TW202328196A

TW202328196A - 使用vista抗原結合分子的癌症之治療及預防

Info

Publication number: TW202328196A
Application number: TW111135206A
Authority: TW
Inventors: 科庫普傑洛米波尹德; 思宇關; 皮爾斯英葛蘭; 寇拉德帕茲奇維斯; 艾瑞克羅文斯基; 迪普蒂薩卡; 布哈山達爾馬迪卡里
Original assignee: 新加坡商蜂鳥生物科技私人有限公司
Priority date: 2021-09-16
Filing date: 2022-09-16
Publication date: 2023-07-16
Also published as: JP2024535053A; KR20240058149A; EP4401772A1; WO2023041745A1; CN119384293A

Abstract

本揭露內容提供用於治療或預防癌症之對VISTA結合的抗原結合分子、包含所述分子的組成物、以及使用所述分子之治療及預防方法。

Description

使用VISTA抗原結合分子的癌症之治療及預防

此申請案主張2021年9月16日申請之US 63/244,986的優先權，其內容及要素出於所有目的藉由參照併入本文。

本發明係關於分子生物學之領域，更具體言之，關於抗體技術。本發明亦有關於醫學治療及預防的方法。

骨髓衍生的壓制型細胞(MDSC)-媒介的免疫反應壓制已於多種實性腫瘤及淋巴瘤識別。MDSC於晚期結腸直腸癌是升高的(Toor et al, Front Immunol. 2016; 7:560)。於乳癌亦觀察到MDSC，且晚期乳癌患者之周邊血液的MDSC百分比是增高的(Markowitz et al, Breast Cancer Res Treat. 2013 Jul; 140(1):13-21)。MDSC之豐度亦與實性腫瘤預後不良有互相關聯性(Charoentong et al, Cell Rep. 2017 Jan 3; 18(1):248-262)。

MDSC係透過多種機制來發揮對於T細胞的壓制，包括生產反應性氧物種、一氧化氮及精胺酸酶。此等最終導致壓制DC、NK及T細胞活性且增高腫瘤負荷(Umansky et al., Vaccines (Basel) (2016) 4(4):36)。MDSC亦透過生產可溶性因子而有助於腫瘤發展及轉移，諸如促進血管新生、侵襲、增殖及轉移的基質金屬蛋白酶、VEGF、bFGF、TGF-β及S100A8/A9。

靶向含V型免疫球蛋白域的T細胞活化壓制子(VISTA)，其係主要表現於MDSC之一免疫查核點分子，是一誘人的治療策略，用以消除MDSC-媒介的對作用免疫細胞功能之壓制。

WO 2017/137830 A1揭露抗-VISTA抗體VSTB174，其於例如段落[00221]揭露為包含抗-VISTA抗體VSTB112的變異區。段落[00362]揭露VSTB123包含VSTB174的變異區。WO 2017/137830 A1於段落[0417]及圖42A之實施例25揭露mIgG2a抗體VSTB123能抑制MB49腫瘤模型之腫瘤生長。段落[0418]及圖42A揭露VSTB124相反地──其為以IgG2a LALA型式提供的相同抗體；參見段落[0408]──不會抑制腫瘤生長。根據此等結果實施例25於段落[0419]做出用抗-VISTA抗體治療之功效可能需要活性Fc的結論。據此，於圖47(參見段落[0053]對圖47之圖註)示意代表之提議的抗-VISTA抗體作用機制涉及了NK細胞表現的FcγRIII之Fc-媒介的接合作用。

Le Mercier et al. Cancer Res. (2014) 74(7):1933-44中揭露的倉鼠單株抗-VISTA抗體mAb13F3會抑制B16OVA及B16-BL6黑色素瘤模型之腫瘤生長。第1942頁，跨左及右欄的段落教示了VISTA mAb之免疫原性及FcR結合活性可能是達成最適的目標中和及治療功效的關鍵限制因子。

於第一個樣態中，本發明提供一抗原結合分子，其任擇地經單離，其能夠對VISTA結合且抑制VISTA-媒介之訊息傳導，獨立於Fc-媒介之功能。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：290的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：291的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：278的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：309的胺基酸序列之LC-CDR2

具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：290的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：291的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：278的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：295的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含：一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：289的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：310的胺基酸序列有至少70%的序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含：一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：289的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：297的胺基酸序列有至少70%的序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含：併含有下列框架區(FR)之一VH區：具有SEQ ID NO：63的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：292的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：293的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：281的胺基酸序列之HC-FR4。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含：併含有下列框架區(FR)之一VL區：具有SEQ ID NO：288的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：298的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：284的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之LC-FR4。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：331的胺基酸序列。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：317的胺基酸序列。

在另一態樣中，本發明提供包含根據本揭露內容之一抗原結合分子的一組成物。

在一些實施態樣中，該組成物包含： (i) 2 mM至200 mM組胺酸、2%至20% (w/v)蔗糖、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 4.0至7.0；或 (ii) 2 mM至200 mM組胺酸、2%至20% (w/v)蔗糖、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 4.0至7.0；或 (iii) 2 mM至200 mM組胺酸、1 mM至250 mM氯化鈉，及具有一pH 4.0至7.0，任擇地包含0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-20或聚山梨醇酯-80；或 (iv) 2 mM至200 mM組胺酸、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-20或聚山梨醇酯-80，及具有一pH 4.0至7.0；或 (v) 2 mM至200 mM乙酸鹽、2%至20% (w/v)蔗糖、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 4.0至7.0；或 (vi) 2 mM至200 mM乙酸鹽、2%至20% (w/v)蔗糖、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 4.0至7.0；或 (vii) 2 mM至200 mM琥珀酸鹽、2%至20% (w/v)蔗糖、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 4.0至7.0；或 (viii) 2 mM至200 mM琥珀酸鹽、2%至20% (w/v)蔗糖、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 4.0至7.0。

在一些實施態樣中，該組成物包含： (i) 20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.5；或 (ii) 20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.8；或 (iii) 20 mM組胺酸、4% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.8；或 (iv) 20 mM組胺酸、2% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.8；或 (v) 20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 6.3；或 (vi) 20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 5.8；或 (vii) 20 mM乙酸鹽、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.5；或 (viii) 20 mM琥珀酸鹽、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.5；或 (ix) 20 mM組胺酸、0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.8；或 (x) 20 mM組胺酸、150 mM氯化鈉，及具有一pH 5.8。

在一些實施態樣中，該組成物包含20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02%(w/v)聚山梨醇酯-80，及具有pH 5.5。

在一些實施態樣中，該組成物包含約50 mg/mL (例如，50 mg/m)的抗原結合分子。

在一些樣態中，根據本揭露內容之一抗原結合分子或組成物係被提供來使用作為一藥劑。

在一些樣態中，根據本揭露內容之一抗原結合分子或組成物係被提供來用於治療或預防主體中之癌症的方法中。

在一些樣態中，所提供者為本揭露內容之一抗原結合分子或組成物於製造藥劑之用途，該藥劑係用於治療或預防一主體中之癌症。

在一些樣態中，所提供者為治療或預防一主體中之癌症的方法，該方法包含投與治療或預防有效量之本揭露內容之該抗原結合分子或組成物。

在一些實施態樣中，癌症之特徵在於表現VISTA之細胞之存在及/或在於由包含VISTA之複合物所媒介之訊息傳導。

在一些實施態樣中，癌症係選自：一血液學上之癌症、白血病(例如，T細胞白血病)、急性骨髓白血病、淋巴瘤、B細胞淋巴瘤、T細胞淋巴瘤、多發性骨髓瘤、間皮瘤、一實性腫瘤、肺癌、非小細胞肺癌瘤(NSCLC)、胃癌、胃癌瘤、結腸直腸癌、結腸直腸癌瘤、結腸直腸腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌瘤、乳癌、三重陰性乳癌(TBNC)、三重陰性乳侵襲性癌瘤、侵襲性管癌瘤、肝臟癌、肝細胞癌瘤、胰臟癌、胰臟管腺癌、甲狀腺癌、胸腺瘤、皮膚癌、黑色素瘤、皮膚黑色素瘤、腎癌、腎臟細胞癌瘤、腎臟乳突細胞癌瘤、頭頸部癌、頭頸部鱗狀細胞癌瘤(SCCHN)、卵巢癌、卵巢癌瘤、卵巢漿液性囊腺癌、膀胱癌、前列腺癌及/或前列腺腺癌。在一些實施態樣中，該癌症係三重陰性乳癌(TBNC)、非小細胞肺癌瘤(NSCLC)及/或一實性腫瘤。

在一些實施態樣中，癌症之治療或預防額外包含投與能夠抑制由VISTA以外的免疫查核點分子所媒介的訊息傳導之製劑，例如其中該VISTA以外的免疫查核點分子係PD-1及/或PD-L1。該製劑可係抗-PD-1或抗-PD-L1抗體。

在一些實施態樣中，治療或預防或其方法包含偵測表現VISTA之細胞之存在及/或由包含VISTA之複合物所媒介之訊息傳導的步驟。在一些實施態樣中，當偵測到表現VISTA之細胞之存在及/或由包含VISTA之複合物所媒介之訊息傳導時，該主體被選擇來用抗原結合分子或組成物治療。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係每週投與，例如以本揭露內容之組成物。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係在一21天投與循環內投與一、二或三次，任擇地其中該治療包含高達35個投與循環。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係在一21天投與循環內於第1、8及/或15天投與，任擇地其中該治療包含高達35個投與循環。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係在一28天投與循環內於第1、8、15及/或22天投與，任擇地其中該治療包含高達35個投與循環。

在一些實施態樣中，治療或預防或其方法包含每投與投與3.5 mg至2200 mg抗原結合分子。

在一些實施態樣中，治療或預防或其方法包含每投與投與(高達或至少)3.5 mg、7 mg、10.5 mg、17.5 mg、20 mg、21 mg、40 mg、60 mg、72 mg、120 mg、180 mg、240 mg、360 mg、400 mg、800 mg、1200 mg、1600 mg、1900 mg或2200 mg的抗原結合分子(例如，在根據本揭露內容之組成物中)，例如根據本揭露內容之投與時程。

在一些實施態樣中，治療或預防或其方法包含每個21天的投與循環投與高達10.5 mg、高達21 mg、高達31.5 mg、高達52.5 mg、高達60 mg、高達63 mg、高達120 mg、高達180 mg、高達216 mg、高達360 mg、高達540 mg、高達720 mg、高達1080 mg、高達1200 mg、高達2400 mg、高達3600 mg、高達4800 mg、高達5700 mg或高達6600 mg的抗原結合分子(例如，在根據本揭露內容之組成物中)。說明

本發明係有關於新穎的VISTA-結合分子，其與已知的抗-VISTA抗體相比具有新穎及/或改良的性質。

發明人生產對VISTA的細胞外區中之特定屬意區結合之抗原結合分子。本發明之VISTA-結合分子與先前技藝揭露的VISTA-結合抗原結合分子相比，提供所期望的生物物理及功能性質組合。

特定而言，本文所述之VISTA-結合分子證實能夠透過一種不需要Fc-媒介的功能之機制來拮抗VISTA-媒介的訊息傳導。發明人證實本文所述之包含缺乏結合Fcγ受體及/或C1q能力之Fc的VISTA-結合分子能提供活體內治療性抗癌效應。

發明人首次確立透過不需要Fc-媒介的作用功能(例如，針對VISTA-表現細胞之ADCC/ADCP/CDC)之一機制來直接拮抗VISTA-媒介的訊息傳導是有可能的。

本揭露內容之VISTA-結合分子靶向一與已知經抗-VISTA抗體靶定之區不同的VISTA區。靶向特定的VISTA區之抗原結合分子能在不需要Fc-媒介的作用功能的情況下拮抗VISTA-媒介的訊息傳導。

本文所述之VISTA-結合分子因此對於在不需要耗乏VISTA表現細胞的情況下抑制VISTA-媒介的訊息傳導係有用的。這非常重要，因為VISTA被不期望耗乏的細胞所表現。本文揭露之VISTA-結合分子因而能抑制VISTA-媒介的訊息傳導同時最小化非所期望的副作用。

本文所述之VISTA-結合分子亦有利地顯示出能夠從釋放T細胞免於VISTA-媒介的壓制。具體而言，本文揭露之VISTA-結合分子於VISTA或VISTA-表現細胞存在下，顯示出能增高T細胞增殖以及從所培養的T細胞生產例如IFNγ與TNFa。 VISTA、結合伙伴及VISTA-媒介的訊息傳導

含V型免疫球蛋白域的T細胞活化壓制者(VISTA；亦已知為例如B7-H5、SISP1、PD-1H)係UniProt Q9H7M9所識別的蛋白質，具有SEQ ID NO：1中顯示的胺基酸序列(Q9H7M9-1, v3)。VISTA之結構及功能係於例如Lines et al., Cancer Res. (2014) 74(7): 1924-1932中所述，其在此藉由參照全文併入本文。VISTA為~50 kDa單程第I型跨膜，其作用為免疫查核點並且由C10orf54基因編碼。VISTA之細胞外域與PD-L1是同源的。

SEQ ID NO：1之N端32個胺基酸構成一訊息胜肽，所以VISTA的成熟形式(亦即，加工移除訊息胜肽之後)具有SEQ ID NO：2中顯示的胺基酸序列。SEQ ID NO：1之位置33至194形成細胞外域(SEQ ID NO：3)、位置195至215形成跨膜域(SEQ ID NO：4)，以及位置216至311形成細胞質域(SEQ ID NO：5)。細胞外域包含一Ig樣V型域(SEQ ID NO：1之位置33至168，顯示於SEQ ID NO：6)。

在本說明書中，「VISTA」係指來自任何物種之VISTA，且包括來自任何物種之VISTA同功異型體、片段、變異體(包括突變體)或同源物。

在本文中使用時，一蛋白質的「片段」、「變異體」或「同源物」可任擇地定特徵為與參考蛋白(例如，一參考同功異型體)的胺基酸序列有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。在一些實施態樣中，一參考蛋白之片段、變異體、同功異型體及同源物之特徵可在於能夠施行該參考蛋白所施行之一功能。

一「片段」通常係指參考蛋白的一區段部分(fraction)。一「變異體」通常係指一蛋白質其所具有之一胺基酸序列相對於參考蛋白的胺基酸序列包含一或多個胺基酸取代、插入、缺失或其他修飾，但保留與參考蛋白的胺基酸序列相當程度的序列同一性(例如，至少60%)。一「同功異型體」通常係指由與參考蛋白物種相同的物種所表現的該參考蛋白之一變異體。一「同源物」通常係指參考蛋白的一變異體，其係由與參考蛋白物種相比，不同的物種所生產者。同源物包括異種同源物。

一「片段」可為任何長度(按胺基酸的數目計)，雖然可任擇地為參考蛋白(亦即，衍生出該片段之蛋白質)之長度的至少20%且可具有參考蛋白之長度的50%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中之一者的最大長度。VISTA的片段可具有10、20、30、40、50、100、150、200、250或300個胺基酸中之一者的最小長度，且可具有20、30、40、50、100、150、200、250或300個胺基酸中之一者的最大長度。

在一些實施態樣中，VISTA為來自哺乳動物的VISTA (例如，靈長類動物(恆河猴(rhesus)、食蟹獼猴(cynomolgus)、非人類靈長類動物或人類)及/或嚙齒動物(例如，大鼠或鼠類)VISTA)。VISTA之同功異型體、片段、變異體或同源物可任擇地定特徵為與來自給定物種，例如人類的未成熟或成熟的VISTA同功異型體之胺基酸序列，有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

同功異型體、片段、變異體或同源物可任擇地為功能上之同功異型體、片段、變異體或同源物，例如由該功能性質/活性合適的檢定法予以分析判定時，具有參考VISTA的功能性質/活性。舉例而言，VISTA之同功異型體、片段、變異體或同源物可例如顯示與VSIG-3、LRIG1、VSIG8及/或PSGL-1締合。

在一些實施態樣中，VISTA包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：1或2有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。在一些實施態樣中，VISTA的片段包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：2、3或6中之一者有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

VISTA為B7蛋白質家族的成員，且主要表現於白血球，以及特別是CD14+單核球(包括單核球衍生的壓制型細胞(MDSC))及CD33+骨髓細胞。CD56+ NK細胞、樹突細胞亦表現VISTA，以及CD4+及CD8+ T細胞亦表現較小的程度。VISTA係高度表現於MDSC上，特別是腫瘤浸潤MDSC，並且亦於腫瘤浸潤骨髓DC上(Le Mercier et al, Cancer Res. (2014) 74(7):1933-44)，以及於腫瘤相關聯巨噬細胞(TAM)及嗜中性球上。

有證據證明VISTA能作用為T細胞上的配體及受體兩者以抑制T細胞作用功能且維持周邊耐受性；經工程改造以過度表現VISTA的腫瘤逃避免疫控制且比未過度表現VISTA的腫瘤生長得更快(Wang et al., Journal of Experimental Medicine. (2011) 208 (3): 577-92；Lines et al., Cancer Res. (2014) 74(7): 1924-1932)。 VISTA已被證明是CD4+ T細胞上的共抑制性受體或T細胞上的共抑制性配體。VISTA ^−/ ⁻CD4+ T細胞已被報導會顯示出比野生型CD4+ T細胞更強的抗原特異性增殖及細胞激素生產，暗示VISTA作用為CD4+ T細胞上的抑制性受體。利用單株抗-VISTA抗體阻斷VISTA功能已被顯示會增強腫瘤微環境內腫瘤反應性T細胞之浸潤、增殖及作用功能(Le Mercier et al, Cancer Res. (2014) 74(7):1933-4)。

已提議VISTA會與VSIG-3 (IGSF11)交互作用──參見例如Wang et al., J Immunol (2017), 198 (1 Supplement) 154.1，其在此藉由參照全文併入本文。在活化的T細胞上，VSIG-3透過接合VISTA而抑制T細胞增殖且降低細胞激素及趨化激素生產，諸如IFN-γ、IL-2、IL-17、CCL5/RANTES、CCL3/MIP-1a及CXCL11/I-TAC。

VSIG-3係UniProt Q5DX21所識別的蛋白質。人類IGSF11基因編碼的mRNA之選擇式剪接產出三種不同的同功異型體：同功異型體1(UniProt：Q5DX21-1，v3；SEQ ID NO：7)；同功異型體2(UniProt：Q5DX21-2；SEQ ID NO：8)，其包含位置1至17與SEQ ID NO：7不同的序列；及同功異型體3(UniProt：Q5DX21-3；SEQ ID NO：9)，其包含位置1至17與SEQ ID NO：7不同的序列，且其亦包含位置211-235與SEQ ID NO：7不同的序列。

SEQ ID NO：7、8及9之N端22個胺基酸構成一訊息胜肽，所以VSIG-3同功異型體1、2及3的成熟形式(亦即，加工移除訊息胜肽之後)分別具有SEQ ID NO：10、11及12中顯示的胺基酸序列。SEQ ID NO：7及8之位置23至241形成VSIG-3同功異型體1及2的細胞外域(SEQ ID NO：13)，且SEQ ID NO：9之位置23至216形成VSIG-3同功異型體3的細胞外域(SEQ ID NO：14)。VSIG-3的跨膜域係顯示於SEQ ID NO：15中，而細胞質域係顯示於SEQ ID NO：16中。細胞外域包含一Ig樣V型域(顯示於SEQ ID NO：17)，且VSIG-3同功異型體1及2的細胞外域額外包含一Ig樣C2型域(顯示於SEQ ID NO：18)。

在此說明書中，「VSIG-3」係指來自任何物種之VSIG-3，且包括來自任何物種之VSIG-3同功異型體、片段、變異體(包括突變體)或同源物。

VSIG-3的片段可具有10、20、30、40、50、100、150、200、250、300、350或400個胺基酸中之一者的最小長度，且可具有20、30、40、50、100、150、200、250、300、350或400個胺基酸中之一者的最大長度。

在一些實施態樣中，VSIG-3為來自一哺乳動物的VSIG-3 (例如，一靈長類動物(恆河猴(rhesus)、食蟹獼猴(cynomolgus)、非人類靈長類動物或人類)及/或一嚙齒動物(例如，大鼠或鼠類)VSIG-3)。VSIG-3之同功異型體、片段、變異體或同源物可任擇地定特徵為與來自一給定物種，例如人類之一未成熟或成熟的VSIG-3同功異型體的胺基酸序列，有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

同功異型體、片段、變異體或同源物可任擇地為功能上之同功異型體、片段、變異體或同源物，例如由該功能性質/活性合適的檢定法予以分析判定時，具有參考VSIG-3的功能性質/活性。舉例而言，VSIG-3之同功異型體、片段、變異體或同源物可例如顯示與VISTA締合。

在一些實施態樣中，VSIG-3包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：7至12中之一者有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。在一些實施態樣中，VSIG-3的片段包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：10至14、17或18中之一者有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

亦已提議VISTA會與VSIG-8交互作用──參見例如WO/2016/090347 A1。VSIG-8係UniProt P0DPA2 (SEQ ID NO：19)所識別的蛋白質。SEQ ID NO：19之N端21個胺基酸構成一訊息胜肽，所以VSIG-8的成熟形式(亦即，加工移除訊息胜肽之後)具有SEQ ID NO：20中顯示的胺基酸序列。SEQ ID NO：19之位置22至263形成VSIG-8的細胞外域(SEQ ID NO：21)。VSIG-8的跨膜域係顯示於SEQ ID NO：22中，而細胞質域係顯示於SEQ ID NO：23中。細胞外域包含一Ig樣V型域1(顯示於SEQ ID NO：24)及一Ig樣V樣域2(顯示於SEQ ID NO：25)。

在此說明書中，「VSIG-8」係指來自任何物種之VSIG-8，且包括來自任何物種之VSIG-8同功異型體、片段、變異體(包括突變體)或同源物。

VSIG-8的片段可具有10、20、30、40、50、100、150、200、250、300、350或400個胺基酸中之一者的最小長度，且可具有20、30、40、50、100、150、200、250、300、350或400個胺基酸中之一者的最大長度。

在一些實施態樣中，VSIG-8為來自一哺乳動物的VSIG-8 (例如，一靈長類動物(恆河猴(rhesus)、食蟹獼猴(cynomolgus)、非人類靈長類動物或人類)及/或一嚙齒動物(例如，大鼠或鼠類)VSIG-8)。VSIG-8之同功異型體、片段、變異體或同源物可任擇地定特徵為與來自一給定物種，例如人類之一未成熟或成熟的VSIG-8同功異型體的胺基酸序列，有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

同功異型體、片段、變異體或同源物可任擇地為功能上之同功異型體、片段、變異體或同源物，例如由該功能性質/活性合適的檢定法予以分析判定時，具有參考VSIG-8的功能性質/活性。舉例而言，VSIG-8之同功異型體、片段、變異體或同源物可例如顯示與VISTA締合。

在一些實施態樣中，VSIG-8包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：19或20有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。在一些實施態樣中，VSIG-8的片段包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：20、21、24或25中之一者有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

亦已提議VISTA會與PSGL-1交互作用──參見例如WO 2018/132476 A1。PSGL-1同功異型體1係UniProt Q14242-1 (SEQ ID NO：323)所識別的蛋白質。PSGL-1同功異型體2係UniProt Q14242-2 (SEQ ID NO：324)所識別之蛋白質，且與PSGL-1同功異型體1的差異在於其於SEQ ID NO：323的位置1後包含額外的16個胺基酸。

SEQ ID NO：323之N端17個胺基酸構成一訊息胜肽，所以PSGL-1的成熟形式(亦即，加工移除訊息胜肽之後)具有SEQ ID NO：325中顯示的胺基酸序列。SEQ ID NO：323之位置18至320形成PSGL-1的細胞外域(SEQ ID NO：326)。PSGL-1的跨膜域係顯示於SEQ ID NO：327中，而細胞質域係顯示於SEQ ID NO：328中。細胞外域包含12、10個胺基酸串連(tandem)重複；該重複區係顯示於SEQ ID NO：329中。

在此說明書中，「PSGL-1」係指來自任何物種之PSGL-1，且包括來自任何物種之PSGL-1同功異型體、片段、變異體(包括突變體)或同源物。

PSGL-1的片段可具有10、20、30、40、50、100、150、200、250、300、350或400個胺基酸中之一者的最小長度，且可具有20、30、40、50、100、150、200、250、300、350或400個胺基酸中之一者的最大長度。

在一些實施態樣中，PSGL-1為來自一哺乳動物的PSGL-1 (例如，一靈長類動物(恆河猴(rhesus)、食蟹獼猴(cynomolgus)、非人類靈長類動物或人類)及/或一嚙齒動物(例如，大鼠或鼠類)PSGL-1)。PSGL-1之同功異型體、片段、變異體或同源物可任擇地定特徵為與來自一給定物種，例如人類之一未成熟或成熟的PSGL-1同功異型體的胺基酸序列，有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

同功異型體、片段、變異體或同源物可任擇地為功能上之同功異型體、片段、變異體或同源物，例如由該功能性質/活性合適的檢定法予以分析判定時，具有參考PSGL-1的功能性質/活性。舉例而言，PSGL-1之同功異型體、片段、變異體或同源物可例如顯示與VISTA締合。

在一些實施態樣中，PSGL-1包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：323或324有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。在一些實施態樣中，PSGL-1的片段包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：325、326或329中之一者有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。目標分子上特別屬意之區

本發明之抗原結合分子經特定設計來靶向特別屬意之VISTA區。在二步驟的作法中，在預測抗原性、功能及安全性分析後，選擇要靶定的VISTA區。接著使用對應於目標區的胜肽作為用以引發特異性單株抗體的免疫原，來製備對VISTA之目標區有特異性的抗體，且隨後篩選以識別能夠以原生狀態結合VISTA的抗體。此作法提供抗體表位精湛的掌握。

本發明之抗原結合分子可藉由參照其等結合的VISTA區來定義。本發明之抗原結合分子可對VISTA的特定屬意區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子可結合由相連的胺基酸序列組成(亦即，胺基酸一級序列)之VISTA的線形表位。在一些實施態樣中，該抗原結合分子可結合由胺基酸序列之不連續序列的胺基酸組成之VISTA的構形表位。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子對VISTA結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子對VISTA的細胞外區(例如，SEQ ID NO：3中所示的區)結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子對VISTA的Ig樣V型域(例如，SEQ ID NO：6中所示的區)結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子對VISTA於對應於SEQ ID NO：1的位置61至162(SEQ ID NO：31中所示)的區結合。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子對SEQ ID NO：322中所示的VISTA區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子對SEQ ID NO：26中所示的VISTA區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子對SEQ ID NO：27中所示的VISTA區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子對SEQ ID NO：28中所示的VISTA區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子對SEQ ID NO：29中所示的VISTA區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子對SEQ ID NO：30中所示的VISTA區結合。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子不對SEQ ID NO：271中所示的VISTA區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不對SEQ ID NO：272中所示的VISTA區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不對SEQ ID NO：273中所示的VISTA區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不對SEQ ID NO：274中所示的VISTA區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不對SEQ ID NO：275中所示的VISTA區結合。

一抗體與一胜肽/多肽結合的區可藉由熟習此藝者使用本技藝中已知的各種方法來判定，包括抗體-抗原複合物之X射線共結晶學分析、胜肽掃描、誘變測繪、由質譜法進行之氫-氘交換分析、噬菌體顯示、競爭ELISA及蛋白質水解為基的「保護」法。此等方法係於例如Gershoni et al., BioDrugs, 2007, 21(3):145-156中所述，其在此藉由參照全文併入本文。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠結合至一抗體所結合VISTA區的相同VISTA之區或一重疊的VISTA之區，該抗體包含本文所述之抗體殖株4M2-C12、4M2-B4、4M2-C9、4M2-D9、4M2-D5、4M2-A8、V4H1、V4H2、V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31、2M1-B12、2M1-D2、1M2-D2、13D5p、13D5-1、13D5-13、5M1-A11或9M2-C12中之一者的VH及VL序列。

在本文中使用時，一「胜肽」係指由肽鍵所鏈結之二或更多胺基酸單體之一鏈。一胜肽一般在該區具有約2至50個胺基酸的長度。一「多肽」為二或更多胜肽的一聚合物鏈。多肽一般具有超過約50個胺基酸的長度。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠對一多肽結合，該多肽包含SEQ ID NO：1、2、3、6或31中之一者的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：322的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：29的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能夠對由SEQ ID NO：271之胺基酸序列所組成的一胜肽結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能夠對由SEQ ID NO：272之胺基酸序列所組成的一胜肽結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能夠對由SEQ ID NO：273之胺基酸序列所組成的一胜肽結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能夠對由SEQ ID NO：274之胺基酸序列所組成的一胜肽結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能夠對由SEQ ID NO：275之胺基酸序列所組成的一胜肽結合。

抗原結合分子對給定胜肽/多肽結合的能力可以藉由熟習此藝者熟知的方法來分析，包括藉由ELISA、免疫墨點法(例如，西方墨點法)、免疫沉澱法、表面電漿子共振(SPR；參見例如Hearty et al., Methods Mol Biol (2012) 907:411-442)或生物層干涉術(參見例如Lad et al., (2015) J Biomol Screen 20(4): 498-507)之分析。

在該抗原結合分子能夠對包含一參考胺基酸序列之一胜肽/多肽結合的實施態樣中，該胜肽/多肽可包含一或多個額外的胺基酸於該參考胺基酸序列之一或兩端處。在一些實施態樣中，該胜肽/多肽包含例如1-5、1-10、1-20、1-30、1-40、1-50、5-10、5-20、5-30、5-40、5-50、10-20、10-30、10-40、10-50、20-30、20-40或20-50個額外的胺基酸於該參照胺基酸序列的一或兩端處。

在一些實施態樣中，該參考序列之一或二端(亦即，N-端及C-端末端)所提供的額外胺基酸，係對應於VISTA胺基酸序列的情境下之參考序列的末端位置。舉例而言，在該抗原結合分子能夠對包含SEQ ID NO：26的序列及在SEQ ID NO：26之C-端末端的額外二個胺基酸的一胜肽/多肽結合的情況下，該等額外二個胺基酸可為精胺酸及天冬醯胺酸，對應於SEQ ID NO：1的位置90及91。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一抗體所結合的一胜肽/多肽結合，該抗體包含本文所述之抗體殖株4M2-C12、4M2-B4、4M2-C9、4M2-D9、4M2-D5、4M2-A8、V4H1、V4H2、V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31、2M1-B12、2M1-D2、1M2-D2、13D5p、13D5-1、13D5-13、5M1-A11或9M2-C12中之一者的VH及VL序列。骨髓衍生的壓制型細胞(MDSC)

骨髓衍生的壓制型細胞(MDSC)為骨髓譜系細胞之一異質性群組的免疫細胞，特徵在於免疫壓制性表現型。MDSC生物學係於Kumar et al., Trends Immunol. (2016); 37(3): 208-220中回顧，其在此藉由參照全文併入本文。

MDSC之特徵在於數個區分這些細胞與成熟骨髓細胞(亦即，巨噬細胞、樹突細胞及嗜中性球)的生物化學及基因體特徵，諸如：NADPH氧化酶(Nox2)的增高表現，反應性氧物種(ROS) (諸如過氧化物陰離子(O ² ⁻)、過氧化氫(H ₂O ₂)及過氧亞硝酸根(PNT；ONOO ⁻))的增高生產；精胺酸酶1及一氧化氮合成酶2 (nos2)的增高表現，及一氧化氮(NO)的增高生產；c/EBPβ及STAT3的增高表現；IRF8的減少表現；以及S100A8/9蛋白的增高生產。

有二種不同類型的MDSC；多形核MDSC (PMN-MDSC)，其與嗜中性球為形態及表現型上相似；以及與單核球更相似的單核球性MDSC (M-MDSC)。MDSC的形態及表現型特性係於例如Marvel and Gabrilovich J Clin Invest. 2015 Sep 1; 125(9): 3356–3364中所述，其在此藉由參照全文併入本文。在小鼠中，MDSC廣泛地識別為CD11b ⁺Gr1 ⁺細胞。Gr-1 ^hi細胞係多數為PMN-MDSC，以及Gr-1 ^lo細胞係多數為M-MDSC。這些亞群可以基於Ly6C及Ly6G標誌予以更準確地識別；M-MDSC為CD11b ⁺Ly6C ^hiLy6G ^–，以及PMN-MDSC為CD11b ⁺Ly6C ^loLy6G ⁺)。在人類中，MDSC被識別於單核區段部分中。PMN-MDSC為CD14 ^–CD11b ⁺CD33 ⁺CD15 ⁺或CD66b ⁺細胞，以及M-MDSC為CD14 ⁺HLA-DR ^–/ ^lo細胞。Lin ^–HLA-DR ^–CD33 ⁺MDSC族群代表富集骨髓先驅細胞之一混合群組的細胞。

MDSC-媒介之免疫壓制牽涉的因素包括：精胺酸酶(ARG1)、可誘發的NOS (iNOS)、TGF-β、IL-10及COX2的表現；半胱胺酸之隔離；T細胞的l-選擇素之減少表現；以及Treg之誘發。M-MDSC及PMN-MDSC運用不同的免疫壓制機制。M-MDSC透過生產NO及細胞激素來壓制抗原特異性及非特異性T細胞反應兩者，以及有比PMN-MDSC更強的免疫壓制性。PMN-MDSC以透過ROS生產之抗原特異性方式壓制免疫反應。

MDSC病理上牽涉癌症及感染性疾病之發展及進程。MDSC於人類疾病上的角色係於例如Kumar et al., Trends Immunol. (2016); 37(3): 208-220(藉由參照併入本文)及Greten et al., Int Immunopharmacol. (2011) 11(7):802-807中回顧，其在此藉由參照全文併入本文。

腫瘤組織內有大量的MDSC，且透過多種機制來促進癌症之發展及進程，例如於Umansky et al., Vaccines (Basel) (2016) 4(4):36中所回顧。透過趨化激素表現來召募MDSC至腫瘤位置，以及腫瘤微環境中的促發炎性因子導致MDSC之免疫壓制性功能顯著的向上調節。MDSC透過壓制作用免疫細胞功能(例如，作用T細胞及NK細胞功能)、促進調節性T細胞生產/活性、生產諸如VEGF及bFGF的生長因子、以及生產諸如基質金屬蛋白酶的ECM-修飾因子，來促進腫瘤發展、新生血管形成及轉移。

MDSC可參考VISTA表現予以特徵化。在本發明之各種態樣之實施態樣中，MDSC可為「VISTA-表現MDSC」或「VISTA+ MDSC」。MDSC可在細胞表面表現VISTA (亦即，VISTA可表現於細胞膜中或細胞膜處)。抗原結合分子

本發明提供能夠對VISTA結合之抗原結合分子。

一「抗原結合分子」係指能夠對一目標抗原對的一分子，且含括單株抗體、多株抗體、單特異性及多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)、及抗體片段(例如，Fv、scFv、Fab、scFab、F(ab') ₂、Fab ₂、雙聯體(diabody)、三聯體(triabody)、scFv-Fc、迷你體(minibodies)、單域抗體(例如，VhH)等)，只要其等顯示有對相關目標分子的結合。

本發明之抗原結合分子包含能夠對一目標抗原結合的一部分。在一些實施態樣中，能夠對一目標抗原結合的該部分係包含能夠對該目標抗原特異性結合之一抗體的一抗體重鏈變異區(VH)及一抗體輕鏈變異區(VL)。在一些實施態樣中，能夠對一目標抗原結合的該部分係包含能夠對該目標抗原結合的一適體或由其組成，例如一核酸適體(例如於Zhou and Rossi Nat Rev Drug Discov. 2017 16(3):181-202中回顧)。在一些實施態樣中，能夠對一目標抗原結合之該部分係包含一抗原結合胜肽/多肽或由其組成，例如一胜肽適體、硫氧化還原蛋白、單擬抗體(monobody)、抗卡林(anticalin)、孔尼茲域(Kunitz domain)、厄維體(avimer)、打結素(knottin)、菲諾體(fynomer)、艾萃體(atrimer)、DARPin、親和體(affibody)、奈體(nanobody) (亦即，單域抗體(sdAb))阿菲林(affilin)、犰狳重複蛋白(armadillo repeat protein) (ArmRP)、OBody或纖維接合素(fibronectin)──例如於Reverdatto et al., Curr Top Med Chem. 2015; 15(12): 1082–1101中回顧，其在此藉由參照全文併入本文(亦參見例如Boersma et al., J Biol Chem (2011) 286:41273-85以及Emanuel et al., Mabs (2011) 3:38-48)。

本發明之抗原結合分子大致上包含一抗原結合域，其包含能夠對目標抗原特異性結合之一抗體的一VH及一VL。由一VH及一VL形成的抗原結合域在本文中亦可稱為一Fv區。

一抗原結合分子可為或可包含一抗原結合多肽或一抗原結合多肽複合物。一抗原結合分子可包含一起形成一抗原結合域的多於一之多肽。多肽可以共價或非共價地締合。在一些實施態樣中，該等多肽係形成包含該等多肽之一較大多肽的部分(例如，於scFv之例中包含VH及VL，或在scFab之情況下包含VH-CH1及VL-CL)。

一抗原結合分子可指多於一之多肽(例如，2、3、4、6或8多肽)之一非共價或共價複合物，例如包含二重鏈多肽及二輕鏈多肽的一IgG樣抗原結合分子。

本發明之抗原結合分子可使用能夠對VISTA結合之單株抗體(mAb)的序列來設計及製備。亦可使用/提供抗體之抗原結合區，諸如單鏈變異片段(scFv)、Fab及F(ab') ₂片段。一「抗原結合區」是一抗體的任何片段，其能夠對該給定抗體對其具特異性的目標結合。

抗體通常包含六個互補決定區CDR；三者於重鏈變異(VH)區：HC-CDR1、HC-CDR2及HC-CDR3，以及三者於輕鏈變異(VL)區：LC-CDR1、LC-CDR2及LC-CDR3。六個CDR一起定義抗體之對位(paratope)，其為抗體對目標抗原結合的部分。

VH區及VL區於每一CDR之任一側係包含框架區(FR)，其為CDR提供一支架。從N-端至C-端，VH區包含下列結構：N term-[HC-FR1]-[HC-CDR1]-[HC-FR2]-[HC-CDR2]-[HC-FR3]-[HC-CDR3]-[HC-FR4]-C term；且VL區包含下列結構：N term-[LC-FR1]-[LC-CDR1]-[LC-FR2]-[LC-CDR2]-[LC-FR3]-[LC-CDR3]-[LC-FR4]-C term。

存在若干用於定義抗體CDR及FR之不同慣例，諸如Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)、Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)中所說明者；及VBASE2，如Retter et al., Nucl. Acids Res. (2005) 33 (suppl 1): D671-D674中所說明。本文所述之抗體殖株之VH區及VL區的CDR及FR之定義係根據國際IMGT (ImMunoGeneTics)資訊系統(LeFranc et al., Nucleic Acids Res. (2015) 43 (Database issue):D413-22)，其使用Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. (2003) 27:55-77中所述之IMGT V-DOMAIN編碼規則。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一能夠對VISTA結合之抗原結合分子的CDR。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一能夠對VISTA結合之抗原結合分子的FR。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一能夠對VISTA結合之抗原結合分子的CDR及FR。亦即，在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一能夠對VISTA結合之抗原結合分子的VH區及VL區。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一VH區及一VL區，其係為或其係衍生自本文所述之VISTA-結合抗體殖株的VH/VL區(亦即，抗-VISTA抗體殖株4M2-C12、4M2-B4、4M2-C9、4M2-D9、4M2-D5、4M2-A8、V4H1、V4H2、V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31、2M1-B12、2M1-D2、1M2-D2、13D5p、13D5-1、13D5-13、5M1-A11或9M2-C12)。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含根據以下(1)至(18)中之一者的一VH區：

(1) (4M2-C12衍生一致的) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：305的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：306的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：307的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(2) (V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：290的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：291的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：278的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(3) (V4-C1) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：33的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：277的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：278的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(4) (V4-C9) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：33的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：286的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：278的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(5) (4M2-C12/V4H1/V4H2一致的) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：244的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：34的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：35的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(6) (4M2-C12、4M2-B4、V4H2) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：33的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：34的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：35的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(7) (V4H1) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：53的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：34的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：35的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(8) (2M1-B12、2M1-D2) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：72的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：73的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：74的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(9) (4M2-C9、5M1-A11) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：89的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：90的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(10) (4M2-D9) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：33的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：107的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：108的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(11) (1M2-D2) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：120的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：121的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：122的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(12) (4M2-D5) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：144的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：145的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：146的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(13) (4M2-A8) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：158的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：159的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：160的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(14) (9M2-C12) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：169的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：170的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：171的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(15) (13D5衍生的) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：72的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：184的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：246的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(16) (13D5p) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：72的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：184的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：185的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(17) (13D5-1) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：72的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：184的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：195的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(18) (13D5-13) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：72的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：184的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：200的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含根據以下(19)至(35)中之一者的一VH區：

(19) (V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31) 併含有下列FR之一VH區：具有SEQ ID NO：63的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：292的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：293的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：281的胺基酸序列之HC-FR4，或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(20) (V4-C1、V4-C9) 併含有下列FR之一VH區：具有SEQ ID NO：63的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：279的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：280的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：281的胺基酸序列之HC-FR4，或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(21) (4M2-C12) 併含有下列FR之一VH區：具有SEQ ID NO：36的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：37的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：38的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：39的胺基酸序列之HC-FR4，或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(22) (4M2-B4) 併含有下列FR之一VH區：具有SEQ ID NO：49的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：37的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：38的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：39的胺基酸序列之HC-FR4，或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(23) (V4H1) 併含有下列FR之一VH區：具有SEQ ID NO：54的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：55的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：56的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：39的胺基酸序列之HC-FR4，或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(24) (V4H2) 併含有下列FR之一VH區：具有SEQ ID NO：63的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：64的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：65的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：39的胺基酸序列之HC-FR4，或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(25) (2M1-B12) 併含有下列FR之一VH區：具有SEQ ID NO：75的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：76的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：77的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：78的胺基酸序列之HC-FR4，或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(26) (4M2-C9) 併含有下列FR之一VH區：具有SEQ ID NO：91的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：93的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：94的胺基酸序列之HC-FR4，或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(27) (2M1-D2) 併含有下列FR之一VH區：具有SEQ ID NO：103的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：76的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：77的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：78的胺基酸序列之HC-FR4，或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(28) (4M2-D9) 併含有下列FR之一VH區：具有SEQ ID NO：109的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：110的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：111的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：112的胺基酸序列之HC-FR4，或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(29) (1M2-D2) 併含有下列FR之一VH區：具有SEQ ID NO：123的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：124的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：125的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：78的胺基酸序列之HC-FR4，或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(30) (5M1-A11) 併含有下列FR之一VH區：具有SEQ ID NO：134的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：93的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：135的胺基酸序列之HC-FR4，或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(31) (4M2-D5) 併含有下列FR之一VH區：具有SEQ ID NO：147的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：148的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：149的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：135的胺基酸序列之HC-FR4，或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(32) (4M2-A8) 併含有下列FR之一VH區：具有SEQ ID NO：161的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：162的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：163的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：135的胺基酸序列之HC-FR4，或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(33) (9M2-C12) 併含有下列FR之一VH區：具有SEQ ID NO：172的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：173的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：174的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：175的胺基酸序列之HC-FR4，或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(34) (13D5p、13D5-1) 併含有下列FR之一VH區：具有SEQ ID NO：103的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：186的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：187的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：86的胺基酸序列之HC-FR4，或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(35) (13D5-13) 併含有下列FR之一VH區：具有SEQ ID NO：103的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：186的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：201的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：86的胺基酸序列之HC-FR4，或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一VH區，該VH區包含根據以上(1)至(18)中之一者的CDR以及根據以上(19)至(35)中之一者的FR。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含根據以下(36)至(57)中之一者的一VH區：

(36)包含根據(1)之CDR以及根據(19)、(20)、(21)、(22)、(23)或(24)之FR的一VH區。

(37) 包含如(2)之CDR以及如(19)之FR的一VH區。

(38) 包含如(3)之CDR以及如(20)之FR的一VH區。

(39) 包含如(4)之CDR以及如(20)之FR的一VH區。

(40)包含根據(5)之CDR以及根據(21)、(22)、(23)或(24)之FR的一VH區。

(41) 包含如(6)之CDR以及如(21)之FR的一VH區。

(42) 包含如(6)之CDR以及如(22)之FR的一VH區。

(43) 包含如(6)之CDR以及如(24)之FR的一VH區。

(44) 包含如(7)之CDR以及如(23)之FR的一VH區。

(45) 包含如(8)之CDR以及如(25)之FR的一VH區。

(46) 包含如(8)之CDR以及如(27)之FR的一VH區。

(47) 包含如(9)之CDR以及如(26)之FR的一VH區。

(48) 包含如(9)之CDR以及如(30)之FR的一VH區。

(49) 包含如(10)之CDR以及如(28)之FR的一VH區。

(50) 包含如(11)之CDR以及如(29)之FR的一VH區。

(51) 包含如(12)之CDR以及如(31)之FR的一VH區。

(52) 包含如(13)之CDR以及如(32)之FR的一VH區。

(53) 包含如(14)之CDR以及如(33)之FR的一VH區。

(54) 包含根據(15)之CDR以及根據(34)或(35)之FR的一VH區。

(55) 包含如(16)之CDR以及如(34)之FR的一VH區。

(56) 包含如(17)之CDR以及如(34)之FR的一VH區。

(57) 包含如(18)之CDR以及如(35)之FR的一VH區。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含根據以下(58)至(76)中之一者的一VH區：

(58) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：276之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(59) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：285之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(60) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：289之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(61) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：32之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(62) 一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：48的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(63) 一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：52的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(64) 一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：62的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(65) 一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：71的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(66) 一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：87的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(67) 一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：102的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(68) 一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：106的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(69) 一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：119的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(70) 一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：133的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(71) 一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：143的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(72) 一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：157的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(73) 一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：168的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(74) 一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：183的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(75) 一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：194的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(76) 一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：199的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含根據以下(77)至(96)中之一者的一VL區：

(77) (4M2-C12衍生一致的) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：308的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(78) (C24/C26/C27一致的) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：309的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(79) (V4-C24、V4-C26) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：295的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(80) (V4-C27、V4-C30、V4-C31) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：300的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(81) (4M2-C12/V4H1/V4H2一致的) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：245的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(82) (4M2-C12、4M2-B4、V4-C1、V4-C9、V4-C28) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：42的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(83) (V4H1) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：58的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(84) (V4H2) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：67的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(85) (2M1-B12、2M1-D2) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：80的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：81的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：82的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(86) (4M2-C9) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：96的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：97的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：98的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(87) (4M2-D9) 併含有下列CDR之一VH區：具有SEQ ID NO：114的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：67的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：115的胺基酸序列之LC-CDR3，或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(88) (1M2-D2) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：127的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：128的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：129的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(89) (5M1-A11) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：137的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：138的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：139的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(90) (4M2-D5) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：151的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：152的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：153的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(91) (4M2-A8) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：165的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：152的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：153的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(92) (9M2-C12) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：177的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：178的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：179的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(93) (13D5p衍生的) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：247的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：178的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：190的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(94) (13D5p) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：189的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：178的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：190的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(95) (13D5-1) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：197的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：178的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：190的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(96) (13D5-13) 併含有下列CDR之一VL區：具有SEQ ID NO：203的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：178的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：190的胺基酸序列之LC-CDR3；或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含根據以下(97)至(120)中之一者的一VL區：

(97) (V4-C1) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：59的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：283的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：284的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(98) (V4-C9) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：288的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：283的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：284的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(99) (V4-C24) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：288的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：283的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：296的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(100) (V4-C26) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：288的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：298的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：284的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(101) (V4-C27) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：288的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：283的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：284的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(102) (V4-C28) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：288的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：283的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：296的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(103) (V4-C30) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：288的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：283的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：296的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(104) (V4-C31) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：288的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：283的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：304的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(105) (4M2-C12) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：44的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：46的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(106) (4M2-B4) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：51的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：46的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(107) (V4H1) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：59的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：60的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：61的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(108) (V4H2) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：68的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：69的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：70的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(109) (2M1-B12) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：83的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：84的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：85的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：86的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(110) (4M2-C9) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：99的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：100的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：101的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：86的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(111) (2M1-D2) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：105的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：84的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：85的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：86的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(112) (4M2-D9) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：116的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：117的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：118的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：86的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(113) (1M2-D2) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：130的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：131的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：132的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：86的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(114) (5M1-A11) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：140的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：141的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：142的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：86的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(115) (4M2-D5) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：154的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：155的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：156的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：86的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(116) (4M2-A8) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：166的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：155的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：167的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：86的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(117) (9M2-C12) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：180的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：181的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：182的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：86的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(118) (13D5p) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：191的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：192的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：193的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：86的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(119) (13D5-1) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：191的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：198的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：193的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：86的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

(120) (13D5-13) 併含有下列FR之一VL區：具有SEQ ID NO：191的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：192的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：204的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：86的胺基酸序列之LC-FR4，或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一VL區，該VH區包含根據以上(77)至(96)中之一者的CDR以及根據以上(97)至(120)中之一者的FR。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含根據以下(121)至(148)中之一者的一VL區：

(121) 包含根據(77)之CDR以及根據(97)、(98)、(99)、(100)、(101)、(102)、(103)、(104)、(105)、(106)、(107)或(108)之FR的一VL區。

(122) 包含根據(78)之CDR以及根據(99)、(100)或(101)之FR的一VL區。

(123) 包含如(79)之CDR以及如(99)之FR的一VL區。

(124) 包含如(79)之CDR以及如(100)之FR的一VL區。

(125) 包含如(80)之CDR以及如(101)之FR的一VL區。

(126) 包含如(82)之CDR以及如(97)之FR的一VL區。

(127) 包含如(82)之CDR以及如(98)之FR的一VL區。

(128) 包含如(82)之CDR以及如(102)之FR的一VL區。

(129) 包含如(80)之CDR以及如(103)之FR的一VL區。

(130) 包含如(80)之CDR以及如(104)之FR的一VL區。

(131) 包含根據(81)之CDR以及根據(105)、(106)、(107)或(108)之FR的一VL區。

(132) 包含如(82)之CDR以及如(105)之FR的一VL區。

(133) 包含如(82)之CDR以及如(106)之FR的一VL區。

(134) 包含如(83)之CDR以及如(107)之FR的一VL區。

(135) 包含如(84)之CDR以及如(108)之FR的一VL區。

(136) 包含如(85)之CDR以及如(109)之FR的一VL區。

(137) 包含如(85)之CDR以及如(111)之FR的一VL區。

(138) 包含如(86)之CDR以及如(110)之FR的一VL區。

(139) 包含如(87)之CDR以及如(112)之FR的一VL區。

(140) 包含如(88)之CDR以及如(113)之FR的一VL區。

(141) 包含如(89)之CDR以及如(114)之FR的一VL區。

(142) 包含如(90)之CDR以及如(115)之FR的一VL區。

(143) 包含如(91)之CDR以及如(116)之FR的一VL區。

(144) 包含如(92)之CDR以及如(117)之FR的一VL區。

(145) 包含根據(93)之CDR以及根據(118)、(119)或(120)之FR的一VL區。

(146) 包含如(94)之CDR以及如(118)之FR的一VL區。

(147) 包含如(95)之CDR以及如(119)之FR的一VL區。

(148) 包含如(96)之CDR以及如(120)之FR的一VL區。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含根據以下(149)至(173)中之一者的一VL區：

(149) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：310之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(150) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：282之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(151) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：287之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(152) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：294之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(153) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：297之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(154) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：299之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(155) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：301之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(156) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：302之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(157) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：303之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(158) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：40之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(159) 一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：50的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(160) 一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：57的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(161) 一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：66的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(162) 一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：79的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(163) 一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：95的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(164) 一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：104的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(165) 一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：113的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(166) 一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：126的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(167) 一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：136的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(168) 一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：150的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(169) 一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：164的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(170) 一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：176的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(171) 一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：188的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(172) 一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：196的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

(173) 一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：202的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含如以上(1)至(76)中之任一者之一VH區，以及如以上(77)至(173)中之任一者之一VL區。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含：一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：289的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性；及一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：297的胺基酸序列有至少70%的序列同一性，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)一或多個(例如，二)多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：315之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)一或多個(例如，二)多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：317之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)一或多個(例如，二)多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：331之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)一或多個(例如，二)多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：317之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在根據本發明之一或多個胺基酸係由另一個胺基酸取代的實施態樣中，該等取代可為例如根據下表之保留式取代。在一些實施態樣中，中間欄位同一方塊內的胺基酸為經取代的。在一些實施態樣中，最右邊的欄位中同一行的胺基酸為經取代的：

脂肪族	非極性	G A P
I L V
極性 - 不帶電	C S T M
N Q
極性 - 帶電	D E
K R
芳香族		H F W Y

在一些實施態樣中，取代可為功能上保留型。亦即，在一些實施態樣中，該取代可能不影響(或可能不實質影響)包含該取代的抗原結合分子的一或多種功能性質(例如，目標結合)，其係與等效未經取代的分子相比。

一抗體之一抗原結合區的VH及VL區係一起構成Fv區。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含對VISTA結合之一Fv區或由其組成。在一些實施態樣中，該Fv的VH及VL區係提供由一連接子區連結的單個多肽，亦即一單鏈Fv (scFv)。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一免疫球蛋白重鏈恆定序列的一或多個區。在一些實施態樣中，該免疫球蛋白重鏈恆定序列係為，或衍生自一IgG (例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgA (例如，IgA1、IgA2)、IgD、IgE或IgM之重鏈恆定序列。

在一些實施態樣中，該免疫球蛋白重鏈恆定序列為人類免疫球蛋白G 1恆定(IGHG1；UniProt：P01857-1，v1；SEQ ID NO：205)。SEQ ID NO：205之位置1至98形成CH1區(SEQ ID NO：206)。SEQ ID NO：205之位置99至110形成CH1與CH2區之間的一鉸鏈區(SEQ ID NO：207)。SEQ ID NO：205之位置111至223形成CH2區(SEQ ID NO：208)。SEQ ID NO：205之位置224至330形成CH3區(SEQ ID NO：209)。

製備實例性抗原結合分子可使用pFUSE-CHIg-hG1，其於CH3區包含取代D356E、L358M (根據EU編號所編號的位置)。pFUSE-CHIg-hG1所編碼之CH3區的胺基酸序列係顯示於SEQ ID NO：210中。將瞭解，CH3區可提供有根據本文所述之抗原結合分子的一Fc區之修飾的進一步取代。

在一些實施態樣中，一CH1區包含下列或由下列組成：SEQ ID NO：206的序列，或與SEQ ID NO：206的胺基酸序列有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性的一序列。在一些實施態樣中，一CH1-CH2鉸鏈區包含下列或由下列組成：SEQ ID NO：207的序列，或與SEQ ID NO：207的胺基酸序列有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性的一序列。在一些實施態樣中，一CH2區包含下列或由下列組成：SEQ ID NO：208的序列，或與SEQ ID NO：208的胺基酸序列有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性的一序列。在一些實施態樣中，一CH3區包含下列或由下列組成：SEQ ID NO：209或210的序列，或與SEQ ID NO：209或210的胺基酸序列有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性的一序列。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一免疫球蛋白輕鏈恆定序列之一或多個區。在一些實施態樣中，免疫球蛋白輕鏈恆定序列為人類免疫球蛋白κ恆定(IGKC；Cκ；UniProt：P01834-1，v2；SEQ ID NO：211)。在一些實施態樣中，免疫球蛋白輕鏈恆定序列為一人類免疫球蛋白λ恆定(IGLC；Cλ)，例如IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6或IGLC7。在一些實施態樣中，一CL區包含下列或由下列所組成：SEQ ID NO：211的序列，或與SEQ ID NO：211的胺基酸序列有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性的一序列。

一抗體之一抗原結合區的VL及輕鏈恆定(CL)區，以及VH區及重鏈恆定1 (CH1)區係一起構成Fab區。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fab區，其包含一VH、一CH1、一VL及一CL (例如，Cκ或Cλ)。在一些實施態樣中，該Fab區包含一包括一VH及一CH1之多肽(例如，一VH-CH1融合多肽)，以及一包括一VL及一CL之多肽(例如，一VL-CL融合多肽)。在一些實施態樣中，該Fab區包含一包括一VH及一CL之多肽(例如，一VH-CL融合多肽)，以及一包括一VL及一CH之多肽(例如，一VL-CH1融合多肽)；亦即在一些實施態樣中，該Fab區為一CrossFab區。在一些實施態樣中，該Fab或CrossFab之VH、CH1、VL及CL區係提供為由連接子區連結的單一多肽，亦即為一單鏈Fab (scFab)或一單鏈CrossFab (scCrossFab)。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含對VISTA結合之一Fab區或由其組成。

在一些實施態樣中，本文所述之抗原結合分子包含對VISTA結合之整個抗體或由其組成。在本文中使用時，「整個抗體」係指具有與一免疫球蛋白(Ig)之結構實質相似之一結構的一抗體。不同種類的免疫球蛋白及其結構係說明於例如，Schroeder and Cavacini J Allergy Clin Immunol. (2010) 125(202): S41-S52中，其在此藉由參照全文併入本文。

類型G的免疫球蛋白(亦即，IgG)為~150 kDa醣蛋白，其包含兩個重鏈及兩個輕鏈。從N-至C-端，重鏈包含一VH接著為包含三個恆定域 (CH1、CH2及CH3)之一重鏈恆定區，並且相似地，輕鏈包含一VL接著為一CL。取決於重鏈，免疫球蛋白可分類為IgG (例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgA (例如，IgA1、IgA2)、IgD、IgE或IgM。輕鏈可為κ或λ。

在一些實施態樣中，本文所述之抗原結合分子包含下列或由下列所組成：一種對VISTA結合之IgG (例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgA (例如，IgA1、IgA2)、IgD、IgE或IgM。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子對於VISTA為至少單價的結合。結合價係指對於一給定抗原決定位，一抗原結合分子中之結合位點的數目。據此，在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含至少一個VISTA結合位點。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含多於一的VISTA結合位點，例如2、3或4個結合位點。該等結合位點可為相同或不同的。在一些實施態樣中，該抗原結合分子對於VISTA為例如為二價、三價或四價的。

本發明之樣態係有關於多特異性抗原結合分子。按「多特異性」其係意謂該抗原結合分子顯現出特異性結合多於一個的目標。在一些實施態樣中，該抗原結合分子是雙特異性的抗原結合分子。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含至少二個不同的抗原結合域(亦即，例如包含非同一的VH及VL的至少二個抗原結合域)。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子結合VISTA及另一目標(例如，一VISTA以外的抗原)，所以至少是雙特異性的。用語「雙特異性」意指該抗原結合分子能對至少兩種不同的抗原決定位特異性地結合。

將瞭解，本發明之抗原結合分子(例如，一多特異性抗原結合分子)可包含能夠結合至抗原結合分子對其具特異性的目標的抗原結合分子。舉例而言，能夠對VISTA及VISTA以外的抗原結合之一抗原結合分子可包含：(i)能夠對VISTA結合的一抗原結合分子，以及(ii)能夠對VISTA以外的抗原結合的一抗原結合分子。

亦將瞭解，本發明之抗原結合分子(例如，一多特異性抗原結合分子)可包含能夠結合至抗原結合分子對其具特異性的目標的抗原結合多肽或抗原結合多肽複合物。舉例而言，本發明之一抗原結合分子可包含：例如(i)能夠對VISTA結合的一抗原結合多肽複合物，其包含一輕鏈多肽(包含結構VL-CL)及一重鏈多肽(包含結構VH-CH1-CH2-CH3)，以及(ii)能對VISTA以外的一抗原結合的一抗原結合多肽複合物，其包含一輕鏈多肽(包含結構VL-CL)及一重鏈多肽(包含結構VH-CH1-CH2-CH3)。

在一些實施態樣中，一較大的抗原結合分子(例如，一多特異性抗原結合分子)之一組分抗原結合分子，可稱為該較大的抗原結合分子之例如一「抗原結合域」或「抗原結合區」。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含能夠對VISTA結合的一抗原結合分子，以及能夠對一VISTA以外的抗原結合的一抗原結合分子。在一些實施態樣中，該VISTA以外的抗原為一免疫細胞表面分子。在一些實施態樣中，該VISTA以外的抗原為一癌細胞抗原。在一些實施態樣中，該VISTA以外的抗原為一受體分子，例如細胞表面受體。在一些實施態樣中，該VISTA以外的抗原為一細胞訊息傳導分子，例如細胞激素、趨化激素、干擾素、介白素或淋巴激素。在一些實施態樣中，該VISTA以外的抗原為一生長因子或一荷爾蒙。

一癌細胞抗原為由一癌細胞所表現或過度表現的一抗原。一癌細胞抗原可為任何胜肽/多肽、醣蛋白、脂蛋白、聚醣、醣脂、脂質，或其片段。一癌細胞抗原之表現可與一癌症相關聯。一癌細胞抗原可由一癌細胞所異常表現(例如，該癌細胞抗原可異常定位所表現)，或可由一癌細胞以一異常結構所表現。一癌細胞抗原可能能夠引發一免疫反應。在一些實施態樣中，該抗原係在癌細胞之細胞表面表現(亦即，該癌細胞抗原為一癌細胞表面抗原)。在一些實施態樣中，本文所述之抗原結合分子所結合之抗原的部份，係顯示於癌細胞之外表面上(亦即，細胞外的)。癌細胞抗原可為一癌症相關聯抗原。在一些實施態樣中，癌細胞抗原為其表現關聯於一癌症之發展、進程或症狀嚴重性的抗原。該癌症相關聯之抗原可能與該癌症之病因或病理相關聯，或可能由於該癌症導致異常表現。在一些實施態樣中，該癌細胞抗原為一種其表現係為一癌症之細胞所向上調節(例如，於RNA及/或蛋白位準)的抗原，例如與可比配之非癌細胞(例如，衍生自相同組織/細胞類型的非癌細胞)表現的位準相比。在一些實施態樣中，癌症相關聯抗原可能優先由癌細胞表現，且可比配的非癌細胞(例如，衍生自相同組織/細胞類型的非癌細胞)不表現。在一些實施態樣中，該癌症相關聯抗原可為一突變致癌基因或突變腫瘤壓制基因的產物。在一些實施態樣中，癌症相關聯抗原可為一過度表現的細胞蛋白質之產物、一致癌病毒生產的一癌抗原、一致癌胎兒抗原或一細胞表面醣脂或醣蛋白。

一免疫細胞表面分子可為在一免疫細胞之細胞表面處或上表現之任何胜肽/多肽、醣蛋白、脂蛋白、聚醣、醣脂、脂質或其片段。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子所結合之免疫細胞表面分子的部分，係位於免疫細胞之外表面上(亦即，細胞外的)。免疫細胞表面分子可表現於任何免疫細胞之細胞表面。在一些實施態樣中，免疫細胞可為造血來源的一細胞，例如一嗜中性球、嗜酸性球、嗜鹼性球、樹突細胞、淋巴球或單核球。淋巴球可為例如，一T細胞、B細胞、自然殺手(NK)細胞、NKT細胞或先天性淋巴細胞(ILC)，或其之一前驅物(例如，一胸腺細胞或前B細胞(pre-B cell))。在一些實施態樣中，免疫細胞表面分子可為一共刺激分子(例如，CD28、OX40、4-1BB、ICOS或CD27)或其配體。在一些實施態樣中，免疫細胞表面分子可為一免疫查核點分子(例如，PD-1、CTLA-4、LAG-3、TIM-3、VISTA、TIGIT或BTLA)或其配體。

本發明之多特異性抗原結合分子可呈任何合適之型式提供，諸如Brinkmann and Kontermann MAbs (2017) 9(2): 182-212中所述的那些型式，其在此藉由參照全文併入本文。合適的型式包括Brinkmann and Kontermann MAbs (2017) 9(2): 182-212之圖2內所示的該等：抗體共軛物，例如IgG ₂、F(ab') ₂或CovX-Body；IgG或IgG樣分子，例如IgG、嵌合IgG、κλ-體共同HC (κλ-body common HC)；CH1/CL融合蛋白，例如scFv2-CH1/CL、VHH2-CH1/CL；「唯變異域」雙特異性抗原結合分子，例如串連scFv (taFV)、三聯體(triplebody)、雙聯體(diabody) (Db)、dsDb、Db(kih)、DART、scDB、dsFv-dsFv、tandAbs、三頭(triple head)、串連dAb/VHH、四價dAb.VHH；非Ig融合蛋白，例如scFv ₂-白蛋白、scDb-白蛋白、taFv-白蛋白、taFv-毒素、迷你抗體(miniantibody)、DNL-Fab ₂、DNL-Fab ₂-scFv、DNL-Fab ₂-IgG-細胞激素 ₂、ImmTAC (TCR-scFv)；經修飾的Fc及CH3融合蛋白，例如scFv-Fc(kih)、scFv-Fc(CH3電荷對(charge pair))、scFv-Fc (EW-RVT)、scFv-fc (HA-TF)、scFv-Fc(SEEDbody)、taFv-Fc(kih)、scFv-Fc(kih)-Fv、Fab-Fc(kih)-scFv、Fab-scFv-Fc(kih)、Fab-scFv-Fc(BEAT)、Fab-scFv-Fc(SEEDbody)、DART-Fc、scFv-CH3(kih)、TriFab；Fc融合體，例如二-雙聯體(diabody)、scDb-Fc、taFv-Fc、scFv-Fc-scFv、HCAb-VHH、Fab-scFv-Fc、scFv ₄-Ig、scFv ₂-Fcab；CH3融合體，例如Dia-雙聯體(diabody)、scDb-CH3；IgE/IgM CH2融合體，例如scFv-EHD2-scFv、scFvMHD2-scFv；Fab融合蛋白，例如Fab-scFv(二擬抗體(bibody))、Fab-scFv ₂(三擬抗體(tribody))、Fab-Fv、Fab-dsFv、Fab-VHH、正交性Fab-Fab；非Ig融合蛋白，例如DNL-Fab ₃、DNL-Fab ₂-scFv、DNL-Fab ₂-IgG-細胞激素 ₂；不對稱IgG或IgG樣分子，例如IgG(kih)、IgG(kih)共同LC、ZW1 IgG共同LC、Biclonics共同LC、CrossMab、CrossMab(kih)、scFab-IgG(kih)、Fab-scFab-IgG(kih)、正交性Fab IgG(kih)、DuetMab、CH3電荷對+CH1/CL電荷對、鉸鏈/CH3電荷對、SEED-體、Duobody、四合一-CrossMab(kih)、LUZ-Y共同LC；LUZ-Y scFab-IgG、FcFc*；附加及Fc-經修飾的IgG，例如IgG(kih)-Fv、IgG HA-TF-Fv、IgG(kih)scFab、scFab-Fc(kih)-scFv2、scFab-Fc(kih)-scFv、半DVD-Ig、DVI-Ig(四合一)、CrossMab-Fab；經修飾的Fc及CH3融合蛋白，例如Fab-Fc(kih)-scFv、Fab-scFv-Fc(kih)、Fab-scFv-Fc(BEAT)、Fab-scFv-Fc-SEEDbody、TriFab；附加的IgGs-HC融合體，例如IgG-HC、scFv、IgG-dAb、IgG-taFV、IgG-CrossFab、IgG-正交性Fab、IgG-(CαCβ) Fab、scFv-HC-IgG、串連Fab-IgG(正交性Fab) Fab-IgG(CαCβ Fab)、Fab-IgG(CR3)、Fab-鉸鏈-IgG(CR3)；附加的IgG - LC融合體，例如IgG-scFv(LC)、scFv(LC)-IgG、dAb-IgG；附加的IgG-Hc及LC融合體，例如DVD-Ig、TVD-Ig、CODV-Ig、scFv ₄-IgG、Zybody；Fc融合體，例如Fab-scFv-Fc、scFv ₄-Ig；F(ab')2融合體，例如F(ab') ₂-scFv ₂；CH1/CL融合蛋白，例如scFv ₂-CH1-鉸鏈/CL；經修飾的IgG，例如DAF(二合一-IgG)、DutaMab、Mab ²；及非Ig融合體，例如DNL-Fab ₄-IgG。

熟習此藝者能設計及製備雙特異性抗原結合分子。生產雙特異性抗原結合分子的方法包括例如，用可還原的雙硫或非可還原的硫醚鍵進行抗原結合分子或抗體片段之化學交聯作用，例如，如Segal and Bast, 2001. Production of Bispecific Antigen-binding molecules. Current Protocols in Immunology. 14:IV:2.13:2.13.1-2.13.16中所述者，其在此藉由參照全文併入本文。舉例而言，可以使用N-琥珀醯亞胺基-3-(-2-吡啶基二硫基)-丙酸酯(SPDP)、經由鉸鏈區SH-基團予以化學交聯例如Fab片段，以生成雙硫鍵聯的雙特異性F(ab) ₂異質二聚體。

其他生產雙特異性抗原結合分子的方法包括融合生產抗體的融合瘤，例如用聚乙二醇來生產能分泌雙特異性抗體的四源雜交瘤細胞(quadroma cell)，例如，如D. M. and Bast, B. J. 2001. Production of Bispecific Antigen-binding molecules. Current Protocols in Immunology. 14:IV:2.13:2.13.1-2.13.16中所述者。

本發明之雙特異性抗原結合分子亦可從例如一編碼抗原結合分子之多肽的核酸建構物予以表現而重組地生產，例如，如Antibody Engineering: Methods and Protocols, Second Edition (Humana Press, 2012), at Chapter 40: Production of Bispecific Antigen-binding molecules: Diabodies and Tandem scFv (Hornig and Färber-Schwarz), 或者French, How to make bispecific antigen-binding molecules, Methods Mol. Med. 2000; 40:333-339中所述者，兩者之全部內容在此藉由參照併入本文。舉例而言，編碼二種抗原結合片段之輕及重鏈變異域(亦即，能夠結合VISTA的抗原結合片段之輕及重鏈變異域，以及能夠結合另一目標蛋白的抗原結合片段之輕及重鏈變異域)、且於抗原結合片段之間包括編碼一合適的連接子或二聚化域之序列的一DNA建構物，可藉由分子選殖的技術予以製備。重組型雙特異性抗體其後能藉由於一合適的宿主細胞(例如，一哺乳動物宿主細胞)內之建構物表現(例如，在活體外)來生產，以及表現的重組型雙特異性抗體接著可任擇地予以純化。 Fc區

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區。

在IgG IgA及IgD同型中，Fc區包含有來自一多肽的CH2及CH3區，以及來自另一多肽的CH2及CH3區。來自該二多肽的CH2及CH3區係一起形成Fc區。在IgM及IgE同型中，Fc區含有三恆定域(CH2、CH3及CH4)，且來自該二多肽的CH2至CH4係一起形成該Fc區。

Fc區提供與Fc受體及其他免疫系統分子的交互作用以引起功能效應。IgG Fc-媒介的作用功能係例如於Jefferis et al., Immunol Rev 1998 163:59-76中回顧(其在此藉由參照全文併入本文)，且係經由下列而引生：Fc-媒介的免疫細胞(例如巨噬細胞、樹突細胞、NK細胞及T細胞)之召募及活化(經由Fc區與該等免疫細胞所表現Fc受體間之交互作用)、補體途徑組分之召募(經由Fc區與補體蛋白C1q之結合)以及後續的補體級聯(cascade)之活化。

Fc媒介的功能包括Fc受體結合、抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞媒介的胞噬作用(ADCP)、補體依賴性細胞毒性(CDC)、形成膜攻擊複合物(MAC)、細胞去顆粒作用、生產細胞激素及/或趨化激素，以及抗原加工與呈現。

影響Fc媒介的功能之抗體Fc區之修飾係為本技藝所已知，諸如那些例如於Wang et al., Protein Cell (2018) 9(1):63-73中所述者，其在此藉由參照全文併入本文。特定而言，已知會影響抗體作用功能的實例性Fc區修飾係摘要於Wang et al., Protein Cell (2018) 9(1):63-73的表1中。於下文中說明影響抗體作用活性的Fc區之修飾。

於描述Fc區/CH2/CH3為包含「對應於」參考取代之修飾的情況中，可預期同源的Fc/CH2/CH3之等效取代。作為例示，人類IgG1的L234A/L235A取代(根據如Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所述之EU編號系統所編號)對應於根據SEQ ID NO：256所編號的小鼠Ig γ-2A鏈C區，A對偶基因，於位置117及118之L由A取代。

在描述一Fc區為包含修飾的情況下，該修飾可存在於一起形成Fc區的一或二個多肽鏈中。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區，其包含修飾。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區，其包含CH2及/或CH3區中之一或多者中的修飾。

在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增加Fc-媒介之功能。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強ADCC。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強ADCP。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強CDC。一種包含包括會增強Fc-媒介之功能(例如，ADCC、ADCP、CDC)之修飾的一Fc區之抗原結合分子，與包括對應的未修飾的Fc區之抗原結合分子相比，誘發增高位準的相關作用功能。

在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增加對Fc受體的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強對Fcγ受體的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強對FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb中之一或多者的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強對FcγRIIIa的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強對FcγRIIa的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強對FcγRIIb的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強對FcRn的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強對補體蛋白的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增加對C1q的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以促進抗原結合分子之六聚化作用。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增加抗原結合分子半生期。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強共接合(co-engagement)。

在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Stavenhagen et al. Cancer Res. (2007) 67:8882-8890中所述的取代F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L之組合的修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Lazar et al., Proc Natl Acad Sci USA. (2006)103:4005-4010中所述的取代S239D/I332E或S239D/I332E/A330L之組合的修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Shields et al., J Biol Chem. (2001) 276:6591-6604中所述的取代S298A/E333A/K334A之組合的修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含對重鏈多肽中之一者的修飾、對應於取代L234Y/L235Q/G236W/S239M/H268D/D270E/S298A之組合，及對另一重鏈多肽之修飾、對應於取代D270E/K326D/A330M/K334E之組合，如Mimoto et al., MAbs. (2013): 5:229-236中所述。在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Richards et al., Mol Cancer Ther. (2008) 7:2517-2527中所述的取代G236A/S239D/I332E之組合的修飾。

在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Idusogie et al. Immunol. (2001) 166(4):2571-5中所述的取代K326W/E333S之組合的修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Moore et al. MAbs. (2010) 2(2):181-9中所述的取代S267E/H268F/S324T之組合的修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於Natsume et al., Cancer Res. (2008) 68(10):3863-72中所述的取代組合之修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Diebolder et al. Science (2014) 343(6176):1260-3中所述的取代E345R/E430G/S440Y之組合的修飾。

在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Dall'Acqua et al. J Immunol. (2002) 169:5171-5180中所述的取代M252Y/S254T/T256E之組合的修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Zalevsky et al. Nat Biotechnol. (2010) 28:157-159中所述的取代M428L/N434S之組合的修飾。

在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Chu et al., Mol Immunol. (2008) 45:3926-3933中所述的取代S267E/L328F之組合的修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Shang et al. Biol Chem. (2014) 289:15309-15318中所述的取代N325S/L328F之組合的修飾。

在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以降低/防止Fc-媒介的功能。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以降低/防止ADCC。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以降低/防止ADCP。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以降低/防止CDC。一種包含包括會降低/防止Fc-媒介之功能(例如，ADCC、ADCP、CDC)之修飾的一Fc區之抗原結合分子，與包括對應的未修飾的Fc區之抗原結合分子相比，誘發降低的相關作用功能位準。

在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以降低/防止對Fc受體的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以降低/防止對Fcγ受體的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以降低/防止對FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb中之一或多者的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以降低/防止對FcγRIIIa的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以降低/防止對FcγRIIa的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以降低/防止對FcγRIIb的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以降低/防止對補體蛋白的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以降低/防止對C1q的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以降低/防止對應於N297之胺基酸殘基的醣基化。

在一些實施態樣中，該Fc區不能誘發一或多種Fc-媒介之功能(亦即，缺乏引發相關的Fc-媒介之功能的能力)。據此，包含此等Fc區之抗原結合分子亦缺乏誘發相關功能之能力。此等抗原結合分子可描述為沒有相關功能。

在一些實施態樣中，該Fc區不能誘發ADCC。在一些實施態樣中，該Fc區不能誘發ADCP。在一些實施態樣中，該Fc區不能誘發CDC。在一些實施態樣中，該Fc區不能誘發ADCC及/或不能誘發ADCP及/或不能誘發CDC。

在一些實施態樣中，該Fc區不能對Fc受體結合。在一些實施態樣中，該Fc區不能對Fcγ受體結合。在一些實施態樣中，該Fc區不能對FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb中之一或多者結合。在一些實施態樣中，該Fc區不能對FcγRIIIa結合。在一些實施態樣中，該Fc區不能對FcγRIIa結合。在一些實施態樣中，該Fc區不能對FcγRIIb結合。在一些實施態樣中，該Fc區不能對FcRn結合。在一些實施態樣中，該Fc區不能對補體蛋白結合。在一些實施態樣中，該Fc區不能對C1q結合。在一些實施態樣中，該Fc區在對應於N297之胺基酸殘基處不被醣化。

在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Leabman et al., MAbs. (2013) 5:896-903中所述的N297A或N297Q或N297G的修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Alegre et al., J Immunol. (1992) 148:3461-3468中所述的L235E的修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Xu et al., Cell Immunol. (2000) 200:16-26中所述的取代L234A/L235A或F234A/L235A之組合的修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Schlothaue et al., Protein Engineering, Design and Selection (2016), 29(10):457-466中所述的P329A或P329G的修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Lo et al. J. Biol. Chem (2017) 292(9):3900-3908中所述的取代L234A/L235A/P329G之組合的修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於Rother et al., Nat Biotechnol. (2007) 25:1256-1264中所述的取代組合的修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Newman et al., Clin. Immunol. (2001) 98:164-174中所述的取代S228P/L235E之組合的修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如An et al., MAbs. (2009) 1:572-579中所述的取代H268Q/V309L/A330S/P331S之組合的修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Vafa et al., Methods. (2014) 65:114-126中所述的取代V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S之組合的修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如US 2015/0044231 A1中所述的取代L234A/L235E/G237A/A330S/P331S之組合的修飾。

取代「L234A/L235A」之組合及對應的取代(諸如例如人類IgG4中之F234A/L235A)已知會破壞Fc對Fcγ受體之結合且抑制ADCC、ADCP，且亦會降低C1q結合且從而降低CDC (Schlothauer et al., Protein Engineering, Design and Selection (2016), 29(10):457-466，其在此藉由參照全文併入本文)。取代「P329G」及「P329A」降低C1q結合(且藉此降低CDC)。已知以「A」、「G」或「Q」取代「N297」會消除醣基化，且藉此降低Fc對C1q及Fcγ受體之結合，且從而降低CDC及ADCC。Lo et al. J. Biol. Chem (2017) 292(9):3900-3908(在此藉由參照全文併入本文)報導，取代L234A/L235A/P329G之組合在鼠類IgG2a及人類IgG1兩者中會消除補體結合及固定以及Fc γ受體依賴型、抗體依賴型、細胞-媒介的細胞毒性。

US 2015/0044231 A1中揭露的IgG1 Fc中之取代L234A/L235E/G237A/A330S/P331S之組合會徹底破壞胞噬作用、ADCC及CDC之誘發。

在一些實施態樣中，該Fc區包含對應於如Silva et al., J Biol Chem. (2015) 290(9):5462-5469中所述的取代S228P的修飾。IgG4 Fc中之取代S228P會降低Fab-臂交換(Fab臂交換可能是非期望的)。

在一些實施態樣中，該Fc區包含相應於對應於取代L234A/L235A之組合的修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含相應於對應於取代P329G的修飾。在一些實施態樣中，該Fc區包含相應於對應於取代N297Q的修飾。

