示該兩種或更多種抗體競爭結合抗原(例如TF)。在一個示範性檢定中，將TF包被在表面上，且使其與第一TF抗體接觸，此後，添加第二TF抗體。在另一示範性檢定中，將第一TF抗體包被在表面上，且使其與TF接觸，接著添加第二TF抗體。若在任一檢定中，第一TF抗體之存在使第二TF抗體之結合降低，則抗體彼此競爭。術語「與……競爭」亦包括抗體之組合，其中一種抗體使另一抗體之結合降低，但其中在以相反順序添加抗體時未觀測到競爭。然而，在一些實施例中，第一抗體及第二抗體抑制彼此之結合，無論它們的添加順序如何。在一些實施例中，一種抗體使另一抗體與其抗原之結合降低至少25%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%。熟悉此項技藝者可基於抗體對TF之親和力以及抗體之效價來選擇抗體在競爭檢定中使用之濃度。此定義中所述之檢定為說明性的，且熟悉此項技藝者可利用任何適合檢定來確定抗體是否彼此競爭。適合檢定例如描述於Cox等人，「Immunoassay Methods」, Assay Guidance Manual [Internet], 2014年12月24日更新(www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK92434/；2015年9月29日存取)；Silman等人， Cytometry, 2001, 44:30-37；以及Finco等人， J. Pharm. Biomed. Anal., 2011, 54:351-358中；其各自以引用方式整體併入。如 實例 19中提供的，第25組之抗體及第43組之抗體彼此競爭結合到人類TF，而來自第1組、第29組、第39組及第54組之抗體並不與第25組及第43組之抗體競爭結合到人類TF。
如本文所用，當可在ForteBio Octet上用小鼠抗原量測K D值時，認為特異性結合人類抗原之抗體與小鼠來源之相同抗原結合。當小鼠抗原之K D值不大於相應人類抗原之對應K D值之20倍時，認為特異性結合人類抗原之抗體與小鼠來源之相同抗原「交叉反應」。例如，以下抗體不結合小鼠TF：抗體M1593，其描述於美國專利第8,722,044號、第8,951,525號及第8,999,333號，其各自出於所有目的以引用方式整體併入本文；人類化5G9抗體，其描述於Ngo等人，2007, Int J C ancer, 120(6):1261-1267，其以引用方式整體併入；以及嵌合ALT-836抗體，其描述於Hong等人，2012, J Nucl Med, 53(11):1748-1754，其以引用方式整體併入。如 實例 1 、 13 及 14中所提供的，來自第25組及第43組之TF抗體結合小鼠TF，例如，TF抗體25G、25G1、25G9及43D8與小鼠TF交叉反應。
如本文所用，當食蟹猴抗原之K D值不大於相應人類抗原之對應K D值之15倍時，認為特異性結合人類抗原之抗體與食蟹猴來源之相同抗原「交叉反應」。如 實例 1 及 13中所提供的，來自第1組、第25組、第29組、第39組、第43組及第54組之所有測試抗體與食蟹猴TF交叉反應。
術語「表位」意指抗原之由抗體特異性結合之部分。表位常常包括表面可及胺基酸殘基及/或糖側鏈，且可具有特定三維結構特徵以及特定電荷特徵。構形性表位及非構形性表位之區別在於在變性溶劑存在下，與前者而非與後者之結合可喪失。表位可包含直接參與結合之胺基酸殘基以及不直接參與結合之其他胺基酸殘基。抗體結合之表位可使用用於表位確定之已知技術來確定，諸如例如測試抗體與具有不同點突變之TF變異體或與嵌合TF變異體之結合。
多肽序列與參考序列之間的「同一性」百分比經定義為在比對序列並引入空位(若需要的話)以實現最大百分比之序列同一性之後，多肽序列中與參考序列中之胺基酸殘基相同的胺基酸殘基之百分比。出於確定胺基酸序列同一性百分比之目的之比對可以屬於此項技術中之技能之各種方式實現，例如使用可公開獲得之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN、MEGALIGN (DNASTAR)、CLUSTALW、CLUSTAL OMEGA或MUSCLE軟體。熟悉此項技藝者可以確定用於比對序列之適當參數，包括在所比較序列之全長上實現最大比對所需之任何算法。
「保守性取代」或「保守性胺基酸取代」係指用化學上或功能上類似之胺基酸取代胺基酸。提供類似胺基酸之保守性取代表為此項技術中熟知的。以舉例之方式，在一些實施例中， 表 2 至表 4中提供之胺基酸組視為彼此之保守性取代。 表 2 ：在某些實施例中，視為彼此之保守性取代之所選胺基酸組。
酸性殘基 D及E
鹼性殘基 K、R及H
親水性不帶電荷殘基 S、T、N及Q
脂肪族不帶電荷殘基 G、A、V、L及I
非極性不帶電荷殘基 C、M及P
芳香族殘基 F、Y及W
表 3 ：在某些實施例中，視為彼此之保守性取代之其他所選胺基酸組。
第 1 組 A、S及T
第 2 組 D及E
第 3 組 N及Q
第 4 組 R及K
第 5 組 I、L及M
第 6 組 F、Y及W
表 4 ：在某些實施例中，視為彼此之保守性取代之其他所選胺基酸組。
A 組 A及G
B 組 D及E
C 組 N及Q
D 組 R、K及H
E 組 I、L、M、V
F 組 F、Y及W
G 組 S及T
H 組 C及M
其他保守性取代可發現於例如Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties第2版(1993) W. H. Freeman & Co., New York, NY中。藉由對親本抗體中之胺基酸殘基進行一或多個保守性取代而產生之抗體稱為「保守性修飾之變異體」。
術語「胺基酸」係指二十種常見之天然存在之胺基酸。天然存在之胺基酸包括丙胺酸(Ala；A)、精胺酸(Arg；R)、天冬醯胺(Asn；N)、天冬胺酸(Asp；D)、半胱胺酸(Cys；C)；麩胺酸(Glu；E)、麩醯胺(Gln；Q)、甘胺酸(Gly；G)；組胺酸(His；H)、異白胺酸(Ile；I)、白胺酸(Leu；L)、離胺酸(Lys；K)、甲硫胺酸(Met；M)、苯丙胺酸(Phe；F)、脯胺酸(Pro；P)、絲胺酸(Ser；S)、蘇胺酸(Thr；T)、色胺酸(Trp；W)、酪胺酸(Tyr；Y)及纈胺酸(Val；V)。
如本文所用，術語「載體」係指能夠使與其連接之另一核酸增殖之核酸分子。該術語包括作為自我複製型核酸結構之載體以及併入已經引入載體之宿主細胞的基因組內之載體。某些載體能夠引導與其可操作性連接之核酸之表現。本文將此類載體稱為「表現載體」。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」可互換使用且係指已經引入外源核酸之細胞，以及此類細胞之後代。宿主細胞包括「轉化體」(或「經轉化細胞」)及「轉染子」(或「經轉染細胞」)，其各自包括原代經轉化細胞或經轉染細胞及由其衍生之後代。此類後代之核酸含量可能與親代細胞不完全相同，且可能含有突變。
術語「治療(treating)」(及其變型諸如「治療(treat)」或「治療(treatment)」)係指試圖改變有需要之個體中疾病或疾患之自然進程的臨床干預。可出於預防目的及在臨床病理過程期間進行治療。預防可延緩疾病進展，降低疾病之嚴重程度，抑制疾病發展，或導致比在沒有預防性治療之情況下觀察到之更好的疾病結果。理想的治療效果包括：預防疾病之發生或復發、緩解症狀、消除疾病之任何直接或間接之病理學後果、預防轉移、降低疾病進展之速率、改善或減輕疾病狀態以及緩解或改善預後。
如本文所用，術語「治療有效量」或「有效量」係指當向個體投與時有效治療疾病或病症之本文提供之抗體或醫藥組合物之量。有效量足以實現個體中之所要結果或益處。在一些實施例中，向個體投與預防有效量。有效量可以一或多次投與、應用或劑量來投與且不欲限制為特定調配物或投與途徑。預防有效量可由醫師或執業醫師確定。「預防有效量」係指在必要之劑量及時間段內有效實現所需預防結果的量。在一些實施例中，預防有效量小於治療有效量，因為預防劑量係在疾病之前或疾病之早期階段用於個體。在一些實施例中，預防有效量與治療有效量相同。在一些實施例中，預防有效量係足以防止疾病或病症復發的預防劑之任何量。確定預防性治療時可考慮的因素包括但不限於疾病風險程度及患者之病史(例如復發)、待治療患者之年齡、體重、家族史、基因構成及既往治療或伴隨治療(若有)之類型。
如本文所用，術語「基線水準」及「基線」係指即將治療前或在治療時之參數(例如體重)之水準。
如本文所用，術語「個體」意指哺乳動物個體。示範性個體包括人類、猴子、狗、貓、小鼠、大鼠、牛、馬、駱駝、山羊、兔子、豬及綿羊。在某些實施例中，個體為人類。在一些實施例中，個體患有可用本文提供之抗體治療之疾病或疾患。在一些態樣中，疾病或疾患為炎性疾病。在一些態樣中，疾病或疾患涉及新生血管或血管炎症。
如本文所用，片語「有需要之個體」係指表現出及/或經診斷為具有如本文所述之炎性疾病之一或多種症狀或徵象之個體。
術語「包裝說明書」用於係指通常在治療或診斷產品(例如，套組)之商業包裝中包括之說明，其含有關於使用此類治療或診斷產品之適應症、用法、劑量、投與、聯合療法、禁忌症及/或警告之資訊。
「化學治療劑」係指可用於治療癌症之化合物。化學治療劑包括「抗激素劑」或「內分泌治療劑」，其作用為調節、減少、阻斷或抑制可促進癌症生長之激素之效應。
術語「細胞抑制劑」係指活體外或活體內阻滯細胞生長之化合物或組合物。在一些實施例中，細胞抑制劑為減少S期細胞百分比之劑。在一些實施例中，細胞抑制劑將S期細胞百分比減少至少約20%、至少約40%、至少約60%或至少約80%。
術語「醫藥組合物」係指這樣的製劑，其形式允許包含在其中之活性成分之生物活性對治療個體有效，且其不含在醫藥組合物中提供之量下對個體具有不可接受之毒性之其他組分。
術語「調節(modulate/modulation)」係指降低或抑制，或另選地，活化或增加所敘述變量。
術語「增加」及「活化」係指所敘述變量增加10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或更大。
術語「降低」及「抑制」係指所敘述變量降低10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或更大。
術語「促效」係指使受體傳訊活化以誘導與受體活化相關之生物反應。「促效劑」為結合受體且使受體促效之實體。
術語「拮抗」係指使受體傳訊受抑制以抑制與受體活化相關之生物反應。「拮抗劑」為結合受體且使受體拮抗之實體。 2. TF抗體 2.1. TF結合
本文提供了特異性結合TF之經分離抗體。在一些態樣中，TF為hTF (SEQ ID NO:809)。在一些態樣中，TF為cTF (SEQ ID NO:813)。在一些態樣中，TF為mTF (SEQ ID NO:817)。在一些態樣中，TF為兔TF (SEQ ID NO:832)。在一些態樣中，TF為pTF (SEQ ID NO:824)。在一些實施例中，本文提供之抗體特異性結合hTF (SEQ ID NO:809)、cTF (SEQ ID NO:813)、mTF (SEQ ID NO:817)、兔TF (SEQ ID NO:832)及pTF (SEQ ID NO:824)。在一些實施例中，本文提供之抗體特異性結合hTF (SEQ ID NO:809)、cTF (SEQ ID NO:813)、mTF (SEQ ID NO:817)及pTF (SEQ ID NO:824)。在一些實施例中，本文提供之抗體特異性結合hTF (SEQ ID NO:809)、cTF (SEQ ID NO:813)及mTF (SEQ ID NO:817)。在一些實施例中，本文提供之抗體特異性結合hTF (SEQ ID NO:809)及cTF (SEQ ID NO:813)。在一些實施例中，本文提供之抗體不結合mTF (SEQ ID NO:817)。在一些實施例中，本文提供之抗體不結合pTF (SEQ ID NO:824)。在一些實施例中，本文提供之抗體不結合兔TF (SEQ ID NO:832)。
在各種實施例中，本文提供之抗體特異性結合人類TF細胞外域(SEQ ID NO:810)。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，本文提供之抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基149處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於本文提供之抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。在一些實施例中，SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基149處之突變為K149N。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，本文提供之抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基68處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合大於本文提供之抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。在一些實施例中，SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基68處之突變為K68N。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，本文提供之抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基171及197處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於本文提供之抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。在一些實施例中，SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基171及197處之突變為N171H及T197K。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基1至77經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基1至76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基39至77經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基38至76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基94至107經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基99至112替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基146至158經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基151至163替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基159至219經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基164至224替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基159至189經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基164至194替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基159至174經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基164至179替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基167至174經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基172至179替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，本文提供之抗體與大鼠TF細胞外域(其中SEQ ID NO:838所示序列之胺基酸殘基141至194經SEQ ID NO:810所示序列之人類TF細胞外域胺基酸殘基136至189替換)之間的結合大於本文提供之抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，本文提供之抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基149處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於本文提供之抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；本文提供之抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基68處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合大於本文提供之抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基1至77經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基1至76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基39至77經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基38至76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基94至107經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基99至112替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基146至158經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基151至163替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；且本文提供之抗體與大鼠TF細胞外域(其中SEQ ID NO:838所示序列之胺基酸殘基141至194經SEQ ID NO:810所示序列之人類TF細胞外域胺基酸殘基136至189替換)之間的結合大於本文提供之抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。在一些實施例中，SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基149處之突變為K149N；且SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基68處之突變為K68N。
在一些實施例中，如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，本文提供之抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基149處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於本文提供之抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；本文提供之抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基68處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合大於本文提供之抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；本文提供之抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基171及197處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於本文提供之抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基1至77經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基1至76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基39至77經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基38至76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基94至107經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基99至112替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基146至158經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基151至163替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基159至219經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基164至224替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基159至189經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基164至194替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基159至174經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基164至179替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；本文提供之抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基167至174經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基172至179替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；且本文提供之抗體與大鼠TF細胞外域(其中SEQ ID NO:838所示序列之胺基酸殘基141至194經SEQ ID NO:810所示序列之人類TF細胞外域胺基酸殘基136至189替換)之間的結合大於本文提供之抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。在一些實施例中，SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基149處之突變為K149N；SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基68處之突變為K68N；且SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基171及197處之突變為N171H及T197K。
在一些實施例中，與參考抗體M1593相比，本文提供之抗體在抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成上為惰性的，其中參考抗體M1593包含SEQ ID NO:821之V H序列及SEQ ID NO:822之V L序列。
在一些實施例中，本文提供之抗體不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成。在某些實施例中，本文提供之抗體允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成。
在一些實施例中，本文提供之抗體在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF。在某些實施例中，本文提供之抗體不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa之能力。
在一些實施例中，本文提供之抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF。在某些實施例中，本文提供之抗體不與人類FVIIa競爭結合到人類TF。
在一些實施例中，本文提供之抗體結合人類TF細胞外域；在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；且允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成。
在一些實施例中，本文提供之抗體結合人類TF細胞外域；不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa之能力；且不與人類FVIIa競爭結合到人類TF。
在一些實施例中，本文提供之抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF細胞外域；不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa之能力；且不與人類FVIIa競爭結合到人類TF。
在一些實施例中，本文提供之抗體抑制FVIIa依賴性TF傳訊。
在一些實施例中，本文提供之抗體減少豬脈絡膜新生血管(CNV)模型中之病變大小。
在一些實施例中，本文提供之抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF細胞外域；不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa之能力；不與人類FVIIa競爭結合到人類TF；且結合到食蟹猴及小鼠TF。
在一些實施例中，本文提供之抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF細胞外域；不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa之能力；不與人類FVIIa競爭結合到人類TF；結合到食蟹猴、小鼠及豬TF；且減少豬脈絡膜新生血管(CNV)模型中之病變大小。
在一些實施例中，本文提供之抗體結合人類TF細胞外域；抑制FVIIa依賴性TF傳訊；且結合到食蟹猴TF。 2.2. TF抗體之序列 2.2.1. V H域
在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:37之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:75之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:113之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:151之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:189之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:836之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:227之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:265之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:303之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:341之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:379之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:417之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:455之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:493之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:531之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:569之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:607之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:645之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:683之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:721之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:759之V H序列。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含與SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759中提供之說明性V H序列具有至少約50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%同一性之V H序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759中提供之V H序列，其具有多達1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，這個段落中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體之方法來重新分離。 2.2.2. V L域
在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:38之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:76之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:114之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:152之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:190之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:837之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:228之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:266之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:304之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:342之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:380之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:418之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:456之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:494之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:532之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:570之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:608之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:646之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:684之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:722之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:760之V L序列。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含與SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760中提供之說明性V L序列具有至少約50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%同一性之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760中提供之V L序列，其具有多達1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，這個段落中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體之方法來重新分離。 2.2.3. V H-V L組合
在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759之V H序列以及選自SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760之V L序列。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:37之V H序列及SEQ ID NO:38之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:75之V H序列及SEQ ID NO:76之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:113之V H序列及SEQ ID NO:114之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:151之V H序列及SEQ ID NO:152之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:189之V H序列及SEQ ID NO:190之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:836之V H序列及SEQ ID NO:837之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:227之V H序列及SEQ ID NO:228之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:265之V H序列及SEQ ID NO:266之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:303之V H序列及SEQ ID NO:304之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:341之V H序列及SEQ ID NO:342之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:379之V H序列及SEQ ID NO:380之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:417之V H序列及SEQ ID NO:418之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:455之V H序列及SEQ ID NO:456之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:493之V H序列及SEQ ID NO:494之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:531之V H序列及SEQ ID NO:532之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:569之V H序列及SEQ ID NO:570之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:607之V H序列及SEQ ID NO:608之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:645之V H序列及SEQ ID NO:646之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:683之V H序列及SEQ ID NO:684之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:721之V H序列及SEQ ID NO:722之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:759之V H序列及SEQ ID NO:760之V L序列。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含與SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759中提供之說明性V H序列具有至少約50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%同一性之V H序列以及與SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760中提供之說明性V L序列具有至少約50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%同一性之V L序列。在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759中提供之V H序列，其具有多達1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個胺基酸取代；以及SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760中提供之V L序列，其具有多達1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，這個段落中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體之方法來重新分離。 2.2.4. CDR
在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759之V H域中之一個至三個CDR。在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759之V H域中之兩個至三個CDR。在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759之V H域中之三個CDR。在一些態樣中，CDR為示範性CDR。在一些態樣中，CDR為Kabat CDR。在一些態樣中，CDR為Chothia CDR。在一些態樣中，CDR為AbM CDR。在一些態樣中，CDR為Contact CDR。在一些態樣中，CDR為IMGT CDR。
在一些實施例中，CDR為與SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759之CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性之CDR。在一些實施例中，CDR-H1為選自SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759之V H域之CDR-H1，其具有多達1、2、3、4或5個胺基酸取代。在一些實施例中，CDR-H2為選自SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759之V H域之CDR-H2，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代。在一些實施例中，CDR-H3為選自SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759之V H域之CDR-H3，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，這個段落中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體之方法來重新分離。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760之V L域之一個至三個CDR。在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760之V L域之兩個至三個CDR。在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760之V L域之三個CDR。在一些態樣中，CDR為示範性CDR。在一些態樣中，CDR為Kabat CDR。在一些態樣中，CDR為Chothia CDR。在一些態樣中，CDR為AbM CDR。在一些態樣中，CDR為Contact CDR。在一些態樣中，CDR為IMGT CDR。
在一些實施例中，CDR為與SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760之CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性之CDR。在一些實施例中，CDR-L1為選自SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760之V L域之CDR-L1，其具有多達1、2、3、4或5個胺基酸取代。在一些實施例中，CDR-L2為選自SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760之V L域之CDR-L2，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代。在一些實施例中，CDR-L3為選自SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760之V L域之CDR-L3，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，這個段落中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體之方法來重新分離。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759之V H域之一個至三個CDR以及選自SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760之V L域之一個至三個CDR。在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759之V H域之兩個至三個CDR以及選自SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760之V L域之兩個至三個CDR。在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759之V H域之三個CDR以及選自SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760之V L域之三個CDR。在一些態樣中，CDR為示範性CDR。在一些態樣中，CDR為Kabat CDR。在一些態樣中，CDR為Chothia CDR。在一些態樣中，CDR為AbM CDR。在一些態樣中，CDR為Contact CDR。在一些態樣中，CDR為IMGT CDR。
在一些實施例中，CDR為與SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759之CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性以及與SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760之CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性之CDR。在一些實施例中，CDR-H1為選自SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759之V H域之CDR-H1，其具有多達1、2、3、4或5個胺基酸取代；CDR-H2為選自SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759之V H域之CDR-H2，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代；CDR-H3為選自SEQ ID NO:37、75、113、151、189、227、265、303、341、379、417、455、493、531、569、607、645、683、721及759之V H域之CDR-H3，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代；CDR-L1為選自SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760之V L域之CDR-L1，其具有多達1、2、3、4、5或6個胺基酸取代；CDR-L2為選自SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760之V L域之CDR-L2，其具有多達1、2、3或4個胺基酸取代；且CDR-L3為選自SEQ ID NO:38、76、114、152、190、228、266、304、342、380、418、456、494、532、570、608、646、684、722及760之V L域之CDR-L3，其具有多達1、2、3、4或5個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，這個段落中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體之方法來重新分離。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:3、41、79、117、155、193、231、269、307、345、383、421、459、497、535、573、611、649、687及725之CDR-H3，如藉由示範性編號系統所確定的。在一些態樣中，CDR-H3與SEQ ID NO:3、41、79、117、155、193、231、269、307、345、383、421、459、497、535、573、611、649、687及725之CDR-H3具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性。在一些實施例中，CDR-H3為選自SEQ ID NO:3、41、79、117、155、193、231、269、307、345、383、421、459、497、535、573、611、649、687及725之CDR-H3，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，這個段落中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體之方法來重新分離。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:2、40、78、116、154、192、230、268、306、344、382、420、458、496、534、572、610、648、686及724之CDR-H2，如藉由示範性編號系統所確定的。在一些態樣中，CDR-H2與SEQ ID NO:2、40、78、116、154、192、230、268、306、344、382、420、458、496、534、572、610、648、686及724之CDR-H2具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性。在一些實施例中，CDR-H2為選自SEQ ID NO:2、40、78、116、154、192、230、268、306、344、382、420、458、496、534、572、610、648、686及724之CDR-H2，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，這個段落中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體之方法來重新分離。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:1、39、77、115、153、191、229、267、305、343、381、419、457、495、533、571、609、647、685及723之CDR-H1，如藉由示範性編號系統所確定的。在一些態樣中，CDR-H1與SEQ ID NO:1、39、77、115、153、191、229、267、305、343、381、419、457、495、533、571、609、647、685及723之CDR-H1具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性。在一些實施例中，CDR-H1為選自SEQ ID NO:1、39、77、115、153、191、229、267、305、343、381、419、457、495、533、571、609、647、685及723之CDR-H1，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，這個段落中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體之方法來重新分離。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:3、41、79、117、155、193、231、269、307、345、383、421、459、497、535、573、611、649、687及725之CDR-H3以及選自SEQ ID NO:2、40、78、116、154、192、230、268、306、344、382、420、458、496、534、572、610、648、686及724之CDR-H2。在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:3、41、79、117、155、193、231、269、307、345、383、421、459、497、535、573、611、649、687及725之CDR-H3；選自SEQ ID NO:2、40、78、116、154、192、230、268、306、344、382、420、458、496、534、572、610、648、686及724之CDR-H2；及選自SEQ ID NO:1、39、77、115、153、191、229、267、305、343、381、419、457、495、533、571、609、647、685及723之CDR-H1。在一些實施例中，CDR-H3與SEQ ID NO:3、41、79、117、155、193、231、269、307、345、383、421、459、497、535、573、611、649、687及725之CDR-H3具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性；CDR-H2與SEQ ID NO:2、40、78、116、154、192、230、268、306、344、382、420、458、496、534、572、610、648、686及724之CDR-H2具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性；且CDR-H1與SEQ ID NO:1、39、77、115、153、191、229、267、305、343、381、419、457、495、533、571、609、647、685及723之CDR-H1具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性。在一些實施例中，CDR-H3為選自SEQ ID NO:3、41、79、117、155、193、231、269、307、345、383、421、459、497、535、573、611、649、687及725之CDR-H3，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代；CDR-H2為選自SEQ ID NO:2、40、78、116、154、192、230、268、306、344、382、420、458、496、534、572、610、648、686及724之CDR-H2，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代；且CDR-H1為選自SEQ ID NO:1、39、77、115、153、191、229、267、305、343、381、419、457、495、533、571、609、647、685及723之CDR-H1，其具有多達1、2、3、4或5個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，這個段落中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體之方法來重新分離。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:6、44、82、120、158、196、234、272、310、348、386、424、462、500、538、576、614、652、690及728之CDR-L3，如藉由示範性編號系統所確定的。在一些態樣中，CDR-L3與SEQ ID NO:6、44、82、120、158、196、234、272、310、348、386、424、462、500、538、576、614、652、690及728之CDR-L3具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性。在一些實施例中，CDR-L3為選自SEQ ID NO:6、44、82、120、158、196、234、272、310、348、386、424、462、500、538、576、614、652、690及728之CDR-L3，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，這個段落中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體之方法來重新分離。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:5、43、81、119、157、195、233、271、309、347、385、423、461、499、537、575、613、651、689及727之CDR-L2，如藉由示範性編號系統所確定的。在一些態樣中，CDR-L2與SEQ ID NO:5、43、81、119、157、195、233、271、309、347、385、423、461、499、537、575、613、651、689及727之CDR-L2具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性。在一些實施例中，CDR-L2為選自SEQ ID NO:5、43、81、119、157、195、233、271、309、347、385、423、461、499、537、575、613、651、689及727之CDR-L2，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，這個段落中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體之方法來重新分離。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:4、42、80、118、156、194、232、270、308、346、384、422、460、498、536、574、612、650、688及726之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。在一些態樣中，CDR-L1與SEQ ID NO:4、42、80、118、156、194、232、270、308、346、384、422、460、498、536、574、612、650、688及726之CDR-L1具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性。在一些實施例中，CDR-L1為選自SEQ ID NO:4、42、80、118、156、194、232、270、308、346、384、422、460、498、536、574、612、650、688及726之CDR-L1，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，這個段落中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體之方法來重新分離。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:6、44、82、120、158、196、234、272、310、348、386、424、462、500、538、576、614、652、690及728之CDR-L3以及選自SEQ ID NO:5、43、81、119、157、195、233、271、309、347、385、423、461、499、537、575、613、651、689及727之CDR-L2。在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:6、44、82、120、158、196、234、272、310、348、386、424、462、500、538、576、614、652、690及728之CDR-L3；選自SEQ ID NO:5、43、81、119、157、195、233、271、309、347、385、423、461、499、537、575、613、651、689及727之CDR-L2；及選自SEQ ID NO:4、42、80、118、156、194、232、270、308、346、384、422、460、498、536、574、612、650、688及726之CDR-L1。在一些實施例中，CDR-L3與SEQ ID NO:6、44、82、120、158、196、234、272、310、348、386、424、462、500、538、576、614、652、690及728之CDR-L3具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性；CDR-L2與SEQ ID NO:5、43、81、119、157、195、233、271、309、347、385、423、461、499、537、575、613、651、689及727之CDR-L2具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性；且CDR-L1與SEQ ID NO:4、42、80、118、156、194、232、270、308、346、384、422、460、498、536、574、612、650、688及726之CDR-L1具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性。在一些實施例中，CDR-L3為選自SEQ ID NO:6、44、82、120、158、196、234、272、310、348、386、424、462、500、538、576、614、652、690及728之CDR-L3，其具有多達1、2、3、4或5個胺基酸取代；CDR-L2為選自SEQ ID NO:5、43、81、119、157、195、233、271、309、347、385、423、461、499、537、575、613、651、689及727之CDR-L2，其具有多達1、2、3或4個胺基酸取代；且CDR-L1為選自SEQ ID NO:4、42、80、118、156、194、232、270、308、346、384、422、460、498、536、574、612、650、688及726之CDR-L1，其具有多達1、2、3、4、5或6個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，這個段落中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體之方法來重新分離。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含選自SEQ ID NO:3、41、79、117、155、193、231、269、307、345、383、421、459、497、535、573、611、649、687及725之CDR-H3；選自SEQ ID NO:2、40、78、116、154、192、230、268、306、344、382、420、458、496、534、572、610、648、686及724之CDR-H2；選自SEQ ID NO:1、39、77、115、153、191、229、267、305、343、381、419、457、495、533、571、609、647、685及723之CDR-H1；選自SEQ ID NO:6、44、82、120、158、196、234、272、310、348、386、424、462、500、538、576、614、652、690及728之CDR-L3；選自SEQ ID NO:5、43、81、119、157、195、233、271、309、347、385、423、461、499、537、575、613、651、689及727之CDR-L2；選自SEQ ID NO:4、42、80、118、156、194、232、270、308、346、384、422、460、498、536、574、612、650、688及726之CDR-L1。在一些實施例中，CDR-H3與SEQ ID NO:3、41、79、117、155、193、231、269、307、345、383、421、459、497、535、573、611、649、687及725之CDR-H3具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性；CDR-H2與SEQ ID NO:2、40、78、116、154、192、230、268、306、344、382、420、458、496、534、572、610、648、686及724之CDR-H2具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性；CDR-H1與SEQ ID NO:1、39、77、115、153、191、229、267、305、343、381、419、457、495、533、571、609、647、685及723之CDR-H1具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性；CDR-L3與SEQ ID NO:6、44、82、120、158、196、234、272、310、348、386、424、462、500、538、576、614、652、690及728之CDR-L3具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性；CDR-L2與SEQ ID NO:5、43、81、119、157、195、233、271、309、347、385、423、461、499、537、575、613、651、689及727之CDR-L2具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性；且CDR-L1與SEQ ID NO:4、42、80、118、156、194、232、270、308、346、384、422、460、498、536、574、612、650、688及726之CDR-L1具有至少約50%、75%、80%、85%、90%或95%同一性。在一些實施例中，CDR-H3為選自SEQ ID NO:3、41、79、117、155、193、231、269、307、345、383、421、459、497、535、573、611、649、687及725之CDR-H3，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代；CDR-H2為選自SEQ ID NO:2、40、78、116、154、192、230、268、306、344、382、420、458、496、534、572、610、648、686及724之CDR-H2，其具有多達1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代；CDR-H1為選自SEQ ID NO:1、39、77、115、153、191、229、267、305、343、381、419、457、495、533、571、609、647、685及723之CDR-H1，其具有多達1、2、3、4或5個胺基酸取代；CDR-L3為選自SEQ ID NO:6、44、82、120、158、196、234、272、310、348、386、424、462、500、538、576、614、652、690及728之CDR-L3，其具有多達1、2、3、4或5個胺基酸取代；CDR-L2為選自SEQ ID NO:5、43、81、119、157、195、233、271、309、347、385、423、461、499、537、575、613、651、689及727之CDR-L2，其具有多達1、2、3或4個胺基酸取代；且CDR-L1為選自SEQ ID NO:4、42、80、118、156、194、232、270、308、346、384、422、460、498、536、574、612、650、688及726之CDR-L1，其具有多達1、2、3、4、5或6個胺基酸取代。在一些態樣中，胺基酸取代為保守性胺基酸取代。在一些實施例中，這個段落中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。在一些實施例中，此類變異體例如藉由親和力成熟、定點誘變、隨機誘變或此項技術中已知或本文所述之任何其他方法來由本文提供之序列獲得。在一些實施例中，此類變異體不由本文提供之序列獲得，且可例如根據本文提供之用於獲得抗體之方法來重新分離。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:1之CDR-H1、SEQ ID NO:2之CDR-H2、SEQ ID NO:3之CDR-H3、SEQ ID NO:4之CDR-L1、SEQ ID NO:5之CDR-L2及SEQ ID NO:6之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:39之CDR-H1、SEQ ID NO:40之CDR-H2、SEQ ID NO:41之CDR-H3、SEQ ID NO:42之CDR-L1、SEQ ID NO:43之CDR-L2及SEQ ID NO:44之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:77之CDR-H1、SEQ ID NO:78之CDR-H2、SEQ ID NO:79之CDR-H3、SEQ ID NO:80之CDR-L1、SEQ ID NO:81之CDR-L2及SEQ ID NO:82之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:115之CDR-H1、SEQ ID NO:116之CDR-H2、SEQ ID NO:117之CDR-H3、SEQ ID NO:118之CDR-L1、SEQ ID NO:119之CDR-L2及SEQ ID NO:120之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:153之CDR-H1、SEQ ID NO:154之CDR-H2、SEQ ID NO:155之CDR-H3、SEQ ID NO:156之CDR-L1、SEQ ID NO:157之CDR-L2及SEQ ID NO:158之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:884之CDR-H1、SEQ ID NO:885之CDR-H2、SEQ ID NO:886之CDR-H3、SEQ ID NO:887之CDR-L1、SEQ ID NO:888之CDR-L2及SEQ ID NO:889之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:191之CDR-H1、SEQ ID NO:192之CDR-H2、SEQ ID NO:193之CDR-H3、SEQ ID NO:194之CDR-L1、SEQ ID NO:195之CDR-L2及SEQ ID NO:196之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:229之CDR-H1、SEQ ID NO:230之CDR-H2、SEQ ID NO:231之CDR-H3、SEQ ID NO:232之CDR-L1、SEQ ID NO:233之CDR-L2及SEQ ID NO:234之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:267之CDR-H1、SEQ ID NO:268之CDR-H2、SEQ ID NO:269之CDR-H3、SEQ ID NO:270之CDR-L1、SEQ ID NO:271之CDR-L2及SEQ ID NO:272之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:305之CDR-H1、SEQ ID NO:306之CDR-H2、SEQ ID NO:307之CDR-H3、SEQ ID NO:308之CDR-L1、SEQ ID NO:309之CDR-L2及SEQ ID NO:310之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:343之CDR-H1、SEQ ID NO:344之CDR-H2、SEQ ID NO:345之CDR-H3、SEQ ID NO:346之CDR-L1、SEQ ID NO:347之CDR-L2及SEQ ID NO:348之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:381之CDR-H1、SEQ ID NO:382之CDR-H2、SEQ ID NO:383之CDR-H3、SEQ ID NO:384之CDR-L1、SEQ ID NO:385之CDR-L2及SEQ ID NO:386之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:419之CDR-H1、SEQ ID NO:420之CDR-H2、SEQ ID NO:421之CDR-H3、SEQ ID NO:422之CDR-L1、SEQ ID NO:423之CDR-L2及SEQ ID NO:424之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:457之CDR-H1、SEQ ID NO:458之CDR-H2、SEQ ID NO:459之CDR-H3、SEQ ID NO:460之CDR-L1、SEQ ID NO:461之CDR-L2及SEQ ID NO:462之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:495之CDR-H1、SEQ ID NO:496之CDR-H2、SEQ ID NO:497之CDR-H3、SEQ ID NO:498之CDR-L1、SEQ ID NO:499之CDR-L2及SEQ ID NO:500之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:533之CDR-H1、SEQ ID NO:534之CDR-H2、SEQ ID NO:535之CDR-H3、SEQ ID NO:536之CDR-L1、SEQ ID NO:537之CDR-L2及SEQ ID NO:538之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:571之CDR-H1、SEQ ID NO:572之CDR-H2、SEQ ID NO:573之CDR-H3、SEQ ID NO:574之CDR-L1、SEQ ID NO:575之CDR-L2及SEQ ID NO:576之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:609之CDR-H1、SEQ ID NO:610之CDR-H2、SEQ ID NO:611之CDR-H3、SEQ ID NO:612之CDR-L1、SEQ ID NO:613之CDR-L2及SEQ ID NO:614之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:647之CDR-H1、SEQ ID NO:648之CDR-H2、SEQ ID NO:649之CDR-H3、SEQ ID NO:650之CDR-L1、SEQ ID NO:651之CDR-L2及SEQ ID NO:652之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:685之CDR-H1、SEQ ID NO:686之CDR-H2、SEQ ID NO:687之CDR-H3、SEQ ID NO:688之CDR-L1、SEQ ID NO:689之CDR-L2及SEQ ID NO:690之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含SEQ ID NO:723之CDR-H1、SEQ ID NO:724之CDR-H2、SEQ ID NO:725之CDR-H3、SEQ ID NO:726之CDR-L1、SEQ ID NO:727之CDR-L2及SEQ ID NO:728之CDR-L1，如藉由示範性編號系統所確定的。 2.2.5.    共有序列
在一些實施例中，本文提供了第一抗體家族，其中此種家族之抗體包含以下六個CDR序列：(a)具有序列G-F-T-F-S-X 1-Y-A-M-X 2(SEQ ID NO:773)之CDR-H1，其中X 1為D或S且X 2為A或G；(b)具有序列X 3-I-S-G-S-G-G-L-T-Y-Y-A-D-S-V-K-G (SEQ ID NO:774)之CDR-H2，其中X 3為A或T；(c)具有序列APYGYYMDV (SEQ ID NO:775)之CDR-H3；(d)具有序列RASQSISSWLA (SEQ ID NO:776)之CDR-L1；(e)具有序列KASSLES (SEQ ID NO:777)之CDR-L2；及(f)具有序列QQYKSYIT (SEQ ID NO:778)之CDR-L3。在一些實施例中，此種家族之抗體包含SEQ ID NO:761之V H序列及SEQ ID NO:762之V L序列。在一些實施例中，本文提供了此種第一家族內之抗體。
在一些實施例中，本文提供了第二抗體家族，其中此種家族之抗體包含以下六個CDR序列：(a)具有序列G-Y-T-F-X 1-X 2-Y-G-I-S (SEQ ID NO:779)之CDR-H1，其中X 1為D或R且X 2為S或V；(b)具有序列W-X 3-A-P-Y-X 4-G-N-T-N-Y-A-Q-K-L-Q-G (SEQ ID NO:780)之CDR-H2，其中X 3為I或V且X 4為S或N；(c)具有序列D-A-G-T-Y-S-P-X 5-G-Y-G-M-D-V (SEQ ID NO:781)之CDR-H3，其中X 5為F或Y；(d)具有序列X 6-A-S-X 7-S-I-X 8-X 9-W-L-A (SEQ ID NO:782)之CDR-L1，其中X 6為R或Q，X 7為Q、E或H，X 8為S、D或N，且X 9為S或N；(e)具有序列X 10-A-X 11-X 12-L-E-X 13(SEQ ID NO:783)之CDR-L2，其中X 10為K或S，X 11為S或Y，X 12為S、Y或N，且X 13為S或Y；及(f)具有序列Q-X 14-F-Q-X 15-L-P-P-F-T (SEQ ID NO:784)之CDR-L3，其中X 14為Q、L或R且X 15為S或K。在一些實施例中，此種家族之抗體包含SEQ ID NO:763之V H序列及SEQ ID NO:764之V L序列。在一些實施例中，本文提供了此種第二家族內之抗體。
在一些實施例中，本文提供了第三抗體家族，其中此種家族之抗體包含以下六個CDR序列：(a)具有序列G-F-T-F-X 1-S-X 2-G-M-H (SEQ ID NO:785)之CDR-H1，其中X 1為H或R且X 2為R或Y；(b)具有序列VITYDGINKYYADSVEG (SEQ ID NO:786)之CDR-H2；(c)具有序列DGVYYGVYDY (SEQ ID NO:787)之CDR-H3；(d)具有序列KSSQSVLFSSNNKNYLA (SEQ ID NO:788)之CDR-L1；(e)具有序列WASTRES (SEQ ID NO:789)之CDR-L2；及(f)具有序列QQFHSYPLT (SEQ ID NO:790)之CDR-L3。在一些實施例中，此種家族之抗體包含SEQ ID NO:765之V H序列及SEQ ID NO:766之V L序列。在一些實施例中，本文提供了此種第三家族內之抗體。
