TW202323267A - 新生黴素（novobiocin）類似物及脯胺酸之共晶型及其用途 - Google Patents

Abstract

本發明揭示N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺及L-脯胺酸或D-脯胺酸之共晶型、其醫藥組合物、製造方法及用於治療諸如糖尿病性周邊神經病之神經退化性病症的方法。

Description

新生黴素（NOVOBIOCIN）類似物及脯胺酸之共晶型及其用途

揭示N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺及L-脯胺酸或D-脯胺酸之共晶型、其醫藥組合物、製造方法及用於治療諸如糖尿病性周邊神經病之神經退化性病症的方法。

大約2600萬美國人罹患1型或2型糖尿病。儘管使用胰島素及口服抗糖尿病藥物幫助維持血糖正常，但此等個體中約60%-70%顯現糖尿病性周邊神經病(DPN)。參見Veves, A.；Backonja, M.；Malik, R. A., Pain Med. 9 (2008) 660-674。據報導基於新生黴素骨架之許多小分子抑制熱休克蛋白90 (Hsp90)，且據報導其具有顯著神經保護特性且適用於逆轉動物模型中DPN之症狀。參見B. R. Kusuma等人, J. Med. Chem.55 (2012) 5797-5812；美國專利第9,422,320號。

此類型之一種新生黴素類似物(「新生黴素類似物」)為N-(2-(5-(((3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺( 4)，據報導其展現高神經元保護活性。Kusuma (2012)。進一步報導新生黴素類似物 4具有與另一熱休克蛋白Hsp70之存在相關之作用，而其他作用與Hsp70無關。Hsp70在新生黴素類似物 4及相關化合物之作用機制中的確切作用尚未完全表徵。J. Ma等人, ACS Chem. Neurosci.6(9) (2015) 1637-1648。

據報導新生黴素類似物 4之合成遵循產生非晶固體之程序，且其物理化學表徵省略在2位之立體化學的明確分配(Kusuma (2012)；美國專利第9,422,320號)，藉此原則上允許如下文所示之兩種可能之變旋異構物 4a及 4b的存在：

。

如以下事實所證明，公開之 4(亦稱為KU-596)之合成雖然指示HPLC純度為95.6%，但未指示非晶固體之變旋異構物純度：僅僅諾維糖2位缺乏立體化學之明確分配。(Kusuma (2012)。

本發明係基於以下意外發現：以高產率、純度及變旋異構物純度實現新生黴素類似物 4a及L-脯胺酸或D-脯胺酸之共晶型。此外，本發明之形態證實相對於已知之非晶型 4，生物可用性得到顯著改善。

因此，本發明之一實施例為N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺及L-脯胺酸(1:2)之共晶。該共晶之特徵在於如在繞射計上使用Cu-Kα輻射在1.54178 Å之波長下所測定，包含以下峰之X射線粉末繞射圖：14.76、16.86、19.00及21.05 °2θ ±0.20 °2θ。此共晶在本文中稱為「形態B」。

另一實施例為N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺及L-脯胺酸(1:2)之共晶。該共晶之特徵在於如在繞射計上使用Cu-Kα輻射在1.54178 Å之波長下所測定，包含以下峰之X射線粉末繞射圖：9.20、16.19、18.45及24.51 °2θ ±0.2 °2θ。此共晶在本文中稱為「形態D」。

另外，一實施例為N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺及L-脯胺酸呈丙酮溶劑合物形式存在之共晶(1:1:1)。此共晶之特徵在於如在繞射計上使用Cu-Kα輻射在1.54178 Å之波長下所測定，包含以下峰之X射線粉末繞射圖：14.64、17.53、18.91及21.33 °2θ ±0.20 °2θ。此共晶在本文中稱為「形態C」。

在又一實施例中，本發明係關於N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺及L-脯胺酸呈甲基乙基酮與吡嗪之溶劑合物形式之共晶，莫耳比率分別為約1:1.2:0.6:0.1。該共晶之特徵在於如在繞射計上使用Cu-Kα輻射在1.54178 Å之波長下所測定，包含以下峰之X射線粉末繞射圖：10.42、14.62、19.28及21.14 °2θ ±0.20 °2θ。此共晶在本文中稱為「形態G」。

本發明亦提供N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺及D-脯胺酸(1:1)之共晶，其特徵在於如在繞射計上使用Cu-K _α1輻射在1.5405929 Å之波長下所測定，包含以下峰之X射線粉末繞射圖：11.77、14.52、19.54及21.23 °2θ ±0.20 °2θ。

本發明進一步提供N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺及L-脯胺酸(1:1)之共晶，其特徵在於如在繞射計上使用Cu-K _α1輻射在1.5405929 Å之波長下所測定，包含以下峰之X射線粉末繞射圖：8.52、16.33、19.50及21.22 °2θ ±0.20 °2θ。

根據另一實施例，本發明係關於一種醫藥組合物，其包含本文所述之任一共晶型。該組合物進一步包含醫藥學上可接受之固體載劑。在一些實施例中，組合物進一步包含一或多種其他共晶型。

本發明之另一實施例為一種用於抑制個體中之熱休克蛋白90 (Hsp90)的方法。該方法包含向個體投與治療有效量之本文所述之共晶。

本發明亦體現在一種用於治療或預防罹患神經退化性病症之個體之神經退化性病症的方法。該方法包含向個體投與治療有效量之本文所述之共晶。在一些實施例中，神經退化性病症為糖尿病性周邊神經病(DPN)。

或者，根據其他實施例，本發明提供一種用於預防糖尿病性周邊神經病自罹患1型或2型糖尿病之個體中顯現或降低此可能性的方法。該方法包含向該個體投與治療有效量之本文所述之共晶。

根據另一實施例，本發明提供一種用於製造形態B共晶之方法。該方法包含將N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺( 4a)與L-脯胺酸以約1:1至約1:2莫耳比之組合在C _{1 - 6}烷基醇中加熱至第一溫度，得到溶液的步驟。接著使溶液冷卻至不高於約30℃之第二溫度，藉此得到共晶之漿液，且接著在第二溫度下攪拌漿液約72小時或更少之持續時間。

另一實施例為一種製造形態D共晶之方法。該方法包含將N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺( 4a)與L-脯胺酸以約1:1莫耳比之組合在EtOH或乙腈中加熱至第一溫度，接著使溶液冷卻至不高於約30℃之第二溫度，藉此得到共晶之懸浮液。接著在第二溫度下攪拌懸浮液約72小時或更少之持續時間。

本發明體現在關於製造形態C共晶之又一方法。該方法包含(a)視情況使等莫耳量之N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺( 4a)及L-脯胺酸在EtOH中回流，得到溶液，且使溶液冷卻至不高於約30℃之溫度，藉此得到固體產物。接著將步驟(a)之產物或者N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺( 4a)與L-脯胺酸以約1:1莫耳比之組合在丙酮中在不高於約30℃之溫度下攪拌約72小時或更少之持續時間，藉此得到共晶。

根據另一實施例，本發明提供一種用於製造形態G共晶之方法。該方法包含將N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺( 4a)、L-脯胺酸及吡嗪分別以約1:1:20之莫耳比組合在甲基乙基酮(MEK)與MeOH之混合溶劑中，得到溶液，且接著攪拌溶液，藉此得到共晶。

本發明另外提供一種用於製造如本文所述之 4a/D-脯胺酸之共晶的方法，其包含將N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺( 4a)與D-脯胺酸以約1:1莫耳比之組合在C _{1 - 6}烷基醇中加熱至第一溫度，得到溶液；以及使溶液冷卻至不高於約30℃之第二溫度，藉此得到共晶之懸浮液。

在另一實施例中，本發明提供一種增加包含N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺( 4a)及N-(2-(5-(((2 S,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺( 4b)之組合物中 4a相對於 4b之濃度的方法。該方法包含使該組合物與脯胺酸在溶劑中接觸，且使組合物、脯胺酸及溶劑經受結晶條件，由此產生 4a及脯胺酸之共晶。大塊共晶呈現高於包含 4a及 4b之組合物中的 4a濃度。

定義

本發明全篇使用之縮寫、首字母縮寫詞及術語具有以下含義。

NMR	核磁共振光譜法
OM	光學顯微法
XRPD	X射線粉末繞射
CP	急速沈澱
FE	快速蒸發
RC	反應結晶
SC	緩慢冷卻
SE	緩慢蒸發
amt	量
API	活性醫藥成分
B/E	雙折射及消光
eq	當量
min.	分鐘
mol.	莫耳濃度
Obs	觀測
ppt	沈澱物或沈澱
ref.	冰箱
RT	室溫
Soln/soln	溶液
vac	真空
ACN	乙腈
2-BuOH	2-丁醇
EtOH	乙醇
EtOAc	乙酸乙酯
IPA或2-PrOH	異丙醇、2-丙醇
IPE	異丙基醚
MEK	甲基乙基酮
MeOH	甲醇
MTBE或TBME	甲基第三丁基醚
THF	四氫呋喃
TMP	2,3,5,6-四甲基-吡嗪
w/w	重量/重量。 4a/脯胺酸共晶中 4a之重量百分比藉由排除脯胺酸含量計算，亦即w/w=( 4a重量)/(共晶中所有非脯胺酸物種之重量)。

引言

如上所概述，關於新生黴素類似物 4之研究強調該化合物在與Hsp70無關之Hsp90抑制中的極佳效力(Kusuma (2012)及Ma (2015))。該等研究揭露化合物合成之潛在缺點，包括其產生α-變旋異構物 4a與β-變旋異構物 4b之混合物的傾向及低總產率。另外，雖然報導之關於 4之管柱層析純化方法適合於小規模研究，且甚至化合物為約95%純(HPLC)，但該方法無法用於產生大量及醫藥學上純之量的α-變旋異構物 4a進行藥物開發。

因此，本發明者進行多種分離 4a之結晶策略。然而，本發明者未發現藉由結晶將 4a與 4b分離之條件。

本發明者使非晶 4a經受由28種共晶形成體構成之共晶篩選，且意外地發現L-脯胺酸及D-脯胺酸選擇性地與α-變旋異構物 4a共結晶。此外，本發明者發現L-脯胺酸及D-脯胺酸為得到能夠明確表徵之任何結晶物質的唯一測試共晶形成體。(參見實例3)。 共晶型

化合物 4與共晶形成體L-脯胺酸或D-脯胺酸接觸意外地引起 4a與任一共晶形成體之選擇性共結晶(參見實例2及10)。以此方式，共結晶實現如藉由例如HPLC所測定，相對於 4b，高度富集 4a之大量 4。因此，在一實施例中， 4a與L-脯胺酸之選擇性共結晶降低β-變旋異構物之濃度且其促進少量雜質之移除。因此， 4a/L-脯胺酸共晶之形成將 4a(HPLC)之純度自約90%提高至至少95%、96%、97%或98%。隨後 4a/L-脯胺酸共晶之再結晶將 4a之純度進一步提供至至少97%、98%或99%。

類似地，在其他實施例中， 4a及 4b之起始組合物與D-脯胺酸諸如以約等莫耳量之 4a/ 4b及D-脯胺酸之共結晶產生其中相對於起始組合物中之 4a濃度， 4a之純度(亦即，濃度)如藉由HPLC所測定，提高至少15%、10%、5%或3%的 4a/D-脯胺酸共晶。因此，舉例而言， 4a / 4b之起始組合物含有濃度為約93%之 4a，且在與D-脯胺酸共結晶後，所得共晶含有濃度為約98%之 4a。在一些實施例中， 4a/D-脯胺酸共晶含有最終純度為至少85%、90%、95%、97%、98%或99%之 4a。

在其他實施例中，一定量之α-變旋異構物 4a藉由其與D-脯胺酸諸如以等莫耳量接觸，由此產生 4a/D-脯胺酸共晶來純化。大塊共晶中 4a之所得濃度比起始量之 4a中 4a濃度高例如至少1%、2%、3%、4%或5% (HPLC)。此等實施例中之每一者涵蓋視情況存在之一或多個再結晶之步驟以進一步增加所得到之共晶中 4a之純度。

共結晶亦產生如上文概述之多種共晶型。藉由一或多種分析技術，包括X射線粉末繞射(XRPD)、差示掃描熱量測定(DSC)及熱解重量分析(TGA)鑑別各種形態且區分彼此。 形態 B

因此，表示為形態B之一個實施例為N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺( 4a)及L-脯胺酸分別呈1:2莫耳比之共晶。如在繞射計上使用Cu-Kα輻射在1.54178 Å之波長下所測定，X射線粉末繞射圖包含在14.76、16.86、19.00及21.05 °2θ ±0.2 °2θ處之特徵峰。在一實施例中，X射線粉末繞射圖進一步包含在12.14、17.51、18.89及19.41 °2θ ±0.2 °2θ處之峰。根據又一實施例，形態B另外實質上藉由其整個X射線粉末繞射圖表徵(參見圖1)。

形態B之DSC曲線表徵此共晶，其中其在約211℃下呈現放熱。根據一個實施例，形態B藉由如實質上圖2中所示之整個DSC熱分析圖表徵。

本發明進一步體現在一種用於製造形態B之方法(參見實例4)。該方法包含將N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺( 4a)及L-脯胺酸以約1:1至約1:2莫耳比之組合在C _{1 - 6}烷基醇中加熱，得到溶液。在一些實施例中， 4a呈純 4a存在，而在其他實施例中， 4a與β-變旋異構物 4b組合存在，諸如由公開之 4合成產生之組合(Kusuma 2012, 見上文)。舉例而言， 4a呈95%、96%、97%、98%或99% (w/w)存在。將該組合加熱至在約50℃至約80℃範圍內之第一溫度。例示性C _{1 - 6}烷基醇包括甲醇、乙醇及正丙醇及異丙醇。在一個實施例中，醇為乙醇。根據一實施例，適宜第一溫度為在標準壓力下醇之沸點。因此，舉例而言，當乙醇為該醇時，第一溫度為沸點，亦即約78℃。

該方法進一步包含使 4a及L-脯胺酸之溶液冷卻至不高於約30℃之第二溫度，藉此得到共晶之漿液的步驟。在第二溫度下攪拌漿液約72小時或更少之持續時間。在一實施例中，過濾漿液以分離形態B。 形態 D

本發明進一步體現在 4a及L-脯胺酸分別呈1:2莫耳比存在之共晶且其表示為形態D。形態D之特徵在於如在繞射計上使用Cu-Kα輻射在1.54178 Å之波長下所測定，包含以下峰之X射線粉末繞射圖：9.20、16.19、18.45及24.51 °2θ ±0.2 °2θ。另一實施例係關於在11.83、17.16、20.15及25.34 °2θ ±0.2 °2θ處存在之額外特徵峰。形態D另外藉由如實質上圖14中所示之其X射線粉末繞射圖表徵。

形態D之DSC曲線亦表徵此共晶，其中其在約212.2℃下呈現吸熱，其中起始溫度為約211.2℃。根據一實施例，形態D藉由如實質上圖15中所示之整個DSC熱分析圖表徵。

本發明之一實施例亦關於一種用於製造形態D之方法。該方法包含將N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺 (4a)及L-脯胺酸呈約1:1莫耳比之組合在EtOH或乙腈中加熱至第一溫度之步驟。在一些實施例中， 4a呈純 4a存在，而在其他實施例中， 4a與β-變旋異構物 4b組合存在，諸如由公開之 4合成產生之組合(Kusuma 2012, 見上文)。舉例而言， 4a呈95%、96%、97%、98%或99% (w/w)存在。第一溫度為在約70℃至約85℃範圍內選擇之溫度。適宜溫度例如藉由使該組合回流來實現，亦即在約82℃之乙腈沸點下。

該方法進一步包含以下步驟：使溶液冷卻至不高於約30℃之第二溫度，藉此得到共晶之懸浮液，且接著在第二溫度下攪拌懸浮液約72小時或更少之持續時間。根據一實施例，將懸浮液過濾，例如以分離形態D。 形態 C

本發明進一步體現在分別呈1:1:1莫耳比存在的 4a及L-脯胺酸之共晶之丙酮溶劑合物且其表示為形態C (參見實例6)。該共晶之特徵在於如在繞射計上使用Cu-Kα輻射在1.54178 Å之波長下所測定，包含以下峰之X射線粉末繞射圖：14.64、17.53、18.91及21.33 °2θ ±0.2 °2θ。更特定而言，根據另一實施例，X射線粉末繞射圖包含在12.10、15.14、18.26及19.56 °2θ ±0.2 °2θ處之額外峰。表徵形態C之此等及額外峰展示在如實質上圖10中所示之其X射線粉末繞射圖中。

形態C另外藉由參考其TGA熱分析圖來表徵，其TGA熱分析圖包含推斷在約150℃與約220℃下之重量損失步驟。一實施例係關於如實質上圖11中所示之形態C之TGA熱分析圖。

形態C藉由根據本發明之各種實施例之方法製造。因此，在一個實施例中，該方法包含使等莫耳量之N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺( 4a)及L-脯胺酸在EtOH中回流，得到溶液，且接著使溶液冷卻至不高於約30℃之溫度，藉此產生固體產物。接著在丙酮中在不高於約30℃之溫度下攪拌固體產物約72小時或更少之持續時間，藉此得到形態C。