在一些實施態樣中，該Fc區包含相應於對應於取代L234A/L235A/P329G之組合的修飾。

在一些實施態樣中，該Fc區包含相應於對應於取代L234A/L235A/P329G/N297Q之組合的修飾。

在一些實施態樣中，該Fc區包含相應於對應於取代L234A/L235E/G237A/A330S/P331S之組合的修飾。

在一些實施態樣中，該Fc區包含相應於對應於取代S228P的修飾，例如於IgG4中。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區，其包含在CH2及CH3區中之一或多者中的修飾，促進Fc區的締合。一抗原結合分子之組成多肽的重組型共同表現以及隨後的締合，係導致若干可能的組合。在重組型生產上為了改良抗原結合分子中所欲多肽組合的產量，於Fc區導入修飾而促進所欲重鏈多肽組合的締合是有利的。修飾可促進例如不同的多肽鏈之CH2及/或CH3區之間的疏水性及/或靜電交互作用。合適的修飾係例如於Ha et al., Front. Immnol (2016) 7:394說明，其在此藉由參照全文併入本文。

在一些實施態樣中，本發明之抗原抗原結合分子包含一Fc區，其包含根據下列型式中之一者於Fc區之CH3區的成對取代，如Ha et al., Front. Immnol (2016) 7:394之表1所示：KiH、KiH _s-s、HA-TF、ZW1、7.8.60、DD-KK、EW-RVT、EW-RVT _s-s、SEED或A107。

在一些實施態樣中，Fc區包含「圓頭-入-洞(knob-into-hole)」或「KiH」修飾，例如，如於例如US 7,695,936及Carter, J Immunol Meth 248, 7-15 (2001)中所述。在此等實施態樣中，Fc區的CH3區中之一者包含一「圓頭」修飾，且另一CH3區包含一「洞」修飾。「圓頭」及「洞」修飾定位於個別CH3區內，使得「圓頭」可定位於「洞」中，以便促進多肽之異質二聚化(且抑制同質二聚化)且/或穩定異質二聚體。圓頭係藉由以具有較大側鏈的胺基酸(例如，酪胺酸或色胺酸)取代那些具有較小鏈者來建構。洞係藉由以具有較小側鏈的胺基酸(例如，丙胺酸或蘇胺酸)取代那些具有較大側鏈者來生成。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子之Fc區的CH3區中之一者包含取代(本文Fc、CH2及CH3區中位置/取代的編號係根據如Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所述的EU編號系統) T366W，且Fc區的另一CH3區包含取代Y407V。在一些實施態樣中，該抗原結合分子之Fc區的CH3區中之一者包含取代T366W，且Fc區的另一CH3區包含取代T366S及L368A。在一些實施態樣中，該抗原結合分子之Fc區的CH3區中之一者包含取代T366W，且Fc區的另一CH3區包含取代Y407V、T366S及L368A。

在一些實施態樣中，Fc區包含如於例如WO 2014/131694 A1中所述的「DD-KK」修飾。在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代K392D及K409D，且Fc區之另一CH3區包含取代E356K及D399K。該等修飾促進CH3區之間的靜電交互作用。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含如Labrijn et al., Proc Natl Acad Sci U S A. (2013) 110(13):5145-50中所述予以修飾的一Fc區，稱為「Duobody」型式。在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代K409R，且Fc區之另一CH3區包含取代K405L。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區，其包含如Strop et al., J Mol Biol. (2012) 420(3):204-19中所述的「EEE-RRR」修飾。在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代D221E、P228E及L368E，且Fc區之另一CH3區包含取代D221R、P228R及K409R。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含Choi et al., Mol Cancer Ther (2013) 12(12):2748-59中所述的「EW-RVT」修飾。在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代K360E及K409W，且Fc區之另一CH3區包含取代Q347R、D399V及F405T。

在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代S354C，且Fc區之另一CH3區包含取代Y349C。導入這些半胱胺酸殘基係導致Fc區的二個CH3區之間形成雙硫橋，進一步穩定異質二聚體(Carter (2001), J Immunol Methods 248, 7-15)。

在一些實施態樣中，Fc區包含「KiH _S-S」修飾。在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代T366W及S354C，且Fc區之另一CH3區包含取代T366S、L368A、Y407V及Y349C。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區，其包含如Davis et al., Protein Eng Des Sel (2010) 23(4):195-202中所述的「SEED」修飾，其中人類IgG1 CH3及IgA CH3的β-股節段被交換。

在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代S364H及F405A，且Fc區之另一CH3區包含取代Y349T及T394F (參見例如Moore et al., MAbs (2011) 3(6):546-57)。

在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代T350V、L351Y、F405A及Y407V，且Fc區之另一CH3區包含取代T350V、T366L、K392L及T394W (參見例如Von Kreudenstein et al., MAbs (2013) 5(5):646-54)。

在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代K360D、D399M及Y407A，且Fc區之另一CH3區包含取代E345R、Q347R、T366V及K409V (參見例如Leaver-Fay et al., Structure (2016) 24(4):641-51)。

在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代K370E及K409W，且Fc區之另一CH3區包含取代E357N、D399V及F405T (參見例如Choi et al., PLoS One (2015) 10(12):e0145349)。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區，其不對Fc γ受體結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其不對FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb中之一或多者結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其不對FcγRIIa、FcγRIIb及FcγRIIIa中之一或多者結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其不對FcγRIIa及FcγRIIb中之一或兩者結合。

一Fc區或一包含Fc區的抗原結合分子，其與一參考蛋白(例如，Fc受體)結合的能力可以根據此技藝中所熟知的方法來分析，諸如ELISA、免疫墨點法、免疫沉澱法、表面電漿子共振(SPR；參見例如Hearty et al., Methods Mol Biol (2012) 907:411-442)或生物層干涉術(BLI；參見例如Lad et al., (2015) J Biomol Screen 20(4): 498-507)。

在本文中使用時，一「不結合」參考蛋白的Fc區，例如，在由ELISA、免疫墨點法(例如，西方墨點法)、免疫沉澱法、SPR或BLI)所判定時，可能顯示出實質上沒有結合參考蛋白。「實質上沒有結合」可為交互作用的位準，其沒有比於給定檢定法中彼此不結合的蛋白質所判定的交互作用位準明顯更大。「實質上沒有結合」可為交互作用的位準，其為給定檢定法中彼此不結合的蛋白質所判定的交互作用位準的≤ 5倍，例如≤ 4倍、≤ 3倍、≤ 2.5倍、≤ 2倍或≤ 1.5倍。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其對FcRn結合。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其對FcRn結合，且其不對FcγRIIa、FcγRIIb及FcγRIIIa中之一或多者結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其對FcRn結合，且其不對FcγRIIa及FcγRIIb中之一或兩者結合。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含不誘發ADCC的Fc區。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含不誘發ADCP的Fc區。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含不誘發CDC的Fc區。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含不誘發ADCC、ADCP或CDC的Fc區。

在本文中使用時，一不誘發(亦即，不能誘發)ADCC/ADCP/CDC之Fc區/抗原結合分子，例如由一適當的相關活性檢定法予以分析判定時，實質上沒有引發ADCC/ADCP/CDC活性。「實質上沒有ADCC/ADCP/CDC活性」係指ADCC/ADCP/CDC的位準，其沒有比於給定檢定法中適當的陰性對照分子(例如，缺少Fc區的抗原結合分子，或包含「靜默」Fc區的抗原結合分子(例如，如Schlothauer et al., Protein Engineering, Design and Selection (2016), 29(10):457-466中所述，其在此藉由參照併入上文))所判定的ADCC/ADCP/CDC位準明顯更大。「實質沒有活性」可為相關活性的位準，其為給定檢定法中適當的陰性對照分子所判定的活性位準的≤ 5倍，例如≤ 4倍、≤ 3倍、≤ 2.5倍、≤ 2倍或≤ 1.5倍。

一Fc區或一包含Fc區的抗原結合分子誘發ADCC的能力之分析，可以例如根據Yamashita et al., Scientific Reports (2016) 6:19772(在此藉由參照全文併入本文)中所述的方法，或藉由如例如Jedema et al., Blood (2004) 103: 2677-82(在此藉由參照全文併入本文)中所述的 ⁵¹Cr釋放檢定法來進行。一Fc區或一包含Fc區的抗原結合分子誘發ADCP的能力之分析，可以例如根據Kamen et al., J Immunol (2017) 198 (1 Supplement) 157.17(在此藉由參照全文併入本文)中所述的方法來進行。一Fc區或一包含Fc區的抗原結合分子誘發CDC的能力之分析可以例如使用如Schlothauer et al., Protein Engineering, Design and Selection (2016), 29(10):457-466(藉由參照併入上文)中所述的C1q結合檢定法來進行。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含具有一胺基酸序列的一多肽，該胺基酸序列與SEQ ID NO：254有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含具有一胺基酸序列的一多肽，該胺基酸序列與SEQ ID NO：257有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含具有一胺基酸序列的一多肽，該胺基酸序列與SEQ ID NO：259有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含具有一胺基酸序列的一多肽，該胺基酸序列與SEQ ID NO：260有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子缺少一Fc區。 Fc受體

Fc受體為對免疫球蛋白的Fc區結合之多肽。Fc受體之結構及功能係於例如Masuda et al., Inflamm Allergy Drug Targets (2009) 8(1): 80-86及Bruhns, Blood (2012) 119:5640-5649中回顧，其等兩者在此藉由參照全文併入本文。

Fc受體表現於造血細胞的表面上，包括巨噬細胞、嗜中性球、樹突細胞、嗜酸性球、嗜鹼性球、肥大細胞及NK細胞。其等包括IgG-結合Fc γ受體、IgE之高親和力受體(FcεRI)、IgA受體、以及IgA及IgM之聚合型Ig受體。新生兒Fc受體(FcRn)為IgG之其他Fc受體，且涉及IgG跨上皮障壁之輸送(胞吞轉送)、保護IgG免於降解、以及抗原呈現。

人類有六個不同類別的Fcγ受體(括號內顯示小鼠異種同源物)：FcγRI (mFcγRI)、FcγRIIa (mFcγRIII)、FcγRIIb (mFcγRIIb)、FcγRIIc、FcγRIIIa (mFcγRIV)及FcγRIIIb。

FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc及FcγRIIIa包含免疫受體酪胺酸為基之活化模體(ITAM)於其等之細胞內域，並且被Fc接合則導致了表現該等受體的細胞活化。FcγRIIb包含免疫受體酪胺酸為基之抑制性模體(ITIMs)於其等之細胞內域，並且一旦被Fc接合則負向調節細胞活化及去顆粒作用、細胞增殖、胞吞作用及胞噬作用。

在本說明書中，一「Fcγ受體」可來自任何物種，且包括來自任何物種之同功異型體、片段、變異體(包括突變體)或同源物。相似地，「FcγRI」、「FcγRIIa」、「FcγRIIb」、「FcγRIIc」、「FcγRIIIa」及「FcγRIIIb」分別指來自任何物種之FcγRI/FcγRIIa/FcγRIIb/FcγRIIc/FcγRIIIa/FcγRIIIb，且包括來自任何物種之同功異型體、片段、變異體(包括突變體)或同源物。

在一些實施態樣中，Fcγ受體(例如，FcγRI/FcγRIIa/FcγRIIb/FcγRIIc/FcγRIIIa/FcγRIIIb)係來自哺乳動物(例如，靈長類動物(恆河猴(rhesus)、食蟹獼猴(cynomolgus)、非人類靈長類動物或人類)及/或嚙齒動物(例如，大鼠或小鼠)。同功異型體、片段、變異體或同源物可任擇地定特徵為與來自例如人類之一給定物種的一Fc γ受體(如FcγRI/FcγRIIa/FcγRIIb/FcγRIIc/FcγRIIIa/FcγRIIIb)之未成熟或成熟的同功異型體之胺基酸序列有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

同功異型體、片段、變異體或同源物可任擇地為功能上之同功異型體、片段、變異體或同源物，例如由該功能性質/活性合適的檢定法予以分析判定時，具有參考Fc γ受體的功能性質/活性。舉例而言，FcγRI之同功異型體、片段、變異體或同源物可例如顯示與人類IgG1 Fc締合。

在本說明書中，「FcRn受體」可來自任何物種，且包括來自任何物種的同功異型體、片段、變異體(包括突變體)或同源物。

在一些實施態樣中，FcRn受體為來自哺乳動物(例如，靈長類動物(恆河猴(rhesus)、食蟹獼猴(cynomolgus)、非人類靈長類動物或人類)及/或嚙齒動物(例如，大鼠或鼠類))。同功異型體、片段、變異體或同源物可任擇地定特徵為與來自例如人類之一給定物種的FcRn受體之未成熟或成熟的同功異型體之胺基酸序列有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

同功異型體、片段、變異體或同源物可任擇地為功能上之同功異型體、片段、變異體或同源物，例如由該功能性質/活性合適的檢定法予以分析判定時，具有參考FcRn的功能性質/活性。舉例而言，FcRn之同功異型體、片段、變異體或同源物可例如顯示與人類IgG1 Fc締合。多肽

本發明亦提供抗原結合分子之多肽組成。該多肽可以單離或實質純化之形式提供。

本發明之抗原結合分子可為或可包含多肽之一複合物。

本說明書中，在一多肽包含多於一域或區之情況，將被瞭解成有複數域/區係較佳存在於相同的多肽鏈中。亦即，包含多於一域或區之多肽為包含該等域/區之一融合多肽。

在一些實施態樣中，本發明之一多肽係包含如本文所述之一VH或由其組成。在一些實施態樣中，本發明之一多肽係包含如本文所述之一VL或由其組成。

在一些實施態樣中，該多肽額外包含一或多個抗體重鏈恆定區(CH)。在一些實施態樣中，該多肽額外包含一或多個抗體輕鏈恆定區(CL)。在一些實施態樣中，該多肽包含一免疫球蛋白(Ig)的CH1、CH2區及/或CH3區。

在一些實施態樣中，該多肽包含一免疫球蛋白重鏈恆定序列的一或多個區。在一些實施態樣中，該多肽包含如本文所述之一CH1區。在一些實施態樣中，該多肽包含如本文所述之一CH1-CH2鉸鏈區。在一些實施態樣中，該多肽包含如本文所述之一CH2區。在一些實施態樣中，該多肽包含如本文所述之一CH3區。

在一些實施態樣中，該多肽包含一CH2及/或CH3區，其包含下列胺基酸取代/胺基酸取代組合中之任一者：F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L；S239D/I332E；S239D/I332E/A330L；S298A/E333A/K334A；L234Y/L235Q/G236W/S239M/H268D/D270E/S298A；D270E/K326D/A330M/K334E；G236A/S239D/I332E；K326W/E333S；S267E/H268F/S324T；E345R/E430G/S440Y；M252Y/S254T/T256E；M428L/N434S；S267E/L328F；N325S/L328F；N297A；N297Q；N297G；L235E；L234A/L235A；F234A/L235A；P329A；P329G；L234A/L235A/P329G；H268Q/V309L/A330S/P331S；及V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S。

在一些實施態樣中，該多肽包含一CH3區，其包含下列胺基酸取代/胺基酸取代組合中之任一者(顯示於例如Ha et al., Front. Immnol (2016) 7:394之表1中，其藉由參照併入上文中)：T366W；T366S、L368A及Y407V；T366W及S354C；T366S、L368A、Y407V及Y349C；S364H及F405A；Y349T及T394F；T350V、L351Y、F405A及Y407V；T350V、T366L、K392L及T394W；K360D、D399M及Y407A；E345R、Q347R、T366V及K409V；K409D及K392D；D399K及E356K；K360E及K409W；Q347R、D399V及F405T；K360E、K409W及Y349C；Q347R、D399V、F405T及S354C；K370E及K409W；以及E357N、D399V及F405T。

在一些實施態樣中，該多肽之CH2及/或CH3區係包含一或多個胺基酸取代，用於促進該多肽與包含一CH2及/或CH3區之另一多肽的締合。

在一些實施態樣中，該多肽包含一免疫球蛋白輕鏈恆定序列之一或多個區。在一些實施態樣中，該多肽包含如本文所述之一CL區。

在一些實施態樣中，該多肽缺少一免疫球蛋白重鏈恆定序列之一或多個區。在一些實施態樣中，該多肽缺少一CH2區。在一些實施態樣中，該多肽缺少一CH3區。在一些實施態樣中，該多肽缺少一CH2區且亦缺少一CH3區。

在一些實施態樣中，本發明之多肽包含如下列中之一者從N-至C-端的一結構： (i) VH (ii) VL (iii) VH-CH1 (iv) VL-CL (v) VL-CH1 (vi) VH-CL (vii) VH-CH1-CH2-CH3 (viii) VL-CL-CH2-CH3 (ix) VL-CH1-CH2-CH3 (x) VH-CL-CH2-CH3

本發明亦提供包含本發明之多肽的抗原結合分子。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含下列多肽組合中之一者： (A) VH + VL (B) VH-CH1 + VL-CL (C) VL-CH1 + VH-CL (D) VH-CH1-CH2-CH3 + VL-CL (E) VH-CL-CH2-CH3 + VL-CH1 (F) VL-CH1-CH2-CH3 + VH-CL (G) VL-CL-CH2-CH3 + VH-CH1 (H) VH-CH1-CH2-CH3 + VL-CL-CH2-CH3 (I) VH-CL-CH2-CH3 + VL-CH1-CH2-CH3

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含多於一者的以上(A)至(I)中所示組合的一多肽。舉例而言，參照上述(D)，在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含二個包含結構VH-CH1-CH2-CH3的多肽，以及二個包含結構VL-CL的多肽。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含下列多肽組合中之一者： (J) VH (抗-VISTA) + VL (抗-VISTA) (K) VH (抗-VISTA)-CH1 + VL (抗-VISTA)-CL (L) VL (抗-VISTA)-CH1 + VH (抗-VISTA)-CL (M) VH (抗-VISTA)-CH1-CH2-CH3 + VL (抗-VISTA)-CL (N) VH (抗-VISTA)-CL-CH2-CH3 + VL ( 抗-VISTA)-CH1 (O) VL (抗-VISTA)-CH1-CH2-CH3 + VH (抗-VISTA)-CL (P) VL (抗-VISTA)-CL-CH2-CH3 + VH ( 抗-VISTA)-CH1 (Q) VH (抗-VISTA)-CH1-CH2-CH3 + VL (抗-VISTA)-CL-CH2-CH3 (R) VH (抗-VISTA)-CL-CH2-CH3 + VL (抗-VISTA)-CH1-CH2-CH3

其中：「VH (抗-VISTA)」係指一種如本文所述能夠對VISTA結合的抗原結合分子之VH，例如於(1)至(76)中的一者所定義；「VL (抗-VISTA)」係指一種如本文所述能夠對VISTA結合的抗原結合分子之VL，例如於(77)至(173)中的一者所定義。

在一些實施態樣中，該多肽包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：212至243、248至250、258、266或311至321中之一者的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。連接子及額外的序列

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子及多肽包含一鉸鏈區。在一些實施態樣中，一鉸鏈區係在一CH1區與一CH2區之間提供。在一些實施態樣中，一鉸鏈區係在一CL區與一CH2區之間提供。在一些實施態樣中，該鉸鏈區域包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：207之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子及多肽在胺基酸序列之間係包含一或多個連接子序列。可在該抗原結合分子/多肽的一VH、VL、CH1-CH2鉸鏈區、CH2區及一CH3區中之一或多者的一或兩端處提供一連接子序列。

連接子序列為熟習此藝者已知的，且係於例如Chen et al., Adv Drug Deliv Rev (2013) 65(10): 1357-1369中所述，其在此藉由參照全文併入本文。在一些實施態樣中，一連接子序列可為一撓性連接子序列。撓性連接子序列係允許該連接子序列所連接之胺基酸序列的相對移動。可撓性連接子為熟習此藝者已知的，且若干連接子於Chen et al., Adv Drug Deliv Rev (2013) 65(10): 1357-1369中被識別。撓性連接子序列常包含高比例之甘胺酸及/或絲胺酸殘基。

在一些實施態樣中，該連接子序列包含至少一甘胺酸殘基及/或至少一絲胺酸殘基。在一些實施態樣中，該連接子序列係由甘胺酸及絲胺酸殘基組成。在一些實施態樣中，連接子序列具有1-2、1-3、1-4、1-5或1-10個胺基酸的一長度。

本發明之抗原結合分子及多肽可額外包含另外的胺基酸或胺基酸序列。舉例而言，該等抗原結合分子及多肽可包含用以促進該抗原結合分子/多肽之表現、折疊、運輸、加工、純化或偵測的胺基酸序列。舉例而言，該抗原結合分子/多肽可包含編碼一His、(例如，6XHis)、Myc、GST、MBP、FLAG、HA、E或生物素標籤的一序列，任擇地於該抗原結合分子/多肽之N-或C-端處。在一些實施態樣中，該抗原結合分子/多肽包含一可偵測的部分，例如一螢光、發光、免疫可偵測的、放射、化學、核酸或酵素標記。

本發明之抗原結合分子及多肽可額外包含一訊息胜肽(亦稱為一前導序列或訊息序列)。訊息胜肽通常由5-30個疏水性胺基酸的一序列組成，其形成單個α螺旋。分泌的蛋白質及細胞表面表現的蛋白質通常包含訊息胜肽。

訊息胜肽可存在於抗原結合分子/多肽的N-端，以及可存在於新合成的抗原結合分子/多肽中。訊息胜肽為抗原結合分子/多肽提供有效的運輸及分泌。訊息胜肽通常藉由裂解來移除，且因此係不包含於從表現抗原結合分子/多肽的細胞所分泌的成熟抗原結合分子/多肽中。

已知許多蛋白質的訊息胜肽，且記錄於資料庫中，諸如GenBank、UniProt、Swiss-Prot、TrEMBL、Protein Information Resource、Protein Data Bank、Ensembl及InterPro，及/或可以被識別/預測，例如使用胺基酸序列分析工具，諸如SignalP (Petersen et al., 2011 Nature Methods 8: 785-786)或Signal-BLAST (Frank and Sippl, 2008 Bioinformatics 24: 2172-2176)。標記及共軛物

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子額外地包含一可偵測的部分。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一可偵測的部分，例如一螢光標記、磷光標記、發光標記、免疫可偵測的標記(例如，一表位標籤)、放射性標記、化學、核酸或酵素標記。該抗原結合分子可用該可偵測的部分予以共價或非共價地標記。

螢光標記包括例如螢光素、羅丹明(rhodamine)、別藻藍蛋白、曙紅及NDB、諸如銪(Eu)、鋱(Tb)及釤(Sm)之稀土族的綠色螢光蛋白(GFP)螯合物、四甲基羅丹明、德克薩斯紅(Texas Red)、4-甲基繖形酮、7-胺基-4-甲基香豆素、Cy3及Cy5。放射性標記包括放射同位素，諸如碘 ¹²³、碘 ¹²⁵、碘 ¹²⁶、碘 ¹³¹、碘 ¹³³、溴 ⁷⁷、鎝 ^99m、銦 ¹¹¹、銦 ^113m、鎵 ⁶⁷、鎵 ⁶⁸、釕 ⁹⁵、釕 ⁹⁷、釕 ¹⁰³、釕 ¹⁰⁵、汞 ²⁰⁷、汞 ²⁰³、錸 ^99m、錸 ¹⁰¹、錸 ¹⁰⁵、鈧 ⁴⁷、碲 ^121m、碲 ^122m、碲 ^125m、銩 ¹⁶⁵、銩 ¹⁶⁷、銩 ¹⁶⁸、銅 ⁶⁷、氟 ¹⁸、釔 ⁹⁰、鈀 ¹⁰⁰、鉍 ²¹⁷及銻 ²¹¹。發光標記包括如輻射發光、化學發光(例如，吖錠酯(acridinium ester)、發光胺(luminol)、異發光胺)及生物發光標記。免疫可偵測標記包括半抗原、胜肽/多肽、抗體、受體及配體，諸如生物素、抗生物素蛋白、鏈黴抗生物素蛋白或地谷新配質(digoxigenin)。核酸標記包括適體。酵素標記包括例如過氧化酶、鹼性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶及螢光素酶。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子與一化學部分軛接。該化學部分可為用以提供一治療效應的一部分。抗體-藥物共軛物於例如Parslow et al., Biomedicines. 2016 Sep; 4(3):14中被回顧。在一些實施態樣中，該化學部分可為一藥物部分(例如，一細胞毒性劑)。在一些實施態樣中，該藥物部分可為一化學治療劑。在一些實施態樣中，該藥物部分係選自於卡奇黴素(calicheamicin)、DM1、DM4、單甲基奧瑞他汀E (monomethylauristatin E) (MMAE)、單甲基奧瑞他汀F (monomethylauristatin F) (MMAF)、SN-38、多柔比星(doxorubicin)、倍癌黴素(duocarmycin)、D6.5及PBD。抗原結合分子之特定實例性實施態樣

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：212的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：213的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：214的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：215的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：216的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：217的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：218的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：219的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：220的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：221的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：222的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：223的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：224的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：225的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：226的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：227的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：228的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：229的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：230的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：231的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：232的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：233的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：234的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：235的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：236的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：237的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：238的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：239的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：240的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：241的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：242的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：243的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：248的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：250的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：249的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：250的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：258的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：250的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：266的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：250的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成： (i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：330的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：213的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。

在一些實施態樣中，抗原結合分子係由2021年5月7日所寄存為ATCC專利寄存號PTA-127063的細胞株之細胞生產，例如，如GB 2108446.2中所述，其在此藉由參照全文併入本文。抗原結合分子之功能性質

本文所述之抗原結合分子可參考某些功能性質予以特徵化。在一些實施態樣中，本文所述之抗原結合分子可擁有一或多種下列性質：對VISTA (例如，人類、鼠類及/或食蟹獼猴(cynomolgus macaque) VISTA)結合；不對PD-L1及/或HER3結合；不對Fcγ受體結合；不對C1q結合；不誘發ADCC；不誘發ADCP；不誘發CDC；對FcRn受體結合；對VISTA-表現細胞結合；抑制VISTA與一VISTA結合伙伴(例如PSGL-1、VSIG-3、VSIG-8或LRIG1)之間的交互作用；抑制VISTA-媒介之訊息傳導；獨立於Fc-媒介之功能而抑制VISTA-媒介之訊息傳導；增高VISTA-表現細胞之殺滅；不誘發/增高VISTA-表現細胞之殺滅；降低VISTA-表現細胞之數目/比例；不降低VISTA-表現細胞之數目/比例；增高作用免疫細胞的數目/活性；降低壓制型免疫細胞的數目/活性；降低壓制型免疫細胞增殖；減少VISTA-表現細胞媒介之免疫壓制；增高抗原呈現細胞之抗原呈現；增高免疫細胞的IL-6生產；增高混合淋巴球反應(MLR)檢定法中的IFN-γ、IL-2及/或IL-17生產；增高T細胞增殖、IFN-γ生產及/或TNFa生產；以及抑制活體內癌症的發展及/或進程，以及不誘發活體內細胞激素釋放症候群。

將瞭解，一給定抗原結合分子可顯示前述段落中明載之性質中之多於一者。一給定抗原結合分子可使用合適的檢定法來評鑑前述段落中明載之性質。該等檢定法可為例如活體外檢定法，其可為游離(cell-free)或以細胞為基之檢定法。替代地，該等檢定法可為例如活體內檢定法，亦即在非人類動物中施行。

檢定法為以細胞為基之檢定法時，其等可包含使細胞接觸一給定抗原結合分子，以便判定該抗原結合分子是否顯示明載之性質中的一或多者。檢定法可運用標記有可偵測實體的物種以便促進其等之偵測。檢定法可包含細胞在分開地以一範圍之數量/濃度的抗原結合分子處理之後(例如，一稀釋系列)，評鑑明載之性質。將瞭解，細胞較佳為表現VISTA之細胞，例如MDSC。

此等檢定法之結果的分析可包含判定達到最大相關活性位準的50%時之濃度。達到最大相關活性位準的50%的抗原結合分子濃度，可稱為抗原結合分子關於相關活性的「半最大有效濃度」，其亦可稱為「EC ₅₀」。作為例示，一給定抗原結合分子對VISTA結合的EC ₅₀，可為達成對相關物種結合之最大位準的50%時的濃度。

取決於性質，EC ₅₀亦可稱為「半最大抑制濃度」或「IC ₅₀」，此為觀察到一給定性質之最大抑制位準之50%時的抗原結合分子濃度。作為例示，一給定抗原結合分子抑制一VISTA與一VISTA交互作用伙伴(例如，LRIG1、PSGL-1、VSIG3或VSIG8)間之交互作用的IC ₅₀，可為達成最大抑制位準之50%時的濃度。

本文所述之抗原結合分子較佳顯示對VISTA有特異性結合。在本文中使用時，「特異性結合」係指就抗原具選擇性的結合，且其對非目標抗原之非特異性結合係可區別的。對一目標分子特異性結合的一抗原結合分子，比起它對其他非目標分子結合，係以更大的親和力、及/或更長的持續時間較佳地對該目標結合。

一給定多肽對一給定分子特異性結合的能力，係可藉由本技藝中已知方法的分析，諸如藉由ELISA、表面電漿子共振(SPR；參見例如Hearty et al., Methods Mol Biol (2012) 907:411-442)、生物層干涉術(參見例如Lad et al., (2015) J Biomol Screen 20(4): 498-507)、流式細胞分析術，或藉由一放射性標記抗原結合檢定法(RIA)酵素聯結免疫吸附檢定法來判定。對一給定分子的結合係可透過此等分析來量測及定量。在一些實施態樣中，結合可為在一給定檢定法中所偵測到的反應。

在一些實施態樣中，當例如藉由ELISA、SPR、生物層干涉術或藉由RIA量測時，該抗原結合分子對一非目標分子結合的程度係小於該抗體對該目標分子結合的程度之約10%。替代地，結合特異性可反映在結合親和力上，其中該抗原結合分子係以比該抗原結合分子對一非目標分子的解離常數(K _D)更大至少0.1量級(亦即，0.1 x 10 ⁿ，n為代表量級的整數)之K _D進行結合。此可任擇地為至少0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5或2.0中之一者。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子顯示有對人類VISTA、鼠類(例如，小鼠)VISTA及/或食蟹獼猴(Macaca fascicularis) VISTA的結合。亦即，在一些實施態樣中，該抗原結合分子為對人類VISTA及鼠類VISTA及/或食蟹獼猴VISTA有交叉反應性。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子與非人類靈長類動物之VISTA顯示出交叉反應性。VISTA於模型物種之交叉反應性係允許能以同基因型模型活體內探索功效而不倚賴代用分子。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子沒有顯示對PD-L1 (例如，人類PD-L1)的特異性結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子沒有顯示對HER3 (例如，人類HER3)的特異性結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子沒有顯示對B7蛋白質家族的另一成員的特異性結合(亦即，沒有交叉反應)。在一些實施態樣中，該抗原結合分子沒有顯示對PD-L1、PD-L2 CD80、CD86、ICOSLG、CD276、VTCN1、NCR3LG1、HHLA2及/或CTLA4的特異性結合。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子沒有顯示對PD-1、PD-L1、B7H3、VTCN1 (B7H4)、NCR3LG1 (B7H6)、HHLA2 (B7H7)及/或CTLA4的特異性結合。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能誘發一或多種Fc-媒介之功能(亦即，缺乏引發相關的Fc-媒介之功能的能力)。此等抗原結合分子可描述為沒有相關功能。

如上文所解釋，一不誘發(亦即，不能誘發)ADCC/ADCP/CDC之Fc區/抗原結合分子，例如由一適當的相關活性檢定法予以分析判定時，實質上沒有引發ADCC/ADCP/CDC活性。相似地，一「不結合」參考蛋白(例如，一給定Fc受體或補體蛋白)的抗原結合分子，於一適當的檢定法中，實質上不顯示對該參考蛋白之結合。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能誘發ADCC。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能誘發ADCP。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能誘發CDC。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能誘發ADCC及/或不能誘發ADCP及/或不能誘發CDC。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能對Fc受體結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能對Fcγ受體結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能對FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb中之一或多者結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能對FcγRIIIa結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能對FcγRIIa結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能對FcγRIIb結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子對FcRn結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能對補體蛋白結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能對C1q結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子在對應於N297之胺基酸殘基處不被醣化。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子對人類VISTA、鼠類VISTA及/或食蟹獼猴VISTA結合；且不結合PD-L1、PD-1、B7H3、VTCN1 (B7H4)、NCR3LG1 (B7H6)、HHLA2 (B7H7)及/或CTLA4 (例如，人類PD-L1/PD-1/B7H3/VTCN1/NCR3LG1/HHLA2/CTLA4)。

在一些實施態樣中，根據本揭露內容之抗原結合分子，以在微莫耳範圍內之親和力對VISTA結合，亦即，K _D= 9.9 x 10 ^-4至1 x 10 ^-6M。在一些實施態樣中，抗原結合分子以亞微莫耳親和力對VISTA結合，亦即，K _D＜ 1 x 10 ^-6M。在一些實施態樣中，抗原結合分子以在奈米莫耳範圍內之親和力對VISTA結合，亦即，K _D= 9.9 x 10 ^-7至1 x 10 ^-9M。在一些實施態樣中，抗原結合分子以亞奈米莫耳親和力對VISTA結合，亦即，K _D＜ 1 x 10 ^-9M。在一些實施態樣中，抗原結合分子以在亞皮莫耳(sub-picomolar)範圍內之親和力對VISTA結合，亦即，K _D= 9.9 x 10 ^-10至1 x 10 ^-12M。在一些實施態樣中，抗原結合分子以亞皮莫耳親和力對VISTA結合，亦即，K _D＜ 1 x 10 ^-12M。

在一些實施態樣中，本文所述之抗原結合分子以10 µM或更小的K _D，較佳為≤5 µM、≤2 µM、≤1 µM、≤500 nM、≤100 nM、≤75 nM、≤50 nM、≤40 nM、≤30 nM、≤20 nM、≤15 nM、≤12.5 nM、≤10 nM、≤9 nM、≤8 nM、≤7 nM、≤6 nM、≤5 nM、≤4 nM≤3 nM、≤2 nM、≤1 nM或≤500 pM中之一者，對VISTA (例如，人類VISTA、小鼠VISTA)結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係以K _D= ≤10 nM、≤9 nM、≤8 nM、≤7 nM或≤6 nM、≤5 nM、≤4 nM、≤3 nM、≤2 nM或≤1 nM之親和力，對VISTA (例如，人類VISTA、小鼠VISTA)結合。在一些實施態樣中，抗原結合分子係以K _D= ≤500 pM、≤100 pM、≤90 pM、≤80 pM、≤70 pM或≤60 pM、≤50 pM、≤40 pM、≤30 pM、≤20 pM、≤10 pM、≤9 pM、≤8 pM、≤7 pM或≤6 pM、≤5 pM、≤4 pM、≤3 pM、≤2 pM或≤1 pM之親和力，對VISTA (例如，人類VISTA、小鼠VISTA)結合。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之抗原結合分子，以≤1 nM (例如，≤900 pM、≤800 pM、≤700 pM、≤600 pM、≤500 pM、≤400 pM、≤300 pM中之一者)之K _D對VISTA結合(例如，由SPR (Biocore)分析所判定，例如，如本揭露內容之實施例中所述的SPR分析)。

在一些實施態樣中，根據本揭露內容之抗原結合分子，以≤1 nM (例如，≤900 pM、≤800 pM、≤700 pM、≤600 pM、≤500 pM中之一者)之K _D對人類VISTA結合(例如，由SPR (Biocore)分析所判定，例如，如本揭露內容之實施例中所述的SPR分析)。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之抗原結合分子，以≤1 nM (例如，≤900 pM、≤800 pM、≤700 pM、≤600 pM、≤500 pM、≤400 pM中之一者)之K _D對食蟹獼猴VISTA結合(例如，由SPR (Biocore)分析所判定，例如，如本揭露內容之實施例中所述的SPR分析)。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之抗原結合分子，以≤1 nM (例如，≤900 pM、≤800 pM、≤700 pM、≤600 pM、≤500 pM、≤400 pM中之一者)之K _D對大鼠VISTA結合(例如，由SPR (Biocore)分析所判定，例如，如本揭露內容之實施例中所述的SPR分析)。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之抗原結合分子以≤1 nM (例如，≤900 pM、≤800 pM、≤700 pM、≤600 pM中之一者)之K _D對小鼠VISTA結合(例如，由SPR (Biocore)分析所判定，例如，如本揭露內容之實施例中所述的SPR分析)。

在一些實施態樣中，根據本揭露內容之抗原結合分子，以1 µM或更小的EC ₅₀對VISTA結合(例如，由ELISA所判定，例如，如本揭露內容之實例中所述的ELISA)，例如≤500 nM、≤100 nM、≤50 nM、≤40 nM、≤30 nM、≤20 nM、≤10 nM、≤5 nM、≤4 nM ≤3 nM、≤2 nM、≤1 nM、≤500 pM、≤400 pM、≤300 pM、≤200 pM、≤100 pM、≤50 pM、≤40 pM、≤30 pM、≤20 pM、≤15 pM、≤10 pM、≤5 pM或≤1 pM中之一者。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子顯示對人類VISTA、鼠類(例如，小鼠)VISTA、大鼠VISTA及/或食蟹獼猴(Macaca fascicularis) VISTA之結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子結合人類VISTA及小鼠VISTA及大鼠VISTA及食蟹獼猴VISTA。在一些實施態樣中，該抗原結合分子對人類VISTA及小鼠VISTA及大鼠VISTA及食蟹獼猴VISTA有交叉反應性。在一些實施態樣中，本揭露內容之抗原結合分子顯示對非人類靈長類動物之VISTA有交叉反應性。VISTA於模型物種之交叉反應性係允許能以同基因型模型活體內探索功效而不倚賴代用分子。

在一些實施態樣中，根據本揭露內容之抗原結合分子以≤20 pM (例如，≤15 pM、≤12.5 pM、≤10 pM、≤7.5 pM中之一者)之EC ₅₀(例如，由ELISA所判定，例如，如本揭露內容之實施例中所述的ELISA)對人類VISTA結合。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之抗原結合分子以≤50 pM (例如，≤25 pM、≤20 pM、≤15 pM中之一者)之EC ₅₀(例如，由ELISA所判定，例如，如本揭露內容之實施例中所述的ELISA)對食蟹獼猴VISTA結合。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之抗原結合分子以≤20 pM (例如，≤15 pM、≤12.5 pM、≤10 pM、≤7.5 pM中之一者)之EC ₅₀(例如，由ELISA所判定，例如，如本揭露內容之實施例中所述的ELISA)對大鼠VISTA結合。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之抗原結合分子以≤20 pM (例如，≤15 pM、≤12.5 pM、≤10 pM、≤7.5 pM、≤5 pM中之一者)之EC ₅₀(例如，由ELISA所判定，例如，如本揭露內容之實施例中所述的ELISA)對小鼠VISTA結合。

在一些實施態樣中，根據本揭露內容之抗原結合分子在pH 5.5至pH 7.5下以相似之親和力對VISTA (例如，人類VISTA)結合。舉例而言，在一些實施態樣中，該抗原結合分子顯示在pH 5.5下對VISTA的親和力相似於在pH 7.5下對VISTA的親和力。

在本文中，「相似」於一參考結合親和力的一結合親和力意謂：一結合親和力其在可比配之條件下所判定係在該參考結合親和力之50%內，例如在40%、45%、30%、25%、20% 19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%中之一者內。

與VISTA (例如，人類VISTA)結合之K _D在pH從5.5至pH 7.5可為相似。與VISTA (例如，人類VISTA)結合之EC ₅₀在pH從5.5至pH 7.5可為相似。

在本文中，對一參考值「相似」的一K _D或EC ₅₀值可為該參考值的≥0.5倍且≤2倍，例如，≥0.7倍且≤1.5倍、≥0.75倍且≤1.25倍、≥0.8倍且≤1.2倍、≥0.85倍且≤1.15倍、≥0.9倍且≤1.1倍、≥0.91倍且≤1.09倍、≥0.92倍且≤1.08倍、≥0.93倍且≤1.07倍、≥0.94倍且≤1.06倍、≥0.95倍且≤1.05倍、≥0.96倍且≤1.04倍、≥0.97倍且≤1.03倍、≥0.98倍且≤1.02倍、或≥0.99倍且≤1.01倍中之一者。

本發明之抗原結合分子可對VISTA的特定屬意區結合。根據本域之抗原結合分子的抗原結合區可結合由相連的胺基酸序列組成(亦即，胺基酸一級序列)之VISTA的線性表位。在一些實施態樣中，該抗原結合區分子可結合由胺基酸序列之不連續序列的胺基酸組成之VISTA的構形表位。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠對VISTA結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠在VISTA之細胞外區中對VISTA結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對VISTA於Ig樣V型域(例如，SEQ ID NO：6中所示的區)結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對VISTA於SEQ ID NO：31中所示的區結合。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一多肽結合，該多肽包含SEQ ID NO：6中所示的胺基酸序列或由其所組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一多肽結合，該多肽包含SEQ ID NO：31中所示的胺基酸序列或由其所組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一胜肽或多肽結合，該胜肽或多肽包含SEQ ID NO：322中所示的胺基酸序列或由其所組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一胜肽或多肽結合，該胜肽或多肽包含SEQ ID NO：26中所示的胺基酸序列或由其所組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一胜肽或多肽結合，該胜肽或多肽包含SEQ ID NO：27中所示的胺基酸序列或由其所組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一胜肽或多肽結合，該胜肽或多肽包含SEQ ID NO：28中所示的胺基酸序列或由其所組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一胜肽或多肽結合，該胜肽或多肽包含SEQ ID NO：29中所示的胺基酸序列或由其所組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一胜肽或多肽結合，該胜肽或多肽包含SEQ ID NO：30中所示的胺基酸序列或由其所組成。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子不結合至被IGN175A (例如於WO 2014/197849 A2中所述)所結合的VISTA之區。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不結合至被包含有由SEQ ID NO：267序列組成之一多肽及由SEQ ID NO：268序列組成之一多肽的一抗原結合分子所結合的VISTA之區。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子不與IGN175A (例如於WO 2014/197849 A2中所述)競爭對VISTA的結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不與包含有由SEQ ID NO：267序列組成之一多肽及由SEQ ID NO：268序列組成之一多肽的一抗原結合分子競爭對VISTA的結合。

一給定抗原結合分子與IGN175A或包含由SEQ ID NO：267序列組成之一多肽及由SEQ ID NO：268序列組成之一多肽的一抗原結合分子競爭對VISTA結合的能力，可以例如藉由競爭ELISA、或藉由依表位分箱(epitope binning)來分析，如Abdiche et al., J Immunol Methods (2012) 382(--2):101-116中所述(其在此藉由參照全文併入本文)。表位分箱可例如藉由BLI分析來施行，例如，如本申請案的實施例8中所述。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能夠對由SEQ ID NO：275中所示的胺基酸序列所組成的一胜肽結合。

一抗原結合分子對一給定之胜肽/多肽結合的能力，係可藉由熟習此藝者所熟知的方法來分析，包括藉由ELISA、免疫墨點法(例如，西方墨點法)、免疫沉澱法、表面電漿子共振法及生物層干涉術的分析。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠結合至一抗體所結合VISTA區的相同VISTA之區或一重疊的VISTA之區，該抗體包含殖株4M2-C12、4M2-B4、4M2-C9、4M2-D9、4M2-D5、4M2-A8、V4H1、V4H2、V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31、2M1-B12、2M1-D2、1M2-D2、13D5p、13D5-1、13D5-13、5M1-A11或9M2-C12中之一者的VH及VL序列。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一VISTA區結合，該區不同於被IGN175A (描述於例如WO 2014/197849 A2中)所結合之VISTA區。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一VISTA區結合，該區不同於被包含有由SEQ ID NO：267序列組成之一多肽及由SEQ ID NO：268序列組成之一多肽的一抗原結合分子所結合之VISTA區。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一VISTA區結合，該區與IGN175A (描述於例如WO 2014/197849 A2中)所結合之VISTA區不是重疊的。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對一VISTA區結合，該區不與被包含有由SEQ ID NO：267序列組成之一多肽及由SEQ ID NO：268序列組成之一多肽的一抗原結合分子所結合之VISTA區重疊。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子透過接觸VISTA的殘基而對VISTA結合，該等殘基非相同於被VSTB112 (例如，於WO 2015/097536 A2中所述)所接觸VISTA的殘基。在一些實施態樣中，該抗原結合分子透過接觸VISTA的殘基而對VISTA結合，該等殘基非相同於被包含有由SEQ ID NO：269序列組成之一多肽及由SEQ ID NO：270序列組成之一多肽的一抗原結合分子所結合之VISTA區的殘基。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子之表位非相同於VSTB112之表位。在一些實施態樣中，該抗原結合分子之表位非相同於包含有由SEQ ID NO：269序列組成之一多肽及由SEQ ID NO：270序列組成之一多肽的一抗原結合分子之表位。

在一些實施態樣中，在VISTA表現於細胞表面(亦即，在細胞膜中或在細胞膜)時，本發明之抗原結合分子係對VISTA結合在一抗原結合分子(亦即，細胞外抗原結合分子)可接近的區中。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠對表現VISTA的一細胞之細胞表面處所表現的VISTA結合。於一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠結合VISTA-表現細胞(例如，CD14+單核球(諸如，單核球衍生的壓制型細胞(MDSC))及/或CD33+骨髓細胞、腫瘤相關聯巨噬細胞(TAM)及嗜中性球)。

可以分析抗原結合分子對一給定細胞類型結合的能力，其係藉由接觸帶有抗原結合分子的細胞，以及例如在移除未結合之抗原結合分子的一清洗步驟之後，偵測對細胞結合的抗原結合分子。一抗原結合分子對表現免疫細胞表面分子的細胞及/或表現癌細胞抗原的細胞結合的能力，可以藉由諸如流式細胞分析術及免疫螢光顯微鏡術的方法予以分析。

本發明之抗原結合分子可為VISTA之拮抗劑。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠抑制VISTA及/或一VISTA結合伙伴(例如，PSGL-1、VSIG-3、VSIG-8、LRIG1)所媒介之一功能或過程(例如，交互作用、訊息傳導或其他活性)。本文中，「抑制」係指相對於一控制條件的一降低、減少或減輕。抑制一給定交互作用/活性/過程之一抗原結合分子，可稱為交互作用/活性/過程的抑制劑或拮抗劑，且可謂「阻斷」或「中和」該交互作用/活性/過程。

本文所述之VISTA-結合抗原結合分子能藉由不需要Fc-媒介之功能，諸如ADCC、ADCP及CDC，的一機制來抑制VISTA-媒介之功能/過程。亦即，本文所述之VISTA-結合抗原結合分子能在不需要引發ADCC、ADCP及/或CDC的情況下抑制VISTA-表現細胞之免疫壓制性活性。

特定而言，本文所述之VISTA-結合抗原結合分子能經由不需要對Fcγ受體結合及/或對C1q結合之一機制來抑制VISTA。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠抑制VISTA與一VISTA結合/交互作用伙伴(例如，PSGL-1、VSIG-3、VSIG-8、LRIG1)之間的交互作用。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠抑制VISTA與PSGL-1之間的交互作用。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠抑制VISTA與VSIG-3之間的交互作用。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠抑制VISTA與LRIG1之間的交互作用。

一抗原結合分子抑制二因子之間交互作用的能力，可例如在該抗體/片段存在下，或用該抗體/片段孵化該等交互作用伙伴中之一或兩者之後，藉由分析交互作用來判定。判定一給定抗原結合分子是否能夠抑制二交互作用伙伴間之交互作用的檢定法，係包括競爭ELISA檢定法及藉由SPR之分析。

能夠抑制一給定(例如，VISTA與一VISTA結合伙伴之間的)交互作用之一抗原結合分子，係藉由觀察，當與在抗原結合分子不存在下(或在適當的對照抗原結合分子存在下)的交互作用位準相比時，交互作用伙伴之間的交互作用位準在抗原結合分子存在下(或在交互作用伙伴中之一或兩者與抗原結合分子一起培育之後)的降低/減少來識別。合適的分析能例如使用重組型交互作用伙伴或使用表現交互作用伙伴的細胞在活體外施行。表現交互作用伙伴的細胞可內生地如此進行，或可由導入該細胞的核酸如此進行。出於此等分析之目的，交互作用伙伴中之一或兩者及/或抗原結合分子可標記或結合使用一可偵測實體，供用於偵測及/或量測交互作用位準的目的。

抗原結合分子抑制二結合伙伴間之交互作用的能力，亦可以藉由分析此等交互作用的下游功能結果來判定。舉例而言，VISTA與一VISTA結合伙伴間之交互作用的下游功能結果可包括VISTA-媒介之訊息傳導。舉例而言，抗原結合分子抑制VISTA與一VISTA結合伙伴間之交互作用的能力，可以藉由分析MLR檢定法中IL-2、IFN-γ及/或IL-17之生產來判定。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠抑制VISTA及一VISTA結合伙伴(例如，PSGL-1、VSIG-3、VSIG-8、LRIG1)間之交互作用，達到比在抗原結合分子不存在的情況下(或在適當的對照抗原結合分子存在的情況下)VISTA與VISTA結合伙伴間之交互作用位準更低少於1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍、或≤0.01倍。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子抑制VISTA-媒介之訊息傳導。在一些實施態樣中，VISTA-媒介之訊息傳導可為由包含VISTA之一多肽複合物所媒介之訊息傳導。在一些實施態樣中，VISTA-媒介之訊息傳導可為由包含VISTA及一VISTA交互作用伙伴(例如，LRIG1、VSIG3、PSGL-1、VSIG8)的一多肽複合物所媒介之訊息傳導。VISTA-媒介之訊息傳導可例如使用作用免疫細胞數目/活性檢定法來分析，諸如本文的實驗實施例中所述之MLR分析。抑制VISTA-媒介之訊息傳導可藉由偵測作用免疫細胞數目及/或活性之增高來識別，如由例如IL-2、IFN-γ及/或IL-17生產之增高來判定。

抗原結合分子抑制VISTA與一VISTA交互作用伙伴之間的交互作用的能力，可以例如藉由在該抗原結合分子存在下，或在交互作用伙伴中之一或兩者與該抗原結合分子一起培育之後，分析交互作用來判定。用於判定一給定抗原結合分子是否能夠抑制一VISTA與一VISTA交互作用伙伴間之交互作用的分析法包括競爭ELISA檢定法及藉由SPR之分析。

能夠抑制VISTA與一VISTA交互作用伙伴間之交互作用的一抗原結合分子，可藉由觀察，當與在抗原結合分子不存在下(或在已知不抑制此等交互作用的適當的對照抗原結合分子存在下)的交互作用位準相比時，交互作用伙伴之間的交互作用位準在抗原結合分子存在下(或在交互作用伙伴中之一或兩者與該抗原結合分子一起培育之後)的降低/減少來識別。合適的分析能例如使用重組型交互作用伙伴或使用表現交互作用伙伴的細胞在活體外施行。表現交互作用伙伴的細胞可內生地如此進行，或可由導入該細胞的核酸如此進行。出於此等分析之目的，交互作用伙伴中之一或兩者及/或抗原結合分子可標記或結合使用一可偵測實體，供用於偵測及/或量測交互作用位準的目的。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子能藉由不需要或涉及Fc-媒介之功能的一機制來抑制VISTA-媒介之訊息傳導。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能獨立於Fc-媒介之功能來抑制VISTA-媒介之訊息傳導。亦即，在一些實施態樣中，該抗原結合分子能以非Fc區依賴型方式抑制VISTA-媒介之訊息傳導。

抗原結合分子藉由不需要/涉及Fc-媒介之功能的一機制來抑制VISTA-媒介之訊息傳導的能力，可以例如藉由分析以缺乏功能性Fc區的型式提供之抗原結合分子抑制VISTA-媒介之訊息傳導的能力來評鑑。舉例而言，能使用包含「靜默」Fc區(例如，包含LALA PG取代)的抗原結合分子，或使用以缺乏Fc區的型式提供之的抗原結合分子(例如，scFv、Fab等)來研究對於VISTA-媒介之訊息傳導的效應。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子能藉由不涉及ADCC之一機制來抑制VISTA-媒介之訊息傳導。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能藉由不涉及ADCP之一機制來抑制VISTA-媒介之訊息傳導。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能藉由不涉及CDC之一機制來抑制VISTA-媒介之訊息傳導。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子能藉由不需要該抗原結合分子對Fc受體結合之一機制來抑制VISTA-媒介之訊息傳導。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能藉由不需要該抗原結合分子對Fcγ受體結合之一機制來抑制VISTA-媒介之訊息傳導。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能藉由不需要該抗原結合分子對FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb中之一或多者結合之一機制來抑制VISTA-媒介之訊息傳導。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能藉由不需要對FcγRIIIa結合之一機制來抑制VISTA-媒介之訊息傳導。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能藉由不需要對FcγRIIa結合之一機制來抑制VISTA-媒介之訊息傳導。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能藉由不需要對FcγRIIb結合之一機制來抑制VISTA-媒介之訊息傳導。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能藉由不需要對補體蛋白結合之一機制來抑制VISTA-媒介之訊息傳導。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能藉由不需要對C1q結合之一機制來抑制VISTA-媒介之訊息傳導。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能藉由不需要N297醣基化之一機制來抑制VISTA-媒介之訊息傳導。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能增高VISTA-表現細胞之殺滅。可透過該抗原結合分子之一作用功能來增強VISTA-表現細胞之殺滅。在抗原結合分子包含Fc區的實施態樣中，該抗原結合分子可透過下列中之一或多者來增高VISTA-表現細胞的殺滅：補體依賴型細胞毒性(CDC)、抗體依賴型細胞媒介細胞毒性(ADCC)及抗體依賴型細胞吞噬作用(ADCP)。

在一適當的檢定法中，能夠增高VISTA-表現細胞之殺滅的一抗原結合分子係能在該抗原結合分子存在下──或用該抗原結合分子培育VISTA-表現細胞之後──藉由觀察到VISTA-表現細胞之一增高的殺滅位準來識別，如相較於該抗原結合分子不存在下(或在一適當的控制抗原結合分子存在下)所偵測到的細胞殺滅位準。CDC、ADCC及ADCP之分析法為熟習此藝者熟知的。VISTA-表現細胞之殺滅位準亦可以在暴露於不同的處理條件後，藉由量測活的及/或非活的VISTA-表現細胞之數目/比例來判定。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠增高VISTA-表現細胞(例如，VISTA-表現MDSC)之殺滅，達到比抗原結合分子不存在下(或在適當的對照抗原結合分子存在下)所觀察到的殺滅位準的1倍更多，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子在一可比配之檢定法中能夠降低VISTA-表現細胞(例如，VISTA-表現MDSC)之數目，達到比在抗原結合分子不存在的情況下培育後(或在適當的對照抗原結合分子存在的情況下培育後)所偵測到的VISTA-表現細胞(例如，VISTA-表現MDSC、TAM、嗜中性球)之數目更少小於1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍、或≤0.01倍。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子為一非耗乏性抗原結合分子。亦即，在一些實施態樣中，該抗原結合分子不會造成VISTA-表現細胞的實質上耗乏。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不會引發/增高對VISTA-表現細胞之ADCC、ADCP及/或CDC。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子不誘發/增高VISTA-表現細胞之殺滅，例如在缺乏Fc區的抗原結合分子之實施態樣中，或在該抗原結合分子包含不能誘發Fc-媒介的抗體作用功能之Fc區的實施態樣中。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子不降低VISTA-表現細胞之數目/比例。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子(i)抑制VISTA-媒介之訊息傳導，及(ii)不誘發/增高VISTA-表現細胞之殺滅。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子(i)抑制VISTA-媒介之訊息傳導，及(ii)不降低VISTA-表現細胞之數目/比例。

這可能是特別有利的，因為VISTA被不期望耗乏的細胞所表現。舉例而言，免疫細胞(例如，某些類型的T細胞及樹突細胞)表現低位準的VISTA而其等之殺滅或數目/比例之降低是不期望的。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子，例如在適當的活體外檢定法中或在活體內，相對於陰性對照條件，能夠增高作用免疫細胞的數目及/或活性。作為解釋，本發明之抗原結合分子可能能夠解除作用免疫細胞免於MDSC所媒介之作用免疫細胞增殖及功能的壓制。在一些實施態樣中，作用免疫細胞可能為例如CD8+ T細胞、CD8+細胞毒性T淋巴細胞(CD8+ CTL)、CD4+ T細胞、CD4+ T輔助細胞、NK細胞、IFNγ-生產細胞、記憶T細胞、中央記憶T細胞、具抗原經驗T細胞或CD45RO+ T細胞。

細胞數目及比例可例如藉由使用允許偵測細胞類型之抗體的流式細胞分析術分析來判定。細胞分裂可例如藉由活體外分析 ³H-胸苷之併入或藉由CFSE稀釋檢定法來分析，如Fulcher and Wong, Immunol Cell Biol (1999) 77(6): 559-564中所述，其在此藉由參照全文併入本文。作用免疫細胞活性可藉由量測此等活性的互相關聯值來判定。在一些實施態樣中，作用免疫細胞活性可例如藉由IL-2、IFN-γ及/或IL-17生產之分析來判定。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠增高作用免疫細胞類型之數目，達到比抗原結合分子不存在下(或在適當的對照抗原結合分子存在下)所觀察到之數目的1倍更多，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠增高作用免疫細胞活性互相關聯值之位準，達到比在抗原結合分子不存在下(或在適當的對照抗原結合分子存在下)所觀察到之位準的1倍更多，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠減少VISTA-表現細胞所媒介之免疫壓制位準。免疫壓制位準的改變可使用用以量測VISTA-表現細胞之精胺酸酶1之表現及/或反應性氧物種(ROS)之生產的方法來判定，例如於Ochoa et al., Ann Surg. 2001 Mar; 233(3): 393-399 and Dikalov and Harrison Antioxid Redox Signal. 2014 Jan 10; 20(2): 372-382中所述。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠增高抗原呈現細胞之抗原呈現，例如，如使用合適的抗原呈現檢定法所判定。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠增高吞噬細胞(例如，嗜中性球、單核球、巨噬細胞、肥大細胞及/或樹突細胞)之胞噬作用，例如，如使用合適的胞噬作用位準檢定法所判定。

在一些實施態樣中，本揭露內容之抗原結合分子例如在適當的活體外檢定法中或在活體內(例如，在腫瘤中)，相對於陰性對照條件，能夠增高抗原呈現細胞(例如，CD11b+ MHCII+細胞)之數目及/或活性。在一些實施態樣中，該抗原結合分子例如在適當的活體外檢定法中或在活體內(例如，在腫瘤中)，相對於陰性對照條件，能夠增高巨噬細胞(例如，CD11b+ F4/80+細胞)之數目及/或活性。在一些實施態樣中，該抗原結合分子例如在適當的活體外檢定法中或在活體內(例如，在腫瘤中)，相對於陰性對照條件，能夠增高樹突細胞(例如，CD11c+細胞)之數目及/或活性。

在一些實施態樣中，本揭露內容之抗原結合分子能夠增高前述段落中明載之細胞類型之數目，達到比在抗原結合分子不存在下(或在適當的對照抗原結合分子存在下)所觀察到之數目的1倍更多，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍。在一些實施態樣中，本揭露內容之抗原結合分子能夠增高前述段落中明載之細胞類型之活性互相關聯值之位準，達到比在抗原結合分子不存在下(或在適當的對照抗原結合分子存在下)所觀察到之位準的1倍更多，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠增高免疫細胞的IL-6生產。該等免疫細胞可為例如PBMC、淋巴細胞、T細胞、B細胞、NK細胞或單核球。在一些實施態樣中，該等免疫細胞為單核球。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠增高免疫細胞於例如用LPS刺激後的IL-6生產。抗原結合分子增高免疫細胞的IL-6生產之能力可以活體外檢定法來分析，例如，如本文的實施例10中所述。此等方法可包含用LPS刺激單核球(例如，THP1細胞)，以及用該抗原結合分子培育經刺激的細胞。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠增高免疫細胞(例如，LPS-刺激的THP1細胞)的IL-6生產，達到比在抗原結合分子不存在下(或在適當的對照抗原結合分子存在下)所觀察到之位準的1倍更多，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍。

在一些實施態樣中，本揭露內容之抗原結合分子能夠增加Th1/Th17細胞之數目及/或活性。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠向上調節Th1/Th17反應。在一些實施態樣中，該抗原結合分子有利於Th1/Th17反應優於Th2反應。在一些實施態樣中，於一混合淋巴球反應(MLR)檢定法中，本揭露內容之抗原結合分子能夠提高T細胞增殖、IL-2生產、IFN-γ生產、TNFα生產及/或IL-17A生產。MLR檢定法可如Bromelow et al J.Immunol Methods, 2001 Jan 1;247(1-2):1-8(其在此藉由參照全文併入本文)中所述，或是如本文的實驗實施例中所述者來施行。IL-2、IFNγ及/或IL-17生產可藉由例如熟習此藝者熟知的方法來分析，諸如西方墨點法、免疫組織化學法、免疫細胞化學法、流式細胞分析術、ELISA、ELISPOT或以報導者為基的方法。

在一些實施態樣中，一混合淋巴球反應(MLR)檢定法中，本發明之抗原結合分子能夠增高T細胞(例如，Th1/Th17細胞)增殖、IL-2生產、IFN-γ生產及/或IL-17生產。MLR檢定法可如Bromelow et al J.Immunol Methods, 2001 Jan 1;247(1-2):1-8(其在此藉由參照全文併入本文)中所述，或是如本文的實驗實施例中所述者來施行。IL-2、IFNγ及/或IL-17生產可藉由例如熟習此藝者熟知的方法來分析，諸如西方墨點法、免疫組織化學法、免疫細胞化學法、流式細胞分析術、ELISA、ELISPOT或以報導者為基的方法。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子於MLR檢定法中能夠增高T細胞增殖、IL-2生產、IFN-γ生產及/或IL-17生產，達到比在抗原結合分子不存在下(或在適當的對照抗原結合分子存在下)所觀察到之位準的1倍更多，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子例如在VISTA/表現VISTA之細胞存在下能夠增高T細胞增殖、IFN-γ生產及/或TNFa生產。抗原結合分子可例如於活體外檢定法中評鑑此等性質，如本文的實驗實施例中所述。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠增高T細胞(例如，Th1/Th17細胞)增殖、IFN-γ生產及/或TNFa生產(例如，在VISTA/表現VISTA之細胞存在下)，達到比在抗原結合分子不存在下(或在適當的對照抗原結合分子存在下)所觀察到之位準的1倍更多，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠將T細胞(例如，CD4+ T細胞及/或CD8+ T細胞，例如Th1/Th17)增殖增高至比先前技術中所揭露的VISTA-結合抗體(例如，VSTB112，例如於WO 2015/097536 A2中所述)更大的程度。T細胞增殖可以活體外檢定法來評鑑，例如本文實施例9中所述，且可涉及藉由在促效劑抗-CD3抗體存在下培養來刺激T細胞增殖。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子於此檢定法中能夠增高T細胞增殖，達到比先前技術VISTA-結合抗體(例如，VSTB112)所誘發之增殖位準的1倍更多，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍。

在一些實施態樣中，本揭露內容之抗原結合分子能夠增高T細胞-媒介之癌細胞溶解，達到比在抗原結合分子不存在的情況下(或在適當的對照抗原結合分子存在的情況下)所觀察到之位準的1倍更多，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍。

在一些實施態樣中，本揭露內容之抗原結合分子，例如在VISTA/表現VISTA之細胞存在下，能夠增高T細胞-媒介之癌細胞溶解。抗原結合分子可例如於活體外檢定法中評鑑此等性質，如本文的實驗實施例中所述。

在一些實施態樣中，本揭露內容之抗原結合分子能夠增高T細胞-媒介之溶解(例如，在VISTA/表現VISTA之細胞存在下)，達到比在抗原結合分子不存在下(或在適當的對照抗原結合分子存在下)所觀察到之位準的1倍更多，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠增高THP1細胞的IL-6生產達到比先前技術中所揭露的VISTA-結合抗體(例如，VSTB112，例如於WO 2015/097536 A2中所述)更大的程度。THP1細胞的IL-6生產可活體外檢定法來評鑑，例如本文實施例10中所述，且可涉及用LPS刺激THP1細胞。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子於此等檢定法中能夠增高IL-6生產，達到比先前技術VISTA-結合抗體(例如，VSTB112)所誘發之位準的1倍更多，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子例如在適當的活體外檢定法中或在活體內，相對於陰性對照條件，能夠：降低壓制型免疫細胞的數目及/或活性、抑制壓制型免疫細胞的增殖，及/或降低壓制型免疫細胞在一細胞族群(例如，CD45+細胞，例如從腫瘤獲得的CD45+細胞)中的比例。

壓制型免疫細胞可以為例如VISTA-表現細胞、Arg1-表現細胞、MDSC、顆粒球性MDSC (g-MDSC)或單核球性MDSC (m-MDSC)。在一些實施態樣中，壓制型免疫細胞為CD11b+ GR1+ MHCII-細胞。

在一些實施態樣中，數目/活性/增殖/比例上的降低係達到比在抗原結合分子不存在下(或在適當的對照抗原結合分子存在下)所觀察到之數目/活性/增殖/比例的1倍更少，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍、或≤0.01倍。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子能藉由不涉及Fc-媒介之功能的一機制來降低壓制型免疫細胞的數目/活性/增殖/比例。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能獨立於Fc-媒介之功能(亦即，以非Fc區依賴型方式)而降低壓制型免疫細胞的數目/活性/增殖/比例。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能藉由不涉及ADCC、ADCP及/或CDC的一機制來降低壓制型免疫細胞的數目/活性/增殖/比例。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能藉由不涉及耗乏VISTA-表現細胞的一機制來降低壓制型免疫細胞的數目/活性/增殖/比例。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係活體內抑制癌症的發展及/或進程。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子例如藉由作用免疫細胞，造成殺滅癌細胞之一增強。在一些實施態樣中，例如在與一適當的控制條件相比之下，該抗原結合分子係活體內造成癌細胞之數目的降低。在一些實施態樣中，該抗原結合分子抑制了腫瘤生長，例如，藉由量測腫瘤隨著時間推移的大小/體積所判定。

於一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠在以該抗原結合分子治療的小鼠內使IFN-γ及/或IL-23的血清位準增高。IFN-γ及/或IL-23的血清位準能例如藉由從小鼠獲得的血液樣本衍生的血清的ELISA來分析。在一些實施態樣中，投與本發明之抗原結合分子增高IFN-γ及/或IL-23的血清位準，達到比在沒有投與抗原結合分子下所觀察到之位準(或在投與適當的對照抗原結合分子之後所觀察到之位準)的1倍更多，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍。

可以適當的活體內模型，例如細胞株衍生的異種移植模型來分析本發明之抗原結合分子抑制癌症發展及/或進程之能力，例如，CT26細胞衍生的模型、4T-1細胞衍生的模型、LL2細胞衍生的模型、B16細胞衍生的模型、或EL4細胞衍生的模型。癌症可為病理上牽涉VISTA-表現細胞及/或MDSC (例如，VISTA-表現MDSC、TAM、嗜中性球)的癌症。「病理上牽涉」MDSC的癌症包括MDSC或一增高的MDSC數目/比例係與該癌症之發作、發展或進程、及/或該癌症之一或多個症狀的嚴重性有正相關的癌症，或者MDSC或一增高的MDSC數目/比例係為該癌症之發作、發展或進程之風險因子的癌症。該癌症可在受疾病影響的器官/組織(例如，顯現該疾病/病況症狀的器官/組織)內或腫瘤內包含MDSC。

在一些實施例中，投與本發明之抗原結合分子可造成下列中之一或多者：抑制癌症之發展/進程、延遲/預防癌症發作、減少/延遲/預防腫瘤生長、減少/延遲/預防轉移、降低癌症症狀之嚴重性、減少癌細胞之數目、減小腫瘤大小/體積及/或增加存活期(例如，無進程存活期)，例如，如以CT26細胞、4T-1細胞、LL2細胞、B16細胞或EL4細胞所衍生的異種移植模型所判定。

一些實施態樣中，投與本發明之抗原結合分子，比在沒有投與抗原結合分子下(或在投與適當的對照抗原結合分子之後)所觀察到之腫瘤生長，能夠抑制大於5%，例如≥10%、≥15%、≥20%、≥25%、≥30%、≥35%、≥40%、≥45%、≥50%、≥55%、≥60%、≥65%、≥70%、≥75%、≥80%、≥85%、≥90%或≥95%。

在一些實施態樣中，以本揭露內容之實驗實施例之CT26細胞衍生模型中之實驗所述的劑量及周期性投與抗原結合分子，比在沒有投與抗原結合分子下(或在投與適當的對照抗原結合分子之後)所觀察到之腫瘤生長，抑制了大於5%，例如≥10%、≥15%、≥20%、≥25%、≥30%、≥35%、≥40%、≥45%、≥50%、≥55%、≥60%、≥65%、≥70%、≥75%或≥80%。在一些實施態樣中，以本揭露內容之實驗實施例之4T-1細胞衍生模型中之實驗所述的劑量及周期性投與抗原結合分子，比在沒有投與抗原結合分子下(或在投與適當的對照抗原結合分子之後)所觀察到之腫瘤生長，抑制了大於5%，例如≥10%、≥15%、≥20%、≥25%、≥30%、≥35%、≥40%、≥45%、≥50%。

在一些實施態樣中，根據本揭露內容之抗原結合分子的投與係沒有關聯於細胞激素釋放症候群。在一些實施態樣中，抗原結合分子的投與係沒有關聯於白血球(例如，B細胞、T細胞、NK細胞、巨噬細胞、樹突細胞及/或單核球)之系統性激活。在一些實施態樣中，抗原結合分子的投與係沒有關聯於白血球之發炎性細胞激素及/或趨化激素(例如，IL-6、IFN-γ、IL-8、IL-10、GM-CSF、MIP-1α/β、MCP-1、CXCL9及/或CXCL10)之表現的系統性向上調節。

在一些實施態樣中，用本文所揭露之一抗原結合分子或其他物件(例如，組成物、核酸等)來治療一主體，例如其中該抗原結合分子/物件係以一劑量且/或根據本文所述之一劑量時程對一主體投與，該治療可與下列結果中之一或多者相關聯： ‧不存在不良事件(AE)； ‧不存在嚴重不良事件(SAE)； ‧最小或降低頻率之不良事件(AE)，例如與其他抗-VISTA治療性抗體相比； ‧最小或降低頻率之嚴重不良事件(SAE)，例如與其他抗-VISTA治療性抗體相比； ‧不存在劑量限制毒性(DLT)； ‧最小或降低頻率之劑量限制毒性(DLT)，例如與諸如W0180及CA-170的其他抗-VISTA治療性抗體相比；・治療後的循環腫瘤標誌(例如，游離(cf) DNA改變對偶基因區段部分/腫瘤區段部分，ctDNA)減少，例如與治療前的相同主體相比；・不存在、最小或降低頻率之輸注相關反應，例如細胞激素釋放症候群，及相關細胞激素增加，例如與諸如W0180及CA-170的其他抗-VISTA治療性抗體相比；・不存在、最小或降低頻率之胃腸毒性，例如與諸如W0180及CA-170的其他抗-VISTA治療性抗體相比；・不存在、最小或降低頻率之皮疹或皮膚炎，例如與諸如W0180及CA-170的其他抗-VISTA治療性抗體相比；・不存在、最小或降低頻率之血液學上之變化，例如與諸如W0180及CA-170的其他抗-VISTA治療性抗體相比；・不存在、最小或降低頻率之心毒性，例如與諸如W0180及CA-170的其他抗-VISTA治療性抗體相比；及/或・不存在、最小或降低頻率之白蛋白增加，例如與諸如W0180及CA-170的其他抗-VISTA治療性抗體相比。

一不良事件(AE)可定義為投與一試驗藥品(IMP)、一比對產品或一許可藥物之一患者中的任何不順遂、非所欲或非計劃的醫療事故。一AE可為與IMP或比對物可能相關或可能不相關的一徵象、症狀、疾病及/或實驗室或生理觀測。一AE包括但不限於以下清單中之那些者。・既存病況之臨床上顯著的惡化。這包括可能完全消解且接著再次變得異常的病況。 ‧由一IMP之過量引起之AE，無論係意外的或有意的。研究員‧由缺乏一IMP功效引起之AE，例如，若懷疑一藥物批次並不有效，或若研究員懷疑該IMP已促成疾病進程。

一嚴重不良事件(SAE)為無論劑量、因果或預期性之任何下列的AE： ‧導致死亡； ‧危及生命，亦即，在不良事件發生時患者處於顯著的死亡風險，或持續使用裝置或其他醫藥品時可能導致患者死亡的事件；・需要住院病人住院治療或延長現有住院治療(一些住院治療係豁免SAE報導，例如在患者進入試驗之前所計劃的入院；為諸如輸血之計劃的程序的過夜停留)； ‧導致持續性或顯著的無能力或失能； ‧為一先天性異常或出生缺陷； ‧為任何其他醫療上重大之事件，亦即，任何可危及患者或可能需要介入以防止上文列出之結果中之一者的事件。

在一些實施態樣中，對本揭露內容之治療的反應係可藉由參照腫瘤/病變反應來特徵化。在一些實施態樣中，腫瘤/病變反應係根據實性腫瘤反應評鑑準則(RECIST)之準則來評鑑，例如Eisenhauer et al., Eur J Cancer. 2009 Jan;45(2):228-47中所述之RECIST 1.1準則，其在此藉由參照全文併入本文。

在一些實施態樣中，以本文所述之一抗原結合分子或物件對一主體之治療，例如，其中該抗原結合分子/物件係以一劑量及/或根據本文所述之一劑量時程投與一主體，係可關聯於以下結果中之一或多者(如適當時根據RECIST 1.1準則所評估；參見實施例19.9之細節及評估方法)，例如從治療開始起算在12個月及/或24個月時： ‧一抗腫瘤反應； ‧一完整反應(CR)。一CR係指所有目標及/或非目標腫瘤的一巨觀尺度完全消失。一CR可涉及腫瘤標誌位準之正規化； ‧對未接受該抗原結合分子之一主體、或與已用一不同抗-VISTA抗原結合分子治療之一主體，增加一完全反應(CR)的可能性，例如與未經該抗原結合分子治療之相同主體中CR的可能性相比； ‧顯示一完全反應(CR)之主體的比例增加，例如與未經該抗原結合分子治療或已用一不同抗-VISTA抗原結合分子治療之顯示一CR之主體的比例相比；整體存活期‧(OS)。OS係定義為從開始治療到任何原因所致死亡的時間； ‧對未接受該抗原結合分子之一主體、或與已用一不同抗-VISTA抗原結合分子治療之一主體，增加整體存活期(OS)的可能性，例如與未經該抗原結合分子治療之相同主體中OS的可能性相比； ‧展現整體存活期(OS)之主體之比例增加，例如與未經該抗原結合分子治療或已用一不同抗-VISTA抗原結合分子治療之顯示OS之主體的比例相比； ‧無進程存活(PFS)。PFS係指從治療開始到疾病進程或死亡的時間。 ‧對未接受該抗原結合分子之一主體、或與已用一不同抗-VISTA抗原結合分子治療之一主體，增加無進程存活(PFS)的可能性，例如與未經該抗原結合分子治療之相同主體中PFS的可能性相比； ‧展現無進程存活(PFS)之主體的比例增加，例如與未經該抗原結合分子治療或已用一不同抗-VISTA抗原結合分子治療之顯示PFS之主體的比例相比；・在6個月時無進程存活(PFS6)。PFS6係指在開始治療之後在6個月(26週)時存活及無進程之患者的百分比。 ‧對未接受該抗原結合分子之一主體、或與已用一不同抗-VISTA抗原結合分子治療之一主體，增加在6個月時無進程存活(PFS6)的可能性，例如與未經該抗原結合分子治療之相同主體中PFS的可能性相比；・展現在6個月時無進程存活(PFS6)之主體之百分比增加，例如與未經該抗原結合分子治療或已用不同抗-VISTA抗原結合分子治療之顯示PFS6之主體的百分比相比； ‧一部分反應(PR)。PR係指與治療之前所計算的基線總和相比，所有目標腫瘤直徑的總和至少有30%的降低； ‧對未接受該抗原結合分子之一主體、或與已用一不同抗-VISTA抗原結合分子治療之一主體，增加一部分反應(PR)的可能性，例如與未經該抗原結合分子治療之相同主體中一PR的可能性相比； ‧展現一部分反應(PR)之主體的比例增加，例如與未經該抗原結合分子治療或已用一不同抗-VISTA抗原結合分子治療之顯示一PR之主體的比例相比； ‧一混合反應(MR)。MR係指一或多個腫瘤病變滿足PR之準則，且其他腫瘤病變滿足進行性疾病之準則(所有腫瘤直徑之總和自最小腫瘤大小增加至少20%及/或出現一新的腫瘤病變)； ‧對未接受該抗原結合分子之一主體、或與已用一不同抗-VISTA抗原結合分子治療之一主體，增加一混合反應(MR)的可能性，例如與未經該抗原結合分子治療之相同主體中一MR的可能性相比； ‧展現一混合反應(MR)之主體的比例增加，例如與未經該抗原結合分子治療或已用一不同抗-VISTA抗原結合分子治療之顯示一MR之主體的比例相比； ‧穩定的疾病(SD)。SD係指與開始治療時之腫瘤負荷相比，既非部分反應亦非進行性疾病。 ‧對未接受該抗原結合分子之一主體、或與已用一不同抗-VISTA抗原結合分子治療之一主體，增加穩定的疾病(SD)的可能性，例如與未經該抗原結合分子治療之相同主體中SD的可能性相比； ‧展現穩定的疾病(SD)之主體之比例增加，例如與未經該抗原結合分子治療或已用一不同抗-VISTA抗原結合分子治療之顯示SD之主體的比例相比；・對未接受該抗原結合分子之一主體、或與已用一不同抗-VISTA抗原結合分子治療之一主體，增加反應持續期間(DoR)或增加CR期間的可能性，例如與未經該抗原結合分子治療之相同主體中之期間的可能性相比；反應持續期間(DoR)係定義為從首次滿足PR或CR之量測準則的日期，到首次滿足進行性疾病(PD)之量測準則的日期的時間。CR期間(DoCR)係定義從首次滿足CR之量測準則的日期，到首次滿足PD之量測準則的日期的時間；・展現增加反應持續期間(DoR)或增加CR期間之主體之比例增加，例如與未經該抗原結合分子治療、或已用一不同抗-VISTA抗原結合分子治療之主體之DoR或DoCR相比； ‧一整體反應(OR)。OR係定義為達成完全反應(CR)或部分反應(PR)； ‧一整體反應率(ORR)。ORR定義為已達成完全反應(CR)或部分反應(PR)之患者的比例；・ORR增加，例如與未經該抗原結合分子治療或已用不同抗-VISTA抗原結合分子治療之顯示一OR之主體的比例相比；

腫瘤反應可根據腫瘤及其位置使用適當成像技術來評鑑，例如CT掃描、MRI掃描及FDG-PET。適當技術將為熟習此藝者所熟悉且說明於Eisenhauer et al, supra及/或本文實施例19.9中。

該主體可為本文所定義之一主體，例如，其患有或已判定為患有例如根據本揭露內容之一癌症或實性腫瘤。嵌合抗原受體(CAR)

本發明亦提供包含本發明之抗原結合分子或多肽之嵌合抗原受體(CAR)。

CAR為重組型受體，其提供抗原結合及T細胞活化功能兩者。CAR結構及工程改造係例如於Dotti et al., Immunol Rev (2014) 257(1)中回顧，其在此藉由參照全文併入本文。CAR包含一抗原結合區，其與一細胞膜錨定區及一訊息傳導區鏈結。一任擇的鉸鏈區可在抗原結合區與細胞膜錨定區之間提供分隔，以及可作用為一撓性連接子。