在一些實施例中，本文提供了第四抗體家族，其中此種家族之抗體包含以下六個CDR序列：(a)具有序列GGTFSSNAIG (SEQ ID NO:791)之CDR-H1；(b)具有序列SIIPIIGFANYAQKFQG (SEQ ID NO:792)之CDR-H2；(c)具有序列DSGYYYGASSFGMDV (SEQ ID NO:793)之CDR-H3；(d)具有序列RASQSVSSNLA (SEQ ID NO:794)之CDR-L1；(e)具有序列GASTRAT (SEQ ID NO:795)之CDR-L2；及(f)具有序列EQYNNLPLT (SEQ ID NO:796)之CDR-L3。在一些實施例中，此種家族之抗體包含SEQ ID NO:767之V H序列及SEQ ID NO:768之V L序列。在一些實施例中，本文提供了此種第四家族內之抗體。
在一些實施例中，本文提供了第五抗體家族，其中此種家族之抗體包含以下六個CDR序列：(a)具有序列G-G-S-X 1-S-S-G-X 2-Y-W-S (SEQ ID NO:797)之CDR-H1，其中X 1為I或L且X 2為Q或Y；(b)具有序列E-I-X 3-X 4-S-G-S-T-R-Y-N-P-S-L-K-S (SEQ ID NO:798)之CDR-H2，其中X 3為Y或G且X 4為Y或A；(c)具有序列D-X 5-P-Y-Y-Y-X 6-G-G-Y-Y-Y-Y-M-D-V (SEQ ID NO:799)之CDR-H3，其中X 5為T或A且X 6為E、G或D；(d)具有序列R-A-S-X 7-S-V-X 8-S-S-X 9-L-A (SEQ ID NO:800)之CDR-L1，其中X 7為Q、E或D、X 8為S或D且X 9為Y或F；(e)具有序列G-A-X 10-X 11-R-X 12-X 13(SEQ ID NO:801)之CDR-L2，其中X 10為S、D、F或Y，X 11為S或T，X 12為A或Q，且X 13為T或N；及(f)具有序列Q-Q-X 14-G-V-V-P-Y-T (SEQ ID NO:802)之CDR-L3，其中X 14為V、A或D。在一些實施例中，此種家族之抗體包含SEQ ID NO:769之V H序列及SEQ ID NO:770之V L序列。在一些實施例中，本文提供了此種第五家族內之抗體。
在一些實施例中，本文提供了第六抗體家族，其中此種家族之抗體包含以下六個CDR序列：(a)具有序列GYTFANYYMH (SEQ ID NO:803)之CDR-H1；(b)具有序列IINPSGGITVYAQKFQG (SEQ ID NO:804)之CDR-H2；(c)具有序列GGSKVAALAFDI (SEQ ID NO:805)之CDR-H3；(d)具有序列QASQDISNSLN (SEQ ID NO:806)之CDR-L1；(e)具有序列DASNLET (SEQ ID NO:807)之CDR-L2；及(f)具有序列QQYNFHPLT (SEQ ID NO:808)之CDR-L3。在一些實施例中，此種家族之抗體包含SEQ ID NO:771之V H序列及SEQ ID NO:772之V L序列。在一些實施例中，本文提供了此種第六家族內之抗體。
在一些實施例中，本文提供了第七抗體家族，其中此種家族之抗體包含以下六個CDR序列：(a)具有序列G-Y-T-F-D-X 1-Y-G-I-S (SEQ ID NO:872)之CDR-H1，其中X 1為V或A；(b)具有序列W-I-A-P-Y-X 2-G-N-T-N-Y-A-Q-K-L-Q-G (SEQ ID NO:873)之CDR-H2，其中X 2為N或S；(c)具有序列D-A-G-T-Y-S-P-F-G-Y-G-M-D-V (SEQ ID NO:874)之CDR-H3；(d)具有序列X 3-A-S-X 4-S-I-X 5-X 6-W-L-A (SEQ ID NO:875)之CDR-L1，其中X 3為R或Q，X 4為Q或E，X 5為S或N且X 6為S或N；(e)具有序列K-A-X 7-X 8-L-E-X 9(SEQ ID NO:876)之CDR-L2，其中X 7為S或Y，X 8為S或N且X 9為S或Y；及(f)具有序列Q-X 10-F-Q-X 11-L-P-P-F-T (SEQ ID NO:877)之CDR-L3，其中X 10為Q或L且X 11為S或K。在一些實施例中，此種家族之抗體包含SEQ ID NO:868之V H序列及SEQ ID NO:869之V L序列。在一些實施例中，本文提供了此種第七家族內之抗體。
在一些實施例中，本文提供了第八抗體家族，其中此種家族之抗體包含以下六個CDR序列：(a)具有序列G-Y-T-F-R-S-Y-G-I-S (SEQ ID NO:878)之CDR-H1；(b)具有序列W-V-A-P-Y-X 1-G-N-T-N-Y-A-Q-K-L-Q-G (SEQ ID NO:879)之CDR-H2，其中X 1為S或N；(c)具有序列D-A-G-T-Y-S-P-Y-G-Y-G-M-D-V (SEQ ID NO:880)之CDR-H3；(d)具有序列X 2-A-S-X 3-S-I-X 4-S-W-L-A (SEQ ID NO:881)之CDR-L1，其中X 2為R或Q，X 3為Q或H，X 4為S或D；(e)具有序列X 5-A-S-X 6-L-E-S (SEQ ID NO:882)之CDR-L2，其中X 5為K或S，X 6為S或Y；及(f)具有序列Q-X 7-F-Q-S-L-P-P-F-T (SEQ ID NO:883)之CDR-L3，其中X 7為Q、L或R。在一些實施例中，此種家族之抗體包含SEQ ID NO:870之VH序列及SEQ ID NO:871之VL序列。在一些實施例中，本文提供了此種第八家族內之抗體。 2.2.6.    抗體變異體之功能特性
如上所述及在本揭示案別處所述，本文提供了基於與本文提供之說明性抗體序列之同一性百分比或與本文提供之說明性抗體序列相比胺基酸殘基之取代來定義之抗體變異體。
在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體對hTF具有特異性。在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體對cTF具有特異性。在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體對mTF具有特異性。在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體對hTF及cTF具有特異性。在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體對hTF及mTF具有特異性。在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體對cTF及mTF具有特異性。在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體對hTF、cTF及mTF具有特異性。
在一些實施例中，來源於本文提供之說明性抗體序列之抗體之變異體保留對hTF之親和力，如藉由K D所量測的，該親和力在此種說明性抗體之親和力之約1.5倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍或約10倍內。在一些實施例中，來源於本文提供之說明性抗體序列之抗體的變異體保留對cTF之親和力，如藉由K D所量測的，該親和力在此種說明性抗體之親和力之約1.5倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍或約10倍內。在一些實施例中，來源於本文提供之說明性抗體序列之抗體的變異體保留對mTF之親和力，如藉由K D所量測的，該親和力在此種說明性抗體之親和力之約1.5倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍或約10倍內。在一些實施例中，來源於本文提供之說明性抗體序列之抗體的變異體保留對hTF及cTF之親和力，如藉由K D所量測的，該親和力在此種說明性抗體之親和力之約1.5倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍或約10倍內。在一些實施例中，來源於本文提供之說明性抗體序列之抗體的變異體保留對hTF及mTF之親和力，如藉由K D所量測的，該親和力在此種說明性抗體之親和力之約1.5倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍或約10倍內。在一些實施例中，來源於本文提供之說明性抗體序列之抗體的變異體保留對cTF及mTF之親和力，如藉由K D所量測的，該親和力在此種說明性抗體之親和力之約1.5倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍或約10倍內。在一些實施例中，來源於本文提供之說明性抗體序列之抗體的變異體保留對hTF、cTF及mTF中之所有三個之親和力，如藉由K D所量測的，該親和力在此種說明性抗體之親和力之約1.5倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍或約10倍內。
在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體保留抑制TF傳訊之能力，如藉由本文所述之一或多種檢定或生物學效應所量測的。在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體保留血液凝固過程中TF之正常功能。
在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體與選自1F、1G、25A、25A3、25A5、25A5-T、25G、25G1、25G9、29D、29E、39A、43B、43B1、43B7、43D、43D7、43D8、43E、43Ea及54E (各自如本揭示案之 表 13中提供的)之抗體競爭結合到TF。在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體與選自25A、25A3、25A5、25A5-T、25G、25G1及25G9之抗體競爭結合到TF。在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體與選自43B、43B1、43B7、43D、43D7、43D8、43E及43Ea之抗體競爭結合到TF。在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體與選自25A、25A3、25A5、25A5-T、25G、25G1、25G9、43B、43B1、43B7、43D、43D7、43D8、43E及43Ea之抗體競爭結合到TF。在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體與選自1F、1G、29D、29E、39A或54E之抗體競爭結合到TF。
在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成。在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成。
在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF。在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa之能力。
在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF。在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體不與人類FVIIa競爭結合到人類TF。
在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體抑制FVIIa依賴性TF傳訊。
在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體結合小鼠TF (SEQ ID NO:817)。在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體以比抗體對hTF之親和力低之親和力(如由較高K D所指示)結合小鼠TF。在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體不結合mTF。
在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體結合豬TF (SEQ ID NO:824)。在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體以比抗體對hTF之親和力低之親和力(如由較高K D所指示)結合豬TF。在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體不結合pTF。
在一些實施例中，本文提供之抗體之變異體與此種抗體結合相同之TF表位。 2.2.7.    抗體之其他功能特性
在一些實施例中，本文提供之抗體具有以下(a)至(dd)中列出之特徵中之一或多者：(a)在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；(b)不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；(c)與同型對照相比，不降低凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值(峰值IIa)；(d)與同型對照相比，不增加自檢定開始到凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值之時間(tt峰值)；(e)與同型對照相比，不降低由凝血酶生成曲線下面積確定之內源性凝血酶潛能(ETP)；(f)允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；(g)與同型對照相比，保持凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值(峰值IIa)；(h)與同型對照相比，保持自檢定開始到凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值之時間(tt峰值)；(i)與同型對照相比，保留由凝血酶生成曲線下面積確定之內源性凝血酶潛能(ETP)；(j)在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；(k)不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa之能力；(l)不與人類FVIIa競爭結合到人類TF；(m)抑制FVIIa依賴性TF傳訊；(n)結合到食蟹猴TF；(o)結合到小鼠TF；(p)結合到兔TF；(q)結合到豬TF；(r)減少豬脈絡膜新生血管(CNV)模型中之病變大小；(s)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基149處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(t)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基68處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(u)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基171及197處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(v)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基1至77經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基1至76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(w)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基39至77經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基38至76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(x)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基94至107經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基99至112替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(y)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基146至158經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基151至163替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(z)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基159至219經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基164至224替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(aa)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基159至189經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基164至194替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(bb)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基159至174經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基164至179替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(cc)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基167至174經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基172至179替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；及(dd)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與大鼠TF細胞外域(其中SEQ ID NO:838所示序列之胺基酸殘基141至194經SEQ ID NO:810所示序列之人類TF細胞外域胺基酸殘基136至189替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之兩個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之三個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之四個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之五個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之六個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之七個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之八個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之九個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十一個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十二個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十三個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十四個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十五個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十六個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十七個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十八個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十九個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十一個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十二個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十三個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十四個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十五個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十六個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十七個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十八個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十九個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之所有三十個特徵。
在一些實施例中，本文提供之抗體具有以下(a)至(dd)中列出之特徵中之一或多者：(a)在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；(b)不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；(c)與同型對照相比，不降低凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值(峰值IIa)；(d)與同型對照相比，不增加自檢定開始到凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值之時間(tt峰值)；(e)與同型對照相比，不降低由凝血酶生成曲線下面積確定之內源性凝血酶潛能(ETP)；(f)允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；(g)與同型對照相比，保持凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值(峰值IIa)；(h)與同型對照相比，保持自檢定開始到凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值之時間(tt峰值)；(i)與同型對照相比，保留由凝血酶生成曲線下面積確定之內源性凝血酶潛能(ETP)；(j)在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；(k)不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa之能力；(l)不與人類FVIIa競爭結合到人類TF；(m)抑制FVIIa依賴性TF傳訊；(n)結合到食蟹猴TF；(o)結合到小鼠TF；(p)結合到兔TF；(q)結合到豬TF；(r)減少豬脈絡膜新生血管(CNV)模型中之病變大小；(s)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之突變K149N之變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(t)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之突變K68N之變異體TF細胞外域之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(u)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之突變N171H及T197K之變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(v)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基1至77經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基1至76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(w)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基39至77經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基38至76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(x)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基94至107經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基99至112替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(y)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基146至158經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基151至163替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(z)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基159至219經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基164至224替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(aa)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基159至189經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基164至194替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(bb)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基159至174經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基164至179替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(cc)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基167至174經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基172至179替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；及(dd)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與大鼠TF細胞外域(其中SEQ ID NO:838所示序列之胺基酸殘基141至194經SEQ ID NO:810所示序列之人類TF細胞外域胺基酸殘基136至189替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之兩個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之三個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之四個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之五個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之六個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之七個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之八個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之九個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十一個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十二個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十三個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十四個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十五個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十六個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十七個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十八個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之十九個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十一個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十二個或更多個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十三個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十四個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十五個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十六個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十七個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十八個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之二十九個特徵。在一些實施例中，本文提供之抗體具有前述(a)至(dd)中列出之所有三十個特徵。
在一些實施例中，本文提供之抗體表現出包含以下(a)至(dd)中列出之特徵中之兩者或更多者的特徵組合：(a)在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；(b)不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；(c)與同型對照相比，不降低凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值(峰值IIa)；(d)與同型對照相比，不增加自檢定開始到凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值之時間(tt峰值)；(e)與同型對照相比，不降低由凝血酶生成曲線下面積確定之內源性凝血酶潛能(ETP)；(f)允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；(g)與同型對照相比，保持凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值(峰值IIa)；(h)與同型對照相比，保持自檢定開始到凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值之時間(tt峰值)；(i)與同型對照相比，保留由凝血酶生成曲線下面積確定之內源性凝血酶潛能(ETP)；(j)在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；(k)不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa之能力；(l)不與人類FVIIa競爭結合到人類TF；(m)抑制FVIIa依賴性TF傳訊；(n)結合到食蟹猴TF；(o)結合到小鼠TF；(p)結合到兔TF；(q)結合到豬TF；(r)減少豬脈絡膜新生血管(CNV)模型中之病變大小；(s)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基149處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(t)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基68處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(u)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基171及197處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(v)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基1至77經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基1至76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(w)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基39至77經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基38至76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(x)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基94至107經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基99至112替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(y)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基146至158經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基151至163替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(z)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基159至219經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基164至224替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(aa)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基159至189經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基164至194替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(bb)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基159至174經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基164至179替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(cc)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基167至174經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基172至179替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；及(dd)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與大鼠TF細胞外域(其中SEQ ID NO:838所示序列之胺基酸殘基141至194經SEQ ID NO:810所示序列之人類TF細胞外域胺基酸殘基136至189替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，本文提供之抗體表現出包含以下(a)至(dd)中列出之特徵中之兩者或更多者之特徵組合：(a)在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；(b)不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；(c)與同型對照相比，不降低凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值(峰值IIa)；(d)與同型對照相比，不增加自檢定開始到凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值之時間(tt峰值)；(e)與同型對照相比，不降低由凝血酶生成曲線下面積確定之內源性凝血酶潛能(ETP)；(f)允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；(g)與同型對照相比，保持凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值(峰值IIa)；(h)與同型對照相比，保持自檢定開始到凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值之時間(tt峰值)；(i)與同型對照相比，保留由凝血酶生成曲線下面積確定之內源性凝血酶潛能(ETP)；(j)在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；(k)不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa之能力；(l)不與人類FVIIa競爭結合到人類TF；(m)抑制FVIIa依賴性TF傳訊；(n)結合到食蟹猴TF；(o)結合到小鼠TF；(p)結合到兔TF；(q)結合到豬TF；(r)減少豬脈絡膜新生血管(CNV)模型中之病變大小；(s)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之突變K149N之變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(t)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之突變K68N之變異體TF細胞外域之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(u)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之突變N171H及T197K之變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(v)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基1至77經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基1至76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(w)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基39至77經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基38至76替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(x)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基94至107經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基99至112替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(y)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基146至158經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基151至163替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(z)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基159至219經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基164至224替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(aa)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基159至189經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基164至194替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(bb)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基159至174經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基164至179替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；(cc)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與人類TF細胞外域(其中SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基167至174經SEQ ID NO:838所示序列之大鼠TF細胞外域胺基酸殘基172至179替換)之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；及(dd)如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與大鼠TF細胞外域(其中SEQ ID NO:838所示序列之胺基酸殘基141至194經SEQ ID NO:810所示序列之人類TF細胞外域胺基酸殘基136至189替換)之間的結合大於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，本文提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基171及197處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，本文提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之突變N171H及T197K之變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，本文提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基171及197處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，本文提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之突變N171H及T197K之變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，本文提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基149處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基171及197處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，本文提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之突變K149N之變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之突變N171H及T197K之變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，本文提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基149處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基171及197處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，本文提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之突變K149N之變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之突變N171H及T197K之變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，本文提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；結合到食蟹猴TF；如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基149處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基171及197處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，本文提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；結合到食蟹猴TF；如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之突變K149N之變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之突變N171H及T197K之變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，本文提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基149處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之胺基酸殘基171及197處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。
在一些實施例中，本文提供之抗體表現出以下中列出之特徵之組合：在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；結合到食蟹猴TF；如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之突變K149N之變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%；且如藉由在活細胞染色檢定中抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，抗體與包含SEQ ID NO:810所示序列之突變N171H及T197K之變異體TF細胞外域之間的結合小於抗體與SEQ ID NO:810所示序列之TF細胞外域之間的結合之50%。 2.3. TF抗體之親和力及其他特性 2.3.1. TF抗體之親和力
在一些實施例中，如由K D所指示，本文提供之抗體對TF之親和力小於約10 -5M、小於約10 -6M、小於約10 -7M、小於約10 -8M、小於約10 -9M、小於約10 -10M、小於約10 -11M或小於約10 -12M。在一些實施例中，抗體之親和力在約10 -7M及10 -12M之間。在一些實施例中，抗體之親和力在約10 -7M及10 -11M之間。在一些實施例中，抗體之親和力在約10 -7M及10 -10M之間。在一些實施例中，抗體之親和力在約10 -7M及10 -9M之間。在一些實施例中，抗體之親和力在約10 -7M及10 -8M之間。在一些實施例中，抗體之親和力在約10 -8M及10 -12M之間。在一些實施例中，抗體之親和力在約10 -8M及10 -11M之間。在一些實施例中，抗體之親和力在約10 -9M及10 -11M之間。在一些實施例中，抗體之親和力在約10 -10M及10 -11M之間。
在一些實施例中，本文提供之抗體對cTF之K D值不大於抗體對hTF之K D值之15倍。在一些實施例中，本文提供之抗體對cTF之K D值不大於抗體對hTF之K D值之10倍。在一些實施例中，本文提供之抗體對cTF之K D值不大於抗體對hTF之K D值之8倍。在一些實施例中，本文提供之抗體對cTF之K D值不大於抗體對hTF之K D值之5倍。在一些實施例中，本文提供之抗體對cTF之K D值不大於抗體對hTF之K D值之3倍。在一些實施例中，本文提供之抗體對cTF之K D值不大於抗體對hTF之K D值之2倍。
在一些實施例中，本文提供之抗體對mTF之K D值不大於抗體對hTF之K D值之20倍。在一些實施例中，本文提供之抗體對mTF之K D值不大於抗體對hTF之K D值之15倍。在一些實施例中，本文提供之抗體對mTF之K D值不大於抗體對hTF之K D值之10倍。在一些實施例中，本文提供之抗體對mTF之K D值不大於抗體對hTF之K D值之5倍。在一些實施例中，本文提供之抗體對mTF之K D值不大於抗體對hTF之K D值之2倍。
在一些實施例中，如 表 5中所闡述的，如由Biacore量測之K D所指示，本文提供之抗體對hTF之親和力選自約0.31 nM、約6.20 nM、約0.36 nM、約0.08 nM、約23.0 nM、約0.94 nM、約13.3 nM、約0.47 nM、約0.09 nM、約1.75 nM、約0.07 nM、約0.14 nM、約2.09 nM、約0.06 nM、約0.15 nM、約1.46 nM、約1.60 nM及約0.42 nM。在一些實施例中，由K D所指示之此種親和力在約23.0 nM至約0.06 nM之範圍內。在一些實施例中，此種K D為約23.0 nM或更小。
在一些實施例中，如 表 5中所闡述的，如由ForteBio量測之K D所指示，本文提供之抗體對hTF之親和力選自約1.28 nM、約2.20 nM、約8.45 nM、約1.67 nM、約0.64 nM、約21.9 nM、約3.97 nM、約35.8 nM、約3.30 nM、約2.32 nM、約0.83 nM、約2.40 nM、約0.96 nM、約0.86 nM、約3.84 nM、約1.02 nM、約1.61 nM、約2.52 nM、約2.28 nM及約1.59 nM。在一些實施例中，由K D所指示之此種親和力在約35.8 nM至約0.64 nM之範圍內。在一些實施例中，此種K D為約35.8 nM或更小。
在一些實施例中，如 表 5中所闡述的，如由Biacore量測之K D所指示，本文提供之抗體對cTF之親和力選自約0.26 nM、約5.42 nM、約0.21 nM、約0.04 nM、約18.0 nM、約0.78 nM、約16.4 nM、約5.06 nM、約0.08 nM、約5.64 nM、約0.12 nM、約0.24 nM、約5.66 nM、約0.39 nM、約5.69 nM、約6.42 nM及約1.83 nM。在一些實施例中，由K D所指示之此種親和力在約18.0 nM至約0.04 nM之範圍內。在一些實施例中，此種K D為約18.0 nM或更小。
在一些實施例中，如 表 5中所闡述的，如由ForteBio量測之K D所指示，本文提供之抗體對cTF之親和力選自約1.43 nM、約2.70 nM、約7.65 nM、約1.36 nM、約0.76 nM、約17.5 nM、約4.99 nM、約42.9 nM、約12.0 nM、約15.0 nM、約0.57 nM、約3.40 nM、約1.05 nM、約0.94 nM、約4.12 nM、約1.11 nM、約1.96 nM、約4.07 nM、約2.71 nM及約4.16 nM。在一些實施例中，由K D所指示之此種親和力在約42.9 nM至約0.57 nM之範圍內。在一些實施例中，此種K D為約42.9 nM或更小。
在一些實施例中，如 表 5中所闡述的，如由Biacore量測之K D所指示，本文提供之抗體對mTF之親和力選自約5.4 nM、約2.9 nM、約21 nM及約2.4 nM。在一些實施例中，由K D所指示之此種親和力在約21 nM至約2.4 nM之範圍內。在一些實施例中，此種K D為約21 nM或更小。
在一些實施例中，如 表 5中所闡述的，如由ForteBio量測之K D所指示，本文提供之抗體對mTF之親和力選自約263 nM、約131 nM、約188 nM、約114 nM、約34.2 nM、約9.16 nM、約161 nM、約72.1 nM、約360 nM、約281 nM、約41.4 nM、約6.12 nM、約121 nM及約140 nM。在一些實施例中，由K D所指示之此種親和力在約360 nM至約6.12 nM之範圍內。在一些實施例中，此種K D為約360 nM或更小。
在一些實施例中，如由用人類TF陽性HCT-116細胞量測之EC 50(如國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號所陳述，該等申請案以引用方式整體併入本文)所指示，本文提供之抗體對hTF之親和力選自約50 pM、約58 pM、約169 pM、約77 pM、約88 pM、約134 pM、約85 pM、約237 pM、約152 pM、約39 pM、約559 pM、約280 pM、約255 pM、約147 pM、約94 pM、約117 pM、約687 pM、約532 pM及約239 pM。在一些實施例中，此種親和力在約687 pM至約39 pM之範圍內。在一些實施例中，此種EC 50為約687 pM或更小。
在一些實施例中，如由用小鼠TF陽性CHO細胞量測之EC 50(如國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號所陳述，該等申請案以引用方式整體併入本文)所指示，本文提供之抗體對mTF之親和力選自約455 nM、約87 nM、約11 nM、約3.9 nM、約3.0 nM、約3.4 nM、約255 nM、約2.9 nM、約3.6 nM及約4.0 nM。在一些實施例中，此種親和力在約455 nM至約2.9 nM之範圍內。在一些實施例中，此種EC 50為約455 pM或更小。
在一些實施例中，本文提供之抗體對pTF之K D值不大於抗體對hTF之K D值之20倍。在一些實施例中，本文提供之抗體對pTF之K D值不大於抗體對hTF之K D值之15倍。在一些實施例中，本文提供之抗體對pTF之K D值不大於抗體對hTF之K D值之10倍。在一些實施例中，本文提供之抗體對pTF之K D值不大於抗體對hTF之K D值之5倍。在一些實施例中，本文提供之抗體對pTF之K D值不大於抗體對hTF之K D值之2倍。
在一些實施例中，如表40中所闡述的，如由Biacore量測之K D所指示，本文提供之抗體對pTF之親和力為約3.31 nM或12.9 nM。 2.3.2. TF抗體存在下之凝血酶生成
在一些實施例中，本文提供之TF抗體不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成。在某些實施例中，本文提供之TF抗體允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，凝血酶生成之峰值百分比(峰值IIa %)為至少40%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少50%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少60%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少95%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少99%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於50 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少40%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於50 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少50%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於50 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少60%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於50 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於50 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於50 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於50 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少95%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於50 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少99%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於10 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少60%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於10 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於10 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於10 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於10 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少95%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於10 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %為至少99%。
在一些實施例中，如 表 6及 表 37中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在100 nM TF抗體之存在下，如藉由未進行抗體預孵育之凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %選自約99%、約100%、約103%、約64%、約52%、約87%、約96%、約98%及約53%。在一些實施例中，此種峰值IIa %在約52%至約103%之範圍內。在一些實施例中，此種峰值IIa %為約52%或更高。
在一些實施例中，如 表 6及 表 37中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在50 nM TF抗體之存在下，如藉由未進行抗體預孵育之凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %選自約99%、約100%、約103%、約67%、約58%、約89%、約96%、約98%、約68%、約62%及約88%。在一些實施例中，此種峰值IIa %在約58%至約103%之範圍內。在一些實施例中，此種峰值IIa %為約58%或更高。
在一些實施例中，如 表 6及 表 37中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在10 nM TF抗體之存在下，如藉由未進行抗體預孵育之凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %選自約100%、約99%、約103%、約87%、約83%、約95%、約98%、約86%及約96%。在一些實施例中，此種峰值IIa %在約83%至約103%之範圍內。在一些實施例中，此種峰值IIa %為約83%或更高。
在一些實施例中，如 表 7及 表 38中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在100 nM TF抗體之存在下，如藉由在10 min抗體預孵育下之凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %選自約108%、約105%、約111%、約58%、約47%、約91%、約103%、約109%、約107%及約45%。在一些實施例中，此種峰值IIa %在約45%至約111%之範圍內。在一些實施例中，此種峰值IIa %為約45%或更高。
在一些實施例中，如 表 7及 表 38中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在50 nM TF抗體之存在下，如藉由在10 min抗體預孵育下之凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %選自約107%、約104%、約114%、約62%、約49%、約87%、約105%、約109%、約55%及約92%。在一些實施例中，此種峰值IIa %在約49%至約114%之範圍內。在一些實施例中，此種峰值IIa %為約49%或更高。
在一些實施例中，如 表 7及 表 38中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在10 nM TF抗體之存在下，如藉由在10 min抗體預孵育下之凝血酶生成檢定(TGA)確定的，峰值IIa %選自約105%、約114%、約76%、約68%、約94%、約108%、約104%、約74%及約93%。在一些實施例中，此種峰值IIa %在約68%至約114%之範圍內。在一些實施例中，此種峰值IIa %為約68%或更高。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，內源性凝血酶潛能百分比(ETP %)為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，ETP %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，ETP %為至少95%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，ETP %為至少99%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於50 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，ETP %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於50 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，ETP %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於50 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，ETP %為至少95%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於50 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，ETP %為至少99%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於10 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，ETP %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於10 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，ETP %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於10 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，ETP %為至少95%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於10 nM TF抗體之存在下，如藉由凝血酶生成檢定(TGA)確定的，ETP %為至少99%。
在一些實施例中，如 表 6及 表 37中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在100 nM TF抗體之存在下，如藉由未進行抗體預孵育之凝血酶生成檢定(TGA)確定的，ETP %選自約108%、約103%、約109%、約100%、約96%、約102%、約105%及約92%。在一些實施例中，此種ETP %在約92%至約109%之範圍內。在一些實施例中，此種ETP %為約92%或更高。
在一些實施例中，如 表 6及 表 37中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在50 nM TF抗體之存在下，如藉由未進行抗體預孵育之凝血酶生成檢定(TGA)確定的，ETP %選自約108%、約103%、約111%、約101%、約97%、約104%、約106%、約93%、約96%及約105%。在一些實施例中，此種ETP %在約93%至約111%之範圍內。在一些實施例中，此種ETP %為約93%或更高。
在一些實施例中，如 表 6及 表 37中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在10 nM TF抗體之存在下，如藉由未進行抗體預孵育之凝血酶生成檢定(TGA)確定的，ETP %選自約106%、約109%、約105%、約104%、約107%、約99%、約101%及約102%。在一些實施例中，此種ETP %在約99%至約109%之範圍內。在一些實施例中，此種ETP %為約99%或更高。
在一些實施例中，如 表 7及 表 38中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在100 nM TF抗體之存在下，如藉由在10 min抗體預孵育下之凝血酶生成檢定(TGA)確定的，ETP %選自約110%、約104%、約106%、約98%、約95%、約108%、約107%、約96%、約92%及約103%。在一些實施例中，此種ETP %在約92%至約110%之範圍內。在一些實施例中，此種ETP %為約92%或更高。
在一些實施例中，如 表 7及 表 38中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在50 nM TF抗體之存在下，如藉由在10 min抗體預孵育下之凝血酶生成檢定(TGA)確定的，ETP %選自約110%、約106%、約108%、約103%、約96%、約109%、約102%、約104%、約94%及約98%。在一些實施例中，此種ETP %在約94%至約110%之範圍內。在一些實施例中，此種ETP %為約94%或更高。
在一些實施例中，如 表 7及 表 38中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在10 nM TF抗體之存在下，如藉由在10 min抗體預孵育下之凝血酶生成檢定(TGA)確定的，ETP %選自約107%、約106%、約110%、約103%、約100%、約105%、約102%及約101%。在一些實施例中，此種ETP %在約100%至約110%之範圍內。在一些實施例中，此種ETP %為約100%或更高。 2.3.3. TF抗體存在下之FXa轉化
在一些實施例中，本文提供之抗體在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF。在某些實施例中，本文提供之抗體不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa之能力。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，FXa轉化之百分比(FXa %)為至少75%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少85%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少95%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於50 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少75%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於50 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於50 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少85%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於50 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於50 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少95%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於25 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少75%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於25 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於25 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少85%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於25 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於25 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少95%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於12.5 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少75%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於12.5 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於12.5 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少85%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於12.5 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於12.5 nM TF抗體之存在下，FXa %為至少95%。
在一些實施例中，如 表 8中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在100 nM TF抗體之存在下，FXa %選自約89%、約96%、約116%、約108%、約117%、約105%、約112%、約106%、約103%、約111%、約98%及約101%。在一些實施例中，此種FXa %在約89%至約117%之範圍內。在一些實施例中，此種FXa %為約89%或更高。
在一些實施例中，如 表 8中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在50 nM TF抗體之存在下，FXa %選自約94%、約93%、約78%、約102%、約99%、約104%、約105%、約108%、約107%、約97%及約106%。在一些實施例中，此種FXa %在約78%至約108%之範圍內。在一些實施例中，此種FXa %為約78%或更高。
在一些實施例中，如 表 8中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在25 nM TF抗體之存在下，FXa %選自約81%、約89%、約85%、約109%、約96%、約97%、約108%、約104%、約103%、約112%及約89%。在一些實施例中，此種FXa %在約81%至約112%之範圍內。在一些實施例中，此種FXa %為約81%或更高。
在一些實施例中，如 表 8中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在12.5 nM TF抗體之存在下，FXa %選自約87%、約89%、約82%、約99%、約101%、約98%、約113%、約106%、約115%、約110%、約120%、約85%及約108%。在一些實施例中，此種FXa %在約82%至約120%之範圍內。在一些實施例中，此種FXa %為約82%或更高。 2.3.4. TF抗體存在下之FVIIa結合
在一些實施例中，本文提供之抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF。在某些實施例中，本文提供之抗體不與人類FVIIa競爭結合到人類TF。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於250 nM TF抗體之存在下，FVIIa結合之百分比(FVIIa %)為至少75%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於250 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於250 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少85%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於250 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於250 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少95%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於83 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少75%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於83 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於83 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少85%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於83 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於83 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少95%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於28 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少75%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於28 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於28 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少85%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於28 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於28 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少95%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於9.25 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少75%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於9.25 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於9.25 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少85%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於9.25 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少90%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於9.25 nM TF抗體之存在下，FVIIa %為至少95%。