或者，在丙酮中在不高於約30℃之溫度下攪拌 4a及L-脯胺酸呈約1:1莫耳比之組合約72小時或更少之持續時間，藉此得到形態C。在此等實施例中之任一者中， 4a呈純 4a或呈諸如藉由公開之 4合成產生的與β-變旋異構物 4b之組合存在。在另一實施例中，諸如藉由過濾來分離形態C。 形態 G

本發明進一步關於呈甲基乙基酮及吡嗪之溶劑合物存在的 4a及L-脯胺酸之共晶，且其表示為形態G(參見實例9)。如實例中所解釋，形態G之XRPD指標化與1:1之 4a:L-脯胺酸莫耳比相一致，但該指標化未區分大小相當之MEK與吡嗪分子，使得藉由此分析技術難以確定溶劑之明確量。然而，形態G之質子NMR分析確定分別約1:1.2:0.6:0.1之 4a、L-脯胺酸、MEK及吡嗪之莫耳比。因此，形態G藉由其XRPD繞射圖表徵為如在繞射計上使用Cu-Kα輻射在1.54178 Å之波長下所測定，具有在10.42、14.62、19.28及21.14 °2θ ±0.2 °2θ處之特徵峰。另一實施例提供在11.85、14.93、17.40及19.28 °2θ ±0.2 °2θ處之額外峰。形態G亦可藉由如實質上圖17中所示之其完整XRPD繞射圖表徵。

根據另一個實施例，形態G之XRPD分析進一步確定表徵共晶之單位晶胞參數。因此，參數為a = 10.975 Å，b = 10.310 Å，c = 15.704 Å，α = 90°，β = 108.56°，及γ = 90°。

本發明進一步關於一種用於製造形態G之方法。該方法包含將N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺( 4a)、L-脯胺酸及吡嗪分別以約1:1:20之莫耳比組合在甲基乙基酮(MEK)與MeOH之混合溶劑中，得到溶液。在一些實施例中， 4a呈純 4a存在，而在其他實施例中， 4a與β-變旋異構物 4b組合存在，諸如由公開之 4合成產生之組合(Kusuma 2012, 見上文)。舉例而言， 4a呈95%、96%、97%、98%或99% (w/w)存在。一般而言，混合溶劑體現在MEK相比於MeOH過量。因此，MEK與MeOH之例示性比率為約9:1 (v/v)。接著攪拌溶液，藉此得到形態G。 物質 A

本發明之另一實施例為分別以1:1莫耳比存在之 4a及L-脯胺酸之共晶，其表示為物質A。物質A之特徵在於如在繞射計上使用Cu-K _α1輻射在1.5405929 Å之波長下所測定，包含以下峰之X射線粉末繞射圖：8.52、16.33、19.50及21.22 °2θ ±0.20 °2θ。另一實施例係關於在9.19、13.22、14.75及17.57 °2θ ±0.2 °2θ處存在之額外特徵峰。物質A另外藉由如實質上圖23中所示之其X射線粉末繞射圖表徵。

根據另一個實施例，物質A之XRPD分析進一步確定表徵共晶之單位晶胞參數。因此，參數為a = 10.126 Å，b = 11.021 Å，c = 30.259 Å，α = 90°，β = 90°，及γ = 90°。

物質A之DSC曲線亦表徵此共晶，其中其在約145℃下呈現吸熱。根據一實施例，物質A藉由如實質上圖24中所示之整個DSC熱分析圖表徵。

物質A另外藉由參考其TGA熱分析圖表徵，其TGA熱分析圖包含推斷在約160℃與約230℃下之重量損失步驟。一實施例係關於物質A之TGA熱分析圖，如實質上圖24中所示。 4a/D- 脯胺酸共晶

在另一實施例中，本發明亦提供以1:1莫耳比存在之 4a及D-脯胺酸之共晶(參見實例11)。該共晶藉由其XRPD繞射圖表徵為如在繞射計上使用Cu-K _α1輻射在1.5405929 Å之波長下所測定，具有在11.77、14.52、19.54及21.23 °2θ ±0.20 °2θ處之特徵峰。額外特徵存在於8.45、13.18、16.95及19.12 °2θ ±0.2 °2θ。表徵共晶之此等及甚至額外峰展示在如實質上圖18中所示之其X射線粉末繞射圖中。

4a/D-脯胺酸晶體之DSC曲線亦表徵此共晶，其中其在約130℃下呈現吸熱。根據一實施例，共晶藉由如實質上圖19中所示之整個DSC熱分析圖表徵。

共晶另外藉由參考其TGA熱分析圖表徵，其TGA熱分析圖包含推斷分別在約150-160℃與約230℃下之兩個重量損失步驟。一實施例係關於共晶之TGA熱分析圖，如實質上圖19中所示。

本發明進一步提供一種用於製造 4a/D-脯胺酸晶體之方法。該方法包含以下步驟：(a)將N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺 (4a)及D-脯胺酸以約1:1莫耳比之組合在C _{1 - 6}烷基醇中加熱至第一溫度，得到溶液；以及(b)使該溶液冷卻至不高於約30℃之第二溫度，藉此得到共晶之懸浮液。在一些實施例中， 4a呈純 4a存在，而在其他實施例中， 4a與β-變旋異構物 4b組合存在，諸如由公開之 4合成產生之組合(Kusuma 2012, 見上文)。舉例而言， 4a呈95%、96%、97%、98%或99% (w/w)存在。 純化方法

根據一實施例， 4a選擇性地與L-脯胺酸及D-脯胺酸共結晶之意外發現引起一種用於將 4a自大批量 4純化之方法。亦即， 4a與脯胺酸共結晶使 4a/脯胺酸共晶之所得大塊樣品中 4a濃度相對於 4b富集。一種提高 4a濃度之方法首先涵蓋 4a與 4b之起始組合物。起始組合物可為由公開之 4合成產生或藉由熟習有機合成技術者已知或合理設想之產生 4的大量替代合成路徑之一產生的大塊固體。另外，起始組合物可為主要 4a之大塊固體，由諸如管柱層析法之其他純化方式產生。本發明者意外地發現在此方面， 4a挑戰所有結晶嘗試；實際上，沒有條件下可觀測到 4a呈結晶形式存在。在此等實例中之任一者中，起始組合物含有至少一些量之 4b，諸如0.5%至約10% (w/w)。

莫耳過量，諸如一至約兩當量之脯胺酸與起始組合物在溶劑中組合。在一些實施例中，脯胺酸為L-脯胺酸，且在其他實施例中，脯胺酸為D-脯胺酸。可使用L-脯胺酸與D-脯胺酸之混合物。能夠實質上溶解脯胺酸及起始組合物之任何溶劑均適合於達成此目的。諸如本文所述之任何溶劑的示例性溶劑包括C ₁-C ₆烷基醇，諸如甲醇及乙醇。在該方法之一些實施例中，宜藉由加熱起始組合物、脯胺酸及溶劑混合物來促進溶解。出於達成此目的之適宜溫度為溶劑之回流溫度。

接著起始組合物、脯胺酸及溶劑之組合經受結晶條件，實現 4a與脯胺酸共結晶。在此上下文中多種結晶技術為適用的，諸如本文所述之彼等技術中之任一者。在示例性實施例中，使起始組合物與脯胺酸之溫溶液冷卻至室溫。可執行外部冷卻手段使溶液冷卻至低於室溫以促進共結晶。或者或組合地，使溶劑緩慢蒸發。單獨或彼此組合，此等方式中之任一者干擾溶液均衡，移向結晶。

藉此，相對於起始組合物中之 4a濃度，所得到之 4a及脯胺酸之大塊共晶富集 4a。對應之 4b濃度減少。另外，該方法將 4a自其他雜質純化。用於定量 4a濃度之適宜方法係藉由HPLC，不過能夠解析及定量混合物中存在之組分的任何分析技術均適合於達成此目的，包括在對掌性固定相上進行之氣相層析法(GC)。因此，舉例而言，大塊共晶中 4a之濃度比起始組合物中高約3%至約20%，或約5%至約15% (w/w)。或者，相對於大塊起始組合物中之 4a濃度，大塊共晶中 4a增加至少約5%、約10%或約15% (w/w)。因此，舉例而言，如藉由HPLC所測定， 4之起始組合物含有約93% 4a與約6% 4b(參見實例10(A))。在如藉由本發明方法所指示，與L-脯胺酸共結晶後，所得到之大塊共晶中 4b之量減少至約2.5%。在此等實施例中之任一者中，隨後 4a/脯胺酸共晶之再結晶可進一步減少大塊物質中 4b之量。

本發明提及根據特徵峰之圖案，諸如XRPD圖案。在可歸因於個別儀器及實驗條件之不確定性內，此類峰之集合係既定共晶型所獨有的。因此，舉例而言，各XRPD峰根據角度2θ揭示，角度2θ具有±0.2°2θ之可接受不確定性，因此應瞭解在其特徵峰之對應集合下，在此不確定性內特徵峰之變化決不削弱共晶型之特性。 醫藥組合物

本發明亦涵蓋包含如本文所述之共晶之醫藥組合物作為另一實施例。如實例中所解釋，本發明之共晶意外地呈現比單獨 4a，亦即非晶固體大得多之生物可用性。因此，醫藥組合物可調配成相對於含有非晶 4a之調配物，含有較低濃度之共晶來實現治療學上相同之作用。藉由本發明共晶之此益處，醫藥組合物中共晶之治療有效量提供約0.1 mg至約1000 mg之劑量，視需要根據個體之重量調整。典型劑量可在每天約0.01 mg/kg至每天約100 mg/kg之範圍內變化。

根據醫藥混配之習慣作法，醫藥組合物進一步包含一或多種醫藥學上可接受之賦形劑、稀釋劑、佐劑、穩定劑、乳化劑、防腐劑、著色劑、緩衝劑或風味賦予劑，該等總體上構成醫藥學上可接受之載劑。一般而言，醫藥組合物用習知材料及技術，諸如混合、摻合及其類似技術製備。原則上，醫藥學上可接受之載劑可為液體，只要共晶維持組成及結構穩定性即可，諸如不溶解於載劑中。一般而言，然而，醫藥學上可接受之載劑及因此組合物整體上為固體。

根據一些實施例，醫藥組合物進一步包含一或多種如本文所揭示之其他共結晶體。舉例而言，該組合物包含兩種形態、三種形態或四種形態。一種示例性組合物包含形態B及形態D。二元組合物，亦即僅僅含有兩種形態之組合物，提供呈在約0.05:1至約1:0.05範圍內之多種重量比的形態。亦設想中間比率及範圍，諸如0.2:1至約1:0.2及0.5:1至約1:0.5。

對於錠劑組合物，本發明之共晶與無毒之醫藥學上可接受之賦形劑混合，用於製造錠劑。此類賦形劑之實例包括(不限於)惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；粒化劑及崩解劑，例如玉米澱粉或褐藻酸；黏合劑，例如澱粉、明膠或阿拉伯膠；及潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。錠劑可不包覆包衣或其可藉由已知之包衣技術包覆包衣以延遲在胃腸道中之崩解及吸收，且藉此提供所需時間段之持續治療作用。舉例而言，可採用時間延遲材料，諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。

用於口服使用之調配物亦可呈硬明膠膠囊形式呈現，其中活性成分與惰性固體稀釋劑(例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)混合；或以軟明膠膠囊形式呈現，其中活性成分與水或油性介質(例如花生油、液體石蠟或橄欖油)混合。此等調配物及本文所述之所有其他液體調配物均服從以上關於保持固體共晶之組成及結構完整性所描繪之限制。

根據下文描述之實施例，醫藥組合物呈現為懸浮液。該等實施例係指「穩定懸浮液」，意謂既定共晶或共晶之組合維持其特徵性特徵，例如XRPD峰，即使在接觸懸浮液之其他組分時，亦即不溶解於懸浮液之液體賦形劑中，不轉變成另一共晶型或非晶型，或兩者。

對於水性懸浮液，本發明之共晶與適合於維持穩定懸浮液之賦形劑混合。此類賦形劑之實例包括(但不限於)羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、褐藻酸鈉、聚乙烯吡咯啶酮、黃蓍膠及阿拉伯膠。

口服懸浮液亦可含有分散劑或潤濕劑，諸如天然存在之磷脂，例如卵磷脂；或環氧烷與脂肪酸之縮合產物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯；或環氧乙烷與長鏈脂族醇之縮合產物，例如十七伸乙基氧基十六醇；或環氧乙烷與衍生自脂肪酸及己醣醇之偏酯的縮合產物，諸如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯；或環氧乙烷與衍生自脂肪酸及己醣醇酸酐之偏酯的縮合產物，例如聚乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯。水性懸浮液亦可含有一或多種防腐劑，例如對羥基苯甲酸乙酯或對羥基苯甲酸正丙酯；一或多種著色劑；一或多種調味劑；及一或多種甜味劑，諸如蔗糖或糖精。

油性懸浮液可藉由使活性成分懸浮於植物油(例如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)中或礦物油(諸如液體石蠟)中來調配。油性懸浮液可含有增稠劑，例如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟醇。

可添加甜味劑(諸如上述之彼等甜味劑)及調味劑，以提供適口之口服製劑。此等組合物可藉由添加抗氧化劑諸如抗壞血酸來保存。

適合於藉由添加水製備水性懸浮液之可分散散劑及顆粒可提供活性成分與分散劑或濕潤劑、懸浮劑及一或多種防腐劑之混合物。合適分散劑或潤濕劑及懸浮劑由上文已提及之彼等分散劑或潤濕劑及懸浮劑例示。亦可存在其他賦形劑，例如甜味劑、調味劑及著色劑。

本發明之醫藥組合物亦可呈水包油乳液形式。油相可為植物油，例如橄欖油或花生油；或礦物油，例如液體石蠟，或此等油之混合物。合適乳化劑可為天然存在之樹膠，例如阿拉伯膠或黃蓍膠；天然存在之磷脂，例如大豆、卵磷脂；及衍生自脂肪酸及己醣醇酐之酯或偏酯，例如脫水山梨糖醇單油酸酯；及所述偏酯與環氧乙烷之縮合產物，例如聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯。乳液亦可含有甜味劑及調味劑。

可利用例如丙三醇、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖之甜味劑來調配糖漿及酏劑。此類調配物亦可含有緩和劑、防腐劑及調味劑及著色劑。醫藥組合物可呈無菌可注射液、水性懸浮液或油性懸浮液形式。此懸浮液可根據已知技術使用上文已提及之合適分散劑或潤濕劑及懸浮劑來調配。無菌可注射製劑亦可為於非經腸可接受之無毒稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或懸浮液，例如呈於1,3-丁二醇中之溶液的形式。可採用之可接受之媒劑及溶劑為水、林格氏溶液(Ringer's solution)及等滲氯化鈉溶液。此外，無菌不揮發性油常規用作溶劑或懸浮介質。出於此目的，可採用任何溫和不揮發性油，包括合成單甘油酯或二甘油酯。另外，諸如油酸之脂肪酸可用於製備可注射液。

本發明之共晶亦可呈栓劑形式投與以經直腸投與共晶。可藉由將共晶與合適之非刺激性賦形劑混合來製備此等組合物，該賦形劑在常溫下為固體但在直腸溫度下為液體且因此將在直腸中熔融以釋放共晶。此類物質之實例為可可脂及聚乙二醇。

用於非經腸投與之組合物於無菌介質中投與。視所用媒劑及調配物中共晶之濃度而定，非經腸調配物可為共晶之懸浮液，其限制條件為共晶之粒徑分佈適合於此投與模式。諸如局部麻醉劑、防腐劑及緩衝劑之佐劑亦可添加至非經腸組合物中。 使用方法

如藉由隨附實例所證明，本發明之共晶所賦予之一個意外益處為能夠製造大量極高非對映異構體及化學純度之 4a。此對於遵循例如由美國食品和藥物管理局頒佈之良好生產規範(GMP)規定，研發 4a而言尤其重要。相比之下，非晶 4a之合成需要後續及費力之分離技術，諸如層析法，且所有結晶嘗試如上文所提及均不成功，其仍無法以高化學及非對映異構體純度分離 4a用於達成GMP目的。出於此等原因，本發明之共晶及其製造方法提供大量可用於臨床試驗及商業化工作之 4a。

本發明之共晶之另一益處在於與非晶 4a相比，來自共晶之 4a的生物可用性意外很高。更特定言之，活體內投與共晶使 4a之生物可用性相對於相同劑量之非晶 4a增加約1.5-2倍(參見實例12及13)。考慮到醫藥之非晶型比其結晶對應物顯著更可溶且因此生物可用性更高的一般觀測結果，本發明之共晶的此特徵更令人意外，且實際上，形成對比。參見B. C. Hancock等人, Pharm. Res.17(4) (2000) 397 - 404；B. C. Hancock等人, J. Pharm. Sci.86(1) (1997) 1 - 12。