本發明的CAR包含一抗原結合區，其包含本發明之抗原結合分子或由本發明之該抗原結合分子組成，或者其包含本發明之一多肽或由其組成。

細胞膜錨定區提供於CAR之抗原結合區與訊息傳導區之間，且提供CAR錨定至表現一CAR之一細胞的細胞膜，其中抗原結合區在細胞外空間中，且訊息傳導區在細胞內部。在一些實施態樣中，該CAR包含一細胞膜錨定區，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列組成，該胺基酸序列包含CD3-ζ、CD4、CD8或CD28中之一者的跨膜區胺基酸序列、由其所組成、或是自其衍生。在本文中使用時，「衍生自」一參考胺基酸序列之一區包含一胺基酸序列，其與參考序列有至少60%的序列同一性，例如至少65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者。

一CAR的訊息傳導區係允許T細胞之活化。CAR的訊息傳導區可包含CD3-ζ之細胞內域之胺基酸序列，其提供免疫受體酪胺酸為基之活化模體(ITAM)，供用於CAR-表現T細胞之磷酸化及活化。包含其他含ITAM蛋白的序列之訊息傳導區，諸如FcγRI，亦已經運用於CAR (Haynes et al., 2001 J Immunol 166(1):182-187)。CAR的訊息傳導區亦可包含衍生自共刺激分子之訊息傳導區的共刺激序列，以促進CAR-表現T細胞一旦對目標蛋白結合後的活化。合適的共刺激分子包括CD28、OX40、4-1BB、ICOS及CD27。在一些情況中，CAR係經工程改造以提供不同細胞內訊息傳導途徑的共刺激。舉例而言，與CD28共刺激相關聯的訊息傳導優先活化磷脂醯肌醇3-激酶(P13K)的途徑，而4-1BB-媒介之訊息傳導係經由TNF受體關聯因子(TRAF)轉接蛋白。CAR之訊息傳導區因此有時含有衍生自多於一個的共刺激分子之訊息傳導區的共刺激序列。在一些實施態樣中，本發明的CAR包含一或多個共刺激序列，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列包含CD28、OX40、4-1BB、ICOS及CD27中之一或多者之細胞內域的胺基酸序列、由其所組成、或自其衍生。

一任擇的鉸鏈區可於抗原結合域與跨膜域之間提供分隔，以及可作用為一撓性連接子。鉸鏈區可衍生自IgG1。在一些實施態樣中，本發明的CAR包含一鉸鏈區，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列組成，該胺基酸序列包含IgG1之鉸鏈區的胺基酸序列、由其組成、或自其衍生。

亦提供一種包含根據本發明之一CAR的細胞。本發明之CAR可使用來產生CAR-表現免疫細胞，例如CAR-T或CAR-NK細胞。使CAR進入免疫細胞中的工程改造係可在活體外培養的期間施行。

本發明之CAR的抗原結合區能以任何合適之型式提供，例如scFv、scFab等。核酸及載體

本發明提供一種核酸或複數核酸，其編碼本發明之一抗原結合分子、多肽或CAR。

在一些實施態樣中，該核酸係例如從其他核酸或天然存在的生物材料來純化或分離的。在一些實施態樣中，核酸包含DNA及/或RNA或由其組成。

本發明亦提供一種載體或複數載體，其包含本發明之核酸或複數核酸。

核苷酸序列可被含有在例如一表現載體的一載體中。在本文中使用時，一「載體」為一核酸分子，其使用作為將外來核酸轉移至一細胞中的一載媒(vehicle)。載體可為用於在細胞中表現核酸的一載體。此等載體可包括一種啟動子序列，其可操作地鏈結至編碼待表現序列之核苷酸序列。一載體亦可包括一終止密碼子及表現強化子。本技藝中已知的任何合適的載體、啟動子、強化子及終止密碼子係可用於從本發明之一載體來表現一胜肽或多肽。

用語「可操作地鏈結」可包括一選定核酸序列及調節性核酸序列(例如，啟動子及/或強化子)、以一種使核酸序列表現受調節序列影響或控制(藉此形成一表現匣)之方式共價鏈結的情況。因此，若一調節序列能夠實現核酸序列轉錄，則該調節序列可操作地鏈結至選定核酸序列。形成的轉錄本接著可轉譯成一所欲的胜肽/多肽。

合適的載體包括質體、二元載體、DNA載體、mRNA載體、病毒載體(例如，γ反轉錄病毒載體(例如，鼠類白血病病毒(MLV)-衍生載體)、慢病毒(lentiviral)載體、腺病毒載體、腺病毒相關聯病毒載體、牛痘病毒載體及疱疹病毒載體)、轉位子為基載體以及人工染色體(例如，酵母人工染色體)。

在一些實施態樣中，載體可為一真核載體，例如包含於一真核細胞中從該載體表現蛋白所需之元素的一載體。在一些實施態樣中，載體可為一哺乳動物載體，例如包含一巨細胞病毒(CMV)或SV40啟動子以驅動蛋白質表現。

本發明之一抗原結合分子的組成多肽，係可由複數核酸中之不同核酸或由複數載體中之不同載體編碼。包含/表現該抗原結合分子及多肽的細胞

本發明亦提供一種包含或表現本發明之一抗原結合分子、多肽或CAR的細胞。亦提供一種包含或表現本發明之一核酸、複數核酸、一載體或複數載體的細胞。

細胞可為一真核細胞，例如一哺乳動物細胞。哺乳動物可為靈長類動物(恆河猴(rhesus)、食蟹獼猴(cynomolgus)、非人類靈長類動物或人類)或非人類哺乳動物(例如兔、天竺鼠、大鼠、小鼠或其他嚙齒動物(包括嚙齒目中之任何動物)、貓、狗、豬、綿羊、山羊、牛(包括母牛(cow)，例如乳用母牛(dairy cow)，或牛目(order Bos)中之任何動物)、馬(包括馬目(order Equidae)中之任何動物)、驢及非人類靈長類動物)。

本發明亦提供一種用於生產一細胞之方法，該細胞包含本發明之核酸或載體，該方法包含將本發明之一核酸、複數核酸、一載體或複數載體導入至一細胞中。在一些實施態樣中，將本發明之一單離的核酸或載體導入至一細胞內，係包含轉形、轉染、電穿孔或轉導(例如，反轉錄病毒轉導)。

本發明亦提供一種用於生產一細胞之方法，該細胞表現/包含本發明之一抗原結合分子、多肽或CAR，該方法包含導入本發明之一核酸、複數核酸、一載體或複數載體至一細胞中。在一些實施態樣中，該等方法額外包含在合適於由該細胞表現核酸或載體的條件下培養該細胞。在一些實施態樣中，該等方法係在活體外施行。

本發明亦提供藉由本發明之方法所獲得或可獲得的細胞。生產抗原結合分子及多肽

本發明之抗原結合分子及多肽可根據熟習此藝者已知的生產多肽的方法製備。

多肽可藉由化學合成法來製備，例如液相或固相合成法。舉例而言，肽/多肽可藉由使用例如Chandrudu et al., Molecules (2013), 18: 4373-4388中所述之方法合成，其在此藉由參照全文併入本文。

替選地，抗原結合分子及多肽可藉由重組型表現來生產。合適於多肽之重組型生產的分子生物學技術為本技藝中所熟知的，諸如於Green and Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (4th Edition), Cold Spring Harbor Press, 2012，以及於Nat Methods. (2008); 5(2): 135-146中所闡述者，其等兩者在此藉由參照全文併入本文。抗原結合分子之重組型生產的方法亦說明於Frenzel et al., Front Immunol. (2013); 4: 217以及Kunert and Reinhart, Appl Microbiol Biotechnol. (2016) 100: 3451-3461中，其等兩者在此藉由參照全文併入本文。

在一些情況中，本發明之抗原結合分子包含多於一的多肽鏈。在此等情況中，該抗原結合分子之生產可包含多於一之多肽的轉錄及轉譯，以及多肽鏈隨後締合以形成該抗原結合分子。

可使用合適於多肽表現的任何細胞，用於本發明之重組型生產。細胞可為一原核細胞或真核細胞。在一些實施態樣中，細胞為一原核細胞，諸如古菌或細菌的一細胞。在一些實施態樣中，細菌可為革蘭氏陰性細菌，諸如腸細菌科的細菌，例如大腸桿菌。在一些實施態樣中，細胞可為一種真核細胞，諸如一酵母細胞、一植物細胞、昆蟲細胞或一哺乳動物細胞，例如CHO、HEK (例如HEK293)、HeLa或COS細胞。在一些實施態樣中，該細胞為暫時或穩定表現多肽的一CHO細胞。

在一些情況中，細胞不是一原核細胞，因為一些原核細胞不允許如真核細胞一般地折疊或轉譯後修飾。此外，真核細胞可有非常高的表現位準，以及能使用適當的標籤而容易地從真核細胞純化蛋白質。亦可利用增強蛋白質分泌至培養基中的特異性質體。

在一些實施態樣中，多肽可以藉由游離蛋白質合成法(CFPS)來製備，例如根據使用Zemella et al. Chembiochem (2015) 16(17): 2420-2431中所述的系統，其在此藉由參照全文併入本文。

生產可涉及培養或發酵經修飾以表現屬意的多肽的一真核細胞。培養或發酵可於一生物反應器中施行，該生物反應器提供適當之營養、空氣/氧及/或生長因子的供應。分泌的蛋白質可藉由以下方式收集：將培養基/發酵液自細胞分區、萃取蛋白質內含物，及單離個別蛋白質以單離分泌的多肽。培養、發酵及分離的技術為熟習此藝者熟知的，且說明於例如Green and Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual中(第4版；藉由參照併入上文)。

生物反應器包括一或多個可培養細胞的器皿。藉著反應物持續流入反應器，及所培養的細胞持續流出反應器，可在生物反應器中持續進行培養。替選地，培養可批次進行。生物反應器監測且控制環境條件，諸如器皿內的pH、氧氣、進出流率及攪拌，以使得係提供最適的細胞培養條件。

在培養表現抗原結合分子/多肽的細胞之後，可單離屬意的多肽。可使用本技藝中已知的從細胞分離蛋白質之任何合適的方法。為了單離多肽，可能必須使細胞與營養培養基分離。若多肽係從細胞分泌，則可藉由離心來使細胞與含有分泌的屬意的多肽之培養基分開。若屬意的多肽聚集於細胞內，則蛋白質單離可包含：離心以從細胞培養基分離細胞；以溶解緩衝劑處理細胞丸粒；及例如藉由超聲處理(sonification)、快速凍-融或滲透溶解來進行細胞破碎。

接著可能可期望從上清液或培養基單離屬意的多肽，該上清液或培養基可能含有其他的蛋白質及非蛋白質組分。從上清液或培養基分離蛋白質組分的一般作法係藉由沉澱。不同溶解度的蛋白質係在不同濃度之諸如硫酸銨的沉澱劑下沉澱。舉例而言，在低濃度的沉澱劑下，萃取出水溶性蛋白質。因此，藉由添加不同增高濃度的沉澱劑，可以區分出不同溶解度的蛋白質。隨後可使用透析以從分離的蛋白質移除硫酸銨。

其他區分不同蛋白質的方法為本技藝中所知的，例如離子交換層析法及大小層析法。這些方法可使用作為沉澱之一替代，或是可於沉澱後施行。

一旦已經自培養物單離屬意的多肽，則可能期望或需要濃縮多肽。一些濃縮蛋白質的方法為本技藝中所知的，諸如超過濾或凍乾。組成物

本發明亦提供包含本文所述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸、表現載體及細胞之組成物。

本文所述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸、表現載體及細胞可調配為供臨床使用之藥學組成物或藥劑，以及可包含一藥學上可接受的載劑、稀釋劑、賦形劑或佐劑。組成物可經調配用於局部、腸胃外、系統性、腔內、靜脈內、動脈內、肌內、鞘內、眼內、結膜內、腫瘤內、皮下、皮內、鞘內、口服或經皮投與途徑，經皮投與途徑可包括注射或輸注。

合適的調配物可包含一無菌或等張介質中的抗原結合分子。藥劑及藥學組成物能以包括凝膠之流體形式調配。流體調配物可經調配用於藉由注射或輸注(例如，經由導管)投與至人類或動物身體之一選定區。

在一些實施態樣中，該組成物經調配用於注射或輸注至例如一血管或腫瘤中。

根據本文所述之本發明亦提供用於生產藥學上有用之組成物的方法，此等生產方法可包含選自下列中之一或多個步驟：生產本文所述之一抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)或細胞；單離本文所述之一抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)或細胞；及/或混合本文所述之一抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)或細胞以及一藥學上可接受的載劑、佐劑、賦形劑或稀釋劑。

舉例而言，本文所述之發明的一另外之態樣係有關於一種調配或生產一藥劑或藥學組成物的方法，該藥劑或藥學組成物係供用於治療一疾病/病況(例如，一癌症)，該方法包含藉由混合本文所述之一抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)或細胞，與一藥學上可接受的載劑、佐劑、賦形劑或稀釋劑來調配一藥學組成物或藥劑。

在本揭露內容之態樣及實施態樣中，該抗原結合分子能以特定濃度/比例在包含特定化學組成的一組成物中提供。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一緩衝劑中。在本文中使用時，一「緩衝劑」係指一種緩衝溶液，其藉由其酸-鹼共軛組分之作用來抵抗pH改變。本揭露內容的一緩衝劑較佳具有由約4.5至約7.0之範圍內的一pH，較佳在約5.0至約6.5之範圍內。會控制pH在此範圍內之緩衝劑之實例包括乙酸鹽、琥珀酸鹽、組胺酸、組胺酸-精胺酸、組胺酸-甲硫胺酸以及其他的有機酸緩衝劑。

在一些實施態樣中，包含該抗原結合分子之組成物係具有4.0至7.0中之一pH，例如pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.5、pH 4.8至pH 6.3、或pH 5.0至pH 6.3中之一者。在一些實施態樣中，該組成物具有~5.5的一pH。在一些實施態樣中，該組成物具有~5.8的一pH。在一些實施態樣中，該組成物具有~6.3的一pH。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一乙酸鹽緩衝劑，亦即包含乙酸離子的一緩衝劑中。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，該組成物包含乙酸鹽，最終濃度為2 mM至200 mM乙酸鹽，例如5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~20 mM乙酸鹽。該緩衝劑可包含乙酸鈉。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組胺酸緩衝劑，亦即包含組胺酸離子的一緩衝劑中。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，該組成物包含組胺酸，最終濃度為2 mM至200 mM組胺酸，例如5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~20 mM組胺酸。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一琥珀酸鹽緩衝劑中，亦即包含琥珀酸離子的一緩衝劑中。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供在一組成物中，該組成物包含琥珀酸鹽，最終濃度為2 mM至200 mM琥珀酸鹽，例如5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM或18至22 mM中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~20 mM琥珀酸鹽。該緩衝劑可包含琥珀酸鈉。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一磷酸鈉緩衝劑，亦即包含鈉及磷酸離子的一緩衝劑中。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，該組成物包含磷酸鈉，最終濃度為2 mM至200 mM磷酸鈉，例如5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~20 mM磷酸鈉。

在一些實施態樣中，抗原結合分子係提供於一乙酸鈉緩衝劑，亦即包含鈉及乙酸離子之一緩衝劑中。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，該組成物包含乙酸鈉，最終濃度為2 mM至200 mM乙酸鈉，例如5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~20 mM乙酸鈉。

在一些實施態樣中，抗原結合分子係提供於一精胺酸緩衝劑，亦即包含精胺酸離子之一緩衝劑中。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，該組成物包含精胺酸，最終濃度為1 mM至250 mM精胺酸，例如5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~20 mM精胺酸。

在一些實施態樣中，抗原結合分子係提供於一組胺酸-精胺酸緩衝劑，亦即包含組胺酸及精胺酸離子之一緩衝劑中。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，該組成物包含：組胺酸，最終濃度為2 mM至200 mM組胺酸，例如5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM或18至22 mM中之一者；以及精胺酸，最終濃度為1 mM至300 mM精胺酸，例如10 mM至250 mM、50 mM至200 mM、75 mM至200 mM、100 mM至180 mM或125至175 mM中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~20 mM組胺酸及~150 mM精胺酸。

在一些實施態樣中，包含抗原結合分子之組成物係包含一等張劑。等張劑可用以提供等張調配物。等張劑之實例包括例如鹽(例如，氯化鈉、氯化鉀)及糖(例如，蔗糖、葡萄糖、海藻糖)。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供在一組成物中，該組成物包含氯化鈉，亦即鈉離子及氯離子。該組成物之氯化鈉組分能以1 mM至250 mM氯化鈉的最終濃度提供，例如10 mM至250 mM、50 mM至200 mM、75 mM至200 mM、100 mM至180 mM或125至175 mM中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~150 mM氯化鈉。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於包含甲硫胺酸的一組成物中。該組成物之甲硫胺酸組分能以1 mM至250 mM甲硫胺酸的最終濃度提供，例如10 mM至250 mM、50 mM至200 mM、75 mM至200 mM、100 mM至180 mM或125至175 mM中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~150 mM甲硫胺酸。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於包含蔗糖之一組成物中。該組成物之蔗糖組分能以2%至20%的最終濃度(以重量/體積計)提供，例如2%至15%、3%至12%、或4%至10%中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~2、~4、~6、或~8% (w/v)蔗糖。組成物之蔗糖組分能以200至300 nM的最終濃度提供，例如~240 mM。

在一些實施態樣中，包含該抗原結合分子之組成物係包含一界面活性劑。在本文中使用時，一「界面活性劑」係指降低表面張力之一製劑。該界面活性劑較佳為一非離子界面活性劑。界面活性劑之實例包括聚山梨醇酯(聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-80)、泊洛沙姆(poloxamer) (泊洛沙姆-188)及曲拉通X-100。該界面活性劑較佳以約0.001% (w/v)至約0.5% (w/v)之範圍存在於該組成物中。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於包含聚山梨醇酯-20之一組成物中。該組成物之聚山梨醇酯-20組分能以0.001%至0.1%的最終濃度(以重量/體積計)提供，例如0.002%至0.08%、0.006%至0.05%、或0.008%至0.04%中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-20。在一些實施態樣中，該組成物可包含~0.05% (w/v)聚山梨醇酯-20。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於包含聚山梨醇酯-80之一組成物中。該組成物之聚山梨醇酯-80組分能以0.001%至0.1%的最終濃度(以重量/體積計)提供，例如0.002%至0.08%、0.006%至0.05%、或0.008%至0.04%中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~0.01% (w/v)聚山梨醇酯-80。在一些實施態樣中，該組成物可包含~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含： 2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳為~20 mM組胺酸； 2%至20% (例如，2%至15%、3%至12%，或4%至10%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳為~8% (w/v)蔗糖； 0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%，或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳為~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；及 pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳為pH ~5.5。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含： 2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳為~20 mM組胺酸； 2%至20% (例如，2%至15%、3%至12%，或4%至10%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳為~8% (w/v)蔗糖； 0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%，或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳為~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；及 pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳為pH ~5.8。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含： 2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳為~20 mM組胺酸； 2%至20% (例如，1%至15%、2%至10%，或3%至8%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳為~4% (w/v)蔗糖； 0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%，或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳為~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；及 pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳為pH ~5.8。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含： 2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳為~20 mM組胺酸； 0.2%至20% (例如，0.5%至15%、0.75%至10%，或1%至5%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳為~2% (w/v)蔗糖； 0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%，或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳為~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；及 pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳為pH ~5.8。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含： 2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳為~20 mM組胺酸； 2%至20% (例如，2%至15%、3%至12%，或4%至10%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳為~8% (w/v)蔗糖； 0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%，或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳為~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；及 pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳為pH ~6.3。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含： 2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳為~20 mM組胺酸； 2%至20% (例如，2%至15%、3%至12%，或4%至10%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳為~8% (w/v)蔗糖； 0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%，或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-20 (w/v)，更佳為~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-20；及 pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳為pH ~5.8。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含： 2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)乙酸鹽，例如乙酸鈉，更佳為~20 mM乙酸鹽； 2%至20% (例如，2%至15%、3%至12%，或4%至10%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳為~8% (w/v)蔗糖； 0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%，或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳為~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；及

pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳為pH ~5.5。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含： 2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)琥珀酸鹽，例如琥珀酸鈉，更佳為~20 mM琥珀酸鹽； 2%至20% (例如，2%至15%、3%至12%，或4%至10%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳為~8% (w/v)蔗糖； 0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%，或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳為~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；及 pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳為pH ~5.5。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含： 2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳為~20 mM組胺酸； 0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%，或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳為~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；及 pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳為pH ~5.8。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含： 2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳為~20 mM組胺酸； 1 mM至250 mM (例如，10 mM至250 mM、50 mM至200 mM、75 mM至200 mM、100 mM至180 mM，或125至175 mM中之一者)氯化鈉，更佳為~150 mM氯化鈉；以及 pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳為pH ~5.8。

該組成物可包含約0.025 mg/mL至約100 mg/mL抗原結合分子。該組成物可包含約0.05 mg/mL至約80 mg/mL抗原結合分子。該組成物可包含約0.06 mg/mL至約70 mg/mL抗原結合分子。該組成物可包含約0.07 mg/mL至約60 mg/mL抗原結合分子。該組成物可包含約0.07 mg/mL至約50 mg/mL抗原結合分子。

該抗原結合分子能以約30 mg/mL、約35 mg/mL、約40 mg/mL、約45 mg/mL、約50 mg/mL、約55 mg/mL、約60 mg/mL、約65 mg/mL或約70 mg/mL或其中之任何範圍的一濃度，調配於例如根據本揭露內容之組成物中。該抗原結合分子能以約50 mg/mL之一濃度，調配於例如根據本揭露內容之組成物中。

在本文中使用時，「約」係指指定濃度，且加或減該濃度之10%。舉例而言，「約50 mg/mL」之濃度係指在45 mg/mL至55 mg/mL之範圍的濃度，包括50 mg/mL之濃度。

該抗原結合分子可以至少0.05 mg/mL、至少0.1 mg/mL、至少0.15 mg/mL、至少0.2 mg/mL、至少0.25 mg/mL、至少0.3 mg/mL、至少0.35 mg/mL、至少0.4 mg/mL、至少0.5 mg/mL、至少0.8 mg/mL、至少1 mg/mL、至少1.4 mg/mL、至少2 mg/mL、至少2.4 mg/mL、至少4 mg/mL、至少6 mg/mL、至少8 mg/mL、至少10 mg/mL、至少12 mg/mL、至少14 mg/mL或至少16 mg/mL的濃度調配，例如於根據本揭露內容之組成物中。

50 mg/mL之抗原結合分子溶液可在投與之前，使用任何合適的賦形劑稀釋。在一些實施態樣中，50 mg/mL之抗原結合分子溶液係稀釋於5%右旋糖中以供投與。在一些實施態樣中，50 mg/mL抗原結合分子溶液係經稀釋例如於50 mL的體積中，達至少0.07 mg/mL、至少0.14 mg/mL、至少0.21 mg/mL、至少0.35 mg/mL、至少0.42 mg/mL、至少0.8 mg/mL、至少1.4 mg/mL、至少2.4 mg/mL之濃度，以供投與。在一些實施態樣中，50 mg/mL抗原結合分子溶液係經稀釋例如於100 mL的體積中，達至少2.4 mg/mL、至少4 mg/mL、至少8 mg/mL、至少12 mg/mL或至少16 mg/mL之濃度，以供投與。在一些實施態樣中，經稀釋之抗原結合分子溶液係接著投與至一主體，例如經由靜脈內投與，例如使用根據本揭露內容之一劑量/用劑方案，以例如治療本揭露內容之疾病/病況。在一些實施態樣中，經稀釋之抗原結合分子溶液在初始稀釋步驟之48小時內投與至該主體。

根據本揭露內容之抗原結合分子，例如使用本文所述之劑量及/或劑量方案，可組合能夠抑制PD-1所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。能夠抑制PD-1-媒介之訊息傳導的製劑可為PD-1-或PD-L1-靶定製劑。能夠抑制PD-1-媒介之訊息傳導的製劑可為例如能夠對PD-1或PD-L1結合並抑制PD-1-媒介之訊息傳導的一抗體。在一些實施態樣中，該製劑係拮抗劑抗-PD-1抗體。在一些實施態樣中，該製劑係拮抗劑抗-PD-L1抗體。在一些實施態樣中，該藥劑係派立珠單抗(Pembrolizumab) (吉舒達(Keytruda))、尼沃魯單抗(Nivolumab) (保疾伏(Opdivo))、西米單抗(Cemiplimab) (Libtayo)、阿替珠單抗(Atezolizumab) (癌自禦(Tecentriq))、阿維魯單抗(Avelumab) (巴文西歐(Bavencio))，或德瓦魯單抗(Durvalumab) (抑癌寧(Imfinzi))。此等製劑可根據關於製劑所提供之藥物製備指南來製備及投與。治療及預防應用

本文所述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸、表現載體、細胞及組成物於治療及預防方法上得到應用。

本發明提供本文所述之一抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物，其供使用於醫學治療或預防的一方法中。亦提供本文所述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物於製備供用於治療或預防一疾病或病況的藥物之用途。亦提供一種治療或預防一疾病或病況之方法，其包含投與一治療或預防有效量之本文所述之一抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物至一主體。本文所述之所有治療及預防方法/用途可在一主體上施行。

該等方法可有效降低一疾病/病況的發展或進程、緩解一疾病/病況的症候群或減少一疾病/病況的病理。該等方法可有效地預防疾病/病況之進程，例如以預防疾病/病況惡化，或減緩疾病/病況之發展速率。在一些實施態樣中，該方法可導致該疾病/病況的一改善，例如減少該疾病/病況的症候群或減少該疾病/病況的嚴重性/作用的一些其他互相關聯。在一些實施態樣中，該等方法可預防該疾病/病況發展到一晚期(例如，一慢性階段或轉移)。

將瞭解，本發明之物件可用於治療/預防能從表現VISTA的細胞(例如，MDSC)之數目及/或活性下降而得到治療或預防之益處的任何疾病/病況。亦將清楚的是，本發明之治療及預防效用基本上擴及會從MDSC及/或其他表現VISTA的細胞(例如腫瘤相關巨噬細胞(TAM)及嗜中性球)之數目或活性下降而獲益的任何疾病/病況。VISTA之拮抗作用有效解除作用免疫細胞不受MDSC及/或其他表現VISTA的細胞的壓制。

舉例而言，該疾病/病況可為病理上牽涉表現VISTA的細胞(例如，MDSC)的一種疾病/病況，例如表現VISTA的細胞(例如，MDSC)之數目/比例的增高與該疾病/病況之開始、發展或進程、及/或該疾病/病況之一或多種症狀的嚴重性有正相關，或是表現VISTA的細胞(例如，MDSC)數目/比例增高為該疾病/病況發作、發展或進程之一風險因子的一種疾病/病況。

在一些實施態樣中，根據本發明要治療/預防的疾病/病況係一種特徵在於表現VISTA之細胞(例如，MDSC)之數目/比例/活性增高的疾病/病況，例如與沒有該疾病/病況之表現VISTA之細胞(例如，MDSC)之數目/比例/活性相比。

在一些實施態樣中，就本文所述之治療，一主體可被選擇，係基於偵測到表現VISTA的細胞(例如，MDSC)之數目/比例/活性增高，例如於末梢或於受該疾病/病況影響的器官/組織內(例如，顯現該疾病/病況症狀的器官/組織)，或是藉由表現VISTA的細胞(例如，MDSC或腫瘤相關巨噬細胞)存在於腫瘤中。該疾病/病況可影響任何組織或器官或器官系統。在一些實施態樣中，該疾病/病況可影響若干組織/器官/器官系統。

在一些實施態樣中，一主體可被選擇來按照本發明之療法/預防係基於判定一主體的末梢或器官/組織內表現VISTA的細胞(例如，MDSC)之數目/比例/活性，相對於一健康主體內此等細胞之數目/比例/活性有增高，或是基於判定該主體有一包含表現VISTA的細胞(例如，MDSC)之腫瘤。

在一些實施態樣中，該要治療/預防的疾病/病況係一癌症。

將瞭解，該抗原結合分子通常而言對於治療癌症係有用的，因為本發明之抗原結合分子有助於解除作用免疫細胞不受MDSC-媒介之壓制或表現VISTA之細胞之壓制，且藉此增強抗癌免疫反應。

該癌症可為任何不想要的細胞增殖(或其自身顯現為不想要的細胞增殖的任何疾病)、贅生物或腫瘤。癌症可能是良性或惡性的以及可能為原發性或是次發性(轉移性)的。一贅生物或腫瘤可為任何異常的細胞生長或增殖，且可位於任何組織中。癌症可係衍生自以下之組織/細胞，例如腎上腺腺體、腎上腺髓質、肛門、闌尾、膀胱、血液、骨骼、骨髓、腦、乳、盲腸、中樞神經系統(包括或不包括大腦)小腦、子宮頸、結腸、十二指腸、子宮內膜、上皮細胞(例如，腎臟上皮)、膽囊、食道、神經膠細胞、心臟、迴腸、空腸、腎臟、淚腺(lacrimal glad)、喉、肝臟、肺臟、淋巴、淋巴結、淋巴母細胞、上頜骨、縱膈、腸繫膜、子宮肌層、鼻咽、腸網膜、口腔、卵巢、胰臟、腮腺、周邊神經系統、腹膜、胸膜、前列腺、唾腺、乙狀結腸、皮膚、小腸、軟組織、脾臟、胃、睪丸、胸腺、甲狀腺、舌、扁桃腺、氣管、子宮、女陰、及/或白血球。

要治療的腫瘤可為神經或非神經系統腫瘤。神經系統腫瘤可起源於中樞或周邊神經系統，例如神經膠質瘤、髓母細胞瘤、腦脊髓膜瘤、神經纖維瘤、室管膜瘤、神經鞘瘤(Schwannoma)、神經纖維肉瘤、星細胞瘤及寡樹突神經膠質瘤中。非神經系統癌症/腫瘤可起源於任何其他非神經組織，實例包括黑色素瘤、間皮瘤、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病、非何杰金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin's lymphoma) (NHL)、何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性骨髓白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(myelodysplastic syndrome) (MDS)、皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、肝癌、表皮樣癌瘤、前列腺癌瘤、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巢癌、胰臟癌、胸腺癌瘤、NSCLC、血液癌症及肉瘤。

MDSC於晚期結腸直腸癌是升高的(Toor et al, Front Immunol. 2016; 7:560)。於乳癌亦觀察到MDSC，且晚期乳癌患者之周邊血液的MDSC百分比是增高的(Markowitz et al, Breast Cancer Res Treat. 2013 Jul; 140(1):13-21)。MDSC之豐度亦與實性腫瘤預後不良有互相關聯性(Charoentong et al., Cell Rep. 2017 Jan 3; 18(1):248-262)，以及MDSC於肝臟癌模型中是富集的(Connolly et al., J Leukoc Biol. (2010) 87(4):713-25)。前列腺及乳癌瘤、黑色素瘤、結腸直腸癌及路易士肺癌瘤(Lewis lung carcinoma)已被報導會生產吸引MDSC及促進免疫壓制的趨化激素(Umansky et al., Vaccines (Basel) (2016) 4(4):36))，且胰臟癌患者的MDSC與腫瘤負荷有正相關(Xu et al., Hepatobiliary Pancreat Dis Int. (2016) 15(1):99-105)。亦已報導VISTA為針對卵巢癌(參見例如US 9,631,018 B2)及淋巴瘤(參見例如WO 2017/023749 A1)之治療的一目標。

Blando et al. Proc Natl Acad Sci U S A. (2019) 116(5):1692-1697近來報導胰臟癌內VISTA-表現骨髓細胞之顯著浸潤，且在前列腺癌用CTLA4拮抗劑治療後，以及在黑色素瘤用PD-L1拮抗劑治療之前及之後，都已觀察到VISTA-表現骨髓細胞之擴增。

在一些實施態樣中，一癌症係選自於：一包含表現VISTA之細胞的癌症、一包含表現VISTA之細胞之浸潤的癌症、一包含表現VISTA之癌細胞的癌症、一血液學上之癌症、白血病、急性骨髓白血病、淋巴瘤、B細胞淋巴瘤、T細胞淋巴瘤、多發性骨髓瘤、間皮瘤、一實性腫瘤、肺癌、非小細胞肺癌瘤(NSCLC)、胃癌、胃癌瘤、結腸直腸癌、結腸直腸癌瘤、結腸直腸腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌瘤、乳癌、三重陰性乳癌(TBNC)、三重陰性乳侵襲性癌瘤、侵襲性管癌瘤、肝臟癌、肝細胞癌瘤、胰臟癌、胰臟管腺癌、甲狀腺癌、胸腺瘤、皮膚癌、黑色素瘤、皮膚黑色素瘤、腎癌、腎臟細胞癌瘤、腎臟乳突細胞癌瘤、頭頸部癌、頭頸部鱗狀細胞癌瘤(SCCHN)、卵巢癌、卵巢癌瘤、卵巢漿液性囊腺癌、膀胱癌、前列腺癌及/或前列腺腺癌。

在一些實施態樣中，該癌症係結腸直腸癌 (例如，結腸癌瘤、結腸腺癌)、胰臟癌、乳癌(例如，三重陰性乳癌；TBNC)、侵襲性管癌瘤、肝臟癌、前列腺癌、卵巢癌、頭頸部癌、白血病(例如，T細胞白血病)、淋巴瘤、黑色素瘤、胸腺瘤、肺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、間皮瘤、膀胱癌、子宮癌及/或實性腫瘤。

在一些實施態樣中，癌症為一晚期、不可切除或轉移性癌症。

在一些實施態樣中，癌症為轉移性三重陰性乳癌(TBNC)。TBNC可定義為雌激素受體(ER)-陰性、黃體固酮受體(PR)-陰性及人類表皮生長因子2 (HER2)-陰性；或ER-陰性、PR-陰性及HER2-陽性。癌症可定義為具有雌激素受體(ER)表現≤10%且黃體固酮受體(PR)表現≤10%。

在一些實施態樣中，癌症係轉移性及/或晚期非小細胞肺癌(NSCLC)，例如局部晚期且不可切除。在一些實施態樣中，例如NSCLC之癌症不包含表皮生長因子受體(EGFR)或退行性淋巴瘤激酶(ALK)之活化突變。

治療/預防可係針對下列中之一或更多者：延遲/預防該癌症症狀的發作/進程、減少該癌症的症狀嚴重性、減少該癌症細胞的存活/生長/侵襲/轉移、減少該癌症細胞的數目及/或增高主體的存活。

本揭露內容之物件(亦即，抗原結合分子、組成物等)對於治療/預防特徵在於存在表現VISTA之細胞的疾病/病況(例如，癌症)及/或特徵在於由包含VISTA之複合物所媒介之訊息傳導的疾病/病況(例如，癌症)係特別有用的。

一種特徵在於存在表現VISTA之細胞的癌症可包含表現VISTA的癌細胞。亦即，該癌症之細胞可表現VISTA。將瞭解，在本文之實施態樣中，包含具特定特徵之細胞的癌症可為包含具有那些特徵之細胞的腫瘤或包含該等腫瘤。

替代地或另外地，一種特徵在於「存在」表現VISTA之細胞的癌症，可藉由在該癌症之細胞的附近(亦即，與之相近)存在表現VISTA之細胞來特徵化。癌症可包含表現VISTA之細胞的浸潤。癌症可包含顯示表現VISTA之細胞之浸潤的腫瘤。關連於此等實施態樣，表現VISTA之細胞不一定為該癌症之細胞，且可例如為非癌細胞。在一些實施態樣中，該等細胞係免疫細胞。表現VISTA之免疫細胞可為或包含造血來源之細胞，例如嗜中性球、嗜酸性球、嗜鹼性球、樹突細胞、淋巴球或單核球。在一些實施態樣中，表現VISTA的免疫細胞可為或包含淋巴球，例如T細胞、B細胞、NK細胞、NKT細胞、先天性淋巴細胞(ILC)或其等之前驅物。在一些實施態樣中，表現VISTA之免疫細胞為作用免疫細胞(例如，CD8+ T細胞、CD8+細胞毒性T淋巴球(CD8+ CTL)、CD4+ T細胞、CD4+ T輔助細胞、NK細胞、IFNγ-生產細胞、記憶T細胞、中央記憶T細胞、具抗原經驗T細胞及/或CD45RO+ T細胞)。在一些實施態樣中，表現VISTA之免疫細胞為抗原呈現細胞(APC)、巨噬細胞、樹突細胞、T細胞(例如，CD8+ T細胞)及/或MDSC。在其中癌症包含表現VISTA之免疫細胞之浸潤、或其中該癌症包含顯示此等免疫細胞浸潤之腫瘤的實施態樣中，該等免疫細胞可被稱為腫瘤浸潤免疫細胞。

舉例而言，一種特徵在於存在表現VISTA之細胞的癌症可包含一含有表現VISTA之細胞(例如，非癌細胞，例如腫瘤浸潤免疫細胞)的腫瘤。

包含表現VISTA之細胞的癌症、癌細胞及/或腫瘤可描述為VISTA-陽性或VISTA IHC+。

將瞭解，被稱為在癌細胞「附近」或「與之相近」的細胞，係被設定為實體上密切相近於一癌症之細胞，例如在患有此一癌症之主體的活體內。在一些實施態樣中，在一癌症之細胞附近/與之相近的細胞，係被包含在與該癌症之細胞相同的器官/組織中。在一些實施態樣中，在一癌症之細胞附近/與之相近的細胞，係被包含在該癌症的一腫瘤中。在一些實施態樣中，在一癌症之細胞附近/與之相近的細胞，係與該癌症之細胞接觸。

在一些實施態樣中，要治療/預防的癌症包含表現VISTA的細胞。在一些實施態樣中，要治療/預防的癌症包含表現VISTA的癌細胞。在一些實施態樣中，表現VISTA的細胞為MDSC (例如，g-MDSC及/或m-MDSC)。在一些實施態樣中，該癌症包含一包含表現VISTA的細胞(例如，MDSC)之腫瘤。在一些實施態樣中，要治療/預防的癌症包含一包含MDSC之腫瘤。在一些實施態樣中，要治療/預防的癌症包含表現VISTA之細胞(例如，MDSC)的浸潤。在一些實施態樣中，要治療/預防的癌症包含一顯示表現VISTA之細胞(例如，MDSC)的浸潤之腫瘤。

在一些實施態樣中，要治療/預防的癌症包含一腫瘤，該腫瘤包含一CD45+細胞族群，其包含大於1%的MDSC，例如≥2%、≥5%、≥10%、≥15%、≥20%、≥25%或≥30%(例如，由該腫瘤之免疫剖析所判定)。

本文所述之VISTA-結合抗原結合分子可抑制VISTA與VISTA交互作用伙伴(例如，LRIG1、VSIG3、PSGL-1、VSIG8)之間的交互作用。使用本文所述之抗原結合分子抑制VISTA與其交互作用伙伴之間的交互作用係復又證實解除作用免疫細胞不受MDSC-媒介之對其活性的壓制。

據此，本揭露內容之物件(亦即，抗原結合分子、組成物等)對於治療/預防特徵在於存在表現一VISTA交互作用伙伴(例如，LRIG1、VSIG3、PSGL-1、VSIG8)之細胞的疾病/病況(例如，癌症)及/或特徵在於由包含VISTA及一VISTA交互作用伙伴(例如，LRIG1、VSIG3、PSGL-1、VSIG8)之複合物所媒介之訊息傳導的疾病/病況(例如癌症)係特別有用的。

一種特徵在於存在表現一VISTA交互作用伙伴(例如，LRIG1、VSIG3、PSGL-1、VSIG8)之細胞的癌症可包含表現該VISTA交互作用伙伴的癌細胞。亦即，該癌症的細胞可表現該VISTA交互作用伙伴。

替代地或另外地，一種特徵在於「存在」表現一VISTA交互作用伙伴(例如，LRIG1、VSIG3、PSGL-1、VSIG8)之細胞的癌症，可藉由在該癌症之細胞的附近(亦即，與之相近)存在表現該VISTA交互作用伙伴的細胞來特徵化。癌症可包含表現一VISTA交互作用伙伴之細胞的浸潤。癌症可包含一顯示表現一VISTA交互作用伙伴之細胞之浸潤的腫瘤。關連於此等實施態樣，表現該VISTA交互作用伙伴的細胞不一定為該癌症之細胞，且可例如為非癌細胞。在一些實施態樣中，該等細胞係免疫細胞。表現一VISTA交互作用伙伴(例如，LRIG1、VSIG3、PSGL-1、VSIG8)之免疫細胞可為或包含造血來源之細胞，例如嗜中性球、嗜酸性球、嗜鹼性球、樹突細胞、淋巴球或單核球。在一些實施態樣中，表現一VISTA交互作用伙伴的免疫細胞可為或包含淋巴球，例如T細胞、B細胞、NK細胞、NKT細胞、先天性淋巴細胞(ILC)或其等之前驅物。在一些實施態樣中，表現一VISTA交互作用伙伴之免疫細胞為作用免疫細胞(例如，CD8+ T細胞、CD8+細胞毒性T淋巴球(CD8+ CTL)、CD4+ T細胞、CD4+ T輔助細胞、NK細胞、IFNγ-生產細胞、記憶T細胞、中央記憶T細胞、具抗原經驗T細胞及/或CD45RO+ T細胞)。在一些實施態樣中，表現一VISTA交互作用伙伴的免疫細胞為抗原呈現細胞(APC)、巨噬細胞、樹突細胞、T細胞(例如，CD8+ T細胞)及/或MDSC。在其中癌症包含表現一VISTA交互作用伙伴之免疫細胞之浸潤、或其中該癌症包含顯示此等免疫細胞浸潤之腫瘤的實施態樣中，該等免疫細胞可被稱為腫瘤浸潤免疫細胞。

舉例而言，一種特徵在於存在表現一VISTA交互作用伙伴(例如，LRIG1、VSIG3、PSGL-1、VSIG8)之細胞的癌症可包含一腫瘤，其包含表現一VISTA交互作用伙伴的細胞(例如，非癌細胞，例如腫瘤浸潤免疫細胞)。

將瞭解，在本文之實施態樣中，包含具特定特徵之細胞的癌症可為包含具有那些特徵之細胞的腫瘤或包含該等腫瘤。在一些實施態樣中，要治療/預防的癌症包含一腫瘤，其特徵在於存在表現一VISTA交互作用伙伴的細胞(其可為例如非癌細胞，例如腫瘤浸潤免疫細胞)。在一些實施態樣中，要治療/預防的癌症包含一腫瘤，其包含表現一VISTA交互作用伙伴的細胞。在一些實施態樣中，要治療/預防的癌症包含表現一VISTA交互作用伙伴之細胞的浸潤。在一些實施態樣中，要治療/預防的癌症包含一腫瘤，其顯示表現一VISTA交互作用伙伴之細胞的浸潤。

在一些實施態樣中，表現一VISTA交互作用伙伴的細胞，可顯示交互作用伙伴表現交互作用伙伴之表現增高，其相對於例如由在非病理病況下之相同類型細胞(例如，來自相同器官/組織)所表現之參考位準。在一些實施態樣中，表現一VISTA交互作用伙伴的細胞可能過度表現一VISTA交互作用伙伴。此等細胞可能以比對當之非癌細胞/非腫瘤組織的表現位準更大之位準表現相關分子。在一些實施態樣中，要治療/預防之癌症的特徵在於由包含VISTA及一VISTA交互作用伙伴之複合物所媒介之訊息傳導。在一些實施態樣中，要治療/預防之癌症的特徵在於升高的由包含VISTA及一VISTA交互作用伙伴之複合物所媒介之訊息傳導的位準，亦即，與不存在癌症下由相關複合物之訊息傳導的位準相比。

在一些實施態樣中，要治療/預防之癌症的特徵在於存在(i)表現VISTA的細胞，及(ii)表現一VISTA交互作用伙伴的細胞。在一些實施態樣中，要治療/預防之癌症包含(i)表現VISTA的細胞，及(ii)表現一VISTA交互作用伙伴的細胞。在一些實施態樣中，要治療/預防之癌症包含一腫瘤，其特徵在於存在(i)表現VISTA的細胞，及(ii)表現一VISTA交互作用伙伴的細胞。在一些實施態樣中，要治療/預防之癌症包含一腫瘤，其包含(i)表現VISTA的細胞，及(ii)表現一VISTA交互作用伙伴的細胞。在一些實施態樣中，要治療/預防之癌症包含下列的浸潤：(i)表現VISTA的細胞，及(ii)表現一VISTA交互作用伙伴的細胞。在一些實施態樣中，要治療/預防之癌症包含一腫瘤，其顯示下列的浸潤：(i)表現VISTA的細胞，及(ii)表現一VISTA交互作用伙伴的細胞。在一些實施態樣中，要治療/預防之癌症為一癌症，其特徵在於由包含VISTA及一VISTA交互作用伙伴之複合物所媒介之訊息傳導。在一些實施態樣中，要治療/預防之癌症為一癌症，其特徵在於升高的由包含VISTA及一VISTA交互作用伙伴之複合物所媒介之訊息傳導的位準，例如，與不存在癌症下由相關細胞類型/組織/器官中之複合物之訊息傳導的位準相比。

在一些實施態樣中，就本文所述之治療，一主體可被選擇，係基於例如在從該主體獲得的樣本中偵測到包含表現VISTA/一VISTA交互作用伙伴(例如，MDSC)之細胞的癌症，或是偵測到包含表現VISTA/一VISTA交互作用伙伴(例如，MDSC)之細胞的腫瘤，而例如可特徵化如上文所述之癌症/腫瘤。

在一些實施態樣中，病理上牽涉VISTA-表現細胞的疾病/病況為一感染性疾病，例如細菌、病毒、真菌或寄生蟲感染。在一些實施態樣中，可能特別期望治療慢性/持續性感染，例如此等感染係關聯於T細胞功能失調或T細胞衰竭者。眾所周知，T細胞衰竭為許多慢性感染(包括病毒、細菌及寄生蟲)期間以及癌症中出現的T細胞功能失調狀態(Wherry Nature Immunology Vol.12, No.6, p492-499, June 2011)。

可以治療的細菌感染之實例包括由於下列之感染：芽胞桿菌屬物種(Bacillus spp.)、百日咳博德氏桿菌(Bordetella pertussis)、梭菌屬物種(Clostridium spp.)、棒狀桿菌屬物種(Corynebacterium spp.)、霍亂弧菌(Vibrio chloerae)、葡萄球菌屬物種(Staphylococcus spp.)、鏈球菌屬物種(Streptococcus spp.)、艾氏菌屬(Escherichia)、克留氏菌屬(Klebsiella)、變形桿菌屬(Proteus)、耶氏桿菌屬(Yersinia)、伊文氏桿菌屬(Erwina)、沙門氏桿菌屬(Salmonella)、李氏菌屬物種(Listeria sp)、幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori)、分枝桿菌(mycobacteria) (例如，結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis))及綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)。舉例而言，細菌感染可為敗血症或結核病。可以治療的病毒感染之實例包括由於下列之感染：流感病毒、麻疹病毒、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)、人類免疫缺乏病毒(HIV)、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV)、單純疱疹病毒以及人類乳突病毒(HPV)。可以治療的真菌感染之實例包括由於下列之感染：鏈隔孢菌屬物種(Alternaria sp)、麴菌屬物種(Aspergillus sp)、念珠菌屬物種(Candida sp)及組織漿菌屬物種(Histoplasma sp.)。真菌感染可以是真菌性敗血症或組織漿菌症。可以治療的寄生蟲感染之實例包括由於下列之感染：瘧原蟲屬物種(Plasmodium species) (例如，惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum)、約氏瘧原蟲(Plasmodium yoeli)、卵形瘧原蟲(Plasmodium ovale)、間日瘧原蟲(Plasmodium vivax)或夏氏瘧原蟲(Plasmodium chabaudi))寄生蟲感染可以為一疾病，諸如瘧疾、利什曼原蟲病(leishmaniasis)及弓蟲症。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子經由不涉及Fc區媒介之作用功能(例如，ADCC、ADCP、CDC)的一分子機制來發揮其治療/預防性效應。在一些實施態樣中，該分子機制不涉及該抗原結合分子對Fcγ受體(例如，FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb中之一或多者)結合。在一些實施態樣中，該分子機制不涉及該抗原結合分子對補體蛋白結合(例如，C1q)。

在一些實施態樣中(例如，在缺乏Fc區的抗原結合分子之實施態樣，或在該抗原結合分子包含不能誘發Fc-媒介的抗體作用功能之Fc區的實施態樣)，該治療不誘發/增高VISTA-表現細胞之殺滅。於一些實施態樣中，該治療不降低VISTA-表現細胞之數目/比例。

於一些實施態樣中，該治療(i)抑制VISTA-媒介之訊息傳導，及(ii)不誘發/增高VISTA-表現細胞之殺滅。於一些實施態樣中，該治療(i)抑制VISTA-媒介之訊息傳導，及(ii)不降低VISTA-表現細胞之數目/比例。

本發明之物件較佳係以一「治療有效」或「預防有效」量來投與，此係足以對主體顯示治療或預防益處。所投與之實際量及投與速率及時間過程(time-course)將取決於疾病/病況之性質及嚴重性以及所投與之特定物件。治療的處方，例如決定劑量等，係在全科醫師及其他醫療醫生的責任範圍內，並且一般要考慮要治療的疾病/病症、個別主體之病況、遞送位點、投與方法以及執業人員已知的其他因素。上文所提及之技術及規程的實例係可見於Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th Edition, 2000, pub. Lippincott, Williams & Wilkins中。

投與可取決於所要治療之病況同時抑或是依序地單獨或與其他治療組合進行。本文所述之抗原結合分子或組成物及一治療劑可同時或依序投與。

在一些實施態樣中，該方法包含額外的治療或預防性介入，例如用於治療/預防一癌症。在一些實施態樣中，該治療或預防性介入係選自於化學療法、免疫療法、放射療法、手術、疫苗接種及/或荷爾蒙療法。在一些實施態樣中，該治療或預防性介入包含白血球分離術(leukapheresis)。在一些實施態樣中，該治療或預防性介入包含幹細胞移植。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係組合能夠抑制VISTA以外的免疫查核點分子所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。在一些實施態樣中，該免疫查核點分子係例如PD-1、CTLA-4、LAG-3、TIM-3、TIGIT或BTLA。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係組合能夠促進一共刺激受體所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。在一些實施態樣中，該共刺激受體係例如CD28、CD80、CD40L、CD86、OX40、4-1BB、CD27或ICOS。

因此，本發明提供組成物，其包含本發明之物件(例如，本發明之抗原結合分子)及一能夠抑制VISTA以外的一免疫查核點分子所媒介之訊息傳導的製劑。亦提供包含下列之組成物：本發明之物件及能夠促進一共刺激受體所媒介之訊息傳導的一製劑。亦提供此等組成物於本文所述之疾病/病況之醫學治療及預防方法上的用途。

亦提供用於治療/預防本文所述之疾病/病況之方法，其包含投與本發明之物件(例如，本發明之抗原結合分子)及一能夠抑制VISTA以外的一免疫查核點分子所媒介之訊息傳導的製劑。亦提供用於治療/預防本文所述之疾病/病況之方法，其包含投與本發明之物件(例如，本發明之抗原結合分子)及一能夠促進一共刺激受體所媒介之訊息傳導的製劑。

能夠抑制免疫查核點分子所媒介之訊息傳導的製劑係為本技藝中已知的，且包括例如能夠對免疫查核點分子或其等之配體結合並抑制免疫查核點分子所媒介之訊息傳導的抗體。其他能夠抑制一免疫查核點分子所媒介之訊息傳導的製劑，係包括能夠降低該免疫查核點分子或該免疫查核點分子之一配體的基因/蛋白質表現的製劑(例如，透過抑制編碼該免疫查核點分子/配體之基因的轉錄、抑制編碼該免疫查核點分子/配體之RNA的轉錄後加工、降低編碼該免疫查核點分子/配體之RNA的穩定性、促進編碼該免疫查核點分子/配體之RNA的降解、抑制該免疫查核點分子/配體之轉譯後加工、降低該免疫查核點分子/配體的穩定性、或促進該免疫查核點分子/配體的降解)，以及小分子抑制劑。

能夠促進共刺激受體所媒介之訊息傳導的製劑為本技藝中所知的，且包括例如能夠對共刺激受體結合並觸發或增高該共刺激受體所媒介之訊息傳導的促效劑抗體。其他能夠促進共刺激受體所媒介之訊息傳導的製劑包括能夠增高共刺激受體或共刺激受體之一配體的基因/蛋白質表現的製劑(例如，透過促進編碼共刺激受體/配體之基因的轉錄、促進編碼共刺激受體/配體之RNA的轉錄後加工、增高編碼共刺激受體/配體之RNA的穩定性、抑制編碼共刺激受體/配體之RNA的降解、促進共刺激受體/配體的轉譯後加工、增高共刺激受體/配體的穩定性或抑制共刺激受體/配體的降解)，以及小分子促效劑。

用能夠抑制免疫查核點分子所媒介之訊息傳導之製劑治療，其失敗及抗性發展已經牽涉到VISTA-表現MDSC之免疫壓制。Gao et al., Nature Medicine (2017) 23: 551-555近來提出VISTA可能為前列腺腫瘤於伊派利單抗(ipilimumab) (亦即，抗-CTLA-4抗體)療法之後的補償性抑制途徑。

在特定實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合能夠抑制PD-1所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。能夠抑制PD-1-媒介之訊息傳導的製劑可為PD-1-或PD-L1-靶定製劑。能夠抑制PD-1-媒介之訊息傳導的製劑可為例如能夠對PD-1或PD-L1結合並抑制PD-1-媒介之訊息傳導的一抗體。在一些實施態樣中，該製劑係拮抗劑抗-PD-1抗體。在一些實施態樣中，該製劑係拮抗劑抗-PD-L1抗體。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合能夠抑制CTLA-4所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。能夠抑制CTLA-4所媒介之訊息傳導的該製劑可為一CTLA-4-靶定製劑，或靶定諸如CD80或CD86之一CTLA-4配體的一製劑。在一些實施態樣中，能夠抑制CTLA-4所媒介之訊息傳導的製劑可為，例如能對CTLA-4、CD80或CD86結合且抑制CTLA-4所媒介之訊息傳導的一抗體。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合能夠抑制LAG-3所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。能夠抑制LAG-3所媒介之訊息傳導的製劑可為一LAG-3-靶定製劑，或靶定諸如MHC第二型之一LAG-3配體的一製劑。在一些實施態樣中，能夠抑制LAG-3所媒介之訊息傳導的製劑可為，例如能夠對LAG-3或MHC第二型結合且抑制LAG-3所媒介之訊息傳導的一抗體。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合能夠抑制TIM-3所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。能夠抑制TIM-3所媒介之訊息傳導的製劑可為一TIM-3-靶定製劑，或靶定諸如半乳凝集素9之一TIM-3配體的一製劑。在一些實施態樣中，能抑制TIM-3所媒介之訊息傳導的製劑可為，例如能夠對TIM-3或半乳凝集素9結合且抑制TIM-3所媒介之訊息傳導的一抗體。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合能夠抑制TIGIT所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。能抑制TIGIT所媒介之訊息傳導的製劑可為一TIGIT-靶定製劑，或標定諸如CD113、CD112或CD155之一TIGIT配體的一製劑。在一些實施態樣中，能夠抑制TIGIT所媒介之訊息傳導的製劑可為，例如能夠對TIGIT、CD113、CD112或CD155結合且抑制TIGIT所媒介之訊息傳導的一抗體。

在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合能夠抑制BTLA所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。能抑制BTLA所媒介之訊息傳導的製劑可為一BTLA-靶定製劑，或標定諸如HVEM之一BTLA配體的一製劑。在一些實施態樣中，能夠抑制BTLA所媒介之訊息傳導的一製劑可為，例如能夠對BTLA或HVEM結合且抑制BTLA所媒介之訊息傳導的一抗體。

在一些實施態樣中，運用本發明之抗原結合分子與一種能夠抑制免疫查核點分子(例如，PD-1及/或PD-L1)所媒介之訊息傳導的製劑之組合的方法，與任一製劑使用作為單一療法時觀察到的效應相比，提供了改良的治療效應。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子與一種能夠抑制免疫查核點分子(例如，PD-1及/或PD-L1)所媒介之訊息傳導的製劑之該組合提供了增效性(亦即，優加性(super-additive))治療效應。

在一些實施態樣中，用一種包含(i)本發明之抗原結合分子及(ii)能夠抑制免疫查核點分子(例如，PD-1及/或PD-L1)所媒介之訊息傳導的一製劑之組合的治療，可能關聯於下列中之一或多者：・一改良的治療效應，其係相較於該組合之任一組分單獨使用所觀察到的治療效應；・增效性的(亦即，優加性)治療效應，其係相較於該組合之任一組分單獨使用所觀察到的治療效應；・增高之腫瘤生長抑制，其係相較於該組合之任一組分單獨使用之腫瘤生長抑制；・增效性的(亦即，優加性)腫瘤生長抑制，其係相較於該組合之任一組分單獨使用之腫瘤生長抑制；・壓制型免疫細胞數目/活性上之更大降低，其係相較於該組合之任一組分單獨使用時壓制型免疫細胞數目/活性的降低；・增效性的(亦即，優加性)壓制型免疫細胞數目/活性的降低，其係相較於該組合之任一組分單獨使用時壓制型免疫細胞數目/活性的降低；・壓制型免疫細胞增殖之更大降低，其係相較於該組合之任一組分單獨使用時壓制型免疫細胞增殖的降低・增效性的(亦即，優加性)壓制型免疫細胞增殖的降低，其係相較於該組合之任一組分單獨使用時壓制型免疫細胞增殖的降低；・壓制型免疫細胞在一細胞族群(例如，CD45+細胞，例如從腫瘤獲得的CD45+細胞)中比例之更大降低，其係相較於該組合之任一組分單獨使用時壓制型免疫細胞比例的降低；以及・增效性的(亦即，優加性)壓制型免疫細胞在一細胞族群(例如，CD45+細胞，例如從腫瘤獲得的CD45+細胞)中比例的降低，其係相較於該組合之任一組分單獨使用時壓制型免疫細胞比例的降低。

在一些實施態樣中，一種能夠抑制免疫查核點分子(例如，PD-1及/或PD-L1)所媒介之訊息傳導的製劑為派立珠單抗(Pembrolizumab) (吉舒達(Keytruda)；MK-3475、蘭利珠單抗(lambrolizumab))、尼沃魯單抗(Nivolumab) (保疾伏(Opdivo))、西米單抗(Cemiplimab) (Libtayo)、阿替珠單抗(Atezolizumab) (癌自禦(Tecentriq))、阿維魯單抗(Avelumab) (巴文西歐(Bavencio))，或德瓦魯單抗(Durvalumab) (抑癌寧(Imfinzi))。

同時投與係指一起投與該抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物及治療劑，例如作為一種含有二製劑的藥學組成物(組合製備物)，或是彼此緊密相連地投與以及任擇地經由相同的投與途徑，例如至相同的動脈、靜脈或其他血管。相繼投與係指投與該抗原結合分子/組成物或治療劑中之一者，隨後於一給定時間間隔之後分開投與另一製劑。二製劑不需要以相同的途徑投與，雖然在一些實施態樣中是此種情況。時間間隔可為任何的時間間隔。

化學療法及放射療法分別指用一藥物或用游離輻射所進行之一癌症治療(例如，使用X射線或γ射線所進行之放射療法)。藥物可為一化學實體，例如小分子製藥、抗生素、DNA嵌插劑(intercalator)、蛋白質抑制劑(例如，激酶抑制劑)，或一生物製劑，例如抗體、抗體片段、適體、核酸(例如，DNA、RNA)、胜肽、多肽或蛋白質。該藥物可調配成一藥學組成物或藥劑。調配物可以包含一種或更多種藥物(例如，一種或更多種活性製劑)連同一或多個藥學上可接受的稀釋劑、賦形劑或載劑。

一治療可涉及多於一之藥物的投與。一藥物可取決於所要治療之病況而同時抑或是依序地單獨或與其他治療組合投與。舉例而言，化學療法可為涉及投與二種藥物的一共療法，其等中之一或多者可能要用以治療癌症。

化學療法可藉由一或多種投與途徑來投與，例如腸胃外、靜脈注射、口服、皮下、皮內或腫瘤內。

化學療法可根據一治療方案來投與。治療方案可為化學療法投與的一預定時間表、計劃、規劃或時程，其可由醫師或醫療執業人員製備且可經調整以合適於需要治療之患者。治療方案可指示下列中之一或多者：向患者投與之化學療法的類型；每一種藥物或輻射的劑量；投藥之間的時間間隔；每一治療的長度；若存在，則任何治療假期之數目及性質等。對於一共療法，可提供指示如何投與每一藥物的單個治療方案。

化學療法藥物可選自於：阿貝西利(Abemaciclib)、醋酸阿比特龍(Abiraterone Acetate)、必除癌(Abitrexate) (胺甲喋呤(Methotrexate))、亞伯杉(Abraxane) (太平洋紫杉醇(Paclitaxel)白蛋白穩定的奈米粒子調配物)、ABVD、ABVE、ABVE-PC、AC、阿卡替尼(Acalabrutinib)、AC-T、雅詩力(Adcetris) (貝倫妥單抗維多汀(Brentuximab vedotin))、ADE、阿多-曲妥珠單抗艾坦辛(Ado-Trastuzumab Emtansine)、阿德力黴素(Adriamycin) (鹽酸多柔比星(Doxorubicin Hydrochloride))、二馬來酸阿法替尼(Afatinib Dimaleate)、癌伏妥(Afinitor) (依維莫司(Everolimus))、嘔可舒(Akynzeo) (奈妥吡坦和鹽酸帕洛諾司瓊(Netupitant and Palonosetron Hydrochloride))、樂得美(Aldara) (咪喹莫特(Imiquimod))、阿地介白素(Aldesleukin)、安立適(Alecensa) (阿雷替尼(Alectinib))、阿雷替尼(Alectinib)、阿來組單抗(Alemtuzumab)、愛寧達(Alimta) (培美曲塞二鈉(Pemetrexed Disodium))、安列庫帕(Aliqopa) (鹽酸庫潘利司(Copanlisib Hydrochloride))、注射用威克瘤(Alkeran) (鹽酸黴法蘭(Melphalan Hydrochloride))、威克瘤錠(Alkeran Tablets) (美法侖(melphalan))、嘔立舒(Aloxi) (鹽酸帕洛諾司瓊(Palonosetron Hydrochloride))、阿倫布里格(Alunbrig) (布里格替尼(Brigatinib))、安波氯林(Ambochlorin) (氯芥苯丁酸(Chlorambucil))、苯丁酸氮芥(Amboclorin) (氯芥苯丁酸(Chlorambucil))、阿米福汀(Amifostine)、胺基乙醯丙酸(Aminolevulinic Acid)、阿那曲唑(Anastrozole)、阿瑞吡坦(Aprepitant)、雷狄亞(Aredia) (帕米膦酸二鈉(Pamidronate Disodium))、安美達(Arimidex) (阿那曲唑(Anastrozole))、諾曼癌素(Aromasin) (依西美坦(Exemestane))、阿倫恩(Arranon) (奈拉濱(nelarabine))、三氧化砷、亞舍拉(Arzerra) (奧法木單抗(Ofatumumab))、天冬醯胺酸酶菊歐文氏桿菌(Asparaginase Erwinia chrysanthemi)、阿替珠單抗(Atezolizumab)、癌思停(Avastin) (貝伐珠單抗(Bevacizumab))、阿維魯單抗(Avelumab)、西卡思羅(Axicabtagene Ciloleucel)、阿西替尼(Axitinib)、阿扎胞苷(Azacitidine)、巴文西歐(Bavencio) (阿維魯單抗(Avelumab))、BEACOPP、貝克努(Becenum) (卡莫司汀(Carmustine))、貝利達(Beleodaq) (貝林司他(Belinostat))、貝林司他(Belinostat)、鹽酸苯達莫司汀(Bendamustine Hydrochloride)、BEP、沛斯博(Besponsa) (伊諾珠單抗奥佐米星(Inotuzumab Ozogamicin))、貝伐珠單抗(Bevacizumab)、貝瑟羅汀(Bexarotene)、百克沙(Bexxar) (托西莫單抗(Tositumomab)及碘I 131托西莫單抗(Tositumomab))、比卡魯胺(Bicalutamide)、BiCNU (卡莫司汀(Carmustine))、博萊黴素(Bleomycin)、博納吐單抗(Blinatumomab)、百利妥(Blincyto) (博納吐單抗(Blinatumomab))、硼替佐米(Bortezomib)、伯舒里(Bosulif) (博舒替尼(Bosutinib))、博舒替尼(Bosutinib)、貝倫妥單抗維多汀(Brentuximab vedotin)、布里格替尼(Brigatinib)、BuMel、白消安(Busulfan)、補束剋(Busulfex) (白消安(Busulfan))、卡巴他賽(Cabazitaxel)、癌必定(Cabometyx) (卡博替尼-S-蘋果酸(Cabozantinib-S-Malate))、卡博替尼-S-蘋果酸(Cabozantinib-S-Malate)、CAF、克瘤康(Calquence) (阿卡替尼(Acalabrutinib))、坎帕斯(Campath) (阿來組單抗(Alemtuzumab))、開普拓(Camptosar) (鹽酸伊立替康(Irinotecan Hydrochloride))、卡培他濱(Capecitabine)、CAPOX、卡樂(Carac) (氟尿嘧啶(Fluorouracil)--局部用)、卡鉑、CARBOPLATIN-TAXOL、卡非佐米(Carfilzomib)、卡姆布里斯(Carmubris) (卡莫司汀(Carmustine))、卡莫司汀(Carmustine)、卡莫司汀植入劑(Carmustine Implant)、可蘇多(Casodex) (比卡魯胺(Bicalutamide))、CEM、色瑞替尼(Ceritinib)、司比定(Cerubidine) (鹽酸道諾黴素(Daunorubicin Hydrochloride))、保蓓(Cervarix) (重組型HPV二價疫苗(Recombinant HPV Bivalent Vaccine))、西妥昔單抗(Cetuximab)、CEV、氯芥苯丁酸(Chlorambucil)、CHLORAMBUCIL-PREDNISONE、CHOP、順鉑、克拉屈濱(Cladribine)、克拉芬(Clafen) (環磷醯胺)、氯伐拉濱(Clofarabine)、氯伐瑞斯(Clofarex) (氯伐拉濱(Clofarabine))、可羅拉(Clolar) (氯伐拉濱(Clofarabine))、CMF、克美替尼(Cobimetinib)、克美曲(Cometriq) (卡博替尼-S-蘋果酸(Cabozantinib-S-Malate))、鹽酸庫潘利司(Copanlisib Hydrochloride)、COPDAC、COPP、COPP-ABV、可美淨(Cosmegen) (放線菌素D (Dactinomycin))、可泰利(Cotellic) (克美替尼(Cobimetinib))、里唑蒂尼(Crizotinib)、CVP、環磷醯胺、賽福斯(Cyfos) (依弗醯胺)、欣銳擇(Cyramza) (雷莫司單抗(Ramucirumab))、賽德拉濱(Cytarabine)、賽德拉濱(Cytarabine)脂質體、賽德薩-U (Cytosar-U) (賽德拉濱(Cytarabine))、賽妥生(Cytoxan) (環磷醯胺)、達拉菲尼(Dabrafenib)、達卡巴嗪(Dacarbazine)、達克金(Dacogen) (地西他濱(Decitabine))、放線菌素D (Dactinomycin)、達雷木單抗(Daratumumab)、達則列斯(Darzalex) (達雷木單抗(Daratumumab))、達沙替尼(Dasatinib)、鹽酸道諾黴素(Daunorubicin Hydrochloride)、鹽酸道諾黴素及賽德拉濱脂質體(Daunorubicin Hydrochloride and Cytarabine Liposome)、地西他濱(Decitabine)、去纖苷鈉(Defibrotide Sodium)、去纖維鈉(Defitelio) (去纖苷鈉(Defibrotide Sodium))、加瑞克(Degarelix)、地尼介白素迪夫托斯(Denileukin Diftitox)、德諾單抗(Denosumab)、DepoCyt (賽德拉濱(Cytarabine)脂質體)、地塞米松(Dexamethasone)、鹽酸右雷佐生(Dexrazoxane Hydrochloride)、丹尼托昔單抗(Dinutuximab)、多西他賽(Docetaxel)、多柔(Doxil) (鹽酸多柔比星脂質體(Doxorubicin Hydrochloride Liposome))、鹽酸多柔比星(Doxorubicin Hydrochloride)、鹽酸多柔比星脂質體(Doxorubicin Hydrochloride Liposome)、Dox-SL (鹽酸多柔比星脂質體(Doxorubicin Hydrochloride Liposome))、DTIC-Dome (達卡巴嗪(Dacarbazine))、德瓦魯單抗(Durvalumab)、艾欣宜膚(Efudex) (氟尿嘧啶(Fluorouracil)--局部用)、埃立特(Elitek) (拉布立酶(Rasburicase))、艾倫斯(Ellence) (鹽酸表柔比星(Epirubicin Hydrochloride))、埃羅妥珠單抗(Elotuzumab)、益樂鉑(Eloxatin) (奧沙利鉑(Oxaliplatin))、艾曲波帕乙醇胺(Eltrombopag Olamine)、止敏吐(Emend) (阿瑞吡坦(Aprepitant))、恩必喜(Empliciti) (埃羅妥珠單抗(Elotuzumab))、甲磺酸恩西地尼(Enasidenib Mesylate)、恩雜魯胺(Enzalutamide)、鹽酸表柔比星(Epirubicin Hydrochloride)、EPOCH、愛必妥(Erbitux) (西妥昔單抗(Cetuximab))、甲磺酸艾日布林(Eribulin Mesylate)、愛維德(Erivedge) (維莫德吉(Vismodegib))、鹽酸厄洛替尼(Erlotinib Hydrochloride)、歐文酶(Erwinaze) (天冬醯胺酸酶菊歐文氏桿菌(Asparaginase Erwinia chrysanthemi))、益護爾氨磷汀(Ethyol) (阿米福汀(Amifostine))、依託泊(Etopophos) (依託泊苷磷酸(Etoposide Phosphate))、依託泊苷(Etoposide)、依託泊苷磷酸(Etoposide Phosphate)、艾維絲(Evacet) (鹽酸多柔比星脂質體(Doxorubicin Hydrochloride Liposome))、依維莫司(Everolimus)、鈣穩(Evista) (鹽酸雷洛昔芬(Raloxifene Hydrochloride))、優維寧(Evomela) (鹽酸黴法蘭(Melphalan Hydrochloride))、依西美坦(Exemestane)、5-FU (氟尿嘧啶(Fluorouracil)注射)、5-FU (氟尿嘧啶(Fluorouracil)--局部用)、弗瑞斯(Fareston) (托瑞米芬(Toremifene))、髓力達(Farydak) (帕比司他(Panobinostat))、法洛德(Faslodex) (氟維司群(Fulvestrant))、FEC、復乳納(Femara) (來曲唑(Letrozole))、非格司亭(Filgrastim)、福達樂(Fludara) (磷酸氟達拉濱(Fludarabine Phosphate))、磷酸氟達拉濱(Fludarabine Phosphate)、氟普列斯(Fluoroplex) (氟尿嘧啶(Fluorouracil)--局部用)、氟尿嘧啶(Fluorouracil)注射、氟尿嘧啶(Fluorouracil)--局部用、氟他胺(Flutamide)、福列斯(Folex) (胺甲喋呤(Methotrexate))、福列斯PFS (Folex PFS) (胺甲喋呤(Methotrexate))、FOLFIRI、FOLFIRI-BEVACIZUMAB、FOLFIRI-CETUXIMAB、FOLFIRINOX、FOLFOX、服瘤停(Folotyn) (普拉曲沙(Pralatrexate))、FU-LV、氟維司群(Fulvestrant)、嘉喜(Gardasil) (重組型HPV四價疫苗)、嘉喜9 (Gardasil 9) (重組型HPV九價疫苗)、癌即瓦(Gazyva) (奥濱尤妥珠單抗(Obinutuzumab))、吉菲替尼(Gefitinib)、鹽酸吉西他濱(Gemcitabine Hydrochloride)、GEMCITABINE-CISPLATIN、GEMCITABINE-OXALIPLATIN、吉妥珠單抗奥佐米星(Gemtuzumab Ozogamicin)、健擇(Gemzar) (鹽酸吉西他濱(Gemcitabine Hydrochloride))、妥復克(Gilotrif) (二馬來酸阿法替尼(Afatinib Dimaleate))、基利克(Gleevec) (甲磺酸伊馬替尼(Imatinib Mesylate))、格立得(Gliadel) (卡莫司汀植入劑(Carmustine Implant))、格立得晶圓(Gliadel wafer) (卡莫司汀植入劑(Carmustine Implant))、谷卡匹酶(Glucarpidase)、醋酸戈舍瑞林(Goserelin Acetate)、賀樂維(Halaven) (甲磺酸艾日布林(Eribulin Mesylate))、普潘奈(Hemangeol) (鹽酸普潘奈(Propranolol Hydrochloride))、賀癌平(Herceptin) (曲妥珠單抗(Trastuzumab))、HPV二價疫苗、重組型、HPV九價疫苗、重組型、HPV四價疫苗、重組型、癌康定(Hycamtin) (鹽酸托普迪肯(Topotecan Hydrochloride))、愛治(Hydrea) (羥基尿素)、羥基尿素、Hyper-CVAD、愛乳適(Ibrance) (帕博西利(Palbociclib))、替伊莫單抗(Ibritumomab tiuxetan)、依魯替尼(Ibrutinib)、ICE、英可欣(Iclusig) (鹽酸普納替尼(Ponatinib Hydrochloride))、伊達黴素(Idamycin) (鹽酸伊達比星(Idarubicin Hydrochloride))、鹽酸伊達比星(Idarubicin Hydrochloride)、艾代拉利司(Idelalisib)、艾地法(Idhifa) (甲磺酸恩西地尼(Enasidenib Mesylate))、艾菲斯(Ifex) (依弗醯胺)、依弗醯胺、伊弗斯法旦(Ifosfamidum) (依弗醯胺)、IL-2 (阿地介白素(Aldesleukin))、甲磺酸伊馬替尼(Imatinib Mesylate)、億珂(Imbruvica) (依魯替尼(Ibrutinib))、抑癌寧(Imfinzi) (德瓦魯單抗(Durvalumab))、咪喹莫特(Imiquimod)、伊姆利基(Imlygic) (拉他莫金(Talimogene Laherparepvec))、抑癌特(Inlyta) (阿西替尼(Axitinib))、伊諾珠單抗奥佐米星(Inotuzumab Ozogamicin)、干擾素α-2b、重組型、介白素-2 (阿地介白素(Aldesleukin))、因治隆A (Intron A) (重組型干擾素α-2b)、碘I 131托西莫單抗(Tositumomab)及托西莫單抗(Tositumomab)、伊派利單抗(Ipilimumab)、艾瑞莎(Iressa) (吉菲替尼(Gefitinib))、鹽酸伊立替康(Irinotecan Hydrochloride)、鹽酸伊立替康脂質體(Irinotecan Hydrochloride Liposome)、羅米地辛(Istodax) (羅米地辛(Romidepsin))、伊沙匹隆(Ixabepilone)、檸檬酸埃沙佐米(Ixazomib Citrate)、易莎平(Ixempra) (伊沙匹隆(Ixabepilone))、捷可衛(Jakafi) (磷酸鹽魯索利替尼(Ruxolitinib Phosphate))、JEB、去癌達(Jevtana) (卡巴他賽(cabazitaxel))、賀癌寧(Kadcyla) (阿多-曲妥珠單抗艾坦辛(Ado-Trastuzumab Emtansine))、可莫昔芬(Keoxifene) (鹽酸雷洛昔芬(Raloxifene Hydrochloride))、凱望斯(Kepivance) (帕利夫明(Palifermin))、吉舒達(Keytruda) (派立珠單抗(Pembrolizumab))、擊癌利(Kisqali) (瑞博西利(Ribociclib))、祈萊亞(Kymriah) (地莎金雷流索(Tisagenlecleucel))、凱博斯(Kyprolis) (卡非佐米(Carfilzomib))、蘭雷歐肽乙酯(Lanreotide Acetate)、二甲苯磺酸拉帕替尼(Lapatinib Ditosylate)、拉特沃(Lartruvo) (奥拉妥單抗(Olaratumab))、來那度胺(Lenalidomide)、甲磺酸樂伐替尼(Lenvatinib Mesylate)、樂衛瑪(Lenvima) (甲磺酸樂伐替尼(Lenvatinib Mesylate))、來曲唑(Letrozole)、留可佛林鈣鹽(Leucovorin Calcium)、瘤克寧(Leukeran) (氯芥苯丁酸(Chlorambucil))、醋酸亮丙瑞林(Leuprolide Acetate)、祿斯得停(Leustatin) (克拉屈濱(Cladribine))、聚果糖(Levulan) (胺基乙醯丙酸(Aminolevulinic Acid))、淋福力增(Linfolizin) (氯芥苯丁酸(Chlorambucil))、力得微脂體(LipoDox) (鹽酸多柔比星脂質體(Doxorubicin Hydrochloride Liposome))、洛莫司汀(Lomustine)、朗斯弗(Lonsurf) (三氟胸苷和鹽酸替比拉西(Trifluridine and Tipiracil Hydrochloride))、柳菩隆(Lupron) (醋酸亮丙瑞林(Leuprolide Acetate))、柳菩隆緩釋倉針劑(Lupron Depot) (醋酸亮丙瑞林(Leuprolide Acetate))、柳菩隆兒科緩釋倉針劑(Lupron Depot-Ped) (醋酸亮丙瑞林(Leuprolide Acetate))、利普卓(Lynparza) (奧拉帕(Olaparib))、馬奇博(Marqibo) (硫酸長春新鹼脂質體(Vincristine Sulfate Liposome))、馬土練(Matulane) (鹽酸丙卡巴肼(Procarbazine Hydrochloride))、鹽酸甲基二(氯乙基)胺(Mechlorethamine Hydrochloride)、醋酸甲地孕酮(Megestrol Acetate)、麥欣霓(Mekinist) (曲美替尼(Trametinib))、美法侖(Melphalan)、鹽酸黴法蘭(Melphalan Hydrochloride)、巰基嘌呤、美司鈉(Mesna)、美司聶(Mesnex) (美司鈉(Mesna))、甲唑拉通(Methazolastone) (替莫唑胺(Temozolomide))、胺甲喋呤(Methotrexate)、胺甲喋呤(Methotrexate) LPF (胺甲喋呤(Methotrexate))、溴化甲基納曲酮(Methylnaltrexone Bromide)、米薩德(Mexate) (胺甲喋呤(Methotrexate))、米薩德-AQ (Mexate-AQ) (胺甲喋呤(Methotrexate))、米哚妥林(Midostaurin)、絲裂黴素C (Mitomycin C)、鹽酸雙羥蒽醌(Mitoxantrone Hydrochloride)、米托利垂(Mitozytrex) (絲裂黴素C (Mitomycin C))、MOPP、總動原(Mozobil) (普樂沙福(Plerixafor))、氮芥(Mustargen) (鹽酸甲基二(氯乙基)胺(Mechlorethamine Hydrochloride))、排多癌(Mutamycin) (絲裂黴素C (Mitomycin C))、邁樂寧(Myleran) (白消安(Busulfan))、麥羅蕯(Mylosar) (阿扎胞苷(Azacitidine))、麥羅塔(Mylotarg) (吉妥珠單抗奥佐米星(Gemtuzumab Ozogamicin))、奈米粒子太平洋紫杉醇(Paclitaxel) (太平洋紫杉醇(Paclitaxel)白蛋白穩定的奈米粒子調配物)、溫諾平(Navelbine) (酒石酸長春瑞賓(Vinorelbine Tartrate))、耐昔妥單抗(Necitumumab)、奈拉濱(Nelarabine)、新薩(Neosar) (環磷醯胺)、馬來酸來那替尼(Neratinib Maleate)、來那替尼(Nerlynx) (馬來酸來那替尼(Neratinib Maleate))、奈妥吡坦和鹽酸帕洛諾司瓊(Netupitant and Palonosetron Hydrochloride)、倍血添(Neulasta) (培非格司亭(Pegfilgrastim))、優保津(Neupogen) (非格司亭(Filgrastim))、蕾莎瓦(Nexavar) (甲苯磺酸索拉非尼(Sorafenib Tosylate))、尼魯米特(Nilandron) (尼魯他胺(Nilutamide))、尼羅替尼(Nilotinib)、尼魯他胺(Nilutamide)、免瘤諾(Ninlaro) (檸檬酸埃沙佐米(Ixazomib Citrate))、甲苯磺酸尼拉帕日單水合物(Niraparib Tosylate Monohydrate)、尼沃魯單抗(Nivolumab)、諾瓦得士(Nolvadex) (檸檬酸他莫昔芬(Tamoxifen Citrate))、恩沛板(Nplate) (羅米司亭(Romiplostim))、奥濱尤妥珠單抗(Obinutuzumab)、歐丹佐(Odomzo) (索尼得吉(Sonidegib))、OEPA、奧法木單抗(Ofatumumab)、OFF、奧拉帕(Olaparib)、奥拉妥單抗(Olaratumab)、高三尖杉酯鹼(Omacetaxine Mepesuccinate)、昂卡司帕(Oncaspar) (培門冬酶(Pegaspargase))、鹽酸昂丹司瓊(Ondansetron Hydrochloride)、安能得(Onivyde) (鹽酸伊立替康脂質體(Irinotecan Hydrochloride Liposome))、昂他克(Ontak) (地尼介白素迪夫托斯(Denileukin Diftitox))、保疾伏(Opdivo) (尼沃魯單抗(Nivolumab))、OPPA、奥希替尼(Osimertinib)、奧沙利鉑(Oxaliplatin)、太平洋紫杉醇(Paclitaxel)、太平洋紫杉醇(Paclitaxel)白蛋白穩定的奈米粒子調配物、PAD、帕博西利(Palbociclib)、帕利夫明(Palifermin)、鹽酸帕洛諾司瓊(Palonosetron Hydrochloride)、鹽酸帕洛諾司瓊(Palonosetron Hydrochloride)及奈妥吡坦(Netupitant)、帕米膦酸二鈉(Pamidronate Disodium)、帕尼單抗(Panitumumab)、帕比司他(Panobinostat)、佳鉑(Paraplat) (卡鉑)、佳鉑帝(Paraplatin) (卡鉑)、鹽酸帕唑帕尼(Pazopanib Hydrochloride)、PCV、PEB、培門冬酶(Pegaspargase)、培非格司亭(Pegfilgrastim)、培格干擾素α-2b (Peginterferon Alfa-2b)、PEG-因治隆(PEG-Intron) (培格干擾素α-2b (Peginterferon Alfa-2b))、派立珠單抗(Pembrolizumab)、培美曲塞二鈉(Pemetrexed Disodium)、賀疾妥(Perjeta) (帕妥珠單抗(Pertuzumab))、帕妥珠單抗(Pertuzumab)、普拉汀諾(Platinol) (順鉑)、普拉汀諾-AQ (Platinol-AQ) (順鉑)、普樂沙福(Plerixafor)、泊馬度胺(Pomalidomide)、鉑美特(Pomalyst) (泊馬度胺(Pomalidomide))、鹽酸普納替尼(Ponatinib Hydrochloride)、搏癌莎(Portrazza) (耐昔妥單抗(Necitumumab))、普拉曲沙(Pralatrexate)、強體松(Prednisone)、鹽酸丙卡巴肼(Procarbazine Hydrochloride)、普留淨(Proleukin) (阿地介白素(Aldesleukin))、保骼麗(Prolia) (德諾單抗(Denosumab))、波瑪塔(Promacta) (艾曲波帕乙醇胺(Eltrombopag Olamine))、鹽酸普潘奈(Propranolol Hydrochloride)、普羅文奇(Provenge) (西普魯塞-T (Sipuleucel-T))、嘌呤硫醇(Purinethol) (巰基嘌呤)、普利生(Purixan) (巰基嘌呤)、[無輸入]、二氯化鐳223 (Radium 223 Dichloride)、鹽酸雷洛昔芬(Raloxifene Hydrochloride)、雷莫司單抗(Ramucirumab)、拉布立酶(Rasburicase)、R-CHOP、R-CVP、重組型人類乳突病毒(HPV)二價疫苗(Recombinant Human Papillomavirus (HPV) Bivalent Vaccine)、重組型人類乳突病毒(HPV)九價疫苗、重組型人類乳突病毒(HPV)四價疫苗、重組型干擾素α-2b、瑞格菲尼(Regorafenib)、雷利斯特(Relistor) (溴化甲基納曲酮(Methylnaltrexone Bromide))、R-EPOCH、瑞復美(Revlimid) (來那度胺(Lenalidomide))、如美曲斯(Rheumatrex) (胺甲喋呤(Methotrexate))、瑞博西利(Ribociclib)、R-ICE、利妥生(Rituxan) (利妥昔單抗(Rituximab))、利妥生海希拉(Rituxan Hycela) (利妥昔單抗及人類玻尿酸酶(Rituximab及Hyaluronidase Human))、利妥昔單抗(Rituximab)、利妥昔單抗及人類玻尿酸酶(Rituximab and Hyaluronidase Human)、鹽酸羅拉吡坦(Rolapitant Hydrochloride)、羅米地辛(Romidepsin)、羅米司亭(Romiplostim)、紅比黴素(Rubidomycin) (鹽酸道諾黴素(Daunorubicin Hydrochloride))、瑞布卡(Rubraca) (瑞卡帕日樟腦磺酸鹽(Rucaparib Camsylate))、瑞卡帕日樟腦磺酸鹽(Rucaparib Camsylate)、磷酸鹽魯索利替尼(Ruxolitinib Phosphate)、雷德帕斯(Rydapt) (米哚妥林(Midostaurin))、司蘭索胸腔內氣霧劑(Sclerosol Intrapleural Aerosol) (Talc)、司妥昔單抗(Siltuximab)、西普魯塞-T (Sipuleucel-T)、舒得寧(Somatuline Depot) (蘭雷歐肽乙酯(Lanreotide Acetate))、索尼得吉(Sonidegib)、甲苯磺酸索拉非尼(Sorafenib Tosylate)、柏萊(Sprycel) (達沙替尼(Dasatinib))、STANFORD V、無菌滑石粉(Sterile Talc Powder) (Talc)、無菌滑石(Steritalc) (Talc)、癌瑞格(Stivarga) (瑞格菲尼(Regorafenib))、蘋果酸舒尼替尼(Sunitinib Malate)、紓癌特(Sutent) (蘋果酸舒尼替尼(Sunitinib Malate))、希拉特隆(Sylatron) (培格干擾素α-2b (Peginterferon Alfa-2b))、薩溫珂(Sylvant) (司妥昔單抗(Siltuximab))、高三尖杉酯鹼(Synribo) (高三尖杉酯鹼(Omacetaxine Mepesuccinate))、特布羅德(Tabloid) (硫鳥嘌呤(Thioguanine))、TAC、泰伏樂(Tafinlar) (達拉菲尼(Dabrafenib))、泰格莎(Tagrisso) (奥希替尼(Osimertinib))、Talc、拉他莫金(Talimogene Laherparepvec)、檸檬酸他莫昔芬(Tamoxifen Citrate)、答拉濱PFS (Tarabine PFS) (賽德拉濱(Cytarabine))、得舒緩(Tarceva) (鹽酸厄洛替尼(Erlotinib Hydrochloride))、塔革雷汀(Targretin) (貝瑟羅汀(Bexarotene))、泰息安(Tasigna) (尼羅替尼(Nilotinib))、紫杉醇(Taxol) (太平洋紫杉醇(paclitaxel))、剋癌易(Taxotere) (多西他賽(Docetaxel))、癌自禦(Tecentriq) (阿替珠單抗(Atezolizumab))、泰道(Temodar) (替莫唑胺(Temozolomide))、替莫唑胺(Temozolomide)、替西羅莫司(Temsirolimus)、沙立度胺(Thalidomide)、沙羅米(Thalomid) (沙立度胺(Thalidomide))、硫鳥嘌呤(Thioguanine)、塞替派(Thiotepa)、地莎金雷流索(Tisagenlecleucel)、托拉克(Tolak) (氟尿嘧啶(Fluorouracil)--局部用)、鹽酸托普迪肯(Topotecan Hydrochloride)、托瑞米芬(Toremifene)、特癌適(Torisel) (替西羅莫司(Temsirolimus))、托西莫單抗(Tositumomab)及碘I 131托西莫單抗(Tositumomab)、多德特(Totect) (鹽酸右雷佐生(Dexrazoxane Hydrochloride))、TPF、他比特定(Trabectedin)、曲美替尼(Trametinib)、曲妥珠單抗(Trastuzumab)、普癌汰(Treanda) (鹽酸苯達莫司汀(Bendamustine Hydrochloride))、三氟胸苷及鹽酸替比拉西(Trifluridine and Tipiracil Hydrochloride)、萃克森(Trisenox) (三氧化砷)、泰嘉(Tykerb) (二甲苯磺酸拉帕替尼(Lapatinib Ditosylate))、丹尼托辛(Unituxin) (丹尼托昔單抗(Dinutuximab))、尿苷三乙酸酯(Uridine Triacetate)、VAC、伐柔比星(Valrubicin)、瓦爾斯塔爾(Valstar) (伐柔比星(Valrubicin))、凡德他尼(Vandetanib)、VAMP、瓦如畢(Varubi) (鹽酸羅拉吡坦(Rolapitant Hydrochloride))、維必施(Vectibix) (帕尼單抗(Panitumumab))、VeIP、維卞(Velban) (硫酸長春鹼(Vinblastine Sulfate))、萬科(Velcade) (硼替佐米(Bortezomib))、維薩(Velsar) (硫酸長春鹼(Vinblastine Sulfate))、威羅菲尼(Vemurafenib)、唯可來(Venclexta) (維奈克拉(Venetoclax))、維奈克拉(Venetoclax)、捷癌寧(Verzenio) (阿貝西利(Abemaciclib))、威亞得(Viadur) (醋酸亮丙瑞林(Leuprolide Acetate))、委丹扎(Vidaza) (阿扎胞苷(Azacitidine))、硫酸長春鹼(Vinblastine Sulfate)、安克薩(Vincasar) PFS (硫酸長春新鹼(Vincristine Sulfate))、硫酸長春新鹼(Vincristine Sulfate)、硫酸長春新鹼脂質體(Vincristine Sulfate Liposome)、酒石酸長春瑞賓(Vinorelbine Tartrate)、VIP、維莫德吉(Vismodegib)、維斯多卡(Vistogard) (尿苷三乙酸酯(Uridine Triacetate))、伏拉札(Voraxaze) (谷卡匹酶(Glucarpidase))、伏立諾他(Vorinostat)、福退癌(Votrient) (鹽酸帕唑帕尼(Pazopanib Hydrochloride))、菲佐斯(Vyxeos) (鹽酸道諾黴素及賽德拉濱脂質體(Daunorubicin Hydrochloride and Cytarabine Liposome))、爾可福(Wellcovorin) (留可佛林鈣鹽(Leucovorin Calcium))、截剋瘤(Xalkori) (里唑蒂尼(Crizotinib))、截瘤達(Xeloda) (卡培他濱(Capecitabine))、XELIRI、XELOX、癌骨瓦(Xgeva) (德諾單抗(Denosumab))、鐳治骨(Xofigo) (二氯化鐳223 (Radium 223 Dichloride))、安可坦(Xtandi) (恩雜魯胺(Enzalutamide))、益伏(Yervoy) (伊派利單抗(Ipilimumab))、耶克他(Yescarta) (西卡思羅(Axicabtagene Ciloleucel))、友待(Yondelis) (他比特定(Trabectedin))、柔癌捕(Zaltrap) (Ziv-阿柏西普(Ziv-Aflibercept))、薩而吉(Zarxio) (非格司亭(filgrastim))、則樂(Zejula) (甲苯磺酸尼拉帕日單水合物(Niraparib Tosylate Monohydrate))、日沛樂(Zelboraf) (威羅菲尼(Vemurafenib))、澤娃靈(Zevalin) (替伊莫單抗(Ibritumomab Tiuxetan))、津內卡(Zinecard) (鹽酸右雷佐生(Dexrazoxane Hydrochloride))、Ziv-阿柏西普(Ziv-Aflibercept)、卓弗蘭(Zofran) (鹽酸昂丹司瓊(Ondansetron Hydrochloride))、諾雷德(Zoladex) (醋酸戈舍瑞林(Goserelin Acetate))、唑來膦酸(Zoledronic acid)、柔林則(Zolinza) (伏立諾他(Vorinostat))、卓骨祂(Zometa) (唑來膦酸(Zoledronic acid))、思得適(Zydelig) (艾代拉利司(Idelalisib))、立克癌(Zykadia) (色瑞替尼(Ceritinib))以及澤珂(Zytiga) (醋酸阿比特龍(Abiraterone Acetate))。用劑/劑量方案