在一些實施例中，如 表 9中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在250 nM TF抗體之存在下，FVIIa %選自約98%、約87%、約80%、約92%、約95%、約89%、約91%、約97%、約94%、約101%及約96%。在一些實施例中，此種FVIIa %在約80%至約101%之範圍內。在一些實施例中，此種FVIIa %為約80%或更高。
在一些實施例中，如 表 9中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在83 nM TF抗體之存在下，FVIIa %選自約97%、約88%、約77%、約93%、約94%、約91%、約98%、約100%及約92%。在一些實施例中，此種FVIIa %在約77%至約100%之範圍內。在一些實施例中，此種FVIIa %為約77%或更高。
在一些實施例中，如 表 9中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在28 nM TF抗體之存在下，FVIIa %選自約101%、約87%、約79%、約96%、約93%、約95%、約98%、約100%、約102%、約99%、約92%及約91%。在一些實施例中，此種FVIIa %在約79%至約102%之範圍內。在一些實施例中，此種FVIIa %為約79%或更高。
在一些實施例中，如 表 9中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在9.25 nM TF抗體之存在下，FVIIa %選自約100%、約90%、約76%、約97%、約93%、約99%、約98%、約102%、約101%及約95%。在一些實施例中，此種FVIIa %在約76%至約102%之範圍內。在一些實施例中，此種FVIIa %為約76%或更高。 2.3.5. TF抗體存在下之FVIIa依賴性TF傳訊
在一些實施例中，本文提供之抗體抑制FVIIa依賴性TF傳訊。在一些實施例中，藉由IL8之減少來量測對FVIIa依賴性TF傳訊之抑制。在一些實施例中，藉由GM-CSF之減少來量測對FVIIa依賴性TF傳訊之抑制。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，介白素8濃度(IL8濃度)降低至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，IL8濃度降低至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，IL8濃度降低至少90%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於40 nM TF抗體之存在下，IL8濃度降低至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於40 nM TF抗體之存在下，IL8濃度降低至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於40 nM TF抗體之存在下，IL8濃度降低至少90%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於16 nM TF抗體之存在下，IL8濃度降低至少60%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於16 nM TF抗體之存在下，IL8濃度降低至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於16 nM TF抗體之存在下，IL8濃度降低至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於16 nM TF抗體之存在下，IL8濃度降低至少90%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於6.4 nM TF抗體之存在下，IL8濃度降低至少50%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於6.4 nM TF抗體之存在下，IL8濃度降低至少60%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於6.4 nM TF抗體之存在下，IL8濃度降低至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於6.4 nM TF抗體之存在下，IL8濃度降低至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於6.4 nM TF抗體之存在下，IL8濃度降低至少90%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，顆粒球-巨噬細胞集落刺激因子濃度(GM-CSF濃度)降低至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，GM-CSF濃度降低至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於100 nM TF抗體之存在下，GM-CSF濃度降低至少90%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於40 nM TF抗體之存在下，GM-CSF濃度降低至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於40 nM TF抗體之存在下，GM-CSF濃度降低至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於40 nM TF抗體之存在下，GM-CSF濃度降低至少90%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於16 nM TF抗體之存在下，GM-CSF濃度降低至少60%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於16 nM TF抗體之存在下，GM-CSF濃度降低至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於16 nM TF抗體之存在下，GM-CSF濃度降低至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於16 nM TF抗體之存在下，GM-CSF濃度降低至少90%。
在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於6.4 nM TF抗體之存在下，GM-CSF濃度降低至少50%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於6.4 nM TF抗體之存在下，GM-CSF濃度降低至少60%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於6.4 nM TF抗體之存在下，GM-CSF濃度降低至少70%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於6.4 nM TF抗體之存在下，GM-CSF濃度降低至少80%。在一些實施例中，與不含抗體之對照條件相比，在不小於6.4 nM TF抗體之存在下，GM-CSF濃度降低至少90%。
在一些實施例中，如 表 10中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在100 nM TF抗體之存在下，介白素8之百分比(IL8 %)選自約2%、約9%、約8%、約6%、約13%、約1%、約3%、約4%及約5%。在一些實施例中，此種IL8 %在約1%至約13%之範圍內。在一些實施例中，此種IL8 %為約13%或更少。
在一些實施例中，如 表 10中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在40 nM TF抗體之存在下，IL8 %選自約2%、約8%、約7%、約10%、約14%、約4%、約5%及約6%。在一些實施例中，此種IL8 %在約2%至約14%之範圍內。在一些實施例中，此種IL8 %為約14%或更少。
在一些實施例中，如 表 10中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在16 nM TF抗體之存在下，IL8 %選自約2%、約3%、約10%、約8%、約7%、約16%、約9%、約15%、約5%及約6%。在一些實施例中，此種IL8 %在約2%至約16%之範圍內。在一些實施例中，此種IL8 %為約16%或更少。
在一些實施例中，如 表 10中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在6.4 nM TF抗體之存在下，IL8 %選自約3%、約4%、約11%、約9%、約14%、約22%、約12%、約6%、約5%、約15%、約21%及約8%。在一些實施例中，此種IL8 %在約3%至約22%之範圍內。在一些實施例中，此種IL8 %為約22%或更少。
在一些實施例中，如 表 11中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在100 nM TF抗體之存在下，顆粒球-巨噬細胞集落刺激因子之百分比(GM-CSF %)選自約6%、約7%、約22%、約20%、約12%、約19%、約17%、約25%、約5%、約14%、約11%及約10%。在一些實施例中，此種GM-CSF %在約5%至約25%之範圍內。在一些實施例中，此種GM-CSF %為約25%或更少。
在一些實施例中，如 表 11中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在40 nM TF抗體之存在下，GM-CSF %選自約6%、約7%、約19%、約15%、約18%、約16%、約26%、約5%、約13%、約11%及約10%。在一些實施例中，此種GM-CSF %在約5%至約26%之範圍內。在一些實施例中，此種GM-CSF %為約26%或更少。
在一些實施例中，如 表 11中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在16 nM TF抗體之存在下，GM-CSF %選自約6%、約7%、約22%、約19%、約14%、約32%、約17%、約26%、約5%、約12%、約13%、約9%、約11%及約15%。在一些實施例中，此種GM-CSF %在約5%至約32%之範圍內。在一些實施例中，此種GM-CSF %為約32%或更少。
在一些實施例中，如 表 11中所闡述的，與不含抗體之對照條件相比，在6.4 nM TF抗體之存在下，GM-CSF %選自約8%、約9%、約24%、約20%、約18%、約39%、約34%、約15%、約21%、約16%、約17%及約10%。在一些實施例中，此種GM-CSF %在約8%至約39%之範圍內。在一些實施例中，此種GM-CSF %為約39%或更少。 2.3.6. 豬脈絡膜新生血管(CNV)模型中之病變大小減小
在一些實施例中，本文提供之抗體減小豬脈絡膜新生血管(CNV)模型中之病變大小。在一些實施例中，藉由螢光素血管造影術(FA)量測病變大小之減小。
在一些實施例中，豬CNV模型中之病變大小在投與抗TF抗體後7天減小至少5%。在一些實施例中，豬CNV模型中之病變大小在投與抗TF抗體後7天減小至少10%。在一些實施例中，豬CNV模型中之病變大小在投與抗TF抗體後7天減小至少20%。在一些實施例中，豬CNV模型中之病變大小在投與抗TF抗體後7天減小至少40%。在一些實施例中，豬CNV模型中之病變大小在投與抗TF抗體後7天減小至少60%。
在一些實施例中，豬CNV模型中之病變大小在投與抗TF抗體後21天減小至少10%。在一些實施例中，豬CNV模型中之病變大小在投與抗TF抗體後21天減小至少20%。在一些實施例中，豬CNV模型中之病變大小在投與抗TF抗體後21天減小至少40%。在一些實施例中，豬CNV模型中之病變大小在投與抗TF抗體後21天減小至少60%。在一些實施例中，豬CNV模型中之病變大小在投與抗TF抗體後21天減小至少80%。 2.4. 生殖系
本文提供之抗體可包含任何適合V H及V L生殖系序列。
在一些實施例中，本文提供之抗體之V H區來自VH3生殖系。在一些實施例中，本文提供之抗體之V H區來自VH1生殖系。在一些實施例中，本文提供之抗體之V H區來自VH4生殖系。
在一些實施例中，本文提供之抗體之V H區來自VH3-23生殖系。在一些實施例中，本文提供之抗體之V H區來自VH1-18生殖系。在一些實施例中，本文提供之抗體之V H區來自VH3-30生殖系。在一些實施例中，本文提供之抗體之V H區來自VH1-69生殖系。在一些實施例中，本文提供之抗體之V H區來自VH4-31生殖系。在一些實施例中，本文提供之抗體之V H區來自VH4-34生殖系。在一些實施例中，本文提供之抗體之V H區來自VH1-46生殖系。
在一些實施例中，本文提供之抗體之V L區來自VK1生殖系。在一些實施例中，本文提供之抗體之V L區來自VK4生殖系。在一些實施例中，本文提供之抗體之V L區來自VK3生殖系。
在一些實施例中，本文提供之抗體之V L區來自VK1-05生殖系。在一些實施例中，本文提供之抗體之V L區來自VK4-01生殖系。在一些實施例中，本文提供之抗體之V L區來自VK3-15生殖系。在一些實施例中，本文提供之抗體之V L區來自VK3-20生殖系。在一些實施例中，本文提供之抗體之V L區來自VK1-33生殖系。 2.5. 單特異性及多特異性TF抗體
在一些實施例中，本文提供之抗體為單特異性抗體。
在一些實施例中，本文提供之抗體為多特異性抗體。
在一些實施例中，本文提供之多特異性抗體結合多於一種抗原。在一些實施例中，多特異性抗體結合兩種抗原。在一些實施例中，多特異性抗體結合三種抗原。在一些實施例中，多特異性抗體結合四種抗原。在一些實施例中，多特異性抗體結合五種抗原。
在一些實施例中，本文提供之多特異性抗體結合TF抗原上之多於一個表位。在一些實施例中，多特異性抗體結合TF抗原上之兩個表位。在一些實施例中，多特異性抗體結合TF抗原上之三個表位。
許多多特異性抗體構築體為此項技術中已知的，且本文提供之抗體可以任何適合多特異性適合構築體之形式提供。
在一些實施例中，多特異性抗體包含免疫球蛋白，該免疫球蛋白包含至少兩個不同重鏈可變區，該等重鏈可變區各自與共有輕鏈可變區(亦即，「共有輕鏈抗體」)配對。共有輕鏈可變區與兩個不同重鏈可變區中之各者形成不同抗原結合域。參見Merchant等人， Nature Biotechnol., 1998, 16:677-681，其以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含免疫球蛋白，該免疫球蛋白包含連接於此種免疫球蛋白之重鏈或輕鏈之N端或C端中之一或多者的抗體或其片段。參見Coloma及Morrison, Nature Biotechnol., 1997, 15:159-163，其以引用方式整體併入。在一些態樣中，此種抗體包含四價雙特異性抗體。
在一些實施例中，多特異性抗體包含雜交免疫球蛋白，該雜交免疫球蛋白包含至少兩個不同重鏈可變區及至少兩個不同輕鏈可變區。參見Milstein及Cuello, Nature, 1983, 305:537-540；及Staerz及Bevan, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1986, 83:1453-1457；其各自以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含免疫球蛋白鏈，其具有改變以減少不具有多特異性之副產物之形成。在一些態樣中，抗體包含一或多種「隆突入穴(knobs-into-holes)」修飾，如美國專利第5,731,168號中所描述，該專利以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含具有一或多種靜電修飾以促進Fc異多聚體組裝之免疫球蛋白鏈。參見WO 2009/089004，其以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含雙特異性單鏈分子。參見Traunecker等人， EMBO J., 1991, 10:3655-3659；及Gruber等人， J. Immunol., 1994, 152:5368-5374；其各自以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含藉由多肽連接子連接之重鏈可變域及輕鏈可變域，其中選擇連接子之長度以促進具有所需多特異性之多特異性抗體之組裝。例如，當重鏈可變域及輕鏈可變域藉由具有超過12個胺基酸殘基之多肽連接子連接時，通常形成單特異性scFv。參見美國專利第4,946,778號及第5,132,405號，其各自以引用方式整體併入。在一些實施例中，將多肽連接子之長度減少到少於12個胺基酸殘基防止同一多肽鏈上之重鏈及輕鏈可變域之配對，從而使來自一條鏈之重鏈及輕鏈可變域與另一條鏈上之互補域配對。因此，所得抗體具有多特異性，其中各結合位點之特異性由多於一條多肽鏈貢獻。包含由3到12個胺基酸殘基之間的連接子連接之重鏈及輕鏈可變域之多肽鏈主要形成二聚體(稱為雙抗體)。在0到2個胺基酸殘基之間的連接子的情況下，三聚體(稱為三抗體)及四聚體(稱為四抗體)為有利的。然而，除了連接子之長度外，寡聚之確切類型似乎亦取決於胺基酸殘基組成及各多肽鏈中可變域之順序(例如，V H-連接子-V L對V L-連接子-V H)。技術人員可基於所需多特異性選擇適當連接子長度。
在一些實施例中，多特異性抗體包含雙抗體。參見Hollinger等人， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90:6444-6448，其以引用方式整體併入。在一些實施例中，多特異性抗體包含三抗體。參見Todorovska等人， J. Immunol. Methods, 2001, 248:47-66，其以引用方式整體併入。在一些實施例中，多特異性抗體包含四抗體。參見同上，其以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含三特異性F(ab’)3衍生物。參見Tutt等人， J. Immunol., 1991, 147:60-69，其以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含交聯抗體。參見美國專利第4,676,980號；Brennan等人， Science, 1985, 229:81-83；Staerz等人， Nature, 1985, 314:628-631；及EP 0453082；其各自以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含由白胺酸拉鍊組裝之抗原結合域。參見Kostelny等人， J. Immunol., 1992, 148:1547-1553，其以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含互補蛋白域。在一些態樣中，互補蛋白域包含錨定域(AD)以及二聚化及對接域(DDD)。在一些實施例中，AD及DDD彼此結合，並從而能夠藉由「對接及鎖定」(DNL)方法組裝多特異性抗體結構。可組裝具有許多特異性之抗體，包括雙特異性抗體、三特異性抗體、四特異性抗體、五特異性抗體及六特異性抗體。包含互補蛋白域之多特異性抗體描述於例如美國專利第7,521,056號；第7,550,143號；第7,534,866號及第7,527,787號中；其各自以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含雙重作用Fab (DAF)抗體，如美國專利公開案第2008/0069820號中描述，其以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含藉由還原兩個親本分子之後混合兩個親本分子並再氧化以組裝雜化結構而形成之抗體。參見Carlring等人， PLoS One, 2011, 6:e22533，其以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含DVD-Ig TM。DVD-Ig TM為可結合兩種或更多種抗原之雙重可變域免疫球蛋白。DVD-Igs TM描述於美國專利第7,612,181號中，其以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含DART TM。DARTs TM描述於Moore等人， Blood, 2011, 117:454-451中，其以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含DuoBody ®。DuoBodies ®描述於Labrijn等人， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2013, 110:5145-5150；Gramer等人， mAbs, 2013, 5:962-972；及Labrijn等人， Nature Protocols, 2014, 9:2450-2463中；其各自以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含連接於另一抗體或片段之抗體片段。連接可為共價或非共價的。當連接為共價時，其可呈融合蛋白之形式或藉由化學連接子。包含連接於其他抗體之抗體片段之多特異性抗體之說明性實例包括四價雙特異性抗體，其中scFv與IgG之C H3之C端融合。參見Coloma及Morrison, Nature Biotechnol., 1997, 15:159-163。其他實例包括抗體，其中Fab分子連接於免疫球蛋白之恆定區。參見Miler等人， J. Immunol., 2003, 170:4854-4861，其以引用方式整體併入。可使用任何適合片段，包括本文所述或此項技術已知之任何片段。
在一些實施例中，多特異性抗體包含CovX-Body。CovX-Body描述於例如Doppalapudi等人， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2010, 107:22611-22616中，其以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含Fcab抗體，其中一或多個抗原結合域經引入Fc區。Fcab抗體描述於Wozniak-Knopp等人， Protein Eng. Des. Sel., 2010, 23:289-297中，其以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含TandAb ®抗體。TandAb ®抗體描述於Kipriyanov等人， J. Mol. Biol., 1999, 293:41-56及Zhukovsky等人， Blood, 2013, 122:5116中，其各自以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含串聯Fab。串聯Fab描述於WO 2015/103072中，其以引用方式整體併入。
在一些實施例中，多特異性抗體包含Zybody TM。Zybodies TM描述於LaFleur等人， mAbs, 2013, 5:208-218中，其以引用方式整體併入。 2.6. 糖基化變異體
在某些實施例中，可改變本文提供之抗體以提高、降低或消除其糖基化之程度。多肽之糖基化通常為「N-連接」或「O-連接」的。
「N-連接之」糖基化係指碳水化合物部分與天冬醯胺殘基側鏈之連接。三肽序列天冬醯胺-X-絲胺酸及天冬醯胺-X-蘇胺酸(其中X為除脯胺酸以外之任何胺基酸)為將碳水化合物部分酶促連接到天冬醯胺側鏈之識別序列。因此，多肽中此等三肽序列中任一個之存在創建潛在糖基化位點。
「O-連接之」糖基化係指糖N-乙醯基半乳糖胺、半乳糖或木糖中之一種與羥基胺基酸(最常見的為絲胺酸或蘇胺酸)之連接，但亦可使用5-羥基脯胺酸或5-羥基離胺酸。
可藉由改變胺基酸序列以使得創建或除去上述三肽序列中之一或多個來實現向本文提供之抗體添加或自本文提供之抗體刪除N-連接之糖基化位點。可藉由在抗體序列中添加、缺失或取代(視情況而定)一或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基來實現O-連接之糖基化位點之添加或缺失。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含不同於天然存在之抗體之糖基化模體。可在本文提供之抗體中修飾任何適合天然存在之糖基化模體。例如，免疫球蛋白之結構及糖基化性質在此項技術中已知，且總結於例如Schroeder及Cavacini, J. Allergy Clin. Immunol., 2010, 125:S41-52中，其以引用方式整體併入。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含對連接於天冬醯胺297 (Asn 297)之寡糖進行修飾之IgG1 Fc區。由哺乳動物細胞產生之天然存在之IgG1抗體通常包含分支之雙觸角寡糖，其一般藉由N鍵聯連接於Fc區之C H2域之Asn 297。參見Wright等人， TIBTECH, 1997, 15:26-32，其以引用方式整體併入。連接於Asn 297之寡糖可包括各種碳水化合物，諸如甘露糖、N-乙醯葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸，以及連接於雙觸角寡糖結構「主幹」中之GlcNAc之岩藻糖。
在一些實施例中，修飾連接於Asn 297之寡糖以創建具有改變之ADCC之抗體。在一些實施例中，改變寡糖以改良ADCC。在一些實施例中，改變寡糖以減少ADCC。
在一些態樣中，本文提供之抗體包含相較於天然存在之IgG1域，在位置Asn 297處具有降低之岩藻糖含量之IgG1域。已知該等Fc域具有改良之ADCC。參見Shields等人， J. Biol. Chem., 2002, 277:26733-26740，其以引用方式整體併入本文。在一些態樣中，此類抗體在位置Asn 297處不包含任何岩藻糖。岩藻糖之量可使用任何適合方法測定，例如如WO 2008/077546中所述，其以引用方式整體併入本文。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含二等分寡糖，諸如連接於抗體之Fc區之由GlcNAc二等分的雙觸角寡糖。此類抗體變異體可具有降低之岩藻糖基化及/或改良之ADCC功能。此類抗體變異體之實例例如描述於WO 2003/011878；美國專利第6,602,684號；及美國專利公開案第2005/0123546號中；該等專利中之各者以引用方式整體併入。
可併入本文提供之抗體中之其他說明性糖基化變異體例如描述於美國專利公開案第2003/0157108號、第2004/0093621號、第2003/0157108號、第2003/0115614號、第2002/0164328號、第2004/0093621號、第2004/0132140號、第2004/0110704號、第2004/0110282號、第2004/0109865號；國際專利公開案第2000/61739號、第2001/29246號、第2003/085119號、第2003/084570號、第2005/035586號、第2005/035778號；第2005/053742號、第2002/031140號；Okazaki等人， J. Mol. Biol., 2004, 336:1239-1249；以及Yamane-Ohnuki等人， Biotech. Bioeng., 2004, 87: 614-622中，該等專利及文獻中之各者以引用方式整體併入。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含在連接於Fc區之寡糖中具有至少一個半乳糖殘基之Fc區。此類抗體變異體可具有改良之CDC功能。該等抗體變異體之實例例如描述於WO 1997/30087；WO 1998/58964；及WO 1999/22764中；該等專利中之各者以引用方式整體併入。
能夠產生去岩藻糖基化抗體之細胞株之實例包括Lec13 CHO細胞，該等Lec13 CHO細胞為蛋白質岩藻糖基化缺陷的(參見Ripka等人， Arch. Biochem. Biophys., 1986, 249:533-545；美國專利公開案第2003/0157108號；WO 2004/056312；該等文獻及專利中之各者以引用方式整體併入)，以及敲除細胞株諸如α-1,6-岩藻糖基轉移酶基因或FUT8敲除CHO細胞(參見Yamane-Ohnuki等人， Biotech. Bioeng., 2004, 87: 614-622；Kanda等人， Biotechnol. Bioeng., 2006, 94:680-688；以及WO 2003/085107；該等文獻及專利中之各者以引用方式整體併入)。
在一些實施例中，本文提供之抗體為無糖基化抗體。可使用此項技術已知或本文所述之任何方法來產生無糖基化抗體。在一些態樣中，藉由修飾抗體以去除所有糖基化位點來產生無糖基化抗體。在一些態樣中，僅自抗體之Fc區去除糖基化位點。在一些態樣中，藉由在不能夠糖基化之生物體諸如大腸埃希氏菌中表現抗體或藉由在無細胞反應混合物中表現抗體來產生無糖基化抗體。
在一些實施例中，與天然IgG1抗體相比，本文提供之抗體具有效應子功能降低之恆定區。在一些實施例中，本文提供之抗體之Fc區之恆定區對Fc受體之親和力小於天然IgG1恆定區對此種Fc受體之親和力。 2.7. Fc區胺基酸序列變異體
在某些實施例中，本文提供之抗體包含與天然存在之Fc區相比具有一或多個胺基酸取代、插入或缺失之Fc區。在一些態樣中，此類取代、插入或缺失產生具有改變之穩定性、糖基化或其他特徵之抗體。在一些態樣中，此類取代、插入或缺失產生無糖基化抗體。
在一些態樣中，對本文提供之抗體之Fc區進行修飾以產生對Fc受體具有改變之親和力之抗體、或更具免疫惰性之抗體。在一些實施例中，本文提供之抗體變異體具有一些但並非所有之效應子功能。例如，當抗體之半衰期在活體內很重要，但當某些效應子功能(例如，補體激活及ADCC)不必要或有害時，此類抗體可為有用的。
在一些實施例中，本文提供之抗體之Fc區為包含鉸鏈穩定突變S228P及L235E中之一或多個之人類IgG4 Fc區。參見Aalberse等人， Immunology, 2002, 105:9-19，其以引用方式整體併入。在一些實施例中，IgG4 Fc區包含以下突變中之一或多個：E233P、F234V及L235A。參見Armour等人， Mol. Immunol., 2003, 40:585-593，其以引用方式整體併入。在一些實施例中，IgG4 Fc區包含位置G236處之缺失。
在一些實施例中，本文提供之抗體之Fc區為包含一或多個突變以降低Fc受體結合之人類IgG1 Fc區。在一些態樣中，一或多個突變在選自S228 (例如，S228A)、L234 (例如，L234A)、L235 (例如，L235A)、D265 (例如，D265A)及N297 (例如，N297A)之殘基中。在一些態樣中，抗體包含PVA236突變。PVA236意指來自IgG1之胺基酸位置233至236之胺基酸序列ELLG (SEQ ID NO: 928)或IgG4之EFLG (SEQ ID NO: 929)經PVA替換。參見美國專利第9,150,641號，其以引用方式整體併入。
在一些實施例中，對本文提供之抗體之Fc區進行修飾，如Armour等人， Eur. J. Immunol., 1999, 29:2613-2624；WO 1999/058572；及/或英國專利申請案第98099518號中描述；其各自以引用方式整體併入。
在一些實施例中，本文提供之抗體之Fc區為包含突變A330S及P331S中之一或多個之人類IgG2 Fc區。
在一些實施例中，本文提供之抗體之Fc區在選自238、265、269、270、297、327及329之一或多個位置具有胺基酸取代。參見美國專利第6,737,056號，其以引用方式整體併入。此類Fc突變體包括在胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩處或更多處具有取代之Fc突變體，包括用丙胺酸取代殘基265及297之所謂之「DANA」 Fc突變體。參見美國專利第7,332,581號，其以引用方式整體併入。在一些實施例中，抗體包含胺基酸位置265處之丙胺酸。在一些實施例中，抗體包含胺基酸位置297處之丙胺酸。
在某些實施例中，本文提供之抗體包含具有一或多個使ADCC改良之胺基酸取代之Fc區，該等胺基酸取代諸如為在Fc區之位置298、333及334中之一或多者處之取代。在一些實施例中，本文提供之抗體包含具有在位置239、332及330處導致效應子功能增強之一或多個胺基酸取代之Fc區，如Lazar等人， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2006,103:4005-4010中描述，其以引用方式整體併入。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含一或多個使C1q結合及/或CDC改良或減弱之改變。參見美國專利第6,194,551號；WO 99/51642；以及Idusogie等人， J. Immunol., 2000, 164:4178-4184；該等專利及文獻中之各者以引用方式整體併入。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含一或多個增加半衰期之改變。具有增加之半衰期及改良之與新生兒Fc受體(FcRn)結合之抗體描述於例如Hinton等人， J. Immunol., 2006, 176:346-356；及美國專利公開案第2005/0014934號中，其各自以引用方式整體併入。此類Fc變異體包括在IgG之Fc區殘基238、250、256、265、272、286、303、305、307、311、312、314、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424、428及434中之一或多處具有取代之彼等變異體。
在一些實施例中，本文提供之抗體包含一或多種Fc區變異體，如美國專利第7,371,826號、第5,648,260號及第5,624,821號；Duncan及Winter, Nature, 1988, 322:738-740；及WO 94/29351中描述；其各自以引用方式整體併入。 2.8. 焦麩胺酸
如此項技術中已知的，重組蛋白N端處之麩胺酸(E)及麩醯胺(Q)在活體外及活體內可自發地環化以形成焦麩胺酸(pE)。參見Liu等人， J. Biol. Chem., 2011, 286:11211-11217，其以引用方式整體併入。
在一些實施例中，本文提供了包含在N端位置具有pE殘基之多肽序列之抗體。在一些實施例中，本文提供了包含多肽序列之抗體，在該多肽序列中N端殘基已自Q轉化為pE。在一些實施例中，本文提供了包含多肽序列之抗體，在該多肽序列中N端殘基已自E轉化為pE。 2.9. 經半胱胺酸工程改造之抗體變異體
在某些實施例中，本文提供了經半胱胺酸工程改造之抗體，亦稱為「thioMAb」，其中抗體之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在具體實施例中，經取代之殘基存在於抗體之溶劑可及位點。藉由用半胱胺酸取代此類殘基，將反應性硫醇基團引入抗體之溶劑可及位點，且可用於將抗體與其他部分(諸如藥物部分或連接子-藥物部分)綴合，以例如創建免疫綴合物。
在某些實施例中，可用半胱胺酸取代下列殘基中之任一或多個：輕鏈之V205；重鏈Fc區之A118；及重鏈Fc區之S400。可生成經半胱胺酸工程改造之抗體，如例如美國專利第7,521,541號中描述，其以引用方式整體併入。 3. 抗TF抗體-藥物綴合物
本文提供了抗體-藥物綴合物(ADC)，該等抗體-藥物綴合物包含與TF特異性結合之抗體及細胞毒性劑。在一些實施例中，細胞毒性劑直接連接到抗TF抗體。在一些實施例中，細胞毒性劑間接連接到抗TF抗體。
在一些實施例中，ADC亦包含連接子。在一些實施例中，連接子將抗TF抗體連接到細胞毒性劑。
在一些實施例中，本文提供之ADC具有之藥物-抗體比率(DAR)為1。在一些實施例中，本文提供之ADC具有之DAR為2。在一些實施例中，本文提供之ADC具有之DAR為3。在一些實施例中，本文提供之ADC具有之DAR為4。在一些實施例中，本文提供之ADC具有之DAR為5。在一些實施例中，本文提供之ADC具有之DAR為1至2、1至3、1至4、1至5、2至3、2至4、2至5、3至4、3至5、4至5、1、2、3、4或5。在一些實施例中，本文提供之ADC具有之DAR大於5。在一些實施例中，藉由UV/vis光譜、疏水相互作用層析(HIC)及/或具有飛行時間偵測及質量表徵之反相液相層析分離(RP-UPLC/質譜)來量測DAR。 4. 用於製備TF抗體之方法 4.1. TF抗原製備
用於分離本文提供之抗體之TF抗原可為完整TF或TF之片段。TF抗原可為例如經分離蛋白質或在細胞表面上表現之蛋白質之形式。
在一些實施例中，TF抗原為TF之非天然存在之變異體，諸如具有自然界中不存在之胺基酸序列或翻譯後修飾之TF蛋白。
在一些實施例中，藉由去除例如細胞內或跨膜序列或訊息序列來截短TF抗原。在一些實施例中，TF抗原在其C端融合至人類IgG1 Fc域或聚組胺酸標籤。 4.2. 單株抗體之製備方法
單株抗體可例如使用Kohler等人， Nature, 1975, 256:495-497 (其以引用方式整體併入)首先描述之融合瘤方法，及/或藉由重組DNA方法(參見例如美國專利第4,816,567號，其以引用方式整體併入)獲得。單株抗體亦可例如使用噬菌體展示文庫(參見例如美國專利第8,258,082號，其以引用方式整體併入)，或另選地，使用基於酵母之文庫(參見例如美國專利第8,691,730號，其以引用方式整體併入)獲得。
在融合瘤方法中，對小鼠或其他適當宿主動物進行免疫以引發產生或能夠產生將與用於免疫之蛋白特異性結合之抗體的淋巴球。另選地，可在活體外免疫淋巴球。然後使用適合融合劑諸如聚乙二醇將淋巴球與骨髓瘤細胞融合，以形成融合瘤細胞。參見Goding J.W., Monoclonal Antibodies: Principles and Practice第3版(1986) Academic Press, San Diego, CA，其以引用方式整體併入。
將融合瘤細胞接種於適合培養基中並使其在其中生長，該培養基含有抑制未融合之親代骨髓瘤細胞生長或存活之一或多種物質。例如，若親代骨髓瘤細胞缺乏次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶(HGPRT或HPRT)，則融合瘤之培養基通常將包括次黃嘌呤、氨基蝶呤及胸腺嘧啶(HAT培養基)，此等物質阻止HGPRT缺陷型細胞之生長。
有用的骨髓瘤細胞為有效融合、支持由所選抗體產生細胞穩定地高水準產生抗體、且具有敏感培養基條件(諸如存在或不存在HAT培養基)之彼等骨髓瘤細胞。其中，較佳骨髓瘤細胞株為鼠類骨髓瘤細胞株，諸如來源於MOP-21及MC-11小鼠腫瘤(可購自Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, CA)以及SP-2或X63-Ag8-653細胞(可購自American Type Culture Collection, Rockville, MD)之彼等者。亦描述了用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤細胞株。參見例如Kozbor, J. Immunol., 1984, 133:3001，其以引用方式整體併入。
在鑑定出產生所需特異性、親和力及/或生物學活性之抗體之融合瘤細胞後，可藉由限制稀釋程序來對所選純系進行亞選殖，並藉由標準方法生長。參見Goding，同上。用於此目的之適合培養基包括例如D-MEM或RPMI-1640培養基。此外，融合瘤細胞可在動物中作為腹水腫瘤在活體內生長。
編碼單株抗體之DNA可容易地經分離並使用常規工序(例如，藉由使用能夠特異性結合編碼單株抗體之重鏈及輕鏈之基因之寡核苷酸探針)進行定序。因此，融合瘤細胞可充當編碼具有所需特性之抗體之DNA的有用來源。一旦分離，可將DNA置於表現載體中，然後將其轉染到宿主細胞中，諸如細菌(例如，大腸埃希氏菌( E. coli))、酵母(例如，釀酒酵母( Saccharomyces)或畢赤酵母( Pichia sp.))、COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或原本不產生抗體之骨髓瘤細胞中，以產生單株抗體。 4.3. 嵌合抗體之製備方法
製備嵌合抗體之說明性方法描述於例如美國專利第4,816,567號；及Morrison等人， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1984, 81:6851-6855；其各自以引用方式整體併入。在一些實施例中，藉由使用重組技術將非人類可變區(例如，來源於小鼠、大鼠、倉鼠、兔或非人類靈長類諸如猴之可變區)與人類恆定區組合來製備嵌合抗體。 4.4. 人類化抗體之製備方法
可藉由用相應人類抗體序列替換非人類單株抗體之大部分或所有結構部分來生成人類化抗體。因此，生成了雜交分子，其中僅抗原特異性可變區或CDR由非人類序列組成。獲得人類化抗體之方法包括描述於例如以下中之彼等者：Winter及Milstein, Nature, 1991, 349:293-299；Rader等人， Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 1998, 95:8910-8915；Steinberger等人， J. Biol. Chem., 2000, 275:36073-36078；Queen等人， Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1989, 86:10029-10033；以及美國專利第5,585,089號、第5,693,761號、第5,693,762號及第6,180,370號；其各自以引用方式整體併入。 4.5. 人類抗體之製備方法
人類抗體可藉由此項技術已知之多種技術生成，例如藉由使用轉基因動物(例如，人類化小鼠)。參見例如Jakobovits等人， Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1993, 90:2551；Jakobovits等人， Nature, 1993, 362:255-258；Bruggermann等人， Year in Immuno., 1993, 7:33；以及美國專利第5,591,669號、第5,589,369號及第5,545,807號；其各自以引用方式整體併入。人類抗體亦可源自噬菌體展示文庫(參見例如Hoogenboom等人， J. Mol. Biol., 1991, 227:381-388；Marks等人， J. Mol. Biol., 1991, 222:581-597；以及美國專利第5,565,332號及第5,573,905號；其各自以引用方式整體併入)。亦可由活體外激活之B細胞來生成人類抗體(參見例如美國專利第5,567,610號及第5,229,275號，其各自以引用方式整體併入)。人類抗體亦可源自基於酵母之文庫(參見例如美國專利第8,691,730號，其以引用方式整體併入)。 4.6. 抗體片段之製備方法
本文提供之抗體片段可藉由任何適合方法製備，包括本文所述之說明性方法或此項技術已知之彼等方法。適合方法包括重組技術及整個抗體之蛋白水解消化。製備抗體片段之說明性方法描述於例如Hudson等人， Nat. Med., 2003, 9:129-134中，其以引用方式整體併入。製備scFv抗體之方法描述於例如Plückthun， The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷, Rosenburg及Moore編, Springer-Verlag, New York,第269-315頁(1994)；WO 93/16185；以及美國專利第5,571,894號及第5,587,458號中；其各自以引用方式整體併入。 4.7. 替代支架之製備方法
本文提供之替代支架可藉由任何適合方法製備，包括本文所述之說明性方法或此項技術已知之彼等方法。例如，Adnectins TM之製備方法描述於Emanuel等人， mAbs, 2011, 3:38-48中，其以引用方式整體併入。iMab之製備方法描述於美國專利公開案第2003/0215914號中，其以引用方式整體併入。Anticalin ®之製備方法描述於Vogt及Skerra, Chem. Biochem., 2004, 5:191-199中，其以引用方式整體併入。Kunitz域之製備方法描述於Wagner等人， Biochem. & Biophys. Res. Comm., 1992, 186:118-1145中，其以引用方式整體併入。硫氧還蛋白肽適體之製備方法提供於Geyer及Brent, Meth. Enzymol., 2000, 328:171-208中，其以引用方式整體併入。親和體之製備方法提供於Fernandez, Curr. Opinion in Biotech., 2004, 15:364-373中，其以引用方式整體併入。DARPins之製備方法提供於Zahnd等人， J. Mol. Biol., 2007, 369:1015-1028中，其以引用方式整體併入。人類泛素之製備方法提供於Ebersbach等人， J. Mol. Biol., 2007, 372:172-185中，其以引用方式整體併入。四連接素之製備方法提供於Graversen等人， J. Biol. Chem., 2000, 275:37390-37396中，其以引用方式整體併入。高親和性多聚體之製備方法提供於Silverman等人， Nature Biotech., 2005, 23:1556-1561中，其以引用方式整體併入。Fynomers之製備方法提供於Silacci等人， J. Biol. Chem., 2014, 289:14392-14398中，其以引用方式整體併入。
關於替代支架之其他資訊提供於Binz等人， Nat. Biotechnol., 2005 23:1257-1268；及Skerra, Current Opin. in Biotech., 2007 18:295-304中，其各自以引用方式整體併入。 4.8. 多特異性抗體之製備方法
本文提供之多特異性抗體可藉由任何適合方法製備，包括本文所述之說明性方法或此項技術已知之彼等方法。常見輕鏈抗體之製備方法描述於Merchant等人， Nature Biotechnol., 1998, 16:677-681中，其以引用方式整體併入。四價雙特異性抗體之製備方法描述於Coloma及Morrison, Nature Biotechnol., 1997, 15:159-163中，其以引用方式整體併入。雜化免疫球蛋白之製備方法描述於Milstein及Cuello, Nature, 1983, 305:537-540；以及Staerz及Bevan, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1986, 83:1453-1457中；其各自以引用方式整體併入。具有隆突入穴修飾之免疫球蛋白之製備方法描述於美國專利第5,731,168號中，其以引用方式整體併入。具有靜電修飾之免疫球蛋白之製備方法提供於WO 2009/089004中，其以引用方式整體併入。雙特異性單鏈抗體之製備方法描述於Traunecker等人， EMBO J., 1991, 10:3655-3659；及Gruber等人， J. Immunol., 1994, 152:5368-5374中；其各自以引用方式整體併入。連接子長度可變化之單鏈抗體之製備方法描述於美國專利第4,946,778號及第5,132,405號中，其各自以引用方式整體併入。雙抗體之製備方法描述於Hollinger等人， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90:6444-6448中，其以引用方式整體併入。三抗體及四抗體之製備方法描述於Todorovska等人， J. Immunol. Methods, 2001, 248:47-66中，其以引用方式整體併入。三特異性F(ab')3衍生物之製備方法描述於Tutt等人 J. Immunol., 1991, 147:60-69中，其以引用方式整體併入。交聯抗體之製備方法描述於美國專利第4,676,980號；Brennan等人， Science, 1985, 229:81-83；Staerz等人 Nature, 1985, 314:628-631；及EP 0453082中；其各自以引用方式整體併入。由白胺酸拉鍊組裝之抗原結合域之製備方法描述於Kostelny等人， J. Immunol., 1992, 148:1547-1553中，其以引用方式整體併入。藉由DNL方法製備抗體之方法描述於美國專利第7,521,056號；第7,550,143號；第7,534,866號及第7,527,787號中；其各自以引用方式整體併入。抗體及非抗體分子之雜化物之製備方法描述於WO 93/08829中，其以引用方式整體併入，以用於此種抗體之實例。DAF抗體之製備方法描述於美國專利公開案第2008/0069820號中，其以引用方式整體併入。藉由還原及氧化製備抗體之方法描述於Carlring等人， PLoS One, 2011, 6:e22533中，其以引用方式整體併入。DVD-Igs TM之製備方法描述於美國專利第7,612,181號中，其以引用方式整體併入。DARTs TM之製備方法描述於Moore等人， Blood, 2011, 117:454-451中，其以引用方式整體併入。DuoBodies ®之製備方法描述於Labrijn等人， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2013, 110:5145-5150；Gramer等人， mAbs, 2013, 5:962-972；及Labrijn等人， Nature Protocols, 2014, 9:2450-2463中；其各自以引用方式整體併入。包含融合到IgG之C H3之C端之scFv的抗體之製備方法描述於Coloma及Morrison, Nature Biotechnol., 1997, 15:159-163中，其以引用方式整體併入。Fab分子連接到免疫球蛋白之恆定區的抗體之製備方法描述於Miler等人， J. Immunol., 2003, 170:4854-4861中，其以引用方式整體併入。CovX-Bodies之製備方法描述於Doppalapudi等人， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2010, 107:22611-22616中，其以引用方式整體併入。Fcab抗體之製備方法描述於Wozniak-Knopp等人， Protein Eng. Des. Sel., 2010, 23:289-297中，其以引用方式整體併入。TandAb ®抗體之製備方法描述於Kipriyanov等人， J. Mol. Biol., 1999, 293:41-56及Zhukovsky等人， Blood, 2013, 122:5116中，其各自以引用方式整體併入。串聯Fab之製備方法描述於WO 2015/103072中，其以引用方式整體併入。Zybodies TM之製備方法描述於LaFleur等人， mAbs, 2013, 5:208-218中，其以引用方式整體併入。 4.9. 變異體之製備方法
在一些實施例中，本文提供之抗體為親本抗體之親和力成熟之變異體，其可例如使用基於噬菌體展示之親和力成熟技術來生成。簡言之，可對一或多個CDR殘基進行突變，且將變異體抗體或其部分在噬菌體上展示並針對親和力進行篩選。可在CDR「熱點」或由在體細胞成熟過程期間經歷高頻突變之密碼子編碼之殘基(參見Chowdhury, Methods Mol. Biol., 2008, 207:179-196，其以引用方式整體併入)及/或與抗原接觸之殘基中進行此類改變。
可使用任何適合方法將可變性引入編碼抗體之一或多個多核苷酸序列中，包括易錯PCR、鏈改組及寡核苷酸定向誘變，諸如三核苷酸定向誘變(TRIM)。在一些態樣中，數個CDR殘基(例如，一次4至6個殘基)為隨機的。可例如使用丙胺酸掃描誘變或建模來特異性鑑定參與抗原結合之CDR殘基。特別地，CDR-H3及CDR-L3通常靶向突變。
將多樣性引入可變區及/或CDR中可用於產生次級文庫。然後，篩選次級文庫以鑑定具有改良之親和力之抗體變異體。藉由次級文庫之構築及再選擇進行的親和力成熟已經描述於例如Hoogenboom等人， Methods in Molecular Biology, 2001, 178:1-37中，其以引用方式整體併入。 4.10. 載體、宿主細胞及重組方法
亦提供了編碼TF抗體之經分離核酸、包含核酸之載體以及包含載體及核酸之宿主細胞、以及用於產生抗體之重組技術。
為了重組產生抗體，可將編碼其之一或多個核酸分離並插入可複製載體中以便進一步選殖(亦即DNA擴增)或進行表現。在一些態樣中，可藉由同源重組產生核酸，例如，如美國專利第5,204,244號中描述，其以引用方式整體併入。
許多不同之載體為此項技術中已知的。載體組分通常包括但不限於以下一或多種：訊息序列、複製起點、一或多個標記基因、增強子元件、啟動子及轉錄終止序列，例如如美國專利第5,534,615號中描述，其以引用方式整體併入。
下面提供了適合宿主細胞之說明性實例。此等宿主細胞並不意欲為限制性的，且任何適合宿主細胞可用於產生本文提供之抗體。
適合宿主細胞包括任何原核(例如，細菌)、低等真核(例如，酵母)或高等真核(例如，哺乳動物)細胞。適合原核細胞包括真細菌，諸如革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物體，例如腸桿菌科諸如埃希氏菌屬( Escherichia)(大腸埃希氏菌)、腸桿菌屬( Enterobacter)、歐文氏菌屬( Erwinia)、克雷伯氏菌屬( Klebsiella)、變形桿菌屬( Proteus)、沙門氏菌屬( Salmonella)(鼠傷寒沙門氏菌( S. typhimurium))、沙雷氏菌屬( Serratia)(黏質沙雷氏菌( S. marcescans))、志賀氏菌屬( Shigella)、芽孢桿菌屬( Bacilli)(枯草芽孢桿菌( B.subtilis)及地衣芽孢桿菌( B.licheniformis))、假單胞菌屬( Pseudomonas)(銅綠假單胞菌( P. aeruginosa))，及鏈黴菌屬( Streptomyces)。一種有用的大腸埃希氏菌選殖宿主為大腸埃希氏菌294，但其他菌株諸如大腸埃希氏菌B、大腸埃希氏菌X1776及大腸埃希氏菌W3110亦為適合的。
除原核生物外，真核微生物諸如絲狀真菌(filamentous fungi)或酵母亦為TF抗體編碼載體之適合選殖或表現宿主。釀酒酵母或普通麵包酵母(common baker's yeast)為常用的低等真核宿主微生物。然而，許多其他屬、種及菌株為可獲得且有用的，諸如粟酒裂殖酵母( Schizosaccharomyces pombe)；克魯維酵母屬( Kluyveromyces) (乳酸克魯維酵母( K. lactis)、脆壁克魯維酵母( K. fragilis)、保加利亞克魯維酵母( K. bulgaricus)、威肯克魯維酵母( K. wickeramii)、瓦爾特克魯維酵母( K. waltii)、果蠅克魯維酵母( K. drosophilarum)、耐熱克魯維酵母( K. thermotolerans)及馬克斯克魯維酵母( K. marxianus))；耶氏酵母屬( Yarrowia)、巴氏畢赤酵母( Pichia pastoris)、假絲酵母屬( Candida) (白假絲酵母( C. albicans))、瑞氏木黴( Trichoderma reesia)、粗糙鏈孢黴( Neurospora crassa)、許旺酵母屬( Schwanniomyces) (西方許旺酵母( S. occidentalis))；及絲狀真菌諸如例如青黴菌屬( Penicillium)、彎頸黴屬( Tolypocladium)及麯黴屬( Aspergillus) (構巢麯黴( A. nidulans)及黑麯黴( A. niger))。
有用的哺乳動物宿主細胞包括COS-7細胞、HEK293細胞、幼倉鼠腎(BHK)細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、小鼠睾丸支持細胞、非洲綠猴腎細胞(VERO-76)等。
用於產生本發明之TF抗體之宿主細胞可在多種培養基中培養。市售培養基，諸如例如Ham's F10、最小必需培養基(Minimal Essential Medium) (MEM)、RPMI-1640以及達爾伯克氏改良伊格爾培養基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium，DMEM)，適於培養宿主細胞。此外，可使用Ham等人， Meth. Enz., 1979, 58:44；Barnes等人， Anal. Biochem., 1980, 102:255；以及美國專利第4,767,704號、第4,657,866號、第4,927,762號、第4,560,655號及第5,122,469號；或WO 90/03430及WO 87/00195中描述之任何培養基。上述參考文獻各自以引用方式整體併入。
此等培養基中之任一種可根據需要用激素及/或其他生長因子(例如胰島素、轉鐵蛋白或表皮生長因子)、鹽(例如氯化鈉、鈣、鎂及磷酸鹽)、緩衝液(例如HEPES)、核苷酸(例如腺嘌呤核苷及胸腺嘧啶核苷)、抗生素、微量元素(定義為通常以微莫耳範圍之最終濃度存在之無機化合物)，以及葡萄糖或等效能量源進行補充。亦可以熟悉此項技藝者已知之適當濃度包含任何其他必需補充劑。
培養條件，諸如溫度、pH等，為先前與選擇用於表現之宿主細胞一起使用之彼等條件，且對於熟悉此項技藝者而言為顯而易見的。
當使用重組技術時，抗體可在細胞內、周質空間中產生、或直接分泌到培養基中。若抗體在細胞內產生，則作為第一步，例如藉由離心或超濾去除顆粒碎片(宿主細胞或裂解片段)。例如，Carter等人( Bio/Technology, 1992, 10:163-167，其以引用方式整體併入)描述了分離分泌至大腸埃希氏菌之周質空間之抗體的程序。簡言之，在乙酸鈉(pH 3.5)、EDTA及苯甲基磺醯氟(PMSF)之存在下解凍細胞糊漿(cell paste)約30分鐘。可藉由離心去除細胞碎片。
在一些實施例中，抗體在無細胞體系中產生。在一些態樣中，無細胞體系為活體外轉錄及翻譯系統，如Yin等人， mAbs, 2012, 4:217-225中描述，其以引用方式整體併入。在一些態樣中，無細胞體系利用來自真核細胞或原核細胞之無細胞提取物。在一些態樣中，原核細胞為大腸埃希氏菌。抗體之無細胞表現可為有用的，例如，在抗體以不溶性聚集體形式在細胞中積累或周質表現之收率較低之情況下。
在將抗體分泌到培養基中之情況下，通常首先使用可商購獲得之蛋白質濃縮過濾器(例如，Amicon ®或Millipore ®Pellcon ®超濾單元)濃縮來自此類表現體系之上清液。蛋白酶抑制劑諸如PMSF可包括在上述任何步驟中以抑制蛋白水解，且可包括抗生素以防止不定污染物之生長。
可使用例如羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析及親和層析來純化由細胞製備之抗體組合物，其中親和層析為特別有用的純化技術。蛋白A作為親和配體之適用性取決於抗體中存在之任何免疫球蛋白Fc域之種類及同型。蛋白A可用於純化包含人類γ1、γ2或γ4重鏈之抗體(Lindmark等人， J. Immunol. Meth., 1983, 62:1-13，其以引用方式整體併入)。蛋白G可用於所有小鼠同型及人類γ3 (Guss等人， EMBO J., 1986, 5:1567-1575，其以引用方式整體併入)。
親和配體所連接之基質最通常為瓊脂糖，但亦可使用其他基質。機械穩定之基質(諸如受控孔玻璃或聚(苯乙烯二乙烯基)苯)可實現比瓊脂糖更快之流速及更短之處理時間。在抗體包含C H3域之情況下，BakerBond ABX ®樹脂可用於純化。
用於蛋白質純化之其他技術，諸如離子交換管柱上之分級分離、乙醇沉澱、反相HPLC、矽膠層析法、肝素Sepharose ®層析法、層析聚焦、SDS-PAGE及硫酸銨沉澱亦為可用的，且可由熟悉此項技藝者應用。
在任何初步純化步驟之後，可使用pH在約2.5至約4.5之間的溶析緩衝液對包含受關注之抗體及污染物之混合物進行低pH疏水相互作用層析法，通常在低鹽濃度下(例如，約0至約0.25 M鹽)進行。 5. 細胞毒性劑
在一些實施例中，本文提供之ADC包含細胞毒性劑。細胞毒性劑可考慮用於患有炎性疾病(例如自體免疫病症)之患者。本文提供之細胞毒性劑包括此項技術已知之各種免疫抑制劑、抗腫瘤劑或抗癌劑。在一些實施例中，細胞毒性劑引起癌細胞或免疫細胞之破壞。
適合細胞毒性劑包括抗血管生成劑、促凋亡劑、抗有絲分裂劑、抗激酶劑、烷化劑、激素、激素促效劑、激素拮抗劑、趨化介素、藥物、前驅藥、毒素、酶、抗代謝藥、抗生素、生物鹼及放射性同位素。
在一些實施例中，細胞毒性劑包含以下中之至少一種：刺孢黴素、喜樹鹼、卡鉑、伊立替康、SN-38、卡鉑、喜樹鹼、環磷醯胺、阿糖胞苷、達卡巴嗪、多西他賽、更生黴素、柔紅黴素、多柔比星、多柔比星、依託泊苷、伊達比星、拓撲替康、長春花生物鹼、美登木素生物鹼、美登木素生物鹼類似物、吡咯并苯并二氮呯、紫杉烷類、多卡米星、多拉司他汀、澳瑞他汀及其衍生物。在某些實施例中，細胞毒性劑為單甲基澳瑞他汀E (MMAE)。
在一些實施例中，細胞毒性劑為診斷劑，諸如放射性同位素、金屬螯合劑、酶、螢光化合物、生物發光化合物或化學發光化合物。
在一些實施例中，細胞毒性劑為具有改良之安全性概況之細胞毒性有效載荷，例如XMT-1267及描述於Trail等人， Pharmacol Ther, 2018, 181:126-142中之其他細胞毒性有效載荷。 6. 連接子
在一些實施例中，本文提供之ADC包含連接子。在一些實施例中，未結合之連接子包含兩個反應性末端：抗體綴合反應性末端及細胞毒性劑綴合反應性末端。連接子之抗體綴合反應性末端可藉由抗體上之半胱胺酸硫醇或離胺酸胺基團與抗體綴合，通常為硫醇反應性基團(諸如雙鍵)、離去基團(諸如氯、溴或碘)、R-硫烷基或磺醯基、或胺反應性基團(諸如羧基)。連接子之細胞毒性劑綴合反應性末端可藉由與細胞毒素上之鹼性胺或羧基(通常為羧基或鹼性胺基)形成醯胺鍵而與細胞毒性劑綴合。
在一些實施例中，連接子為不可裂解之連接子。在一些實施例中，連接子為可裂解之連接子。在一些實施例中，細胞毒性劑在細胞中自ADC釋放。
ADC之適合連接子包括不穩定性連接子、酸不穩定性連接子(例如，腙連接子)、光不穩定性連接子、帶電荷連接子、含二硫鍵之連接子、肽酶敏感性連接子(例如，包含胺基酸(例如纈胺酸及/或瓜胺酸諸如瓜胺酸-纈胺酸或苯丙胺酸-離胺酸)之肽連接子)、β-葡糖醛酸苷連接子(參見例如Graaf等人， Curr Pharm Des, 2002, 8:1391-1403)、二甲基連接子(參見例如Chari等人， Cancer Research, 1992, 52:127-131；美國專利第5,208,020號)、硫醚連接子或親水連接子(參見例如Kovtun等人， Cancer Res., 2010, 70:2528-2537)。在某些實施例中，使用纈胺酸-瓜胺酸(vc)連接子將細胞毒性劑綴合到抗體。 7. 抗體-藥物綴合物之製備方法
可使用多種雙功能蛋白偶聯劑(諸如BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基EMCS、磺基GMBS、磺基KMUS、磺基MBS、磺基SIAB、磺基SMCC及磺基SMPB以及SVSB (琥珀醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯))製備本文提供之抗體-藥物綴合物(ADC)。例如，可如Vitetta等人， Science, 1987, 238:1098中所述製備蓖麻毒蛋白免疫毒素。此外，可使用此項技術中揭示之任何適合方法來製備ADC，例如， Bioconjugate Techniques,第2版, G. T. Hermanson編, Elsevier, San Francisco, 2008中。
在一些實施例中，ADC為用位點特異性綴合技術製備的，導致均勻之藥物負載並避免具有改變之抗原結合或藥代動力學之ADC亞群。在一些實施例中，對重鏈及輕鏈上之位置處包含半胱胺酸取代之「硫單抗(thiomabs)」進行工程改造以提供不破壞免疫球蛋白折疊及組裝或改變抗原結合之反應性硫醇基團(Junutula等人， J. Immunol. Meth., 2008, 332: 41-52；Junutula等人， Nat. Biotechnol., 2008, 26: 925-932)。在一些實施例中，藉由重新編碼自終端到硒代半胱胺酸插入之終止密碼子UGA，將硒代半胱胺酸共翻譯插入到抗體序列中，從而允許在其他天然胺基酸之存在下，在硒代半胱胺酸之親核硒醇基團處進行位點特異性共價綴合(參見例如Hofer等人， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2008, 105:12451-12456；Hofer等人， Biochemistry, 2009, 48(50):12047-12057)。在某些實施例中，如Behrens等人， Mol Pharm, 2015, 12:3986-98中所述合成ADC。 8. 檢定
此項技術已知之各種檢定可用於鑑定及表徵本文提供之抗TF抗體及抗TF ADC。 8.1. 結合、競爭及表位定位檢定
如本揭示案別處所述，可藉由任何適合方法來評估本文提供之抗體之特異性抗原結合活性，該方法包括使用SPR、BLI、RIA及MSD-SET。此外，可藉由ELISA檢定及西方墨點檢定評估抗原結合活性。
用於量測兩種抗體之間或一種抗體與另一種分子(例如，TF之一或多種配體)之間的競爭之檢定描述於本揭示案之別處及例如，Harlow及Lane, Antibodies: A Laboratory Manual第14章, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y中，其以引用方式整體併入。
用於對本文提供之抗體所結合之表位進行定位之檢定描述於例如Morris 「Epitope Mapping Protocols,」， Methods in Molecular Biology第66卷, 1996, Humana Press, Totowa, N.J.中，其以引用方式整體併入。在一些實施例中，藉由肽競爭確定表位。在一些實施例中，藉由質譜分析確定表位。在一些實施例中，藉由晶體學確定表位。 8.2. 凝血酶生成、FXa轉化及TF傳訊檢定
如本揭示案別處所述，可藉由凝血酶生成檢定(TGA)來確定在本文提供之抗體存在下之凝血酶生成。
本揭示案別處描述了用於在本文提供之抗體存在下量測FXa轉化之檢定。
可藉由量測由TF傳訊調節之細胞介素(諸如IL8及GM-CSF)之產生來確定TF傳訊之抑制。用於確定IL8及/或GM-CSF水準之檢定提供於本揭示案別處及例如Hjortoe等人， Blood, 2004, 103:3029-3037中。 8.3. 用於效應子功能之檢定
可使用此項技術已知之多種活體外及活體內檢定評估用本文提供之抗體治療後之效應子功能，該等檢定包括描述於以下中之彼等者：Ravetch及Kinet, Annu. Rev. Immunol., 1991, 9:457-492；美國專利第5,500,362號、第5,821,337號；Hellstrom等人， Proc. Nat’l Acad. Sci. USA, 1986, 83:7059-7063；Hellstrom等人， Proc. Nat’l Acad. Sci. USA, 1985, 82:1499-1502；Bruggemann等人， J. Exp. Med., 1987, 166:1351-1361；Clynes等人， Proc. Nat’l Acad. Sci. USA, 1998, 95:652-656；WO 2006/029879；WO 2005/100402；Gazzano-Santoro等人， J. Immunol. Methods, 1996, 202:163-171；Cragg等人， Blood, 2003, 101:1045-1052；Cragg等人， Blood, 2004, 103:2738-2743；及Petkova等人， Int’l. Immunol., 2006, 18:1759-1769；其各自以引用方式整體併入。 8.4. 細胞毒性檢定及活體內研究
本揭示案別處描述了用於評估本文提供之抗體-藥物綴合物(ADC)之細胞毒性的檢定。
本揭示案別處描述了對免疫受損之小鼠之異種移植研究以用於評估本文提供之ADC之活體內功效。
本揭示案包括對免疫活性(immune competent)小鼠之同基因研究以用於評估ADC之活體內功效。 8.5. 免疫組織化學(IHC)檢定
本揭示案別處描述了用於評估患者樣品中之TF表現之免疫組織化學(IHC)檢定。 8.6. 嵌合構築體定位及表位分倉(Epitope Binning)檢定
如本揭示案別處所述，可藉由嵌合TF構築體定位實驗及表位分倉檢定來確定本文提供之抗人類TF抗體之間的表位結合差異。 9. 醫藥組合物
本文提供之抗體可以任何適當的醫藥組合物調配且藉由任何合適投與途徑投與。醫藥組合物之投與途徑可以係根據已知方法，例如經口、透過藉由靜脈內注射、腹膜內、腦內(實質內)、腦室內、肌內、眼內、動脈內、門靜脈內、病灶內途徑、髓內、鞘內、心室內、經皮、皮下、腹膜內、鼻內、腸內、局部、舌下、尿道、陰道或直腸方式、藉由持續釋放系統或藉由植入裝置。在需要時，組合物可藉由彈丸注射或連續輸注或藉由植入裝置投與。在某些實施例中，合適的投與途徑包括但不限於動脈內、皮內、肌內、腹膜內、靜脈內、經鼻、非經腸、局部、肺部及皮下途徑。
醫藥組合物可包含一或多種醫藥賦形劑。可使用任何適合醫藥賦形劑，且熟悉此項技藝者能夠選擇適合醫藥賦形劑。因此，以下提供之醫藥賦形劑旨在說明而非限制。另外的醫藥賦形劑包括例如描述於以下中之彼等： Handbook of Pharmaceutical Excipients, Rowe等人(編)第6版(2009)，其以引用方式整體併入。 9.1. 非經腸劑型
在某些實施例中，本文提供之抗體經調配為非經腸劑型。非經腸劑型可藉由各種途徑向個體投與，該等途徑包括但不限於皮下、靜脈內(包括輸注及彈丸注射)、肌內及動脈內。因為其投與通常繞過個體對污染物之天然防禦，所以非經腸劑型通常為無菌的或能夠在向個體投與前經滅菌。非經腸劑型之實例包括但不限於準備注射之溶液、準備溶解或懸浮於醫藥學上可接受之注射用媒劑中之乾燥(例如，凍乾)產品、準備注射之懸浮液以及乳劑。 10. 劑量及單位劑型
在人類療法中，醫生將根據預防性或治療性治療且根據年齡、體重、狀況及欲治療個體之其他特定因素來確定他認為最適當的劑量。
在某些實施例中，本文提供之組合物為醫藥組合物或單一單位劑型。本文提供之醫藥組合物及單一單位劑型包含預防或治療有效量之一或多種預防性或治療性抗體或ADC。
將有效於預防或治療病症或其一或多種症狀之抗體/ADC或組合物之量可隨疾病或疾患之性質及嚴重程度以及抗體/ADC之投與途徑而變化。頻率及劑量亦可根據各個體之特定因素而變化，其取決於所投與之特定療法(例如，治療劑或預防劑)、病症、疾病或疾患之嚴重程度、投與途徑以及個體之年齡、體重、反應及既往病史。可由來源於活體外或動物模型測試系統之劑量-反應曲線來外推有效劑量。
如熟悉此項技藝者容易知道的，不同治療有效量可適用於不同之疾病及疾患。類似地，本文提供之劑量之量及劑量頻率時間表亦包括足以預防、控制、治療或改善此類病症，但不足以引起或足以減輕與本文提供之抗體或ADC相關之不利影響之量。此外，當給個體投與多個劑量之本文提供之組合物時，並非所有劑量都需要相同。例如，可增加向個體投與之劑量以改良組合物之預防或治療效果，或可降低其以減少特定個體正在經歷之一或多種副作用。
如本揭示案別處更詳細地討論的，本文提供之抗體或ADC可視情況與一或多種用於預防或治療疾病或病症之其他藥劑一起投與。此類其他藥劑之有效量可取決於存在於調配物中之ADC之量、病症或治療之類型以及此項技術已知或本文所述之其他因素。 11. 治療應用
對於治療應用，本發明之抗體以醫藥學上可接受之劑型諸如此項技術中已知之彼等者及上文所論述之彼等者來向個體(通常為哺乳動物，通常為人類)投與。舉例而言，本發明之抗體可作為彈丸靜脈內或在一個時間段內藉由連續輸注、藉由玻璃體內、腹膜內、腦脊髓內、皮下、關節內、滑膜內、鞘內、腫瘤內或局部途徑來向個體投與。在某些實施例中，投與係經由靜脈內、肌內、腫瘤內、皮下、滑膜內、眼內、斑塊內或皮內注射抗體或具有編碼該抗體之cDNA之表現載體來進行。該載體可為攜帶編碼該抗體之cDNA之複製缺陷型腺病毒載體、逆轉錄病毒載體或其他病毒載體。
在一些實施例中，患者用有效量之攜帶編碼該抗體之cDNA之一或多種複製缺陷型腺病毒載體或一或多種腺相關病毒載體治療。
本文提供之抗體可用於治療涉及TF之炎性疾病。如所用，術語「炎性疾病」廣泛係指特徵在於炎症(局部或全身性、急性或慢性)之任何疾病、病症、損傷或疾患。如所用，「炎性疾病」亦涵蓋自體免疫性疾病。另外，如所用，術語「炎性疾病」亦涵蓋炎症之症狀。
炎症之症狀之實例包括但不限於炎性細胞介素及趨化介素之濃度或表現增加(局部或全身性)、腫脹、疼痛、纖維化、紅血球沉降速率(ESR)增加、單核細胞及/或顆粒球在患病或受損部位浸潤(例如肺之間質液、肺泡、急性損傷部位等)、脾腫大、體重損失、使用脈搏血氧監測儀確定之低氧血症(指示影響呼吸系統之炎性疾病)、肺泡液清除率減小、糞便稠度發生改變(例如個體糞便軟化)、腹瀉(例如，慢性腹瀉)、便血、潛血、在炎症或損傷部位之泛紅(發紅)、在炎症或損傷部位之灼熱(熱量增加)、在炎症或損傷部位或疾病器官中之功能喪失(functio laesa/loss of function)、皮疹、頭疼、發熱、噁心或局部組織或細胞損害。
使用本揭示案之方法治療炎性疾病導致減少或減輕炎性疾病的一或多種不良症狀或與炎性疾病之收縮或進展相關之其他效應。
在一些情況下，總白血球計數之增加為炎性疾病(例如結腸炎、炎性腸病、關節炎、急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)及呼吸道融合細胞病毒(RSV))之症狀。在某些實施例中，在投與本文提供之抗體或ADC後，相對於基線水準及/或另一種抗炎劑，該抗體或ADC使總白血球計數減少例如至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%。用於量測總白血球計數之方法為此項技術中已知的。在某些實施例中，總白血球計數使用光學顯微鏡法來確定。
在一些情況下，總顆粒球計數(例如總嗜中性球計數、總嗜酸性球計數、總嗜鹼性球計數)之增加為炎性疾病(例如結腸炎、炎性腸病、關節炎、急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)及呼吸道融合細胞病毒(RSV))之症狀。在某些實施例中，在投與本文提供之抗體或ADC後，相對於基線水準及/或另一種抗炎劑，該抗體或ADC使總顆粒球計數減少例如至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%。用於量測總顆粒球計數之方法為此項技術中已知的。在某些實施例中，總顆粒球計數對組織樣品或血清樣品使用免疫組織化學(IHC)分析來確定。在某些實施例中，總顆粒球計數使用支氣管肺泡灌洗術(BAL)流體差示細胞計數來確定。用於進行BAL流體差示細胞計數及分析之方法為此項技術中已知的(參見例如Choi SH等人， PLoS One.2014;9(5):e97346，其以引用方式整體併入)。
在一些情況下，總單核細胞計數(例如總巨噬細胞計數、總淋巴球計數)之增加為炎性疾病(例如結腸炎、炎性腸病、關節炎、急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)及呼吸道融合細胞病毒(RSV))之症狀。在某些實施例中，在投與本文提供之抗體或ADC後，相對於基線水準及/或另一種抗炎劑，該抗體或ADC使總單核細胞計數減少例如至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%。用於量測總單核細胞計數之方法為此項技術中已知的。在某些實施例中，總單核細胞計數對組織樣品或血清樣品使用免疫組織化學(IHC)分析來確定。在某些實施例中，總單核細胞計數使用支氣管肺泡灌洗術(BAL)流體差示細胞計數來確定。用於進行BAL流體差示細胞計數及分析之方法為此項技術中已知的(參見例如Choi SH等人， PLoS One.2014;9(5):e97346，其以引用方式整體併入)。
在某些實施例中，使用本揭示案之抗體或ADC進行治療導致M1巨噬細胞降低及/或M2巨噬細胞降低。在某些實施例中，使用本揭示案之抗體或ADC進行治療導致M1巨噬細胞降低及/或M2巨噬細胞增加。在某些炎性疾病中，M2巨噬細胞升高已與疾病之無症狀狀態或疾病消退相關。(參見Hu, Kebin等人， Journal of Immunology Research, 2018，其以引用方式整體併入)。
在一些情況下，脾腫大(splenomegaly/enlarged spleen)為炎性疾病之症狀。在某些實施例中，在投與本文提供之抗體或ADC後，相對於基線水準或相對於不同抗炎劑，該抗體或ADC減小脾之重量、減小脾之大小或消除/逆轉脾腫大。在臨床環境中，量測脾之重量為不實際的。在此類情況下，脾腫大之進展(或逆轉)可使用此項技術中已知之方法(例如觸診、叩診、超音波、電腦斷層(CT)掃描或磁共振成像(MRI))來確定。超音波、電腦斷層(CT)掃描及磁共振成像(MRI)允許使脾可視化。超音波或電腦斷層(CT)掃描有助於確定脾之大小及確定脾是否簇擁其他器官。磁共振成像(MRI)允許臨床醫師追蹤穿過脾之血流。