依據此等優點，本發明進一步關於任一共晶型，包括其醫藥組合物之用途，用於治療或預防罹患神經退化性病症之個體之該病症。此類神經退化性病症之非限制性實例包括阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)、帕金森氏病(Parkinson's disease)、肌肉萎縮性側索硬化(ALS)、亨廷頓氏症(Huntington's disease)、脊髓性肌萎縮、脊髓小腦失調及共濟失調形式，及包括運動神經元疾病之脫髓鞘神經病症。另外，共晶型及其醫藥組合物可用於治療糖尿病性神經病變(包括其疼痛與無感覺形式)及神經病之其他形式，包括並非由糖尿病引起之神經性疼痛。

依據所報導的化合物 4a用於改善神經元中受損粒線體功能及減少糖尿病神經元中發炎標記物之表現的用途(Ma (2015))，共晶型及其醫藥組合物亦可用於治療與粒線體功能障礙、氧化應激或發炎有關之神經病症。因為糖尿病組織經受顯著氧化應激，所以此等結果表明本發明之共晶型及其醫藥組合物可用於治療與氧化應激及慢性發炎有關之其他神經病症，包括癲癇症、多發性硬化症、脊髓損傷及精神病症，包括精神分裂症、抑鬱症、躁鬱症、自閉症及相關病症，以及創傷後應激病症。組合物及共晶型可與其他療法、尤其藉由其他機制減少氧化應激、發炎及粒線體功能障礙之療法組合使用。

「神經退化性病症」如該術語在本文所用，係指其中在周邊神經系統中或在中樞神經系統中神經元逐漸喪失之病症。因此，在一個實施例中，本發明提供一種藉由抑制引起細胞死亡之神經元的逐漸惡化，諸如在治療神經退化性病症期間或之後，抑制個體中之Hsp90之方法。

如本文所述之方法包含向個體投與治療有效量之本發明之共晶。在上述給藥準則內，「治療有效量」為共晶完全或部分抑制病症進展或至少部分緩解病症之一或多種症狀的量。治療有效量亦可為預防有效量。治療有效量將視患者體型及性別、待治療之病症、病症之嚴重性及尋求之結果而定。對於既定患者及病症，治療有效量可藉由熟習此項技術者已知之方法確定。

在各種實施例中，方法預防神經病症。如本文所用之術語「預防(preventing)」或「預防(prevention)」意謂當投與在投與時尚未診斷為可能患有病症但通常預期將顯現病症或處於增加之病症風險下的個體時本發明之共晶適用。本發明之共晶減緩病症症狀之發展，延遲病症發作或完全阻止個體顯現病症。預防亦涵蓋向認為由於年齡、家族病史、基因或染色體異常及/或由於存在病症之一或多種生物學標記物而易患病症的個體投與共晶。

在其他實施例中，本發明之方法「治療(treatment)」或「治療(treating)」意謂共晶用於至少臨時診斷出病症之個體中。因此，本發明之共晶延遲或減緩病症進展。另外，術語「治療」至少包含與病症相關之症狀的改善，其中改善在廣泛意義上使用，係指至少與所治療之病狀相關之參數，例如症狀之量值減小。由此，「治療」亦包括病症或至少與其相關之症狀得到完全抑制，例如預防發生，或停止，例如終止之情況，使得個體不再罹患該病症或至少無表徵該病症之症狀。

在一個實施例中，神經退化性病症為由例如與糖尿病症狀相關之高血糖症引起的感覺神經元葡萄糖毒性。舉例而言，個體罹患1型或2型糖尿病。更特定言之，根據一實施例，神經退化性病症為糖尿病性周邊神經病。因此，在一實施例中，本發明之方法包含預防罹患1型或2型糖尿病之個體中顯現糖尿病性周邊神經病或降低此可能性。

在本發明之方法及用途之情況下，待用本發明之共晶治療的「個體」為動物且較佳為哺乳動物，例如犬、貓、小鼠、猴、大鼠、兔、馬、牛、天竺鼠、綿羊。在一實施例中，個體為人類。 實例

提供以下非限制性實例以說明本發明之額外實施例。

例如根據公開程序(Kusuma (2012)及美國專利第9,422,320號)獲得約95%純度(HPLC)之非晶 4a。 I. 通用結晶實驗方法

急速沈澱 ( CP ) ：在攪動下，以既定莫耳比，用多種共晶形成體在多種溶劑或溶劑系統中製備 4a之溶液。在攪拌下分配多種反溶劑之等分試樣，直至出現沈澱。將混合物攪拌特定時間段。在說明之情況下，採用其他結晶技術。

快速蒸發 ( FE ) ：在攪動下，以既定莫耳比，用多種共晶形成體在多種溶劑中製備 4a之溶液。除非另有說明，否則在周圍條件下自空心小瓶蒸發各溶液。除非指明為部分蒸發(存在固體，少量溶劑剩餘)，否則使溶液蒸發至乾燥，在此情況下固體藉由所說明方法分離或如所說明採用其他結晶技術。

手工碾磨 ：將所稱之量之 4a及多種共晶形成體轉移至瑪瑙研缽。將少量既定溶劑添加至固體，且用瑪瑙缽杵手動碾磨混合物既定時間量。

研磨：將所稱之量之 4a及既定共晶形成體轉移至瑪瑙研磨容器。將少量既定溶劑及瑪瑙研磨球添加至容器，容器接著附接至Retsch研磨機。將混合物在30 s ^{- 1}下研磨所說明之持續時間。在循環之間將固體自瓶壁刮下。

反應結晶 ( RC ) ：藉由添加一種組分之固體至第二組分之溶液，在既定溶劑中製備 4a與多種共晶形成體之混合物。當添加足夠固體使得溶液含有不同濃度各組分(一般一種組分相對於其他組分，莫耳濃度相差10至20倍)時，將溶液攪拌長時間段。當詳細說明時，若未出現沈澱，則添加更濃組分之其他固體，且再次將混合物攪拌長時間段。分離任何沈澱固體且分析。

緩慢冷卻 ( SC ) ：在高溫下，在攪拌下，以既定莫耳比，用多種共晶形成體在多種溶劑系統中製備 4a之濃溶液。將各小瓶加蓋且置於加熱板上，且關閉加熱板以使樣品緩慢冷卻至周圍溫度。若在冷卻至周圍溫度之後不存在固體，則樣品置於冰箱(大約2至8℃)及/或冷凍機(大約-10至-25℃)中進一步冷卻。若不存在固體，則如詳細說明，採用其他結晶技術。

緩慢蒸發 ( SE ) ：以既定莫耳比，用多種共晶形成體在多種溶劑系統中製備 4a之溶液。在周圍條件下，在用經針孔穿孔之鋁箔覆蓋之小瓶中將各溶液蒸發。除非指明為部分緩慢蒸發，其中蒸發一部分溶劑，否則將溶液蒸發至乾燥。藉由所說明之技術分離所得固體，或在說明之情況下，採用其他結晶技術。

漿液實驗 ：藉由在周圍條件下添加足夠固體至既定溶劑系統，使得存在未溶解固體，以所說明莫耳比用多種共晶形成體製備 4a之懸浮液。接著在密封小瓶中，在所說明之條件下攪動(通常藉由攪拌)混合物長時間段。藉由所說明之技術分離固體，或在說明之情況下，採用其他結晶技術。

蒸汽擴散 ( VD ) ：在多種溶劑中製備既定起始物質之濃溶液( 4a/L-脯胺酸之既定形態或 4a與L-脯胺酸之所說明化學計量混合物)。在一些情況下，經由0.2 μm耐綸過濾器過濾溶液。將各溶液分配至小瓶中，接著將小瓶置於含有既定反溶劑之較大瓶內。在說明之情況下，將既定 4a/L-脯胺酸形態之晶種添加至溶液。將小瓶敞開，且將較大瓶加蓋，以允許進行蒸汽擴散。在說明之情況下，採用其他結晶技術。

真空過濾 ：藉由真空過濾，將固體收集在紙或耐綸過濾器上，且在該等過濾器上在減壓下短暫空氣乾燥，接著轉移至小瓶。

互變漿液 ：藉由在所說明之溫度下添加固體至既定溶劑系統來製備既定起始物質之溶液(既定 4a/L-脯胺酸形態或 4a與L-脯胺酸之所說明之化學計量混合物)。若指定飽和溶液，則在環境溫度下攪動懸浮液長時間段以確保液相飽和。將所關注之既定 4a/L-脯胺酸形態每一者之晶種添加至所製備溶液(來自飽和溶液之過濾液相)，使得存在未溶解固體。接著在所說明之溫度下在密封小瓶中攪動(通常藉由攪拌)各混合物既定持續時間。藉由真空過濾分離固體且分析。 II. X 射線粉末繞射 ( XRPD ) 峰之鑑別

本發明全篇為x射線繞射圖案及具有峰清單之表。選擇在至多約30° 2θ範圍內之峰。捨入演算法用於將各峰捨入至最接近0.01° 2θ。使用專用軟體(TRIADS ^TM2.0版)確定圖與清單中峰沿著x軸(° 2θ)之位置，且捨入至十進制小數點後兩個有效數字。基於USP中關於X射線粉末繞射變率之論述(美國藥典(United States Pharmacopeia), USP 38-NF 33至S2, ＜941＞ 12/1/2015)所概述之建議，指定峰位置變率在± 0.2° 2θ內。尚未確定與本文所揭示之任何特定量測相關的準確度及精確度。此外，在不同儀器上關於獨立製備之樣品的第三方量測可產生超過±0.2° 2θ之變率。用於計算d-間距之波長為1.5405929Å，Cu-K _{α 1}波長(Holzer, G.；Fritsch, M.；Deutsch, M.；Hartwig, J.；Forster, E. Phys. Rev. 1997, A56(6), 4554-4568)。在各d-間距下，自USP建議計算與d-間距估值相關之變率，且提供於相應資料表中。

根據USP準則，可變水合物及溶劑合物可顯示超過0.2° 2θ之峰方差，因此0.2° 2θ之峰方差不適用於此等物質。

對於僅僅具有一種XRPD圖案之樣品且無其他手段評估樣品是否提供粉末平均值之良好近似值，峰表含有僅僅鑑別為「主峰」之資料。此等峰為整個觀測到之峰清單的子集。主要峰係藉由鑑別具有較強強度之較佳不重疊、低角度峰，選自觀測到之峰。

在可獲得多個繞射圖案之情況下，可評估粒子統計學(PS)及/或較佳取向(PO)。來自在單一繞射儀上分析之多種樣品的XRPD圖案之間的再現性表明粒子統計學足夠。來自多個繞射計之XRPD圖案之間相對強度之一致性表明良好取向統計學。或者，基於單一晶體結構(若可獲得)，所觀測到之XRPD圖案可與計算XRPD圖案相比較。使用平面偵測器之二維散射圖案亦可用於評估PS/PO。若確定PS與PO之作用可忽略，則XRPD圖案代表樣品之粉末平均強度且主峰可鑑別為「代表性峰」。一般而言，收集用於確定代表性峰之資料愈多，將彼等峰分類愈自信。

在存在之情況下，「特徵峰」為代表性峰之子集，且用來區分一種結晶多晶型物與另一結晶多晶型物(多晶型物為具有相同化學組成之結晶形態)。藉由在±0.2° 2θ內，針對化合物之所有其他已知結晶多晶型物，評估哪些代表性峰(若存在)存在於該化合物之一種結晶多晶型物中，確定特徵峰。並非化合物之全部結晶多晶型物必需具有至少一個特徵峰。

儀器技術

差示掃描熱量測定 ( DSC ) ：使用TA Instruments Q2000差示掃描量熱計進行DSC。使用NIST可追蹤之銦金屬進行溫度校準。將樣品置放於Tzero捲曲DSC鋁盤中，用蓋子覆蓋，且準確記錄重量。將組態成樣品盤之稱量鋁盤置放於池之參考側面上。

動態蒸汽吸附 ( DVS ) ：在VTI SGA-100蒸汽吸附分析器上收集動態蒸汽吸附資料。NaCl及聚乙烯吡咯啶酮(PVP)用作校準標準。在分析之前不乾燥樣品。在氮氣淨化下以10% RH遞增，收集5%至95% RH範圍內之吸附及解吸附資料。用於分析之平衡準則為5分鐘內重量變化小於0.0100%，最大平衡時間為3小時。未針對樣品之初始水分含量對資料進行校正。

EasyMax™ 反應器：使用具有Julabo F26冷卻器/循環器之Mettler Toledo EasyMax™ 102進行結晶實驗。在20 mL玻璃管(加蓋)中，在磁力攪拌下，進行結晶。使用夾套溫度(Tj)設置控制溫度。

元素分析：藉由Galbraith Laboratories (Knoxville, TN)進行元素分析。

紅外光譜法：在裝備有Ever-Glo中/遠IR源、溴化鉀(KBr)分束器及氘化三甘胺酸硫酸鹽(DTGS)偵測器之Nicolet 6700傅立葉變換紅外(FT-IR)分光光度計(Thermo Nicolet)上獲取IR光譜。使用NIST SRM 1921b (聚苯乙烯)進行波長驗證。具有鍺(Ge)晶體之衰減全反射(ATR)附件(Thunderdome™, Thermo Spectra-Tech)用於獲取資料。各光譜代表在4 cm ^-1頻譜解析度下收集之256次共添掃描。用乾淨Ge晶體獲取背景資料集。藉由採用此兩個資料集相對於彼此之比率來獲取Log 1/ R( R= 反射率)光譜。

拉曼光譜分析 ：在與裝備有砷化銦鎵(InGaAs)偵測器之Nexus 670 FT-IR分光光度計(Thermo Nicolet)接合之FT-拉曼模組上獲得拉曼光譜。使用硫及環己烷進行波長驗證。藉由將樣品置於球粒固定器將各樣品準備用於分析。大約0.514 W Nd:YVO ₄雷射功率(1064 nm激發波長)用於照射樣品。各光譜代表在4 cm ^-1頻譜解析度下收集之256次共添掃描。

單晶 X 射線繞射 ( SCXRD ) ：在Purdue University之Crystallography Laboratory，確定 4a/L-脯胺酸形態B及形態C之單晶結構。

熱解重量分析 ( TGA ) ：使用TA Instruments 2050或Discovery熱解重量分析儀進行TG分析。使用鎳及AlumeI™進行溫度校準。將各樣品置於鋁或鉑盤中且插入至TG鍋爐中。將鍋爐在氮氣淨化下以10℃/min之加熱速率自周圍溫度加熱至350℃。

光學顯微法 ：在Wolfe光學顯微鏡下，利用正交偏光片，以2x或4x物鏡，或在Leica立體顯微鏡下，利用一級紅色補償器與正交偏光片，以0.8x至10x物鏡，觀測樣品。

溶液 ¹ H NMR 光譜法 ：藉由Spectral Data Services of Champaign (IL)，在25℃下，利用Varian ^UNITY INOVA-400光譜儀，獲得溶液 ¹H NMR光譜。樣品溶解於DMSO- d ₆中。來自不完全氘化DMSO之殘餘峰在大約2.5 ppm下，且在大約3.3 ppm下之相對較寬峰係由水引起。

X 射線粉末繞射 (XRPD)

PANalytical X ' PERT Pro MPD 繞射儀 - 透射幾何學 ( 大部分樣品 ) ：經由PANalytical X'Pert PRO MPD繞射儀，使用利用Optix長細焦輻射源所產生之入射Cu輻射束，收集XRPD圖案。使用橢圓形階化多層鏡將Cu Kα X射線聚焦穿過樣本且到達偵測器上。分析之前，對矽樣本(NIST SRM 640e)進行分析以驗證Si 111峰之所觀測位置與NIST證實之位置一致。將樣品之樣本夾入3 μm厚膜之間且以透射幾何學加以分析。使用射束截捕器、短防散射延伸部分及防散射刀口來使空氣所產生的背景最小化。使用針對入射光束及繞射光束之索勒狹縫(Soller slits)以使軸向發散變寬降至最低。使用距離試樣240 mm之掃描位置敏感性偵測器(X'Celerator)及資料收集軟體2.2b版來收集繞射圖案。

PANalytical X ' PERT Pro MPD 繞射儀 - 反射幾何學 ( 樣品為有限數量 ) ：藉由PANalytical X'Pert PRO MPD繞射儀，使用由使用長細焦輻射源及鎳濾光器產生之Cu K α輻射之入射光束收集XRPD圖案。繞射儀使用對稱布拉格-布倫塔諾幾何學(Bragg-Brentano geometry)組態。分析之前，對矽樣本(NIST SRM 640e)進行分析以驗證Si 111峰之所觀測位置與NIST證實之位置一致。將樣品之樣本製備成薄的圓形層，置於零背景矽基板上之中央。使用抗散射狹縫(SS)以使空氣所產生之背景降至最低。使用針對入射光束及繞射光束之索勒狹縫以使軸向發散變寬降至最低。使用距離樣品240 mm之掃描位置敏感性偵測器(X'Celerator)及資料收集器軟體2.2b版收集繞射圖案。