可以提供多次用劑的抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物。以下段落中對「抗原結合分子」之參考亦涵蓋一或多種根據本揭露內容之其他物件(多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物)，且反之亦然。一或多、或是每一用劑可伴隨著另一種治療劑之同時或循序投與。

多次用劑之間可藉由一預定的時間間隔分開，該時間間隔可選自下列中之一者：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或31天，或者1、2、3、4、5或6個月。舉例而言，可每7、14、21或28天(加或減3、2或1天：諸如4、5、6、8、9或10天；11、12、13、15、16或17天；18、19、20、22、23或24天；或25、26、27、29、30或31天)給予一次用劑。亦即，每7天、每14天、每21天或每28天可有一個治療事件。在約7天(加或減3、2或1天)、約14天(加或減3、2或1天)、約21天(加或減3、2或1天)或約28天(加或減3、2或1天)之用劑/投與之間，可有一治療假期。

在本揭露內容之一些態樣中，該抗原結合分子係每週投與一次(例如，每7天加或減3、2或1天一次)。亦即，可每週可有一個治療事件/投與。

在本揭露內容之一些態樣中，該抗原結合分子係每兩週投與一次(例如，每14天加或減3、2或1天一次)。亦即，可每兩週可有一個治療事件/投與。

在本揭露內容之一些態樣中，該抗原結合分子係每三週投與一次(例如，每21天加或減3、2或1天一次)。亦即，可每三週可有一個治療事件/投與。

在本揭露內容之一些態樣中，該抗原結合分子係在一或多個三週/21天(加/減3、2或1天)的週期投與。每個三週/21天的週期可以被稱為一個投與「循環」，亦即，一個循環可為三週/21天(加/減3、2或1天)。投與可持續3、6、9、12、15、18、21、24、27、30或更多週，高達105週。投與可持續1、2、3、4、5、6或更多個循環，高達35個循環(例如，每個循環包含21天/三週)。投與可持續1、2、3、4、5、6或更多個月，高達24個月(例如，每個循環包含21天/三週)。21天之循環/週期可為持續/連續的，或其可藉由例如1、2、3、4、5、6或7天或1、2、3、4、5、6或更多週分開。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係在三週/21天(加/減3、2或1天)的一週期期間投與一、二或三次。亦即，可每個三週/21天循環投與一、二或三劑。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係一週投與一次持續一個三週的週期。該抗原結合分子可每週投與一次，持續一、二、三、四、五、六或更多個循環(亦即，每週一次持續1、2、3、4、5、6或更多個第21天之週期，或每週一次持續3、6、9、12、15、18、21、24、27、30或更多週)。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係在21天/三週循環的第1、8及15天(加/減3、2或1天)投與。在每一劑間可存在~7天(加或減3、2或1天)的一治療假期。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係在三週/21天(加/減3、2或1天)的一週期期間投與二次(貳次)。亦即，可每個三週/21天循環投與二劑。在一些實施態樣中，在三週/21天的該週期內，該二劑間隔7天(加/減3、2或1天)投與。該抗原結合分子可每一、二、三、四、五、六或更多個循環投與二次(亦即，1、2、3、4、5、6個或更多個三週/21天之週期每一個二次，或每三週/21天二次持續3、6、9、12、15、18、21、24、27、30或更多週)。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係在每一21天/三週循環的第1及第8天(加/減3、2或1天)投與。在不同循環中之用劑間(例如，在循環1之第8天的一劑與循環2之第1天的一劑間)可存在~14天(加或減3、2或1天)的一治療假期。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係在三週/21天(加/減3、2或1天)的週期期間中投與一次(壹次)。亦即，可每個三週/21天循環投與一劑。該抗原結合分子可每一、二、三、四、五、六或更多個循環投與一次(亦即，1、2、3、4、5、6個或更多個三週/21天之週期每一個一次，或每三週/21天一次持續3、6、9、12、15、18、21、24、27、30或更多週)。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係在每一21天/三週循環的第1天(加/減3、2或1天)投與。在不同循環中之用劑間(例如，在循環1之第1天的一劑與循環2之第1天的一劑間)可存在~21天(加或減3、2或1天)的一治療假期。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係在四週/28天(加/減3、2或1天)的週期期間投與一、二、三或四次。亦即，可每個四週/28天循環投與一、二、三或四劑(亦即，一投與循環可為四週/28天加/減3、2或1天)。該抗原結合分子可每一、二、三、四、五、六或更多個循環投與一、二、三次或四次(亦即，1、2、3、4、5、6個或更多個四週/28天之週期每一個一次，或每四週/28天一、二、三次或四次持續4、8、12、16、20、24、28、32或更多週)。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係在每一28天/四週循環的第1、8、15及/或22天(各加/減3、2或1天)中之一或多者投與。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係在四週/28天(加/減3、2或1天)的週期期間投與二次(貳次)。亦即，可每個四週/28天循環投與二劑。在一些實施態樣中，在四週/28天的週期內，二劑間隔7天或間隔14天(加/減3、2或1天)投與。該抗原結合分子可一、二、三、四、五、六或更多個循環每一個投與二次(亦即，1、2、3、4、5、6個或更多個四週/28天之週期每一個二次，或每四週/28天二次持續4、8、12、16、20、24、28、32、36、40或更多週)。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係在每一28天/四週循環的第1及第15天(加/減3、2或1天)投與。在相同循環中之用劑之間(例如，在循環1之第1天的一劑與循環1之第51天的一劑之間)可有~14天(加或減3、2或1天)的一治療假期。在不同循環中之用劑之間(例如，在循環1之第15天的一劑與循環2之第1天的一劑間)可存在~14天(加或減3、2或1天)的一治療假期。

在一些實施態樣中，投與包含例如每投與投與至少2 mg、至少3、至少5 mg、至少7 mg、至少10 mg、至少11 mg、至少12 mg、至少13 mg、至少14 mg、至少15 mg、至少16 mg、至少17 mg、至少18 mg、至少19 mg、至少20 mg、至少21 mg、至少22 mg、至少23 mg、至少24 mg或至少25 mg。

在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中者)包含，例如每投與，投與約7 mg的抗原結合分子。在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中者)包含，例如每投與，投與約10 mg的抗原結合分子。在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中者)包含，例如每投與，投與約20 mg的抗原結合分子。在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中者)包含，例如每投與，投與約2.2 mg的抗原結合分子。在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中者)包含，例如每投與，投與約3.3 mg的抗原結合分子。在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中者)包含，例如每投與，投與約3.5 mg的抗原結合分子。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係每投與或每投與循環以3.5 mg至1600 mg的劑量來投與，例如如本文所述。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係每投與或每投與循環以3.5 mg至20 mg的劑量來投與，例如如本文所述。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係每投與或每投與循環以20 mg至80 mg的劑量來投與，例如如本文所述。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係每投與或每投與循環以60 mg至400 mg的劑量來投與，例如如本文所述。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係每投與或每投與循環以100 mg至250 mg的劑量來投與，例如如本文所述。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係每投與或每投與循環以300 mg至800 mg的劑量來投與，例如如本文所述。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係每投與或每投與循環以800 mg至1800 mg的劑量來投與，例如如本文所述。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係每投與或每投與循環以1000 mg至1600 mg的劑量來投與，例如如本文所述。

在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中者)包含每投與或每投與循環，例如每三週/21天或四週/28天之週期，投與至少3.5 mg、至少5 mg、至少7.5 mg、至少10 mg、至少12.5 mg、至少15 mg、至少17.5 mg、至少20 mg、至少22.5 mg、至少25 mg、至少27.5 mg、至少30 mg、至少32.5 mg、至少35 mg、至少37.5 mg、至少40 mg、至少42.5 mg、至少45 mg、至少47.5 mg、至少50 mg、至少52.5 mg、至少55 mg、至少57.5 mg、至少60 mg、至少62.5 mg、至少65 mg、至少67.5 mg或至少70 mg的抗原結合分子。

在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中者)包含每投與或每投與循環，例如每三週/21天或四週/28天之週期，投與至少80 mg、至少90 mg、至少100 mg、至少110 mg、至少120 mg、至少130 mg、至少140 mg、至少150 mg、至少160 mg、至少170 mg、至少180 mg、至少190 mg、至少200 mg、至少210 mg、至少220 mg、至少230 mg、至少240 mg、至少250 mg、至少260 mg、至少270 mg、至少280 mg、至少290 mg、至少300 mg、至少310 mg、至少320 mg、至少330 mg、至少340 mg、至少350 mg、至少360 mg、至少370 mg、至少380 mg、至少390 mg、至少400 mg、至少410 mg、至少420 mg、至少430 mg、至少440 mg、至少450 mg、至少460 mg、至少470 mg、至少480 mg、至少490 mg、至少500 mg、至少510 mg、至少520 mg、至少530 mg、至少540 mg、至少550 mg、至少560 mg、至少570 mg、至少580 mg、至少590 mg、至少600 mg、至少610 mg、至少620 mg、至少630 mg、至少640 mg、至少650 mg、至少660 mg、至少670 mg、至少680 mg、至少690 mg、至少700 mg、至少710 mg、至少720 mg、至少730 mg、至少740 mg、至少750 mg、至少760 mg、至少770 mg、至少780 mg、至少790 mg、至少800 mg、至少810 mg、至少820 mg、至少830 mg、至少840 mg、至少850 mg、至少860 mg、至少870 mg、至少880 mg、至少890 mg、至少900 mg、至少910 mg、至少920 mg、至少930 mg、至少940 mg、至少950 mg、至少960 mg、至少970 mg、至少980 mg、至少990 mg、至少1000 mg、至少1050 mg、至少1100 mg、至少1150 mg、至少1200 mg、至少1250 mg、至少1300 mg、至少1350 mg、至少1400 mg、至少1450 mg、至少1500 mg、至少1550 mg、至少1600 mg、至少1650 mg、至少1700 mg、至少1750 mg、至少1800 mg、至少1850 mg、至少1900 mg、至少1950 mg或至少2000 mg的抗原結合分子。

在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中者)包含每投與或每投與循環，例如每三週/21天或四週/28天之週期，投與(高達或至少)3.5 mg、7 mg、10.5 mg、17.5 mg、20 mg、21 mg、40 mg、60 mg、72 mg、120 mg、180 mg、240 mg、360 mg、400 mg、800 mg、1200 mg、1600 mg、1900 mg、2200 mg或2500 mg的抗原結合分子。

在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中者)包含每投與或每投與循環投與60-90 mg、90-120 mg、120-180 mg、180-240 mg或240-360 mg的抗原結合分子。

在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中者)包含每投與或每投與循環，例如每三週/21天或四週/28天之週期，投與約0.05 mg/kg、約0.1 mg/kg、約0.15 mg/kg、約0.25 mg/kg、約0.3 mg/kg、約0.5 mg/kg、約0.9 mg/kg、約1 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約5 mg/kg、約7.5 mg/kg、約10 mg/kg、約12.5 mg/kg、約15 mg/kg、約17.5 mg/kg、約20 mg/kg、約22.5 mg/kg或約25 mg/kg (或所列劑量中之至少一者)的抗原結合分子。

在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中者)包含每投與循環，例如每三週/21天或四週/28天之週期，投與高達10.5 mg、高達21 mg、高達31.5 mg、高達52.5 mg、高達60 mg、高達63 mg、高達120 mg、高達216 mg、高達180 mg、高達360 mg、高達540 mg、高達720 mg、高達1080 mg、高達1200 mg、高達2400 mg、高達3600 mg、高達4800 mg、高達5000 mg、高達5500 mg、高達5700 mg、高達6000 mg、高達6600 mg或高達7500 mg的抗原結合分子。在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中者)包含每投與循環，例如每三週/21天或四週/28天之週期，投與10.5 mg至7500 mg的抗原結合分子。在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中者)包含每投與循環，例如每三週/21天之週期，投與10.5 mg至31.5 mg、31.5 mg至66 mg、66 mg至120 mg、120 mg至216 mg、216 mg至360 mg、360 mg至720 mg、720 mg至1080 mg、1080 mg至1200 mg、1200 mg至2400 mg、2400 mg至3600 mg、3600 mg至4800 mg、4800 mg至6000 mg或6000 mg至7500 mg的抗原結合分子。

在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中者)包含每投與循環，例如每四週/28天之週期，投與高達14 mg、高達28 mg、高達42 mg、高達70 mg、高達80 mg、高達84 mg、高達160 mg、高達240 mg、高達288 mg、高達480 mg、高達720 mg、高達960 mg、高達1440 mg、高達1600 mg、高達3200 mg、高達4800 mg、高達6400 mg、高達6600 mg、高達7200 mg、高達7600 mg、高達8000 mg、高達8800 mg或高達10000 mg的抗原結合分子。在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中者)包含每投與循環，例如每四週/28天之週期，投與14 mg至1000 mg的抗原結合分子。在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中者)包含每投與循環，例如每四週/28天之週期，投與14 mg至42 mg、42 mg至80 mg、80 mg至120 mg、120 mg至160 mg、160 mg至240 mg、240 mg至480 mg、480 mg、至720 mg、720 mg至960 mg、960 mg至1600 mg、1600 mg至3200 mg、3200 mg至4800 mg、4800 mg至6400 mg、6400 mg至7200 mg、7200 mg至8000 mg或8000至10000 mg的抗原結合分子。

本文所述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物係以一或更多劑或本文所述之投與時程與一第二治療劑組合投與。該第二製劑可能能夠由PD-1媒介訊息傳導。能夠抑制PD-1-媒介之訊息傳導的製劑可為PD-1-或PD-L1-靶定製劑。能夠抑制PD-1-媒介之訊息傳導的製劑可為例如能夠對PD-1或PD-L1結合並抑制PD-1-媒介之訊息傳導的一抗體。在一些實施態樣中，該製劑係拮抗劑抗-PD-1抗體。在一些實施態樣中，該製劑係拮抗劑抗-PD-L1抗體。該藥劑可係派立珠單抗(Pembrolizumab) (吉舒達(Keytruda)；MK-3475、蘭利珠單抗(lambrolizumab))、尼沃魯單抗(Nivolumab) (保疾伏(Opdivo))、西米單抗(Cemiplimab) (Libtayo)、阿替珠單抗(Atezolizumab) (癌自禦(Tecentriq))、阿維魯單抗(Avelumab) (巴文西歐(Bavencio))，或德瓦魯單抗(Durvalumab) (抑癌寧(Imfinzi))。此等抗體的劑量和投與方案在本技藝中是可得到的。

在一些實施態樣中，該第二治療劑，例如一能夠抑制PD-1所媒介之訊息傳導的製劑，係在三週/21天(加/減3、2或1天)之週期期間以約200 mg之一劑量投與一次(壹次)。

在本文中使用時，「約」係指指定劑量，且加或減該劑量之10%。舉例而言，「約3.5 mg」之劑量係指在3.15 mg至3.85 mg之範圍的劑量，包括3.5 mg之劑量。

在一些實施態樣中，該抗原結合分子係作為一60分鐘IV輸注(-5 min/+10 min)來投與。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係作為一30分鐘IV輸注(-5 min/+10 min)來投與。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係作為一45分鐘IV輸注(-5 min/+10 min)來投與。該抗原結合分子能調配於例如根據本揭露內容之組成物中供用於IV輸注。

該抗原結合分子可與適當的支援性照護製劑共同投與，例如造血生長因子、皮質類固醇、抗憂鬱劑、二苯胺明(diphenhydramine)、乙醯胺酚(acetaminophen)、血小板生成劑(亦即，羅米司亭(Romiplostim)、艾曲波帕(eltrombopag))或顆粒球聚落刺激因子(G-CSF)製劑(亦即，非格司亭(filgrastim)、培非格司亭(peg filgrastim))、止吐及止瀉製劑、食慾刺激劑、興奮劑(亦即，莫達非尼(modafinil))、抗惡病質療法(亦即，魚油補充劑)、抗憂鬱劑、鴉片及非鴉片止痛劑、抗生素、選擇性使用皮質類固醇、血小板/嗜中性球生長因子、雙膦酸類療法、抗-核因子κβ受體活化子配體療法(例如，德諾單抗(denosumab))、促性腺激素釋放激素(GnRH)促效劑及/或LHRH促效劑。

該抗原結合分子可與一或多種製劑共同投與以治療或預防細胞激素釋放症候群，例如皮質類固醇、抗-IL-6療法(例如，托珠單抗(tocilizumab))、非類固醇抗炎劑、腎上腺素、IV流體、抗組織胺、NSAID、乙醯胺酚、麻醉藥、氧氣及/或血管加壓劑。偵測方法

本發明亦提供本發明之物件以供用於偵測、定位或成像VISTA或表現VISTA的細胞(例如，MDSC)之方法中使用。本文所述之抗原結合分子可使用於涉及對VISTA的該抗原結合分子之方法中。此等方法可涉及偵測該抗原結合分子與VISTA之結合複合物。

特定而言，偵測VISTA在診斷/預後判斷一病理上牽涉表現VISTA的細胞(例如，MDSC)的疾病/病況、識別處於發展此等疾病/病況的風險中的主體之方法上可能係有用的，且/或在預測主體對治療性介入之反應的方法上可能係有用的。

因此，提供一種方法，其包含使一含有或懷疑含有VISTA的樣本與本文所述之抗原結合分子接觸，以及偵測該抗原結合分子與VISTA之複合物的形成。亦提供一種方法，其包含使一含有或懷疑含有表現VISTA的細胞的樣本與本文所述之抗原結合分子接觸，以及偵測該抗原結合分子與表現VISTA的細胞之複合物的形成。

一樣本可取自於任何組織或身體流體。該樣本可包含或可衍生自：一定量的血液；自該個體血液所衍生之一定量的血清，其可包含在移除血纖維蛋白凝塊與血液細胞之後所得之血液的液體部分；一組織樣本或生檢；胸膜積液；腦脊髓液(CSF)；或從該個體單離的細胞。在一些實施態樣中，該樣本可取得自或衍生自受該疾病/病況影響的一或多種組織(例如，顯現該疾病之症狀的一或多種組織，或涉及該疾病/病況之致病機制的一或多種組織)。

合適的方法形式為本技藝中所熟知，包括免疫檢定法，諸如夾心式檢定法，例如ELISA。該方法可以涉及用如本文所述之可偵測的部分，例如螢光標記、磷光標記、發光標記、免疫可偵測的標記、放射性標記、化學、核酸或酵素標記來標記抗原結合分子或目標，或是兩者。偵測技術為熟習此藝者熟知的且可對應於標記劑來選擇。

此種方法可提供用以診斷及/或預後評估例如一癌症之一疾病或病況的方法基礎。此等方法可於一患者樣本或在處理一患者樣本後，於活體外施行。一旦收集樣本，在活體外方法施行時並不需要患者在場，且因此該方法可為一種不於人類或動物體實施的方法。在一些實施態樣中，該方法係於活體內施行。

偵測一樣本可用於診斷一疾病/病況(例如，癌症)、一疾病/病況的傾向或提供一疾病/病況的預後判斷(預示(prognosticating))的目的，例如本文所述之疾病/病況。診斷或預後判斷可能有關於一現存的(先前診斷的)疾病/病況。

本發明亦提供用於選擇/取選(stratify)一主體來以VISTA-靶定製劑治療的方法。在一些實施態樣中，一主體被選擇來根據本發明治療/預防、或識別為能從此種治療/預防獲益的一主體，係基於例如在從該個體獲得的一樣本中偵測/定量到VISTA或表現VISTA的細胞。

此等方法可涉及偵測或定量，例如一患者樣本內的VISTA及/或表現VISTA的細胞(例如，MDSC)。在該方法包含定量相關因子之情況中，該方法可進一步包含將所判定量與一標準或參考值相比，來作為診斷或預後評估的部分。可使用其他的診斷/預後測試來與本文所述之該等結合使用，以增強診斷或預後的準確度，或用於證實使用本文所述之測試所獲得的結果。

從一主體得到的樣本中，偵測到增高的VISTA位準的情況，或偵測到表現VISTA的細胞(例如，MDSC)存在──或數目/比例增高──的情況，該主體可被診斷為具有病理上牽涉MDSC的一疾病/病況，或處於發展此一疾病/病況的風險。在此方法中，「增高的」表現位準或細胞數目/比例係指位準/數目/比例更大於一適當的對照條件所判定的位準/數目/比例，諸如例如從一健康主體獲得的一可比配的樣本(例如從相同流體、組織、器官等獲得的，例如相同種類之樣本)中偵測到的位準/數目/比例。

相較於可比配的樣本(例如從相同流體、組織、器官等獲得的、例如相同種類之樣本)中被判定具有較低的VISTA位準或降低的表現VISTA的細胞(例如，MDSC)數目/比例之主體，在從一主體獲得的樣本中偵測到增高的VISTA位準的情況，或在偵測到表現VISTA的細胞(例如，MDSC)存在──或數目/比例增高──的情況，該主體可被判定為具有一較差的預後。

本發明之抗原結合分子於預測對免疫療法之反應的方法上亦為有用的。「免疫療法」通常係指目的在於利用免疫系統以治療疾病/病況的治療性介入。免疫療法包括增高主體中的作用免疫細胞(例如，作用T細胞(例如，抗原特異性T細胞、CAR-T細胞)、NK細胞)的數目/比例/活性的治療性介入。增高作用免疫細胞的數目/比例/活性的免疫療法包括下列介入：促進作用免疫細胞之增殖及/或存活、抑制免疫查核點分子所媒介之訊息傳導、促進共刺激性受體所媒介之訊息傳導、增強抗原呈現細胞之抗原呈現等。增高作用免疫細胞的數目/比例/活性的免疫療法亦涵蓋用以增加主體內具有所欲特異性或活性之作用免疫細胞的頻率之介入，例如透過過繼性細胞轉移(ACT)。ACT通常涉及從主體獲得免疫細胞，一般藉由抽取血液樣本從其單離出免疫細胞。該等細胞接著一般以某種方式處理或改變，然後投與至相同主體或至一不同主體。ACT一般目的在於將具有特定所欲特性的免疫細胞族群提供給一主體，或增加該主體內具有此等特性之免疫細胞的頻率。在一些實施態樣中，ACT可例如具包含對目標抗原或屬意的細胞類型有特異性的一嵌合抗原受體(CAR)之細胞。免疫療法亦包括用以減少主體中的壓制型免疫細胞(例如，調節性T細胞、MDSCs)之數目/比例/活性的治療性介入。減少壓制型免疫細胞的數目/比例/活性之免疫療法包括用以造成或加强壓制型免疫細胞之細胞殺滅、及抑制免疫查核點分子所媒介之訊息傳導的介入。

相較於可比配的樣本(例如從相同流體、組織、器官等獲得的、例如相同種類之樣本)中被判定具有較低的VISTA位準或降低的表現VISTA的細胞(例如，MDSC)數目/比例之主體，在從一主體獲得的樣本中偵測到增高的VISTA位準的情況，或在偵測到表現VISTA的細胞(例如，MDSC)存在──或數目/比例增高──的情況，該主體可被預測為對用以增高主體內作用免疫細胞的數目/比例/活性之免疫療法具有一較差的反應。相較於可比配的樣本(例如從相同流體、組織、器官等獲得的、例如相同種類之樣本)中被判定具有較低的VISTA位準或降低的表現VISTA的細胞(例如，MDSC)數目/比例之主體，在從一主體獲得的樣本中偵測到增高的VISTA位準的情況，或在偵測到表現VISTA的細胞(例如，MDSC)存在──或數目/比例增高──的情況，該主體可被預測為對目的在於降低主體中壓制型免疫細胞的數目/比例/活性之免疫療法有一改良的反應。

在一些實施態樣中，該等方法包含判定壓制型免疫細胞隔區及作用免疫細胞隔區之相對大小/活性。舉例而言，在一些實施態樣中，該方法運用本文所述之抗原結合分子於判定VISTA-表現細胞(例如，MDSC、TAM、嗜中性球)對作用免疫細胞之比率的方法中。相較於判定具有較低的比率之主體，具有增高比率的一主體可能被預測為對於目的在於降低壓制型免疫細胞的數目/比例/活性之免疫療法具有一改良的反應，及/或可能被預測為對於增高作用免疫細胞的數目/比例/活性之免疫療法具有一較差的反應。

本發明的診斷及預後判斷方法可於該疾病及/或治療的整個過程的多個時間點從一主體獲得的樣本上施行，並且可用於監測疾病/病況隨著時間推移的發展，例如響應於對該主體所投與之治療。根據該方法特徵化的結果可用於告知關於何時投與及投與何種療法給主體之臨床決定。

診斷或預後判斷方法可在從一主體獲得的樣本上或是在處理從一主體獲得的樣本後，在活體外施行。一旦收集樣本，患者不需要就活體外施行診斷或預後判斷方法在場，且因此該方法可為一種不於人類或動物體實施的方法。主體

根據本文所述之本發明之態樣的主體可為任何動物或人類。主體較佳為哺乳動物，更佳為人類。主體可為一非人類哺乳動物，但更佳為人類。主體可為雄性或雌性。主體可為一患者。一主體可能已診斷有需要治療的一疾病或病況(例如，一癌症)、可能懷疑具有此一疾病/病況，或可能處於發展/感染此一疾病/病況的風險中。

在本發明之實施態樣中，主體較佳為一人類主體。在一些實施態樣中，根據本文之發明的一治療或預防方法要治療的主體為具有或處於一發展癌症之風險中的一主體。在本發明之實施態樣中，可基於此等疾病/病況之某些標誌的特徵化來選擇根據該方法治療的一主體。

根據本揭露內容之主體可包含表現或過度表現VISTA/一VISTA交互作用伙伴的細胞，例如免疫細胞及/或腫瘤細胞，例如如本文所述。

主體可包含晚期或轉移性癌症，諸如實性腫瘤，例如經組織學上確認(例如，經由對腫瘤生檢之免疫組織化學法)。癌症可為對傳統治療有抗性或難治性，或者不存在傳統療法。主體可具有對免疫查核點靶定療法有抗性的一癌症，例如抗-CTLA4及/或抗-PD-1/PD-L1療法。

主體可具有三重陰性乳癌(TBNC)，例如晚期、轉移性、抗性或難治性TBNC，且可能已接受針對TNBC之先前治療，例如在治療期間/之後有極少或無治療效益或展現疾病進程。

主體可具有非小細胞肺癌(NSCLC)，例如晚期、轉移性、抗性或難治性TBNC，且可能已經接受針對NSCLC之先前治療，例如在治療期間/之後有極少或無治療效益或展現疾病進程。主體可包含ROS重排、BRAF V600E突變及/或met外顯子14跳讀式突變。在一些實施態樣中，主體包含不具有表皮生長因子受體(EGFR)或退行性淋巴瘤激酶(ALK)之一活化突變的細胞。

主體可能已經接受抗-PD-1或抗-PD-L1療法之先前治療，例如抗-PD-1或抗-PD-L1抗體。主體可能已接受例如與化學療法組合之阿替珠單抗(atezolizumab)之先前治療，例如在治療期間/之後有極少或無治療效益或展現疾病進程。

在一些實施態樣中，就本文所述之治療，一主體可被選擇，係基於例如在從該主體獲得的樣本中偵測到表現/過度表現VISTA及/或一VISTA交互作用伙伴之細胞，或是偵測到包含表現/過度表現VISTA及/或一VISTA交互作用伙伴之細胞的癌症/腫瘤。癌症或細胞可描述為VISTA IHC+。根據本揭露內容之方法可包含，例如在得自主體的一樣本中，偵測包含表現/過度表現VISTA及/或一VISTA交互作用伙伴之細胞的癌症或腫瘤，例如如本文所述。

在一些實施態樣中，就本文所述之治療，一主體可被選擇，係基於例如在從該主體獲得的樣本中偵測到表現/過度表現PD-1及/或PD-L1的細胞。該癌症或細胞可描述為PD-1及/或PD-L1 IHC+。

根據本揭露內容之方法可包含偵測生物標誌，例如循環腫瘤標誌，包括游離DNA (cfDNA)改變對偶基因區段部分/腫瘤區段部分(例如腫瘤衍生的cfDNA，諸如ctDNA)。本發明之方法可以包含偵測細胞激素，例如IL-2、IL-6、IL-8及/或TNFα。本發明之方法可包含對免疫及癌細胞之蛋白質體分析，例如針對VISTA及/或PD-1/PD-L1表現。方法可包含偵測腫瘤浸潤白血球、免疫相關mRNA表現印記及VISTA及PD-1/PD-L1表現之存在及/或改變。

在主體接受治療之前、期間及之後可受評鑑之一或多種腫瘤血清標誌(或標誌列組)，針對主體之癌症/腫瘤類型適當時，包括但不限於：卵巢癌中之CA-125、HE4及OVA1；結腸直腸癌中之CEA；胰臟癌及胃癌中之CA19-9；前列腺癌中之PSA、PAP、PCA3、Oncotype DX GPS印記及Prolaris印記；膀胱癌中之BTA、FGFR2及/或FGFR3基因突變、NMP22以及染色體3、7、17及9p21；NSCLC中之ALK基因重排及過度表現、EGFR基因突變、NSE、PD-L1及ROS1基因重排；卵巢癌及乳癌中之BRCA1及/或BRCA2；例如在結腸直腸癌及NSCLC中之BRAF V600 (例如，BRAF V600E/)及KRAS突變；乳癌中之CA15-3/CA27.29、ER/PR、uPA、PAI-1及Mammaprint印記；肺癌中之細胞角蛋白片段21-1；乳癌、結腸直腸癌、胃癌及胰臟癌中之HCC中之DCP、DPD突變；甲狀腺癌中之甲狀腺球蛋白；以及任何實性腫瘤中之NTRK基因融合體。

本文所述之任何生物標誌可以在治療之前、期間及/或之後使用本文所揭露之方法來偵測，例如以選擇供治療之合適主體及/或監測治療過程或成效。治療後偵測到的生物標誌可與治療前測到的生物標誌作比較。套組

在本文所述之本發明的一些態樣中提供一套組的部件(a kit of parts)。在一些實施態樣中，該套組可具有至少一容器，其具有一預定量之本文所述之一抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物。

在一些實施態樣中，該套組包含例如根據本揭露內容之一組成物中的一50 mg/mL之抗原結合分子溶液。在一些實施態樣中，該套組包含呈一組成物之50 mg/mL的抗原結合分子，該組成物包含20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖、0.02% (w/v)聚山梨醇酯 80，在pH 5.5。

包含50 mg/mL之抗原結合分子的組成物可在使用之前稀釋。該套組可包含稀釋指南。該套組可包含5%之右旋糖，用以稀釋該組成物，例如以得到合適於靜脈內投與之一組成物，例如如本文所述。該套組可包含一組成物，其包含一濃度為至少0.07 mg/mL、或根據本揭露內容之另一濃度之抗原結合分子，例如按原樣或在用右旋糖稀釋後提供。

本揭露內容之抗原結合分子或其他物件可經凍乾(亦即，容器可包含凍乾之抗原結合分子或其他物件)。經凍乾製劑可例如根據本揭露內容重構於一組成物緩衝劑中。該套組可包含用於重構抗原結合分子/其他物件之指南。

該容器可為任何合適的容器，例如一玻璃小瓶。

在一些實施態樣中，該套組可包含供用於生產本文所述之一抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物的材料。

該套組可提供該抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物與投與指南一起給一患者，以治療一特定的疾病/病況，例如使用如本文所述之一劑量/用劑方案，及/或治療本文所述之一疾病/病況。

在一些實施態樣中，該套組可進一步包含至少一容器，其具有一預定量的另一治療劑(例如，抗感染劑或化學療法劑)。在此等實施態樣中，該套組亦可包含一第二藥劑或藥學組成物，以使得該等兩種藥劑或藥學組成物可同時或分開投與，以使得其等針對該特定疾病或病況提供一組合治療。該治療劑亦可予以調配以便合適於注射或輸注至一腫瘤或至血液中。該治療劑可為任何本文所述之此等試劑。該治療劑可為一抗-PD-1/抗-PD-L1製劑，例如抗體。該治療劑可為一拮抗劑抗-PD-1抗體或一拮抗劑抗-PD-L1抗體。序列同一性

在本文中使用時，「序列同一性」係指一主體序列的核苷酸/胺基酸殘基與一參考序列的核苷酸/胺基酸殘基，在排比序列之後的序列同一性百分比，且若需要，則導入間隙以達到序列之間最大的序列同一性百分比。可按熟習此藝者已知的各種方法，來達到用於判定二或更多個胺基酸或核酸序列之間的序列同一性百分比之成對與多重序列排比，例如使用可公開取得的電腦軟體，諸如ClustalOmega (Söding, J. 2005, Bioinformatics 21, 951-960)、T-coffee (Notredame et al. 2000, J. Mol. Biol. (2000) 302, 205-217)、Kalign (Lassmann and Sonnhammer 2005, BMC Bioinformatics, 6(298))及MAFFT (Katoh and Standley 2013, Molecular Biology and Evolution, 30(4) 772-780之軟體。當使用此軟體時，較佳採用內定參數，例如間隙罰分或延長罰分。序列

SEQ ID NO：	說明	序列
1	人類VISTA (Q9H7M9-1，v3)	MGVPTALEAGSWRWGSLLFALFLAASLGPVAAFKVATPYSLYVCPEGQNVTLTCRLLGPVDKGHDVTFYKTWYRSSRGEVQTCSERRPIRNLTFQDLHLHHGGHQAANTSHDLAQRHGLESASDHHGNFSITMRNLTLLDSGLYCCLVVEIRHHHSEHRVHGAMELQVQTGKDAPSNCVVYPSSSQDSENITAAALATGACIVGILCLPLILLLVYKQRQAASNRRAQELVRMDSNIQGIENPGFEASPPAQGIPEAKVRHPLSYVAQRQPSESGRHLLSEPSTPLSPPGPGDVFFPSLDPVPDSPNFEVI
2	成熟人類VISTA (Q9H7M9-1，v3位置33至311)	FKVATPYSLYVCPEGQNVTLTCRLLGPVDKGHDVTFYKTWYRSSRGEVQTCSERRPIRNLTFQDLHLHHGGHQAANTSHDLAQRHGLESASDHHGNFSITMRNLTLLDSGLYCCLVVEIRHHHSEHRVHGAMELQVQTGKDAPSNCVVYPSSSQDSENITAAALATGACIVGILCLPLILLLVYKQRQAASNRRAQELVRMDSNIQGIENPGFEASPPAQGIPEAKVRHPLSYVAQRQPSESGRHLLSEPSTPLSPPGPGDVFFPSLDPVPDSPNFEVI
3	細胞外域人類VISTA (Q9H7M9-1，v3位置33至194)	FKVATPYSLYVCPEGQNVTLTCRLLGPVDKGHDVTFYKTWYRSSRGEVQTCSERRPIRNLTFQDLHLHHGGHQAANTSHDLAQRHGLESASDHHGNFSITMRNLTLLDSGLYCCLVVEIRHHHSEHRVHGAMELQVQTGKDAPSNCVVYPSSSQDSENITAA
4	跨膜域人類VISTA (Q9H7M9-1，v3位置195至215)	ALATGACIVGILCLPLILLLV
5	細胞質域人類VISTA (Q9H7M9-1，v3位置216至311)	YKQRQAASNRRAQELVRMDSNIQGIENPGFEASPPAQGIPEAKVRHPLSYVAQRQPSESGRHLLSEPSTPLSPPGPGDVFFPSLDPVPDSPNFEVI
6	Ig樣V型域人類VISTA (Q9H7M9-1，v3位置33至168)	FKVATPYSLYVCPEGQNVTLTCRLLGPVDKGHDVTFYKTWYRSSRGEVQTCSERRPIRNLTFQDLHLHHGGHQAANTSHDLAQRHGLESASDHHGNFSITMRNLTLLDSGLYCCLVVEIRHHHSEHRVHGAMELQV
7	人類VSIG-3同功異型體1 (Q5DX21-1，v3)	MTSQRSPLAPLLLLSLHGVAASLEVSESPGSIQVARGQPAVLPCTFTTSAALINLNVIWMVTPLSNANQPEQVILYQGGQMFDGAPRFHGRVGFTGTMPATNVSIFINNTQLSDTGTYQCLVNNLPDIGGRNIGVTGLTVLVPPSAPHCQIQGSQDIGSDVILLCSSEEGIPRPTYLWEKLDNTLKLPPTATQDQVQGTVTIRNISALSSGLYQCVASNAIGTSTCLLDLQVISPQPRNIGLIAGAIGTGAVIIIFCIALILGAFFYWRSKNKEEEEEEIPNEIREDDLPPKCSSAKAFHTEISSSDNNTLTSSNAYNSRYWSNNPKVHRNTESVSHFSDLGQSFSFHSGNANIPSIYANGTHLVPGQHKTLVVTANRGSSPQVMSRSNGSVSRKPRPPHTHSYTISHATLERIGAVPVMVPAQSRAGSLV
8	人類VSIG-3同功異型體2 (Q5DX21-2)	MSLVELLLWWNCFSRTGVAASLEVSESPGSIQVARGQPAVLPCTFTTSAALINLNVIWMVTPLSNANQPEQVILYQGGQMFDGAPRFHGRVGFTGTMPATNVSIFINNTQLSDTGTYQCLVNNLPDIGGRNIGVTGLTVLVPPSAPHCQIQGSQDIGSDVILLCSSEEGIPRPTYLWEKLDNTLKLPPTATQDQVQGTVTIRNISALSSGLYQCVASNAIGTSTCLLDLQVISPQPRNIGLIAGAIGTGAVIIIFCIALILGAFFYWRSKNKEEEEEEIPNEIREDDLPPKCSSAKAFHTEISSSDNNTLTSSNAYNSRYWSNNPKVHRNTESVSHFSDLGQSFSFHSGNANIPSIYANGTHLVPGQHKTLVVTANRGSSPQVMSRSNGSVSRKPRPPHTHSYTISHATLERIGAVPVMVPAQSRAGSLV
9	人類VSIG-3同功異型體3 (Q5DX21-3)	MSLVELLLWWNCFSRTGVAASLEVSESPGSIQVARGQPAVLPCTFTTSAALINLNVIWMVTPLSNANQPEQVILYQGGQMFDGAPRFHGRVGFTGTMPATNVSIFINNTQLSDTGTYQCLVNNLPDIGGRNIGVTGLTVLVPPSAPHCQIQGSQDIGSDVILLCSSEEGIPRPTYLWEKLDNTLKLPPTATQDQVQGTVTIRNISALSSAQPRNIGLIAGAIGTGAVIIIFCIALILGAFFYWRSKNKEEEEEEIPNEIREDDLPPKCSSAKAFHTEISSSDNNTLTSSNAYNSRYWSNNPKVHRNTESVSHFSDLGQSFSFHSGNANIPSIYANGTHLVPGQHKTLVVTANRGSSPQVMSRSNGSVSRKPRPPHTHSYTISHATLERIGAVPVMVPAQSRAGSLV
10	成熟人類VSIG-3同功異型體1 (Q5DX21-1，v3位置23至431)	LEVSESPGSIQVARGQPAVLPCTFTTSAALINLNVIWMVTPLSNANQPEQVILYQGGQMFDGAPRFHGRVGFTGTMPATNVSIFINNTQLSDTGTYQCLVNNLPDIGGRNIGVTGLTVLVPPSAPHCQIQGSQDIGSDVILLCSSEEGIPRPTYLWEKLDNTLKLPPTATQDQVQGTVTIRNISALSSGLYQCVASNAIGTSTCLLDLQVISPQPRNIGLIAGAIGTGAVIIIFCIALILGAFFYWRSKNKEEEEEEIPNEIREDDLPPKCSSAKAFHTEISSSDNNTLTSSNAYNSRYWSNNPKVHRNTESVSHFSDLGQSFSFHSGNANIPSIYANGTHLVPGQHKTLVVTANRGSSPQVMSRSNGSVSRKPRPPHTHSYTISHATLERIGAVPVMVPAQSRAGSLV
11	成熟人類VSIG-3同功異型體2 (Q5DX21-2位置23至431)	LEVSESPGSIQVARGQPAVLPCTFTTSAALINLNVIWMVTPLSNANQPEQVILYQGGQMFDGAPRFHGRVGFTGTMPATNVSIFINNTQLSDTGTYQCLVNNLPDIGGRNIGVTGLTVLVPPSAPHCQIQGSQDIGSDVILLCSSEEGIPRPTYLWEKLDNTLKLPPTATQDQVQGTVTIRNISALSSGLYQCVASNAIGTSTCLLDLQVISPQPRNIGLIAGAIGTGAVIIIFCIALILGAFFYWRSKNKEEEEEEIPNEIREDDLPPKCSSAKAFHTEISSSDNNTLTSSNAYNSRYWSNNPKVHRNTESVSHFSDLGQSFSFHSGNANIPSIYANGTHLVPGQHKTLVVTANRGSSPQVMSRSNGSVSRKPRPPHTHSYTISHATLERIGAVPVMVPAQSRAGSLV
12	成熟人類VSIG-3同功異型體3 (Q5DX21-3位置23至407)	LEVSESPGSIQVARGQPAVLPCTFTTSAALINLNVIWMVTPLSNANQPEQVILYQGGQMFDGAPRFHGRVGFTGTMPATNVSIFINNTQLSDTGTYQCLVNNLPDIGGRNIGVTGLTVLVPPSAPHCQIQGSQDIGSDVILLCSSEEGIPRPTYLWEKLDNTLKLPPTATQDQVQGTVTIRNISALSSAQPRNIGLIAGAIGTGAVIIIFCIALILGAFFYWRSKNKEEEEEEIPNEIREDDLPPKCSSAKAFHTEISSSDNNTLTSSNAYNSRYWSNNPKVHRNTESVSHFSDLGQSFSFHSGNANIPSIYANGTHLVPGQHKTLVVTANRGSSPQVMSRSNGSVSRKPRPPHTHSYTISHATLERIGAVPVMVPAQSRAGSLV
13	細胞外域人類VSIG-3同功異型體1及2	LEVSESPGSIQVARGQPAVLPCTFTTSAALINLNVIWMVTPLSNANQPEQVILYQGGQMFDGAPRFHGRVGFTGTMPATNVSIFINNTQLSDTGTYQCLVNNLPDIGGRNIGVTGLTVLVPPSAPHCQIQGSQDIGSDVILLCSSEEGIPRPTYLWEKLDNTLKLPPTATQDQVQGTVTIRNISALSSGLYQCVASNAIGTSTCLLDLQVISPQPRNIG
14	細胞外域人類VSIG-3同功異型體3	LEVSESPGSIQVARGQPAVLPCTFTTSAALINLNVIWMVTPLSNANQPEQVILYQGGQMFDGAPRFHGRVGFTGTMPATNVSIFINNTQLSDTGTYQCLVNNLPDIGGRNIGVTGLTVLVPPSAPHCQIQGSQDIGSDVILLCSSEEGIPRPTYLWEKLDNTLKLPPTATQDQVQGTVTIRNISALSSAQPRNIG
15	跨膜域人類VSIG-3	LIAGAIGTGAVIIIFCIALIL
16	細胞質域人類VSIG-3	GAFFYWRSKNKEEEEEEIPNEIREDDLPPKCSSAKAFHTEISSSDNNTLTSSNAYNSRYWSNNPKVHRNTESVSHFSDLGQSFSFHSGNANIPSIYANGTHLVPGQHKTLVVTANRGSSPQVMSRSNGSVSRKPRPPHTHSYTISHATLERIGAVPVMVPAQSRAGSLV
17	Ig樣V型域人類VSIG-3	LEVSESPGSIQVARGQPAVLPCTFTTSAALINLNVIWMVTPLSNANQPEQVILYQGGQMFDGAPRFHGRVGFTGTMPATNVSIFINNTQLSDTGTYQCLVNNLPDIGGRNIGVT
18	Ig樣C2型域人類VSIG-3	PSAPHCQIQGSQDIGSDVILLCSSEEGIPRPTYLWEKLDNTLKLPPTATQDQVQGTVTIRNISALSSGLYQCVASNAIGTSTCLLDLQVIS
19	人類VSIG-8 (P0DPA2-1，v1)	MRVGGAFHLLLVCLSPALLSAVRINGDGQEVLYLAEGDNVRLGCPYVLDPEDYGPNGLDIEWMQVNSDPAHHRENVFLSYQDKRINHGSLPHLQQRVRFAASDPSQYDASINLMNLQVSDTATYECRVKKTTMATRKVIVTVQARPAVPMCWTEGHMTYGNDVVLKCYASGGSQPLSYKWAKISGHHYPYRAGSYTSQHSYHSELSYQESFHSSINQGLNNGDLVLKDISRADDGLYQCTVANNVGYSVCVVEVKVSDSRRIGVIIGIVLGSLLALGCLAVGIWGLVCCCCGGSGAGGARGAFGYGNGGGVGGGACGDLASEIREDAVAPGCKASGRGSRVTHLLGYPTQNVSRSLRRKYAPPPCGGPEDVALAPCTAAAACEAGPSPVYVKVKSAEPADCAEGPVQCKNGLLV
20	成熟人類VSIG-8 (P0DPA2-1，v1位置22至414)	VRINGDGQEVLYLAEGDNVRLGCPYVLDPEDYGPNGLDIEWMQVNSDPAHHRENVFLSYQDKRINHGSLPHLQQRVRFAASDPSQYDASINLMNLQVSDTATYECRVKKTTMATRKVIVTVQARPAVPMCWTEGHMTYGNDVVLKCYASGGSQPLSYKWAKISGHHYPYRAGSYTSQHSYHSELSYQESFHSSINQGLNNGDLVLKDISRADDGLYQCTVANNVGYSVCVVEVKVSDSRRIGVIIGIVLGSLLALGCLAVGIWGLVCCCCGGSGAGGARGAFGYGNGGGVGGGACGDLASEIREDAVAPGCKASGRGSRVTHLLGYPTQNVSRSLRRKYAPPPCGGPEDVALAPCTAAAACEAGPSPVYVKVKSAEPADCAEGPVQCKNGLLV
21	細胞外域人類VSIG-8 (P0DPA2-1，v1位置22至263)	VRINGDGQEVLYLAEGDNVRLGCPYVLDPEDYGPNGLDIEWMQVNSDPAHHRENVFLSYQDKRINHGSLPHLQQRVRFAASDPSQYDASINLMNLQVSDTATYECRVKKTTMATRKVIVTVQARPAVPMCWTEGHMTYGNDVVLKCYASGGSQPLSYKWAKISGHHYPYRAGSYTSQHSYHSELSYQESFHSSINQGLNNGDLVLKDISRADDGLYQCTVANNVGYSVCVVEVKVSDSRRIG
22	跨膜域人類VSIG-8 (P0DPA2-1，v1位置264至284)	VIIGIVLGSLLALGCLAVGIW
23	細胞質域人類VSIG-8 (P0DPA2-1，v1位置285至414)	GLVCCCCGGSGAGGARGAFGYGNGGGVGGGACGDLASEIREDAVAPGCKASGRGSRVTHLLGYPTQNVSRSLRRKYAPPPCGGPEDVALAPCTAAAACEAGPSPVYVKVKSAEPADCAEGPVQCKNGLLV
24	Ig樣V型域1人類VSIG-8 (P0DPA2-1，v1位置22至141)	VRINGDGQEVLYLAEGDNVRLGCPYVLDPEDYGPNGLDIEWMQVNSDPAHHRENVFLSYQDKRINHGSLPHLQQRVRFAASDPSQYDASINLMNLQVSDTATYECRVKKTTMATRKVIVT
25	Ig樣V型域2人類VSIG-8 (P0DPA2-1，v1位置146至257)	PAVPMCWTEGHMTYGNDVVLKCYASGGSQPLSYKWAKISGHHYPYRAGSYTSQHSYHSELSYQESFHSSINQGLNNGDLVLKDISRADDGLYQCTVANNVGYSVCVVEVKVS
26	由抗-VISTA抗體殖株4M2-C12、4M2-B4、4M2-C9、4M2-D9、4M2-D5、4M2-A8、V4H1、V4H2、V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30及V4-C31所辨識的表位	SRGEVQTCSERRPI
27	由抗-VISTA抗體殖株2M1-B12及2M1-D2所辨識的表位	FQDLHLHHGGHQAA
28	由抗-VISTA抗體殖株1M2-D2、13D5p、13D5-1及13D5-13所辨識的表位	CLVVEIRHHHSEHR
29	由抗-VISTA抗體殖株5M1-A11所辨識的表位	DKGHDVTFYKT
30	由抗-VISTA抗體殖株9M2-C12所辨識的表位	RHHHSEHRVHG
31	人類VISTA之位置61至162 (Q9H7M9-1，v3)	DKGHDVTFYKTWYRSSRGEVQTCSERRPIRNLTFQDLHLHHGGHQAANTSHDLAQRHGLESASDHHGNFSITMRNLTLLDSGLYCCLVVEIRHHHSEHRVHG
32	4M2-C12重鏈變異區	EVKLVESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYITYSGNISYNPSLRSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTPEDTATYSCARSLYYPWYFDVWGAGTTVTVSS
33	4M2-C12、4M2-B4、V4H2、4M2-D9、V4-C1、V4-C9重鏈CDR1	GYSITSDYA
34	4M2-C12、4M2-B4、V4H1、V4H2重鏈CDR2	ITYSGNI
35	4M2-C12、4M2-B4、V4H1、V4H2重鏈CDR3	ARSLYYPWYFDV
36	4M2-C12重鏈FR1	EVKLVESGPGLVKPSQSLSLTCTVT
37	4M2-C12、4M2-B4重鏈FR2	WNWIRQFPGNKLEWMGY
38	4M2-C12、4M2-B4重鏈FR3	SYNPSLRSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTPEDTATYSC
39	4M2-C12、4M2-B4、V4H1、V4H2、13D5p、13D5-1、13D5-13重鏈FR4	WGAGTTVTVSS
40	4M2-C12輕鏈變異區	DIVITQTPAILSTSPGEKVTMTCRASSSVGYIHWYQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSNSLTITRVEAEDAATYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVK
41	4M2-C12、4M2-B4、V4H1、V4H2、V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、 V4-C28、V4-C30、V4-C31輕鏈CDR1	SSVGY
42	4M2-C12、4M2-B4、V4-C1、V4-C9、V4-C28輕鏈CDR2	ATS
43	4M2-C12, 4M2-B4, V4H1, V4H2, V4-C1 V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31輕鏈CDR3	QQWSSYPPIT
44	4M2-C12輕鏈FR1	DIVITQTPAILSTSPGEKVTMTCRAS
45	4M2-C12、4M2-B4輕鏈FR2	IHWYQQKPGSSPKPWIY
46	4M2-C12、4M2-B4輕鏈FR3	NLASGVPARFSGSGSGTSNSLTITRVEAEDAATYYC
47	4M2-C12、4M2-B4、V4H1、V4H2、V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31輕鏈FR4	FGGGTKLEVK
48	4M2-B4重鏈變異區	EVMLVESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYITYSGNISYNPSLRSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTPEDTATYSCARSLYYPWYFDVWGAGTTVTVSS
49	4M2-B4重鏈FR1	EVMLVESGPGLVKPSQSLSLTCTVT
50	4M2-B4輕鏈變異區	DIVLTQTTAILSTSPGEKVTMTCRASSSVGYIHWYQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSNSLTITRVEAEDAATYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVK
51	4M2-B4輕鏈FR1	DIVLTQTTAILSTSPGEKVTMTCRA
52	V4H1重鏈變異區	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTITSDYAMSWVRQAPGKGLEWVSVITYSGNISYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSLYYPWYFDVWGAGTTVTVSS
53	V4H1重鏈CDR1	GYTITSDYA
54	V4H1重鏈FR1	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAAS
55	V4H1重鏈FR2	MSWVRQAPGKGLEWVSV
56	V4H1重鏈FR3	SYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC
57	V4H1輕鏈變異區	EIVITQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYLAWYQQKPGQAPRPLIYDTSNRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVK
58	V4H1輕鏈CDR2	DTS
59	V4H1、V4-C1輕鏈FR1	EIVITQSPATLSLSPGERATLSCRAS
60	V4H1輕鏈FR2	LAWYQQKPGQAPRPLIY
61	V4H1輕鏈FR3	NRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDFAVYYC
62	V4H2重鏈變異區	QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCTVSGYSITSDYAWSWIRQPPGKGLEWIGYITYSGNISYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYDCARSLYYPWYFDVWGAGTTVTVSS
63	V4H2、V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31重鏈FR1	QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCTVS
64	V4H2重鏈FR2	WSWIRQPPGKGLEWIGY
65	V4H2重鏈FR3	SYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYDC
66	V4H2輕鏈變異區	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVGYLNWYQQKPGKAPKPLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDNTLTISSLQPEDFATYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVK
67	V4H2、4M2-D9輕鏈CDR2	AAS
68	V4H2輕鏈FR1	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRA
69	V4H2輕鏈FR2	LNWYQQKPGKAPKPLIY
70	V4H2輕鏈FR3	SLQSGVPSRFSGSGSGTDNTLTISSLQPEDFATYYC
71	2M1-B12重鏈變異區	EVQLQQSGAELVRPGTSVKTSCKASGYTFTNYWLGWVKERAGHGLEWIGEIFPGGGHTNYKEKFKGKATLTADTSSSTAYMKLSSLTSEDSAVYFCAQIPLYYGHYRSAYWGQGTLVTVSA
72	2M1-B12、2M1-D2、13D5p、13D5-1、13D5-13重鏈CDR1	GYTFTNYW
73	2M1-B12、2M1-D2重鏈CDR2	IFPGGGHT
74	2M1-B12、2M1-D2重鏈CDR3	AQIPLYYGHYRSAY
75	2M1-B12重鏈FR1	EVQLQQSGAELVRPGTSVKTSCKAS
76	2M1-B12、2M1-D2重鏈FR2	LGWVKERAGHGLEWIGE
77	2M1-B12、2M1-D2重鏈FR3	NYKEKFKGKATLTADTSSSTAYMKLSSLTSEDSAVYFC
78	2M1-B12、2M1-D2、1M2-D2重鏈FR4	WGQGTLVTVSA
79	2M1-B12輕鏈變異區	DIQMMQSPASLSASVGETVAITCGASENIYGALNWYQRKQGKSPQLLIYGATNLADGMSSRFSGSGSGRQYSLKISSLHPDDVATYYCQNVLSTPYTFGGGTKLEIK
80	2M1-B12、2M1-D2輕鏈CDR1	ENIYGA
81	2M1-B12、2M1-D2輕鏈CDR2	GAT
82	2M1-B12、2M1-D2輕鏈CDR3	QNVLSTPYT
83	2M1-B12輕鏈FR1	DIQMMQSPASLSASVGETVAITCGAS
84	2M1-B12、2M1-D2輕鏈FR2	LNWYQRKQGKSPQLLIY
85	2M1-B12、2M1-D2輕鏈FR3	NLADGMSSRFSGSGSGRQYSLKISSLHPDDVATYYC
86	2M1-B12、4M2-C9、2M1-D2、4M2-D9、1M2-D2、5M1-A11、4M2-D5、4M2-A8、9M2-C12、13D5p、13D5-1、13d5-13輕鏈FR4	FGGGTKLEIK
87	4M2-C9重鏈變異區	QVTLKECGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVSWIRQPSGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDSSSNQVFLKITSVDTADTATYYCARRLDGYNDPYYFDYWGQGTTLTVSS
88	4M2-C9、5M1-A11重鏈CDR1	GFSLSTSGMG
89	4M2-C9、5M1-A11重鏈CDR2	IYWDDDK
90	4M2-C9、5M1-A11重鏈CDR3	ARRLDGYNDPYYFDY
91	4M2-C9重鏈FR1	QVTLKECGPGILQPSQTLSLTCSFS
92	4M2-C9、5M1-A11重鏈FR2	VSWIRQPSGKGLEWLAH
93	4M2-C9、5M1-A11重鏈FR3	RYNPSLKSRLTISKDSSSNQVFLKITSVDTADTATYYC
94	4M2-C9重鏈FR4	WGQGTTLTVSS
95	4M2-C9輕鏈變異區	DIVMTQSPSSLSASLGDTVTITCHASQNVNVWLSWYQQKPGNIPKLLIYKASNLHAGVPSRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQGQSYPLTFGGGTKLEIK
96	4M2-C9輕鏈CDR1	QNVNVW
97	4M2-C9輕鏈CDR2	KAS
98	4M2-C9輕鏈CDR3	QQGQSYPLT
99	4M2-C9輕鏈FR1	DIVMTQSPSSLSASLGDTVTITCHAS
100	4M2-C9輕鏈FR2	LSWYQQKPGNIPKLLIY
101	4M2-C9輕鏈FR3	NLHAGVPSRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYC
102	2M1-D2重鏈變異區	QVQLQQSGAELVRPGTSVKISCKASGYTFTNYWLGWVKERAGHGLEWIGEIFPGGGHTNYKEKFKGKATLTADTSSSTAYMKLSSLTSEDSAVYFCAQIPLYYGHYRSAYWGQGTLVTVSA
103	2M1-D2、13D5p、13D5-1、13D5-13重鏈FR1	QVQLQQSGAELVRPGTSVKISCKAS
104	2M1-D2輕鏈變異區	DIVMTQSPASLSASVGETVAITCGASENIYGALNWYQRKQGKSPQLLIYGATNLADGMSSRFSGSGSGRQYSLKISSLHPDDVATYYCQNVLSTPYTFGGGTKLEIK
105	2M1-D2輕鏈FR1	DIVMTQSPASLSASVGETVAITCGAS
106	4M2-D9重鏈變異區	EVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNRLEWMGFISYSGFTTYSPSLESRISITRDTSKNQFFLQLISVTTEDTATYYCARNHYGGSYWYFDVWGAGTSVTVSS
107	4M2-D9重鏈CDR2	ISYSGFT
108	4M2-D9重鏈CDR3	ARNHYGGSYWYFDV
109	4M2-D9重鏈FR1	EVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVT
110	4M2-D9重鏈FR2	WNWIRQFPGNRLEWMGF
111	4M2-D9重鏈FR3	TYSPSLESRISITRDTSKNQFFLQLISVTTEDTATYYC
112	4M2-D9重鏈FR4	WGAGTSVTVSS
113	4M2-D9輕鏈變異區	DIVMTQSPGSLAVSLGQRATISCRASESVEYYGTSLMQWYLQKPGQPPKLLIYAASNVESGVPDRFRGSGSGTDFSLNIHPVEEDDIAMYFCQQSRKVPWTFGGGTKLEIK
114	4M2-D9輕鏈CDR1	ESVEYYGTSL
115	4M2-D9輕鏈CDR3	QQSRKVPWT
116	4M2-D9輕鏈FR1	DIVMTQSPGSLAVSLGQRATISCRAS
117	4M2-D9輕鏈FR2	MQWYLQKPGQPPKLLIY
118	4M2-D9輕鏈FR3	NVESGVPDRFRGSGSGTDFSLNIHPVEEDDIAMYFC
119	1M2-D2重鏈變異區	EVKVEESGGGLVQPGGSMKLSCAASGFTFSDAWMDWVHQSPEKGLEWVAEIRSKANNHATYYVESVEGRFTISRDDSKSSVFLQVNSLRPEDTGIYYCTRRDGYYFAYWGQGTLVTVSA
120	1M2-D2重鏈CDR1	GFTFSDAW
121	1M2-D2重鏈CDR2	IRSKANNHAT
122	1M2-D2重鏈CDR3	TRRDGYYFAY
123	1M2-D2重鏈FR1	EVKVEESGGGLVQPGGSMKLSCAAS
124	1M2-D2重鏈FR2	MDWVHQSPEKGLEWVAE
125	1M2-D2重鏈FR3	YYVESVEGRFTISRDDSKSSVFLQVNSLRPEDTGIYYC
126	1M2-D2輕鏈變異區	DIVLTQSPAIMSASLGEEITLTCSASSSVRDMHWYQQKSGTSPKVLIYNTFNLASGVPSRFSGSGSGTFYSLTISSVEAGDAAAYYCHQWSSYPTFGGGTKLEIK
127	1M2-D2輕鏈CDR1	SSSVRD
128	1M2-D2輕鏈CDR2	NTF
129	1M2-D2輕鏈CDR3	HQWSSYPT
130	1M2-D2輕鏈FR1	DIVLTQSPAIMSASLGEEITLTCSA
131	1M2-D2輕鏈FR2	MHWYQQKSGTSPKVLIY
132	1M2-D2輕鏈FR3	NLASGVPSRFSGSGSGTFYSLTISSVEAGDAAAYYC
133	5M1-A11重鏈變異區	QVTLKVSGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVSWIRQPSGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDSSSNQVFLKITSVDTADTATYYCARRLDGYNDPYYFDYWGQGTTLTVSS
134	5M1-A11重鏈FR1	QVTLKVSGPGILQPSQTLSLTCSFS
135	5M1-A11、4M2-D5、4M2-A8重鏈FR4	WGQGTTLTVSS
136	5M1-A11輕鏈變異區	DVVMTQTPALMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMYWYQQKPRSSPKPWIYLTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWNSNPYTFGGGTKLEIK
137	5M1-A11輕鏈CDR1	SSVSY
138	5M1-A11輕鏈CDR2	LTS
139	5M1-A11輕鏈CDR3	QQWNSNPYT
140	5M1-A11輕鏈FR1	DVVMTQTPALMSASPGEKVTMTCSAS
141	5M1-A11輕鏈FR2	MYWYQQKPRSSPKPWIY
142	5M1-A11輕鏈FR3	NLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYC
143	4M2-D5重鏈變異區	QVQLQQSGAELARPGASVRMSCKASGYTFTSYTMNWVKQRPGQGLEWIGFINPDSDYTTYDQKFKDKATLTADSSSSTAYMQLSSLTYDDSAVYYCTRHSYGNYGDYWGQGTTLTVSS
144	4M2-D5重鏈CDR1	GYTFTSYT
145	4M2-D5重鏈CDR2	INPDSDYT
146	4M2-D5重鏈CDR3	TRHSYGNYGDY
147	4M2-D5重鏈FR1	QVQLQQSGAELARPGASVRMSCKAS
148	4M2-D5重鏈FR2	MNWVKQRPGQGLEWIGF
149	4M2-D5重鏈FR3	TYDQKFKDKATLTADSSSSTAYMQLSSLTYDDSAVYYC
150	4M2-D5輕鏈變異區	DIVLTQSPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVTNDVAWYQQKPGQSPKLLIYYASSRYTGVPDRFTGSGFGTDFTFTINTVQAEDLAVYFCQQDYSSPYTFGGGTKLEIK
151	4M2-D5輕鏈CDR1	QSVTND
152	4M2-D5、4M2-A8輕鏈CDR2	YAS
153	4M2-D5、4M2-A8輕鏈CDR3	QQDYSSPYT
154	4M2-D5輕鏈FR1	DIVLTQSPKFLLVSAGDRVTITCKAS
155	4M2-D5、4M2-A8輕鏈FR2	VAWYQQKPGQSPKLLIY
156	4M2-D5輕鏈FR3	SRYTGVPDRFTGSGFGTDFTFTINTVQAEDLAVYFC
157	4M2-A8重鏈變異區	QVQLQQSGADLARPGASVKMSCKASGYTFIDYTVHWVKQRPGQGLEWIGFINPSNDYTSYNQKFKDKASLTADTSSTTAYMQLSSLTSDDSAVYYCARHSYGNYGDYWGQGTTLTVSS
158	4M2-A8重鏈CDR1	GYTFIDYT
159	4M2-A8重鏈CDR2	INPSNDYT
160	4M2-A8重鏈CDR3	ARHSYGNYGDY
161	4M2-A8重鏈FR1	QVQLQQSGADLARPGASVKMSCKAS
162	4M2-A8重鏈FR2	VHWVKQRPGQGLEWIGF
163	4M2-A8重鏈FR3	SYNQKFKDKASLTADTSSTTAYMQLSSLTSDDSAVYYC
164	4M2-A8輕鏈變異區	DIVMTQAPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVTNGVAWYQQKPGQSPKLLIYYASNRYTGVPDRFTGSGFGTDFTFTISTVQAEDLAVYFCQQDYSSPYTFGGGTKLEIK
165	4M2-A8輕鏈CDR1	QSVTNG
166	4M2-A8輕鏈FR1	DIVMTQAPKFLLVSAGDRVTITCKAS
167	4M2-A8輕鏈FR3	NRYTGVPDRFTGSGFGTDFTFTISTVQAEDLAVYFC
168	9M2-C12重鏈變異區	QVQLQQSGAELVKPGASVRLSCKASGYTFTSYWMHWVRQRPGLGLEWIGEIDPSDSYTNCNQRFKGKATLTVDKSSSTAYTQLSSLTSEDSAVYYCARWAYGPYAMDYWGQGTSVTVSS
169	9M2-C12重鏈CDR1	GYTFTSYW
170	9M2-C12重鏈CDR2	IDPSDSYT
171	9M2-C12重鏈CDR3	ARWAYGPYAMDY
172	9M2-C12重鏈FR1	QVQLQQSGAELVKPGASVRLSCKAS
173	9M2-C12重鏈FR2	MHWVRQRPGLGLEWIGE
174	9M2-C12重鏈FR3	NCNQRFKGKATLTVDKSSSTAYTQLSSLTSEDSAVYYC
175	9M2-C12重鏈FR4	WGQGTSVTVSS
176	9M2-C12輕鏈變異區	DIVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPWTFGGGTKLEIK
177	9M2-C12輕鏈CDR1	QSLVHSNGNTY
178	9M2-C12、13D5p、13D5-1、13D5-13輕鏈CDR2	KVS
179	9M2-C12輕鏈CDR3	SQSTHVPWT
180	9M2-C12輕鏈FR1	DIVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSS
181	9M2-C12輕鏈FR2	LHWYLQKPGQSPKLLIY
182	9M2-C12輕鏈FR3	NRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFC
183	13D5p重鏈變異區	QVQLQQSGAELVRPGTSVKISCKASGYTFTNYWLGWVKQRPGHGLEWIGDIYPGGGYTNYNEKFKGKATLTADTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARGGYYYGSSWYFDVWGAGTTVTVSS
184	13D5p、13D5-1、13D5-13重鏈CDR2	IYPGGGYT
185	13D5p重鏈CDR3	ARGGYYYGSSWYFDV
186	13D5p、13D5-1、13D5-13重鏈FR2	LGWVKQRPGHGLEWIGD
187	13D5p、13D5-1重鏈FR3	NYNEKFKGKATLTADTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFC
188	13D5p輕鏈變異區	DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPPTFGGGTKLEIK
189	13D5p輕鏈CDR1	QSIVHSNGNTY
190	13D5p、13D5-1、13D5-13輕鏈CDR3	FQGSHVPPT
191	13D5p、13D5-1、13D5-13輕鏈FR1	DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSS
192	13D5p、13D5-13輕鏈FR2	LEWYLQKPGQSPKLLIY
193	13D5p、13D5-1輕鏈FR3	NRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYC
194	13D5-1重鏈變異區	QVQLQQSGAELVRPGTSVKISCKASGYTFTNYWLGWVKQRPGHGLEWIGDIYPGGGYTNYNEKFKGKATLTADTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCVRSGYYYGSSWYFDVWGAGTTVTVSS
195	13D5-1重鏈CDR3	VRSGYYYGSSWYFDV
196	13D5-1輕鏈變異區	DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSSGNTYLEWYLQKPDQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPPTFGGGTKLEIK
197	13D5-1輕鏈CDR1	QSIVHSSGNTY
198	13D5-1輕鏈FR2	LEWYLQKPDQSPKLLIY
199	13D5-13重鏈變異區	QVQLQQSGAELVRPGTSVKISCKASGYTFTNYWLGWVKQRPGHGLEWIGDIYPGGGYTNYNEKFKGKATLTADISSSTAYMQLSSLTSEDSADYFCVRGGYYYGSSWYFDVWGAGTTVTVSS
200	13D5-13重鏈CDR3	VRGGYYYGSSWYFDV
201	13D5-13重鏈FR3	NYNEKFKGKATLTADISSSTAYMQLSSLTSEDSADYFC
202	13D5-13輕鏈變異區	DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSTVHSIGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSESGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPPTFGGGTKLEIK
203	13D5-13輕鏈CDR1	QSTVHSIGNTY
204	13D5-13輕鏈FR3	NRFSGVPDRFSGSESGTDFTLKISRVEAEDLGVYYC
205	人類IgG1恆定區(IGHG1；UniProt：P01857-1，v1)	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
206	CH1 IgG1 (P01857-1，v1之位置1-98)	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV
207	鉸鏈IgG1 (P01857-1，v1之位置99-110)	EPKSCDKTHTCP
208	CH2 IgG1 (P01857-1，v1之位置111-223)	PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK
209	CH3 IgG1 (P01857-1，v1之位置224-330)	GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
210	CH3 (D356E、L358M；根據EU編號之編號位置)	GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
211	Cκ CL (IGCK；UniProt：P01834-1，v2)	RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
212	4M2-C12 VH-CH1-CH2-CH3	EVKLVESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYITYSGNISYNPSLRSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTPEDTATYSCARSLYYPWYFDVWGAGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
213	4M2-C12 VL-Cκ	DIVITQTPAILSTSPGEKVTMTCRASSSVGYIHWYQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSNSLTITRVEAEDAATYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
214	4M2-B4 VH-CH1-CH2-CH3	EVMLVESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYITYSGNISYNPSLRSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTPEDTATYSCARSLYYPWYFDVWGAGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
215	4M2-B4 VL-Cκ	DIVLTQTTAILSTSPGEKVTMTCRASSSVGYIHWYQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSNSLTITRVEAEDAATYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
216	V4H1 VH-CH1-CH2-CH3	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTITSDYAMSWVRQAPGKGLEWVSVITYSGNISYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSLYYPWYFDVWGAGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
217	V4H1 VL-Cκ	EIVITQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYLAWYQQKPGQAPRPLIYDTSNRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
218	V4H2 VH-CH1-CH2-CH3	QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCTVSGYSITSDYAWSWIRQPPGKGLEWIGYITYSGNISYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYDCARSLYYPWYFDVWGAGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
219	V4H2 VL-Cκ	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVGYLNWYQQKPGKAPKPLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDNTLTISSLQPEDFATYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
220	2M1-B12 VH-CH1-CH2-CH3	EVQLQQSGAELVRPGTSVKTSCKASGYTFTNYWLGWVKERAGHGLEWIGEIFPGGGHTNYKEKFKGKATLTADTSSSTAYMKLSSLTSEDSAVYFCAQIPLYYGHYRSAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
221	2M1-B12 VL-Cκ	DIQMMQSPASLSASVGETVAITCGASENIYGALNWYQRKQGKSPQLLIYGATNLADGMSSRFSGSGSGRQYSLKISSLHPDDVATYYCQNVLSTPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
222	4M2-C9 VH-CH1-CH2-CH3	QVTLKECGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVSWIRQPSGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDSSSNQVFLKITSVDTADTATYYCARRLDGYNDPYYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
223	4M2-C9 VL-Cκ	DIVMTQSPSSLSASLGDTVTITCHASQNVNVWLSWYQQKPGNIPKLLIYKASNLHAGVPSRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQGQSYPLTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
224	2M1-D2 VH-CH1-CH2-CH3	QVQLQQSGAELVRPGTSVKISCKASGYTFTNYWLGWVKERAGHGLEWIGEIFPGGGHTNYKEKFKGKATLTADTSSSTAYMKLSSLTSEDSAVYFCAQIPLYYGHYRSAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
225	2M1-D2 VL-Cκ	DIVMTQSPASLSASVGETVAITCGASENIYGALNWYQRKQGKSPQLLIYGATNLADGMSSRFSGSGSGRQYSLKISSLHPDDVATYYCQNVLSTPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
226	4M2-D9 VH-CH1-CH2-CH3	EVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNRLEWMGFISYSGFTTYSPSLESRISITRDTSKNQFFLQLISVTTEDTATYYCARNHYGGSYWYFDVWGAGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
227	4M2-D9 VL-Cκ	DIVMTQSPGSLAVSLGQRATISCRASESVEYYGTSLMQWYLQKPGQPPKLLIYAASNVESGVPDRFRGSGSGTDFSLNIHPVEEDDIAMYFCQQSRKVPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
228	1M2-D2 VH-CH1-CH2-CH3	EVKVEESGGGLVQPGGSMKLSCAASGFTFSDAWMDWVHQSPEKGLEWVAEIRSKANNHATYYVESVEGRFTISRDDSKSSVFLQVNSLRPEDTGIYYCTRRDGYYFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
229	1M2-D2 VL-Cκ	DIVLTQSPAIMSASLGEEITLTCSASSSVRDMHWYQQKSGTSPKVLIYNTFNLASGVPSRFSGSGSGTFYSLTISSVEAGDAAAYYCHQWSSYPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
230	5M1-A11 VH-CH1-CH2-CH3	QVTLKVSGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVSWIRQPSGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDSSSNQVFLKITSVDTADTATYYCARRLDGYNDPYYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
231	5M1-A11 VL-Cκ	DVVMTQTPALMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMYWYQQKPRSSPKPWIYLTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWNSNPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
232	4M2-D5 VH-CH1-CH2-CH3	QVQLQQSGAELARPGASVRMSCKASGYTFTSYTMNWVKQRPGQGLEWIGFINPDSDYTTYDQKFKDKATLTADSSSSTAYMQLSSLTYDDSAVYYCTRHSYGNYGDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
233	4M2-D5 VL-Cκ	DIVLTQSPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVTNDVAWYQQKPGQSPKLLIYYASSRYTGVPDRFTGSGFGTDFTFTINTVQAEDLAVYFCQQDYSSPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
234	4M2-A8 VH-CH1-CH2-CH3	QVQLQQSGADLARPGASVKMSCKASGYTFIDYTVHWVKQRPGQGLEWIGFINPSNDYTSYNQKFKDKASLTADTSSTTAYMQLSSLTSDDSAVYYCARHSYGNYGDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
235	4M2-A8 VL-Cκ	DIVMTQAPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVTNGVAWYQQKPGQSPKLLIYYASNRYTGVPDRFTGSGFGTDFTFTISTVQAEDLAVYFCQQDYSSPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
236	9M2-C12 VH-CH1-CH2-CH3	QVQLQQSGAELVKPGASVRLSCKASGYTFTSYWMHWVRQRPGLGLEWIGEIDPSDSYTNCNQRFKGKATLTVDKSSSTAYTQLSSLTSEDSAVYYCARWAYGPYAMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
237	9M2-C12 VL-Cκ	DIVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
238	13D5p VH-CH1-CH2-CH3	QVQLQQSGAELVRPGTSVKISCKASGYTFTNYWLGWVKQRPGHGLEWIGDIYPGGGYTNYNEKFKGKATLTADTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARGGYYYGSSWYFDVWGAGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
239	13D5p VL-Cκ	DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
240	13D5-1 VH-CH1-CH2-CH3	QVQLQQSGAELVRPGTSVKISCKASGYTFTNYWLGWVKQRPGHGLEWIGDIYPGGGYTNYNEKFKGKATLTADTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCVRSGYYYGSSWYFDVWGAGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
241	13D5-1 VL-Cκ	DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSSGNTYLEWYLQKPDQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
242	13D5-13 VH-CH1-CH2-CH3	QVQLQQSGAELVRPGTSVKISCKASGYTFTNYWLGWVKQRPGHGLEWIGDIYPGGGYTNYNEKFKGKATLTADISSSTAYMQLSSLTSEDSADYFCVRGGYYYGSSWYFDVWGAGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
243	13D5-13 VL-Cκ	DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSTVHSIGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSESGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
244	4M2-C12/V4H1/V4H2重鏈CDR1一致性	GYX ₁ITSDYA 其中X ₁= S或T
245	4M2-C12/V4H1/V4H2輕鏈CDR2一致性	X ₂X ₃S 其中X ₂= A或D；X ₃= T或A
246	13D5p衍生的重鏈CDR3一致性	X ₄RX ₅GYYYGSSWYFDV 其中X ₄= V或S；X ₅= G或S
247	13D5p衍生的輕鏈CDR1一致性	QSX ₆VHSX ₇GNTY 其中X ₆= I或T；X ₇= N、S或I
248	4M2-C12 mIgG2a HC	EVKLVESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYITYSGNISYNPSLRSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTPEDTATYSCARSLYYPWYFDVWGAGTTVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
249	4M2-C12 mIgG2a LALA PG HC	EVKLVESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYITYSGNISYNPSLRSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTPEDTATYSCARSLYYPWYFDVWGAGTTVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNAAGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLGAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
250	4M2-C12 LC	DIVITQTPAILSTSPGEKVTMTCRASSSVGYIHWYQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSNSLTITRVEAEDAATYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
251	mIgG2a CH1	AKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKI
252	mIgG2a鉸鏈	EPRGPTIKPCPPCKCP
253	mIgG2a CH2	APNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPK
254	mIgG2a CH2 LALA PG	APNAAGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLGAPIERTISKPK
255	mIgG2a CH3	GSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
256	小鼠Ig γ-2A鏈C區，A對偶基因	AKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
257	mIgG2a CH2、CH3 LALA PG	APNAAGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLGAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
258	4M2-C12 mIgG2a NQ HC	EVKLVESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYITYSGNISYNPSLRSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTPEDTATYSCARSLYYPWYFDVWGAGTTVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYQSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
259	mIgG2a CH2 NQ	APNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYQSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPK
260	mIgG2a CH2、CH3 NQ	APNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYQSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
261	小鼠IGHG1	AKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMNTNGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK
262	mIgG1 CH1	AKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKI
263	mIgG1鉸鏈	VPRDCGCKPCICT
264	mIgG1 CH2	VPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTK
265	mIgG1 CH3	GRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMNTNGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK
266	4M2-C12 mIgG1 HC	EVKLVESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYITYSGNISYNPSLRSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTPEDTATYSCARSLYYPWYFDVWGAGTTVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMNTNGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK
267	IGN175A HC	QVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFSTHWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSGSTSYNEKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARWLLYYYAMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
268	IGN175A LC	DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKLSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHFPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
269	VSTB112 HC	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGllPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSSYGWSYEFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
270	VSTB112 LC	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDTRLNWYQQKPGKAPKLLIYSASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSAYNPITFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
271	VSTB112主要表位1	PVDKGHDVTF
272	VSTB112主要表位2	RRPIRNLTFQDL
273	VSTB112次要表位1	TWYRSSRGEVQTCS
274	VSTB112次要表位2	EIRHHHSEHRVHGAMEL
275	IGN175A表位	FKVATPYSLYVCPEGQNVTLTCRLLGPVDKGH
276	V4-C1重鏈變異區	QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCTVSGYSITSDYAWNWIRQTPGKGLEWIGYITYSGYISYNPSLRSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYSCARALYYPWYFDVWGTGTTVTVSS
277	V4-C1重鏈CDR2	ITYSGYI
278	V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31重鏈CDR3	ARALYYPWYFDV
279	V4-C1、V4-C9重鏈FR2	WNWIRQTPGKGLEWIGY
280	V4-C1、V4-C9重鏈FR3	SYNPSLRSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYSC
281	V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31重鏈FR4	WGTGTTVTVSS
282	V4-C1輕鏈變異區	EIVITQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYIHWYQQKPGQAPRPLIYATSNRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVK
283	V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31輕鏈FR2	IHWYQQKPGQAPRPLIY
284	V4-C1、V4-C9、V4-C26、V4-C27輕鏈FR3	NRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYC
285	V4-C9重鏈變異區	QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCTVSGYSITSDYAWNWIRQTPGKGLEWIGYITYSGYVSYNPSLRSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYSCARALYYPWYFDVWGTGTTVTVSS
286	V4-C9重鏈CDR2	ITYSGYV
287	V4-C9輕鏈變異區	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYIHWYQQKPGQAPRPLIYATSNRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVK
288	V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31輕鏈FR1	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRAS
289	V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31重鏈變異區	QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCTVSGYSITSDYTWNWIRQTPGKGLEWIGHITYSGSVSYNPSLRSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTATYSCARALYYPWYFDVWGTGTTVTVSS
290	V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31重鏈CDR1	GYSITSDYT
291	V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31重鏈CDR2	ITYSGSV
292	V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31重鏈FR2	WNWIRQTPGKGLEWIGH
293	V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31重鏈FR3	SYNPSLRSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTATYSC
294	V4-C24輕鏈變異區	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYIHWYQQKPGQAPRPLIYTTSYRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVK
295	V4-C24、V4-C26輕鏈CDR2	TTS
296	V4-C24、V4-C28、V4-C30輕鏈FR3	YRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYC
297	V4-C26輕鏈變異區	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYIHWYQQKPGQAPRPIIYTTSNRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVK
298	V4-C26輕鏈FR2	IHWYQQKPGQAPRPIIY
299	V4-C27輕鏈變異區	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYIHWYQQKPGQAPRPLIYATYNRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVK
300	V4-C27、V4-C30、V4-C31輕鏈CDR2	ATY
301	V4-C28輕鏈變異區	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYIHWYQQKPGQAPRPLIYATSYRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVK
302	V4-C30輕鏈變異區	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYIHWYQQKPGQAPRPLIYATYYRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVK
303	V4-C31輕鏈變異區	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYIHWYQQKPGQAPRPLIYATYYRTTGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVK
304	V4-C31輕鏈FR3	YRTTGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYC
305	4M2-C12衍生的重鏈CDR1一致性	GYX ₈ITSDYX ₉其中X ₈= S或T；X ₉= T或A
306	4M2-C12衍生的重鏈CDR2一致性	ITYSGX ₁₀X ₁₁其中X ₁₀= S、N或Y；X ₁₁= V或I
307	4M2-C12衍生的重鏈CDR3一致性	ARX ₁₂LYYPWYFDV 其中X ₁₂= A或S
308	4M2-C12衍生的輕鏈CDR2一致性	X ₁₃X ₁₄X ₁₅其中X ₁₃= A、T或D；X ₁₄= T或A；X ₁₅= S或Y
309	C24/C26/C27輕鏈CDR2一致性	X ₁₆TX ₁₇其中X ₁₆= T或A；X ₁₇= S或Y
310	C24/C26/C27輕鏈變異區一致性	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYIHWYQQKPGQAPRPX ₁₇IYX ₁₈TX ₁₉X ₂₀YNRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVK 其中X ₁₇= L或I；X ₁₈= T或A；X ₁₉= S或Y；X ₂₀= N或Y
311	V4-C1 VH-CH1-CH2-CH3	QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCTVSGYSITSDYAWNWIRQTPGKGLEWIGYITYSGYISYNPSLRSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYSCARALYYPWYFDVWGTGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
312	V4-C1 VL-Cκ	EIVITQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYIHWYQQKPGQAPRPLIYATSNRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
313	V4-C9 VH-CH1-CH2-CH3	QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCTVSGYSITSDYAWNWIRQTPGKGLEWIGYITYSGYVSYNPSLRSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYSCARALYYPWYFDVWGTGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
314	V4-C9 VL-Cκ	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYIHWYQQKPGQAPRPLIYATSNRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
315	V4-C24/C26/C27/C28/C30/C31 VH-CH1-CH2-CH3	QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCTVSGYSITSDYTWNWIRQTPGKGLEWIGHITYSGSVSYNPSLRSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTATYSCARALYYPWYFDVWGTGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
316	V4-C24 VL-Cκ	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYIHWYQQKPGQAPRPLIYTTSYRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
317	V4-C26 VL-Cκ	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYIHWYQQKPGQAPRPIIYTTSNRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
318	V4-C27 VL-Cκ	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYIHWYQQKPGQAPRPLIYATYNRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
319	V4-C28 VL-Cκ	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYIHWYQQKPGQAPRPLIYATSYRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
320	V4-C30 VL-Cκ	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYIHWYQQKPGQAPRPLIYATYYRATGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
321	V4-C31 VL-Cκ	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGYIHWYQQKPGQAPRPLIYATYYRTTGIPARFSGSGSGTDNTLTISSLEPEDSAVYYCQQWSSYPPITFGGGTKLEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
322	4M2-C12及衍生物所結合之VISTA序列	SRGEVQ
323	人類PSGL-1同功異型體1 (UniProt：Q14242-1，v1)	MPLQLLLLLILLGPGNSLQLWDTWADEAEKALGPLLARDRRQATEYEYLDYDFLPETEPPEMLRNSTDTTPLTGPGTPESTTVEPAARRSTGLDAGGAVTELTTELANMGNLSTDSAAMEIQTTQPAATEAQTTQPVPTEAQTTPLAATEAQTTRLTATEAQTTPLAATEAQTTPPAATEAQTTQPTGLEAQTTAPAAMEAQTTAPAAMEAQTTPPAAMEAQTTQTTAMEAQTTAPEATEAQTTQPTATEAQTTPLAAMEALSTEPSATEALSMEPTTKRGLFIPFSVSSVTHKGIPMAASNLSVNYPVGAPDHISVKQCLLAILILALVATIFFVCTVVLAVRLSRKGHMYPVRNYSPTEMVCISSLLPDGGEGPSATANGGLSKAKSPGLTPEPREDREGDDLTLHSFLP
324	人類PSGL-1同功異型體2 (UniProt：Q14242-2)	MAVGASGLEGDKMAGAMPLQLLLLLILLGPGNSLQLWDTWADEAEKALGPLLARDRRQATEYEYLDYDFLPETEPPEMLRNSTDTTPLTGPGTPESTTVEPAARRSTGLDAGGAVTELTTELANMGNLSTDSAAMEIQTTQPAATEAQTTQPVPTEAQTTPLAATEAQTTRLTATEAQTTPLAATEAQTTPPAATEAQTTQPTGLEAQTTAPAAMEAQTTAPAAMEAQTTPPAAMEAQTTQTTAMEAQTTAPEATEAQTTQPTATEAQTTPLAAMEALSTEPSATEALSMEPTTKRGLFIPFSVSSVTHKGIPMAASNLSVNYPVGAPDHISVKQCLLAILILALVATIFFVCTVVLAVRLSRKGHMYPVRNYSPTEMVCISSLLPDGGEGPSATANGGLSKAKSPGLTPEPREDREGDDLTLHSFLP
325	成熟人類PSGL-1同功異型體1 (Q14242-1，v1位置18至412)	LQLWDTWADEAEKALGPLLARDRRQATEYEYLDYDFLPETEPPEMLRNSTDTTPLTGPGTPESTTVEPAARRSTGLDAGGAVTELTTELANMGNLSTDSAAMEIQTTQPAATEAQTTQPVPTEAQTTPLAATEAQTTRLTATEAQTTPLAATEAQTTPPAATEAQTTQPTGLEAQTTAPAAMEAQTTAPAAMEAQTTPPAAMEAQTTQTTAMEAQTTAPEATEAQTTQPTATEAQTTPLAAMEALSTEPSATEALSMEPTTKRGLFIPFSVSSVTHKGIPMAASNLSVNYPVGAPDHISVKQCLLAILILALVATIFFVCTVVLAVRLSRKGHMYPVRNYSPTEMVCISSLLPDGGEGPSATANGGLSKAKSPGLTPEPREDREGDDLTLHSFLP
326	PSGL-1細胞外域 (Q14242-1，v1位置18至320)	LQLWDTWADEAEKALGPLLARDRRQATEYEYLDYDFLPETEPPEMLRNSTDTTPLTGPGTPESTTVEPAARRSTGLDAGGAVTELTTELANMGNLSTDSAAMEIQTTQPAATEAQTTQPVPTEAQTTPLAATEAQTTRLTATEAQTTPLAATEAQTTPPAATEAQTTQPTGLEAQTTAPAAMEAQTTAPAAMEAQTTPPAAMEAQTTQTTAMEAQTTAPEATEAQTTQPTATEAQTTPLAAMEALSTEPSATEALSMEPTTKRGLFIPFSVSSVTHKGIPMAASNLSVNYPVGAPDHISVKQC
327	PSGL-1跨膜域 (Q14242-1，v1位置321至341)	LLAILILALVATIFFVCTVVL
328	PSGL-1細胞質域 (Q14242-1，v1位置342至412)	AVRLSRKGHMYPVRNYSPTEMVCISSLLPDGGEGPSATANGGLSKAKSPGLTPEPREDREGDDLTLHSFLP
329	PSGL-1細胞外域重複區 (Q14242-1，v1位置122至261)	QTTQPAATEAQTTQPVPTEAQTTPLAATEAQTTRLTATEAQTTPLAATEAQTTPPAATEAQTTQPTGLEAQTTAPAAMEAQTTAPAAMEAQTTPPAAMEAQTTQTTAMEAQTTAPEATEAQTTQPTATEAQTTPLAAMEA
330	4M2-C12 VH-CH1-CH2-CH3 IgG4	EVKLVESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYITYSGNISYNPSLRSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTPEDTATYSCARSLYYPWYFDVWGAGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
331	V4-C26 hIgG4(S228P) HC	QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCTVSGYSITSDYTWNWIRQTPGKGLEWIGHITYSGSVSYNPSLRSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTATYSCARALYYPWYFDVWGTGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