在一些情況下，纖維化(例如，肺組織之纖維化或炎症部位之纖維化)為炎性疾病之症狀。纖維化通常為慢性炎症之特徵。在某些實施例中，在投與本文提供之抗體或ADC後，相對於基線水準或相對於不同抗炎劑，該抗體或ADC減少纖維化(例如肺、皮膚或肝中之纖維化)。纖維化之變化可以使用組織之IHC分析或藉由定量高解析度電腦斷層掃描(qHRCT)來量測。
在一些情況下，紅血球沉降速率(ESR)增加為炎性疾病之指示。ESR為抗凝全血中之紅血球在標準管內在一個小時之時間段內下降之速率。其為常見血液學測試，且為炎症之非特異性量測。在某些實施例中，在投與本文提供之抗體或ADC後，相對於基線水準及/或另一種抗炎劑，該抗體或ADC使ESR減小例如至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%。
在一些情況下，糞便稠度之變化、糞便之軟化及/或腹瀉為炎性疾病(例如結腸炎、炎性腸病(IBD))之症狀。舉例而言，患有炎性疾病之個體可表現出稀糞，這根據布里斯托糞便表分類為大於4、5或6。已開發布里斯托糞便分類表(BSFS)或布里斯托糞便表作為評定成人滯腸時間之方法(參見Lewis S J等人， Scand J Gastrotrnterol,32:920-924 (1997)，其以引用方式整體併入)。其為由以豎直方式排列之各種糞便類型之2維表示組成的紙質量表，其中各糞便類型與各糞便類型之文本描述結合來描繪。BSFS廣泛用於臨床護理中患有功能性胃腸病(FGID)之患者中。用於量測糞便稠度之方法及裝置之實例提供於美國申請案第13/592,906號，其以引用方式整體併入。在患有炎性疾病(例如結腸炎、IBD)之個體表現出稀便之情況下，在投與本文提供之抗體或ADC後，相對於基線水準及/或不同抗炎劑，抗體或ADC導致糞便變硬。在某些實施例中，在投與本文提供之抗體或ADC後，該抗體或ADC導致糞便稠度根據BSFS分類為3。可以藉由使用本文提供之抗體或ADC進行治療來改良之其他端點或症狀包括便血、糞便頻率、糞便緊迫性及嚴重性以及腹痛。
在一些情況下，便血及/或潛血為炎性疾病(例如，結腸炎或IBD)之症狀。便血為血液自肛門經過(通常在糞便中或與糞便一起)。便血可以藉由目視檢查糞便來確定。相比之下，潛血為糞便中不明顯之血液，且亦可指示炎性疾病。確定糞便中血液(特別為潛血)量之變化的更準確方法係藉由使用潛血試劑測試、糞便潛血測試或免疫化學血球凝集測試。用於進行潛血試劑測試之方法為此項技術中已知的(例如，測試可使用潛血試劑測試載玻片套組(SmithKline Diagnostics, Inc.)及製造商說明書來執行)。用於進行免疫化學血球凝集測試之方法亦為此項技術中已知的且利用對人類血紅素具有特異性之抗體進行偵測。
在一些情況下，淨肺泡液清除率(AFC)之減小或AFC受損為炎性疾病(例如，急性呼吸窘迫症候群(ARDS)及急性肺損傷)之症狀。在某些實施例中，在投與本文提供之抗體或ADC後，相對於基線水準或不同抗炎劑，該抗體或ADC增加AFC。AFC可使用此項技術中已知之方法量測，例如連續水腫液蛋白濃度之量測。用於使用連續水腫液蛋白濃度之量測確定AFC之變化的方法提供於例如Ware, L.B.及Michael, M.A., American journal of respiratory and critical care medicine,163.6 (2001): 1376-1383，其以引用方式整體併入。
炎症可以直接或間接引起對多種細胞、組織或器官或對單個細胞類型、組織類型或器官之細胞、組織或器官損害。可顯示損害之示範性組織及器官取決於炎性疾病且包括上皮或黏膜組織、胃腸道、腸、胰臟、胸腺、肝、腎、脾、皮膚或骨骼關節(例如，膝、踝、髖、肩、腕、手指、趾或肘)。根據本揭示案之治療可導致組織損害減少或抑制，或可導致受損器官或組織(例如，皮膚、黏膜、肝、肺等)再生。
在一些實施例中，本文提供了一種延遲有需要之個體炎性疾病發作之方法，其藉由向個體投與有效量之本文提供之抗體或ADC來進行。
在一些實施例中，本文提供了一種預防有需要之個體炎性疾病發作之方法，其藉由向個體投與有效量之本文提供之抗體或ADC來進行。
在一些實施例中，本文提供了一種用於延長有需要之個體之總體存活期、中值存活時間或無進展存活期之方法，其藉由向個體投與有效量之本文提供之抗體或ADC來進行。
在一些實施例中，本文提供了一種用於治療已對標準護理治療產生抗性之個體之方法，其藉由向個體投與有效量之本文提供之抗體或ADC來進行。
在一些實施例中，可受益於用抗TF抗體治療之疾病或疾患為涉及炎症之疾病或疾患。在某些實施例中，炎性疾病為結腸炎、炎性腸病、關節炎、急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)或呼吸道融合細胞病毒(RSV)。在一些實施例中，可受益於用抗TF抗體治療之疾病或疾患為涉及血管炎症之疾病或疾患。
在一些實施例中，提供本文提供之抗TF抗體或ADC以用作用於治療涉及炎症之疾病或疾患之藥物。在一些實施例中，提供本文提供之抗TF抗體用於製造或製備用於治療炎性疾病之藥物。在某些實施例中，炎性疾病為結腸炎、炎性腸病、關節炎、急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)或呼吸道融合細胞病毒(RSV)。在一些實施例中，提供本文提供之抗TF抗體或ADC以用作用於治療涉及血管炎症之疾病或疾患之藥物。在一些實施例中，提供本文提供之抗TF抗體用於製造或製備用於治療涉及血管炎性疾病之疾病或疾患之藥物。
在一些實施例中，本文提供了一種治療有需要之個體之炎性疾病之方法，其藉由向個體投與有效量之本文提供之抗TF抗體來進行。在某些實施例中，炎性疾病為結腸炎、炎性腸病、關節炎、急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)或呼吸道融合細胞病毒(RSV)。在一些實施例中，本文提供了一種治療有需要之個體之涉及血管炎症之疾病或疾患之方法，其藉由向個體投與有效量之本文提供之抗TF抗體或ADC來進行。
在一些實施例中，本文提供了一種延遲有需要之個體炎性疾病發作之方法，其藉由向個體投與有效量之本文提供之抗體來進行。
在一些實施例中，本文提供了一種預防有需要之個體炎性疾病發作之方法，其藉由向個體投與有效量之本文提供之抗體來進行。
在一些實施例中，本文提供了一種延遲有需要之個體涉及血管炎症之疾病或疾患之發作的方法，其藉由向個體投與有效量之本文提供之抗體來進行。
在一些實施例中，本文提供了一種預防有需要之個體涉及血管炎症之疾病或疾患之發作的方法，其藉由向個體投與有效量之本文提供之抗體來進行。 12. 炎症及炎性疾病
炎症可分類為急性或慢性。急性炎症為身體對有害刺激之初始反應且藉由增加血漿及白血球(例如，白血球，例如，單核細胞及顆粒球)自血液至受損組織之移動來達成。該炎症啟動導致成熟炎性反應之一系列生物化學事件，包括局部血管分佈、免疫系統及受損組織中之各種細胞。相比之下，慢性炎症導致存在於炎症部位之細胞類型發生進行性偏移且其特徵在於組織在炎性過程中同時破壞及癒合。慢性炎症亦可導致宿主疾病，包括但不限於花粉熱、牙周炎、動脈粥樣硬化、類風濕性關節炎及癌症，這突出顯示了身體經身體密切調節之需要。
本揭示案之方法中所預期之炎性疾病的實例包括：結腸炎、炎性腸病、關節炎、急性肺損傷(ALI)、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)及呼吸道融合細胞病毒(RSV)。
炎性疾病之非限制性實例包括但不限於尋常性痤瘡、急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群、氣喘、自體免疫性疾病(例如急性瀰漫性腦脊髓炎(ADEM))、艾迪森氏病(Addison's disease)、無γ球蛋白血症(agammaglbulinemia)、斑禿、肌肉萎縮性脊髓側索硬化症、關節黏連性脊椎炎、抗磷脂質症候群、抗合成酶症候群(antisynthetase syndrome)、特應性變態反應、異位性皮膚炎、自體免疫性再生不良性貧血、自體免疫性心肌病、自體免疫性腸病變、自體免疫性溶血性貧血、自體免疫性肝炎、自體免疫性內耳病、自體免疫性淋巴球增生症候群、自體免疫性周邊神經病變、自體免疫性胰臟炎、自體免疫性多內分泌症候群、自體免疫性黃體激素皮膚炎、自體免疫性血小板減少性紫癜症、自體免疫性蕁麻疹、自體免疫性眼色素層炎、巴洛同心性硬化(Balo concentric sclerosis)、貝西氏病(Behcet's disease)、伯格氏病(Berger's disease)、畢卡史達夫氏腦炎(Bickerstaff s encephalitis)、布勞症候群(Blau syndrome)、大皰性類天皰瘡、Castleman氏病、乳糜瀉、蔡格司病(Chagas disease)、慢性炎症脫髓鞘性多發神經病變、慢性復發性多灶性骨髓炎、慢性阻塞性肺病、Churg-Strauss二氏症候群、疤痕性類天皰瘡、Cogan症候群、結腸炎、冷凝集素疾病、補體成分2缺乏症、接觸性皮膚炎、顱動脈炎、CREST症候群、克隆氏病、庫興氏症候群(Cushing's syndrome)、皮膚白血球破碎性血管炎、德哥氏病(Dego's disease)、Dercum氏病、疱疹性皮膚炎、皮肌炎、1型糖尿病、彌漫性皮膚全身性硬化症、Dressler氏症候群、藥物誘導性狼瘡、盤狀紅斑性狼瘡、濕疹、子宮內膜異位症、附著點炎相關性關節炎、嗜伊紅球性筋膜炎、嗜酸性球性胃腸炎、後天性水皰性表皮鬆解症、結節性紅斑、胎兒紅血球母細胞增多症、特發性混合性冷凝球蛋白血症、伊凡氏症候群(Evan's syndrome)、進行性骨化性纖維發育不良、纖維化肺泡炎、胃炎、胃腸道類天皰瘡、巨大細胞動脈炎、腎小球性腎炎、古巴士德氏症候群(Goodpasture's syndrome)、格雷氏病(Grave's disease)、格巴二氏症候群(Guillain-Barre syndrome)、橋本氏腦病(Hashimoto's encephalopathy)、橋本甲狀腺炎(Hashimoto's thyroiditis)、Henoch-Schonlein二氏紫瘢病、妊娠疱疹、化膿性汗腺炎、休斯二氏症候群(Hughes-Stovin syndrome)、低加馬球蛋白血症、特發性炎性脫髓鞘病、特發性肺纖維化、特發性血小板減少性紫癲、IgA腎病、包涵體肌炎、慢性炎症脫髓鞘性多發神經病變、間質性膀胱炎、幼年型特發性關節炎、川崎病(Kawasaki's disease)、Lambert-Eaton二氏肌無力症候群、白血球破碎性血管炎、扁平苔蘚、硬化性苔蘚、線性IgA病、紅斑狼瘡、Majeed症候群、美尼爾氏病(Meniere's disease)、顯微多血管炎、混合性結締組織疾病、侷限性硬皮病、Mucha-Habermann二氏病、重症肌無力、肌炎、嗜睡症、視神經脊髓炎、神經性肌強直、眼部瘢痕性類天庖瘡、眼陣攣-肌陣攣症候群(opsoclonus myoclonus syndrome)、奧德氏甲狀腺炎(Ord's thyroiditis)、迴文型風濕病、PANDAS、伴腫瘤性小腦變性、陣發性夜間血紅素尿、帕-羅二氏症候群(Parry Romberg syndrome)、Parsonage-Turner症候群、睫狀體扁平部炎(pars planitis)、尋常型天皰瘡、惡性貧血、靜脈周腦脊髓炎、POEMS症候群、結節性多動脈炎、風濕性多發性肌痛、多發性肌炎、原發性膽汁性膽管炎、原發性膽汁性肝硬化、原發性硬化性膽管炎、進行性炎性神經病變、牛皮癬性關節炎、壞疽性膿皮病、純紅血球再生不良、Rasmussen氏腦炎、Raynaud氏現象、復發性多發性軟骨炎、Reiter氏症候群、呼吸道融合細胞病毒(RSV)、不寧腿症候群、腹膜後纖維變性、風濕熱、Schnitzler氏症候群、鞏膜炎、硬皮症、血清病、休格倫氏症候群、脊椎關節疾病、僵體症候群、亞急性細菌性心內膜炎、蘇薩克氏症候群(Susac's syndrome)、斯威特氏症候群(Sweet's syndrome)、交感性眼炎、高安動脈炎(Takayasu's arteritis)、顳動脈炎、血小板減少症、Tolosa-Hunt症候群、橫貫性脊髓炎、潰瘍性結腸炎、未分化型結締組織病、未分化型脊椎關節病變、白斑病及華格納氏肉芽病(Wegener's granulomatosis)、乳糜瀉、慢性前列腺炎、腎小球性腎炎、過敏症、炎性腸病、盆腔炎性疾病、再灌注損傷、類風濕性關節炎、類肉瘤病、移植排斥、血管炎、間質性膀胱炎及骨關節炎。
在一些實施例中，術語「炎性疾病」包括病毒感染。在一些實施例中，炎性疾病包括嚴重急性呼吸症候群冠狀病毒2 (SARS-CoV-2)。在一些實施例中，如本文所述之抗TF抗體用於治療病原性病毒，諸如呼吸道融合細胞病毒(RSV)、脊髓灰白質炎病毒、單純疱疹病毒、A型肝炎病毒、輪狀病毒、腺病毒、SARS-CoV-2及A型流感病毒。在一些實施例中，病原性病毒選自：疱疹病毒科、痘病毒科、嗜肝病毒科、冠狀病毒科、黃病毒科、披膜病毒科、逆轉錄病毒科、正黏病毒科、砂粒病毒科、布尼亞病毒科、纖絲病毒科、副黏病毒科及彈狀病毒科。在一個實施例中，該病毒選自由以下組成之群：1型單純泡疹病毒、2型單純泡疹病毒、水痘帶狀皰狀病毒、艾司坦-巴爾病毒(Epstein-Barr virus)、人類巨細胞病毒、人類疱疹病毒、天花、B型肝炎病毒、重度急性呼吸症候群病毒、C型肝炎病毒、黃熱病毒、登革熱病毒、西尼羅病毒、TBE病毒、寨卡病毒、德國麻疹病毒、人類免疫缺陷病毒(HIV)、流感病毒、賴薩病毒、克里米亞剛果出血熱病毒(Crimean-Congo, hemorrhagic fever virus)、漢江病毒、伊波拉病毒、馬堡病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、副流感病毒、呼吸道融合細胞病毒、狂犬病病毒及D型肝炎病毒(HDV)。
若干自體免疫性疾病被認為是炎性疾病及/或透過多種機制引起炎症。本揭示案中亦預期使用本文提供之抗體或ADC治療自體免疫性疾病。炎性疾病之非限制性實例包括：自體免疫性疾病或病症之實例包括關節炎，諸如類風濕性關節炎、急性關節炎、類風濕性關節炎、痛風性關節炎、急性痛風性關節炎、急性免疫性關節炎、慢性炎性關節炎、骨關節炎、II型膠原誘發性關節炎、感染性關節炎、來母關節炎(Lyme arthritis)、增生性關節炎、牛皮癬性關節炎、Still氏病、脊椎關節炎、幼發型類風濕性關節炎、骨關節炎、慢性進行性關節炎(arthritis chronica progrediente)、骨關節炎、慢性原發性多發性關節炎(chronic primary multiple polyarthritis chronica primaria)、反應性關節炎及關節黏連性脊椎炎；炎性過度增生皮膚疾病；牛皮鮮，諸如尋常型牛皮癬、點狀牛皮癬(gutatte psoriasis)、膿皰型牛皮癬、牛皮癬甲；特異反應(例如異位性疾病，例如花粉熱及Job氏症候群)；皮膚炎(例如接觸性皮膚炎、慢性接觸性皮膚炎、紅皮症、過敏性皮膚炎、過敏性接觸性皮膚炎、疱疹性皮膚炎、貨幣型皮膚炎(monetary dermatitis)、脂溢性皮膚炎、非特異性皮膚炎、原發性刺激性接觸性皮膚炎及異位性皮膚炎)；x性聯高IgM症候群；過敏性眼內炎性疾病；蕁麻疹，例如慢性過敏性蕁麻疹、慢性特發性蕁麻疹及慢性自體免疫性蕁麻疹；肌炎；多發性肌炎/皮肌炎；幼年型皮肌炎；中毒性表皮壞死；硬皮病，例如全身性硬皮病；硬化症，例如全身性硬化症、多發性硬化症(MS)、脊髓視覺MS、原發性進行性MS (PPMS)、復發性緩解型MS (RRMS)、進行性全身性硬化症、動脈粥樣硬化、動脈硬化、散播性硬化及共濟失調鞏膜視神經脊髓炎(ataxic scler optic neuromyelitis，NMO)；炎性腸病(IBD)，例如克隆氏病、自體免疫介導之胃腸病、結腸炎、潰瘍性結腸炎、潰瘍性結腸炎、顯微結腸炎、膠原形成性結腸炎、息肉狀結腸炎、壞死性小腸結腸炎、完全厚度結腸炎及自體免疫性炎性腸病；腸炎；壞疽性硬皮病；結節性紅斑；原發性硬化性膽管炎呼吸困難症候群，例如成人或急性呼吸困難症候群(ARDS)；腦膜炎；全部或部分眼球中膜層之炎症；虹膜炎；脈絡膜炎；自體免疫性血液疾病；風濕性脊椎炎；滑膜炎；遺傳性血管水腫；腦神經病症，諸如腦膜炎；妊娠期疱疹；妊娠期類天皰瘡；陰囊瘙癢；自體免疫性卵巢功能不全；由於IgE介導之疾病諸如Anaphyki腦炎之自體免疫性症狀突發性耳聾，例如ramssen腦病及肢體及/或腦幹腦炎；眼色素層炎，例如前眼色素層炎、急性前眼色素層炎、肉芽腫型眼色素層炎、非肉芽腫型眼色素層炎、晶狀體抗原眼色素層炎、後眼色素層炎或自體免疫性眼色素層炎；腎小球性腎炎(GN)伴有或不伴有腎病症候群，例如慢性或急性螺紋球體腎炎(chronic or acute thread Globe nephritis)、原發性GN、免疫介導之GN、膜GN (膜性腎病變)、特發性膜GN或特發性膜腎病、膜或膜增生性GN (MPGN)(例如I型及II型)及快速進行性GN；增生性腎炎；自體免疫性多種內分泌功能不全；龜頭炎，例如漿細胞局限性龜頭炎(plasma cell localized bullitis)；龜頭包皮炎；傳出神經環形紅斑；多形紅斑；環狀肉芽腫；光澤苔蘚(gloss lichen)；萎縮性苔蘚(Atrophic lichen)；比德爾苔蘚(bidar lichen)；多刺苔蘚(spiny lichen)；扁平苔癬；層板狀魚鱗病；剝落性皮膚炎(exfoliative keratosis)；癌前角化症；壞疽性硬皮病；過敏性症狀及反應；反應；濕疹，諸如過敏性及異位性濕疹、皮脂缺乏性濕疹、泡狀濕疹及泡狀掌蹠濕疹；氣喘，諸如支氣管氣喘、支氣管氣喘及自體免疫性氣喘；T細胞潤濕及症狀，包括慢性炎性反應；對外來抗原之免疫反應，諸如在妊娠期間之致命性ABO血型；慢性肺部炎性疾病；自體免疫性心肌炎；白血球黏附分子缺乏症；狼瘡，諸如狼瘡性腎炎；狼瘡性腦炎、兒童狼瘡、非腎性狼瘡、腎外狼瘡、盤狀狼瘡及盤狀紅斑狼瘡、禿頭性狼瘡、全身性狼瘡Temato SLE、皮膚SLE、亞急性皮膚SLE、新生兒狼瘡症候群(NLE)及播散性狼瘡、紅斑狼瘡(播散性紅斑狼瘡)；幼年發作型(I型)糖尿病，例如小兒胰島素依賴性糖尿病(IDDM)、成人發作型糖尿病(II型糖尿病)、自體免疫性糖尿病、特發性尿崩症、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病及糖尿病性主動脈病；由細胞介素及T淋巴球介導之與急性及延遲過敏症相關之免疫反應；結核病；類肉瘤病；肉芽腫病，例如淋巴瘤樣肉芽腫病；華格納氏肉芽病；無顆粒白血球增多症；血管炎病，例如血管炎、大血管血管炎、類風濕性多發性肌痛及巨大細胞動脈炎(高安動脈炎)、中等血管血管炎、川崎病、結節性多動脈炎/結節性動脈周圍炎、顯微多血管炎、免疫性血管炎、CNS血管炎、皮膚血管炎、過敏性血管炎、壞死性血管炎、全身壞死性血管炎、ANCA相關性血管炎、Churg-Strauss血管炎或症候群(CSS)及ANCA相關性小血管血管炎；顳動脈炎；再生不良性貧血；自體免疫性再生不良性貧血；庫姆氏陽性貧血(Coombs positive anemia)；Diamond Blackfan貧血；溶血性貧血或免疫性溶血性貧血(例如自體免疫性溶血性貧血(AIHA))、致命性貧血(perniciosemia/anemia perniciosa)；艾迪森氏病；真紅細胞貧血或紅血球發育不全(PRCA)；因子VIII缺乏症；A型血友病、自體免疫性嗜中性球減少症；全部血球減少症；白血球減少症；包括白血球滲漏之疾病；CNS炎性疾病；多器官損傷症候群，例如繼發於敗血症、創傷或出血；抗原-抗體複合物介導之疾病；腎小球基底膜抗體病；抗磷脂抗體症候群；過敏性貝西氏病/症候群；Castleman症候群；古巴士德氏症候群；Reynaud症候群；休格倫氏症候群；Stevens-Johnson二氏症候群；大皰性類天皰瘡及皮膚類天皰瘡、天皰瘡、尋常型天皰瘡、落葉性天皰瘡(deciduous pemphigus)、天皰瘡黏膜性類天皰瘡及紅斑型天皰瘡；自體免疫性多內分泌性內分泌病、Reiter氏病或症候群；熱損傷；子癇前期；免疫複合物病症諸如免疫複合物腎炎及抗體介導之腎炎；多發性神經病變；慢性腎病，諸如IgM多發性神經病變及IgM介導之神經官能病；血小板減少症(例如在患有心肌梗塞之患者中)，例如栓塞性血小板減少性紫癜病(TTP)、輸血後紫癜(PTP)、肝素誘導性血小板減少症、自體免疫性或免疫介導性血小板減少症、特發性血小板減少性紫癲(ITP)及慢性或急性ITP；鞏膜炎，例如特發性角膜鞏膜炎，及上鞏膜炎(episclerosis)；睪丸及卵巢自體免疫性疾病，諸如自體免疫性睪丸炎；原發性甲狀腺機能減退症；副甲狀腺機能減退症；自體免疫性內分泌疾病，諸如甲狀腺炎、自體免疫性甲狀腺炎、橋本氏病、慢性甲狀腺炎(橋本氏甲狀腺炎)或亞急性甲狀腺炎、自體免疫性甲狀腺病、特發性甲狀腺機能減退症、格雷氏病、多腺症候群、自體免疫性多腺症候群及多腺內分泌病症症候群；伴腫瘤症候群，諸如神經性伴腫瘤症候群；Lambert-Eaton二氏肌無力症候群或Eaton-Lambert二氏症候群；僵人症候群或全身性僵硬性徵症候群；腦脊髓炎，例如過敏表現脊髓炎、腦脊髓炎過敏症及實驗性過敏性腦脊髓炎(EAE)；重症肌無力，例如與胸腺瘤小腦變性相關之重症肌無力；神經肌肉張力；眼陣攣或眼陣攣性肌陣攣症候群(OMS)；感覺神經病變；多灶性運動神經病變；席漢氏症候群(Sheehan syndrome)；肝炎，諸如自體免疫性肝炎、慢性肝炎、狼瘡狀肝炎、巨大細胞肝炎、慢性活動性肝炎及自體免疫性慢性活動性肝炎；淋巴樣間質性肺炎(LIP)；阻塞性小支氣管炎(非移植)對比NSIP；格巴二氏症候群；伯格氏病(IgA腎病)；特發性IgA腎病；線性IgA皮膚病；急性嗜中性皮膚病；角層下膿皰性皮膚病(subhorny pustular dermatosis)；例如原發性膽汁性肝硬化及肺纖維化；自體免疫性腸病症候群；乳糜瀉(Celiac/Coeliac disease)；脂質糞便(lipostool) (麩蛋白腸病)；難治性口炎性腹瀉；特發性口炎性腹瀉；球蛋白血症；肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS；路易里克氏病(Louis Gehrig disease))；環狀動脈病；自體免疫性耳病，諸如自體免疫性內耳病(AIED)；自體免疫性聽力損傷；軟骨炎，例如難治性或復發型或復發性多發性軟骨炎；細胞蛋白沉積病(cytoproteinosis)；Cogan氏症候群/非梅毒間質性角膜炎；貝爾麻痹(Bell paralysis)；斯威特氏病/症候群；自體免疫性酒渣自體免疫；與帶狀泡疹相關之疼痛；類澱粉變性症；非癌性淋巴球增多症；原發性淋巴水腫，例如單株B細胞淋巴巨細胞症(例如，良性單株免疫球蛋白及意義不明單株丙種球蛋白病(MGUS))；周邊神經病變；通道病，例如癲癇、偏頭痛、心律不整、肌肉失能、痔瘡、失明、週期性麻痺及CNS通道病；自閉症；炎性肌病；局灶節段性腎小球硬化(FSGS)；內分泌性眼病；自體免疫性肝病；纖維肌痛症；多內分泌功能不全；施密特氏症候群(Schmidt syndrome)；腎上腺炎；胃萎縮症；早老性失智症；脫髓鞘病，諸如自體免疫性脫髓鞘及慢性炎性脫髓鞘多發性神經病變；Dressler氏症候群；斑禿；完全禿髮；CREST症候群(鈣化、Raynaud氏現象、亞食道蠕動、指端硬化(sclerotia)及毛細血管擴張)；男性及女性自體免疫性不孕(例如抗精子抗體)；混合性結締組織病；蔡格司病；風濕熱；復發性自然流產；農夫肺；紅斑性紅斑；心臟切開術後症候群；庫興氏症候群；禽病；過敏性肉芽腫血管炎；良性皮膚淋巴球血管炎；Alport症候群；肺泡炎，例如過敏性肺泡炎及纖維肺泡炎；間質性肺炎；輸血反應；麻瘋；瘧疾；Samter症候群；卡布蘭症候群(Caplan syndrome)；心內膜炎；心內膜心肌纖維化；彌漫性間質性肺纖維化；間質性肺纖維化(Interstitial mung fibrosis)；肺纖維化；特發性肺纖維化；囊腫纖維化；眼內炎；持續增加之紅斑；胎兒紅血球母細胞增多症；嗜酸性球筋膜炎；蘇爾曼症候群(Schulman syndrome)；Felty氏症候群；輕癱(flaresis)；睫狀體炎症(ciliary body inflammation)，甚至慢性睫毛炎(Chronic ciliitis)、異時睫毛炎、虹膜睫毛炎(急性或慢性)或福客睫毛炎(Fuch ciliitis)；Henoch-Schonlein二氏紫斑病；敗血症；內部毒血症；胰臟炎；甲狀腺中毒症(thyroxicosis)；伊凡氏症候群；自體免疫性腺功能不全；西登哈姆舞蹈病(Sydenham chorea)；鏈球菌後腎炎；阻塞性血栓性脈管炎；甲狀腺素中毒；背側動脈(dorsalis)；脈絡膜炎；巨大細胞多發性肌痛；慢性過敏性肺炎；乾性角膜結膜炎；流行性角膜結膜炎；特發性腎病症候群；微小變化性腎病；良性家族性及缺血性灌注病症；缺血性心臟疾病；灌注；視網膜自體免疫；關節炎症；支氣管炎；慢性阻塞性氣道/肺病；矽肺病；口瘡；口瘡口炎；動脈硬化性病；無精子形成(Aspermiogenese)；自體免疫性溶血、Croglob Nchisho；Dupuis Trang (Dupuytren)攣縮；晶狀體過敏性眼內炎(晶狀體蛋白過敏性眼內炎(endophthalmia phacoanaphylactica))；過敏性小腸結腸炎；麻瘋性結節性紅斑；特發性面神經麻痹；風濕熱；Hamman-Rich二氏病；感官神經性聽力損失；陣發性血紅素尿症(paroxysmal hemoglobinuria/haemoglobinuria paroxysmatica)；性腺功能障礙；局灶性迴腸炎；白血球減少症；傳染性單核白血球增多症；原發性特發性黏液水腫；腎病；交感性眼炎(ophthalmia symphatica)；肉芽腫性睾丸炎(orchitis granulomatosa)；胰臟炎；急性多發性神經病變；壞疽性膿皮病；奎汶氏甲狀腺炎(Quervain's thyroiditis)；獲得性脾萎縮症；非惡性胸腺瘤；白斑病；毒性休克徵候群；食物中毒；包括T細胞浸潤之症狀；白血球黏附分子缺乏症；與由細胞介素及T淋巴球介導之急性及延遲過敏症相關之免疫反應；包括白血球滲漏之症狀；多器官損傷症候群；由抗原-抗體複合物介導之疾病；抗腎小球基底膜抗體病；過敏神經炎；自體免疫性多腺內分泌缺乏症；眼色素層炎；原發性黏液水腫；自體免疫性萎縮性胃炎；可互換性眼炎；腎病症候群；胰島炎；多腺內分泌缺乏症；i型多腺自體免疫性症候群(成人發作性特發性副甲狀腺低能症：AOIH)心肌病，諸如擴張性心肌病；獲得性大孢性表皮鬆懈(EBA)；血色素沉著症；心肌炎；腎病症候群；原發性硬化性膽管炎；化膿性或非化膿性鼻竇炎；鼻竇炎(Rhinosinitis)；篩竇炎、額竇炎、上頜竇炎或蝶竇炎；與嗜酸性球相關之疾病，諸如嗜酸性球增多症、肺濕潤性嗜酸性球增多症、嗜酸性球增加之肌痛症候群、Loffler氏症候群、慢性嗜酸性球肺炎、局部肺嗜酸性球增多症、支氣管與肺的麴菌病、麴菌瘤或包括嗜酸性球之肉芽腫；重度過敏；血清陰性脊柱關節病(seronegative spondyloarthritides)；多腺內分泌自體免疫性疾病；硬化性慢性黏膜皮膚腺病；布魯頓症候群；嬰兒期短暫性低加馬球蛋白血症；偉-爾二氏症候群(Wiskott-Aldrich syndrome)；共濟失調周圍血管舒張症候群；血管舒張；與膠原病相關之自體免疫性疾病、風濕病、神經疾病、淋巴腺炎、血壓反應降低、血管功能障礙、組織損傷、心血管缺血、感覺過敏、腎缺血、腦缺血及血管生成相關性疾病；過敏性過敏症；血管球性腎炎；再灌注損傷；缺血性再灌注病症；心肌或其他組織再灌注損傷、淋巴瘤支氣管炎；炎性皮膚病；由於急性炎性成分之皮膚病；多器官衰竭；水皰病；腎元皮質壞死；急性化膿性腦病或其他中樞神經系統炎性疾病；眼部及眼眶炎症疾病；顆粒球輸注相關症候群；細胞介素誘導之毒性；嗜睡病；急性重度炎症；慢性難治性炎症；腎盂腎炎；動脈增生；消化性潰瘍；心瓣炎(valvitis)；及子宮內膜異位症。
在一些實施例中，本文提供之抗體可用於治療與蛋白酶活化受體2 (PAR-2)上調相關之疾病或損傷。在一些實施例中，本文提供之抗體可用於治療與PAR-2上調相關之心血管疾病或損傷。在一些實施例中，心血管疾病或損傷為心肌梗塞。在一些實施例中，心血管疾病或損傷為動脈粥樣硬化。與PAR-2上調相關之疾病之實例提供於例如Heuberger, Dorothea M.及Reto A. Schuepbach. Thrombosis journal17.1 (2019): 1-24以及Kagota, Satomi等人 BioMed research international第2016卷(2016): 3130496，其各自之相關揭示內容以引用方式併入本文。
在某些實施例中，本文提供之抗體可用於治療與炎症相關之癌症。舉例而言，可在Car-T療法後投與本文提供之抗體以用於治療CRS (細胞介素釋放症候群)。舉例而言，許多與慢性炎症相關之癌症包括結直腸癌、肺癌、間皮瘤、肝癌、食道癌、胃癌、胰臟癌、膽囊癌、卵巢癌/子宮癌、前列腺癌、膀胱癌、甲狀腺癌、唾液腺癌、口(鱗狀)癌及皮膚癌、霍奇金氏病(Hodgkin’s disease)/非霍奇金氏淋巴瘤、及MALT (黏膜相關性淋巴組織)。炎症相關性癌症之其他實例提供於Coussens LM及Werb Z. Nature.2002;420(6917):860-867中，該文獻以引用方式整體併入。 13. 炎症及凝血病變
炎症啟動凝血、降低天然抗凝機制之活性且損害分解纖維蛋白系統。炎性細胞介素為參與凝血活化之主要介質。急性炎症已顯示導致凝血之系統性活化。全身性炎症導致凝血活化，這是由於TF介導之凝血酶生成。抗凝級聯中之介質(例如血栓調節蛋白)減少對炎性介質之細胞反應且促進一些炎性介質之中和。炎症與凝血之間的相互作用詳述於Esmon, C.T. British journal of haematology131.4 (2005): 417-430，其以引用方式整體併入。
凝血病變為身體形成凝塊之能力受損之疾患。在患者中，其表現為難以控制之出血、慢性出血及/或過量出血，尤其是在攻擊諸如損傷、手術或分娩後。凝血病變由凝血因子之肝臟合成降低及散播性血管內凝血病變(DIC)之存在引起，該散播性血管內凝血病變為凝血因子及血小板加速消耗之過程。在DIC中，存在凝血酶之不受調節及過量生成及因此凝血因子(例如，纖維蛋白原及因子VIII)之消耗。研究已顯示炎性活化與微血管血栓形成共同導致患有嚴重感染及DIC之患者發生多器官衰竭。(參見Levi, M.等人， Cardiovascular research60.1 (2003): 26-39，其以引用方式整體併入)。
如本文所用，術語「凝血病變」係指出血傾向增加，這可歸因於正常凝血級聯之任何促凝血成分之任何定性或定量缺乏或纖維蛋白分解之任何上調。凝血病變可經分類為獲得性、先天性或醫源性。其可使用凝血酶原時間(PT)及部分凝血激酶時間(PTT)之量測來診斷及追蹤。在某些實施例中，本文提供之抗體可用於治療凝血病變(例如，獲得性凝血病變、先天性凝血病變)。可使用本文提供之抗體或ADC治療之凝血病變的實例包括但不限於散播性血管內凝血病變(DIC；耗損性凝血病變)、A型血友病、B型血友病、馮威里氏病(von Willebrand disease)、特發性血小板減少症、一或多種接觸因子(諸如因子XI、因子XII、前微血管增滲素(precallicrein)及高分子量激肽原(HMMK))之缺乏症、一或多種與顯著臨床出血相關之因子(諸如因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XIII、因子II (低凝血酶原血症)及馮威里氏因子)之缺乏症、維生素K缺乏症、與纖維蛋白原相關之病症(包括無纖維素原血症、低纖維素原血症及纖維蛋白原不良血症(dysphibrinogenemia))、α2-胞漿素缺乏症及重度出血(諸如由肝病、腎病、血小板減少症、血小板功能障礙、血腫、血腫、血腫、血腫性創傷、體溫過低引起之出血、在月經及妊娠期間之出血)。在一些實施例中，NASP用於治療先天性出血病症，包括A型血友病、B型血友病及馮威里氏病。獲得性凝血病症之實例包括因子VIII缺乏症，馮威里氏因子、因子IX、因子V、因子XI、因子XII及因子XIII缺乏症，特別為由針對凝血因子之抑制劑或自體免疫反應引起之病症，或由導致凝血因子之合成降低之疾病或疾患引起的止血障礙。凝血病變及用於評定凝血病變之變化(例如由於使用抗體之治療)之方法的其他實例提供於美國申請案第13/721,802號中，該申請案以引用方式整體併入。
在某些實施例中，個體罹患凝血病變且用本文提供之抗體或ADC進行之治療減少或減輕凝血病變之一或多種症狀。 14. 炎性細胞介素及趨化介素
在某些實施例中，在向個體投與後，本文提供之抗體或ADC減小炎性細胞介素或趨化介素之濃度。炎性細胞介素或促炎性細胞介素為自免疫細胞(例如，輔助T細胞(Th)、巨噬細胞)分泌且促進炎症之傳訊分子之類型。炎性趨化介素為主要作為白血球之化學吸引因數起作用，從而將單核球、嗜中性球及其他效應細胞自血液募集至感染或組織損傷部位之小細胞介素或傳訊蛋白。其可分類為四個主要亞家族：CXC、CC、CX3C及XC，其全部藉由選擇性結合到位於靶細胞表面上之趨化介素受體來發揮生物活性。
在某些實施例中，在投與本文提供之抗體或ADC後，相對於基線水準或不同抗炎劑，該抗體或ADC導致炎性細胞介素及趨化介素減少，其中該等炎性細胞介素及趨化介素為以下中之一或多者：IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IFNγ、GM-CSF、TNFα、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL19、CCL20、CCL25、CXCL1、CXCL2及CXCL10。
IL-1α (介白素1α)為介白素1細胞介素家族之成員。其為參與多種免疫反應、炎性過程及造血作用之多向性細胞介素。IL-1α由單核球及巨噬細胞作為原蛋白產生，其經蛋白水解處理且因應於細胞損傷而釋放，且因此誘導細胞凋亡。
IL-1β (介白素1β)為介白素1細胞介素家族之成員且由經活化巨噬細胞作為原蛋白產生，其由半胱天冬酶1 (CASP1/ICE)蛋白水解處理成其活性形式。IL-1β為炎性反應之重要介質，且參與多種細胞活動，包括細胞增殖、分化及細胞凋亡。已發現在中樞神經系統(CNS)中此細胞介素誘導環加氧酶2 (PTGS2/COX2)造成炎性疼痛過敏症。
IL-2 (介白素2)為對T淋巴球及B淋巴球之增殖為重要之細胞介素。IL-2為對微生物感染之免疫反應之一部分，且區分外來(「非自身」)與「自身」。在T細胞成熟之胸腺中，其藉由促進某些不成熟T細胞分化成調節性T細胞以防止T細胞破壞健康細胞，來預防自體免疫性疾病。小鼠中靶向破壞類似基因導致潰瘍性結腸炎樣疾病，這表明此基因在對抗原刺激之免疫反應中之重要作用。
IL-4 (介白素4)為由經活化T細胞產生之多向性細胞介素。細胞介素之作用之一為刺激經活化B細胞及T細胞增殖以及B細胞向漿細胞分化。血管外組織中IL-4之存在促進巨噬細胞向M2細胞之替代性活化且抑制巨噬細胞向M1細胞之經典活化。
IL-5 (介白素5)為用作B細胞及嗜酸性球之生長及分化因子之細胞介素，且其在嗜酸性球形成、成熟、募集及存活之調節方面起重要作用。IL-5升高已與嗜酸性球依賴性炎性疾病之發病原理相關。(參見Takatsu K., Proc Jpn Acad Ser B Phys Biol Sci. 2011;87(8):463-485，其以引用方式整體併入)。
IL-6 (介白素6)為在炎症及B細胞成熟中起重要作用之細胞介素。其為能夠在患有自體免疫性疾病或感染之人中誘導發熱之內源性熱原。該蛋白主要在急性及慢性炎症部位產生，其中該蛋白分泌到血清中且透過介白素6受體α誘導轉錄炎性反應。
IL-8 (介白素8、CXCL8或C-X-C模體趨化介素配體8)為一種趨化介素(CXC趨化介素家族之成員)，且為炎性反應之主要介質及強效血管生成因子。其主要由嗜中性球分泌，其中該趨化介素藉由將嗜中性球引導至感染部位來用作趨化性因子。
IL-10 (介白素10)為主要由單核球產生之細胞介素。其在免疫調節及炎症中具有多向性作用。其下調Th1細胞介素、MHC II類Ag及共刺激分子在巨噬細胞上之表現。其亦增強B細胞存活、增殖及抗體產生。其亦阻斷NF-κ B活性，且參與調節JAK-STAT傳訊路徑。小鼠中之敲除研究表明此細胞介素作為腸道中之必需免疫調節劑之功能。(參見Schreiber, S.等人， Gastroenterology108.5 (1995): 1434-1444，其以引用方式整體併入)。
IFNγ (干擾素γ)為作為II型干擾素類別之成員之可溶性細胞介素。其為結合至干擾素γ受體從而引發對病毒及微生物感染之細胞反應的同二聚體。編碼IFNγ之基因中之突變與對病原性感染及若干自體免疫性疾病之易感性增加相關。
GM-CSF (顆粒球-巨噬細胞集落刺激因子)為由巨噬細胞、T細胞、巨大細胞、自然殺手細胞、內皮細胞及成纖維細胞分泌之細胞介素。其為刺激幹細胞以產生顆粒球(嗜中性球、嗜酸性球及嗜鹼性球)及單核球之單體糖蛋白。其亦增強嗜中性球遷移。其已經識別為當受到阻斷或抑制時減少炎症之靶標。
TNFα (腫瘤壞死因子)為主要由巨噬細胞分泌且屬於腫瘤壞死因子(TNF)超家族之多功能促炎性細胞介素。其可結合至受體TNFRSF1A/TNFR1及TNFRSF1B/TNFBR且因此透過該等受體起作用。TNFα參與調節廣泛生物過程，包括細胞增殖、分化、細胞凋亡、脂質代謝及凝血。
CCL2 (C-C模體趨化介素配體2)為特徵在於兩個相鄰半胱胺酸殘基之CC趨化介素家族之成員。CCL2展示出對單核球及嗜鹼性球之趨化活性，但未展示對嗜中性球或嗜酸性球之趨化活性。其牽涉到特徵在於單核球浸潤之疾病之發病原理，該等疾病如牛皮癬、類風濕性關節炎及動脈粥樣硬化。
CCL3 (C-C模體趨化介素配體3或巨噬細胞炎性蛋白1-α)為CC趨化介素家族之成員。其透過結合至受體CCR1、CCR4及CCR5來在炎性反應中起作用。其為巨噬細胞、單核球及嗜中性球之化學吸引因數。
CCL4 (C-C模體趨化介素配體4)為由嗜中性球、單核球、B細胞、T細胞、成纖維細胞、內皮細胞及上皮細胞分泌之促分裂原誘導性單核因子，且為由CD8+ T細胞產生之主要HIV抑制性因子之一。所編碼蛋白經分泌且具有趨化性及炎性功能。
CCL5 (C-C模體趨化介素配體5)為特徵在於兩個相鄰半胱胺酸殘基之CC趨化介素家族之成員。此趨化介素用作血液單核球、記憶T輔助細胞及嗜酸性球之化學吸引因數。其引起組胺自嗜鹼性球釋放且活化嗜酸性球。此細胞介素為由CD8+細胞產生之主要HIV抑制性因子之一。
CCL19 (C-C模體趨化介素配體19)為特徵在於兩個相鄰半胱胺酸殘基之CC趨化介素家族之成員。其在正常淋巴球再循環及歸向中起作用。其亦在胸腺中T細胞之運輸以及T細胞及B細胞遷移至次級淋巴器官中起重要作用。
CCL20 (C-C模體趨化介素配體20)為特徵在於兩個相鄰半胱胺酸殘基之CC趨化介素家族之成員。其展示出對淋巴球之趨化活性且可抑制淋巴祖細胞之增殖。
CCL25 (C-C模體趨化介素配體25)為展示出對樹突狀細胞、胸腺細胞及經活化巨噬細胞之趨化活性但對周邊血液淋巴球及嗜中性球無活性之細胞介素。
CXCL1 (C-X-C模體趨化介素配體1)為透過G蛋白偶聯受體CXC受體2傳訊之趨化介素CXC亞家族之成員。CXCL1由巨噬細胞、嗜中性球及上皮細胞表現且具有嗜中性球化學吸引因數活性。此蛋白之異常表現與某些腫瘤之生長及進展相關。
CXCL2 (C-X-C模體趨化介素配體2或巨噬細胞炎性蛋白2-α)為在炎症部位表現之CXC亞家族之趨化介素。其由單核球及巨噬細胞分泌且對多形核白血球及造血幹細胞具有趨化性。
CXCL10 (C-X-C模體趨化介素配體10)為CXC亞家族之趨化介素。其為受體CXCR3之配體。此蛋白與CXCR3之結合導致多向性作用，包括單核球、自然殺手細胞及T細胞遷移之刺激以及黏附分子表現之調節。
炎性細胞介素及趨化介素之非限制性實例提供於Turner, M.D.等人， Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Cell Research1843.11 (2014): 2563-2582，其以引用方式整體併入。
本文所述之炎性細胞介素及趨化介素可例如使用免疫組織化學、ELISA、MSD-ECLA、Olink面板(例如定製Olink面板；Olink Proteomics, Uppsala, Sweden)或Luminex Multiplex檢定來量測。或者，血液樣品中炎性細胞介素之表現水準可使用RT-PCR量測。 15. 用於治療炎性疾病之比較療法
本揭示案之抗體及ADC可用於治療炎性疾病。在某些實施例中，本文提供之抗體或ADC減輕或減少炎性疾病之症狀或指示之程度大於比較療法其他抗炎治療劑(亦稱為抗炎劑)。該等抗炎劑為已知或指示用於治療本文所預期之炎性疾病之替代性療法。舉例而言，在某些實施例中，比較抗炎劑選自以下中之任一者：非類固醇抗炎藥(NSAID)、類固醇抗炎藥、β促效劑、抗膽鹼能藥、抗組胺藥及甲基黃嘌呤。在某些實施例中，比較抗炎劑為IL-6抑制劑(可溶性IL-6及IL-6R)、GM-CSF抑制劑、TNFα抑制劑、抗IL-1α、地塞米松、趨化介素及趨化介素受體拮抗劑或JAK抑制劑。在某些實施例中，比較抗炎劑為環孢素。
由於IL-6在炎症及自體免疫性疾病(上文論述)中之作用，IL-6被視為自體免疫性疾病之可行靶標。IL-6抑制劑之非限制性實例包括：抗IL-6抗體、抗IL-6受體抗體、抗gp130抗體、IL-6變異體、IL-6受體變異體、IL-6或IL-6受體之可溶性及部分肽以及顯示類似活性之低分子量化合物及質子(例如C326 Avimer ( Nature Biotechnology(2005) 23:1556-61，其以引用方式整體併入))。在患有類風濕性關節炎(RA)之患者之滑膜及血清中存在高水準IL-6。最新研究已在使用IL-6抑制劑治療RA中顯示出顯著功效。(參見Hennigan S.及Kavanaugh A. Ther Clin Risk Manag. 2008;4(4):767-775，其以引用方式整體併入)。可用IL-6抑制劑藥物之實例包括托珠單抗(tocilizumab)(RoActemra, Roche)及沙利姆單抗(sarilumab) (Kevzara, Sanofi)。
托珠單抗為具有以下輕鏈及重鏈序列之重組人類化單株抗體IL-6受體抑制劑： 托珠單抗輕鏈：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGNTLPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 930) 托珠單抗重鏈：QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGYSITSDHAWSWVRQPPGRGLEWIGYISYSGITTYNPSLKSRVTMLRDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARSLARTTAMDYWGQGSLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 931)
沙利姆單抗為結合至膜結合及可溶性介白素6 (IL-6)受體形式之完全人類抗IL-6R單株IgG1抗體。其具有以下輕鏈及重鏈序列： 沙利姆單抗輕鏈：DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFASYYCQQANSFPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 932) 沙利姆單抗重鏈：EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASRFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAENSLFLQMNGLRAEDTALYYCAKGRDSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 933)
由於GM-CSF之促炎性功能，已開發療法來靶向及抑制細胞介素。靶向GM-CSF之抗體、抗體片段及其他GM-CSF拮抗劑之非限制性實例提供於美國申請案第16/442,779號及第11/944,162號中，其各自以引用方式整體併入。
TNFα抑制劑為干擾TNFα (上文所述)之活性之劑。其包括但不限於本文所述之抗TNFα人類抗體及抗體部分中之各者以及美國專利第6,090,382號；第6,258,562號；第6,509,015號及美國專利申請案第09/801,185號(如今的美國專利第7,223,394號)及第10/302,356號中所述之彼等者，該等專利各自以引用方式整體併入。在一個實施例中，本發明中所用之TNFα抑制劑為抗TNFα抗體或其片段，包括英夫利昔單抗(infliximab)(Remicade®, Johnson and Johnson；描述於美國專利第5,656,272號，其以引用方式併入本文)、CDP571 (人類化單株抗TNF-α IgG4抗體)、CDP 870 (人類化單株抗TNF-α抗體片段)、抗TNF dAb (Peptech)、CNTO 148 (戈利木單抗(golimumab)或欣普利(Simponi)；Medarex and Centocor，參見國際申請案第PCT/US2001/024785號，其以引用方式整體併入)及阿達木單抗(adalimumab)(Humira® Abbott Laboratories，人類抗TNF mAb，作為D2E7描述於美國專利第6,090,382號，其以引用方式整體併入)。可用於本發明中之額外TNF抗體描述於美國專利第6,593,458號；第6,498,237號；第6,451,983號；及第6,448,380號，其各自以引用方式整體併入。在另一個實施例中，TNFα抑制劑為TNF融合蛋白，例如依那西普(etanercept)(Enbrel®, Amgen；描述於國際申請案第PCT/US1990/004001號，其以引用方式整體併入)。在另一個實施例中，TNFα抑制劑為重組TNF結合蛋白(r-TBP-I) (Serono)。TNFα抑制劑之另一個實例為培塞利珠單抗(certolizumab pegol)(Cimzia)。
培塞利珠單抗為針對腫瘤壞死因子-α (TNF-α)之聚乙二醇化單株抗體。下文提供重鏈及輕鏈之示範性序列： 培塞利珠單抗輕鏈：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVGTNVAWYQQKPGKAPKALIYSASFLYSGVPYRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNIYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 934) 培塞利珠單抗重鏈：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYVFTDYGMNWVRQAPGKGLEWMGWINTYIGEPIYADSVKGRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARGYRSYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCAA (SEQ ID NO: 935)
IL-1α抑制劑干擾IL-1α (上文所述)之活性。IL-1α抑制劑之非限制性實例包括貝邁奇單抗(Bermekimab) (MABp1或Xilonix)及列洛西普(Rilonacept)。
貝邁奇單抗(MABp1或Xilonix)為靶向介白素1 α之IgG1k同型之人類單株抗體。下文提供貝邁奇單抗重鏈及輕鏈之示範性序列： 貝邁奇單抗重鏈：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCTASGFTFSMFGVHWVRQAPGKGLEWVAAVSYDGSNKYYAESVKGRFTISRDNSKNILFLQMDSLRLEDTAVYYCARGRPKVVIPAPLAHWGQGTLVTFSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 936) 貝邁奇單抗輕鏈：DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASNLETGVPSRFSGSGSGSDFTLTISSLQPEDFATYYCQQTSSFLLSFGGGTKVEHKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 937)
列洛西普為用作介白素1抑制劑之二聚融合蛋白且用於治療CAPS，其亦稱為隱熱蛋白相關週期症候群，包括家族性冷因型自體炎性症候群(FCAS)及Muckle-Well氏症候群(MWS)。IL-1α為其靶標之一。下文提供列洛西普之示範性序列： SERCDDWGLDTMRQIQVFEDEPARIKCPLFEHFLKFNYSTAHSAGLTLIWYWTRQDRDLEEPINFRLPENRISKEKDVLWFRPTLLNDTGNYTCMLRNTTYCSKVAFPLEVVQKDSCFNSPMKLPVHKLYIEYGIQRITCPNVDGYFPSSVKPTITWYMGCYKIQNFNNVIPEGMNLSFLIALISNNGNYTCVVTYPENGRTFHLTRTLTVKVVGSPKNAVPPVIHSPNDHVVYEKEPGEELLIPCTVYFSFLMDSRNEVWWTIDGKKPDDITIDVTINESISHSRTEDETRTQILSIKKVTSEDLKRSYVCHARSAKGEVAKAAKVKQKVPAPRYTVEKCKEREEKIILVSSANEIDVRPCPLNPNEHKGTITWYKDDSKTPVSTEQASRIHQHKEKLWFVPAKVEDSGHYYCVVRNSSYCLRIKISAKFVENEPNLCYNAQAIFKQKLPVAGDGGLVCPYMEFFKNENNELPKLQWYKDCKPLLLDNIHFSGVKDRLIVMNVAEKHRGNYTCHASYTYLGKQYPITRVIEFITLEENKPTRPVIVSPANETMEVDLGSQIQLICNVTGQLSDIAYWKWNGSVIDEDDPVLGEDYYSVENPANKRRSTLITVLNISEIESRFYKHPFTCFAKNTHGIDAAYIQLIYPVTNSGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 938)
地塞米松或MK-125為在位置9處氟化且用於治療內分泌病、風濕性病、膠原病、皮膚病、過敏性病、眼部病、胃腸病、呼吸道病、血液學病、腫瘤、水腫及其他疾患之皮質類固醇。下文提供地塞米松之示範性結構：
如本文所用，術語「趨化介素拮抗劑」及「趨化介素受體拮抗劑」係指抑制、降低、消除或阻斷趨化介素與一或多種其同源受體之結合之藥物或分子。趨化介素拮抗劑及趨化介素受體拮抗劑之非限制性實例提供於美國申請案第15/759,886號及第10/996,353號中，其各自以引用方式整體併入。
JAK抑制劑藉由抑制Janus激酶家族(JAK1、JAK2、JAK3、TYK2)中一或多種之活性，從而干擾JAK-STAT傳訊路徑來起作用。Janus激酶(JAK)家族在增殖之細胞介素依賴性調節及參與免疫反應之細胞之作用中起重要作用。JAK抑制劑之非限制性實例提供於美國申請案第12/401,348號及國際申請案第PCT/US2017/025117號，其各自以引用方式整體併入。
AZD1480為JAK2激酶之強效三磷酸腺苷競爭性小分子抑制劑。其已在研究實體惡性腫瘤、後真性紅血球增多症、原發性骨髓纖維化(PMF)及原發性血小板過多症骨髓纖維化(Essential Thrombocythaemia Myelofibrosis)之治療之試驗中使用。其已顯示在人類多發性骨髓瘤細胞中抑制生長、存活以及FGFR3及STAT3傳訊以及下游靶標(包括週期蛋白D2)。(參見Scuto, Anna等人， Leukemia25.3 (2011): 538-550，其以引用方式整體併入)。下文提供AZD1480之示範性結構：
環孢素(CsA)為鈣調磷酸酶抑制劑，以其預防器官移植排斥及治療各種炎性及自體免疫性疾患之免疫調節特性為人所知。下文提供環孢素之示範性結構：
抗炎劑之非限制性實例包括非類固醇抗炎藥(NSAID)、類固醇抗炎藥、β促效劑、抗膽鹼能藥、抗組胺藥(例如乙醇胺、乙二胺、哌嗪及吩噻嗪)及甲基黃嘌呤。NSAID之實例包括但不限於阿司匹靈、伊布洛芬(ibuprofen)、柳酸鹽、乙醯胺酚、塞內昔布(celecoxib)、雙氯芬酸、依託度酸(etodolac)、非諾洛芬(fenoprofen)、吲哚美灑辛(indomethacin)、酮咯酸(ketoralac)、奧沙普嗪(oxaprozin)、萘丁美酮(nabumentone)、舒林酸、托美丁(tolmentin)、羅非西布(rofecoxib)、萘普生(naproxen)、酮洛芬(ketoprofen)及萘丁美酮。此類NSAID藉由抑制環氧合酶(例如COX-1及/或COX-2)來起作用。類固醇抗炎藥之實例包括但不限於糖皮質素、地塞米松、皮質酮、氫皮質酮、普賴鬆(prednisone)、普賴蘇穠(prednisolone)、曲安奈德(triamcinolone)、柳氮磺胺嘧啶及類花生酸諸如攝護腺素、前列凝素及白三烯。 16. 組合療法
在一些實施例中，本文提供之抗體或ADC與至少一種另外的治療劑一起投與。任何適合另外的治療劑都可與本文提供之抗體或ADC一起投與。在一些態樣中，另外的治療劑選自輻射、細胞毒性劑、化學治療劑、細胞抑制劑、抗激素劑、免疫刺激劑、免疫抑制劑、抗炎劑、抗血管生成劑及其組合。
另外的治療劑可藉由任何適合手段投與。在一些實施例中，本文提供之抗體或ADC及另外的治療劑被包括在同一醫藥組合物中。在一些實施例中，本文提供之抗體或ADC及另外的治療劑被包括在不同醫藥組合物中。
在其中本文提供之抗體或ADC及另外的治療劑被包括在不同醫藥組合物中之實施例中，該抗體或ADC之投與可在投與該另外的治療劑之前、同時及/或之後發生。 17. 診斷方法
亦提供了用於偵測來自個體之細胞上TF之存在的方法。此類方法可用於例如預測及評估對用本文提供之抗體或ADC治療之反應性。
在一些實施例中，該方法可用於偵測患有或疑似患有炎性疾病之個體中之TF。在一些實施例中，方法包括：(a)接收來自個體之樣品；以及(b)藉由使樣品與本文提供之抗體接觸來偵測樣品中TF之存在性或水準。在一些實施例中，方法包括：(a)向個體投與本文提供之抗體；以及(b)偵測個體中TF之存在性或水準。在一些實施例中，炎性疾病為結腸炎、炎性腸病、關節炎、急性肺損傷(ALI)、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)及呼吸道融合細胞病毒(RSV)中之任一者。在一些實施例中，炎性疾病涉及血管炎症。
在一些實施例中，方法包括：(a)向個體投與本文提供之ADC；以及(b)偵測個體中TF之存在性或水準。在一些實施例中，炎性疾病為結腸炎、炎性腸病、關節炎、急性肺損傷(ALI)、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)及呼吸道融合細胞病毒(RSV)中之任一者。
在一些實施例中，本文提供之抗體與螢光標記綴合。在一些實施例中，本文提供之抗體與放射性標記綴合。在一些實施例中，本文提供之抗體與酶標記綴合。
在一些實施例中，本文提供之ADC包含螢光標記。在一些實施例中，本文提供之ADC包含放射性標記。在一些實施例中，本文提供之ADC包含酶標記。
在一些實施例中，確定由此類細胞表現之TF之相對量。表現TF之細胞之比例及由此類細胞表現之TF之相對量可藉由任何適合方法來確定。在一些實施例中，使用流動式細胞測量術進行此類量測。在一些實施例中，使用螢光輔助細胞分選(FACS)進行此種量測。 18. 套組
亦提供了包含本文提供之抗體或ADC之套組。套組可用於如本文所述治療、預防及/或診斷疾病或病症。
在一些實施例中，套組包括容器及在該容器上或與該容器相關聯之標籤或包裝說明書。適合容器包括例如瓶、小瓶、注射器及IV溶液袋。容器可由諸如玻璃或塑料之各種材料形成。容器容納本身有效或與另一組合物組合時有效治療、預防及/或診斷疾病或病症之組合物。容器可具有無菌進入口。例如，若容器為靜脈輸液袋或小瓶，則其可能具有可經針頭刺穿之端口。組合物中之至少一種活性劑為本文提供之抗體或ADC。標籤或包裝說明書指示該組合物用於治療所選疾患。
在一些實施例中，套組可包含(a)第一容器及其中包含之第一組合物，其中第一組合物包含本文提供之抗體或ADC；及(b)第二容器及其中包含之第二組合物，其中第二組合物包含另外的治療劑。本發明之此實施例中之套組亦可包括包裝說明書，其指示該組合物可用於治療特定疾患。
另選地或另外地，套組亦可包括第二(或第三)容器，該第二(或第三)容器包含醫藥學上可接受之賦形劑。在一些態樣中，賦形劑為緩衝液。套組亦可包括在商業及使用者看來所需之其他材料，包括過濾器、針頭及注射器。 實例
下面為本發明之方法及組合物之實例。應當理解，考慮到本文提供之一般性描述，可實施各種其他實施例。
以下為用於進行本發明之特定實施例之實例。實例僅出於說明性目的而提供，且不意圖以任何方式限制本發明之範圍。已努力確保關於所用數值(例如量、溫度等)之準確性，但當然應慮及一些實驗誤差及偏差。
除非另外指示，否則本發明之實施將採用屬於此項技術之技能的常規蛋白質化學、生物化學、重組DNA技術及藥理學方法。此類技術充分說明於文獻中。參見例如T.E. Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties(W.H. Freeman and Company, 1993)；A.L. Lehninger, Biochemistry(Worth Publishers, Inc.,本期新增)；Sambrook等人， Molecular Cloning: A Laboratory Manual(第2版, 1989)； Methods In Enzymology(S. Colowick及N. Kaplan編, Academic Press, Inc.)； Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版(Easton, Pennsylvania: Mack Publishing Company, 1990)；Carey及Sundberg Advanced Organic Chemistry第3版(Plenum Press)第A及B卷(1992)。 實例 1 ： TF 抗體之生成
將人類、食蟹猴及小鼠TF細胞外域(ECD)片段表現為C端His或Fcγ片段融合體。按照製造商之建議，用編碼人類、食蟹猴或小鼠TF ECD–His6 (TF-His；分別為SEQ ID NO:811、815及819)之pcDNA3.1V5-HisA (ThermoFisher Scientific)或編碼人類、食蟹猴或小鼠TF ECD–Fc (TF-Fc；分別為SEQ ID NO:812、816及820)之pFUSE-hIgG1-Fc (Invivogen, San Diego, CA, USA)瞬時轉染Expi293細胞(ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA)。對於His標記之蛋白，用330 mM氯化鈉及13.3 mM咪唑對藉由離心自細胞中清除之細胞培養上清液進行預處理。使用推薦之程序，分別藉由用HisTrap HP及MabSelect SuRe管柱(GE Healthcare Bio-Sciences, Marlborough, MA, USA)之親和層析法純化TF-His6及TF-Fc蛋白。藉由用MabSelect SuRe管柱之親和層析法，之後進行尺寸排阻層析法來對Expi293中表現之FVII-Fc進行純化。按照建議用15倍莫耳過量之Sulfo-NHS-SS-生物素(ThermoFisher Scientific)對TF-His6及TF-Fc蛋白進行生物素化。藉由使用Superdex 200 Increase 10/300管柱(GE Healthcare Bio-Sciences)之尺寸排阻層析法進一步純化非標記及生物素化蛋白。
如下所述，藉由使用生物素化重組TF蛋白作為篩選抗原之基於Adimab™酵母之抗體呈遞來生成針對人類TF之人類抗體。評估所有針對人類TF之抗體與食蟹猴及小鼠TF之交叉反應性。抗體與人類、食蟹猴及小鼠TF之結合活性展示於 表 5。 I.    用於分離抗TF抗體之文庫詢問及選擇方法 初始文庫選擇
如前所述，設計、生成及繁殖八個初始人類合成酵母文庫，其各自具有之多樣性為約10 9(參見例如WO2009036379；WO2010105256；WO2012009568；Xu等人， Protein Eng Des Sel., 2013, 26(10):663-70)。使用用於單體人類TF選擇之八個初始文庫進行八次平行選擇。
對於前兩輪選擇，基本如所述進行利用Miltenyi MACS系統之磁珠分選技術(Siegel等人， J Immunol Methods,2004, 286(1-2):141-53)。簡言之，將酵母細胞(約10 10個細胞/文庫)與10 nM生物素化人類TF Fc融合抗原在室溫下於含0.1% BSA之FACS洗滌緩衝液PBS中孵育15分鐘。用50 mL冰冷之洗滌緩衝液洗滌一次後，將細胞沉澱重懸於40 mL洗滌緩衝液中，且將500 μl Streptavidin MicroBeads (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany；目錄號130-048-101)添加到酵母中，並在4℃下孵育15分鐘。接下來，將酵母沉澱，重懸於5 mL洗滌緩衝液中，並加載到MACS LS管柱(Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany；目錄號130-042-401)上。加載5 mL後，用3 mL FACS洗滌緩衝液洗滌管柱3次。然後將管柱自磁場中移出，並用5 mL生長培養基溶析酵母，然後使其生長過夜。
在兩輪MACS後，使用流動式細胞測量術(FACS)進行以下四輪分選。對於第一輪FACS，沉澱約5×10 7個酵母，用洗滌緩衝液洗滌3次，且在室溫下與10 nM每種小鼠及/或食蟹猴TF抗原之生物素化Fc融合蛋白一起孵育10至15 min。然後洗滌酵母兩次，且用1:100稀釋之LC-FITC (Southern Biotech, Birmingham, Alabama；目錄號2062-02)以及1:500稀釋之SA-633 (Life Technologies, Grand Island, NY；目錄號S21375)或1:50稀釋之EA-PE (Sigma-Aldrich, St Louis；目錄號E4011)二次試劑在4℃下染色15分鐘。用冰冷洗滌緩衝液洗滌兩次後，將細胞沉澱重懸於0.4 mL洗滌緩衝液中，並轉移至蓋有濾網之分選管。使用FACS ARIA分選儀(BD Biosciences)進行分選，且確定分選門以針對TF結合進行選擇。使來自第一輪FACS之小鼠及食蟹猴選擇之群體生長，且藉由在選擇性培養基中進行亞培養擴增。第二輪、第三輪及第四輪FACS涉及陽性分選以富集TF結合物及/或陰性分選以使用來自CHO細胞之可溶性膜蛋白減少非特異性結合物之數量(參見例如WO2014179363及Xu等人， PEDS, 2013, 26(10):663-70)。在最後一輪分選後，將酵母塗鋪並定序。 初始選擇中 鑑 定出之純系之親和力成熟
使用來自初始輸出之重鏈(上述)製備輕鏈多樣化文庫，然後將其用於其他選擇輪次。特別地，自第四輪初始選擇輸出中提取重鏈可變區，且將其轉化為具有之多樣性為1 x 10 6之輕鏈文庫。
第一輪選擇利用Miltenyi MACS珠粒及10 nM生物素化人類TF Fc融合蛋白作為抗原。在MACS珠粒選擇之後，如上所述，使用10 nM之食蟹猴及小鼠Fc融合TF、或人類、小鼠或食蟹猴TF之生物素化Fc融合TF抗原或生物素化單體HIS形式進行三輪FACS分選。對來自各FACS選擇輪次之單個菌落進行定序。 自初始或輕鏈多樣化選擇中 鑑 定出之先導物之優化
利用三種成熟策略進行先導純系之優化：CDR-H1及CDR-H2之多樣化；CDR-H1及CDR-H2多樣性池優化之後之CDR-H3多樣化；及在選定之CDR-L1及CDR-L2多樣性池中之CDR-L3多樣化。
CDR-H1及CDR-H2選擇：將來自選自初始或輕鏈多樣化程序之純系之CDR-H3重組到預製文庫中，該文庫具有多樣性為1 x 10 8之CDR-H1及CDR-H2變異體，且使用生物素化Fc融合食蟹猴TF抗原、生物素化食蟹猴HIS-TF抗原及/或生物素化人類HIS-TF進行選擇。藉由在室溫下在平衡條件下使用濃度降低之生物素化HIS-TF抗原(低至1 nM)來施加親和力壓力。
CDR-H3/CDR-H1/CDR-H2選擇：寡聚物自IDT訂購，該寡聚物包含CDR-H3及CDR-H3任一側上之同源側翼區。CDR-H3中之胺基酸位置藉由整個CDR-H3中各寡聚物之兩個位置處之NNK多樣性進行變異。使用退火至CDR-H3之側翼區之引物將CDR-H3寡聚物雙鏈化。重鏈可變區之剩餘FR1至FR3自具有改良之親和力之抗體池中擴增，該抗體池為自上面選擇之CDR-H1及CDR-H2多樣性中分離的。然後，藉由將雙鏈CDR-H3寡聚物、FR1至FR3合併之片段以及重鏈表現載體轉化至已經含有親本輕鏈之酵母中來創建文庫。如在先前週期中一樣，使用FACS分選進行選擇。FACS輪次評估了非特異性結合、物種交叉反應性及親和力壓力，且進行分選以獲得具有所需特徵之群體。如上關於CDR-H1及CDR-H2選擇所述，進行此等選擇之親和力壓力。
CDR-L3/CDR-L1/CDR-L2選擇：寡聚物自IDT訂購，該寡聚物包含CDR-L3及CDR-L3任一側上之同源側翼區。CDR-L3中之胺基酸位置藉由整個CDR-L3中各寡聚物之一個位置處之NNK多樣性進行變異。使用退火至CDR-L3之側翼區之引物將CDR-L3寡聚物雙鏈化。輕鏈可變區之剩餘FR1至FR3自具有改良之親和力之抗體池中擴增，該抗體池為自上面選擇之CDR-L1及CDR-L2多樣性中分離的。然後，藉由將雙鏈CDR-L3寡聚物、FR1至FR3合併之片段以及輕鏈表現載體轉化至已經含有親本重鏈之酵母中來創建文庫。如在先前之循環中一樣，使用FACS分選進行選擇。FACS輪次評估了非特異性結合、物種交叉反應性及親和力壓力，且進行分選以獲得具有所需特徵之群體。親和力壓力包括滴定以及將親本Fab摻入到抗原預複合中。 II.   IgG及Fab之產生及純化
為了產生足夠量之所選抗體以進行進一步表徵，使酵母純系生長到飽和，然後在30℃下振盪誘導48 h。誘導後，將酵母細胞沉澱，且收集上清液以用於純化。使用蛋白A管柱純化IgG，且用pH 2.0乙酸溶析。藉由木瓜蛋白酶消化生成Fab片段，且藉由CaptureSelect IgG-CH1親和基質(LifeTechnologies,目錄號1943200250)進行純化。 實例 2 ：在長期血栓形成模型中抗 TF 抗體之影響
進行活體內研究以評估抗TF抗體(例如43D8)在長期血栓形成模型中之影響。簡言之，在限流誘導的靜脈血栓形成模型中檢查對靜脈血栓形成之影響。對於部分狹窄，將下腔靜脈結紮在瞬時定位之隔片(例如直徑= 0.26 mm)上，這將血管腔面積減少到原始面積之約10-15%。這提供了標準化的限流，而不會導致內皮損傷。10只受到限流誘導血栓形成的小鼠用抗TF mAb治療，且10只用同型對照治療(第2、5及8天10 mg/kg)。在21天內藉由高分辨率超音波檢查小鼠之血栓形成及消退，且藉由影像分析來量化血栓大小之差異。
用於製備限流誘導血栓形成模型及分析治療端點(例如，血栓大小、血栓重量、血栓長度、血小板水準、單核球水準、淋巴球水準、嗜中性球水準等)的方法為熟悉此項技藝者已知的。參見例如Subramaniam等人， Blood, The Journal of the American Society of Hematology129.16 (2017): 2291-2302，其相關揭示內容以引用方式併入本文。
圖 1展示了相對於第2天的血栓大小之結果。結果表明抗TF mAb治療之小鼠在治療後的所有時間點都具有較小的血栓。 實例 3 ：在 a PL 誘導之急性血栓形成模型中抗 TF 抗體之影響
進行活體內研究以評估抗TF抗體(例如，43D8)在aPL誘導之血栓形成模型中之影響。抗磷脂質抗體(aPL)會導致靜脈或動脈血栓形成及嚴重的妊娠發病。APL激活內體NADPH氧化酶(NOX)及活性含氧物(ROS)之產生，從而誘導TF表現。它們亦藉由解離單核球細胞表面上發現的受抑制TF凝血起始複合物來觸發凝血及炎性傳訊。該實驗係藉由在aPL及+/-抗TF mAb之存在下對腔靜脈成像來進行的。
用於製備aPL誘導之血栓形成模型及分析治療端點(例如，血栓大小、血栓重量、血栓長度、血小板水準、單核球水準、淋巴球水準、嗜中性球水準)的方法為熟悉此項技藝者已知的。參見例如Müller-Calleja等人， Blood, The Journal of the American Society of Hematology134.14 (2019): 1119-1131，其相關揭示內容以引用方式併入本文。
圖 2展示了暴露於aPL 3小時時血栓大小之結果。結果表明，抗TF mAb治療之小鼠具有較小的aPL誘導血栓。 實例 4 ：在 Poly I:C 模型中抗 TF 抗體之影響
進行活體內研究以在聚肌苷-聚胞嘧啶核苷酸(Poly(I:C))模型中評估抗TF抗體(例如43D8)對炎性端點之作用。poly I:C模型模擬肺對病毒感染之活體內反應。在該模型中，向小鼠投與Poly I:C，其為雙股(ds)RNA之合成類似物且為TL3配體。其通常在活體內用於研究宿主細胞先天性免疫系統之病毒識別及後續細胞介素風暴及炎症。
簡言之，在第1天、第2天及第3天，藉由異氟烷吸入麻醉所有小鼠。小鼠保持直立位且使用移液管向動物鼻孔投與50 µL PBS中之Poly (I:C)。在第2天，在第二次鼻內攻擊後3 h，終末麻醉來自所選組之10只小鼠，且進行血液收集及三次連續支氣管肺泡灌洗術(BAL)收集。在第4天，在最後一次鼻內攻擊後24 h，終末麻醉其餘小鼠，且進行血液收集及三次連續支氣管肺泡灌洗術(BAL)收集。藉由多重電化學發光MSD檢定來評定BAL量測。
用測試項目給藥：在第1天在poly:IC注射前2 h腹膜內(IP)注射媒劑、同型對照及抗體(例如，43D8)。
劑量及組提供於 表 50 及 60中。 表 50 ：用於第1-4組之研究設計實例
組 處理 Poly:IC 劑量水準、途徑、給藥頻率 TI 劑量水準、途徑、體積、給藥頻率 N 屍體剖檢1 屍體剖檢2
1 初始/媒劑(PBS) - 0 mg/kg，IP，在第1天一次 10 - 第4天， 最後一次poly:IC後24 h
2 Poly:(IC)/媒劑(PBS) 50 µg/50 µL，鼻內，第1天、第2天、第3天 0 mg/kg，IP，10 mL/kg，在第1天在Poly:IC前2 h一次 10+10 第2天，在第2次poly:IC後3 h 第4天， 最後一次poly:IC後24 h
3 Poly (I:C)/抗體 50 µg/50 µL，鼻內，第1天、第2天、第3天 10 mg/kg，IP，10 mL/kg，在第1天在Poly:IC前2 h一次 10+10 第2天，在第2次poly:IC後3 h 第4天， 最後一次poly:IC後24 h
4 Poly (I:C) /同型對照抗體 50 µg/50 µL，鼻內，第1天、第2天、第3天 10 mg/kg，IP，10 mL/kg，在第1天在Poly:IC前2 h一次 10 - 第4天， 最後一次poly:IC後24 h
表 60 ：43D8之劑量，mg抗體/kg
組 處理及測試品 劑量 (mg/kg) 收穫時間
1 媒劑(初始小鼠) NA 第3天
2 媒劑+ Poly I:C NA 第2天
3 43D8 + Poly I:C 10 mg/kg 第2天
5 媒劑+ Poly I:C NA 第3天
6 同型+ Poly I:C 10 mg/kg 第3天
7 43D8 + Poly I:C 10 mg/kg 第3天
圖 3A展示自研究第3天之促炎性細胞介素水準。結果展示在第7組(43D8 + Poly I:C處理組)中相對於第5組(媒劑+ Poly I:C對照)及第7組(同型+ Poly I:C對照)在第3天GMCSF、VEGF、IL17F、IL-1β、IL-6、IFNγ及KC促炎性標記之水準之顯著減少。
圖 3B展示自研究第3天抗炎性標記IL-10及IL28p28之水準。兩種標記在第7組(43D8 + Poly I:C處理組)中相對於第5組(媒劑+ Poly I:C對照)及第7組(同型+ Poly I:C對照)在第3天大幅增加。
相比之下，反應大小在第2天更小。 對巨噬細胞趨化性之影響
相對於未刺激的經新鮮分離之腹膜巨噬細胞用Poly I/C刺激，該等腹膜巨噬細胞係藉由珠粒去除(beads depletion)經純化且在組織培養基中黏附隔夜
來自Corning的Transwells (Costar® 6.5 mm Insert，24孔板，5.0 µM聚碳酸酯膜)在37℃下用人類纖維蛋白原(Sekisui Diagnostics，0.05 mg/mL)包被2小時，隨後封閉(1% BSA PBS)及洗滌(H 2O)。來自腹腔灌洗液的巨噬細胞用巨噬細胞分離套組(Macrophage Isolation Kit)(腹膜)純化，小鼠來自Miltenyi Biotec，且接種在transwells的上室(100 µL DMEM + 0.1% BSA中之0.5 x10 6個細胞)。在用poly (I:C) (InvivoGen，Poly(I:C) HMW，25 µg/mL)刺激前15 min，將50 µg/mL 43D IgG2a或同型對照抗體添加到孔中，或用作無刺激之對照。將600 µL含10% FCS之DMEM添加到下隔間。
將細胞在37℃、5% CO 2條件下孵育4小時，用棉籤小心去除膜上側的細胞，且遷移到膜下側的細胞用May-Grünwald及Giemsa染色。乾燥後，在400倍放大倍率下對所有遷移的巨噬細胞進行計數。六個獨立的巨噬細胞分離物源自3隻雌性及3隻雄性供體小鼠。
圖 4展示了對巨噬細胞趨化性之最終影響(*表示p＜0.05，且**表示p＜0.01)。Poly I:C刺激之對照組中的遷移細胞明顯多於未經處理的未刺激的經新鮮分離之腹膜巨噬細胞。結果亦表明，相對於對照，抗TF處理之Poly I:C組的巨噬細胞趨化性顯著降低。 實例 5 ：在 COVID 模型中抗 TF 抗體之影響
進行活體內研究以在COVID模型中評估抗TF抗體(例如43D8)之作用。此模型用於評估在SARS-CoV-2鼻內攻擊後抗TF mAb 43D8在表現人類ACE2之4-8週齡B6.Cg-Tg(K18-ACE2)小鼠(The Jackson Laboratory)之血漿中及肺上之治療作用。
簡言之，在研究第1天根據 表 61藉由鼻內接種用SARS-CoV-2之淨儲備液攻擊第1組至第4組中之小鼠。第1組至第4組中之小鼠在攻擊前大約2小時(±15分鐘)接受單一劑量之測試品或對照品。在研究第4天，對第1組及第2組中之小鼠實施安樂死以進行樣品收集。對研究第8天存活之第3組及第4組中之小鼠實施安樂死以進行樣品收集。在研究期間觀測小鼠，記錄觀測結果，每日最少兩次，間隔至少六小時，除了在人道終止之日僅進行一次觀測。研究前及在研究期間每日收集體重。 表 61 ：用於抗TF-COVID模型研究之實驗詳情
組 小鼠數量 攻擊劑量/ 途徑 處理 處理劑量/ 途徑 處理開始 時間表安排 終止 ( 研究天數)
1 5 M & 5 F SARS-CoV-2/ 1E+03/ IN 1 鹽水 10 mg/kg/ IP 2 攻擊前約2小時(± 15分鐘) 4
2 5 M & 5 F 43D8 4
3 5 M & 5 F 鹽水 8
4 5 M & 5 F 43D8 8
F =雌性 IN =鼻內     IP =腹膜內  M =雄性 112.5 µL將緩慢滴入右鼻孔及左鼻孔，總體積為25 µL。 2處理將以10 mL/kg之靶體積遞送。
圖 5展示在研究過程中體重量測之結果。 表 62展示鹽水及43D8處理組中臨床觀測之結果。 表 62 ：COVID模型中之臨床觀測結果
鹽水 鹽水之臨床觀測結果 43D8 43D8 之臨床觀測結果
2254 彎腰駝背，皮毛粗糙 2268 直至研究結束都正常
2255 在第7天死亡 2269 直至研究結束都正常
2266 直至研究結束都正常 2271 直至研究結束都正常
2267 彎腰駝背、嗜眠、用力呼吸 2274 直至研究結束都正常
2270 在第8天死亡 2275 直至研究結束都正常
2281 直至研究結束都正常 2277 嗜眠、用力呼吸
2286 直至研究結束都正常 2279 直至研究結束都正常
2288 彎腰駝背、用力呼吸 2280 直至研究結束都正常
2297 直至研究結束都正常 2283 直至研究結束都正常
2298 彎腰駝背、嗜眠、呼吸減弱 2300 直至研究結束都正常
總之，結果展示43D8處理組之重量損失之延遲。在43D8處理組中未觀測到死亡，而在研究時在對照組中2只動物死亡。對照組中之大部分動物具有顯著臨床觀測結果，而在43D8處理組中僅1只動物展示疾病徵象。 BAL 細胞介素 / 趨化介素量測
為了評估抗TF抗體(例如43D8)對細胞介素及趨化介素水準之作用，在研究期間終末麻醉之小鼠經歷血液收集及支氣管肺泡灌洗術(BAL)收集。簡言之，藉由將大約1.0 mL無鈣無鎂磷酸鹽緩衝鹽水(CMF-PBS)滴入右肺葉且將抽吸物吸入小瓶中來收集BAL液。BAL標本以600 x g離心10 min。將第一次洗滌之上清液等分用於細胞介素及趨化介素分析以及病毒載量評估，且儲存在設置為保持-85℃至-60℃的冰箱中直至分析。將兩個樣品管中之細胞沉澱合併，且重懸於CMF-PBS中以進行總細胞計數及差示細胞計數。使用細胞離心機將細胞旋轉到玻璃載玻片上，且使用Wright Giemsa染色劑進行染色以促進細胞差示計數，細胞差示計數由病理學家進行。使用MSD V-Plex小鼠細胞介素19-plex套組分析第一次BAL液洗滌之上清液。
表 63展示了各組觀察到的細胞類型之平均百分比。肺泡巨噬細胞(PAM)係觀察到的最豐富的細胞類型。在接種後第3天及第7天，亦在各組中觀察到嗜中性球及淋巴球。與對照組及處理組接種後3天相比，接種後7天觀察到嗜中性球及淋巴球的比率更高；用抗TF抗體處理之小鼠表現出近兩倍的嗜中性球百分比。在任何標本中均未觀察到嗜鹼性球和嗜酸性球。 表 63：各組之平均差示計數
量測促炎性細胞介素IFNγ、IL-1β、IL-6、IL27p28/IL30及IL-10且展示於 圖 6中。量測抗炎性細胞介素KC/GRO、IP-10、MP-1a、MCP-1及MP-2且展示於 圖 7中。
在BALF中分析細胞介素濃度。 表 64呈現了具有最高濃度的6種細胞介素/趨化介素(IP-10、MCP-1、IFN-γ、IL-6、KC/GRO及TNF-α)之平均細胞介素值。 表 64：各組之平均肺細胞介素濃度(pg/mL)
結果表明，接種後3天經處理小鼠中這六種細胞介素/趨化介素之水準相對於對照降低。接種後3天經處理組中之IP-10及IL-6與對照組相比顯著降低。到接種後7天為止，IP-10、IL-6及MCP-1值在兩組中均下降，在對照組中觀察到更明顯的下降。接種後3至7天，兩組中之IFN-γ、IL-10及KC/GRO均增加。
IL-33及MIP-2之濃度在所有組中都較低。IL-2及IL-5之水準可忽略不計。IL-15、IL-17A/F、IL-9、IL-12p70及IL-4在任何組中都未偵測到。 病毒效價量測
在收集BAL之後，為了評估抗TF抗體(例如43D8)對SARS-CoV-2病毒效價水準的影響，簡言之，在安樂死後自右肺無菌收集約4-5 mm 3樣品並保存在RNAlater中。RNA標本係自所有被人道安樂死的小鼠收集的，而非自各組中被發現死亡的任何小鼠收集的。將切片之組織置於兩個單獨的小瓶中，各小瓶裝有RNAlater。一個小瓶用於RT-qPCR，而另一個小瓶用作備份/保留樣品。兩個小瓶都儲存在設定為保持2℃至8℃的冰箱中。自RNAlater中取出後，將樣品儲存在設置為保持-85℃至-60℃的冰箱中，直至分析。將RNA樣品均質化以促進RT-qPCR。使用定量實時PCR (qRT-PCR)檢定來量測樣品中的病毒載量。在研究過程中，亦定期使用qRT-PCR分析鼻、咽及直腸樣品。
用於量測及分析病毒效價資料之方法為熟悉此項技藝者已知的。參見例如Roberts, Anjeanette等人， PLoS pathogens3.1 (2007): e5，其相關揭示內容以引用方式併入本文。