HPLC 程序

下表呈現本文所述之HPLC量測之參數及條件。報導之 4a及 4b之HPLC純度不考慮脯胺酸之峰。

管柱	Thames Restek Raptor C18 150×4.6 mm，2.7 µm
移動相A	水
移動相B	乙腈
流速	1.0 mL/min
UV波長	215 nm
管柱溫度	40℃
注射體積	10 µL
操作時間	40分鐘
梯度
時間(分鐘)	移動相A (%)	移動相B (%)
0	90	10
3	90	10
33	10	90
35	10	90
37	90	10
40	90	10

實例 1 ： 4a / L - 脯胺酸共晶 ( 物質 A ) 之合成

化合物 4a藉由層析分離(HPLC： 4a96.4%及 4b1.2%，500 mg)獲得且與L-脯胺酸(128 mg，1當量)混合於EtOH (4 mL)中。在回流下加熱混合物15分鐘。熱溶液經由棉花塞過濾。使所得透明濾液緩慢冷卻且保持在室溫下16小時。藉由過濾收集沈澱固體，且在室溫下空氣乾燥，得到呈白色固體之 4a/L-脯胺酸共晶，指定為物質A (456 mg，73%產率)。M.P. 203-205℃。 ¹H NMR指示 4a與L-脯胺酸之比率為1:1.1。

物質A為1:1 4a/L-脯胺酸共晶且其可能為同構溶劑合物。基於成功地指標化(表A1)之XRPD圖案(圖23)，物質A含有少量L-脯胺酸組分。XRPD指標化通常成功用於主要或僅僅由單晶相組成之樣品。然而，針對此混合物，獲得指標化方案，瞭解到XRPD圖案中在8.7°、15.0°及18.0° 2θ處存在之少量峰/肩部與指標化方案不一致，且可能歸因於L-脯胺酸。獲自指標化方案之精選單位晶胞參數呈現於表A2中。

表 A1 ：針對 4a / L - 脯胺酸物質 A 觀測到之峰

°2θ	d 間距 (Å)	強度 (%)
5.81 ± 0.20	15.189 ± 0.522	6
8.52 ± 0.20	10.369 ± 0.243	100
9.19 ± 0.20	9.613 ± 0.209	63
9.92 ± 0.20	8.913 ± 0.179	23
10.49 ± 0.20	8.426 ± 0.160	7
11.68 ± 0.20	7.568 ± 0.129	57
11.87 ± 0.20	7.451 ± 0.125	65
12.21 ± 0.20	7.244 ± 0.118	29
13.22 ± 0.20	6.691 ± 0.101	67
14.75 ± 0.20	5.999 ± 0.081	73
16.07 ± 0.20	5.510 ± 0.068	18
16.33 ± 0.20	5.422 ± 0.066	78
16.68 ± 0.20	5.312 ± 0.063	20
17.10 ± 0.20	5.181 ± 0.060	45
17.57 ± 0.20	5.044 ± 0.057	54
18.32 ± 0.20	4.839 ± 0.052	29
18.54 ± 0.20	4.783 ± 0.051	27
18.87 ± 0.20	4.698 ± 0.049	30
19.26 ± 0.20	4.605 ± 0.047	39
19.50 ± 0.20	4.548 ± 0.046	75
19.65 ± 0.20	4.514 ± 0.045	35
20.17 ± 0.20	4.399 ± 0.043	27
20.34 ± 0.20	4.363 ± 0.042	46
21.22 ± 0.20	4.183 ± 0.039	70
21.79 ± 0.20	4.076 ± 0.037	21
22.08 ± 0.20	4.023 ± 0.036	8
22.34 ± 0.20	3.976 ± 0.035	8
22.61 ± 0.20	3.930 ± 0.034	6
23.51 ± 0.20	3.781 ± 0.032	35
23.79 ± 0.20	3.738 ± 0.031	50
24.58 ± 0.20	3.619 ± 0.029	26
24.88 ± 0.20	3.576 ± 0.028	15
25.12 ± 0.20	3.542 ± 0.028	13
25.48 ± 0.20	3.493 ± 0.027	24
25.96 ± 0.20	3.430 ± 0.026	8
26.20 ± 0.20	3.398 ± 0.025	16
26.45 ± 0.20	3.367 ± 0.025	9
27.28 ± 0.20	3.266 ± 0.023	6
27.63 ± 0.20	3.225 ± 0.023	14
27.85 ± 0.20	3.201 ± 0.023	11
28.27 ± 0.20	3.154 ± 0.022	11
28.40 ± 0.20	3.140 ± 0.022	14
29.04 ± 0.20	3.072 ± 0.021	6
29.46 ± 0.20	3.029 ± 0.020	5
29.78 ± 0.20	2.998 ± 0.020	14

表 A2 ： 4a / L - 脯胺酸物質 A 之單位晶胞參數

布拉韋類型(Bravais Type)	粗斜方晶
a [Å]	10.126
b [Å]	11.021
c [Å]	30.259
α [°]	90
β [°]	90
γ [°]	90
體積[Å 3/晶胞]	3,376.9
對掌性內容?	對掌性
消光符號	P 2 12 1-
空間群	P2 12 12 (18)

單位晶胞體積足夠大以容納溶劑化1:1 4a/L-脯胺酸共晶。自由體積(或考慮共晶體後剩餘之單位晶胞體積)可能適合於水及/或產生物質A之任一溶劑，包括EtOH、IPA及THF。

如上所述之物質A另外藉由DSC、TGA及DVS表徵。該物質之DSC及TGA熱分析圖之重疊圖展示於圖24中。TGA熱分析圖呈現兩個不同重量損失步驟，第一個存在於約100℃與160℃之間(7 wt%)且第二個存在於160℃與230℃之間(21 wt%)。藉由DSC觀測到寬廣吸熱，其中峰最大值在145℃下，對應於第一個TGA重量損失步驟。此等事件發生之相對較高溫度以及逐步重量損失性可能指示結合之溶劑/水之喪失。藉由DSC，約170℃與約240℃之間的重疊吸熱事件對應於TGA熱分析圖中之第二個重量損失步驟，可能與同時的共晶體之熔融及L-脯胺酸組分之揮發對應。TGA熱分析圖中超過約250℃下之急劇下降可能對應於分解。

如上所述之物質A之DVS等溫線呈現於圖25中。因為該物質表徵為與未反應L-脯胺酸之混合物，所以過量L-脯胺酸可能對蒸汽吸附行為產生什麼作用(若存在)係未知的。該物質呈現在85% RH或高於85% RH下之顯著吸濕性，介於85%與95% RH之間，吸收約6 wt%水蒸氣。蒸汽吸附動力學平衡暫停在85%-95% RH，此表明若允許更長平衡時間，則與量測相比，共晶體可能吸收更多水分。在95%與5% RH之間解吸附時，注意到相對穩定之重量損失。解吸附時損失之重量(約8 wt%)顯著高於在吸附期間獲得的重量，此表明該物質在該分析開始時可能溶劑化/水合。藉由XRPD分析DVS後物質顯示結晶度降低，不過固體形式保持完整。由於XRPD圖案中之無序，無法證實DVS後樣品中過量L-脯胺酸存在或不存在。

實例 2 ：藉由與 L - 脯胺酸共結晶純化 4a

使500 mg由化合物 4a及 4b組成之 4(HPLC：92.0% 4a及7.1% 4b)及L-脯胺酸(128 mg，1當量)於乙醇(4 mL)中之混合物回流15分鐘。將混合物用在實例1中獲得之共晶接種，且使混合物冷卻且接著保持在室溫下18小時。過濾出白色固體，同時將殘餘固體與母液一起移出反應瓶。所收集數量之 4a/L-脯胺酸共晶(如藉由 ¹H-NMR所測定，1:1比率，497 mg，79%產率)由98.0% 4a及1.49% 4b(藉由HPLC分析)組成。

實例 3 ：共晶篩選

非晶 4a與除L-脯胺酸及D-脯胺酸外之26種共晶形成體一起用於大約50個共晶篩選實驗中，如下表1中所概述。採用能夠形成共晶之多種結晶技術，包括溶劑輔助之研磨及手工碾磨、冷卻、蒸發、漿液、急速沈澱及反應結晶，其中含有高莫耳過量之一種組分的溶液與另一組分組合以促進反應平衡利於共晶形成。利用具有能夠形成氫鍵之官能基的多種共晶形成體，包括羧酸、胺基酸、糖、醯胺、胺及大量官能性芳族化合物。然而，在此篩選中探索之多種條件及共晶形成體下， 4a不與此等常見共晶形成體形成任何經證實之共晶。