編號段落下列編號段落(paras)提供與本發明關連於所思量之特徵及特徵組合的進一步陳述：

1. 一種抗原結合分子，其任擇地經單離，其能夠對VISTA結合且抑制VISTA-媒介之訊息傳導，獨立於Fc-媒介之功能。

2. 如段落1之抗原結合分子，其能夠結合VISTA於Ig樣V型域中。

3. 如段落1或段落2之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能夠對一多肽結合，該多肽包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列或由其組成。

4. 如段落1至3中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能夠對一多肽結合，該多肽包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列或由其組成。

5. 如段落1至4中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子不會與IGN175A競爭對VISTA之結合。

6. 如段落1至5中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子不能夠結合由SEQ ID NO：275的胺基酸序列組成之胜肽。

7. 如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：305的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：306的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：307的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：308的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3。

8. 如段落1至7中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：290的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：291的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：278的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：309的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3。

9. 如段落1至8中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：290的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：291的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：278的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：295的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3。

10. 如段落1至8中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：290的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：291的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：278的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：300的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3。

11. 如段落1至8中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：33的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：277的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：278的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：42的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3。

12. 如段落1至8中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：33的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：286的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：278的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：42的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3。

13. 如段落1至8中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：290的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：291的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：278的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：42的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3。

14. 如段落1至8中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：290的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：291的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：278的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：300的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3。

15. 如段落1至7中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：33的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：34的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：35的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：42的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3。

16. 如段落1至7中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：33的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：34的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：35的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：67的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3。

17. 如段落1至7中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：53的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：34的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：35的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：58的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3。

18. 如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：72的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：73的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：74的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：80的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：81的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：82的胺基酸序列之LC-CDR3。

19. 如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：89的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：90的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：96的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：97的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：98的胺基酸序列之LC-CDR3。

20. 如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：89的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：90的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：137的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：138的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：139的胺基酸序列之LC-CDR3。

21. 如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：33的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：107的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：108的胺基酸序列之HC-CDR3，或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：114的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：67的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：115的胺基酸序列之LC-CDR3。

22. 如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：120的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：121的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：122的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：127的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：128的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：129的胺基酸序列之LC-CDR3。

23. 如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：144的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：145的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：146的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：151的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：152的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：153的胺基酸序列之LC-CDR3。

24. 如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：158的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：159的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：160的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：165的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：152的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：153的胺基酸序列之LC-CDR3。

25. 如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：169的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：170的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：171的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：177的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：178的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：179的胺基酸序列之LC-CDR3。

26. 如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：72的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：184的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：246的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：247的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：178的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：190的胺基酸序列之LC-CDR3。

27. 如段落1至6或段落26中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：72的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：184的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：185的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：189的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：178的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：190的胺基酸序列之LC-CDR3。

28. 如段落1至6或段落26中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：72的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：184的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：195的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：197的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：178的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：190的胺基酸序列之LC-CDR3。

29. 如段落1至6或段落26中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：72的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：184的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：200的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：203的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：178的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：190的胺基酸序列之LC-CDR3。

30. 如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：289的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：310的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：289的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：294的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：289的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：297的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：289的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：299的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：289的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：301的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：289的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：302的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：289的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：303的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：276的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：282的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：285的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：287的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：32的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：40的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：52的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：57的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：62的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：66的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：48的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：50的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：87的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：95的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：106的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：113的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：143的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：150的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：157的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：164的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：71的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：79的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：102的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：104的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：119的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：126的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：183的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：188的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：194的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：196的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：199的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：202的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：133的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含與SEQ ID NO：136的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；或一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：168的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：176的胺基酸序列有至少70%的序列同一性。

31. 如段落1至30中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能夠對人類VISTA、以及小鼠VISTA及食蟹獼猴VISTA中之一或多者結合。

32. 一種抗原結合分子，其任擇地經單離，其包含(i)如段落1至31中任一者的一抗原結合分子，及(ii)能夠對VISTA以外之一抗原結合的一抗原結合分子。

33. 如段落1至32中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能夠對表現VISTA的細胞在細胞表面處結合。

34. 如段落1至33中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能夠抑制VISTA與一VISTA結合伙伴之間的交互作用。

35. 如段落1至34中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能夠抑制VISTA-媒介之訊息傳導。

36. 如段落1至35中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能夠增高作用免疫細胞的增殖及/或細胞激素生產。

37. 一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含如段落1至36中任一者之一抗原結合分子。

38. 一種核酸或複數種核酸，其任擇地經單離，其編碼如段落1至36中任一者之一抗原結合分子或如段落37之一CAR。

39. 一種表現載體或複數種表現載體，其包含如段落38之一核酸或複數核酸。

40. 一種細胞，其包含如段落1至36中任一者之一抗原結合分子、如段落37之一CAR、如段落38之一核酸或複數種核酸、或如段落39之一表現載體或複數種表現載體。

41. 一種方法，其包含培養包含如段落38之一核酸或複數核酸、或如段落39之一表現載體或複數表現載體的一細胞，在合適於從該(等)核酸或該(等)表現載體表現該抗原結合分子或CAR的條件下。

42. 一種組成物，其包含如段落1至36中任一者之一抗原結合分子、如段落37之一CAR、如段落38之一核酸或複數核酸、如段落39之一表現載體或複數表現載體，或如段落40之一細胞。

43. 如段落42之組成物，額外包含能夠抑制一VISTA以外的免疫查核點分子所媒介之訊息傳導的一製劑，任擇地其中該VISTA以外的免疫查核點分子係選自於PD-1、CTLA-4、LAG-3、TIM-3、TIGIT及BTLA。

44. 一種如段落1至36中任一者之抗原結合分子、一種如段落37之CAR、一種或複數如段落38之核酸、一種或複數如段落39之表現載體、一種如段落40之細胞，或一種如段落42或段落43之組成物，其供使用於醫學治療或預防的一方法中。

45. 一種如段落1至36中任一者之抗原結合分子、一種如段落37之CAR、一種或複數如段落38之核酸、一種或複數如段落39之表現載體、一種如段落40之細胞，或一種如段落42或段落43之組成物，其供使用於治療或預防一癌症或一感染性疾病的一方法。

46. 一種如段落1至36中任一者之抗原結合分子、一種如段落37之CAR、一種或複數如段落38之核酸、一種或複數如段落39之表現載體、一種如段落40之細胞，或一種如段落42或段落43之組成物於製備一藥物之用途，該藥物供使用於治療或預防一癌症或一感染性疾病的一方法。

47. 一種治療或預防一癌症或一感染性疾病之方法，其包含對一主體投與一治療或預防有效量之如段落1至36中任一者之一抗原結合分子、如段落37之一CAR、如段落38之一核酸或複數種核酸、如段落39之一表現載體或複數種表現載體、如段落40之一細胞，或如段落42或段落43之一組成物。

48. 如段落45之供使用之抗原結合分子、CAR、核酸或複數種核酸、表現載體或複數種表現載體、細胞或組成物、如段落46之用途或如段落47之方法，其中該癌症係選自於：結腸直腸癌、胰臟癌、乳癌、肝臟癌、前列腺癌、卵巢癌、頭頸部癌、白血病、淋巴瘤、黑色素瘤、胸腺瘤、肺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)及實性腫瘤。

49. 一種如段落1至36中任一者之抗原結合分子、一種如段落37之CAR、一種或複數如段落38之核酸、一種或複數如段落39之表現載體、一種如段落40之細胞，或一種如段落42或段落43之組成物，其供使用於治療或預防病理上牽涉骨髓衍生的壓制型細胞(MDSC)之一疾病的一方法。

50. 一種如段落1至36中任一者之一抗原結合分子、如段落37之一CAR、如段落38之一或複數核酸、如段落39之一或複數表現載體、如段落40之一細胞、或如段落42或段落43之一組成物於製備一藥劑之用途，該藥劑供使用於治療或預防病理上牽涉骨髓衍生的壓制型細胞(MDSC)之一疾病的一方法。

51. 一種治療或預防病理上牽涉骨髓衍生的壓制型細胞(MDSC)之一疾病的方法，其包含對一主體投與一治療或預防有效量之如段落1至36中任一者之一抗原結合分子、如段落37之一CAR、如段落38之一核酸或複數種核酸、如段落39之一表現載體或複數種表現載體、如段落40之一細胞，或如段落42或段落43之一組成物。

52. 如段落45至51中任一者之供使用之抗原結合分子、CAR、核酸或複數種核酸、表現載體或複數種表現載體、細胞或組成物、用途或方法，其中該方法額外包含投與能夠抑制一VISTA以外的免疫查核點分子所媒介之訊息傳導的一製劑，任擇地其中該VISTA以外的免疫查核點分子係選自於PD-1、CTLA-4、LAG-3、TIM-3、TIGIT或BTLA。

53. 一種抑制VISTA-媒介之訊息傳導的方法，其包含使VISTA-表現細胞與如段落1至36中任一者之一抗原結合分子接觸。

54. 一種抑制骨髓衍生的壓制型細胞(MDSC)之活性的方法，該方法包含使MDSC與如段落1至36中任一者之一抗原結合分子接觸。

55. 一種用於增高作用免疫細胞之數目或活性的方法，該方法包含以如段落1至36中任一者之一抗原結合分子抑制VISTA-表現細胞之活性。

56. 一種活體外複合物，其任擇地經單離，其包含與VISTA結合之如段落1至36中任一者的一抗原結合分子。

57. 一種方法，其包含使一含有或懷疑含有VISTA的樣本接觸如段落1至36中任一者的一抗原結合分子，以及偵測該抗原結合分子與VISTA之一複合物的形成。

58. 一種選擇或取選一主體來以VISTA-靶定製劑治療的方法，該方法包含於活體外使來自該主體的一樣本接觸如段落1至36中任一者之一抗原結合分子，以及偵測該抗原結合分子與VISTA的複合物之形成。

59. 一種如段落1至36中任一者之一抗原結合分子作為一活體外或活體內診斷劑或預後劑之用途。

60. 一種如段落1至36中任一者之抗原結合分子於一用於偵測、定位或成像一癌症之方法的用途，任擇地其中該癌症係選自於：結腸直腸癌、胰臟癌、乳癌、肝臟癌、前列腺癌、卵巢癌、頭頸部癌、白血病、淋巴瘤、黑色素瘤、胸腺瘤、肺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)及實性腫瘤。 ***

本發明包括所說明之態樣及較佳特徵之組合，除非此一組合係顯然不允許或明確表示需避免者。

本文中所使用之節標題僅出於組織目的且不應理解為限制所說明之標的。

現將參看隨附圖式，藉助於實施例來例示本發明之樣態及實施態樣。其他樣態及實施例對於熟習此藝者將為顯易可見的。此文中所提及的全部文件係藉由參照併入本文中。

在貫穿此說明書，包括隨後之申請專利範圍中，除非上下文另外要求，否則「包含」一詞及其變化形(諸如「包含有」及「正包含」)應理解為暗示含括一所陳述整體或步驟、或是整體或步驟之群組，但不排除任何其他整體或步驟、或是整體或步驟之群組。

必須注意到，當使用於本說明書及隨附的申請專利範圍中，除非上下文另外明確指定，否則單數形式「一」、「一個」以及「該」包括複數的指示對象。範圍於本文中可表達為從「約」一特定值及/或至「約」另一特定值。當表示此一範圍時，另一實施態樣包括從該一特定值及/或至該另一特定值。相似地，當值藉由使用前述「約」來表示為近似值時，應理解該特定值係形成另一實施態樣。

當在本文中揭露一核酸序列時，亦明確考量其反向補體。

本文所述之方法較佳可在活體外施行。用語「活體外」意欲涵蓋用培養中之細胞施行的程序，而用語「活體內」意欲涵蓋以/於完整的多細胞生物施行的程序。

在下列實施例中，發明人說明靶定VISTA分子中屬意的特定區之新穎抗-VISTA抗體殖株之產生，以及這些抗原結合分子在生物物理學上和功能上之特徵化及治療評鑑。 實施例1 ：VISTA 目標設計及抗-VISTA 抗體融合瘤生產

發明人選擇人類VISTA之細胞外區中的區(SEQ ID NO：3)，用於引發VISTA-結合單株抗體。

因為此VISTA區已被提議對於VISTA的抑制功能很重要，所以FG環區被靶定(Vigdorovich et al., Structure. 2013;21(5):707-717)。VISTA的前向β褶板區(front-facing β-sheet region)亦被靶定。 1.1 融合瘤生產

從InVivos (新加坡)獲得大約6週大的雌性BALB/c小鼠。動物安置於無特定病原條件下且遵照實驗動物照護及使用委員會(IACUC)的指導方針來對待。

於融合瘤生產方面，用抗原胜肽、重組型目標蛋白或表現目標蛋白的細胞之專有的混合物來免疫小鼠。

於收穫脾臟供融合之前，小鼠用抗原混合物來追加連續三天。在最後追加後24 h，單離所有的脾細胞且根據製造商指南(Stemcell Technologies，加拿大)，使用ClonaCell-HY融合瘤選殖套組，用PEG來與骨髓瘤細胞株P3X63.Ag8.653 (ATCC，USA)融合。

在37°C下於5% CO ₂培育器中以ClonaCell-HY培養基C (Stemcell Technologies，加拿大)培養融合細胞過夜。隔天，融合細胞係經離心且再懸浮於10 ml之ClonaCell-HY培養基C中，接著與90 ml含HAT組分之半固體甲基纖維素為基的ClonaCell-HY培養基D (StemCell Technologies，加拿大)溫和地混合，其將融合瘤選擇與選殖結合成一個步驟。

融合細胞接著佈入於96孔平盤中且允許在37℃下於一5% CO ₂培育器中生長。7-10天後，單離單個融合瘤殖株並藉由以酵素聯結免疫吸附檢定法(ELISA)及螢光激發細胞分選(FAC)篩選上清液來選擇生產抗體的融合瘤。 1.2 抗體變異區擴增及定序

使用TRIzol試劑(Life Technologies, Inc.，USA)用製造商之規程從融合瘤細胞萃取出總RNA。使用SMARTer RACE 5'/3'套組(Clontech™，USA)按照製造商指南來合成雙股cDNA。簡而言之，根據製造商指南，1 µg之總RNA被用來使用5'-RACE CDS引子(以套組提供)生產全長cDNA，且接著使5'轉接者(SMARTer II A引子)併入每一cDNA中。cDNA合成反應含有：5X第一股緩衝劑、DTT (20 mM)、dNTP混合物(10 mM)、RNase抑制劑(40 U/µl)及SMARTScribe反轉錄酶(100 U/µl)。

使用SeqAmp DNA聚合酶(Clontech™，USA)來擴增race-ready cDNA。擴增反應含有SeqAmp DNA聚合酶、2X Seq AMP緩衝劑、與轉接者序列互補之5' SMARTer Race套組所提供的5'通用引子，以及與個別之重鏈或輕鏈恆定區引子黏合的3'引子。基於先前由Krebber et al. J. Immunol. Methods 1997; 201: 35-55、Wang et al. Journal of Immunological Methods 2000, 233; 167-177或Tiller et al. Journal of Immunological Methods 2009; 350:183–193所報導的引子混合物來設計5'恆定區。使用下列熱規程：94℃歷時1 min的預變性循環；35個循環的94°C，30 s、55°C，30 s及72°C，45 s；72°C歷時3 min的最終延長。

生成的VH及VL PCR產物，大約550 bp，係使用CloneJET PCR選殖套組(Thermo Scientific，USA)來選殖進pJET1.2/鈍端載體中，且用來轉形高度勝任的大腸桿菌DH5α。使用Miniprep套組(Qiagene，德國)從生成的轉形體來製備質體DNA且定序。藉由AITbiotech來進行DNA定序。使用國際IMGT (ImMunoGeneTics)資訊系統來分析這些定序資料(LeFranc et al., Nucleic Acids Res. (2015) 43 (Database issue):D413-22)，以特徵化個別的CDR及框架序列。藉由SignalP (v 4.1; Nielsen, in Kihara, D (ed): Protein Function Prediction (Methods in Molecular Biology vol. 1611) 59-73, Springer 2017)來識別VH及VL之5'端的訊息胜肽。

接著選擇單株抗-VISTA抗體殖株用於進一步開發及特徵化。抗體殖株4M2-C12 (於此亦稱為「V4」)之人源化版本亦根據標準方法、藉由選殖抗體的CDR成為包含人類抗體框架區的VH及VL來製備。

抗體殖株	VH/VL 序列	用以引發該抗體之胜肽免疫原性
4M2-C12 (在本文中亦稱為「V4」)	VH = SEQ ID NO：32	SEQ ID NO：26
VL = SEQ ID NO：40
V4H1	VH = SEQ ID NO：52
VL = SEQ ID NO：57
V4H2	VH = SEQ ID NO：62
VL = SEQ ID NO：66
4M2-B4	VH = SEQ ID NO：48
VL = SEQ ID NO：50
4M2-C9	VH = SEQ ID NO：87
VL = SEQ ID NO：95
4M2-D9	VH = SEQ ID NO：106
VL = SEQ ID NO：113
4M2-D5	VH = SEQ ID NO：143
VL = SEQ ID NO：150
4M2-A8	VH = SEQ ID NO：157
VL = SEQ ID NO：164
2M1-B12	VH = SEQ ID NO：71	SEQ ID NO：27
VL = SEQ ID NO：79
2M1-D2	VH = SEQ ID NO：102
VL = SEQ ID NO：104
1M2-D2	VH = SEQ ID NO：119	SEQ ID NO：28
VL = SEQ ID NO：126
13D5p	VH = SEQ ID NO：183
VL = SEQ ID NO：188
13D5-1	VH = SEQ ID NO：194
VL = SEQ ID NO：196
13D5-13	VH = SEQ ID NO：199
VL = SEQ ID NO：202
5M1-A11	VH = SEQ ID NO：133	SEQ ID NO：29
VL = SEQ ID NO：136
9M2-C12	VH = SEQ ID NO：168	SEQ ID NO：30
VL = SEQ ID NO：176

實施例2 ：抗體生產及純化2.1 選殖VH及VL進表現載體中：

編碼抗-VISTA抗體殖株之重及輕鏈變異區的DNA序列，係被亞選殖至pmAbDZ_IgG1_CH及pmAbDZ_IgG1_CL (InvivoGen，USA)真核表現載體中，以供建構人類-小鼠嵌合抗體。

任擇地，編碼抗-VISTA抗體殖株之重及輕鏈變異區的DNA序列，係被亞選殖至pFUSE-CHIg-hG1及pFUSE2ss-CLIg-hk (InvivoGen，USA)真核表現載體中，以供建構人類-小鼠嵌合抗體。相對於人類IgG1恆定區(IGHG1；UniProt：P01857-1, v1；SEQ ID NO：210)，pFUSE-CHIg-hG1所編碼的人類IgG1恆定區於CH3區中包含取代D356E、L358M (根據EU編號所編號的位置)。pFUSE2ss-CLIg-hk編碼人類IgG1輕鏈κ恆定區(IGCK；UniProt：P01834-1，v2)。

變異區連同訊息胜肽係使用SeqAmp酵素(Clontech™，USA)遵循製造商的規程從選殖載體來擴增。使用與VH或VL內適當區具有15-20bp重疊、加上5'端之6 bp作為限制位的順向及反向引子。DNA插入物及pFuse載體係以製造商推薦的限制酵素來消化以確保不會有框移導入(例如，EcoRI及NheI用於VH，AgeI及BsiWI用於VL)，且使用T4連接酶酵素(Thermo Scientific，USA)來連接進其個別質體中。莫耳比3:1之DNA插入物對載體係被使用於接合。 2.2 在哺乳動物細胞中抗體的表現

遵循製造商指南，使用1) Expi293暫時表現系統套組(Life Technologies，USA)、抑或是2) HEK293-6E暫時表現系統(CNRC-NRC，加拿大)來表現抗體。 1) Expi293暫時表現系統：細胞株維持：

從Life Technologies, Inc (USA)獲得HEK293F細胞(Expi293F)。在具搖動平台、37℃、8% CO ₂及80%增濕的培育器中，細胞培養於增補50 IU/ml青黴素及50 µg/ml鏈黴素(Gibco，USA)的無血清、無蛋白質、化學性界定培養基(Expi293表現培養基；Thermo Fisher，USA)中。轉染：

根據其製造商的規程、使用ExpiFectamine 293試劑套組(Gibco，USA)以表現質體來轉染Expi293F細胞。簡而言之，維持中的細胞係藉由旋轉降沉培養物來替換一培養基以移除抗生素，於轉染前1天將細胞丸粒再懸浮於沒有抗生素的新鮮培養基中。在轉染當天，每一轉染係播種2.5 x 10 ⁶/ml之活細胞於搖動器燒瓶中。在添加給細胞之前，在室溫下於血清減少的培養基(Opti-MEM (Gibco，USA))中歷時25 min形成DNA-ExpiFectamine複合物。在轉染後16-18 h，添加強化子至經轉染的細胞。在轉染後第4天，將一等量的培養基加添至轉染體以防止細胞聚集。在第7天，轉染體藉由4000 x g離心15 min來收穫，且過濾通過0.22 µm無菌過濾器單元。 2) HEK293-6E 暫時表現系統細胞株維持：

從加拿大國家研究委員會(National Research Council Canada)獲得HEK293-6E細胞。在具搖動平台、37°C、5% CO ₂及80%增濕的培育器中，細胞被培養於增補0.1% Kolliphor-P188及4 mM L-麩醯胺酸(Gibco，USA)、及25 µg/ml G-418之無血清、無蛋白質、化學性界定的Freestyle F17培養基(Invitrogen，USA)中。轉染：

根據其製造商的規程、使用PEIproTM (Polyplus，USA)以表現質體來轉染HEK293-6E細胞。簡而言之，維持中的細胞係藉由離心來替換一培養基以移除抗生素，於轉染前1天將細胞丸粒再懸浮於沒有抗生素的新鮮培養基中。在轉染當天，每一轉染係播種1.5-2 x 10 ⁶細胞/ml的活細胞於搖動器燒瓶中。混合DNA與PEIproTM至一1:1的比率且於添加給細胞之前，在RT下歷時5 min以允許複合物於F17培養基中形成。在轉染後24-48 h，提供0.5% (w/v)胰化蛋白(Tryptone) N1給轉染體。在第6-7天，藉由4000 x g離心15 min來收穫轉染體，且上清液係過濾通過0.22 µm無菌濾器單元。

用編碼下列多肽之組合的載體來轉染細胞：

抗原結合分子	多肽	抗體
[1]	4M2-C12 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：212) + 4M2-C12 VL-Cκ (SEQ ID NO：213)	抗-VISTA殖株4M2-C12 IgG1
[2]	4M2-B4 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：214) + 4M2-B4 VL-Cκ (SEQ ID NO：215)	抗-VISTA殖株4M2-B4 IgG1
[3]	V4H1 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：216) + V4H1 VL-Cκ (SEQ ID NO：217)	抗-VISTA殖株V4H1 IgG1
[4]	V4H2 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：218) + V4H2 VL-Cκ (SEQ ID NO：219)	抗-VISTA殖株V4H2 IgG1
[5]	2M1-B12 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：220) + 2M1-B12 VL-Cκ (SEQ ID NO：221)	抗-VISTA殖株2M1-B12 IgG1
[6]	4M2-C9 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：222) + 4M2-C9 VL-Cκ (SEQ ID NO：223)	抗-VISTA殖株4M2-C9 IgG1
[7]	2M1-D2 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：224) + 2M1-D2 VL-Cκ (SEQ ID NO：225)	抗-VISTA殖株2M1-D2 IgG1
[8]	4M2-D9 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：226) + 4M2-D9 VL-Cκ (SEQ ID NO：227)	抗-VISTA殖株4M2-D9 IgG1
[9]	1M2-D2 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：228) + 1M2-D2 VL-Cκ (SEQ ID NO：229)	抗-VISTA殖株1M2-D2 IgG1
[10]	5M1-A11 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：230) + 5M1-A11 VL-Cκ (SEQ ID NO：231)	抗-VISTA殖株5M1-A11 IgG1
[11]	4M2-D5 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：232) + 4M2-D5 VL-Cκ (SEQ ID NO：233)	抗-VISTA殖株4M2-D5 IgG1
[12]	4M2-A8 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：234) + 4M2-A8 VL-Cκ (SEQ ID NO：235)	抗-VISTA殖株4M2-A8 IgG1
[13]	9M2-C12 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：236) + 9M2-C12 VL-Cκ (SEQ ID NO：237)	抗-VISTA殖株9M2-C12 IgG1
[14]	13D5p VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：238) + 13D5p VL-Cκ (SEQ ID NO：239)	抗-VISTA殖株13D5p IgG1
[15]	13D5-1 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：240) + 13D5-1 VL-Cκ (SEQ ID NO：241)	抗-VISTA殖株13D5-1 IgG1
[16]	13D5-13 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：242) + 13D5-13 VL-Cκ (SEQ ID NO：243)	抗-VISTA殖株13D5-13 IgG1

2.3 抗體純化親和力純化、緩衝劑交換及儲存：

由轉染細胞分泌到培養物上清液中的抗體係使用液相層析法系統AKTA Start (GE Healthcare，UK)來純化。具體而言，以一結合速率5 ml/min裝載上清液至HiTrap蛋白G管柱(GE Healthcare，UK)上，隨後用10倍管柱體積的清洗緩衝劑(20 mM 磷酸鈉，pH 7.0)來清洗該管柱。經結合的mAb係用溶析緩衝劑(0.1 M甘胺酸，pH 2.7)來溶析，且將溶析液份化至含適量中和緩衝劑(1 M Tris，pH 9)之收集管。含純化mAb之經中和的溶析緩衝劑係使用30K MWCO蛋白質濃縮器(Thermo Fisher，USA)或3.5K MWCO透析夾(Thermo Fisher，USA)交換至PBS中。單株抗體係藉由通過0.22 µm過濾器予以無菌化、等分且快速冷凍於-80°C以供儲存。 2.4 抗體純度分析粒徑篩析層析法(SEC)：

藉由粒徑篩析層析法(SEC)分析抗體純度，其使用Superdex 200 10/30 GL管柱(GE Healthcare，UK)、以PBS電泳緩衝劑，於一AKTA Explorer液相層析法系統(GE Healthcare，UK)上進行。 pH 7.2的500 µl PBS中之150 µg的抗體係在室溫下以0.75 ml/min的一流速注入至該管柱。蛋白質根據其等之分子量洗提。

抗-VISTA抗體殖株V4 (實施例2.2之[1])的結果顯示於圖10中。十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)：

抗體純度亦根據標準方法、藉由還原及非還原條件之SDS-PAGE來分析。簡而言之，4%-20% TGX蛋白質凝膠(Bio-Rad，USA)被用來使用Mini-Protean電泳系統(Bio-Rad，USA)解析蛋白。在非還原條件方面，蛋白樣本藉由混合2x Laemmli樣本緩衝劑(Bio-Rad，USA)來變性，且於裝載至凝膠之前，95°C煮沸5-10 min。在還原條件方面，使用含5%的β-巰乙醇(βME)或40 mM DTT (二硫蘇糖醇)的2x樣本緩衝劑。電泳係以SDS電泳緩衝劑(25 mM Tris，192 mM甘胺酸，1% SDS，pH 8.3)，在150V恆電壓下進行1 h。西方墨點法：

蛋白質樣本(30 µg)係如以上所述藉由SDS-PAGE予以份化且轉移至硝化纖維素膜。接著將膜阻斷且用抗體於4°C下進行免疫轉漬過夜。以PBS-Tween清洗三次之後，接著與經辣根過氧化酶(HRP)-軛接的二級抗體於室溫下培育膜1 h。經由一化學發光Pierce ECL受質西方墨點偵測系統(Thermo Scientific，USA)及自動放射攝影術底片(Kodak XAR底片)暴光來使結果視覺化。

偵測所使用的初級抗體為山羊抗-小鼠IgG (H+L)抗體(LI-COR，Cat. No. 926-32210)。

抗-VISTA抗體殖株V4 (實施例2.2之[1])的結果顯示於圖11中。V4容易以高濃度表現、純化及加工。 實施例3 ：生物物理上的特徵化3.1 藉由流式細胞分析術分析細胞表面抗原-結合

野生型HEK293T細胞(沒有表現高位準的VISTA)及以編碼人類VISTA之載體所轉染的HEK293T細胞之細胞(亦即，HEK 293 HER O/E細胞)係與20 µg/ml之抗-VISTA抗體或同型對照抗體於4℃一起培育1 hr。抗-VISTA抗體殖株VSTB112，如於WO 2015/097536中所述，係包括於分析中作為一陽性對照。

細胞用FACS緩衝劑(PBS加上5mM EDTA及0.5% BSA)清洗三次，且再懸浮於2-8°C之FITC-軛接的抗-FC抗體(Invitrogen，USA)歷時40 min。再次清洗細胞且再懸浮於200 µL之FACS流動緩衝劑(PBS加上5mM EDTA)中，用於使用MACSQuant 10 (Miltenyi Biotec，德國)之流式細胞量測術分析。取得後，使用Flowlogic軟體來分析所有的原始資料。使用前與側散射剖析來圈選細胞，且就天然及過度表現細胞族群判定螢光強度之中位數(MFI)的值。

結果顯示於圖1A至1D、圖2及圖24中。抗-VISTA抗體顯示係以高特異性對人類VISTA結合。

在一分開的實驗中，分析13D5p (實施例2.2之[14])其對經編碼食蟹獼猴VISTA或鼠類VISTA的載體所轉染之細胞的結合能力。發現13D5p顯示對食蟹獼猴VISTA及鼠類VISTA有交叉反應性。 3.2 使用Octet QK384系統之總體親和力研究

生物層干涉術(BLI)實驗係使用Octet QK384系統(ForteBio)來施行。抗-五-HIS (HIS1K)塗覆的生物感測器尖(Pall ForteBio，USA)係使用來捕捉帶有His標籤的人類、食蟹獼猴或鼠類VISTA (270 nM)。所有的量測均在25°C下伴隨1000 rpm之攪拌施行。藉由裝載不同濃度的抗-VISTA抗體(如圖所指示)120 s，隨後藉由將生物感測器轉移至含有檢定緩衝劑的孔內120 s的解離時間，來施行抗原結合之動力學量測。感應圖譜係參照緩衝效應，接著使用Octet QK384使用者軟體(Pall ForteBio，USA)予以擬合。動力學反應係使用一位點結合模型進行一整體擬合，以獲得締合(kon)、解離(koff)速率常數及平衡解離常數(KD)之值。該分析僅包括能與軟體可靠擬合的曲線(R ²＞0.90)。

圖3A至3C顯示抗-VISTA抗體殖株V4 (亦即，實施例2.2之[1])之結合之分析的代表性感應圖譜。

發現抗-VISTA抗體殖株V4係以K _D= ＜1 pM的親和力對人類及食蟹獼猴VISTA結合，以及以K _D= 113 nM的親和力對鼠類VISTA結合。 3.3 判定抗體特異性之ELISA

使用ELISA來判定抗體之結合特異性。分析抗-VISTA抗體對人類VISTA多肽、個別的小鼠及食蟹獼猴同源物，以及人類PD-L1及人類HER3 (Sino Biological Inc.，中國)之結合。

根據標準規程來進行ELISA。簡而言之，用磷酸鹽緩衝型鹽水(PBS)中之1 µg/ml之目標蛋白質於37°C塗覆96孔平盤(Nunc，丹麥)歷時2 h。在室溫下用Tris緩衝鹽水(TBS)中之10% BSA阻斷1 h之後，測試抗體以最高濃度為30 µg/ml被系列地稀釋(12點系列稀釋)，並且添加至平盤。在室溫下培育1 h後，用含有0.05% Tween 20之TBS (TBS-T)清洗平盤三次，且接著與一HRP-軛接的抗-小鼠IgG抗體(Life Technologies, Inc.，USA)於室溫下培育1 h。在清洗之後，平盤用比色偵測受質3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(Turbo-TMB；Pierce，USA)在室溫下顯色15 min。用2M H ₂SO ₄來停止反應，以及在30 min內量測450 nM的OD。

用抗-VISTA抗體殖株V4 (實施例2.2之[1])獲得的結果顯示於圖4A中。發現殖株V4能對人類、食蟹獼猴及鼠類VISTA結合，但是對人類PD-L1或人類HER3未顯示交叉反應性(即使是非常高濃度)。

用抗-VISTA抗體殖株13D5-1 (實施例2.2之[15])獲得的結果顯示於圖20中。發現殖株13D5-1能對人類、食蟹獼猴及鼠類VISTA結合。

用抗-VISTA抗體殖株13D5-13 (實施例2.2之[16])獲得的結果顯示於圖21中。發現殖株13D5-13能對人類及小鼠VISTA結合。

在一進一步的實驗中，以ELISA分析抗-VISTA抗體殖株V4 (實施例2.2之[1])對人類VISTA、PD-1、PD-L1、B7H3、B7H4、B7H6、B7H7及CTLA4結合的能力。結果顯示於圖4C中。發現殖株V4不會對PD-1、PD-L1、B7H3、B7H4、B7H6、B7H7或CTLA4中之任一者有交叉反應。 3.4 以微差掃描螢光分析法進行之熱穩定性分析

簡而言之，三複本的0.2 mg/mL抗體與SYPRO Orange染料(ThermoFisher)之反應混合物係製備於25 µL的PBS中，轉移至MicroAmp光學96孔反應平盤(ThermoFisher)的孔中，且用MicroAmp光學黏著膜(ThermoFisher)來密封。熔化曲線係以一7500快速即時PCR系統(Applied Biosystems)進行，其選擇TAMRA作為報導者及ROX作為被動對照。熱剖析包括25°C之一起始步驟2 min及99°C之一最終步驟2 min，以1.2%之一升降溫速率。原始資料之第一階導數係繪製為溫度之一函數以獲得導數熔化曲線。從導數曲線峰提取抗體的熔化溫度(Tm)。

圖9顯示抗體殖株V4 IgG1型式(亦即，實施例2.2之[1])之熱穩定性微差掃描螢光分析法獲得之原始資料的第一階導數。判定Tm為67.5°C。 實施例4 ：功能特徵化4.1 VISTA與VSIG-3之間的交互作用

發明人使用Octet QK384系統(ForteBio)、藉由生物層干涉術(BLI)分析來研究VSIG-3是否行動如同一VISTA配體。簡而言之，抗-人類Fc捕捉生物感測器被使用來捕捉濃度100 nM帶有Fc標籤的VSIG-3，且捕捉的VSIG-3與所施用之濃度從3000 nM開始接著3倍系列稀釋的VISTA之締合係被量測，並與PBS對照比較。

圖5顯示代表性感應圖譜。VSIG-3及VISTA之間的締合親和力經計算為~K _D=5.28 µM。

發明人接著分析抗-VISTA抗體抑制VISTA與VSIG-3之間交互作用的能力。

簡而言之，用1x PBS中之1 µg/ml的未帶有標籤或帶有Fc標籤的VSIG-3 (R&D Systems，USA)塗覆96孔平盤(Nunc，丹麥)於4℃歷時16 h。在室溫下以TBS中之1 % BSA阻斷1 h之後，在漸增濃度的抗-VISTA抗體存在或不存在的情況下、添加15µg/ml的VISTA/人類帶有His標籤的融合蛋白(Sinobiological Inc，中國)，以及在室溫下培育1 h。隨後用TBS-T清洗平盤三次且與HRP-軛接的抗-his二級抗體在室溫下培育1 h。在清洗之後，平盤用比色偵測受質Turbo-TMB (Pierce，USA)顯色。用2M H ₂SO ₄來停止反應，並且量測450 nM的OD。

抗-VISTA抗體殖株5M1-A11及9M2-C12 (實施例2.2之[10]及[13])獲得的結果顯示於圖6中。抗-VISTA抗體顯示VISTA與VSIG-3間之交互作用的劑量依賴型抑制。

在一進一步的實驗中，分析4M2-C12 IgG1 (實施例2.2之[1])對於VISTA與VSIG-3之間交互作用之抑制。由對不相干的目標抗原有特異性的一抗體及人類IgG1同型對照所致VISTA:VSIG-3交互作用之抑制亦被分析來作為對照條件。結果顯示於圖32中。發現4M2-C12 IgG1係以劑量依賴型方式抑制VISTA：VSIG-3之間的交互作用。

在一進一步的實驗中，以使用VISTA-Fc作為捕捉劑之檢定法來分析4M2-C12 IgG1 (實施例2.2之[1])對於VISTA與VSIG-3之間交互作用之抑制。簡而言之，用30 µl的0.5 µg/ml的VISTA-Fc在室溫下塗覆384孔平盤的孔歷時1 h。用PBS-T清洗平盤且以TBS中之1 % BSA在室溫下阻斷1 h。系列稀釋的4M2-C12 IgG1或人類IgG1同型對照抗體與0.3 µg/ml的VISG3-His一起添加至平盤。在室溫下培育1 h後，用PBS-T清洗平盤五次，以及與山羊抗-HIS-HRP在室溫下培育1 h。用PBS-T清洗平盤五次以及，用Turbo-TMB顯色。用2M H ₂SO ₄來停止反應，並且量測450 nM的OD。

結果顯示於圖54中。發現4M2-C12 IgG1係以劑量依賴型方式抑制VISTA：VSIG-3之間的交互作用。 4.2 VISTA與PSGL-1之間的交互作用

發明人接著以流式細胞分析術為基的檢定法來研究PSGL-1是否行動如同一VISTA配體。

簡而言之，在包含HBSS、0.5% BSA及2 mM EDTA pH 6.0之緩衝劑中，經修飾以過度表現人類VISTA蛋白之100,000個HEK293T細胞(藉由用編碼人類VISTA之建構物轉染)與4M2-C12-hIgG1 (實例2.2之[1])或濃度為20 µg/ml、40 µg/ml或80 µg/ml之同型匹配之對照抗體在4℃下共培育15分鐘。15 µg/ml的帶有Fc標籤的人類PSGL1 (R&D Systems，Cat No：3345-PS)或相同量的帶有Fc標籤的不相干抗原接著被添加至細胞，然後在4℃下培育另外的45 min。隨後用緩衝劑清洗細胞三次，然後添加稀釋因數(1:11)之FITC-軛接的抗-PSGL1抗體(Miltenyi Biotec Cat No：130-104-706)或添加稀釋因數1:200之Alex488-軛接的抗-Fc抗體，並且在4℃下培育細胞15 min。接著用緩衝劑清洗細胞三次且藉由流式細胞分析術分析。

結果顯示於圖55中。發現4M2-C12-hIgG1以劑量依賴型方式抑制PSGL-1對VISTA之結合。 4.3 VISTA-媒介之訊息傳導的抑制

發明人藉由使用混合淋巴球反應(MLR)檢定法分析，研究抗-VISTA抗體殖株13D5p是否會抑制VISTA-媒介之訊息傳導。

簡而言之，使用Septamate套組(Stemcell Technologies，加拿大)、根據製造商指南，從非相關的供體單離PBMC (以獲得刺激者及作用者族群)。刺激者細胞以50 µg/mL的絲裂黴素C (Sigma Aldrich，USA)於37℃處理20分鐘且於1x PBS清洗5次後使用。於增加濃度之測試抗體存在或不存在下，從最高濃度為20 µg/ml開始，刺激者族群以0.5 x 10 ⁵個細胞/孔播種，以及反應者族群以每孔1.0 x 10 ⁵個細胞播種，。5天後，收穫上清液且遵照標準規程由ELISA來判定IL-17、IL-2A及IFN-γ位準。

結果顯示於圖7A及7B中。發現抗-VISTA抗體13D5p導致IL-17、IL-2及IFN-γ位準增加。圖8A及8B顯示使用抗PD-L1抗體殖株MIH5 (ThermoFisher Scientific)之相同檢定法中獲得的結果。 實施例5 ：活體內分析

就活體內研究，生產小鼠IgG2a型式的4M2-C12。該分子為具有SEQ ID NO：248中所示序列之重鏈多肽及具有SEQ ID NO：250中所示序列之輕鏈多肽的異聚體(heteromer)。4M2-C12 mIgG2a係藉由於CHO細胞中共同表現編碼重及輕鏈多肽的核酸，以及隨後純化來生產。

抗原結合分子	多肽	抗體
[17]	4M2-C12 mIgG2a HC (SEQ ID NO：248) + 4M2-C12 CL (SEQ ID NO：250)	4M2-C12 mIgG2a

5.1 藥物動力學分析

大約6-8週大的C57BL/6小鼠係養置於無特定病原條件下，且遵照實驗動物照護及使用委員會(IACUC)的指導方針來對待。

投與600 µg之抗-VISTA抗體，且在基線(- 2 hr)、投與後0.5 hr、6 hr、24 hr、96 hr、168 hr及336 hr由心臟穿刺從3隻小鼠取得血液。藉由ELISA來定量血清中的抗體。

藥物動力學分析的參數係衍生自一非隔間模型：最大濃度( C _max)、AUC (0-336hr)、AUC (0-無限大)、半生期(t _½)、清除率(CL)、穩態分佈體積(V _ss)。

抗-VISTA抗體殖株V4 (實施例5之[17])所獲得的結果顯示於圖12中。發現此抗體殖株的半生期為11.7天。 5.2 活體內分析治療癌症之功效

大約6-8週大的雌性BALB/c或C57BL/6小鼠係購自InVivos (新加坡)。動物安置於無特定病原條件下且遵照實驗動物照護及使用委員會(IACUC)的指導方針來對待。

研究中所使用的細胞株包括從ATCC獲得之LL2細胞(路易士肺癌瘤)、4T1細胞(乳癌)、CT26細胞(結腸癌瘤)、殖株-M3細胞(黑色素瘤)及EL4細胞(T細胞白血病/淋巴瘤)。B16-BL6細胞(黑色素瘤)係從Creative Bioarray獲得。根據供應商指南來維持細胞株；LL2細胞、B16-BL6細胞及EL4細胞培養於增補10%胎牛血清(FBS)及1% Pen/Strep之DMEM，以及4T1細胞及CT26細胞培養於增補10% FBS及1% Pen/Strep之RPMI-1640內。殖株-M3細胞生長於增補2.5% FBS、15%馬血清及1% Pen/Strep之F12-K培養基內。所有的細胞都培養在37℃於5% CO ₂培育器中。

藉由皮下注射LL2 (2x10 ⁵)、4T1 (5x10 ⁵)、CT26 (1x10 ⁵-1x10 ⁶)、殖株-M3 (5x10 ⁵)、EL4 (2x10 ⁵)或B16-BL6 (1x10 ⁵)細胞至小鼠右脇來產生同基因型的腫瘤模型。

植入後3天，每3天腹膜內投與抗-VISTA抗體，共6劑。對照組以相同的用劑間隔接受載媒處理。

使用數位卡尺量測一週3次並用公式[L x W2/2]來計算腫瘤體積。一旦對照組腫瘤長度量測為＞1.5 cm時，則認為已達到研究終點。 5.2.1 CT26細胞模型

圖13顯示一實驗所獲得的結果，其中抗-VISTA抗體殖株V4 (實施例5之[17])的抗癌效應係相比於一CT26細胞株衍生的同基因型小鼠結腸癌瘤模型中抗-PD-L1抗體殖株10F.9G2的抗癌效應。藉由皮下注射100,000個CT26細胞至Balb/c小鼠右脇(每治療組n=8隻小鼠)來建立該模型。

從第3天開始每3天以每劑300 µg投與V4或抗-PD-L1抗體。每劑300 µg V4 + 300 µg抗-PD-L1抗體之組合治療亦包括於該分析中。

於此模型中發現抗-VISTA抗體殖株V4為非常有力的，且能夠抑制腫瘤生長達~60%。

在第21天收穫腫瘤且根據Newman et al. Nat Methods. (2015) 12(5):453-457中所述的方法，以RNA-seq分析法來評鑑Arg1 RNA表現。結果顯示於圖39中。用4M2-C12之治療係關聯於第21天腫瘤中Arg1表現的一顯著降低。

在另一實驗中，藉由皮下注射100,000個CT26細胞至Balb/c小鼠右脇(每治療組n=8隻小鼠)來建立一CT26細胞株衍生的同基因型小鼠結腸癌瘤模型，以及該分析亦包括藉由下列來治療小鼠：從第3天開始每3天每劑投與300 µg的同型對照抗體、抗-PD-L1抗體殖株10F.9G2、抗-VISTA抗體殖株V4 (實施例5之[17])、抗-TIGIT抗體殖株1G9、抗-LAG-3抗體殖株C9B7W、抗-TIM-3抗體殖株RMT3-23，或每劑300 µg的抗-PD-L1抗體殖株10F.9G2與300 µg的其他抗體中之每一者之組合治療。

圖14顯示第15天偵測到的腫瘤生長經計算之抑制的結果。在此實驗中發現抗-VISTA抗體殖株V4為比任何其他針對免疫查核點分子之單一療法更有力的腫瘤生長抑制劑，且發現與抗-PD-L1療法組合的表現更好。

發明人施行其他以相同的方式建立CT26腫瘤之實驗，以及小鼠接著兩週一次投與300 µg抗-VISTA抗體殖株V4、200 µg抗-PD-L1抗體殖株10F.9G2、300 µg抗-VISTA抗體殖株V4 + 200 µg抗-PD-L1抗體殖株10F.9G2，或者作為對照條件的PBS。在實驗結束時，根據Newman et al. Nat Methods. (2015) 12(5):453-457中所述的方法，藉由RNA-Seq分析腫瘤來判定MDSC、CD8+ T細胞及Treg的相對數目，其在此藉由參照全文併入本文。

結果顯示於圖15中。發現抗-VISTA抗體殖株V4 (單獨或與抗-PD-L1治療組合)之治療會降低MDSC的數目，及增加CD8 T細胞：Treg之比率。關聯於抗-VISTA抗體治療之腫瘤微環境中基因表現改變的分析亦顯示涉及胞噬作用過程的基因之表現之向上調節(例如，肌動蛋白纖維為基的移動)，以及精胺酸酶1之表現之向下調節(導致免疫壓制性較少的環境)。

在一進一步的實驗中，如以上所述於Balb/C小鼠中建立CT26細胞株衍生的同基因型小鼠結腸癌瘤模型，並且小鼠係從第3天投與且每3天投與(i) 600 µg抗-VISTA抗體殖株13D5-1、(ii) 200 µg抗-PD-L1抗體殖株10F.9G2、(iii) 600 µg抗-VISTA抗體殖株13D5-1 + 200 µg抗-PD-L1抗體殖株10F.9G2，或者(iv)等體積的PBS (作為陰性對照)。

結果顯示於圖22中。於此模型中發現抗-VISTA抗體殖株13D5-1(單獨或與抗-PD-L1治療組合)能抑制腫瘤生長。 5.2.2 LL2細胞模型

藉由皮下注射200,000個LL2細胞至Balb/c小鼠右脇來建立LL2模型(每治療組n=8隻小鼠)，並且小鼠隨後兩週一次投與600 µg抗-VISTA抗體殖株V4 (實施例5之[17])或一等體積的載媒作為陰性對照。

實驗結果顯示於圖16中。於此模型中發現抗-VISTA抗體殖株V4為非常有力的──能夠抑制腫瘤生長達~44%。 5.2.3 B16-BL6細胞模型

藉由皮下注射200,000個B16-BL6細胞至C57BL/6小鼠右脇來建立B16-BL6模型(每治療組n=8隻小鼠)，且小鼠隨後兩週一次投與(共6劑) 600 µg的抗-VISTA抗體殖株V4 (實施例5之[17])、200 µg的抗-PD-1抗體RMP1-14 (Bio X Cell)、600 µg的抗-VISTA抗體殖株V4 + 200 µg的抗-PD-1抗體，或者一等體積載媒作為陰性對照。

實驗結果顯示於圖17中。於此模型中發現抗-VISTA抗體殖株V4組合抗-PD-1抗體治療為非常有力的。 5.2.4 4T1細胞模型

藉由皮下注射250,000個4T1細胞至右脇以於Balb/c小鼠建立4T1細胞株衍生的同基因型小鼠乳癌瘤模型。

小鼠隨後從第3天投與且每3天投與(共6劑) 300或600 µg的抗-VISTA抗體殖株13D5-1、同型對照抗體或等體積的載媒作為陰性對照。

實驗結果顯示於圖23中。於此模型中發現抗-VISTA抗體殖株13D5-1為非常有力的──能夠抑制腫瘤生長達~70%。 5.3 安全藥理學、毒理學及免疫毒性

使用IMGT DomainGapAlign (Ehrenmann et al., Nucleic Acids Res., 38, D301-307 (2010))及IEDB去免疫化(Dhanda et al., Immunology. (2018) 153(1):118-132)工具來電腦模擬分析抗-VISTA抗體殖株V4及人源化版本V4H1及V4H2之安全性及免疫原性。

抗-VISTA抗體殖株V4H1及V4H2與人類重及輕鏈有足夠被認為是人源化的(亦即，＞85%)之同源性、具有少到足以被認為是安全的之數目的可能免疫性胜肽，並且不具有任可其他可造成可能的可發展性問題的性質。

發明人亦於實施例5.2中所述的實驗過程期間秤重並分析小鼠大體屍體鏡檢的徵象；用抗-VISTA抗體殖株V4治療的小鼠與PBS-處理的對照小鼠沒有顯現出任何差異。圖44顯示實施例5.2.1.中所述的研究過程期間所得到的結果。

發明人進一步於實驗中研究血液毒性，其中以單一劑量900 µg的抗-VISTA抗體殖株V4或等體積的PBS注射小鼠。

獲取血液樣本且使用HM5血液分析器來分析不同類型白血球的數目。結果顯示於圖18中；不同細胞類型的數目係落在查爾斯河(Charles River)參考範圍之內且V4與PBS-處理組之間沒有差異，且不同組之間偵測到的臨床徵象、大體屍體鏡檢或重量沒有差異。

亦分析小鼠之肝毒性及腎毒性互相關聯值，且結果顯示於圖19內。偵測到的位準落在查爾斯河參考範圍之內且V4與PBS-處理組之間沒有差異。 5.4 晚期實性腫瘤之治療首次於人類

患有晚期或轉移性實性腫瘤、且在以標準療法治療後有疾病進程或治療不耐性以及有適當的器官功能及ECOG狀態的患者，係以根據經安全性調整之「最小期望生物效應位準」(MABEL)作法所計算出的劑量，藉由靜脈注射抗-VISTA抗體V4 (實施例2.2之[1])、V4H1 (實施例2.2之[3])或V4H2 (實施例2.2之[4])來治療。投與後監測患者28天。

接著根據不良事件通用術語標準(CTCAE)來評鑑患者，以判定治療之安全及可耐受性，且判定分子之藥物動力學。

發現以抗-VISTA抗體治療是安全且可耐受的。劑量遞增──單一療法

患有晚期或轉移性實性腫瘤、且在以標準療法治療後有疾病進程或治療不耐性以及有適當的器官功能及ECOG狀態的患者(n=18-24)，係根據一3+3模式為基的過量控制下遞增(EWOC)的劑量遞增，藉由靜脈注射抗-VISTA抗體V4 (實施例2.2之[1])、V4H1 (實施例2.2之[3])或V4H2 (實施例2.2之[4])來治療。

接著根據不良事件通用術語標準(CTCAE)來評鑑患者，以判定治療之安全及可耐受性，以及評鑑分子之藥物動力學與治療之功效。亦判定最大耐受劑量(MTD)及最大投與劑量(MAD)。劑量遞增──組合療法

患有晚期或轉移性實性腫瘤、且在以標準療法治療後有疾病進程或治療不耐性以及有適當的器官功能及ECOG狀態的患者(n=9)之治療，係用抗-VISTA抗體V4 (實施例2.2之[1])、V4H1 (實施例2.2之[3])或V4H2 (實施例2.2之[4])、根據抗-PD-1或抗-PD-L1抗體(3 mg/kg)之一3+3模式為基的遞增來治療。

接著根據不良事件通用術語標準(CTCAE)來評鑑患者，以判定治療之安全及可耐受性，以及評鑑分子之藥物動力學與治療之功效。劑量擴增

分析經治療患者的整體反應率、腫瘤標誌表現、循環腫瘤細胞、無進程存活期、整體存活期、安全性及可耐受性。

發現抗-VISTA抗體是安全且可耐受的、能降低癌細胞的數目/比例、降低腫瘤細胞標誌表現、增加無進程存活期及增加整體存活期。 5.5 淋巴瘤之治療首次於人類

患有淋巴瘤(NHL及HL)、沒有從1線化學療法受益、尚未接受同種異體幹細胞移植及可能對利妥昔單抗(rituximab) (NHL)與尼沃魯單抗(nivolumab)或派立珠單抗(pembrolizumab) (HL)有反應的患者，係以根據經安全性調整之「最小期望生物效應位準」(MABEL)作法所計算出的劑量，藉由靜脈注射抗-VISTA抗體V4 (實施例2.2之[1])、V4H1 (實施例2.2之[3])或V4H2 (實施例2.2之[4])來治療。投與後監測患者28天。

患有淋巴瘤(NHL及HL)、沒有從1線化學療法受益、尚未接受同種異體幹細胞移植及可能對利妥昔單抗(rituximab) (NHL)與尼沃魯單抗(nivolumab)或派立珠單抗(pembrolizumab) (HL)有反應的患者，係根據一3+3模式為基的過量控制下遞增(EWOC)的劑量遞增，藉由靜脈注射抗-VISTA抗體V4 (實施例2.2之[1])、V4H1 (實施例2.2之[3])或V4H2 (實施例2.2之[4])來治療。

患有淋巴瘤(NHL及HL)、沒有從1線化學療法受益、尚未接受同種異體幹細胞移植及可能對利妥昔單抗(rituximab) (NHL)與尼沃魯單抗(nivolumab)或派立珠單抗(pembrolizumab) (HL)有反應的患者之治療，係藉由靜脈注射抗-VISTA抗體V4 (實施例2.2之[1])、V4H1 (實施例2.2之[3])或V4H2 (實施例2.2之[4])、根據抗-PD-L1抗體之一3+3模式為基的遞增來治療。

分析經治療患者的整體反應率、癌細胞標誌表現、循環癌細胞、無進程存活期、整體存活期、安全性及可耐受性。

發現抗-VISTA抗體是安全且可耐受的、能降低癌細胞的數目/比例、降低腫瘤細胞標誌表現、增加無進程存活期及增加整體存活期。 實施例6 ：包含不同的Fc 區之VISTA- 結合抗體之生產與特徵化6.1 包含不同的Fc區之VISTA-結合抗體之生產與特徵化

4M2-C12係以小鼠IgG2a LALA PG型式生產。該分子為具有SEQ ID NO：249中所示序列之重鏈多肽及具有SEQ ID NO：250中所示序列之輕鏈多肽的異聚體(heteromer)。重鏈序列包含於CH2區中根據SEQ ID NO：253所編號的位置4及5之白胺酸(L)到丙胺酸(A)之取代，以及根據SEQ ID NO：253所編號的位置99之脯胺酸(P)到甘胺酸(G)之取代。這些取代於文獻中稱為L234A、L235A及P329G，以及描述於小鼠IgG2a Fc，例如於Lo et al. J. Biol. Chem (2017) 292(9):3900-3908中所述，其在此藉由參照全文併入本文。4M2-C12 mIgG2a LALA PG係藉由於CHO細胞中共同表現編碼重及輕鏈多肽的核酸，以及隨後純化來生產。

抗原結合分子	多肽	抗體
[18]	4M2-C12 mIgG2a LALA PG HC (SEQ ID NO：249) + 4M2-C12 CL (SEQ ID NO：250)	4M2-C12 mIgG2a LALA PG

4M2-C12亦以小鼠IgG2a NQ型式生產。該分子為具有SEQ ID NO：258中所示序列之重鏈多肽及具有SEQ ID NO：250中所示序列之輕鏈多肽的異聚體(heteromer)。重鏈序列包含CH2區中在根據SEQ ID NO：253的位置67之天冬醯胺酸(N)到麩醯胺酸(Q)之取代。此取代於文獻中稱為N297Q，以及描述於小鼠IgG2a Fc，例如於Lo et al. J. Biol. Chem (2017) 292(9):3900-3908中所述。4M2-C12 mIgG2a NQ係藉由於CHO細胞中共同表現編碼重及輕鏈多肽的核酸，以及隨後純化來生產。

抗原結合分子	多肽	抗體
[19]	4M2-C12 mIgG2a NQ HC (SEQ ID NO：258) + 4M2-C12 CL (SEQ ID NO：250)	4M2-C12 mIgG2a NQ

4M2-C12係以小鼠IgG1型式生產。該分子為具有SEQ ID NO：266中所示序列之重鏈多肽及具有SEQ ID NO：250中所示序列之輕鏈多肽的異聚體(heteromer)。4M2-C12 mIgG1係藉由於CHO細胞中共同表現編碼重及輕鏈多肽的核酸，以及隨後純化來生產。

抗原結合分子	多肽	抗體
[20]	4M2-C12 mIgG1 HC (SEQ ID NO：266) + 4M2-C12 CL (SEQ ID NO：250)	4M2-C12 mIgG1

6.2 包含不同的Fc區之VISTA-結合抗體對Fc受體之結合的分析

不同抗體型式的4M2-C12對人類、食蟹獼猴及鼠類VISTA蛋白之結合係經由ELISA來評估，以及對小鼠Fcγ受體及小鼠FcRn之結合係藉由BLI、使用Pall ForteBio Octet QK 384系統來評估。

從Sino Biological獲得帶有組胺酸標籤的mFcγRIV (50036-M08H)、mFcγRIII (50326-M08H)、mFcγRIIb (50030-M08H)，及mFcRn (CT009-H08H)。抗-五-HIS (HIS1K)生物感測器係購自Forte Bio (18-5120)。