如 表 65所示，在經處理及未經處理之動物中，組織病毒載量平均而言在接種後3天與接種後7天相比更高。平均而言，經處理組的病毒載量與對照組相比大約低1個對數，接種後7天與接種後3天相比，對照組及經處理組之間的差異更大。 表 65：藉由RT-qPCR之肺組織病毒載量分析(拷貝/g) D- 二聚體量測
為了評估抗TF抗體(例如，43D8)對D-二聚體水準之作用，自處理組(43D8)及對照組(鹽水)收集血液以獲得血漿樣品。根據製造商的說明，使用ELISA套組(Novus Biologicals，目錄號：NBP3-08100)分析血漿樣品之D-二聚體。在接種後3天及7天量測D-二聚體水準。用於量測及分析小鼠模型中之d-二聚體水準之方法的實例提供於例如Weiler, Hartmut等人，「Characterization of a mouse model for thrombomodulin deficiency.」 Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology21.9 (2001): 1531-1537，其相關揭示內容以引用方式併入本文。
各組的平均D-二聚體濃度展示於 表 66中並繪圖於 圖 8中。結果表明，接種後3天及7天抗TF抗體(例如43D8)處理組中的平均D-二聚體濃度與對照組相比略低。與接種後3天相比，接種後7天兩組的平均濃度均有所下降。此等結果表明抗TF抗體處理減輕了疾病之嚴重程度。 表 66：各組之平均D-二聚體濃度(ng/mL) 實例 6 ：抗 TF 抗體對心肌梗塞 (MI) 恢復之影響
在小鼠中由巨噬細胞表現之PAR2以及TF細胞質域對心肌梗塞(MI)中之缺血後恢復具有有害作用。進行活體內研究以評估抗TF抗體(例如43D8)及TF傳訊阻斷對自心肌梗塞(MI)恢復之作用。用於製成MI模型及測試MI模型中之端點之方法為熟悉此項技藝者已知的。參見例如Molitor, Michael等人， Cardiovascular research117.1 (2021): 162-177，其相關揭示內容以引用方式併入本文。
簡言之，為了誘導MI，小鼠經歷冠狀動脈左前降支之永久性結紮。藉由高頻率超音活體成像來監測心臟功能。在誘導MI後，小鼠(8只小鼠/每組)接受10 mg 43D8抗體/kg或主鏈中之同型對照。在MI後第1天及第4天投與抗體及對照，且在第7天藉由高頻率超音活體成像進行心臟功能之評估。使用高頻率超音活體成像來確定心室壁運動得分指數(梗塞大小)、左心室射出分率及左心室舒張末期容積。在第7天對小鼠實施安樂死且評估缺血性心臟組織在梗塞心肌中之炎性細胞募集。使用螢光活化細胞分選(FACS)分析梗塞心肌組織中之炎性細胞募集。
結果展示於 圖 9-12中。結果揭示梗塞大小在用抗TF抗體處理之組中相對於同型對照有所減小( 圖 9)。MI減小左心室射出分率且結果展示用抗TF抗體治療恢復之左心室射出分率大於同型對照。MI顯著增加左心室舒張末期容積，且結果揭示用抗TF抗體治療減少之左心室舒張末期容積大於同型對照(圖 10)。結果亦展示梗塞心肌中炎性細胞浸潤之減少( 圖 11 及圖 12)。此等結果可指示抗TF抗體中斷了TF-Par2傳訊。 細胞介素表現及 PAR2 傳訊
為了評估抗TF抗體對MI之後TF-Par2傳訊之作用，使用RT-PCR量測炎性細胞介素表現且使用ERK1/2磷酸化作為PAR2傳訊之標記。在第7天及第28天量測炎性端點。 實例 7 ：在 DSS 結腸炎模型中抗 TF 抗體之影響
進行活體內研究以在結腸炎模型中確定抗TF抗體(例如43D8)對炎性端點之作用。在此實例及以下實例中使用43D8純系作為本文所述之其他抗TF抗體之替代物，因為其與小鼠TF交叉反應且以高親和力結合至小鼠TF。參見例如表5。
在結腸炎模型中，投與葡聚糖硫酸鈉(DSS)由於對結腸上皮細胞之毒性導致黏膜功能受損及嗜中性球、巨噬細胞及淋巴球之浸潤而引起結腸炎樣病變。這導致上皮障壁功能損傷、促炎性細胞介素及趨化介素分泌以及具有細胞毒性潛力之細胞諸如嗜中性球及炎性巨噬細胞之流入。這不被視為此項技術中之T細胞介導過程。
在研究第0天，8-12週齡雄性C57BL/6小鼠隨意接受無菌水(第1組， n=5)或隨意接受溶解於無菌水中之2.5% (w/v) DSS (第2-5組，每組 n=10只小鼠)。在第0天及第4天，第2組、第4組及第5組之小鼠接受以下劑量(靜脈內途徑)： ●    第2組：媒劑(PBS) ●    第4組：3 mg/kg之測試品 ●    第5組：10 mg/kg之測試品 測試品為抗TF抗體43D8。
亦在開始第0天至第10天，第3組中之小鼠藉由經口飼喂80 mg/kg之陽性對照環孢素(CsA)(Neoral)來每日處理一次。在第8天，所有動物對於其餘實驗均接受無菌水且在第10天實施安樂死。
在整個研究期間，每日進行臨床觀測。每日量測且記錄體重(第0天至第10天)。亦使用 圖 13中所示之評分系統每日目視評估身體狀況。定性確定糞便稠度且每日使用潛血糞便出血測試量測糞便中之血液。 表 A 、 B及 C展示用於評定糞便稠度、糞便血液(潛血)及重量相對於基線水準(第0天)之變化的評分系統。將糞便稠度得分、糞便血液得分及重量得分組合以提供各個體在各量測時間之疾病活動指數。 表 D展示確定疾病活動指數之綜合評分系統。 表 A ：糞便稠度得分
得分 0 1 2 3
觀測 正常 濕潤/黏稠糞便 軟糞便 腹瀉
表 B ：糞便血液得分
得分 0 1 2 3
潛血試劑測試結果 陰性潛血試劑測試，無血液 在＞30秒內之陽性潛血試劑測試 在＜30秒內之陽性潛血試劑測試 載玻片上肉眼可觀測到血液
表 C ：重量得分
得分 0 1 2 3 4
相對於基線之重量損失 0% 1-5% 6-10% 11-15% 16%或更高
表 D ：疾病活動指數(DAI)得分，其為糞便稠度得分+糞便血液得分+重量得分之組合。
得分 糞便稠度得分 糞便血液得分 重量損失
0 正常 陰性潛血試劑測試，無血液 0%
1 濕潤/黏稠糞便 在＞30秒內之陽性潛血試劑測試 1-5%
2 軟糞便 在＜30秒內之陽性潛血試劑測試 6-10%重量損失
3 腹瀉 載玻片上肉眼可觀測到血液 11-15%重量損失
4 N/A N/A 16%或更高
在實施安樂死後，量測動物(確定長度)且稱重。計算各動物之重量/長度比率。解剖動物且確定其脾之重量。對於各動物，將結腸「瑞士卷(swiss-rolled)」且將其置於10%中性緩衝福馬林(NBF)中達24小時，隨後置於70%乙醇中。在內部處理經固定之結腸樣品。將樣品包埋在石蠟中，以5微米切片，且用蘇木素及伊紅(H&E)染色載玻片以進行組織學分析。
結果顯示對於用CsA處理之第3組動物在第4天之顯著及早期重量損失(相對於基線之約20%重量損失)。對於媒劑對照組(第2組)及第4組及第5組在前5天，重量損失相當。然後，在第5天與第10天之間，媒劑對照動物比第4組及第5組中之動物損失顯著更多重量。結果表明，用抗TF抗體43D8治療與比較藥物相比導致相對於基線水準之重量損失更少。這亦表明用抗TF抗體治療與在不存在任何治療下經歷之情況相比導致重量損失更少( 圖 14)。
亦使用上文所述度量分析疾病活動。第5組中之動物(接受10 mg/kg 43D8)與媒劑對照中之動物相比具有更低(更接近於正常)疾病活動得分( 圖 15)。在媒劑對照組或接受3 mg/kg 43D8之組中未觀測到對疾病活動之作用。總之，此等結果表明，用抗TF抗體治療與在不存在治療下觀測到之情況相比導致更正常的糞便稠度、更少可偵測血液及更少重量損失。
身體狀況之結果表明在研究中小鼠身體狀況並無變化直至第7天，此後，第2組CsA小鼠在身體狀況方面經歷最顯著惡化。在整個研究期間，僅初始組保持3之身體狀況(正常良好狀態)。第5組經歷身體狀況得分之最低減少，隨後為第4組( 圖 16)。結果表明用抗TF抗體治療相對於比較治療且相對於由無治療引起之身體狀況改良了身體狀況。
由量測脾重量得到之結果在43D8治療組中相對於媒劑對照顯示脾重量之劑量依賴性減少( 圖 17)。彼等結果表明用抗TF抗體治療可以逆轉或減少通常在炎性疾病之情況下可見之脾腫大。該等結果亦指示抗TF抗體之全身性抗炎作用。 實例 8 ：在 DSS 結腸炎模型中抗 TF 抗體之影響
進行另一項活體內研究以在結腸炎模型中確定抗TF抗體(例如43D8)對炎性端點之作用。研究方法與 實例 2中概述之彼等者相同，但改變用於誘導結腸炎之DSS之濃度及研究之最後一天及對照。
簡言之，在研究第0天，8-12週齡雄性C57BL/6小鼠隨意接受無菌水(第1組， n=5)或隨意接受溶解於無菌水中之3% DSS (第2-5組，每組 n=10只小鼠)。在第0天及第4天，第4組、第5組及第6組之小鼠接受兩個劑量之同型、43D8 mAb或抗小鼠Il-6 mAb。亦在開始第0天至第10天，第2組及第3組中之小鼠藉由經口飼喂媒劑或80 mg/kg之陽性對照環孢素(CsA)(Neoral， n= 10)來每日處理一次。在第8天，對所有動物實施安樂死。 表 E中展示實驗設計且在 圖 18中展示時間點及時間表。研究端點為體重、DAI得分、結腸密度(寬度/長度)、脾重量及組織病理學。 表 E ：DSS模型之實驗設計
組 N 測試品 處理 (mg/kg) 全身性給藥
途徑 頻率
1 5 初始(無DSS) N/A N/A NA
2 10 媒劑 N/A PO 每日一次(QD)
3 10 CsA 50 PO 每日一次(QD)
4 10 同型抗體 10 IP 兩次(第0天及第4天)
5 10 43D8 mAb 10 IP 兩次(第0天及第4天)
6 10 IL-6 mAb 10 IP 兩次(第0天及第4天)
*IP = 腹膜內；PO = 經口投與
體重量測、DAI得分、結腸密度(結腸重量/長度之比率)及脾重量量測之結果分別展示於 圖 19- 圖 22中。
結果顯示相對於媒劑及同型對照及抗IL-6 mAb小鼠，在第5組小鼠(用43D8 mAb處理)中在第5天及後續時間點體重損失延遲。相對於媒劑對照小鼠，在第6天，重量損失之延遲高度顯著( 圖 19)。
結果顯示相對於媒劑對照小鼠在第3天DAI得分得到顯著改良。在第4天在第5組小鼠中相對於第6組小鼠(抗IL-6 mAB)，DAI得分亦更低( 圖 20)。
結果表明相對於媒劑對照小鼠，第5組小鼠之結腸密度顯著改良。在研究結束時，第5組小鼠與第6組小鼠相比表現出更低結腸密度( 圖 21)。
在研究結束時各組之間未觀測到脾重量之顯著差異( 圖 22)。 實例 9 ：在 TNBS- 結腸炎模型中抗 TF 抗體之影響
進行活體內研究以在TNBS-結腸炎模型中確定抗TF抗體(例如43D8)對炎性端點之作用。
在此結腸炎模型中，投與2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)引起結腸炎樣病理。一般而言，TNBS模型之特徵在於與DSS結腸炎模型相比在結腸中之更局灶性損傷。這導致主要由TH1介導之免疫反應驅動且特徵在於CD4þ T細胞、嗜中性球及巨噬細胞對固有層之浸潤的透壁性結腸炎。抗IFNg、抗IL-12p40已在TNBS模型中顯示有效治療。
用於製成TNBS誘導性結腸炎模型之方法為熟悉此項技藝者已知的。參見例如Antoniou, Efstathios等人， Annals of medicine and surgery11 (2016): 9-15，其相關揭示內容以引用方式併入本文。
在TNBS結腸炎模型中評估抗TF之作用，在該等模型中動物接受2% TNBS之結腸內注射以誘導結腸炎( n=10只小鼠/組)。每日進行臨床觀測、體重及DAI評分。用抗TF抗體(例如43D8)、媒劑對照或同型對照處理動物。另一組接受胺水楊酸作為陽性對照。投與抗TF抗體(例如43D8)未顯示相對於對照之作用。可能的是，在TNBS模型中投與抗TF抗體不產生任何作用，因為TNBS模型為T細胞主導模型。在此項技術中已知TF在經活化骨髓細胞上表現，而非在T細胞上表現。 實例 10 ：在急性肺損傷模型中抗 TF 抗體之影響
進行活體內研究以在脂多糖(LPS)誘導之急性肺損傷模型中評估抗TF抗體(例如43D8)對炎性端點之作用。急性肺損傷(ALI)及其最嚴重表現形式急性呼吸窘迫症候群(ARDS)為由急性缺氧性呼吸衰竭、與水腫一致之雙側肺浸潤及正常心臟充盈壓力所限定之臨床症候群。
對於此研究，將48只雄性BALB/c小鼠隨機且前瞻性地分配給五個組：六隻之一組( n=6)、十二隻之一組( n=12)及各自十隻(每組 n=10)之三個組。在第0天，在LPS投與前60分鐘，根據 表 F向第2-5組中之動物給藥。在第1天(LPS後24小時)再次向第3組動物(陽性對照)投與地塞米松(3 mg/kg)。使用異氟烷麻醉所有動物且一旦各動物均對捏腳趾無反應，則藉由鼻內(IN)鼻內投與25 µl中之10 µg LPS (僅第2-5組)或作為對照之鹽水(第1組)來攻擊動物。然後將動物釋放到恢復籠中，直到它們蘇醒。 表 F ：用於ALI研究之實驗設計。TA表示測試品(43D8抗體)
組 動物數量 LPS (IN)第0天(0 h) 處理 劑量 途徑 劑量時間表 端點/ 終末收集(48 h)
1 6 鹽水 -- -- -- -- 1. 血液( 血漿) 2. 肺( 樣品收集)● BAL 流體：差示計數，總蛋白 ● 肺組織學：H&E染色 ● 肺組織：急凍
2 12 10 µg 媒劑 -- IP -1 h
3 10 地塞米松 3 mg/kg IP -1 h、24 h
4 10 TA #1 1 mg/kg IP -1 h
5 10 10 mg/kg IP -1 h
對所有動物進行稱重且每日評估其呼吸窘迫(經定義為呼吸率增加及/或明顯呼吸運作)。在觀測之2小時內對患有嚴重呼吸窘迫之動物或損失大於其總初始體重之20%之動物實施安樂死。
在LPS攻擊後48小時，用過多劑量之甲苯噻嗪處死所有動物，並僅對右肺進行支氣管肺泡灌洗術(BAL)(藉由綁住左肺)以進行總細胞計數及差示細胞計數，以及藉由Luminex進行總蛋白質定量及細胞介素定量。然後對肺進行稱重(總肺重量及右肺重量)。將右肺冷凍在液氮中且儲存在-80℃下。向左肺葉吹入10% NBF，在10% NBF中固定24小時且然後轉換成PBS，且隨後處理以用於組織學。將經福馬林固定的肺包埋在石蠟中，以5微米切片，且用蘇木素及伊紅(H&E)染色載玻片。由專業認證之獸醫病理學家評估所有載玻片，該獸醫病理學家使用評分系統評估肺損傷及炎症之程度。 表 G 及表 H展示白血球浸潤之評分系統。 表 G ：用於ALI模型中之間質或肺泡嗜中性球浸潤之組織病理學評分
得分 間質或肺泡嗜中性球浸潤
0 不存在
1 最少(受累樣品＜10%)
2 輕度(受累樣品佔10-25%)
3 中度(受累樣品佔26-50%)
4 顯著(受累樣品佔51-75%)
5 重度(受累樣品＞75%)
表 H ：用於血管周/小支氣管周區域中之單核細胞浸潤/聚集物形成之組織病理性評分
得分 間質或肺泡嗜中性球浸潤
0 不存在
1 最少(局灶性浸潤或分散性浸潤細胞)
2 輕度(多灶性浸潤或小聚集物形成)
3 中度(多灶性聚集物形成)
4 顯著(大多數血管/小支氣管由聚集物圍繞)
5 重度(所有血管/小支氣管均有大及融合聚集物圍繞)
體重結果在接受1 mg/kg 43D8之組中顯示最高重量損失。媒劑對照組及第4組(1 mg/kg 43D8)在研究結束時具有相當的重量損失百分比(相對於基線之約6%重量損失)。相比之下，陽性對照組(地塞米松)在研究結束時相對於基線僅表現出約2%重量損失。第5組(接受10 mg/kg)表現出少於媒劑對照之重量損失，但大於陽性對照之重量損失( 圖 23)。結果表明在ALI個體中，用抗TF抗體(43D8)治療可導致重量損失小於在不存在治療下經歷之重量損失(對體重損失之保護性作用)。該等結果亦表明抗TF抗體以劑量依賴性方式對抗重量損失。
來自BAL細胞差示計數之結果揭示了，用抗TF抗體(43D8)治療導致總白血球計數低於陽性對照及媒劑對照。第4組(1 mg/kg 43D8)中之總巨噬細胞計數未顯著低於媒劑對照，但第5組(10 mg/kg 43D8)之總巨噬細胞計數低於媒劑對照(以及陽性對照)。第4組及第5組之總淋巴球計數及總嗜中性球計數低於其相應媒劑對照且其計數之減少為劑量依賴性的。相比之下，第4組及第5組之總嗜酸性球計數顯著高於媒劑對照。總之，結果揭示了在用43D8處理之組中BAL流體中之淋巴球、巨噬細胞及嗜中性球浸潤降低且該等降低與陽性對照(地塞米松)相當或較之更好( 圖 24A 及圖 24B)。
對於組織病理學分析，第5組(10 mg/kg 43D8)相對於媒劑對照表現出嗜中性球向間質、肺泡及小支氣管中之浸潤及單核細胞向血管周/小支氣管周組織中之浸潤輕微降低。嗜中性球向間質、肺泡及小支氣管中之浸潤在第4組(1 mg/kg 43D8)與媒劑對照之間的差異並不顯著。測試品組無一與陽性對照(地塞米松)一樣有效於減少嗜中性球向間質、肺泡及小支氣管中之浸潤及單核細胞向血管周/小支氣管周組織中之浸潤( 圖 25)。
炎性細胞介素之結果展示於 圖 26A 及圖 26B 中。10 mg/kg 43D8組相對於媒劑對照表現出細胞介素濃度之顯著減小。在所有情況下，除了IL-6及TNFα，10 mg/kg 43D8組相對於陽性對照(地塞米松)均表現出炎性細胞介素水準之顯著減小。此等結果亦指示由於使用抗TF抗體治療引起之局部炎症減少。 實例 11 ：在敗血症存活模型中抗 TF 抗體之影響
進行活體內研究以評估抗TF抗體(例如43D8)在敗血症模型中之作用。為了模擬囓齒動物的嚴重敗血症，LPS之投與劑量預計在投與後5天內會產生50%、75%或100%之死亡率。然後藉由量測對存活百分比之影響來檢查抗TF mAb作用。 圖 27展示了用於此類研究的示例性LPS存活模型。
簡言之，在第0天，64隻小鼠藉由腹膜內(IP)注射用LPS (來自Sigma L8274的大腸埃希氏菌O26:B6)(劑量TBD)處理一次。第1組中的動物將不進行處理，並將作為初始對照。在LPS處理前一小時，第2-5組中之動物經由IP注射用媒劑、同型對照或不同劑量之化合物1 (低劑量及高劑量)進行處理。第2-5組之動物在第3天再次以相同方式處理。所有動物每日稱重，並且監測存活率，直至第5天。在研究期間不向動物提供支持性護理。任何剩餘動物在第5天經安樂死。在動物中量測的其他端點包括一般臨床觀察、細胞介素水準及趨化介素水準。
用於製成LPS敗血症模型及測試LPS敗血症模型中之端點之方法為熟悉此項技藝者已知的。參見例如Lewis等人， Surgical infections17.4 (2016): 385-393，其相關揭示內容以引用方式併入本文。 實例 12 ：在膠原抗體誘導之關節炎 (CAIA) 模型中抗 TF 抗體之影響
進行活體內研究以在CAIA模型中評估抗TF抗體(例如43D8)對炎性端點之作用。在CAIA模型中，使用針對II型膠原之單株抗體誘導關節炎。
簡言之，將相同性別、在研究開始時約21日齡之小鼠隨機且前瞻性地分配給五個組(每組n=10)： ●    第1組：初始 ●    第2組：媒劑對照(PBS) ●    第3組：測試品(10 mg/kg 43D8) ●    第4組：陽性對照(地塞米松) ●    第5組：抗TNFα
在第0天，在第2-5組中藉由投與抗II型膠原抗體混合來誘導疾病。在同一天，第2-5組中之動物接受媒劑、陽性對照或測試品。在第3天，向動物腹膜內(IP)投與LPS。此後，每日檢查動物以評定指示關節炎之運動性之改變、重量量測及身體狀況評分，如( 圖 13)所示。
在研究結束時對動物實施安樂死(第12天)。在實施安樂死後，量測動物(確定長度)且稱重。計算各動物之重量/長度比率。解剖動物且確定脾之重量。收集滑膜液之樣品且使用IHC檢查單核細胞浸潤。將來自經誘導關節炎部位之組織樣品置於10%中性緩衝福馬林(NBF)中達24小時，隨後置於70%乙醇中。將樣品包埋在石蠟中，切片，且用蘇木素及伊紅(H&E)染色以進行組織病理學分析。亦觀測經誘導關節炎部位之骨之骨侵蝕。動物中量測之額外端點包括臨床關節炎得分、爪墊厚度(例如，在關節炎在爪中誘導的情況下)及一般臨床觀測結果。(參見例如MacKenzie JD等人， Radiology.2011;259(2):414-420及Jung, EG.等人， BMC complementary and alternative medicine15.1 (2015): 1-11.，其各自以引用方式整體併入)。結果展示相對於對照，抗TF抗體(例如10 mg/kg 43D8)之量測量度之顯著改良。 實例 13 ：結合親和力檢定
抗TF抗體之動力學量測在Octet QK384 (Pall ForteBio, Fremont, CA, USA)或Biacore (GE Healthcare Bio-Sciences)上進行。
大體上如先前所述，進行ForteBio親和力量測(Estep等人，MAbs. 2013年3月至4月；5(2):270-8)。簡言之，藉由將IgG在線加載到AHC感測器上以進行ForteBio親和力量測。感測器在檢定緩衝液中離線平衡30 min，然後在線監測60秒以建立基線。將帶有負載IgG之感測器暴露於100 nM抗原(人類、食蟹猴或小鼠TF) 3 min，然後將其轉移至檢定緩衝液3 min以進行解離速率量測。另選地，藉由將生物素化TF單體加載到SA感測器上，之後將其暴露於溶液中之100 nM抗體Fab來獲得結合量測值。使用1:1 Langmuir結合模型對動力學資料進行分析及擬合，且藉由將k off除以k on來計算K D。藉由基於Octet之實驗量測之TF抗體之K D值展示於 表 5。
對於基於Biacore之量測，使用胺偶聯套組(GE Healthcare Bio-Sciences)將抗體共價偶聯至CM5或C1晶片。量測抗TF抗體與自25至500 nM開始之五點三倍滴定之TF-His之間的締合300秒。隨後，量測抗TF抗體與TF-His之間的解離長達1800秒。使用1:1結合模型對動力學資料進行整體分析及擬合。藉由基於Biacore之實驗量測之TF抗體之K D值展示於 表 5。
如 表 5所示，抗體對hTF之親和力，如K D所指示，在10 -7M及10 -11M之間。所有抗hTF抗體都與cTF交叉反應。此外，來自第25組及第43組之所有抗hTF抗體均表現出與mTF之結合活性。抗hTF抗體25G、25G1、25G9及43D8與mTF交叉反應。不存在表現出與小鼠TF之結合活性及交叉反應性之其他已知之人類或人類化抗hTF單株抗體，這指示來自第25組及第43組之抗體與新型TF表位結合。 表 5：抗體動力學
Ab 人類K D(nM) [Biacore] 食蟹猴K D(nM) [Biacore] 小鼠K D(nM) [Biacore] 人類K D(nM) [ForteBio] 食蟹猴K D(nM) [ForteBio] 小鼠K D(nM) [ForteBio]
1F 0.31 0.26 nd* 1.28 1.43 無結合*
1G nd* nd* nd* 2.20 2.70 nd*
25A 6.20 5.42 nd* 8.45 7.65 263
25A3 0.36 0.21 nd* 1.67 1.36 131
25A5 0.08 0.04 nd* 0.64 0.76 188
25G 23.0 18.0 nd* 21.9 17.5 114
25G1 0.94 0.78 5.4 3.97 4.99 34.2
25G9 13.3 16.4 2.9 35.8 42.9 9.16
29D nd* nd* nd* 3.30 12.0 nd
29E 0.47 5.06 nd* 2.32 15.0 無結合*
39A 0.09 0.08 nd* 0.83 0.57 無結合*
43B 1.75 5.64 nd* 2.40 3.40 161
43B1 0.07 0.12 nd* 0.96 1.05 72.1
43B7 0.14 0.24 nd* 0.86 0.94 360
43D 2.09 5.66 nd* 3.84 4.12 281
43D7 0.06 0.12 21 1.02 1.11 41.4
43D8 0.15 0.39 2.4 1.61 1.96 6.12
43E 1.46 5.69 nd* 2.52 4.07 121
43Ea 1.60 6.42 nd* 2.28 2.71 140
54E 0.42 1.83 nd* 1.59 4.16 無結合*
無結合*：無結合至弱結合，無可報告之K Dnd*：未確定 實例 14 ：基於細胞之結合檢定
自美國組織培養物保藏中心(ATCC, Manassas, VA, USA)獲得具有內源性人類TF表現之HCT116細胞，並按建議進行維護。藉由按建議用編碼具有C端FLAG標籤之全長小鼠TF的pcDNA5/FRT載體(ThermoFisher Scientific)轉染Flp-In-CHO細胞來生成表現小鼠TF之Flp-In-CHO細胞。藉由在經組織培養物處理之96孔板中進行有限稀釋來分離小鼠TF陽性CHO純系。
評估基於細胞之抗體結合，如先前於Liao-Chan等人， PLoS One, 2015, 10:e0124708中描述，其以引用方式整體併入。將用Cellstripper (Mediatech, Manassas, VA, USA)收集之1.2x10 5個細胞用十二點1:3稀釋滴定之抗人類TF IgG1或Fab抗體(在250 nM或100 nM處開始)在冰上孵育2小時。洗滌2次後，將標記有IgG1或Fab之細胞分別與150 nM山羊藻紅蛋白(PE)山羊抗人類IgG F(ab’) 2片段(Fcγ片段特異性)(Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA, USA)或FITC標記之山羊抗人類κ F(ab’) 2片段(SouthernBiotech, Birmingham, AL, USA)在冰上孵育30 min。洗滌2次後，用TO-PRO-3碘化物(ThermoFisher Scientific)標記死細胞，且在CytoFLEX流式細胞儀(Beckman Coulter, Brea, CA, USA)或Novocyte流式細胞儀(ACEA Biosciences, San Diego, CA, USA)上分析樣品。繪製各稀釋度處之中值螢光強度(MFI)，且使用Prism (GraphPad, La Jolla, CA, USA)中之4參數結合模型得出細胞EC 50。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示抗TF抗體與人類TF陽性HCT-116細胞之結合之結果。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示抗TF抗體與表現小鼠TF之CHO細胞之結合之結果。
國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號中展示之所有抗hTF抗體對人類TF陽性HCT-116細胞表現出高親和力，其中EC 50在約687 pM至約39 pM之範圍內。如國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)所展示，來自第25組及第43組之抗體表現出與表現小鼠TF之CHO細胞之結合，其中EC 50在約455 nM至約2.9 nM之範圍內。與小鼠TF之結合活性為抗hTF抗體(例如來自第25組及第43組)之獨特性質。這對於用小鼠模型進行此等抗體之臨床前研究為有利的。在某些實施例中，與小鼠TF之結合親和力為用於選擇用於炎性疾病、炎症及纖維化之抗體之重要性質。 實例 15 ：凝血酶生成檢定 (TGA)
使用由STAGO製造及分配之校準自動血栓圖(CAT)儀器進行TGA檢定。測試方法設計等效於標準CAT檢定之量測，不同之處在於血漿來源為檸檬酸鹽/CTI中之NPP。將抗TF抗體在0、10、50及100 nM處進行滴定，且與收集在補充有100微克/mL玉米胰蛋白酶抑制劑之11 mM檸檬酸鹽(檸檬酸鹽/CTI)中之正常混合血漿(NPP)混合。將重新脂化之TF添加到96孔檢定板，之後添加抗體/NPP混合物。孵育10分鐘後或直接將重新脂化之TF與抗體/NPP合併後，藉由添加鈣及凝血酶受質來引發凝血酶之生成。使用STAGO軟體報告以下參數：峰值IIa (生成之最高凝血酶濃度[nM])；滯後時間(生成IIa之時間) [min])；ETP (內源性凝血酶潛能，曲線下面積) [nM x min])；及tt峰值(到達峰值IIa之時間[min])。亦報告了在同一板上，相對於無抗體血漿對照，每種抗體存在下凝血酶生成之峰值百分比(峰值IIa%)及內源性凝血酶潛能百分比(ETP %)。
表 6展示選自1F、25A、25A3、25G1、29E、39A、43B1、43D7、43Ea及54E之每種抗體存在下之峰值IIa、滯後時間、ETP、tt峰值、峰值IIa %及ETP %，其中在添加鈣及凝血酶受質之前不進行抗體孵育。 表 7展示選自1F、25A、25A3、25G1、29E、39A、43B1、43D7、43Ea及54E之每種抗體存在下之峰值IIa、滯後時間、ETP、tt峰值、峰值IIa%及ETP %，其中在添加鈣及凝血酶受質之前進行10 min抗體孵育。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示抗TF抗體滴定存在下之峰值IIa%，其中在添加鈣及凝血酶受質之前不進行抗體孵育。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了抗TF抗體滴定存在下之峰值IIa%，其中在添加鈣及凝血酶受質之前進行10 min抗體孵育。
在來自第25組之抗體(包括25A、25A3及25G1)存在下，峰值IIa%大於90%。在來自第25組之抗體(包括25A、25A3及25G1)存在下，ETP %大於100%。在來自第43組之抗體(包括43B1、43D7及43Ea)存在下，峰值IIa%大於40%。在來自第43組之抗體(包括43B1、43D7及43Ea)存在下，ETP %大於90%。
該資料指示來自第25組及第43組之抗體允許正常凝血酶生成，並因此並非凝血酶生成之抑制劑。 表 6：不進行抗體預孵育之凝血酶生成檢定
板 抗體 Ab 濃度(nM) 峰值IIa (nM) 滯後時間(min) ETP (nM • min) tt 峰值(min) 峰值IIa % ETP %
1 1F 100 29 25.9 * 37.9 7 *
50 32 27.2 * 36.8 8 *
10 83 12.1 1395 19.8 21 58
1 25A 100 398 4.4 2610 7.1 99 108
50 399 4.2 2621 7.1 99 108
10 403 4.1 2555 6.8 100 106
1 25A3 100 405 3.9 2493 6.5 100 103
50 404 3.9 2495 6.6 100 103
10 401 4.2 2550 7.3 99 106
1 25G1 100 416 4.5 2626 7.1 103 109
50 416 4.5 2680 7.1 103 111
10 417 4.5 2635 7.0 103 109
1 29E 100 99 17.3 * 26.4 25 *
50 107 14.4 1747 22.7 26 72
10 266 5.7 2189 10.0 66 91
1 39A 100 26 28.9 * 40.1 6 *
50 30 30.5 * 40.0 7 *
10 82 12.1 1330 19.6 20 55
1 血漿對照 NA 403 4.1 2417 6.8 100 100
2 43B1 100 221 5.2 2167 10.6 64 100
50 232 5.2 2195 10.3 67 101
10 299 4.9 2288 8.9 87 105
2 43D7 100 179 5.4 2094 11.8 52 96
50 202 5.3 2116 11.1 58 97
10 287 5.0 2263 9.0 83 104
2 43Ea 100 300 4.6 2219 8.1 87 102
50 307 4.6 2234 8.1 89 103
10 328 5.0 2329 8.3 95 107
2 54E 100 68 14.8 1175 23.9 20 54
50 154 8.9 2019 15.9 44 93
10 307 5.7 2307 9.6 89 106
2 同型 100 348 5.0 2415 8.3 101 111
50 347 5.0 2360 8.0 101 109
10 346 4.3 2260 7.6 100 104
2 血漿對照 NA 345 4.7 2171 7.8 100 100
*當軟體無法計算ETP時，組具有「未發現尾(No Tail Found)」之錯誤。 表 7：進行10 min抗體預孵育之凝血酶生成檢定
板 抗體 Ab 濃度(nM) 峰值IIa (nM) 滯後時間(min) ETP (nM • min) tt 峰值(min) 峰值IIa % ETP %
1 1F 100 17 30.3 * 42.0 7 *
50 20 27.6 * 38.9 7 *
10 27 18.8 540 28.6 10 31
1 25A 100 285 3.3 1898 6.7 108 110
50 284 3.3 1887 6.6 107 110
10 277 3.3 1842 6.7 105 107
1 25A3 100 277 3.1 1785 6.3 105 104
50 275 3.2 1824 6.4 104 106
10 278 3.2 1827 6.6 105 106
1 25G1 100 293 3.3 1827 6.4 111 106
50 301 3.3 1853 6.3 114 108
10 302 3.3 1891 6.3 114 110
1 29E 100 68 15.1 1098 25.3 26 64
50 70 14.2 1168 24.3 27 68
10 78 10.4 1254 20.2 30 73
1 39A 100 17 28.0 * 40.2 7 *
50 17 28.4 346 38.9 7 20
10 25 20.8 482 30.7 9 28
1 血漿對照 NA 264 3.3 1720 6.8 100 100
2 43B1 100 152 3.2 1712 9.3 58 98
50 163 3.2 1797 9.0 62 103
10 200 3.2 1788 8.1 76 103
2 43D7 100 124 3.6 1656 10.3 47 95
50 128 3.6 1677 10.3 49 96
10 178 3.6 1745 8.8 68 100
2 43Ea 100 239 2.9 1820 6.9 91 104
50 227 2.9 1791 7.1 87 103
10 247 3.2 1825 7.0 94 105
2 54E 100 29 22.1 580 32.3 11 33
50 35 18.3 680 28.4 13 39
10 112 6.1 1530 13.4 43 88
2 同型 100 288 3.2 1888 6.6 110 108
50 285 3.2 1879 6.6 109 108
10 273 3.2 1804 6.6 104 104
2 血漿對照 NA 262 3.2 1742 6.9 100 100
*當軟體無法計算ETP時，組具有「未發現尾」之錯誤。 實例 16 ： FXa 轉化檢定
為了評價TF:FVIIa在抗TF人類抗體之存在下將FX轉化為FXa之能力，將5x10 4個MDA-MB-231細胞(ATCC, Manassas, VA, USA)塗鋪到經組織培養物處理之黑色96孔板(Greiner Bio-One, Monroe, NC, USA)中。在去除細胞培養基且在含1.5 mM CaCl 2之HEPES緩衝液中添加最終濃度為200 nM之FX後，在37℃下用滴定抗體孵育細胞15 min。在複溶具有最終濃度為20 nM FVIIa之二元TF:FVIIa複合物後，將細胞在37℃下孵育5 min。用乙二胺四乙酸(EDTA)猝滅反應後，用50 µM SN-7，即基於6-氨基-1-萘磺醯胺之螢光受質(Haematologic Technologies, Essex Junction, VT, USA)在配備有Umbelliferone 355激發濾光片、Umbelliferone 460發射濾光片及LANCE/DELFIA頂鏡之Envision讀板儀(Perkin Elmer, Waltham, MA, USA)上量測生成之FXa。相對於無抗體對照，抗TF抗體滴定存在下之FXa轉化百分比(FXa %)總結於 表 8中且在國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)中對其進行繪圖。
在不同濃度之來自第25組及第43組之抗體(包括25A、25A3、25G、25G1、25G5、25G9、43B、43B1、43B7、43D、43D7、43D8、43E及43Ea)存在下，FXa轉化百分比在約78%至約120%之範圍內。
該資料指示來自第25組及第43組之抗TF抗體不抑制TF:FVIIa介導之FXa自FX轉化。該資料亦表明來自第25組及第43組之抗TF抗體具有與由FX結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點。 表 8：FXa轉化%
抗體 FXa %
12.5 nM 25 nM 50 nM 100 nM
1F 49 40 37 38
1G 55 48 41 41
25A 87 81 94 89
25A3 89 89 93 96
25A5 82 85 78 89
25G 99 109 102 116
25G1 101 96 99 108
25G9 98 97 104 117
29D 85 77 75 75
29E 81 68 63 66
39A 39 38 37 39
43B 113 109 105 105
43B1 106 108 108 112
43B7 113 104 108 112
43D 115 109 104 106
43D7 110 103 102 103
43D8 120 112 107 111
43E 85 89 97 98
43Ea 108 103 106 101
54E 53 44 41 42
5G9 37 33 30 30
同型對照 93 95 89 97
實例 17 ： FVIIa 競爭檢定
使用Alexa Fluor 488 5-磺基二氯苯酚酯(ThermoFisher Scientific)生成FVII-Fc綴合物。藉由凝膠過濾(ThermoFisher Scientific)自綴合物製劑中去除過量之Alexa Fluor染料。
為了評價FVIIa與抗TF人類抗體之間的競爭，首先將TF陽性MDA-MB-231細胞(ATCC, Manassas, VA, USA)在冰上孵育1小時，其中滴定抗TF人類抗體。隨後，將最終濃度為20 nM之與Alexa488綴合之FVII-Fc添加到抗體細胞混合物中。在冰上再孵育1小時後，洗滌細胞，用活性染料進行染色，並藉由流動式細胞測量術進行分析。使用中值螢光強度總結了來自活細胞之Alexa488螢光資料。FVII-Fc結合總結為FVII-Fc結合% = [MFI 抗體標記之細胞– MFI 未染色之細胞] / [MFI IgG1 對照標記之細胞– MFI 未染色之細胞]。相對於無抗體對照，抗TF抗體滴定存在下之FVIIa結合百分比(FVIIa %)總結於 表 9中且展示於國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號中，其以引用方式整體併入本文。
在不同濃度之來自第25組及第43組之抗體(包括25A、25A3、25G、25G1、25G5、25G9、43B、43B1、43B7、43D，43D7、43D8、43E及43Ea)存在下，FVIIa結合百分比在約76%至約102%之範圍內。
該資料表明來自第25組及第43組之抗TF抗體不與FVIIa競爭結合至人類TF。該資料亦表明來自第25組及第43組之抗TF抗體具有與由FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點。 表 9：抗TF抗體與FVIIa之競爭
抗體 FVIIa %
9.25 nM 28 nM 83 nM 250 nM
1F 7 7 7 6
1G 7 7 7 6
25A 100 101 97 98
25A3 90 87 88 87
25A5 76 79 77 80
25G 97 96 93 92
25G1 97 93 94 95
25G9 93 93 91 89
29D 6 4 3 3
29E 5 3 2 2
39A 2 2 2 2
43B 99 95 93 91
43B1 97 95 93 91
43B7 98 98 97 97
43D 102 100 98 94
43D7 101 102 100 101
43D8 100 99 98 96
43E 95 92 91 89
43Ea 93 91 92 89
54E 11 3 3 2
同型 99 98 97 99
實例 18 ： TF 傳訊檢定
如先前Hjortoe等人， Blood, 2004, 103:3029-3037中所述，對IL-8及GM-CSF蛋白水準進行量測。將用Leibovitz之L-15培養基進行2小時血清饑餓之TF陽性MDA-MB-231細胞(ATCC, Manassas, VA, USA)用自100 nM抗TF抗體開始之8點1:2.5滴定進行孵育。在37℃下30分鐘後，將FVIIa (NovoSeven RT, Novo Nordisk, Bagsvaerd, Denmark)以20 nM之最終濃度添加到細胞中。5小時後，收集細胞培養上清液，並按建議藉由ELISA分析IL8或GM-CSF (R&D Biosystems, Minneapolis, MN, USA)。在Prism中使用利用重組IL8或GM-CSF得到之標準曲線(R&D Biosystems, Minneapolis, MN, USA)，以計算細胞培養上清液中之細胞介素濃度。相對於無抗體對照，計算報告抗體濃度下之IL8及GM-CSF百分比(IL8 %及GM-CSF %)。用抗TF抗體滴定之IL8濃度展示在國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)中，且不同抗體濃度下之IL8 %展示於 表 10。用抗TF抗體滴定之GM-CSF濃度展示於國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)中，且不同抗體濃度下之IL8 %展示於 表 11。
在濃度大於或等於6.4 nM之抗TF抗體之存在下，IL8濃度降低大於75%。在濃度大於或等於6.4 nM之抗TF抗體之存在下，GM-CSF濃度降低大於60%。
該資料表明所有測試之抗TF抗體抑制FVIIa依賴性TF傳訊。 表 10：IL8之抑制
抗體 IL8 %
100 nM 40 nM 16 nM 6.4 nM 2.56 nM
1F 2 2 2 3 18
1G 2 2 3 4 26
25A 9 8 10 11 43
25A3 8 8 8 9 47
25A5 6 7 7 14 70
25G 9 10 16 22 60
25G1 9 8 9 12 46
25G9 13 14 15 22 51
29D 1 2 2 6 27
29E 2 2 2 5 33
39A 3 2 2 6 52
43B 4 4 5 11 50
43B1 5 5 6 12 56
43B7 4 4 8 15 55
43D 5 5 7 21 58
43D7 5 4 5 11 48
43D8 5 5 5 21 67
43E 5 5 6 15 49
43Ea 6 6 6 14 52
54E 2 2 3 8 48
對照 106 108 84 88 90
表 11 ：GM-CSF之抑制
抗體 GM-CSF %
100 nM 40 nM 16 nM 6.4 nM 2.56 nM
1F 6 6 6 8 27
1G 7 7 7 9 34
25A 22 19 22 24 57
25A3 20 19 19 20 59
25A5 12 15 14 18 72
25G 19 18 32 39 77
25G1 17 16 17 18 48
25G9 25 26 26 34 60
29D 5 6 7 15 38
29E 6 6 5 9 33
39A 7 5 5 8 42
43B 14 13 12 21 59
43B1 11 11 13 16 50
43B7 11 11 13 17 50
43D 12 11 13 24 56
43D7 10 10 9 15 45
43D8 12 11 11 24 57
43E 14 15 15 21 61
43Ea 14 15 14 21 65
54E 5 5 5 10 38
對照 105 111 94 86 88
實例 19 ：抗體競爭檢定
使用Alexa Fluor 488 5-磺基二氯苯酚酯(ThermoFisher Scientific)生成Alexa Fluor抗體。藉由凝膠過濾(ThermoFisher Scientific)自抗體染料綴合物製劑中去除過量之Alexa Fluor染料。
為了評價第一抗TF人類抗體與25A之間的競爭，首先將TF陽性A431細胞(ATCC, Manassas, VA, USA)在冰上孵育1小時，其中滴定第一抗TF人類抗體。隨後，將最終濃度為20 nM之與Alexa488綴合之25A添加到抗體細胞混合物中。在冰上再孵育1小時後，洗滌細胞，用活性染料進行染色，並藉由流動式細胞測量術進行分析。使用中值螢光強度總結了來自活細胞之Alexa488螢光資料。25A結合總結為25A結合% = [MFI 抗體標記之細胞– MFI 未染色之細胞] / [MFI IgG1 對照標記之細胞– MFI 未染色之細胞]。
為了評價第一抗TF人類抗體與43Ea之間的競爭，首先將TF陽性A431細胞(ATCC, Manassas, VA, USA)在冰上孵育1小時，其中滴定第一抗TF人類抗體。隨後，將最終濃度為20 nM之與Alexa488綴合之43Ea添加到抗體細胞混合物中。在冰上再孵育1小時後，洗滌細胞，用活性染料進行染色，並藉由流動式細胞測量術進行分析。使用中值螢光強度總結了來自活細胞之Alexa488螢光資料。43Ea結合總結為43Ea結合% = [MFI 抗體標記之細胞– MFI 未染色之細胞] / [MFI IgG1 對照標記之細胞– MFI 未染色之細胞]。
25A結合%及43Ea結合%展示於 表 12。來自第25組及第43組之抗體降低25A結合%及43Ea結合%至小於10%。
該資料指示第25組之抗體及第43組之抗體彼此競爭結合至人類TF，且可結合相同或重疊之人類TF表位。 表 12：抗TF抗體與抗體純系25A或43Ea之競爭
抗體(100 nM) 25A 結合% 43Ea 結合%
1F 95 77
1G 75 58
25A 3 1
25G 7 3
29D 70 64
29E 96 85
39A 99 96
43B 0 0
43D 0 0
43E 0 0
54E 99 96
同型 100 100
實例 20 ：細胞活力檢定
為了評價抗TF抗體之內在化，進行細胞毒性檢定。簡言之，將細胞以每孔4x10 3個細胞塗鋪於384孔板(Greiner Bio-One, Monroe, NC, USA)內之40 µl培養基中。與微管蛋白抑制劑單甲基澳瑞他汀F (MMAF) (Moradec, San Diego, CA, USA)綴合之抗體及二級抗人類Fc抗體分別自5 nM及30 nM處開始進行連續稀釋。孵育板3天，之後在CellTiter-Glo (CTG)檢定試劑(Promega, Madison, WI, USA)中裂解。在Envision讀板儀上量測CTG發光，且在Prism中繪製4次重複實驗之平均值及標準偏差。對於每種抗TF抗體，使用4參數結合模型在Prism中計算IC 50及其相關之95%置信區間。
國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示出由發光水準及經計算之IC 50指示之細胞活力。
該資料表明，測試之第1組、第25組、第29組、第39組、第43組及第54組之所有抗TF抗體有效降低了TF陽性A431細胞之活力。 實例 21 ：凝血酶生成檢定 (TGA)
使用由STAGO製造及分配之校準自動血栓圖(CAT)儀器進行TGA檢定。測試方法之設計等效於標準CAT檢定之量測，不同之處在於血漿來源為補充有玉米胰蛋白酶抑制劑之檸檬酸鹽(檸檬酸鹽/CTI)中之正常混合血漿(NPP)。將抗TF抗體以0、10、50及100 nM滴定，且與收集在補充有100微克/mL玉米胰蛋白酶抑制劑之11 mM檸檬酸鹽(檸檬酸鹽/CTI)中之正常混合血漿(NPP)混合。將重新脂化之TF添加到96孔檢定板中，之後添加抗體/NPP混合物。孵育10分鐘後或直接將重新脂化之TF與抗體/NPP合併後，藉由添加鈣及凝血酶受質來引發凝血酶之生成。使用STAGO軟體報告以下參數：峰值IIa (生成之最高凝血酶濃度[nM])；滯後時間(生成IIa之時間) [min])；ETP (內源性凝血酶潛能，曲線下面積) [nM x min])；及tt峰值(到達峰值IIa之時間[min])。亦報告了在同一板上，相對於無抗體血漿對照，每種抗體存在下凝血酶生成之峰值百分比(峰值IIa%)及內源性凝血酶潛能百分比(ETP %)。
表 37展示選自25A、25A3、25A5、39A、43B1、43D7、43Ea及M1593之每種抗體存在下之峰值IIa、滯後時間、ETP、tt峰值、峰值IIa%及ETP %，其中在添加鈣及凝血酶受質之前不進行抗體孵育。 表 38展示選自25A、25A3、25A5、39A、43B1、43D7、43Ea及M1593之每種抗體存在下之峰值IIa、滯後時間、ETP、tt峰值、峰值IIa%及ETP %，其中在添加鈣及凝血酶受質之前進行10 min抗體孵育。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了抗TF抗體滴定存在下之峰值IIa%，其中在添加鈣及凝血酶受質之前不進行抗體孵育。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了抗TF抗體滴定存在下之峰值IIa%，其中在添加鈣及凝血酶受質之前進行10 min抗體孵育。M1593抗體具有SEQ ID NO:821之VH序列及SEQ ID ID NO:822之VL序列。
在不進行抗體預孵育之來自第25組之抗體(包括25A、25A3及25A5)存在下，峰值IIa%為95%或更高。在進行10 min抗體預孵育之來自第25組之抗體(包括25A、25A3及25A5)存在下，峰值IIa%為100%或更高。在來自第25組之測試抗體之存在下，ETP %為99%或更高。
在不進行抗體預孵育之來自第43組之抗體(包括43B1、43D7及43Ea)及抗TF抗體M1593之存在下，峰值IIa%大於50%但等於或小於96%。在進行10 min抗體預孵育之來自第43組之抗體(包括43B1、43D7及43Ea)及抗TF抗體M1593之存在下，峰值IIa%大於40%但等於或小於93%。在來自第43組之測試抗體及M1593抗體之存在下，ETP %為92%或更高。
該資料指示來自第25組及第43組之抗體允許正常凝血酶生成，並因此並非凝血酶生成之抑制劑。與第43組之抗體及M1593抗體相比，凝血酶生成之峰值百分比(峰值IIa%)在第25組之抗體之存在下更大。 表 37：不進行抗體預孵育之凝血酶生成檢定
板 抗體 Ab 濃度(nM) 峰值IIa (nM) 滯後時間(min) ETP (nM • min) tt 峰值(min) 峰值IIa % ETP %
3 25A 100 334 5.0 2390 8.7 96 105
50 335 5.0 2380 8.7 96 104
10 333 5.0 2387 8.6 95 104
3 25A3 100 343 5.0 2405 8.4 98 105
50 349 5.0 2433 8.4 100 106
10 350 5.0 2426 8.0 100 106
3 25A5 100 342 5.1 2393 8.5 98 105
50 344 4.8 2317 8.1 98 101
10 343 4.7 2270 8.0 98 99
3 39A 100 22 38.1 * 48.3 6 *
50 29 33.1 * 43.2 8 *
10 84 12.4 1332 20.7 24 58
3 43B1 100 223 4.8 2111 10.0 64 92
50 239 4.9 2134 9.9 68 93
10 303 5.1 2318 9.1 87 101
3 43D7 100 186 5.6 2105 12.2 53 92
50 216 5.5 2183 11.3 62 96
10 301 5.4 2338 9.3 86 102
3 43Ea 100 302 5.1 2347 9.1 87 103
50 308 5.1 2392 8.8 88 105
10 336 4.5 2305 7.8 96 101
3 M1593 100 242 5.1 2235 10.4 69 98
50 270 5.1 2282 9.8 77 100
10 322 5.1 2368 8.8 92 104
3 同型 100 347 5.0 2319 8.1 99 101
50 348 5.0 2324 8.1 100 102
10 348 5.0 2326 8.3 100 102
3 血漿對照 NA 349 4.7 2285 7.7 100 100
*當軟體無法計算ETP時，組具有「未發現尾」之錯誤。 表 38：進行10 min抗體預孵育之凝血酶生成檢定
板 抗體 Ab 濃度(nM) 峰值IIa (nM) 滯後時間(min) ETP (nM • min) tt 峰值(min) 峰值IIa % ETP %
3 25A 100 274 3.3 1879 7.0 103 106
50 279 3.3 1876 7.0 105 106
10 280 3.6 1872 7.0 105 106
3 25A3 100 290 3.4 1906 6.8 109 108
50 291 3.6 1925 6.8 109 109
10 287 3.3 1886 6.8 108 107
3 25A5 100 286 3.7 1883 7.0 107 107
50 277 3.7 1803 7.0 104 102
10 278 3.7 1808 7.0 104 102
3 39A 100 17 32.1 * 43.2 6 *
50 21 29.0 * 39.7 8 *
10 30 20.9 * 30.8 11 *
3 43B1 100 156 3.6 1701 9.3 58 96
50 148 3.3 1667 9.6 55 94
10 203 3.7 1776 8.2 76 101
3 43D7 100 120 3.7 1633 10.8 45 92
50 131 3.7 1724 10.4 49 98
10 197 3.7 1784 8.8 74 101
3 43Ea 100 244 3.3 1817 7.3 91 103
50 246 3.3 1833 7.3 92 104
10 247 3.3 1779 7.1 93 101
3 M1593 100 160 3.7 1737 9.4 60 98
50 165 3.7 1739 9.3 62 99
10 224 3.7 1807 8.0 84 102
3 同型 100 279 3.7 1829 7.2 105 104
50 283 3.7 1839 7.0 106 104
10 279 3.7 1814 7.1 105 103
3 血漿對照 NA 267 3.7 1766 7.2 100 100
*當軟體無法計算ETP時，組具有「未發現尾」之錯誤。 實例 22 ：抗體 - 藥物綴合物 (ADC) 之合成
合成抗體-藥物綴合物(ADC)，如Behrens等人， Mol Pharm, 2015, 12:3986-98中描述。用2.5莫耳當量之三(2-羧基乙基)膦將pH 7.4之磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中之5 mg/mL抗體還原。在37℃下2小時後，將部分還原之抗體冷卻至室溫，且經1小時綴合至3至5莫耳當量之MC-vc-PAB-MMAE (馬來醯亞胺基己醯基-纈胺酸-瓜胺酸-對氨基苯甲醯氧基羰基-單甲基澳瑞他汀E)。將反應物緩衝液交換到PBS中以去除小分子量試劑。所得ADC之藥物-抗體比率(DAR)為3至4。用以下公式確定DAR：吸光度(248 nm) /吸光度(280 nm) = (n x Ex PAB[248 nm]+ Ex 抗體 [248 nm]) / (n x Ex PAB[280 nm]+ Ex 抗體 [280 nm])，其中n為DAR之變量，且Ex為PAB及抗體之消光係數。疏水相互作用層析法及尺寸排阻層析法分別用於證實基於吸光度之DAR估計值及用於確保ADC製劑為至少95%單體。 實例 23 ：抗體 - 藥物綴合物 (ADC) 之細胞毒性檢定
為了評價ADC之細胞毒性，將TF陽性A431及HPAF-II細胞以每孔4x10 3個細胞塗鋪於384孔板(Greiner Bio-One, Monroe, NC, USA)中之40 µL培養基內。將綴合至MC-vc-PAB-MMAE之抗TF抗體自5 nM開始進行連續稀釋。孵育板3至4天，之後在CellTiter-Glo (CTG)檢定試劑(Promega, Madison, WI, USA)中裂解。在Envision讀板儀上量測CTG發光，且在Prism中繪製4次重複實驗之平均值及標準偏差。對於各ADC，使用4參數結合模型在Prism中計算IC 50及其相關之95%置信區間。
國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了在TF陽性A431及HPAF-II細胞中由CTG發光及計算之IC 50指示之細胞活力。包含綴合至MC-vc-PAB-MMAE之來自第25組、第43組及第39組之抗TF抗體之ADC在TF陽性A431及HPAF-II細胞中產生細胞毒性。
該資料指示抗TF抗體-藥物綴合物降低了TF陽性細胞之活體外活力。 實例 24 ：對豬 TF 之結合親和力檢定
測試了某些抗體與豬TF結合之能力。對於豬TF基於Biacore之量測，給定抗TF抗體經共價偶聯至CM5晶片之抗人類IgG抗體(GE Healthcare Bio-Sciences)捕獲。量測抗TF抗體與自100 nM開始之五點三倍滴定之豬TF-His之間的締合180至240秒。隨後，量測抗TF抗體與TF-His之間的解離1800秒。使用1:1結合模型對動力學資料進行整體分析及擬合。藉由基於Biacore之實驗量測之指示之TF抗體之K D值展示於 表 40。
如 表 40所示，來自第25組及第43組之抗hTF抗體，即25G9及43D8表現出與豬TF之結合活性及交叉反應性。 表 40 ：豬TF之抗體動力學
Ab 豬K D(nM) [ 標準偏差]
1G 無結合*
29D 無結合*
25G9 3.31 [0.08]
43D8 12.9 [0.03]
無結合*：無結合至弱結合，無可報告之K D 實例 25 ：基於細胞之結合檢定
人類TF陽性癌細胞株A431及MDA-MB-231以及普通獼猴TF陽性細胞株RF/6A獲自美國組織培養物保藏中心(ATCC, Manassas, VA, USA)，並按建議進行維護。
評估基於細胞之抗體結合，如先前描述於Liao-Chan等人， PLoS One, 2015, 10:e0124708中，其以引用方式整體併入。將用Cellstripper (Mediatech, Manassas, VA, USA)收集之1.2x10 5個細胞用十二點1:3稀釋滴定之抗人類TF IgG1抗體(在250 nM或100 nM處開始)在冰上孵育2小時。洗滌2次後，將標記有IgG1抗體之細胞分別與150 nM山羊藻紅蛋白(PE)山羊抗人類IgG F(ab’) 2片段(Fcγ片段特異性)(Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA, USA)或FITC標記之山羊抗人類κ F(ab’) 2片段(SouthernBiotech, Birmingham, AL, USA)在冰上孵育30 min。洗滌2次後，用TO-PRO-3碘化物(ThermoFisher Scientific)標記死細胞，且在CytoFLEX流式細胞儀(Beckman Coulter, Brea, CA, USA)或Novocyte流式細胞儀(ACEA Biosciences, San Diego, CA, USA)上分析樣品。繪製各稀釋度處之中值螢光強度(MFI)，且使用Prism (GraphPad, La Jolla, CA, USA)中之4參數結合模型得出細胞EC 50。基本上不影響FX轉化之抗體(亦即25A、25A3、25G1、43B1、43D7及43Ea)及抑制FX轉化超過50%之抗體(亦即1F、29E、39A及54E)包括在檢定中。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示抗TF抗體與人類TF陽性A431細胞之結合之結果。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示抗TF抗體與人類TF陽性MDA-MB-231細胞之結合之結果。
國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號之圖12A中之所有測試之抗hTF抗體對人類TF陽性A431細胞表現出高親和力，其中EC 50在約1.50 nM至約0.34 nM之範圍內。IgG1同型對照不結合A431細胞(不結合，nb)。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號之圖12B中之所有測試之抗hTF抗體對人類TF陽性MDA-MB-231細胞表現出高親和力，其中EC 50在約1.50 nM至約0.06 nM之範圍內。IgG1同型對照不結合MDA-MB-231細胞(不結合，nb)。
如 實例 13所述及 表 5所示，評價了抗hTF抗體對來自食蟹猴(食蟹獼猴)之TF之結合親和力。食蟹獼猴TF及普通獼猴TF之蛋白質序列為相同的。如 表 42所示，使用普通獼猴RF/6A細胞株證實TF特異性抗體與食蟹猴之結合。所有測試之抗hTF抗體對TF陽性普通獼猴RF/6A細胞表現出高親和力，其中EC 50在約1.28 nM至約0.17 nM之範圍內。抗TF抗體結合至食蟹猴之能力對於用非人類靈長類動物模型對此等抗體進行毒理學研究為有利的。 表 42 ：抗TF抗體與普通獼猴RF/6A細胞之結合
Ab RF/6A EC50 (nM) RF/6A 95% CI
1F 0.17 0.14至0.21
25A 0.43 0.37至0.50
25A3 0.27 0.24至0.30
25G1 0.27 0.23至0.32
29E 0.53 0.46至0.61
39A 0.27 0.23至0.32
43B1 0.47 0.40至0.55
43D7 0.41 0.35至0.49
43Ea 0.92 0.83至1.01
54E 1.28 1.16至1.41
實例 26 ：對大腸埃希氏菌來源之 TF 之結合檢定
大腸埃希氏菌來源之TF經表現為OmpA訊息序列與TF ECD-His6之間的融合體，且藉由親和及陰離子交換層析進行純化。藉由蛋白ELISA研究確定抗TF抗體1F、25A，25A3、25G1、29E、39A、43B1、43D7、43Ea及54E與Expi293或大腸埃希氏菌來源之TF之結合。將用Expi293或大腸埃希氏菌來源之TF-His包被之板與濃度遞增之抗體一起孵育。在用HRP綴合之二級抗體(Jackson Immunoresearch)孵育後，獲得發光資料，並用於使用Prism計算EC 50與95%置信區間。 表 43中列出了抗體之EC 50及95%置信區間。 表 43 ：抗TF抗體與Expi293或大腸埃希氏菌來源之TF之結合
Ab Expi293 來源之TF 蛋白EC50 (nM) Expi293 來源之TF 蛋白95% CI 大腸埃希氏菌來源之TF 蛋白EC50 (nM) 大腸埃希氏菌來源之TF 蛋白95% CI
1F 0.41 0.37至0.46 0.32 0.30至0.34
25A 0.54 0.49至0.60 0.35 0.30至0.41
25A3 0.47 0.39至0.56 0.36 0.31至0.42
25G1 0.42 0.36至0.47 0.31 0.29至0.33
29E 0.98 0.78至1.24 0.68 0.39至1.26
39A 0.45 0.39至0.53 0.34 0.28至0.40
43B1 0.57 0.53至0.61 0.39 0.34至0.44
43D7 0.71 0.62至0.80 0.43 0.35至0.53
43Ea 0.74 0.68至0.81 0.46 0.40至0.53
54E 0.96 0.73至1.29 0.38 0.22至0.62
所有測試之抗hTF抗體均對大腸埃希氏菌來源之TF表現出高親和力，其中EC 50在約0.68 nM至約0.31 nM之範圍內，這與抗體與Expi293來源之TF之結合親和力(約0.98 nM至0.41 nM)相當。此等結果指示，儘管自人類細胞株中選擇了針對糖基化TF之抗TF抗體，但當藉由蛋白ELISA量測時，抗體可以相似之親和力結合至大腸埃希氏菌來源之TF。 實例 27 ：凝血酶生成檢定 (TGA)
使用由STAGO製造及分配之校準自動血栓圖(CAT)儀器(Diagnostica Stago SAS, Asnières sur Seine, France)進行TGA檢定。參見Samama等人， Thromb Res, 2012, 129:e77-82，其以引用方式整體併入。測試方法之設計等效於標準CAT檢定之量測，不同之處在於血漿來源為收集在補充有100 µg/mL玉米胰蛋白酶抑制劑之11 mM檸檬酸鹽(檸檬酸鹽/CTI)中之正常混合血漿(NPP)。將抗TF抗體以0、10、50及100 nM滴定，並與檸檬酸鹽/CTI中之NPP混合。將重新脂化之TF添加到96孔檢定板中，之後添加抗體/NPP混合物。孵育10分鐘後或直接將重新脂化之TF與抗體/NPP合併後，藉由添加鈣及凝血酶受質來引發凝血酶之生成。使用STAGO軟體報告以下參數：峰值IIa (凝血酶生成曲線上生成之最高凝血酶濃度[nM])；滯後時間(自檢定開始到形成10 nM凝血酶時刻之時間) [min])；ETP (內源性凝血酶潛能，曲線下面積) [nM x min])；及tt峰值(自檢定開始到峰值IIa之時間[min])。亦報告了在同一板上，相對於無抗體血漿對照，每種抗體存在下凝血酶生成之峰值百分比(峰值IIa%)、內源性凝血酶潛能百分比(ETP %)及tt峰值百分比(tt峰值%)。如本文所用，術語「凝血酶生成檢定」(TGA)係指在此實例中使用之TGA。
表 44展示選自1F、25A、25A3、25G1、29E、39A、43B1、43D7、43Ea、54E、TF-011、5G9及10H10之每種抗體存在下之峰值IIa、滯後時間、ETP、tt峰值、峰值IIa%、ETP %及tt峰值%，其中在添加鈣及凝血酶受質之前不進行抗體孵育。 表 45展示選自1F、25A、25A3、25G1、29E、39A、43B1、43D7、43Ea、54E、TF-011、5G9及10H10之每種抗體存在下之峰值IIa、滯後時間、ETP、tt峰值、峰值IIa%、ETP %及tt峰值%，其中在添加鈣及凝血酶受質之前進行10 min抗體孵育。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了未進行抗體預孵育之100 nM抗TF抗體存在下之凝血酶生成曲線。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了未進行抗體預孵育之抗TF抗體滴定存在下之峰值凝血酶濃度。
如國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)所展示，在未進行抗體預孵育之條件下，在100 nM抗體濃度下，1F、29E、39A、54E分別將峰值IIa濃度降低了92%、76%、91%及70%。類似地，100 nM之5G9及TF-011分別抑制峰值IIa濃度92%及91%。在兩種最高濃度之1F、39A、5G9及TF-011之存在下，凝血酶生成大大降低，這阻礙了內源性凝血酶生成(ETP)計算，且在50 nM及100 nM下分別將達到峰值IIa/凝血酶生成之時間(tt峰值)增加了至少284%及353%。相比之下，來自第25組之抗體對峰值IIa濃度或tt峰值之影響不超過9%。第43組抗體及10H10對峰值IIa濃度表現出輕微之干擾：100 nM之43B1、43D7、43Ea及10H10分別將峰值IIa濃度降低了33%、44%、13%及34%。此外，100 nM之43B1、43D7及10H10展示tt峰值增加了至少29%。然而，對於第43組抗體及10H10，觀測到之峰值IIa濃度下降及tt峰值延遲不導致ETP下降超過10%。
在進行10 min抗體預孵育之條件下，類似之結果在 表 45 中展示。在100 nM抗體濃度下，1F、29E、39A、54E分別將峰值IIa濃度降低了93%、72%、93%及87%。類似地，100 nM之5G9及TF-011分別抑制峰值IIa濃度92%及91%。在兩種最高濃度之1F、39A、54E及TF-011以及所有測試濃度之5G9之存在下，凝血酶生成大大降低，這阻礙了內源性凝血酶生成(ETP)計算，且在50 nM及100 nM下分別將達到峰值IIa/凝血酶生成之時間(tt峰值)增加了至少303%及371%。相比之下，來自第25組之抗體並不降低峰值IIa濃度或增加tt峰值。第43組抗體及10H10對峰值IIa濃度表現出輕微之干擾：100 nM之43B1、43D7、43Ea及10H10分別將峰值IIa濃度降低了41%、56%、13%及48%。此外，100 nM之43B1、43D7及10H10展示tt峰值增加了至少33%。然而，對於第43組抗體及10H10，觀測到之峰值IIa濃度下降及tt峰值延遲不導致ETP下降超過11%。
總體而言，此等結果指示，當考慮到所有三個TGA參數(ETP、峰值IIa濃度及tt峰值)時，第25組抗體在凝血級聯之倒數第二步中為完全惰性的。 表 44：不進行抗體預孵育之凝血酶生成檢定
板 樣品 Ab 濃度(nM) 峰值IIa [nM] (SD) 滯後時間[min] (SD) ETP (nM • min] (SD) tt 峰值[min] (SD) 峰值IIa % ETP % tt 峰值%
1 1F 100 25 (1) 31 (1) * 41 (0.7) 8 * 419
50 31 (0) 25.6 (0.3) * 35.3 (0.3) 9 * 347
10 155 (1) 8.2 (0.2) 1738 (25) 14.9 (0.2) 47 86 89
1 25A 100 317 (6) 5.2 (0.2) 2134 (28) 8.6 (0.2) 95 105 9
50 317 (2) 5.2 (0.2) 2122 (30) 8.6 (0.2) 95 105 9
10 322 (2) 5 (0) 2108 (29) 8.2 (0.2) 97 104 4
1 25A3 100 323 (1) 4.6 (0.2) 2031 (19) 7.9 (0.2) 97 100 0
50 328 (2) 4.7 (0) 2080 (23) 8 (0) 98 103 1
10 326 (4) 5.3 (0) 2152 (14) 8.4 (0.2) 98 106 6
1 25G1 100 340 (3) 5.3 (0) 2160 (27) 8.3 (0) 102 107 5
50 346 (6) 5.1 (0.2) 2221 (40) 8.2 (0.2) 104 110 4
10 337 (1) 4.7 (0) 2061 (34) 7.8 (0.2) 101 102 -1
1 29E 100 81 (0) 17.1 (0.2) 1257 (18) 26.2 (0.2) 24 62 232
50 95 (1) 14.1 (0.2) 1365 (26) 22.6 (0.4) 29 67 186
10 235 (3) 7 (0) 1926 (9) 11.7 (0) 71 95 48
1 同型 100 326 (3) 5.3 (0) 2132 (13) 8.6 (0.2) 98 105 9
50 331 (3) 5.3 (0) 2177 (19) 8.3 (0) 99 108 5
10 328 (4) 5.3 (0) 2129 (26) 8.4 (0.2) 98 105 6
1 TF-011 100 30 (1) 26 (0.3) * 35.8 (0.2) 9 * 353
50 39 (3) 21.3 (0.5) * 30.3 (1.1) 12 * 284
10 156 (7) 8 (0) 1714 (41) 14.7 (0.5) 47 85 86
1 5G9 100 27 (1) 29.9 (0.4) * 39.6 (0.4) 8 * 401
50 28 (0) 25.1 (0.4) * 34.6 (0.2) 8 * 338
10 79 (1) 10.4 (0.2) 1176 (16) 18.6 (0.2) 24 58 135
1 10H10 100 221 (4) 5.2 (0.2) 1945 (37) 10.2 (0.2) 66 96 29
50 248 (3) 5.2 (0.2) 1978 (32) 9.8 (0.3) 74 98 24
10 310 (2) 5.2 (0.2) 2036 (33) 8.6 (0.2) 93 101 9
1 血漿對照 NA 333 (0) 4.7 (0) 2023 (30) 7.9 (0.2) 100 100 0
2 39A 100 29 (0) 34.7 (0) * 44.6 (0.2) 9 * 465
50 36 (1) 29.8 (0.7) * 39.3 (0.7) 11 * 397
10 122 (3) 10.8 (0.3) 1694 (57) 18.6 (0.2) 37 84 135
2 43B1 100 238 (4) 5.3 (0) 2300 (32) 10.8 (0.2) 67 99 37
50 258 (5) 5.2 (0.2) 2301 (29) 10.2 (0.2) 72 99 29
10 317 (1) 5 (0) 2341 (34) 8.6 (0.2) 89 101 9
2 43D7 100 199 (6) 5.1 (0.2) 2124 (27) 11.2 (0.2) 56 91 42
50 234 (1) 5 (0) 2190 (15) 10.3 (0) 66 94 30
10 312 (3) 5 (0) 2343 (49) 8.9 (0.2) 88 101 13
2 43Ea 100 308 (2) 5 (0) 2349 (9) 9 (0) 87 101 14
50 316 (3) 5 (0) 2430 (69) 8.7 (0) 89 105 10
10 337 (4) 5 (0) 2416 (82) 8.3 (0) 95 104 5
2 54E 100 108 (3) 12.2 (0.2) 1589 (13) 20.2 (0.2) 30 68 156
50 191 (2) 8 (0) 2109 (51) 14.3 (0) 54 91 81
10 311 (5) 5 (0) 2275 (41) 8.8 (0.2) 87 98 11
2 同型 100 351 (2) 4.7 (0) 2304 (14) 7.9 (0.2) 99 99 0
50 353 (1) 5 (0) 2391 (29) 8.2 (0.2) 99 103 4
10 348 (1) 5 (0) 2367 (9) 8.3 (0) 98 102 5
2 血漿對照 NA 356 (1) 4.9 (0.2) 2323 (76) 8.11 (0.3) 100 100 3
*當軟體無法計算ETP時，組具有「未發現尾」之錯誤。 表 45：進行10 min抗體預孵育之凝血酶生成檢定
板 樣品 Ab 濃度 (nM) 峰值 IIa [nM] (SD) 滯後時間 [min] (SD) ETP (nM • min] (SD) tt 峰值 [min] (SD) 峰值 IIa % ETP % tt 峰值 %
1 1F 100 20 (1) 29.5 (0.2) * 40.8 (0.6) 7 * 483
50 23 (0) 26.5 (0.7) * 37.3 (0.4) 8 * 433
10 44 (2) 13.8 (0.5) 742 (23) 22.4 (0.4) 16 41 220
1 25A 100 291 (3) 3.3 (0.1) 1964 (36) 6.7 (0.1) 106 108 -4
50 290 (0) 3.3 (0.1) 1972 (22) 6.8 (0) 106 108 -3
10 284 (1) 3.3 (0.1) 1899 (21) 6.8 (0) 104 104 -3
1 25A3 100 290 (3) 3.1 (0) 1893 (28) 6.4 (0) 106 104 -9
50 284 (4) 3.1 (0) 1875 (16) 6.4 (0) 104 103 -9
10 288 (3) 3.1 (0) 1901 (26) 6.4 (0) 105 105 -9
1 25G1 100 311 (3) 3.1 (0) 1954 (20) 6.3 (0.1) 114 107 -10
50 311 (1) 3.1 (0) 1951 (22) 6.1 (0) 114 107 -13
10 302 (3) 3.1 (0) 1877 (33) 6.1 (0) 110 103 -13
1 29E 100 76 (1) 14.7 (0.1) 1201 (24) 24.3 (0.3) 28 66 247
50 83 (1) 14.1 (0) 1300 (17) 23.6 (0.1) 30 72 237
10 98 (1) 9.4 (0) 1408 (11) 18.1 (0) 36 77 159
1 同型 100 288 (2) 3.4 (0) 1922 (28) 6.8 (0) 105 106 -3
50 292 (2) 3.4 (0) 1921 (25) 6.8 (0) 107 106 -3
10 290 (3) 3.4 (0) 1926 (38) 6.8 (0) 106 106 -3
1 TF-011 100 26 (0) 23.8 (1.1) * 34.2 (0.9) 9 * 389
50 27 (1) 22.4 (0.1) * 33 (0.1) 10 * 371
10 46 (3) 13.5 (0.5) 792 (55) 22.5 (0.2) 17 44 221
1 5G9 100 22 (0) 26.7 (0.3) * 37.5 (0.5) 8 * 436
50 23 (3) 23.6 (2.2) * 34 (2.4) 8 * 386
10 30 (1) 19.3 (0.4) * 29 (0.8) 11 * 314
1 10H10 100 169 (3) 3.4 (0) 1795 (36) 9.3 (0.1) 62 99 33
50 175 (4) 3.4 (0) 1754 (20) 9.2 (0.1) 64 96 31
10 235 (8) 3.4 (0) 1807 (42) 7.8 (0) 86 99 11
1 血漿對照 NA 274 (1) 3.4 (0) 1818 (24) 7 (0.1) 100 100 0
2 39A 100 19 (1) 33.6 (0.7) * 44.6 (0.9) 7 * 537
50 22 (0) 30.7 (0.1) * 41.4 (0.1) 8 * 491
10 36 (1) 19.6 (0.7) * 29.3 (0.8) 13 0 319
2 43B1 100 167 (0) 4 (0) 1806 (15) 9.8 (0.1) 59 98 40
50 174 (1) 3.8 (0.1) 1831 (22) 9.6 (0) 62 99 37
10 222 (5) 3.7 (0.1) 1841 (37) 8.3 (0) 79 100 19
2 43D7 100 123 (2) 4 (0) 1673 (27) 11.5 (0.1) 44 91 64
50 122 (1) 3.7 (0.1) 1639 (29) 11.3 (0) 43 89 61
10 194 (5) 4 (0) 1796 (35) 8.8 (0.1) 69 97 26
2 43Ea 100 244 (2) 3.5 (0.1) 1857 (42) 7.5 (0.1) 87 101 7
50 245 (0) 3.6 (0) 1851 (29) 7.6 (0) 87 100 9
10 262 (1) 3.6 (0) 1877 (15) 7.3 (0) 93 102 4
2 54E 100 37 (1) 22.3 (0.2) * 33 (0.5) 13 * 371
50 44 (1) 18.3 (0.4) * 28.2 (1) 16 * 303
10 121 (4) 6.5 (0.1) 1523 (20) 13.7 (0.3) 43 83 96
2 同型 100 275 (2) 3.6 (0) 1862 (23) 7.3 (0) 98 101 4