表 1

共晶形成體	4a/ 共晶形成體莫耳比	條件	技術	結果
乙酸	約1:66	1) 在攪拌下添加冰乙酸至 4a固體 2) RC (攪拌)，室溫，3天 3) 回流，73天	Obs	1) 固體變成淡藍色且接著溶解，透明淺青色溶液。 2) 透明溶液 3) 透明溶液
L-精胺酸	1:5	1) 使L-精胺酸溶解於水，添加至 4a2) RC (攪拌)，室溫，3天 3) 添加5莫耳當量L-精胺酸	Obs	1) 存在未溶解固體 2) 透明液相，攪拌棒上灰白色黏性固體 3) 存在未溶解固體 4) 透明液相，黏性固體黏住攪拌棒
1:10	4) RC (攪拌)，室溫，4天
L-精胺酸	1:1	1) 以30 Hz在MeOH下研磨 4a3×10分鐘循環 2) 在N 2下乾燥1天	Obs	1) 黏性物 2) 黏性物
咖啡因	1:2	1) 在約74℃下在攪拌下添加MEK至 4a及共晶形成體固體 2) SC，約74℃至室溫，在室溫下靜置，1天 3) 用抹刀戳 4) 真空過濾	Obs	1) 透明溶液 2) 大塊灰白色固體，少量液體可見 3) 液體自固體釋放 4) 白色固體
OM	針狀物，B/E
XRPD	咖啡因
咖啡因	1:1	在丙酮下手工碾磨 4a4分鐘	Obs	自由流動之灰白色固體
OM	細粒及糰粒，部分B/E
XRPD	咖啡因 + 非晶形
卡馬西平(carbamazepine)	1:1	1) 在約75℃下在攪拌下添加EtOAc至 4a及共晶形成體固體 2) SC，約75℃至室溫，在室溫下攪拌3天 3) 真空過濾	Obs	1) 透明溶液 2) 不透明白色懸浮液，壁上白色固體 3) 白色固體
OM	細粒及糰粒，B/E
XRPD	卡馬西平
檸檬酸	1:5	1) 使檸檬酸溶解於EtOH，添加至 4a2) RC (攪拌)，室溫，3天 3) 添加5莫耳當量檸檬酸	Obs	1) 透明溶液 2) 透明溶液 3) 透明溶液 4) 透明溶液 5) 透明溶液 6) 透明溶液
1:10	4) RC (攪拌)，室溫，4天 5) 添加10莫耳當量檸檬酸
1:20	6) RC (攪拌)，室溫，46天
D-果糖	1:5	1) 使D-果糖溶解於MeOH，添加至 4a2) RC (攪拌)，室溫，3天 3) 添加5莫耳當量果糖	Obs	1) 透明溶液 2) 透明溶液 3) 存在未溶解固體 4) 透明溶液 5) 存在未溶解固體 6) 透明液相，白色固體 7) 白色固體
1:10	4) RC (攪拌)，室溫，4天 5) 添加10莫耳當量果糖
1:20	6) RC (攪拌)，室溫，16天 7) 真空過濾
OM	細粒及糰粒，B/E
XRPD	D-果糖
反丁烯二酸	1:2	1) 在約74℃下在攪拌下添加EtOH至 4a及酸固體 2) SC，約74℃至室溫，在室溫下攪拌1天 3) 真空過濾	Obs	1) 透明溶液 2) 混濁白色懸浮液 3) 白色固體
OM	細粒及糰粒，B/E
XRPD	反丁烯二酸
反丁烯二酸	1:10	1) 使酸溶解於THF，添加至 4a2) RC (攪拌)，室溫，3天 3) 添加10莫耳當量反丁烯二酸	Obs	1) 透明溶液 2) 透明溶液 3) 存在未溶解固體 4) 透明液相，白色固體 5) 白色固體
1:20	4) RC (攪拌)，室溫，12天 5) 真空過濾
OM	細粒及糰粒，B/E
XRPD	反丁烯二酸
龍膽酸	1:3	1) 使 4a及酸溶解於ACN 2) 攪拌，室溫，1天 3) 在攪拌下添加MTBE (ACN/MTBE 1:3) 4) 攪拌，室溫，3天 5) SE 6) 真空烘箱，室溫，3天	Obs	1) 透明溶液 2) 透明溶液 3) 溶液變得極輕微混濁，接著透明 4) 透明，微琥珀色溶液。 5) 大的晶體包埋於黏性琥珀色油狀物中 6) 起泡灰白色固體
OM (步驟5後)	許多片狀物(可能單片)，B/E；油狀物，無B/E
OM (步驟6後)	未知形態，無B/E；片狀物，B/E
XRPD	龍膽酸
L-麩胺酸	1:2	1) 在約75℃下在攪拌下添加EtOH及水(1:2)至 4a2) 熱過濾 3) SC，約75℃至室溫，在室溫下靜置4天 4) 回流，6天 5) 傾析液體，在N 2下短暫乾燥固體	Obs	1) 輕度混濁溶液 2) 透明溶液 3) 透明溶液 4) 透明液相，底部上白色固體 5) 潮濕白色固體
OM	不規則片狀物及團塊，B/E
XRPD	L-麩胺酸
甘胺酸	1:2	1) 使 4a溶解於EtOH 2) 添加 4a溶液至甘胺酸 3) 形成漿液，室溫，4天 4) 添加 4a至1:1	Obs	1) 透明溶液 2) 存在未溶解固體 3) 混濁懸浮液，底部上大的晶體(可能甘胺酸) 4) 混濁 5) 混濁懸浮液，存在很少大的晶體(可能甘胺酸) 6) 混濁 7) 混濁懸浮液，底部上最少的大晶體 8) 白色固體
1:1	5) 攪拌，室溫，3天 6) 添加 4a至1.5:1
1.5:1	7) 攪拌，室溫，數天 8) 真空過濾
OM	細粒、糰粒及小塊，B/E
XRPD	甘胺酸
甘胺酸	1:2	1) 以30 Hz在甲苯下研磨 4a3×10分鐘循環 2) 在N 2下乾燥1天	Obs	1) 黏性物及白色固體 2) 灰白色黏性物
馬尿酸	1:1	1) 在約74℃下在攪拌下添加MEK至 4a及酸固體 2) SC，約74℃至室溫，在室溫下靜置，1天 3) 傾析液體，在N 2下短暫乾燥固體	Obs	1) 透明溶液 2) 透明液相，白色固體包覆底部 3) 白色固體
OM	長方形片狀物及糰粒，B/E
XRPD	馬尿酸
反式-4-羥基-L-脯胺酸	5:1	1) 使 4a溶解於EtOH 2) 在攪拌下添加 4a溶液至共晶形成體固體 3) RC (攪拌)，室溫，6天 4) 真空過濾	Obs	1) 輕度混濁淡黃色溶液 2) 存在少量未溶解固體 3) 不透明灰白色懸浮液 4) 白色固體
OM	細粒及糰粒，無B/E
XRPD	反式-4-羥基-L-脯胺酸
D-(-)-異抗壞血酸	1:2	1) 在約75℃下在攪拌下添加EtOH至 4a及酸固體 2) SC，約75℃至室溫，在室溫下攪拌3天 3) 真空過濾	Obs	1) 透明溶液 2) 不透明白色懸浮液，壁上白色固體 3) 白色固體
OM	細粒及糰粒，B/E
XRPD	D-異抗壞血酸
乳酸	約1:48	1) 在攪拌下添加濃乳酸至 4a固體 2) RC (攪拌)，室溫，3天 3) 回流，73天	Obs	1) 稠懸浮液，存在未溶解固體 2) 透明溶液 3) 透明溶液
菸鹼醯胺	1:3	1) 使 4a及酸溶解於MEK 2) 攪拌，室溫，1天 3) 部分SE 4) 傾析液體，在N 2下短暫乾燥固體	Obs	1) 透明溶液 2) 透明溶液 3) 少量透明液相，底部及側面上灰白色固體 4) 黏性白色固體
OM	薄針狀物，B/E
XRPD	菸鹼醯胺
菸鹼醯胺	1:20	1) 使菸鹼醯胺溶解於MeOH，添加至 4a2) RC (攪拌)，室溫，1天 3) 真空過濾	Obs	1) 透明溶液 2) 透明液相，存在白色固體 3) 白色固體
OM	針狀物及糰粒，B/E
XRPD	菸鹼醯胺
草酸	1:10	1) 在音波處理下添加ACN至 4a及酸固體 2) RC (攪拌)，室溫，2天 3) 添加10莫耳當量酸	Obs	1) 輕度混濁溶液 2) 透明溶液 3) 存在未溶解固體 4) 透明琥珀色液相，存在白色固體 5) 白色固體
1:20	4) RC (攪拌)，室溫，11天 5) 傾析液體相，在N 2下乾燥固體
OM	細粒及糰粒，B/E
XRPD	草酸
L-苯丙胺酸	1:2	1) 在約73℃下在攪拌下添加EtOH至 4a及共晶形成體固體 2) 添加水至EtOH/水 50:50 3) SC，約73℃至室溫，在室溫下攪拌1天 4) 真空過濾	Obs	1) 未溶解固體 2) 輕度混濁懸浮液 3) 混濁懸浮液(不透明) 4) 白色固體
OM	精細針狀物及糰粒，B/E
XRPD	L-苯丙胺酸半水合物
哌嗪	1:1	1) 在丙酮下手工碾磨 4a4分鐘 2) 在N 2氣體下乾燥2分鐘	Obs	1) 黏性膜 2) 黏性膜，可能未自研砵及研棒刮下
吡拉西坦(piracetam)	1:2	1) 在約75℃下在攪拌下添加EtOH至 4a及共晶形成體固體 2) SC，約75℃至室溫，在室溫下攪拌3天	Obs	1) 透明溶液 2) 不透明灰白色懸浮液 3) 白色固體
OM	細粒及糰粒，B/E
XRPD	吡拉西坦
L-脯胺醯胺	1:2	1) 在約75℃下在攪拌下添加EtOH至 4a及共晶形成體固體 2) SC，約75℃至室溫，在室溫下攪拌3天 3) 冷凍，7天 4) SE 5) 添加乙醚 6) 形成漿液(攪拌)，室溫，22天	Obs	1) 透明黃色溶液 2) 透明黃色溶液 3) 透明黃色溶液 4) 黏性黃色油狀物 5) 透明液相，黃色油狀物 6) 透明液相，底部上黃色油狀物
L-脯胺醯胺	1:2	1) 在約73℃下在攪拌下添加ACN至 4a及共晶形成體固體 2) SC，約73℃至室溫，在室溫下攪拌1天 3) 冷凍，16天 4) SE 5) 在攪拌下添加IPE 6) 攪拌，室溫，3天	Obs	1) 透明黃色溶液 2) 透明黃色溶液，壁上半透明膜 3) 黃色液相，少量固體 4) 黏性黃色油狀物 5) 透明液體，黃色油狀物 6) 透明液相，底部上黃色油狀物
沒食子酸丙酯	1:1	1) 以30 Hz在甲苯下研磨 4a3×10分鐘循環 2) 在N 2下乾燥1天	Obs	1) 黏性物 2) 白色黏性物
沒食子酸丙酯	1:1	1) 在約75℃下在攪拌下添加EtOH至 4a2) SC，約75℃至室溫，在室溫下靜置4天 3) 冷凍，2天 4) 部分SE 5) 冷凍(加蓋)，3天 6) SE 7) 在攪拌下添加MTBE 8) 攪拌，室溫，30天 9) SE	Obs	1) 透明溶液 2) 透明溶液 3) 透明溶液 4) 透明溶液 5) 透明溶液 6) 黏性物 7) 透明溶液 8) 透明溶液 9) 黏性琥珀色油狀物
吡嗪	1:5	1) 使吡嗪溶解於丙酮中，添加至 4a2) RC (攪拌)，室溫，3天 3) 添加5莫耳當量吡嗪	Obs	1) 透明溶液 2) 透明黃色溶液 3) 透明溶液 4) 透明溶液 5) 透明淡黃色溶液 6) 透明溶液
1:10	4) RC (攪拌)，室溫，4天 5) 添加10莫耳當量吡嗪
1:20	6) RC (攪拌)，室溫，46天
吡嗪	1:2	1) 在約75℃下在攪拌下添加EtOH至 4a2) SC，約75℃至室溫，在室溫下靜置4天 3) 冷凍，2天 4) 部分SE 5) 冷凍(加蓋)，3天 6) SE 7) 在攪拌下添加庚烷 8) 攪拌，室溫，30天	Obs	1) 透明溶液 2) 透明溶液 3) 透明溶液 4) 透明溶液 5) 透明溶液 6) 黏性物 7) 透明液相，淡黃色黏性物 8) 透明液相，底部上油狀物
L-焦麩胺酸	1:1	1) 以30 Hz在MeOH下研磨 4a3×10分鐘循環 2) 在N 2下乾燥1天	Obs	1) 黏性物 2) 黏性物
L-焦麩胺酸	1:2	1) 在約75℃下在攪拌下添加EtOH至 4a2) SC，約75℃至室溫，在室溫下靜置4天 3) 冷凍，2天 4) 部分SE 5) 冷凍(加蓋)，3天 6) SE 7) 在攪拌下添加乙醚 8) 攪拌，室溫，5天 9) 傾析液體相，在N 2下乾燥固體	Obs	1) 透明溶液 2) 透明溶液 3) 透明溶液 4) 透明溶液 5) 透明溶液 6) 黏性物 7) 透明液相，白色黏性物 8) 透明液相，白色固體 9) 白色固體
OM	細粒及糰粒，B/E
XRPD	焦麩胺酸物質A + 焦麩胺酸
L-焦麩胺酸	1:1	1) 在音波處理下添加EtOH至 4a及酸固體 2) 部分FE，1天 3) 在N 2流下蒸發 4) 在攪拌下添加乙醚 5) 添加晶種 a，攪拌，室溫，10天 6) 真空過濾	Obs	1) 透明溶液 2) 少量透明溶液 3) 透明黏性油狀物 4)油狀物變得白色 5) 透明液相，存在白色固體 6) 白色固體
OM	細粒及糰粒，B/E
XRPD	焦麩胺酸物質B + 焦麩胺酸
L-焦麩胺酸	1:1	1) 在音波處理下添加EtOH至 4a及酸固體 2) 或者在攪拌下添加晶種 a及等分式樣乙醚多次至乙醚/EtOH 6:1比率 3) 攪拌，室溫，1天 4) 攪拌，2-8℃，11天 5) SE 6) 將固體刮至油狀物，在攪拌下添加乙醚 7) 攪拌，室溫，1天 8) 傾析液體，在N 2下短暫乾燥固體	Obs/OM	1) 透明溶液 2) 晶種始終溶解，始終透明溶液 3) 透明溶液 4) 透明溶液 5) 黏性油狀物，上壁上少量固體(不規則片狀物，B/E) 6) 透明溶液，底部上油狀物 7) 透明液相，灰白色固體 8) 灰白色固體
OM (步驟後8)	細粒及糰粒，B/E
XRPD	焦麩胺酸物質A +物質B + 酸
L-焦麩胺酸	2:1	1) 在音波處理下添加EtOH至 4a及酸固體 2) 過濾 3) 在N 2流下蒸發 4) 添加晶種 b5) 在攪拌下添加乙醚 6) 攪拌，室溫，18天 7) 真空過濾	Obs	1) 透明溶液，很少漂浮物 2) 透明溶液 3) 透明黏性油狀物 4) 晶種剩餘 5) 油狀物變成白色，透明液相 6) 透明液相，白色固體 7) 白色固體
OM	細粒及糰粒，B/E
XRPD	焦麩胺酸物質B + 焦麩胺酸
2,3,5,6-四甲基-吡嗪 (TMP)	1:10	1) 在音波處理下添加EtOAc至 4a及共晶形成體固體 2) RC (攪拌)，室溫，2天 3) 添加10莫耳當量TMP	Obs	1) 透明溶液 2) 透明溶液 3) 存在未溶解固體 4) 透明溶液
1:20	4) RC (攪拌)，室溫，36天
L-色胺酸	1:2	1) 在約73℃下在攪拌下添加EtOH至 4a及共晶形成體固體 2) 添加水至3:1 EtOH/水 3) SC，約73℃至室溫，在室溫下攪拌1天 4) 真空過濾	Obs	1) 存在未溶解固體 2) 透明溶液 3) 透明液相，白色固體 4) 光亮白色固體 (像珍珠)
OM	糰粒，B/E
XRPD	L-色胺酸
尿素	1:2	1)在約74℃下在攪拌下添加EtOH至 4a及尿素固體 2) SC，約74℃至室溫，在室溫下攪拌1天 3) 冷凍，3天 4) 在攪拌下添加EtOAc (EtOAc/EtOH 6:1) 5) 攪拌，室溫，1天 6) 冷凍，7天 7) 傾析液體相，在N 2下短暫乾燥固體	Obs	1) 透明溶液 2) 透明溶液 3) 輕度混濁懸浮液 4) 輕度混濁懸浮液 5) 透明液相，少量固體 6) 透明液相，少量白色固體 7) 白色固體
OM	針狀物，B/E
XRPD	尿素

^a,b包含 4a及焦麩胺酸之未表徵結晶物質之多批晶種

實例 4 ： 4a / L - 脯胺酸形態 B 之製備及表徵

將等莫耳量之非晶 4a與L-脯胺酸(1:1)混合於甲醇中且加熱至約68℃。使所得溶液緩慢冷卻至室溫，此時形成白色懸浮液。接著將懸浮液在室溫下攪拌三天，之後藉由過濾來收集呈白色固體之形態B且乾燥。

或者，將1:2莫耳比之非晶 4a與L-脯胺酸組合在乙醇中且加熱至約82℃，得到白色懸浮液。將懸浮液保持在82℃下約5分鐘，使其緩慢冷卻至室溫，且接著在室溫下攪拌三天。藉由過濾來收集呈白色固體之形態B且乾燥。

形態B為無水1:2 4a/L-脯胺酸共晶。形態B藉由XRPD (利用指標化)、DSC、TGA、DVS、拉曼光譜法、IR光譜法、質子NMR、HPLC及元素分析來表徵。

形態B之XRPD圖案成功地指標化(表2)且其指示形態B主要或僅僅由單晶相組成(圖1)。自指標化方案獲得之單位晶胞體積符合無水1:2 4a/L-脯胺酸共晶。下表3呈現單位晶胞參數。

表 2 ：觀測到之 4a / L - 脯胺酸形態 B 之峰

°2θ	d 間距 (Å)	強度 (%)
5.81 ± 0.20	15.204 ± 0.523	36
8.40 ± 0.20	10.512 ± 0.250	21
8.50 ± 0.20	10.396 ± 0.244	16
10.46 ± 0.20	8.454 ± 0.161	29
11.65 ± 0.20	7.590 ± 0.130	15
12.14 ± 0.20	7.286 ± 0.120	30
14.57 ± 0.20	6.076 ± 0.083	43
14.76 ± 0.20	5.998 ± 0.081	71
16.49 ± 0.20	5.371 ± 0.065	11
16.86 ± 0.20	5.253 ± 0.062	100
17.51 ± 0.20	5.061 ± 0.057	78
18.16 ± 0.20	4.881 ± 0.053	21
18.39 ± 0.20	4.819 ± 0.052	25
18.89 ± 0.20	4.694 ± 0.049	52
19.00 ± 0.20	4.667 ± 0.049	70
19.17 ± 0.20	4.627 ± 0.048	30
19.41 ± 0.20	4.570 ± 0.047	61
19.58 ± 0.20	4.530 ± 0.046	27
19.93 ± 0.20	4.452 ± 0.044	14
21.05 ± 0.20	4.217 ± 0.040	47
21.48 ± 0.20	4.134 ± 0.038	10
21.82 ± 0.20	4.070 ± 0.037	34
23.43 ± 0.20	3.794 ± 0.032	19
23.56 ± 0.20	3.774 ± 0.032	29
23.77 ± 0.20	3.740 ± 0.031	24
24.36 ± 0.20	3.651 ± 0.030	44
25.13 ± 0.20	3.541 ± 0.028	17
25.71 ± 0.20	3.462 ± 0.026	10
26.36 ± 0.20	3.378 ± 0.025	21
26.60 ± 0.20	3.348 ± 0.025	16
26.94 ± 0.20	3.306 ± 0.024	14
27.18 ± 0.20	3.278 ± 0.024	9
27.48 ± 0.20	3.243 ± 0.023	9
27.67 ± 0.20	3.221 ± 0.023	14
27.97 ± 0.20	3.188 ± 0.022	13
28.28 ± 0.20	3.153 ± 0.022	9
28.91 ± 0.20	3.086 ± 0.021	19
29.38 ± 0.20	3.037 ± 0.020	12
29.75 ± 0.20	3.001 ± 0.020	10
29.99 ± 0.20	2.977 ± 0.019	8

表 3 ： 4a / L - 脯胺酸形態 B 之單位晶胞參數

布拉韋類型	粗單斜晶
a [Å]	11.130
b [Å]	10.168
c [Å]	16.094
α [°]	90
β [°]	109.27
γ [°]	90
體積[Å 3/晶胞]	1,719.3
對掌性內容?	對掌性
消光符號	P 1 2 11
空間群	P2 1(4)

藉由質子NMR及HPLC表徵自MeOH漿液分離之形態B之樣品。質子NMR資料指示1:2 4a/L-脯胺酸化學計量，未偵測到殘餘溶劑。如藉由HPLC所測定，樣品中 4a之純度為99.7%。

形態B之DSC及TGA熱分析圖分別呈現於圖2及圖3中。因為各技術分析不同樣品，所以資料分開繪製。藉由TGA分析之樣品自MeOH漿液分離，而DSC樣品由共晶形成實驗在MeOH中產生。實際上在周圍溫度與190℃之間TGA未觀測到重量損失，與無水/未溶劑化物質相一致。DSC亦與此相一致，表明無顯著熱事件，直至208℃下開始吸熱事件，具有重疊強放熱事件。值得注意地，在此分析之後觀測到樣品自盤脫出，可能對放熱幅度有影響。此等事件可能對應於共晶之熔融/解離。類似地，TGA熱分析圖中超過190℃之急劇降低可能歸因於共晶之一部分L-脯胺酸組分揮發，接著可能分解。

為進一步證實共晶化學計量，藉由C、H、N、F及O元素分析來分析形態B (表4)。1:1及1:2共晶之實驗組成百分比值與理論值之比較顯示樣品與1:2共晶相更緊密一致。此結果與其他表徵資料相一致。

表 4 ： 4a / L - 脯胺酸形態 B 之元素分析

理論1:1共晶 61.9% C 7.0% H 5.0% N 3.4% F 22.7% O

理論1:2共晶 60.3% C 7.1% H 6.2% N 2.8% F 23.6% O

實驗結果 59.78% C 6.88% H 6.28% N 2.79% F 25.12% O

形態B之動態蒸汽吸附(DVS)等溫線顯示於圖4中。注意到5%與95% RH之間重量增加2.3 wt%，其中大部分吸附發生在超過50% RH。所有此重量在解吸附上喪失，注意到少許滯後。蒸汽吸附動力學平衡暫停在吸附步驟上85%-95% RH之間，此表明與允許更長平衡時間下所量測相比，共晶可能吸收更多水分。藉由XRPD對DVS後物質之分析未顯示形態可觀測之改變。

獲得形態B之IR及拉曼光譜且分別呈現於圖5及圖6中。

實例 5 ： 4a / L - 脯胺酸形態 B 之單晶 X 射線結構測定

資料收集

具有0.70×0.45×0.30 mm之大致尺寸的 4a/L-脯胺酸形態B (C ₃₄H ₄₈FN ₃O ₁₀[C ₂₄H ₃₀FNO ₆, 2(C ₅H ₉NO ₂)])之無色片狀物以無規取向安裝在耐綸環上。在裝備有共焦光學裝置之Rigaku Rapid II繞射儀上利用Cu Kα輻射(λ=1.54178Å)進行初步檢查及資料收集。使用SHELX2013進行修正(Sheldrick, G. M. Acta Cryst., 2008, A64, 112)。

使用在4° ＜ θ＜ 68°範圍內的21646個反射之設置角，自最小平方修正，獲得用於收集資料之晶胞常數及取向矩陣。自DENZO/SCALEPACK修正之鑲嵌度為0.44°，表明晶體品質良好(Otwinowski, Z.; Minor, W. Methods Enzymol. 1997, 276, 307)。藉由程式XPREP確定空間群(Bruker, XPREP in SHELXTL 6.12版, Bruker AXS Inc., Madison, WI, USA, 2002)。自以下條件之系統性存在：0 k0 k= 2 n，且自隨後最小平方修正，確定空間群為 P2 ₁(no. 4)。

在室溫下資料收集至135.73°之最大繞射角(2 θ)。

資料還原

用HKL3000整合訊框(Otwinowski ( 1997))。收集總共21646個反射，其中5936個為獨特的。勞倫茲及極化校正應用於資料。對於Cu K α輻射，線性吸收係數為0.833 mm ^{- 1}。應用使用SCALEPACK之經驗吸收校正(Otwinowski ( 1997))。透射係數在0.128至0.779範圍內。應用二次消光校正(Sheldrick ( 2008))。以最小平方修正之最終係數為0.0157(11) (絕對單位)。將同等反射之強度平均化。基於強度，平均化之一致性因子為4.1%。