在動力學的實驗中，抗-五-HIS生物感測器於PBS緩衝劑(pH 7.2)被培育歷時60 sec以獲得第一基線，且隨後被裝載PBS (pH 7.2)中之200 nM的mFcγRIV (hFcγRIIIa之異種同源物)、160 nM的mFcγRIII (hFcγRIIa之異種同源物)、75 nM的mFcγRIIb (hFcγRIIb之異種同源物)或120 nM的mFcRn歷時120 sec。裝載後，生物感測器於PBS緩衝劑(Fcγ受體為pH 7.2且FcRn為pH 5.8)中培育60 sec以獲得第二基線，以及與PBS (就Fcγ受體為pH 7.2且就FcRn為pH 5.8)中之一6點、2倍稀釋系列的測試抗體(mFcγ受體結合為2000 nM-62.5 nM，及FcRn結合為500 nM-15.6 nM)培育歷時60 sec以獲得締合曲線。最終，生物感測器在PBS (mFcγR為pH 7.2且mFcRn為pH 5.8)中培育歷時120 sec以獲得解離曲線。藉由將締合及解離資料整體擬合至1:1結合模型來計算動力學及親和力常數。

圖25A至25D中顯示4M2-C12-mIgG1對不同的小鼠Fcγ受體及小鼠FcRn的結合之分析結果。

圖26A至26D中顯示4M2-C12-mIgG2a對不同的小鼠Fcγ受體及小鼠FcRn的結合之分析結果。施行二個分開的實驗(1及2；參見圖29A至29C)；圖26A至26D顯示實驗2所獲得的結果。針對不同Fcγ受體所偵測到的結合位準可比得上科學文獻中報導的位準。

圖27A至27D顯示4M2-C12-mIgG2a LALA PG對不同的小鼠Fcγ受體及小鼠FcRn的結合之分析結果。4M2-C12-mIgG2a對mFcγRIV、mFcγRIII及mFcγRIIb的結合位準是可忽略/不可偵測的，以及對mFcRn的結合位準係與對mFcRn的結合位準相似。

圖28A至28D顯示4M2-C12-mIgG2a NQ對不同的小鼠Fcγ受體及小鼠FcRn的結合之分析結果。

圖29A至29C的表總結所判定的4M2-C12 mIgG1、4M2-C12 mIgG2a、4M2-C12-mIgG2a LALA PG及4M2-C12-mIgG2a NQ對不同的Fc受體結合的K _on、K _dis及K _D值。 實施例7 ：包含不同的Fc 區之VISTA- 結合抗體之活體內分析

於一同基因型的EL4 T細胞白血病/淋巴瘤模型中評鑑4M2-C12-mIgG2a及4M2-C12-mIgG2a LALA PG (參見實施例6.1)活體內治療癌症之功效。

EL4細胞培養於增補10%馬血清(FBS)及1% Pen/Strep之DMEM內。細胞被培養在37℃於5% CO ₂培育器中。

從InVivos (新加坡)獲得大約6週大的C57BL/6小鼠。動物安置於無特定病原條件下且遵照實驗動物照護及使用委員會(IACUC)的指導方針來對待。接種2 × 10 ⁵個EL4 T細胞白血病/淋巴瘤細胞於C57BL/6小鼠右脇。腫瘤植入後，當腫瘤大小達到350至400 mm ³時，隨機將小鼠分成下列的治療組：a)載媒對照(PBS)、b) 4M2-C12 mIgG2a (實施例5之[17])、或c) 4M2-C12 mIgG2a-LALA PG (實施例6之[18])，劑量為25 mg/kg。每3天腹膜內投與治療，共5劑。

使用一數位卡尺量測腫瘤體積一週3次，且用公式[L x W2/2]來計算。一旦載媒對照治療組腫瘤長度量測為＞1.5 cm時，則認為已經達到研究終點。

結果顯示於圖30A至30C中。到研究最後一天(植入後第23天)，4M2-C12 IgG2a及4M2-C12 IgG2a LALA PG治療組兩者的平均腫瘤體積係低於可靠量測的大小(＜30mm ³)。對比之下，載媒(PBS)治療組小鼠的平均腫瘤體積到第18天超出2000mm ³且對所有動物實施安樂死。

因而發現呈IgG2a及IgG2a LALA PG型式兩者的4M2-C12顯示出有力的腫瘤生長抑制。

發現用抗-VISTA抗體4M2-C12治療高度建立的EL4荷瘤小鼠是非常有效的而作為單一療法，且導致腫瘤清除。

發現4M2-C12的生物活性不依賴鼠類Fcγ受體之接合，強烈暗示4M2-C12係透過抑制VISTA-媒介之訊息傳導而發揮其生物活性。 實施例8 ：該等抗體結合之VISTA 表位之分析

評估抗-VISTA抗體以判定其等是否會彼此競爭對VISTA之結合。

先前已提出VSTB112會在幾個區與VISTA結合。已提議主要表位對應至SEQ ID NO：1之位置59至68及位置86至97(亦即，SEQ ID NO：271及272)。已提議次要表位對應至SEQ ID NO：1之位置71至84及位置150至166 (亦即，SEQ ID NO：273及274)；參見例如WO 2017/137830 A1，例如於[0302]段落。VSTB112已描述於例如WO 2015/097536 A2中，其在此藉由參照全文併入本文。

IGN175A被認為會對VISTA在成熟蛋白的最前32個胺基酸內結合(亦即，SEQ ID NO：1之位置33至64之內(亦即，SEQ ID NO：275))。IGN175A已描述於例如WO 2014/197849 A2中，其在此藉由參照全文併入本文。

藉由BLI、使用Octet QK384系統(ForteBio)來施行表位分箱實驗。簡而言之，使PBS中之人類VISTA-His重組型蛋白質(4.7 µg/ml)固化於抗-五His感應器(HIS1K，ForteBio)，歷時5 min。在裝載400 nM的PBS中之飽和抗體歷時10 min之前，量測PBS之基線訊號30s，且在1000 rpm之搖動速度下，接著是使用PBS之120 s的解離步驟。隨後生物感測器在1000 rpm之搖動速度下，用PBS中之300 nM競爭抗體處理5 min，接著是使用PBS之120 s的解離步驟。

在實驗中分析下列抗原結合分子：・呈IgG1型式之4M2-C12 (V4) (實例2.2之[1]) ・呈IgG1型式之4M2-C12人源化及親和力成熟之變異體(V4-C1) (實例13之[21]) ・IGN175A IgG1 (包含IGN175A HC (SEQ ID NO：267) + IGN175A LC (SEQ ID NO：268)) ・VSTB112 IgG1 (包含VSTB112 HC (SEQ ID NO：269) + VSTB112 LC (SEQ ID NO：270))

研究下列抗原/飽和抗體/競爭抗體組合：

抗原	飽和抗體	競爭抗體
人類VISTA	V4-C1 IgG1	IGN175A IgG1
人類VISTA	V4-C1 IgG1	V4-C1 IgG1
人類VISTA	V4-C1 IgG1	VSTB112 IgG1
人類VISTA	VSTB112 IgG1	IGN175A IgG1
人類VISTA	IGN175A IgG1	V4-C1 IgG1
人類VISTA	VSTB112 IgG1	V4-C1 IgG1
人類VISTA	IGN175A IgG1	IGN175A IgG1
無(PBS)	V4-C1 IgG1	IGN175A IgG1

結果顯示於圖31A及31B中。

發現V4及V4-C1 IgG1不會與IGN175A競爭對VISTA之結合。發現VSTB112與V4、V4-C1及IGN175A部分競爭對VISTA之結合。添加競爭抗體後之反應變化(nm)顯示如下。

飽和抗體		競爭抗體
	IGN175A	V4-C1 IgG1	VSTB112
IGN175A	0.0454	1.4362	-
V4-C1 IgG1	1.0661	-0,0158	-0.0124
VSTB112	0.1392	0.1579	-

結果指示出4M2-C12及IGN175A係結合VISTA的局部遙遠區，以及VSTB112係結合VISTA於相近於4M2-C12及IGN175A之區。

V1-C1與IGN175A不會競爭對VISTA之結合的事實合併VSTB112會與IGN175A競爭對VISTA之結合的觀察結果，指示出包含4M2-C12之CDR的抗體所結合的VISTA表位係非相同於IGN175A所結合的VISTA表位，且亦非相同於VSTB112所結合的VISTA表位。

從對VISTA之序列、用以引發4M2-C12之免疫原及物種交叉反應性資料的分析，發明人論結出4M2-C12及其衍生物會對SEQ ID NO：322 (其對應至SEQ ID NO：1之位置76至81)所示序列結合。 實施例9 ：分析VISTA- 結合抗體救援VISTA- 媒介之對T 細胞增殖之抑制作用的能力

以活體外檢定法來分析抗-VISTA抗體救援VISTA-媒介之訊息傳導之抑制效應的能力。

簡而言之，用抗-CD3與VISTA-Ig或對照-Ig以濃度比率1:1 (2.5 µg/ml抗-CD3:2.5 µg/ml的VISTA/對照Ig)或2:1 (2.5 µg/ml抗-CD3: 1.25 µg/ml VISTA/對照Ig)塗覆96孔平盤。不相干抗原-Ig係使用作為對照條件。平盤於4℃培育過夜。

從新鮮收集的血液樣本純化PBMC且使用人類泛T細胞單離套組(Miltenyi Biotec)進一步富集T細胞。然後用CFSE標記該等富集的T細胞族群。

用PBS清洗孔三次，且對每一孔添加100,000個CFSE-標記的T細胞，係在增補10% FBS之完整RPMI 1640培養基中，在最終濃度20 µg/ml或50 µg/ml的4M2-C12 IgG1 (實施例2.2之[1])存在下、或在最終濃度20 µg/ml的VSTB 1 12存在下、或在缺少添加的抗體下。

5天後，收穫細胞、用螢光軛接的抗-CD4及抗-CD8抗體予以標記，且使用Macsquant Analyzer 10藉由流式細胞分析術來分析。

實驗結果顯示於圖33A至33D中。發現4M2-C12會恢復CD4+ T細胞及CD8+ T細胞兩者增殖的能力。

重要地，發現4M2-C12比VSTB112更有效地恢復T細胞增殖。 實施例10 ：VISTA- 結合抗體促進THP1 細胞響應LPS 而生產IL-6 之能力的分析

以活體外檢定法來分析抗-VISTA抗體促進THP-1細胞響應LPS刺激而生產IL-6之能力。

簡而言之，未分化的THP1細胞以二複本播種於96孔平盤內(100,000個細胞/孔)，係在沒有FBS或pen/strep的RPMI培養基中。隨後，在範圍為2000 µg/ml至7.8 µg/ml的不同濃度4M2-C12 IgG1 (實施例2.2之[1])、或範圍為1000 µg/ml至7.8 µg/ml的不同濃度VSTB112存在下，用LPS (最終濃度100 µg/ml)及MnCl ₂(100 µM)處理細胞。3天之後，收集細胞培養物上清液且藉由ELISA分析以判定IL-6位準，係使用IL-6人類ELISA套組(Invitrogen)。

結果顯示於圖34A及34B中。發現4M2-C12，比起VSTB112，會促進LPS刺激的THP1細胞生產更多的IL-6。 實施例11 ：VISTA- 結合抗體促進活體內IL-6 生產之能力的分析

研究活體內響應於4M2-C12治療之IL-6生產。

簡而言之，以一600 µg單劑的4M2-C12 mIgG2a (實施例5之[17])投與C57BL/6小鼠(n=3)，且在投與前2h，及投與後0.5 hr、6 hr、24 hr、96 hr、168 hr及336 hr從小鼠獲得血液樣本。

使用小鼠IL-6 ELISA套組(Abcam，ab100712)來分析血清的IL-6含量。

結果顯示於圖35中。於4M2-C12 mIgG2a投與後0.5 hr偵測到血清內的IL-6。 實施例12 ：VISTA- 結合抗體單獨或與抗-PD-1/PD-L1 抗體組合之活體內分析12.1 CT26細胞模型

藉由皮下注射1x10 ⁵個CT26細胞至Balb/c小鼠右脇來產生一T細胞白血病/淋巴瘤之同基因型模型。

每3天腹膜內投與小鼠(每治療組7隻)共7劑，係用：・600 µg的4M2-C12 IgG2a (實施例5之[17]) ・200 µg抗-PD-1抗體(殖株RMP1-14(Bioxcell)) ・600 µg的4M2-C12 IgG2a + 200 µg的抗-PD-1抗體・只有PBS

使用數位卡尺量測一週3次並用公式[L x W2/2]來計算腫瘤體積。一旦對照組腫瘤長度量測為＞1.5 cm時，則認為已達到研究終點。

結果顯示於圖36A及36B中。抗-VISTA抗體4M2-C12與抗-PD-1之組合療法比單獨使用的任一製劑會達到更大程度的腫瘤生長抑制。

進行腫瘤浸潤CD45+細胞之免疫剖析。簡而言之，在實驗第22天收穫腫瘤、加工成單一細胞懸浮液、並用對免疫細胞表面蛋白(CD45、CD4、CD8、CD25、CD11b、Ly6G及Ly6C)具有特異性的抗體予以染色。

藉由流式細胞分析術來分析樣本，且基於其等之不同的如下之免疫細胞表面蛋白的染色而分類為下列免疫細胞子集：・CD4細胞：CD45 ⁺CD4 ⁺；・CD8 T細胞：CD45 ⁺CD8 ⁺；・Treg細胞：CD45 ⁺CD4 ⁺CD25 ⁺；・顆粒球性MDSC (g-MDSC)：CD45 ⁺CD11b ⁺Ly6G ⁺Ly6C ^lo/-・單核球性MDSC (m-MDSC)： CD45 ⁺CD11b ⁺Ly6G ^-Ly6C ^hi/+

具有所指示之表現型的腫瘤浸潤CD45+細胞之百分比總結如下：

治療組	CD4 細胞	CD8 細胞	Treg	g-MDSC	m-MDSC
PBS	1.03%	5.99%	0.09%	33.08%	9.8%
4M2-C12 IgG2a	1.66%	6.51%	0.11%	26.4%	8.34%
抗-PD-1抗體	1.05%	7.21%	0.14%	46.2%	15.25%
4M2-C12 IgG2a + 抗-PD-1抗體	1.55%	9.98%	0.22%	15.66%	14.04%

圖37顯示係為g-MDSC的腫瘤浸潤CD45+細胞的百分比。4M2-C12之治療(單獨或與抗-PD-1組合)顯著降低腫瘤浸潤CD45+細胞之中的g-MDSC的比例。

在第18天從小鼠獲得血液，且藉由使用小鼠之MACSPlex細胞激素10套組(Miltenyi Biotec)之分析法，來分析血清各種不同的細胞激素位準。

結果顯示於圖38A至38E中。 12.2 B16-BL6細胞模型

圖40A及40B顯示上文實施例5.2.3(結果顯示於圖17中)中所述的研究結果，延長至18天。抗-VISTA抗體4M2-C12與抗-PD-1之組合療法比單獨使用的任一製劑會達到更大程度的腫瘤生長抑制。

進行腫瘤浸潤CD45+細胞之免疫剖析。簡而言之，在實驗第18天收穫腫瘤、加工成單一細胞懸浮液、用對免疫細胞表面具有特異性的抗體染色、藉由流式細胞分析術來分析，並且如上文實施例12.1中所述將細胞分類為免疫細胞子集。

治療組	CD4 細胞	CD8 細胞	Treg	g-MDSC	m-MDSC
PBS	2.72%	8.79%	1.42%	2.06%	6.68%
4M2-C12 IgG2a	2.84%	10.7%	1.58%	1.65%	13.94%
抗-PD-1抗體	0.95%	3.43%	0.51%	36.65%	14.12%
4M2-C12 IgG2a + 抗-PD-1抗體	3.58%	10.6%	0.82%	5.45%	14.44%

圖41顯示係為g-MDSC的腫瘤浸潤CD45+細胞的百分比。 12.3 EL4細胞模型

藉由皮下注射2x10 ⁵個EL4細胞至C57BL/6小鼠右脇來建立一白血病/淋巴瘤之同基因型模型。

每3天腹膜內投與小鼠(每治療組7隻)共5劑，係用：・600 µg的4M2-C12 IgG2a (實施例5之[17]) ・200 µg抗-PD-1抗體(殖株RMP1-14(Bioxcell)) ・600 µg的4M2-C12 IgG2a + 200 µg的抗-PD-1抗體・只有PBS

結果顯示於圖42中。抗-VISTA抗體4M2-C12與抗-PD-1之組合療法比單獨使用的任一製劑會達到更大程度的腫瘤生長抑制。

進行腫瘤浸潤CD45+細胞之免疫剖析。簡而言之，在實驗第16天收穫腫瘤、加工成單一細胞懸浮液、用對免疫細胞表面具有特異性的抗體染色、藉由流式細胞分析術來分析，並且如上文實施例12.1中所述將細胞分類為免疫細胞子集。

治療組	CD4 細胞	CD8 細胞	Treg	g-MDSC	m-MDSC
PBS	3.71%	0.55%	0.18%	19.41%	0.88%
4M2-C12 IgG2a	7.4%	1.84%	0.19%	14.51%	0.94%
抗-PD-1抗體	4.35%	3.04%	0.09%	20.91%	0.81%
4M2-C12 IgG2a + 抗-PD-1抗體	6.53%	2.18%	0.35%	10.16%	0.33%

圖43顯示係為g-MDSC的腫瘤浸潤CD45+細胞的百分比。4M2-C12之治療(單獨或與抗-PD-1組合)顯著降低腫瘤浸潤CD45+細胞之中的g-MDSC的比例。 12.4 結論

在CT26、B16-BL6及EL4模型中，PD-1/PD-L1之訊息傳導的抑制作用使腫瘤浸潤CD45+細胞之中的g-MDSC比例增高，然而用4M2-C12治療會壓制g-MDSC的擴增。 實施例13 ：VISTA- 結合抗體之進一步特徵化

生產其他VISTA-結合抗原結合分子：

抗原結合分子	多肽	抗體
[21]	V4-C1 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：311) + V4-C1 VL-Cκ (SEQ ID NO：312)	抗-VISTA殖株V4-C1 IgG1
[22]	V4-C9 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：313) + V4-C9 VL-Cκ (SEQ ID NO：314)	抗-VISTA殖株V4-C9 IgG1
[23]	V4-C24/C26/C27/C28/C30/C31 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：315) + V4-C24 VL-Cκ (SEQ ID NO：316)	抗-VISTA殖株V4-C24 IgG1
[24]	V4-C24/C26/C27/C28/C30/C31 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：315) + V4-C26 VL-Cκ (SEQ ID NO：317)	抗-VISTA殖株V4-C26 IgG1
[25]	V4-C24/C26/C27/C28/C30/C31 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：315) + V4-C27 VL-Cκ (SEQ ID NO：318)	抗-VISTA殖株V4-C27 IgG1
[26]	V4-C24/C26/C27/C28/C30/C31 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：315) + V4-C28 VL-Cκ (SEQ ID NO：319)	抗-VISTA殖株V4-C28 IgG1
[27]	V4-C24/C26/C27/C28/C30/C31 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：315) + V4-C30 VL-Cκ (SEQ ID NO：320)	抗-VISTA殖株V4-C30 IgG1
[28]	V4-C24/C26/C27/C28/C30/C31 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：315) + V4-C31 VL-Cκ (SEQ ID NO：321)	抗-VISTA殖株V4-C31 IgG1

使用IMGT DomainGapAlign (Ehrenmann et al., Nucleic Acids Res., 38, D301-307 (2010))及IEDB去免疫化(Dhanda et al., Immunology. (2018) 153(1):118-132)工具來電腦模擬分析V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30及V4-C31之安全性及免疫原性。

V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30及V4-C31與人類重及輕鏈有足夠被認為是人源化的(亦即，＞85%)之同源性、具有少到足以被認為是安全的(參見圖53)之數目的可能免疫性胜肽，並且不具有任何其他可造成可能的可發展性問題的性質。 13.1 藉由BLI進行的結合親和力分析

藉由BLI、使用Pall ForteBio Octet QK 384系統來評估V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30及V4-C31 (亦即，[21]至[28])對人類及小鼠VISTA蛋白及人類PD-L1之結合。

簡而言之，抗-五-HIS生物感測器於PBS緩衝劑(pH 7.2)中培育歷時60 sec以獲得第一基線，且隨後被裝載PBS (pH 7.2)中之180 nM的hVISTA、180 nM的mVISTA或250 nM的hPD-L1歷時120 sec。裝載後，生物感應器於pH 7.2之PBS緩衝劑中培育60 sec以獲得第二基線，且與PBS pH 7.2中之一6點、2倍稀釋系列的測試抗體(500 nM-15.6 nM)培育歷時120 sec或900 sec以獲得締合曲線。最終，生物感測器在pH 7.2之PBS中培育120 sec以獲得解離曲線。藉由將締合及解離資料整體擬合至1:1結合模型來計算動力學及親和力常數。

V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30或V4-C31中無一者顯示出對人類PD-L1有顯著的結合(圖45C)。

此實驗中，就V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30及V4-C31對人類VISTA及小鼠VISTA的結合所計算的動力學及熱力學常數係顯示於圖45D中。

在一分開的實驗中，分析V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30及V4-C31對小鼠VISTA蛋白之結合，其包括VSTB112 IgG1 (包含VSTB112 HC (SEQ ID NO：269) + VSTB112 LC (SEQ ID NO：270))之評鑑。

VSTB112沒有顯示出對小鼠VISTA蛋白有明顯的結合(圖46A)。此實驗中，就V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30及V4-C31對小鼠VISTA的結合所計算的動力學及熱力學常數係顯示於圖46B中。

在一進一步的實驗中，分析V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27及VSTB112 IgG1對人類VISTA及小鼠VISTA蛋白之結合，且經計算的動力學及熱力學常數係顯示於圖47C中。

在另一實驗中，分析V4 (實施例2.2之[1])及VSTB112 IgG1 (包含VSTB112 HC (SEQ ID NO：269) + VSTB112 LC (SEQ ID NO：270))對人類VISTA、小鼠VISTA及人類CD47之結合。抗-五-HIS生物感測器於PBS緩衝劑(pH 7.2)培育歷時60 sec以獲得第一基線，且隨後裝載PBS (pH 7.2)中之180 nM的hVISTA、180 nM的mVISTA或300 nM的hCD47歷時120 sec。裝載後，生物感測器於pH 7.2之PBS緩衝劑中培育60 sec以獲得第二基線，且與pH 7.2之PBS中之一稀釋系列的測試抗體(1500 nM-46.9 nM)培育120 sec以獲得締合曲線。最終，生物感測器在pH 7.2之PBS中培育120 sec以獲得解離曲線。藉由將締合及解離資料整體擬合至1:1結合模型來計算動力學及親和力常數。

V4或VSTB112都沒有顯示出有對人類CD47之結合。VSTB112沒有顯示出對小鼠VISTA蛋白有明顯的結合，然而V4有。經計算的動力學及熱力學常數係顯示於圖48B中。 13.2 藉由ELISA進行的結合親和力分析

ELISA係使用來評鑑不同的抗體對人類VISTA及小鼠VISTA之結合。如上文實施例3.3中所述來施行ELISA。

在實驗中分析下列抗體：・4M2-C12 IgG1 (實例2.2之[1]；圖中稱為「V4pr」) ・V4-C1 IgG1 (實例13之[21]) ・V4-C9 IgG1 (實例13之[22]) ・V4-C24 IgG1 (實例13之[23]) ・V4-C26 IgG1 (實例13之[24]) ・V4-C27 IgG1 (實例13之[25]) ・V4-C28 IgG1 (實例13之[26]) ・V4-C30 IgG1 (實例13之[27]) ・V4-C31 IgG1 (實例13之[28]) ・VSTB112 IgG1 (包含VSTB112 HC (SEQ ID NO：269) + VSTB112 LC (SEQ ID NO：270)) ・阿替珠單抗(Atezolizumab) ・人類IgG1同型對照

獲得的結果顯示於圖49A及49B中，以及圖49C總結從ELISA所計算的抗體對所指示蛋白質結合之EC50 (nM)值。

施行一進一步的實驗，其中分析V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31、VSTB112及同型對照抗體對人類VISTA或小鼠VISTA之結合。結果顯示於圖50A及50B中，以及圖50C總結從ELISA所計算的抗體對所指示蛋白質結合之EC50 (nM)值。

施行一進一步的實驗，其中分析V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、VSTB112及同型對照抗體對人類VISTA或小鼠VISTA之結合。結果顯示於圖51A及51B中，以及圖51C總結從ELISA所計算的抗體對所指示蛋白質結合之EC50 (nM)值。

施行一進一步的實驗，其中分析V4、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30及V4-C31及同型對照抗體對人類VISTA、PD-L1、B7H3、B7H4、B7H6、B7H7、PD-1及CTLA-4之結合。結果顯示於圖56A至56G中。V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30及V4-C31中之每一者顯示出對人類VISTA之強大的結合，以及對於B7蛋白質家族的其他成員沒有交叉反應性。

在一進一步的實驗中，分析V4 (圖57中稱為「V4P」)、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30及V4-C31對人類VISTA、小鼠VISTA、大鼠VISTA及cyno VISTA之結合。獲得的結果顯示於圖57A至57H中，以及圖57I總結從ELISA所計算的抗體對所指示蛋白質結合之EC50 (M)值。

發現V4及所有V4-衍生的殖株V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30及V4-C31都會對人類VISTA、小鼠VISTA、大鼠VISTA及cyno VISTA結合。 13.3 藉由流式細胞分析術分析對VISTA-表現細胞之結合

基本上如上文實施例3.1中所述來分析抗-VISTA抗體其等對VISTA-表現細胞之結合能力。

簡而言之，轉染細胞或編碼人類VISTA或小鼠VISTA的載體所轉染之HEK293細胞，係與1 µg/ml的抗-VISTA抗體或同型對照抗體於4℃培育1 hr。接著清洗細胞，並且與10 µg/ml FITC-軛接的抗-人類Fc抗體於4℃培育1 hr。再次清洗細胞，然後藉由流式細胞分析術來分析。

在實驗中分析下列抗體：・4M2-C12 IgG1 (實例2.2之[1]；圖中稱為「V4P」) ・V4-C24 IgG1 (實例13之[23]) ・V4-C26 IgG1 (實例13之[24]) ・V4-C27 IgG1 (實例13之[25]) ・V4-C28 IgG1 (實例13之[26]) ・V4-C30 IgG1 (實例13之[27]) ・V4-C31 IgG1 (實例13之[28]) ・VSTB112 IgG1 (包含VSTB112 HC (SEQ ID NO：269) + VSTB112 LC (SEQ ID NO：270)) ・人類IgG1同型對照

結果顯示於圖58A至58C中。 13.4 以微差掃描螢光分析法進行之熱穩定性分析

不同抗體的熱穩定性係藉由微差掃描螢光分析法予以評鑑，如上文實施例3.4中所述。

圖52A至52I顯示V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30、V4-C31 (亦即，[21]至[28])及VSTB112 (以三複本)之熱穩定性微差掃描螢光分析法所獲得的原始資料之第一階導數，且結果總結於圖52J中。

發現V4-C1、V4-C9、V4-C24、V4-C26、V4-C27、V4-C28、V4-C30及V4-C31，相比於V4 (67.5℃)，有較高的Fab區熔化溫度(Tm)，且從而有改良的熱穩定性。 實施例14 ：VISTA- 結合抗體於免疫組織化學法之用途

評鑑抗-VISTA抗體4M2-C12 mIgG2a (實施例5之[17])其要使用於免疫組織化學法供用於偵測人類VISTA蛋白的能力。

使用Bond試劑(Leica Biosystems)來施行切片加工。來自正常人類脾臟或正常人類卵巢之市售石蠟切片以Bond脫蠟溶液(Bond Dewax solution)予以脫石蠟，且經再水合後使用。切片接著接受下列處理而伴隨步驟之間以1x Bond Wash沖洗4-5次：(i)抗原暴露，藉由於100℃用Bond表位修復溶液(Bond Epitope Retrieval Solution)處理40 min，(ii)內生的過氧化酶阻斷，藉由室溫下用3.5% (v/v) H ₂O ₂處理15 min，(iii)藉由用10%山羊血清室溫下處理30 min以進行阻斷，(iv)與一9.37 mg/mL溶液的1:50稀釋4M2-C12 mIgG2a於4℃培育過夜，(v)與HRP-聚合物軛接的山羊抗-小鼠抗體於室溫下培育5 min，以及(vi)用Bond Mixed DAB Refine於室溫下顯影7 min，接著用去離子水沖洗以停止反應。

在室溫下用蘇木素複染(counterstain)切片5 min且用去離子水及1x Bond清洗溶液(Bond Wash solution)來沖洗，然後脫水、封固於合成封固介質中且以高解析度予以掃描。

結果顯示於圖59A及59B中。抗-VISTA抗體會染色脾臟細胞之細胞質，但是不會染色正常卵巢切片中的細胞(對照)。 實施例15 ：進一步分析VISTA- 結合抗體救援VISTA- 媒介之對T 細胞增殖及促發炎性細胞激素生產之抑制作用的能力

鑑定抗-VISTA抗體對於釋放T細胞免於VISTA-媒介之壓制作用的能力之特徵。

用濃度2.5 µg/ml的抗-CD3塗覆96孔平盤且於4℃培育過夜。如上文從血液樣本單離PBMC、從PBMC富集T細胞且用CSFE予以標記，並且CFSE-標記的T細胞接著以2:1比率與編碼人類VISTA之建構物所轉染的HEK293-6E細胞共培養於增補2% FBS之RPMI 1640培養基中。

接著用0 µg/ml (對照)、20 µg/ml或50 µg/ml濃度之4M2-C12-hIgG1 (實施例2.2之[1])或VSTB112來處理細胞。

5天後，收穫細胞且藉由流式細胞分析術來分析以由CSFE稀釋剖析判定細胞增殖。亦收穫細胞培養物上清液，且藉由ELISA來分析INFγ及TNFa位準。

結果顯示於圖60A至60D中。圖60A及60B顯示4M2-C12-hIgG1係以劑量依賴型方式釋放T細胞增殖免於VISTA-媒介的抑制作用。圖60C及60D顯示4M2-C12-hIgG1釋放T細胞生產INFγ及TNFa免於VISTA-媒介的抑制作用。

在進一步的實驗中，未分化的THP1細胞以二複本播種於96孔平盤的孔內，於沒有FBS或pen/strep的RPMI培養基(100,000個細胞/孔)中，且在濃度範圍為2000 µg/ml至7.8 µg/ml的系列稀釋濃度的4M2-C12-hIgG1 (實施例2.2之[1])或VSTB112存在下，用LPS (100 µg/ml)來刺激細胞。

24 h後收集細胞培養物上清液且藉由ELISA分析IL-6及TNFa。細胞亦被固定且經透化，以及經由流式細胞分析術來分析VISTA之存在。

結果顯示於圖61A至61C中。發現4M2-C12-hIgG1係以劑量依賴型方式使LPS-刺激的THP1細胞的IL-6及TNFa生產增加，且達比VSTB112更大很多的程度。

在一進一步的實驗中，未分化的THP1細胞以二複本播種於96孔平盤的孔內，於沒有FBS或pen/strep的RPMI培養基(100,000個細胞/孔)中，且在濃度範圍為2000 µg/ml至7.8 µg/ml的4M2-C12-hIgG1 (實施例2.2之[1])或4M2-C12-hIgG4 (以下所示之[29])存在下，用LPS (100 µg/ml)及MnCl2 (100 µM)來刺激細胞。24 h後收集細胞培養物上清液且藉由ELISA分析IL-6。

抗原結合分子	多肽	抗體
[29]	4M2-C12 VH-CH1-CH2-CH3 IgG4 (SEQ ID NO：330) + 4M2-C12 VL-Cκ (SEQ ID NO：213)	抗-VISTA殖株4M2-C12 IgG4

結果顯示於圖62中。發現LPS-刺激的THP1細胞生產的IL-6增加係與Fc無關，因為觀察到在以人類IgG1或IgG4型式的4M2-C12處理所誘發的IL6位準之間沒有顯著差異。 實施例16 ：藥理學、毒理學及免疫毒性之進一步分析

在一急性劑量研究中，大鼠被投與單一劑量10 mg/kg、25 mg/kg、100 mg/kg或250 mg/kg的4M2-C12-hIgG1 (實施例2.2之[1])或4M2-C12-hIgG4 (實施例15之[29])。

在基線(- 2 hr)、投與後0.5 hr、6 hr、24 hr、96 hr、168 hr及336 hr從大鼠取得血液。藉由ELISA來定量血清中的抗體。

結果顯示於圖63A至63D中。

於分開的實驗中，BALB/C小鼠被投與單一劑量50 mg/kg 4M2-C12-hIgG1 (實施例2.2之[1])或等體積的PBS。在96小時後獲取血液樣本，且使用HM5血液分析器來分析不同類型白血球的數目。亦分析血液樣本之肝毒性及腎毒性互相關聯值。

代表性結果係顯示於圖64A至64C的表中。

在進一步的實驗中，史道二氏大鼠被投與單一劑量250 mg/kg 4M2-C12-hIgG1 (實施例2.2之[1])或等體積的PBS。在6、24、96及168小時獲得血液樣本，且使用HM5血液分析器來分析不同類型白血球的數目。亦分析血液樣本之肝毒性、腎毒性及胰毒性互相關聯值。

代表性結果係顯示於圖65A至65C的表中。

投與4M2-C12-hIgG1沒有發現與顯著毒性有關聯，以及不會顯著改變血液內細胞類型的數目。 實施例17 ：V4-C26 抗體之分析17.1 V4-C26、VSTB112及mAb 13F3對人類及小鼠VISTA之結合的比較

分析抗-VISTA抗體V4-C26 (亦即，實施例13之分子[24])、VSTB112 IgG1 (包含VSTB112 HC (SEQ ID NO：269) + VSTB112 LC (SEQ ID NO：270))以及mAb 13F3 (BioXCell Cat. No. BE0310)對人類VISTA及小鼠VISTA之結合。

生物層干涉術(BLI)實驗係使用Octet QK384系統(ForteBio)來施行。所有量測均在25℃下施行。

簡而言之，塗佈有抗-五-HIS (HIS1K)之生物感測器尖(Pall ForteBio，USA)培育於PBS緩衝劑(pH 7.2)中歷時60 sec以獲得第一基線，且該等尖隨後裝載PBS (pH 7.2)中之270 nM帶有HIS標籤的人類VISTA或小鼠VISTA歷時120 sec。

裝載後，生物感應器被培育於pH 7.2之PBS緩衝劑中60 sec以獲得第二基線，且以4點、2倍稀釋系列之PBS pH 7.2中的測試抗體(濃度：250 nM、125 nM、62.5 nM及31.3 nM)培育歷時120 sec以獲得締合曲線。最終，生物感測器在pH 7.2之PBS中培育歷時120 sec以獲得解離曲線。

結果顯示於圖66中。發現V4-C26顯示有對人類VISTA及小鼠VISTA兩者之結合。對比之下，mAb 13F3顯示有對小鼠VISTA結合，但沒有對人類VISTA結合，以及VSTB112顯示有對人類VISTA結合，但沒有對小鼠VISTA結合。 17.2 由V4-C26 hIgG4之腫瘤生長抑制

在同基因型細胞株衍生的小鼠結腸癌瘤模型中評鑑包含SEQ ID NO：331之重鏈及SEQ ID NO：317之輕鏈的抗原結合分子V4-C26 hIgG4其在活體內抑制腫瘤生長的能力。

CT26細胞係獲得自ATCC，且在37℃下於5% CO ₂培育器中於增補10%胎牛血清及1% Pen/Strep之RPMI-1640中培養。

藉由皮下注射1x10 ⁵個CT26細胞至~6-8週齡雌性BALB/c小鼠右脇來建立CT26細胞衍生的腫瘤。

植入後3天及其後兩週一次，小鼠係藉由腹膜內注射來投與25 mg/kg的V4-C26 hIgG4，或作為對照條件的等體積載媒(每治療組8隻小鼠)。

使用一數位卡尺量測腫瘤體積一週3次，且用公式[L x W2/2]來計算。一旦對照組腫瘤長度量測為＞1.5 cm時，則認為已達到研究終點。

結果顯示於圖67A及67B中。相對於向用載媒來投與之小鼠，投與V4-C26 hIgG4之小鼠顯示了顯著的腫瘤生長抑制及改善的存活期。 17.3 VISTA表現之分佈 17.3.1 VISTA主要表現於健康組織中骨髓衍生之細胞上

研究VISTA在健康組織中之分佈以評鑑VISTA拮抗劑之最適策略。分析來自10X Genomics之單一細胞(sc) RNA-seq資料集，其包含68,000個PBMC [www.10xgenomics.com/single-cell-gene-expression/datasets]。此顯露14個主要細胞叢之存在(圖68A)。儘管在許多細胞族群中識別到低位準之VISTA轉錄本，但高表現係限於健康人類供體中之骨髓衍生的單核球及樹突細胞，在T細胞中具有限表現(圖68B、68C)。

對福馬林固定石蠟包埋(FFPE)組織微陣列(TMA)切片使用免疫組織化學法(IHC)來進一步特徵化健康人類組織中之VISTA蛋白表現(圖68D)。在淋巴器官(例如，脾臟及骨髓)及具有顯著白血球浸潤之組織(例如，乳房及肺臟)中偵測到最高VISTA位準。VISTA跨健康組織及多樣免疫細胞之分佈強烈支持在不耗乏VISTA表現細胞下拮抗VISTA之需求，供用於最適治療效益及可耐受安全性。 17.3.2 包括TNBC及NSCLC之實性腫瘤顯示VISTA及VSIG3的顯著表現

經由免疫組織化學法評估四實性癌症之福馬林固定石蠟包埋(FFPE)組織微陣列(TMA)切片中之VISTA及VSIG3的表現，包括三重陰性乳癌(TNBC)、非小細胞肺癌(NSCLC)、肝細胞癌瘤(HCC)及間皮瘤。免疫組織化學法使用4M2-C12-mIgG2a (其由SEQ ID NO：248及250之多肽形成)或抗-VSIG3抗體。

TNBC及NSCLC患者分別顯示，展現中高染色強度之核心的最高VISTA表現有89%及85%(圖68E、68F)。進一步評鑑VSIG3之表現。VSIG3顯示出於間皮瘤(90%)、NSCLC (84%)及TNBC (74%)中有中高染色(圖68G、68H)。在TNBC及NSCLC中所觀察到之VISTA及VSIG3兩者的高表現，係與VISTA之共抑制功能可透過壓制T細胞功能的VISTA-VSIG3交互作用來媒介的報導(Wang et al., Immunology (2019) 156: 74-85)為一致的，且暗示出這些可為研究VISTA拮抗作用之效益的優先適應症。 17.4 V4-C26 hIgG4之性質分析

V4-C26係開發為IgG4同型，其包含SEQ ID NO：331之重鏈及SEQ ID NO：317之輕鏈。 17.4.1 ADCC及CDC功能性分析

為了排除V4-C26 hIgG4致使ADCC及CDC反應之可能性，評鑑其對個別的FcγRIII及C1q蛋白質之結合親和力。藉由ELISA觀察到在FcγRIII與C1q蛋白質之間沒有結合(圖69A及69B)，其將排除ADCC或CDC機制耗乏VISTA表現細胞。

此特徵使得V4-C26 hIgG4與先前開發之使用IgG1 Fc同型、已知會觸發由ADCC及CDC之細胞耗乏的靶向VISTA之抗體不同。 17.4.2 V4-C26 hIgG4之生物物理性質

V4-C26 hIgG4對VISTA之結合特異性係藉由ELISA來量測。

圖70A展示出V4-C26 hIgG4在B7家族之其他相關成員(B7H1/PDL-1、B7H3、B7H4、B7H6、B7H7)、以及PD-1及CTLA-4之中顯示對VISTA有高度特異性結合。

為了支持為功效、安全性及PK模型而利用嚙齒動物及非人類靈長類動物(NHP)物種，使用ELISA及SPR (Biacore)評估V4-C26 hIgG4對VISTA異種同源物之結合能力。

圖70B顯示V4-C26 hIgG4展現對人類、NHP、大鼠及小鼠VISTA-HIS蛋白的劑量依賴型結合，藉由ELISA分別有5.117 pM、12.15 pM、6.689 pM、及3.549 pM之EC ₅₀。亦觀察到V4-C26 hIgG4可結合人類、NHP、大鼠及小鼠VISTA異種同源物，使用SPR (Biacore)分別有407 pM、367 pM、382 pM、及549 pM之相似的皮莫耳親和力(Kd)，參見圖75A至75D。

進一步藉由FACS確認，V4-C26 hIgG4對表現重組型VISTA異種同源物之HEK293T細胞以及對相關臨床前物種之PBMC內之骨髓細胞的細胞表面結合。

圖70C顯示：V4-C26 hIgG4顯示出對所有受試物種之VISTA異種同源物為劑量依賴型結合，對於人類、NHP、大鼠及小鼠VISTA表現HEK293T細胞分別有3.738 nM、2.571 nM、4.133 nM及8.94 nM的可比配EC ₅₀值。觀察到對不表現VISTA之野生型HEK293T細胞沒有非特異性結合。

圖70D顯示：V4-C26 hIgG4亦顯示出對所有受試臨床前物種之骨髓細胞上所表現之內生VISTA為可比配之劑量依賴型結合，對於人類、NHP、大鼠及小鼠VISTA分別為108 nM、67.6 nM、48.6 nM及111 nM之EC ₅₀。

一些腫瘤環境已被報導為缺氧的，特徵在於相對低之pH。由於VISTA含有許多暴露之組胺酸殘基，其易受質子化影響之且可能影響抗體結合，因此我們評鑑pH對V4-C26 hIgG4結合之效應。圖75E顯示V4-C26 hIgG4被觀察到在pH 5.5-7.5下以可比配之親和力對VISTA結合，如藉由ELISA所評估，確認V4-C26 hIgG4在跨生理學上相關之pH範圍內對VISTA結合，且結合位點不同於富含組胺酸之區。

因此，V4-C26 hIgG4之結合係高度選擇性的，且即使在可代表腫瘤微環境中之條件的低pH條件下亦維持。 17.5 V4-C26 hIgG4阻斷VISTA功能性之能力 17.5.1 V4-C26 hIgG4調變骨髓功能

為了研究VISTA阻斷對表現最高VISTA位準之骨髓細胞的效應，在若干骨髓功能活體外模型中評鑑V4-C26 hIgG4治療。

首先，評估V4-C26 hIgG4之VISTA阻斷其對人類單核球性MDSC之功能的影響。先前的研究已經報導MDSC會顯著地促進TME中之T細胞功能的壓制(L. Wang, et al., Oncoimmunology 7, e1469594 (2018))。經以GM-CSF及IL-6歷時7天分化為MDSC的單核細胞係與自體PBMC共培養。接著將T細胞用一抗-CD3抗體刺激，並藉由ELISA量測培養上清液中的IFN-γ位準。

圖71A顯示添加V4-C26 hIgG4，但不添加VSTB112，響應於抗-CD3刺激成功地逆轉MDSC媒介之T細胞壓制，如增強之IFN-γ位準所指示。

諸如嗜中性球之顆粒球是先天性免疫反應的一整體部分，但可能會不良地影響癌症進程。儘管活體外模型化顆粒球性(g)-MDSC之功能具有挑戰性，但已知g-MDSC可由已浸潤腫瘤微環境之嗜中性球產生(G. E. Kaiko, et al., Immunology 123, 326-338 (2008))。使用穿孔檢定法探索V4-C26 hIgG4-媒介之VISTA阻斷對嗜中性球趨化性之效應。在此檢定法中，嗜中性球在腔室之間朝向生理學上相關之化學引誘物C5a遷移，且已遷移至下部腔室之細胞之百分比接著經由一發光讀出來定量。

圖71B顯示V4-C26 hIgG4以劑量依賴型方式有力地抑制嗜中性球遷移。對比而言，VSTB112僅能在更高很多的濃度下壓制嗜中性球遷移。

總而言之，這些結果展現V4-C26 hIgG4有力地中和骨髓細胞上之VISTA，導致促炎性細胞激素之分泌增加且嗜中性球之遷移減少。 17.5.2 V4-C26 hIgG4使免疫細胞環境向T _H1/T _H17免疫反應極化

為了研究由V4-C26 hIgG4所作之VISTA阻斷在更複雜之活體外免疫活化模型中之功能效應，使用同種異體混合淋巴球反應(MLR)檢定法。簡而言之，來自5個獨立健康的人類供體之PBMC經成對混合以模型化一自我/抗自我免疫反應，且接著在分析上清液的細胞激素位準之前，於存在或不存在V4-C26 hIgG4之下培養歷時達96小時。亦使用批量RNA-seq分析細胞之轉錄體(transcriptome)。藉由Luminex檢定法定量上清液中之細胞激素位準。

圖72A顯示V4-C26 hIgG4在96小時時誘發IFN-γ、TNF-α及IL-17A之位準上的顯著劑量依賴性增加，可比得上藉由抗-PD-1抗體、派立珠單抗(pembrolizumab)之PD-1/PD-L1阻斷所見的效應，但在IL-4、IL-10及IL-13 (Th2細胞激素)或IL-6之位準無顯著改變。細胞激素位準的這些改變係指示Th1/Th17反應之轉變。

此結論進一步為批量RNA-seq所支持，其突顯在關聯於TLR、TNF-α、IL-1、JAK-STAT和IL-17訊息傳導途徑之基因之轉錄本位準的一富集(圖72B，72C)，連同在諸如IFN-γ、TNF-α及IL-12A之Th1相關聯基因之轉錄本位準的一增加以及Th2相關聯基因IL-4、IL-10、IL-13及IL-9之轉錄本位準的一降低(圖72D)。

總而言之，這些結果顯示VISTA之V4-C26 hIgG4阻斷可使免疫細胞環境向增強之Th1/Th17免疫反應極化。此與鼠類VISTA基因剔除模型一致，該等模型導致先前已報導其特徵在於Th1/Th17反應(N. Li et al., Sci Rep-uk 7, 1485 (2017))之乾癬及實驗性自體免疫性腦脊髓炎(EAE)。 17.6 V4-C26 hIgG4治療在多個實性腫瘤之免疫勝任鼠類CDX模型中誘發強的抗腫瘤反應

為探索活體內V4-C26 hIgG4之促炎性及抗致瘤效應，在多個實性腫瘤模型中進行腫瘤生長抑制研究，該等模型包括結腸癌(CT26)之同基因型鼠類細胞衍生之異種移植(CDX)皮下模型、VISTA表現乳癌(4T1)之查核點抑制劑抗性同位CDX模型以及人類肺癌(A549)及結腸直腸癌(HCT15)之經移植CD34之人源化小鼠模型。

首先，Balb/c小鼠被皮下植入(右脇) CT26腫瘤，且從植入後3天兩週一次以500 µg (~25 mg/kg)的V4-C26 hIgG4 (腹膜內)進行治療。

圖73A顯示V4-C26 hIgG4展現顯著的單一製劑功效，與載媒相比，有84%的腫瘤生長抑制(TGI)。

其次，藉由在Balb/c小鼠之乳脂肪墊中植入過度表現VISTA之4T1細胞，建立乳癌之鼠類同位模型。小鼠在植入後第7、9、12、14、16天，以50 µg的V4-C26 hIgG4或抗-小鼠VISTA抗體13F3進行腫瘤內治療。13F3經常用作為用於研究抗-VISTA抗體之活體內功效的一小鼠代用物。

圖73B再次顯示：V4-C26 hIgG4顯示顯著的TGI (53%)，其可比得上13F3，表明二抗體可能共有共同的作用機制。

最後，在移植有CD34+臍帶血造血幹細胞之人源化小鼠中測試V4-C26 hIgG4之功效。這些人源化小鼠接受GM-CSF/IL3追加，其於腫瘤植入前二天在器官及血液中穩定地重構多個人類細胞譜系，例如T、B及骨髓細胞(表S1)。在重構歷時3-4個月後，小鼠被用人類HCT15結腸直腸癌細胞或人類A549肺癌細胞皮下植入，且自植入後5天開始兩週一次(腹膜內)用500 µg (~25 mg/kg)的V4-C26 hIgG4或載媒對照進行治療。

圖73C及73D顯示：如在同基因型模型中所觀察到的，V4-C26 hIgG4在這些HCT15結腸直腸及A549肺臟人源化CDX模型中顯示分別為65%及62% TGI之顯著單一製劑抗腫瘤功效。

因此，V4-C26 hIgG4在多種實性腫瘤CDX模型中展現作為單一製劑之強抗腫瘤反應。在完全免疫勝任之鼠類腫瘤模型及重現人類免疫隔區之鼠類腫瘤模型兩者的V4-C26 hIgG4治療之後所觀察到的相似腫瘤抑制，係暗示在小鼠與人類抗腫瘤免疫反應之間共有一種守恆且可能可轉譯的機制。 17.7 V4-C26 hIgG4治療重塑鼠類CDX模型之腫瘤微環境，增加活化的作用免疫細胞且減少壓制性細胞

為了理解在鼠類模型中針對V4-C26 hIgG4所觀察到之抗腫瘤功效的機制，使用FACS進一步剖析來自同基因型CT26結腸癌模型之腫瘤。

圖73E顯示觀察到V4-C26 hIgG4治療顯著增加腫瘤微環境中CD11b+ MHCII+ (抗原呈現細胞)、CD11b+ F4/80+ (巨噬細胞)及CD11c+ (DC)的百分比。亦觀察到CD8+ T細胞的增加，雖然此並非係統計學上顯著的。對比而言，與載媒對照相比，經治療小鼠之腫瘤中廣泛壓制性MDSC (CD11b+ GR1+ MHCII-)之頻率顯著較低。

為進一步評估免疫細胞數目改變關聯於腫瘤浸潤淋巴球(TIL)之功能狀態的機制，我們藉由活體外共培養CT26細胞及來自CDX模型之單離TIL來施行一抗原回憶檢定法。

圖73F展示：共培養後72小時，自經V4-C26 hIgG4處理之腫瘤所單離之TIL顯示出顯著較高的CT26細胞溶解。此增加之活性進一步用浸潤T細胞與CT26細胞的離體共培養檢定法來確認，其中，與未治療小鼠相比，來自經治療小鼠之T細胞顯示出顯著較高的IFN-γ位準，如藉由ELISA所量測。

這些結果表明：V4-C26 hIgG4之VISTA阻斷係增加發炎性作用細胞的位準而連帶有腫瘤微環境中之免疫壓制性MDSC的伴隨減少，且增強TIL之抗原特異性細胞毒性活性，很可能有助於V4-C26 hIgG4之抗腫瘤功效。V4-C26 hIgG4能將腫瘤微環境重塑至一抗致瘤、促炎性表現型，與係為高度VISTA-陽性骨髓隔室之操縱的主要機制一致。 17.8 V4-C26 hIgG4在多個物種中展示出有利的藥物動力學剖析

治療性抗體應具有與適當用劑方案相容之質體中半生期。先前抗-VISTA抗體已展現特徵在於快速血清清除率之不良PK (R. J. Johnston et al., Nature 574, 565-570 (2019))，其可由Fc-作用功能解釋，諸如ADCC，尤其係嗜中性球的Fc-作用功能，導致VISTA表現細胞之快速細胞更新且造成一顯著的抗體沉陷(antibody sink)。因此在健康及荷瘤小鼠及健康大鼠及NHP中評鑑V4-C26 hIgG4之藥物動力學剖析。

圖74A顯示對於已經以增加劑量之V4-C26 hIgG4 (5-20 mg/kg)腹膜內投與之荷瘤及無荷瘤Balb/c小鼠的代表性藥物動力學剖析。非荷瘤小鼠展現線形PK，然而，荷瘤小鼠中之剖析非線性，可能係由於目標位準較高及目標媒介的藥物動向(TMDD)增高所致。荷瘤小鼠的V4-C26 hIgG4血清半生期係跨劑量計算為26.9至57.2小時，而在無荷瘤小鼠血清半生期為61.1至80.8小時。

在史-道二氏大鼠及食蟹獼猴中，自雄性及雌性動物兩者中之量測值判定PK剖析。V4-C26 hIgG4係以1 mg/kg、10 mg/kg及100 mg/kg之單一劑量，作為靜脈內(IV)推注輸注至大鼠之尾靜脈中，且作為IV推注輸注至獼猴之周邊靜脈中來投與。在兩種物種中，V4-C26 hIgG4之PK剖析在性別之間沒有不同，並且針對跨所有劑量之Cmax值觀察到暴露隨劑量成比例增加。V4-C26 hIgG4之血清半生期隨每一用劑組而增加。跨大鼠兩個性別中所觀察到之半生期平均值針對1、10及100 mg/kg分別為6.3、25.5及67.5小時，而在跨食蟹獼猴兩個性別中所觀察到之半生期平均值針對1、10及100 mg/kg分別為8.6、41.3及34.9小時(圖74B、74C)。

這些結果合力展現：V4-C26 hIgG4在多個物種中具有有利的PK剖析，而沒有其已在具一耗乏性IgG1 Fc域的其他抗-VISTA抗體上注意到的快速清除率。

最適治療性抗體應展現對正常組織之最小毒性且避免不利副作用，諸如細胞激素釋放症候群(如就亞治療劑量之其他IgG1同型抗-VISTA耗乏性抗體所報導(NCT02671955))。因為V4-C26 hIgG4顯示VISTA異種同源物之物種守恆結合，亦監測上述PK研究之動物的V4-C26 hIgG4用劑之不良作用，作為並行的可耐受性研究之一部分。在史-道二氏大鼠及食蟹獼猴中單一IV注射之後，兩物種均顯示沒有治療相關之發病率/死亡率或臨床徵象，且沒有治療相關之在體重、食物攝取、臨床化學或血液學參數上的改變，其持續了28天的觀察期間。

另外，用來自健康供體之人類全血及經單離之PBMC執行離體細胞激素釋放檢定法，以藉由使用細胞量測圓珠陣列作法評鑑培養上清液中的IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α及IFN-γ位準，來評估V4-C26 hIgG4之潛在免疫毒性。在以V4-C26 hIgG4、陽性對照(抗-CD3或葡萄球菌腸毒素B)或呈可溶性刺激型式之陰性同型對照刺激24小時之後，量測細胞激素位準。V4-C26 hIgG4在血液中或在經純化PBMC中不會引發任何顯著的細胞激素釋放(圖74D至74G)。

這些結果合力展現：V4-C26 hIgG4在大鼠及食蟹獼猴中耐受良好，並且進一步表明對細胞激素釋放所造成之潛在免疫毒性的低風險。 17.9 由V4-C26 hIgG4及抗PD-1之腫瘤生長抑制 A549細胞模型

A549細胞係獲得自ATCC。在70-80%匯集度時收穫細胞，用15 ml的PBS清洗三次，使用血球計計數且於PBS回溶成5 x 10 ⁷個細胞/ml的濃度。

藉由皮下植入5 × 10 ⁶個A549細胞(總體積為0.1 ml)至6-8週齡之經移植CD34之人源化HiMice小鼠之右脇來建立A549細胞衍生的腫瘤。

植入後3天，及其後6-7週兩週一次，小鼠用以下劑量腹膜內投與：・在0.2 ml的總體積中，500 µg的V4-C26 hIgG4 (HMBD-002) (等效於25 mg/kg)。・在0.2 ml的總體積中，200 µg的抗-人類PD-1抗體(等效於10 mg/kg)。・在0.2 ml的總體積中，500 µg的V4-C26 hIgG4 + 200 µg的抗-人類PD-1抗體。

在治療過程中量測腫瘤體積。

結果顯示於圖83A中。抗-VISTA抗體V4-C26 hIgG4 (HMBD-002)與抗-PD-1之組合療法會抑制腫瘤生長達到比單獨的任一製劑更大的程度。 CT26細胞模型

CT26細胞係獲得自ATCC。在70-80%匯集度時收穫細胞，用15 ml的PBS清洗三次，使用血球計計數且於PBS回溶成5 x 10 ⁶個細胞/ml的濃度。

藉由皮下植入1×10 ⁵個CT26細胞(總體積為0.1 ml)至6-8週齡之Balb/c小鼠之右脇來建立CT26細胞衍生的腫瘤。

植入後3天，及其後4-5週兩週一次，小鼠用以下劑量腹膜內投與：・在0.2 ml的總體積中，500 µg的V4-C26 hIgG4 (HMBD-002) (等效於25 mg/kg)。・在0.2 ml的總體積中，200 µg的抗-小鼠PD-1抗體(等效於10 mg/kg)。・在0.2 ml的總體積中，500 µg的V4-C26 hIgG4 + 200 µg的抗-小鼠PD-1抗體。

在治療過程中量測腫瘤體積。

結果顯示於圖83B中。抗-VISTA抗體V4-C26 hIgG4 (HMBD-002)與抗-PD-1之組合療法會抑制腫瘤生長達到比單獨的任一製劑更大的程度。 17.10 實施例17之材料及方法 ELISA 結合檢定法

用稀釋於PBS之1 µg/ml之目標抗原，於4°C塗覆384孔平盤歷時16 hr。在室溫下用Tris緩衝生理食鹽水(TBS)中之1% BSA阻斷1小時之後，V4-C26-hIgG4或人類IgG4同型對照(Biolegend #403702)使用以中性pH 7的1x PBS所製作之1% BSA系列地稀釋且添加至平盤中。為了測試測試物件在不同pH下之結合，使用7.5、6.5、6、5.5或5之pH的1x PBS製作1% BSA。在室溫下培育1 hr後，用含有0.05% Tween 20之TBS (TBS-T)清洗平盤三次，且與1:7000之山羊抗-人類IgG Fc-HRP (Abcam #ab97225)在室溫下培育1小時。在清洗之後，平盤用比色偵測受質3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(Turbo-TMB；Pierce)顯色10 min。用2M H2SO4來停止反應，以及在一BioTek Synergy HT上量測450 nm的OD。 流式細胞分析術及分析

藉由流式細胞分析術量測結合PBMC或經工程改造以表現VISTA之HEK293T細胞上之細胞表面所表現之VISTA的V4-C26 hIgG4。使用脂染胺2000 (lipofectamine 2000) (ThermoFisher Scientific #11668019)遵循製造商規程使野生型HEK293T細胞以編碼人類、NHP、大鼠及小鼠VISTA之VISTA cDNA表現質體(Sinobiological)暫時轉染。來自人類、NHP、大鼠及小鼠之PBMC係購自商業供應商(Accgren)且在染色之前用Fc阻斷物(人類TruStain FcX，Biolegend #422302；小鼠TruStain Fcx，Biolegend #101320；抗-大鼠CD32，BD Pharmingen #550270；及恆河猴FcR結合抑制劑，ThermoFisher #14-9165-42)來阻斷。V4-C26 hIgG4或同型對照抗體根據製造商規程與APC軛接。

針對FACS，細胞與不同濃度之帶有APC標籤的V4-C26 hIgG4或同型對照如圖中所指示於4℃下培育40 min。為識別骨髓細胞，將PBMC進一步與CD45 FITC及CD11b PE一起培育。再次清洗細胞且再懸浮於200 µL之FACS流動緩衝劑(PBS與5mM EDTA)中，用於使用MACSQuant 10 (Miltenyi)之流式細胞量測術分析。取得後，使用Flowlogic軟體來分析所有的原始資料。使用前與側散射來圈選細胞，並且判定陽性細胞的百分比。 免疫組織化學法

包含福馬林固定石蠟包埋(FFPE)組織之TNBC、NSCLC、間皮瘤及肝臟癌患者的組織微陣列(TMA) (USBiomax，目錄號#BR1301、#LC1401、#MS481d、#LV8013a)係針對VISTA (4M2-C12-mIgG2a；稀釋1:800)及VSIG3 (LS Biosciences #LS-C338858；稀釋1:300)染色，且正常TMA (USBiomax，目錄號#FDA999q)亦針對VISTA染色(4M2-C12-mIgG2a)。將載玻片在乾燥器中乾燥15 min ^-1hr且置放在EnVision™ FLEX目標復原溶液、低pH (Dako，K8005/DM829)中，在97℃下歷時20 min以供抗原修復。在轉移至Omnis儀器供染色之前，將載玻片置放在Envision Flex緩衝劑(1X)中10分鐘。將載玻片染色並以Envision Flex+偵測系統(套組K800)使用基於該套組的規程於Dako Link Omnis上複染，接著沖洗、脫水及蓋上載玻片。TMA藉由光學顯微鏡法半定量地評分以測定在正常及腫瘤組織中之VISTA及VSIG3蛋白質表現的相對染色強度(0-3+強度標度)、分佈及定位。 VISTA-VSIG3 之V4-C26 hIgG4 阻斷後的細胞激素釋放

PBMC培養於塗覆有αCD3單株抗體(eBioscience #16-0037)及VSIG3-Fc (R&D #9229-VS)比率為1:0 (2 µg/ml αCD3單獨)或1:2 (2 µg/ml αCD3: 4 µg/ml VSIG3-Fc)之平盤中。接著以指示濃度之V4-C26 hIgG4、VSTB112或IgG4同型對照(Biolegend #403702)處理細胞並在37℃下培育平盤。24 hr後收穫上清液，且使用人類IFN-γ未經塗佈之ELISA套組(Invitrogen #88-7316)量測IFN-γ位準。 MDSC-T 細胞共培養

使用典型單核球單離套組(Miltenyi，德國，#130-117-337)經由負富集從新鮮人類PBMC單離單核球。隨後，單核球被分化成MDSC，係在GM-CSF (10 ng/ml) (PeproTech，USA，#300-03)及IL-6 (10 ng/ml) (PeproTech，USA，#200-06)存在下歷時7天。MDSC經收穫且與新鮮單離之自體PBMC在人類抗-CD3抗體(OKT3，1 µg/ml) (BioLegend，USA，#317326)存在下、及在測試物件存在或不存在下，以3:1比率一起培養，如所指示者。96 hr後收穫上清液，且經由ELISA (ThermoFisher，USA，#88-7316-88)判定IFN-γ位準。 嗜中性球趨化性檢定法

嗜中性球係使用MACSxpress®全血嗜中性球單離套組(Miltenyi #130-104-434)從全血單離且與指示濃度之V4-C26 hIgG4、VSTB112或同型對照於37℃培育60 min。培育後，將嗜中性球播種於24孔穿孔平盤(Thermo Fisher #1406287)之上部腔室(300 µl/孔)中，且將具有或不具50 ng/ml之C5a的培養基(Acro Biosystem #C5A-H5116)添加至下部腔室(600 µl)。細胞培育在穿孔中於37℃1 hr，之後使用CellTiter-Glo (Promega #G7571)量測下部腔室中之遷移嗜中性球的ATP位準，且藉由Victor Nova (Perkin Elmer)量測發光。 人類同種異體混合淋巴球反應(MLR)

新鮮PBMC是使用Lymphoprep (Stemcell Technologies, #07861)從人類全血(共5個供體)單離，遵循製造商規程且以5×106個細胞/ml用CellGenix GMP DC培養基再懸浮。將50 µl的DC培養基添加至96孔圓底平盤的每一孔中，接著是來自2個供體的50 µl的PBMC，以1:1比率，在50 µl的30、10及1 µg/mL之V4-C26 hIgG4或同型對照hIgG4 (InvivoGen #bgal-mab114)存在下。使用共10個供體對。在37℃下培育細胞96 hr。在96 hr時收集上清液，且藉由Luminex (R&D #LXSAHM-04/07)偵測上清液細胞激素位準。藉由自測試樣本減去同型對照值來將資料對hIg4同型對照正規化。 動物實驗

Balb/c小鼠係購自InVivos或Jackson Labs，且經移植CD34之人源化HiMice小鼠係購自Invivocue。所有動物在經AALAC認可的設施中安置於無特定病原條件下且遵照實驗動物照護及使用委員會的指導方針來對待。 活體內腫瘤生長檢定法

小鼠在右脇被皮下植入腫瘤細胞(針對CT26係10 ⁵個、針對HCT15係10 ⁶個、針對A549係5x10 ⁶個)，或針對同位乳房模型將腫瘤細胞植入至乳腺脂肪墊中(2x10 ⁴個4T1細胞)。植入後3-6天，一週二次以測試物件之所指示劑量及間隔治療小鼠。針對所有皮下模型係腹膜內投與治療，且針對同位模型係腫瘤內投與治療。使用卡尺量測腫瘤體積，如Thakkar et al., Mol Cancer Ther (2020) 19: 490–501中所述。 統計分析

使用GraphPad Prism施行統計分析。用兩個變數(劑量調定)所獲取之資料係以二因子ANOVA、接著杜凱氏多重比較檢定來進行分析。針對二群組之間的比較，施行一未配對t-檢定。∗p ≤ 0.05、∗∗p ≤ 0.01、∗∗∗p ≤ 0.001、∗∗∗∗p ≤ 0.0001的值被認為是顯著的。 跨物種抗體結合親和力量測

V4-C26 hIgG4之親和力係藉由使用Biacore之表面電漿子共振(SPR)所判定。使用CM5感測器晶片(Cytiva #29104988)施行檢定法。Biacore HIS捕捉套組(GE Healthcare #28-9950-56)被運用來固定化人類、NHP、大鼠及小鼠VISTA-HIS晶片表面上或被單獨留下供背景信號訂正。簡而言之，以5 µl/min之流率捕捉VISTA-HIS歷時60 s之接觸時間。V4-C26 hIgG4被流入兩倍系列稀釋中：對於人類、NHP及大鼠VISTA為50E ^-9M至390E ^-12，且對於小鼠VISTA為12.5 ^E-9M至390E ^-12M，以30 µl/min之流率在RT下歷時90 sec締合及3000 sec解離。使用Biacore T200軟體分析所獲得的感應圖譜，且藉由擬合至1:1結合動力學模型來計算KD。 抗體依賴型細胞的細胞毒性及補體依賴型細胞毒性

96孔平盤係用PBS中的1 µg/孔之人類C1q蛋白或0.5 ug/孔之人類CD16a在4℃下塗覆。培育過夜後，將平盤清洗三次，且在室溫下用阻斷緩衝劑阻斷1 hr。將平盤與V4-C26 hIgG4或同型對照在室溫下培育1 hr，並與1:7000稀釋之HRP-軛接的抗-人類Fc抗體在室溫下培育1 h。使用如上文就ELISA所述之標準規程使比色反應顯色。 sc-RNA-seq

為了判定VISTA轉錄本最高度表現的細胞類型，從10X Genomics網站擷取可公開取得之68k PBMC資料集(Stuart et al., Biorxiv (2018), 460147)且使用Seurat v3.2 (Stuart et al., Cell (2019) 177: 1888-1902.e21)處理。具有超過6%粒線體轉錄本或少於200個不同轉錄本之細胞被排除。使用內定參數來正規化資料，並使用具20,000個特徵的VST方法進行可變特徵識別。隨後縮放資料，且接著以15個主要組分來運行一PCA分解。UMAP投影係使用內定參數及以0.8之解析度運行之FindClusters功能來進行。為了標記叢集，使用來自SeuratData包的PBMC3k資料集(Hafemeister and Satija, Biorxiv (2019), 576827)作參照以映射細胞身分。 批量RNA-seq

從治療後96小時的MLR檢定法每條件(V4-C26、V9、抗-PD1及IgG4)取出10個樣本。這些係使用NEBNext Ultra II RNA庫製備套組(NEB #E7770S)製備供用於RNA-seq，並在v1.5 chemistry之Illumina NovaSeq S4流動槽(flowcell)上運行。經轉接者修整及過濾的資料係使用FASTQC及MultiQC來評鑑(Ewels et al., Bioinformatics (2016) 32: 3047-3048)，且讀數係使用Kallisto v0.46 (Bray et al., Nat Biotechnol (2016) 34: 525-527)與GRC37人類參考轉錄體比對。資料使用TxImport (Soneson et al., F1000research (2015) 4: 1521)輸入至R。經正規化之基因計數及基因位準差異表現係使用DESeq2 (Love et al., Genome Biol (2014) 15: 550)來獲得。途徑活性係使用SPEED2 (Rydenfelt et al., Nucleic Acids Res (2020) 48: W307-W312)包使用內定參數來估算。 CT26 腫瘤剖析

藉由在37℃下用0.1 mg/ml的DNase I (Sigma，USA，#11284932001)及1 mg/ml的膠原蛋白酶(Sigma，USA，#1108866001)消化精細切割之腫瘤組織歷時45分鐘來產生單一細胞懸浮液。Fc受體係用人類TruStain FcX (BioLegend，USA，#422302)來阻斷。細胞經螢光團軛接之抗體所染色供用於免疫細胞標誌(表S4)，清洗並再懸浮於緩衝劑(1xPBS + 0.5% BSA + 1mM EDTA)中。免疫細胞族群之頻率係經由流式細胞分析術來判定。資料係在MACSQuant 10 (Milteny Biotec，德國，#130-096-343)上獲取且使用FlowLogic軟體V7來分析。 CT26 抗原回憶檢定法

單一細胞腫瘤懸浮液係如先前所述來產生。根據製造商規程，使用CD45微珠(Milteny Biotec，德國，#130-110-618)或CD4/CD8微珠(Milteny Biotec，德國，#130-116-480)自細胞懸浮液富集TIL (CD45+)或T細胞(CD4+/CD8+)。將24 hr前播種的CT26細胞(T：目標細胞)與來自腫瘤之富集TIL或T細胞(E：作用者細胞)以如所指示之作用細胞對目標(E:T)比率共培養72小時。所有條件係均三複本。藉由CellTiter Glo (Promega，USA，#G7571)判定細胞生存力。藉由ELISA (Invitrogen，USA，#BMS606)判定上清液中的IFN-γ位準。溶解係計算為：溶解% = ((T - E:T)/T)*100。 藥物動力學

在雄性及雌性Balb/c小鼠、史道二氏大鼠以及食蟹獼猴中評鑑V4-C26 hIgG4之單一劑量藥物動力學剖析。V4-C26 hIgG4係以所指示濃度的單一劑量，經由腹膜內注射於小鼠、IV推注輸注至大鼠之尾靜脈中、以及IV推注輸注至獼猴之周邊靜脈中來投與。在用劑後的不同時間點採血，並藉由ELISA來定量血清內的抗體濃度。藥物動力學分析的參數係衍生自非隔間模型：最大濃度(Cmax)、AUC (0-336hr)、AUC (0-無限大)、半生期(t½)、清除率(CL)、穩態分佈體積(Vss)。實施例18：抗體調配物開發

調配物開發係針對包含V4-C26變異區、人類IgG4重鏈恆定區及κ輕鏈、且其包含有SEQ ID NO：331之重鏈及SEQ ID NO：317之輕鏈的一抗原結合分子施行。抗原結合分子係由2021年5月7日所寄存之細胞株的一細胞生產，如ATCC專利寄存號PTA-127063。此抗原結合分子在此實施例中可稱為「HMDB-002」。 18.1 調配物

在不同的液體調配物中評鑑HMDB-002的產品穩定性。調配物開發包括在高溫及2-8℃下之1個月穩定性、凍-融應力研究及高濃度應力研究。分析測試係經設計以識別就大小變異、電荷變異及結合效力顯示為最佳分子穩定性的調配物。

經純化之材料(MabSelect SuRe LX (LX；3L生物反應器運行1)，進一步藉由Superdex及Capto Q純化)係使用Slide-A-Lyzer、20k MWCO (Cat#66030，Thermo Scientific)對不同調配物緩衝劑透析。首先將樣本過度濃縮超過目標濃度(大約1-1.25倍)然後藉由用調配物緩衝劑稀釋來調整回目標濃度。

將經加工樣本過濾通過0.1 um無菌過濾器(Cat#16553，Sartorius)並以1mL填充體積，分配在一生物安全櫃中裝進1.8 mL冷凍保存小瓶(Cat#NNC#368632，Thermo Scientific)中。

受測之調配物緩衝劑具有下列組成：

調配物ID	pH	緩衝劑系統 (20 mM)	蔗糖 (%，w/v)	NaCl (mM)	聚山梨醇酯20 (%)	聚山梨醇酯80 (%)
F1	5.5	組胺酸	8	0	0	0.02
F2	5.8	組胺酸	8	0	0	0.02
F3	5.8	組胺酸	4	0	0	0.02
F4	5.8	組胺酸	2	0	0	0.02
F5	6.3	組胺酸	8	0	0	0.02
F6	5.8	組胺酸	8	0	0.02	0
F7	5.5	鈉乙酸鹽	8	0	0	0.02
F8	5.5	鈉琥珀酸鹽	8	0	0	0.02
F9	5.8	組胺酸	0	0	0	0.02
F10	5.8	組胺酸	0	150	0	0

18.2 逆境條件

十個調配物經受高溫、高濃度及凍-融應力。針對每一調配物共製備4個小瓶(包括兩種小瓶大小：4 mL/小瓶供用於高濃度；1 mL/小瓶供用於剩餘條件)。 10個調配物以1種濃度(10 mg/mL)、3種逆境條件與1個對照組在2-8℃下進行測試，其中經歷一界定時段的穩定性測試係針對儲存條件40°C及2-8°C進行。

調配物逆境條件：凍融：施行六個-80°C下冷凍且在室溫下解凍的循環。在每一循環之間，將小瓶保持在-80℃下供用於深凍，直至解凍。在冷凍或解凍期間，每一小瓶彼此相隔大約5 cm。自小瓶取出大約80 µL之一小等分並儲存在2-8℃下直至分析，在取樣10個調配物完成後將小瓶返回至-80℃。・高溫：來自每一調配物之一小瓶在預定時間點儲存於溫度設定點為40℃的(Infors HT Multitron)培育器中。將大約150 µL放入生物安全櫃內以防止污染。隨後將等分之樣本儲存在2-8℃下直至分析，剩餘的小瓶返回至培育器。・高濃度：樣本用20K Da MWCO Amicon蛋白質濃縮器(Cat#UFC905096，Millipore)在4000 g、4℃下於桌上型離心機中濃縮。每20分鐘監測濃度，直至超過每個靶定濃度。接著將樣本濃度調整回至其最接近目標濃度。

等分樣本藉由目視檢查分析沉澱、藉由具微電極之pH計分析pH、藉由Nanodrop Lite 2000分析濃度、藉由HLPC-SEC分析聚集、藉由HPLC-CEX分析電荷變異、藉由抗原結合ELISA分析效力及藉由Nova Flex分析滲透壓。逆境條件及分析顯示於下文中。 18.3 穩定性研究

10個調配物中在10 mg/mL下之HMBD-002的穩定性分別就在40°C ± 3°C下一個月及在5°C ± 3°C下6個月的總週期予以評鑑。樣本一旦自下游程序釋放則以t=0受分析。在第10、20、30、60、90、180天之時間點，使用本文所述之檢定法來分析樣本。 18.4 分析技術

・藉由A280之蛋白質含量：藉由UV光吸光度之量測判定蛋白質含量，係基於蛋白質中所存在之色胺酸、酪胺酸及半胱胺酸之豐度之特定特性。HMBD-002理論的消光係數為1.64 mL·mg-1·cm-1。・目視檢查：檢查樣本之可見粒子及沉澱。・藉由HPLC-SEC之純度及聚集體含量：用高效液相層析法來量測抗體之純度，其係基於具重大修改的HMBD-002 SEC SOP v1.0，該修改係改變分析欄為XBridge BEH200 SEC 3.5µ 7.8x300mm欄(Cat#176003596，Waters)。・藉由HPLC-CEX之電荷異質性：藉由在高效液相層析法系統上之離子交換來施行抗體之帶電分佈，基於HMBD-002 CEX SOP v1.0。・pH：pH量測係在pH計用可購得的標準溶液來在pH 7.0、pH 4.0及pH 10.0進行3點校準之後施行。・滲透壓：滲透壓係藉由Nova Flex量測並使用凍結點下降方法判定。・結合ELISA：使用HMBD-002-V4C26 ELISA (Antigen Binding) SOP v1.0。 18.5 結果

高溫度穩定性研究之結果顯示於圖76A至76?中。

圖76A顯示：針對所有調配物，發現蛋白質濃縮在40℃± 3℃下穩定達1個月。

圖76B顯示針對所有調配物，發現pH波動低於0.3，其在長期儲存期間通常係為可接受的。調配物F5、F6及F9在第10天的3個量測點(由黑色圓點突顯)被視為離群值，因為從第20天和第30天取得的量測值均顯示出對目標pH之變化更小很多。

圖76C顯示HPLC-SEC聚集。在放入40℃腔室之前，蛋白質樣本具有大約5.5%之聚集。雖然在第20天的聚集量測值高於第30天的聚集量測值，但是有一清楚的趨勢為，與其他的調配物相比，F5-F8及F10在高溫下更容易在長期儲存期間形成聚集體。圖76D顯示調配物F1中之HMBD-002在第30天於40℃下之代表性結果。

圖76E顯示，酸性變異體通常而言顯示略微增加之趨勢，主要的同功異型體在54%-60%之間的範圍內波動，如由HPLC-CEX所量測。由於抗體序列顯示對脫醯胺、異構化、醣化、消旋化、琥珀醯亞胺形成、非所要醣基化之低傾向(liability)，因此有可能在所有調配物中保留藥物物質之化學穩定性。聚集峰，其一般對應於HMBD-002藥物物質之鹼性-1峰中的部分，並未顯示進一步的增加，確認此等10個調配物中之共同因素促成防止聚集形成(如在HPLC-SEC資料中所觀察)。

圖76F顯示調配物F1中HMBD-002在第30天於40℃下之代表性HPLC-CEX結果，六個酸性峰、單個主要同功異型峰及五個鹼性峰良好地分散在大約8分鐘之分析窗口中，這表示方法敏感到足以展現穩定性。

圖76G顯示，第20天於40℃下的所有調配物中，HMBD-002對其人類目標(VISTA)之親和力增加。在第30天，親和力進一步增加至最大1.65倍(F2)。下文提供來自抗原結合ELISA研究之EC50資料。

圖76H顯示，所有調配物對於40℃下儲存1個月顯示最小滲透壓變化。

當以高濃度調配HMBD-002時，目視檢查顯露HMBD-002顯示達200 mg/mL濃度的8個調配物中有良好溶解度，顯示於下文。但是，調配物F5及F9不支援超過100 mg/mL的良好溶解度。

圖77顯示調配物F1、F2、F3、F4及F10在調配成高濃度方面顯示良好潛力，且可溶性聚集改變最小(藉由HPLC-SEC量測)。針對F5及F9，不溶性聚集係藉由離心來移除，且進一步藉由0.22 µm過濾器過濾，僅分析可溶性部分的HPLC-SEC。

經受凍-融應力之HMBD-002調配物藉由HPLC-SEC分析聚集傾向。圖78顯示HMBD-002在達6個冷凍及解凍循環後在9個調配物顯示有良好穩定性。調配物F10顯示凍-融後的聚集傾向。

下表總結來自穩定性分析之關鍵結果。淡灰色結果指示有利的蛋白質穩定性，而中灰色結果指示不利的蛋白質穩定性。

下表顯示pH電荷變異剖析之評鑑。

圖79顯示調配物F1、F2及F5之pH與總電荷變異的互相關聯性。 18.6 結論

調配物F1、F2、F3及F4於製造期間，在保留關於關鍵品質屬性之分子穩定性方面，顯示出優於其他候選調配物的優異效能。此外，對在40℃下長期儲存期間之pH改變對電荷變異剖析改變之評鑑，指示pH值減少與電荷變異絕對值減少之間有良好互相關聯性。

總體而言，調配物F1 (20 mM組胺酸+8%蔗糖+0.02%聚山梨醇酯80，pH 5.5)顯示出在所有所測試條件下最佳保留抗體之完整性及穩定性且被選擇為用於臨床材料之前導調配物。另外，考慮到高濃度研究中的相對高之蔗糖位準(8% w/v)及蛋白質穩定性，所獲得用於臨床材料的最終藥物物質應調配為50 mg/mL。 18.7 藥物物質的穩定性

評估在上述調配物F1中以50 mg/mL調配之HMBD-002臨床藥物物質在長期儲存條件(-80℃)、加速儲存條件(5℃)、逆境儲存條件(25℃)下及在6個凍/融條件循環下的穩定性。結果提供如下。