50 284 (0) 3.6 (0) 1899 (15) 7.2 (0.1) 101 103 3
10 281 (3) 3.6 (0) 1877 (13) 7.3 (0) 100 102 4
2 血漿對照 NA 282 (2) 3.8 (0.1) 1845 (22) 7.3 (0) 100 100 4
*當軟體無法計算ETP時，組具有「未發現尾」之錯誤。 實例 28 ：對先前描述之抗 TF 抗體之 FXa 轉化檢定及 FVIIa 競爭檢定
在FXa轉化檢定及FVIIa競爭檢定中測試先前描述之TF特異性抗體TF-011、5G9及10H10 (Breij等人， Cancer Res, 2014, 74:1214-1226；Versteeg等人， Blood, 2008,111:190-199；其各自以引用方式整體併入)。
為了評價在抗TF之人類抗體存在下TF:FVIIa將FX轉化為FXa之能力，進行基於細胞之FX轉化檢定，如Larsen等人， J Biol Chem, 2010, 285:19959-19966中描述，其以引用方式整體併入。簡言之，將5x10 4個MDA-MB-231細胞(ATCC, Manassas, VA, USA)塗鋪到經組織培養物處理之黑色96孔板(Greiner Bio-One, Monroe, NC, USA)中並培養過夜。在去除細胞培養基且在含1.5 mM CaCl 2之HEPES緩衝液中添加最終濃度為200 nM之FX後，在37℃下用滴定抗體孵育細胞15 min。在複溶具有最終濃度為20 nM FVIIa之二元TF:FVIIa複合物後，將細胞在37℃下孵育5 min。在黑色94孔板中用乙二胺四乙酸(EDTA)猝滅反應後，用50 µM SN-7，即基於6-氨基-1-萘磺醯胺之螢光受質(Haematologic Technologies, Essex Junction, VT, USA)在配備有Umbelliferone 355激發濾光片、Umbelliferone 460發射濾光片及LANCE/DELFIA頂鏡之Envision讀板儀(Perkin Elmer, Waltham, MA, USA)上量測生成之FXa。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了相對於無抗體對照，抗TF抗體滴定存在下之FXa轉化百分比(FXa %)。
為了評價FVIIa與抗TF人類抗體之間的競爭，首先將TF陽性MDA-MB-231細胞(ATCC, Manassas, VA, USA)在冰上孵育1小時，其中滴定抗TF人類抗體或同型對照。隨後，將綴合到Alexa488之FVII-Fc以20 nM之最終濃度添加到抗體細胞混合物中。在冰上再孵育1小時後，洗滌細胞，用活性染料進行染色，並藉由流動式細胞測量術進行分析。使用中值螢光強度(MFI)總結了來自活細胞之Alexa488螢光資料。FVII-Fc結合總結為FVII-Fc結合% = [MFI 抗體標記之細胞– MFI 未染色之細胞] / [MFI IgG1 對照標記之細胞– MFI 未染色之細胞]。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了相對於同型對照，抗TF抗體滴定存在下之FVIIa結合百分比(FVIIa %)。
如國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)所展示，TF-011及5G9在25 nM、50 nM及100 nM之濃度下抑制FX轉化57%-59%及67%-70%。10H10在這三種濃度下不顯著抑制FX轉化。
如國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)所展示，TF-011與FVII有效競爭，而5G9及10H10分別展示在最高抗體濃度下低於25%及10%之競爭。
此等結果指示，5G9主要與受質FX結合競爭，從而導致觀測到FX轉化及凝血酶生成之抑制。TF-011藉由與FVIIa競爭結合到TF來抑制凝血酶生成。然而，10H10抑制TF-FVIIa介導之傳訊，而基本上不影響FVIIa與TF之結合。此等發現與以下中描述之先前觀測結果一致：Huang等人， J Mol Biol, 1998, 275:873-894；Ruf等人， Biochem J, 1991, 278:729-733；及Teplyakov等人， Cell Signal, 2017, 36:139-144；其各自以引用方式整體併入。 實例 29 ：抗體競爭檢定
根據製造商之方案使用Alexa Fluor 488 5-磺基二氯苯酚酯(ThermoFisher Scientific)生成Alexa Fluor抗體。藉由凝膠過濾(ThermoFisher Scientific)自抗體染料綴合物製劑中去除過量之Alexa Fluor染料。
為了評估第一抗TF人類抗體與25A3之間的競爭，首先將TF陽性MDA-MB-231細胞(ATCC, Manassas, VA, USA)在冰上孵育1小時，其中滴定第一抗TF人類抗體。隨後，將最終濃度為20 nM之與Alexa488綴合之25A3添加到抗體細胞混合物中。在冰上再孵育1小時後，洗滌細胞，用活性染料進行染色，並藉由流動式細胞測量術進行分析。使用中值螢光強度總結了來自活細胞之Alexa488螢光資料。25A3結合總結為25A3結合% = [MFI 抗體標記之細胞– MFI 未染色之細胞]/[MFI IgG1 對照標記之細胞– MFI 未染色之細胞]。
為了評價第一抗TF人類抗體與43D7之間的競爭，首先將TF陽性MDA-MB-231細胞(ATCC, Manassas, VA, USA)在冰上孵育1小時，其中滴定第一抗TF人類抗體。隨後，將最終濃度為20 nM之與Alexa488綴合之43D7添加到抗體細胞混合物中。在冰上再孵育1小時後，洗滌細胞，用活性染料進行染色，並藉由流動式細胞測量術進行分析。使用中值螢光強度總結了來自活細胞之Alexa488螢光資料。43D7結合總結為43D7結合% = [MFI 抗體標記之細胞– MFI 未染色之細胞]/[MFI IgG1 對照標記之細胞– MFI 未染色之細胞]。
為了評價第一抗TF人類抗體與39A之間的競爭，首先將TF陽性MDA-MB-231細胞(ATCC, Manassas, VA, USA)在冰上孵育1小時，其中滴定第一抗TF人類抗體。隨後，將最終濃度為20 nM之與Alexa488綴合之39A添加到抗體細胞混合物中。在冰上再孵育1小時後，洗滌細胞，用活性染料進行染色，並藉由流動式細胞測量術進行分析。使用中值螢光強度總結了來自活細胞之Alexa488螢光資料。39A結合總結為39A結合% = [MFI 抗體標記之細胞– MFI 未染色之細胞] / [MFI IgG1 對照標記之細胞– MFI 未染色之細胞]。
國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示出25A3結合%、43D7結合%及39A結合%。來自第25組及第43組之抗體、5G9及10H10降低25A3結合%及43D7結合%且不降低39A結合%。來自第1組、第29組、第39組及第54組之抗體以及TF-011降低39A結合%且不降低25A3結合%及43D7結合%。
雖然抗體競爭檢定結果指示，第25組及第43組抗體、5G9及10H10可與人類TF之相同或重疊表位結合，或可藉由變構機制影響彼此之TF結合，但如本揭示案別處所述之嵌合TF構築體定位實驗證明第25組抗體、第43組抗體、5G9及10H10結合不同之表位。此外，雖然抗體競爭檢定結果指示，第1組、第29組、第39組及第54組之抗體及TF-011可與人類TF之相同或重疊表位結合，或可藉由變構機制影響彼此之TF結合，但如本揭示案別處所述之嵌合TF構築體定位實驗證明第29組、第39組及第54組之抗體結合與TF-011不同之表位。 實例 30 ：抗 TF 抗體內在化
為了評價抗TF抗體之內在化，進行細胞毒性檢定，如Liao-Chan等人， PLoS One, 2015, 10:e012470中描述，其以引用方式整體併入。簡言之，將細胞以每孔4x10 3個細胞塗鋪於384孔板(Greiner Bio-One, Monroe, NC, USA)中之40 µl培養基內。與微管蛋白抑制劑單甲基澳瑞他汀F (MMAF) (Moradec, San Diego, CA, USA)綴合之抗體及抗人類Fc Fab分別自5 nM及30 nM處開始進行連續稀釋。與MMAF綴合之抗人類Fc Fab由對人類IgG之Fc區具有特異性之多株抗體組成，其中DAR為1.2至1.5。孵育板3天，之後在CellTiter-Glo (CTG)檢定試劑(Promega, Madison, WI, USA)中裂解。在Envision讀板儀上量測CTG發光，且在Prism (GraphPad, La Jolla, CA, USA)中繪製4次重複實驗之平均值及標準偏差。對於每種抗TF抗體，使用4參數結合模型在Prism中計算IC 50及其相關之95%置信區間。用抗TF抗體及抗TF抗體Fab:MMAF複合物孵育後之細胞活力結果在國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)中展示。IC 50值之95%置信區間在 表 46中展示。
亦藉由基於內在化螢光及猝滅之表面螢光之定量檢定來評價抗TF抗體之內在化。如Liao-Chan等人， PLoS One, 2015,10:e0124708中所述評估細胞表面螢光猝滅。簡言之，將1.2x10 5個MDA-MB-231細胞與100 nM之A488綴合之抗體在培養基中於冰上預孵育2小時。洗滌2次後，將細胞重懸於冷培養基中，且在37℃下脈衝長達4小時。將細胞快速冷卻，且在有或沒有300 nM抗A488抗體(純系19A)之情況下在冰上孵育30 min。洗滌2次後，用DAPI標記死細胞，且在Novocyte流式細胞儀(ACEA Biosciences)上分析樣品。相對於同型對照，對各抗A488 mAb濃度處之中值螢光強度(MFI)進行歸一化，以獲得歸一化之MFI百分比。藉由校正不完全表面猝滅，自猝滅及非猝滅之樣品資料中計算出內在化螢光：1–(N 1–Q 1)/(N 1– (N 1Q 0/N 0))，其中N 1=各時間點(t 1)之未猝滅之MFI；Q 1= t 1之猝滅之MFI；Q 0=保持在冰上之樣品(t 0)之猝滅之MFI；N 0= t 0之未猝滅之MFI。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示與A488綴合之抗TF抗體之內在化百分比。
因為Fab:MMAF結合TF特異性抗體之Fc區，所以此等複合物之細胞攝取可觸發細胞死亡。雖然單獨之TF特異性抗體在TF陽性A431細胞之三天培養中對細胞活力沒有影響，但與Fab:MMAF複合之TF特異性抗體展示劑量依賴性細胞殺傷，其中IC 50值在0.07 nM及0.14 nM之範圍內(參見國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號，其以引用方式整體併入本文)。
細胞攝取經螢光標記之TF特異性抗體證實。在基於內在化螢光及猝滅表面螢光之定量檢定中，TF特異性抗體在4 h孵育後展示28%及37%之間的內在化(參見國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號，其以引用方式整體併入本文)。
此等結果指示，所測試之抗TF抗體可內在化並將毒素遞送到TF陽性細胞中。 表 46 ：帶排序之ADC資料(連續孵育)。*國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了所提及的圖。
   細胞株： A431 A431 MDA-MB-231 HPAF-II 連續之初級 ADC 排序
ADC 格式： 二級ADC 初級ADC 初級ADC 初級ADC
處理： 連續 連續 連續 連續
圖： 圖 18B* 圖 20A* 圖 22D* 圖 22E*
結合資料： IC 50(nM) 95% CI 排序 IC 50(nM) 95% CI 排序 IC 50(nM) 95% CI 排序 IC 50(nM) 95% CI 排序
抗體： 1F 0.07 0.06至0.07 不包括在內 未測試 未測試 未測試 不包括在內
25A 0.11 0.10至0.11 6 0.09 0.08至0.09 7 0.14 0.12至0.16 7 0.06 0.05至0.07 8 7
25A3 0.09 0.08至0.09 3 0.07 0.07至0.08 5 0.11 0.10至0.12 4 0.05 0.04至0.05 5 4
25G1 0.08 0.07至0.08 1 0.06 0.06至0.06 3 0.09 0.08至0.10 3 0.04 0.04至0.05 3 3
29E 0.10 0.09至0.10 4 0.06 0.05至0.06 2 0.07 0.07至0.08 2 0.04 0.04至0.05 2 2
39A 0.08 0.08至0.09 2 0.05 0.05至0.05 1 0.05 0.05至0.05 1 0.04 0.03至0.05 1 1
43B1 0.12 0.11至0.13 7 0.08 0.08至0.08 6 0.14 0.13至0.15 5 0.05 0.04至0.06 4 5
43D7 0.10 0.10至0.10 5 0.06 0.06至0.07 4 0.14 0.12至0.16 6 0.05 0.05至0.06 6 6
43Ea 0.13 0.13至0.14 8 0.09 0.09至0.10 8 0.15 0.13至0.17 8 0.06 0.05至0.06 7 8
54E 0.11 0.11至0.12 不包括在內 0.07 0.07至0.07 不包括在內 未測試 未測試 不包括在內
同型 不適用 不適用 不適用 不適用 不包括在內
TF-011 未測試 0.05 0.05至0.05    未測試 未測試 不包括在內
表 47 ：帶排序之ADC資料(4 h孵育)。*國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了所提及的圖。
   細胞株： A431 A431 4 小時初級ADC 排序
ADC 格式： 初級ADC 初級ADC
處理： 4小時，之後漂洗 4小時，之後漂洗
圖： 圖20B* 圖21A*
量測： IC 50(nM) 95% CI 排序 IC 50(nM) 95% CI 排序
抗體： 1F 未測試 未測試 不包括在內
25A 0.35 0.32至0.39 6 0.18 0.17至0.19 6 6
25A3 0.19 0.17至0.21 3 0.12 0.11至0.12 3 3
25G1 0.19 0.17至0.20 2 0.10 0.09至0.10 2 2
29E 0.20 0.18至0.21 4 0.13 0.12至0.14 4 4
39A 0.12 0.11至0.13 1 0.09 0.09至0.10 1 1
43B1 0.36 0.32至0.41 7 0.19 0.17至0.20 7 7
43D7 0.28 0.25至0.30 5 0.14 0.13至0.15 5 5
43Ea 0.43 0.39至0.48 8 0.24 0.22至0.25 8 8
54E 0.26 0.24至0.29    0.20 0.18至0.22    不包括在內
同型 不適用 不適用 不包括在內
TF-011 0.17 0.16至0.18    0.09 0.09至0.10    不包括在內
實例 31 ：抗體 - 藥物綴合物 (ADC) 之基於細胞之結合檢定
為了評價ADC之細胞結合特性，評估了抗TF抗體及抗TF ADC與表現內源性人類TF之HCT116細胞之結合，如先前描述於Liao-Chan等人， PLoS One, 2015, 10:e0124708中，其以引用方式整體併入。簡言之，將用Cellstripper (Mediatech, Manassas, VA, USA)收集之1.2x10 5個細胞在冰上用十二點1:3稀釋滴定之在100 nM開始之抗人類TF抗體或ADC孵育2小時。洗滌2次後，將標記有抗體或ADC之細胞分別與150 nM山羊藻紅蛋白(PE)山羊抗人類IgG F(ab’) 2片段(Fcγ片段特異性)(Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA, USA)或FITC標記之山羊抗人類κ F(ab’) 2片段(SouthernBiotech, Birmingham, AL, USA)在冰上孵育30 min。洗滌2次後，用TO-PRO-3碘化物(ThermoFisher Scientific)標記死細胞，且在CytoFLEX流式細胞儀(Beckman Coulter, Brea, CA, USA)或Novocyte流式細胞儀(ACEA Biosciences, San Diego, CA, USA)上分析樣品。繪製各稀釋度處之中值螢光強度(MFI)，且使用Prism (GraphPad, La Jolla, CA, USA)中之4參數結合模型得出細胞EC 50。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了抗TF抗體及抗TF ADC之結合曲線。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了抗TF抗體及ADC之可報告細胞EC 50及其95%置信區間。
如國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)所展示 ，TF特異性ADC之細胞結合特性與TF特異性抗體之細胞結合特性相當，這指示ADC之綴合過程不改變ADC之TF特異性抗體部分之細胞結合特性。 實例 32 ：抗體 - 藥物綴合物 (ADC) 之細胞毒性檢定
為了評價ADC之細胞毒性，將A431細胞塗鋪於384孔板(Greiner Bio-One)中。如所示將綴合至MC-vc-PAB-MMAE之抗TF抗體進行連續稀釋。將TF特異性ADC加入A431細胞中，72 h孵育或4 h孵育，之後去除過量之ADC，且再培養68 h。處理後，A431細胞在CTG檢定試劑中裂解。量測CTG發光，且在Prism中繪製4次重複實驗之平均值及標準偏差。對於各ADC，使用4參數結合模型在Prism中計算IC 50及其相關之95%置信區間。
國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了在滴定抗TF ADC連續孵育72h後之細胞活力。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了滴定抗TF ADC孵育4h，之後去除過量之ADC並再培養68h後之細胞活力。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了在連續處理及脈衝處理下之ADC之可報告IC 50值。 表 46及 表 47分別列出了連續處理及脈衝處理之IC 50之95%置信區間。
兩種處理均導致有效之細胞殺傷，其中與72 h孵育相比，當在4 h孵育後自培養物中去除過量之ADC時，IC 50升高2.4至4.7倍。去除過量之25A3及39A ADC對IC 50之影響最小，分別自0.07 nM及0.05 nM增加了2.7及2.4倍。
此等結果指示，與TF特異性抗體相似，TF特異性ADC經歷了實質性之細胞內在化。 實例 33 ： FVIIa 存在下之細胞毒性檢定
為了瞭解FVIIa是否干擾TF特異性ADC之活性，我們在不存在或存在FVIIa之情況下，用TF特異性ADC (與MC-vc-PAB-MMAE綴合之抗TF抗體)處理A431細胞4 h並在68 h後量測細胞活力。在添加抗TF ADC滴定之前，將A431細胞在沒有或有50 nM FVIIa之情況下預孵育30分鐘。藉由CTG檢定確定細胞活力。在Prism中繪製4次重複實驗之平均值及標準偏差。對於各ADC，使用4參數結合模型在Prism中計算IC 50。
國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了在不存在或存在FVIIa之情況下滴定抗TF ADC後之細胞活力。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了在不存在或存在FVIIa之情況下，ADC之可報告IC 50值。
雖然與FVIIa競爭之ADC (29E、39A、54E及TF-011)受到FVIIa存在之負面影響達至少2.3倍，但在不存在或存在FVIIa之情況下，未與FVIIa競爭之ADC (第25組及第43組抗體)同樣有效。
此等結果指示FVIIa不干擾第25組及第43組之抗TF ADC之活性。 實例 34 ：抗體 - 藥物綴合物 (ADC) 存在下之細胞內微管網絡
進行了細胞內微管網絡之免疫螢光實驗，以說明ADC之作用機制。參見Theunissen等人， Methods Enzymol, 2006, 409:251-284。簡言之，將A431或HPAF-II細胞接種於8孔經聚D-離胺酸處理之載玻片(Corning Inc, Corning, NY, USA)上。一天後，將培養基替換為含有5 nM ADC之培養基。ADC暴露20小時後，在室溫下用4%多聚甲醛(ThermoFisher Scientific)固定細胞15 min。用PBS洗滌三次後，用含有0.3% Triton X-100及5%正常山羊血清之PBS使細胞滲透1 h。接下來，將微管網絡在含有1% BSA及0.3% Triton X-100之PBS中用抗微管蛋白(11H10)兔mAb (Alexa Fluor 488綴合物)(Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA)染色3 h。洗滌三次後，將帶有DAPI之ProLong Gold Antifade試劑(ThermoFisher Scientific)添加到細胞中，且使用0.17 mm蓋玻片將載玻片固定以用於顯微術。在配備有sCMOS相機之DMi8螢光顯微鏡(Leica Microsystems, Buffalo Grove, IL, USA)上進行影像採集。使用Leica LAS X軟體獲取系統優化之6至7微米之Z堆棧。用擴展景深(EDF)影像特徵自動創建此Z堆棧中之清晰二維影像。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了A431或HPAF-II細胞之微管蛋白染色之代表性影像。
雖然同型對照ADC不影響微管網絡，但25A3 ADC在A431及HPAF-II細胞中均有效破壞微管網絡。
此等結果指示，基於MMAE之抗TF ADC藉由破壞細胞內微管網絡來誘導TF陽性癌細胞之細胞毒性。 實例 35 ：細胞毒性檢定及 HUVEC 中之 G 2/M 阻滯
為了評價人類臍靜脈內皮細胞(HUVEC)之細胞表面上之TF拷貝數，收集1.2x10 5個HUVEC，並與小鼠IgG2a主鏈上之133 nM抗人類TF抗體5G9一起在冰上孵育2小時。洗滌2次後，將QIFIKIT珠粒(Agilent)及標記有抗TF抗體之細胞與150 nM之山羊藻紅蛋白(PE)山羊抗小鼠IgG F(ab') 2片段(Fc-γ片段特異性)(Jackson ImmunoResearch)在冰上孵育30分鐘。洗滌2次後，用TO-PRO-3碘化物(ThermoFisher Scientific)標記死細胞，且在CytoFLEX流式細胞儀(Beckman Coulter)上分析樣品。門控單個活細胞後，使用FlowJo (Flowjo, Ashland, OR, USA)確定MFI。使用5參數結合模型在Prism中生成使用QIFIKIT珠粒之標準曲線，以確定拷貝數。定量之下限為1.9x10 3個抗體結合位點(亦稱為拷貝數)，且定量之上限為8.0x10 5個抗體結合位點。
對損傷、炎性及血管生成因子之反應短暫增加血管系統中表面TF之表現。參見Holy等人， Adv Pharmacol, 2010, 59:259-592，其以引用方式整體併入。藉由用炎性細胞介素(5 ng/mL IL1-β、25 ng/mL TNF-α及50 ng/mL VEGF)聯合治療HUVEC來模仿細胞培養物中TF之瞬時上調。如國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)所展示，在細胞介素治療6 h後，表面TF水準自不存在炎性細胞介素之2.4x10 3個拷貝增加至1.2x10 4個拷貝。相對於6 h之細胞介素治療，20 h治療後表面TF降低約3倍，這指示細胞介素誘導之TF上調為短暫的。
對於ADC細胞毒性檢定，將HUVEC培養物接種於一半面積96孔板上。第二天，將炎性細胞介素及滴定ADC之組合添加到培養物中。四天後，藉由在CellTiter-Glo (CTG)檢定試劑中裂解來評估培養物之活力。如國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)所展示，抗TF ADC、25A-vc-MMAE及43Ea-vc-MMAE不影響經炎性細胞介素處理之HUVEC培養物之細胞活力。結果指示，經炎性細胞介素處理之內皮細胞對抗TF ADC具有抗性。
為了進一步瞭解內皮細胞對抗TF ADC之抗性，在添加細胞介素及TF特異性ADC後24 h評價了細胞週期進程。如先前Theunissen等人， Methods Enzymol, 2006, 409:251-284中所述分析了細胞週期之G 2/M期之阻滯。簡言之，將在VascuLife VEGF-Mv內皮培養基(Lifeline Cell Technologies)中繁殖之低傳代HUVEC (Lifeline Cell Technologies, Frederick, MD, USA)及HCT-116細胞接種於12孔板上。第二天，去除培養基，且用新鮮培養基(無細胞介素)或含有5 ng/mL IL1-β、25 ng/mL TNF-α及50 ng/mL VEGF之培養基(含細胞介素)替換。將滴定之MMAE連接之ADC或游離MMAE添加到細胞中。處理24 h後，將細胞固定在冰冷之70%乙醇中。隨後，用流動式細胞測量術緩衝液(PBS, 1% FBS, 0.1% Triton)洗滌細胞，且用磷酸組蛋白H3 (Ser10)(D2C8 PE Conjugate, Cell Signaling Technology)之1:100稀釋液染色1 h。洗滌2次後，用100 µg/mL PureLink RNAse A (ThermoFisher Scientific)處理細胞20 min，之後添加活性染料TO-PRO-3碘化物(ThermoFisher Scientific)。在Novocyte流式細胞儀上收集40000個事件。在Flowjo資料分析軟體中，排除了細胞雙倍體及非整倍體細胞。根據DNA含量對pH3訊息進行作圖，以確定pH3陽性細胞之百分比。
國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了在不存在或存在炎性細胞介素之情況下，抗TF ADC滴定下HUVEC中之pH3陽性細胞之百分比(pH3 %)。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了抗TF ADC滴定下HCT-116細胞中之pH3陽性細胞之百分比(pH3 %)。
雖然TF特異性ADC誘導HCT-116細胞中細胞週期之G 2/M期之阻滯，但ADC不影響經或不經炎性細胞介素處理之HUVEC之細胞週期進程。如國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)所展示，與同型vc-MMAE之處理相比，pH3陽性HCT-116細胞之百分比在25A-vc-MMAE處理後增加了5倍。
如國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)所展示，未綴合之MMAE在HCT-116細胞及HUVEC中均以類似之程度增加組蛋白H3之磷酸化，這指示內皮細胞中之抗性對基於MMAE之ADC具有特異性。
綜上所述，此等結果指示，在不存在或存在炎症細胞介素之情況下，抗TF ADC不影響HUVEC之活力。 實例 36 ： Erk 磷酸化檢定
為了評估Erk磷酸化，將A431細胞塗鋪於培養基中之6孔板(Corning)過夜。第二天，將細胞洗滌一次，且在無血清培養基中進行血清饑餓。饑餓後，在37℃下將細胞與100 nM抗TF抗體預孵育30分鐘。將FVIIa以50 nM加標至孔中，且在37℃下孵育20 min以誘導p-ERK。誘導後，用具有Halt™蛋白酶及磷酸酶抑制劑混合物之RIPA裂解及提取緩衝液(ThermoFisher Scientific)裂解細胞。使用Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204)及p44/42 MAPK (Erk1/2) (137F5) (Cell Signaling Technology)作為一抗以及過氧化物酶AffiniPure驢抗兔IgG (H+L) (Jackson ImmunoResearch)作為二抗用20 µg細胞裂解液進行西方墨點。在Amersham AI600 (GE Healthcare)上量測pErk及Erk之非飽和譜帶強度。將各pErk強度根據其各自之Erk強度及無抗體無FVIIa樣品強度進行歸一化。
pErk及Erk之西方墨點結果展示於國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號中，其以引用方式整體併入本文。在不進行抗TF抗體預處理之情況下，用FVIIa處理誘導細胞培養物中之Erk磷酸化為5.2倍。Erk磷酸化之誘導藉由用1F、39A及54E預處理進行消融(誘導倍數在0.8及1.2之間)，且經29E以及第25組及第43組之成員減弱(誘導倍數在2.0及3.4之間)。
該資料指示，在評估Erk磷酸化時，抗TF抗體抑制FVIIa依賴性TF傳訊。 實例 37 ：抗體依賴性細胞毒性 (ADCC) 檢定
為了評價ADCC活性，根據製造商之方案使用ADCC報告生物檢定核心套組(Promega)。簡言之，將A431細胞塗鋪於微量滴定板(Corning)上。第二天，用在50 nM開始之十點1:3稀釋滴定之抗TF抗體或ADC孵育細胞。將ADCC效應子與靶細胞比率為8:1添加到各孔中，且在37℃下孵育6 h。將Bio-Glo™螢光素酶檢定試劑添加到各孔中，以在Envision讀板儀(PerkinElmer, Waltham, MA, USA)上量測發光。在Prism中繪製4次重複實驗之平均值及標準偏差。對於各抗體及ADC，使用4參數結合模型在Prism中計算EC 50及其相關之95%置信區間。
國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了在抗TF抗體或抗TF ADC滴定下，報告Jurkat細胞株孵育後ADCC之報告發光。國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)展示了每種抗TF抗體或ADC之ADCC報告發光EC 50值。
所有測試之TF特異性抗體及ADC均誘導螢光素酶依賴性發光，其中EC 50值範圍在0.18 nM及0.43 nM之間。
此等資料指示，TF特異性抗體及ADC均可藉由抗體之IgG1 Fc域誘導抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。 實例 38 ：對豬 TF 及兔 TF 之結合親和力檢定
測試了某些抗體與豬TF結合之能力。對於豬TF基於Biacore之量測，給定抗TF抗體經共價偶聯至CM5晶片之抗人類IgG抗體(GE Healthcare Bio-Sciences)捕獲。量測抗TF抗體與自100 nM開始之五點三倍滴定之豬TF-His之間的締合180至240秒。隨後，量測抗TF抗體與TF-His之間的解離1800秒。使用1:1結合模型對動力學資料進行整體分析及擬合。藉由基於Biacore之實驗量測之指示之TF抗體之K D值展示於 表 48。
測試了某些抗體與兔TF結合之能力。對於兔TF基於Biacore之量測，給定抗TF抗體經共價偶聯至CM5晶片之抗人類IgG抗體(GE Healthcare Bio-Sciences)捕獲。量測抗TF抗體與自100 nM開始之五點三倍滴定之兔TF-His之間的締合180至240秒。隨後，量測抗TF抗體與TF-His之間的解離1800秒。使用1:1結合模型對動力學資料進行整體分析及擬合。藉由基於Biacore之實驗量測之指示之TF抗體之K D值展示於 表 48。
如 表 48所示，來自第25組及第43組之抗hTF抗體表現出與豬TF及兔TF之結合活性及交叉反應性。相比之下，來自第1組及第29組之抗體未展示與豬TF或兔TF之結合活性。 表 48 ：豬及兔TF之抗體動力學
抗體 豬K D ，nM 兔K D ，nM
1G 無結合 無結合
25A 18.7 50.5
25A3 5.5 12.4
25A5 5.2 5.4
25A5-T 4.5 5.4
25G 26.0 75.5
25G1 2.6 3.6
25G9 3.3 4.2
29D 無結合 無結合
43D7 8.8 6.8
43D8 19.2 7.7
無結合*：無結合至弱結合，無可報告之K D 實例 39 ：抗 TF 抗體之表位分倉
為了建立抗人類TF抗體之間的表位結合差異，進行了嵌合TF構築體定位實驗。該定位技術能夠區分抗體表位。
因為評價之所有抗人類TF抗體均不結合大鼠TF，所以將大鼠TF序列用於構築嵌合人類-大鼠TF構築體。嵌合人類-大鼠構築體設計由TF細胞外域之N端及C端域(分別為細胞外域之胺基酸1-107及108-219)指導，其中比對展示於國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號中，其以引用方式整體併入本文。基於使用國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號(其以引用方式整體併入本文)之 圖 36之構築體進行的嵌合定位結果，大鼠胺基酸區段141至194經人類序列(hTF細胞外域之胺基酸136-189)替換，其中比對展示於國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號中，其以引用方式整體併入本文。基於報告之10H10抗體之contact殘基K68、K149、及N171及T197 (Teplyakov等人， Cell Signal., 2017, 36:139-144)設計三個具有1或2個人類-大鼠取代之人類TF構築體(hTF_K68N、hTF_K149N及hTF_N171H_T197K)，其中比對展示於國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號中，其以引用方式整體併入本文。
為了建立抗人類TF抗體與各種TF構築體之結合，用共表現TF構築體及綠色螢光蛋白標記物之DNA質粒轉染HEK293細胞。對於抗體之子集，在選定之TF構築體上評價抗體滴定(250 nM處開始之12點1:3稀釋系列)(參見國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號，其以引用方式整體併入本文)。此等抗體滴定表明， 表 51 及表 52中使用之15 µg/ml (100 nM)之抗體濃度適於建立「相對於hTF，抗體與TF構築體之結合百分比」。轉染後兩天，將細胞自組織培養板中收集，用15 µg/ml指示之抗TF抗體進行染色，洗滌，用抗人類IgG-Fc Alexa Fluor 647多株抗體染色，洗滌，且用活力染料4',6-二脒基-2-苯基吲哚二鹽酸鹽染色。在流式細胞儀上獲得80000個活事件後，分析用螢光標記物標記之活細胞之抗TF抗體染色之程度。各TF表現構築體之相對於同型對照之中值螢光強度值除以hTF表現構築體之相對於同型對照之中值螢光強度值，且所得百分數於 表 51 及表 52中列為「相對於hTF，抗體與TF構築體之結合百分比」。如本文所用，術語「活細胞染色檢定」係指在此實例中使用之抗體結合檢定。
抗體集合中至少一種抗人類TF抗體之所有TF構築體均滿足所有嵌合TF構築體在細胞表面上表現之水準在hTF對照構築體之50%及150%之間的假設，除了h1-107_r構築體(人類胺基酸區段1-107經大鼠序列替換)之外。預期抗人類TF抗體與細胞表面表現之大鼠TF缺乏結合。當 表 51 及表 52中之「相對於hTF，抗體與TF構築體之結合百分比」小於50%時， 表 53 及表 54中之抗體視為非結合物(0)。當 表 51 及表 52中之「相對於hTF，抗體與TF構築體之結合百分比」在50%及150%之間時， 表 53 及表 54中之抗體視為結合物(1)。
基於來自 表 53之未結合構築體之組合，將每種抗體分配給 表 55中之表位倉。來自譜系25之抗體(25A、25A3、25A5-T、25G1及25G9)結合獨特之表位，在 表 55中稱為表位倉6。來自譜系43之抗體(43B1、43D7、43D8及43Ea)亦結合獨特之表位，在 表 55中稱為表位倉7。來自譜系29之抗體(29E)結合獨特之表位，在 表 55中稱為表位倉2。來自譜系39及54之抗體(39A及54E)結合獨特之表位，在 表 55中稱為表位倉3。
譜系25及43抗體為抗體組中唯一結合嵌合構築體r141-194_h之抗體，該構築體中大鼠胺基酸141至194經人類序列替換( 表 54)。此外，雖然M1593不能結合hTF_K68N，但抗體組中所有其他抗體結合hTF_K68N ( 表 54)。僅譜系25及43抗體不能結合hTF_K149N ( 表 54)。僅譜系25抗體不能結合hTF_N171H_T197K ( 表 54)(參見國際PCT申請案PCT/US2019/012427及美國實用申請案第16/959,652號，其以引用方式整體併入本文)。
總之，此等結果指示，與所有其他測試之抗體相比，譜系25抗體結合人類TF上之獨特表位。與所有其他測試之抗體相比，譜系43抗體結合人類TF上之獨特表位。譜系25及譜系43抗體與M1593結合不同之人類TF表位。 實例40：在DSS結腸炎模型中抗TF抗體之作用
進行活體內研究以在結腸炎模型中確定預防性投與之抗TF抗體(例如，43D8)對炎症端點之作用。43D8純系在本實例中用作本文所述的其他抗TF抗體之替代物，因為它與小鼠TF發生交叉反應並以高親和力與小鼠TF結合。參見例如表5。表67提供了實驗之研究設計。 表 67：實驗之研究設計。
組 N 測試品 處理 (mg/kg) 全身性給藥
途徑 頻率
1 5 初始(無DSS) NA IP 兩次，第0天及第4天
2 10 媒劑 NA IP 兩次，第0天及第4天
3 5 環孢素A 50 PO 每日一次(QD)
4 10 同型抗體(IgG2a)，第0天及第4天 30 IP 一次，第4天
5 10 43D8 mAb (IgG2a)，預防性治療，第0天及第4天 10 IP 兩次，第0天及第4天
6 10 43D8 mAb (IgG2a)，預防性治療，第0天及第4天 30 IP 兩次，第0天及第4天
7 10 43D8 mAb (IgG2a)，第4天，治療性治療 30 IP 一次，第4天
DSS 結腸炎模型小鼠中之PK
8 9 43D8 mAb (IgG2a)，預防性治療，第0天及第4天 10 IP 兩次，第0天及第4天
9 9 43D8 mAb (IgG2a)，預防性治療，第0天及第4天 30 IP 兩次，第0天及第4天
在研究第0天，8-12週齡雄性C57BL/6小鼠隨意接受無菌水(第1及3組， n=5)或隨意接受溶解於無菌水中之3% DSS (第2-7組，每組 n=10只小鼠)。在第0天及第4天，第4組、第5組及第6組之小鼠接受兩個劑量之經指示劑量水準之同型或43D8——第0天的預防性治療劑量及第4天的治療性劑量。在第4天，第7組中之小鼠接受30 mg/kg之43D8 (僅治療性治療組)。
亦在開始第0天至第7天，第2組及第3組中之小鼠藉由經口投與媒劑或50 mg/kg之陽性對照環孢素(Neoral， n= 10)來每日處理一次。在第7天，所有動物對於其餘實驗均接受無菌水，直至第8天實施安樂死。
第8組及第9組中的動物被視為待用於藥代動力學繪圖之「衛星動物」。此等組沒有進行終末器官採集。
在研究期間，進行了以下量測： ● 體重量測自第0天開始，包括第8天，每日進行。 ● 糞便稠度、血液及疾病活動指數評分：每日對糞便稠度及糞便中之血液進行評分。使用潛血糞便出血測試對糞便中之血液進行定量。 表 A 、表 B及 表 C展示用於評定糞便稠度、糞便血液(潛血)及重量相對於基線水準(第0天)之變化的評分系統。將糞便稠度得分、糞便血液得分及重量得分組合以提供各個體在量測時間之疾病活動指數(DAI)。 表 I展示確定DAI之綜合評分系統。 表 A ：糞便稠度得分
得分 0 1 2 3
觀測 正常 濕潤/黏稠糞便 軟糞便 腹瀉
表 B ：糞便血液得分
得分 0 1 2 3
潛血試劑測試結果 陰性潛血試劑測試，無血液 在＞30秒內之陽性潛血試劑測試 在＜30秒內之陽性潛血試劑測試 載玻片上肉眼可觀測到血液
表 C ：重量得分
得分 0 1 2 3 4
相對於基線之重量損失 0% 1-5% 6-10% 11-15% 16%或更高
表 I：疾病活動指數(DAI)得分，其為糞便稠度得分+糞便血液得分+重量得分之組合。
得分 糞便稠度得分 糞便血液得分 重量損失
0 正常 陰性潛血試劑測試，無血液 0%或重量增加
1 濕潤/黏稠糞便 在＞30秒內之陽性潛血試劑測試 1-5%
2 軟糞便 在＜30秒內之陽性潛血試劑測試 6-10%
3 腹瀉 載玻片上肉眼可觀測到血液 11-15%
4 N/A N/A 16%或更高
●        每日進行臨床觀測。
在屍體剖檢時，對於每隻動物，量測長度及重量且計算重量/長度比率。將結腸「瑞士卷(swiss-rolled)」且將其置於10%中性緩衝福馬林(NBF)中達24小時，隨後置於70%乙醇中。在內部處理經固定之結腸樣品且組織學用H&E染色進行。將樣品包埋在石蠟中，以5微米切片，且用H&E對載玻片染色以進行組織學分析。結腸樣品亦在含有蛋白酶抑制劑之DPBS中處理成組織均質物。組織病理學評分係基於以下參數之綜合評分： 1.       隱窩結構 2.       細胞浸潤 3.       肌肉增厚 4.       隱窩膿腫
結果顯示用CsA處理之第3組動物在第1天之顯著及早期重量損失。然後，在第4天與第8天之間，媒劑對照動物及第4組動物比其他組中之動物損失顯著更多重量。結果表明，用抗TF抗體治療與比較藥物相比導致相對於基線水準之重量損失更少。結果亦表明用抗TF抗體之預防性治療及治療性治療與在不存在該治療下經歷之情況相比導致重量損失更少( 圖 28A 及圖 28B)。
亦使用上文所述量度分析疾病活動。所有治療組均顯示出與媒劑相比具有統計學意義的較低DAI。總之，此等結果表明，用抗TF抗體治療(有預防性投與及無預防性投與)與在不存在治療下觀測到之情況相比導致更正常的糞便稠度、更少可偵測血液及更少重量損失(圖 29A 及圖 29B)。
基於結腸長度及結腸重量計算結腸密度。如 圖 30A- 圖 30C所示，第5、6及7組的相對結腸密度在統計學上顯著降低。此等結果表明使用抗TF抗體的治療性治療及預防性治療導致更好的疾病結果，例如，如結腸密度所示。
組織病理學評分之結果顯示，第1、3及6組之組織病理學得分與媒劑組相比顯著不同(圖31)。此結果表明，用抗TF抗體進行預防性治療可改善組織病理學結果。 表 51 ：相對於hTF，抗體與TF構築體之結合百分比
   抗體
   構築體 1F 29E 39A 54E TF-011 5G9 M1593 25A 25A3 25A5-T 25G1 25G9 43B1 43D7 43D8 43Ea
   hTF 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
   rTF 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
人類胺基酸區段經大鼠區段替換(括號中：相對於人類TF之胺基酸變化數) h1-107_r(52) 0 0 0 0 0 41 0 32 36 36 37 28 33 35 31 37
h1-77_r(25) 0 0 0 0 0 94 0 86 95 84 88 64 64 75 69 69
h1-38_r(14) 91 87 100 102 104 100 104 101 104 93 101 88 97 106 104 103
h39-77_r(11) 0 0 0 0 0 88 2 82 88 80 87 71 59 75 71 69
h78-107_r(21) 0 8 81 68 32 114 74 108 116 103 113 108 113 114 117 114
h78-107_r.v2(27) 0 0 76 62 23 101 59 95 96 91 94 93 97 100 101 101
h78-93_r(18) 102 0 77 91 110 102 104 106 105 92 101 98 101 104 102 103
h94-107_r(9) 1 82 85 89 27 91 46 82 86 78 83 77 84 92 89 91
h108-219_r(46) 119 118 118 122 128 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
h108-158_r(19) 98 101 107 108 108 63 4 1 0 0 11 22 0 1 0 0
h108-132_r(10) 105 108 109 107 124 125 124 112 112 106 111 118 122 126 122 124
h133-158_r(9) 113 122 119 130 134 91 0 0 0 0 2 3 0 4 1 0
h133-145_r(4) 84 95 96 104 104 108 100 77 80 80 87 100 99 104 103 106
h133-139_r(2) 82 90 95 103 102 104 103 88 89 88 91 86 94 101 97 101
h140-145_r(2) 89 100 101 110 109 113 97 80 87 86 89 105 101 104 104 109
h146-158_r(5) 115 122 125 134 134 91 133 2 17 18 17 0 3 20 10 0
h146-151_r(1) 122 133 139 142 143 141 118 3 14 17 7 0 11 39 23 2
h152-158_r(4) 110 121 128 127 136 82 132 110 116 112 116 111 119 134 129 134
h159-219_r(27) 132 134 141 142 155 0 137 0 0 0 0 0 132 130 130 76
h159-189_r(11) 94 101 104 110 112 0 105 0 0 0 0 0 100 106 104 94
h159-174_r(6) 96 98 101 118 120 0 98 0 0 0 0 0 103 115 112 101
h159-166_r(3) 89 93 96 100 98 104 100 93 95 87 91 88 99 106 105 110
h167-174_r(3) 96 112 96 122 128 0 118 0 0 0 0 0 109 121 112 104
h175-189_r(5) 97 113 112 118 123 119 114 86 95 99 100 86 109 118 114 122
h190-219_r(16) 111 138 149 141 145 12 143 125 124 119 127 144 133 140 136 147
表 52 ：相對於hTF，抗體與TF構築體之結合百分比
   抗體
構築體 1F 29E 39A 54E TF-011 5G9 M1593 25A 25A3 25A5-T 25G1 25G9 43B1 43D7 43D8 43Ea
hTF 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
rTF 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
r141-194_h* 0 0 0 0 0 32 0 65 89 88 83 108 90 102 95 81
hTF_K68N 105 115 119 118 111 132 0 93 124 126 115 103 107 116 119 118
hTF_K149N 115 117 131 127 132 145 111 2 12 13 7 0 10 29 20 1
hTF_N171H_T197K 83 98 94 89 109 102 113 1 4 7 1 0 98 101 103 118
*大鼠胺基酸區段經人類區段替換，導致20個胺基酸變化 表 53 ：抗體與TF構築體之結合
   抗體
   構築體 1F 29E 39A 54E TF-011 5G9 M1593 25A 25A3 25A5-T 25G1 25G9 43B1 43D7 43D8 43Ea
   hTF 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
   rTF 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
人類胺基酸區段經大鼠區段替換(括號中：相對於人類TF之胺基酸變化數) h1-107_r(52) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
h1-77_r(25) 0 0 0 0 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1
h1-38_r(14) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
h39-77_r(11) 0 0 0 0 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1
h78-107_r(21) 0 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
h78-107_r.v2(27) 0 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
h78-93_r(18) 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
h94-107_r(9) 0 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1
h108-219_r(46) 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
h108-158_r(19) 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
h108-132_r(10) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
h133-158_r(9) 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
h133-145_r(4) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
h133-139_r(2) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
h140-145_r(2) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
h146-158_r(5) 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0
h146-151_r(1) 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0
h152-158_r(4) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
h159-219_r(27) 1 1 1 1 1 0 1 0 0 0 0 0 1 1 1 1
h159-189_r(11) 1 1 1 1 1 0 1 0 0 0 0 0 1 1 1 1
h159-174_r(6) 1 1 1 1 1 0 1 0 0 0 0 0 1 1 1 1
h159-166_r(3) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
h167-174_r(3) 1 1 1 1 1 0 1 0 0 0 0 0 1 1 1 1
h175-189_r(5) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
h190-219_r(16) 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
表 54 ：抗體與TF構築體之結合
   抗體
構築體 1F 29E 39A 54E TF-011 5G9 M1593 25A 25A3 25A5-T 25G1 25G9 43B1 43D7 43D8 43Ea
hTF 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
rTF 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
r141-194_h* 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1
hTF_K68N 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1
hTF_K149N 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0
hTF_N171H_T197K 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 1 1 1 1
*大鼠胺基酸區段經人類區段替換，導致20個胺基酸變化 表 55 ：基於未結合之嵌合構築體之表位倉分配
抗體 不由抗體結合之構築體 表位倉
1F rTF, h1-107_r, h1-77_r, h39-77_r, h78-107_r, h78-107_r.v2, h94-107_r 1
29E rTF, h1-107_r, h1-77_r, h39-77_r, h78-107_r, h78-107_r.v2, h78-93_r 2
39A rTF, h1-107_r, h1-77_r, h39-77_r 3
54E rTF, h1-107_r, h1-77_r, h39-77_r 3
TF-011 rTF, h1-107_r, h1-77_r, h39-77_r, h78-107_r, h78-107_r.v2, h94-107_r 1
5G9 rTF, h1-107_r, h108-219_r, h159-219_r, h159-189_r, h159-174_r, h167-174_r, h190-219_r 4
M1593 rTF, h1-107_r, h1-77_r, h39-77_r, h94-107_r, h108-219_r, h108-158_r, h133-158_r 5
25A rTF, h1-107_r, h108-219_r, h108-158_r, h133-158_r, h146-158_r, h146-151_r, h159-219_r, h159-189_r, h159-174_r, h167-174_r 6
25A3 rTF, h1-107_r, h108-219_r, h108-158_r, h133-158_r, h146-158_r, h146-151_r, h159-219_r, h159-189_r, h159-174_r, h167-174_r 6
25A5-T rTF, h1-107_r, h108-219_r, h108-158_r, h133-158_r, h146-158_r, h146-151_r, h159-219_r, h159-189_r, h159-174_r, h167-174_r 6
25G1 rTF, h1-107_r, h108-219_r, h108-158_r, h133-158_r, h146-158_r, h146-151_r, h159-219_r, h159-189_r, h159-174_r, h167-174_r 6
25G9 rTF, h1-107_r, h108-219_r, h108-158_r, h133-158_r, h146-158_r, h146-151_r, h159-219_r, h159-189_r, h159-174_r, h167-174_r 6
43B1 rTF, h1-107_r, h108-219_r, h108-158_r, h133-158_r, h146-158_r, h146-151_r 7
43D7 rTF, h1-107_r, h108-219_r, h108-158_r, h133-158_r, h146-158_r, h146-151_r 7
43D8 rTF, h1-107_r, h108-219_r, h108-158_r, h133-158_r, h146-158_r, h146-151_r 7
43Ea rTF, h1-107_r, h108-219_r, h108-158_r, h133-158_r, h146-158_r, h146-151_r 7
儘管本發明已參考較佳實施例及各種替代性實施例加以特定顯示及描述，但相關領域技術人員將瞭解可在不脫離本發明之精神及範圍下在其中進行各種形式及細節變化。
在本說明書之主體內引用之所有參考文獻、授權專利及專利申請案都據此出於所有目的以引用方式整體併入本文。 序列 表 13 ：可變區序列
純系 VH 域(SEQ ID NO) VL 域(SEQ ID NO)
1F EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMGWVRQAPGKGLEWVSTISGSGGLTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKAPYGYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:37) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYKSYITFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:38)
1G EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMAWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGLTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKAPYGYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:75) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYKSYITFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:76)
25A QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:113) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQSLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:114)
25A3 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:151) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:152)
25A5 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:189) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESISNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYSLEYGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQKLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:190)
25A5-T QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDAYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:836) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESISNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYSLEYGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQKLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:837)
25G QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMGWVAPYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:227) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQSLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:228)
25G1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMGWVAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:265) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASHSIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASYLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:266)
25G9 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMGWVAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:303) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYSASYLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQRFQSLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:304)
29D QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFHSRGMHWVRQAPGKGLEWVAVITYDGINKYYADSVEGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGVYYGVYDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:341) DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFHSYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:342)
29E QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVITYDGINKYYADSVEGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGVYYGVYDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:379) DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFHSYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:380)
39A QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSNAIGWVRQAPGQGLEWMGSIIPIIGFANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDSGYYYGASSFGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:417) EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCEQYNNLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:418)
43B QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGQYWSWIRQHPGKGLEWIGEIYYSGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDAPYYYGGGYYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:455) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQVGVVPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:456)
43B1 QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGQYWSWIRQHPGKGLEWIGEIYYSGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDAPYYYGGGYYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:493) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASESVDSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRQTGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQAGVVPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:494)
43B7 QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGQYWSWIRQHPGKGLEWIGEIYYSGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDAPYYYGGGYYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:531) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASESVDSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGADSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQDGVVPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:532)
43D QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSLSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIGASGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDTPYYYEGGYYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:569) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQVGVVPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:570)
43D7 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSLSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIGASGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDTPYYYEGGYYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:607) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASDSVDSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRANGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQAGVVPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:608)
43D8 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSLSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIGASGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDTPYYYEGGYYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:645) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGAYSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQAGVVPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:646)
43E QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGQYWSWIRQHPGKGLEWIGEIYYSGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKDQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDTPYYYDGGYYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:683) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQVGVVPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:684)
43Ea QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGQYWSWIRQHPGKGLEWIGEIYYSGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDTPYYYDGGYYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:721) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQVGVVPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:722)
54E QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFANYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGITVYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGSKVAALAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO:759) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNSLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSRSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYNFHPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:760)
表 14 ：共有可變區序列
組 共有VH 域(SEQ ID NO) 共有VL 域(SEQ ID NO)
1 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSx[D/S]YAMx[A/G]WVRQAPGKGLEWVSx[A/T]ISGSGGLTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKAPYGYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:761) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYKSYITFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:762)
25 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFx[D/R]x[S/V/A]YGISWVRQAPGQGLEWMGWx[I/V]APYx[S/N]GNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPx[F/Y]GYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:763) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCx[R/Q]ASx[Q/E/H]SIx[S/D/N]x[S/N]WLAWYQQKPGKAPKLLIYx[K/S]Ax[S/Y]x[S/Y/N]LEx[S/Y]GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQx[Q/L/R]FQx[S/K]LPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:764)
29 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFx[H/R]Sx[R/Y]GMHWVRQAPGKGLEWVAVITYDGINKYYADSVEGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGVYYGVYDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:765) DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFHSYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:766)
39 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSNAIGWVRQAPGQGLEWMGSIIPIIGFANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDSGYYYGASSFGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:767) EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCEQYNNLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:768)
43 QVQLQx[E/Q]x[S/W]Gx[P/A]GLx[V/L]KPSx[Q/E]TLSLTCx[T/A]Vx[S/Y]GGSx[I/L]SSGx[Q/Y]YWSWIRQx[H/P]PGKGLEWIGEIx[Y/G]x[Y/A]SGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKx[N/D]QFSLKLSSVTAADTAVYYCARDx[T/A]PYYYx[E/G/D]GGYYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:769) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASx[Q/E/D]SVx[S/D]SSx[Y/F]LAWYQQKPGQAPRLLIYGAx[S/D/F/Y]x[S/T]Rx[A/Q]x[T/N]GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQx[V/A/D]GVVPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:770)
54 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFANYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGITVYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGSKVAALAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO:771) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNSLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSRSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYNFHPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:772)
表 15 ：抗體 1F-CDR 序列
示範性 * Kabat Chothia AbM Contact IMGT
VH CDR 序列 VH CDR1 GFTFSDYAMG (SEQ ID NO:1) DYAMG (SEQ ID NO:7) GFTFSDY (SEQ ID NO:13) GFTFSDYAMG (SEQ ID NO:19) SDYAMG (SEQ ID NO:25) GFTFSDYA (SEQ ID NO:31)