結構解析及修正

藉由使用SHELXT (Sheldrick ( 2008))之直接法，解析結構。剩餘原子位於後續差分傅立葉綜合(succeeding difference Fourier syntheses)中。氫原子包括在修正中，但限於騎在其鍵結之原子上。藉由將以下函數最小化，以全矩陣最小平方修正結構：

權重 w定義為1/[σ ²( F _o ²) + (0.0640 P) ²+(0.5095 P)]，其中 P= ( F _o ²+2 F _c ²)/3。

散射因子獲自「國際晶體學表」(國際晶體學表, C卷, Kluwer Academic Publishers: Dordrecht, The Netherlands, 1992, 表4.2.6.8及6.1.1.4)。在用於修正之5936個反射中，僅僅 F _o ²＞ 2σ( F _o ²)之反射用於計算擬合殘差 R。計算中使用總共5601個反射。最終修正循環包括490個可變參數且用以下未加權及加權一致性因子收斂(最大參數變化＜0.01×其估計標準偏差)：

單位權重之觀測結果的標準偏差(擬合優度)為1.062。最終差分傅立葉中之最高峰具有0.187 e/Å ³之高度。最小負峰具有-0.193 e/Å ³之高度。

計算之 X 射線粉末繞射 ( XRPD ) 圖案

使用Mercury (Macrae, C. F. Edgington, P. R. McCabe, P. Pidcock, E. Shields, G. P. Taylor, R. Towler M.及van de Streek, J.; J. Appl. Cryst., 2006, 39, 453-457)及單晶結構之原子座標、空間群及單位晶胞參數產生計算XRPD圖案。

原子位移橢球及填充圖

原子位移橢球圖係使用Mercury (Macrae ( 2006))製定。原子由50%概率各向異性熱橢球表示。填充圖及其他圖用Mercury (Macrae ( 2006))產生。氫鍵結表示為短劃線。對掌性中心之評估用PLATON (Spek, A. L. PLATON. Molecular Graphics Program. Utrecht University, Utrecht, The Netherlands, 2008. Spek, A. L, J.Appl.Cryst. 2003,36, 7)進行。使用分子對掌性規則之說明評估絕對組態(Cahn, R.S.; Ingold, C; Prelog, V. Angew. Chem. Intern. Ed. Eng., 1966, 5, 385；Prelog, V., Helmchen, G. Angew. Chem. Intern. Ed. Eng., 1982, 21, 567)。

結果

單斜晶胞參數及所計算之體積為： a= 11.1270(4) Å， b= 10.1566(4) Å， c= 16.0790(6) Å， β= 109.309(2)° (α = γ = 90°)， V= 1714.91(11) Å ³。形態B之晶體結構中不對稱單元之式量為677.75 g mol ^{- 1}，其中 Z= 2，使得計算密度為1.313 g cm ^{- 3}。確定空間群為 P2 ₁(no. 4)。表5中提供晶體資料及晶體學資料收集參數之概述。

表 5 4a / L - 脯胺酸形態 B 之晶體資料及資料收集參數

式	C 34H 48FN 3O 10
式量	677.77
空間群	P2 1(no. 4)
a，Å	11.1270(4)
b，Å	10.1566(4)
c，Å	16.0790(6)
b，°	109.309(2)
V，Å 3	1714.91(11)
Z	2
d calc，g cm -3	1.312
晶體尺寸，mm	0.25×0.20×0.16
溫度，K	295
輻射(波長，Å)	Cu K a(1.54178)
單色器	共焦光學裝置
線性吸收係數，mm -1	0.833
應用之吸收校正	經驗 a
透射因子：min、max	0.128、0.779
繞射儀	Rigaku RAPID-II
h、k、l範圍	-13至13   -12至12   -18至18
2q範圍，°	8.42-135.73
鑲嵌度，°	0.44
所用程式	SHELXTL
F 000	724
收集之資料	21646
獨特資料	5936
R int	0.041
修正中使用之資料	5936
R-因子計算中使用之截止值	F o 2＞2.0s(F o 2)
I＞2.0s(I)之資料	5601
修正消光係數	0.0157
變數數目	490
最終循環中最大變化/esd	0
R(F o)	0.0422
R w(F o 2)	0.1141
擬合優度	1.062
絕對結構測定	弗蘭克參數(Flack parameter) b(-0.02(11)) 霍夫特參數(Hooft parameter) c(-0.02(5)) 弗瑞德覆蓋率(Friedel Coverage) 92%

^aOtwinowski, Z.; Minor, W. Methods Enzymol. 1997, 276, 307。 ^bFlack,H. D. Acta Cryst., 1983 A39, 876。 ^cHooft,R.W.W., Straver,L.H., 及Spek, A.L. J. Appl. Cryst., 2008, 41, 96-103。

空間群及單位晶胞參數與自形態B之XRPD分析獲得之空間群及單位晶胞參數相一致(參見以上表3)。

如由0.0422 (4.22%)之擬合殘差 R指示，所得結構之品質高。最可靠確定之結構引用在0.02至0.06範圍內之 R值(Glusker, Jenny Pickworth; Trueblood, Kenneth N. Crystal Structure Analysis: A Primer, 第2版; Oxford University press: New York, 1985; 第87頁)。

形態B之原子位移橢球圖顯示於圖7中。在單晶結構之不對稱單元中觀測到之分子與所提出之 4a之分子結構相一致。圖7中所示之不對稱單元含有一個 4a分子及兩個L-脯胺酸分子，與1:2 4a:L-脯胺酸化學計量相一致。兩個質子位於兩個脯胺酸氮原子上且獨立地修正，表明兩性離子。兩個L-脯胺酸分子在兩個位置上無序，修正為82/18%及71/29%佔有率。

絕對結構可經由對晶體之異常X射線散射之分析來確定。稱為弗蘭克參數之修正參數 x(Flack, H. D.; Bernardinelli, G., Acta Cryst. 1999, A55,908；Flack, H. D.; Bernardinelli, G., J. Appl. Cryst. 2000, 33,1143；Flack, H. D. Acta Cryst. 1983, A39, 876；Parsons, S., Flack, H. D., Wagner, T., Acta Cryst. 2013, B69, 249-259)以倒反雙晶編碼兩個組分之相對豐度。該結構含有經修正之模型之分數1- x，及其反量 x。倘若獲得低標準不確定性，若解析之結構正確，則弗蘭克參數應接近0，且若，則倒反模型正確，則接近1。圖7中所示之形態B之結構的量測弗蘭克參數為-0.02，標準不確定度為0.11，此表明倒反區分能力弱，且因此無法解釋弗蘭克參數。標準不確定度中之誤差阻止僅僅基於弗蘭克因子進行分配。

弗蘭克參數( x)之修正未得到關於絕對結構分配之定量陳述。然而，應用貝氏統計(Bayesian statistics)於比約沃特差(Bijvoet difference)之方法可為絕對結構之不同假設提供一系列概率(Hooft,R.W.W., Straver,L.H., 及Spek, A.L. J. Appl. Cryst., 2008, 41, 96-103；Bijvoet, J.M.; Peerdeman, A.F.; van Bommel A.J. Nature 1951 , 168,271)。除絕對結構為正確、不正確或外消旋雙晶之概率外，此分析提供弗蘭克同等(霍夫特)參數。對於當前資料集，確定弗蘭克同等(霍夫特)參數為-0.02(5)，結構正確之概率為1.000，結構不正確之概率0.9×10 ^{- 91}，且物質為外消旋雙晶之概率為0.2×10 ^{- 24}。因此，圖7中模型之絕對組態為正確的。此結構含有在 4a上之四個對掌性中心，位於C7、C9、C11及C12 (圖7)，其分別呈 R、 R、 S及 R組態鍵結；及脯胺酸分子每一者上一個對掌性中心，在C26及C31上，均呈 S組態鍵結。

圖8展示形態B之計算XRPD圖案，由單晶結構產生。以上顯示先前指標化之形態B之實驗XRPD圖案(實例4)且與計算XRPD圖案(圖9)相一致。

實例 6 ： 4a / L - 脯胺酸形態 C 之製備及表徵

使等莫耳量之非晶 4a及L-脯胺酸(1:1)形成漿液且接著在室溫下在丙酮中攪拌3天。過濾漿液以收集呈白色固體狀之形態C。

形態C亦藉由使等莫耳量之非晶 4a及L-脯胺酸溶解於EtOH中來製備。接著藉由蒸汽擴散(VD)將丙酮引入溶液，使形態C沈澱。

資料指示形態C由1:1共晶組成，其中1莫耳丙酮存在於晶格中，不過丙酮不參與氫鍵結。單晶資料證實化學及固相組成。

成功地將形態C之XRPD圖案(圖10)指標化，且表6中展示觀測到之峰。

表 6 ：觀測到之 4a / L - 脯胺酸形態 C 之峰

°2θ	d間距(Å)	強度(%)
8.73 ± 0.20	10.126 ± 0.232	67
10.51 ± 0.20	8.414 ± 0.160	46
11.83 ± 0.20	7.477 ± 0.126	32
12.10 ± 0.20	7.308 ± 0.120	62
12.26 ± 0.20	7.214 ± 0.117	36
12.44 ± 0.20	7.110 ± 0.114	31
14.64 ± 0.20	6.047 ± 0.082	97
15.14 ± 0.20	5.847 ± 0.077	50
16.13 ± 0.20	5.492 ± 0.068	13
17.53 ± 0.20	5.055 ± 0.057	100
18.26 ± 0.20	4.855 ± 0.053	62
18.91 ± 0.20	4.688 ± 0.049	71
19.36 ± 0.20	4.580 ± 0.047	74
19.56 ± 0.20	4.536 ± 0.046	56
20.17 ± 0.20	4.399 ± 0.043	20
20.97 ± 0.20	4.232 ± 0.040	24
21.15 ± 0.20	4.197 ± 0.039	22
21.33 ± 0.20	4.163 ± 0.039	54
21.55 ± 0.20	4.121 ± 0.038	29
22.40 ± 0.20	3.966 ± 0.035	14
23.18 ± 0.20	3.834 ± 0.033	29
23.71 ± 0.20	3.750 ± 0.031	20
24.02 ± 0.20	3.701 ± 0.030	33
24.34 ± 0.20	3.654 ± 0.030	25
24.73 ± 0.20	3.597 ± 0.029	40
25.87 ± 0.20	3.441 ± 0.026	23
26.54 ± 0.20	3.356 ± 0.025	17
26.71 ± 0.20	3.335 ± 0.025	15
27.09 ± 0.20	3.289 ± 0.024	12
27.38 ± 0.20	3.254 ± 0.023	16
27.86 ± 0.20	3.200 ± 0.023	8
28.40 ± 0.20	3.140 ± 0.022	12
28.73 ± 0.20	3.105 ± 0.021	11
29.05 ± 0.20	3.071 ± 0.021	10
29.45 ± 0.20	3.031 ± 0.020	23

下表7中呈現來自XRPD指標化之單位晶胞參數：

表 7 ： 4a / L - 脯胺酸形態 C 之單位晶胞參數

布拉韋類型	粗單斜晶
a [Å]	10.992
b [Å]	10.275
c [Å]	15.362
α [°]	90
β [°]	108.07
γ [°]	90
體積[Å 3/晶胞]	1,649.5
對掌性內容?	對掌性
消光符號	P 1 2 11
空間群	P2 1(4)

形態C之TGA熱分析圖呈現逐步重量損失，與該物質由丙酮溶劑合物組成之發現相一致(圖11)。丙酮似乎分兩步蒸發。第一步，在約60℃與150℃之間觀測到2.6%重量損失。假設揮發物為丙酮，2.6 wt%對應於0.26莫耳(或每個單晶結構約1/4總丙酮)。在150℃與220℃之間的第二步重量損失對應於6.7%重量損失，或若假定丙酮為唯一揮發物，則為0.70莫耳。

實例 7 ： 4a / L - 脯胺酸形態 C 之單晶 X 射線結構測定

具有0.19×0.18×0.10 mm之大致尺寸的C ₃₂H ₄₅FN ₂O ₉[C ₂₄H ₃₀FNO ₆, C ₅H ₉NO ₂, C ₃H ₆O]之無色片狀物以無規取向安裝在纖維上。在裝備有共焦光學裝置之Rigaku Rapid II繞射儀上利用Cu K _α輻射(λ=1.54178Å)進行初步檢查及資料收集。使用SHELX2013進行修正(Sheldrick ( 2008))。

使用在4° ＜ θ＜ 59°範圍內的12615個反射之設置角，自最小平方修正，獲得用於收集資料之晶胞常數及取向矩陣。自DENZO/SCALEPACK修正之鑲嵌度為0.25°，指示良好晶體品質(Otwinowski ( 1997))。藉由程式XPREP (Bruker ( 2002))確定空間群。自以下條件之系統性存在：0 k0 k= 2 n，且自隨後最小平方修正，確定空間群為 P2 ₁(no. 4)。

在室溫下資料收集至117.84°之最大繞射角(2 θ)。

用HKL3000整合訊框(Bruker ( 2002))。收集總共12615個反射，其中4368個為獨特的。勞倫茲及極化校正應用於資料。對於Cu K α輻射，線性吸收係數為0.788 mm ^{- 1}。應用使用SCALEPACK之經驗吸收校正(Bruker ( 2002))。透射係數在0.060至0.924範圍內。應用二次消光校正(Sheldrick ( 2008))。以最小平方修正之最終係數為0.0049(7) (絕對單位)。將同等反射之強度平均化。基於強度，平均化之一致性因子為4.8%。

結構解析及修正以類似於以上實例5之方式進行。在用於修正之4368個反射中，僅僅 F _o ²＞ 2 σ( F _o ²)之反射用於計算擬合殘差 R。總共3518個反射用於計算。修正之最終循環包括417個可變參數且用以下未加權及加權一致性因子收斂(最大參數變化＜0.01×其估計標準偏差)：

單位權重之觀測結果的標準偏差(擬合優度)為1.078。最終差分傅立葉中之最高峰具有0.271 e/Å ³之高度。最小負峰具有-0.167 e/Å ³之高度。

根據實例5中之程序產生計算XRPD圖案及原子位移橢球圖。

單斜晶胞參數及所計算之體積為： a= 10.9962(6) Å， b= 10.2721(6) Å， c= 15.3197(9) Å， β= 107.937(4)° (α = γ = 90°)， V= 1646.32(17) Å ³。形態C之晶體結構中不對稱單元之式量為620.70 g mol ^{- 1}，其中 Z= 2，使得計算密度為1.252 g cm ^{- 3}。確定空間群為 P2 ₁(no. 4)。表8中提供晶體資料及晶體學資料收集參數之概述。空間群及單位晶胞參數與先前藉由XRPD指標化獲得之空間群及單位晶胞參數一致(實例6)。

表 8 4a / L - 脯胺酸形態 C 之晶體資料及資料收集參數

式	C 32H 45FN 2O 9
式量	620.72
空間群	P2 1(no. 4)
a，Å	10.9962(6)
b，Å	10.2721(6)
c，Å	15.3197(9)
b，°	107.937(4)
V，Å 3	1646.32(16)
Z	2
d calc，g cm -3	1.252
晶體尺寸，mm	0.19×0.18×0.15
溫度，K	293
輻射(波長，Å)	Cu K a(1.54178)
單色器	共焦光學裝置
線性吸收係數，mm -1	0.788
應用之吸收校正	經驗 a
透射因子：min、max	0.79、0.89
繞射儀	Rigaku RAPID-II
h、k、l範圍	-12至12   -11至11   -17至17
2q範圍，°	6.06-126.82
鑲嵌度，°	0.25
所用程式	SHELXTL
F 000	664
收集之資料	12615
獨特資料	4368
R int	0.048
修正中使用之資料	4368
R-因子計算中使用之截止值	F o 2＞2.0s(F o 2)
I＞2.0s(I)之資料	3518
修正消光係數	0.0049
變數數目	417
最終循環中最大變化/esd	0
R(F o)	0.054
R w(F o 2)	0.131
擬合優度	1.078
絕對結構測定	弗蘭克參數 b(0.08(14)) 霍夫特參數 c(0.09(9)) 弗瑞德覆蓋率86%

^aOtwinowski (1997). ^bFlack (1983). ^cHooft (2008).