HMBD-002藥物物質在-80℃下：

HMBD-002藥物物質在5℃下：

HMBD-002藥物物質在25℃、60%相對濕度下：

HMBD-002藥物物質經受凍/融條件：

產生之結果證實藥物物質在推薦的儲存條件下保持穩定高達6個月。基於穩定性結果，指定之到期期間將為12個月。 18.8 藥物產品穩定性

評估在上述調配物F1中以50 mg/mL調配之HMBD-002臨床藥物產品在長期儲存條件(-20℃)、加速儲存條件(5℃)、逆境儲存條件(25°C及40℃)下、及在6個凍/融條件循環下的穩定性。結果提供如下。

HMBD-002藥物產品在-20℃下：

HMBD-002藥物產品在5℃、豎直定向下：

HMBD-002藥物產品於5℃、倒置定向下：

HMBD-002藥物產品在25℃、60%相對濕度下：

HMBD-002藥物產品在40℃、75%相對濕度下：

HMBD-002藥物產品經受凍/融條件下：

產生之結果證實藥物產品在推薦的儲存條件下保持穩定高達6個月。針對每種製劑/條件亦在6個月及9個月時間點看到與以上結果相似之結果。到9個月時間點所產生的所有穩定性資料係保留在已建立的規格接受準則內。基於穩定性結果，指定之到期期間將為12個月。實施例19：在患有晚期實性惡性腫瘤之患者中靶向VISTA之單株抗體HMBD-002-V4C26之第1階段研究

於下文中使用時，HMDB-002或HMBD-002-V4C26係指一IgG4人源化單株抗原結合分子，其包含呈人類IgG4/Vκ型式之V4-C26變異區，且其包含有SEQ ID NO：331之重鏈及SEQ ID NO：317之輕鏈。 19.1 介紹

VISTA為B7蛋白質家族之跨膜免疫調節醣蛋白，其作用為負免疫查核點調節劑。其最接近之同源物為PD-L1，其與PD-L1共有24%序列同源性。 ¹VISTA僅略微地與Ig超家族之其他成員有關。 ^1,2

VISTA之最近所識別之晶體結構具有突顯的特徵，其使得VISTA IgV樣折疊在B7家族成員中係獨特的。這些包括存在10個β股(而非典範的9個)、3個α螺旋布置於一β-夾心形成體中以及股C與C'之間形成延伸環的一獨特21-殘基轉折。該晶體結構亦顯示VISTA缺乏IgC域，其存在於已被結晶出之所有其他B7家族蛋白質中。最後，VISTA含有2個非典範且守恆的C51/C113二硫化物，其中一者可能將延伸之C-C'環留持於一獨特、凸出的位置，其可在臨床上相關之蛋白質-蛋白質交互作用上扮演一角色。 ³

早期臨床前研究展示，在抗原呈現細胞(APC)上之重組型VISTA處理或VISTA表現係足以阻遏T細胞增殖，其係獨立於PD-1途徑。 ¹另外，多個研究已顯示VISTA在數個臨床前模型中約束自體免疫性，包括乾癬、自體免疫腦炎、狼瘡及移植物抗宿主疾病。 ^1,2,5,6,7,8缺乏VISTA基因之小鼠發展出器官及皮膚自體免疫性，相似於PD-1途徑反常(de-regulation)之表現型。 ^5,9,10,11該等資料指示出VISTA作用來壓制免疫反應，很可能透過對淋巴球及骨髓細胞，尤其是初始T細胞的作用。 ^12,13VISTA係一作用為負免疫查核點調節劑之跨膜醣蛋白。

VISTA主要在骨髓及顆粒球細胞上表現，尤其係MDSC及腫瘤相關聯巨噬細胞(TAM)。亦已報導VISTA在CD4+ T調節細胞、初始T細胞以及一些腫瘤細胞上表現。 ^14,15,16MDSC所作之免疫壓制及VISTA之向上調節已被連結到對實性癌症中及急性骨髓白血病中之抗-細胞毒性T淋巴球相關聯蛋白質4(CTLA4)及抗-PD-1/PD-L1療法的後天抗性。 ^17,18,19已報導VISTA減弱有力地降低MDSC-媒介之CD8 T細胞活性。 ¹⁹另外，已報導VISTA在維持初始T細胞靜止及周邊免疫耐受性上扮演一關鍵角色 ¹⁵。這些細胞上之VISTA之損失會在轉錄及表觀遺傳位準減少初始T細胞之靜止表現型，增強T細胞受體(TCR)及細胞激素途徑活性。

VISTA在初始T細胞上之表現先於其他完善建立之T細胞活化之負查核點調節劑，諸如CTLA4及PD-1。 ¹³CTLA4在T細胞活化之後在細胞表面上表現且藉由限制共刺激在促發階段抑制T細胞活化。PD-1在促發期間較晚表現且在作用階段抑制T細胞，且VISTA作用為周邊T細胞耐受性之最早查核點調節劑。 ¹³

基於VISTA基因功能與PD-L1途徑之間的相似性，VISTA在腫瘤免疫性中之角色受到更佳理解。初始研究展示，在小鼠中在腫瘤細胞上VISTA過度表現係足以保護抗腫瘤免疫性。 ¹對鼠類VISTA之阻斷抗體接著被開發且利用來展現VISTA阻斷可透過作用於腫瘤微環境(TME)而帶動抗腫瘤免疫性。 ¹⁸阻斷VISTA功能之抗體已顯示與PD-1阻斷有綜效，再次暗示VISTA及PD-1獨立地作用 ¹⁰。已在淋巴瘤、膀胱癌、黑色素瘤、結腸直腸癌、卵巢癌、頭頸部鱗狀細胞癌瘤、及其他惡性腫瘤的臨床前鼠類模型中，展現VISTA阻斷之抗腫瘤反應，指示此作法可具有廣泛利用性。又，包括黑色素瘤、胰臟癌、間皮瘤、NSCLC之人類腫瘤、子宮、乳房及前列腺，係在腫瘤細胞本身或免疫浸潤細胞上表現VISTA。 ^{1,12,14,15,18,19,21-34}基於此組資訊，以此可推斷VISTA可為跨多種人類惡性腫瘤之一可作動目標。

VISTA之生理學相關結合伙伴尚待決定性的判定，但兩項獨立的活體外研究已證實V-Set與免疫球蛋白域含有體3(VSIG3，或 IGSF11)為一伙伴。 ^3,20VSIG3係表現在癌細胞上，經報導於多種惡性腫瘤中有升高表現，包括結腸直腸、肝細胞癌及腸型胃癌 ²⁰。

另外，已顯示VISTA-VSIG3交互作用會抑制T細胞增殖、以及促炎性細胞激素及趨化激素釋放。 ²⁰亦已報導VISTA在一酸性pH下結合其自身 ⁹、富含白胺酸重複序列及免疫球蛋白樣域1 (LRIG1) ³⁵、及P-選擇素醣蛋白-1 (PSGL-1)。 ^4,37

基於免疫查核點抑制劑作為針對多種實性腫瘤之廣泛活性製劑的概念，近來已將努力聚焦於將VISTA-靶向療法轉化至臨床領域。存在3種臨床階段研究性治療，其靶向VISTA但運用與HMBD-002不同的藥物機制。奧弗替利單抗(Onvatilimab) (CI-8993)，一具IgG1同型之第1階段之臨床階段抗-VISTA抗體，預期會造成VISTA+細胞之耗乏，包括正常造血細胞。此化合物當前正由Curis, Inc.與Immunext合作開發。2016年，Janssen Research & Development與Immunext合作，開始一項非隨機、開放標記的第1階段研究，以評鑑奧弗替利單抗的安全性。 ³⁹此研究入選12名患者，然後計畫暫停，直到2020年6月，當時Curis, Inc.重新開始一項第1階段研究，以評鑑奧弗替利單抗的安全性和可耐受性。 ⁴⁰可公開取得的資訊顯示，患者召募正在進行中。

2020年11月，Pierre Fabre開始一項關於抗-VISTA mAb，W0180 (亦為一IgG1同型)的第1階段臨床研究 ⁴¹，其在患有局部晚期或轉移性實性腫瘤、對標準療法有難治性之患者中，作為一單一療法以及與派立珠單抗組合。此研究中之召募正在進行中。

靶向VISTA之另一種臨床階段治療，CA-170係一經報導將結合PD-L1及VISTA的小分子。 ³⁴作為有多標靶拮抗作用之口服小分子，此化合物與HMBD-002相比具有不同作用機制，其僅對VISTA蛋白具有高特異性。CA-170最初由Aurigen發現，並由Curis, Inc開發，直到開發中斷為止。報導於2019年之ACS Medicinal Chemistry Letters中的一項第三方研究無法再現化合物對VISTA之結合，提出化合物之替代作用機制。 ³⁵在一項由Curis, Inc進行的第1階段劑量遞增研究中 ⁴²，藥物於大部分免疫相關不良事件有良好的耐受性。 ³⁶

綜以觀之，在靶向VISTA上人類經驗有限，且當前作法與HMBD-002相比代表實質上不同之作用機制。 19.2 研究理論基礎 19.2.1 研究設計之理論基礎

對於新療法有臨床上未滿足的需求，且VISTA由於其強健的抑制活性而作為一具吸引力之免疫療法目標。靶向VISTA之理論基礎係由臨床前研究之結果進一步增強，指示用抗-PD-1 mAb之先前治療可能使得VISTA成為更重要的目標。對比於其他抗-VISTA mAb，HMBD-002為一IgG4建構物且因此不被預期在對T細胞結合之後誘發ADCC，其為在其他IgG1抗體所觀察到之CRS及/或相關神經毒性的推定原因。在同基因型VISTA-表現腫瘤模型中，HMBD-002治療極度抑制腫瘤生長及/或導致腫瘤消退。

此HMBD-002之FIH研究的第一部分(第1部分；劑量遞增)係設計來評估HMBD-002之安全性及可耐受性，且推薦第2部分之劑量(劑量擴增)及後續疾病導向之第2階段研究。該研究亦在患有實性惡性腫瘤之患者中尋求特徵化HMBD-002之PK行為及偵測HMBD-002 ADA，以及尋求抗癌活性之初步證據，其係在具高VISTA表現發生率的選定惡性腫瘤方面有一擴增，包括晚期三重陰性乳癌(TNBC)及非小細胞肺癌(NSCLC)及各種其他癌症。此研究亦將探究HMBD-002對腫瘤中及治療前與後取樣的血液中之作用免疫細胞的效應。

包括活體外可用之藥理活性劑量(PAD)、經模型化及預期之受體佔據(RO)及毒理學資料的一整合型資料驅動作法已被使用來識別及支持適當FIH起始劑量。提議FIH起始劑量為大約20 mg (~0.3 mg/kg)而意欲的「測試」劑量為33%或7 mg (0.1 mg/kg)。預期測試劑量分別在雌性及雄性人類中得到2.2 µg/mL的最大濃度(C _max)與16.4至18.3%之間的受體佔據。

起始劑量係基於PAD，其判定係使用27.2 µg/mL之平均血清濃度(獲得自每週兩次用5 mg/kg的最低最小有效劑量治療之同基因型荷瘤小鼠的PK資料，參見實施例19.2.4)、53 mL/天之預測總人類清除率(CL) (使用來自GLP毒理學研究之食蟹獼猴參數之異速縮放(allometric scaling)計算)及為1之假定的生物可用度，當藥物將經靜脈內遞送時。PAD作法支持大約10 mg (0.17 mg/kg)的起始劑量。

起始劑量亦基於功能性同種異體混合淋巴球反應(MLR)混合檢定法中所測試的1 ug/mL之最低濃度，其中與同型對照相比，觀察到最少至無的細胞激素改變。同種異體MLR檢定法使用10對的單一供體來源之周邊血液單核細胞(PBMC)，其等被混合，接著用抗體HMBD-002或hIgG4同型對照處理。在96 hr時HMBD-002誘發在IFN-γ、TNF-α及IL-17A之位準上的顯著劑量依賴性增加，同時在IL-4、IL-10及IL-13 (Th2細胞激素)或IL-6之位準上相比於同型對照無顯著改變。預期(異速縮放)的人類中心分佈體積為3.52 L，且使用1 ug/mL作為預期C _max，表明起始劑量為3.5 mg (~0.05 mg/kg)。

提議劑量亦由1個月IV大鼠及獼猴重複劑量毒性研究所支持。與大約16.7 mg/kg的所推斷之人類等效劑量(HED)相比，相對於獼猴及大鼠分別在100 mg/kg的NOAEL/HNSTD及NOAEL/STD10，所提議之FIH起始劑量係預期可提供顯著(167倍)安全界限。

20 mg的所提議之FIH起始劑量連同7 mg (測試)劑量將確保充分評估HMBD-002在人類中之PK、PD、安全性及功效。劑量遞增階段之組群1中之所有患者，在第1天將接受33%之意欲劑量位準作為「測試」劑量(例如，在組群1之循環1的第1天為7 mg)，而所有後續投與劑量皆如意欲組群劑量(例如，在第8天及第15天[循環1]為20 mg，在第1、8天及15天[循環2+]亦然)。 19.2.2 臨床適應症之理論基礎

此為一項第1期、首次於人類(FIH)、兩階段(第1部分：劑量遞增；及第2部分：劑量擴增)研究，其評鑑患有晚期實性腫瘤(亦即，局部晚期及不可切除，或轉移性)之患者中多個靜脈內(IV)投與HMBD-002之用劑及時程。

基於VISTA在人類癌症中之表現與其在癌症免疫性中之角色(例如作為腫瘤微環境內免疫壓制性因子)間的平行性質，已選擇兩種優先適應症用於早期臨床階段試驗：三重陰性乳癌(TNBC)及非小細胞肺癌(NSCLC)。基於此類型之癌症中未滿足的需求及VISTA的廣泛表現，TNBC已識別為HMBD-002之臨床研究的關鍵癌症類型。 ^35,39現行技藝之TNBC治療係阿替珠單抗與化學療法之經許可組合，其係適用於患有具表現PD-L1之腫瘤的局部或轉移性癌症之的患者。然而，患有TNBC之患者中僅40%具有表現PD-L1之惡性腫瘤，剩下大部分晚期TNBC患者無法進行此選項。 ⁴⁰

對超過900名患有侵襲性管癌瘤之患者的一IHC研究揭示，在~30%的案例中免疫細胞上有VISTA之高位準表現。 ³⁹在8%案例中，VISTA表現於癌細胞本身上。另外，在乳癌之一些子集中VISTA之表現係富集的。發現ER-、PR-及HER2+乳癌比表現ER+及/或PR+之乳癌更頻繁地表現VISTA。具有VISTA表現最大富集之子集為TNBC，其中大於45%之患者經評分為患有VISTA-陽性癌症。 ³⁹在一項分開的研究中，20%之TNBC案例在癌細胞與浸潤免疫細胞上顯示中至高的VISTA蛋白染色強度。 ³⁵應注意，所有來自轉移所取樣的TNBC表現出均一的VISTA高位準。 ³⁵Hummingbird對TNBC組織微陣列之內部分析已顯示，在經分析之119個核心中，89%表現VISTA，且其中50%顯示中至高的染色強度。鑒於VISTA之免疫調節角色的證據，以及在TNBC患者樣本(尤其是轉移性TNBC)中升高之VISTA位準的證據，其為合理的優先適應症。

相似地，在NSCLC中，免疫查核點抑制劑，諸如mAbs至CTLA-4及PD-1/PD-L1，已展現出穩健的抗腫瘤活性及臨床效益；然而，仍然有顯著改善的空間，其可能需要克服替代的免疫查核點 ⁴¹。已充分記錄NSCLC中的高位準之VISTA表現。在一項對636個經切除之NSCLC腫瘤樣本的研究中，在99%案例中偵測到VISTA蛋白(主要在基質細胞中)。 ²⁷檢查腫瘤免疫浸潤物中之空間型樣，VISTA與PD-L1、PD-1、CD8+ T細胞及CD68+巨噬細胞為正關聯。 ²⁷支持此的是，對NSCLC組織微陣列之分析亦顯示：在69個經分析之核心中，85%表現VISTA。已假設VISTA可經由其在MDSC上之表現來促進NSCLC治療抗性，其位準在患有NSCLC之患者的腫瘤及周邊血液中升高，為靶向VISTA之潛在效益添加進一步支持。

在當前首次於人類的研究中，以HMBD-002靶向VISTA可誘發廣泛且穩健的治療活性。此研究將首先聚焦於實性腫瘤晚期及患有TNBC、NSCLC之目標患者，且各種已知會表現VISTA之晚期癌症。合格入選此項FIH研究之潛在患者必須具有惡性實性腫瘤之證據且必須具有晚期疾病，其定義為轉移性或局部晚期且不可切除之癌症。患者必須亦患有其中可用療法不太可能有利地影響及賦予臨床效益之疾病。 19.2.3 HMBD-002之非臨床研究

活體外及活體內藥理學及初步可耐受性研究已經進行，以研究HMBD-002之潛在治療效益及毒理學風險剖析，供用於治療患有VISTA-表現惡性腫瘤之患者。已完成研究以證實HMBD-002對於VISTA之親和力及特異性且以透由配體抑制及細胞激素誘發確立作用機制。這些研究已顯示HMBD-002不對FcγRIII及C1q結合，且證實：在若干鼠類同基因型腫瘤(CDX)模型中，HMBD-002，作為單一療法或與各種查核點抑制劑組合，均具有明顯抗腫瘤活性。

由於HMBD-002之跨物種結合(對臨床前毒理學物種中之VISTA異種同源物有可比配之親和力)所致，已完成在小鼠中之單一劑量PK研究，連同在大鼠及非人類靈長類動物(NHP)中之PK及可耐受性研究。已使用來自這些研究之資料以初步指示安全性且計算供用於此FIH研究之潛在頻率及劑量。 19.2.4 臨床前功效

使用健康供體人類周邊血液單核細胞(PBMC)評鑑活體外人類免疫活化模型中之功效。使用同種異體混合淋巴球反應(MLR)檢定法，其中來自分開之供體之PBMC經成對混合以模型化自我/抗自我免疫反應。HMBD-002被證實可增強促炎性信號之活化，如藉由包括γ干擾素(IFNγ)及腫瘤壞死因子-α (TNFα)之細胞激素釋放所量測。

為了評估HMBD-002之活體內功效，鼠類同基因型腫瘤模型CT26 (結腸癌瘤)及B16/BL6 (黑色素瘤)以HMBD-002作為單一療法且組合一功能性抗-鼠類PD-1 mAb來治療。小鼠係用500 µg (~25 mg/kg)之HMBD-002單獨或者與200 µg (~10 mg/kg)之抗-mPD-1 (RMP1-14)組合來治療。如圖80中所見，在一項CT26單一療法研究中，HMBD-002顯著抑制腫瘤生長且改良存活期(與8隻小鼠中僅1隻具有低於200 mm ³之腫瘤體積的載媒組相比，在研究終止時經HMBD-002治療組8隻小鼠中有6隻具有低於200 mm ³之腫瘤體積)。

在B16/BL6模型中，HMBD-002與抗-PD-1治療組合顯著抑制腫瘤生長(與8隻小鼠中僅1隻具有低於200 mm ³之腫瘤體積的載媒組相比，在研究終止時組合治療組8隻小鼠中有7隻具有低於200 mm ³之腫瘤體積)。

為了闡明最小有效劑量的HMBD-002，所以選擇CT26腫瘤模型且用不同劑量的HMBD-002來治療小鼠。如圖81中所見，HMBD-002在100 µg (~5 mg/kg)之劑量下顯示功效，較高劑量亦然。這些結果可用於支持藥理活性起始劑量之計算。 19.2.5 毒理學及藥理學

為支持HMBD-002之臨床評鑑，HMBD-002之毒性係在一系列非臨床活體外檢定法中，以及在史-道二氏大鼠及食蟹獼猴之活體內研究中評估。因為與人類VISTA蛋白序列的同源性以及HMBD-002對大鼠及猴子VISTA之相比於人類的相似結合親和力，選擇大鼠及猴子作為藥理相關物種。

在小鼠中，PK剖析係從在用不同劑量的HMBD-002之荷瘤及非荷瘤小鼠的量測值來判定。圖82A顯示荷瘤小鼠中HMBD-002之PK剖析為非線性的，而非荷瘤小鼠展現線形PK。

非荷瘤小鼠中觀察到接近劑量成比例之暴露，如藉由Cmax及AUCinf輸注所量測。也在荷瘤小鼠的Cmax觀察到此情況，然而荷瘤小鼠的AUCinf於展現稍微大於暴露上之劑量成比例增加。荷瘤小鼠的HMBD-002血清半生期跨劑量計算為29.6至58.6小時，而在無荷瘤小鼠血清半生期為60.9及178小時。

大鼠中，PK剖析係在一項關於HMBD-002以10 mg/kg、30 mg/kg及100 mg/kg之每週劑量持續5劑之研究中，從雄性及雌性史-道二氏大鼠中的量測值來判定。HMBD-002之PK剖析於性別之間沒有差異。圖82B顯示，隨著劑量自10增加至100 mg/kg/劑，系統性暴露在第1天於兩性別及在第29天於雌性中係劑量成比例地增加，而在第29天於雄性中其增加大於劑量成比例。HMBD-002在任何劑量位準下未觀察到明顯的藥物累積。

食蟹獼猴中，PK剖析係在一項關於HMBD-002以10 mg/kg、30 mg/kg及100 mg/kg之每週劑量共5劑之研究中，從雄性及雌性獼猴中的量測值來判定。圖82C顯示HMBD-002之PK剖析於性別之間沒有差異。

由於在第22天時所偵測之抗-藥物抗體(ADA)力價，因此第22天之結果小心解釋。表5中呈現在對雄性及雌性獼猴每週一次以10、30或100 mg/kg/劑IV注射HMBD-002-V4C26共5劑之後的HMBD-002-V4C26之所有PK參數的平均值 ± SD。

由於ADA之存在及其對較低劑量下之暴露之影響，AUC _0-168h在第22天於兩性別中係增加大於劑量成比例。在對雄性及雌性獼猴單次(第1天)或重複(第22天) IV注射HMBD-002-V4C26後，HMBD-002-V4C26的中位數T _1/2值估算為第1天係在59.6與177.3小時之間且在第22天係在7.1與138.0小時之間，這可能係由ADA之影響引起(表1)。T _1/2值針對ADA陽性雄性及雌性在第29天分別估算為35.3及70.6小時(表2)，且針對ADA陰性雄性及雌性在第29天分別係285.1及186.1小時(表3)。

中位數半生期值經估算為在第1天係在59.6與177.3小時之間，且在第22天係在7.1與250小時之間，這可能係由ADA之影響引起。

表1：所有研究動物在多次用劑之後HMBD-002-V4C26之TK參數的總結

在100 mg/kg/劑下未觀察到明顯藥物累積。然而，由於ADA之存在及其對整體暴露之影響，通常而言在10及30 mg/kg/劑下觀察到系統性暴露降低。

C _max及AUC _0-24h及AUC _0-72h已總結於表2中。

表2：ADA陽性研究動物在多次用劑之後HMBD-002-V4C26之TK參數的總結

表3：ADA陰性研究動物在多次用劑後HMBD-002-V4C26之TK參數的總結

隨著劑量從10增加至100 mg/kg/劑，對HMBD-002-V4C26之系統性暴露(AUC _all及/或C _max)在第1天於兩性別中係劑量成比例地增加，但由於ADA之存在及其對以較低劑量暴露之影響，在第22天於兩性別中係增加大於劑量成比例。

在以10、30或100 mg/kg/劑重複IV注射HMBD-002-V4C26之後，在100 mg/kg/劑下之AUC _0-168h未觀察到HMBD-002-V4C26之明顯藥物積聚。然而，由於ADA之存在及其對暴露之影響，通常而言在10及30 mg/kg/劑下觀察到系統性暴露降低(第22天/第1天)。 19.3 試驗目標主要目標：第1 部分- 劑量遞增階段

劑量遞增階段期間之主要目標，係要識別HMBD-002之最大耐受劑量(MTD)或最大測試劑量，及要為後續疾病導向研究推薦劑量(亦即，建議第2期劑量[RP2D])。第2 部分- 劑量擴增階段

擴增階段期間之主要目標，係估算在先前經治療之患有三重陰性乳癌(TNBC)、非小細胞肺癌(NSCLC)及其他VISTA-表現惡性腫瘤的患者中，HMBD-002作為單一療法在RP2D下的抗癌活性。 次要目標：

次要目標為下列：・為了特徵化HMBD-002之藥物動力學(PK)性質。・為了進一步特徵化在MTD或最大測試劑量下HMBD-002的安全性剖析。・為了評鑑抗-HMBD-002抗-藥物抗體(ADA)形成之發生率及持續性，以及其對HMBD-002之PK剖析的影響。 探索性目標：

探索性目標為下列：・為了在治療前、治療期間及治療後之實性惡性腫瘤檢體中評鑑以HMBD-002治療對VISTA及程式性死亡-配體1(PD-L1)受體之表現的效應，且將結果與抗癌活性互相關聯。・為了評鑑HMBD-002對各種免疫學作用細胞之定量及定性效應，包括在血液及腫瘤組織中之骨髓衍生的壓制型細胞(MDSC)及T細胞。 19.4 研究終點

安全性終點包括下列：・劑量限制性毒性(DLT)的發生率係在DLT評估期間根據NCI CTCAE版本5.0來分級；・AE及SAE的性質、頻率及嚴重性；由於毒性之治療中斷；及臨床實驗室異常；・身體檢查及ECG調查結果；・VS量測值；・ECOG表現狀態分數。

劑量探索終點包括MTD或最大測試劑量，及RP2D。

次要終點：

在HMBD-002治療期間在各個時間點評鑑的藥物動力學終點包括下列：・最大血清濃度(C _max)；・血清濃度-時間曲線下方面積(AUC)；・排除半生期(t _½)；・清除率(CL)；・分佈體積(V _d)；・ADA。

HMBD-002之抗腫瘤活性將藉由下列量測(亦參見實施例19.9)：・整體反應率(ORR)根據RECIST v1.1. ³⁷係定義為達成完全反應(CR)或部分反應(PR)之最佳反應的患者比例。反應持續期間(DoR)係定義為從首次滿足PR或CR之量測準則的日期，到首次滿足進行性疾病(PD)之量測準則的日期的時間。 CR期間(DoCR)係定義從首次滿足CR之量測準則的日期，到首次滿足PD之量測準則的日期的時間。・無進程存活期(PFS)係定義為從研究療法開始的日期起，到首次滿足PD之量測準則或因任何原因死亡其中先發生者的日期之時間。・6個月時無進程存活(PFS6)係定義為在研究療法開始之後6個月(26週)時，患者存活且無進程之百分比。・整體存活期(OS)係定義為從研究療法開始的日期到因任何原因死亡的日期之時間。ORR及PFS6之測試將藉由單樣本二項測試進行，其具有15%的1側第I型錯誤率。

PFS、DoR、DoCR及OS之分佈將藉由Kaplan-Meier方法學估算。功效參數將基於經修改之意欲治療群體，其包括已接受任何藥物之至少一完整劑量的所有患者。 19.5 試驗藥物產品

HMBD-002係阻斷VISTA蛋白與其配體之間交互作用的一種人源化IgG4 mAb。VISTA係一種免疫查核點受體，其表現在主要屬於骨髓隔室(亦即骨髓衍生的壓制型細胞)之免疫細胞、以及廣泛多種癌細胞兩者上。

HMBD-002係一mAb，經設計成以高親和力及特異性與人類VISTA結合且阻斷一所預測之反結構(counter-structure)結合位點。目標殘基在人類、小鼠、大鼠及食蟹獼猴之間係守恆的。HMBD-002被設計為具有hIgG4 Fc域以致能FcRn結合且增加循環中抗體半生期。由於IgG4建構物缺少對媒介這些免疫作用功能之FcγRIII及C1q蛋白質的親和力，此設計策略允許HMBD-002可避免抗體依賴型細胞毒性(ADCC)及補體依賴型細胞毒性(CDC)活性。HMBD-002顯示高親和力，針對人類及食蟹獼猴VISTA為Kd ＜1 nM，且對鼠類VISTA有可比配之結合。此外，HMBD-002基於對HEK293表現系統中之其他細胞表面分子及對重組型B7家族成員的結合比較，展示出高度特異性VISTA結合。

HMBD-002已經於各種臨床前模型中測試抗腫瘤功效。在小鼠結腸腺癌的同基因型CT26模型中，此mAb藉由延遲皮下脇植入物的腫瘤生長及增加存活期證實了單一療法抗腫瘤活性。在小鼠黑色素瘤之B16-BL6同基因型模型中，HMBD-002僅在與PD-1阻斷抗體組合時顯示活性，而單獨之PD-1阻斷或VISTA阻斷並不有力。這些結果表明VISTA及PD-1查核點可能在其抑制免疫反應之能力上互補。HMBD-002共治療降低了腫瘤MDSC浸潤，其可為增加抗腫瘤免疫性的一重要手段。此外，組合抗PD-1 mAb、使用活體內同基因型細胞株衍生的結腸直腸癌、淋巴瘤及黑色素瘤模型，HMBD-002比起單獨的抗PD-1療法，實質上增加腫瘤生長抑制。

HMBD-002係作為在含有50 mg/mL之小瓶中意欲用於IV輸注之無菌、單次使用、無防腐劑溶液來供應。HMBD-002經調配在pH 5.5下具20 mM組胺酸、8%(w/v)蔗糖、0.02%(w/v)聚山梨醇酯80 (Tween 80)調配。

最終容器係一4R USP第I型玻璃小瓶且含有4 mL的HMBD-002。

藥物產品之建議儲存條件為-20 ± 5 ℃ (-13至5 °F)避光儲存。已證實HMBD-002與輸注溶液及輸注套件之相容性。研究結果指示HMBD-002與將在臨床位點處使用之輸注溶液及輸注套件相容。 19.6 投與、用劑及劑量方案 19.6.1 整體設計及規劃

計劃性研究、HMBD-002-V4C26-01為第1期、FIH、開放標記、多中心、二階段(劑量遞增及劑量擴增)研究，其評鑑在患有晚期實性惡性腫瘤(亦即，局部晚期且不可切除，或轉移性)且無可用之可賦予臨床效益之合理可能性之治療的患者中多個IV投與HMBD-002之用劑及時程。

HMBD-002係作為單一療法，以60分鐘IV輸注，在一個3週治療循環(21天循環)的第1、8及15天投與。若耐受良好，則HMBD-002之後續輸注可於30分鐘內投與。

研究將以2階段執行：第1部分(劑量遞增)及第2部分(劑量擴增)。在第1部分中，將投與增加中之劑量的HMBD-002以特徵化安全性、可耐受性、PK及PD，並識別最大耐受劑量(MTD)或最大測試劑量，及建議第2階段劑量(RP2D)。

HMBD-002之單一療法起始劑量方案(亦即，組群1、循環1中之劑量方案)係：在第1天為7 mg (33%[測試]劑量)且在第8及15天為20 mg，接著在一個3週循環的第1、8及15天為20 mg。一治療循環持續期間為21天，包含有每週 x 3 以HMBD-002之治療。

若患者同意且耐受治療，且存在潛在臨床效益，則患者可繼續接受研究治療持續達6個循環。研究治療將因不可接受之毒性、PD、由患者退出自願性研究、滿足另一中斷準則或研究終止而中斷。最大循環數目設定為35。

在第1部分(劑量遞增)中，將招募大約25-30名患者且用HBMD-002作為單一療法以標準「3+3」設計進行治療。

在第1部分中確立HMBD-002之MTD及/或RP2D之後(RP2D可與MTD相同，但應反映出在多個循環中可耐受之劑量)、研究之第2部分(劑量擴增)在患有包括晚期TNBC及NSCLC之選定惡性腫瘤之患者中、及在患有各種實性惡性腫瘤之患者中，評鑑HMBD-002的初步抗腫瘤活性。第2部分亦將進一步評鑑HMBD-002之安全性、可耐受性、PK及藥效學。

在第2部分(劑量擴增)中，基於期中Go/No-Go決定，高達190名患者入選於4個疾病導向擴增組群：TNBC (n=15，期中)及NSCLC (n=15，期中)，若期中分析中存在足夠信號，則其每一者可增加至高達35名患者以更精確地估算HMBD-002之抗腫瘤活性。針對經HMBD-002治療之患有其他實性惡性腫瘤的患者，亦將有一額外的擴增組群(每個n=50)。

在研究期間，將藉由DLT、AE及SAE、由於毒性之治療中斷、臨床實驗室異常、身體檢查、ECG調查結果、VS量測值及ECOG表現狀態分數之文件紀錄來評估安全性終點。抗腫瘤活性之評估將主要聚焦在根據RECIST v1.1所定義的分類客觀反應(參見實施例19.9)。 19.6.2 第1部分：劑量遞增

劑量遞增係以單一藥劑HMBD-002開始。在至少2個用單一療法HMBD-002治療之患者組群已受評估且展現必要可耐受性之後，劑量遞增可以HMBD-002每週 x 3開始。

在劑量遞增階段中，HMBD-002將在第一個21天循環之第1、8及15天投與。審查來自一組群中所入選之所有患者的所有安全性資料，以確認是否經歷過任何DLT，並判定是否會發生入選進下個組群。在劑量遞增階段中，患者在DLT評估期間(循環1)必須已接受其所有3次排定HMBD-002劑量(第1、8及15天)，並追蹤直至此週期結束，以符合DLT評估資格，除非該患者經歷導致省略治療的DLT或藥物相關毒性，在此情況下，患者將已是DLT可評估的。

在研究期間，HMBD-002之PK及安全性剖析可指示該製劑按一替代、儘管較不密集之時程投與係更有利，諸如每3週之第1天及第8天的一時程或每3週之第1天的一時程。若將HMBD-002治療時程修改為每3週之第1及8天或每3週之第1天的治療時程，則患者必須在循環1中已接受第1及8天劑量兩者之HMBD-002(每3週之第1天及第8天的時程)，或第1天之單一劑量之HMBD-002(每3週之第1天的時程)，伴隨追蹤直至DLT評估期間結束(循環1之第21天)，以符合DLT評估資格，除非患者經歷DLT或藥物相關毒性導致省略治療。

若DLT需要招募額外患者到一組群中，則在彼等額外患者已完成DLT評估期間後，該組群之所有安全性資料將被審查。基於對資料之評鑑，可決定在此規程中未指定之中間HMBD-002劑量位準下的招募將比指定者更保守，且下個較高的劑量將為中間劑量。

若一組群內至少3名患者中0名或至少6名患者中≤1名經歷DLT，則下個較高劑量組群之招募可能會以安全性審查委員會(SRC)之合意開始。SRC將由至少三名成員組成，包括Hummingbird Bioscience之首席醫療主管或指定人員、醫療監察人員或指定人員、以及研究主持人中至少一者。在決定下個劑量位準組群之劑量遞增前，委員會將審查來自當前組群及先前組群之安全性資料。僅在任何給定組群中每位患者已達到循環1之第21天，且SRC同意可以發生劑量增加後，才可進行劑量遞增。 19.6.3 劑量遞增程序

鑒於會有因HMBD-002之作用機制而有細胞激素釋放症候群(CRS)的可能，及在其他不相關之VISTA mAb下發生CRS，將在HMBD-002之劑量遞增期間採取以下措施：・在組群1中在循環1之第1天投與的第一劑量將為完整劑量之33%的一「步測」或「測試劑量」。針對每一後續劑量位準(例如，「X mg」劑量位準)，所有患者在循環1之第1天將接受劑量之50%作為「步測」或「測試劑量」。患者應在接受他們的第一(「步測」或「測試」)劑量後在臨床上受觀察歷時至少6小時。應在24小時內至診所進行追蹤就診。・針對第一完整劑量(X mg)，一週後，在循環1之第8天，患者在接受治療後應住院治療大約24小時，且應在治療後的48小時(第9天)及72小時(第10天)時，評估作為門診患者。・針對循環1之第15天的第二完整劑量(X mg)，患者應在治療後在臨床上受觀察歷時至少6小時。・針對循環2+期間的所有後續劑量，患者應接受完整劑量且在治療後受觀察歷時至少1小時。・就任何額外劑量輸注，經歷任何等級之神經毒性、第2級CRS/輸注相關反應(IRR)的患者，應在醫院中就症狀消解被適當地監測。經歷第3級CRS/IRR或第3級神經毒性之任何患者，應中斷脫離研究。・若觀察到任何第3級CRS/IRR，則積累至研究的所有其他患者皆將在以HMBD-002治療前之6及12小時以口服或IV接受20 mg之地塞米松。・患者可基於在先前治療期間發生第1-2級發燒、寒顫、肌痛/關節痛及/或相關AE，用下列療前藥物治療：在HMBD-002治療之前的30-60分鐘內，用二苯胺明25-50 mg IV/po及/或乙醯胺酚。若觀察到此等AE為共同的，則可強制要求所有患者採此療前用藥方案。

至少3名患者在單一製劑HMBD-002之評估中，將接受以起始劑量位準(20 mg)之HMBD-002的治療。將利用3+3設計。入選每一新劑量遞增組群之第一名患者必須在積累額外患者進入組群之前完成完整的循環1。在劑量遞增期間，每一新劑量位準中前3名患者必須錯開至少7天來治療。

後面的通用劑量遞增規劃將如下：・在HMBD-002的遞增劑量中，至少3名患者必須以20 mg的起始劑量位準來治療，三名患者中每一者在循環1之第1天接受7 mg的「測試劑量」。・若在一劑量組群中的前3名DLT可評估患者中無一者經歷DLT，則可開始下個較高劑量組群之招募，且每一組群中所有新患者在循環1之第1天接受50%的測試劑量。・若一組群中有單個DLT可評估患者經歷DLT，則將以該劑量位準招募高達共6名安全性可評估患者。若6名患者中不多於1名經歷DLT，則可開始下個較高劑量組群之招募。・若前3名患者中任一者均無DLT或前6名新患者中不多於1例DLT，只有在入選當前劑量組群之最後一名患者完成DLT評估期間時，才能開始下個較高劑量組群之招募。・若在一組群中之前6名患者中任一者發生第二例DLT，則將已超過MTD，且先前之較低劑量位準將視為MTD，前提為DLT在前6名DLT可評估患者中尚未發生多於1例。・循環2之治療可在DLT觀察期間後因毒性或任何其他原因而延期高達21天，在其時之後患者必須中斷治療。・高達15名患者可以MTD (或最大測試劑量，若無經識別之MTD)或低於MTD之劑量(若存在證據提議一更有利的風險/效益剖析)來治療，以提供HMBD-002之安全性、可耐受性、PK及藥效學的進一步特徵化。這些患者將不需要50%測試劑量。

儘管關於劑量遞增的決定將基於來自DLT評估期間之資料的審查來做出，但亦將從所有患者收集安全性資料，且此將被定期審查。任何偵測到之累積毒性可能需要後來的劑量降低、劑量時程改變或其他適當的動作，包括MTD之進一步改進。

在已發生會防止進一步劑量遞增之DLT，且這些DLT係嚴重但不會威脅生命(亦即，持續性第3級發燒、不適)的情況下，可考慮重新評鑑特定劑量組群，在與醫療監察人員討論後，伴隨初始HMBD-002療法，共同投與適當支援性照護劑(包括但不限於造血生長因子、皮質類固醇、抗憂鬱劑)。

HMBD-002之劑量修改在該研究之劑量遞增階段的循環1(DLT評估期間)期間是不容許的。若在一減少之劑量已在劑量遞增過程期間展現是安全的，且是在與醫療監察人員討論後，則在循環1經歷DLT的患者可以該劑量繼續該研究。該討論將由醫療監察人員及研究協調員來記錄。在DLT評估期間後，劑量可因為特定毒性及/或實驗室異常而保持或被修改，於循環2+中針對參與劑量遞增階段的患者在，以及於所有循環中針對參與劑量擴增階段的患者。

在額外患者積累進入組群之前，劑量遞增階段期間每一新組群中前三名患者之每一者的治療必須錯開7天。劑量遞增將根據表4呈現的簡化概要而發生。

表4：劑量遞增概要

若	則
在DLT評估期間中在劑量位準X下0/3名患者無DLT ≤1/6名患者有DLT	遞增至劑量位準X+1
1/3名患者有DLT	在劑量位準X下評鑑6名患者
≥2/6名患者有DLT	劑量位準X-1為MTD ^a

縮寫：DLT，劑量限制毒性；MTD，最大耐受劑量 ^a若不多於1名患者經歷DLT，此劑量將被視為MTD，前提為至少6名新患者已接受此劑量位準之治療且為DLT可評估的。該劑量位準將被定義為在循環1之第1天為50%測試劑量(50% X)，而所有其他劑量係在完整劑量(X)下。 19.6.4 適用於HMBD-002之劑量遞增

關於HMBD-002之劑量遞增，基於來自優良實驗室操作(GLP)毒理學研究之結果，組群1患者將以在第一個21天循環(循環1)的第1天為7 mg的起始劑量且在第8及15天為20 mg接受HMBD-002。20 mg之劑量將在所有後續循環之第1、8及15天投與。用於下個計劃組群之HMBD-002的最大劑量係取決於來自當前組群之安全性結果，如表5中所呈現。

表5：超越起始劑量之最大劑量

若	則
0名患者在劑量位準X (≤80 mg)下沒有＞第1級之AE ^a	下個組群將接受≤ 3.0 x當前劑量的劑量位準
0名患者在劑量位準X (＞80 mg)下沒有＞第1級之AE ^a	下個組群將接受≤ 2.0 x當前劑量的劑量位準
≥1名患者經歷第2級非DLT之AE (≤80 mg)	下個組群將接受≤ 2.0 x當前劑量的劑量位準
≥1名患者經歷第2級非DLT之AE (＞80 mg)	下個組群將接受≤ 1.5 x當前劑量的劑量位準
≥1患者經歷≥第3級非DLT	下個組群將接受≤ 1.5 x當前劑量的劑量位準
6名患者中之1名經歷DLT	下個組群將接受≤ 1.33 x當前劑量的劑量位準
組群1中≥2名患者經歷任何級別的 DLT ^b	下個組群(組群-1)將接受自組群1減少50%的劑量位準：0.45 mg/m ²
組群-1中≥2名患者經歷任何級別的 DLT ^b	下個組群(組群-2)將接受自組群-1減少33%的劑量位準：0.30 mg/m ²

縮寫：AE=不良事件；DLT=劑量限制毒性 a. 劑量位準X係指當前劑量位準。 b. DLT必須為無法明確歸因於除研究藥物以外之原因的事件。

下個計劃組群之HMBD-002的最大劑量係取決於當前組群中之安全性結果，如下列。應注意，「X」是在先前組群中所評鑑的mg劑量：・若無患者經歷級別＞1的HMBD-002-相關AE (無法明確地歸因於外部原因[例如，癌症、PD]的＞1之任何級別的AE)，且當前劑量位準≤ 80 mg：≤ 3.0(X) mg。・若無患者經歷級別＞1的HMBD-002-相關AE (無法明確地歸因於外部原因[例如，癌症、PD]的＞1之任何級別的AE)，且當前劑量位準＞ 80 mg：≤ 2.0(X) mg。・在沒有DLT的情況下，若至少1名患者經歷第2級HMBD-002-相關AE，且當前劑量位準≤ 80 mg：≤ 2.0(X) mg。・在沒有DLT的情況下，若至少1名患者經歷第2級HMBD-002-相關AE，且當前劑量位準＞ 80 mg：≤ 1.5(X) mg。・在沒有DLT的情況下，若至少1名患者經歷第3級HMBD-002-相關之非DLT：≤ 1.5(X) mg。・若6名患者中之1名經歷DLT：≤ 1.33(X) mg。・較低劑量增加(亦即，25%增加)可基於非DLT AE的頻率及嚴重性來考慮。・在25%或33%劑量遞增之後，若在2個後續(連續)組群中無發生等級≥3之HMBD-002相關非DLT AE，則可重新著手一較高劑量遞增增量(達一50%之增加)。・若在組群1中受治療的2名患者中發生一DLT，則後續組群(組群-1)將以自組群1降低50%之劑量接受HMBD-002(組群-1 = 10 mg，3.3 mg作為循環1之第1天的投與劑量)。・若在組群-1中受治療的2名患者中發生一DLT，則後續組群(組群-2)將以自組群-1降低~33%之劑量接受HMBD-002(組群-2 = 7 mg，2.2 mg作為循環1之第1天的投與劑量)。・在每3週之第1天、8、15天(每週)的時程上之劑量強度太高、且基於臨床安全性及PK資料而有對一較低劑量強度(例如，每3週之第1及8天或每3週之第1天)時程之支持的情形中，可開放一個使用每3週之第1及8天或每3週之第1天之時程的新患者組群來積累新患者。ｏ由於相比於每3週之第1、8及15天的時程時，每3週的每週一次x2 (第1及8天)的時程表示降低33%，且每3週之第1天的時程表示HMBD-002劑量強度降低66%，因此第一患者組群將按每3週之第1、8、15天的時程接受經判定為安全(亦即，MTD或更小)的相同HMBD-002劑量。將根據針對每3週之第1、8及15天時程所述之規劃來施行劑量遞增。此包括在循環1之第1天的50%測試劑量。・額外患者，特別是可經受且同意於相繼之腫瘤生檢(其中該等程序不賦予在患者之臨床環境中及在完成該程序的機構處死亡率或主要發病率估算為2%或更高之顯著絕對風險的生檢)的患者，可用對於DLT可完全評估且就下個較高劑量位準之用劑方面已得到許可的劑量位準受治療。若DLT需要招募額外患者到組群中，則在額外患者已完成DLT評估期間後，將審查該組群之所有安全性資料。基於對資料之評鑑，SRC及/或贊助者可以決定以未在此規程中指定、但將在計劃之劑量位準之間的中間HMBD-002劑量位準，來招募患者。・在DLT觀察期間後，循環2治療可因毒性或任何其他原因而延期高達21天，在其時之後患者必須中斷治療

可評鑑HMBD-002其在組合療法中的安全性與功效，例如與抗-PD-1或抗-PD-L1療法組合。 19.6.5 第2部分：劑量擴增

基於諸如重複循環之耐受性(亦即，累積毒性之證據)、PK研究之結果(亦即，超過指示生物活性之PK參數之劑量位準)、藥效學研究之結果(亦即，目標藥效學效應之飽和)、及/或抗癌活性的因子判定HMBD-002之可代表MTD或較低劑量的MTD/RP2D位準後，用HMBD-002治療不同的以疾病定義的患者組群。

針對入選擴增階段之所有患者，將在治療前，接近循環2結束時或在PD時(若較早的話)，要求腫瘤生檢。腫瘤生檢程序必須不帶有顯著風險，如定義為在患者之臨床環境中及在完成該程序之機構處死亡率或主要發病率之相關聯絕對風險估算為2%或更高。在開始治療之前不需要VISTA+免疫組織化學法(IHC)之證實。

將評鑑下列不同劑量擴增群：・TNBC──15名先前用HMBD-002作為單一療法治療過的患有晚期TNBC之患者，且若觀察到足夠的陽性信號，則有可能進一步擴增。・NSCLC──15名先前用HMBD-002作為單一療法治療過的患有晚期NSCLC之患者，且若觀察到足夠的陽性信號，則有可能進一步擴增。・50名用HMBD-002治療過的患有各種惡性腫瘤可經受系列生檢(亦即，生檢採集並非一顯著風險程序(亦即，在患者之臨床環境中及在完成該程序的機構處≥2%之估算的死亡率或主要發病率))的患者。

高達190名患者可在劑量擴增階段中被治療。若在第一期中評估(15名患者)注意到足夠位準之活性(≥1客觀反應)，則擴增組群中之任何者可各自擴增至35名患者。

劑量可響應於治療相關毒性而被修改。 19.6.6 劑量限制性毒性之定義

DLT評估期間為21天(循環=21天)。入選第1部分(劑量遞增)且接受HMBD-002單一療法的患者在DLT評估期間必須接受其所有3次排定HMBD-002劑量(第1天、8及15天)，有直至第21天皆可獲得之完整追蹤資料，以符合DLT評估資格(亦即，DLT可評估)。在DLT評估期間經歷DLT或其他藥物相關毒性導致省略治療之患者亦將符合DLT評估資格。

研究員將使用國家癌症研究所(NCI)不良事件通用術語標準(CTCAE)版本5.0來評估毒性。AE與HMBD-002(亦即，歸因)之關係需被評估。

DLT係定義為在DLT評估期間發生之下列AE中之任一者，無論研究員是否歸因於HMBD-002，除非該AE可明確地且無可爭議地歸因於外部原因(例如，癌症、PD)。

血液學DLT ：・第3級或4級發熱性嗜中性球減少症ｏ定義為在有或沒有指示危及生命的後果及緊急介入的情況下，絕對嗜中性球計數(ANC) ＜1000/mm ³，具有＞ 38.3℃ (101 °F)之單一溫度或≥38 °C (100.4 °F)之持續溫度，歷時超過1小時。・第4級嗜中性球減少症(ANC ＜500/µL)持續＞7個連續日(必須每2至3天量測全血球計數[CBC]加上差量直到ANC回復至等級≤1)。・第4級血小板減少症(血小板＜25,000/µL)；或第3級血小板減少症(血小板＜50,000/µL)在患者中持續＞7天，沒有可由腫瘤展現之骨髓涉及；或關聯於臨床上顯著出血之第3或4級血小板減少症。

非血液學DLT ：・根據NCI CTCAE版本5.0之任何≥第3級的非血液學AE：ｏ例外為噁心、嘔吐、腹瀉、電解質/代謝/葡萄糖異常、便秘、發燒或疲勞，其中已存在次優的預防及管理，且其在72小時內消解至等級≤1。ｏ例外為未符合海氏定律(Hy's law)之天冬胺酸胺基轉移酶(AST)及/或丙胺酸轉胺酶(ALT)之第3級升高。符合海氏定律之第3級AST及/或ALT升高需要：在不存在膽汁鬱積之發現下(不存在鹼性磷酸酶升高至＞ 2 × ULN)總膽紅素＞ 2 × 正常值上限(ULN)，加上未能發現其他原因可解釋增加之ALT/AST與總膽紅素之組合。係為海氏定律之例外的第3級轉胺酶升高需要在7天內消解至≤第1級，前提為海氏定律準則亦未滿足。・CRS/免疫作用細胞相關聯神經毒性症候群(ICANS)之第3級表現形式，如NCI CTCAE版本5.0所定義。由於用HMBD-002治療而經歷第3或4級CRS或ICANS的此等患者應中斷脫離研究。・第3級IRR或第3級免疫相關毒性。此等患者應中斷脫離研究。

血液學及非血液學DLT 兩者：・在循環1期間導致第8或15天、或若該時程修改為每3週之第1及8天的時程時的第8天之劑量省略的任何可能藥物相關毒性。・因為其無法滿足恢復準則，所以延遲循環2投與＞ 21天的任何毒性。・在循環1期間致使治療中斷的任何治療相關毒性。・任何第5級毒性。・研究員及贊助者醫療代表認為係DLT之任何其它顯著毒性。

直至最後用劑之後30天的治療突發AE將由MedDRA™版本13.1(或更高)系統器官類別及較佳用語所總結。經歷每一AE較佳用語之患者的發生率和百分比將用描述性統計來總結。AE亦將藉由NCI-CTCAE、v5等級以及藉由因果(歸因於研究治療)來總結。DLT、第3-4級AE、SAE及導致劑量修改或治療中斷之AE亦將由較佳用語總結。 19.6.8 用劑及重新治療之準則

在一治療循環內，若在過去24小時期間患者經歷下列事件中之任一者，則在任何的排定治療日應停止HMBD-002： a. ≥第2級腹瀉，儘管在有最適止瀉療法下 b. ≥第2級嘔吐，儘管在有最適止吐療法下 c. ≥第3級疲勞，其未由休息緩解，且限制日常生活中的自我照護活動 d. ≥第3級轉胺酶升高 e. 血小板計數＜50 × 10 ⁹/L f. 嗜中性球計數＜0.5 × 10 ⁹/L

為了開始循環2及之後的治療，患者必須滿足以下準則： a. ANC ≥1.00 × 10 ⁹/L b. 血紅素≥8 mg/dL e. 血小板計數 ≥75 × 10 ⁹/L d. 計算之肌酸酐清除率＞35 mL/min e. 總膽紅素 ≤1.8 × 機構ULN (institutional ULN) f. 若患者患有肝轉移，則AST及ALT ≤4 × 機構ULN或ALT及AST ≤5 × 機構ULN。

在第1部分(劑量遞增)之循環1 (DLT評估期間)期間，不容許一治療循環內之研究治療(HMBD-002)之劑量修改。在患者已經歷確為DLT之一事件的情況下，患者可能以相同劑量或以較低劑量來重新開始研究治療。

劑量修改可基於轉胺酶升高、血小板減少症及/或嗜中性球減少症來進行。

在注射HMBD-002後，患者可能會經歷短暫性發燒、發冷、噁心、疲勞、嘔吐、頭痛及肝臟酵素增加。其等亦可具有CRS之表現形式，包括：發燒、寒顫、不適、疲勞、厭食症、肌肉痛、關節痛、噁心、嘔吐、頭痛、腹瀉、心跳過速、低血壓、心輸出量改變、脈博壓增寬、皮疹、呼吸速迫、升高之D-二聚體、轉胺酶升高(transaminitis)、氮血症、低血氧症、低纖維素原血症±出血、高膽紅素血症、精神狀態(mental status)改變、混淆、譫妄、失語症、幻覺、顫動、辨距不良、步態改變之及/或癲癎。CRS可根據NCI CTCAE版本5準則進行分級。

輕度CRS：輕度(第1級，具有或不具體質性症狀之發燒)早期反應通常不需要介入。需要時，可投與乙醯胺酚(acetaminophen)或類似的抗炎藥物(非類固醇抗炎藥物；NSAID)以治療發燒及相關聯的體質性表現形式。針對歸因於CRS的可能嚴重AE，介入可包括血壓支持，及用皮質類固醇、抗-介白素-6 (IL6) mAb托珠單抗、及/或過敏表現形式之管理來治療。

中度嚴重CRS ：在CRS第2級或更高之情況下，托珠單抗可連同或不連同皮質類固醇來投與，以治療CRS之各種相關及潛在嚴重的表現形式。托珠單抗之建議劑量針對體重低於30 kg的患者為12 mg/kg IV，及針對體重係30 kg或更高的患者為8 mg/kg。製劑應作為60分鐘之IV輸注來投與。若臨床改善在24至48小時內未發生，則可再投與托珠單抗。CRS等級≥2或更高者應藉由在基線(排程實驗室(schedule labs))時以及在事件及在出院前的時間量測IL6、CRP及鐵蛋白來確認。針對後續治療，若有指示，允許用乙醯胺酚、非類固醇抗炎劑的療前用藥。可使用低劑量皮質類固醇作為療前用藥以降低反應的嚴重性，若此等反應係對HMBD-002而引起，但僅在與醫療監察人員討論後。

嚴重CRS ( 第3 級) ：針對歸因於CRS的可能嚴重AE，介入可包括血壓支持，及用皮質類固醇、抗-介白素-6 (IL6) mAb托珠單抗(參見上文)及/或過敏表現式之管理來治療。

針對CRS之標準支援性照護可被投與。

關聯於HMBD-002之AE可代表一免疫相關反應(irAE)。嚴重且危及生命之irAE應該用IV皮質類固醇接著用口服類固醇治療，例如初始劑量1至2 mg/kg的強體松或等效物。若irAE不受皮質類固醇控制，則應開始其他免疫壓制性治療。當irAE ≤ 第1級時，皮質類固醇漸減應開始且持續至少4週。其他適當的醫療療法可包括但不限於：腎上腺素、IV流體、抗組織胺、NSAID、乙醯胺酚、麻醉藥、氧氣、加壓劑及/或皮質類固醇。 19.6.9 先前及伴隨的藥物治療 允許之藥物治療/ 療法

在DLT評估期間之外，在血小板減少症或嗜中性球減少症情境中，根據機構或美國血液學協會(ASH)/ASCO指南投與血小板生成劑(亦即，羅米司亭、艾曲波帕)或顆粒球聚落刺激因子(G-CSF)製劑(亦即，非格司亭、培非格司亭)係容許的。根據上文所提及之指南亦容許紅血球生成素類似物。除非與DLT一致的嚴重血球減少症經識別，否則不應在DLT評估期間運用這些製劑。若在DLT評估期間使用G-CSF製劑於改善嗜中性球減少症，則HMBD-002治療應暫停直至G-CSF製劑停止。

在研究期間容許全面支援性照護，包括但不限於：止吐及止瀉製劑、食慾刺激劑、興奮劑(亦即，莫達非尼)、抗惡病質療法(亦即，魚油補充劑)、抗憂鬱劑、鴉片及非鴉片止痛劑、抗生素、選擇性使用皮質類固醇及血小板/嗜中性球生長因子，如上文所指示。

接受進行中之雙膦酸類療法或抗-核因子κβ受體活化子配體療法(例如德諾單抗)的參加研究之患者，可在研究參與期間繼續接受這些製劑。患有抗性前列腺癌、正在接受促性腺激素釋放激素(GnRH)促效劑作為醫療去勢的患者，在研究期間應繼續接受GnRH促效劑。患有晚期前列腺癌、正在接受LHRH促效劑的患者，容許加入研究且在研究治療期間應繼續使用這些製劑。 禁止之藥物治療/ 療法

入選患者可不接受研究性或經許可之抗癌劑，包括細胞毒性化學療法劑、抗癌酪胺酸激酶抑制劑、免疫療法或治療性mAb，除根據此規程所指導者外(例如抗-PD-1/PD-L-1抗體)。在研究入選期間不容許姑息性放射，除非其係針對現有非進程性轉移/症狀施行且涉及窄放射口(例如，孤立性骨病變)。在研究治療之第一劑之前的30天內及在參與該研究時不容許活的或活減毒疫苗。系統性醣皮質素僅容許用於以下目的：調變疑似具有免疫病因學之AE的症狀，如需要用於預防嘔吐、針對IV造影過敏之療前用藥、在用於COPD加重之＞10mg/天之強體松等效物之用劑中的短期口服或IV使用，或用於慢性系統性替代之不超過10 mg/天之強體松等效物。

患者不應以高於每天10 mg之強體松等效物的劑量之連續的系統性類固醇來治療。若需要以高於10 mg之強體松等效物之劑量的連續的系統性類固醇療法，則HMBD-002不應被投與直到類固醇漸減回基線。 19.7 患者群體

在劑量遞增階段期間，大約40-50名患者受治療。此估算值包括用HMBD-002治療25-30名及15-20名患有復發性/對當前可用療法有難治性之實性惡性腫瘤的患者。

擴增階段包括用HMBD-002作為單一療法治療15-30名各患有三重陰性乳癌(TNBC)及非小細胞肺癌(NSCLC)的患者(高達35名患者)，且用HMBD-002治療高達50名患有其他惡性腫瘤的患者。若在任何NSCLC或TNBC組群中觀察到足夠的活性，則可能擴大該組群到至少35名患者。

所有患者必須具有一治療前(在研究療法之用劑之前)之胸部/腹部/骨盆的成像(電腦斷層攝影[CT])掃描，或磁共振成像(MRI)，若適用的話；及在其第一研究療法用劑之前的21天內，要求腫瘤生檢(若該患者將入選擴增階段)。可能存在患者僅在醫療監察人員容許如此而沒有進行相繼之腫瘤生檢下入選的情況。患有皮膚、皮下或淋巴結轉移的患者亦可藉助於身體檢查進行腫瘤評估(包括用尺量測)。亦要在循環2結束時施行腫瘤量測及疾病反應評估，接著其後大約每2個循環一次，直到PD的發展。亦要在EOT就診時施行腫瘤量測及疾病反應評估。另外，在腫瘤標誌被運用於對患有給定惡性腫瘤之患者及具有已知的給定標誌升高之患者的臨床管理的情況下，強烈鼓勵施行腫瘤標誌量測。所有在接近或達到MTD之HMBD-002劑量下入選劑量遞增階段的患者，及所有入選擴增階段的患者，被要求要在循環1治療之前、以及在循環2結束時或在PD時(若較早的話)，施行系列腫瘤生檢，只要患者將不會經受顯著風險，該顯著風險中在患者之臨床環境中及在完成該程序的機構處死亡率或主要發病率之程序相關聯絕對風險估算為2%或更高。否則，應提交一庫存腫瘤檢體。 19.7.1 納入標準

1. 患者必須具有惡性實性癌症之組織學或細胞學上的證據(任何組織學)，且必須具有無已知賦予臨床效益之可用療法的晚期或轉移性疾病。 2. 入選劑量遞增階段之患者，必須在具有對可用的標準系統性療法有抗性或在其之後復發的疾病，或針對該疾病，不存在醫師判斷中可能得到臨床效益的標準系統性療法或合理的療法，或若此等療法已被患者拒絕。必須針對尚未接受可能得到臨床效益之標準療法的患者，提供該原因之文件紀錄。 3. 理想上來自患者最新生檢的腫瘤組織(至少10個且高達15個未染色載玻片)或石蠟塊必須有計劃地找出以遞送至研究中心或在研究療法的第一劑之前使其為可獲得。一新鮮腫瘤生檢係比使用庫存樣本更佳，且若庫存樣本非可用時將被取得，只要生檢程序不是一顯著風險程序，其定義為非屬在患者之臨床環境中及在完成該程序之機構處死亡率或主要發病率估算為2%或更高者。必須聯絡醫療監察人員，以審查生檢風險文件紀錄及撤除對新鮮生檢之要求。 a. 將要求入選擴增階段之患者在篩選期間、以及循環2結束時(第16-21天± 2天)或在PD時(若較早的話)進行腫瘤生檢，若該程序不是如上文所定義的顯著風險程序。 4. 患者必須具有可藉由實性腫瘤反應評鑑準則(RECIST)1.1版(附錄A)量測的疾病。對於具先前放射治療之患者，可量測病變必須在任何先前放射照野之外，除非疾病進程已在放射後於該位點被記錄。 5. 在簽署同意書當天患者係≥18歲。 6. 患者具有≤1之ECOG PS。 7. 患者具有適當的基線器官功能，如以下所展現： a. 肌酸酐清除率(CrCL) ≥30 mL/min，由Cockcroft-Gault公式所計算： i. CrCl (雄性) = ([140-年齡] × 按kg計之重量) / (血清肌酸酐 × 72) ii. CrCl (雌性) = CrCl (雄性) × 0.85 b. 膽紅素 ≤1.5 x 機構ULN。 c. AST及ALT ≤2.5 x 機構ULN。若患者有肝轉移，則患者可具有ALT及AST ＜5 × 機構ULN。 8. 針對未攝用華法林(warfarin)或其他口服抗凝血劑之患者：國際正規化比值(INR) ≤1.5或凝血酶原時間(PT) ≤1.5 x ULN；且部分凝血激酶時間或活化部分凝血激酶時間(PTT或aPTT) ≤1.5 x ULN。攝用華法林之患者應使用導致＜3.5之穩定INR的穩定劑量。接受其他口服抗凝血劑療法之患者當中，PT或aPTT必須處於抗凝血劑意欲治療範圍內，且/或SC療法應按每機構之標準監測。 9. 患者具有適當的基線血液功能，如以下所展現： a. ANC ≥1.5x10 ⁹/L。 b. 在先前14天期間，血紅素≥9 g/dL且無紅血球細胞(RBC)轉輸。 c. 在先前14天期間，血小板計數≥100x10 ⁹/L且無血小板轉輸。 10. 患者具有由心臟超音波檢查(ECHO)或多門控擷取法(MUGA)掃描所判定的≥45%之左心室射出分率(LVEF)。 11. 若女性參與者未懷孕、未哺乳，且符合以下條件中之至少一者，則其為合格可參與： a. 並非一具生育能力的女性(WOCBP)。 b. 一WOCBP，其同意在治療期間及在研究治療之最後一劑之後至少120天遵循避孕指導。 c. 若患者為WOCBP，其在治療之前的72小時內具有陰性的血清或尿液驗孕結果。 12. 若同意在研究期間及在研究治療之最後一劑之後至少120天遵循避孕指導，則一男性患者為合格可參與。 19.7.2 HMBD-002擴增組群的納入準則：

TNBC1. 患者必須具有TNBC係轉移性的組織學或細胞學上的證據。TNBC係由臨床醫師之評定定義且可包括按2018年美國臨床腫瘤學協會(ASCO)/美國病理學家學會(CAP)準則之人類表皮生長因子受體2(HER2)陰性、雌激素受體(ER) ≤ 10%及黃體固酮受體(PR) ≤ 10%。 2. 儘管不需要VISTA IHC+腫瘤之文件紀錄以開始治療，但患者將在篩選期間及循環2結束時(第16-21天；± 2天)或在PD時(若較早的話)進行一腫瘤生檢，若該程序不是一顯著風險程序，如定義為在患者之臨床環境中及在完成該程序之機構處死亡率或主要發病率之程序相關聯絕對風險估算為2%或更高者。否則，患者將提交一庫存腫瘤檢體。 3. 患者必須已接受用針對TNBC之至少一先前方案的適當治療且沒有已知能賦予臨床效益之可用療法。

NSCLC1. 患者必須具有NSCLC係晚期疾病之組織學或細胞學證據，其定義為轉移性或局部晚期且不可切除的癌症。 2. 儘管不需要VISTA IHC+腫瘤之文件紀錄以開始治療，但患者將在篩選期間及循環2結束時(第16-21天；± 2天)或在PD時(若較早的話)進行一腫瘤生檢，若該程序不是一顯著風險程序，如定義為在患者之臨床環境中及在完成該程序之機構處死亡率或主要發病率之程序相關聯絕對風險估算為2%或更高者。否則，患者將提交一庫存腫瘤檢體。 3. 患者必須不具有表皮生長因子受體(EGFR)或退行性淋巴瘤激酶(ALK)的一活化突變。 4. 患者應已接受用FDA核准之靶定療法的治療，若他們帶有FDA核准之靶定療法可用的其他基因體畸變(例如，ROS重排、BRAF V600E突變、met外顯子14跳讀式突變)，但尚未接受先前治療的此等患者是合格的，若已給予他們關於此等治療在整體存活期上已展現改善的知情同意書。 5. 患者必須在至少一FDA核准的或可比配的NSCLC標準療法上有疾病進程。 6. 患者應該已接受用一針對程式性死亡配體-1 (PD-1)或PD-L1之mAb的適當先前治療，但尚未接受先前治療的此等患者符合HMBD-002單一療法資格，只要已給予他們適當知情同意書(知情同意表)，告知他們此等治療已展現的在整體存活期方面之改善。

多種其他癌症1. 患者必須具有TNBC及NSCLC外之晚期、不可切除或轉移性癌症之組織學或細胞學上的證據而沒有已知賦予臨床效益之可用療法。 2. 儘管不需要VISTA IHC+腫瘤之文件紀錄以開始治療，但患者將在篩選期間及循環2結束時(第16-21天；± 2天)或在PD時(若較早的話)進行一腫瘤生檢，若該程序不是一顯著風險程序，如定義為在患者之臨床環境中及在完成該程序之機構處死亡率或主要發病率之程序相關聯絕對風險估算為2%或更高者。否則，患者將提交一庫存腫瘤檢體。 3. 患者必須就其癌症已進行適當治療，且沒有可用療法可得。 19.7.3 排除準則

1. 患者已接受用抗-PD-1、抗-PD-L1、或抗-PD-L2製劑或用針對另一刺激性或共抑制T細胞受體(例如，CTLA-4、OX 40、CD137)之製劑的先前療法，且由於第3級或更高之免疫相關不良事件(irAE)而從該治療中斷。此不適用在歸因於用細胞療法之先前治療的irAE。 2. 患者在治療2週內已接受先前放射療法。參與者必須已自所有放射相關毒性恢復，不需要皮質類固醇，且非已患有放射性肺炎。就針對非中樞神經系統(CNS)疾病以一受限口之≤2週放射療法的姑息性放射，容許一個1週的洗脫。 3. 患者已在研究藥物治療之第一劑的6個月內接受針對肺臟之＞30戈雷(Gy)的放射治療。 4. 患者已接受使用抗癌療法之治療，包括細胞毒性化學療法、單株抗體及/或小分子酪胺酸激酶抑制劑，其係在研究療法投與之前的14天或5個半生期內(以較短者為準)(對於先前之亞硝基脲(nitrosourea)或絲裂黴素(mitomycin)-C為42天；正在接受黃體激素釋放荷爾蒙(LHRH)促效劑之患有晚期前列腺癌的患者容許加入該研究，且應該在研究治療期間繼續使用這些製劑)。 5. 患者已具有一同種異體組織/實性器官移植。 6. 在研究介入之第一劑前的30天內，患者已接受活或活減毒疫苗。允許投與死疫苗及RNA疫苗(例如，COVID-19)。 7. 患者已接受用HMBD-002或另一靶向VISTA之研究性製劑的先前治療。 8. 若參與者進行過大手術，則參與者必須在開始研究介入之前已自程序及/或自手術之任何併發症適當地恢復。 9. 患者當前正在參與或已參與一研究性製劑之研究，或者在研究治療之第一劑前的4週內已使用研究性裝置。 10. 患者必須已自由於先前療法所致的所有AE恢復至≤第1級或基線。具有≤第2級脫毛症及/或神經病變之參與者可能係符合資格的。具有內分泌相關AE等級≤2、需要治療或荷爾蒙替代物的參與者可能係符合資格的。導致實驗室異常的先前毒性應該已消解至等級≤1，除非納入準則允許較高等級異常。若需要醫療療法來治療實驗室異常，則劑量及實驗室值應係穩定的。 11. 患者具有在過去需要系統性治療之活動性自體免疫疾病。若在與醫療監察人員討論後提供准許，則已至少兩年不需要系統性治療的病患可以入選(替代療法，例如甲狀腺素、胰島素或針對腎上腺或垂體功能不全之生理皮質類固醇替代療法，不被認為是系統性治療的形式，且係允許的)。 12. 患者具有未受控的內分泌病症。 13. 患者具有臨床上顯著的心血管疾病(例如，未受控的或任何紐約心臟學會類別3或4之心臟衰竭、未受控的心絞痛、心肌梗塞病史、在研究進入前的6個月內的不穩定心絞痛或中風、未受控的高血壓或不受藥物治療控制的臨床上顯著之心律不整)。 14. 患者具有需要類固醇之(非感染性)肺炎或間質性肺病病史，或具有當前肺炎或間質性肺病。 15. 患者具有未受控、臨床上顯著的肺病(例如，慢性阻塞性肺病、肺性高血壓)，該肺病依研究員之見解將在研究期間使患者處於肺部併發症之顯著風險下。 16. 患者對派立珠單抗及/或其賦形劑中之任何者已有嚴重過敏性反應(≥第3級)。 17. 患者具有免疫缺乏之診斷，或者在研究藥物之第一劑前的7天內正接受慢性系統性類固醇療法(以超過每日10 mg強體松等效物之用劑)或任何其他形式的免疫壓制性療法。在不存在活動性自體免疫疾病之情況下容許吸入或局部類固醇。 18. 患者具有未受控的間發病，包括但不限於：需要療法之未受控感染、廣泛性血管內凝固、精神病、藥物濫用或一將限制遵守研究要求的社會情境。 19. 以治療研究員見解，具有可能會混淆研究結果、干擾參與者參與完整研究期間，或不符合參與者參與之最佳利益的任何病況、療法或實驗室異常的一病史或當前證據。 20. 患者具有人類免疫缺乏病毒(HIV)的已知陽性狀態。除非由當地衛生主管機關命令，否則不需要HIV測試。 21. 具有已知B型肝炎病史(定義為HBsAg反應性)或已知活動性C型肝炎病毒(定義為偵測到HCV RNA)感染。除非由當地衛生主管機關命令，否則不需要B型肝炎及C型肝炎測試。 22. 患者係依賴氧氣的。 23. 患者具有以研究員見解會使患者處於不可接受之高毒性風險的任何醫療病況。 24. 若患者未完全接種疫苗，則患者必須在研究治療之1週內具有陰性COVID測試結果。 25. 患者具有進程中或在過去3年內需要積極治療的一額外活動性惡性腫瘤。有具復發之實質可能之過去癌症病史的患者必須在進入研究前與醫療監察人員討論。具有以下伴隨之贅生性診斷之患者為適格的：無進行性疾病之證據的非黑色素瘤皮膚癌、原位癌瘤(包括移行細胞癌瘤、子宮頸上皮內瘤樣病變、乳癌及黑色素瘤，原位)、侷限於器官之前列腺癌。 26. 患者具有已知的活動性CNS轉移及/或癌瘤性腦膜炎。具有先前經治療之腦轉移的參與者可參與，前提為其等是放射穩定的，亦即，藉由重複成像至少4周沒有進程之證據，在研究治療之第一劑前的至少14天在臨床上穩定且不需要類固醇治療。對於患有CNS侵犯病史的患者，在研究篩選期間應施行重複成像。然而，在研究進入之前不需要CNS成像，除非存在CNS侵犯之臨床懷疑。 27. 患者係懷孕中或哺乳中。 19.7.4 安全性研究及不良事件

在研究期間將藉由AE、臨床實驗室測試、身體檢查、生命徵象(VS)量測、心電圖(ECG)及美國東岸癌症臨床研究合作組織(ECOG)表現狀態(PS)之文件紀錄來評估安全性。 安全性評估

安全性評估包括DLT、AE、嚴重AE (SAE)、身體檢查、VS量測、ECOG PS、臨床實驗室評鑑及由於毒性導致之治療中斷的原因。

AE報導期開始於患者或授權代表簽署ICF時，且繼續達90天。規程中指定的AE報導期期間發生於受治療患者之所有AE皆須報導，無論該事件是否被認為與HMBD-002相關。發生在AE報導期外、研究員評估與HMBD-002相關的任何已知不順遂事件亦應作為一AE來報導。 功效評估

功效評估包括疾病反應及進程、反應持續期間及存活期。 生物/ 目標/ 互相關聯研究

針對在研究之劑量遞增階段中的患者，在用研究療法治療之前，來自患者之最新生檢的腫瘤組織(未染色載玻片或石蠟塊)必須為可得的。然而，若不存在庫存組織，則來自一新鮮生檢之載玻片係較佳的，並且若一腫瘤生檢被研究員認為並不符合患者的最佳利益(亦即，要求一顯著風險程序，如定義為2%或更高的在患者之臨床環境中及在完成該程序之機構處死亡率或主要發病率之相關聯絕對風險)，則醫療監察人員可撤除此要求。

針對患有TNBC、NSCLC及其他癌症的患者，研究員應該在給予該研究之知情同意書後在篩選期間獲得生檢。儘管不需要VISTA IHC+腫瘤之文件紀錄以開始治療，但生檢程序必須非為一顯著風險程序，如定義為在患者之臨床環境中及在完成該程序之機構處死亡率或主要發病率之程序相關聯絕對風險估算為2%或更高者。否則，患者將提交一庫存腫瘤檢體。所有可經受生檢程序的患者，如先前所述，將在循環2結束(第16-21天；± 3天)前一週或若PD較早則在PD時施行一後續的腫瘤生檢。

治療前或後之生檢，若其不帶有如上文所定義之顯著程序風險，則將用於評鑑VISTA及PD-L1表現，以及用來研究以HMBD-002治療在治療前、治療期間及治療後對VISTA及PD-L1受體之表現的效應，且用來將量測值與抗腫瘤活性互相關聯。另外，將檢查HMBD-002對循環免疫細胞及腫瘤微環境(TME)中免疫細胞之定量及定性效應。重點將放在治療對VISTA IHC+免疫細胞之效應。

一AE係定義為經投與一藥品之臨床研究患者中之任何不順遂醫療事故，其不必然具有與此治療之因果關係。一AE因此可為任何不利且非意欲之徵象(包括一異常實驗室發現)、症狀或暫時關聯於一藥用(研究性)產品之使用的疾病，無論其是否與藥用(研究性)產品相關。此包括既存病況或事件之加重、間發病、藥物交互作用，或研究中之適應症的顯著惡化，其未記錄在特定功效評估下的eCRF中之別處。既存病況，包括正在進行研究之的疾病(惡性腫瘤)，其不代表臨床顯著加重或惡化的預期波動不需要被認為是AE。

研究中之癌症的進程不被認為是AE，除非其導致住院治療或死亡。

除非明確與研究藥物治療不相關，否則AE事件將被認為與研究藥物治療相關。

將根據NCI CTCAE版本5分級AE的嚴重性。若AE的嚴重性有改變，則必須記錄為分開的事件。對於包括於NCI CTCAE中之未列出AE，可接著如下列來判定嚴重性：

第1 級( 輕度)	在研究治療繼續時，消失或容易耐受的不良事件。
第2 級( 中度)	不良事件不適到足以對一般工作活動造成干擾。
第3 級( 重度)	使人無能力且不能夠工作或施行日常活動的不良事件。
第4 級( 危及生命)	可能危及生命的不良事件。
第5 級( 死亡)	與不良事件相關的死亡。

19.8 藥物動力學、藥效學以及生物評估

從所有患者收集用於PK及藥效學分析之系列血液樣本。

藥物動力學將會針對HMBD-002之血清濃度予以特徵化以及將使用非隔區方法來分析。待計算(若有適當資料可用於估算)的藥物動力學參數將包括但不限於C _max、AUC、t _½、CL及V _d。將使用描述性統計就每一劑量位準組群總結HMBD-002的濃度及PK參數。劑量遞增階段：

・HMBD-002：ｏ將在循環1及2中施行一密集之時程以判定HMBD-002之血清濃度。在循環1中，血液於治療後將在第1及8天(治療前；在輸注結束時及在輸注後之以下時間──1、6、24、48及72小時，第8天僅於單一療法組群)、以及在第15天之治療前及輸注結束時取樣，並且在循環2中在以下時間取樣：第1天(治療前；輸注結束及在輸注後之以下時間──1、6、24、48及72小時)以及第8及15天(輸注前及輸注結束)。若臨床資料允許，則該72 hr PK時間點可消除。本質上，所有患者中PK將在二劑量位準下施行：第1天(33%或50%劑量)及第8天(100%劑量)。若治療時程修改為(每3週之第1、8天)或每3週之第1天，則將使用相同HMBD-002 PK取樣規劃。在二種情況下，PK取樣將在第8及15天施行(若不施行藥物治療，則無治療後取樣)。ｏ在後續循環中亦將稀疏地取樣血液(治療前及循環3-6、8、10、15之第1天的輸注結束)。劑量擴增階段：

・HMBD-002：ｏ將施行有限的血液取樣以評估表1、表2、表3、表4中所注記之有限時間點時HMBD-002的血清濃度。ｏ隨著時間推移之血清濃度資料將用來特徵化HMBD-002之PK動向、用來評估在初始投與與穩態之間及在治療循環之間在HMBD-002之PK性質上的任何改變，以及將HMBD-002之PK特性關連於毒性及抗癌活性。

生物標誌將於本研究全程被評估。

將收集生物檢體(血液組分、腫瘤材料等)以支持細胞、循環分子及其他生物標誌(例如，蛋白質、去氧核糖核酸[DNA]、核糖核酸[RNA]、代謝物)之分析。不同血液及腫瘤生物標誌之變化可提供生物活性之證據且可導致可引導HMBD-002之使用的見解。

可量測循環血清細胞激素，例如IL-2、IL-6、IL-8及/或TNFα。可在循環1之第1、8、15天及循環2之第1天量測血清細胞激素。

臨床評鑑將包括量測以下之血清/血液位準：肌酸酐、血尿素氮(BUN)、天冬胺酸胺基轉移酶(AST或SGOT)、丙胺酸轉胺酶(ALT或SGPT)、鹼性磷酸酶(AP)、總膽紅素、血清白蛋白、血清總蛋白質(TP)、重碳酸鈉、鉀、氯化物、葡萄糖、磷酸鹽、鈣、三酸甘油脂、C反應蛋白、鐵蛋白、血紅素、血容比、白血球細胞(WBC)計數(總及差量)、紅血球細胞(RBC)計數、血小板計數、平均紅血球體積(MCV)、平均紅血球血紅素量(MCH)及平均紅血球血紅素濃度(MCHC)。