VH CDR2 TISGSGGLTYYADSVKG (SEQ ID NO:2) TISGSGGLTYYADSVKG (SEQ ID NO:8) GSGG (SEQ ID NO:14) TISGSGGLTY (SEQ ID NO:20) WVSTISGSGGLTY (SEQ ID NO:26) ISGSGGLT (SEQ ID NO:32)
VH CDR3 APYGYYMDV (SEQ ID NO:3) APYGYYMDV (SEQ ID NO:9) PYGYYMD (SEQ ID NO:15) APYGYYMDV (SEQ ID NO:21) AKAPYGYYMD (SEQ ID NO:27) AKAPYGYYMDV (SEQ ID NO:33)
VL CDR 序列 VL CDR1 RASQSISSWLA (SEQ ID NO:4) RASQSISSWLA (SEQ ID NO:10) SQSISSW (SEQ ID NO:16) RASQSISSWLA (SEQ ID NO:22) SSWLAWY (SEQ ID NO:28) QSISSW (SEQ ID NO:34)
VL CDR2 KASSLES (SEQ ID NO:5) KASSLES (SEQ ID NO:11) KAS (SEQ ID NO:17) KASSLES (SEQ ID NO:23) LLIYKASSLE (SEQ ID NO:29) KAS (SEQ ID NO:35)
VL CDR3 QQYKSYIT (SEQ ID NO:6) QQYKSYIT (SEQ ID NO:12) YKSYI (SEQ ID NO:18) QQYKSYIT (SEQ ID NO:24) QQYKSYI (SEQ ID NO:30) QQYKSYIT (SEQ ID NO:36)
VH序列*： EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSDYAMGWVRQAPGKGLEWVS TISGSGGLTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK APYGYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:37)
VL序列*： DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC RASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIY KASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYC QQYKSYITFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:38)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat加Chothia確定之胺基酸 表 16 ：抗體 1G-CDR 序列
示範性 * Kabat Chothia AbM Contact IMGT
VH CDR 序列 VH CDR1 GFTFSSYAMA (SEQ ID NO:39) SYAMA (SEQ ID NO:45) GFTFSSY (SEQ ID NO:51) GFTFSSYAMA (SEQ ID NO:57) SSYAMA (SEQ ID NO:63) GFTFSSYA (SEQ ID NO:69)
VH CDR2 AISGSGGLTYYADSVKG (SEQ ID NO:40) AISGSGGLTYYADSVKG (SEQ ID NO:46) GSGG (SEQ ID NO:52) AISGSGGLTY (SEQ ID NO:58) WVSAISGSGGLTY (SEQ ID NO:64) ISGSGGLT (SEQ ID NO:70)
VH CDR3 APYGYYMDV (SEQ ID NO:41) APYGYYMDV (SEQ ID NO:47) PYGYYMD (SEQ ID NO:53) APYGYYMDV (SEQ ID NO:59) AKAPYGYYMD (SEQ ID NO:65) AKAPYGYYMDV (SEQ ID NO:71)
VL CDR 序列 VL CDR1 RASQSISSWLA (SEQ ID NO:42) RASQSISSWLA (SEQ ID NO:48) SQSISSW (SEQ ID NO:54) RASQSISSWLA (SEQ ID NO:60) SSWLAWY (SEQ ID NO:66) QSISSW (SEQ ID NO:72)
VL CDR2 KASSLES (SEQ ID NO:43) KASSLES (SEQ ID NO:49) KAS (SEQ ID NO:55) KASSLES (SEQ ID NO:61) LLIYKASSLE (SEQ ID NO:67) KAS (SEQ ID NO:73)
VL CDR3 QQYKSYIT (SEQ ID NO:44) QQYKSYIT (SEQ ID NO:50) YKSYI (SEQ ID NO:56) QQYKSYIT (SEQ ID NO:62) QQYKSYI (SEQ ID NO:68) QQYKSYIT (SEQ ID NO:74)
VH序列*： EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYAMAWVRQAPGKGLEWVS AISGSGGLTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK APYGYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:75)
VL序列*： DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC RASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIY KASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYC QQYKSYITFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:76)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat加Chothia確定之胺基酸 表 17 ：抗體 25A-CDR 序列
示範性 * Kabat Chothia AbM Contact IMGT
VH CDR 序列 VH CDR1 GYTFDVYGIS (SEQ ID NO:77) VYGIS (SEQ ID NO:83) GYTFDVY (SEQ ID NO:89) GYTFDVYGIS (SEQ ID NO:95) DVYGIS (SEQ ID NO:101) GYTFDVYG (SEQ ID NO:107)
VH CDR2 WIAPYNGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:78) WIAPYNGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:84) PYNG (SEQ ID NO:90) WIAPYNGNTN (SEQ ID NO:96) WMGWIAPYNGNTN (SEQ ID NO:102) IAPYNGNT (SEQ ID NO:108)
VH CDR3 DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:79) DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:85) AGTYSPFGYGMD (SEQ ID NO:91) DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:97) ARDAGTYSPFGYGMD (SEQ ID NO:103) ARDAGTYSPFGTGMDV (SEQ ID NO:109)
VL CDR 序列 VL CDR1 RASQSISSWLA (SEQ ID NO:80) RASQSISSWLA (SEQ ID NO:86) SQSISSW (SEQ ID NO:92) RASQSISSWLA (SEQ ID NO:98) SSWLAWY (SEQ ID NO:104) QSISSW (SEQ ID NO:110)
VL CDR2 KASSLES (SEQ ID NO:81) KASSLES (SEQ ID NO:87) KAS (SEQ ID NO:93) KASSLES (SEQ ID NO:99) LLIYKASSLE (SEQ ID NO:105) KAS (SEQ ID NO:111)
VL CDR3 QQFQSLPPFT (SEQ ID NO:82) QQFQSLPPFT (SEQ ID NO:88) FQSLPPF (SEQ ID NO:94) QQFQSLPPFT (SEQ ID NO:100) QQFQSLPPF (SEQ ID NO:106) QQFQSLPPFT (SEQ ID NO:112)
VH序列*： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMG WIAPYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR DAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:113)
VL序列*： DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC RASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIY KASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYC QQFQSLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:114)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat加Chothia確定之胺基酸 表 18 ：抗體 25A3-CDR 序列
示範性 * Kabat Chothia AbM Contact IMGT
VH CDR 序列 VH CDR1 GYTFDVYGIS (SEQ ID NO:115) VYGIS (SEQ ID NO:121) GYTFDVY (SEQ ID NO:127) GYTFDVYGIS (SEQ ID NO:133) DVYGIS (SEQ ID NO:139) GYTFDVYG (SEQ ID NO:145)
VH CDR2 WIAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:116) WIAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:122) PYSG (SEQ ID NO:128) WIAPYSGNTN (SEQ ID NO:134) WMGWIAPYSGNTN (SEQ ID NO:140) IAPYSGNT (SEQ ID NO:146)
VH CDR3 DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:117) DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:123) AGTYSPFGYGMD (SEQ ID NO:129) DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:135) ARDAGTYSPFGYGMD (SEQ ID NO:141) ARDAGTYSPFGTGMDV (SEQ ID NO:147)
VL CDR 序列 VL CDR1 QASQSINNWLA (SEQ ID NO:118) QASQSINNWLA (SEQ ID NO:124) SQSINNW (SEQ ID NO:130) QASQSINNWLA (SEQ ID NO:136) NNWLAWY (SEQ ID NO:142) QSINNW (SEQ ID NO:148)
VL CDR2 KAYNLES (SEQ ID NO:119) KAYNLES (SEQ ID NO:125) KAY (SEQ ID NO:131) KAYNLES (SEQ ID NO:137) LLIYKAYNLE (SEQ ID NO:143) KAY (SEQ ID NO:149)
VL CDR3 QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:120) QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:126) FQSLPPF (SEQ ID NO:132) QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:138) QLFQSLPPF (SEQ ID NO:144) QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:150)
VH序列*：QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMG WIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR DAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:151)
VL序列*： DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC QASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIY KAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYC QLFQSLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:152)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat加Chothia確定之胺基酸 表 19a ：抗體 25A5-CDR 序列
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VH CDR 序列 VH CDR1 GYTFDVYGIS (SEQ ID NO:153) VYGIS (SEQ ID NO:159) GYTFDVY (SEQ ID NO:165) GYTFDVYGIS (SEQ ID NO:171) DVYGIS (SEQ ID NO:177) GYTFDVYG (SEQ ID NO:183)
VH CDR2 WIAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:154) WIAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:160) PYSG (SEQ ID NO:166) WIAPYSGNTN (SEQ ID NO:172) WMGWIAPYSGNTN (SEQ ID NO:178) IAPYSGNT (SEQ ID NO:184)
VH CDR3 DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:155) DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:161) AGTYSPFGYGMD (SEQ ID NO:167) DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:173) ARDAGTYSPFGYGMD (SEQ ID NO:179) ARDAGTYSPFGTGMDV (SEQ ID NO:185)
VL CDR 序列 VL CDR1 RASESISNWLA (SEQ ID NO:156) RASESISNWLA (SEQ ID NO:162) SESISNW (SEQ ID NO:168) RASESISNWLA (SEQ ID NO:174) SNWLAWY (SEQ ID NO:180) ESISNW (SEQ ID NO:186)
VL CDR2 KAYSLEY (SEQ ID NO:157) KAYSLEY (SEQ ID NO:163) KAY (SEQ ID NO:169) KAYSLEY (SEQ ID NO:175) LLIYKAYSLE (SEQ ID NO:181) KAY (SEQ ID NO:187)
VL CDR3 QQFQKLPPFT (SEQ ID NO:158) QQFQKLPPFT (SEQ ID NO:164) FQKLPPF (SEQ ID NO:170) QQFQKLPPFT (SEQ ID NO:176) QQFQKLPPF (SEQ ID NO:182) QQFQKLPPFT (SEQ ID NO:188)
VH序列*： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMG WIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR DAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:189)
VL序列*： DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC RASESISNWLAWYQQKPGKAPKLLIY KAYSLEYGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYC QQFQKLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:190)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat加Chothia確定之胺基酸 表 19b ：抗體 25A5-T-CDR 序列
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VH CDR 序列 VH CDR1 GYTFDAYGIS (SEQ ID NO:884) AYGIS (SEQ ID NO:890) GYTFDAY (SEQ ID NO:896) GYTFDAYGIS (SEQ ID NO:902) DAYGIS (SEQ ID NO:908) GYTFDAYG (SEQ ID NO:914)
VH CDR2 WIAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:885) WIAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:891) PYSG (SEQ ID NO:897) WIAPYSGNTN (SEQ ID NO:903) WMGWIAPYSGNTN (SEQ ID NO:909) IAPYSGNT (SEQ ID NO:915)
VH CDR3 DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:886) DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:892) AGTYSPFGYGMD (SEQ ID NO:898) DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:904) ARDAGTYSPFGYGMD (SEQ ID NO:910) ARDAGTYSPFGTGMDV (SEQ ID NO:916)
VL CDR 序列 VL CDR1 RASESISNWLA (SEQ ID NO:887) RASESISNWLA (SEQ ID NO:893) SESISNW (SEQ ID NO:899) RASESISNWLA (SEQ ID NO:905) SNWLAWY (SEQ ID NO:911) ESISNW (SEQ ID NO:917)
VL CDR2 KAYSLEY (SEQ ID NO:888) KAYSLEY (SEQ ID NO:894) KAY (SEQ ID NO:900) KAYSLEY (SEQ ID NO:906) LLIYKAYSLE (SEQ ID NO:912) KAY (SEQ ID NO:918)
VL CDR3 QQFQKLPPFT (SEQ ID NO:889) QQFQKLPPFT (SEQ ID NO:895) FQKLPPF (SEQ ID NO:901) QQFQKLPPFT (SEQ ID NO:907) QQFQKLPPF (SEQ ID NO:913) QQFQKLPPFT (SEQ ID NO:919)
VH序列*： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFDAYGISWVRQAPGQGLEWMG WIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR DAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:836)
VL序列*： DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC RASESISNWLAWYQQKPGKAPKLLIY KAYSLEYGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYC QQFQKLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:837)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat加Chothia確定之胺基酸 表 20 ：抗體 25G-CDR 序列
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VH CDR 序列 VH CDR1 GYTFRSYGIS (SEQ ID NO:191) SYGIS (SEQ ID NO:197) GYTFRSY (SEQ ID NO:203) GYTFRSYGIS (SEQ ID NO:209) RSYGIS (SEQ ID NO:215) GYTFRSYG (SEQ ID NO:221)
VH CDR2 WVAPYNGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:192) WVAPYNGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:198) PYNG (SEQ ID NO:204) WVAPYNGNTN (SEQ ID NO:210) WMGWVAPYNGNTN (SEQ ID NO:216) VAPYNGNT (SEQ ID NO:222)
VH CDR3 DAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:193) DAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:199) AGTYSPYGYGMD (SEQ ID NO:205) DAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:211) ARDAGTYSPYGYGMD (SEQ ID NO:217) ARDAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:223)
VL CDR 序列 VL CDR1 RASQSISSWLA (SEQ ID NO:194) RASQSISSWLA (SEQ ID NO:200) SQSISSW (SEQ ID NO:206) RASQSISSWLA (SEQ ID NO:212) SSWLAWY (SEQ ID NO:218) QSISSW (SEQ ID NO:224)
VL CDR2 KASSLES (SEQ ID NO:195) KASSLES (SEQ ID NO:201) KAS (SEQ ID NO:207) KASSLES (SEQ ID NO:213) LLIYKASSLE (SEQ ID NO:219) KAS (SEQ ID NO:225)
VL CDR3 QQFQSLPPFT (SEQ ID NO:196) QQFQSLPPFT (SEQ ID NO:202) FQSLPPF (SEQ ID NO:208) QQFQSLPPFT (SEQ ID NO:214) QQFQSLPPF (SEQ ID NO:220) QQFQSLPPFT (SEQ ID NO:226)
VH序列*： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMG WVAPYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR DAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:227)
VL序列*： DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC RASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIY KASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYC QQFQSLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:228)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat加Chothia確定之胺基酸 表 21 ：抗體 25G1-CDR 序列
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VH CDR 序列 VH CDR1 GYTFRSYGIS (SEQ ID NO:229) SYGIS (SEQ ID NO:235) GYTFRSY (SEQ ID NO:241) GYTFRSYGIS (SEQ ID NO:247) RSYGIS (SEQ ID NO:253) GYTFRSYG (SEQ ID NO:259)
VH CDR2 WVAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:230) WVAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:236) PYSG (SEQ ID NO:242) WVAPYSGNT N (SEQ ID NO:248) WMGWVAPYSGNTN (SEQ ID NO:254) VAPYSGNT (SEQ ID NO:260)
VH CDR3 DAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:231) DAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:237) AGTYSPYGYGMD (SEQ ID NO:243) DAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:249) ARDAGTYSPYGYGMD (SEQ ID NO:255) ARDAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:261)
VL CDR 序列 VL CDR1 RASHSIDSWLA (SEQ ID NO:232) RASHSIDSWLA (SEQ ID NO:238) SHSIDSW (SEQ ID NO:244) RASHSIDSWLA (SEQ ID NO:250) DSWLAWY (SEQ ID NO:256) HSIDSW (SEQ ID NO:262)
VL CDR2 KASYLES (SEQ ID NO:233) KASYLES (SEQ ID NO:239) KAS (SEQ ID NO:245) KASYLES (SEQ ID NO:251) LLIY KASYLE (SEQ ID NO:257) KAS (SEQ ID NO:263)
VL CDR3 QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:234) QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:240) FQSLPPF (SEQ ID NO:246) QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:252) QLFQSLPPF (SEQ ID NO:258) QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:264)
VH序列*： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMG WVAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR DAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:265)
VL序列*： DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC RASHSIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIY KASYLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYC QLFQSLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:266)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat加Chothia確定之胺基酸 表 22 ：抗體 25G9-CDR 序列
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VH CDR 序列 VH CDR1 GYTFRSYGIS (SEQ ID NO:267) SYGIS (SEQ ID NO:273) GYTFRSY (SEQ ID NO:279) GYTFRSYGIS (SEQ ID NO:285) RSYGIS (SEQ ID NO:291) GYTFRSYG (SEQ ID NO:297)
VH CDR2 WVAPYSGNT NYAQKLQG (SEQ ID NO:268) WVAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:274) PYSG (SEQ ID NO:280) WVAPYSGNTN (SEQ ID NO:286) WMGWVAPYSGNTN (SEQ ID NO:292) VAPYSGNT (SEQ ID NO:298)
VH CDR3 DAGTYSPYGY GMDV (SEQ ID NO:269) DAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:275) AGTYSPYGYGMD (SEQ ID NO:281) DAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:287) ARDAGTYSPYGYGMD (SEQ ID NO:293) ARDAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:299)
VL CDR 序列 VL CDR1 QASQSIDSWLA (SEQ ID NO:270) QASQSIDSWLA (SEQ ID NO:276) SQSIDSW (SEQ ID NO:282) QASQSIDSWLA (SEQ ID NO:288) DSWLAWY (SEQ ID NO:294) QSIDSW (SEQ ID NO:300)
VL CDR2 SASYLES (SEQ ID NO:271) SASYLES (SEQ ID NO:277) SAS (SEQ ID NO:283) SASYLES (SEQ ID NO:289) LLIYSASYLE (SEQ ID NO:295) SAS (SEQ ID NO:301)
VL CDR3 QRFQSLPPFT (SEQ ID NO:272) QRFQSLPPFT (SEQ ID NO:278) FQSLPPF (SEQ ID NO:284) QRFQSLPPFT (SEQ ID NO:290) QRFQSLPPF (SEQ ID NO:296) QRFQSLPPFT (SEQ ID NO:302)
VH序列*： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMG WVAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR DAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:303)
VL序列*： DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC QASQSIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIY SASYLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYC QRFQSLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:304)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat加Chothia確定之胺基酸 表 23 ：抗體 29D-CDR 序列
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VH CDR序列 VH CDR1 GFTFHSRGMH (SEQ ID NO:305) SRGMH (SEQ ID NO:311) GFTFHSR (SEQ ID NO:317) GFTFHSRGMH (SEQ ID NO:323) HSRGMH (SEQ ID NO:329) GFTFHSRG (SEQ ID NO:335)
VH CDR2 VITYDGINKYYADSVEG (SEQ ID NO:306) VITYDGINKYYADSVEG (SEQ ID NO:312) YDGI (SEQ ID NO:318) VITYDGINKY (SEQ ID NO:324) WVAVITYDGINKY (SEQ ID NO:330) ITYDGINK (SEQ ID NO:336)
VH CDR3 DGVYYGVYDY (SEQ ID NO:307) DGVYYGVYDY (SEQ ID NO:313) GVYYGVYD (SEQ ID NO:319) DGVYYGVYDY (SEQ ID NO:325) ARDGVYYGVYD (SEQ ID NO:331) ARDGVYYGVYDY (SEQ ID NO:337)
VL CDR 序列 VL CDR1 KSSQSVLFSSNNKNYLA (SEQ ID NO:308) KSSQSVLFSSNNKNYLA (SEQ ID NO:314) SQSVLFSSNNKNY (SEQ ID NO:320) KSSQSVLFSSNNKNYLA (SEQ ID NO:326) LFSSNNKNYLAWY (SEQ ID NO:332) QSVLFSSNNKNY (SEQ ID NO:338)
VL CDR2 WASTRES (SEQ ID NO:309) WASTRES (SEQ ID NO:315) WAS (SEQ ID NO:321) WASTRES (SEQ ID NO:327) LLIYWASTRE (SEQ ID NO:333) WAS (SEQ ID NO:339)
VL CDR3 QQFHSYPLT (SEQ ID NO:310) QQFHSYPLT (SEQ ID NO:316) FHSYPL (SEQ ID NO:322) QQFHSYPLT (SEQ ID NO:328) QQFHSYPL (SEQ ID NO:334) QQFHSYPLT (SEQ ID NO:340)
VH序列*： QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS GFTFHSRGMHWVRQAPGKGLEWVA VITYDGINKYYADSVEGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR DGVYYGVYDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:341)
VL序列*： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIY WASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQFHSYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:342)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat加Chothia確定之胺基酸 表 24 ：抗體 29E-CDR 序列
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VH CDR 序列 VH CDR1 GFTFRSYGMH (SEQ ID NO:343) SYGMH (SEQ ID NO:349) GFTFRSY (SEQ ID NO:355) GFTFRSYGMH (SEQ ID NO:361) RSYGMH (SEQ ID NO:367) GFTFRSYG (SEQ ID NO:373)
VH CDR2 VITYDGINKYYADSVEG (SEQ ID NO:344) VITYDGINKYYADSVEG (SEQ ID NO:350) YDGI (SEQ ID NO:356) VITYDGINKY (SEQ ID NO:362) WVAVITYDGINKY (SEQ ID NO:368) ITYDGINK (SEQ ID NO:374)
VH CDR3 DGVYYGVYDY (SEQ ID NO:345) DGVYYGVYDY (SEQ ID NO:351) GVYYGVYD (SEQ ID NO:357) DGVYYGVYDY (SEQ ID NO:363) ARDGVYYGVYD (SEQ ID NO:369) ARDGVYYGVYDY (SEQ ID NO:375)
VL CDR 序列 VL CDR1 KSSQSVLFSSNNKNYLA (SEQ ID NO:346) KSSQSVLFSSNNKNYLA (SEQ ID NO:352) SQSVLFSSNNKNY (SEQ ID NO:358) KSSQSVLFSSNNKNYLA (SEQ ID NO:364) LFSSNNKNYLAWY (SEQ ID NO:370) QSVLFSSNNKNY (SEQ ID NO:376)
VL CDR2 WASTRES (SEQ ID NO:347) WASTRES (SEQ ID NO:353) WAS (SEQ ID NO:359) WASTRES (SEQ ID NO:365) LLIYWASTRE (SEQ ID NO:371) WAS (SEQ ID NO:377)
VL CDR3 QQFHSYPLT (SEQ ID NO:348) QQFHSYPLT (SEQ ID NO:354) FHSYPL (SEQ ID NO:360) QQFHSYPLT (SEQ ID NO:366) QQFHSYPL (SEQ ID NO:372) QQFHSYPLT (SEQ ID NO:378)
VH序列*： QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS GFTFRSYGMHWVRQAPGKGLEWVA VITYDGINKYYADSVEGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR DGVYYGVYDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:379)
VL序列*： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIY WASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQFHSYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:380)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat加Chothia確定之胺基酸 表 25 ：抗體 39A-CDR 序列
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VH CDR 序列 VH CDR1 GGTFSSNAIG (SEQ ID NO:381) SNAIG (SEQ ID NO:387) GGTFSSN (SEQ ID NO:393) GGTFSSNAIG (SEQ ID NO:399) SSNAIG (SEQ ID NO:405) GGTFSSNA (SEQ ID NO:411)
VH CDR2 SIIPIIGFANYAQKFQG (SEQ ID NO:382) SIIPIIGFANYAQKFQG (SEQ ID NO:388) PIIG (SEQ ID NO:394) SIIPIIGFAN (SEQ ID NO:400) WMGSIIPIIGFAN (SEQ ID NO:406) IIPIIGFA (SEQ ID NO:412)
VH CDR3 DSGYYYGASSFGMDV (SEQ ID NO:383) DSGYYYGASSFGMDV (SEQ ID NO:389) SGYYYGASSFGMD (SEQ ID NO:395) DSGYYYGASSFGMDV (SEQ ID NO:401) ARDSGYYYGASSFGMD (SEQ ID NO:407) ARDSGYYYGASSFGMDV (SEQ ID NO:413)
VL CDR 序列 VL CDR1 RASQSVSSNLA (SEQ ID NO:384) RASQSVSSNLA (SEQ ID NO:390) SQSVSSN (SEQ ID NO:396) RASQSVSSNLA (SEQ ID NO:402) SSNLAWY (SEQ ID NO:408) QSVSSN (SEQ ID NO:414)
VL CDR2 GASTRAT (SEQ ID NO:385) GASTRAT (SEQ ID NO:391) GAS (SEQ ID NO:397) GASTRAT (SEQ ID NO:403) LLIYGASTRA (SEQ ID NO:409) GAS (SEQ ID NO:415)
VL CDR3 EQYNNLPLT (SEQ ID NO:386) EQYNNLPLT (SEQ ID NO:392) YNNLPL (SEQ ID NO:398) EQYNNLPLT (SEQ ID NO:404) EQYNNLPL (SEQ ID NO:410) EQYNNLPLT (SEQ ID NO:416)
VH序列*： QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKAS GGTFSSNAIGWVRQAPGQGLEWMG SIIPIIGFANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR DSGYYYGASSFGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:417)
VL序列*： EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC RASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIY GASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC EQYNNLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:418)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat加Chothia確定之胺基酸 表 26 ：抗體 43B-CDR 序列
示範性 * Kabat Chothia AbM Contact IMGT
VH CDR 序列 VH CDR1 GGSISSGQYWS (SEQ ID NO:419) SGQYWS (SEQ ID NO:425) GGSISSGQ (SEQ ID NO:431) GGSISSGQYWS (SEQ ID NO:437) SSGQYWS (SEQ ID NO:443) GGSISSGQY (SEQ ID NO:449)
VH CDR2 EIYYSGSTRYNPSLKS (SEQ ID NO:420) EIYYSGSTRYNPSLKS (SEQ ID NO:426) YSG (SEQ ID NO:432) EIYYSGSTR (SEQ ID NO:438) WIGEIYYSGSTR (SEQ ID NO:444) IYYSGST (SEQ ID NO:450)
VH CDR3 DAPYYYGGGYYYYMDV (SEQ ID NO:421) DAPYYYGGGYYYYMDV (SEQ ID NO:427) APYYYGGGYYYYMD (SEQ ID NO:433) DAPYYYGGGYYYYMDV (SEQ ID NO:439) ARDAPYYYGGGYYYYMD (SEQ ID NO:445) ARDAPYYYGGGYYYYMDV (SEQ ID NO:451)
VL CDR 序列 VL CDR1 RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO:422) RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO:428) SQSVSSSY (SEQ ID NO:434) RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO:440) SSSYLAWY (SEQ ID NO:446) QSVSSSY (SEQ ID NO:452)
VL CDR2 GASSRAT (SEQ ID NO:423) GASSRAT (SEQ ID NO:429) GAS (SEQ ID NO:435) GASSRAT (SEQ ID NO:441) LLIYGASSRA (SEQ ID NO:447) GAS (SEQ ID NO:453)
VL CDR3 QQVGVVPYT (SEQ ID NO:424) QQVGVVPYT (SEQ ID NO:430) VGVVPY (SEQ ID NO:436) QQVGVVPYT (SEQ ID NO:442) QQVGVVPY (SEQ ID NO:448) QQVGVVPYT (SEQ ID NO:454)
VH序列*： QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVS GGSISSGQYWSWIRQHPGKGLEWIG EIYYSGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR DAPYYYGGGYYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:455)
VL序列*： EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY GASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQVGVVPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:456)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat & Chothia確定之胺基酸 表 27 ：抗體 43B1-CDR 序列
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VH CDR 序列 VH CDR1 GGSISSGQYWS (SEQ ID NO:457) SGQYWS (SEQ ID NO:463) GGSISSGQ (SEQ ID NO:469) GGSISSGQYWS (SEQ ID NO:475) SSGQYWS (SEQ ID NO:481) GGSISSGQY (SEQ ID NO:487)
VH CDR2 EIYYSGSTRYNPSLKS (SEQ ID NO:458) EIYYSGSTRYNPSLKS (SEQ ID NO:464) YSG (SEQ ID NO:470) EIYYSGSTR (SEQ ID NO:476) WIGEIYYSGSTR (SEQ ID NO:482) IYYSGST (SEQ ID NO:488)
VH CDR3 DAPYYYGGGYYYYMDV (SEQ ID NO:459) DAPYYYGGGYYYYMDV (SEQ ID NO:465) APYYYGGGYYYYMD (SEQ ID NO:471) DAPYYYGGGYYYYMDV (SEQ ID NO:477) ARDAPYYYGGGYYYYMD (SEQ ID NO:483) ARDAPYYYGGGYYYYMDV (SEQ ID NO:489)
VL CDR 序列 VL CDR1 RASESVDSSYLA (SEQ ID NO:460) RASESVDSSYLA (SEQ ID NO:466) SESVDSSY (SEQ ID NO:472) RASESVDSSYLA (SEQ ID NO:478) DSSYLAWY (SEQ ID NO:484) ESVDSSY (SEQ ID NO:490)
VL CDR2 GASTRQT (SEQ ID NO:461) GASTRQT (SEQ ID NO:467) GAS (SEQ ID NO:473) GASTRQT (SEQ ID NO:479) LLIYGASTRQ (SEQ ID NO:485) GAS (SEQ ID NO:491)
VL CDR3 QQAGVVPYT (SEQ ID NO:462) QQAGVVPYT (SEQ ID NO:468) AGVVPY (SEQ ID NO:474) QQAGVVPYT (SEQ ID NO:480) QQAGVVPY (SEQ ID NO:486) QQAGVVPYT (SEQ ID NO:492)
VH序列*： QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVS GGSISSGQYWSWIRQHPGKGLEWIG EIYYSGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR DAPYYYGGGYYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:493)
VL序列*： EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASESVDSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY GASTRQTGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQAGVVPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:494)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat & Chothia確定之胺基酸 表 28 ：抗體 43B7-CDR 序列
示範性 * Kabat Chothia AbM Contact IMGT
VH CDR 序列 VH CDR1 GGSISSGQYWS (SEQ ID NO:495) SGQYWS (SEQ ID NO:501) GGSISSGQ (SEQ ID NO:507) GGSISSGQYWS (SEQ ID NO:513) SSGQYWS (SEQ ID NO:519) GGSISSGQY (SEQ ID NO:525)
VH CDR2 EIYYSGSTRYNPSLKS (SEQ ID NO:496) EIYYSGSTRYNPSLKS (SEQ ID NO:502) YSG (SEQ ID NO:508) EIYYSGSTR (SEQ ID NO:514) WIGEIYYSGSTR (SEQ ID NO:520) IYYSGST (SEQ ID NO:526)
VH CDR3 DAPYYYGGGYYYYMDV (SEQ ID NO:497) DAPYYYGGGYYYYMDV (SEQ ID NO:503) APYYYGGGYYYYMD (SEQ ID NO:509) DAPYYYGGGYYYYMDV (SEQ ID NO:515) ARDAPYYYGGGYYYYMD (SEQ ID NO:521) ARDAPYYYGGGYYYYMDV (SEQ ID NO:527)
VL CDR 序列 VL CDR1 RASESVDSSYLA (SEQ ID NO:498) RASESVDSSYLA (SEQ ID NO:504) SESVDSSY (SEQ ID NO:510) RASESVDSSYLA (SEQ ID NO:516) DSSYLAWY (SEQ ID NO:522) ESVDSSY (SEQ ID NO:528)
VL CDR2 GADSRAT (SEQ ID NO:499) GADSRAT (SEQ ID NO:505) GAD (SEQ ID NO:511) GADSRAT (SEQ ID NO:517) LLIYGADSRA (SEQ ID NO:523) GAD (SEQ ID NO:529)
VL CDR3 QQDGVVPYT (SEQ ID NO:500) QQDGVVPYT (SEQ ID NO:506) DGVVPY (SEQ ID NO:512) QQDGVVPYT (SEQ ID NO:518) QQDGVVPY (SEQ ID NO:524) QQDGVVPYT (SEQ ID NO:530)
VH序列*： QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVS GGSISSGQYWSWIRQHPGKGLEWIG EIYYSGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR DAPYYYGGGYYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:531)
VL序列*： EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASESVDSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY GADSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQDGVVPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:532)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat & Chothia確定之胺基酸 表 29 ：抗體 43D-CDR 序列
示範性 * Kabat Chothia AbM Contact IMGT
VH CDR 序列 VH CDR1 GGSLSGYYWS (SEQ ID NO:533) GYYWS (SEQ ID NO:539) GGSLSGY (SEQ ID NO:545) GGSLSGYYWS (SEQ ID NO:551) SGYYWS (SEQ ID NO:557) GGSLSGYY (SEQ ID NO:563)
VH CDR2 EIGASGSTRYNPSLKS (SEQ ID NO:534) EIGASGSTRYNPSLKS (SEQ ID NO:540) ASG (SEQ ID NO:546) EIGASGSTR (SEQ ID NO:552) WIGEIGASGSTR (SEQ ID NO:558) IGASGST (SEQ ID NO:564)
VH CDR3 DTPYYYEGGYYYYMDV (SEQ ID NO:535) DTPYYYEGGYYYYMDV (SEQ ID NO:541) TPYYYEGGYYYYMD (SEQ ID NO:547) DTPYYYEGGYYYYMDV (SEQ ID NO:553) ARDTPYYYEGGYYYYMD (SEQ ID NO:559) ARDTPYYYEGGYYYYMDV (SEQ ID NO:565)
VL CDR 序列 VL CDR1 RASQSVSSSYL A (SEQ ID NO:536) RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO:542) SQSVSSSY (SEQ ID NO:548) RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO:554) SSSYLAWY (SEQ ID NO:560) QSVSSSY (SEQ ID NO:566)
VL CDR2 GASSRAT (SEQ ID NO:537) GASSRAT (SEQ ID NO:543) GAS (SEQ ID NO:549) GASSRAT (SEQ ID NO:555) LLIYGASSRA (SEQ ID NO:561 GAS (SEQ ID NO:567)
VL CDR3 QQVGVVPYT (SEQ ID NO:538) QQVGVVPYT (SEQ ID NO:544) VGVVPY (SEQ ID NO:550) QQVGVVPYT (SEQ ID NO:556) QQVGVVPY (SEQ ID NO:562) QQVGVVPYT (SEQ ID NO:568)
VH序列*： QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVY GGSLSGYYWSWIRQPPGKGLEWIG EIGASGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR DTPYYYEGGYYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:569)
VL序列*： EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY GASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQVGVVPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:570)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat & Chothia確定之胺基酸 表 30 ：抗體 43D7-CDR 序列
示範性 * Kabat Chothia AbM Contact IMGT
VH CDR 序列 VH CDR1 GGSLSGYYWS (SEQ ID NO:571) GYYWS (SEQ ID NO:577) GGSLSGY (SEQ ID NO:583) GGSLSGYYWS (SEQ ID NO:589) SGYYWS (SEQ ID NO:595) GGSLSGYY (SEQ ID NO:601)
VH CDR2 EIGASGSTRYNPSLKS (SEQ ID NO:572) EIGASGSTRYNPSLKS (SEQ ID NO:578) ASG (SEQ ID NO:584) EIGASGSTR (SEQ ID NO:590) WIGEIGASGSTR (SEQ ID NO:596) IGASGST (SEQ ID NO:602)
VH CDR3 DTPYYYEGGYYYYMDV (SEQ ID NO:573) DTPYYYEGGYYYYMDV (SEQ ID NO:579) TPYYYEGGYYYYMD (SEQ ID NO:585) DTPYYYEGGYYYYMDV (SEQ ID NO:591) ARDTPYYYEGGYYYYMD (SEQ ID NO:597) ARDTPYYYEGGYYYYMDV (SEQ ID NO:603)
VL CDR 序列 VL CDR1 RASDSVDSSYLA (SEQ ID NO:574) RASDSVDSSYLA (SEQ ID NO:580) SDSVDSSY (SEQ ID NO:586) RASDSVDSSYLA (SEQ ID NO:592) DSSYLAWY (SEQ ID NO:598) DSVDSSY (SEQ ID NO:604)
VL CDR2 GAFSRAN (SEQ ID NO:575) GAFSRAN (SEQ ID NO:581) GAF (SEQ ID NO:587) GAFSRAN (SEQ ID NO:593) LLIYGAFSRA (SEQ ID NO:599) GAF (SEQ ID NO:605)
VL CDR3 QQAGVVPYT (SEQ ID NO:576) QQAGVVPYT (SEQ ID NO:582) AGVVPY (SEQ ID NO:588) QQAGVVPYT (SEQ ID NO:594) QQAGVVPY (SEQ ID NO:600) QQAGVVPYT (SEQ ID NO:606)
VH序列*： QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVY GGSLSGYYWSWIRQPPGKGLEWIG EIGASGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR DTPYYYEGGYYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:607)
VL序列*： EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASDSVDSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY GAFSRANGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQAGVVPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:608)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat & Chothia確定之胺基酸 表 31 ：抗體 43D8-CDR 序列
示範性 * Kabat Chothia AbM Contact IMGT
VH CDR 序列 VH CDR1 GGSLSGYYWS (SEQ ID NO:609) GYYWS (SEQ ID NO:615) GGSLSGY (SEQ ID NO:621) GGSLSGYYWS (SEQ ID NO:627) SGYYWS (SEQ ID NO:633) GGSLSGYY (SEQ ID NO:639)
VH CDR2 EIGASGSTRYNPSLKS (SEQ ID NO:610) EIGASGSTRYNPSLKS (SEQ ID NO:616) ASG (SEQ ID NO:622) EIGASGSTR (SEQ ID NO:628) WIGEIGASGSTR (SEQ ID NO:634) IGASGST (SEQ ID NO:640)
VH CDR3 DTPYYYEGGYYYYMDV (SEQ ID NO:611) DTPYYYEGGYYYYMDV (SEQ ID NO:617) TPYYYEGGYYYYMD (SEQ ID NO:623) DTPYYYEGGYYYYMDV (SEQ ID NO:629) ARDTPYYYEGGYYYYMD (SEQ ID NO:635) ARDTPYYYEGGYYYYMDV (SEQ ID NO:641)
VL CDR 序列 VL CDR1 RASQSVSSSFLA (SEQ ID NO:612) RASQSVSSSFLA (SEQ ID NO:618) SQSVSSSF (SEQ ID NO:624) RASQSVSSSFLA (SEQ ID NO:630) SSSFLAWY (SEQ ID NO:636) QSVSSSF (SEQ ID NO:642)
VL CDR2 GAYSRAT (SEQ ID NO:613) GAYSRAT (SEQ ID NO:619) GAY (SEQ ID NO:625) GAYSRAT (SEQ ID NO:631) LLIYGAYSRA (SEQ ID NO:637) GAY (SEQ ID NO:643)
VL CDR3 QQAGVVPYT (SEQ ID NO:614) QQAGVVPYT (SEQ ID NO:620) AGVVPY (SEQ ID NO:626) QQAGVVPYT (SEQ ID NO:632) QQAGVVPY (SEQ ID NO:638) QQAGVVPYT (SEQ ID NO:644)
VH序列*： QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVY GGSLSGYYWSWIRQPPGKGLEWIG EIGASGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR DTPYYYEGGYYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:645)
VL序列*： EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSFLAWYQQKPGQAPRLLIY GAYSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQAGVVPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:646)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat & Chothia確定之胺基酸 表 32 ：抗體 43E-CDR 序列
示範性 * Kabat Chothia AbM Contact IMGT
VH CDR 序列 VH CDR1 GGSISSGQYWS (SEQ ID NO:647) SGQYWS (SEQ ID NO:653) GGSISSGQ (SEQ ID NO:659) GGSISSGQYWS (SEQ ID NO:665) SSGQYWS (SEQ ID NO:671) GGSISSGQY (SEQ ID NO:677)
VH CDR2 EIYYSGSTRYNPSLKS (SEQ ID NO:648) EIYYSGSTRYNPSLKS (SEQ ID NO:654) YSG (SEQ ID NO:660) EIYYSGSTR (SEQ ID NO:666) WIGEIYYSGSTR (SEQ ID NO:672) IYYSGST (SEQ ID NO:678)
VH CDR3 DTPYYYDGGYYYYMDV (SEQ ID NO:649) DTPYYYDGGYYYYMDV (SEQ ID NO:655) TPYYYDGGYYYYMD (SEQ ID NO:661) DTPYYYDGGYYYYMDV (SEQ ID NO:667) ARDTPYYYDGGYYYYMD (SEQ ID NO:673) ARDTPYYYDGGYYYYMDV (SEQ ID NO:679)
VL CDR 序列 VL CDR1 RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO:650) RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO:656) SQSVSSSY (SEQ ID NO:662) RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO:668) SSSYLAWY (SEQ ID NO:674) QSVSSSY (SEQ ID NO:680)
VL CDR2 GASSRAT (SEQ ID NO:651) GASSRAT (SEQ ID NO:657) GAS (SEQ ID NO:663) GASSRAT (SEQ ID NO:669) LLIYGASSRA (SEQ ID NO:675) GAS (SEQ ID NO:681)
VL CDR3 QQVGVVPYT (SEQ ID NO:652) QQVGVVPYT (SEQ ID NO:658) VGVVPY (SEQ ID NO:664) QQVGVVPYT (SEQ ID NO:670) QQVGVVPY (SEQ ID NO:676) QQVGVVPYT (SEQ ID NO:682)
VH序列*： QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVS GGSISSGQYWSWIRQHPGKGLEWIG EIYYSGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKDQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR DTPYYYDGGYYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:683)
VL序列*： EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY GASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQVGVVPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:684)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat & Chothia確定之胺基酸 表 33 ：抗體 43Ea-CDR 序列
示範性 * Kabat Chothia AbM Contact IMGT
VH CDR 序列 VH CDR1 GGSISSGQYWS (SEQ ID NO:685) SGQYWS (SEQ ID NO:691) GGSISSGQ (SEQ ID NO:697) GGSISSGQYWS (SEQ ID NO:703) SSGQYWS (SEQ ID NO:709) GGSISSGQY (SEQ ID NO:715)
VH CDR2 EIYYSGSTRYNPSLKS (SEQ ID NO:686) EIYYSGSTRYNPSLKS (SEQ ID NO:692) YSG (SEQ ID NO:698) EIYYSGSTR (SEQ ID NO:704) WIGEIYYSGSTR (SEQ ID NO:710) IYYSGST (SEQ ID NO:716)
VH CDR3 DTPYYYDGGYYYYMDV (SEQ ID NO:687) DTPYYYDGGYYYYMDV (SEQ ID NO:693) TPYYYDGGYYYYMD (SEQ ID NO:699) DTPYYYDGGYYYYMDV (SEQ ID NO:705) ARDTPYYYDGGYYYYMD (SEQ ID NO:711) ARDTPYYYDGGYYYYMDV (SEQ ID NO:717)
VL CDR 序列 VL CDR1 RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO:688) RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO:694) SQSVSSSY (SEQ ID NO:700) RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO:706) SSSYLAWY (SEQ ID NO:712) QSVSSSY (SEQ ID NO:718)
VL CDR2 GASSRAT (SEQ ID NO:689) GASSRAT (SEQ ID NO:695) GAS (SEQ ID NO:701) GASSRAT (SEQ ID NO:707) LLIYGASSRA (SEQ ID NO:713) GAS (SEQ ID NO:719)
VL CDR3 QQVGVVPYT (SEQ ID NO:690) QQVGVVPYT (SEQ ID NO:696) VGVVPY (SEQ ID NO:702) QQVGVVPYT (SEQ ID NO:708) QQVGVVPY (SEQ ID NO:714) QQVGVVPYT (SEQ ID NO:720)
VH序列*： QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVS GGSISSGQYWSWIRQHPGKGLEWIG EIYYSGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR DTPYYYDGGYYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:721)
VL序列*： EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY GASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQVGVVPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:722)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat & Chothia確定之胺基酸 表 34 ：抗體 54E-CDR 序列
示範性 * Kabat Chothia AbM Contact IMGT
VH CDR 序列 VH CDR1 GYTFANYYMH (SEQ ID NO:723) NYYMH (SEQ ID NO:729) GYTFANY (SEQ ID NO:735) GYTFANYYMH (SEQ ID NO:741) ANYYMH (SEQ ID NO:747) GYTFANYY (SEQ ID NO:753)
VH CDR2 IINPSGGITVYAQKFQG (SEQ ID NO:724) IINPSGGITVYAQKFQG (SEQ ID NO:730) PSGG (SEQ ID NO:736) IINPSGGITV (SEQ ID NO:742) WMGIINPSGGITV (SEQ ID NO:748) INPSGGIT (SEQ ID NO:754)
VH CDR3 GGSKVAALAFDI (SEQ ID NO:725) GGSKVAALAFDI (SEQ ID NO:731) GSKVAALAFD (SEQ ID NO:737) GGSKVAALAFDI (SEQ ID NO:743) ARGGSKVAALAFD (SEQ ID NO:749) ARGGSKVAALAFDI (SEQ ID NO:755)
VL CDR 序列 VL CDR1 QASQDISNSLN (SEQ ID NO:726) QASQDISNSLN (SEQ ID NO:732) SQDISNS (SEQ ID NO:738) QASQDISNSLN (SEQ ID NO:744) SNSLNWY (SEQ ID NO:750) QDISNS (SEQ ID NO:756)
VL CDR2 DASNLET (SEQ ID NO:727) DASNLET (SEQ ID NO:733) DAS (SEQ ID NO:739) DASNLET (SEQ ID NO:745) LLIYDASNLE (SEQ ID NO:751) DAS (SEQ ID NO:757)
VL CDR3 QQYNFHPLT (SEQ ID NO:728) QQYNFHPLT (SEQ ID NO:734) YNFHPL (SEQ ID NO:740) QQYNFHPLT (SEQ ID NO:746) QQYNFHPL (SEQ ID NO:752) QQYNFHPLT (SEQ ID NO:758)
VH序列*： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFANYYMHWVRQAPGQGLEWMG IINPSGGITVYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR GGSKVAALAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO:759)
VL序列*： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC QASQDISNSLNWYQQKPGKAPKLLIY DASNLETGVPSRFSGSRSGTDFTFTISSLQPEDIATYYC QQYNFHPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:760)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat加Chothia確定之胺基酸 表 35 ：共有 CDR
抗體組 1 25 29 39 43 54
VH CDR 序列 * VH CDR1 GFTFSx[D/S]YAMx[A/G] (SEQ ID NO:773) GYTFx[D/R]x[S/V]YGIS (SEQ ID NO:779) GFTFx[H/R]Sx[R/Y]GMH (SEQ ID NO:785) GGTFSSNAIG (SEQ ID NO:791) GGSx[I/L]SSGx[Q/Y]YWS (SEQ ID NO:797) GYTFANYYMH (SEQ ID NO:803)