形態C之原子位移橢球圖顯示於圖12中。在單晶結構之不對稱單元中觀測到之分子與所提出之 4a/L-脯胺酸之分子結構相一致。圖12中所示之不對稱單元含有一個 4a分子及兩個L-脯胺酸分子及一個丙酮分子。兩個質子位於脯胺酸氮原子上且獨立地修正，表明兩性離子。

圖13展示形態C之計算XRPD圖案，由單晶結構產生。如上所述，獲得晶體之大塊物質的實驗XRPD圖案顯示於圖10中。實驗圖案中之所有峰均展現在計算XRPD圖案中，表明大塊物質可能為單相。計算與實驗粉末繞射圖之間的強度差異常常由較佳取向引起。較佳取向為晶體以一定程度次序自身對準之傾向。在實驗粉末繞射圖案中樣品之此較佳取向可顯著影響峰強度，但不影響峰位置。

對於當前資料集，以實例5中描述之方式確定弗蘭克同等(霍夫特)參數，且確定其為0.09(9)，該結構正確之概率為1.000，該結構不正確之概率為0.4 × 10 ^{- 21}，且該物質為外消旋雙晶之概率為0.4 × 10 ^{- 4}。

因此，圖12中模型之絕對組態可能為正確的。此結構含有在 4a上之四個對掌性中心，位於C7、C9、C11及C12 (圖12)，其分別呈 R、 R、 S及 R組態鍵結；及脯胺酸上一個對掌性中心，位於C26，呈 S組態鍵結。

實例 8 ： 4a / L - 脯胺酸形態 D 之製備及表徵

將等莫耳量之非晶 4a及L-脯胺酸組合在乙腈中，得到稀懸浮液，接著將其加熱至約85℃。使懸浮液冷卻至約71℃，用少量實例1中製備之物質接種，且保持在約71℃下約15分鐘。接著使懸浮液緩慢冷卻至室溫，且接著攪拌三天。過濾所得白色懸浮液，得到形態D，接著乾燥。

亦藉由以下來製備形態D：將等莫耳量之非晶 4a及L-脯胺酸組合在EtOH中，加熱至約82℃且保持在該溫度下約15分鐘，冷卻至約76℃，用少量實例1中製備之物質接種，緩慢冷卻至室溫，且攪拌三天。過濾所得灰白色漿液，且將所收集量之形態D在真空下在約48℃下乾燥。

形態D由無水/未溶劑化1:2 4a/L-脯胺酸共晶組成。形態D之XRPD圖案成功地指標化，表明該物質主要或僅僅由單晶相組成(圖14、表9)。自指標化方案獲得之單位晶胞體積(表10)符合無水1:2 4a/L-脯胺酸共晶。

表 9 ：觀測到之 4a / L - 脯胺酸形態 D 之峰

°2θ	d間距(Å)	強度(%)
2.82 ± 0.20	31.302 ± 2.219	13
5.68 ± 0.20	15.535 ± 0.546	50
8.45 ± 0.20	10.455 ± 0.247	16
9.20 ± 0.20	9.605 ± 0.208	100
9.78 ± 0.20	9.038 ± 0.184	24
10.46 ± 0.20	8.454 ± 0.161	10
11.42 ± 0.20	7.741 ± 0.135	25
11.83 ± 0.20	7.475 ± 0.126	62
12.17 ± 0.20	7.265 ± 0.119	33
13.15 ± 0.20	6.729 ± 0.102	37
14.42 ± 0.20	6.138 ± 0.085	23
14.62 ± 0.20	6.054 ± 0.082	70
16.19 ± 0.20	5.470 ± 0.067	84
16.46 ± 0.20	5.382 ± 0.065	16
16.94 ± 0.20	5.231 ± 0.061	47
17.16 ± 0.20	5.163 ± 0.060	80
17.56 ± 0.20	5.047 ± 0.057	14
18.22 ± 0.20	4.864 ± 0.053	24
18.45 ± 0.20	4.804 ± 0.052	75
18.95 ± 0.20	4.680 ± 0.049	21
19.10 ± 0.20	4.643 ± 0.048	30
19.31 ± 0.20	4.593 ± 0.047	46
19.52 ± 0.20	4.544 ± 0.046	77
20.15 ± 0.20	4.403 ± 0.043	94
20.98 ± 0.20	4.230 ± 0.040	45
21.15 ± 0.20	4.196 ± 0.039	62
21.53 ± 0.20	4.124 ± 0.038	25
22.49 ± 0.20	3.951 ± 0.035	18
22.96 ± 0.20	3.870 ± 0.033	26
23.35 ± 0.20	3.807 ± 0.032	49
23.98 ± 0.20	3.707 ± 0.030	29
24.51 ± 0.20	3.629 ± 0.029	52
25.34 ± 0.20	3.512 ± 0.027	40
25.95 ± 0.20	3.431 ± 0.026	22
26.64 ± 0.20	3.343 ± 0.025	14
27.07 ± 0.20	3.291 ± 0.024	15
27.70 ± 0.20	3.218 ± 0.023	16
27.88 ± 0.20	3.198 ± 0.022	27
28.30 ± 0.20	3.151 ± 0.022	17
29.04 ± 0.20	3.072 ± 0.021	12
29.45 ± 0.20	3.030 ± 0.020	14

表 10 ： 4a / L - 脯胺酸形態 D 之單位晶胞參數

布拉韋類型	粗斜方晶
a [Å]	10.092
b [Å]	11.112
c [Å]	30.974
α [°]	90
β [°]	90
γ [°]	90
體積[Å 3/晶胞]	3,473.3
對掌性內容?	對掌性
消光符號	P 2 12 1-
空間群	P2 12 1(18)

形態D藉由熱技術、質子NMR、HPLC及DVS表徵。經乾燥形態D之DSC及TGA熱分析圖之重疊圖展示於15圖中。藉由TGA至185℃之不顯著重量損失與藉由DSC之寬廣去溶劑化吸熱符合無水/未溶劑化物質。在132℃下觀測到小的寬廣吸熱(峰最大值)。TGA熱分析圖中在211℃下開始之急劇吸熱與26 wt%之急劇逐步重量損失一致，可能對應於同時的共晶之熔融及L-脯胺酸之揮發。

質子NMR資料指示1:2 4a/L-脯胺酸化學計量，偵測到0.2 wt%殘餘EtOH。藉由HPLC，樣品中 4a之純度為99.6%。

形態D之DVS等溫線顯示於圖16中。該物質呈現顯著吸濕性，尤其超過55% RH，其中注意到在5%與95% RH之間重量增加4.7 wt%。所有此重量在解吸附上喪失，注意到少許滯後。應注意，蒸汽吸附動力學平衡暫停在吸附步驟上85%-95% RH之間，此表明與允許更長平衡時間下所量測相比，共晶可能吸收更多水分。

實例 9 ： 4a / L - 脯胺酸形態 G 之製備及表徵

藉由首先將吡嗪溶解於甲基乙基酮及MeOH (90:10，v/v)中，將非晶 4a、吡嗪及L-脯胺酸分別以1:20:1莫耳比組合。將吡嗪溶液添加至 4a及L-脯胺酸混合物且在室溫下攪拌兩天，得到不透明白色懸浮液。藉由真空過濾懸浮液分離形態G。

形態G由MEK溶劑化 4a/L-脯胺酸共晶組成。藉由指標化(表11)之XRPD(圖17)，形態G展示獨特結晶圖案。

表 11 ：觀測到之 4a / L - 脯胺酸形態 G 之峰

°2θ	d間距(Å)	強度(%)
8.66 ± 0.20	10.200 ± 0.235	50
10.42 ± 0.20	8.480 ± 0.162	47
11.85 ± 0.20	7.461 ± 0.125	43
12.09 ± 0.20	7.316 ± 0.121	27
12.20 ± 0.20	7.247 ± 0.118	39
14.62 ± 0.20	6.056 ± 0.082	100
14.93 ± 0.20	5.927 ± 0.079	45
16.14 ± 0.20	5.485 ± 0.068	7
17.40 ± 0.20	5.092 ± 0.058	85
17.85 ± 0.20	4.965 ± 0.055	53
18.22 ± 0.20	4.865 ± 0.053	27
18.31 ± 0.20	4.842 ± 0.052	25
18.79 ± 0.20	4.719 ± 0.050	64
19.28 ± 0.20	4.600 ± 0.047	85
19.43 ± 0.20	4.565 ± 0.047	46
19.81 ± 0.20	4.479 ± 0.045	22
20.43 ± 0.20	4.344 ± 0.042	6
20.94 ± 0.20	4.239 ± 0.040	23
21.14 ± 0.20	4.198 ± 0.039	47
21.59 ± 0.20	4.113 ± 0.038	24
22.15 ± 0.20	4.010 ± 0.036	12
22.66 ± 0.20	3.921 ± 0.034	25
23.79 ± 0.20	3.738 ± 0.031	37
24.28 ± 0.20	3.663 ± 0.030	34
24.56 ± 0.20	3.622 ± 0.029	23
24.77 ± 0.20	3.592 ± 0.029	10
25.42 ± 0.20	3.501 ± 0.027	13
25.94 ± 0.20	3.432 ± 0.026	15
26.07 ± 0.20	3.415 ± 0.026	15
26.62 ± 0.20	3.345 ± 0.025	12
26.80 ± 0.20	3.323 ± 0.024	10
27.33 ± 0.20	3.261 ± 0.023	13
27.89 ± 0.20	3.197 ± 0.022	7
28.18 ± 0.20	3.165 ± 0.022	10
28.59 ± 0.20	3.120 ± 0.021	15
29.08 ± 0.20	3.068 ± 0.021	11
29.54 ± 0.20	3.022 ± 0.020	18

自XRPD圖案指標化獲得之單位晶胞體積(表12)符合1:1 4a/L-脯胺酸共晶，其中存在至多1莫耳MEK或吡嗪(MEK及吡嗪分子體積相當且無法藉由XRPD指標化來區分)。單位晶胞參數(表12)亦指示形態G與形態B及形態C同構。藉由質子NMR，證實形態G含有約1:1.2:0.6:0.1莫耳比之 4a、L-脯胺酸、MEK及少量殘餘吡嗪。

表 12 ： 4a / L - 脯胺酸形態 G 之單位晶胞參數

布拉韋類型	粗單斜晶
a [Å]	10.975
b [Å]	10.310
c [Å]	15.704
α [°]	90
β [°]	108.56
γ [°]	90
體積[Å 3/晶胞]	1,684.5
對掌性內容?	對掌性
消光符號	P 1 2 11
空間群	P2 1(4)

形態B及形態C之單晶分析表明彼等形態係同構，其中 4a及L-脯胺酸形成容納形態B之其他L-脯胺酸及形態C之丙酮的通道。相應通道中之L-脯胺酸及丙酮分子兩者不與包含通道之分子形成氫鍵。如上文所提及，針對形態G獲得之空間群及其他單位晶胞參數表明其與形態B及形態C同構。雖然可能有其他解釋，但考慮到關於彼等形態之分子填充及藉由質子NMR針對形態G量測之L-脯胺酸及MEK之非化學計量當量所瞭解的內容，非常可能形態G中之通道因通道內缺乏氫鍵導致易於交換而容納非化學計量(及可能可變)比率之L-脯胺酸及MEK兩者。

實例 10 ：藉由形成共晶純化 4a A . 用 L - 脯胺酸純化

根據以上程序之 4之共結晶產生形態B及形態D，且藉此極有效地減少β-變旋異構物 4b之量。如藉由HPLC所測定，典型批次之非晶體 4由93.2%/6.3%之 4a / 4b組成。在典型實驗中之共晶形成步驟後， 4b含量自6.3%減少至2.4% (HPLC)。所得 4a/L-脯胺酸共晶藉由將其與MeOH (2體積)混合而再結晶，且使混合物在加熱下回流3小時。經2.5小時使混合物冷卻至0±3℃且接著攪拌隔夜。所得固體藉由過濾來收集。再結晶後， 4b之量進一步減少至1.2%，且 4a之純度提高至98.7% (HPLC)。 B. 用 D - 脯胺酸純化

如藉由HPLC所測定，另一數量之非晶體化合物 4含有89.3% 4a及10.1% 4b。將含化合物 4(300 mg，0.670 mmol)及D-脯胺酸(77.3 mg，0.671 mmol)之EtOH (2.4 mL)在90℃油浴中加熱。回流15分鐘後，在小瓶中使所得溶液冷卻至室溫，且保持24小時，其中移除小瓶蓋子以使EtOH在室溫下緩慢蒸發。沈澱固體藉由過濾來收集，且空氣乾燥，得到 4a/D-脯胺酸共晶。如藉由HPLC所測定，共晶含有97.6% 4a及2.1% 4b(150 mg，40%產率，呈白色固體)。共晶之 ¹H NMR分析表明1:1莫耳比之 4a與D-脯胺酸。

實例 11 ： 4a / D - 脯胺酸共晶之製備及表徵

將化合物 4a(100 mg，0.223 mmol)及D-脯胺酸(25.8 mg，0.224 mmol)於EtOH (0.8 mL)中之混合物在90℃油浴中加熱。回流15分鐘後，使溶液冷卻至室溫，且在加蓋小瓶中保持在室溫下24小時。接著移除小瓶蓋子以使EtOH在室溫下緩慢蒸發。24小時後，沈澱固體藉由過濾來收集且接著空氣乾燥，得到呈白色固體之 4a/D-脯胺酸共晶(74 mg，59%產率)，純度99+% (HPLC)。 ¹H NMR分析表明共晶含有1/1比率之化合物 4a與D-脯胺酸。

4a/D-脯胺酸共晶藉由XRPD、DSC、TGA及DVS表徵。4a/D-脯胺酸共晶之XRPD圖案成功地指標化，表明該物質主要或僅僅由單晶相組成(圖18，表13)。

表 13 ：觀測到之 4a / D - 脯胺酸之峰

°2θ	d間距(Å)	強度(%)
5.76 ± 0.20	15.323 ± 0.531	14
5.90 ± 0.20	14.964 ± 0.507	13
8.45 ± 0.20	10.453 ± 0.247	79
8.74 ± 0.20	10.113 ± 0.231	42
9.22 ± 0.20	9.579 ± 0.207	57
9.81 ± 0.20	9.007 ± 0.183	20
10.44 ± 0.20	8.470 ± 0.162	19
11.55 ± 0.20	7.653 ± 0.132	62
11.77 ± 0.20	7.511 ± 0.127	75
12.19 ± 0.20	7.256 ± 0.119	41
12.30 ± 0.20	7.189 ± 0.116	25
13.18 ± 0.20	6.713 ± 0.101	83
14.04 ± 0.20	6.303 ± 0.089	7
14.52 ± 0.20	6.094 ± 0.083	92
14.68 ± 0.20	6.028 ± 0.082	44
15.04 ± 0.20	5.886 ± 0.078	15
15.93 ± 0.20	5.559 ± 0.069	26
16.19 ± 0.20	5.470 ± 0.067	40
16.57 ± 0.20	5.345 ± 0.064	13
16.95 ± 0.20	5.226 ± 0.061	66
17.27 ± 0.20	5.131 ± 0.059	28
17.38 ± 0.20	5.099 ± 0.058	48
17.56 ± 0.20	5.045 ± 0.057	66
17.80 ± 0.20	4.980 ± 0.056	28
18.22 ± 0.20	4.865 ± 0.053	18
18.43 ± 0.20	4.810 ± 0.052	16
18.73 ± 0.20	4.735 ± 0.050	49
19.12 ± 0.20	4.639 ± 0.048	53
19.26 ± 0.20	4.604 ± 0.047	36
19.40 ± 0.20	4.573 ± 0.047	40
19.54 ± 0.20	4.539 ± 0.046	100
19.78 ± 0.20	4.485 ± 0.045	21
20.19 ± 0.20	4.394 ± 0.043	33
20.60 ± 0.20	4.308 ± 0.041	8
20.91 ± 0.20	4.245 ± 0.040	35
21.23 ± 0.20	4.183 ± 0.039	96
21.41 ± 0.20	4.146 ± 0.038	23
21.62 ± 0.20	4.107 ± 0.038	32
21.84 ± 0.20	4.066 ± 0.037	11
22.15 ± 0.20	4.009 ± 0.036	6
22.37 ± 0.20	3.972 ± 0.035	10
22.59 ± 0.20	3.934 ± 0.034	9
22.73 ± 0.20	3.910 ± 0.034	20
23.25 ± 0.20	3.823 ± 0.032	26
23.57 ± 0.20	3.771 ± 0.032	53
23.80 ± 0.20	3.736 ± 0.031	23
23.99 ± 0.20	3.706 ± 0.030	9
24.23 ± 0.20	3.670 ± 0.030	13
24.32 ± 0.20	3.657 ± 0.030	13
24.58 ± 0.20	3.619 ± 0.029	28
24.88 ± 0.20	3.575 ± 0.028	14
25.38 ± 0.20	3.506 ± 0.027	27
25.76 ± 0.20	3.456 ± 0.026	10
26.11 ± 0.20	3.410 ± 0.026	15
26.25 ± 0.20	3.392 ± 0.025	11
26.56 ± 0.20	3.354 ± 0.025	6
26.71 ± 0.20	3.335 ± 0.025	9
27.01 ± 0.20	3.299 ± 0.024	10
27.41 ± 0.20	3.251 ± 0.023	14
27.71 ± 0.20	3.216 ± 0.023	26
27.93 ± 0.20	3.192 ± 0.022	13
28.14 ± 0.20	3.168 ± 0.022	17
28.68 ± 0.20	3.110 ± 0.021	9
29.09 ± 0.20	3.067 ± 0.021	7
29.30 ± 0.20	3.045 ± 0.020	19