可使用基因體技術(例如，次世代定序及其他技術)特徵化腫瘤組織及血液樣本以理解對VISTA-靶向製劑之關鍵分子變化。可施行腫瘤組織中及血液中之全基因體及靶定傳訊RNA (mRNA)表現剖析及定序兩者，以界定相關基因印記。亦可施行臨床試驗群體內之生殖系列基因分析(例如，單核苷酸多型性分析、全外顯體定序、全基因體定序)。

來自此研究之血液及腫瘤樣本可經歷免疫剖析及蛋白質體分析。來自此研究之腫瘤樣本可經歷對免疫及癌細胞的蛋白質體分析(例如，VISTA、PD-L1 IHC)。這些組織樣本亦可經歷數位病理學分析及多工免疫螢光法。另外，亦可評估腫瘤浸潤白血球、免疫相關mRNA表現印記及VISTA及PD-L1表現之存在及變化。

腫瘤組織及血液樣本(包括血液衍生之蛋白質)可使用各種平台經受蛋白質體分析，該等平台可包括但不限於免疫檢定法、流式細胞分析術、液相層析法/質譜法。諸如酵素聯結免疫檢定法的檢定法量測血清中的此等蛋白質。

此外，上文所概括之腫瘤及血液剖析，可使用在篩選時及治療後所取得的生物檢體之組份來進行額外的轉譯研究。來自患者之蛋白質或細胞可與實驗室試劑組合供用於額外的離體研究(例如，細胞增殖、細胞毒性等)。抗- 藥物抗體之評估

將評估所有患者在劑量遞增階段及劑量擴增階段中對HMBD-002之ADA的發展及定量。血液取樣將在循環1-6中的治療前，及其後每2個循環及在研究結束(EOS)時施行。 19.9 抗腫瘤活性之評估

腫瘤量測將在研究全程中進行，例如，如下文所詳述。

根據實性腫瘤反應評鑑準則(RECIST) v1.1來量測疾病進程及/或治療功效。

整體反應率(ORR)根據RECIST v.1.1係定義為達成完全反應(CR)或部分反應(PR)之最佳反應的患者比例。反應持續期間(DoR)係定義為從首次滿足PR或CR之量測準則的日期，到首次滿足PD之量測準則的日期的時間。CR期間(DoCR)係定義從首次滿足CR之量測準則的日期，到首次滿足PD之量測準則的日期的時間。無進程存活期(PFS)係定義為從研究療法開始的日期起，到首次滿足PD之量測準則或因任何原因死亡其中先發生者的日期之時間。PFS6係定義為在研究療法開始之後6個月(26週)時，患者存活且無進程之百分比。整體存活期(OS)係定義為從研究開始的日期到因任何原因死亡日期的時間。

ORR及PFS6之測試將藉由單樣本二項測試進行，其具有15%的1側第I型錯誤率。PFS、DoR、DoCR及OS之分佈將藉由Kaplan-Meier方法學估算。

新實性腫瘤反應評鑑準則(RECIST 準則) ：經修訂之RECIST 指南( 版本1.1) 。E.A. Eisenhauer et al. (2009). European Journal of Cancer 45: 228-247，其在此藉由參照全文併入本文。 1.腫瘤在基線時之可量測性 1.1.定義

在基線時，腫瘤病變/淋巴結將分類為可量測或非可量測，如下列： 1.1.1. 可量測

腫瘤病變：必須準確地量測至少一個維度(量測平面中之最長直徑將被記錄)，具下列之最小的大小： ‧10 mm，藉由CT掃描(CT掃描切片厚度不超過5 mm；參見附錄II在成像指導上)。 ‧藉由臨床檢查之10 mm測徑器量測(無法用測徑器準確量測之病變應記錄為非可量測的)。 ‧20 mm，藉由胸部X光

惡性淋巴結：為了被視為病理上增大及可量測的，當藉由CT掃描(所建議的CT掃描切片厚度不大於5 mm)評估時，一淋巴結之短軸必須為15 mm。在基線時及追蹤時，將僅量測及追蹤短軸。 1.1.2. 非-可量測

所有其他病變，包括小病變(最長直徑＜10 mm或具有10至＜15 mm短軸之病理淋巴結)以及真正的非可量測的病變。被視為真正非可量測的病變包括：無法藉由可再現之成像技術量測的體檢所識別的軟腦膜疾病、腹水、胸膜或心包膜積液、發炎性乳疾病、皮膚或肺臟之淋巴管炎侵犯、腹部腫塊/腹部器官腫大。 1.1.3. 關於病變可量測性之特別考量先前用局部療法治療之骨骼病變、囊性病變及病變需要特定註解：

骨骼病變： ‧骨骼掃描、PET掃描或平片不被視為用以量測骨病變的適當成像技術。然而，這些技術可用來確認骨骼病變之存在或消失。 ‧具有可識別軟組織組分之溶解性骨骼病變或混合溶解性芽殖病變，其可藉由諸如CT或MRI之截面成像技術來評鑑，若軟組織組分滿足上述可量測性之定義，則該病變係可被視為可量測病變。 ‧芽殖骨骼病變為非可量測的。

囊性病變： ‧符合放射線攝影所定義之單純囊腫之準則的病變，不應被視為惡性病變(既不是可量測的，亦不是非可量測的)，因為它們根據定義係為單純囊腫。 ‧被認為代表囊腫轉移的「囊性病變」可視為可量測病變，若其滿足上文所述之可量測性的定義。然而，若非囊性病變存在於同一患者中，則較佳地選擇這些作為目標病變。

先前局部治療之病變： ‧位於先前所照射之區域中或於經受其他局部區療法的腫瘤病變，係通常不被視為可量測的，除非在該病變中已展現出進程。試驗規程應詳述條件，其中此等病變將被視為可量測的。 1.2. 藉由量測之方法的說明書 1.2.1. 病變之量測

所有量測應以公制符號記錄，若臨床評估，則使用測徑器。所有基線評鑑應盡可能接近於治療開始時施行，且不得超過治療開始前4週施行。 1.2.2. 評估之方法

相同評估方法及相同技術應使用來特徵化在基線時及追蹤期間的每一個所識別及所報導的病變。應永遠進行以成像為基的評鑑而不是臨床檢查，除非正追蹤之病變無法被成像而是僅可藉由臨床檢查來評估的。臨床病變：

臨床病變將僅在使用測徑器評估且有≥10 mm之直徑時被視為可量測的(例如，皮膚結節)。對於皮膚病變之情況，建議由包括量尺以估算病變大小之彩色攝影來記錄。如上所述，當病變可藉由臨床檢查及成像兩者來評鑑時，應做成像評鑑，因為其更客觀且亦可在試驗結束時審查。胸部X光：

胸部CT係優於胸部X光，特別是在進程為一重要終點時，因為CT比X光更敏感，特別是在識別新的病變時。然而，若胸部X光上的病變被明確地界定且被充氣的肺臟包圍，則其可被視為可量測的。 CT、MRI：

CT為用以量測經選擇用於反應評估之病變的最佳當前可用且可再現的方法。此指南基於CT切片厚度為5 mm或更小之假設而已經定義CT掃描之病變可量測性。當CT掃描具有大於5 mm之切片厚度時，則一可量測病變之最小的大小應為該切片厚度的兩倍。MRI在某些情形下亦為可接受的(例如，用於身體掃描)。關於CT及MRI兩者用於評估客觀腫瘤反應評鑑之使用的更多細節係提供於來自Eisenhauer et al.之公開案中。超音波：

超音波在評估病變大小上為沒用的，且不應被使用作為一種量測方法。超音波檢查不能全面地再現以供日後獨立審查，因為其等為操作者依賴的，所以無法保證從一個評估到下一者將採取相同的技術及量測(更詳細地說明於附錄II中)。若新的病變在試驗過程中藉由超音波識別，則建議藉由CT或MRI來確認。若擔心CT之輻射暴露，則在選定情況下可使用MRI代替CT。內視鏡檢查、腹腔鏡檢查：

這些技術對客觀腫瘤評鑑的利用係不被建議的。然而，它們可為可用的，來在獲得生檢時確認完全的病理反應，或判定在試驗中的復發，其中在完全反應或外科切除後的復現係為一終點。腫瘤標誌：

單單腫瘤標誌係不能用於評估客觀腫瘤反應。然而，若標誌最初高於正常極限，則其必須正常化以使患者被視為完全反應。細胞學、組織學：

若規程所需，則這些技術可用以在罕見情況下區分PR與CR (例如，腫瘤類型中之殘存病變，諸如生殖細胞腫瘤，其中已知殘存良性腫瘤可保留)。當積液已知為治療之一潛在不良效應(例如，用某些紫杉烷化合物或血管新生抑制劑)時，若可量測腫瘤已滿足反應或穩定性疾病之準則，則可考量在治療期間出現或惡化的任何積液之贅生來源的細胞學確認，以便於區分反應(或穩定的疾病)與進行性疾病。 2. 腫瘤反應評鑑 2.1 整體腫瘤負荷及可量測疾病的評估

為了評估客觀反應或未來進程，有必要在基線時估算整體腫瘤負荷且使用此作為一比對物以供後續量測。可量測疾病係藉由存在至少一種可量測病變(如上文詳述)來定義。 2.2. 「目標」及「非目標」病變之基線記錄

當於基線時存在多於一個可量測病變時，代表所有涉及器官之高達最多共5個病變(且每個器官最多2個病變)的所有病變，應識別為目標病變，且應在基線時被記錄及量測。此意謂在患者僅有1或2個器官位點涉及之情況，最多2個(1個位點)及4個(2個位點)病變將被分別記錄。該器官中之其他病變將被記錄為非可量測病變(即使其大小藉由CT掃描係大於10 mm)。

目標病變應以其等大小(具有最長直徑之病變)為基礎來選擇、作為所有涉及器官之代表，但除此之外，應係那些自身將提供可再現的重複量測結果者。偶爾，最大病變自身沒有提供可再現的量測結果，在該情況下應選擇可被可再現地量測之次大的病變。

淋巴結值得特別提及，因為它們是即使不受腫瘤侵犯亦可由成像可見的正常解剖結構。病理結點係定義為可量測的且可識別為目標病灶，其必須滿足CT掃描≥15 mm之一短軸的準則。這些結點之短軸將有助於基線總和。結點之短軸為通常由放射科醫師使用以判定一結點是否受實性腫瘤侵犯的直徑。結點的大小通常報導為獲得影像之平面中的2維(對於CT掃描，此幾乎始終為軸向平面；對於MRI，獲取平面可為軸向、矢狀或冠狀)。這些量測中之相似者為短軸。舉例而言，報導為20 mm x 30 mm之一腹部結點的係具有20 mm之一短軸且有資格作為一惡性、可量測的結點。在此實例中，20 mm應記錄為結量測值。所有其他病理結點(具有≥10 mm但＜15 mm之短軸者)應視為非目標病變。具有＜10 mm之一短軸的結點被視為非病理性的且不應記錄或追蹤。

所有目標病變之直徑(非結點病變為最長，結點病變為短軸)的總和將被計算且報導為基線總和直徑。若淋巴結要被包括在總和中，則如上文所述，僅添加短軸至總和中。基線總和直徑將用作參考，以進一步特徵化疾病可量測尺寸中之任何目標腫瘤消退。

包括病理淋巴結之所有其他病變(或疾病位點)應識別為非目標病變，且亦應在基線記錄。不需要量測且將這些病變追蹤為「存在」、「不存在」或在罕見情況下之「明確進程」。另外，在個案報導表上有可能將涉及同一器官的多個非目標病變記錄為單個項目(例如，「多個增大的骨盆淋巴結」或「多個肝轉移」)。 2.3. 反應準則

2.3.1. 目標病變之評估・完全反應(CR)：所有目標病變的消失。任何病理淋巴結(無論是目標或非目標)必須在短軸上減小至＜ 10 mm。・部分反應(PR)：目標病變直徑的總和有至少30%降低，採用參考基線總和直徑。・進行性疾病(PD)：目標病變直徑的總和有至少20%增加，採用參考研究中最小的總和(此包括基線總和，若其為研究中最小的)。除了20%的相對增加之外，總和亦必須展現至少5 mm的絕對增加。(注意：一或多個新的病變之出現亦被視為進程)。・穩定的疾病(SD)：既沒有足夠收縮來符合PR，亦沒有足夠增加來符合PD，採用參考研究中最小總和直徑。

2.3.2. 目標病變之評估的特別注意淋巴結：識別為目標病變之淋巴結應始終記錄實際短軸量測結果(在相同於基線檢查之解剖平面中所量測)，即使結點在研究中消退至低於10 mm。此意謂當淋巴結被包含為目標病變時，病變之「總和」可能不為零，即使滿足CR準則，因為一正常淋巴結係定義為具有＜10 mm之短軸。電子個案報導表(eCRF)或其他資料收集方法可因此設計成，可在分開的區段中記錄目標結點病變，其中為了符合CR條件，每一結點必須達成＜10 mm之短軸。針對PR、SD及PD，結點之實際短軸量測係要包括在目標病變之總和中。

變得「太小以至於無法量測」的目標病變：雖然在試驗上，在基線時記錄的所有病變(結點和非結點)應在每次後續評鑑時記錄其實際量測結果，即使非常小(例如，2 mm)。然而，有時在基線時記錄為目標病變的病變或淋巴結係在CT掃描上變得如此微小而使得放射科醫師可能對於指定一確切量測感到不放心，且可能將其報導為「太小以至於無法量測」。當此發生時，重要的是將一數值記錄在eCRF：・若放射科醫師的見解是病變很可能已經消失，則量測值應記錄為0 mm。若相信存在病變且為隱約可見的、但太小以至於無法量測，則應指定5 mm之一內定值，且應勾選「低於可量測限值」(BML) (注意：此規則將不太可能用於淋巴結，因為它們在正常時通常具有可界定的大小，且經常由脂肪包圍，諸如在腹膜後位中；然而，若相信存在一淋巴結且為隱約可見的、但太小以至於無法量測，則在此情形中亦應指定5 mm之內定值，且亦應勾選BML)。

此內定值係衍生自5 mm之CT切片厚度(但應不會隨著變化的CT切片厚度而改變)。這些病變之量測為可能是不可再現的，因此提供此內定值係將基於量測誤差來預防錯誤反應或進程。

治療時分裂或聚結之病變：當非結點病變「片段化」時，經片段化之部分的最長直徑應一起添加以計算目標病變總和。相似地，當病變聚結，可維持它們之間的一平面，其將有助於獲得每一個別病變的最大直徑量測。若病變已真正聚結以使得它們不再為分開的，則在此情況下，最長直徑之向量應為「聚結病變」之最大最長直徑。

2.3.3. 非目標病變之評鑑儘管一些非目標病變實際上可為可量測的，但它們無需被量測，反之應僅在規程中規定的時間點定性評估。

完全反應：所有非目標病變的消失及腫瘤標誌位準的正規化。所有淋巴結的大小必須是非病理性的(＜ 10 mm短軸)。

非CR/非PD：一或多個非目標病變之持久性及/或腫瘤標誌位準之維持高於正常限值。

進行性疾病：現存非目標病變之明確進程。(注意：一或多個新的病變之出現亦被視為進程)。

2.3.4. 非目標疾病進程之評估的特別註解非目標疾病進程之概念需要如下列的額外解釋：當患者亦患有可量測的疾病時：

在此設定下，為了以非目標疾病為基礎來達成「明確進程」，必須有非目標疾病中實質上惡化的一整體位準，以使得即使在目標疾病中存在SD或PR之情況下，整體腫瘤負擔已充分增加以應受療法之中斷。在一或多個非目標病變之大小上的適度「增加」通常不足以符合明確的進程狀態。面對目標疾病之SD或PR卻單單以非目標疾病之變化為基礎的整體進程的指定，係將因此為極罕見的。當患者僅具有不可量測之疾病時：

當具有可量測疾病不是試驗進入的一準則時，此情形在一些第III階段試驗中出現。相同於上文所述的一般概念在此適用，然而在此情況下，沒有可量測疾病評估作為因素計入非可量測疾病負擔增加的解釋中。因為非目標疾病惡化無法容易地定量(根據定義：若所有病變為真正不可量測的)，在評估患者之明確進程時可施用的一有用測試係要考量：是否基於非可量測疾病之改變的整體疾病負擔的增加，係在大小上為可比對於就可量測疾病宣告PD所將需要的增加：亦即代表「體積」上之額外73%增加(其等效於可量測病變中之20%直徑增加)的一腫瘤負擔增加。實例包括從「微量」至「大量」之胸膜積液的增加、從局部至廣布的淋巴管發炎疾病之增加，或可在規程中說明為「足以需要改變療法的」。若看到「明確進程」，則患者應被視為在該時點已具有整體PD。雖然使目標準則應用於非可量測的疾病將會是理想的，但該疾病的本質使它不可能如此；因此，該增加必須係顯著的。

2.3.5. 新病變新的惡性病變之出現表示疾病進程；因此，一些用於偵測新病變之註釋係重要的。沒有特別準則來識別新的放射線攝影的病變；然而，新病變之發現應為明確的：亦即，不是由於掃描技術的差異、成像模態的變化、被認為是代表腫瘤以外之東西的發現(例如，一些「新的」骨骼病變可單純為既存病變之療癒或發作)。當患者的基線病變顯示部分或完全反應時，此係特別重要的。舉例而言，一肝臟病變的壞死可能在一CT掃描報告中為一「新」囊性病變，但其並非如此。

在基線時未掃描之解剖位置中於追蹤試驗上所識別的一病變，係被視為一新病變且將指示疾病進程。此一實例為患者在基線時患有內臟疾病且其在試驗中安排有一CT或MRI大腦而顯現轉移。患者之腦轉移被視為PD之證據，即使他/她尚未在基線時進行腦成像。

若一新病變為不確定的，例如因為它的大小係小的，則持續的療法及追蹤評鑑將澄清它是否代表真正的新的疾病。若重複掃描確認確實有一新病變，則進程應使用初始掃描日期來宣告。

(18) F-氟化去氧葡萄糖正子發射斷層攝影術(FDG-PET)：為了此研究之目的，進行性疾病不應僅基於FDG-PET結果來做成。所有暗示有進行性疾病之FDG-PET結果應藉由專門的解剖成像(CT或MRI)來確認。下列對RECIST v1.1的修改將施用於此研究：・在基線時之陰性FDG-PET，追蹤時之陽性FDG-PET為基於一新病變之PD的一徵象。*根據規程，藉由CT或MRI掃描確認新病變是需要的。・在基線時沒有FDG-PET，且在追蹤時有一陽性FDG-PET：ｏ若追蹤時的陽性FDG-PET對應於由CT確認之新的疾病徵象，則此係PD。ｏ若追蹤時的陽性FDG-PET在CT上並未被確認作為新的疾病位點，則需要額外的追蹤CT掃描以判定在該位點是否發生真正的進程(若如此，PD之日期將為初始異常*CT掃描之日期)。ｏ若追蹤時的陽性FDG-PET對應於CT上以解剖影像之基礎而言非進程之既存疾病位點，則此並非PD。 *反映出對RECIST v.1.1之研究特定修改

2.3.6. 最佳整體反應之評鑑最佳的整體反應係，在考量到任何確認要求下，從研究治療開始直到治療結束所記錄的最佳反應。偶爾，一反應可能沒被記錄而直到在治療結束之後，因此，若治療後評估係在最佳整體反應之判定上所要考慮的，規程應該要清楚。規程必須表明在進程之前引入的任何新療法將如何影響最佳反應之指定。患者的最佳整體反應指派將取決於目標及非目標疾病兩者之發現，並且亦將考慮新病變之出現。此外，取決於研究性質和規程要求，其亦可能需要確認性量測。具體而言，在反應為主要終點之非隨機化試驗中，需要確認PR或CR來將其中一者視為「最佳整體反應」。此在下文進一步描述。 19.10 實施例19之參考資料

所有參考資料均藉此以其全文併入本文中。 1. Wang L, Rubinstein R, Lines JL, Wasiuk A, Ahonen C, Guo Y, Lu LF, Gondek D, Wang Y, Fava RA, Fiser A, Almo S, Noelle RJ: VISTA, a novel mouse Ig superfamily ligand that negatively regulates T cell responses. J Exp Med 208:577-92, 2011. 2. Flies DB, Wang S, Xu H, Chen L: Cutting edge: A monoclonal antibody specific for the programmed death-1 homolog prevents graft-versus-host disease in mouse models. J Immunol 187:1537-41, 2011. 3. Mehta N, Maddineni S, Mathews II, Sperberg APR, Huang PS, Cochran JR: Structure and Functional Binding Epitope of V-domain Ig Suppressor of T Cell Activation. Cell Rep 28:2509-2516 e5, 2019. 4. Johnston RJ, Su LJ, Pinckney J, Critton D, Boyer E, Krishnakumar A, Corbett M, Rankin AL, Dibella R, Campbell L, Martin GH, Lemar H, Cayton T, Huang RY, Deng X, Nayeem A, Chen H, Ergel B, Rizzo JM, Yamniuk AP, Dutta S, Ngo J, Shorts AO, Ramakrishnan R, Kozhich A, Holloway J, Fang H, Wang YK, Yang Z, Thiam K, Rakestraw G, Rajpal A, Sheppard P, Quigley M, Bahjat KS, Korman AJ: VISTA is an acidic pH-selective ligand for PSGL-1. Nature 574:565-570, 2019. 5. Li N, Xu W, Yuan Y, Ayithan N, Imai Y, Wu X, Miller H, Olson M, Feng Y, Huang YH, Jo Turk M, Hwang ST, Malarkannan S, Wang L: Immune-checkpoint protein VISTA critically regulates the IL-23/IL-17 inflammatory axis. Sci Rep 7:1485, 2017. 6. Borggrewe M, Grit C, Den Dunnen WFA, Burm SM, Bajramovic JJ, Noelle RJ, Eggen BJL, Laman JD: VISTA expression by microglia decreases during inflammation and is differentially regulated in CNS diseases. Glia 66:2645-2658, 2018. 7. Han X, Vesely MD, Yang W, Sanmamed MF, Badri T, Alawa J, Lopez-Giraldez F, Gaule P, Lee SW, Zhang JP, Nie X, Nassar A, Boto A, Flies DB, Zheng L, Kim TK, Moeckel GW, McNiff JM, Chen L: PD-1H (VISTA)-mediated suppression of autoimmunity in systemic and cutaneous lupus erythematosus. Sci Transl Med 11, 2019. 8. Sergent PA, Plummer SF, Pettus J, Mabaera R, DeLong JK, Pechenick DA, Burns CM, Noelle RJ, Ceeraz S: Blocking the VISTA pathway enhances disease progression in (NZB x NZW) F1 female mice. Lupus 27:210-216, 2018. 9. Yoon KW, Byun S, Kwon E, Hwang SY, Chu K, Hiraki M, Jo SH, Weins A, Hakroush S, Cebulla A, Sykes DB, Greka A, Mundel P, Fisher DE, Mandinova A, Lee SW: Control of signaling-mediated clearance of apoptotic cells by the tumor suppressor p53. Science 349:1261669, 2015. 10. Liu J, Yuan Y, Chen W, Putra J, Suriawinata AA, Schenk AD, Miller HE, Guleria I, Barth RJ, Huang YH, Wang L: Immune-checkpoint proteins VISTA and PD-1 nonredundantly regulate murine T-cell responses. Proc Natl Acad Sci U S A 112:6682-7, 2015. 11. Keir ME, Freeman GJ, Sharpe AH: PD-1 regulates self-reactive CD8+ T cell responses to antigen in lymph nodes and tissues. J Immunol 179:5064-70, 2007. 12. Wang G, Tai R, Wu Y, Yang S, Wang J, Yu X, Lei L, Shan Z, Li N: The expression and immunoregulation of immune checkpoint molecule VISTA in autoimmune diseases and cancers. Cytokine Growth Factor Rev, 2020. 13. El Tanbouly MA, Zhao Y, Nowak E, Li J, Schaafsma E, Le Mercier I, Ceeraz S, Lines JL, Peng C, Carriere C, Huang X, Day M, Koehn B, Lee SW, Silva Morales M, Hogquist KA, Jameson SC, Mueller D, Rothstein J, Blazar BR, Cheng C, Noelle RJ: VISTA is a checkpoint regulator for naive T cell quiescence and peripheral tolerance. Science 367, 2020. 14. Le Mercier I, Chen W, Lines JL, Day M, Li J, Sergent P, Noelle RJ, Wang L: VISTA Regulates the Development of Protective Antitumor Immunity. Cancer Res 74:1933-44, 2014. 15. Borggrewe M, Kooistra SM, Noelle RJ, Eggen BJL, Laman JD: Exploring the VISTA of microglia: immune checkpoints in CNS inflammation. J Mol Med (Berl). 2020 Aug 27. doi: 10.1007/s00109-020-01968-x. Online ahead of print. 16. Li Wang 1, Rotem Rubinstein, Janet L Lines, Anna Wasiuk, Cory Ahonen, Yanxia Guo, Li-Fan Lu, David Gondek, Yan Wang, Roy A Fava, Andras Fiser, Steve Almo, Randolph J Noelle. VISTA, a novel mouse Ig superfamily ligand that negatively regulates T cell responses. J Exp Med 208(3):577-92, 2011. 17. Gao J, Ward JF, Pettaway CA, Shi LZ, Subudhi SK, Vence LM, Zhao H, Chen J, Chen H, Efstathiou E, Troncoso P, Allison JP, Logothetis CJ, Wistuba, II, Sepulveda MA, Sun J, Wargo J, Blando J, Sharma P: VISTA is an inhibitory immune checkpoint that is increased after ipilimumab therapy in patients with prostate cancer. Nat Med 23:551-555, 2017. 18. Kakavand H, Jackett LA, Menzies AM, Gide TN, Carlino MS, Saw RPM, Thompson JF, Wilmott JS, Long GV, Scolyer RA: Negative immune checkpoint regulation by VISTA: a mechanism of acquired resistance to anti-PD-1 therapy in metastatic melanoma patients. Mod Pathol 30:1666-1676, 2017. 19. Xu W, Hiếu T, Malarkannan S, Wang L. The structure, expression, and multifaceted role of immune-checkpoint protein VISTA as a critical regulator of anti-tumor immunity, autoimmunity, and inflammation. Cell Mol Immunol. 15(5):438-446, 2018. 20. Wang J, Wu G, Manick B, Hernandez V, Renelt M, Erickson C, Guan J, Singh R, Rollins S, Solorz A, Bi M, Li J, Grabowski D, Dirkx J, Tracy C, Stuart T, Ellinghuysen C, Desmond D, Foster C, Kalabokis V: VSIG-3 as a ligand of VISTA inhibits human T-cell function. Immunology 156:74-85, 2019. 21. Mulati K, Hamanishi J, Matsumura N, Chamoto K, Mise N, Abiko K, Baba T, Yamaguchi K, Horikawa N, Murakami R, Taki M, Budiman K, Zeng X, Hosoe Y, Azuma M, Konishi I, Mandai M: VISTA expressed in tumour cells regulates T cell function. Br J Cancer 120:115-127, 2019. 22. Kondo Y, Ohno T, Nishii N, Harada K, Yagita H, Azuma M: Differential contribution of three immune checkpoint (VISTA, CTLA-4, PD-1) pathways to antitumor responses against squamous cell carcinoma. Oral Oncol 57:54-60, 2016. 23. Blando J, Sharma A, Higa MG, Zhao H, Vence L, Yadav SS, Kim J, Sepulveda AM, Sharp M, Maitra A, Wargo J, Tetzlaff M, Broaddus R, Katz MHG, Varadhachary GR, Overman M, Wang H, Yee C, Bernatchez C, Iacobuzio-Donahue C, Basu S, Allison JP, Sharma P: Comparison of immune infiltrates in melanoma and pancreatic cancer highlights VISTA as a potential target in pancreatic cancer. Proc Natl Acad Sci U S A 116:1692-1697, 2019. 24. Muller S, Victoria Lai W, Adusumilli PS, Desmeules P, Frosina D, Jungbluth A, Ni A, Eguchi T, Travis WD, Ladanyi M, Zauderer MG, Sauter JL: V-domain Ig-containing suppressor of T-cell activation (VISTA), a potentially targetable immune checkpoint molecule, is highly expressed in epithelioid malignant pleural mesothelioma. Mod Pathol 33:303-311, 2020. 25. Chung YS, Kim M, Cha YJ, Kim KA, Shim HS: Expression of V-set immunoregulatory receptor in malignant mesothelioma. Mod Pathol 33:263-270, 2020. 26. Hmeljak J, Sanchez-Vega F, Hoadley KA, Shih J, Stewart C, Heiman D, Tarpey P, Danilova L, Drill E, Gibb EA, Bowlby R, Kanchi R, Osmanbeyoglu HU, Sekido Y, Takeshita J, Newton Y, Graim K, Gupta M, Gay CM, Diao L, Gibbs DL, Thorsson V, Iype L, Kantheti H, Severson DT, Ravegnini G, Desmeules P, Jungbluth AA, Travis WD, Dacic S, Chirieac LR, Galateau-Salle F, Fujimoto J, Husain AN, Silveira HC, Rusch VW, Rintoul RC, Pass H, Kindler H, Zauderer MG, Kwiatkowski DJ, Bueno R, Tsao AS, Creaney J, Lichtenberg T, Leraas K, Bowen J, Network TR, Felau I, Zenklusen JC, Akbani R, Cherniack AD, Byers LA, Noble MS, Fletcher JA, Robertson AG, Shen R, Aburatani H, Robinson BW, Campbell P, Ladanyi M: Integrative Molecular Characterization of Malignant Pleural Mesothelioma. Cancer Discov 8:1548-1565, 2018. 27. Villarroel-Espindola, F., Yu, X., Datar, I., Mani, N., Sanmamed, M. F., Velcheti, V., … Schalper, K. A. (2017). Spatially resolved and quantitative analysis of VISTA/PD-1H as a novel immunotherapy target in human non-small cell lung cancer. Clinical Cancer Research, 24(7), clincanres.2542.2017 28. Brcic L, Stanzer S, Krenbek D, Gruber-Moesenbacher U, Absenger G, Quehenberger F, Valipour A, Lindenmann J, Stoeger H, Al Effah M, Fediuk M, Balic M, Popper HH: Immune cell landscape in therapy-naive squamous cell and adenocarcinomas of the lung. Virchows Arch 472:589-598, 2018. 29. Xiong D, Pan J, Yin Y, Jiang H, Szabo E, Lubet RA, Wang Y, You M: Novel mutational landscapes and expression signatures of lung squamous cell carcinoma. Oncotarget 9:7424-7441, 2018. 30. Manzoni M, Bolognesi MM, Antoranz A, Mancari R, Carinelli S, Faretta M, Bosisio FM, Cattoretti G: The Adaptive and Innate Immune Cell Landscape of Uterine Leiomyosarcomas. Sci Rep 10:702, 2020. 31. Bang YJ, Sosman J, Daud A, Meric-Bernstam F, Garcia-Corbacho J, Patel M, Lee J, Kim K, Brody J, Rha SY, Martin MG, Aix SP, Hamilton E, Ramchandren R, Ahn M, Spicer J, Pacey S, Falchook G, Wang H, Xu G, Adams L, Ma AWS, Gharavi R, Eves PT, Tuck D, Powderly J: Phase 1 study of CA-170, a first-in-class, orally available, small molecule immune checkpoint inhibitor (ICI) dually targeting VISTA and PDL1, in patients with advanced solid tumors or lymphomas, SITC, 2018 32. Radhakrishnan V, Banavali S, Gupta S, Kumar A, Deshmukh C, Nag S, Beniwal S, Gopichand M, Naik R, Lakshmaiah K, Mandavia D, Ramachandra M, Prabhash K: Excellent CBR and prolonged PFS in non-squamous NSCLC with oral CA-170, a dual inhibitor of VISTA and PD-L1, ESMO, 2019 33. Zauderer MG, Brody J, Marron T, Pacey S, Martell RE, Wang H, Spicer J: First-in-Class Small Molecule CA-170 Targeting VISTA: A Report on Efficacy Outcomes from a Cohort of 12 Malignant Pleural Mesothelioma (MPM) Patients in Study CA-170-101, SITC 2019. National Harbor, MD, 2019. 34. Musielak B, Kocik J, Skalniak L, Magiera-Mularz K, Sala D, Czub M, Stec M, Siedlar M, Holak TA, Plewka J: CA-170 - A Potent Small-Molecule PD-L1 Inhibitor or Not? Molecules 24, 2019. 35. Blevins DJ, Hanley R, Bolduc T, et al. In Vitro Assessment of Putative PD-1/PD-L1 Inhibitors: Suggestions of an Alternative Mode of Action. ACS Medicinal Chemistry Letters; 10 (8), 1187-1192, 2019. DOI: 10.1021/acsmedchemlett.9b00221 35. Crawley SC, Hsu JY, Tian H, Compositions and methods for targeting a pathway. Patent Cooperation Treaty (PCT) number PCT/US2015/031539. Information available from: https://patentscope.wipo.int/search/en/detail.jsf?docId=WO2015187359 (2015). 36. Li K, Tian H. Development of small-molecule immune checkpoint inhibitors of PD-1/PD-L1 as a new therapeutic strategy for tumour immunotherapy. J Drug Target. 2019 Mar;27(3):244-256. Review. 37. Mahoney KM, Freeman GJ. Acidity changes immunology: a new VISTA pathway. Nat Immunol. 2020 Jan;21(1):13-16. 38. KEYTRUDA™(pembrolizumab), Merck Sharp & Dohme Corp. US Prescribing Information, 05/2021. https://www.merck.com/product/usa/pi_circulars/k/keytruda/keytruda_pi.pdf 39. ClinicalTrials.gov [Internet]. Bethesda (MD): National Library of Medicine (US). Identifier NCT02671955, A study of safety, pharmacokinetics, pharmacodynamics of JNJ-61610588 in participants with advanced cancer; 2016 Feb 2. Available from: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02671955 40. ClinicalTrials.gov [Internet]. Bethesda (MD): National Library of Medicine (US). Identifier NCT04475523, Phase 1 study of CI-8993 anti-VISTA antibody in patients with advanced solid tumor malignancies; 2020 Jul 17. Available from: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02671955 41. ClinicalTrials.gov [Internet]. Bethesda (MD): National Library of Medicine (US). Identifier NCT04564417, First-in-human (FIH) study of w0180 as single agent and in combination with pembrolizumab in adults with locally advanced or metastatic solid tumors; 2020 Sep 25. Available from: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02671955 42. ClinicalTrials.gov [Internet]. Bethesda (MD): National Library of Medicine (US). Identifier NCT02812875, A study of ca-170 (oral pd-l1, pd-l2 and vista checkpoint antagonist) in patients with advanced tumors and lymphomas; 2016 Jun 24. Available from: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02671955 43. Disis, Mary L. Immune Regulation of Cancer. Journal of Clinical Oncology.2010; 28 (29):4531-4538 44. Dudley, Mark E., Wunderlich, John E.,Yang, James C., Sherry, Richard M., Topalian, Suzzane L., Restifo, Nicholas P., Royal, Richard E., Kammula, Udai, White, Don E., Mavroukakis, Sharon A., et al. Adoptive Cell Transfer Therapy Following Non-Myeloablative but Lymphodepleting Chemotherapy for the Treatment of Patients With Refractory Metastatic Melanoma. Journal of Clinical Oncology.2005; 0732-183 45. Hunder NN, Wallen H, Cao J, Hendricks DW, Reilly JZ, Rodmyre R, et al. Treatment of metastatic melanoma with autologous CD4+ T cells against NY-ESO-1. N Engl J Med 2008;358(25):2698-703 46. Greenwald, Rebecca J., Freeman, Gordon J., and Sharpe, Arlene H. The B7 Family Revisited. Annual Reviews.2005; 23:515-48 47. Okazaki T, Maeda A, Nishimura H, Kurosaki T, Honjo T. PD-1 immunoreceptor inhibits B cell receptor-mediated signaling by recruiting src homology 2-domain-containing tyrosine phosphatase 2 to phosphotyrosine. Proc Natl Acad Sci U S A 2001;98(24):13866-71. 48. Zhang, PD., Xuewu, Schwartz, Jean-Claude D., Guo, Xiaoling, Bhatia, Sumeena, Cao, Erhu, Chen, Lieping, Zhang, Zhong-Yin, Edidin, Michael A., Nathenson, Stanley G. Almo, Steven C. Structural and Functional Analysis of the Costimulatory Receptor Programmed Death-1. Immunity.2004; 337-347 49. Chemnitz, Jens M., Parry, Richard V., Nichols, Kim E., June, Carl H., Riley, James L., SHP-1 and SHP-2 Associate with Immunoreceptor Tyrosine-Based Switch Motif of Programmed Death 1 upon Primary Human T Cell Stimulation, but Only Receptor Ligation Prevents T Cell Activation. The Journal of Immunology.2004, 173: 945-954 50. Shepard, Kelly-Ann., Fitz, Lori J., Lee, Julie M., Benander, Christina, George, Judith A., Wooter, Joe, Qiu, Yongchang, Jussif, Jason M., Carter, Laura L., Wood, Clive R., Chaudhary, Divya. PD-1 inhibits T-cell receptor induced phosphorylation of the ZAP70/CD3 signalosome and downstream signaling to PKC. FEBS Letters. 2004; 0014-5793 51. Riley, James L., PD-1 signaling in primary T cells. Immunological Reviews. 2009; 0105-2896 52. Parry, Richard V., Chemnitz, Jens M., Frauwirth, Kenneth A., Lanfranco, Anthony R., Braunstein, Inbal., Kobayashi, Sumire V., Linsley, Peter S., Thompson, 4 Craig B. and Riley, James L. CTLA-4 and PD-1 Receptors Inhibit T-Cell Activation by Distinct Mechanisms. MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY, 2005; 0270-7306Pilon-Thomas, S., et al., Blockade of programmed death ligand 1 enhances the therapeutic efficacy of combination immunotherapy against melanoma. J Immunol, 2010. 184(7): p. 3442-9. 53. Francisco, Loise M., Sage, Peter T., and Sharpe, Arlene H. The PD-1 pathway in tolerance and autoimmunity. Immunological Reviews.2010; 0105-2896 54. Hirano, F., et al., Blockade of B7-H1 and PD-1 by monoclonal antibodies potentiates cancer therapeutic immunity. Cancer Res, 2005. 65(3): p. 1089-96. 55. Blank, C., et al., PD-L1/B7H-1 inhibits the effector phase of tumor rejection by T cell receptor (TCR) transgenic CD8+ T cells. Cancer Res, 2004. 64(3): p. 1140-5. 56. Weber, J., Immune checkpoint proteins: a new therapeutic paradigm for cancer--preclinical background: CTLA-4 and PD-1 blockade. Semin Oncol, 2010. 37(5): p. 430-9. 57. Strome, S.E., et al., B7-H1 blockade augments adoptive T-cell immunotherapy for squamous cell carcinoma. Cancer Res, 2003. 63(19): p. 6501-5. 58. Spranger, S., et al., Mechanism of tumor rejection with doublets of CTLA-4, PD-1/PD-L1, or IDO blockade involves restored IL-2 production and proliferation of CD8(+) T cells directly within the tumor microenvironment. J Immunother Cancer, 2014. 2: p. 3. 59. Curran, M.A., et al., PD-1 and CTLA-4 combination blockade expands infiltrating T cells and reduces regulatory T and myeloid cells within B16 melanoma tumors. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(9): p. 4275-80. 60. Pilon-Thomas, S., et al., Blockade of programmed death ligand 1 enhances the therapeutic efficacy of combination immunotherapy against melanoma. J Immunol, 2010. 184(7): p. 3442-9. 61. Nomi, T., et al., Clinical significance and therapeutic potential of the programmed death-1 ligand/programmed death-1 pathway in human pancreatic cancer. Clin Cancer Res, 2007. 13(7): p. 2151-7.

(無)

現將參看隨附圖式論述例示本發明之原理的實施態樣及實驗。

圖1A 至1D 。直方圖顯示流式細胞分析術所判定由抗-VISTA抗體所作的細胞染色。直方圖顯示由抗-VISTA抗體殖株(1A) VSTB112 (陽性對照；WO 2015/097536)、(1B) 4-M2-D5、(1C) 9M2-C12或(1D) 4M2-C12 (本文中亦稱為「V4」)所作的HEK293細胞(沒有表現VISTA)或HEK293 VISTA過度表現細胞(HEK293 VISTA O/E)之染色。

圖2 。直方圖顯示流式細胞分析術所判定由抗-VISTA抗體所作的細胞染色。直方圖顯示由抗-VISTA抗體殖株9M2C12、V4及殖株VSTB112或一同型對照抗體所作的HEK293細胞(其沒有表現VISTA)或HEK293 VISTA過度表現細胞(HEK293 VISTA O/E)之染色。分析未染色之細胞作為陰性對照。

圖3A 至3C 。感應圖譜顯示抗-VISTA抗體殖株V4對人類、食蟹獼猴及鼠類VISTA的結合親和力分析的結果。(3A)顯示對人類VISTA、(3B)顯示對食蟹獼猴VISTA、以及(3C)顯示對鼠類VISTA的結合。顯示Kon、Koff及K _D。

圖4A 至4B 。圖形顯示抗-VISTA抗體對不同蛋白質的結合分析結果。4A顯示抗-VISTA抗體殖株V4對人類、食蟹獼猴及鼠類VISTA、人類PD-L1及人類HER3的結合，由ELISA所判定。4B顯示抗-VISTA抗體殖株V4對人類VISTA、PD-1、PD-L1、B7H3、B7H4、B7H6、B7H7、CTLA4及一不相干抗原之結合。

圖5 。感應圖譜顯示VISTA及VSIG-3之間的結合分析結果。

圖6 。圖形顯示由抗-VISTA抗體殖株5M1-A11及9M2-C12抑制VISTA與VSIG-3之間的結合之分析結果。

圖7A 及7B 。圖形及長條圖顯示以抗-VISTA抗體殖株13D5p處理對於IFN-γ、IL-2及IL-17A生產的效應於混合淋巴球反應(MLR)檢定法中之分析結果。(7A)顯示在檢定法結束時細胞培養物上清液中所偵測到的細胞激素位準，以及(7B)顯示所指示的細胞激素之位準之倍數變化(「FC」)。

圖8A 及8B 。圖形及長條圖顯示抗-PD-L1抗體殖株MIH5 (ThermoFisher Scientific)處理對於IFN-γ、IL-2及IL-17A生產的效應於混合淋巴球反應(MLR)檢定法中之分析結果。(8A)顯示在檢定法結束時細胞培養物上清液中所偵測到的細胞激素位準，以及(8B)顯示所指示的細胞激素之位準之倍數變化(「FC」)。

圖9 。圖形顯示以微差掃描螢光分析法進行之抗-VISTA抗體殖株V4之穩定性的分析結果。

圖10 。圖形顯示藉由粒徑篩析層析法之抗-VISTA抗體殖株V4之分析結果。

圖11 。影像顯示藉由SDS-PAGE及西方墨點法所進行之抗-VISTA抗體殖株V4表現的分析結果。道：M1 = TaKaRa蛋白質標誌Cat. No. 3452；M2 = GenScript蛋白質標誌Cat. No. M00521；1 = 還原條件；2 = 非還原條件；P = 陽性對照：小鼠IgG1，κ (Sigma Cat. No. M9269)。對於西方墨點法，使用的初級抗體為山羊抗小鼠IgG (H+L)抗體(LI-COR，Cat. No. 926-32210)。

圖12 。圖形及表顯示由抗體血清之ELISA分析所作的抗-VISTA抗體殖株V4之藥物動力學分析的結果。

圖13 。圖形顯示同基因型細胞株衍生的小鼠結腸癌瘤模型中抗-VISTA抗體殖株V4的活體內抗癌活性分析結果。

圖14 。長條圖顯示同基因型細胞株衍生的小鼠結腸癌瘤模型在用靶向所指示之免疫查核點分子的單一療法或組合療法治療後，第15天之腫瘤生長抑制。此研究使用的抗體係如下列：抗-VISTA=殖株V4、抗-PD-L1=殖株10F.9G2、抗-TIGIT=殖株1G9、抗-LAG-3=殖株C9B7W，及抗-TIM-3 =殖株RMT3-23。

圖15 。長條圖顯示同基因型細胞株衍生的小鼠結腸癌瘤模型之整塊腫瘤中每100,000個細胞的MDSC的數目、及CD8+ T細胞：Treg之比率，其係在用抗-VISTA抗體殖株V4單獨治療、抗-PD-L1抗體殖株10F.9G2單獨治療、用抗-VISTA抗體殖株V4與抗-PD-L1抗體殖株10F.9G2組合治療，或用PBS (陰性對照)處理後，由整塊腫瘤的RNA-Seq分析法所判定。

圖16 。圖形顯示同基因型細胞株衍生的小鼠路易士肺癌瘤模型中抗-VISTA抗體殖株V4的活體內抗癌活性分析結果。

圖17 。圖形顯示同基因型細胞株衍生的小鼠黑色素瘤模型活體中抗-VISTA抗體殖株V4，作為單一療法或與抗-PD-1抗體RMP1-14 (Bio X Cell)組合，的活體內抗癌活性分析結果。

圖18 。長條圖顯示在投與單一劑量900 µg的抗-VISTA抗體殖株V4或等體積的載媒(PBS)作為陰性對照之後不同類型白血球細胞的數目。

圖19A 及19B 。長條圖顯示在投與單一劑量900 µg的抗-VISTA抗體殖株V4或等體積的載媒(PBS)作為陰性對照後，藉由評鑑(19A)肝臟及(19B)腎臟功能互相關聯值進行之肝毒性及腎毒性的分析。(19A)顯示丙胺酸轉胺酶(ALT)及天冬胺酸轉胺酶(AST)的位準，以及(19B)顯示血尿素氮(BUN)及肌酸酐(CREA)位準。

圖20 。圖形顯示抗-VISTA抗體殖株13D5-1對人類、食蟹獼猴及小鼠VISTA、以及人類PD-L1的結合之分析結果，由ELISA所判定。

圖21 。圖形顯示抗-VISTA抗體殖株13D5-13對人類及小鼠VISTA的結合之分析結果，由ELISA所判定。

圖22 。圖形顯示一細胞株衍生的小鼠結腸癌瘤模型中抗-VISTA抗體殖株13D5-1，單獨或與抗-PD-L1組合，的活體內抗癌活性分析結果。

圖23 。圖表顯示一細胞株衍生的小鼠乳癌瘤模型中抗-VISTA抗體殖株13D5-1的活體內抗癌活性分析結果。

圖24 。直方圖顯示流式細胞分析術所判定由抗-VISTA抗體所作的細胞染色。直方圖顯示由抗-VISTA抗體殖株4M2-B4、2M1-B12、4M2-C9、2M1-D2、4M2-D9、1M2-D2、5M1-A11、4M2-D5、4M2-A8及9M2-C12所作的HEK293細胞(沒有表現VISTA)或HEK293 VISTA過度表現細胞(HEK293 VISTA O/E)之染色。

圖25A 至25D 。感應圖譜顯示4M2-C12 mIgG1對(25A)小鼠FcγRIV、(25B)小鼠FcγRIII、(25C)小鼠FcγRIIb及(25D)小鼠FcRn的結合之分析結果。

圖26A 至26D 。感應圖譜顯示4M2-C12 mIgG2a對(26A)小鼠FcγRIV、(26B)小鼠FcγRIII、(26C)小鼠FcγRIIb及(26D)小鼠FcRn的結合之分析結果。

圖27A 至27D 。感應圖譜顯示4M2-C12 mIgG2a LALA PG對(27A)小鼠FcγRIV、(27B)小鼠FcγRIII、(27C)小鼠FcγRIIb及(27D)小鼠FcRn的結合之分析結果。

圖28A 至28D 。感應圖譜顯示4M2-C12 mIgG2a NQ對(28A)小鼠FcγRIV、(28B)小鼠FcγRIII、(28C)小鼠FcγRIIb及(28D)小鼠FcRn的結合之分析結果。

圖29A 至29C 。表總結4M2-C12 mIgG1、4M2-C12 mIgG2a、4M2-C12 mIgG2a LALA PG及4M2-C12 mIgG2a對小鼠FcγRIV、小鼠FcγRIII、小鼠FcγRIIb及小鼠FcRn的結合之分析結果。29A顯示計算的K _on值、29B顯示計算的K _dis值以及29C顯示計算的K _D值。

圖30A 至30C 。圖形顯示在一細胞株衍生的小鼠T細胞淋巴瘤模型中，呈mIgG2a及mIgG2a LALA PG型式的抗-VISTA抗體殖株4M2-C12的活體內抗癌活性分析結果。30A顯示不同治療組的資料，30B顯示載媒對照組及4M2-C12 mIgG2a治療組之個別小鼠的所獲得資料，以及30C顯示載媒對照組及4M2-C12 mIgG2a LALA PG治療組之個別小鼠的所獲得資料。

圖31A 及31B 。感應圖譜顯示由BLI所作的、不同的抗-VISTA抗體之間競爭對人類VISTA結合的分析結果。

圖32 。圖形顯示抗-VISTA抗體4M2-C12抑制VISTA與VSIG-3間的結合之分析結果。

圖33A 至33D 。長條圖顯示抗-VISTA抗體對經VISTA-Ig處理的T細胞恢復T細胞增殖能力之分析結果，由CFSE稀釋檢定法所判定。圖33A及33C顯示從使用經以1:1比率之促效劑抗-CD3抗體及VISTA-Ig塗覆之孔的條件下所獲得的結果，以及圖33B及33D顯示從使用經以2:1比率之促效劑抗-CD3抗體及VISTA-Ig塗覆之孔的條件下所獲得的結果。圖33A及33B顯示CFSE-低CD4+ T細胞的百分比，以及圖33C及33D顯示CFSE-低CD8+ T細胞的百分比。

圖34A 及34B 。長條圖顯示抗-VISTA抗體促進LPS-刺激之THP-1細胞生產IL-6的能力之分析結果。圖34A顯示使用4M2-C12獲得的結果，以及圖34B顯示使用VSTB112獲得的結果。

圖35 。長條圖顯示從被投與抗-VISTA抗體4M2-C12的小鼠於投與前2h，及投與後0.5 hr、6 hr、24 hr及96 hr所獲得的血液樣本中偵測到的IL-6位準。

圖36A 及36B 。圖形顯示在一細胞株衍生的小鼠結腸癌瘤模型中，抗-VISTA抗體4M2-C12 mIgG2a (V4)、抗-PD-1抗體(PD1)、或4M2-C12 mIgG2a與抗-PD-1抗體之組合治療的活體內抗癌活性分析結果。36A顯示不同治療組的資料，36B顯示載媒對照組及4M2-C12 mIgG2a + 抗-PD-1治療組中之個別小鼠所獲得的資料。

圖37 。長條圖顯示腫瘤浸潤CD45+細胞的百分比，該細胞為一細胞株衍生的小鼠結腸癌瘤模型第22天腫瘤之g-MDSC，係從以PBS (載媒)、抗-VISTA抗體4M2-C12 mIgG2a (V4)、抗-PD-1抗體(抗-PD1)或4M2-C12 mIgG2a與抗-PD-1抗體(組合)組合治療所治療的小鼠獲得。

圖38A 至38E 。長條圖顯示一細胞株衍生的小鼠結腸癌瘤模型第18天所獲得之血清中的(38A) IFNγ、(38B) IL-23、(38C) IL-10、(38D) IL-4、及(38E) IL-5位準，係從用PBS (載媒)、抗-VISTA抗體4M2-C12 mIgG2a (V4)、抗-PD-1抗體(PD1)或4M2-C12 mIgG2a及抗-PD-1抗體(V4+PD1)組合治療所治療的小鼠獲得。

圖39 。圖形顯示一細胞株衍生的小鼠結腸癌瘤模型第21天腫瘤中的Arg1 RNA表現位準，係從用PBS (載媒)、抗-VISTA抗體4M2-C12 mIgG2a (V4)、抗-PD-L1抗體(PDL1)或4M2-C12 mIgG2a及抗-PD-1抗體(V4 + PDL1)組合治療所治療的小鼠獲得。

圖40A 及40B 。圖形顯示在一細胞株衍生的小鼠黑色素瘤模型中，抗-VISTA抗體4M2-C12 mIgG2a (V4)、抗-PD-1抗體(PD1)、或4M2-C12 mIgG2a與抗-PD-1抗體之組合治療的活體內抗癌活性分析結果。40A顯示不同治療組的資料，40B顯示載媒對照組及4M2-C12 mIgG2a + 抗-PD-1治療組中之個別小鼠所獲得的資料。

圖41 。長條圖顯示腫瘤浸潤CD45+細胞的百分比，該細胞係為一細胞株衍生的小鼠黑色素瘤模型第18天腫瘤之g-MDSC，係從以PBS (載媒)、抗-VISTA抗體4M2-C12 mIgG2a (V4)、抗-PD-1抗體(抗-PD1)或4M2-C12 mIgG2a與抗-PD-1抗體(組合)組合治療所處理的小鼠獲得。

圖42 。圖形顯示在一細胞株衍生的小鼠T細胞白血病/淋巴瘤模型中，抗-VISTA抗體4M2-C12 mIgG2a (V4)、抗-PD-1抗體(抗-PD1)、或4M2-C12 mIgG2a與抗-PD-1抗體(V4 + 抗-PD1)之組合治療的活體內抗癌活性分析結果。

圖43 。長條圖顯示腫瘤浸潤CD45+細胞的百分比，該細胞係為一細胞株衍生的小鼠T細胞白血病/淋巴瘤模型第16天腫瘤之g-MDSC，係從以PBS (載媒)、抗-VISTA抗體4M2-C12 mIgG2a (V4)、抗-PD-1抗體(抗-PD1)或4M2-C12 mIgG2a與抗-PD-1抗體(組合)組合治療所處理的小鼠獲得。

圖44 。圖形顯示一細胞株衍生的小鼠結腸癌瘤模型之治療過程期間的小鼠重量，係用PBS (載媒)、抗-VISTA抗體4M2-C12 mIgG2a (V4)、抗-PD-L1抗體(抗-PDL1)、或4M2-C12 mIgG2a及抗-PD-1抗體(V4 + 抗-PDL1)組合治療。

圖45A 至45D 。感應圖譜及表顯示不同的抗-VISTA抗體對人類VISTA (45A)小鼠VISTA (45B)及人類PD-L1 (45C)的結合之分析結果，由生物層干涉術所判定。45D總結從45A及45B之感應圖譜所計算的動力學及熱力學常數。

圖46A 及46B 。感應圖譜及表顯示不同的抗-VISTA抗體對小鼠VISTA的結合之分析結果，由生物層干涉術所判定。45B總結從46A之感應圖譜所計算的動力學及熱力學常數。

圖47A 至47C 。感應圖譜及表顯示不同的抗-VISTA抗體對人類VISTA (47A)及小鼠VISTA (47B)的結合之分析結果，由生物層干涉術所判定。47C總結從47A及47B之感應圖譜所計算的動力學及熱力學常數。

圖48A 及48B 。感應圖譜及表顯示不同的抗-VISTA抗體對人類VISTA及小鼠VISTA及人類CD47的結合之分析結果，由生物層干涉術所判定。48B總結從48A之感應圖譜所計算的動力學及熱力學常數。

圖49A 至49C 。濃度-反應圖形及表顯示不同的抗體對人類VISTA (49A)或小鼠VISTA (49B)之結合的分析結果，由ELISA所判定。49C顯示不同的抗體對所指示蛋白質之結合的EC50值(nM)。

圖50A 至50C 。濃度-反應圖形及表顯示不同的抗體對人類VISTA (50A)及小鼠VISTA (50B)之結合的分析結果，由ELISA所判定。50C顯示不同的抗體對所指示蛋白質之結合的EC50值(nM)。

圖51A 至51C 。濃度-反應圖形及表顯示不同的抗體對人類VISTA (51A)及小鼠VISTA (51B)之結合的分析結果，由ELISA所判定。51C顯示不同的抗體對所指示蛋白質之結合的EC50值(nM)。

圖52A 至52J 。熔化圖形及表顯示以微差掃描螢光分析法進行之不同的抗-VISTA抗體的穩定性分析的結果。52A至52I顯示就測試抗體製備物及無蛋白質對照(NPC)製備物，三重複，所獲得的原始資料之第一階導數(derivate)。52J總結52A至52I的結果。

圖53 。表總結不同的抗-VISTA抗體之安全性及免疫原性的電腦模擬分析結果。

圖54 。圖形顯示抗-VISTA抗體4M2-C12抑制VISTA與VSIG-3間的結合之分析結果。

圖55 。長條圖顯示抗-VISTA抗體殖株4M2-C12 (V4)抑制VISTA與PSGL-1之間的結合之分析結果。

圖56A 至56G 。濃度-反應圖形顯示(56A) V4、(56B) V4-C24、(56C) V4-C26、(56D) V4-C27、(56E) V4-C28、(56F) V4-C30及(56G) V4-C31對人類VISTA、PD-L1、B7H3、B7H4、B7H6、B7H7、PD-1及CTLA-4的結合之分析結果，由ELISA所判定。

圖57A 至57I 。濃度-反應圖形顯示(57A) V4、(57B) V4-C24、(57C) V4-C26、(57D) V4-C27、(57E) V4-C28、(57F) V4-C30 (57G) V4-C31及(57H)同型匹配的對照抗體對人類VISTA、小鼠VISTA、大鼠VISTA及cyno VISTA的結合之分析結果，由ELISA所判定。57I顯示不同抗體對所指示蛋白質之結合的EC50值(M)。

圖58A 至58C 。直方圖顯示流式細胞分析術所判定的由不同抗-VISTA抗體或同型對照抗體所作的細胞之染色。58A顯示抗體對野生型、未轉染HEK293-6E細胞之結合。58B顯示抗體對過度表現人類VISTA蛋白的HEK293-6E細胞之結合。58C顯示抗體對過度表現小鼠VISTA蛋白的HEK293-6E細胞之結合。1 = 無抗體(未染色)、2 = 人類IgG1同型對照抗體、3 = VSTB112 IgG1、4 = 4M2-C12 IgG1、5 = V4-C24 IgG1、6 = V4-C26 IgG1、7 = V4-C27 IgG1、8 = V4-C28 IgG1、9 = V4-C30 IgG1及10 = V4-C31 IgG1。

圖59A 及59B 。影像顯示使用抗-VISTA抗體之人類組織的免疫組織化學染色。59A顯示由4M2-C12 mIgG2a所作的正常人類脾臟組織之染色，及59B顯示由4M2-C12 mIgG2a所作的正常人類卵巢組織之染色，係在於所指示的放大倍數。

圖60A 至60D 。直方圖及長條圖顯示抗-VISTA抗體4M2-C12-hIgG1 (V4)或VSTB112釋放活化的T細胞免於受VISTA-表現細胞壓制之能力的分析結果。60A及60B顯示在VISTA-表現細胞及所指示量之抗-VISTA抗體存在下歷時5天之T細胞增殖的CFSE稀釋分析結果。60C及60D顯示5天後細胞培養物上清液中所偵測到的IFNγ (60C)及TNFa (60D)濃度。

圖61A 至61C 。長條圖顯示抗-VISTA抗體4M2-C12-hIgG1 (V4)或VSTB112促進LPS-刺激之THP-1細胞生產細胞激素的能力之分析結果。61A顯示細胞培養物上清液中偵測到的IL-6濃度，以及61B顯示在所指示量的抗-VISTA抗體存在下歷時24小時之細胞的細胞培養物上清液中偵測到的TNFa濃度。61C顯示THP1細胞為VISTA-表現細胞；顯示出培養物中判定表現VISTA之細胞的百分比。1=未染色的、2=以同型匹配之對照抗體染色的細胞、3=以20 µg V4染色的細胞、4=以40 µg V4染色的細胞，以及5=以20 µg VSTB112染色的細胞。

圖62 。長條圖顯示抗-VISTA抗體4M2-C12-hIgG1或4M2-C12-hIgG4促進LPS-刺激之THP-1細胞生產IL-6的能力之分析結果。顯示出細胞培養物上清液中偵測到的IL-6濃度。

圖63A 至63D 。圖形及表顯示由抗體血清的ELISA分析所作的抗-VISTA抗體殖株4M2-C12-hIgG1及4M2-C12-hIgG4之藥物動力學分析的結果。所示為(63A) 10 mg/kg、(63B) 25 mg/kg、(63C) 100 mg/kg或(63D) 250 mg/kg抗體投與後的結果。

圖64A 至64C 。表顯示50 mg/kg 4M2-C12-hIgG1或等體積的PBS投與之後96小時之BALB/C小鼠之代表性血液剖析。64A顯示紅血球細胞隔區的分析結果，64B顯示白血球細胞隔區的分析結果，以及64C顯示肝臟及腎臟功能互相關聯值的分析結果。RBC=紅血球細胞，MVC=平均紅血球體積，MCH=平均紅血球血紅素，MCHC=平均紅血球血紅素濃度，WBC=白血球細胞，ALT=丙胺酸轉胺酶，ALP=鹼性磷酸酶，CREA=肌酸酐，及BUN=血尿素氮。

圖65A 至65C 。表顯示250 mg/kg 4M2-C12-hIgG1、250 mg/kg 4M2-C12-hIgG4或等體積的PBS投與後，SD大鼠之代表性血液剖析。65A顯示紅血球細胞隔區的分析結果，65B顯示白血球細胞隔區的分析結果，以及65C顯示肝臟、腎臟及胰臟功能關聯值、及電解質位準的分析結果。RBC=紅血球細胞，MVC=平均紅血球體積，MCH=平均紅血球血紅素，MCHC=平均紅血球血紅素濃度，WBC=白血球細胞，ALT=丙胺酸轉胺酶，ALP=鹼性磷酸酶，CREA=肌酸酐，BUN=血尿素氮，GLU=升糖素，AMY=澱粉酶，NA=鈉，K=鉀，P=磷及CA=鈣。

圖66 。感應圖譜顯示由生物層干涉術所判定之抗-VISTA抗體V4-C26、13F3及VSTB112對人類VISTA及小鼠VISTA之背景減去之結合訊號。

圖67A 及67B 。圖形顯示在一CT26細胞衍生的小鼠結腸癌瘤模型中投與V4-C26.hIgG4對小鼠之腫瘤體積及存活的效應。(67A)顯示隨時間推移之腫瘤體積，且(67B)顯示投與抗-VISTA抗體V4-C26 hIgG4或載媒對照之小鼠隨著時間推移的存活百分比。

圖68A 至68H 。散佈圖及影像顯示健康組織及於某些癌症內細胞的VISTA表現，以及某些癌症內的VSIG3表現。(68A)由包含68,000個健康PBMC之10X基因體資料的RNA單細胞分析所作的免疫細胞叢識別。(68B、68C)在不同細胞叢中VISTA表現之單細胞RNA-seq資料的UMAP及總結繪圖，其中cDC係指典型樹突細胞、pDC係指漿細胞樣樹突細胞，及HSPC係指造血幹及先驅細胞。(68D)以0.02 mg/ml之4M2-C12-mIgG2a染色之健康脾臟、骨髓、乳房及肺臟TMA (n=99)的代表性免疫組織化學染色；放大倍數，200X。(68E)三重陰性乳癌(TNBC；n=126)與非小細胞肺癌(NSCLC；n=140) TMA中之VISTA以0.02 mg/ml之4M2-C12-mIgG2a染色之代表性染色；放大倍數，200X，以及(68F) TNBC、NSCLC、肝細胞癌瘤(HCC)及間皮瘤患者對於VISTA有陰性(0)、低(1)、中(2)或高(3)染色強度的%。(68G) TNBC (n=126)與NSCLC (n=140) TMA中以0.003 mg/ml之抗-VSIG3抗體染色之VSIG3代表性染色；放大倍數、200X，以及(68H)之TNBC、NSCLC、HCC及間皮瘤患者對於VSIG3有陰性(0)、低(1)、中(2)或高(3)染色強度的%。

圖69A 及69B 。圖形顯示由ELISA所評估之V4-C26 hIgG4 (HMBD-002)對(69A) FcγRIII及(69B) C1q蛋白質的結合親和力。顯示的資料是n=3之量測值的平均值且誤差長條為SEM。

圖70A 至70D 。圖形顯示V4-C26 hIgG4之結合特異性。(70A) V4-C26 hIgG4對所指示之人類B7家族抗原、PD-1與CTLA-4的結合，如由ELISA所判定(顯示的資料是n=2之量測值的平均值且誤差長條為SEM)。(70B) V4-C26 hIgG4對人類、非人類靈長類動物(NHP)、大鼠或小鼠VISTA異種同源物的結合，由ELISA所判定(顯示的資料是n=3之量測值的平均值且誤差長條為SEM)。(70C) V4-C26 hIgG4對過度表現人類、非人類靈長類動物(NHP)、大鼠或小鼠VISTA異種同源物之HEK293T細胞的結合，由流式細胞分析術所判定(顯示的資料是n=3之量測值的平均值且誤差長條為SEM)。(70D) V4-C26 hIgG4對從人類、NHP、大鼠或小鼠PBMC單離之CD11b+骨髓細胞的結合(顯示的資料是n=3之量測值的平均值且誤差長條為SEM)。

圖71A 及71B 。圖形顯示V4-C26 hIgG4對骨髓細胞之VISTA阻斷。(71A)在V4-C26 hIgG4 (HMBD-002)、VSTB112或IgG4同型對照存在或不存在下，與自體PBMC共培養之MDSC在96小時之後的抗-CD3抗體誘發之IFN-γ分泌，如由ELISA所量測(顯示的資料是n=6之量測值的平均值，且誤差長條為SEM，且P-值係藉由二因子(two-way) ANOVA (杜凱氏多重比較測試(Tukey's multiple comparison test))獲得，****p ＜0.0001)。(71B)對嗜中性球遷移至塗佈有C5a之穿孔(transwell)之底部腔室的抑制，且使用CellTiter-Glo量測(顯示的資料是n=3之量測值的平均值且誤差長條為SEM)。

圖72A 至72D 。V4-C26 hIgG4所為之VISTA阻斷對免疫活化之效應的分析。(72A)在96小時藉由Luminex從同種異體混合淋巴球反應之上清液所量測之所指示細胞激素的位準。V4-C26 hIgG4及抗PD-1抗體派立珠單抗(Pembrolizumab) (註解為Pembro)的濃度係以µg/ml顯示。將資料針對同型對照正規化。顯示的資料是n=10的平均值且誤差長條為SEM。P-值藉由單因子(one-way) ANOVA (杜凱氏多重比較測試)獲得，*p ＜ 0.05、***p ＜ 0.001、****p ＜ 0.0001。(72B)從MLR樣本之批量RNA定序進行Speed2途徑分析(n=10)。將資料針對同型對照正規化，表示為平均值+SD，且p-調整值係獲得自批量RNA定序分析法，**p＜0.01、***p ＜ 0.001。(72C)來自在V4-C26 hIgG4或IgG4同型對照存在下培養96小時之PBMC予以批量RNA-seq資料的KEGG途徑分析的結果，顯示在關聯於TLR、TNFα、JAK-STAT及IL-17訊息傳導途徑的基因上有轉錄本位準的富集。(72D)關聯於I型及II型干擾素基因之基因的轉錄本位準的富集，來自MLR樣本之批量RNA定序，其係針對在V4-C26 hIgG4 (HMBD-002)、IgG4同型對照或派立珠單抗(pembrolizumab)存在下所施行的反應(n=10；表示為平均值+SD及p-調整值的資料係獲得自批量RNA定序分析法，為**p＜0.05、***p ＜ 0.001)。

圖73A 至73F 。圖形及長條形圖顯示細胞衍生之異種移植(CDX)模型中的V4-C26 hIgG4抗腫瘤反應。小鼠經隨機化且在指示時間點以測試物件之濃縮來用劑。一週量測腫瘤體積二次。每一資料點係代表來自n=10隻小鼠的平均腫瘤體積+/- SEM。(73A)同基因型CDX模型的結果，其中雌性BALB/c小鼠被皮下植入CT26細胞。(73B)同基因型CDX模型的結果，其中雌性BALB/c小鼠被同位植入過度表現VISTA的4T-1細胞。(73C)一CDX模型的結果，其中經移植CD34之人源化雌性HiMice被皮下植入HCT15細胞。(73D)一CDX模型的結果，其中經移植CD34之人源化雌性HiMice被皮下植入A549細胞。(73E)藉由流式細胞分析術進行之細胞剖析的結果，顯示CT26 CDX模型中腫瘤微環境中之腫瘤浸潤白血球(TIL)族群(顯示的資料是n=3的平均值且誤差長條為SEM)。(73F)一CT26抗原回憶檢定法的結果，其量測係藉由離體培養TIL (CD45+)與CT26細胞以量測溶解，或藉由培養腫瘤富集T細胞(CD4+/CD8+)與CT26細胞以使用ELISA量測經由IFN-γ分泌的T細胞活化(顯示的資料是n=3的平均值且誤差長條為SEM。所有p-值係藉由未配對t-檢定獲得，*p ＜ 0.05、**p ＜ 0.01；每個資料點代表一小鼠)。

圖74A 至74G 。圖形係關於V4-C26 hIgG4的藥物動力學及毒性。(74A至74C)荷瘤及非荷瘤的(74A) Balb/c小鼠、(74B)史道二氏大鼠及(74C)食蟹獼猴中之V4-C26 hIgG4之血清濃度。V4-C26 hIgG4係以指示濃度經由腹膜內注射以單一劑量投與。(74D至74G)用獲得自健康供體(n=10)之(74D及74E)人類全血或(74F及74G)經單離之PBMC所施行之離體細胞激素釋放檢定法的結果，顯示用指示量的V4-C26 hIgG4、IgG4同型對照、(74D及74E)葡萄球菌腸毒素B (SEB)或(74F及74G)抗-CD3抗體刺激24小時後的(74D、74F) IL-2及(74E、74G) IL-6位準。

圖75A 至75E 。V4-C26 hIgG4對(75A)人類VISTA、(75B)非人類靈長類動物(NHP) VISTA、(75C)大鼠VISTA以及(75D)小鼠VISTA之結合的感應圖譜及所計算之K _on、K _off及K _D。(75E)圖形及表顯示在pH範圍5.5-7.5的V4-C26 hIgG4對人類VISTA，由ELISA所判定(顯示的資料是n=3之量測值的平均值且誤差長條為SEM)。

圖76A 至76H 。圖形顯示HMBD-002-V4C26在不同調配物F1至F10中之高溫度穩定性研究的結果。(76A)由A280 UV光吸光度之蛋白質含量，(76B) pH，(76C)藉由HPLC-SEC所量測之聚集，(76D)調配物F1之HPLC-SEC之代表性結果，(76E)藉由HPLC-CEX所量測之電荷變異，(76F)調配物F1之HPLC-CEX之代表性結果，(76G)藉由ELISA量測之抗原結合，(76H)滲透壓。

圖77 。圖形顯示HMBD-002-V4C26在不同調配物F1至F10中之高濃度穩定性研究的結果。藉由HPLC-SEC量測之聚集。

圖78 。圖形顯示在凍-融應力研究後之HMBD-002調配物中之聚集，藉由HPLC-SEC所量測。

圖79 。圖形顯示調配物F1、F2及F5之pH與總電荷變異的互相關聯性。

圖80 。圖形顯示在鼠類同基因型腫瘤模型CT26及B16/BL6中，V4-C26 hIgG4單一療法及與抗-mPD-1 (RMP1-14)抗體之組合療法的活體內功效。小鼠係用500 µg (~25 mg/kg)之HMBD-002單獨或與200 µg (~10 mg/kg)之RMP1-14組合來治療。

圖81 。圖形顯示在鼠類腫瘤模型CT26中，不同劑量之V4-C26 hIgG4單一療法的活體內功效。

圖82A 至82C 。圖形顯示不同劑量的V4-C26 hIgG4單一療法在(82A)荷瘤和非荷瘤小鼠、(82B)在雄性和雌性史-道二氏大鼠、(82C)雄性和雌性食蟹獼猴中之藥物動力學剖析。

圖83A 及83B 。圖形顯示在細胞衍生之異種移植(CDX)模型中，HMBD-002 (V4-C26 hIgG4)、抗-PD-1抗體(aPD1)或以HMBD-002與抗-PD-1抗體之組合治療的抗腫瘤反應。(83A)一CDX模型的結果，其中經移植CD34之人源化HiMice被皮下植入A549細胞。(83B)一CDX模型的結果，其中雌性BALB/c小鼠被皮下植入CT26細胞。

TW202328196A_111135206_SEQL.xml

Claims

一種抗原結合分子，其任擇地經單離，其能夠對VISTA結合且抑制VISTA-媒介之訊息傳導，獨立於Fc-媒介之功能。
如請求項1之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：290的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：291的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：278的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：309的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3。
如請求項1或請求項2之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈變異(VH)區：具有SEQ ID NO：290的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：291的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：278的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈變異(VL)區：具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：295的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之LC-CDR3。
如請求項1至3中任一項之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：289的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：310的胺基酸序列有至少70%的序列同一性。
如請求項1至4中任一項之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：289的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：297的胺基酸序列有至少70%的序列同一性。
如請求項1至5中任一項之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：併含有下列框架區(FR)之一VH區：具有SEQ ID NO：63的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：292的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：293的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：281的胺基酸序列之HC-FR4。
如請求項1至6中任一項之組成物，其中該抗原結合分子包含：併含有下列框架區(FR)之一VL區：具有SEQ ID NO：288的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：298的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：284的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之LC-FR4。
如請求項1至7中任一項之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含一重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：331的胺基酸序列。
如請求項1至8中任一項之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含一輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：317的胺基酸序列。
一種組成物，其包含如請求項1至9中任一項之抗原結合分子。
如請求項10之組成物，其中該組成物包含： (i) 2 mM至200 mM組胺酸、2%至20% (w/v)蔗糖、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 4.0至7.0；或 (ii) 2 mM至200 mM組胺酸、2%至20% (w/v)蔗糖、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 4.0至7.0；或 (iii) 2 mM至200 mM組胺酸、1 mM至250 mM氯化鈉，及具有一pH 4.0至7.0，任擇地包含0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-20或聚山梨醇酯-80；或 (iv) 2 mM至200 mM組胺酸、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-20或聚山梨醇酯-80，及具有一pH 4.0至7.0；或 (v) 2 mM至200 mM乙酸鹽、2%至20% (w/v)蔗糖、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 4.0至7.0；或 (vi) 2 mM至200 mM乙酸鹽、2%至20% (w/v)蔗糖、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 4.0至7.0；或 (vii) 2 mM至200 mM琥珀酸鹽、2%至20% (w/v)蔗糖、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 4.0至7.0；或 (viii) 2 mM至200 mM琥珀酸鹽、2%至20% (w/v)蔗糖、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 4.0至7.0。
如請求項10或請求項11之組成物，其中該組成物包含： (i) 20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.5；或 (ii) 20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.8；或 (iii) 20 mM組胺酸、4% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.8；或 (iv) 20 mM組胺酸、2% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.8；或 (v) 20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 6.3；或 (vi) 20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 5.8；或 (vii) 20 mM乙酸鹽、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.5；或 (viii) 20 mM琥珀酸鹽、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.5；或 (ix) 20 mM組胺酸、0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.8；或 (x) 20 mM組胺酸、150 mM氯化鈉，及具有一pH 5.8。
如請求項10至12中任一項之組成物，其中該組成物包含20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.5。
如請求項10至13中任一項之組成物，其中該組成物包含約50 mg/mL的該抗原結合分子。
如請求項1至14中任一項之抗原結合分子或組成物，其供使用作為一藥劑。
如請求項1至14中任一項之抗原結合分子或組成物，其供使用於治療或預防一主體中之一癌症的一方法中。
一種如請求項1至14中任一項之抗原結合分子或組成物於製造一藥劑之用途，該藥劑供用於治療或預防一主體中之一癌症。
一種治療或預防一主體中之一癌症的方法，該方法包含投與一治療或預防有效量之如請求項1至14中任一項之抗原結合分子或組成物。
如請求項16之供使用之抗原結合分子或組成物、如請求項17之用途或如請求項18之方法，其中該癌症的特徵在於表現VISTA之細胞之存在及/或在於由包含VISTA之一複合物所媒介之訊息傳導。
如請求項16至19中任一項之供使用之抗原結合分子或組成物、用途或方法，其中該癌症係選自於：一血液學上之癌症、白血病(例如，T細胞白血病)、急性骨髓白血病、淋巴瘤、B細胞淋巴瘤、T細胞淋巴瘤、多發性骨髓瘤、間皮瘤、一實性腫瘤、肺癌、非小細胞肺癌瘤(NSCLC)、胃癌、胃癌瘤、結腸直腸癌、結腸直腸癌瘤、結腸直腸腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌瘤、乳癌、三重陰性乳癌(TBNC)、三重陰性乳侵襲性癌瘤、侵襲性管癌瘤、肝臟癌、肝細胞癌瘤、胰臟癌、胰臟管腺癌、甲狀腺癌、胸腺瘤、皮膚癌、黑色素瘤、皮膚黑色素瘤、腎癌、腎臟細胞癌瘤、腎臟乳突細胞癌瘤、頭頸部癌、頭頸部鱗狀細胞癌瘤(SCCHN)、卵巢癌、卵巢癌瘤、卵巢漿液性囊腺癌、膀胱癌、前列腺癌及/或前列腺腺癌。
如請求項16至20中任一項之供使用之抗原結合分子或組成物、用途或方法，其中該癌症係三重陰性乳癌(TBNC)、非小細胞肺癌瘤(NSCLC)及/或實性腫瘤。
如請求項16至21中任一項之供使用之抗原結合分子或組成物、用途或方法，其中該方法包含偵測表現VISTA之細胞之存在及/或由包含VISTA之一複合物所媒介之訊息傳導的一步驟。
如請求項22之供使用之抗原結合分子或組成物、用途或方法，其中當偵測到表現VISTA之細胞之存在及/或由包含VISTA之一複合物所媒介之訊息傳導時，該主體被選擇來用該抗原結合分子或組成物治療。
如請求項16至23中任一項之供使用之抗原結合分子或組成物、用途或方法，其中該抗原結合分子係每週、每兩週或每三週投與。
如請求項16至24中任一項之供使用之抗原結合分子或組成物、用途或方法，其中該抗原結合分子係在一21天投與循環內投與一、二或三次，任擇地其中該治療包含高達35個投與循環。
如請求項16至25中任一項之供使用之抗原結合分子或組成物、用途或方法，其中該抗原結合分子係在一21天投與循環內於第1、8及/或15天投與，任擇地其中該治療包含高達35個投與循環。
如請求項16至26中任一項之供使用之抗原結合分子或組成物、用途或方法，其中該治療包含每投與投與3.5 mg至2200 mg的抗原結合分子。
如請求項16至27中任一項之供使用的抗原結合分子或組成物、用途或方法，其中該治療包含每投與投與以下中之至少一者的抗原結合分子：3.5 mg、7 mg、10.5 mg、17.5 mg、20 mg、21 mg、40 mg、60 mg、72 mg、120 mg、180 mg、240 mg、360 mg、400 mg、800 mg、1200 mg、1600 mg、1900 mg或2200 mg。
如請求項16至28中任一項之供使用之抗原結合分子或組成物、用途或方法，其中該治療包含每21天投與循環投與高達10.5 mg、高達21 mg、高達31.5 mg、高達52.5 mg、高達60 mg、高達63 mg、高達120 mg、高達180 mg、高達216 mg、高達360 mg、高達540 mg、高達720 mg、高達1080 mg、高達1200 mg、高達2400 mg、高達3600 mg、高達4800 mg、高達5700 mg或高達6600 mg的抗原結合分子。