VH CDR2 x[A/T]ISGSGGLTYYADSVKG (SEQ ID NO:774) Wx[I/V]APYx[S/N]GNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:780) VITYDGINKYYADSVEG (SEQ ID NO:786) SIIPIIGFANYAQKFQG (SEQ ID NO:792) EIx[Y/G]x[Y/A]SGSTRYNPSLKS (SEQ ID NO:798) IINPSGGITVYAQKFQG (SEQ ID NO:804)
VH CDR3 APYGYYMDV (SEQ ID NO:775) DAGTYSPx[F/Y]GYGMDV (SEQ ID NO:781) DGVYYGVYDY (SEQ ID NO:787) DSGYYYGASSFGMDV (SEQ ID NO:793) Dx[T/A]PYYYx[E/G/D]GGYYYYMDV (SEQ ID NO:799) GGSKVAALAFDI (SEQ ID NO:805)
VL CDR 序列 * VL CDR1 RASQSISSWLA (SEQ ID NO:776) x[R/Q]ASx[Q/E/H]SIx[S/D/N]x[S/N]WLA (SEQ ID NO:782) KSSQSVLFSSNNKNYLA (SEQ ID NO:788) RASQSVSSNLA (SEQ ID NO:794) RASx[Q/E/D]SVx[S/D]SSx[Y/F]LA (SEQ ID NO:800) QASQDISNSLN (SEQ ID NO:806)
VL CDR2 KASSLES (SEQ ID NO:777) x[K/S]Ax[S/Y]x[S/Y/N]LEx[S/Y] (SEQ ID NO:783) WASTRES (SEQ ID NO:789) GASTRAT (SEQ ID NO:795) GAx[S/D/F/Y]x[S/T]Rx[A/Q]x[T/N] (SEQ ID NO:801) DASNLET (SEQ ID NO:807)
VL CDR3 QQYKSYIT (SEQ ID NO:778) Qx[Q/L/R]FQx[S/K]LPPFT (SEQ ID NO:784) QQFHSYPLT (SEQ ID NO:790) EQYNNLPLT (SEQ ID NO:796) QQx[V/A/D]GVVPYT (SEQ ID NO:802) QQYNFHPLT (SEQ ID NO:808)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat加Chothia確定之胺基酸 表 36： 人類、食蟹猴及小鼠 TF 序列
物種 人類( 智人) 食蟹猴( 食蟹獼猴) 小鼠( 小家鼠)
全長序列[ 訊息序列加下劃線] METPAWPRVPRPETAVARTLLLGWVFAQVAGASGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREIFYIIGAVVFVVIILVIILAISLHKCRKAGVGQSWKENSPLNVS (SEQ ID NO:809) METPAWPRVPRPETAVARTLLLGWVFAQVAGASGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPINQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTADTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGHVESTGSTEEPPYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVQDEWTLVRRNDTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRRTANRKSTDSPVECMGHEKGESREIFYIIGAVVFVVIILVIILAISLHKCKKARVGRSWKENSPLNVA (SEQ ID NO:813) MAILVRPRLLAALAPTFLGCLLLQVTAGAGIPEKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISDRSRNWKNKCFSTTDTECDLTDEIVKDVTWAYEAKVLSVPRRNSVHGDGDQLVIHGEEPPFTNAPKFLPYRDTNLGQPVIQQFEQDGRKLNVVVKDSLTLVRKNGTFLTLRQVFGKDLGYIITYRKGSSTGKKTNITNTNEFSIDVEEGVSYCFFVQAMIFSRKTNQNSPGSSTVCTEQWKSFLGETLIIVGAVVLLATIFIILLSISLCKRRKNRAGQKGKNTPSRLA (SEQ ID NO:817)
細胞外域(ECD) SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:810) SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPINQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTADTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGHVESTGSTEEPPYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVQDEWTLVRRNDTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRRTANRKSTDSPVECMGHEKGESRE (SEQ ID NO:814) AGIPEKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISDRSRNWKNKCFSTTDTECDLTDEIVKDVTWAYEAKVLSVPRRNSVHGDGDQLVIHGEEPPFTNAPKFLPYRDTNLGQPVIQQFEQDGRKLNVVVKDSLTLVRKNGTFLTLRQVFGKDLGYIITYRKGSSTGKKTNITNTNEFSIDVEEGVSYCFFVQAMIFSRKTNQNSPGSSTVCTEQWKSFLGE (SEQ ID NO:818)
TF ECD-His (TF-His) 蛋白之序列 SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRETGHHHHHH (SEQ ID NO:811) SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPINQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTADTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGHVESTGSTEEPPYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVQDEWTLVRRNDTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRRTANRKSTDSPVECMGHEKGESRETGHHHHHH (SEQ ID NO:815) AGIPEKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISDRSRNWKNKCFSTTDTECDLTDEIVKDVTWAYEAKVLSVPRRNSVHGDGDQLVIHGEEPPFTNAPKFLPYRDTNLGQPVIQQFEQDGRKLNVVVKDSLTLVRKNGTFLTLRQVFGKDLGYIITYRKGSSTGKKTNITNTNEFSIDVEEGVSYCFFVQAMIFSRKTNQNSPGSSTVCTEQWKSFLGETGHHHHHH (SEQ ID NO:819)
TF ECD-Fc (TF-Fc) 融合蛋白之序列 SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRETGENLYFQGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:812) SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPINQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTADTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGHVESTGSTEEPPYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVQDEWTLVRRNDTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRRTANRKSTDSPVECMGHEKGESRETGENLYFQGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:816) AGIPEKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISDRSRNWKNKCFSTTDTECDLTDEIVKDVTWAYEAKVLSVPRRNSVHGDGDQLVIHGEEPPFTNAPKFLPYRDTNLGQPVIQQFEQDGRKLNVVVKDSLTLVRKNGTFLTLRQVFGKDLGYIITYRKGSSTGKKTNITNTNEFSIDVEEGVSYCFFVQAMIFSRKTNQNSPGSSTVCTEQWKSFLGETGENLYFQGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:820)
表 39： 抗 TF 抗體之序列
抗體 VH 域 VL 域
10H10 (M1593) EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFAPYWIEWVRQMPGKGLEWMGDILPGTGFTTYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARSGYYGNSGFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:821) DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLSSGNQKNYLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQNDYTYPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:822)
TF-011 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGDYTYYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSPWGYYLDSWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:828) DIQMTQSPPSLSASAGDRVTITCRASQGISSRLAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:829)
5G9 ( 人類化TF8-5G9, CNTO 860) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCKASGFNIKDYYMHWVRQAPGKGLEWIGLIDPENGNTIYDPKFQGRFTISADNSKNTLFLQMDSLRPEDTAVYYCARDNSYYFDYWGQGTPVTVSS (SEQ ID NO:830) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDIRKYLNWYQQKPGKAPKLLIYYATSLADGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCLQHGESPYTFGQGTKLEIT (SEQ ID NO:831)
表 41 ：豬 TF 序列
物種 豬( 野豬)
全長序列[ 訊息序列加下劃線] MATPTGPPVSCPKAAVARALLLGWVLVQVAGATGTTDVIVAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPINYVYTVQISPRLGDWKNKCFHTTDTECDVTDEIMRNVKETYVARVLSYPADTVLTAQEPPFTNSPPFTPYLDTNLGQPVIQSFEQVGTKLNVTVEAARTLVRVNGTFLRLRDVFGKDLNYTLYYWRASSTGKKKATTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRRVNQKSPESRIECTSQEKAVSRELFLIVGAVVFAVIVFVLVLSVSLYKCRKERAGPSGKENAPLNVA (SEQ ID NO:824)
細胞外域(ECD) TGTTDVIVAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPINYVYTVQISPRLGDWKNKCFHTTDTECDVTDEIMRNVKETYVARVLSYPADTVLTAQEPPFTNSPPFTPYLDTNLGQPVIQSFEQVGTKLNVTVEAARTLVRVNGTFLRLRDVFGKDLNYTLYYWRASSTGKKKATTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRRVNQKSPESRIECTSQEKAVSRE (SEQ ID NO:825)
TF ECD-His (TF-His) 蛋白之序列 TGTTDVIVAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPINYVYTVQISPRLGDWKNKCFHTTDTECDVTDEIMRNVKETYVARVLSYPADTVLTAQEPPFTNSPPFTPYLDTNLGQPVIQSFEQVGTKLNVTVEAARTLVRVNGTFLRLRDVFGKDLNYTLYYWRASSTGKKKATTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRRVNQKSPESRIECTSQEKAVSRETGHHHHHH (SEQ ID NO:826)
TF ECD-Fc (TF-Fc) 融合蛋白之序列 TGTTDVIVAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPINYVYTVQISPRLGDWKNKCFHTTDTECDVTDEIMRNVKETYVARVLSYPADTVLTAQEPPFTNSPPFTPYLDTNLGQPVIQSFEQVGTKLNVTVEAARTLVRVNGTFLRLRDVFGKDLNYTLYYWRASSTGKKKATTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRRVNQKSPESRIECTSQEKAVSRETGENLYFQGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:827)
表 49 ：兔 TF 序列
物種 兔( 穴兔)
全長序列[ 訊息序列加下劃線] MAPPTRLQVPRPGTAVPYTVLLGWLLAQVARAADTTGRAYNLTWKSTNFKTILEWEPKSIDHVYTVQISTRLENWKSKCFLTAETECDLTDEVVKDVGQTYMARVLSYPARNGNTTGFPEEPPFRNSPEFTPYLDTNLGQPTIQSFEQVGTKLNVTVQDARTLVRRNGTFLSLRAVFGKDLNYTLYYWRASSTGKKTATTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRKRKQRSPESLTECTSREQGRAREMFFIIGAVVVVALLIIVLSVTVYKCRKARAGPSGKESSPLNIA (SEQ ID NO:832)
細胞外域(ECD) ADTTGRAYNLTWKSTNFKTILEWEPKSIDHVYTVQISTRLENWKSKCFLTAETECDLTDEVVKDVGQTYMARVLSYPARNGNTTGFPEEPPFRNSPEFTPYLDTNLGQPTIQSFEQVGTKLNVTVQDARTLVRRNGTFLSLRAVFGKDLNYTLYYWRASSTGKKTATTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRKRKQRSPESLTECTSREQGRAREM (SEQ ID NO:833)
TF ECD-His (TF-His) 蛋白之序列 ADTTGRAYNLTWKSTNFKTILEWEPKSIDHVYTVQISTRLENWKSKCFLTAETECDLTDEVVKDVGQTYMARVLSYPARNGNTTGFPEEPPFRNSPEFTPYLDTNLGQPTIQSFEQVGTKLNVTVQDARTLVRRNGTFLSLRAVFGKDLNYTLYYWRASSTGKKTATTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRKRKQRSPESLTECTSREQGRAREMTGHHHHHH (SEQ ID NO:834)
TF ECD-Fc (TF-Fc) 融合蛋白之序列 ADTTGRAYNLTWKSTNFKTILEWEPKSIDHVYTVQISTRLENWKSKCFLTAETECDLTDEVVKDVGQTYMARVLSYPARNGNTTGFPEEPPFRNSPEFTPYLDTNLGQPTIQSFEQVGTKLNVTVQDARTLVRRNGTFLSLRAVFGKDLNYTLYYWRASSTGKKTATTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRKRKQRSPESLTECTSREQGRAREMENLYFQGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:835)
表 56 ：大鼠 TF ECD 及嵌合構築體 ECD 序列
大鼠/ 嵌合構築體 細胞外域(ECD) 序列
rTF ( 大鼠TF) AGTPPGKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISDRSRNWKYKCTGTTDTECDLTDEIVKDVNWTYEARVLSVPWRNSTHGKETLFGTHGEEPPFTNARKFLPYRDTKIGQPVIQKYEQGGTKLKVTVKDSFTLVRKNGTFLTLRQVFGNDLGYILTYRKDSSTGRKTNTTHTNEFLIDVEKGVSYCFFAQAVIFSRKTNHKSPESITKCTEQWKSVLGE (SEQ ID NO:838)
h1-107_r AGTPPGKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISDRSRNWKYKCTGTTDTECDLTDEIVKDVNWTYEARVLSVPWRNSTHGKETLFGTHGEEPPFTNARKFLPYRDTKLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:839)
h1-77_r AGTPPGKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISDRSRNWKYKCTGTTDTECDLTDEIVKDVNWTYEARVLSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:840)
h1-38_r AGTPPGKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:841)
h39-77_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISDRSRNWKYKCTGTTDTECDLTDEIVKDVNWTYEARVLSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:842)
h78-107_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSVPWRNSTHGTHGEEPPFTNARKFLPYRDTKLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:843)
h78-107_r.v2 SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSVPWRNSTHGKETLFGTHGEEPPFTNARKFLPYRDTKLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:844)
h78-93_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSVPWRNSTHGKETLFGTHGEEPPYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:845)
h94-107_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLFTNARKFLPYRDTKLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:846)
h108-219_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNIGQPVIQKYEQGGTKLKVTVKDSFTLVRKNGTFLTLRQVFGNDLGYILTYRKDSSTGRKTNTTHTNEFLIDVEKGVSYCFFAQAVIFSRKTNHKSPESITKCTEQWKSVLGE (SEQ ID NO:847)
h108-158_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNIGQPVIQKYEQGGTKLKVTVKDSFTLVRKNGTFLTLRQVFGNDLGYILTYRKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:848)
h108-132_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNIGQPVIQKYEQGGTKLKVTVKDSFTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:849)
h133-158_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRKNGTFLTLRQVFGNDLGYILTYRKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:850)
h133-145_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRKNGTFLTLRQVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:851)
h133-139_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRKNGTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:852)
h140-145_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLTLRQVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:853)
h146-158_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGNDLGYILTYRKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:854)
h146-151_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGNDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:855)
h152-158_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLGYILTYRKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:856)
h159-219_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKDSSTGRKTNTTHTNEFLIDVEKGVSYCFFAQAVIFSRKTNHKSPESITKCTEQWKSVLGE (SEQ ID NO:857)
h159-189_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKDSSTGRKTNTTHTNEFLIDVEKGVSYCFFAQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:858)
h159-174_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKDSSTGRKTNTTHTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:859)
h159-166_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKDSSTGRKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:860)
h167-174_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTNTTHTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:861)
h175-189_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVEKGVSYCFFAQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:862)
h190-219_r SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIFSRKTNHKSPESITKCTEQWKSVLGE (SEQ ID NO:863)
hTF_K68N SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVNQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:865)
hTF_K149N SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGNDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:866)
hTF_N171H_T197K SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTHTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRKVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE (SEQ ID NO:867)
r141-194_h AGTPPGKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISDRSRNWKYKCTGTTDTECDLTDEIVKDVNWTYEARVLSVPWRNSTHGKETLFGTHGEEPPFTNARKFLPYRDTKIGQPVIQKYEQGGTKLKVTVKDSFTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIFSRKTNHKSPESITKCTEQWKSVLGE (SEQ ID NO:864)
表 57 ：共有可變區序列
組 共有VH 域(SEQ ID NO) 共有VL 域(SEQ ID NO)
譜系25A QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDx[V/A]YGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYx[N/S]GNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:868) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCx[R/Q]ASx[Q/E]SIx[S/N]x[S/N]WLAWYQQKPGKAPKLLIYKAx[S/Y]x[S/N]LEx[S/Y]GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQx[Q/L]FQx[S/K]LPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:869)
譜系25G QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMGWVAPYx[N/S]GNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:870) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCx[R/Q]ASx[Q/H]SIx[S/D]SWLAWYQQKPGKAPKLLIYx[K/S]ASx[S/Y]LESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQx[Q/L/R]FQSLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:871)
表 58 ：共有 CDR
抗體組 譜系25A 譜系25G
VH CDR 序列* VH CDR1 GYTFDx[V/A]YGIS (SEQ ID NO:872) GYTFRSYGIS (SEQ ID NO:878)
VH CDR2 WIAPYx[N/S]GNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:873) WVAPYx[N/S]GNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:879)
VH CDR3 DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:874) DAGTYSPYGYGMDV (SEQ ID NO:880)
VL CDR 序列* VL CDR1 x[R/Q]ASx[Q/E]SIx[S/N]x[S/N]WLA (SEQ ID NO:875) x[R/Q]ASx[Q/H]SIx[S/D]SWLA (SEQ ID NO:881)
VL CDR2 KAx[S/Y]x[S/N]LEx[S/Y] (SEQ ID NO:876) x[K/S]ASx[S/Y]LES (SEQ ID NO:882)
VL CDR3 Qx[Q/L]FQx[S/K]LPPFT (SEQ ID NO:877) Qx[Q/L/R]FQSLPPFT (SEQ ID NO:883)
*示範性CDR序列涵蓋了由Kabat加Chothia確定之胺基酸 表 59 ： TF 抗體之抗體序列可變區呈粗體；參與藥物綴合之半胱胺酸加下劃線。表13中之純系具有相同重鏈恆定區。表13中之純系具有相同輕鏈恆定區。
純系 重鏈 輕鏈
25A QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHT CPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 939) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE C(SEQ ID NO: 944)
25A3 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHT CPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 940) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE C(SEQ ID NO: 945)
25A5 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHT CPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 941) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESISNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYSLEYGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQKLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE C(SEQ ID NO: 921)
25A5T QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDAYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHT CPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:920) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESISNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYSLEYGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQKLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE C(SEQ ID NO:921)
25G QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMGWVAPYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHT CPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 942) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE C(SEQ ID NO: 946)
25G1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMGWVAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHT CPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 922) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASHSIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASYLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE C(SEQ ID NO: 947)
25G9 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSYGISWVRQAPGQGLEWMGWVAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPYGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHT CPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:922) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYSASYLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQRFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE C(SEQ ID NO:923)
共有譜系25A QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDx[V/A]YGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYx[N/S]GNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHT CPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 943) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCx[R/Q]ASx[Q/E]SIx[S/N]x[S/N]WLAWYQQKPGKAPKLLIYKAx[S/Y]x[S/N]LEx[S/Y]GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQx[Q/L]FQx[S/K]LPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE C(SEQ ID NO: 948)
43D7 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSLSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIGASGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDTPYYYEGGYYYYMDVWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHT CPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:924) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASDSVDSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRANGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQAGVVPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE C(SEQ ID NO:925)
43D8 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSLSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIGASGSTRYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDTPYYYEGGYYYYMDVWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHT CPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:926) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGAYSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQAGVVPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE C(SEQ ID NO:927)
參考以下描述及附圖將更好地理解本發明之此等及其他特徵、態樣及優點，其中： 圖 1包括展示在長期血栓形成模型中抗TF抗體對血栓大小之作用的圖。誤差棒展示標準誤差。 圖 2包括展示在抗磷脂質抗體(aPL)誘導之急性血栓形成模型中抗TF抗體對血栓大小之作用的圖。誤差棒展示標準誤差。 圖 3A包括展示在Poly I:C模型中經指示之治療對炎性細胞介素水準之作用的圖。誤差棒展示標準偏差。 圖 3B包括展示在Poly I:C模型中經指示之治療對抗炎性細胞介素水準之作用的圖。誤差棒展示標準偏差。 圖 4包括展示在Poly I:C模型中抗TF抗體對巨噬細胞趨化性之作用的圖。 圖 5包括展示在COVID模型中經指示之治療對體重之作用的圖。 圖 6包括展示在COVID模型中抗TF抗體對經指示之支氣管肺泡灌洗術(BAL)細胞介素之作用的圖。 圖 7包括展示在COVID模型中抗TF抗體對經指示之支氣管肺泡灌洗術(BAL)趨化介素之作用的圖。 圖 8包括展示在COVID模型中抗TF抗體對D-二聚體濃度之作用的圖。 圖 9包括展示在心肌梗塞模型中抗TF抗體及同型對照治療對梗塞大小之作用的超音波心動圖影像。 圖 10包括展示在心肌梗塞模型中抗TF抗體及同型對照治療對左心室射出分率及左心室舒張末期容積之作用的圖。 圖 11 及圖 12包括展示在心肌梗塞模型中在使用抗TF治療情況下炎性細胞募集減少之圖。誤差棒展示標準誤差。 圖 13包括展示用於身體狀況評分之定性系統的示意圖。(參見實例)。 圖 14包括展示在DSS結腸炎模型研究中在接受經指示之治療的小鼠中之體重百分比之圖。 圖 15包括展示在DSS結腸炎模型研究中接受經指示之治療的小鼠之疾病活動得分之圖。 圖 16包括展示在DSS結腸炎模型研究中在接受經指示之治療的小鼠中在研究過程中之身體狀況得分之圖。 圖 17包括展示在DSS結腸炎模型研究中在已接受經指示之治療後在研究結束時小鼠之平均體重的圖。 圖 18包括展示DSS誘導之結腸炎模型之研究時間表的示意圖。 圖 19包括展示在接受經指示之治療的DSS小鼠中之體重變化百分比的圖。 圖 20包括展示在DSS模型中經指示之治療對疾病活動指數(DAI)得分之作用的圖。 圖 21包括展示在DSS模型中經指示之治療對結腸密度(亦即結腸重量/結腸長度)之作用的圖。 圖 22包括展示在DSS模型中經指示之治療對脾重量之作用的圖。 圖 23包括展示在ALI模型研究中在接受經指示之治療的小鼠中體重相對於基線水準之體重變化百分比的圖。 圖 24A包括展示在ALI模型研究中在已接受經指示之治療後在研究結束時小鼠支氣管肺泡灌洗術(BAL)流體樣品中之總白血球、總巨噬細胞及總淋巴球計數的圖。 圖 24B包括展示在ALI模型研究中在已接受經指示之治療後在研究結束時小鼠支氣管肺泡灌洗術(BAL)流體樣品中之總嗜中性球及總嗜酸性球計數的圖。 圖 25包括展示在ALI模型研究中在接受經指示之治療的小鼠中比較間質及肺泡及小支氣管中之嗜中性球浸潤以及單核細胞向血管周及小支氣管周組織中之浸潤之組織病理學定性評分結果的圖。 圖 26A 及圖 26B包括展示在ALI模型研究中已接受經指示之治療的小鼠之BAL流體中量測之平均炎性細胞介素及趨化介素濃度(± SEM)的圖。 圖 27包括展示在示例性LPS誘導之敗血症存活模型中之存活百分比的圖。 圖 28A 及 圖 28B包括展示在DSS結腸炎模型研究中接受經指示之(預防性及治療性)治療之小鼠中體重變化的圖。 圖 29A 及 圖 29B包括展示在DSS結腸炎模型研究中接受經指示之(預防性及治療性)治療之小鼠中疾病活動得分的圖。 圖 30A 、圖 30B 及 圖 30C分別包括展示在DSS結腸炎模型研究中接受經指示之(預防性及治療性)治療之小鼠中結腸密度、結腸長度及結腸重量之變化的圖。 圖 31包括展示在DSS結腸炎模型研究中接受經指示之(預防性及治療性)治療之小鼠中之組織病理學得分的圖。
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Claims (176)

  1. 一種治療有需要之個體之炎性疾病的方法，其包含向該個體投與經分離抗體，其中該抗體結合至人類組織因子(TF)之細胞外域，其中該抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF。
  2. 一種預防個體之炎性疾病的方法，其包含向該個體投與經分離抗體，其中該抗體結合至人類組織因子(TF)之細胞外域，其中該抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF，其中該炎性疾病為結腸炎。
  3. 如請求項1之方法，其中該炎性疾病為嚴重急性呼吸症候群冠狀病毒2 (SARS-CoV-2)。
  4. 如請求項1之方法，其中該炎性疾病為肺炎。
  5. 如請求項1之方法，其中該炎性疾病為1型糖尿病。
  6. 如請求項1之方法，其中該炎性疾病為免疫介導皮膚病或免疫介導結締組織病。
  7. 如請求項1之方法，其中該炎性疾病為多發性硬化症(MS)。
  8. 如請求項1之方法，其中該炎性疾病為自體免疫性肝炎。
  9. 如請求項1之方法，其中該炎性疾病為休格倫氏症候群(Sjogren's syndrome)。
  10. 如請求項1之方法，其中該炎性疾病為自體免疫性甲狀腺病。
  11. 如請求項1之方法，其中該炎性疾病為進行性全身性硬化症。
  12. 如請求項1之方法，其中該炎性疾病為肺纖維化。
  13. 如請求項1之方法，其中該炎性疾病為白斑病。
  14. 如請求項1之方法，其中該炎性疾病為重症肌無力。
  15. 如請求項1之方法，其中該炎性疾病為動脈粥樣硬化。
  16. 如請求項1之方法，其中該炎性疾病為鬱血性心臟衰竭、腦血管疾病或缺血性心臟疾病。
  17. 如請求項1之方法，其中該炎性疾病選自：關節炎、炎性腸病(IBD)、狼瘡、急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)、散播性血管內凝血病變(DIC)、血管炎病、病毒感染及敗血症。
  18. 如請求項17之方法，其中該炎性疾病為狼瘡。
  19. 如請求項18之方法，其中該炎性疾病為抗磷脂質症候群。
  20. 如請求項17之方法，其中該炎性疾病為炎性腸病(IBD)。
  21. 如請求項20之方法，其中該IBD為克隆氏病(Crohn's disease)。
  22. 如請求項20之方法，其中該IBD為結腸炎。
  23. 如請求項17之方法，其中該炎性疾病為血管炎病。
  24. 如請求項23之方法，其中該炎性疾病為血管炎。
  25. 如請求項17之方法，其中該炎性疾病為急性肺損傷。
  26. 如請求項17之方法，其中該炎性疾病為急性呼吸窘迫症候群(ARDS)。
  27. 如請求項17之方法，其中該炎性疾病為散播性血管內凝血病變(DIC)。
  28. 如請求項17之方法，其中該炎性疾病為病毒感染。
  29. 如請求項17之方法，其中該炎性疾病為關節炎。
  30. 如請求項29之方法，其中該炎性疾病為類風濕性關節炎或幼年型類風濕性關節炎。
  31. 如請求項17之方法，其中該炎性疾病為敗血症。
  32. 如請求項1之方法，其中該炎性疾病為心血管疾病或損傷。
  33. 如請求項32之方法，其中該心血管疾病或損傷為心肌梗塞。
  34. 如請求項1之方法，其中該炎性疾病為與蛋白酶活化受體2 (PAR-2)之上調相關之心血管疾病。
  35. 如請求項1至34中任一項之方法，其中該個體具有血栓形成。
  36. 一種治療有需要之個體之血栓形成的方法，其包含向該個體投與經分離抗體，其中該抗體結合至人類組織因子(TF)之細胞外域，其中該抗體在與由人類FVIIa結合之人類TF結合位點不同的人類TF結合位點處結合人類TF。
  37. 如請求項1至36中任一項之方法，其中該抗體不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成。
  38. 如請求項1至37中任一項之方法，其中與包含V H序列SEQ ID NO:821及V L序列SEQ ID NO:822之參考抗體相比，如由凝血酶生成檢定(TGA)確定，該經分離之人類抗體不抑制人類凝血酶生成或抑制人類凝血酶生成之程度較小。
  39. 如請求項38之方法，其中如藉由在活細胞染色檢定中該經分離抗體相對於同型對照之中值螢光強度值所確定的，該經分離抗體與包含SEQ ID NO:810中所示序列之胺基酸殘基149處之突變的變異體TF細胞外域之間的結合小於該經分離抗體與SEQ ID NO:810中所示序列之TF之該細胞外域之間的結合之50%。
  40. 如請求項1至39中任一項之方法，其中該抗體包含來自表35之抗體組之所有三個重鏈互補決定區(CDR)及所有三個輕鏈CDR，其中該所有三個重鏈CDR及該所有三個輕鏈CDR均來自相同抗體組。
  41. 如請求項1至39中任一項之方法，其中該抗體包含來自表15-34中任一者之抗體之所有三個重鏈互補決定區(CDR)及所有三個輕鏈CDR，其中該所有三個重鏈CDR及該所有三個輕鏈CDR均來自相同抗體。
  42. 如請求項41之方法，該抗體包含來自以下之所有三個重鏈CDR及所有三個輕鏈CDR：命名為25A之抗體、命名為25A5之抗體、命名為25A5-T之抗體、命名為25G之抗體、命名為25G1之抗體、命名為25G9之抗體、命名為43B之抗體、命名為43B1之抗體、命名為43B7之抗體、命名為43D之抗體、命名為43D7之抗體、命名為43D8之抗體、命名為43E之抗體或命名為43Ea之抗體。
  43. 如請求項42之方法，該抗體包含來自以下之所有三個重鏈CDR及所有三個輕鏈CDR：命名為43B之抗體、命名為43B1之抗體、命名為43B7之抗體、命名為43D之抗體、命名為43D7之抗體、命名為43D8之抗體、命名為43E之抗體或命名為43Ea之抗體。
  44. 如請求項42之方法，該抗體包含來自以下之所有三個重鏈CDR及所有三個輕鏈CDR：命名為25A之抗體、命名為25A5之抗體、命名為25A5-T之抗體、命名為25G之抗體、命名為25G1之抗體或命名為25G9之抗體。
  45. 如請求項1至39中任一項之方法，其中該抗體包含來自表14之VH域序列及VL域序列，其中該VH域序列及該VL域序列來自表14之相同組。
  46. 如請求項1至39中任一項之方法，其中該抗體包含來自表13之VH域序列及VL域序列，其中該VH域序列及該VL域序列來自表13之相同純系。
  47. 如請求項1或37之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:797中列出之序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:798中列出之序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:799中列出之序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:800中列出之序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:801中列出之序列的VL-CDR2；及包含SEQ ID NO:802中列出之序列的VL-CDR3。
  48. 如請求項47之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:571中列出之序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:572中列出之序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:573中列出之序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:574中列出之序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:575中列出之序列的VL-CDR2；及包含SEQ ID NO:576中列出之序列的VL-CDR3。
  49. 如請求項47之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:609中列出之序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:610中列出之序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:611中列出之序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:612中列出之序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:613中列出之序列的VL-CDR2；及包含SEQ ID NO:614中列出之序列的VL-CDR3。
  50. 如請求項1至37及請求項47中任一項之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:769中列出之序列的VH序列及包含SEQ ID NO:770中列出之序列的VL序列。
  51. 如請求項50之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:569中列出之序列的VH序列及包含SEQ ID NO:570中列出之序列的VL序列。
  52. 如請求項50之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:607中列出之序列的VH序列及包含SEQ ID NO:608中列出之序列的VL序列。
  53. 如請求項48或52之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:924中列出之序列的重鏈及包含SEQ ID NO:925中列出之序列的輕鏈。
  54. 如請求項50之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:645中列出之序列的VH序列及包含SEQ ID NO:646中列出之序列的VL序列。
  55. 如請求項49或54之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:926中列出之序列的重鏈及包含SEQ ID NO:927中列出之序列的輕鏈。
  56. 如請求項1至39中任一項之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:779中列出之序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:780中列出之序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:781中列出之序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:782中列出之序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:783中列出之序列的VL-CDR2；及包含SEQ ID NO:784中列出之序列的VL-CDR3。
  57. 如請求項1至40中任一項之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:872中列出之序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:873中列出之序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:874中列出之序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:875中列出之序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:876中列出之序列的VL-CDR2；及包含SEQ ID NO:877中列出之序列的VL-CDR3。
  58. 如請求項57之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:884中列出之序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:885中列出之序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:886中列出之序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:887中列出之序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:888中列出之序列的VL-CDR2；及包含SEQ ID NO:889中列出之序列的VL-CDR3。
  59. 如請求項1至40及57中任一項之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:868中列出之序列的VH序列及包含SEQ ID NO:869中列出之序列的VL序列。
  60. 如請求項59之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:189中列出之序列的VH序列及包含SEQ ID NO:190中列出之序列的VL序列。
  61. 如請求項59之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:836中列出之序列的VH序列及包含SEQ ID NO:837中列出之序列的VL序列。
  62. 如請求項58或61之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:920中列出之序列的重鏈及包含SEQ ID NO:921中列出之序列的輕鏈。
  63. 如請求項1至40中任一項之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:878中列出之序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:879中列出之序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:880中列出之序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:881中列出之序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:882中列出之序列的VL-CDR2；及包含SEQ ID NO:883中列出之序列的VL-CDR3。
  64. 如請求項63之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:267中列出之序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:268中列出之序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:269中列出之序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:270中列出之序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:271中列出之序列的VL-CDR2；及包含SEQ ID NO:272中列出之序列的VL-CDR3。
  65. 如請求項1至40及63中任一項之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:870中列出之序列的VH序列及包含SEQ ID NO:871中列出之序列的VL序列。
  66. 如請求項65之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:303中列出之序列的VH序列及包含SEQ ID NO:304中列出之序列的VL序列。
  67. 如請求項64或66之方法，其中該抗體包含：包含SEQ ID NO:922中列出之序列的重鏈及包含SEQ ID NO:923中列出之序列的輕鏈。
  68. 如前述請求項中任一項之方法，其中該抗體與命名為25A之抗體、命名為25A5之抗體、命名為25A5-T之抗體、命名為25G之抗體、命名為25G1之抗體、命名為25G9之抗體、命名為43B之抗體、命名為43B1之抗體、命名為43B7之抗體、命名為43D之抗體、命名為43D7之抗體、命名為43D8之抗體、命名為43E之抗體或命名為43Ea之抗體競爭結合人類TF。
  69. 如請求項68之方法，其中該抗體與命名為43B之抗體、命名為43B1之抗體、命名為43B7之抗體、命名為43D之抗體、命名為43D7之抗體、命名為43D8之抗體、命名為43E之抗體或命名為43Ea之抗體競爭結合人類TF。
  70. 如請求項68之方法，其中該抗體與命名為25A之抗體、命名為25A5之抗體、命名為25A5-T之抗體、命名為25G之抗體、命名為25G1之抗體或命名為25G9之抗體競爭結合人類TF。
  71. 如前述請求項中任一項之方法，其中該抗體結合之人類TF表位與由命名為25A之抗體、命名為25A5之抗體、命名為25A5-T之抗體、命名為25G之抗體、命名為25G1之抗體、命名為25G9之抗體、命名為43B之抗體、命名為43B1之抗體、命名為43B7之抗體、命名為43D之抗體、命名為43D7之抗體、命名為43D8之抗體、命名為43E之抗體或命名為43Ea之抗體結合之人類TF表位相同。
  72. 如請求項71之方法，其中該抗體結合之人類TF表位與由命名為43B之抗體、命名為43B1之抗體、命名為43B7之抗體、命名為43D之抗體、命名為43D7之抗體、命名為43D8之抗體、命名為43E之抗體或命名為43Ea之抗體結合之人類TF表位相同。
  73. 如請求項71之方法，其中該抗體結合之人類TF表位與由命名為25A之抗體、命名為25A5之抗體、命名為25A5-T之抗體、命名為25G之抗體、命名為25G1之抗體或命名為25G9之抗體結合之人類TF表位相同。
  74. 如前述請求項中任一項之方法，其中該抗體不抑制由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；與同型對照相比，不降低凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值(峰值IIa)；與同型對照相比，不增加自檢定開始到凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值之時間(tt峰值)；與同型對照相比，不降低由凝血酶生成曲線下面積確定之內源性凝血酶潛能(ETP)；允許由凝血酶生成檢定(TGA)確定之人類凝血酶生成；與同型對照相比，保持凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值(峰值IIa)；與同型對照相比，保持自檢定開始到凝血酶生成曲線上之凝血酶峰值之時間(tt峰值)；與同型對照相比，保留由凝血酶生成曲線下面積確定之內源性凝血酶潛能(ETP)；在與由人類FX結合之人類TF結合位點不同之人類TF結合位點處結合人類TF；不干擾TF:FVIIa將FX轉化為FXa之能力；且不與FVIIa競爭結合到人類TF。
  75. 如前述請求項中任一項之方法，其中該三個重鏈CDR及該三個輕鏈CDR使用示範性、Kabat、Chothia、AbM、Contact或IMGT編號確定。
  76. 如前述請求項中任一項之方法，其中該抗體特異性結合到食蟹猴TF。
  77. 如前述請求項中任一項之方法，其中該抗體特異性結合到小鼠TF。
  78. 如前述請求項中任一項之方法，其中該抗體特異性結合到兔TF。
  79. 如前述請求項中任一項之方法，其中該抗體特異性結合到豬TF。
  80. 如前述請求項中任一項之方法，其中該疾病涉及血管炎症。
  81. 如前述請求項中任一項之方法，其中該疾病涉及局部炎症。
  82. 如前述請求項中任一項之方法，其中該疾病涉及全身炎症。
  83. 如前述請求項中任一項之方法，其中該疾病涉及單核細胞及/或顆粒球之浸潤。
  84. 如請求項83之方法，其中該等單核細胞包含巨噬細胞及/或淋巴球。
  85. 如請求項83或84之方法，其中該等顆粒球包含嗜中性球及/或嗜酸性球。
  86. 如前述請求項中任一項之方法，其進一步包含獲得與來自該個體之樣品相關聯的資料集並針對一或多種生物標記評估該資料集，視情況地其中該資料集係藉由自該個體收集該樣品並處理該樣品以獲得該資料集而獲得的，或者視情況地其中該資料集係自處理該樣品之第3方獲得的。
  87. 如請求項86之方法，其中該一或多種生物標記包含TF，視情況地其中該TF之表現水準大於基線處之該TF之表現水準。
  88. 如請求項1及35至87中任一項之方法，其中該炎性疾病選自由以下組成之群：炎性腸病(IBD)、結腸炎、克隆氏病、狼瘡、血管炎病、關節炎、抗磷脂質症候群、急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)、散播性血管內凝血病變(DIC)、病毒感染、敗血症、心肌梗塞及嚴重急性呼吸症候群冠狀病毒2 (SARS-CoV-2)。
  89. 如前述請求項中任一項之方法，其中在向個體投與後，該抗體減少總白血球計數。
  90. 如請求項89之方法，其中該總白血球計數藉由光學顯微鏡法確定。
  91. 如前述請求項中任一項之方法，其中在向個體投與後，該抗體減少顆粒球總數。
  92. 如請求項91之方法，其中該等顆粒球包含嗜中性球。
  93. 如請求項91或92之方法，其中該等顆粒球包含嗜酸性球。
  94. 如請求項91至93中任一項之方法，其中該顆粒球總數藉由免疫組織化學(IHC)分析或支氣管肺泡灌洗術(BAL)流體差示細胞計數來確定。
  95. 如請求項91至94中任一項之方法，其中該等顆粒球係在肺泡中。
  96. 如請求項91至94中任一項之方法，其中該等顆粒球係在間質液中。
  97. 如前述請求項中任一項之方法，其中在向個體投與後，該抗體減少單核細胞總數。
  98. 如請求項97之方法，其中該等單核細胞包含巨噬細胞。
  99. 如請求項97或98之方法，其中該等巨噬細胞包含M1巨噬細胞。
  100. 如請求項97至99中任一項之方法，其中該等單核細胞包含淋巴球。
  101. 如請求項97至100中任一項之方法，其中該等單核細胞包含單核球。
  102. 如請求項97至100中任一項之方法，其中該單核細胞總數藉由免疫組織化學(IHC)分析或支氣管肺泡灌洗術(BAL)流體差示細胞計數來確定。
  103. 如請求項97至102中任一項之方法，其中該等單核細胞係在肺泡中。
  104. 如請求項97至102中任一項之方法，其中該等單核細胞係在間質液中。
  105. 如前述請求項中任一項之方法，其中在向個體投與後，相對於基線水準，該個體保持或增加體重。
  106. 如前述請求項中任一項之方法，其中在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，該抗體保持或增加體重。
  107. 如前述請求項中任一項之方法，其中在向個體投與後，相對於基線水準，該抗體減小脾大小或逆轉脾腫大。
  108. 如前述請求項中任一項之方法，其中在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，該抗體減小脾大小或逆轉脾腫大。
  109. 如請求項107或108之方法，其中該脾大小或脾腫大使用觸診、叩診、超音波、電腦斷層(CT)掃描或磁共振成像(MRI)來確定。
  110. 如請求項1及37至109中任一項之方法，其中該炎性疾病為急性肺損傷。
  111. 如請求項1及37至109中任一項之方法，其中該炎性疾病為急性呼吸窘迫症候群(ARDS)。
  112. 如前述請求項中任一項之方法，其中在向個體投與後，相對於基線水準，該抗體增加淨肺泡液清除率。
  113. 如前述請求項中任一項之方法，其中在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，該抗體增加淨肺泡液清除率。
  114. 如請求項112或113之方法，其中淨肺泡液清除率藉由量測連續水腫液蛋白濃度來確定。
  115. 如請求項114之方法，其中該等連續水腫液蛋白濃度使用ELISA來量測。
  116. 如請求項1及37至109中任一項之方法，其中該炎性疾病為SARS-Cov-2。
  117. 如請求項116之方法，其中在向個體投與後，相對於基線水準，該個體保持或增加體重。
  118. 如請求項116或117之方法，其中在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，該抗體保持或增加體重。
  119. 如前述請求項中任一項之方法，其中在向個體投與後，相對於基線水準，該抗體減小炎性細胞介素及趨化介素之濃度。
  120. 如前述請求項中任一項之方法，其中在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，該抗體減小炎性細胞介素及趨化介素之濃度。
  121. 如請求項119或120之方法，其中該等炎性細胞介素及趨化介素係在支氣管肺泡灌洗術(BAL)樣品中。
  122. 如請求項119至121中任一項之方法，其中該等炎性細胞介素及趨化介素係在肺均質物樣品中。
  123. 如請求項119至122中任一項之方法，其中該等炎性細胞介素及趨化介素包含以下中之一或多者：IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IFNγ、GM-CSF、TNFα、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL19、CCL20、CCL25、CXCL1、CXCL2及CXCL10。
  124. 如請求項119至122中任一項之方法，其中該等炎性細胞介素及趨化介素包含以下中之一或多者：IFNγ、IL-1β、IL-6、IL27p28/IL30、IL-10、KC/GRO、IP-10、MP-1a、MCP-1及MP-2。
  125. 如請求項119至122中任一項之方法，其中該等炎性細胞介素及趨化介素包含IL-1β。
  126. 如請求項119至122中任一項之方法，其中該等炎性細胞介素及趨化介素包含IL-6β。
  127. 如請求項119至122中任一項之方法，其中該等炎性細胞介素及趨化介素包含IFNγ。
  128. 如請求項119至122中任一項之方法，其中該等炎性細胞介素及趨化介素包含MP-2。
  129. 如請求項119至122中任一項之方法，其中該等炎性細胞介素及趨化介素包含KC/GRO。
  130. 如請求項119至122中任一項之方法，其中該等炎性細胞介素及趨化介素包含以下中之一或多者：GMCSF、VEGF、IL17F、IL-1β、IL-6、IFNγ、IL-8及KC。
  131. 如請求項119至130中任一項之方法，其中該等炎性細胞介素及趨化介素使用ELISA量測。
  132. 如請求項119至130中任一項之方法，其中該等炎性細胞介素及趨化介素使用Luminex Multiplex檢定量測。
  133. 如請求項119至132中任一項之方法，其中在向個體投與後，相對於基線水準，該抗體減小D-二聚體濃度。
  134. 如請求項1及37至109中任一項之方法，其中該炎性疾病為結腸炎。
  135. 如請求項1及37至109中任一項之方法，其中該炎性疾病為炎性腸病。
  136. 如請求項2、134或135中任一項之方法，其中在向個體投與後，相對於基線水準，該抗體導致糞便稠度正常或使該個體之糞便稠度硬化。
  137. 如請求項2、134至136中任一項之方法，其中在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，該抗體導致糞便稠度正常或使該個體之糞便稠度硬化。
  138. 如請求項2、136或137中任一項之方法，其中該糞便稠度使用布里斯托糞便量表(Bristol Stool Scale)確定。
  139. 如請求項2、134至138中任一項之方法，其中在向個體投與後，相對於基線水準，該抗體減少該個體之糞便中之血液或導致不存在血液。
  140. 如請求項2、134至139中任一項之方法，其中在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，該抗體減少該個體之糞便中之血液或導致不存在血液。
  141. 如請求項139或140之方法，其中該個體之糞便中之血液使用潛血試劑測試(hemoccult test)量測。
  142. 如請求項2及134至141中任一項之方法，其中在向個體投與後，相對於基線水準，該抗體減小炎性細胞介素及趨化介素之濃度。
  143. 如請求項2、134或142中任一項之方法，其中在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，該抗體減小炎性細胞介素及趨化介素之濃度。
  144. 如請求項142或143之方法，其中該等炎性細胞介素及趨化介素包含以下中之一或多者：IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IFNγ、GM-CSF、TNFα、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL19、CCL20、CCL25、CXCL1、CXCL2及CXCL10。
  145. 如請求項1及37至109中任一項之方法，其中該炎性疾病為病毒感染。
  146. 如請求項145之方法，其中在向個體投與後，相對於基線水準，該抗體增加抗炎性細胞介素及趨化介素。
  147. 如請求項145或146之方法，其中在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，該抗體增加抗炎性細胞介素及趨化介素。
  148. 如請求項145至147中任一項之方法，其中該等抗炎性細胞介素及趨化介素包含以下中之一或多者：IL-10及IL27p28。
  149. 如請求項145至148中任一項之方法，其中該等抗炎性細胞介素及趨化介素係在支氣管肺泡灌洗術(BAL)樣品中。
  150. 如請求項145至149中任一項之方法，其中該等炎性細胞介素及趨化介素使用多重電化學發光MSD檢定量測。
  151. 如請求項145至149中任一項之方法，其中該等炎性細胞介素及趨化介素使用Luminex Multiplex檢定量測。
  152. 如請求項145至151中任一項之方法，其中在向個體投與後，相對於基線水準，該抗體降低巨噬細胞趨化性。
  153. 如請求項1及37至109中任一項之方法，其中該炎性疾病為關節炎。
  154. 如請求項153之方法，其中在向個體投與後，相對於基線水準，該抗體減小炎性細胞介素及趨化介素之濃度。
  155. 如請求項153或154之方法，其中在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，該抗體減小炎性細胞介素及趨化介素之濃度。
  156. 如請求項154或155之方法，其中該等炎性細胞介素及趨化介素包含以下中之一或多者：IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IFNγ、GM-CSF、TNFα、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL19、CCL20、CCL25、CXCL1、CXCL2及CXCL10。
  157. 如請求項1至109及117至132中任一項之方法，其中該個體具有血栓形成。
  158. 如請求項157之方法，其中在向個體投與後，該抗體減小血栓大小至基線水準。
  159. 如請求項158之方法，其中血栓大小使用超音波成像來量測。
  160. 如請求項158之方法，其中血栓大小使用高速螢光視訊顯微鏡法來量測。
  161. 如請求項1及37至109中任一項之方法，其中該炎性疾病為心肌梗塞。
  162. 如請求項161之方法，其中在向個體投與後，相對於基線水準，該抗體減小梗塞大小。
  163. 如請求項161或162之方法，其中在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，該抗體減小梗塞大小。
  164. 如請求項161至163之方法，其中在向個體投與後，相對於基線水準，該抗體增加左心室射出分率。
  165. 如請求項161至164之方法，其中在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，該抗體增加左心室射出分率。
  166. 如請求項161至165之方法，其中在向個體投與後，相對於基線水準，該抗體降低左心室舒張末期容積。
  167. 如請求項161至166之方法，其中在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，該抗體降低左心室舒張末期容積。
  168. 如請求項161至167之方法，其中在向個體投與後，相對於基線水準，該抗體降低梗塞心肌中之炎性細胞募集。
  169. 如請求項161至168之方法，其中在向個體投與後，相對於不同抗炎治療劑，該抗體降低梗塞心肌中之炎性細胞募集。
  170. 如請求項168或169之方法，其中該等炎性細胞選自CD45+、CD11b +、Ly6C hi、CD45 +/CD90.2 -/NK1.1 -/CD11b +、CD45 +/CD90.2 -/NK1.1 -/CD11b +/Ly6C hi及CD45 +/CD90.2 -/NK1.1 -/CD11b +/Ly6C lo。
  171. 如請求項168至170中任一項之方法，其中該炎性細胞募集使用流動式細胞測量術來量測。
  172. 如前述請求項中任一項之方法，其中在向個體投與後，該抗體導致對全身性類固醇之需要減少。
  173. 如前述請求項中任一項之方法，其中該不同抗炎治療劑包含以下中之一或多者：非類固醇抗炎藥(NSAID)、類固醇抗炎藥、β促效劑、抗膽鹼能藥、抗組胺藥及甲基黃嘌呤。
  174. 如前述請求項中任一項之方法，其中該不同抗炎治療劑包含以下中之任一者：IL-6抑制劑、抗GM-CSF、抗TNFa、抗IL-1a、地塞米松(dexamethasone)、趨化介素及趨化介素受體拮抗劑、及JAK抑制劑。
  175. 如前述請求項中任一項之方法，其中該抗體每兩週投與。
  176. 如前述請求項中任一項之方法，其中該抗體每週投與。
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