該物質之DSC/TGA重疊圖顯示於圖19中。 4a/D-脯胺酸共晶之TGA熱分析圖展示兩個不同之重量損失步驟，第一個存在於約100℃與150-160℃之間(7.0%重量損失)，且第二個存在於150℃與230℃之間(20.0%重量損失)。藉由DSC觀測到寬廣吸熱，其中峰最大值在130℃下，其對應於第一個TGA重量損失步驟，可能歸因於結合之溶劑/水之損失。在超過約170℃下觀測到重疊吸熱事件，可能歸因於共晶之D-脯胺酸組分同時熔融/揮發。TGA熱分析圖中超過約250℃下之急劇下降可能對應於分解。

D-脯胺酸共晶之DVS等溫線呈現於圖20中。在吸附時，在5%與95% RH之間共晶增加26 wt%，其中絕大部分重量增加存在於85%與95% RH之間。動力學平衡在此步驟期間暫停，此表明若允許更長平衡時間，則與量測相比，共晶體可能吸收更多水分。在解吸附時，在95%與5% RH之間共晶展示相對穩定之重量損失且損失之重量超過吸附期間增加之重量(29 wt%)，此表明在開始該分析時該物質可能含有溶劑/水。應注意，觀測到D-脯胺酸共晶之DVS後樣品黏住盤且無法回收，此表明在實驗期間部分潮解。

實例 12 ： 4a / L - 脯胺酸物質 A 與 非晶 4a 投與小鼠之比較

本實例評估在雄性C57BL/6小鼠中與非晶 4a之懸浮液調配物相比經口投與如實例1中所製備之物質A之懸浮液調配物後的 4a全身暴露。

非晶 4a或物質A於具有5% DMSO之0.5% CMC中調配(以重量計，考慮脯胺酸之存在)，且使用15 mL/kg之給藥體積，藉由經口管飼以1000 mg/kg投與35隻雄性C57BL/6小鼠。每個時間點使用另一組(n=5/組/時間點)小鼠，在給藥後0.25、0.5、1、2、4、8及24小時收集用於分離血漿之血液樣品，如以下表14中所概述。藉由如下所述之LC/MS/MS法分析血漿樣品之 4a濃度。

表 14 ： 小鼠研究之概述

組	測試物品	N	給藥途徑	媒劑	劑量水準 (mg/kg)	劑量體積 (mL/kg)	血液收集時間 ( 小時 )
1	非晶 4a	35	PO	無菌水中0.5% CMC/5% DMSO	1000	15	0.25、0.5、1, 2、4、8及24
2	物質A	35	PO	無菌水中0.5% CMC/5% DMSO	1000	15	0.25、0.5、1, 2、4、8及24

試劑及供應 ：適當時所有試劑及供應品均具有高品質及LC/MS級且自標準商業供應商獲得。

血漿樣品製備 ：使用蛋白質沈澱法，自K ₃EDTA強化之血漿樣品提取 4a。在聚丙烯微量培養盤(96孔)之孔中，添加20 µL於乙腈/H ₂O (1:1)中製備之2.5-ng/mL D ₃- 4a(內標，IS)溶液，接著添加20 µL血漿樣品。將盤用密封帶(Phenomenex，AH0-7362)密封，且用漩渦混合器平緩地混合1分鐘。將溶液吸入含有500 µL甲醇之聚丙烯盤(96孔，2 mL，Phenomenex，AH0-7194)之孔中。將盤密封且漩渦混合5分鐘，接著在室溫下在3000×g下離心3分鐘。將300 µL上清液之等分試樣轉移至含有300 µL去離子水之新孔。平緩混合後，將盤密封且置於維持在12℃下之LC自動進樣器中，且將10 µL等分試樣注射至LC/MS/MS系統中以定量分析 4a。

層析及質譜分析條件 ： 4a之液相層析分離藉由逆相分析型管柱來達成，其中移動相溶液含有H ₂O、乙腈及甲酸。層析分析物藉由以多反應監測(MRM)模式操作之Waters Xevo TQ-S三重四極質譜儀偵測。使用MassLynx軟體4.1版(Waters Corp.)整合品質控制樣品、校準標準及研究樣品之層析峰面積。

藥物動力學分析 ：使用WinNonlin ^TM軟體6.3版(Pharsight Corp., Cary, NC)，針對各劑量組，自平均 4a血漿濃度-時間資料之非房室分析獲得藥物動力學參數估計值。使用線性對數梯形法則，確定 4a之最後可量測濃度自時間零至時間(t)之血漿濃度-時間曲線下面積(AUC _{( 0 - t )})。最後可量測濃度之時間定義為在大部分動物中各劑量組之 4a濃度低於定量極限(BLQ)的時間。

結果：在單次經口管飼投與物質A及非晶 4a後平均(±SD) 4a血漿濃度-時間資料呈現於以下表15中且展示於圖21中。 4a之藥物動力學參數估計值呈現於表16中。

表 15 ： 在小鼠中在投與單次經口劑量之物質 A 及非晶 4a 後 4a 之平均 ( ±SD ) 血漿濃度

時間 ( 小時 )	4a 血漿濃度 (ng/mL)
物質 A	非晶 4a
0.25	9770 ± 6480	6760 ± 2840
0.5	8090 ± 690	3060 ± 1600
1	733 ± 336	359 ± 140
2	51.4 ± 27.7	80.7 ± 116
4	15.8 ± 17.9	2.28 ± 0.92
8	3.68 ± 6.12	4.01 ± 4.34
24	BLQ a	BLQ a

^a組中之所有樣品均為BLQ。

表 16 ：單次經口投與小鼠後之血漿藥物動力學參數估計值

組	劑量 (mg/kg)	T max(hr)	C max(ng/mL)	AUC (0-t) (hr*ng/mL)
物質A	1000	0.25	9770	5330
非晶 4a	1000	0.25	6760	2880

實例 13 ： 4a / L - 脯胺酸物質 A 與 非晶 4a 投與猴之比較

本實例評估在雄性食蟹猴中使用含0.5%羧基甲基纖維素(CMC)之無菌水作為媒劑(5 mL/kg)以30 mg/kg或於疏鬆填充之膠囊中以50 mg (無論體重如何)在單次經口管飼投與後如實例1中所製備之物質A及非晶 4a調配物分別之全身暴露，如以下表17中所概述。

表 17 ： 猴研究之概述

組	測試物品	N	給藥途徑	媒劑	劑量水準	劑量體積 (mL/kg)	血液收集時間 (hr)
1	物質A	3	PO	無菌水中0.5% CMC	30 mg/kg	5	0.25、0.5、1、2、4、8、12及24
2	非晶 4a	3	PO	無菌水中0.5% CMC	30 mg/kg	5	0.25、0.5、1、2、4、8、12及24
3	物質A	3	PO	明膠膠囊(尺寸00)	50 mg a	NA b	0.25、0.5、1、2、4、8、12及24
4	非晶 4a	3	PO	明膠膠囊(尺寸00)	50 mg a	NA b	0.25、0.5、1、2、4、8、12及24

^a無論體重如何，均投與之劑量 ^bNA，不適用

物質A之給與以重量計，考慮脯胺酸之存在。在給藥後0.25、0.5、1、2、4、8、12及24小時自各猴收集用於分離血漿之血液樣品。藉由LC/MS/MS法分析血漿樣品之 4a濃度，且如以上實例12中所述進行藥物動力學分析。

結果：在單次經口管飼(30 mg/kg、5 mL/kg)後或膠囊給藥(50 mg)後之平均(±SD)血漿濃度呈現於以下表18中且展示於圖22中。藥物動力學參數估計值呈現於表19中。

表 18 ： 猴中在經口投與呈懸浮液或膠囊形式之物質 A 或 非晶 4a 後平均 ( ±SD ) 4a 血漿濃度

4a 血漿濃度 (ng/mL)
時間 (hr)	經口管飼 (30 mg/kg)	膠囊 (50 mg)
物質 A	非晶 4a	物質 A	非晶 4a
0.25	264 ± 193	103 ± 71	32.1 ± 25.1	15.9 ± 12.9
0.5	265 ± 79	129 ± 92	40.8 ± 16.4	12.3 ± 5.5
1	225 ± 67	128 ± 56	19.6 ± 8.9	5.97 ± 0.95
2	111 ± 39	80.2 ± 26.4	0.333 ± 0.230a	1.90 ± 1.89
4	11.3 ± 3.3	14.1 ± 5.5	0.349 ± 0.259 a	0.200 b
8	1.60 ± 0.70	1.20 ± 0.45	0.348 ± 0.256 a	0.951 ± 1.30 a
12	0.463 ± 0.228c	BLQd	2.64 ± 3.48c	3.53 ± 5.78 a
24	BLQ e	BLQ d	12.5 ± 11.0c	6.11 ± 9.23c

^a中間時間點(亦即，具有可定量值之2個時間點之間)之3個值中的2個低於定量極限(BLQ)且作為定量下限(LLOQ)之一半(亦即，0.200 ng/mL)包括在平均值中 ^b中間時間點(亦即，具有可定量值之2個時間點之間)之所有值為BLQ且報導為LLOQ之一半(亦即，0.200 ng/mL) ^c3個值中之1個為BLQ且賦予LLOQ一半(亦即，0.200 ng/mL)之值以計算平均值及標準偏差 ^d平均值報導為BLQ，因為3個樣品中之2個為BLQ ^e所有值均為BLQ

表 19 ： 猴中在藉由經口管飼投與懸浮液或膠囊後之平均 ( ±SD ) 藥物動力學資料

組	T max(hr) a	C max(ng/mL)	AUC (0-t)(hr*ng/mL)
物質A (30 mg/kg)	0.25	309 ± 117	491 ± 120
非晶 4a(30 mg/kg)	0.5	160 ± 78	307 ± 96
物質A (50 mg膠囊)	0.25	51.0 ± 7.6	110 ± 85
非晶 4a(50 mg膠囊)	0.25	19.7 ± 9.4	81.6 ± 105

^a資料呈現為中值

兩種膠囊調配物(而非口服懸浮液調配物)在給藥後4及8小時產生低於或接近於定量下限(亦即，0.400 ng/mL)之 4a血漿濃度，但在24小時顯示第二暴露峰，其中物質A及非晶 4a調配物之平均(±SD) 4a濃度分別為12.5 ± 11.0及6.11 ± 9.23。

圖1呈現形態B之X射線粉末繞射(XRPD)圖案。

圖2為形態B之差示掃描熱量測定(DSC)曲線。

圖3為形態B之熱解重量分析(TGA)曲線。

圖4為形態B之動態氣相吸附(DVS)曲線。

圖5為形態B之紅外(IR)光譜。

圖6為形態B之拉曼光譜。

圖7為藉由單晶X射線晶體學測定之形態B之原子位移橢球圖。

圖8為基於單晶結構測定之形態B之計算XRPD圖案。

圖9展示形態B之計算XRPD圖案(底部跡線)與形態B之實驗XRPD圖案(頂部跡線)的比較。

圖10呈現形態C之X射線粉末繞射(XRPD)圖案。

圖11為形態C之熱解重量分析(TGA)曲線。

圖12為藉由單晶X射線晶體學測定之形態C之原子位移橢球圖。

圖13為基於單晶結構測定之形態C之計算XRPD圖案。

圖14呈現形態D之X射線粉末繞射(XRPD)圖案。

圖15展示形態D之DSC (底部跡線)及TGA (頂部跡線)曲線。

圖16為形態D之動態氣相吸附(DVS)曲線。

圖17呈現形態G之X射線粉末繞射(XRPD)圖案。

圖18呈現 4a/D-脯胺酸共晶之X射線粉末繞射(XRPD)圖案。

圖19展示 4a/D-脯胺酸共晶之DSC (底部跡線)及TGA (頂部跡線)曲線。

圖20為 4a/D-脯胺酸共晶之動態氣相吸附(DVS)曲線。

圖21展示在小鼠中在投與單次經口劑量之物質 A(●)及非晶 4a( ¡)後 4a之平均血漿濃度。

圖22展示在猴中在藉由經口管飼法投與單次經口劑量之物質 A(●)及非晶 4a( ¡)以及以鬆散填充之膠囊投與物質 A(q)及非晶 4a(r)後 4a之平均血漿濃度。

圖23呈現 4a/L-脯胺酸共晶物質A之X射線粉末繞射(XRPD)圖案。

圖24展示 4a/L-脯胺酸共晶物質A之DSC (底部跡線)及TGA (頂部跡線)曲線。

圖25為 4a/L-脯胺酸共晶物質A之動態氣相吸附(DVS)曲線。

Claims (19)

1. 一種組合物，其包含： (a)      N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺及L-脯胺酸(1:2)之共晶，其特徵在於如在繞射計上使用Cu-Kα輻射在1.54178 Å之波長下所測定，包含以下峰之X射線粉末繞射圖：14.76、16.86、19.00及21.05 °2θ ±0.20 °2θ(形態B)；及 (b)      N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺及L-脯胺酸(1:2)之共晶，其特徵在於如在繞射計上使用Cu-Kα輻射在1.54178 Å之波長下所測定，包含以下峰之X射線粉末繞射圖：9.20、16.19、18.45及24.51 °2θ ±0.20 °2θ(型態D)。
2. 如請求項1之組合物，其中該型態B之X射線粉末繞射圖進一步包含在12.14、17.51、18.89及19.41 °2θ ±0.20 °2θ處之峰。
3. 如請求項1之組合物，其中該型態D之X射線粉末繞射圖進一步包含在11.83、17.16、20.15及25.34 °2θ ±0.2 °2θ處之峰。
4. 如請求項1之組合物，其中型態B對型態D之重量比為約0.05:1至約1:0.05。
5. 如請求項4之組合物，其中型態B對型態D之重量比為約0.5:1至約1:0.5。
6. 如請求項5之組合物，其中型態B對型態D之重量比為約0.2:1至約1:0.2。
7. 如請求項1之組合物，其中該組合物進一步包含醫藥學上可接受之載劑。
8. 一種至少一種選自由下列所組成之群組之共晶用於製備治療神經病症之藥劑的用途， (a)      N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺及L-脯胺酸(1:1)之共晶，其特徵在於如在繞射計上使用Cu-K _α1輻射在1.5405929 Å之波長下所測定，包含以下峰之X射線粉末繞射圖：8.52、16.33、19.50及21.22 °2θ ±0.20 °2θ(材料A)； (b)      N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺及L-脯胺酸(1:2)之共晶，其特徵在於如在繞射計上使用Cu-Kα輻射在1.54178 Å之波長下所測定，包含以下峰之X射線粉末繞射圖：14.76、16.86、19.00及21.05 °2θ ±0.20 °2θ(型態B)； (c)      N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺及L-脯胺酸丙酮溶劑合物(1:1:1)之共晶，其特徵在於如在繞射計上使用Cu-Kα輻射在1.54178 Å之波長下所測定，包含以下峰之X射線粉末繞射圖：14.64、17.53、18.91及21.33 °2θ ±0.20 °2θ(型態C)； (d)      N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺及L-脯胺酸(1:2)之共晶，其特徵在於如在繞射計上使用Cu-Kα輻射在1.54178 Å之波長下所測定，包含以下峰之X射線粉末繞射圖：9.20、16.19、18.45及24.51 °2θ ±0.20 °2θ(型態D)； (e)      莫耳比率為約1:1.2:0.6:0.1之N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺、L-脯胺酸、甲基乙基酮及吡嗪之共晶，其特徵在於如在繞射計上使用Cu-Kα輻射在1.54178 Å之波長下所測定，包含以下峰之X射線粉末繞射圖：10.42、14.62、19.28及21.14 °2θ ±0.20 °2θ(型態G)；及 (f)       N-(2-(5-(((2 R,3 R,4 S,5 R)-3,4-二羥基-5-甲氧基-6,6-二甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3'-氟-[1,1'-聯苯]-2-基)乙基)-乙醯胺及D-脯胺酸(1:1)之共晶，其特徵在於如在繞射計上使用Cu-K _α1輻射在1.5405929 Å之波長下所測定，包含以下峰之X射線粉末繞射圖：11.77、14.52、19.54及21.23 °2θ ±0.20 °2θ。
9. 如請求項8之用途，其中該共晶為型態B。
10. 如請求項8之用途，其中該共晶為型態D。
11. 如請求項8之用途，其中該共晶為型態B與型態D之組合物。
12. 如請求項8之用途，其中該神經病症係選自由癲癇症、多發性硬化症、脊髓損傷、精神分裂症(思覺失調症)、抑鬱症、躁鬱症、自閉症及創傷後應激病症所組成之群組。
13. 如請求項12之用途，其中該神經病症為癲癇症。
14. 如請求項12之用途，其中該神經病症為多發性硬化症。
15. 如請求項12之用途，其中該神經病症為脊髓損傷。
16. 如請求項12之用途，其中該神經病症為精神分裂症(思覺失調症)。
17. 如請求項12之用途，其中該神經病症為抑鬱症。
18. 如請求項12之用途，其中該神經病症為自閉症。
19. 如請求項12之用途，其中該神經病症為創傷後應激病症。

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